Коронарный кровоток и энергетический метаболизм в норме и при индукции пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-[A]) у диабетических мышей

Братковский, Сергей Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Коронарный кровоток и энергетический метаболизм в норме и при индукции пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-[A]) у диабетических мышей
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Коронарный кровоток и энергетический метаболизм в норме и при индукции пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-[A]) у диабетических мышей"

На правах рукописи

□03067636

Братковский Сергей Валерьевич

КОРОНАРНЫЙ КРОВОТОК И ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ МЕТАБОЛИЗМ В НОРМЕ И ПРИ ИНДУКЦИИ ПЕРОК-СИСОМ ПРОЛИФЕРАТОР-АКТИВИРУЮЩЕГО РЕЦЕПТОРА АЛЬФА (РРАЫ-а) У ДИАБЕТИЧЕСКИХ МЫШЕЙ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.00.13 - физиология 14.00.16 - патофизиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Архангельск 2006

003067696

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Северный государственный медицинский университет (г. Архангельск) Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» на кафедре нормальной физиологии

Научные руководители:

Заслуженный работник высшей школы, доктор медицинских наук, профессор Совершаева Светлана Леонидовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Камакин Николай Федорович;

доктор медицинских наук, доцент Назаренко Наталья Анатольевна

Ведущая организация:

Российский университет дружбы народов

Зашита состоится «/У» 2007г. в часов на заседании

диссертационного совета Д208.СЮ4.01 при ГОУ ВПО «Северный государственный медицинский университет (г. Архангельск)» по адресу: 163061, г. Архангельск, пр. Троицкий, д.51.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Северный государственный медицинский университет (г. Архангельск)»

Автореферат разослан « 3&» 2006г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.м.н.

С.Е. Зиновьева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Неуклонный рост патологии сердечно-сосудистой системы, в том числе на фоне метаболических нарушений, повышает актуальность исследований, направленных на уточнение механизмов межсистемных взаимодействий и поиск путей коррекции выявленных изменений.

В 1999 г. ВОЗ выдвинула термин «метаболический синдром» как основной в ряду тех изменений, которые сопряжены с инсулинорезистентностью (Albert! K.G., 1998). Среди признаков метаболического синдрома повышение артериального давления, нарушения липидного обмена, избыточная масса тела и др. Развитие метаболического синдрома сопровождается нарушениями в сердечно-сосудистой системе на разном уровне от инотропной функции, коронарного кровотока до метаболических сдвигов.

Известно, что в развитии множественных метаболических нарушений центральную роль играет инсулинорезистентность, которая длительное время может протекать как состояние, пограничное между нормой и патологией.

Результатом длительно существующего метаболического синдрома является развитие микроциркуляторных осложнений и кардиомипатий. Патогенез этих изменений носит комплексный характер (King G.L, 1996). Клеточные и молекулярные механизмы изменений микроциркуляции изучены недостаточно. Современные исследователи рассматривают различные причины этих процессов, в том числе и снижение локального кровотока (Strauer В.Е , 1997) Так, одним из факторов способствующих развитию диабетической кардиомиопатии может быть уменьшение поступления крови к миокарду в результате изменений в микроциркуляторном русле, связанных с повреждением эндотелия, аккумуляцией коллагена и, как следствие, утолщением интимы в артериолах (Strauer В.Е , 1997; Pitkanen О.Р., 1998).

В относительно недавних исследованиях было установлено, что одним из ключевых регуляторных факторов миокардиального метаболизма являются лиганд-рецепторные взаимодействия с участием пероксисом пролифера-тор-активирующих рецепторов (PPAR). Пероксисом пролифератор-активи-рующие рецепторы (англ. peroxisome proliferator-activated receptors - PPAR) вовлечены в различные аспекты метаболизма жиров (Desvergne В, 1999; Kliewer S.A.,2001). В настоящее время идентифицированы три изоформы PPAR: PPAR-a, PPAR-0 и PPAR-y. Все три PPAR активируются жирными кислотами и, находясь в связанном (гетеродимеризованном) состоянии с рецепторами к ретиноловой кислоте, присоединяются к специфической для них последовательности ДНК - AGGTCANAGGTCA в промоутерах, акти-

визирующихся под действием PPAR генов. Функционально, PPAR-a был охарактеризован как центральный регулятор митохондриального катаболизма жирных кислот

В настоящее время роль PPAR-a рецепторов в сердце изучена недостаточно Недавние исследования на культурах неонатальных кардиомиоцитов показали, что активация PPAR-a рецепторов увеличивает транскрипцию 1енов, содержащих информацию о протеинах, участвующих в транспорте и окислении жирных кислот (Brandt J.M., 1998; Van der Lee К А., 2000). Однако, большая часть исследований по PPAR-a связана с системным метаболизмом, в то время как вопросам их роли в регуляции миокардиальной функции уделено недостаточно внимания.

Таким образом, изучение межсистемных аспектов метаболизма, инотро-пш1 миокарда и его кровоснабжения в условиях активации ядерных рецепторов PPAR-альфа искуссвенными агонистами представляет актуальную проблему

Цель. Исследовать метаболизм, сократительную функцию и коронарный юк в миокарде в экспериментальных моделях мышей линий C57BL/KsJ(db/ db), (db/+) до и после активации ядерных рецепторов PPAR-альфа их исскус-твенным агонистом ВМ 17 0744 [2,2-dichloro-12-(p-chlorophenyl)dodecanoic acid] с целью оценки роли пероксисом пролифератор-активирующих рецепторов альфа (PPAR-a) в сердечной деятельности.

Достижение указанной цели потребовало решения следующих задач:

1 Оценить энергетический метаболизм и сократительную функцию миокарда у гетерозиготных (db/+) и гомозиготных мышей линии C57BL/ KsJ(db/db) Изучить роль пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа в регуляции метаболизма и инотропной функции миокарда путем активации PPAR-альфа искусственным агонистом ВМ 17.0744 [2,2-dichloro-l2-(p-chlorophenyl)dodecanoic acid].

2 В целях получения максимально точных измерений коронарного тока в эксперименте на грызунах разработать и апробировать электронный метод мониторинга коронарного тока на модели изолированного сердца (мыши линии Swiss Webster)

3 Сравнить особенности коронарного тока и роль пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-альфа) в его регуляции на модели мышей линий C57BL/KsJ(db/db), (db/+)

Научная новизна работы

В данной работе применен комплексный подход в изучении физиологических механизмов метаболизма энергетических субстратов, состояния коронарного тока и сократительной функции миокарда в сердце, на фоне введения нового агониста PPAR-a рецепторов ВМ 17.0744 на экспериментальной модели (C57BL/KsJ(db/db)

Впервые в экспериментальной науке было проведено исследование коронарного тока покая и резерва коронарного тока ex vivo на мышах серии C57BL/KsJ (db/db).

Для измерения коронарного тока в перфузионной системе Лангендорфа, впервые был применен инфракрасный датчик, вмонтированный в систему, что обеспечило очень высокую точность измерений.

Научно-практическая значимость работы

Разработана методика измерения функциональных параметров: коронарного тока и давления, развиваемого левым желудочком, в мышиных сердцах ex vivo в системе Лангендорфа.

В ходе разработки методики впервые был применен инфракрасный датчик, вмонтированный в систему Лангендорфа, позволяющий с очень высокой степенью точности измерять показатели коронарного тока. В дальнейшем, как недорогая и практичная, данная методика может быть применена на кафедрах физиологии для изучения различных физиологических и патофизиологических состояний сердечно-сосудистой системы и контрактиль-ной функции миокарда.

Результаты исследования вносят вклад в понимание механизмов миокар-диального метаболизма, сократительной функции сердца и его кровоснабжения в норме и на фоне метаболического синдрома.

Положения, выносимые на защиту:

I. Имеются достоверные различия в системном и миокардиальном метаболизме у гетерозиготных (db/+) и гомозиготных мышей C57BL/KsJ(db/ db) У гомозигот серии C57BL/KsJ (db/db) в плазме крови наблюдаются более высокие концентрации глюкозы, триацилглицеридов, свободных жирных кислот и гиперинсулинемия, миокардиальный метаболизм характеризуется снижением утилизации глюкозы, использованием жирных кислот в качестве основного энергетического субстрата и накоплением триацилглицеридов в сердечной мышце. Активация PPAR-альфа искусственным агонистом ВМ 17.0744 ведет к нормализации параметров системного и миокардиального метаболизма.

2 Установлены различия в сократительной функции миокарда в группах гетерозиготных (db/+) и гомозиготных мышей серии C57BL/KsJ (db/db). Гетерозиготы характеризуются более высокими уровнями инотропии миокарда. Активация PPAR-альфа искусственным агонистом в обеих группах ВМ 17.0744 не вызывает значимых изменений давления (конечно-диасто-лпческого давления и давления, развиваемого левым желудочком), а также сердечного выброса.

3 Повышение точности измерений коронарного кровотока в эксперименте на грызунах может быть достигнуто применением электронного метода мониторинга на модели изолированного сердца ex vivo. Модифицированный метод с использованием инфракрасного датчика позволяет более точно измерять быстрые изменения тока жидкости в системе

4 Коронарный ток достоверно выше у гетерозигот (db/+) в сравнении с гомозиготами C57BL/KsJ(db/db). Использование агониста PPAR-альфа в течение 4-х недель перорального применения ВМ 17.0744 у экспериментальных животных не приводит к значимым изменениям коронарного тока.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертационного исследования были доложены на ежегодном конгрессе Скандинавского Физиологического Общества (Scandinavian Physiological Society, Стокгольм, Швеция, 16-19 августа, 2000 г.); на ежегодной конференции Норвежской Диабетологической Ассоциации (Осло, Норвегия, 2000 г, Берген, Норвегия, 2001 г.); на XVII конгрессе Всемирного Общества по Исследованиям Сердца (XVII World Congress of the International Society for Heart Research, Виннипег, Канада, 6-11 июля, 2001 г.), на ежегодной научно-практической конференции молодых ученых "Ломоносова достойные потомки" (к 290-летнему юбилею М.В, Ломоносова), состоявшейся в г Архангельске 23 ноября 2001г.; на открытых семинарах кафедры медицинской физиологии Университета г. Тромсе (Норвегия), состоявшихся в январе 2000 года и марте 2001 года; на XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоно-сов-2005" (Москва, Россия, 12-15 апреля, 2005 г.), на проблемной комиссии гю физиологии в СГМУ (2005, 2006).

Работа выполнена в рамках НИР Северного государственного медицинского университета (№ государственной регистрации 01200408383).

Публикации. По результатам исследования опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации

Работа изложена на 145 страницах машинописи. Состоит из введения, обзора литературы, глав "Объекты и методы исследования", "Результаты собственных исследований и их обсуждение", заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертационная работа иллюстрирована 7 таблицами и 27 рисунками. Список литературы содержит 54 наименований отечественных и 235 зарубежных авторов.

Экспериментальная часть исследования выполнена на кафедре нормальной физиологии СГМУ (г. Архангельск). Автор выражает благодарность кафедре медицинской физиологии Университета г Тромсе (Норвегия) за предоставление условий и помощь в выполнении данной работы.

Эксперименты проводились в соответствии с Европейской конвенцией по защите и использованию позвоночных животных для экспериментальных и других цепей EST№ 123 (1986). Протокол экспериментов был также одобрен Советом по использованию экспериментальных животных Норвегии

Экспериментальная модель. В наших экспериментах в качестве экспериментальной модели использовались мыши серии C57BL/K.SJ (db/db).

В данной экспериментальной модели имелась аутосомно-рецессивная мутация в 4-ой хромосоме, что является причиной мутационного изменения в лептинрецепторе (Chlua Jr.S.C., 1996). Гомозиготы db/db обладают излишним весом, гипергликемией, гиперисулинемией и инсулинорезистен-тностью; у гетерозигот db+ не наблюдаются отклонения от нормы (контрольная группа).

В целях изучения роли PPAR-a использовали искусственный лиганд (рис. 1) к данным рецепторам препарат ВМ 17.0744 (К-111) (2,2-dichloro-12-(p-chlorophenyl)dodecanoic acid).

Рис. 1. Химическая формула препарата ВМ 17.0744 (К-111)

Изучение сократительной функции миокарда и метаболизма

Система изолированного рабочего сердца. Анестезия достигалась введением 10 мг пентобарбитала интраперитонеально и 100 ед. гепарина (для предотвращения коагуляции). После срединной торакотомии сердца быстро

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

(CHj),D-ссь-соон

навлекались и помещались в холодный би карбонатный раствор Кребс-Хен-еелейтн. затем канюлировадись чере i аорту и первоначально перфузирова-лнсь ретроградно в системе Лангендорфа при постоянном перфузиошюм давлении 17> мм рт;ет.

Дня начальной перфузии is системе Лангендорфа был использован рас-тиор Щребс- Хенсе дейха содержащий {is ммож'л): NaCÏ 123,5, NatlCO, 20, KCI 4.7, MgSOj 12, KH J'Oj 1.2. CaCl, 2.0. глюкозы 11. Насыщение раствора проводилось газовой смесью 95% О,, 5% СО, (рН 7.4).

В дальнейшем в модели рабочего сердца использовался модифидирован-иый раствор К ребе-Х е нселе йт£ц 6 который было добавлено 4 ммоля пальни нтата. связанного с 3% BSA (fraction V, Cat. No. А-8022; Sigma) в качестве »нергетпческого субстрата в дополнение к 11 ммоль глюкозы.

IÏ системе изолированного рабочею сердца (рис. 2) модифицированный раствор Кребс-Хепселейта ре циркулировал и проходил через фильтр, вмонтированный в систему. Система была термоизолнронана для поддержания постоянном температуры сердца, которая В эксперименте сохранялась на > ровне Я7"С и измерялась при помощи датчика, введенного ft легочную артерию.

Рис. 2. Сис тема изолированного рабочего сердца

Экспериментальный протокол

Измерение сократительной функции левого желудочка. Два игольчатых электрода присоединялись к правому предсердию для электростимуляции (электростимулятор модели 9D (Grass Instruments; Quincy, USA). Для измерения давления внутри левого желудочка через верхушку сердца вводилась стальная канюля (Larsen T.S., 1999). Данная канюля соединялась с трансдюсером давления: модель Millar Micro-Tip (Millar Instruments; Houston, USA).

После установки всех датчиков перфузионная система переключалась из режима модели Лангендорфа в режим модели излолированного рабочего сердца (рис.2), левое предсердие заполнялось модифицированным раствором Кребс-Хенселейта, давление преднагрузки поддерживалось на уровне 12,5 мм.рт.ст., давление постангрузки - на уровне 50 мм.рт.ст., ЧСС - на уровне 360 ударов в минуту (путем электростимуляции). Сигналы, поступающие с трансдюсера давления, проходили через усилитель, а затем записывались и анализировались при помощи компьютерной программы Lab View. Давление, развиваемое левым желудочком, рассчитывалось как разница между систолическим давлением и конечным диастолическим давлением.

Применение агониста PPAR препарата ВМ 17.0744. В возрасте 8 недель случайно выбранные экспериментальные мыши (C57BL/KsJ (db/db) были помещены в клетки по 4-5 животных. Экспериментальная группа мышей получала препарат ВМ 17.0744 в течение 4 недель. Доза препарата рассчитывалась, исходя из суточного потребления воды и варьировала между 24,5 ± 1,35 и 37,9 ± 2,5 мг/кг в сутки.

Забор крови и биохимический анализ. Уровень глюкозы в крови мышей измерялся в динамике 4-х недельного введения препарата ВМ17.0744. Измерения проводились с помощью Precision Plus electrodes (Medisense and Abbott Laboratories; Bedford, USA) натощак через 4 часа после последнего приема пищи. Забор крови осуществлялся из бедренной вены мыши. В день эвтаназии проводился дополнительный забор крови. Уровень глюкозы плазмы крови, содержание свободных жирных кислот и уровень ТАГ измерялся при помощи биохимических тестов Boehringer-Mannheim (Cat. No. 1442449; Mannheim, Germany), Wako Chemicals (Cat. No. 994-75409; Neuss, Germany) и Roche Diagnostic Systems (Cat. No. 0736791; Basel, Germany). Уровень инсулина измерялся при помощи радиоиммунологического биохимического теста Lineo Research (Cat. No. RI-13K).

Оценка показателей сердечного метаболизма. Сердечный метаболизм измерялся путем регистрации количества 14С02 и ЗН20, образующихся в процессе окисления глюкозы, меченной изотопом 14С и пальмитата, меченного изотопом ЗН. После 60-ти минут эксперимента сердца подвергались быстрой заморозке, а затем хранились в жидком азоте для последующего анализа уровня триацилглицеридов (ТАГ) в сердечной мышце.

Измерение тканевого уровня ТАГ в миокарде. Тканевые липиды извлекались из 30 мг сердечной мышцы методом Folch. Затем они смешивались с 300 мкл тетра-бутилового спирта и 150 мкл тритон-х-100-метилового спирта в соотношении 1:1. Содержание ТАГ измерялось при помощи триг-лицерид-25 теста АВХ Diagnostics (Montpellier, France).

Электронный метод мониторинга коронарного тока на модели изолированного сердца (ex vivo)

Система изолированного сердца по Лангендорфу. Методика измерения коронарного тока и давления, развиваемого левым желудочком, была разработана с использованием мышиных сердец серии Swiss Webster весом 30-35 г Для предотвращения тромбообразования за 10 минут до анестезии животным вводился гепарин в дозе 100 ЕД. Анестезия осуществлялась введением 10 мг пентобарбитала натрия.

После срединной торакотомии сердца быстро извлекались и помещались в холодный бикарбанатный раствор Кребс-Хенселейта. Сердца канулирова-лись через аорту и перфузировались ретроградно при постоянном перфу-зионном давлении 73 мм.рт.ст. бикарбонатным буфером Кребс Хенселейта, содержащим (ммол/л): NaCl 123.5, NaHCOj 20, KCl 4.7, MgS041.2, КН2Р04 1 2, CaCl, 2.0, глюкозы 11, насыщение раствора проводилось газовой смесью 95% Oj, 5% С02 (pH 7.4).

Первые 20 минут сердца промывались от крови. В течение этого времени небольшой шарик, заполненный жидкостью, подсоединенный к тран-сдюсеру давления через тонкий катетер, вводился в левый желудочек через левое предсердие. Это позволяло измерять рабочее давление левого желудочка в течение всего эксперимента (рис.3).

Сигналы, поступающие с трансдюсера, проходили через усилитель и записывались, а затем анализировались при помощи компьютерной программы Lab-View. Температура сердца постоянно поддерживалась на уровне 37°С и записывалась термодатчиком, помещенным в правый желудочек. Стимуляция сердца осуществлялась игольчатыми электродами, присоеди-

ненными к правому предсердию. Коронарный ток записывался при помощи инфракрасного датчика.

нрОЕраммз

Рис. 3. Экспериментальная установка для перфузии изолированного сердца (по О. Langendогff)

Применение агонИСТЯ PPAR препарата ВМ 17.0744. В данном эксперименте мы попытались протестировать гипотезу о том, что нормализация сердечного метаболизма может улучшить коронарный ток и реактивность сосудов. В течении 4-х недель, группе 8-ми недельных гомозиготных мышей вводился препарат ВМ 17.0744, добавленный в питьевую воду (0,24 мг/мл),

Экспериментальный протокол. После инструментальной подготовки изолированного сердца в системе Лангендорфа и периода стабилизации коронарного тока и рабочего давления левого желудочка осуществлялось введение препарата нитропруссида натрия (донора N0) при концентрации 1 мкгр /мин. По окончании введения нитропруссида натрия использовался 10 минутный перерыв, при котором коронарный ток и рабочее давление левого желудочка возвращались к величинам покоя. Затем осуществлялось введение аденозина 5 мкгр /мин. Оба препарата вводились через Т-образное соединение с канюлей со скоростью 5% от коронарного тока покоя. Максимальные дозы препаратов были определены в пробных экспериментах (рис 5). По истечении 10 минутного перерыва коронарный ток и рабочее давление в желудочке были измерены до и после 90-секундного периода тотальной ишемии.

Сердечно-сосудистая реактивность на препараты нитропруссида натрия и аденозина была также исследована в нормотермически калий-остановлен-ных сердцах гетеозиготных db/+ и гомозиготных db/db мышей, чтобы установить: является ли изменение коронарного тока первичным, за счет воздействия препаратов, а не вторичным, за счет увеличения работы сердца.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее и стандартная ошибка среднего (М±т). Различия в данных измерений сократительной функцией миокарда и уровня метаболических субстратов анализировалась при помощи ANOVA. Также использовался непарный Стьюден -1 тест (при Р < 0.05).

Мы использовали парный Стьюдент t-тест в сравнении коронарного тока до и после введения препаратов и непарный Стьюдент t-тест для сравнения увеличения коронарного тока в сердцах db/+ мышей с увеличением коронарного тока в сердцах db/db мышей.

Для статистического анализа использовалась программа Sigma Stat. Для графического представления данных использовался пакет Sigma Plot 8.0 (SPSS Ltd., UK).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Системный и миокардиальный метаболизм, сократительная функция сердца в группах сравнения (до и после индукции агонистом PPAR-a).

В настоящее время роль PPAR-a рецепторов в сердце изучена недостаточно. В наших исследованиях было впервые продемонстрировано, что длительное применение препарата ВМ 17.0744 (агониста PPAR-a рецепторов) приводи-

ло к уменьшению интенсивности окисления жирных кислот и увеличению показателей метаболизма глюкозы в миокарде мышей серии С57ВЬ/Кб1 (с1Ь/ с!Ь), являющихся экспериментальной моделью метаболического синдрома.

Наши исследования показали, что у мышей серии С57ВЬ/Кз.1 (ёЬ/с1Ь) наблюдаются характерные признаки метаболического синдрома: гиперин-сулинемия, гипергликемия и ожирение. При использовании ВМ 17.0744 в течение четырех недель, начиная с возраста восьми недель, у мышей наблюдались значительные изменения в системном метаболизме.

Применение препарата ВМ17.0744 приводило к нормализации уровня глюкозы плазмы крови у мышей ёЬ/ёЬ (таблица 1). Кроме того, в последующем наблюдалось снижение уровня сывороточного инсулина.

Таблица 1

Концентрация энергетических метаболитов плазмы крови

на день эвтаназии

Концентрация глюкозы плазмы крови ммоль / л) Концентрация свободных жирных кислот (моль / л) Концентрация ТАГ (ммоль / л) Концентрация инсулина (мк ед / мл)

Гетерозиготные (db/+) 12.5 ±0.6(10) 1.0 ±0.1(Ю) 0.6 ±0 1(10) 14 0± 1(10)

Гомозиготные (db/db) 34 2± 3.3(11)* 2.5 ±0 4(11)* 1.1 ±0 2(11)* 195 ±38(15)*

Гомозиготные (db/db + ВМ) 10.8± 0 6(12)f 1.1 ±0.1(ll)t 0.6 ± 0.1(1 l)t 49 ± 6(8)* f

Примечания: Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего Числа в скобках — количество животных в группе. * - Статистическая достоверность (Р < 0,05) по сравнению с гетерозиготными (db/+) мышами; f - Статистическая достоверность (Р < 0,05) по сравнению с гомозиготными db/db мышами, у которых не применялся препарат ВМ 17.0744

Предполагается, что агонист PPAR-a - ВМ17.0744 - приводил к уменьшению уровня гликемии через повышение чувствительности тканей к инсулину (Guerro-Millo ML, 2000; Pill J., 1999; Ye J.M., 2001). Повышенный уровень циркулирующих свободных жирных кислот способствует развитию инсулинрезистентности (Bergman R.N., 2000) и, поэтому, обнаруженный ли-пидопонижающий эффект препарата ВМ17.0744 может обуславливать увеличение поглощения глюкозы периферическими тканями.

Полагают, что PPAR-a рецепторы ответственны за метаболические из-

менсния и тканях, как в норме, так и при патологии (Baiger P.M., 2000; Sack M.N., 1998; Pill J., 1999). Изменения в метаболическом профиле миокарда после использования ВМ 17.0744, вероятно, вызваны экспрессией генов, кодирующих католически активные ферменты, ответственные за липидный и углеводным метаболизм. Усиление катаболизма жирных кислот в миокарде при метаболическом синдроме, вызванное гиперлипидемией, тем не менее, не достаточно для их полной утилизцаии и, как следствие, часть из них депонируется в сердечной мышце в виде ТАГ. В результате применения препарата ВМ 17.0744 происходит снижение образования л и поп роте идо» низкой плотности в печени, снижение уровня гиперлипидемии и интенсивности поступления жирных кислот в сердце. Тем самым данный ашнист PPAR-a способствует нормализации уровня миокардияпъных триацилшицёридов.

Кроме того, сердечный метаболизм переключался на преимущественное использование глюкозы в качестве энергетического субстрата. В наших исследованиях было продемонстрировано, что применение у мышей db/db а гон иста ВМ 17.0744 приводило к снижению интенсивности окисления жирных кислот » миокарде на 50%, с сопутствующим увеличением утилизации глюкозы (интенсивность анаэробного и аэробного гликолиза возросла в 1,7 и 2,3 раза соответственно) (рис.4).

е <

о. с.

100

Окисление пальмнгата

Аэробное окислите

Анаэробное окислен Не

db/db

db/db + ВМ

Рис.4, Вклад метаболических реакций в суммарную продукцию АТФ в изолированных рабочих сердцах диабетических (db/db) и диабетических, пролеченных ВМ 17.0744 (db/db + ВМ) мышей

Наши исследования также выявили наличие сократительной дисфункции миокарда мышей <1ЬМЬ, Несмотря на нормализацию миокардиальнога 14

метаболизма и снижение депо ТАГ, улучшения сократительной функции миокарда не наблюдалось. Одной из причин этого могут быть необратимые структурные изменения в миокарде (Giacomelli F., 1979; Kuo Т.Н., 1985), возникшие до момента начала введения препарата. Необходимы дополнительные исследования для выявления момента наступления сократительной дисфункции миокарда у мышей db/db. Другой причиной мог быть короткий период применения агониста PPAR-a (четыре недели). Поэтому необходимы дальнейшие исследования эффективности данного препарата, в которых коррекция начиналась бы с более раннего возраста мышей db/db и была бы более продолжительной. Кроме того, учитывая хороший метаболический эффект от использования PPAR-a - агонистов было бы интересно исследовать поведение сердца на фоне метаболического синдрома в условиях физиологического стресса (кратковременной ишемии и повышенной нагрузки) при введении ВМ17.0744.

Коронарный кровоток, давление левого желудочка в группах сравнения (до и после индукции агонистом PPAR-a). В нашем исследовании разработана методика, которая позволяет одновременно регистрировать давление, развиваемое левым желудочком, и коронарный ток в мышиных сердцах ex vivo. Данная методика была использована для изучения стабильности мышиного сердца в системе Лангендорфа, а также для исследования реактивности коронарных сосудов в сердцах мышей серии C57BL/KsJ, db/ db. Резерв коронарного тока измерялся в ответ на введение препаратов нит-ропруссида натрия (рис.5), аденозина и 90-секундный период тотальной ишемии (развивалась последующая реактивная гиперемия) (рис.6).

Полученные результаты показывают, что коронарный ток покоя в сердцах мышей db/db был на 15 % меньше, чем в сердцах мышей db/+ (контрольная группа), а именно 2,1 ± 0,1 против 2,6 ± 0,2 мл/мин.

Кроме того, резерв коронарного тока в ответ на (1) введение натрия нит-ропруссида (донора N0), (2) введение аденозина и (3) 90-секундный период тотальной ишемии был значительно ниже в сердцах гомозиготных мышей (0,6 - 0,9 мл/мин), в сравнении с гетерозиготными (1,2-1,4 мл/мин). Также наблюдалась достоверная разница между сердцами гомозиготных мышей и сердцами гетерозиготных мышей при восстановлении коронарного тока покоя после 90-секундного периода тотальной ишемии.

4 1

.3 з с

0 3 6 9 12 15 18 21

Время перфузии (мин)

120

- 100

CD LJ

I ^

ГО 5

ей

; s

щ о

Q &

™ -г

1 (В

а) 2

с; g

ш s

ш ^

20 d £ ГО

с:

- 40

при везде истеки н&фш ; .'Т( .г :-

елокое при емягистЕии

натрия нигрспруссида

Рис 5. а) Корнарный ток и ответ на использование нитропруссида натрия и показательном зкеггерлменте, б) Средние величины (п-8) коронарного тока (левая часть графика) и давление, развиваемое левым желудочком (правая часть графика) до и после инфузии натрия нитропруссида 1 (мкг/мин)

то время как коронарный ток покоя в сердцах гетерозиготных мышей приходил в норму через I - 2 мин. после гиперемического пика, восстановление его в сердцах гомозиготных мышей занимало около 5 минут (рис.6). Наши результаты показывают, что резерв коронарного тока снижен в сердцах гомозиготных мышей.

4,0

160

й? 140 -

!£

120 •

й. п 100 -

о X. 80 ■

60 ■

■ 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Время (мин)

• £ V ...

КТ покоя реперфузия

01234 56789 10

Время(мин)

Рис.6. Увеличение коронарный тока в ответ на 90 секундный период тотальной ишемии (ПТИ) в недиабетических сердцах (<1Ь/+, п=8) и диабетических сердцах (с!Ь/с1Ь, п= 7). Панель А - абсолютные величины, панель Б - процентное увеличение коронарного тока, рассчитанное к коронарному току покоя (КТ покоя)

Сниженный коронарный ток покоя в сердцах с!Ь/с1Ь мышей может быть обусловлен структурными изменениями в стенках сосудов. Хроническая гипергликемия может быть одной из этих причин, которая способствует неферментативному гликозилированию молекул в стенках сосудов и необратимому образованию и накоплению конечных продуктов гликозилирования.

Накопление этих продуктов в стенках сосудов может увеличивать образование свободных радикалов кислорода (Ido Y., 2001), что приводит к снижению активности NO и способствует нарушению эндотелиальной функции ( Bucala R , 1991, Verbeke P., 2000). Кроме того, гликозилированный коллаген может индуцировать пролиферацию клеток гладкой мускулатуры сосудов, увеличивать толщину артериальных стенок и снижать эластичность сосудов сердца (lino К., 1996). У диабетических больных сердечный кровоток покоя находится в пределах нормы (Pitkanen O.P., 1998; Di Carli M.F., 1999; Sundell .1, 2002), это указывает на присутствие компенсаторных механизмов задействованных в обеспечении адекватной перфузии сердца

Наше исследование показывает, что коронарный ток в ответ на воздействие нитропруссида натрия, аденозина и реактивной гиперемии был снижен в сердцах гомозиготных мышей и составлял приблизительно половину от резерва коронарного тока в сердцах гетерозиготных мышей. Результаты исследования совпадают с результатами клинических исследований, при которых отмечается снижение коронарной реактивности у диабетических пациентов (Nitenberg А , 1993, Nahser Jr PJ., 1995, Pitkanen O.P., 1998, Di Carl i M F. 1999)

Согласно клиническим наблюдениям у пациентов, страдающих диабе-|«м и пациентов с избыточной массой тела обнаружена дисфункция эндотелия коронарных сосудов с уменьшением активности NO-синтетазы и нарушением высвобождения оксида азота (Steinberg H.О., 1996).

В нашем исследовании нитропруссид натрия и аденозин вводились в оптимальных дозах, приводящих к максимальному расширению сосудов (Bratkovsky S , 2004). Тканевая концентрация оксида азота и аденозина были не лимитированы, могли достигать максимальных величин. Таким образом, снижение резерва коронарного тока в сердцах гомозиготных мышей могло быть вызвано нарушением проведения внутриклеточного сигнала, опосредованного оксидом азота и аденозином, которые в нормальных условиях должны приводить к расслаблению гладкой мускулатуры сосудов. Сниженный резерв коронарного тока мог быть также результатом структурных изменений в стенках сосудов в связи с образованием и накоплением конечных продуктов гликозилирования (Candido R, 2003, De Vriese A.S., 2000, Sheetz M J, 2002) Образование и накопление данных продуктов может способствовать фиброзу и снижению эластичности коронарного микроциркулятор-ного русла (lino К., 1996) Наши исследования показывают, что восстановление коронарного тока покоя замедлено в сердцах гомозиготных мышей по сравнению с контролем, что подтверждает вышеизложенное.

Известно, что помимо повреждающего эффекта хронической гипергли-

кемии, высокий уровень концентрации циркулирующих свободных жирных кислот также приводит к нарушению эндотелиальной функции (Steinberg Н.О., 1997) Кроме того, хронически высокий уровень концентрации инсулина оказывает отрицательный эффект на эндотелиальную функцию через высвобождение эндотелина-1 (ЭТ-1) (Perfetto F., 1998; Piatti P.M., 2000) Поэтому мы использовали у мышей серии C57BL/KsJ,db/db активатор PPAR-a препарат ВМ 17.0744 (Pill J., 1999). Происходила нормализация концентрации глюкозы, липидов и инсулина плазмы крови, но не наблюдалось улучшения коронарной реактивности. Это может свидетельствовать о том, что в структуре коронарных сосудов мышей имели место необратимые изменения.

Таким образом, мы полагаем, что сниженный коронарный ток покоя и уменьшение резерва коронарного тока в сердцах гомозиготных мышей может происходить в связи со структурными изменениями в стенках сосудов. Состояние хронической гипергликемии может приводить к накоплению в стенках сосудов метаболитов глюкозы, что способствует повреждению миокарда через гликозилирование структурных протеинов миокарда и накопление конечных продуктов гликозилирования. Токсичность конечных продуктов гликозилирования обусловлена их способностью накапливаться в тканях с образованием белковых сшивок, а также генерации свободных радикалов кислорода (Candido R., 2003, De Vriese A.S., 2000, Sheetz M.J., 2002). Данные причины могут вызывать фиброз и снижение эластичности сосудов сердца

выводы

1 Установлены различия в системном и миокардиальном метаболизме гетеро- и гомозиготных мышей (db/+, db/db) В отличие от здоровых мышей у db/db в плазме крови наблюдались достоверно более высокие концентрации глюкозы, трнацилглицеридов, свободных жирных кислот и гипе-рпнсулинемия, их миокард в качестве основного энергетического субстрата использовал жирные кислоты, аккумулировал триацилглицериды

2 На фоне введения ВМ17 0744, активатора пероксисом пролифера-юр-активирующего рецептора альфа, у мышей серии C57BL/KsJ (db/db) наблюдалось снижение до нормальных величин в плазме крови концентрации глюкозы, жирных кислот и трнацилглицеридов, а также значительное снижение уровня инсулина. Миокарднальный метаболизм характеризовался vMeHbHienneM интенсивности окисления жирных кислот (на 50%) с сопутствующим увеличением утилизации глюкозы (интенсивность анаэробного и л пробного гликолиза возросла в 1,7 и 2,3 раза соответственно). Отмечено чменьшенпе аккумуляции трнацилглицеридов в сердечной мышце

J Установлены различия в сократительной функции миокарда в группах сравнения сердечный выброс и давление, развиваемое левым желудочком в норме достоверно выше, а КДД ниже у здоровых мышей Активация l'PAR-лльфа искусственным агонистом ВМ 17 0744 не вызывает значимых изменении параметров инотропной функции у экспериментальных животных обеих групп сравнения.

4 Уровень коронарного тока, оцениваемый по разработанной нами методике хпектронного моннторировання инфракрасным датчиком в системе Лангендрофа, достоверно выше в изолированных сердцах гетерозигот в сравнении с гомозиготами Сердца здоровых мышей характеризуются более высоким резервом коронарного тока и реактивности сосудов по данным г ее юв с вазодилататорами нитропруссидом натрия (донором вазодилатато-|м - NO) и аденозином, также при функциональной нагрузке (90 секундный период тотальной ишемии)

5 Активация пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа агонистом ВМ 17 0744 в динамике 4-х недельного перорального применения не сопровождалась изменениями коронарного кровотока и сокра-штельноп активности миокарда в группах экспериментальных животных, чю свидетельствует об отсутствии в данном случае прямого регуляторного влияния данного агониста PPAR-a на коронарные сосуды и сократительную функцию миокарда

Практические рекомендации

1. Разработанная методика измерения коронарного кровотока и давления, развиваемого левым желудочком в системе Лангендорфа (ex vivo), может быть успешно использована для изучения коронарного тока при анализе сосудистой реактивности в эксперименте.

2. Активатор пероксисом пролифератор-активирующих рецепторов альфа (PPAR- а), являющийся агонистом данных ядерных рецепторов, препарат ВМ 17.0744 [2,2-dichloro-12-(p-chlorophenyl)dodecanoic acid], может быть рекомендован как модулятор энергетического обмена в лабораторных моделях не только на грызунах, но и более крупных экспериментальных животных.

Список публикаций

1. Bratkovsky S. Impaired coronary reactivity in hearts from diabetic mice / S. Bratkovsky, E Aasum, R. Riemersma, T. Larsen // Journal of Molecular and Cellular Cardiology.- 2001. - v.33. p.A16.

2. Братковский С.В. Методика изучения функциональных параметров мышиных сердец в системе Лангендорфа / С.В. Братковский, С.Л. Совер-шаева, Т. Ларсен // Бюллетень Северного Государственного Медицинского Университета. - 2003. -№2. - с. 65-67.

3. Bratkovsky S. Measurements of coronary flow reserve in isolated hearts from mice / S. Bratkovsky, E. Aasum, C.H. Birkeland, R.A. Riemersma, E.S.P. Myhre, T.S. Larsen //Acta Physiol. Scand. - 2004. - v.181. - p.167-172.

4. Братковский С.В. Применение системы Лангендорфа в изучении функциональных параметров мышиных сердец ex vivo / СВ. Братковский, С.Л. Совершаева, Т. Ларшен // Сборник тезисов "Ломоносов-2005", секция "фундаментальной медицины", Москва. -2005. - т. 2. - с. 421-422.

5. Братковский С.В. Исследование коронарно-васкулярной реактивности в сердцах диабетических мышей серии (C57BL/KsJ, db/db) / СВ. Братковский, С.Л. Совершаева, Т. Ларшен // Бюллетень Северного Государственного Медицинского Университета, Архангельск. - 2005. - № 1. - с.41-42.

6. Братковский С.В. Методика измерения коронарного тока и давления, развиваемого левым желудочком, в изолированных мышиных сердецах ex vivo / С.В. Братковский, С.Л. Совершаева, Т. Ларшен // Экология человека. 2005.-№ 11. -с.28-31.

7. Bratkovsky S.V. Reduced coronary reserve in response to short-term ischaemia and vasoactive drugs in ex vivo hearts from diabetic mice / S.V. Bratkovsky, E Aasum, R.A. Riemersma, E.S. Myhre, T.S. Larsen //Acta. Physiol. (Oxf) - 2006. - v.186 (3). - p.171-177.

Подписано в печать 26.12 2006 Формат 60х84/16 Уел печ л. 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 1520

ООО «Издательский центр СГМУ»

г Архангельск, пр. Троицкий, 51, каб 2331 Телефон (8182) 20-61-90

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Братковский, Сергей Валерьевич

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1,1. Энергетический метаболит миокарда t .2. Регуляция энергетического метаболизма

1.3, Коронарный кровоток

L .4. Изменения мнокарлиального метаболизм кровотока в условиях хронической пгпергликемни Г ЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. 'Экспериментальная модель

2.2. Агоиист PPAR- а ВМ 17.0744 (К-111) (2,2-diehloro. 12-(p-dilompficnyl ítJodccanoéc ncíd)

2.3. Изучение сократительной функции миокарда м метаболизма у мышей серии C57BL/ttaJ (db'db)« <(1Ы*)

2.4. Электронный метод мониторинга коронарного тока нл модели изолированного сердца (ex vivo)

2.5. Статистический анализ

ГЛАВА 3- РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Коронарный ток и энергетический метаболизм » норме и при индукции перокеисом иролиферотор- активирующего рецептора альфа (PPAR-a) в экажриме1гте

3.1. Сояратнтельная функция миокарда и энергетический метаболизм в норме и при индукции перокеисом прояифератор-аетмвирующего рецептор* альфа <PPAR-fl) препаратом ВМ 17.0744 у мышей CSTBL/KsJ (dfcn'db), (db/+)

3.2. Метол мониторинга коронарного тока изолированного сердца (ex vivo)

3-2-1. Методика измерения функциональных параметров коронарного ток« и давления

3.2.2. Инфракрасный летчик SA 3.2-3. Изучение стабильности фуикииоишшшх napawetpo» 3-2-4- Экспериментальный протокол для изучен К* рекрги коронарного тока 92 3.2.5г Пркммкмяе ктихн мониторинга соеуднстой реактивности и сердцах ГОМО- н rcTcpmiiiTmiw*; MHUiefl рин (C57BL/KsJ4 dlv'db). (db/+) ex vi™

Введение Диссертация по биологии, на тему "Коронарный кровоток и энергетический метаболизм в норме и при индукции пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-[A]) у диабетических мышей"

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования Неуклонный рост отологии сердечно-сосудистой систем«, * том число на фоне метаболических нарушений* повышает актуальность исследований, направленных на уточнеине механизмов меженстемных взаимодейегвий и поиск путей коррекции выявленных изменений.

В 1999 г. ВОЗ выдвинула термин «метаболический синдром* как основной » ряду тех изменений, которое сонрижены с иисулинорезмстагтностью (Alberti K.G„ 1998),

Среди признаков метаболического синдрома повышение артериального давления, нарушения липндиого обмена, нзбыючная масса тела и лр. Ралвшие мегаболнчеекого синдрома сопровождается нарушениями в сердечно-сосудистой системе на разном урмще or ииотропной функции, коронарного кровотока до метаболических едмггоп

Ишесгио. что в развитии множественных метаболических нарушен нП. центральную роль играет ннсулинорсзистеитзюсти, которая длительное время может протекать как состояние, пограничное между нормой н патологией

Результатом длительно существующего метаболического снидрочп является развитие микроциркуляторных ослшкнсннй к кардномнпатий-Патоген« микрониркуляторных наделений носит комплексный характер (King G.L-, 1996). Клеточные и молекулярные механичны микроцирку литерных изменений изучены недостаточно Современные исследователи выдвигают различные причины микрошгркуляториых изменений* а том числе и снижения локального кровотока (Straucr B E-, 1997), Одним из факторов способствующих развитию диабетической карлиомиопатни можег быть умен мнение поступлении кроии к миокирлу и результате изменений в микроциркулггорном русле, связанных е повреждением эндотелия, аккумуляцией коли гена н, как следствие, утолщением юпимы в артериолах (Straucr B.C. 1997; Pitkoiwn О.Р., 1998).

В относительно недивнцк исследованиях было установлено, что олнмч И'« ключевых регулятормш факторов мнокарлишилюго метаболизма являются лнгЯнд-рсцепторныс взаимодействия с участием PPAR pencirropoB Псрокеисом пролнфератор-активнрукнцне рецепторы (англ. peroxisome proliferaJoc-activaied гессрюш • PPAR) вовлечены в различные аспекты метаболизма жиров (Desvergne Н . 1999; Klicwer SA.,2001} В настоящее прем* идентифицированы три иэоформы PPAR: PPAR-o. PPAR-p н PPAR-y Все три РРАК активируются жирными кислотами и. находясь п связанном (пгтероднмернэованном) состоянии с рецепторами к рсти половой кислоте, присоединяются к специфической для них последовательности ДНК -AGGTCANAGGTCA и промоутерод. дктиннзнруюшнхея под действием PPAR генов. Функционально, PPAR-a был охарактеризован как центральный регу.-инор мктохондрнального катаболизма жирных кисло*.

В настоящее время роль PPAR-a рецепторов и сердце изучена недостаточно Недавние исследования на культурах неонаталышх кардномноцитов покипели, 'tro дктиваци* PPAR-a рецепторов увеличивает транскрипцию генов. содержащих информацию о протеинах, участвующих ■ транспорте и окислении жирных кислот (Brandl J.M-* 1998. Van der Lee K,A. 2000). Однако, большая часть исследований ио PPAR-и сихганд с системным метаболизмом, а то время как вопросам их роли в регу ляпни ынкардналииш функции уделено недостаточно пннмвиия

Таким образом, изучение межсистсмных пене кто я метаболизма, нивтропнн миокарда и его хровоснабжсння а уело а пня активации ядерных рецепторов PPAR-альфа искуссвенны.чн огониетами представляет актуальную проблему.

Цел i. Исследовать мепболюм, сокралгтсльную функцию и коронарный ток и миокарде п экспериментальных моделях мышей линий CS7BL/KsJ(dlv'db), (db/+) до и после активации ядерных рецепторов PPAJt-альфа их исскуственныы агониетом ВМ (7,074-1 |2f2-d»chlo<ro-l2-{p-сЫогорЛепу I )dodecaroie acid] с целью оценки роли перокснсоч проянфератор-актнвнруюшмх рецепторов альфа (PPAR-o) о сердечней деятельности,

Достижение у казанной цели атрсбомло решение елслукинн& задач:

1 Оценить энергетический метаболизм и сократительную функцию миокарда у гетеромготпых <db'+) и гомозиготых мышей линии CS7B[j'KjJ(tlb'(lh) lliyinn. роль псрокснсом пролмфератир-акпгамруютето рецептор» ьльфа и регуляции метаболизма и мяирошмП функции мне карла путем arrMMfUNH PPAR-альфа мскуоет ненцы м •пмистом ВМ 17,0744 [JJ-dichlonH l-ip-ehlorophctty 1 Jdodeeonok acid]

2 0 целях получении максимально точных измерений коронарного тока в эксперименте ни «рытуиах разработать и апробировать электронный метод мониторинга коронарного тока ив модели юстированного сердца (мыши линии Swiss Wcbslcr).

3. Сравнить особенности коронарного тока и роль нерохсисом пролифератор-активирующего рсцстора альф» (РРЛК-альфя) в его регуляции на модели мышей линий C57BIJKsJidb>'db>, <dly+)

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1, Имеются достоверные различия в системном и миокарлналмюм метаболизме у гегеро'жготиих (dV+) и гомозиготных мышей CSTBL/KsKdb.'db). У гомозигот серии C57BL/KjJ <dfch'db> а плиме крови наблюдаются более высокие концентрации глюкозы.

Триацклпжцерпдов. свободных жирных кислот и гипери|рсулннемня. мнокардиальный шпбнкн члраkiq7iпустея снижением утилизации глюкозы, использованием жирных кислот в качестве основного энергетического субстрата и накоплением трнацнлглмиерНЯОа в сердечной мышце. Активация PPAR-альфа искусственным лгоиистом ВМ 17.0744 ведет к нормализации параметров системного и мнокардиальиого мепбаиши,

2. Установлены различии в сократнтслыюй функции миокарда в группах гетерозиготных (db/+) и гомозиготных мышей серии C57HlJKsJ (dlVdb) Гегеротиготы характеризуются более высокими уровнями имотропни миокарда. Активация РРАК-адифа искусствен ним «гон истом в обеих группах ВМ 17 0744 не выэыиает значимых изменений давления {коиечно-днастодического давления и давления, развиваемого левым желудочком)» а также сердечного выброса.

3. Повышение точности измерений коронарного кровотока и эксперименте на грызунах может быть достигнуто применением электронного метода мониторинга на модели изолированного сердца ex vivo. Модифицированный метод е использованием инфракрасного датчика позволяет более точно измерить быстрые изменения тока жидкости в системе,

4. Коронарный ток достоверно выше у гетерознгот (<№+) в сравнении с гомозиготами CS7BL/KsJ(db/db), Использование агониста РРАК-адЦк> в течение 4-х недель перорального применения ВМ 17,0744 у экспериментальных животных не приводит к значимым изменениям коронарного тока.

Нау чили ИПИН1ИП работы

В данной работе применен комплексный подход а изучении физиологических механизмов метаболизма энергетических субстратов. состояния коронарного тожп и сОфВТИГгелммй функции миокарда и сердце на фоне введет» нового агониста PPAR-a рецептор» ВNÍ 17.0744 на экспериментальной модели (C57BLf£sJ(db.'db)

Впервые в экспериментальной науке было проведено нсследшщние коронарного тока покая и резерва коронарного тока ex VÍYO на мышах ссрин C57BUKsJ ídtv'db)

Для измерений коронарного тока в перфунюнноЛ системе Лангсндорфа, «первые был применен инфракрасный датчик, вмонтированный в систему, что обеспечило очень высокую точность измерений

Ияучио-прастичсская значимлегь работы

Разработана методика измерения функциональных параметров коронарного тока н давления, разяимемого левым желудочком, п мышиных сердцах ex vivo в системе Лангсндорфа.

В ходе разработки методики впервые был применен инфракрасный датчик, вмонтированный в систему Лангеидорфа, позволяющий с очень высокой степенью точности измерять показатели коронарного тока В дальнейшем, как недорогая н практичная, данная методика может быть применена на кафедрах физиологии для изучен и« различных физиологических и патофизиологических состояний сердечно-сосудистой снетсмы и кон срактнльной функции миокарда.

Результаты исследование вносят вклад в понимание механизмов мнокфдиштыюго метаболизма, сократительной функции сердца и его кровоснабжения в норме и при сахарном диабете второго тина.

Апробанни материи, нш диссертаинн

Материалы диссертационного исследования были доложены на ежегодном конгрессе Скандинавского Ф и з и од огнчесДОГО Общества (Scandinavian Penological Society, Стокгольм. Швеция. 16-19 августа, 2000 г.): на ежегодной конференции Норвежской Диабстологической Ассоциации

Осло, Норвегия, -ООО г,, Берген, Норвегия. 2001 г,); на XVII конгрессе Всемирного Общества по Исследованиям Сердив (XVII World of the internal jonal Society for Heart Research. Вининиег, Канада. 6-11 июля. 2001 г); иа ежегодной иаучио-«рахгкчес«уй конференции мечтай* ученых "Ломоносова достойные потомки" (к 290-лстнсму юбилею Мй, Ломоносова), состоявшейся в г. Архангельске 23 ноября 2001г.; на открытых семинарах кафедры мсдннннекоА физиологии Университета г. Тромсс (Норвегия), состоявшихся в январе 2000 гада и марте 200» года; на XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и мололых ученых "Ломоноеов-2<КЙ" (Москва, Россия. 12-15 апреля, 2005 г.), на проблемной комиссии но физиологии в СГМУ (2005,2006),

Работа выполнена в рамках НИР Севераюго государственною медипиисхого университета (№ государственной регистрации 01200408383).

Публикации. Но результатам исследования опубликовано 7 работ

Структура и объел« диссертаяии

Работа изложена на [44 страницах машинописи- Состоит из »ведения, обзора литературы, глав -Объекты к методы исследования". "Результаты собственных иссдедовоний и их обсуждение", заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертационная работ иллюстрирована 7 таблицами и 27 рисунками. Список литературы содержит S4 наименования отечественных и 235 зарубежны* ¡опоров.

Экспериментальная часть исследования выполнена на кафедре нормальной физиологии СГМУ (г, Архангельск) Автор также благодарит кафелру медицинской физиологии Университета г Тромсе (Норвегия) за оказанную помощь в проведении данной научной работы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Братковский, Сергей Валерьевич

выводы

Установлены различия а системном и мнокардиалыюм метаболизме гстсро- и гомозиготных мышей ((11)/+, dh/db). В отличие от -здоровых мышей у dbk'db в плазм* крови наблюдались л «топер и о бо:«е высокие концентрации глюкозы, триашигДИцерилов, свободных жирных кислот и гипсриисулннсмня, их миокард в качество основного энергетического субстрата использовал жирные кислоты, аккумулировал трияаиыгдныерклы.

На фоне введения BMI7.0744, активатора перокснсоч нролнфератор-а кг и пирующего рецептора альфа, у мышей серии CSTBUKsJ (dtv'tlto) наблюдалось снижение до нормальных величин в плазме крови концентрации глюкозы, жирных кислот и трнацнлглицеридов, а также тначнтельиое снижение уровни инсулина. Миокардняльный метабол«™ хорпхгеризпвалс» уиеиьшенисм интенсивности окисления жирных кислот (на с сопутствующим увеличением утилизации глюкозы (интенсивность анаэробного и аэробного гЛИКОЛЮа возросли в 1.7 н 2,3 раза соответственно). Отмечено уменьшение аккумуляции трнацнлглицеридов в сердечной мышце,

Установлены различия в сократительной функции миокарда в груши.* сравнения сердечный выброс и давление, развиваемое левым желудочком в норме достоверно выше, a КДД ниже у здоровых мыШС-Л Активация РРЛК-лльфа искусственным агониетом ВМ 17.0744 не вызывает значимых изменений параметров инотрониой функции у экспериментальных животных обеих групп сравнения. Уровень коронарного тока, оцениваемый по разработанной нами методике электронного моннторирОйания инфракрасным .датчиком в системе Лаигсидрофа, достоверно выше в изолированных сердцах тетерозигот в сравнении с гомозиготами. Сердца здоровых мыцкй характеризуются более высоким резервом коронарного тока н реактивности сосудов но донным тестов с вазоднлатпторамн тгфопруссндоы натрия (донором ваюдн.зататора - NO) к аденозином, также пр« функциональной нагруцсе (90 секундный период тотальной ишемии)

5. Актнвання псрокснсом пролифсратор-актнвирующеп» peueinopn альфа агоинстом ВМ 17.0744 в динамике 4-х недельного i»ерорального применения не сопровождалась изменениями коронарного кровотоки и сократительной активности миокард» в группах экспериментальны х животных, что свидетельствует об отсутстаии н данном случае прямого регуляторного влияния данного агониста PPAR-а на коронарные сосуды и сократительную функцию миокарда

Практические рекомендации

1, Разработанная методике №МСрС1СНЯ коронарного кровотока и давления, развиваемого левым желудочком в системе Лдигеидорфв (ex vivo), может быть успешно использована для изучения коронарного тока при анализе сосудистой реактивности в эксперименте

2. Активатор псрокснсом нролифератор-акгнвнрующнх рецепторов эльфа (1'РАК- а), являющийся агоннстом данных ядерных рецепторов, препарат ВМ 17.0744 |2,2-dichlo№t2-(p-chloro^tcnyl Wioilecanoic actd), может Сыть рекомендован как модулятор энергетического обмена в лабораторных моделях не только на грызунах, но и более крупных экспериментальных животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Братковский, Сергей Валерьевич, Архангельск

1. Аметов A.C., Дсмцлога 'ПО. Смагиил Л.11. Эндотелий как мнцкиь терапевтического воздействия гнпотеютвной терапии у больных сахарным диабетом 2-га типа // Кардиология. 2004. - №44. - е.55-60

2. Аметов А.С, Демидова Т.Ю-, Косых CA- Синтез оксида азот в эндотелии сосудов у больных сахарным диабетом 2-го тнпа // Клиническая Медицина. 2005. -№83. - с, 62-68.

3. Амстов A.C., Демидова Т.Ю., Косых С,А., Аистов A.C., Демидова Т. Ю, Косых С-А Блокаторы AT II у больных сахарным диабетом 2-го типа и артериальной гипертонией » Клиническая Медицина 2006. №84. - с,50-55.

4. Балаболкии М.И, Клебанова ЕМ. Роль мисулкнорезистектноста в патогенезе сахарного диабета типа 2 // Терапевтический Архив. -2003. -№75.-с.72-77,

5. Белен ков Ю.Н., Акчурнн AJ1. Изменения натавнато коронарного русла н аортокоронарних hevii та в у больных ншемичеекой болезнью сердца в ратные сроки ноем операции коронарного шунтирования )! Кардиология 2002, - № 12 - с. 29-34.

6. Бокерня Л.А., Берншвили И.И., Сигаев И.Ю. Реваскуляризаиия миокарда: меняющиеся подходы И пути развил» Н 'рудная и сердечно-сосудистая хирургия. 1999 - № 6. - с. 102-1 И.

7. Божхо Г.Х., Соколик В.В., Чуршна B.C., Псриева Г.Г. Метаболизм лнполрелеинов у больных сахарным диабетом тина 2 У/ Украинский Биохимический Журнал. 2005. - №77 - с.93-99.

8. Волков В,С , Роюша СА-. Моселюпша О.Б-. Волков B.C. Роюгниа С. А. Поеслюгнна О. Б. Патогенез артериальной гипертонии у больных сахарным диабетом 2-го типа И Клиническая Медицина. 2006. -№84. -С. 34-37.

9. Гуревич М-А. Особенности патогенеза и Лечении ишсмнчсской болезни сердна, сердечной недостаточности н артериальной гипертонии у бальных сахарным диабетом /I Клиническая Медицина. ■ 2005, Jfe83. - е.4-9.

10. Демидова Т-Ю-, Аметов А.С-, Смагииа Л-ß, Влияние метаболических факторов на вазорелаксируютую функцию эндотелия у больных сахарным диабетом 2-го типа в сочетании с артериальной гипертонией I/ Клиническая Медицина, 2005. - №83- - с,25-30.

11. Дильман И М. Эндокринологическая онкология Л.: Медицина, |983- -408 с.

12. Довпатяи A.A., Каеабов A.B. Диагностика и консервативное лечение острого пиелонефрита у больных сахарным диабетом Н Терапевтический Архив. 2005. -№77. -с.85-88

13. Долгих В Т. Патофизиология обмена веществ. М.: Мед. кн. - Н. Новгород. 2002.- 152 с,

14. Журавлева И.А,, Мелентьев НА. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии И Клин, медицина. 1997 - №63 - с. 984-991

15. Клмкин А.Г„ Каменский A.A. Фундаментальная и клиническая физиология. М - ACADEMIA, 2004, - 450 с.

16. Каро К., Педдн Т., Шротер Р., Сил У, Механика кровообращения. ■ М. Мир. 1981.-624 с,

17. Клебанова ЕМ Влияние пнюкалорийиой листы на инеулмновую резистентность, функциональную активность ß-клеток и лнпндный обмен у больных сахарным диабетом типа 2 // Вопросы питания. ■ 2006. №75. - с-32-35.

18. Лили Л Патофизиология заболеваний сердечнососудистой системы: Пер, с англ. М-: ШНОМ, Лаборатория знаний, 2003. - 598 с.

19. Малярснко Ю.Ё, Быков А.Т , Малярснко Т.Н Изменения сердечнососудистой системы и се вегетативной регуляции при физиологическом старении как детерминанта формирования псираничиого состояния организма Н Клин фнчнолтмн кровообращения. 2005. -Äl.-c. 59-70.

20. Мамонтов О.В , Максимова Г С„ Пнзни В.М , Уродская НС- Динамика структурно-функциональных показателей сердечно-сосудистой системы у больных ншеми ческой болезнью сердца после прямой ревасхуляризоции миокарда // Кардиология. 2002. - № 5. - с. 48-51.

21. Мвреев В JO. Беленков Ю.Н. Хроническая сердечная недостаточность н инсулиннезавнсимый сахарный диабет: случайная связь или закономерность? //Терапевтический Архив. 2003. - №75. - e.S-l 1.

22. Машкова О-В-, Белов Ю.В., Амстов A.C., Калина HB. Результаты хируртческого лечения нпземнческой болезни сердца у больных сахарным диабетом II тина// Хирургия им Н И Пиротова. -2004 -№б -с. 34-35.

23. Меньшикова ЕЛ. Зенков Н.К., Реутов В.П. Оксид алога и NOcHirraiu в организме млекогапаюшнх при различных физиологических состояниях 11 Биохимия. 2000. - Т- 65, № 4. - с.485-503.

24. Михайлов ВЛ Основы патологической фитологии: рук. для грачей M Медицина, 2001. - 704 с.

25. Мормт ДД, Хешкр Л. Физиология сердечнснахудистой системы СПб.: Пнгер, 2000. - 250 с,

26. Огаков Р.Г. Ишемнческля болезнь серди». МПЦ. 1997 - 76 с.

27. Один ВН. Беликова В,И., Шустов С,Б, Пушкова Е С. Эмануель В Л Пплиморбндность и некоторые онтогенетические факторы у больных диабетом пожшюго к старческого щркп И Российский Биомсдзшннскнй Журнал. 2005. - №б, - с. 564-576.

28. Окуне ва Г.Н., Чернявский A.M., Булатсцкая Л.М. МиокарднальиыЙ хроиоток на разных участках сердца у больных ишемической болеигью сердца до и после реваскулярнзапии Ч Кардиологи*. 2002. - № 5. - с.

29. Орлов P.C., Ноздрачео А Д Коронарное кровообрадиенис. в кн. Нормальная фнзнолопгя М.; ГЭОТАР-Медно, 2005. 69бс

30. Пал ее в HP, Калинин А.П, Мравян С Р. Сахарный диабет и сердце // Клиническая Медицина. -2005. №83 -с.37-42.

31. Паршин С С- Современные представления о биологических эффектах оксида азота и его роди « развитии кврдноискулярной патологии !> Кардиоваскулярная терапия н профилактика. 2006. - №1. - с, 88-94.

32. Путовкнн А.П. Евлахов ВН. Шалковсквя Л,H Физиология серДЦаУПйД ред. Б И. Ткаченко.- СПб. 1996. 68 с.

33. Ройтберг Г.Е., Ушакова Т.И., Дорош Ж.В. Роль

34. Кардиология 2004. - №44 с.94-101. 37. Ройтберг ПЕ,, СтруктынекнЙ A.B. Вдтутренние болезни. Сердечнососудистая система. Руководство, ОАО Медицина, Веб Сайт Интернет 200352.55.в диагностике метаболического синдрома Ч

35. Санникнй H-H. Биофизические осипни кровообращения и клинические методы исследования гемодинамики — СПб.; Медицина, 1974. 309 с.

36. Седлецкий ЮЛ , Седов В.М., Неймарх А.Е., Деюгтипровл O.A. Ширай Г.Л Хирургическое лечение тяжелых форм метаболического синдрома И Вестник Хирургии Им И.ИГрекова -2005. №164. с.42-46

37. Сергисико В.И, Бондарева И. Б Математическая статистика в клинических исследованиях. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2000 - 255 с

38. Соколов Е.И., Перова H B, Диабетическая дислнпилемия в патогенезе ншемичсской болезни сердца // Кардиология, 2003. - №43, - с, 16-20.

39. Старкова Н.Т., Дворяшииа HB- Метаболический синдром нн су л н ihipet ист с i гтиостн основная концепция и следствие tí Терапевтический Архив. 2004. - №76. - 54-58.

40. Стрюк Р.И., Цыганок Н.Ю. Ненрогуморштьные механизмы патогенеза метаболического синдрома /1 Кардиология. 2006. - №46 с.54-59.

41. Строгнн Л.Г., Починка ИТ- Особенности хронической сердечной недостаточности у больных сахарным диабетом 2-го типа tí Кардиологи». 2005, - №45. с,33-36.

42. Сыркин АД. Инфаркт миокарда. 2-е изд., перераС. - М- МИА, 1998, -398 с

43. Тепло» СИ, Нейрогеииая рефляция кровоснабжения сердил н головного мозга. СПб: Наука, 1980. -130 с,

44. Гкачснко БЛ. Физиология сердца / под ред. В,И. Ткачснко. СПб.: СпвцЛит. 200 L - 143 с.

45. Цуканов В Н., Селиверстова Е В., /Дотации С.А. Показатели липндного состава сыворотки крови и желчи при заболеваниях желчевыводящих путей у больных сахарным диабетом // Терапевтический Архив 2005. - »77. - clS-Ш.

46. Шарафетдинов XX, Плотников» О.А. Мещерякова В. А. Влияние диетотерапии, содержащей специализированные пищевые снеси, на клнннко метаболические показатели у болы1ых сахарным диабетом 2 типа // Вопросы питания, 2005. - Jfe74. - с.26-32.

47. Шевченко Ю.Л , Бобров J1 Л. Систолическая функция левого желудочка. М,: ГЮТАР-МЕД, 2002 - 240 с.$4. :>п(нгхоф. Р.Н., Крнчевская А А Влияние инсулина на гликолиз в культурах клеток//Биохимия. -1960- №25. - с.556-562.

48. Akatsuka Y., Egashirt К. K.ai.iuda Y., Narishige Т., Ueno H. Shimnitawa. H„ Takeshila A ATP .sensitive polasiitmi channels are involved in odenosine A2 receptor mediated coronary vasodilatation tn the dog t! Cardiovasc Res. -1994,- v.28. p. 906-911.

49. Albert! KG, Zimrnet PZ. Definition, diagnosis and classification of diabetes meiUtus and its complications, Part 1: diagnosis and classification of diabetes meltilus provisional report of a WHO consultation // Diabet Med. 1998, v. 5. - p. 539-53.

50. Allard M.F. Cofurihtition of oxidative metabolism and glycolysis to ATP production in hypertroplsied hearts // Am J Physiol, ■ 1994 v.267, - p. 742-750,

51. SS. Aoyama T A novel disease with deficiency of mitochondrial very-long-dtain acyi-CoA dehydrogenase i! Biochem Bwphys Res Commun. 1993. -V.I9L- p. 1349-1372.

52. Aversano T., Ouyang P., SiJvaman H. Blockade of the A TP-sensitive potassium channel modulates reactive hyperemia in the canine coronary circulation)iCii* Res, -1991 v,fi9, - p. fil»-«22.

53. Borger P.M., Kelly D.P, PPAR signaling in the control of cardiac energy metabolism H Trends Cardiovasc Med 2000 - v. 10, - p.238- 245,

54. Ы. Baynes l.W Rote of oxidative stress in development of complications in diabetes t! Diabetes, 1991 - - v.4Q, - p,405-412,

55. Beckman J.S. Koppenol W.H. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitnte the good, the bad, and ugly//Am J Physiol 996, - v.271. - p. 1424-1437,

56. Bclnidindi L., Linden J, Berne R.N. The cardiac ciTcd of adenosine II Prog Cardiovasc Dis 1989 -v32 - p.73-78.

57. Bergman K.N., Ader M. Free fatty acids and pathogenesis of type 2 diabetes mellitus U Trends Endocrinol Mrtab 2000. -V.U.-p.351-356.5, Bemc K M Metabolic regulation of blood flow U Cire Res 1964, - v. 15. -p.261-268.

58. Berne M R, Levy N. M. Cardiovascular physiology. R-ïh ed. Mosby. St Louis. 2000. 312p.

59. Ben-Harousb Л,, Yogev YHod M- Epidemiology of gestational diabetes mellitus and its association with Type 2 diabetes H Diabct Med. 2004. -¥.21.-103-113,

60. Beenakkei* A.M., Klmgenberfc M, Carnitine-Coenzyme a Transjcetytase i n Mitochondria from Various Organs I Biochim Biophys Ada. 1964, - v.84. - p.205-207

61. Bing R.J, ct al. Metabolism of ihe human heart tl. Studies on fat, ketone and amino acid metabolism tt Am J Med. -1954. v. 16. • p.504-515.

62. Bohlen H.O., Nase G.P- Arteriolar nitric oxide concentralioii is decreased during hypergiycemia-induced betall PKC activation H Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2001. - v,2B0. -*p.621 -627.

63. Boli R. Myocardial "stunning" in man /I Circulation. 992. -v.86, -p. 1671-1678.

64. Boner G„ Cooper M.E- Diabetic nephropathy // Diabetes Tcchnol Ther. -1999, v, 1. -p.489-4%.

65. Brandt J.M. Djoundi F-, Kelly D P Fatty acids activate transcription of the muscle carnitine palmitoyltransferase I gene in cardiac myocytes via the peroxisome prolifcratoi-activaled receptor alpha // J Biol Chem -1998. -v.273. p.23786-23792,

66. Brown MS., Goldstein J.L. Plasma lipoproteins teaching old dogma* new tricks it Nature. 1987, -v.330- p, 113-114.

67. Brownlee M, A radical explanotion for glucose-induced beta ccll dysfunction H. J Clin Invest. -2003. v. 112,- p. 788-1790.

68. Brownlee M The pathological implications of protein glycotion U Clin Invest Med- -1995- v.|8. -p.27V281

69. Brownlee M, Vlassara H„ Ceraim A. Nooenzymaiie glycosylate« and Ihe pathogenesis of diabetic complications // Ann Intern Med. 1984. - v. 101. -p.527-337.

70. Bushmanr I„ Schaper W. Artcriogcnesis versus angiogenesis. two mehanosn» of vessel ¡jnwth It News Physiol Set. 1999. - v. 14. - p,l2l-127.

71. Cm L., Kong Y.J, Cell death ond diabetk catdiomyopathy tt Cardrovnsc Toxicol. -2003. -v3. p.219-228.

72. Candido R., Srivastava P.r Cooper M,E.t Burretl LM Diabetes meHitus: a cardiovascular disease II Out Opin Investig Drugs 2003. - v.4. -p. 10881094.

73. C№ E.M. Glycolysis in muscle and other tissues U Bioehem 1. ~ 1929 -v.23.- p. 210-2(8.

74. Ceriello A Mechanisms of tissue damage in Ihe postprandial slate tl Irfl J Clin Proct Suppl. 2001- - v.l 23. - p.7-12.

75. Ceriello A-, Qunglioro L., D'Armco M-, Di Filippo C. Marfella R , Nappo F, Berrino L„ Rossi F, Giugliano D, Acute hyperglycemia induces niUotyrosine formation and opoptosi* m perfused heart from rat // Diabetes. 2002. - v.51. - p.l 076-1082.

76. Chen Y., Saari J.T., Kang YJ. Weak antioxidant defenses make the heart a target for damage in copper-deficient rats // Free Radic Biol Med. -1994 -v. 17. -529-536.

77. Clubber R, Mulinntn P.A., Kühner E.M. Intracellular protein glycation in cultured retinal capillar pericytes and endothelial cells exposed in high-glucose concentration H Cell Mol Biol (Noisy-le-grand|, 1999, - v.45. -p.47-57.

78. Coleman D.I., Hummel K.P. Studies with the mutation, diabetes, in the mouse 1/ Diabetologie.- 1967. v3, - p 238-248.

79. Oaut J,. Maier.Rvnfc.lpli W. von Bickerath N. Mehrke G„ Gunther K„ Goedel-Meinen L. Hypoxic dilation of coronary arteries is mediated by ATP-sensiUve potassium channels // Science. 1990. - v.247, -p. 134 J — 1344.

80. Dcsvcrgne B, Wahli W Peroxisome prolifcrator-activated receptors nuclear control of meiabolism H Endocr Rev . 1999.- v. 20. -p. 649-688.

81. De Vriese A S, Verbcuren TJ„ Van de Voorde J., Lnmeire N.H., Vanhoutie P.M. Endothelial dysfunction in diabetes U Br J Pharmacol 2000 - v. 130, -963-974,

82. Devendrá D, Liu E„ Eiscnbarth G.S, Type I diabetes: recent developments tí BMJ. 2004, - v.328. - 750-754.

83. Diabetus mellitus, WHO information, Fact Sheet № 138, Reviewed November 1999.

84. Doria A. Methods for the study of the genetic determinants of diabetes and its complications II Preegl I-ek, 2000, -v.57. - p.7-12.

85. Djouadi F., et al, The rote of the peroxisome proliferaior-activated receptor alpha (PPAR alpha) in the control of cardiac lipid metabolism II Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. ■ 1999. v.60, - p. 339-343,

86. Eriksson U.J-, Borg L.A. Diabetes and embryonic malformations. Role of substrate-induced free-oxygen radical production for dysmorphogenesis in cultured rat embry os // Diabetes. 1993. - v-42. -p.411-419.

87. Etingof R.N. Krichevskaia A. A. On the effect of insulin on glycolysis in cells in tissue culta**// Biokhimiia- ■ I960. v.25, -p,S56-ifi2.

88. Factor S.M„ Butany J., Sole M.J. Wigle ED. Williams W,C,, Rojkind M. Pathologic fibrosis and matrix connective tissue rn the subaortic myocardium of patients with hypertrophic cardiomyopathy H J Am Coll Cardiol. 1991- ■ v.7, - p. 1343-1351.

89. Factor S.M., Ofcun EM, Minase T, Capillary microaneurysm in the human diabetic heart// N Engl J Med, I9S0, - v-302. - p.3 84-388

90. Figucrtdo V.M. Diamond 1, Zhou Y. Chronic dipiTidamoie therapy produces sustained protection against cardiac ischeniia-rcperfusion injury // Am J Physiol -1999. v.277. - p. 2091-2098.

91. Finck. B.N. et aJ. The cardiac phenotype induced by PPARalpha overexpresuon mimics that caused by diabetes ntellitus H J Clin Invest. ■ 2002. v.109,-p42t-l30.

92. Finck B-N,. et al. A critical role for ppARalpha-mediaied lipotoxicity m the pathogenesis of diabetic cardiomyopathy: modulation by dietary lat content ft Proc Nad Acad Sei US A. 2003. - v. 100, - p. 1226-1231.

93. Ford E.S,. Giles WÜ. Diet* W.H. Prevalence of the metabolic syndrome among US adults: findings Irons the thiid National Health and Nuirition Examination Survey // JAMA- ■ 2002 -v287. - p.356-359.

94. Forman B.M., Callen J. Evans R.M. Hypolipidemic drugs. polyunsaturated fatty acids, and eicosanoids are ligands for peroxisome prolifcrator-activatcd receptors alpha and delta I! Proc Nfttl Acad Sci USA,- 1997 v.94, -p. 4312*4317.

95. Forrest J A. Menser M A . Burgess J. A. High frequency of diabetes ntellitus in young paients with congemtal rubella II Lancet. -197I,- v, ii, -p,332-334126

96. Fourlanos 5 , Colman P.O., Harrison I. С. Late-onset autoimmune diabetes in relatives of people with type I diabetes )/ Aim N Y Acad Sci.- 2003. -v, 1005.-p,370-373.

97. FnKhwt J,C„ Dune/; P„ Staels B. Peroxisome proliferate!-- activated receptor-alpha activators regulate genes governing lipoprotein metabolism, vascular inflammation and atherosclerosis ■'/ Curr Opin Lipidol. 1999 -v,|0- - p.245-257.

98. Gabbay K H, Hyperglycemia, polyol metabolism, and complications of diabetes mellitus// Annu Rev Med. 1975.-v.26. - p,52l-536,

99. Gaur C. Mathur A., Aganval A.r Verma К.» Jain R . Swaroop A. Diabetic autonomic neuropathy causing gall bladder dysfunction U } Assoc Physicians India.- 2000. v.48. - p.603-605.

100. CnacomeUt F.„ Wiener J. Primary myocardial disease in the diabetic mouse. An ultrastruetural study11 Lab Invest. 1979 v.40. - p.460-473.

101. Ginrdinei l„ Jidelstein D. Brownlee M. Neneniymatic glycosylate in vitro and in bovine endothelial cells alters basic libroWasi growth factor activity A model for intracellular glyco»ylalvOTi in diabetes II Clin Invest.- 1994. -v.94,-p.II0. П7»

102. Giugliano D. Ceriello A., Paolisso G. Oxidative stress and diabetic vascular complications//Diabetes Care -1996. v.19. - p 257-267.

103. Godecke A , Descking U.K.M., Ding Z Coronary hemodynamics In endothelial! NO synthase kuockovr mice // Cite Rs, 1998. - v.82- - p. 186189.

104. Goldstein B ) Insulin resistance from benign to type 2 diabetes mellitus H Rev Cardiovasc Med. 2Q03. v.4 , -p.S3-10.

105. Gulick T. et al. The peroxisome prol iterator-activated receptor regulates mitochondrial fatty acid oxidative enzyme gene expression II Proc Natl Aead SciUS A, l094.-v.9I -p. 11012-11016.

106. Haffner S„ Taegtmeyer II- Epidemic obesity and the metabolic syndrome it Circulation.-2003, v.108, -p. 1541-1545.

107. Hamada Y., Araki N„ Koh N. Notamura J., Iforiuchi S, Hotta N. Rapid formation of advanced glycotion end products by intetmedtate metabolites of glycolytic pathway and polyol pathway ii Biodwm Biophys Res Commun. -1996. v.228. - p539-543.

108. Hamby R|„ Zonerakh S., Sherman L. Diabetic cardiomyopathy // JAMA. 1974. v.229. - p-1749-1754.

109. Banssen K.F- Blood glucose control and microvascular and microvascular complications in diabetes tt Diabetes. 1997. - 46. - p.101-103.

110. Hardin D,S, etal. Mechanisms of enhanced insulin sensitivity in endurance' trained athletes: effects on blood (low and differential expression of GLUT 4 in skeletal muscles it J Clin fcndocrinol Metab, 1995. - v.80. - p 24372446.

111. Haihout E.H., Shorkcy L, Racinc M. Tbomas W, Nahab F, El-Shahawy SI, Mace J.W Diabetic auUMmmunity tn infants and pre-svhoolcrs wjih type1.diabetes ft Pedtolr Diabetes- -2000. v. I. - p, 13 M 34

112. Hcn T.AV., Kuo L. cAMP-inde pended dilatación of coronary otherioles to adenosine: role of ni trie oxide. G proteins. and K,i¡ ehannels ti Circ Rs. -1999,-v,85, -p,634-638

113. Herberg L„ Coletnan D.L- Laboralory animáis exhtbiling obesily and diabetes syndromes // Metabolism, 1977- ■ v,26. - p,59-99,

114. K Hopt U.T., Bcnz S„ Pfeffer F„ Schareck W-, írfcin I, Busing M. Simultaneous pancreas'kidncy transplantatíon—the optimal tberapy for typc I diabetics with end-stage renal diseasc in Europe. loo? H Transpl Ent -1994. v,?.-pS4I4-4.6.

115. Ilopkiiu TA , el al- Control of cardiac pyntvaie dcftydrogenasc activity in peroxtsome proliferaWr-activatcd rccc(*or-alpha uansgeme mice tt Am l Physiol Hcart Circ Physiol. 2003,- v.2S5. - p, H270-276.

116. Hubfonl R.W, Matthew W.T. Inhibition of £ai cell tipolysis bv low FFA to oltwmin mvusH pp*ds. ■ 1971.- v,«. p. 274-276.144. 1 tornmel K P, Dtcfcie HM, Colernan D.L. Diabetes.a ncwmutation tn the mouse//Science.-1966, v.l53, - p, 1127-1128.

117. Hunt J,V„ Dean R.T., WolfF S.P Hydroxyl radical produetion and autoxidative glyeosylation. Glucosc auloxidatioti « the cause of protein damage in the experimental glycation model of diabetes mellitus and ageing

118. Jaap AJ., Tooke JE, Pathophysiology of microvascular disease in non-insulin-dependent diabetes// Clin Sci fLond), 1995. - v,S9. - p.3-12.

119. Jagasia D, McNulty P H. Diabetes mclltlus and heart failure //Congest Heart Fail. 2003. - vA - p.133-9.

120. Kannel W.B., Hjortland M , Castelli W.P. Role of diabetes in congestive heart failure: the Fnwmngham study it Am J Cardiol 1974. - v,34. - p,25>-34,

121. Canty J.M. Jr., Schwartz l.S. Nllrie oxide mediates How-dependent epicardio! coronary vasodilation to changes in pulse frequency but not mean flow in conscious dog» // Circulation. • 1994. v.89. - p375-384.

122. Kaul N. Siveski-Uiskovic N. Hill M., Khaper N. Senevirmne C . Singid P,K, Probucol treatment reverses antioxidant and functional deficit in diabetic cardiomyopathy // Mol Cell Biochem,-1996. v,160. - p.283-288.

123. Sft. Kersteti S., Pcsvetgj« B., WahlL W. Roles of PPARs in health and disease U Nature. 2000, - v.405. - p421 -424.

124. Kelly DP, et at. Molecular characterization of inherited medium-chain aeyl-CoA dehydrogenase deficiency it Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 -v.87. - p. 9236-9240.

125. Kelly. D P. Strauss A.W. Inherited cardiomyopathies U N Engl J Med. -t994.- V.330 p. 913-919.

126. King H., Aubert R.E. Herman W.H. Global burden of diabetes, 1995-2025: prevalence, numerical estimates, and projections li Diabetes Care. 199K -v^L-p. 1414-1431.

127. Kltewer S-A.,« al. Peroxisome proliferator-activated receptors: from genes to physiology tf Recent Prog Horm Res - 2001. v.56. ■ p.239.263,

128. Kohler H P Insulin resistance syndrome; interaction with ccwgutntion and fibrinolysis // Swiss Med Wkly. 2002. - V. 132. - p.241 -252,

129. Kowic MM, Schrader I. Role of nitric oxide in reactive hyperemia of the guinea pig heart H Circ Res 1992. - v.70. - p20&-212.

130. Kramar R , et al, Beta-oxidation in peroxisomes of brown adipose tissue // Biochim Biophys Acta- -1978- v.53l. - p. 353-356,

131. Kroofc A,, ORahilly S Mutant insulin receptors in syndromes of insulin resistance H Bailticrcs Clin Endocrinol Metah 1996. v. 10. - p,97-122.

132. Kinoshita J.H Mechanisms initiating cataract formation H Invest Ophthalmol.- «974. v.l3.-p.7l3-724.

133. Kuo TH. GiacoraelJi F., Wiener i-, Lapanowski N.K. Pyruvate dehydrogenase activity in cardiac mitochondria from genetically diabetic mice tt Diabetes, -1985. v.34. -p. (075-1081,

134. Larsen T.S. Dam R„ Giles R,W,. Severson D.L, Lopasdiuk O.D., Bclkc D.D. Tybcrg J,V. The isolated working mouse heart: methodological considerations tt Pflugers Arch. ¡999. - v.437. - p.979-985.

135. Lehninger A.L., Smith S.W. Efficiency of phosplvorylaiion coupled to electron transport between dihydrodiphosphopyridine nucleotide and oxygen tt 1 Biol Chem- -1949. v. 181 - p. 415-429,

136. Lee G.H., Proenca R., Montez J.M-, Carroll K M, Domshzadeh J.G., Lee J.L, Friedman J.M, Abnormal splic ing of the leptin receptor in diabetic mice If Nature, 1996, - v. 379- - p,632-635,

137. Lee S.S., et al Targeted disruption of the alpha isoform of the peroxisome proliferator-activated receptor gene in mice results in abolishment of the pleiotropic effects of peroxisome prolrferators tt Mol Cell Biol. 1995, v.lS-p. 3012-3022.

138. Lithcll H.O Hyperinstilinemia, insulin resistance, and the treatment of hypertension ft Am J Hypertens, 1996, . v.9. - p, 1 SOS-154S,

139. Livingstone C , Collison M. Sex steroids and tnsulin resistance ft Clin So (Lond) 2002. - V.102.-P.ISI-166.

140. I Lum H, Roebuck K.A. Oxidanl stress and endothelial cell dysfunction U

141. Meyer K„ Volk) A,, Endete R., Kuhnlc H.F. Pill J, Speeles differences in induction of hepatic enzymes by BM 17.0744. an activator of peroxisome prahferator-activolcd receptor alpha (PPAR alpha} U Arch Toxicol, ■ 1999 -V.73--P 440-450.

142. Mokdad A.H, Bowman B.A., Ford E.S., Vimcor F., Marks J.S., Kaplan JP The continuing epidemics of obesity and diabetes in the United Slates ft JAMA. 2001.- v.286 - p. 1195'1200.

143. Monnier V.M., Kohn R.R., Cerami A. Accelerated age-related browning of human collagen in diabetes mellitus // Proc Natl Acad Set U S A, 1984. -v.8i,~p 583-587.

144. Morley J.E, The metabolic syndrome and aging // J Gerontol A Biol Sei Med Sei, 2004.- v.59. - p. 139-142.

145. Mueckkr M. The molecular biology "I glucose transport: relevance to insulin resistance and non-ittsutin-dependem diabetes mellitus H J Diabetes Complications. -1993, v.7, - p, 130-141.

146. Motufova*VamboI ieva V.N,. Keef K.D. Adcnosineinduced hyperpolarization in guinea pig coronary artery involves A2b receptors and KATP channels U Am J Physiol 1997. v.273. - p H2687-H2695

147. Nagpala P,G„ Malik A.B., Vuong P.T., Lum H. Protein kinase C beta I overexprcssion augment phorbol ester-induced increase in endothelial permeability it J Cell Physiol. 19%. - v. 166. - p 249-255.

148. Nahser PJ, Jr., Brown R.E. Oskarsson H, Winniford M.D. Rossen, i.D. Maximal coronary flow reserve and metabolic coronary vasodilation tn patients with diabetes mellitus it Circulation. -1995. v.91. - 635-640.

149. Nathan D.M. The pathophysiology of diabetic complications: how much does the glucose hypothesis explain"? H Ann Intern Med 1996. - v, 124, -p.86-89,

150. Neu A. Ehehalt S. Willasch A. Kehrer M, Hub 8-, Ranke M B. Varying cluneal presentations at onset of type I diabetes mellitus in childrenepidemiological evidence for different subtypes of (he disease? II Pediitr Diabetes. 2001. - v.2. -147-153,

151. Nishi S., LJeno M. Hisaki S., lino N., Igucbi S. Oyama Y,, Imai N. Arakawa M , Gejyo F- intrastructural characteristics of diabetic nephropathy II Med Electron Microsc 2000. - v33. - p.65-73.

152. NiahikawaT., Edclstetn D., Brownie« M Ihe missing link: a single unifying mechanism for diabetic complications If Kidney Int Suppl ■ 2000 . - v.77. -p.26-30.

153. Nishizuka Y Intracellular signaling by hydrolysis of phospholipids and activation of protein kinase € // Science. -1992. v.258, - p.607-614

154. Olson, A.L„ Pessin I.E., Structure, function, and regulation of the mammalian facilitative glucose transporter gene family II Annu Rev Nutr -1 <m- v.16.-p. 235-25«.

155. Olsson R.A. Buger ft., Spaan J. The coronary circulation. In Fozzanl HA, Haver E, Jennings RB, editors: The heart and cardiovascular syste, ed 2, New York. 1991, Raven Press

156. Olsson R.A., Pearson ID. Cardiovascular purinoceptoni If Physiol Rev. -1 <**).-v.70--p-761-845.

157. Palumbo PJ. Metformin: effects on cardiovascular risk factors in patients whh n on-insulin-dependent diabetes mellhuj // } Diabetes Complications -1998, -y.I2.-J>.1 10-119.

158. Pearson DJ. Tubbs P K. Acetyl-Carnitine in Heart and Liver t! Nature,. -1964,- v.202, p, 91-93.

159. Perfetto F,. Tarquini R,, Tapparini L., Tarquini 13, Influence of non-insuhn-dependem diabetes mellitus on plasma endolhctin-l levels In patients with advanced atherosclerosis // J Diabetes Complications 1998.- v. 12, -192.

160. Pitkanen O.P. Nuutilo P. Raitaksri O.T. Ronnemaa T., Koskinen PJ, lida H„ Uhtimaki TJ„ Loine If.K,. Takala T , Viikari LS-, Knuuti J. Coronary flow reserve is reduced in young men with IDDM fl Diabetes 1998. - v, 47, - 248-254.

161. Pill J. KuhnJe H.F. BM 17,0744: a structurally new antidiabetic compound with insulin-sensitizing and lipid-lowehng activity H Metabolism. 1999. -v.48, - p.34-40

162. Rabfcin S.W., Kong LY. Nitroprusside induces cardiomyoeyte death: interaction with hydrogen peroxide H Am J Physiol 2000 v,279. ■ H3089-H3100,

163. Radha V., Vimaleswaran K.S.r Deepa R„ Mohan V The genetics of diabetes mellitus tt Indian J Med Res. 2003. - v.l 17. - 225-238.

164. Randle PJ. et al. The glucose fatty-acid cycle- its role in insulin sensitivity and the metabolic disturbances of diabetes mellitus H Lancet. 1963 - v, I. -p. 785-789.

165. Randle PJ- Regulation of glycolysis and pyruvate oxidation in cardiac rnusclc // Circ Res. 1976. - v.38. - p 8-15.

166. Sack M.N., Kelly D P- The energy substrate switch during development of heart fiulure; gene regulatory mechanisms // Int i Mol Med. ■ 1948. vT -p.17-24.

167. Sack M.N., et al, Fatty acid oxidation enzyme gene expression is ilownregulaled in the failing heart И Circulation. 1996,- v.94. » p. 28372842.

168. Scratcherd T., Gillcspiic J. Aids to Physiology. Churchill Livingstone. New York- 1997- 390p.

169. Shiba T,, înoguchi T., Sportsman JJL, Heath W.F. Bursell S-. King С L. Correlation of diacylglycerol level and protein kinase С activity in rat retina to retinal circulation // Am J Physiol- 1993. - v.263. - p.E783-793.

170. Shifcukuda Y„ Buttrick P.M. Oxygen free radicals and heart failure: new insight into an old question //AntJ Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2002. - v,283. - pi237-23í,

171. Schmidt A.M. Hofmann M„ Taguchi A-, Yan S.D. Stent D.M. RAGE a multiligand receptor contributing to the cellular response in diabetic vasculopothy and inflammation // Semtn Tbromb Hemost, 2000. - v,26, -p,4»5-493.

172. Singh R.„ Wicgers S Js„ Goldstein В J. Impact of gender on diabetes mell itus and its associated cardiovascular risk factors// J Gend Specif Med, 2001. -4. - p.28-36.

173. Smith S.C Nonproliferative diabetic retinopathy and macular edema H Insight. 1999 - v.24. - P-S9-62

174. Stanley W.C Chandler M P, Energy metabolism m the normal and failing heart: potential for therapeutic interventions // Heart Fail Rev. 2002, - v.7. * p 115-130.

175. Standards of Medical Care for Patients With Diabetes Mellitus Diabetes Care V. 24, suppl. I Amencnn Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations 2001.

176. Steinberg H.O- Chaker H., Learning R-, Johnson A-, Brechtel G. Baron A.D, Obesity/insulin resistance is associated with endothelial dysfitnetron Implications for the syndrome of insulin resistance //J Clin Invest. 1996. -v.97. - р.2й01-2610.

177. Strippoli G-F-, Di Paolo S., Cincione R, Di Palma AM. Teutonko A-, Graiuiatiano G,. Schern F-p, Gesualdo L. Clinical and therapeutic aspects of diabetic nephropathy- // J Nephrol -2003.-v. 16 -p 487-499

178. Sundell i., Laine H.„ Nuutila P. et al. The effects of insulin and sliort-tcmi hyperglycemia on myocardial blood flow in young men with uncomplicated type 1 dtabeles // Diabetologie, 2002.* v.45. - p,775-782.

179. Sutherland FJ., Hearse DJ. The isolated blood and perfusion fluid perfused heart it Pharmacological Research. 2000. - v.41. - p.6l 5-627.

180. Sutherland C-G-, Fisher U.M. Frier B.M., Dargie HJ., More I.A., Lindop G,B. Endomyocardial biopsy palhology in insulin-dependent diabetic patients with abnormal ventricular function .'/Histopaibology 1989- - v 14 -p 593-602.

181. Schwartz J.P., Junga* R,L. Studies on the hormone-sensitive lipase of adipose tissue // J Lipid Res. 1971 - - v. 12, - p. 553-562,

182. Tacgtmcyer H Energy metabolism of the heart from basic concepts to clinical applications H Curr Probl Cordiot. -lW.-v.19.- p. 59-113,

183. Tacgtmeyer H„ Ovenurf M.l- Effects of moderate hypertension on cardiac function and metabolism in the rabbit // Hypertension. 1988, - v4L - p. 416-426,

184. Taylor Si. Lilly Lecture molecular mechanisms of insulin resistance l essons from patients with mutations in the insulin-recepior gene Ц Diabetes, -1992. v,41 - p, 1473-1490.

185. Tesfamoriam B. Free radicals in diabetic endothelial cell dysfunction ft Free Radic Biol Med -1994,. v.l6.-p.383-39l.

186. Thonms 8. Molecular and cellular physiology of GLUT-2, a high-Km facilitated diffusion glucose transporter H Inl Rev Cytol 1992. v. 137. -p. 209-238.

187. Thereof R, MJ. Charron Lodish H P Molecular physiology of glue«« transporters H Diabetes Core, 1990. -v, 13, - p. 209-218,

188. Torra LP., Chinetti G. Duval C. Frudurt J.C., Stacls B. Peroxisome proliferaior-aciivated receptors: from transcriptional control to clinical practice ft Cott Opan updol -1001, ■ v. 12, p,24s-254.

189. TresAOO B, Bueno G„ Moreno L.A., Garagom J.M., Bweno M. Insulin resistance and impaired glucose tolerance in obese children and adolescents (t\ Physiol Biochem. 2003. - v.59 -p.217-223.

190. Van der Lee K.A , VoA M.M. De Vrics J£. Willemsen P H., Glatz J,F. Rcnemnn R,S„ Van der Vusse GJ„ Van Bilsen M. Long-chain fa«y acid-induced changes in gene expression in neonatal cardiac myocytes // J Lipid Res 2000. - v.41. - p.41 -47.

191. Van der Lee K.A., Wilktnsen P H., Van der Vusse G.J-, Van Bilsen M Effects of fatty acids on uncoupling protein-2 expression in the rat heart,',' FASEB J. 2000. - v. 14. - p.495-502.

192. Vane J. R , Anggard E.E., Boiling R M, Regulatory functions of the vascular endothelium // N Engl I Med. 1990. - v,323. - p.27-J6.

193. Verbeke P, Perichon M., Friguet B Bakala H. Inhibition of nitric oxide synthase activity by early and advanced glycation end pioducts in culluredrabbit proximal tubular epithelial celts // Biochim Biophvs Acta. ■ 2000.-v,1502.-p,48l-i94.

194. Viats A. Bum stock G. A2-purinoceptor-mCdioted relaxation in the guinea-pig coronary vasculature: a role for nitric oxide// Br J Pharmacol. 1993. • v.109. - p,424-429,

195. Vinik A-l Freeman R .„ Erbas 1" Diabctic autonomic neuropathy // Scmin Neurol. 2003. - v.23. - p.365-372.

196. Wall S.R., Lopaschuk C D. Glucose oxidation rates in fatty acid-perfused isolated working hearts from diabetic rats // Biochim Biophys Acta- 19S9. 'V.I006.- p.97-t03.

197. Warshaw J.B. Cellular energy metabolism during fetal development. IV. Fatty acid activation, acyl transfer and fatty acid oxidation during development of the chkk and rat // Dcv Biol. 1972. - v.28. - p. 537-544.

198. Watariabe K , et al. Constitutive regulation of cardiac fatty acid metabolism through peroxisome piol i ferator-aeuvated receptor alpha associated with age-dependent cardiac toxicity ft J Biol Chem. 2000. - v,275. - p. 2229322299.

199. Wang H , Keiser J.A. Molecular characteruaition of rabbit CPP32 and its function in vascular smooth muscle cell apoptosis 1/ Am J Physiol. 1998 -v.274.-p-HU32*Sl40.

200. Wilson D-M., Buckingham B Prevention of type la diabetes mcllitus // Pediatr Diabetes. 2001, - v.2.- p. 17-24.

201. Williamson J.R., Chang K„ FrangOS M„ Hasan KS, ldo Y. Kawamura T„ Nyengaard J.R., van den Enden M„ Kilo C-, Tilton H.G. Hyperglycemic pscudohypoxia and diabctic complKations U Diabetes.- 1993. v.42, -p. 801-813.

202. Wisneski JA., et al. Myocardial metabolism of free fatly acids Sludics with 14C-labcied substrates in humans Hi Clin Invest. 1987, - v.79. - p. 359366

203. Winer N. Sowers J R. Epidemiology of diabetes И i Clin Pharmacol. -2004, vr44, - p.397-405.

204. Wohaieb S A., Godrn D,V Alterations in tissue antioxidant systems in flic spontaneously diabetic (BB Wistar) rat /1Сan J Physiol Pharmacol. 1987,-v.65.-p 2191-2195.

205. World Health Organization: Diabetes Mellitus: Report of a WHO Study Group. Geneva, World Health Org., 1985. Tech, Rep. S«r-f Xs 727,1985,

206. Wolff S.P., Jiang Z.Y., Hunt J.V. Protein glycation and oxidative stress in diabetes mellitus and ageing И Free Radic Biol Med. 1991. - v. 10, -pj39-351

207. Varum R„ Zfckifl H, Stammlcr G„ Rose A-G- Human coronary microvcssels in diabetes and ischsertiio. Motphametnc study oF autopsy material Hi Pathol. 1992. - v. 166- - p.265-270.

208. Yasuda K. et at. Expression of GLUT! and GLUT2 glucose transporter lWtfoTTTrs in rat islets of Langethans and their regulation by glucose II Diabetes. -1992. v.4l- p 76-81

209. Young M.E., e* al, Impaired long-chain fairy acid oxidation and contractile dysfunction in the obese Zudcr rat heart // Diabetes 2002- v.51, - p. 25S7-2595.

210. Younger D.S. Diabetic peripheral neuropathy И Drugs Today (Bare}. 1998. - V-34.-p.699-708.

Информация о работе

Братковский, Сергей Валерьевич
кандидата биологических наук
Архангельск, 2007
ВАК 03.00.13

Диссертация

Коронарный кровоток и энергетический метаболизм в норме и при индукции пероксисом пролифератор-активирующего рецептора альфа (PPAR-[A]) у диабетических мышей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы