Взаимосвязь между ядерными рецепторами PPAR α,β,γ и ее роль в регуляции воспалительного ответа

Алешин, Степан Евгеньевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Взаимосвязь между ядерными рецепторами PPAR α,β,γ и ее роль в регуляции воспалительного ответа
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Взаимосвязь между ядерными рецепторами PPAR α,β,γ и ее роль в регуляции воспалительного ответа"

На правах рукописи

АЛЕШИН СТЕПАН ЕВГЕНЬЕВИЧ

ВЗАИМОСВЯЗЬ МЕЖДУ ЯДЕРНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ РРАК а, Р, у И ЕЁ РОЛЬ В РЕГУЛЯЦИИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА.

Специальность 03.00.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□□3400231

Москва-2009

003480231

Работа выполнена на факультете Биоинженерии и биоинформатики Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова в группе системной биологии липидов (отдел биокинетики).

Научный руководитель: доктор химических наук

Сергеева Марина Глебовна

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Копылов Алексей Михайлович

доктор биологических наук Павлова Галина Валериевна

Ведущая организация: Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и

Ю.А.Овчинникова РАН

Защита состоится « _» 2009 г. в « / 3 » часов на заседании совета Д 501.001.76

по защите докторских и кандидатских диссертаций при Московском государственном университете имени М.В. Ломоносова по адресу:

119992, Москва, Ленинские горы, МГУ, НИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского, лабораторный корпус «А», аудитория 536.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова, Москва.

Автореферат разослан "2-3 " их 2009г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук 1 И.А. Крашенинников

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Рецепторы пролифераторов пероксисом (РРАЯ) относятся к классу ядерных рецепторов, регулирующих транскрипцию. Существует три изоформы этих рецепторов - а, р и у. Синтетические агонисты РРАЯа и РРАЯу используют для лечения гиперлипидемии и диабета 2 типа, и в настоящее время их предлагают как противовоспалительные средства. Агонисты РРАЯр как лекарственные средства ещё не зарегистрированы, тем не менее, они считаются перспективными для лечения дислипидемии, ожирения и нарушений механизмов восстановления и регенерации тканей. Предполагают, что нарушение функций этих рецепторов приводит к развитию сердечно-сосудистых заболеваний, возникновению рака, гипертонии, развитию нейродегенеративных заболеваний и хронического воспаления. По этой причине транскрипционные факторы РРАЯ активно изучаются. Эффективность применения синтетических агонистов РРАЯ для терапии таких дисфункций мозга как инсульт, травма, болезни Альцгеймера, Паркинсона, Гентингтона и др. была показана на животных. Считается что нейропротективные свойства агонистов РРАЯ связаны с их противовоспалительными эффектами, поэтому в настоящее время актуальны исследования механизмов действия синтетических агонистов РРАЯ при воспалении, которое моделируется как на уровне целого организма, так и на уровне клеток мозга.

В развитии воспалительных процессов в мозге ключевая роль принадлежит клеткам глии. Среди глиальных клеток следует выделить астроциты, являющиеся основным источником полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов - важных провоспалительных веществ и эндогенных лигандов РРАЯ. Ключевыми ферментами продукции полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов являются фосфолипазы Аг и циклооксигеназы, соответственно. Эти ферменты относятся к так называемым РРАЯ лиганд-синтезирующим ферментам. Имеются сведения, что применение синтетических агонистов РРАЯ может приводить к изменениям уровней экспрессии фосфолипаз и циклооксигеназ, однако влияние лигандов РРАЯ на экспрессию этих ферментов в асгроцитах не изучено. В последние годы было охарактеризовано влияние агонистов

РРАЯа и РРАЯу на различные клеточные ответы астроцитов (пролиферацию, выброс цитокинов, и др.), однако экспрессия самих РРАЯ при этом не изучалась, хотя известно, что изменение экспрессии РРАЯ является одним из важных механизмов регуляции этих транскрипционных факторов. Не смотря на то, что ряд данных позволяет предположить наличие взаимодействий между изотипами РРАЯ на уровне взаимной регуляции их экспрессии, в настоящий момент практически не существует работ, посвященных исследованию взаимодействий всех трёх изотипов РРАЯ.

Способность РРАЯ регулировать экспрессию своих лиганд-синтезирующих ферментов с одной стороны, и участие лигандов в регуляции экспрессии самих РРАЯ с другой стороны, указывают на наличие сложной системы взаимодействий между фосфолипазами А2, циклооксигеназами и РРАЯ. Тем не менее, до сих пор не было попыток изучить эти белки и взаимосвязи между ними как единую систему функционально взаимодействующих белков. Изучению этой системы и посвящена данная работа.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы было исследовать взаимосвязь между изоформами РРАЯ а, р, у и их лиганд-синтезирующих ферментов циклооксигеназы и фосфолипазы А2; установить роль этой взаимосвязи при ответе астроцитов на провоспалительную стимуляцию.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить влияние синтетических агонистов РРАЯ на экспрессию РРАЯ а, риг; цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг и циклооксигеназ.

2. Установить наличие и характер взаимодействия между изоформами РРАЯ в астроцитах, стимулированных липополисахаридом (ЛПС), изучить влияние комбинаций синтетических агонистов РРАЯ на уровни экспрессии РРАЯ а, р и у.

3. Изучить совместное влияние изоформ РРАЯ на экспрессию ключевого фермента синтеза простагландинов - циклооксигеназы в астроцитах, стимулированных ЛПС.

4. Установить влияние различных изоформ РРАЯ на экспрессию цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг в астроцитах, стимулированных ЛПС.

5. Установить РРАЯ-лигандсинтезирующую роль фосфолипаз А2 и циклооксигеназы в регуляции РРАЯ-опосредованной транскрипции циклооксигеназы в астроцитах, стимулированных ЛПС.

Научная новизна и практическая значимость работы В работе было впервые показано, что изоформы ядерных рецепторов РРАЯ а, р и у способны регулировать экспрессию друг друга. В настоящее время многие фармацевтические компании ведут разработки двойных агонистов РРАЯ, активирующих сразу несколько изоформ РРАЯ. Данные о взаимодействии изоформ РРАЯ позволят лучше прогнозировать эффекты этих агонистов.

Впервые было охарактеризовано влияние комбинированного воздействия синтетических РРАЯ агонистов на уровень экспрессии СОХ-2. С использованием ингибиторного анализа и метода нокдауна получены данные, подтверждающие ключевую роль РРАЯр в регуляции экспрессии СОХ-2; показано, что эндогенные РРАЯ лиганды, продуцируемые СОХ-2 и фосфолипазой Аг, участвуют в активации ЛПС-индуцированной транскрипции СОХ-2 за счет связывания с РРАЯр. Обнаруженные эффекты по влиянию комбинированного применения РРАЯ агонистов на экспрессию СОХ-2 позволят разработать методы регулирования экспрессии гена этого фермента при терапии заболеваний с воспалительной компонентой.

Показано участие всех трёх изоформ РРАЯ в регуляции уровня экспрессии цитозольной и секреторной изоформ фосфолипазы Аг в астроцитах, стимулированных ЛПС. Результаты, демонстрирующие различие в динамике экспрессии фосфолипаз Аг при обработке астроцитов агонистами различных изоформ РРАЯ, не имеют аналогов в мировой литературе.

В результате проделанной работы была предложена схема системы взаимодействий трёх изоформ РРАЯ, фосфолипаз А2 и СОХ-2. В данной схеме учитывается влияние как синтетических, так и эндогенных лигандов, продуцируемых при активации фосфолипаз и циклооксигеназы в процессе воспалительного ответа.

Важность полученных результатов для фундаментальной науки и практической медицины заключена в том, что активация этих ферментов является одним из основных компонентов ишемии мозга и нейродегенеративных заболеваний. Результаты этой работы могут найти применение в теоретической и экспериментальной физиологии, патофизиологии и фармакологии.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были представлены на XIV, XV и XVI международных конференциях студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов» (Москва, Россия, 2007, 2008, 2009), Международных конференциях "Рецепция и внутриклеточная сигнализация (Пущино, 5-7 июня 2007 г.; 2-4 июня 2009 г.)", 48°я встрече американского общества клеточных биологов в Сан-Франциско «The American Society for Cell Biology 48th Annual Meeting 2008».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ. Из них статей - 2, статей в сборниках -2, материалов конференций - 6.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на страницах, содержит рисунков и * таблиц, и включает следующие разделы:

«Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и их обсуждение», «Выводы» и «Список литературы» (JL¿2- цитированных работ).

Список сокращений. PPAR- рецепторы активаторов пролиферации пероксисом; СОХ- циклооксигеназа; ФЛА2- фосфолипаза А2; ЛПС-липополисахэрид клеточной стенки бактерий; ГАФД- глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа; ПНЖК- полиненасыщенные жирные кислоты; ПГ-просгагландины.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Астроциты выделяли из мозгов новорожденных крыс, работали на клетках второго пассажа. Воспалительный ответ моделировали липополисахаридом (ЛПС), который является широко используемым провоспалительным стимулом. ЛПС связывается с так называемыми Толл-подобными рецепторами, которые встречаются практически на всех клетках животных, в том числе и на астроцитах. Определение экспрессии генов проводили методом ПЦР в реальном времени с помощью набора «SYBR green PCR Master Mix» (Bio-Rad). Уровень экспрессии генов сравнивали с уровнем экспрессии ГАФД и нормировали на значения, полученные для контрольных клеток. Определение количества белка проводилось методом иммуноблотинга, для проявки использовался ECL-реагент. Данные нормировалась на концентрацию р-тубулина, количество белка в

контрольных клетках принимали за единицу. ДНК-связывающая активность изоформ PPAR определялась с помощью иммуноферментного набора «PPARa, 5, у Complete Transcription Factor Assay Kit» (Cayman Chemical). Значение активности нормировалось на контрольные клетки, ДНК-связывающая активность изоформ PPAR в которых принималась за 100%. Для трансфекции астроцитов миРНК и плазмидой, сверхэкспрессирующей PPARß, использовалась магнитная трансфекция. Для измерения эффективности нокдауна и сверхэкспрессии использовали иммуноблотинг. Нокдаун считался эффективным при снижении уровня белка на 90%. Концентрация простагландина Е2 в культуральной жидкости измерялась методами ESI/MS и ИФА. Полученные данные обрабатывали по методам корреляционного и вариационного анализа (ANOVA) и критерия Стьюдента (t-тест). Все измерения проводились не менее трех раз. Достоверными считали различия при р<0,05. Все погрешности отражают стандартное квадратичное отклонение.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

1. Исследование влияния синтетических агонистов PPAR на экспрессию PPAR a, ß и у; цитозольной и секреторной фосфолипаз А2 и циклооксигеназ

Влияние синтетических агонистов PPAR на экспрессию изоформ PPAR и их лиганд-синтезирующих ферментов ранее не изучалось, поэтому мы исследовали влияние GW7647 (PPARa агонист), L-165041 (PPARß агонист) и росиглитазона (PPARy агонист) на экспрессию этой группы генов. Показано, что синтетический агонист PPARa увеличивает экспрессию PPARß, СОХ-1 и уменьшает экспрессию цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг; синтетический агонист PPARß увеличивает экспрессию PPARß, СОХ-1, и уменьшает экспрессию PPARa, цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг; синтетический агонист PPARy уменьшает экспрессию PPARa, PPARy, СОХ-2, цитозольной и секреторной фосфолипаз А2. Таким образом, синтетические агонисты всех трех изоформ PPAR оказывают влияние на экспрессию PPARa, ß и у; цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг и циклооксигеназ.

2. Взаимосвязь PPAR a, ß и у в астроцитах, стимулированных ЛПС

К началу нашей работы было известно, что уровень экспрессии PPARa и PPARy может меняться под воздействием провоспалительных стимулов. Тем не менее, на клетках мозга подобных работ не проводилось. Более того, ничего не было известно об изменении уровня экспрессии PPARß под действием провоспалительных стимулов. Поэтому мы исследовали уровни экспрессии трех изоформ PPAR при стимуляции астроцитов ЛПС, Поскольку воспалительный ответ является сложным, динамически развивающимся

процессом, на разных этапах которого могут активироваться различные транскрипционные факторы, мы изучали астроциты стимулированные ЛПС в течение 2, 4, 16 и 24 ч.

Получено, что уровни экспрессии РРАЯаи РРАЯупри инкубации клеток с ЛПС в течение 2-24 часов снижаются с минимумом при 4 часах стимуляции (Рис. 1А). Эти результаты согласуются с данными полученными на других типах клеток, Нами показано, что уровень мРНК РРАЯр возрастает при ЛПС стимуляции и к 24 часам значимо отличается от уровня экспрессии РРАЯр в контрольных клетках (Рис. 1А). Изменения уровней мРНК коррелируют с изменениями количества белка, измеренного иммуноблотингом (Рис. 1Б). Так как при 4 часах ЛПС стимуляции наблюдаются самые значительные изменения уровней экспрессии, то для дальнейшего изучения нами была выбрана временная точка 4 часа.

□ РРАЯа 0 РРАИр ■ РРАЯу *

Время инкубации с ЛПС (ч)

РРАКа

РРАКР РРАВ? р- гуйулнн

т т

2 4

16 14 (ч)

Время инкубации с ЛПС (ч)

Рис. 1. ЛПС снижает экспрессию РРАЯа, РРА1*у и увеличивает экспрессию РРАЯр.

Клетки стимулировались ЛПС в течение 2, 4, 16 и 24 часов. (А) Уровни мРНК изоформ РРАЯ, измеренные ПЦР в реальном времени; (Б) Количества белка изоформ РРАЯ определялось с помощью иммуноблотинга. Приведена одна типичная электрофореграмма и результаты денсито-метрии. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

На основании анализа литературных данных мы предположили, что лиганды одной изоформы РРАЯ, способны изменять экспрессию другой изоформы. Для проверки этой гипотезы мы проводили следующие эксперименты: астроциты предынкубировались в течение 10 минут с различными концентрациями С\Л/7б47 (РРАЯа агонист), 1-165041 (РРАРф агонист) и росиглитазона (РРАЯу агонист). Далее клетки стимулировали ЛПС, через 4 часа стимуляции из астроцитов выделяли тотальную РНК и с помощью ПЦР в реальном времени анализировали уровни экспрессии

изоформ РРАЯ. Получено, что в астроцитах, стимулированных ЛПС, агонист РРАЯа С\Л/7647 концентрационно-зависимо снижает экспрессию своего рецептора (Рис. 2А). При использовании 10 мкМ С\Л/7647 уровень экспрессии РРАЯа снижается в два раза. Обработка астроцитов 10 мкМ агониста РРАЯр 1.-165041, приводит к двукратному увеличению уровня экспрессии РРАЯа. РРАЯу агонист росиглитазон не оказывал влияния на экспрессию РРАЯа изоформы (Рис. 2А), то есть экспрессия РРАЯа регулируется агонистами РРАЯа и РРАЯр. В аналогичных экспериментах было показано, что только синтетический агонист РРАЯу влияет на экспрессию РРАЯр и РРАЯу, увеличивая её. (Рис. 25,В), Таким образом, все три агониста способны влиять на экспрессию изоформ РРАЯ в астроцитах, стимулированных ЛПС. Полученные данные указывают на существование взаимосвязей между тремя изоформами РРАЯ на уровне их экспрессии в астроцитах, стимулированных ЛПС.

А)

а^О.6 4—*™ Рос « <

1 *

5 х Ё % 0.2

В)

0.0

(Ш7647 Ы65041

0.1

Б)

§ з

££

•з <

■а и

5 х ,

й а 1

£ Е

Р 0

....... GW7647

—■—Ы65041 —*— Рос

5сЁ"0.6. * ?

ё г 0.2

Концентрация лиганда(мкМ)

—ч—Ы65041 --Рос

о.о

0.1

0 0.1 1 10

Концентрация л и ганда (мкМ)

Рис. 2. Агонисты РРАЯ модулируют экспрессию изоформ РРАЯ. Астроциты обрабатывали указанными концентрациями РРАЯа (С\М7647), РРАЯр (1-165041) и РРАЯу (Рос) агонистов, через 10 мин. клетки стимулировались ЛПС. Через 4 ч стимуляции экспрессия РРАЯа (А), РРАЯр (Б) и РРАЯу (В) определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

2.1. Влияние комбинаций агонистов РРАЯ на экспрессию РРАЯ а, р, у.

Так как было показано, что агонисты РРАЯ способны менять уровни экспрессии изоформ этого семейства транскрипционных факторов, то можно предположить, что совместная обработка клеток агонистами нескольких изоформ РРАЯ будет приводить к синергетическим эффектам. Для проверки

этого предположения мы лредынкубировали астроциты с различными комбинациями РРАЯ агонистов, затем стимулировали клетки ЛПС и измеряли уровни экспрессии изоформ РРАЯ на уровне мРНК и белка. Добавление только Ы65041 или росиглитазона не оказывало влияния на экспрессию РРАЯа, однако совместное добавление росиглитазона и Ы65041 приводило к увеличению экспрессии РРАЯа (Рис. 3; столбец 3). Эффект совместного применения может быть объяснен тем, что росиглитазон увеличивает уровень экспрессии РРАЯр (Рис. 3; столбец 2), порог чувствительности клеток к действию РРАЯр агониста снижается, и он начинает действовать в меньших концентрациях.

Интересно, что РРАЯа агонист СШ7647 не оказывает влияния на экспрессию РРАЯр, однако снимает росиглитазон-индуцированную экспрессию РРАЯр (Рис. 3; столбцы 2 и 4). Совместное добавление, всех трех агонистов приводит к максимальному падению экспрессии РРАРф (Рис. 3; столбец б). Это может объясняться тем, что в этих условиях экспрессия РРАЯа максимальна, а также имеется избыток его агониста С\Л/7647, то есть активность РРАЯа также максимальна. Таким образом, комбинированное применение агонистов РРАН. может приводить к сложным вторичным эффектам за счет модулирования уровней экспрессии их рецепторов.

втб47 _-- + + +

1.-165041 _- + - + +

Рос + + + - +

Рис. 3. Комбинации агонистов РРАЯ модулируют экспрессию изоформ РРАИ. Астроциты предынкубировались с РРАЯа агонистом СМ/7647 (1 мкМ), РРАКЗ агонистом 1.-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ), затем стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Экспрессия изоформ РРАЯ определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трёх раз. * р<0.05.

2.2. Росиглитазон индуцирует экспрессию РРАЯр через РРАЯу-опосредованный путь

Агонисты РРАЯ могут действовать как через специфическую активацию РРАЯ, так и через неспецифические взаимодействия с другими мишенями в клетке. Для выяснения специфичности действия росиглитазона как РРАЯу агониста мы использовали циглитазон, который является агонистом РРАЯу, но имеет другую химическую структуру, а также антагонист РРАЯу СМ9662. Получено, что циглитазон оказывает такой же эффект, что и росиглитазон (Рис. 4). Предобработка клеток антагонистом в)М9662 снимает индукцию экспрессии РРАЯр росиглитазоном или циглитазоном (Рис. 4). Эти результаты указывают на специфическое действие росиглитазона и циглитазона как РРАЯу агонистов. Для подтверждения этого предположения мы исследовали астроциты с нокдауном РРАЯу (Рис. 4). Полученные данные подтверждают, что росиглитазон увеличивает уровень экспрессии РРАЯр через активацию РРАЯу рецептора.

Рис. 4. Активация РРАЯу увеличивает экспрессию РРАЯр в астроцитах, стимулированных ЛПС. Астроциты пред-обрабатывались антагонистом РРАЯу вШ662

1 Антагонист Нокдаун

РРАЯу РРАР!у -

ц - Р ц -

(1 мкМ) в течение 10 мин или использовались астроциты с нокдауном РРАЯу. Далее клетки обрабатывали РРАЯу агонис-тами росиглитазоном (Р) и циглитазоном (Ц) в концентрации 20 и 40 мкМ соответственно, затем астроциты стимулировались ЛПС. Через 4 ч стимуляции экспрессия РРА(*р р ц определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз, * р<0.05.

2.3. РРАЯа агонисг С\Л/7647 снижает экспрессию РРАЯр через РРАЯа-опосредованный путь

Агонисты РРАЯа также могут оказывать РРАЯ неспецифические эффекты, поэтому для доказательства того, что влияние СШ647 на экспрессию РРАЯр является РРАЯа- опосредованным процессом, мы получили астроциты с нокдауном РРАЯа. Добавление СМ/7б47 к изучаемой системе не оказывало влияния на экспрессию РРАЯр в астроцитах с нокдауном РРАЯа (Рис. 5; столбец 6), что указывает на РРАЯа опосредованный эффект этого агониста. Более того, измерение уровней мРНК в ЛПС-стимулированных клетках показало, что нокдаун РРАЯа приводит к увеличению экспрессии РРАЯр в 2,5 раза (Рис. 5; столбцы 1 и 2).

Далее было показано, что изменение уровней мРНК РРАЯр коррелирует с изменениями количества белка РРАЯр. Таким образом, мы показали, что экспрессия РРАЯр находится под негативным контролем РРАЯа. о контроль ш ноедаун РРАЯа

X а

и 6 ££

в 0-¡5 *

4 X

Р ¿2

5 2 и

1 •

стм7 1-165041 Рос

-л

иг

г,:

5 6 +

Рис. 5. Активация РРАИа снимает увеличение экспрессии РРА1*р, вызванное активацией РРАЯу.

Контрольные астроциты, также как и астроциты с нокдауном PPARa предынкубировались с РРАЯа агонистом GW7б47 (1 мкМ), РРАЯр агонистом I.-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Экспрессия РРАЯр определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

2.4. РРАЯр агонист 1-165041 увеличивает экспрессию и

активность РРАЯа в астроцитах, стимулированных ЛПС, через РРАЯ0- опосредованный путь

Поскольку было получено, что экспрессия РРАЯа увеличивается только в астроцитах совместно обработанных росиглитазоном и 1.-165041, то есть в условиях активации, то мы предположили, что именно РРАЯр отвечает за увеличение уровня экспрессии РРАЯа, Для того, чтобы доказать наличие связи между РРАЯа и РРАЯр мы получили и исследовали астроциты с нокдауном РРАЯр. Действительно, в астроцитах, обработанных росиглитазоном и Ы65041 совместно, нокдаун РРАЯр приводил к трехкратному снижению уровня экспрессии РРАЯа (Рис. 6А; столбцы 7 и 8). Аналогичные результаты были получены и при измерении количества белка РРАЯа.

Для подтверждения ключевой роли РРАЯр в индукции экспрессии РРАЯа мы получили астроциты со сверхэкспрессией РРАЯр и провели их исследование. Показано, что избыток РРАЯр приводит к значительному увеличению уровня экспрессии мРНК РРАЯа в клетках, обработанных РРАЯр агонистом (Рис. 6Б; столбцы 3 и 4). Этот эксперимент доказывает, что РРАЯр является позитивным регулятором экспрессии РРАЯа. Поскольку нокдаун РРАЯу изоформы в контрольных клетках приводил к снижению экспрессии РРАЯа в астроцитах, обработанных росиглитазоном и Ы65041 совместно (Рис. 6Б; столбцы 5 и 7), а сверхэкспрессия РРАЯр снимала этот

супрессирующий эффект нокдауна РРАЯу (Рис. 6Б; столбцы 7 и 8), то можно сделать вывод, что роль РРАЯу агонисга в увеличении экспрессии РРАЯа сводится к индукции экспрессии РРАЯр. Таким образом, наряду с позитивной регуляцией РРАЯу изоформой и негативной регуляцией РРАЯа изоформой, РРАЯ(3 изоформа увеличивает экспрессию РРАЯа.

А)

Б)

12-

м х с о о

££ '5 5е 0-8 Н ■о й"

в а.

с; X

£ £ 04'

5 2

и о

Е 0.0' о

1-165041 Рос

□ контроль а нокдаун РРАЯр

¿3

2.0

12 3 4

5 6 +

7 8 +

а ш

1*1.6 >5 <

5 §и 2

¡а *

§Х0.8Н 5 г

0.4

□ сверхэкспрессия РРАРф О контроль

Л Й

1 2

Ь165041 -Рос -нокдаун 7 -

3 4 +

5 6

7 8 +

Рис. 6. Активация РРАЯр приводит к увеличению экспрессии РРАЯа.

Астроциты с нокдауном (А) или сверхэкспрессией (Б) РРАЯр предынкубировались с РРАЯр агонистом И65041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Экспрессия РРАЯа определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

2.5. Взаимодействие изоформ РРАЯ на уровне модуляции их

активности

Взаимодействие между изоформами РРАЯ было обнаружено на уровне их количества. Тем не менее, известно, что количество транскрипционного фактора не обязательно согласуется с его активностью, поэтому для проверки наличия взаимодействия РРАЯ на уровне их ДНК-связывающей активности мы измерили активность РРАЯ в астроцитах, обработанных различными комбинациями РРАЯ агонистов. Показано, что при обработке астроцитов РРАЯа агонистом СШ7647 совместно с РРАЯу агонистом росиглитазоном активность РРАЯа не изменялась, однако добавление 1_-165041 к этим агонистам более чем в 4 раза увеличивало активность РРАЯа (Рис. 7А). Эти данные показывают, что РРАЯр увеличивает активность РРАЯа. Показано, что добавление росиглитазона в 2,5 раза увеличивает активность РРАЯр (Рис. 7Б), а комбинированная обработка астроцитов росиглитазоном и Ы65041 приводит к увеличению активности РРАЯр в 5,5

раз (Рис. 7Б), то есть РРАЯу увеличивает активность РРАЯр. Эта индукция активности РРАЯр снимается агонистом РРАЯа (Рис. 7Б), что подтверждает негативную роль РРАЯа в регуляции РРАЯр. Таким образом, регуляция РРАЯ на уровне активности совпадает с их регуляцией на уровне экспрессии.

А)

-.160

4 120 £

О.

£ 80

1 40

5 £

< о

ОШВ47 Ы65041 Рос

+ +

Б)

* £ С»* Ьбоо-£ <450-о.

[2 зоо-

К * ** I 150£ < 0-

+ вШ647

+ 1.-165041

+ Рос

- с 5 а!;

Рис. 7. Активность РРАЯ модулируется схоже с их экспрессией. Астроциты 10 мин предынкубировались с РРАЯа агонистом GW7647 (1 мкМ), РРАЯр агонистом 1-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Активность РРАЯа (А) и РРАЯР (Б) определялась с иммуноферментного набора. Активность РРА1* в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

3. Влияние агонистов РРАЯ на экспрессию СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС

Важной функцией астроцитов при развитии воспалительного ответа является синтез просгагландинов. Ключевым ферментом синтеза простагландинов является циклооксигеназа. В астроцитах экспрессируются две изоформы СОХ (СОХ-1 и СОХ-2). В литературе имеются сведения о влиянии синтетических агонистов различных изоформ РРАЯ на экспрессию СОХ-2, однако они противоречивы и зависят от типа изучаемых клеток и параметров эксперимента. Поэтому мы исследовали возможность регуляции СОХ-1 и СОХ-2 синтетическими агонистами РРАЯ а, ри у в астроцитах, стимулированных ЛПС.

Исследование динамики экспрессии СОХ показало, что уровень мРНК СОХ-2 начинает возрастать уже через 2 ч после ЛПС стимуляции, достигает максимума к 4 ч инкубации астроцитов с ЛПС, незначительно снижается к 16 ч и остается на этом уровне до 24 часов инкубации астроцитов с ЛПС. Данные иммуноблотинга показали, что уровень белка СОХ-2 значительно

возрастает к 4 ч ЛПС стимуляции и далее практически не растет. ЛПС приводит к незначительному падению уровня экспрессии СОХ-1 к 4 ч, далее этот уровень сохраняется. Хотя ранее таких исследований на астроцитах не проводилось, однако полученные результаты согласуются с общепринятыми представлениями о СОХ-1 как о конститутивно экспрессирующемся гене и о СОХ-2 как о ферменте, индуцируемом при воспалительном ответе.

При добавлении различных концентраций синтетических агонистов РРАЯа (0,1-10 мкМ С\Л/7647), РРАЯр (0,1-10 МкМ Ы65041) и РРАЯу (0,1-20 мкМ росиглитазона) значимого влияния агонистов на экспрессию СОХ-1 не обнаружено. Добавление РРАЯу агонистов (росиглитазона и циглитазона) увеличивало ЛПС-индуцированную экспрессию мРНК СОХ-2 (Рис. 8), агонисты РРАЯа и РРАЯЗ влияния на экспрессию СОХ-2 не оказывали.

Для того, чтобы проверить является ли, обнаруженное потенцирование СОХ-2, вызванное росиглитазоном и циглитазоном специфическим, то есть РРАЯу-зависимым процессом, мы использовали два независимых подхода: предобработка астроцитов РРАЯу антагонистом СМ9662 и изучение астроцитов с нокдауном РРАЯу. Получено, что как ингибирование активности РРАЯу антагонистом С\^9662, так и нокдаун РРАЯу приводит к снятию эффектов агонистов РРАЯу (Рис. 8), то есть эффекты росиглитазона и циглитазона являются РРАЯу-зависимым. Следует отметить, что «базовый» уровень экспрессии СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС, не менялся при обработке астроцитов антагонистом или нокдауне РРАЯу (Рис. 8), то есть индукция экспрессии СОХ-2 при обработке астроцитов ЛПС не является РРАЯу зависимым процессом. Тем не менее, добавление синтетических агонистов РРАЯу включает механизмы, которые приводят к потенцированию

эффекта ЛПС.

.0 X

а а

о. гч

1 и

Л Ьй

2 а 5 г

о о

гЪ

Антагонист РРАГ?у

пЗп

Нокдаун РРАЯу

-РЦ-РЦ - РЦ

Рис. 8. Активация РРАЯу увеличивает экспрессию СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС. Астроциты 10 мин пред-обрабатывались антагонистом РРАЯу или использовались астроциты с нокдауном 1 РРАЯу. Далее их обрабатывали РРАКу I агонистами росиглитазоном (Р) и циглитазоном (Ц), затем астроциты стимулировались ЛПС. Через 4 ч стимуляции определялась экспрессия СОХ-2. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все 1 эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

3.1. Влияние комбинированного применения агонистов РРАЯ на экспрессию СОХ-2

Так как эффекты взаимодействия изоформ РРАЯ наиболее ярко проявляются при комбинированном применении их синтетических агонистов, то мы изучили ЛПС-стимулированные астроциты, обработанные различными комбинациями синтетических РРАЯ агонистов. Получено, что после совместной обработки клеток РРАЯа и РРАЯу агонистами уровень экспрессии СОХ-2 не менялся по сравнению с клетками обработанными только РРАЯу агонистом (Рис. 9; столбцы 2 и 3). Совместная обработка клеток РРАЯу и РРАЯр агонистами приводила к 3-х кратному увеличению экспрессии (Рис. 9; столбцы 1 и 4), однако это увеличение снималось при добавлении агониста РРАЯа (сравнение столбцов 4 и б на Рис. 9). С использованием метода иммуноблотинга показано, что данные по количеству мРНК соответствуют данным по количеству белка. Таким образом, показано, что взаимодействия между изоформами РРАЯ вносят значительный вклад в регуляцию экспрессии СОХ-2, ключевого фермента синтеза простагландинов в активированных астроцитах.

ш Росиглитазон в Циглитазон Рис. 9. Комбинации агонистов РРАЯ

модулируют экспрессию СОХ-2.

Астроциты предынкубировались с РРАЯа агонистом вШ647 (1 мкМ), РРАЯр агонистом 1.-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистами росиглитазоном (Рос) (20мкМ) и циглитазоном (Циг) (40 мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Экспрессия СОХ-2 определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия СОХ-2 в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

8 и о

Е о

йтш

Ы65041 Рос/Циг

3.2. Центральная роль РРАЯр в регуляции ЛПС-индуцированной экспрессии СОХ-2

Поскольку мы показали, что агонист РРАЯу росиглитазон приводит к индукции экспрессии РРАЯр, то логично было предположить, что этот эффект может быть причиной наблюдаемого потенцирования экспрессии СОХ-2 росиглитазоном. Для доказательства этой гипотезы мы использовали астроциты с нокдауном РРАЯр. На этих клетках были изучены эффекты комбинированного применения РРАЯу агониста росиглитазона с РРАЯр

агонисгом 1.-165041. Получено, что хотя «базовый» уровень экспрессии

СОХ-2 в ЛПС- стимулированных астроцитах не изменяется (Рис. 10; столбцы

1 и 2), однако нокдаун РРАЯр снимает эффект как росиглитазона, так и

комбинации росиглитазона с 1-165041 (Рис. 10; сравнение столбцов 5,6 и

столбцов 3,4). Эти результаты позволяют сделать вывод, что для

проявления эффекта росиглитазона на экспрессию СОХ-2 необходимо

наличие активного РРАЯр. Полученные результаты позволяют

предположить, что роль других изоформ РРАЯ сводится к изменению

количества и активности р изоформы РРАЯ.

□ контроль о нокдаун РРАИр Рис. 10. Ключевая роль РРАЯр в * модуляции экспрессии СОХ-2. Как

X а> о

о 12

а <ч >><

•5 8

л О 8 ■

х 2 01. . £ 2 4 о

1 °

Ы65041 Рос

5 6 +

контрольные, так и астроциты с нокдауном РРАЯр предынкубировались с РРАЯр агонистом 1-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 4 ч. Экспрессия СОХ-2 определялась с помощью ПЦР в реальном

времени. Экспрессия СОХ-2 в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз.

* р<0.05.

Для проверки этой гипотезы мы трансфецировали астроциты плазмидой, сверхэкспрессирующей РРАЯр и изучили влияние различных комбинаций агонистов РРАЯ на экспрессию СОХ-2 в данной клеточной модели. Обнаружено, что увеличение экспрессии РРАЯр приводит к увеличению уровня экспрессии СОХ-2 в 2 раза. Добавление агониста РРАЯр Ы65140 увеличивает этот уровень еще в 2 раза, причем эффект становится независимым от добавления агонистов РРАЯу, или РРАЯа, то есть можно предположить, что клетки при избытке РРАЯр становятся нечувствительными к регуляции экспрессии СОХ-2 агонистами РРАЯу и РРАЯа. Для доказательства этой гипотезы, мы изучили эффеюы агонистов РРАЯу и РРАЯа на астроцитах, сверхэкспрессирующих РРАЯр, но с нокдауном РРАЯа или РРАЯу. Было получено, что нокдаун РРАЯа или РРАЯу не влиял на уровень СОХ-2 в таких астроцитах при обработке их Ы65140. Эти данные подтверждают, что РРАЯр играет центральную роль в потенцировании экспрессии СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС, а роль остальных изоформ РРАЯ сводится к модуляции экспрессии РРАЯр. Проведенные

эксперименты позволили предложить следующую схему взаимодействия изотипов РРАЯ при регуляции ЛПС-индуцированной экспрессии СОХ-2 (Рис.11): РРАЯу активирует (Рис.11; путь 1), а РРАЯа ингибирует (Рис.11; путь 2) экспрессию и активность РРАЯр. Активация РРАЯр приводит к потенцированию ЛПС-индуцированной экспрессии СОХ-2 (Рис.11; путь 3). При этом РРАЯр увеличивает экспрессию и активность РРАЯа (Рис.11; путь 4), то есть описанная система способна к терминации экспрессии СОХ-2.

3.3. Изучение физиологической значимости росиглитазон-индуцированной экспрессии СОХ-2

Обнаруженное влияние росиглитазона на экспрессию СОХ-2 исключительно важно в свете предполагаемого использования синтетических РРАЙ агонистов как нейропротективных средств. Поэтому нами были проведены исследования по влиянию росиглитазона на выброс физиологически активных медиаторов воспаления- простагландинов. Был разработан метод количественного определения концентрации простагландинов с помощью метода масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением. В ходе работы было показано, что концентрации всех изучаемых простагландинов при ответе астроцитов на ЛПС меняются согласованно с простагландином Ег, который является общепризнанным маркером воспаления. Поэтому далее активность полиферментной системы синтеза простагландинов оценивалась по уровню выбрасываемого астроцитами простагландина Ег, который измеряли иммуноферментным методом. Был показано, что стимуляция астроцитов ЛПС приводит к выбросу простагландина Ег, концентрация которого становится равной 1,1±0,11 нг/мл, а росиглитазон РРАЯу увеличивает этот выброс до концентрации 2,1±0,09 нг/мл. Действие росиглитазона снимается в присутствии

Рис. 11. Схема взаимодействия изотипов РРАЯ при регуляции экспрессии СОХ-2. 1) РРАКу активирует РРАЯр;2) РРАЯа супрессирует экспрессию и активность РРАЯ(3;3) Активация РРА1*р приводит к увеличению экспрессии СОХ-2; 4) Активация РРА[*р приводит к активации РРАГ*а.

СОХ-2

антагониста РРАЯу, который снижает уровень просгагландина Е2 до 0,9±0,12 нг/мл. Таким образом, обнаруженная росиглитазон-индуцированная экспрессия СОХ-2 является физиологически значимой. 4. Влияние агонистов РРАЯ на экспрессию цитозольной и секреторной ФЛА2 в астроцитах, стимулированных ЛПС

Важной характеристикой действия провоспалительных стимулов на астроциты является активация фосфолипазы Аг (ФЛА2) и высвобождение полиненасыщенных жирных кислот, ФЛА2 относится к классу РРАЯ лиганд-синтезирующих ферментов. Известно, что в астроцитах при воспалении главную роль играют секреторная и цитозольная ФЛА2, а в литературе имеются указания на возможность регуляции секреторной и цитозольной ФЛАг агонисгами РРАЯ, но работ по изучению влияния всех трех изотипов РРАЯ на экспрессию ФЛА2 в не проводилось. Не было сведений и о регуляции ФЛАг агонистами РРАЯ в астроцитах. Поэтому мы изучили влияние ЛПС на экспрессию секреторной и цитозольной ФЛА2.

Получено, что уровень экспрессии цитозольной ФЛА2 увеличивается в 2 раза к 16 ч инкубации астроцитов с ЛПС и далее остается на постоянном уровне (Рис. 12 А). Эти результаты согласуются с общепринятым представлением, что активация ФЛА2 на начальных этапах ответа на провоспалительные стимулы происходит за счет фосфорилирования уже существующего белка и лишь на более поздних этапах идет регуляция ее экспрессии. РРАЯу агонисг росиглитазон приводил к росту уровня экспрессии цитозольной ФЛА2 начиная с 2 ч инкубации, который достигал максимального (троекратного по сравнению с ЛПС-стимулированными асгроцитами) уровня к 4 часам. К 16 часам уровень цитозольной ФЛА2 не отличался от уровня цитозольной ФЛА2 в контрольных клетках (Рис. 12 А). Нокдаун РРАЯу снимал эффекты росиглитазона (Рис. 12 А), что говорит о РРАЯу специфическом действии этого агониста. Аналогично исследовали эффекты РРАЯа и РРАЯр агонистов. Активация РРАЯр его агонистом I.-165041, приводит к увеличению уровня цитозольной ФЛА2 на всех сроках ЛПС стимуляции (2-24 часа). Показано, что агонист 6\Л/7б47 через активацию РРАЯа приводит к значимому увеличению экспрессии цитозольной ФЛА2 после четырехчасовой ЛПС-стимуляции. Таким образом, все три изоформы РРАЯ принимают участие в модуляции ЛПС-индуцированного уровня экспрессии цитозольной ФЛА2.

Экспрессия секреторной ФЛАг увеличивается в 3 раза после 4 ч стимуляции, к 16 ч возвращается к исходному уровню и не меняется в дальнейшем (Рис. 12 Б). Несколько другой тип воздействия оказывают РРАК на экспрессию секреторной ФЛА2. РРАЯа и РРАЯр агонисты не влияют на экспрессию секреторной ФЛАг в диапазоне концентраций от 0,1 до 10 мкМ. Обработка астроцитов росиглитазоном приводит к трехкратному увеличению уровня секреторной ФЛАг после 2 часов стимуляции и к двукратному увеличению после 4 ч стимуляции ЛПС (Рис. 12 Б). К 16 ч уровень секреторной ФЛАг в обработанных росиглитазоном клетках падает до уровня в контрольных клетках и остается постоянным вплоть до окончания измерений (24 часа стимуляции) (Рис. 12 Б). На клетках с нокдауном РРАЯу показано, что эффект росиглитазона является РРАЯу зависимым (Рис. 12 Б).

Таким образом, все три изоформы РРАЯ участвуют в регуляции экспрессии цитозольной ФЛАг и только активация РРАЯу увеличивает уровень экспрессии секреторной ФЛА2, тем не менее РРАЯ не влияют на «базовый» ЛПС-индуцированный уровень экспрессии ФЛА2, а участвуют только в его потенцировании.

нокдаун РРДОу+Рос ■•*— нокдаун РРА(Зу

—к— нокдаун РРАЯу+Рос *1 нокдаун РРАЯу

—•—контроль —»—Рос

Время инкубации с ЛПС (ч)

О 5 10 15 20 Время инкубации с ЛПС (ч)

Рис. 12. Активация РРАЛу увеличивает экспрессию цитозольной (цФЛА2) и секреторной (сФЛА2) фосфолипаз А2. Контрольные астроциты, также как и астроциты с нокдауном РРАЯу предынкубировались с РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (5 мкМ), затем клетки стимулировались ЛПС в течение 2, 4, 16 и 24 ч. Экспрессия цитозольной (ЦФЛА2) (А) и секреторной (сФЛА2) (Б) фосфолипаз А2 определялась с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия генов в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

5. Роль эндогенных лигандов РРАЯ, продуцируемых ФЛАг и СОХ-2, в развитии воспалительного ответа

Нами было показано, что РРАЯ участвуют в активации экспрессии РРАЯ лиганд-синтезирующих ферментов: ФЛАг и СОХ-2, регулируют количество

своих эндогенных лигандов при ответе на провоспалительный стимул. Для подтверждения наличия взаимосвязи между РРАЯ и их лиганд-синтезирующими ферментами мы обрабатывали клетки ингибиторами ФЛАг (МАРР и специфический ингибитор цитозольной ФЛА2), а также специфическим ингибитором СОХ-2 N3398. Получено, что ингибиторы не влияли на «базовый» уровень ЛПС-индуцированной экспрессии СОХ-2 (Рис. 13А, белые столбцы), однако снимали росиглитазон-индуцированную экспрессию СОХ-2 (Рис. 13 А, серые столбцы), то есть эндогенные лиганды, продуцируемые ФЛАг и СОХ-2 играют важную роль в реализации эффекта росиглитазона. Агонистом РРАЯр восстанавливает уровень экспрессии СОХ-2 при всех обработках (Рис. 13 А), что указывает на то, что эндогенные лиганды в рассматриваемой системе являются лигандами РРАЯр. Можно предложить следующую схему, объясняющую взаимодействия РРАЯ и их лиганд-синтезирующих ферментов (Рис. 13 Б): провоспалительный стимул активирует СОХ-2 и ФЛАг, которые синтезируют просгагландины и полиненасыщенные жирные кислоты; эти вещества являются эндогенными лигандами РРАЯр (Рис. 13 Б).

А)

л □ Контроль о Рос ■ Рос+Ы65041

1ПНЖ]4<рАЯ{У5>«1] ПГ~]

Контроль МАРР цФЛА2инг N3398

Время инкубации с ЛПС (ч)

Рис. 13. Фосфолипазы А2 и СОХ-2 продуцируют эндогенные лиганды РРАЯр.

(A) Астроциты 10 мин предынкубировались с МАРР (5 мкМ), специфическим ингибитором цитозольной фосфолипазы цФЛАгИнг (1 мкМ) и со специфическим ингибитором СОХ-2 N5398 ( мкМ). Далее клетки обрабатывались РРАЯр агонистом 1-165041 (1мкМ) и РРАЯу агонистом росиглитазоном (Рос) (20мкМ). После 4 часов ЛПС стимуляции с помощью ПЦР в реальном времени измерялась экспрессия СОХ-2. Экспрессия СОХ-2 в контрольных клетках принята за 1. Все эксперименты проводили не менее трех раз. * р<0.05.

(B) При воздействии провоспалительного стимула фосфолипазы А2 выщепляют полиненасыщенные жирные кислоты из фосфолипидов (1); эти жирные кислоты являются субстратом для СОХ-2 (2), который превращает их в просгагландины (3); и жирные кислоты и просгагландины являются эндогенными лигандами РРАЯр (4), активация которого индуцирует экспрессию СОХ-2 (5) и ФЛА2 (6).

выводы

1. Исследовано влияние синтетических агонистов ядерных рецепторов РРАЯ на экспрессию генов самих ядерных рецепторов РРАЯ а, р, у и ферментов классов фосфолипаз Аг и циклооксигеназ. Показано, что синтетические агонисты изоформ РРАЯ влияют на экспрессию этих генов.

2. Изучена взаимосвязь между изоформами РРАЯ а, р и у в астроцитах, стимулированных ЛПС. Показано, что РРАЯу увеличивает, а РРАЯа снижает уровень экспрессии и активность РРАЯР; РРАЯр увеличивает уровень экспрессии и активность РРАЯа.

3. Показано положительное влияние агонистов РРАЯу и отрицательное влияние агонистов РРАЯа на экспрессию СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС. Установлено, что механизм действия этих агонистов заключается в модуляции активности РРАЯр, который играет ключевую роль в регуляции экспрессии СОХ-2.

4. В результате исследования влияния ядерных рецепторов РРАЯ а, р и у на экспрессию цитозольной и секреторной фосфолипаз Аг в астроцитах, стимулированных ЛПС, установлено, что экспрессия цитозольной фосфолипазы Аг находится под положительным контролем РРАЯа, р и у, а экспрессия секреторной фосфолипазы Аг находится под положительным контролем РРАЯу.

5. Показано, что активность цитозольной фосфолипазы Аг и СОХ-2 необходима для РРАЯ-опосредованной регуляции экспрессии СОХ-2 в астроцитах, стимулированных ЛПС. Установлено, что в данной системе эти ферменты продуцируют эндогенные лиганды РРАЯр.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи:

1. Aleshin S, Grabeklis S, Hanck T, Sergeeva M, Reiser G. (2009). Peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-gamma positively controls and PPARalpha negatively controls cyclooxygenase-2 expression in rat brain astrocytes through a convergence on PPARbeta/delta via mutual control of PPAR expression levels. Mol Pharmacol. 76(2): 414-424

2. Каратассо Ю.О., Алёшин C.E., Попова H.B., Чистяков В.В., Сергеева М.Г., Варфоломеев С.Д. (2007). Количественный анализ простаглэндинов и полиненасыщенных жирных кислот методом масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением. Масс-спектрометрия т.4, в. 3: 173-178

Тезисы конференций и статьи в сборниках:

3. Каратассо Ю.О., Алёшин С.Е., Попова Н.В Использование масс-спектрометрии с электрораспылением для количественного анализа липидомов клеток животных на примере полиненасыщенных жирных кислот и эйкозаноидов. XIV Международная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов», Москва, Россия, 11-14 апреля, 2007, сборник тезисов стр. 34

4. Попова Н.В, Алёшин С.Е., Каратассо Ю.О. Валидация метода ESI/MS для задач липидомики. XIV Международная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов», Москва, Россия, 11-14 апреля, 2007, сборник тезисов, стр. 29-30.

5. Грабеклис С.А., Алёшин С.Е., Сергеева М.Г., Райзер Г. Использование пары "агонист-антагонист" для модуляции эффектов, вызванных транскрипционными факторами PPAR. Сборник статей Международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация (5-7 июня 2007 г.)", стр. 15-17

6. Алёшин С.Е., Грабеклис С.А. Регуляция экспрессии провоспалительного гена СОХ-2 при сочетаном применении синтетических агонистов ядерных рецепторов (PPAR). XV Международная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов», Москва, Россия, 8-11 апреля, 2008, сборник тезисов, стр. 2.

7. Aleshin S, Sergeeva М, Reiser G. PPARy Positively and PPARa Negatively Controls Cyclooxygenase-2 Expression in Rat Brain Astrocytes through a PPARß-Dependent Pathway (2009). Mol. Biol. Cell 19 (suppl), abstract #.W-L47

8. Алёшин C.E. Механизм действия росиглитазона на экспрессию циклооксигеназы-2 (СОХ-2). XVI Международная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов», Москва, Россия, 13-18 апреля, 2009, сборник тезисов, стр.2.

9. Грабеклис С.А., Алёшин С.Е., Сергеева М.Г., Райзер Г. Сочетанное применение агонистов и антагонистов ядерного рецептора PPARy снижает негативные последствия реактивного асгроглиоза. Сборник статей Международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация (2-4 июня 2009 г.)", стр. 350-353.

Подписано в печать: 28.09.2009

Заказ № 2596 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Алешин, Степан Евгеньевич

Список сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1 Место PPAR в семействе ядерных рецепторов.

2.1.1 Место PPAR в классификации семейства ядерных рецепторов.

2.1.2. Сходство структуры PPAR с другими ядерными рецепторами.

2.1.3. PPAR - рецепторы жирных кислот, регулирующие метаболизм липидов и действие инсулина.

2.2. Механизмы PPAR-опосредованной регуляции транскрипции.

2.2.1. Транскрипционные активности PPAR.

2.3. Регуляция активности PPAR через уровень их экспрессии.

2.4. Участие PPAR в регуляции воспалительных процессов в ЦНС.

2.4.1. Терапевтические эффекты агонистов PPAR при лечении заболеваний ЦНС.

2.4.2. Агонисты PPAR регулируют провоспалительные сигнальные пути, участвующие в заболеваниях ЦНС.

2.5. Астроциты-один из ключевых типов клеток, участвующих в воспалении.

2.5.1. Фосфолипазы А2.

2.5.2. Циклооксигеназы и их продукты.

2.6. Участие PPAR в регуляции функций астроцитов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимосвязь между ядерными рецепторами PPAR α,β,γ и ее роль в регуляции воспалительного ответа"

Рецепторы активаторов пролиферации пероксисом (PPAR) принадлежат к семейству ядерных рецепторов. Эти транскрипционные факторы участвуют в регуляции экспрессии генов, ответственных за липидный и глюкозный гомеостаз, а также генов, участвующих в ответе на провоспалительные стимулы. В настоящее время описано три изотипа PPAR: PPARa, PPAR(3 и PPARy. Нарушение в функционировании PPAR-опосредованных путей может приводить к развитию целого ряда заболеваний, таких как: ожирение, диабета 2 типа, сердечно-сосудистые заболевания, рак, гипертония, нейродегенеративные заболевания и хроническое воспаление. В связи с большой медицинской значимостью PPAR и регулируемых ими процессов эти транскрипционные факторы активно изучаются.

Некоторые из синтетических агонистов PPAR уже являются действующими веществами ряда лекарств (Авандия, Актос, Трайкор, Безалип). В частности, фибраты — синтетические агонисты PPARa — используются в качестве гиполипидемических лекарств, а PPARy является мишенью такого класса гипогликемических лекарственных средств, как тиазолидиндионы, которые используются в терапии диабета 2 типа. В последнее время показано, что синтетические PPARa и PPARy агонисты обладают противовоспалительной и антиатеросклеротической активностями. Синтетические агонисты PPARJ3 предлагается использовать для лечения дислипидемии, ожирения и нарушений механизмов восстановления и регенерации тканей. Эффективность применения синтетических агонистов PPAR для терапии таких дисфункций мозга как инсульт, травма, болезни Альцгеймера, Паркинсона, Хантингтона и др. была показана на животных. Считается, что нейропротективные свойства агонистов PPAR связаны с их противовоспалительными эффектами, поэтому в настоящее время актуальны исследования механизмов действия синтетических агонистов PPAR при воспалительных ответах мозга, которые моделируются как на уровне целого организма, так и на уровне отдельных типов клеток.

В развитии воспалительных процессов в мозге ключевая роль принадлежит клеткам глии. Среди глиальных клеток следует выделить астроциты, так как они являются важными участниками воспалительных процессов, протекающих в мозге, и нарушение их функционирования приводит к развитию нейродегенеративных заболеваний. Более того, ранее было показано, что агонисты PPARy и PPARa могут модулировать воспалительные ответы в астроцитах. Также было показано, что в первичных астроцитах экспрессируются все три изотипа PPAR. Эти свойства астроцитов делают их важным объектом для изучения роли PPAR в воспалительных заболеваниях мозга.

Важно также отметить, что астроциты являются основным источником полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов — участников воспалительных процессов и эндогенных лигандов PPAR. Ключевыми ферментами продукции полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов являются фосфолипазы А2 и циклооксигеназы, соответственно. Эти ферменты относятся к так называемым PPAR лиганд-синтезирующим ферментам. Имеются сведения, что применение синтетических агонистов PPAR может приводить к изменениям уровней экспрессии фосфолипаз и циклооксигеназ, однако влияние лигандов PPAR на экспрессию этих ферментов в астроцитах не изучено.

При рассмотрении изотипов PPAR в качестве мишеней лекарственных средств можно заметить значительное перекрывание спектров их терапевтических эффектов. Это наблюдение привело к возникновению интереса к синтезу и изучению так называемых двойных агонистов PPAR, которые способны активировать сразу несколько изотипов PPAR. Вещества, обладающие одновременной специфичностью к PPARa и PPARy в данный момент проходят клинические испытания. Однако, при проверке терапевтической ценности двойных агонистов PPAR было обнаружено, что они обладают рядом побочных эффектов, увеличивая риск сердечнососудистых заболеваний и возникновения опухолей. Поэтому для разработки новых лекарств и терапевтических стратегий на базе двойных агонистов PPAR необходимо тщательно изучить механизм и результаты одновременной активации нескольких изоформ PPAR. Необходимость изучения эффектов совместной активации нескольких изоформ PPAR вытекает также из биологии этих ядерных рецепторов, так как их эндогенные лиганды не имеют изотип-специфичности. То есть, натуральные лиганды PPAR сами по себе обладают активностью двойных (тройных) синтетических агонистов и способны активировать сразу несколько изоформ PPAR. Таким образом, изучение эффектов одновременной активации нескольких изоформ PPAR является важной задачей при изучении механизма воспалительного ответа.

В последние годы было охарактеризовано влияние агонистов PPARa и PPARy на различные клеточные ответы астроцитов (пролиферацию, выброс цитокинов, и др.), однако экспрессия самих PPAR при этом не изучалась, хотя известно, что изменение экспрессии PPAR является одним из важных механизмов регуляции этих транскрипционных факторов. Недавно было предположено наличие функциональных взаимодействий между изотипами PPAR. Так было показано, что за счет активации PPARP может возникать репрессия PPARy- и PPARa-опосредованной активации транскрипции, а также была описана PPARP-зависимая активации PPARy. Не смотря на то, что ряд данных позволяет предположить наличие взаимодействий между изотипами PPAR на уровне взаимной регуляции их экспрессии, в настоящий момент практически не существует работ, посвященных исследованию взаимодействий всех трёх изотипов PPAR.

Способность PPAR регулировать экспрессию своих лиганд-синтезирующих ферментов с одной стороны, и участие лигандов в регуляции экспрессии самих PPAR с другой стороны, указывают на наличие сложной системы взаимодействий между фосфолипазами А2, циклооксигеназами и PPAR. Тем не менее, до сих пор не было попыток изучить эти белки и взаимосвязи между ними как единую систему функционально взаимодействующих белков. Таким образом, целью данной работы было исследовать взаимосвязь между изоформами PPAR а, р, у и их лиганд-синтезирующими ферментами циклооксигеназами и фосфолипазами А2; установить роль этой взаимосвязи при ответе астроцитов на провоспалительную стимуляцию.

2. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Алешин, Степан Евгеньевич

5. Выводы

По результатам проделанной работы можно сделать следующие выводы:

1. Исследовано влияние синтетических агонистов ядерных рецепторов PPAR на экспрессию генов самих ядерных рецепторов PPAR а, (3, у и ферментов классов фосфолипаз А2 и циклооксигеназ. Показано, что синтетические агонисты изоформ PPAR влияют на экспрессию этих генов.

2. Изучена взаимосвязь между изоформами PPAR а, (3 и у в астроцитах, стимулированных LPS. Показано, что PPARy увеличивает, a PPARa снижает уровень экспрессии и активность PPAR(3; PPARp увеличивает уровень экспрессии и активность PPARa.

3. Показано положительное влияние агонистов PPARy и отрицательное влияние агонистов PPARa на экспрессию СОХ-2 в астроцитах, стимулированных LPS. Установлено, что механизм действия этих агонистов заключается в модуляции активности PPARP, который играет ключевую роль в регуляции экспрессии СОХ-2.

4. В результате исследования влияния ядерных рецепторов PPAR a, Р и у на экспрессию цитозольной и секреторной фосфолипаз А2 в астроцитах, стимулированных LPS, установлено, что экспрессия цитозольной фосфолипазы А2 находится под положительным контролем PPARa, Р и у, а экспрессия секреторной фосфолипазы А2 находится под положительным контролем PPARy.

5. Показано, что активность цитозольной фосфолипазы А2 и СОХ-2 необходима для PPAR-опосредованной регуляции экспрессии СОХ-2 в астроцитах, стимулированных LPS. Установлено, что в данной системе эти ферменты продуцируют эндогенные лиганды PPARp.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Алешин, Степан Евгеньевич, Москва

1. Sonoda, J., L. Pei, and R.M. Evans, Nuclear receptors: decoding metabolic disease. FEBS Lett, 2008. 582(1): p. 2-9.

2. Szanto, A., et al., RetinoidXreceptors: X-ploring their (patho)physiological functions. Cell Death Differ, 2004. 11 Suppl 2: p. S126-43.

3. Shulman, A.I. and D,J. Mangelsdorf, Retinoid x receptor heterodimers in the metabolic syndrome. N Engl J Med, 2005. 353(6): p. 604-15.

4. Li, Y., M.H. Lambert, and H.E. Xu, Activation of nuclear receptors: a perspective from structural genomics. Structure, 2003. 11(7): p. 741-6.

5. Nagy, L. and J.W. Schwabe, Mechanism of the nuclear receptor molecular switch. Trends Biochem Sci, 2004. 29(6): p. 317-24.

6. Ни, E., et al., Inhibition of adipogenesis through MAP kinase-mediated phosphorylation ofPPARgamma. Science, 1996. 274(5295): p. 2100-3.

7. A unified nomenclature system for the nuclear receptor superfamily. Cell, 1999. 97(2): p. 161-3.

8. Michalik, L. and W. Wahli, PPARs Mediate Lipid Signaling in Inflammation and Cancer. PPAR Res, 2008. 2008: p. 134059.

9. Fruchart, J.C., P. Duriez, and B. Staels, Peroxisomeproliferator-activated receptor-alpha activators regulate genes governing lipoprotein metabolism, vascular inflammation and atherosclerosis. Curr Opin Lipidol, 1999. 10(3): p. 245-57.

10. Harrington, W. W., et al., The Effect ofPPARalpha, PPARdelta, PPARgamma, and PPARpan Agonists on Body Weight, Body Mass, and Serum Lipid Profiles in Diet-Induced Obese AKR/J Mice. PPAR Res, 2007. 2007: p. 97125.

11. Lehmann, J.M., et al., An antidiabetic thiazolidinedione is a high affinity ligand for peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR gamma). J Biol Chem, 1995. 270(22): p. 12953-6.

12. Lefebvre, P., et al., Sorting out the roles of PPAR alpha in energy metabolism and vascular homeostasis. J Clin Invest, 2006. 116(3): p. 57180.

13. Costet, P., et al., Peroxisomeproliferator-activated receptor alpha-isoform deficiency leads to progressive dyslipidemia with sexually dimorphic obesity and steatosis. J Biol Chem, 1998. 273(45): p. 29577-85.

14. Li, A.C. and W. Palinski, Peroxisome proliferator-activated receptors: how their effects on macrophages can lead to the development of a new drug therapy against atherosclerosis. Annu Rev Pharmacol Toxicol, 2006. 46: p. 1-39.

15. Viljoen, A. and A.S. Wierzbicki, Potential options to treat hypertriglyceridaemia. Curr Drug Targets, 2009.10(4): p. 356-62.

16. Smyth, S. and A. Heron, Diabetes and obesity: the twin epidemics. Nat Med, 2006.12(1): p. 75-80.

17. Babaev, Y.R., et al., Conditional knockout of macrophage PPARgamma increases atherosclerosis in C57BL/6 and low-density lipoprotein receptor-deficient mice. Arterioscler Thromb Vase Biol, 2005. 25(8): p. 1647-53.

18. Krall, R.L., Cardiovascular safety of rosiglitazone. Lancet, 2007. 369(9578): p. 1995-6.

19. Barish, G.D., V.A. Narkar, and R.M. Evans, PPAR delta: a dagger in the heart of the metabolic syndrome. J Clin Invest, 2006. 116(3): p. 590-7.

20. Evans, R.M., G.D. Barish, and Y.X. Wang, PPARs and the complex journey to obesity. Nat Med, 2004. 10(4): p. 355-61.

21. Ricote, M. and C.K. Glass, PPARs and molecular mechanisms of transrepression. Biochim Biophys Acta, 2007. 1771(8): p. 926-35.

22. Daynes, R.A. and D.C. Jones, Emerging roles of PPARs in inflammation and immunity. Nat Rev Immunol, 2002. 2(10): p. 748-59.

23. Kostadinova, R., W. Wahli, and L. Michalik, PPARs in diseases: control mechanisms of inflammation. Curr Med Chem, 2005. 12(25): p. 2995-3009.

24. Devchand, P.R., et al., The PPARalpha-leukotriene B4 pathway to inflammation control Nature, 1996. 384(6604): p. 39-43.

25. Delerive, P., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor alpha negatively regulates the vascular inflammatory gene response by negative cross-talk with transcription factors NF-kappaB and AP-1. J Biol Chem, 1999. 274(45): p. 32048-54.

26. Marx, N., et al., PPARalpha activators inhibit tissue factor expression and activity in human monocytes. Circulation, 2001. 103(2): p. 213-9.

27. Marx, N., et al., PPARalpha activators inhibit cytokine-induced vascular cell adhesion molecule-1 expression in human endothelial cells. Circulation, 1999. 99(24): p. 3125-31.

28. Neve, B.P., et al., PPARalpha agonists inhibit tissue factor expression in human monocytes and macrophages. Circulation, 2001. 103(2): p. 207-12.

29. Xu, X., et al., PPARalpha and GR differentially down-regulate the expression of nuclear factor-kappaB-responsive genes in vascular endothelial cells. Endocrinology, 2001. 142(8): p. 3332-9.

30. Staels, В., et al., Activation of human aortic smooth-muscle cells is inhibited by PPARalpha but not by PPARgamma activators. Nature, 1998. 393(6687): p. 790-3.

31. Ikawa, H., et al., Effect of PPAR activators on cytokine-stimulated cyclooxygenase-2 expression in human colorectal carcinoma cells. Exp Cell Res, 2001.267(1): p. 73-80.

32. Ulivi, V., R. Cancedda, and F.D. Cancedda, 15-deoxy-delta 12,14-prostaglandin J(2) inhibits the synthesis of the acute phase protein SIP24 in cartilage: Involvement of COX-2 in resolution of inflammation. J Cell Physiol, 2008. 217(2): p. 433-41.

33. Zhang, Q., et al., Involvement of PPARgamma in oxidative stress-mediated prostaglandin E(2) production in SZ95 human sebaceous gland cells. J Invest Dermatol, 2006. 126(1): p. 42-8.

34. Pang, L., et al., Cyclooxygenase-2 expression by nonsteroidal antiinflammatory drugs in human airway smooth muscle cells: role of peroxisome proliferator-activated receptors. J Immunol, 2003. 170(2): p. 1043-51.

35. Welch, J.S., et al., PPARgamma andPPARdelta negatively regulate specific subsets of lipopolysaccharide and IFN-gamma target genes in macrophages. Proc Natl Acad SciU S A, 2003.100(11): p. 6712-7.

36. Glinghammar, В., et al., PPARdelta activation induces COX-2 gene expression and cell proliferation in human hepatocellular carcinoma cells. Biochem Biophys Res Commun, 2003. 308(2): p. 361-8.

37. Kockx, M., et al., Fibrates suppress fibrinogen gene expression in rodents via activation of the peroxisome proliferator-activated receptor-alpha. Blood, 1999. 93(9): p. 2991-8.

38. Madej, A., et al., Effects of fenofibrate on plasma cytokine concentrations in patients with atherosclerosis and hyperlipoproteinemia lib. Int J Clin Pharmacol Ther, 1998. 36(6): p. 345-9.

39. Cunard, R., et al., Regulation of cytokine expression by ligands of peroxisome proliferator activated receptors. J Immunol, 2002. 168(6): p. 2795-802.

40. Lovett-Racke, A.E., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor alpha agonists as therapy for autoimmune disease. J Immunol, 2004. 172(9): p. 5790-8.

41. Marx, N., et al., PPAR activators as antiinflammatory mediators in human T lymphocytes: implications for atherosclerosis and transplantation-associated arteriosclerosis. Circ Res, 2002. 90(6): p. 703-10.

42. Cunard, R., et al., WY14,643, a PPAR alpha ligand, has profound effects on immune responses in vivo. J Immunol, 2002. 169(12): p. 6806-12.

43. Xu, J., et al., Agonists for the peroxisome proliferator-activated receptor-alpha and the retinoid X receptor inhibit inflammatory responses of microglia. JNeurosci Res, 2005. 81(3): p. 403-11.

44. Ding, G., et al., PPARdelta modulates lipopolysaccharide-induced TNFalpha inflammation signaling in cultured cardiomyocytes. J Mol Cell Cardiol, 2006. 40(6): p. 821-8.

45. Kuenzli, S. and J.H. Saurat, Effect of topical PPARbeta/delta and PPARgamma agonists on plaque psoriasis. A pilot study. Dermatology, 2003. 206(3): p. 252-6.

46. Lee, C.H., et al., Transcriptional repression of atherogenic inflammation: modulation by PPARdelta. Science, 2003. 302(5644): p. 453-7.

47. Haffner, S.M., et al., Effect of rosiglitazone treatment on nontraditional markers of cardiovascular disease in patients with type 2 diabetes mellitus. Circulation, 2002.106(6): p. 679-84.

48. Setoguchi, K., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma haploinsufficiency enhances В cell proliferative responses and exacerbates experimentally induced arthritis. J Clin Invest, 2001. 108(11): p. 1667-75.

49. Jiang, С., A.T. Ting, and B. Seed, PPAR-gamma agonists inhibit production of monocyte inflammatory cytokines. Nature, 1998. 391(6662): p. 82-6.

50. Ricote, M., et al., The peroxisome proliferator-activated receptor-gamma is a negative regulator of macrophage activation. Nature, 1998. 391(6662): p. 79-82.

51. Marx, N., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma activators inhibit IFN-gamma-induced expression of the T cell-active CXC chemokines IP-10, Mig, and I-TAC in human endothelial cells. J Immunol, 2000.164(12): p. 6503-8.

52. Murao, К., et al., Thiazolidinedione inhibits the production of monocyte chemoattractant protein-1 in cytokine-treated human vascular endothelial cells. FEBS Lett, 1999. 454(1-2): p. 27-30.

53. Cunard, R., et al., Repression oflFN-gamma expression by peroxisome proliferator-activated receptor gamma. J Immunol, 2004. 172(12): p. 75306.

54. Yang, X.Y., et al., Activation of human T lymphocytes is inhibited by peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) agonists. PPARgamma co-association with transcription factor NFAT. J Biol Chem, 2000. 275(7): p. 4541-4.

55. Delerive, P., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor activators inhibit thrombin-induced endothelin-1 production in human vascular endothelial cells by inhibiting the activator protein-1 signaling pathway. Circ Res, 1999. 85(5): p. 394-402.

56. Bensinger, S J. and P. Tontonoz, Integration of metabolism and inflammation by lipid-activated nuclear receptors. Nature, 2008. 454(7203): p. 470-7.

57. Glass, C.K. and M.G. Rosenfeld, The coregulator exchange in transcriptional functions of nuclear receptors. Genes Dev, 2000. 14(2): p. 121-41.

58. McKenna, N .J. and B.W. O'Malley, Combinatorial control of gene expression by nuclear receptors and coregulators. Cell, 2002. 108(4): p. 465-74.

59. Rosenfeld, M.G., V.V. Lunyak, and C.K. Glass, Sensors and signals: a coactivator/corepressor/epigenetic code for integrating signal-dependent programs of transcriptional response. Genes Dev, 2006. 20(11): p. 1405-28.

60. Jepsen, K., et al., Combinatorial roles of the nuclear receptor corepressor in transcription and development. Cell, 2000. 102(6): p. 753-63.

61. Chen, J.D. and R.M. Evans, A transcriptional co-repressor that interacts with nuclear hormone receptors. Nature, 1995. 377(6548): p. 454-7.

62. Horlein, A. J., et al., Ligand-independent repression by the thyroid hormone receptor mediated by a nuclear receptor co-repressor. Nature, 1995. 377(6548): p. 397-404.

63. Li, J., et al., Both corepressorproteins SMRTandN-CoR exist in large protein complexes containingHDAC3. EMBO J, 2000.19(16): p. 4342-50.

64. Yoon, H.G., et al., Purification andfunctional characterization of the human N-CoR complex: the roles ofHDACS, TBL1 and TBLRL EMBO J, 2003. 22(6): p. 1336-46.

65. Ни, X. and M.A. Lazar, The CoRNR motif controls the recruitment of corepressors by nuclear hormone receptors. Nature, 1999. 402(6757): p. 936.

66. Xu, H.E., et al., Structural basis for antagonist-mediated recruitment of nuclear co-repressors by PPARalpha. Nature, 2002. 415(6873): p. 813-7.

67. Perissi, V., et al., A corepressor/coactivator exchange complex required for transcriptional activation by nuclear receptors and other regulated transcription factors. Cell, 2004. 116(4): p. 511-26.

68. Pascual, G. and C.K. Glass, Nuclear receptors versus inflammation: mechanisms of transrepression. Trends Endocrinol Metab, 2006.17(8): p. 321-7.

69. Delerive, P., et al., Induction oflkappaBalpha expression as a mechanism contributing to the anti-inflammatory activities of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha activators. J Biol Chem, 2000. 275(47): p. 367037.

70. Goetze, S., et al., PPAR activators inhibit endothelial cell migration by targeting Akt. Biochem Biophys Res Commun, 2002. 293(5): p. 1431-7.

71. Paumelle, R., et al., Acute antiinflammatory properties of statins involve peroxisome proliferator-activated receptor-alpha via inhibition of the protein kinase С signaling pathway. Circ Res, 2006. 98(3): p. 361-9.

72. Kamei, Y., et al., А СВР integrator complex mediates transcriptional activation andAP-1 inhibition by nuclear receptors. Cell, 1996. 85(3): p. 403-14.

73. Li, M., G. Pascual, and C.K. Glass, Peroxisome proliferator-activated receptor gamma-dependent repression of the inducible nitric oxide synthase gene. Mol Cell Biol, 2000. 20(13): p. 4699-707.

74. Zuo, X., et al., Oxidative metabolism oflinoleic acid modulates PPAR-beta/delta suppression of PPAR-gamma activity. Oncogene, 2006. 25(8): p. 1225-41.

75. Ghisletti, S., et al., Parallel SUMOylation-dependentpathways mediate gene- and signal-specific transrepression by LXRs and PPARgamma. Mol Cell, 2007. 25(1): p. 57-70.

76. Becker, J., et al., Regulation of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha expression during lung inflammation. Pulm Pharmacol Ther, 2008. 21(2): p. 324-30.

77. Necela, B.M., W. Su, and E.A. Thompson, Toll-like receptor 4 mediates cross-talk between peroxisome proliferator-activated receptor gamma and nuclear factor-kappaB in macrophages. Immunology, 2008.125(3): p. 34458.

78. Xiao, В., et al., Effect of nuclear factor-kappaB on peroxisome proliferator activated receptor gamma expression in Ana-1 cells. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue, 2009. 21(1): p. 3-7.

79. Lee, J., et al., The effect of PPARalpha and PPARgamma ligands on inflammation and ABC Al expression in cultured gallbladder epithelial cells. DigDis Sci, 2008. 53(6): p. 1707-15.

80. Barish, G.D., et al., A Nuclear Receptor Atlas: macrophage activation. Mol Endocrinol, 2005.19(10): p. 2466-77.

81. Huang, J.T., et al., Interleukin-4-dependentproduction of PPAR-gamma ligands in macrophages by 12/15-lipoxygenase. Nature, 1999. 400(6742): p. 378-82.

82. Harada, K., et al., Thl cytokine-induced downregulation of PPARgamma in human biliary cells relates to cholangitis in primary biliary cirrhosis. Hepatology, 2005. 41(6): p. 1329-38.

83. Lemay, D.G. and D.H. Hwang, Genome-wide identification of peroxisome proliferator response elements using integrated computational genomics. J Lipid Res, 2006. 47(7): p. 1583-7.

84. Sun, G.Y., et al., Phospholipase A2 in the central nervous system: implications for neurodegenerative diseases. J Lipid Res, 2004. 45(2): p. 205-13.

85. Lee, T.I., et al., Proinflammatory cytokine and ligands modulate cardiac peroxisome proliferator-activated receptors. Eur J Clin Invest, 2009. 39(1): p. 23-30.

86. Li, L., et al., The adipose triglyceride lipase, adiponectin and visfatin are downregulated by tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in vivo. Cytokine, 2009. 45(1): p. 12-9.

87. Leininger, M.T., C.P. Portocarrero, and K.L. Houseknecht, Peroxisome proliferator-activated receptor gammal expression in porcine white blood cells: dynamic regulation with acute endotoxemia. Biochem Biophys Res Commun, 1999. 263(3): p. 749-53.

88. Inoue, H., T. Tanabe, and K. Umesono, Feedback control of cyclooxygenase-2 expression through PPARgamma. J Biol Chem, 2000. 275(36): p. 28028-32.

89. Andersson, C., et al., Alterations in immune response andPPAR/LXR regulation in cystic fibrosis macrophages. J Cyst Fibros, 2008. 7(1): p. 6878.

90. Matsusue, K., J.M. Peters, and F J. Gonzalez, PPARbeta/delta potentiates PPARgamma-stimulated adipocyte differentiation. Faseb J, 2004. 18(12): p. 1477-9.

91. Babaev, V.R., et al., Macrophage expression of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha reduces atherosclerosis in low-density lipoprotein receptor-deficient mice. Circulation, 2007.116(12): p. 1404-12.

92. Leisewitz, A.V., et al., A PPARs cross-talk concertedly commits C6 glioma cells to oligodendrocytes and induces enzymes involved in myelin synthesis. J Cell Physiol, 2008. 217(2): p. 367-76.

93. Ogata, M., et al., On the mechanism for PPAR agonists to enhance ABCA1 gene expression. Atherosclerosis, 2009. 205(2): p. 413-9.

94. Heneka, M.T. and G.E. Landreth, PPARs in the brain. Biochim Biophys Acta, 2007.1771(8): p. 1031-45.

95. Tzeng, S.F., H.Y. Hsiao, and O.T. Мак, Prostaglandins and cyclooxygenases in glial cells during brain inflammation. Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005. 4(3): p. 335-40.

96. Bright, J. J., et al., PPAR Regulation of Inflammatory Signaling in CNS Diseases. PPAR Res, 2008. 2008: p. 658520.

97. Diab, A., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonist 15-deoxy-Delta(12,14)-prostaglandin J(2) ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis. J Immunol, 2002. 168(5): p. 2508-15.

98. Feinstein, D.L., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonists prevent experimental autoimmune encephalomyelitis. Ann Neurol, 2002. 51(6): p. 694-702.

99. Natarajan, C. and J J. Bright, Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonists inhibit experimental allergic encephalomyelitis by blocking IL-12 production, IL-12 signaling and Thl differentiation. Genes Immun, 2002. 3(2): p. 59-70.

100. Storer, P.D., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonists inhibit the activation of microglia and astrocytes: implications for multiple sclerosis. J Neuroimmunol, 2005. 161(1-2): p. 113-22.

101. Niino, M., et al., Amelioration of experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice by an agonist of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma. J Neuroimmunol, 2001. 116(1): p. 40-8.

102. Schmidt, S., et al., Anti-inflammatory and antiproliferative actions of PPARgamma agonists on T lymphocytes derivedfrom MS patients. J Leukoc Biol, 2004. 75(3): p. 478-85.

103. Natarajan, C., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma-deficient heterozygous mice develop an exacerbated neural antigen-induced Thl response and experimental allergic encephalomyelitis. J Immunol, 2003.171(11): p. 5743-50.

104. Raikwar, H.P., et al., PPARgamma antagonists reverse the inhibition of neural antigen-specific Thl response and experimental allergic encephalomyelitis by Ciglitazone and 15-deoxy-Deltal2,14-prostaglandin J2. J Neuroimmunol, 2006. 178(1-2): p. 76-86.

105. Dasgupta, S., et al., Gemfibrozil ameliorates relapsing-remitting experimental autoimmune encephalomyelitis independent of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha. Mol Pharmacol, 2007. 72(4): p. 93446.

106. Polak, P.E., et al., Protective effects of a peroxisome proliferator-activated receptor-beta/delta agonist in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroimmunol, 2005.168(1-2): p. 65-75.

107. Непека, M.T., et al., Acute treatment with the PPARgamma agonist pioglitazone and ibuprofen reduces glial inflammation and Abetal-42 levels in APPV7171 transgenic mice. Brain, 2005. 128(Pt 6): p. 1442-53.

108. Watson, G.S., et al., Preserved cognition in patients with early Alzheimer disease and amnestic mild cognitive impairment during treatment with rosiglitazone: a preliminary study. Am J Geriatr Psychiatry, 2005. 13(11): p. 950-8.

109. McTigue, D.M., et al., The PPAR gamma agonist Pioglitazone improves anatomical and locomotor recovery after rodent spinal cord injury. Exp Neurol, 2007. 205(2): p. 396-406.

110. Besson, V.C., et al., Fenofibrate, a peroxisome proliferator-activated receptor alpha agonist, exerts neuroprotective effects in traumatic brain injury. Neurosci Lett, 2005. 388(1): p. 7-12.

111. Allahtavakoli, M., et al., Rosiglitazone, a peroxisome proliferator-activated receptor-gamma ligand, reduces infarction volume and neurological deficits in an embolic model of stroke. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2006. 33(11): p. 1052-8.

112. Ou, Z., et al., Neuronal expression of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARgamma) and 15d-prostaglandin J2--mediated protection of brain after experimental cerebral ischemia in rat. Brain Res, 2006.1096(1): p. 196-203.

113. Zhao, Y., et al., The intracerebral application of the PPARgamma-ligand pioglitazone confers neuroprotection against focal ischaemia in the rat brain. Eur J Neurosci, 2005. 22(1): p. 278-82.

114. Victor, N.A., et al., Altered PPARgamma expression and activation after transient focal ischemia in rats. Eur J Neurosci, 2006. 24(6): p. 1653-63.

115. Nakamura, Т., et al., Pioglitazone exerts protective effects against stroke in stroke-prone spontaneously hypertensive rats, independently of blood pressure. Stroke, 2007. 38(11): p. 3016-22.

116. Collino, M., et al., Oxidative stress and inflammatory response evoked by transient cerebral ischemia/reperfusion: effects of the PPAR-alpha agonist WY14643. Free Radic Biol Med, 2006. 41(4): p. 579-89.

117. Deplanque, D., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha activation as a mechanism of preventive neuroprotection induced by chronic fenofibrate treatment. J Neurosci, 2003. 23(15): p. 6264-71.

118. Iwashita, A., et al., Neuroprotective efficacy of the peroxisome proliferator-activated receptor delta-selective agonists in vitro and in vivo. J Pharmacol Exp Ther, 2007. 320(3): p. 1087-96.

119. Consilvio, С., A.M. Vincent, and E.L. Feldman, Neuroinflammation, COX-2, and ALS-a dual role? Exp Neurol, 2004. 187(1): p. 1-10.

120. Khan, Т.К. and D.L. Alkon, An internally controlled peripheral biomarker for Alzheimer's disease: Erkl and Erk2 responses to the inflammatory signal bradykinin. Proc Natl Acad Sci USA, 2006.103(35): p. 13203-7.

121. Longo, F.M. and S.M. Massa, Neuroprotective strategies in Alzheimer's disease. NeuroRx, 2004. 1(1): p. 117-27.

122. Wahner, A.D., et al., Nonsteroidal anti-inflammatory drugs may protect against Parkinson disease. Neurology, 2007. 69(19): p. 1836-42.

123. Lee, B.C., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma Prol2Alapolymorphism is associated with the susceptibility to ischemic stroke in Taeeumin classified by Sasang medicine. Neurol Res, 2007. 29 Suppl 1: p. S32-7.

124. Pereira, M.P., et al., The nonthiazolidinedione PPARgamma agonist L-796,449 is neuroprotective in experimental stroke. J Neuropathol Exp Neurol, 2005. 64(9): p. 797-805.

125. Szczucinski, A. and J. Losy, Chemokines and chemokine receptors in multiple sclerosis. Potential targets for new therapies. Acta Neurol Scand, 2007.115(3): p. 137-46.

126. Schutz, В., et al., The oral antidiabetic pioglitazone protects from neurodegeneration and amyotrophic lateral sclerosis-like symptoms in superoxide dismutase-G93A transgenic mice. J Neurosci, 2005. 25(34): p. 7805-12.

127. Ramanan, S., et al., PPARalpha ligands inhibit radiation-induced microglial inflammatory responses by negatively regulating NF-kappaB and AP-1 pathways. Free Radic Biol Med, 2008. 45(12): p. 1695-704.

128. Dehmer, Т., et al., Protection by pioglitazone in the MPTP model of Parkinson's disease correlates with I kappa В alpha induction and block of NF kappa В and iNOS activation. J Neurochem, 2004. 88(2): p. 494-501.

129. Bright, J J., et al., Expression ofIL-12 in CNS and lymphoid organs of mice with experimental allergic encephalitis. J Neuroimmunol, 1998. 82(1): p. 22-30.

130. Cua, D J., et al., Interleukin-23 rather than interleukin-12 is the critical cytokine for autoimmune inflammation of the brain. Nature, 2003. 421(6924): p. 744-8.

131. Leonard, J.P., K.E. Waldburger, and S J. Goldman, Prevention of experimental autoimmune encephalomyelitis by antibodies against interleukin 12. J Exp Med, 1995. 181(1): p. 381-6.

132. Trinchieri, G., S. Pflanz, and R.A. Kastelein, The IL-12 family of heterodimeric cytokines: new players in the regulation of T cell responses. Immunity, 2003.19(5): p. 641-4.

133. Segal, B.M., B.K. Dwyer, and E.M. Shevach, An interleukin (IL)-10/IL-12 immunoregulatory circuit controls susceptibility to autoimmune disease. J Exp Med, 1998.187(4): p. 537-46.

134. Shevach, E.M., J.T. Chang, and B.M. Segal, The critical role of IL-12 and the IL-12R beta 2 subunit in the generation of pathogenic autoreactive Thl cells. Springer Semin Immunopathol, 1999. 21(3): p. 249-62.

135. Glabinsk, A.R. and R.M. Ransohoff, Targeting the chemokine system for multiple sclerosis treatment. Curr Opin Investig Drugs, 2001. 2(12): p. 1712-9.

136. Muller, D.M., M.P. Pender, and J.M. Greer, Chemokines and chemokine receptors: potential therapeutic targets in multiple sclerosis. Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2004. 3(3): p. 279-90.

137. Ghosh, S., M.J. May, and E.B. Kopp, NF-kappa В andRelproteins: evolutionarily conserved mediators of immune responses. Annu Rev Immunol, 1998. 16: p. 225-60.

138. Sha, W.C., Regulation of immune responses by NF-kappa B/Rel transcription factor. J Exp Med, 1998. 187(2): p. 143-6.

139. Grilli, M. and M. Memo, Nuclear factor-kappaB/Rel proteins: a point of convergence of signalling pathways relevant in neuronal function and dysfunction. Biochem Pharmacol, 1999. 57(1): p. 1-7.

140. Mattson, M.P. and S. Camandola, NF-kappaB in neuronal plasticity and neurodegenerative disorders. J Clin Invest, 2001. 107(3): p. 247-54.

141. Jacobson, N.G., et al., Interleukin 12 signaling in T helper type 1 (Thl) cells involves tyrosine phosphorylation of signal transducer and activator of transcription (Stat)3 and Stat4. J Exp Med, 1995. 181(5): p. 1755-62.

142. Parham, C., et al., A receptor for the heterodimeric cytokine IL-23 is composed of IL-12Rbetal and a novel cytokine receptor subunit, IL-23R. J Immunol, 2002.168(11): p. 5699-708.

143. Aggarwal, S., et al., Interleukin-23 promotes a distinct CD4 T cell activation state characterized by the production of interleukin-17. J Biol Chem, 2003. 278(3): p. 1910-4.

144. Bright, J.J., C. Du, and S. Sriram, Tyrphostin B42 inhibits IL-12-induced tyrosine phosphorylation and activation of Janus kinase-2 and prevents experimental allergic encephalomyelitis. J Immunol, 1999. 162(10): p. 6255-62.

145. Natarajan, C. and J.J. Bright, Curcumin inhibits experimental allergic encephalomyelitis by blockingIL-12 signaling through Janus kinase-STAT pathway in Tlymphocytes. J Immunol, 2002. 168(12): p. 6506-13.

146. Chen, Y. and R.A. Swanson, Astrocytes and brain injury. J Cereb Blood Flow Metab, 2003. 23(2): p. 137-49.

147. Giulian, D., et al., Interleukin 1 of the central nervous system is produced by ameboid microglia. J Exp Med, 1986. 164(2): p. 594-604.

148. Norton, W.T., et al., Quantitative aspects of reactive gliosis: a review. Neurochem Res, 1992.17(9): p. 877-85.

149. Minghetti, L. and G. Levi, Microglia as effector cells in brain damage and repair: focus on prostanoids and nitric oxide. Prog Neurobiol, 1998. 54(1): p. 99-125.

150. Kielian, Т., Toll-like receptors in central nervous system glial inflammation and homeostasis. J Neurosci Res, 2006. 83(5): p. 711-30.

151. Kigerl, К.A., et al., Toll-like receptor (TLR)-2 and TLR-4 regulate inflammation, gliosis, and myelin sparing after spinal cord injury. J Neurochem, 2007. 102(1): p. 37-50.

152. Lee, S.J. and S. Lee, Toll-like receptors and inflammation in the CNS. Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2002.1(2): p. 181-91.

153. Сергеева, М.Г. and A.T. Варфоломеева, Каскад арахидоновой кислоты. 2006, Москва: Народное образование. 255.

154. Rosenberger, Т.A., et al., Rat brain arachidonic acid metabolism is increased by a 6-day intracerebral ventricular infusion of bacterial lipopolysaccharide. J Neurochem, 2004. 88(5): p. 1168-78.

155. Balsinde, J. and E.A. Dennis, Distinct roles in signal transduction for each of the phospholipase A2 enzymes present in P388DJ macrophages. J Biol Chem, 1996. 271(12): p. 6758-65.

156. Cho, W., Structure, function, and regulation of group V phospholipase A(2). Biochim Biophys Acta, 2000.1488(1-2): p. 48-58.

157. Gabryel, В., et al., Activation of cPLA2 and sPLA2 in astrocytes exposed to simulated ischemia in vitro. Cell Biol Int, 2007. 31(9): p. 958-65.

158. Scholz-Pedretti, K., et al., Potentiation ofTNF-alpha-stimulatedgroup IIA phospholipase A(2) expression by peroxisome proliferator-activated receptor alpha activators in rat mesangial cells. J Am Soc Nephrol, 2002. 13(3): p. 611-20.

159. Bishop-Bailey, D. and T.D. Warner, PPARgamma ligands induce prostaglandin production in vascular smooth muscle cells: indomethacinacts as a peroxisome proliferator-activated receptor-gamma antagonist. FASEB J, 2003.17(13): p. 1925-7.

160. Xu, L., C. Han, and T. Wu, A novel positive feedback loop between peroxisome proliferator-activated receptor-delta and prostaglandin E2 signaling pathways for human cholangiocarcinoma cell growth. J Biol Chem, 2006. 281(45): p. 33982-96.

161. Hirst, W.D., et al., Expression of COX-2 by normal and reactive astrocytes in the adult rat central nervous system. Mol Cell Neurosci, 1999. 13(1): p. 57-68.

162. Janabi, N., Selective inhibition of cyclooxygenase-2 expression by 15-deoxy-Delta(12,14)(12,14)-prostaglandin J(2) in activated human astrocytes, but not in human brain macrophages. J Immunol, 2002.168(9): p. 4747-55.

163. Combs, C.K., et al., Inflammatory mechanisms in Alzheimer's disease: inhibition of beta-amyloid-stimulated proinflammatory responses and neurotoxicity by PPARgamma agonists. J Neurosci, 2000. 20(2): p. 558-67.

164. Aid, S., R. Langenbach, and F. Bosetti, Neuroinflammatory response to lipopolysaccharide is exacerbated in mice genetically deficient in cyclooxygenase-2. J Neuroinflammation, 2008. 5: p. 17.

165. Lim, G.P., et al., Ibuprofen suppresses plaque pathology and inflammation in a mouse model for Alzheimer's disease. J Neurosci, 2000. 20(15): p. 570914.

166. McGeer, P.L., M. Schulzer, and E.G. McGeer, Arthritis and antiinflammatory agents as possible protective factors for Alzheimer's disease: a review of 17 epidemiologic studies. Neurology, 1996. 47(2): p. 425-32.

167. Seibert, K., et al., Distribution of COX-1 and COX-2 in normal and inflamed tissues. Adv Exp Med Biol, 1997. 400A: p. 167-70.

168. Nogawa, S., et al., Cyclo-oxygenase-2 gene expression in neurons contributes to ischemic brain damage. J Neurosci, 1997. 17(8): p. 2746-55.

169. Griffin, D.E., S.L. Wesselingh, and J.C. McArthur, Elevated central nervous system prostaglandins in human immunodeficiency virus-associated dementia. Ann Neurol, 1994. 35(5): p. 592-7.

170. Hurley, S.D., J.A. Olschowka, and M.K. O'Banion, Cyclooxygenase inhibition as a strategy to ameliorate brain injury. J Neurotrauma, 2002. 19(1): p. 1-15.

171. Teismann, P., et al., Cyclooxygenase-2 is instrumental in Parkinson's disease neurodegeneration. Proc Natl Acad Sci USA, 2003. 100(9): p. 5473-8.

172. Gilroy, D.W. and P.R. Colville-Nash, New insights into the role of COX 2 in inflammation. J Mol Med, 2000. 78(3): p. 121-9.

173. Gilroy, D.W., et al., Inducible cyclooxygenase may have anti-inflammatory properties. Nat Med, 1999. 5(6): p. 698-701.

174. Drew, P.D., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor agonist regulation of glial activation: relevance to CNS inflammatory disorders. Neurochem Int, 2006. 49(2): p. 183-9.

175. CulHngford, Т.Е., et al., Distribution of mRNAs encoding the peroxisome proliferator-activated receptor alpha, beta, and gamma and the retinoid X receptor alpha, beta, and gamma in rat central nervous system. J Neurochem, 1998. 70(4): p. 1366-75.

176. Granneman, J., R. Skoff, and X. Yang, Member of the peroxisome proliferator-activated receptor family of transcription factors is differentially expressed by oligodendrocytes. J Neurosci Res, 1998. 51(5): p. 563-73.

177. Cristiano, L., A. Bernardo, and M.P. Ceru, Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) and peroxisomes in rat cortical and cerebellar astrocytes. JNeurocytol, 2001. 30(8): p. 671-83.

178. Woods, J. W., et al., Localization of PPARdelta in murine central nervous system: expression in oligodendrocytes and neurons. Brain Res, 2003. 975(1-2): p. 10-21.

179. Benani, A., et al., Evidence for the presence of both peroxisome proliferator-activated receptors alpha and beta in the rat spinal cord. J Chem Neuroanat, 2003. 25(1): p. 29-38.

180. Cristiano, L., et al., Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) and related transcription factors in differentiating astrocyte cultures. Neuroscience, 2005. 131(3): p. 577-87.

181. Pahan, K., et al., Gemfibrozil, a lipid-lowering drug, inhibits the induction of nitric-oxide synthase in human astrocytes. J Biol Chem, 2002. 277(48): p. 45984-91.

182. Xu, J. and P.D. Drew, Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonists suppress the production of IL-12 family cytokines by activated glia. J Immunol, 2007.178(3): p. 1904-13.

183. Xu, J., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha and retinoid X receptor agonists inhibit inflammatory responses of astrocytes. J Neuroimmunol, 2006.176(1-2): p. 95-105.

184. Defaux, A., et al., Effects of the PPAR-beta agonist GW501516 in an in vitro model of brain inflammation and antibody-induced demyelination. J Neuroinflammation, 2009. 6: p. 15.

185. Kitamura, Y., et al., Activators of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARgamma) inhibit inducible nitric oxide synthase expression but increase heme oxygenase-1 expression in rat glial cells. Neurosci Lett, 1999. 262(2): p. 129-32.

186. Syapin, P.J., Regulation ofhaeme oxygenase-1 for treatment of neuroinflammation and brain disorders. Br J Pharmacol, 2008. 155(5): p. 623-40.

187. Chattopadhyay, N., et al., Expression of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARS) in human astrocytic cells: PPARgamma agonists as inducers of apoptosis. J Neurosci Res, 2000. 61(1): p. 67-74.

188. Fitch, M.T., et al., Cellular and molecular mechanisms of glial scarring and progressive cavitation: in vivo and in vitro analysis of inflammation-induced secondary injury after CNS trauma. J Neurosci, 1999. 19(19): p. 8182-98.

189. Непека, M.T., et al., Focal glial activation coincides with increasedBACE1 activation and precedes amyloid plaque deposition in APP/Y7171. transgenic mice. J Neuroinflammation, 2005. 2: p. 22.

190. Park, E.J., et al., 15d-PGJ2 and rosiglitazone suppress Janus kinase-STAT inflammatory signaling through induction of suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) andSOCS3 in glia. J Biol Chem, 2003. 278(17): p. 14747-52.

191. Dello Russo, C., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor gamma thiazolidinedione agonists increase glucose metabolism in astrocytes. J Biol Chem, 2003. 278(8): p. 5828-36.

192. Spagnolo, A., et al., Differential effects of PPARgamma agonists on the metabolic properties of gliomas and astrocytes. Neurosci Lett, 2007. 417(1): p. 72-7.

193. Petrova, T.V., K.T. Akama, and L J. Van Eldik, Cyclopentenone prostaglandins suppress activation of microglia: down-regulation of inducible nitric-oxide synthase by 15-deoxy-Deltal2,14-prostaglandin J2. Proc Natl Acad Sci USA, 1999. 96(8): p. 4668-73.

194. Storer, P.D., et al., Cyclopentenone prostaglandins PGA2 and 15-deoxy-deltal2,14 PGJ2 suppress activation of murine microglia and astrocytes: implications for multiple sclerosis. J Neurosci Res, 2005. 80(1): p. 66-74.

195. Perez-Ortiz, J.M., et al., Glitazones differentially regulate primary astrocyte and glioma cell survival. Involvement of reactive oxygen species and peroxisome proliferator-activated receptor-gamma. J Biol Chem, 2004. 279(10): p. 8976-85.

196. Luna-Medina, R., et al., Regulation of inflammatory response in neural cells in vitro by thiadiazolidinones derivatives through peroxisome proliferator-activated receptor gamma activation. J Biol Chem, 2005. 280(22): p. 2145362.

197. Gurley, C., et al., Microglia and Astrocyte Activation by Toll-Like Receptor Ligands: Modulation by PPAR-gamma Agonists. PPAR Res, 2008. 2008: p. 453120.

198. Romera, C., et al., Ischemic preconditioning reveals that GLT1/EAAT2 glutamate transporter is a novel PPARgamma target gene involved in neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab, 2007. 27(7): p. 1327-38.

199. Klotz, L., et al., Noradrenaline induces expression of peroxisome proliferator activated receptor gamma (PPARgamma) in murine primary astrocytes and neurons. J Neurochem, 2003. 86(4): p. 907-16.

200. Chawla, A., et al., PPAR-gamma dependent and independent effects on macrophage-gene expression in lipid metabolism and inflammation. Nat Med, 2001. 7(1): p. 48-52.

201. Wohlfert, E.A., et al., Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) and immunoregulation: enhancement of regulatory T cells through PPARgamma-dependent and -independent mechanisms. J Immunol, 2007.178(7): p. 4129-35.

202. Shi, Y., M. Hon, and R.M. Evans, The peroxisome proliferator-activated receptor delta, an integrator of transcriptional repression and nuclear receptor signaling. Proc Natl Acad Sci USA, 2002. 99(5): p. 2613-8.

203. Herschman, H.R., Prostaglandin synthase 2. Biochim Biophys Acta, 1996. 1299(1): p. 125-40.

204. Schwab, J.M., K. Seid, and H.J. Schluesener, Traumatic brain injury induces prolonged accumulation of cyclooxygenase-1 expressing microglia/brain macrophages in rats. J Neurotrauma, 2001.18(9): p. 88190.

205. Gottlicher, M., et al., Fatty acids activate a chimera of the clofibric acid-activated receptor and the glucocorticoid receptor. Proc Natl Acad Sci U S A, 1992. 89(10): p. 4653-7.

206. Kliewer, S.A., et al., Fatty acids and eicosanoids regulate gene expression through direct interactions with peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma. Proc Natl Acad Sci USA, 1997. 94(9): p. 4318-23.

207. Zhao, Y., et al., Activation of cerebral peroxisome proliferator-activated receptors gamma promotes neuroprotection by attenuation of neuronal cyclooxygenase-2 overexpression after focal cerebral ischemia in rats. FASEB J, 2006. 20(8): p. 1162-75.

208. Pontsler, A.V., et al., Cyclooxygenase-2 is induced in monocytes by peroxisome proliferator activated receptor gamma and oxidized alkyl phospholipids from oxidized low density lipoprotein. J Biol Chem, 2002. 277(15): p. 13029-36.

209. Zhao, X., et al., Distinct patterns of intracerebral hemorrhage-induced alterations in NF-kappaB subunit, iNOS, and COX-2 expression. J Neurochem, 2007.101(3): p. 652-63.

210. Seimandi, M., et al., Differential responses of PPARalpha, PPARdelta, and PPARgamma reporter cell lines to selective PPAR synthetic ligands. Anal Biochem, 2005. 344(1): p. 8-15.

211. Chene, G., et al., n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acids induce the expression of COX-2 via PPARgamma activation in human keratinocyte HaCaTcells. Biochim Biophys Acta, 2007.1771(5): p. 576-89.

212. Каратассо, Ю.О., et al., Количественный анализ простагландинов и полиненасыщенных жирных кислот методом масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением. Масс-Спектрометрия, 2007. 4(3): р. 173-178.

213. Heales, S J., et al., Neurodegeneration or neuroprotection: the pivotal role of astrocytes. Neurochem Res, 2004. 29(3): p. 513-9.

214. Saluja, I., J.G. Granneman, and R.P. Skoff, PPAR delta agonists stimulate oligodendrocyte differentiation in tissue culture. Glia, 2001. 33(3): p. 191204.

215. Serhan, C.N., et al., Resolvins: a family ofbioactive products of omega-3 fatty acid transformation circuits initiated by aspirin treatment that counter proinflammation signals. J Exp Med, 2002. 196(8): p. 1025-37.

216. Farooqui, A.A., et al., Phospholipase A2 and its role in brain tissue. J Neurochem, 1997. 69(3): p. 889-901.

Информация о работе

Алешин, Степан Евгеньевич
кандидата биологических наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.03

Диссертация

Взаимосвязь между ядерными рецепторами PPAR α,β,γ и ее роль в регуляции воспалительного ответа - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы