Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций

Мукомолова, Анна Львовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций"

На правах рукописи

МУКОМОЛОВ А АННА ЛЬВОВНА

ЗНАЧЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЯ АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ КЛАССА ДО К ОТДЕЛЬНЫМ БЕЛКАМ ВИРУСА ГЕПАТИТА С ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ИНФЕКЦИИ

03.00.06. - Вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт- Петербург 2004

Работа выполнена в Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте детских инфекций Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Аксенов Олег Алексеевич Кандидат медицинских наук Горячева Лариса Георгиевна Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук Соколова Екатерина Дмитриевна Доктор медицинских наук, профессор Носков Фридрих Савельевич

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи РАМН

Защита диссертации состоится 2004 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 001.043.01 при ГУ Научно-исследовательском институте гриппа РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института гриппа РАМН

Автореферат разослан » игЛ^б-- 2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.043.01 кандидат медицинских наук

Т.Г. Лобова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

После того, как 15 лет назад появилась первая публикация об открытии вируса гепатита С [Choo Q.-L. et al., 1989], началось интенсивное изучение инфекции, вызываемой этим возбудителем. Многими специалистами было показано, что вирусный гепатит С (ГС) является одной из самых актуальных проблем здравоохранения во всеммире, включая Россию [Львов Д.К. с соавт., 1995, 2002; Мукомолов С.Л. с соавт., 1993,1994,1997,2002; Онищенко Г.Г. с соавт. 2000, 2001, 2002; Шахгильдян И.В., Михайлов М.И, 2003], в связи с широкой распространенностью инфекции и ее частыми неблагоприятными исходами в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоклеточ-ный рак. Глубокое изучение любой инфекции невозможно без лабораторных методов диагностики. За сравнительно короткий период времени для диагностики ГС было разработано и апробировано множество тестов, основанных на принципах иммуноферментного анализа (ИФА), иммуноблоттинга, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и других. Широкое применение разнообразных лабораторных методов позволило получить много важных данных об эпидемиологии ГС, естественном течении инфекции, патогенезе, эффективности противовирусного лечения.

Несмотря на большое разнообразие лабораторных методов, основным тестом, повсеместно и широко применяемым для диагностики ГС, остается выявление суммарных антител к белкам вируса (анти-ВГС) в иммуноферментном анализе. Специальными исследованиями показана высокая специфичность и чувствительность иммунофер-ментных тест-систем третьего-четвертого поколения для выявления анти-ВГС. Однако по наличию анти-ВГС можно установить только факт инфицирования человека вирусом ГС, но нельзя сделать заключения о давности процесса, что имеет значение для планирования и применения терапевтических мероприятий в клинике инфекционных болезней.

Одним из простых и доступных лабораторных методов для разграничения острой и хронической инфекции, а также имевшей место инфекции в прошлом, уже много лет является измерение авидности антител. Этот показатель характеризует суммарную величину прочности связывания всех молекул антител с целевыми антигенными детерминантами. Многими исследованиями было продемонстрировано, что в период острой инфекции синтезирующиеся антитела класса IgG обладают низкой авидностью, однако в дальнейшем они заменяются на высокоавидные антитела, которые»'могут длительно циркулировать. На основании этого феномена

СПстсрбург ОЭ

■■"■а

острой и хронической инфекции при инфекциях, вызванных цитоме-галовирусом, вирусом Эпштейна-Барр, вирусом герпеса и многих других [Lazzarotto T. etal., 1997,1999,2000; Bottiger В., Jensen I.P., 1997; Schubert J. et al, 1998; Robertson P. et al., 2003;].

При гепатите С значение измерения авидности антител для диагностики практически не изучено. Имеется лишь несколько публикаций на эту тему с ограниченным числом наблюдений [Дмитриева Т.Г., 1999; Ward K.N. et al., 1994; Leon P. et al., 1997; Kanno A., Kazuyama Y., 2002]. Остается неизвестным как меняется авидность антител класса IgG к основным диагностически значимым белкам вируса ГС — ядерному и NS4 - в различные фазы инфекционного процесса. Во многом такое положение связано с отсутствием разработанного теста для определения авидности антител к белкам вируса ГС и обоснований для практической интерпретации получаемых результатов.

В связи с указанным, становится очевидной необходимость изучения авидности антител класса IgG к белкам вируса ГС у больных с различными формами гепатита С и разработки научных обоснований для использования теста измерения авидности в алгоритме лабораторных исследований при этой инфекции.

Цель исследования.

Установить значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекции и определить место этого теста в алгоритме комплексной лабораторной диагностики гепатита С у детей.

Задачи исследования.

1.Разработать диагностический тест для измерения авидности антител на основе синтетических пептидов, представляющих иммуно-доминантные регионы ядерного и NS4 белков вируса гепатита С.

2. Измерить авидность антител класса IgG к ядерному белку и неструктурному белку NS4 у больных с острым и хроническим гепатитом С, в том числе в условиях динамического наблюдения.

3. Провести наблюдение за изменениями показателя авидности антител класса IgG у детей первого года жизни, рожденных матерями с ВГС-инфекцией.

4. Сопоставить данные определения суммарных антител к вирусу гепатита С, антител класса IgM к ядерному белку вируса, спектра антител к различным белкам вируса с уровнем авидности антител класса IgG.

5. Предложить новый алгоритм комплексной лабораторной диаг-

Научная новизна работы.

Впервые разработан тест для измерения авидности антител класса IgG на основе синтетических пептидов - аналогов иммунодоминант-ных регионов ядерного и неструктурного №4 белков.

Получена новая информация об авидности антител класса IgG к ядерному и №4 белкам у больных с различными клиническими формами ГС-инфекции. Установлено, что антитела к ядерному белку вируса ГС встречаются наиболее часто у больных в острой стадии инфекционного процесса. С помощью теста измерения авидности показано, что авидность IgG антител к ядерному белку вируса ГС изменяется в течение инфекционного процесса. В стадии острого процесса этот показатель, как правило, не превышает 50%, а в стадии хронической инфекции - достигает 90-100%. Эти данные указывают на то, что при гепатите С наблюдаются общие для инфекционных заболеваний закономерности формирования иммунного ответа. В частности, продемонстрировано, что при одновременной циркуляции антител к ядерному белку вируса ГС классов IgM и IgG последние являются низкоавидными.

Измерение авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС у детей первых месяцев жизни, рожденных матерями с хронической ВГС-инфекцией, позитивных по анти-ВГС в коммерческих тестах, продемонстрировало, что этот показатель соответствует таковому у лиц с длительным инфекционным процессом. Этот факт подтверждает мнение о том, что в первые месяцы жизни у детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, обнаруживаются материнские антитела.

Практическая значимость работы.

Разработанный простой и экономичный тест определения антител к структурному ядерному и неструктурному №4 белкам вируса гепатита С различной степени авидности расширяет методическую базу и возможности лабораторий, занимающихся рутинной диагностикой гепатита С.

Определение индекса авидности IgG антител может помочь врачу-инфекционисту дифференцировать у больных с гепатитом С острый процесс от хронического. У больных с острым гепатитом С низкоавидные антитела со временем всегда замещаются на высокоавидные антитела. При текущем хроническом процессе у пациентов постоянно циркулируют высокоавидные антитела. На основе этого предложен новый алгоритм лабораторных исследований при гепатите С с включением в него теста измерения авид-ности.

Для педиатрической инфекционной практики значение имеет определение индекса авидности антител у детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией. Обнаружение высокоавидных антител к ядерному белку вируса ГС у таких детей свидетельствует о том, что антитела имеют материнское происхождение и не связаны с формированием инфекционного процесса. При динамическом наблюдении за детьми первого года жизни, рожденными матерями с хронической ГС-инфекцией, с включением в алгоритм лабораторного наблюдения теста измерения авидности антител можно прогнозировать состояние циркуляции материнских антител и диагностировать начало острой инфекции.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработан тест для измерения авидности антител класса IgG к ядерному и неструктурному ^4 белкам вируса гепатита С с использованием иммуносорбентов на основе синтетических пептидов, соответствующих иммунодоминантным регионам указанных белков. Определены основные параметры выполнения теста, включая кратность разведения образцов, концентрацию мочевины для обработки комплексов антиген-антитело, интерпретацию полученных результатов.

2. При гепатите С наблюдаются общие с другими вирусными, бактериальными и паразитарными инфекциями закономерности изменения авидности антител класса IgG к различным белкам вируса гепатита С. В связи с тем, что наиболее ранними и часто обнаруживаемыми антителами являются антитела к ядерному белку вируса, измерение авидности антител к этому белку имеет наибольшую диагностическую ценность.

3. У детей, рожденных матерями с хронической ВГС-инфекцией, в первые три месяца жизни наблюдается высокий уровень авидности антител к ядерному белку вируса гепатита С, что указывает на их материнское происхождение.

Реализация результатов исследования.

По результатам исследования получен патент Российской Федерации «Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита С» № 202114254/14(015062) от 30.05.2002 (положительное решение от 11.09.2003).

Основные материалы работы представлены в учебных пособиях НИИДИ для врачей «Современные подходы в лечении хронических гепатитов у детей» (Санкт-Петербург,2001) и «НС-вирусная инфекция у детей и подростков» (Санкт-Петербург, 2002).

Способ внедрен в практику работы Санкт-Петербургского НИИДИ (2001), клинической инфекционной больницы № 21 г. Волгограда (2001), Кировского областного центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями (2002), Санкт-Петербургского городского диагностического центра (вирусологического) в 2003 г.

Материалы диссертации используются в педагогическом процессе па кафедре инфекционных болезней у детей факультета постдипломного образования Санкт-Петербургской педиатрической медицинской академии.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на итоговых научно-практических конференциях Санкт-Петербургского НИИДИ (2000, 2001,

2002), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100 летию академика Смородинцева А.А. « Современные аспекты вакцинопрофилактики, химиотерапии, эпидемиологии, диагностики гриппа и других вирусных инфекций» (Санкт-Петербург, 2001), на IV Российской научно-практической конференции «Гепатит В, С и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2001), на заседании Санкт-Петербургского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной современным научным и практическим проблемам инфекционной патологии у детей (НИИДИ, Санкт-Петербург,

2003).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 153 страницах машинописного текста, включая 8 таблиц, 1 схему и 34 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и приложения. Список литературы включает 82 отечественных и 152 иностранных источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в вирусологической лаборатории Научно-исследовательского института детских инфекций Минздрава Российской Федерации.

Согласно поставленным целям и задачам исследование проводилось в трех основных направлениях:

- разработка диагностического теста для измерения авидности антител класса IgG к различным белкам вируса гепатита С,

- измерение авидности антител класса IgG к ядерному белку и неструктурному белку NS4 у больных острым и хроническим гепатитом С,

- наблюдение за изменениями показателя авидности антител у детей первого года жизни, рожденных матерями с ВГС-инфекцией.

Для разработки теста по определению авидности антител класса IgG к белкам вируса ГС был использован метод ИФА. В качестве антигенов применялись синтетические пептиды, соответствующие иммуно-доминантным регионам core белка (пептид С21, последовательность а.к. 3-75) и неструктурного белка NS4 (пептид NS645, последовательность а.к. 1689-1738 и 1921-1940). Пептиды синтезировались в лаборатории химии пептидов Государственного НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, к.х.н. ст.н.с. А.А.Колобовым (зав. лабораторией д.х.н., профессор О.А.Кауров) методом твердофазного синтеза с последующей хроматографической очисткой. Ранее было показано, что указанные пептиды обладают высокой антигенной активностью и могут применяться для диагностики гепатита С (патенты РФ 2138286,2133622).

Рабочие растворы пептидов С21 и NS645 в концентрации 1 мкг/мл готовились в карбонат-бикарбонатном буферном растворе с рН 9,5. Иммуносорбепты получали с использованием каждого пептида в отдельности. Для этого в лунки микропланшетов для ИФА с высокой адсорбционной емкостью (Biohit, Финляндия) вносили по 0,1 мл рабочего раствора пептидов С21 или NS645 и инкубировали 16-18 часов при комнатной температуре во влажной камере. После инкубации раствор из лунок удаляли, а микропланшеты высушивали и хранили при температуре +2-8° С в пластиковых пакетах.

Наряду с иммуносорбентами на основе пептидов С21 и NS645 для измерения авидности антител использовали коммерческую тест-систему «Аквагеп-С-Ат-2» (Аквапаст, Санкт-Петербург), иммуносорбент которой содержит сумму пептидов и рекомбинантных протеинов к разным белкам вируса ГС.

Для экспериментов по определению основных параметров теста для

измерения авидности антител к белкам вируса ГС было подготовлено 4 панели сывороток:

- панель № 1 - 30 сывороток, содержащих антитела класса IgG к вирусу ГС (анти-ВГС) по данным стандартных коммерческих ИФА тест-систем «Аквагеп-С-Ат-2» (Аквапаст, Санкт-Петербург) или «ImmunocombHCV» ^^п^, Израиль);

— панель № 2 — 30 сывороток, содержащих антитела класса IgM к ядерному белку вируса ГС по данным коммерческой ИФА тест-системы «РекомбиБест анти-ВГС—IgM» производства ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская область п. Кольцово;

- панель № 3 - 30 сывороток, содержащих анти-ВГС класса IgG, но не содержащих анти-ВГС класса IgM

— панель № 4 — 30 сывороток, не содержащих антител к вирусу гепатита С по данным коммерческих тест-систем

Подготовленные иммуносорбенты на основе пептидов С21 и NS645, а также панели сывороток использовали для постановки ИФА теста с целью измерения авидности антител. Принцип определения авидности антител в ИФА заключается в разрушении связей (гидрофобные взаимодействия и водородные связи) между антигеном и антителом с помощью разнообразных химических веществ (детергентов) и сравнения показателя оптической плотности раствора в лунке, которая подвергалась воздействию детергента, с таковым в лупке, не подвергавшейся воздействию детергента. В качестве разрушающего связи между антигеном и антителом химического вещества в работе использовали мочевину марки ч.д.а. в различной концентрации (ЗМ, 6М, 9М). В ходе экспериментов варьировали степень первоначального разведения исследуемых сывороток в диапазоне 1:10 - 1:20.

Расчет показателя авидности антител проводили по формуле:

ОП пробы, обработанной раствором мочевины

ИА.Х100

ОП пробы без обработки раствором мочевины и выражали его в процентах.

Всего в этой части работы было выполнено 2924 исследования.

Для реализации 2-го направления - измерение авидности антител класса IgG к ядерному белку и неструктурному белку №4 у больных острым и хроническим гепатитом С исследовали сыворотки крови, полученные от пациентов с различными клиническими формами ВГС, которые находились па лечении в клинике вирусного гепатита НИИ-ДИ. За период с 1999 по 2003 год было проведено комплексное обследование 155 детей в возрасте от 2-х до 14 лет, включая 33 ребенка с диагнозом острого гепатита С, 62 - с диагнозом хронического гепатита С и 60 детей, у которых были выявлены суммарные анти-ВГС, но

окончательный диагноз не был установлен. Все дети находились под наблюдением и обследовались лабораторно в динамике от 2 до 7 раз согласно разработанному алгоритму. Алгоритм лабораторного вирусологического обследования включал определение суммарных анти-ВГС, спектра антител к различным белкам вируса гепатита С, индекса авидности антител класса IgG к ядерному и NS4 белкам вируса ГС, антител к вирусу ГС класса IgM. В ряде случаев в сыворотке крови определяли РНК вируса ГС.

Суммарпые анти-ВГС, спектр анти-ВГС IgG определяли стандартным методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем соответственно «Аквагеп-С-Ат-2» и «АКВАГЕП-СПЕКТР-С подтверждающий», выпускаемых НПП «АКВАПАСТ», г. Санкт-Петербург. Все исследования выполнялись согласно инструкциям производителя.

Тест-система «АКВАГЕП-СПЕКТР-С подтверждающий» позволяет выявлять антитела к отдельным белкам вируса ГС, включая антитела к структурным (core) и неструктурным (NS3, NS4, NS5) белкам.

Для того, чтобы зафиксировать острую стадию заболевания или выявить периоды обострения хронического ГС была использована тест-система «РекомбиБест анти-ВГС—IgM» производства ЗАО «Век-тор-Бест» Новосибирская область, п. Кольцово.

Основным свойством этой тест-системы является ее способность выявлять в сыворотках (плазме) крови человека специфические антитела класса IgM к разным антигенам вируса ГС за счет их взаимодействия с иммобилизованными на планшетах рекомбинантными антигенами этого вируса.

Кроме качественного определения антител класса IgG проводили полуколичественный их учет. Поскольку между концентрацией антител и интенсивностью сигнала в ИФА (оптическая плотность раствора) существует линейная зависимость, уровень антител рассчитывали в условных единицах, представляющих отношение ОП исследуемой пробы к значению отсекающего показателя (cut off). Такой подход позволяет сравнивать между собой результаты исследований, проведенных в различное время.

Измерение авидности антител класса IgG к ядерному и NS4 белкам вируса ГС проводили по методике, описанной выше. РНК вируса ГС определяли в лаборатории молекулярной биологии Санкт-Петербургского НИИ гриппа РАМН (руководитель лаборатории к.б.н. М.П.Гру-динин) по методу H.Okamoto.

Для реализации 3-его направления исследования была установлена длительность персистирования антител к вирусу гепатита С и изменение индекса авидности антител класса IgG у 29 детей первого года жизни, рожденных матерями с различными клиническими формами гепатита С. В сыворотках определяли в динамике суммарные анти-ВГС, спектр антител к различным белкам вируса ГС и авидность ан-

тител к ядерному и NS4 белкам. Определение этих лабораторных показателей проведено от 3-х до 8 раз в динамике.

Указанная группа детей обследована с помощью тех же коммерческих тест-систем и разработанного метода измерения авидности, что и остальные группы пациентов.

Общее число различных исследований для реализации задач второго и третьего направлений составило 3185.

Статистическая обработка полученных результатов исследования проводилась на персональном компьютере Pentium IV с использованием программы Microsoft Excel 7.0 для Windows-XP.

Различия считали достоверными при вероятности 95% (р<0,05 и выше).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Поскольку для измерения авидности антител к отдельным белкам вируса ГС не существовало специальных тест-систем, необходимо было их разработать. Для создания теста был использован принцип твердофазного иммуноферментного анализа. В качестве антигенов применялись высокоочищенные синтетические пептиды, соответствующие иммунодоминантным регионам ядерного (С21) и неструктурного белка NS4 (NS645) вируса ГС. Приготовленные на основе указанных пептидов иммуносорбенты в стандартных испытаниях на панелях сывороток, содержащих и не содержащих анти-ВГС, показали высокую специфичность результатов. Все 30 анти-ВГС- негативных сывороток оказались отрицательными в ИФА на иммуносорбентах С21 и NS645. В то же время, все 30 анти-ВГС-позитивных сывороток прореагировали с иммуносорбентом С21, а 28 из них (93,3% ) - и с иммуносорбен-том NS645. Полученные результаты подтвердили ценность использования синтетических пептидов — аналогов иммунодоминантных регионов для конструирования диагностических тестов.

Авидность антител, характеризующая суммарную величину прочности связывания всех молекул антител с целевыми антигенными детерминантами, определяется путем разрушения связей между антигеном и антителом каким-либо химическим реагентом и измерением оставшихся связанными после обработки антител. В качестве разрывающего связи реагента наиболее часто используется мочевина в различных концентрациях. Сравнительный анализ результатов исследований одних и тех же модельных сывороток с применением промывающих буферных растворов, содержащих ЗМ, 6М и 9М мочевины, показал, что наиболее адекватные данные могут быть получены при обработке образцов 6М мочевиной. Применение сравнительно низких (ЗМ) и высоких (9М) концентраций мочевины приводило к значительному расхождению результатов при измерении авидности

аптител - 94,0± 1,5% и 79,9±3,5% соответственно для ЗМ и 9М растворов мочевины (р<0,001). В то же время, средний индекс авиднос-ти антител при применении 6М раствора составлял 86,3±2,9% и не отличался статистически от средних показателей при применении ЗМ и 9М мочевины.

В исследуемых образцах сыворотки крови может содержаться различная концентрация антител к тестируемым вирусным белкам. В связи с этим, важно было определить стандартную кратность разведения образца, позволяющую измерять авидность антител. В специальных экспериментах с панелью высокотитражных и низкотитражных сывороток, содержащей 8 образцов было продемонстрировано, что оптимально разводить сыворотки для измерения авидности антител не более, чем в 10 раз. Увеличение кратности разведения исследуемых образцов с низким содержанием антител приводит к снижению концентрации антител и большей доступности комплексов антиген-антитело воздействию детергента и, как следствие, полному их разрушению и невозможности измерить авидность антител.

Таким образом, стандартными условиями при проведении измерения авидности антител в ИФА на иммуносорбентах С21 и ^645 являлись обработка комплексов антиген-антитело, образующихся при исследовании сывороток, разведенных в 10 раз, 6М мочевиной.

Соблюдение этих условий позволило получать стабильно воспроизводимые результаты при измерении авидности антител в одних и тех же образцах сыворотки крови. В шести сериях экспериментов с 39 анти-ВГС-позитивными образцами было показано, что различие значений индекса авидпости при тестировании сывороток составляет всего12,2±1,4%.

Важным моментом при анализе показателей индекса авидности в отдельных исследованных образцах является заключение о высокой или низкой авидпости антител, присутствующих в сыворотке крови. Обычно для разграничения антител разной авидности при различных инфекциях используют пограничный показатель индекса авидности, определенный экспериментально на специальных панелях сывороток от больных с хорошо документированной острой фазой инфекционного процесса. Поскольку при гепатите С отсутствуют стандарты лабораторного подтверждения острой инфекции, пограничное значение индекса авидности определялось на панелях специально отобранных сывороток, содержащих одновременно IgG и IgM антитела к вирусу ГС или содержащих только IgG антитела по результатам тестирования в коммерческих тест-системах.

Средний индекс авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС в сыворотках, содержащих антитела класса IgM, составил 50,9±2,4%. В сыворотках, содержащих только антитела класса IgG, соответствующий показатель оказался значительно выше и достигал

95,7±0,94% (р<0,001). Этп результаты позволили определить пограничный показатель индекса авидности для антител класса IgG к ядерному белку науровне50%. При индексе авидности ниже этого уровня можно с уверенностью судить о преобладании в исследуемом образце низкоавидных антител. При доминировании антител высокой авидности, индекс авидности превышает значение 90%.

Определение среднего индекса авидности антител класса IgG к неструктурному белку №4 в сыворотках, содержащих и не содержащих антител класса IgM к вирусу ГС, не выявило каких-либо существенных различий между ЭТИМИ двумя группами образцов. Средний показатель индекса авидности для IgM-позитивных образцов составил 93,0 + 2.1%, а для IgM-негативных образцов 85,9±3,8% (р>0,05).Эти результаты могут свидетельствовать о том, что при гепатите С процесс антителообразования и смена классов антител к различным белкам вируса, по-видимому, не совпадают во времени. Получить дополнительную информацию подтверждающую или не подтверждающую эту рабочую гипотезу, можно было получить при сопоставлении результатов тестирования образцов от больных с различными формами ГС-инфекции на антитела к различным белкам вируса ГС и определения авидпости антител к ядерному и ^4 белкам с помощью разработанного теста.

Исследование сывороток крови больных острым и хроническим ГС выявило существенные различия в спектре циркулирующих антител у пациентов этих двух групп (рис. 1).

Core NS3 NS4 NS5

Белки вируса гепатита С □ острый ГС ЕЗ хронический ГС

Рис. 1. Частота выявления антител к различным белкам вируса гепатита С у больных острым и хроническим гепатитом С

У всех без исключения обследованных пациентов выявлялись антитела к ядерному белку вируса ГС, а у значительной части из них также присутствовали антитела к белку №3 - 84,6±7,1 на 100 и 90,9±5,0 на 100 соответственно у больных с острым и хроническим ГС. Однако между показателями частоты выявления антител к белкам №4 и №5 в двух сравниваемых группах имелись существенные различия. Так, у больных острым ГС антитела к белку №4 обнаруживались с частотой всего 23,1±8,3 на 100 обследованных, что более, чем в 4 раза реже по сравнению с больными хроническим ГС -100,0± 1,8% (р<0,001). Еще более выраженные различия имелись между частотными показателями для антител к белку №5 - 7,7±5,2 на 100 у больных острым ГС и 97,0±3,0 - у больных хроническим ГС (р<0,001).

Таким образом, низкая частота антител к белку №4 у пациентов с острым ГС делает бесперспективным использование определения авид-ности антител к этому белку для разграничения острой и хронической инфекции. В этих условиях возрастает значение измерения авид-пости антител к ядерному белку вируса ГС для диагностики различных форм инфекции, так как именно антитела к ядерному белку встречаются у всех пациентов.

Определение индексов авидности антител к ядерному белку вируса ГС у пациентов с острым и хроническим ГС показало значительные различия показателей в этих двух группах (рис. 2).

Белки вируса гепатита С

Рис. 2. Средние значения индекса авидности антител класса IgG к ядерному и неструктурному NS4 белкам у больных острым и хроническим гипатитом

У больных острым ГС средний показатель индекса авидности антител к ядерному белку вируса ГС составил 45,5±3,2% и оказался в 2 раза ниже соответствующего показателя у больных хроническим ГС - 94,4± 1,1% (р<0,001). Необходимо отметить, что для антител к белку №4 отмечены принципиально похожие, но менее выраженные различия их авидности у больных острым и хроническим ГС. Средний индекс авидности антител к белку №4 составил у больных острым ГС 61,1 ±7,6%, а у больных хроническим ГС - 88,1±2,5% (р<0,05). Достоверные различия в показателях авидности антител для двух диагностически важных белков вируса ГС у больных с острым и хроническим ГС лишь подтверждают факт, что при гепатите С имеются общие с другими инфекциями и инвазиями закономерности изменения авид-пости антител в течение инфекционного процесса.

Различие показателей авидности антител у больных острым и хроническим гепатитом С ставит еще один закономерный вопрос, касающийся длительности процесса созревания антител после завершения острой фазы инфекции и достижения ими высокой авидности. Для того, чтобы ответить на этот вопрос было организовано динамическое наблюдение за 8 пациентами с определением индекса авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС на сроках 1-2 месяца, 3-5 месяцев, 6-9 месяцев и 10 и более месяцев после начала заболевания. Через 1-2 месяца после начала заболевания индексы авидности антител у отдельных больных колебались от 23% до 50%, а средний показатель составил 35,3±4,6%. В дальнейшем происходило постепенное увеличение среднего показателя до 55,8±6,7% через 3-5 месяцев и 64,2±7,8% -через 6-9 месяцев. Длительность полного созревания антител варьировала у разных пациентов, но у большинства из них индекс авидности антител выше 90% был достигнут через 10 месяцев.

Таким образом, динамическое наблюдение за изменением авид-ности антител к ядерному белку вируса ГС позволило подтвердить корректность определенного пограничного показателя индекса авидности на уровне < 50% для низкоавидных антител и лабораторного диагноза острого ГС. Поскольку высокая авидность антител на уровне индекса авидности > 90% достигается через достаточно длительное время, промежуточные между < 50% п>90% показатели должны рассматриваться индивидуально в контексте других клинико-лабораторных данных. Длительные до двух лет наблюдения за индексами авидности к ядерному белку вируса ГС у больных с хроническим ГС не выявили существенных изменений показателей, средние значения которых постоянно находились на уров-

не 93,5-97,7%.

Известно, что гепатит С, как и другие вирусные гепатиты, чаще протекает у детей без выраженной клинической симптоматики и вы-

является нередко случайно по обнаружению анти-ВГС. В связи с этим, важно было сопоставить результаты определения спектра антител к различным белкам вируса и измерения авидности антител у детей с анти-ВГС, но без явных признаков заболевания. Было установлено, что в целом спектр антител у таких пациентов был сходен с таковым у больных хроническим ГС. Антитела к ядерному, NS3, №4 белкам обнаруживались соответственно с частотой 91,7±3,6, 90,0±3,9 и 95,0±2,8 на 100. Исключение составил только показатель для антител к белку NS5, который составил всего 16,7±4,8 и оказался в 5,8 раза меньше по сравнению с таковым (97,0±3,0) у больных с диагностированным хроническим ГС (р<0,001). Белок №5 представляет собой РНК-зависимую РНК полимеразу — важный фермент, необходимый для вирусной репродукции. Не исключено, что различие в частоте обнаружения антител к этому белку у пациентов с манифестными и скрыто протекающими формами хронического гепатита С связаны с более активной репродукцией вируса у лиц с выраженными клиническими симптомами.

Средний показатель индекса авидности антител к ядерному белку вируса ГС у лиц с анти-ВГС, но без явных признаков заболевания, составил 92,8± 1,8% и практически не отличался от соответствующего показателя у пациентов с хроническим ГС - 94,4± 1,1%. Таким образом, между этими двумя группами существуют лишь внешние различия, связанные с выраженностью клинической симптоматики.

Отдельно от проблемы обнаружения анти-ВГС у детей без явных признаков заболевания стоит вопрос об инфицпрованности вирусом ГС детей, рожденных женщинами с хронической ГС-инфекцией. У таких детей на первом году жизни часто обнаруживаются анти-ВГС, которые в практике ассоциируются с заболеванием гепатитом С, что нередко приводит к ошибочным заключениям об инфицировании новорожденных.

Для того, чтобы определить значение измерения авидности антител для выявления у детей первого года жизни острой ГС-инфекции было проведено динамическое наблюдение за 29 детьми, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией. Наблюдение включало определение уровня антител к ядерному белку и измерение их авидности . По результатам исследования все дети были разделены на две подгруппы. В первую группу вошли 20 детей, у которых в первые 2-3 месяца жизни удалось определить индекс авидности антител к ядерному белку вируса ГС. Среднее значение этого показателя составило 81,8±2,7%, что указывало на циркуляцию высокоавидных антител и их вероятное материнское происхождение. На это же указывал и достаточно высокий уровень антител к ядерному белку вируса, выраженный уровнем оптической плотности в ИФА, в среднем составивший 1,679±0,112 оптических единиц (о.е.). В дальнейшем происходило

постепенное снижение уровня антител к ядерному белку до 0,843±0,086 о.е. в возрасте 4-6 месяцев и 0,292±0,071 о.е. в возрасте 7-10 месяцев. У всех наблюдаемых детей антитела перестали определяться до достижения ими возраста 12 месяцев. Средние индексы авид-ности антител к ядерному белку вируса на этих же временных отрезках оставались достаточно высокими и колебались от 80% до 74%. Из вышеприведенных наблюдений вытекает важное заключение о том, что сохранение высокой авидности антител к ядерному белку вируса ГС у детей первого года жизни, рожденных женщинами с хронической ГС-инфекцией, на фоне снижения концентрации этих антител вплоть до полного их исчезновения является свидетельством отсутствия инфицированности таких детей вирусом ГС.

Во вторую группу вошли 9 детей, которые, в основном, впервые были обследованы в возрасте 7-10 месяцев и наблюдение за ними по аналогичному с первой группой детей алгоритму проводилось до возраста 19 месяцев и более. Важным отличием этой группы детей от вышеописанной явилось наличие у них высоких концентраций антител к ядерному белку вируса ГС в возрасте 7-12 месяцев со средним значением в ИФА 1,785±0,107 о.е. Средний индекс авидности антител к ядерному белку вируса ГС на этом временном отрезке составил 66,б± 10,7%, а у 5 из 9 обследованных детей индивидуальные индексы авидности оказались ниже 50%. В дальнейшем в сыворотках крови этих детей постоянно обнаруживались антитела к ядерному белку вируса в высоких концентрациях (1,854 - 2,001 о.е.) и наблюдалось постепенное повышение авидности антител. При определении индекса авидности в возрасте 19 месяцев и старше средний показатель достиг значения 86,4±9,1%. Необходимо отметить, что индивидуальные индексы авидности антител к ядерному белку у 8 из 9 детей колебались в пределах 87% -99% . Только у одного ребенка индексы авидно-сти оставались низкими во время всего наблюдения и не превысили 35%.

Результаты определения антител к ядерному белку вируса и индексов их авидности во второй группе детей в динамике позволяют сделать заключение, что эти дети были инфицированы вирусом ГС, предположительно в первом полугодии их жизни.

Таким образом, разработанный тест и экспериментально обоснованная методика определения авидности антител к ядерному белку вируса ГС класса IgG оказались полезными для лабораторного разграничения острой и хронической ГС-инфекции, а также обследования детей первого года жизни с выявленными антителами к вирусу ГС.

На основе результатов исследования разработан алгоритм включения теста определения авидности антител к ядерному белку, который представлен на рисунке 3.

Рис. 3 Алгоритм серологического лабораторного обследования детей с предполагаемым вирусным гепатитом С и интерпретация результатов измерения авидности антител класса IgG

ВЫВОДЫ

1. Разработан тест для измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса ГС в ИФАна основе иммуносорбента, включающего синтетические пептиды, соответствующие иммуно-доминантным регионам ядерного и NS4 белков вируса, и обработки комплексов антиген-антитело, образующихся при исследовании образцов, 6М мочевиной. Тест отличается высокой воспроизводимостью результатов с максимальной вариабельностью показателей 12,2%.

2. В образцах анти-ВГС-позитивных сывороток, содержащих антитела класса IgM, средний индекс авидности антител класса IgG к ядерному белку составляет 50,9%, тогда как в образцах, не содержащих антител класса IgM, показатель индекса авидности достигает 95,7%. Это позволяет установить пограничное значение для низко-авидных антител на уровне <50%.

3. У больных острым гепатитом С наиболее часто обнаруживаются антитела класса IgG к ядерному (100%) и NS3 (84,6%) белкам вируса ГС, а антитела к NS4 и NS5 белкам выявляются всего в 23,1% - 7,7% случаев соответственно. У больных хроническим ГС частота выявления указанных антител колеблется от 90,9% (NS3) до 100% (Core, NS4). Значительная доля пациентов с антителами к ядерному белку вируса ГС делает использование теста измерения авидности антител к этому белку перспективным для разграничения острой и хронической инфекции.

4. Средний индекс авидпости антител к ядерному белку вируса ГС у больпых острым ГС в первые недели заболевания составляет 45,5%, а у больных хроническим ГС - 94,4%, что свидетельствует о преобладании низкоавидпых антител к ядерному белку у пациентов с острым ГС и высокоавидных антител - у больных хроническим ГС. Средний индекс авидности антител у лиц с анти-ВГС, но без явных признаков заболевания, составляет 92,8%, что указывает на давность заражения и высокую вероятность у них хронической инфекции.

5. Полное созревание антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС и достижение ими высокой авидности (>90%) у отдельных больных, перенесших острый ГС, происходит через различные промежутки времени, но в среднем этот процесс длится не менее 10 месяцев. У больных хроническим ГС постояпно циркулируют антитела высокой авидности.

6. У детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, в первые месяцы жизни наблюдается высокая авидность антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС (81,8% ), что свидетельствует об их материнском происхождении. Снижение концентрации антител у таких детей при сохраняющемся высоком индексе авидности антител к ядерному белку вируса ГС является благоприятным прогностическим критерием, свидетельствующим о том, что дети не были инфицированы вирусом ГС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью диагностики острого и хронического гепатита С вирусологическим лабораториям рекомендуется использовать дополнительный тест определения авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС. Значение индекса авидности <50% свидетельствует о преобладании низкоавидных антител к ядерному белку в исследуемом образце, которые характерны для острого процесса. У больных с манифестным хроническим ГС индекс авидности антител, как правило, превышает 90%.

2. Для принятия решения об ипфицированности вирусом ГС детей первого года жизни, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, необходимо проводить динамическое наблюдение за уровнем суммарных антител к вирусу ГС или антител к ядерному белку вируса и показателями индекса авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса. Снижение индекса авидности антител к ядерному белку при сохраняющемся высоком уровне антител является неблагоприятным признаком развития гепатита С.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Использование синтетических пептидов для диагностики вирусного гепатита С / С.Л. Мукомолов, А.А. Колобов, В.А. Плотникова, Е.А.Кампе-Немм, И.А. Созина, А.Л. Мукомолова, В.А. Шпень,

A.Н. Прусаков // Глобальный контроль за вирусными гепатитами: Материалы 1-ой международной конференции по вирусным гепатитам -Минск.,июпь 11-12,1997 - С. 28-30.

2. Мукомолова А.Л. Пути совершенствования диагностики и лечения НС-вирусной инфекции / А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева,

B.А. Тихонова / / Детские инфекции на рубеже XXI века: настоящее и будущее: Материалы научно-практической конференции. — СПб., 1999.-С. 32-33.

3. Мукомол ова А.Л. Авпдность антител у детей с вирусным гепатитом С / А.Л. Мукомолова, О.А. Аксепов, Л.Г. Горячева // Актуальные вопросы детской инфектологии: Материалы Итоговой научно-практической конференции. - СПб., 2000. - С. 65-70.

4. Современные подходы в лечении хронических гепатитов у детей / Л.Г. Горячева, В.А. Тихонова, Н.В. Рогозина, Н.Н. Муравьева, Е.А. Мурина, А.Л .Мукомолова / / Учебное пособие для врачей инфекционистов, педиатров, гастроэнтерологов. - СПб., 2000. - 20 с.

5. Новое в диагностике острых и хронических вирусных инфекций / О.А. Аксенов, З.А. Осипова, Е.А. Мурина, А.Л. Мукомолова, О.В. Голева // Новые технологии в терапии и профилактике инфекционных заболеваний у детей: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - СПб., 2000. — С. 16-17.

6. Мукомолова А.Л. Роль антител к структурным и неструктурным белкам в диагностике и течении НС-вирусной инфекции / Современные аспекты вакципопрофилактики, химиотерапии, эпидемиологии, диагностики гриппа и других вирусных инфекций: Материалы Всероссийской научной конференции, посвященной 100 летию академика Смородинцева А.А. - СПб., 2001. - С. 35-36.

7. Вирусологические методы исследования в дифференциальной диагностике острых и хронических форм HCV-инфекции у детей /А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева, О.А. Аксенов, М.А.Пономарева // Перспективы снижения инфекционной заболеваемости и летальности детей: патогенез, терапия, профилактика: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - СПб., 2001. - С. 46.

8. Авидность антител к ядерному белку вируса гепатита С у больных с острой и хронической HCV инфекцией / А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева, А.А. Колобов, А.С. Гусев, О.А. Аксенов, С.Л. Мукомолов // Гепатит В, С, и D — проблемы диагностики, лечения и профилактики: Материалы IV Российской научно-практической конференции. - М., 2001. - С. 241-242.

9. НС - вирусная инфекция у детей и подростков / Л.Г. Горячева, О.А. Аксенов , М.А. Пономарева, Н.В. Рогозина, И.В. Тихомирова, А.Л. Мукомолова, Л.Н. Крыга // Учебное пособие для врачей. - СПб.,

2002.-43 с.

10. Мукомолова А.Л. Специфическая лабораторная диагностика гепатита С у детей / А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева, О.А. Аксенов / / Современные научные и практические проблемы инфекционной патологии у детей: Материалы Всероссийской конференции. - СПб., -

2003.-С. 81.

11. Современный взгляд на проблему НС-вирусной инфекции у детей и подростков и достижения противовирусной терапии / Л.Г. Горячева, Г.Ф. Железникова, М.А. Пономарева, И.В. Тихомирова, А.Л. Мукомолова, Н.В. Рогозина, Н.Е. Монахова // Современные

научные и практические проблемы инфекционной патологии у детей: Материалы Всероссийской конференции. - СПб., - 2003. - С. 39.

12. Горячева Л.Г. Диагностика различных форм HCV-инфекции у детей /Л.Г. Горячева, И.В. Шилова, А.Л. Мукомолова // Гепатит В, С, и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики: Материалы V Российской научно-практической конференции 3-5 июня 2003 г. - М., 2003.- С. 65-66.

13. Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита С /О.А. Аксенов, А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева, Н.В. Рогозина, А.А. Колобов// Заявка № 2002114254/14(015062).

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

анти-ВГС — антитела к вирусу гепатита С

ВГС - вирус гепатита С

ГС - гепатит С

ИА — индекс авидности

ИФА — иммуноферментный анализ

ОГС — острый гепатит С

о. е. — оптическая единица

ОП — оптическая плотность

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ХГС - хронический гепатит С

anti-core - антитела к ядерному белку ВГС

anti-NS3-5 - антитела к неструктурным белкам 3-5 ВГС

С - ядерный белок

core — ядерный белок

NS1-5 - неструктурные белки 1-5

Подписано в печать26.03.04. Формат 60х841/16» Объем I1/, п.л. Заказ 76.03. Тираж 100 экз.

ООО «Издательство Русь», 190031, Санкт-Петербург, Столярный пер., д. 18/69, А/Я 707.

6420

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Мукомолова, Анна Львовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ВИРУС ГЕПАТИТА С И МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ ЭТИМ ВОЗБУДИТЕЛЕМ.

1.1 Вирус гепатита С.

1.2 Диагностика вирусного гепатита С.

1.2.1 Определение антител классов IgG и IgM к белкам вируса гепатита

С методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга.

1.2.2 Определение ядерного антигена вируса гепатита С в сыворотке крови.

1.2.3 Качественное и количественное определение РНК вируса гепатита С.

1.2.4 Определение генотипа вируса гепатита С.

1.3 Измерение авидности антител класса IgG - широко распространенный метод диагностики.

1.3.1 Принципы определения авидности антител класса IgG.

1.3.2 Использование определения авидности антител для диагностики стадий инфекционного процесса при различных инфекционных и паразитарных заболеваниях; и оценки эффективности вакцин.

1.3.3 Авидность антител при гепатите С.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций"

Актуальность. После того, как 15 лет назад появилась первая публикация об открытии вируса гепатита С [105], началось интенсивное изучение инфекции, вызываемой этим возбудителем. Многими специалистами было показано, что вирусный гепатит С (ГС) является одной из самых актуальных проблем здравоохранения во всем мире, включая Россию [46, 47, 48, 53, 54, 61, 62, 63, 64, 65, 77], в связи с широкой распространенностью инфекции и ее частыми неблагоприятными исходами в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоклеточный рак. Глубокое изучение любой инфекции невозможно без лабораторных методов диагностики. За сравнительно короткий период времени для диагностики ГС было разработано и апробировано множество тестов, основанных на принципах иммуноферментного анализа (ИФА), иммуноблоттинга, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и других. Широкое применение разнообразных лабораторных методов позволило получить много важных данных об эпидемиологии ГС, естественном течении инфекции, патогенезе, эффективности противовирусного лечения.

Несмотря на большое разнообразие лабораторных методов, основным тестом, повсеместно и широко применяемым для диагностики гепатита С, остается выявление суммарных антител к белкам вируса (анти-ВГС) в иммуноферментном анализе. Специальными исследованиями показана высокая специфичность и чувствительность иммуноферментных тест-систем третьего-четвертого поколения для выявления анти-ВГС. Однако по наличию анти-ВГС можно установить только факт инфицирования человека вирусом ГС, но нельзя сделать заключения о давности процесса, что имеет значение для планирования и применения терапевтических мероприятий в клинике инфекционных болезней.

Одним из простых и доступных лабораторных методов для разграничения острой и хронической инфекции, а также имевшей место инфекции в прошлом, уже много лет является измерение авидности антител. Этот показатель характеризует суммарную величину прочности связывания всех молекул антител с целевыми антигенными детерминантами. Многими исследованиями было продемонстрировано, что в период острой инфекции синтезирующиеся антитела класса IgG обладают низкой авидностью, однако в дальнейшем они заменяются на высокоавидные антитела, которые могут длительно циркулировать. На основании этого феномена построен алгоритм разграничения острой и хронической инфекции при инфекциях, вызванных цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барр, вирусом герпеса и многих других [99, 158,159, 160, 195, 201].

При гепатите С значение измерения авидности антител для диагностики практически не изучено. Имеется лишь несколько публикаций на эту тему с ограниченным числом наблюдений [25, 148, 165, 229]. Остается неизвестным, как меняется авидность антител класса IgG к основным диагностически значимым белкам вируса ГС - ядерному и NS4 — в различные фазы инфекционного процесса. Во многом такое положение связано с отсутствием разработанного теста для определения авидности антител к белкам вируса ГС и обоснований для практической интерпретации получаемых результатов.

Цель исследования. Установить значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекции и определить место этого теста в алгоритме комплексной лабораторной диагностике гепатита С у детей.

Задачи исследования.

1 .Разработать диагностический тест для измерения авидности антител на основе синтетических пептидов, представляющих иммунодоминантные регионы ядерного и NS4 белков вируса гепатита С.

5. Предложить новый алгоритм комплексной лабораторной диагностики гепатита С с учетом теста измерения авидности антител класса IgG.

Научная новизна работы.

Впервые разработан тест для измерения авидности антител класса IgG на основе синтетических пептидов - аналогов иммунодоминантных регионов ядерного и неструктурного NS4 белков.

Получена новая информация об авидности антител класса IgG к ядерному и NS4 белкам у больных с различными клиническими формами ГС-инфекции. Установлено, что антитела к ядерному белку вируса ГС встречаются наиболее часто у больных в острой стадии инфекционного процесса. С помощью теста измерения авидности показано, что авидность IgG антител к ядерному белку вируса ГС изменяется в течение инфекционного процесса. В стадии острого процесса этот показатель, как правило, не превышает 50%, а в стадии хронической инфекции — достигает 90 - 100%. Эти данные указывают на то, что при гепатите С наблюдаются общие для инфекционных заболеваний закономерности формирования иммунного ответа. В частности, продемонстрировано, что при одновременной циркуляции антител к ядерному белку вируса ГС классов IgM и IgG последние являются низкоавидными.

Измерение авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС у детей первых месяцев жизни, рожденных матерями с хронической ВГС-инфекцией, позитивных по анти-ВГС в коммерческих тестах, продемонстрировало, что этот показатель соответствовал таковому у лиц с длительным инфекционным процессом. Этот факт подтверждает мнение о том, что в первые месяцы жизни у детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, обнаруживаются материнские антитела.

Практическая значимость работы.

Разработанный простой и экономичный тест определения антител к структурному ядерному и неструктурному NS4 белкам вируса гепатита С различной степени авидности расширяет методическую базу и возможности лабораторий, занимающихся рутинной диагностикой гепатита С.

Для педиатрической инфекционной практики значение имеет определение индекса авидности антител у детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией. Обнаружение высокоавидных антител к ядерному белку вируса ГС у таких детей свидетельствовало о том, что антитела имеют материнское происхождение и не связаны с формированием инфекционного процесса. При динамическом наблюдении за детьми первого года жизни, рожденными матерями с хронической ГС-инфекцией, с включением в алгоритм лабораторного наблюдения теста измерения авидности антител можно прогнозировать состояние циркуляции материнских антител и диагностировать начало острой инфекции.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработан тест для измерения авидности антител класса IgG к ядерному и неструктурному NS4 белкам вируса гепатита С с использованием иммуносорбентов на основе синтетических пептидов, соответствующих иммунодоминантным регионам указанных белков. Определены основные параметры выполнения теста, включая кратность разведения образцов, концентрацию мочевины для обработки комплексов антиген-антитело, интерпретацию полученных результатов.

Реализация результатов исследования.

По результатам исследования получен патент Российской Федерации «Способ дифференциальной диагностики вирусного гепатита С» № 202114254 от 30.05.2002 (положительное решение от 11.09.2003).

Способ внедрен в практику работы Санкт-Петербургского НИИДИ (2001), клинической инфекционной больницы №21 г. Волгограда (2001), Кировского областного центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями (2002), Санкт-Петербургского городского диагностического центра (вирусологического) в 2003 г.

Материалы диссертации используются в педагогическом процессе на кафедре инфекционных болезней у детей факультета постдипломного образования Санкт-Петербургской педиатрической медицинской академии.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на итоговых научно-практических конференциях Санкт-Петербургского НИИДИ (2000, 2001, 2002), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100 летию академика Смородинцева А.А. «Современные аспекты вакцинопрофилактики, химиотерапии, эпидемиологии, диагностики гриппа и других вирусных инфекций » (Санкт-Петербург, 2001г), на IV Российской научно-практической конференции «Гепатит В, С и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2001), на заседании Санкт-Петербургского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной современным научным и практическим проблемам инфекционной патологии у детей (НИИДИ, Санкт-Петербург, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ.

Объем и структура диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Мукомолова, Анна Львовна

ВЫВОДЫ

1. Разработан тест для измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса ГС в ИФА на основе иммуносорбента, включающего синтетические пептиды, соответствующие иммунодоминантным регионам ядерного и NS4 белков вируса, и обработки комплексов антиген-антитело, образующихся при исследовании образцов, 6М мочевиной. Тест отличается высокой воспроизводимостью результатов с максимальной вариабельностью показателей 12,2%.

2. В образцах анти-ВГС-позитивных сывороток, содержащих антитела класса IgM, средний индекс авидности антител класса IgG к ядерному белку составляет 50,9%, тогда как в образцах, не содержащих антител класса IgM, показатель индекса авидности достигает 95,7%. Это позволяет установить пограничное значение для низкоавидных антител на уровне <50%.

4. Средний индекс авидности антител к ядерному белку вируса ГС у больных острым ГС в первые недели заболевания составляет 45,5%, а у больных хроническим ГС - 94,4%, что свидетельствует о преобладании низкоавидных антител к ядерному белку у пациентов с острым ГС и высокоавидных антител - у больных хроническим ГС. Средний индекс авидности антител у лиц с анти-ВГС, но без явных признаков заболевания, составляет 92,8%, что указывает на давность заражения и высокую вероятность у них хронической инфекции.

5. Полное созревание антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС и достижение ими высокой авидности (>90%) у отдельных больных, перенесших острый ГС, происходит через различные промежутки времени, но в среднем этот процесс длится не менее 10 месяцев. У больных хроническим ГС постоянно циркулируют антитела высокой авидности.

6. У детей, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, в первые месяцы жизни наблюдается высокая авидность антител класса IgG к ядерному белку вируса ГС (81,8%), что свидетельствует об их материнском происхождении. Снижение концентрации антител у таких детей при сохраняющемся высоком индексе авидности антител к ядерному белку вируса ГС является благоприятным прогностическим критерием, свидетельствующим о том, что дети не были инфицированы вирусом ГС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Для принятия решения об инфицированности вирусом ГС детей первого года жизни, рожденных матерями с хронической ГС-инфекцией, необходимо проводить динамическое наблюдение за уровнем суммарных антител к вирусу ГС или антител к ядерному белку вируса и показателями индекса авидности антител класса IgG к ядерному белку вируса. Снижение индекса авидности антител к ядерному белку при сохраняющемся высоком уровне антител является неблагоприятным признаком развития гепатита С.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Мукомолова, Анна Львовна, Санкт-Петербург

1. Абдукадырова М.А. Прогностические маркеры хронизации вирусного гепатита С / М.А.Абдукадырова // Иммунопатология и клиническая иммунология. 2002. — №1. — С.47-50.

2. Абдукадырова М.А. Клинические варианты острого вирусного гепатита С /М.А.Абдукадырова // Иммунопатология и клиническая иммунология. — 2002.- №1. С.51-54.

3. Абдулмеджидова А.Г. Характеристика панели моноклональных антител к рекомбинантному белку NS3 вируса гепатита С / А.Г.Абдулмеджидова, О.В.Масалова, С.Н.Атанадзе и др. // Вопросы вирусологии. 2002. -№1.- С.21-25.

4. Афанасьев А.Ю. ИФА-диагностика в разграничении гепатита С острого и хронического течения / А.Ю.Афанасьев, С.В.Зубов, Ю.Е.Юданов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. -1995.-Т.5, №3.- прил.1. С. 12.

5. Балаян М.С. Вирусные гепатиты: Энциклопедический словарь /М.С.Балаян, М.И.Михайлов // Изд.2-ое переработанное и дополненное — М.: Амипресс, 1999. 304с.

6. Бобкова М.Р. Возможные механизмы взаимного влияния инфекций, вызываемых ВИЧ и вирусом гепатита С / М.Р.Бобкова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии — 2002. — №5. — С.104-115.

7. Бузина А.Б. Спектры антител к антигенам HCV при острой и хронической формах гепатита С / А.Б.Бузина // Гепатит В, С и D -проблемы диагностики, лечения и профилактики: Тезисы докладов IV Российской научно-практической конференции. — М., 2001. — С.50-51.

8. Васильева Е.А. Сравнительная характеристика вирусных гепатитов В и С по данным клинико-лабораторного и эпидемиологического обследования: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. — СПб., 1995. — 24с.

9. Ветров Т.А. Клиническое значение определения антител к поверхностным белкам вируса гепатита С: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. — СПб., 2003. — 15с.

10. Вирусные гепатиты в Российской Федерации: Аналитический обзор/ Под ред. А.Б.Жебруна. — СПб.: НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, 2000. вып.З. - 256с.

11. Галазка А. Иммунологические основы иммунизации. Вып.1.Общая иммунология. Женева, 1993. - 29 с.

12. Гончарук М.Ю. Распространение гепатита С в семейных очагах / М.Ю.Гончарук, Е.И.Ефимов, Т.Н.Быстрова и др. // Гепатит С (Российский консенсус): Тез. докл. Научно-практической конференции, 26-27 сентября 2000г. М., 2000. - С.30-31.

13. Гончарук М.Ю. Вирусный гепатит С и наркотики / М.Ю.Гончарук, Е.И.Ефимов, Т.Н.Быстрова и др. // Гепатит В, С и D проблемы диагностики, лечения и профилактики: Тез. докл. TV Российской научно-практической конференции. — М.,2001. — С.82-83.

14. Горячева Л.Г. Современные подходы в лечении хронических гепатитов у детей / Л.Г.Горячева, В.А.Тихонова, Н.В.Рогозина и др. // Учебное пособие. СПб., - 2000 . - 20с.

15. Григирьева Е.А. Клинические варианты гепатита С у детей / Е.А.Григорьева, И.А.Московская, М.ИМихайлов и др.// Гепатит С (Российский консенсус): Тезисы докладов научно-практической конференции. М., 2000. - С.31.

16. Дифференциальная лабораторная иммунодиагностика вирусных гепатитов: Методические рекомендации /А.А.Новик, В.Н.Цыган, В.Ю.Никитин и др. М., 2002. -78 с.

17. Дмитриева Т.Г. Клинико-лабораторная характеристика вирусного гепатита С у детей: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд.мед наук. СПб., 1999. - 27 с.

18. Ершова О.Н. Характеристика современных эпидемиологических особенностей НС-вирусной инфекции и активность перинатальной передачи вируса гепатита С: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. М., 2000. - 29с.

19. Ершова О.Н. Характеристика активности естественных путей передачи вируса гепатита С / О.Н. Ершова, И.В.Шахгильдян, С.Н.Кузин // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., 2002. — Т.З. - С.23-24.

20. Жданов В.М. Вирусные гепатиты /В.М.Жданов, В.А.Ананьев, В.М.Стаханова. М.: Медицина, 1986. - 256с.

21. Знойно О.О. Вирусный гепатит С (клиника, диагностика и исходы): Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук. — М., 1994. — 23с.

22. Зубов С.В. Серологический профиль в разные фазы гепатита С / С.В.Зубов, С.Н.Соринсон, Ю.Е.Жданов // В кн. Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. СПб., 1995. - 86с.

23. Ильина Е.Н. Хронические вирусные заболевания печени / Е.Н.Ильина, Е.Е.Фомина, Е.К.Артемов . М., 2002. - С.21.

24. Калинина О.В. Молекулярно-генетическая характеристика вариантов вируса гепатита С, циркулирующих в Санкт-Петербурге: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук. — СПб., 2000. — 22с.

25. Калышенко М.В. Субпопуляционный состав лимфоцитов/моноцитов крови человека у больных острыми вирусными гепатитами В и С / М.В.Калышенко, И.П.Балмасова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2002.- N°3.-С.46-48.

26. Крутлов И.В. Серологическое исследование эпитопов белка NS5 вируса гепатита С и их значение для клиники и диагностики / И.В.Круглов, О.О.Знойко, М.П.Финогенова и др. // Вопросы вирусологии. 2000. - №1. -С. 14-17.

27. Круглов И.В. Спектр антител к различным антигенам HCV при различных вариантах течения хронической HCV-инфекции / И.В.Круглов, О.О.Знойко, О.Л.Огиенко // Вопросы вирусологии. — 2002. -№2. -С.11-16.

28. B, дельта и С / С.Н.Кузин, И.В.Шахгильдян, А.Я.Буриев // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1998. — №6. — С.25-28.

29. Кузин С.Н. Распространение гепатита С и отдельных генотипов вируса гепатита С в регионе с умеренной активностью эпидемического процесса /

30. C.Н.Кузин, Е.В.Лисицина, Е.И.Самохвалов и др. // Вопросы вирусологии. 1999.- №2. - С.79-82.

31. Кузнецова А.В. Случай внутрисемейной передачи HCV-инфекции / А.В.Кузнецова, А.И.Жердева // Гепатит В, С и D проблемы диагностики, лечения и профилактики: Тез. докл. IV Российской научно-практической конференции. - М., 2001. - С. 192-193.

32. Кузнецова И.О. Результаты скрининга на антитела к вирусу гепатита С в различных группах населения в Свердловской области / И.О.Кузнецова,

33. B.В.Романенко, О.С.Утницкая и др. // Гепатит С (Российский консенсус): Тезисы докладов научно-практической конференции. — М., 2000. С.72.

34. Львов Д.К. Распространение генотипов вируса гепатита С, циркулирующих на территории Северо-Западной и Центральной частей России / Д.К.Львов, С.Миширо, Н.А.Селиванов и др. // Вопросы вирусологии. 1995. - №6. - С .251-253.

35. Львов Д.К. Вирусные гепатиты / Д.К.Львов // Вопросы вирусологии. — 2002.-№6. С.44-46.

36. Масалова О.В. Характеристика панели моноклональных антител и эпитопное картирование белков вируса гепатита С / О.В.Масалова, А.Г.Абдулмеджидова, С.Н.Атанадзе // Докл. АН. 2002. - Т.383. - №4.1. C.545-550.

37. Масалова О.В. Анализ белков вируса гепатита С в клетках печени больных хроническим гепатитом С / О.В.Масалова, А.Г.Абдулмеджидова, Т.В.Шкурко // Вопросы вирусологии.-2003. №1.-С.9-14.

38. Мохонов В.В. Анализ генома изолята 274933RU вируса гепатита С, выделенного на территории Российской Федерации / В.В.Мохонов, Д.В.Новиков, Е.И.Самохвалов и др. // Вопросы вирусологии. 2002. -№1. — С.9-11.

39. Мукомолов С.Л. Вирусные гепатиты / С.Л.Мукомолов, И.В.Валькова, Н.А.Чайка. СПб., - 1992. - 97с.

40. Мукомолов С.Л. Вирусный гепатит С. Клинико-эпидемиологическая и лабораторная характеристика: Автореф. дис. на соискание ученой степени докт. мед. наук. СПб., 1994. — 35с.

41. Мукомолов С.Л. Диагностическое значение определения антител класса IgM к ядерному белку вируса гепатита С / С.Л.Мукомолов, А. А .Яковлев, А.А.Колобов и др.// Вирусные гепатиты и другие актуальные инфекции. -СПб. 1997. - Т.1. -С.61-70.

42. Николаева Л.И. Титры вирусспецифических антител в разные фазы инфекции вирусом гепатита С / Л.И.Николаева // Информационный бюллетень. Новости "Вектор-Бест". 2001. - №19. - С.2-5.

43. Онищенко Г.Г. О состоянии заболеваемости вирусными гепатитами в Российской Федерации и неотложных медицинских мерах по ее стабилизации / Г.Г.Онищенко // Вопросы вирусологии. 2001. - №4. -С.4-7.

44. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика / И.В.Шахгильдян, М.И.Михайлов, Г.Г.Онищенко. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003.-383с.

45. Раков АЛ. Актуальные проблемы гепатологии: эпидемиология вирусных гепатитов / Под ред. И.М.Чижа и Л.Л.Галина / АЛ.Раков, Ю.В.Лобзин, В.В.Горбаков и др.// Приложение к СССХХХШ тому «Военно-медицинского журнала». — М., 2002. 96 с.

46. Созина И.А. Разработка и использование метода определения генотип-специфических антител к вирусу гепатита С: Автореф. дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук. СПб., 1999. — 20с.

47. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике / С.Н.Соринсон. СПб.: Теза, 1996. - С.204-234.

48. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. Изд. 2-ое /С.Н.Соринсон- СПб.: Теза, 1998.-331с.

49. Фридлянд И.Ф. Хронический вирусный гепатит С: особенности иммунитета у больных с персистенцией вируса в мононуклеарных клетках / И.Ф.Фридлянд, О.Н.Гришаева, М.П.Гришаев и др.// Иммунопатология и клиническая иммунология. 2002. - №2. — С.121-124.

50. Характеристика перинатальной передачи НС- и HG- вирусной инфекции / О.Н.Ершова и др. // Гепатит В, С, и D — проблемы диагностики, лечения и профилактики: Тез. докл. V Российской научно-практической конференции 3-5 июня 2003 г. М., 2003. - С.92-93.

51. Шкурко Т.В. Острый гепатит С на фоне хронической HBV-инфекции / Т.В.Шкурко, С.Г.Чешик, Д.М.Брагинский // Вопр.вирусологии. 2002. -№1. — С.12-14.

52. Шустов А.В. Частота встречаемости маркеров гепатита С и факторы риска у персонала больниц Новосибирской области / А.В.Шустов, Г.В.Кочнева, Г.Ф.Сиволобова и др, // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. — №2. — С.26-32.

53. Alvarado-Esquivel С. Comparison of two commercially available avidity tests for toxoplasma-specific IgG antibodies / Alvarado-Esquivel C., Sethi S., Janitschke K. et al.// Arch. Med. Res. 2002. - v.33. - N6. - P.520-523.

54. Abou-Basha L.M. Specific IgG avidity in acute and chronic human fascioliasis / Abou-Basha L.M., Shehab A.Y., Osman M.M., Farag H.F.// East.Mediterr. Health J. 2000. - v.6. - N5-6. - P.919-925.

55. Aoyagi K. Development of a simple and highly sensitive enzyme immunoassay for Hepatitis С virus core antigen/ Aoyagi K., Ohue C., Iida K. et al.// J.Clin.Microbiol. 1999. -v.37. -N6. -P. 1802-1808.

56. Aoyagi K. Performance of a conventional enzyme immunoassay for hepatitis С virus core antigen in the early phases of hepatitis С infection/ Aoyagi K., Iida K., Ohue C., et al.// Clin.Lab. 2001. - v.47. -N 3-4. - P. 119-127.

57. Anderson S.C. Comparison of two second-generation anti-hepatitis С virus ELISA on 21431 US blood donor samples/ Anderson S.C., Hathaway Т., Kuramoto I.K et al.// J.Viral Hepat. 1995. - v.2. - N1. - P.55-61.

58. Arase Y. Efficacy of prolonged interferon therapy for patients with chronic hepatitis С with HCV-genotype lb and high virus load / Arase Y., Ikeda K., Tsubota A. et al.// J.Gastroenterol. -2003. v.38. -N2. -P.158-163.

59. Baccard-Longere M. Multicenter evaluation of a rapid and convenient method for determination of cytomegalovirus immunoglobulin G avidity / Baccard1.ngere М., Freymuth F., Cointe D. et al.// Clin.Diagn.Lab.Immunol. 2001. -v.8. — N2. — P.429-431.

60. Barerra J.M. Improved detection of anti-HCV in post-transfusion hepatitis by third-generation ELISA / Barerra J.M., Francis В., Ercilla G., et al.// Vox Sang.- 1995. v.68. - N1. - P.15-18.

61. Berger A. Lack of correlation between different hepatitis С virus screening and confirmatory assays / Berger A., Doerr H.W., Preiser W., Weber B. // J.Virol.Methods. 1996. - v.59. - N1-2. -P.141-146.

62. Bizollon T. Anti-hepatitis С virus core IgM antibodies correlate with hepatitis С recurrence and its severity in liver transplant patients / Bizollon Т., Si Ahmed S.N., Guichard S. Et al.// Gut. 2000. - v.47. - N47. - P.698-702.

63. Bodeus M. Avidity of IgG antibodies distinguishes primary from nonprimary cytomegalovirus infection in pregnant women/ Bodeus M., Feyder S., Goubau P. // Clin. Diagn. Virol. 1998. - v.9. -Nl. -P.9-16.

64. Bodeus M. Ability of three IgG-avidity assays to exclude recent cytomegalovirus infection/ Bodeus M., Beulne D., Goubau P. // Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 2001. - v.20. - N3. - P.248-252.

65. Bottiger B. Maturation of rubella IgG avidity over time after acute rubella infection/ Bottiger В., Jensen LP. // Clin. Diagn. Virol. 1997. - v.8. - N2. -P.105-111.

66. Bouvier-Alias M. Clinical utility of total HCV core antigen quantification: a new indirect marker of HCV replication/ Bouvier-Alias M., Patel K., Dahari H. et al.// Hepatology. 2002. - v.36. - N1. - P.211-218.

67. Callahan J.D. Second generation hepatitis С virus assays: performance when testing African sera/ Callahan J.D., Constantine N.T., Kataaha P. et al.// J.Med. Virol. 1993. - v.41. -Nl. - P.35-38.

68. Chamberlian R.W. The complete coding sequence of hepatitis virus genotype 5a, the predominant genotype in South Africa/ Chamberlian R.W., Adams N.J., Taylor L.A. et al.// Biochem. Biophys. Res.Commun. 1997. — v.236. - N1. - P.44-49.

69. Choo Q.-L. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome / Choo Q.-L., Kuo G., Weiner A.J. et al. // Science. 1989. - v.244. - P.359-362

70. Chinchai T. Comparative study of different methods to genotype hepatitis С virus type 6 variants/ Chinchai Т., Labout J., Noppornpanth S. et al.// J.Virol.Methods. 2003. - v. 109. -N2. - P. 195-201.

71. Courouce A.M. Hepatitis С virus (HCV) infection in haemodialysed patients: HCV RNA and anti-HCV antibodies (third generation assays)/

72. Courouce A.M., Bouchardeau F., Chauveau P. et al.// Nephrol. Dial. Transplant. 1995. - v.10. -N2. -P.234-239.

73. Courouce A.M. A comparative evaluation of the sensitivity of five anti-hepatitis С virus immunoblot assays/ Courouce A.M., Noel L., Barin F. et al.// Vox Sang. 1998. - v.74. -N4. -P.217-224.

74. Courouce A.M. Efficacy of HCV core antigen detection during the preseroconversion period/ Courouce A.M., Le Marrec N., Bouchardeau F. et al.// Transfusion. 2000. - v.40. -N10. -P.l 198-1202.

75. Cristina J. Hepatitis С virus phylogeny : a useful clinical tool / Cristina J., Mukomolov S., Colina R. et al.// Acta Virol. 2002. - v.46. -N3. - P.179-182.

76. Dal Molin G. Mother-to-infant transmission of hepatitis С virus: rate of infection and assessment of viral load and IgM anti-HCV as risk factors/ Dal Molin G., D' Agaro P., Ansaldi F. et al.// J.Med.Virol. 2002. - v.67. - N2. -P.137-142.

77. Davidson F. Survey of major genotypes and subtypes of hepatitis С virus using RFLP of sequences amplified from 5' non-coding region/ Davidson F., Simmonds P., Ferguson J.C. et al. // J.Gen.Virol. 1995. - v.76. - N5. -P.l 197-1204.

78. Das B.R. Geographical distribution of hepatitis С virus genotypes in India/ Das B.R., Kundu В., Khandapkar R., Sahni S. // Indian J.Pathol.Microbiol. -2002. v.45. - N3. - P.323-328.

79. De Cock L. Serotyping and genotyping of hepatitis С virus in Belgium/ De Cock L., Vranckx R.// Infection. 2003. - v.31. - N2. - P.92-97.

80. De Ory F. Application of low-avidity immunoglobulin G studies to diagnosis of Epstein-Barr virus infectious mononucleosis/ De Ory F., Antonaya J., Fernandez M.V., Echevarria J.M.// J. Clin. Microbiol. 1993. - v.31. — N6. -P.1669-1671.

81. Dentico P. Hepatitis С virus RNA, immunoglobulin M anti-HCV and risk factors in haemodialysis patients/ Dentico P., Sacco R., Buongiorno R. et al.// Microbios. 1999. - v.99. -N3. - P.55-62.

82. Djebbi A. Genotypes of hepatitis С virus circulating in Tunisia/ Djebbi A., Triki H., Bahri O. et al. //Epidemiol.Infect. 2003. - v.l30. -N3. - P.501-505.

83. Dusheiko G. Hepatitis С virus genotypes: an investigation of type-specific differences in geographic origin and disease/ Dusheiko G., Schmilovitz-Weiss H., Brown D. et al. //Hepatology. 1994. - v.19. -Nl. -P.13-18.

84. Dussaix E. Analysis of sera indeterminate by Ortho-HCV RIBA-2 by using three confirmatory assays for anti-hepatitis С virus antibody/ Dussaix E., Charnaux N., Laurent-Puig P. et al. // J.Clin.Microbiol. 1994. - v.32. - N9. -P.2071-2075.

85. El-Gohary A. HCV-RNA and anti-HCV IgM in Egyptian subjects bearing IgG anti-HCV antibodies/ El-Gohary A., Hosny A.M., Fawaz N. et al.// Jpn. J.Infect.Dis. 1999. - v.52. -N3. -P.l 13-116.

86. El-Zayadi A. Response to interferon-alpha of Egyptian patients infected with hepatitis С virus genotype 4/ El-Zayadi A., Simmonds P., Dabbous H. et al. // J. Viral Hepat. 1996. - v.3. - N5. - P.261-264.

87. Eroglu C. A highly sensitive and specific enzyme-linked immunosorbent assay of antibodies to hepatitis С virus/ Eroglu C., Yildiz E., Ozturk M., Pinarbasi E. // Acta Virol. 2000. - v.44. - N1. - P.29-33.

88. Gassman C. Avidity determination of IgG directed against tick-born encephalitis virus improves detection of current infections/ Gassman C., Bauer G. // J.Med. Virol. 1997. - v.51. -N3. -P.242-251.

89. Goldblatt D. Antibody avidity as a surrogate marker of successful priming by Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine following infant immunization / Goldblatt D., Vaz A.R., Miller E. // J. Infect. Dis. 1998. -v.177. -N6. -P.1112-1115.

90. Grandeot-Keros L. Value of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity index for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women/ Grandeot-Keros L., Mayaux M.J., Lebon P. et al.// J.Infect. Dis. 1997. - v. 175. - N5. - P. 944-946.

91. Grant P.R. Quantification of HCV RNA levels and detection of core antigen in donations before seroconversion/ Grant P.R., Sims C.M., Tedder R.S.// Transfusion. 2002. - v.42. - N8. - P. 1032-1036.

92. Gutierrez J. Reliability of low-avidity IgG and IgA in the diagnosis of primary infection by rubella virus with adaptation of a commercial test/ Gutierrez J., Rodriguez M.J., De Ory F. et al.// J.Clin.Lab. Anal. 1999. - v. 13. -Nl.-P.l-4.

93. Hanley J.P. Interferon treatment for chronic hepatitis С infection in hemophiliacs influence of virus load, genotype and liver pathology on response / Hanley J.P., Jarvis L.M., Andrew J. et al. // Blood. — 1996. — v.87. -N5. — P. 1704-1709.

94. Hedman К. Recent rubella virus infection indicated by a low avidity of specific IgG / Hedman K., Seppala I.// J.Clin.Immunol. 1988. - v.8. - N3. — P.214-221.

95. Hedman K. Measurement of avidity of specific IgG for verification of recent primary rubella / Hedman K., Rousseau S.A. // J.Med. Virology. 1989. - v.27. — N4. - P.288-292.

96. Hedman K. Recent primary Toxoplasma infection indicated by a low avidity of specific IgG / Hedman K., Lappalainen M., Seppaia I., Makela O. // J.InfectDis. 1989. - v. 159. - N2. - P. 736-740

97. Hedman K. Avidity of IgG in serodiagnosis of infectious diseases / Hedman K., Lappalainen M., Soderland M., Hedman L. // Rev.Med.Microbiol. — 1993. -v.4. —N1. —P.123-129.

98. Hennig H. Evaluation of newly developed microparticle enzyme immunoassay for the detection of HCV antibodies / Hennig H., Schlenke P., Kirchner H. // J.Virol.Methods. 2000. - v.84. - N2. - P.181-190.

99. Hitzler W.E. Screening of blood donation by hepatitis С virus polimerase chain reaction (HCV-PCR) improves safety of blood products by window period reduction / Hitzler W.E., Runkel S. // Clin.Lab. 2001. - v.47. - N5-6. -P.219-222.

100. Hitzler W.E. Routine HCV PCR screening of blood donation to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV / Hitzler W.E., Runkel S. // Transfusion. 2001. - v. 41. -N3. - P.333-337.

101. Houshofer A.C. Genotyping of hepatitis С virus comparison of three assays / Houshofer A.C., Berg J., Hauer R. et al.// J.Clin.Virol. — 2003. — v.27. -N3. — P.276-285.

102. Hubner J. Diagnosis of the early phase of larval toxocariasis using IgG avidity / Hubner J., Uhlikova M., Leissova M. // Epidemiol. Mikrobiol. Immunol. 2001. - v.50. - N2. - P.67-70.

103. Icardi G. Novel approach to reduce the hepatitis С virus (HCV) window period: clinical evaluation of a new enzyme-linked immunosorbent assay for

104. HCV core antigen / Icardi G., Ansaldi F., Bruzzone B.M. et al, // J.Clin.Microbiol. 2001. - v.39. - N9. - P.3110-3114.

105. Inouye S. Changes in antibody avidity after virus infections: detection by an immunosorbent assay in which a mild protein-denaturing agent is employed / Inouye S, Hasegava A., Matsuno S., Katow S. // J.Clin.Microbiol. 1984. -v.20. - N3. - P.525-529.

106. Jenum P. A. Improved diagnosis of primary Toxoplasma gondii infection in early pregnancy by determination of antitoxoplasma immunoglobulin G avidity / Jenum P.A., Stray-Pedersen В., Gundersen A.-G. // J.Clin. Microbiol. 1997.- v.35. N8. - P.1972-1977.

107. ICalinina O. Shift in predominating subtype of HCV from lb to 3a in St.Petersburg mediated by increase in injecting drug use / Kalinina O., Norder H., Vetrov T. et al. // J.Med.Virol. 2001. - v.65. -N3. - P.517-524.

108. Kalinina O. A natural intergenotypic recombinant of hepatitis С virus identified in St.Petersburg / Kalinina O., Norder H., Mukomolov S., Magnius L.O. // J.Virol. 2002. - v.76. -N8. - P.4034-4043.

109. Kanno A. Immunoglobulin G avidity assay for serodiagnosis of hepatitis С virus infection / Kanno A., Kazuyama Y. // J.Med.Virol. — 2002. v.68. - N2. -P.229-233.

110. Kashiwakuma T. Detection of hepatitis С virus specific core protein in serum of patients by a sensitive fluorescence enzyme immunoassay (FEIA) / Kashiwakuma Т., Hasegava A., Kajita T. et al. // J.Immunol. Methods. 1996.- v.l 90. N1. - P.79-89.

111. Kiely P.R. Anti-HCV confirmatory testing of voluntary blood donors: comparison of the sensitivity of two immunoblott assay / Kiely P.R., Eliades L.A., Kebede M. et al.// Transfusion. 2002. - v.42. -N8. - P. 1053-1058.

112. Korhonen M.H. A new method with general diagnostic utility for the calculation of immunoglobulin G avidity / Korhonen M.H., Brunstein J., Haario H. et al. // Clin.Diag.Lab.Immunol. 1999. - v.6. -N5. - P.725-728.

113. Krarup H.B. Performance of hepatitis С virus (HCV) antibody test systems in relation to HCV-RNA detection in the diagnosis of HCV infection / Krarup H.B., Jacobsen S.E., Varming K. et al. // Dan. Med. Bull. 1998. - v.45. - N1. -P.89-91.

114. Kuo G. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A, non-B hepatitis / Kuo G., Choo Q.-L., Alter H.J. et al. II Science. 1989. - v.244. -N3. -P.362-364.

115. Kurtz J.B. The diagnostic significance of an assay for '4otal" hepatitis С core antigen/ Kurtz J.B., Boxall E., Quisir N. et al.// J.Virol.Methods. 2001. -V.96.-N2.-P. 127-132.

116. Lappalainen M. Toxoplasmosis acquired during pregnancy: improved serodiagnosis based on avidity of IgG / Lappalainen M., Koskela P., Koskeniemi M. et al.// J.Infect.Dis. 1993. - v. 167. -N3. - P.691-697.

117. Lazzarotto Т. Prenatal indicators of congenital cytomegalovirus infection / Lazzarotto Т., Varani S., Guerra B. et al.// J.Pediatr. 2000. - v.137. -Nl. - P. 90-95.

118. Le Guiloou H. Antibody avidity: use for the diagnosis of HIV early infection / Le Guiloou H., Le Meur A., Bourdon S. et al. // Ann.Biol.Clin. 2001. - v.59. -Nl. -P.41-47.

119. Lee S.R. Increased detection of hepatitis С virus infection in commercial plasma donors by a third generation screening assay / Lee S.R., Wood C.L., Lane M.J. et al. // Transfusion. 1995. - v.35. -N10. - P.845-849.

120. Lee S.R. Efficacy of a hepatitis С virus core antigen enzyme-linked immunosorbent assay for the identification of "window" phase blood donation / Lee S.R., Peterson J., Niven P. et al.// Vox Sang. 2001. - v.80. - N1. - P.19-23.

121. Lelie P.N. Patterns of serological markers in transfusion-transmitted hepatitis С virus infection using second generation HCV assays / Lelie P.N., Cuypers H.T., Reesink H.W. et al. //J.Med.Virol. 1992. - v.37. - N1. - P.203-209.

122. Leon P. Detection of low-avidity IgG antibodies in the diagnosis of primary acute infection by hepatitis С virus / Leon P., Lopez J.A., De Ory F. et al. // Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. -1997. -v.15. -Nl. -P.14-18.

123. Leon P. Typing of hepatitis С virus antibodies with specific peptides in seropositive blood donors and comparison with genotyping of viral RNA / Leon P., Lopez J.A., Elola C. et al.// Vox Sang. 1997. - v.72. -N2. -P.71-75.

124. Leon P. Use of overlapping synthetic peptides to characterize samples from blood donors with indeterminate results to hepatitis С virus core antigen / Leon P., Lopez J.A., Elola C. et al. //Vox Sang. 1998. - v.75. - Nl. - P.32-36.

125. Lin H.H. Effectiveness of second- and third generation immunoassays for the detection of hepatitis С virus infection in pregnant women / Lin H.H., Kao J.H. // J.Obstet.Gynaecol. Res. 2000. - v.26. -N4. - P.265-270.

126. Longworth E. Avidity maturation following vaccination with a Meningococcal recombinant hexavalent PorA OMV vaccine in UK infants / Longworth E., Borrow R., Goldblatt D. et al.// Vaccine. 2002. - v.20. - N.19-20. - P.2592-2596.

127. Marcipar I.S. Antibody maturation in Trypanosoma cruzi infected rats / Marcipar I.S., Risso M.G., Silber A.M. et al. // Clin.Diagn.Lab.Immunol. -2001. v.8. -N4. -P.802-805.

128. Martin P. Automated RIB A hepatitis С virus (HCV) strip immunoblot assay for reproducible HCV diagnosis / Martin P., Fabrizi F., Dixit V. et al. // J.Clin.Microbiol. 1998. - v.36. -N2. - P.387-390.

129. Mellor J. Genotype dependance of hepatitis С virus load measurement in commercially available quantitative assays / Mellor J., Hawkins A., Simmonds P. // J.Clin.Microbiol. 1999. - v.37. - N8. - P.2525-2532.

130. Moatter T. Comparative anlysis of viral titers and histologic features of Pakistani patients infected with hepatitis С virus type 3 / Moatter Т., Hussainy A.S., Hamid S et al. // Int.J.Infect.Dis. 2002. - v.6. - N4. - P.272-276.

131. Mohan K.V. Diagnosis of hepatitis С virus infection by ELISA, RIBA and RT-PCR: a comparative evaluation / Mohan K.V., Murugavel K.G., Rajanikanth M.S. et al. // Indian J. Gastroenterol. 1999. - v.18. - N2. - P.73-75.

132. Montoya J.G. VIDAS test for avidity of Toxoplasma-specific immunoglobulin G for confirmatory testing of pregnant women / Montoya J.G., Liesenfeld O., Kinney S. et al. // J.Clin.Microbiol. 2002. - v.40. - N7. -P.2504-2508.

133. Mostafa N.E. Low avidity IgG antibodies in diagnosis of recent human schistosomiasis / Mostafa N.E., Awad A., Shalaby M. // J.Egypt. Soc. Parasitol. 2002. - v.32. - N3. - P. 979-985.

134. Muerhoff A.S. Detection of HCV core antigen in human serum and plasma with an automated chemiluminescent immunoassay / Muerhoff A.S., Jiang L., Shah D.O. et al. // Transfusion. 2002. - v.42. -N3. - P.349-356.

135. Narita M. Analysis of Mumps vaccine failure by means of avidity testing for mumps virus specific immunoglobulin G / Narita M., Matsuzono Y., Takekoshi Y. et al. // Clin. Diag. Lab .Immunol. 1998. - v.5. - N6. - P.799-803.

136. Nolte F.S. Clinical evaluation of two methods for genotyping hepatitis С virus based on analysis of the 5' noncoding region / Nolte F.S., Green A.M., Fiebelkorn K.R. et al. // J.Clin.Microbiol. 2003. - v.41. -N4. - P. 1558-1564.

137. Nubling C.M. Sensitivity of HCV core antigen and HCV RNA detection in the early infection phase / Nubling C.M., Unger G., Chudy M. et al. // Transfusion. 2002. - v.42. - N8. - P.l037-1045.

138. Odievre M.H. The assessment of IgG avidity in the evaluation of perinatal herpes simplex virus infection / Odievre M.H., Cointe D., Thebaud B. et al. // J.Perinatol. 2002. - v.22. - N8. - P.669-671.

139. Palacios A. Development of low cost peptide based anti-hepatitis С virus screening and confirmatory assays: comparison with commercially available tests / Palacios A., Taylor L., Haue L. et al. // J.Med.Virol. 1999. - v.58. -N3. -P.221-226.

140. Pawlotsky J.M. Serological determination of hepatitis С virus genotype: comparison with a standardized genotyping assay / Pawlotsky J.M., Prescott L., Simmonds P. et al. // J.Clin.Microbiol. 1997. - v.35. -N7. -P.1734-1739.

141. Pawlotsky J.M. What strategy should be used for diagnosis of hepatitis С virus infection in clinical laboratories? / Pawlotsky J.M., Lonjon I., Hezode C. et al. // Hepatology. 1998. - v.27. -N6. - P. 1700-1702.

142. Pawlotsky J.M. Quantification of hepatitis С virus RNA in serum by branched DNA-based signal amplification assays / Pawlotsky J.M., Martinot

143. Peignoux M., Poveda J.D. et al. // J.Virol.Methods. 1999. - v.79. - N2. -P.227-235.

144. Peterson J. Detection of hepatitis core antigen in the antibody negative "window" phase of hepatitis С infection / Peterson J., Green G., Iida K. et al. // Vox Sang. 2000. - v.78. -N2. - P.80-85

145. Prescott L.E. Detection and clinical features of hepatitis С virus type 6 infections in blood donors from Hong Kong / Prescott L.E., Simmonds P., Lai C.L. et al. // J.Med.Virol. 1996. - v.50. -N2. -P.168-175.

146. Prince H.E. Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity / Prince H.E., Wilson M. // Clin.Diagn.Lab.Immunol. 2001. - v.8. -N5. - P.904-908.

147. Prince H.E. Validation of an in-house assay for cytomegalovirus immunoglobulin G (CMV IgG) avidity and relationship of avidity to CMV IgM levels / Prince H.E., Leber A.L. // Clin.Diagn.Lab.Immunol. 2002. — v.9. -N4. — P.824-827.

148. Pullen G.R. Antibody avidity determination by ELISA using thiocyanate elution / Pullen G.R., Fitzgerald M.G., Hosking C.S. // J.Immunol.Methods. -1986. v. 106. - N1. - P. 119-125.

149. Rauer S. Avidity determination of Borrelia burgdorferi-specific IgG antibodies in Lyme disease / Rauer S., Beitlich P., Neubert U. et al. // Scand. J. Infect.Dis. 2001. - v.33. - N11. - P.809-811.

150. Re V. Hepatitis С virus genotypes in Cordoba, Argentina. Unexpected high prevalence of genotype 2 / Re V., Lampe E., Yoshida C.F. et al. // Medicina (B.Aires). -2003. v.63. -N3. -P.205-210.

151. Robertson P. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection / Robertson P., Beynon S., Whybin R. et al. // J. Med. Virology. 2003. - v.70. -N4. - P.617-623 .

152. Ross R.S. Performance characteristics of a transcription-mediated nucleic acid amplification assay for qualitative detection of hepatitis С virus RNA / Ross R.S., Viazov S.O., Hoffman S., Roggendorf M. // J.Clin.Lab.Anal. -2001. v.15. -N6. -P.308-313.

153. Sandres-Saune K. Determining hepatitis С genotype by analyzing the sequence of the NS5b region / Sandres-Saune K., Deny P., Pasquier C. et al. // J.Virol.Methods. 2003. - v.109. -N2. - P.l 87-193.

154. Schreiber G.B. The risk of transfusion-transmitted viral infection. The retrovirus epidemiology donor study / Schreiber G.B., Busch M.P., Kleinman S.H., Korelits J.J. //N.Engl.J.Med. 1996.- v.334.-N9.-P.1685-1690 .

155. Schroter M. Strategies for reliable diagnosis of hepatitis С infection: the need for a serological confirmatory assay / Schroter M., Schafer P., Zollner B. et al. // J.Med.Virol. 2001. - v.64. - N3. - P.320-324.

156. Schubert J. Comparative evaluation of the use of immunoblots and of IgG avidity assays as confirmatory test for the diagnosis of acute EBV infections / Schubert J., Zens W., Weissbrich B. // J.Clin.Virology. 1998. - v.l 1. - N3. -P.161-172.

157. Sensini A. IgG avidity in the serodiagnosis of acute Toxoplasma gondii infection: a multicenter study / Sensini A., Pascoli S., Marchetti D. et al. // Clin.Microbiol.Infect. 1996. - v.2. - N1. - P.25-29.

158. Shah D.O. Combination HCV core antigen and antibody assay on a fully automated chemiluminescent analyzer / Shah D.O., Chang C.D., Jiang L.X. et al. //Transfusion. -2003. v.43. -N8. -P.1067-1074.

159. Shioda A. Immunoglobulin G and M hepatitis С virus core antibody (JCC.2) response in chimpanzees infected experimentally with hepatitis С virus / Shioda A., Moriyama M, Hayashi N. et al. // Intervirology. 2000. - v.43. — N3. -P.146-153.

160. Simmonds P. Classification of hepatitis С virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic analysis of the NS5 region / Simmonds P., Holmes E.C., Cha T.A. et al. // J. Gen. Virol. 1993. - v.74. - N11. - P.2391-2399.

161. Simmonds P. A proposed system for the nomenclature of hepatitis С viral genotypes / Simmonds P., Alberti A., Alter H.J. et al. // Hepatology. — 1994. — v.19. -N5. -P.1321-1324.

162. Simmonds P. Identification of genotypes of hepatitis С virus by sequence comparisons in the core, El and NS5 regions / Simmonds P., Smith D.B., McOmish F. et al. // J.Gen.Virol. 1994. - v.75. - N5. - P.1053-1061.

163. Simmonds P. Epidemiological, clinical and therapeutic associations of hepatitis С types in western European patients / Simmonds P., Mellor J., Craxi A. et al. // J.Hepatol. 1996. - v.24. -N5. -P.17-24.

164. Soffredini R Increased detection of antibody to hepatitis С virus in renal transplant patients by third generation assays / Soffredini R.} Rumi M., Lampertico P. et al. // Am.J.Kidney Dis. -1996. v.28. -N3. -P.437-440.

165. Stuyver L. Hepatitis С virus genotyping by means of 5' UT/core line probe assays and molecular analysis of untypeable samples / Stuyver L., Wyseur W., Van Arnhem W. et al. // Virus Res. 1995. - v.38. -Nl. -P.137-157.

166. Takahashi K. Demonstration of a hepatitis С virus-specific antigen predicted from the putative core gene in the circulation of infected host / Takahashi K., Okamoto H., Kishimoto S. et al. // J.Gen.Virol. 1992. - v.73. - N3. - P.667-672.

167. Tran A. Significance of serum immunoglobulin M to hepatitis С virus core in patients with chronic hepatitis С / Tran A., Yang G., Dreyfus G. et al. // Am.J.Gastroenterol. 1997. - v.92. -N10. -P.1835-1838.

168. Trimoulet P. Evaluation of the VERS ANT HCV RNA 3.0 asay for quantification of hepatitis С virus RNA in serum / Trimoulet P., Halfon P., Pohier E. et al. // J.Clin.Microbiol. 2002. - v.40.' - N6. - P.2031-2036.

169. Urdea M.S. Hepatitis С -diagnosis and monitoring / Urdea M.S., Wuestehube L.I., Laurenson P.M., Wilber J.C. // Clin. Chemistry. 1997. -v.43. -N8. -P.1507-1511.

170. Usinger W.R. Avidity as a determinant of the protective efficacy of human antibodies to pneumococcal capsular polysaccharides / Usinger W.R., Lucas A.H. // Infect.Immun. 1999. - v.67. -Nil.- P.2366-2370.

171. Valentine-Thon E. Quality control in nucleic acid testing — where do we stand? J.Clin.Virol. 2002. - v.25. - Suppl 3. - S13-21

172. Verachai V. Prevalence and genotypes of hepatitis С virus infection among drug addicts and blood donors in Thailand / Verachai V., Phutiprawan Т., Theamboonlers A. et al. // Southeast Asian J.Trop.Med.Public Health. 2002. -v.33. - N4. - P.849-851.

173. Viana Lde G. Antibody subclass profile and avidity during acute and chronic human Schistosoma mansoni infection / Viana Lde G., Rabello A., Katz N. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2001. - v.95. - N5. - P. 550-556.

174. Vrielink H. Comparison of two anti-hepatitis С virus enzyme-linked immunosorbent assays / Vrielink H., Zaaijer H.L., Reesink H.W. et al. // Transfusion. 1995. - v.35. -N7. -P.601-604.

175. Vrielink H. Performance of three generations of anti-hepatitis С virus enzyme immunosorbent assays in donors and patients / Vrielink H., Reesink

176. H.W., Van Den Burg P.J. et al. // Transfusion. 1997. - v.37. - N8. - P.845-849.

177. Ward K.N. Measurement of antibody avidity for hepatitis С virus distinguishes primary antibody responses from passively acquired antibody / Ward K.N., Dhaliwal W., Ashworth K.L. et al. // J.Med.Virol. 1994. - v.43.- N4. — P.367-372.

178. Ward K.N. Use of immunoglobulin G antibody avidity for differentiation of primary human herpesvirus 6 and 7 infections / Ward K.N., Turner D.J., Couto-Parada X., Thiruchelvam A.D. // J.Clin. Microbiol. 2001. v.39. - N3. -P.959-963.

179. Widell A. Detection of hepatitis С core antigen in serum or plasma as a marker of hepatitis С viraemia in the serological window-phase / Widell A., Molnegren V., Pieksma F. et al. // Transfiis. Med. 2002. - v. 12. - N2. -P.107-113.

180. Yamaguchi N. Humoral immune response in Japanese acute hepatitis patients with hepatitis С virus infection / Yamaguchi N., Tokushige K., Yamauchi K., Hayashi N. // Can J.Gastroenterol. 2000. - v. 14. - N7. - P.593-598.

181. Yang J.H. Real-time RT-PCR for quantitation of hepatitis С virus RNA / Yang J.H., Lai J.P., Douglas S.D. et al. // J.Virol.Methods. 2002. - v. 102. -N1-2. —P.l 19-128.

Информация о работе

Мукомолова, Анна Львовна
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2004
ВАК 03.00.06

Диссертация

Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы