Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с ишемической болезнью сердца

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с ишемической болезнью сердца"

На правах рукописи

НИКИТИН АЛЕКСЕЙ ГЕОРГИЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИИ РЯДА ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ С ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА

03.00.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2008

Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» (ФГУП «ГосНИИ генетика»)

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор, ФГУП «ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов», г Москва.

Носиков Валерий Вячеславович

Официальные оппоненты-

доктор биологических наук, Институт

молекулярной генетики РАН, г. Москва Сломинский Петр Андреевич

доктор медицинских наук, профессор, Московский государственный медико-стоматологическиий университет им Н А

Семашко, г Москва Терещенко Сергей Николаевич

Ведущая организация ГУ Медико-генетический научный центр

Защита состоится марта 2008 г в 14 часов на заседании Диссертационного совета

Д.217.013 01 при Государственном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов по адресу* 117545, Москва, 1-й Дорожный проезд, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика»

Российской академии медицинских наук (ГУ МГНЦ РАМН, г Москва).

Реферат разослан <

■><Я/1А »2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной инвалидности и смертности в экономически развитых странах, при этом на долю ишемической болезни сердца (ИБС) и инфаркта миокарда приходится примерно две трети случаев смерти от сердечно-сосудистых заболеваний

Известно, что данные сердечно-сосудистые патологии являются многофакторными заболеваниями с многочисленными звеньями патогенеза. Для таких заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды Исходя из современных представлений о механизмах развития ИБС, можно выделить группы так называемых генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.

Так как атеросклероз является основным этиологическим фактором ишемической болезни сердца, к генам-кандидатам, определяющим развитие ИБС и ее осложнений, можно отнести группу генов системы антиокислительной защиты, генов системы репарации ДНК и генов, кодирующих адренорецепторы и рецепторы, активируемые пролифераторами пе-роксисом Современная стратегия исследования генетической составляющей многофакторных заболеваний включает в себя поиск полиморфных маркеров в генах-кандидатах и оценку их ассоциации с заболеванием

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров.

Цель и задачи работы. Целью данной работы было изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с развитием ишемической болезни сердца Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи

1 Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, кодирующих рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа уЗ (РРА1ЮЗ), коак-

тиватор la рецептора, активируемого пролифератором пероксиеом типа у (PPARGC1A), рецептор, активируемый пролифератором пероксиеом типа 6 (PPARD), адренорецепторы pi, Р2 (ADRB1, ADRB2), фермент, превращающий ан-гиотензин I (АСЕ), |33-субъединицу G-белка (GNB3), поли(АДФ-рибоза)-полимеразу 1 (ADPRT1), поли(АДФ-рибоза)-гидролазу (PARG) и a-субъединицу цитохрома Ь(-245) (СУВЛ) в группе больных ишемической болезнью сердца и группе здоровых индивидов среди русских г. Москвы 2 Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии

Научная новизна работы. В данной работе впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров C(-681)G гена PPARG3, Gly482Ser гена PPARGC1A, Т(-87)С гена PPARD, Ser49Gly и Gly389Arg гена ADRB1, Glyl6Arg и Glu27Gln гена ADRB2, G7831A гена АСЕ, C82ST гена GNB3, Leu64Phe и Val762Ala гена ADPRT1, A(-431)G гена PARG и Tyr72His гена СУВА с ишемической болезнью сердца (ИБС) Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Tyr72His гена CYBA с развитием ИБС Установлено, что носители генотипа Туг/Туг данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа His/His имеют пониженный риск развития ИБС Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С825Ттен& GNB3 с развитием ИБС Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Т(-87)С гена PPARD с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС Все вышеизложенные результаты получены впервые

Практическая ценность работы. Показано, что исследованные полиморфные маркеры генов CYBA, GNB3 и PPARD могут использоваться для прогноза течения заболевания у больных с ИБС Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов CYBA, GNB3 и PPARD с развитием ИБС открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии

Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на заседания Секции молекулярной биологии Ученого Совета ФГУП «ГосНИИ Генетика» 19 февраля

2008 г Результаты настоящей работы докладывались на Российском национальном конгрессе кардиологов "Российская кардиология от центра к регионам", г Томск, Россия (12 -14 октября 2004 г ); Российском национальном конгрессе кардиологов "От диспансеризации к высоким технологиям", Москва, Россия (10-12 октября 2006 г), на международной конференции "From Human Genetic Variations to Prediction of Risks and Responses to Drugs and Environment", остров Санторин, Греция (29 сентября - 2 октября 2006 г )

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, включая 3 статьи, а также тезисы докладов и сообщений на конференциях

Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, выводы и список литературы Материалы диссертации изложены на 1Й6 страницах машинописного текста и содержат 18 таблиц и 8 рисунков В работе процитировано 174 зарубежных и 12 отечественных литературных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов с ИБС проводили, используя две группы пациентов, общая характеристика которых приведена в таблице 1 В исследование включались пациенты с ИБС, поступившие в стационар Городской клинической больницы (ГКБ) № 51 Диагноз ставили на основании клинических и биохимических исследований и данных коронароангиографии (у части больных). У части больных ИБС был диагностирован инфаркт миокарда (ИМ) Контрольная группа представляла собой случайную выборку пациентов, имеющих аналогичный профиль основных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, у которых проведенная эхо- и электрокардиография не выявила достоверных признаков ИБС

Выборки были этнически однородны и составлены из русских (на основании паспортных данных), проживающих в г Москве Геномную ДНК пациентов использовали для амплификации фрагментов ДНК, содержащих полиморфные маркеры ряда генов-кандидатов, предположительно вовлеченных в патогенез атеросклероза и ишемической болезни сердца Анализ нуклеотидных последовательностей осуществляли с помощью системы NCBI в сети Интернет (www nebí nlm nih gov) Использовали следующие разделы Map View (построение генетической карты), dbSNP (информация о полиморфных маркерах) Для подбо-

pa праймеров и рестриктаз использовали пакет программ Invitrogen Vector NTI Advance 10 (версия Education)

Таблица 1.

Общая характеристика обследованных групп больных с наличием ("ИБС+") и отсутствием ("ИБС-") ишемической болезни сердца

Показатель "ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Возраст, лет (среднее значение ± в О*) 60,2 ±4,9 55,5 ± 9,0

Пол (мужчины / женщины) 167/146 69/63

Курящие 66 15

Сахарный диабет типа 2 в анамнезе 67 0

Систолическое давление (мм рт ст) 137 1±1 18 144 1 ± 1 82

Диастолическое давление (мм рт ст) 81 7 ± 0 59 88 8 ± 0 97

Уровень холестерина (мм/л) 6.2 ± 0 09 5 6± 0 21

Уровень триглицеридов (мм/л) 2 56 ± 0 094 I 90 ±0 17

*S D - стандартное отклонение

Идентификация аллелей полиморфных маркеров проводилась с использованием по-лимеразной цепной реакции, последующего расщепления фрагментов ДНК рестриктазами, и электрофоретического разделения фрагментов ДНК в 8%-ном полиакриламидном геле или 2%-ном агарозном геле

1.1. Исследование ассоциации полиморфного маркера C(-681)G гена PPARG3 с

ИБС.

Продукт экспрессии гена PPARG, PPARy, контролирует экспрессию генов, вовлеченных в регуляцию обмена жирных кислот и адипогенез PPARy существует в виде нескольких белковых изоформ, являющихся результатом альтернативного сплайсинга на 5'-конце гена PPARG Точный механизм транскрипционного регулирования метаболизма сердечной мышцы семейством PPARy до настоящего времени остается невыясненным, но ряд исследований показал, что наблюдается высокий уровень экспрессии этих транскрипционных факторов в миоцитах (Yamamoto et al., 2001, Asakawa et al, 2002, Gilde et al, 2003, Xu et al, 2005) Помимо прямого влияния на метаболизм сердечной мышцы, PPARy является регуля-

тором энергетического баланса и ряд полиморфных маркеров в гене PPARG ассоциированы с повышенным индексом массы тела и распределением жировой ткани в организме, что является факторами риска для развития атеросклероза

Известно несколько полиморфных маркеров в гене, кодирующем PPARy, и фланкирующих его областях Из них наиболее изучен однонуклеотидный полиморфизм C/G в эк-зоне 1, приводящий к аминокислотной замене Рго12А1а в аминокислотной последовательности белка PPARy Но по данным, полученным разными исследователями, этот полиморфизм не ассоциирован с развитием патологий сердечно-сосудистой системы (Ai-Shah et al, 2004; Rhee et al, 2007, Wang et al, 2007) В нашей работе мы использовали малоизученный однонуклеотидный полиморфизм C(-681)G, который находится в промоторной области гена PPARG Недавно было показано, что аллель G этого полиморфного маркера ассоциирован с повышенным индексом массы тела (Cecil et al, 2006), но других исследований ассоциации с патологиями сердечно-сосудистой системы не проводилось

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера C(-681)G гена PPARG3 в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 2)

Таким образом, полиморфный маркер C(-681)G гена PPARG3 не ассоциирован с развитием ИБС у русских г Москвы

Таблица 2.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С(-681)й гена РРАЯОЗ в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение у2 Уровень значимости р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Аллель С 0,773 0,788 0,23 0,63

Аллель б 0,227 0,212

Генотип СС 0,601 0,629 0,32 0,85

Генотип Св 0,345 0,318

Генотип Ой 0,054 0,053

1.2 Исследование ассоциации полиморфного маркера Gly482Ser гена PPARGC1A с ИБС.

Продукт экспрессии гена PPARGC1A играет ключевую роль в метаболизме клеток миокарда. Активация PGC-la в миоцитах сердца ведет к индукции генов, кодирующих ферменты системы перекисного окисления липидов (Lehman et al, 2000), а также активирует ряд транскрипционных факторов, таких как ERRa, ERRy и NRF-1, которые стимулируют биогенез митохондрий и усиливают экспрессию генов, кодирующих компоненты системы переноса электронов в митохондриях (Huss et al., 2004). Белки семейства PGC-1 увеличивают активность транскрипционных факторов путем прямых белок-белковых взаимодействий и, помимо PGC-la, в это семейство входит также коактиваторы PGC-ip и PGC-lr (Andersson et al, 2001, Lin et al, 2002, Lm et al, 2005, Fmck et al, 2006, Soyal et al, 2006)

PGC-la и PGC-1 p экспрессируются в бурой жировой ткани, сердце, скелетных мышцах и почках (Puigserver et al, 1998) Несмотря на относительно большое количество информации об эффектах PGC-la в изолированных миоцитах и модельных системах, о его регуляторной роли в человеческом сердце известно мало Пока неизвестно, уменьшается ли экспрессия или активность PGC-la при сердечно-сосудистых патологиях В гене PPARGC1A обнаружен ряд полиморфных маркеров, которые показали ассоциацию с инсу-линорезистентностью и сахарным диабетом типа 2 (Ek et al, 2001, Нага et al, 2002, Andrulionyte et al, 2004, Oberkofler et al, 2004) Однако остается неясным, ассоциированы ли эти полиморфные маркеры с заболеваниями сердечно-сосудистой системы

В нашей работе

Таблица 3.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С1у4828ег гена РРАЯОСЫ в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Аллель Gly 0,671 0,667 0,02 0,90

Аллель Ser 0,329 0,333

Генотип Gly/Gly 0,431 0,409 0,56 0,76

Генотип Gly/Ser 0,479 0,515

Генотип Ser/Ser 0,089 0,076

мы использовали полиморфный маркер Gly482Ser гена

PPARGC1A, расположенный в экзоне 8 Ряд новых исследований показал ассоциацию этого полиморфизма с сердечно сосудистыми патологиями при сахарном диабете типа 2 (Lai et al, 2008) и гипертонией (Andersen et

al, 2005; Xie et al, 2007). Данные по изучению ассоциации этого полиморфного маркера с ИБС отсутствуют

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Gly482Ser гена PPARGC1A в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 3) Таким образом, полиморфный маркер Gly482Ser гена PPARGC1A не ассоциирован с развитием ИБС у русских г Москвы

1.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера Т(-87)С гена PPARD с ИБС.

Белки семейства PPAR регулируют экспрессию генов с помощью связывания с регу-ляторными элементами в промоторных областях генов Необходимым кофактором для них является рецептор ретиноидов X (RXR) и активность комплекса PPAR/RXR зависит от доступности лигандов для PPAR и RXR. Наиболее значимыми эндогенными лигандами для семейства PPAR являются длинноцепочечные жирные кислоты и их метаболиты До недавних пор изоформы PPARp/8 были мало изучены PPARp/S экспрессируются во всех тканях тела, но в миоцитах наблюдается повышенный уровень экспрессии (Gilde et al., 2003) Было показано, что изоформы PPARp/Ô защищают миоциты от апоптоза, вызванного окислительным стрессом, с помощью увеличения экспрессии каталазы, которая разлагает пери-кись водорода (Pesant et al, 2006)

В гене PPARD обнаружен ряд полиморфизмов, для одного из которых, а именно Т(-87)С, показана ассоциация с сахарным диабетом типа 2 (Andrulionyte et al, 2006), инсу-линорезистентностью (Ни et al, 2006), метаболическим синдромом (Robitaille et al, 2007) и уровнем липопротеинов высокой плотности (Aberle et al, 2006)

Полиморфизм Т(-87)С (также известен под обозначением Т294С) находится в промо-торной области гена PPARD на расстоянии 87 нуклеотидов от точки инициации трансляции Было обнаружено, что этот полиморфизм оказывает влияние на связывание транскрипционного фактора Sp-1 и аллель С ассоциирован с повышенной транскрипционной активностью (Skogsberg et al, 2003) В этом же исследовании было установлено, что аллель С полиморфного маркера Т(~87)С гена PPARD ассоциирован с пониженным уровнем липопротеинов низкой плотности, в то время как другие полиморфные маркеры (С(-409)Т, С73Т и A255G) не показали ассоциации с уровнями липопротеинов высокой и низкой плотности В связи с этим в нашем исследовании мы анализировали полиморфный маркер Т(-87)С гена PPARD, как наиболее вероятный функционально значимый полиморфизм промоторной области.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Т(-87)С гена РРАЮ (табл 4) были обнаружены статистически достоверные различия Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск развития ИБС (ОЯ = 1,43 и 2,19, соотв ), в то время как носители аллеля Т и генотипа ТС - пониженный риск (Ой = 0,28 и 0,70, соотв )

Таблица 4.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера

Т(-87)С гена PPARD в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости Р OR [CI95%]

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п — 132)

Аллель Т 0,347 0,432 5,77 0,02 0,70 [0,52-0,94]

Аллель С 0,653 0,568 1,43 [1,07-1,92]

Генотип ТТ 0,281 0,258 29,24 4,7 10"7 -

Генотип ТС 0,131 0,348 0,28 [0,17-0,46]

Генотип СС 0,588 0,394 2,19 [1,45-3,32]

Таким образом, полиморфный маркер Т(-87)С гена РРАКО ассоциирован с развитием ИБС у русских г Москвы

1.4. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Ser49Gly и Gfy389Arg гена ADRB1 с ИБС.

ß-адренергические рецепторы играют важную роль в функционировании сердечнососудистой системы и развитии ее заболеваний ßl-рецепторы превалирует в сердце, составляя примерно 80% от всех бета-рецепторов миокарда, а ßl- и Р2-рецепторы в почках стимулируют высвобождение ренина, который активирует ренин-ангиотензин-альдостероновую систему р2-рецепторы также находятся в артериях, где их стимуляция ведет к расширению сосудов ß3-рецепторы были обнаружены относительно недавно и их роль до конца не установлена (Johnson et al, 2002)

Роль бета-адренорецепторов в работе сердечно-сосудистой системы подтверждается широким применением лекарственных средств, действие которых основано на связывании с ß-рецепторами. Бета-адреноблокаторы используются при лечении хронических заболеваний сердца, гипертонии, инфаркта миокарда и т д.

Исходя из этого, представляется интересным исследовать вклад генетических полиморфизмов генов, кодирующих бета-адренорецепторы, в развитие сердечно-сосудистых паталогий, таких как ИБС.

Полиморфизмы в гене ADRB1, который кодирует pi-рецептор, были обнаружены в 1999 г (Maqbool et al, 1999) Наиболее изученными являются полиморфные маркеры Ser49Gly и Gly389Arg, так как они имеют удобные для исследований по схеме «случай-контроль» частоты минорных аллелей Позже были найдены еще 12 однонуклеотидных полиморфизмов, пять из которых приводили к замене аминокислоты в аминокислотной последовательности белка, но так как все эти полиморфизмы обнаружены одной группой исследователей, требуется независимое подтверждение их существования (Podlowski et al, 2000)

Было показано, что полиморфизм Ser49Gly, который находится на N-концевом внеклеточном участке рецептора, не оказывает какого-либо эффекта ни на связывание лиганда с рецептором, ни на эффективность связывания с G-белком, но при длительном взаимодействии с агонистами плотность рецепторов с вариантом Ser49 оказывается на 25% выше плотности рецепторов с вариантом 49Gly Дальнейшие исследования подтвердили, что вариант Ser49 имеет более высокий уровень экспрессии чем 49Gly (Rathz et al, 2002), что безусловно оказывает влияние на степень активации симпатической нервной системы и течение заболеваний, связанных с этим

Таблица 5. Аналогичные ис-

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и геноти- следования, проведен-пов полиморфного маркера Ser49Gly гена ADRB1 в группах ные для полиморфизма "ИБС+" и "ИБС-" Gfy389Arg, располо-

женного в области связывания рецептора с G-белком, показали что вариант 389Arg обладает повышенно способностью связываться с G-белками и уровень аденилатцтслазы в два раза превышает таковой для варианта Gly389 (Mason et al, 1999)

Все эти данные позволяют предположить, что полиморфизмы Ser49Gly и Gly389Arg гена ADRB1 имеют функциональную значимость и могут влиять на процессы лиганд-

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Аллель Ser 0,915 0,913 0,01 0,90

Аллель Gly 0,085 0,087

Генотип Ser/Ser 0,840 0,833 0,10 0,95

Генотип Ser/Gly 0,150 0,159

Генотип Gly/Gly 0,010 0,008

Таблица 6.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Ыу389Аг% гена А£)ЯВ1 в группах "ИБС+" и "ИБС-"

рецепторных взаимодействий в клетке Был проведен ряд исследований для изучения ассоциации этих полиморфных маркеров с гипертонией (Bengtsson, Melander et al, 2001, Ranade et al, 2002) и сердечной недостаточностью (Tesson et al, 1999, Borjesson et al, 2000) К сожалению, полученные данные противоречивы и скудны, что требует более широких исследований этих несомненно интересных полиморфизмов

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров Ser49Gly и Gly389Arg гена ADRB1 в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 5-6) Таким образом, полиморфные маркеры Ser49Gly и Gly389Arg гена ADRB1 не ассоциированы с развитием ИБС у русских г Москвы

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель Arg 0,773 0,780 0,05 0,82

Аллель Gly 0,227 0,220

Генотип Arg/Arg 0,601 0,629 0,92 0,63

Генотип Arg/Gly 0,345 0,303

Генотип Gly/Gly 0,054 0,068

1.5. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Glyl6Arg и Glu27Gln гена ADRB2 с ИБС.

К настоящему времени обнаружено 11 полиморфизмов в гене ADRB2, который кодирует р2-адренорецептор, четыре из которых приводят к заменам аминокислот в позициях 16, 27, 34 и 164 (Liggett, 1997) Полиморфный маркер Val34Met имеет очень низкую частоту встречаемости минорного аллеля и малоинтересен для исследований ассоциации с сердечно-сосудистыми заболеваниями

Функциональные эффекты полиморфизмов Glyl6Arg и Glu27Gln были исследованы в нескольких работах (Green et al, 1994, Green et al, 1995, Chong et al, 2000), но никакого влияния на лиганд-рецепторное взаимодействие или экспрессию обнаружено не было

Множество исследований ассоциации этих полиморфных маркеров с гипертонией (Timmermann et al, 1998, Gratze et al, 1999, Busjahn et al, 2000, Rosmond et al, 2000, Bengtsson, Orho-Melander et al., 2001) и сердечной недостаточностью (Liggett et al, 1998, Wagoner et al, 2000) не обнаружили значимых ассоциаций полиморфизмов Glyl6Arg и Glu27Gln гена ADRB2 с заболеваниями, но одно из исследований показало изменение соот-

ношения (31- и (32-рецепторов в сердце от 80 20 к 60 40 при сердечной недостаточности, что указывает на возможную роль полиморфных маркеров гена АОЯВ2 в течении заболевания (ВГ^оуу, 2000)

Таблица 7.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С1у16Аг% гена Ай11В2 в группах "ИБС+"и"ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Аллель Gly 0,695 0,682 0,15 0,70

Аллель Arg 0,305 0,318

Генотип Gly/Gly 0,466 0,477 1,95 0,38

Генотип Gly/Arg 0,457 0,409

Генотип Arg/Arg 0,077 0,114

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров в1у16Аи в1и27в1п гена АОКВ2 в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 7-8) Таким образом, полиморфные маркеры С1у16Аг% и &и2701п гена АОЯВ2 не ассоциированы с развитием ИБС у русских г Москвы

Несмотря на неудачный итог исследований ассоциации полиморфизмов генов АОШ1 и АОЯВ2 с сердечно-сосудистыми заболеваниями как в мире, так и в нашей работе, интересным представляется дальнейшее изучение эти полиморфизмов в области фарма-когеномики препаратов, применимых при лечении ИБС и гипертонии, таких как бета-адреноблокаторы

Таблица 8.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера аи2701п гена АВРВ2 в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель Glu 0,577 0,545 0,74 0,39

Аллель Gin 0,423 0,455

Генотип Glu/Glu 0,403 0,386 1,06 0,59

Генотип Glu/Gin 0,348 0,318

Генотип Gln/Gln 0,249 0,295

и

1,6. Исследование ассоциации полиморфного маркера G7831A гена А СЕ с ИБС.

Регуляция кровообращения осуществляется за счет сложного взаимодействия двух прессорных систем - симпато-адреналовой и ренин-ангиотензиновой Ренин-ангиотеизиновая система (РАС) отвечает за регуляцию тонуса кровеносных сосудов, поддержание водно-солевого гомеостаза, обеспечивает питание и стимулирует пролиферацию клеток гладкой мускулатуры сосудов и миокарда Таким образом, РАС напрямую вовлечена в физиологическую регуляцию кровяного давления, и гены, кодирующие компоненты данной системы, могут рассматриваться в качестве генов-кандидатов, чьи продукты участвуют в развитии сосудистых патологий Помимо общециркуляторной системы существуют автономные и специфичные локальные РАС (сосудистые, миокардиальная) Фермент ренин (синтезируется юкстагломерулярными клетками почек), являясь дипептидилкарбоксипеп-тидазой, катализирует реакцию превращения неактивного белка антиотензиногена, секре-тируемого печенью, в ангиотензин I (AI) (Asp-Arg- Val- Tyr-Ile-His-Pro-Phe-VLis-Leu) Последний, в свою очередь, под действием другой карбоксипептидазы (фермента, превращающего ангиотензин I, локализованного на поверхности клеток эндотелия) превращается в регуляторный вазоактивный октапептид ангиотензин II (All) (Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe) All повышает артериальное давление, вызывая спазм артериол

Наиболее изученным полиморфизмом гена АСЕ, кодирующего фермент, превращающий ангиотензин I, является полиморфизм типа вставка/отсутствие вставки (insertion/deletion, I/D). Показано, что полиморфизм типа I/D связан со степенью экспрессии данного гена и, следовательно, с содержанием фермента в плазме К настоящему времени накоплено множество данных об ассоциации I/D полиморфизма гена АСЕ с инфарктом миокарда (Cambien et al, 1992, Tiret et al., 1993, Kamitam et al, 1995), заболеваниями почек (Tanaka et al, 1998) и сосудистыми осложнениями сахарного диабета (Fujisawa et al, 1995, Keavney et al, 1995, Huang et al, 1998) Но работы, посвященные изучению ассоциации этого и других полиморфных маркеров гена АСЕ с ИБС, показали как наличие предрасположенности, так и ее отсутствие в зависимости от рассматриваемых факторов риска, что требует дальнейшего изучения взаимосвязи полиморфизмов гена АСЕ и клинических проявлений сердечно-сосудистых патологий Нами был выбран полиморфный маркер G7831A, расположенный в интроне 7 гена АСЕ

Таблица 9.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера 07831А гена АСЕ в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение 5С2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель А 0,401 0,333 3,60 0,06

Аллель в 0,599 0,667

Генотип АА 0,131 0,091 4,14 0,13

Генотип А в 0,540 0,485

Генотип вС 0,329 0,424

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера 07831А гена АСЕ в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 9) Таким образом, полиморфный маркер в7831А гена АСЕ не ассоциирован с развитием

ИБС у русских г Москвы

1.7. Исследование ассоциации полиморфных маркеров LeuS4Phe и Val762Ala гена

ADPRT1 с ИБС.

Поли(АДФ-рибоза)-полимераза (PARP1) играет существенную роль в распознавании повреждений и репарации ДНК PARP1 интенсивно связывается с одиночными и двойными разрывами ДНК, образовавшимися при непосредственном повреждении ДНК или при ферментативном воздействии во время репарации ДНК. Дальнейший процесс синтеза по-ли(АДФ-рибозы) предшествует началу репарации поврежденной ДНК Цепи полимера, синтезированные в ядрах в ответ на мутагенное воздействие, распадаются через 1-2 минуты после завершения их синтеза благодаря действию гидролазы поли(АДФ-рибозы) -PARG

Недавние исследования показали патогенетическую роль окислительного стресса и сопутствующих процессов, таких как активация металлопротеиназ (семейство ММР) и по-ли(АФД-рибоза)-полимеразы, в различных формах сердечно-сосудистых патологий (Li et al, 2001, Sorescu et al, 2002, Tyagi et al, 2003, Berry et al, 2004, Ferrari et al., 2004, Szabo et al, 2004) Была продемонстрирована повышенная активность поли(АДФ-рибоза)-полимеразы в тканях сердца при сердечной недостаточности по сравнению со здоровыми донорами, что явилось клеточным ответом на возросшие уровни конечных продуктов гли-козилирования вследствие окислительного стресса (Molnar et al, 2006)

Таблица 10.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Ьеи54Рке гена АОРКТ1 в группах "ИБС+"и"ИБС-"

Очевидно, что гены, кодирующие компоненты ферментных систем, участвующих в защите клеток от воздействия окислительного стресса и свободных радикалов, являются генами-кандидатами для изучения ассоциации с развитием атеросклероза и дальнейших осложнений, так как окислительный стресс стал рассматриваться в последнее время как один из главных факторов возникновения

атеросклеротических бляшек и эндотелиаль-ных дисфункций

Ген АГ>РКГ1, кодирующий поли(АДФ-рибоза)-полимеразу

РАЙИ, состоит из двух функционально различающихся частей КГ-концевого ДНК-связывающего и С-концевого каталитического доменов Между ними находится домен ау-томодификации Известен ряд полиморфизмов в этом гене из которых наиболее изученными являются Ьеи54РИе, расположенный в экзоне 2 в области «цинковых пальцев», и Уа17б2А1а, расположенный в экзоне 17 в начале каталитического домена Исследований ассоциации этих полиморфных маркеров с ИБС или другими сердечно-сосудистыми патологиями до настоящего времени не проводилось

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров Ьеи54РИе и Уа1762А1а гена АЛРЯТ]в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл. 10-11), но полученные значения

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель Leu 0,390 0,462 4,01 0,05

Аллель Phe 0,610 0,538

Генотип Leu/Leu 0,185 0,288 5,82 0,05

Генотип Leu/Phe 0,409 0,348

Генотип Phe/Phe 0,406 0,364

Таблица 11. Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Уа1762А1а гена АВРКГ! в группах "ИБС+" и"ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель Val 0,850 0,879 1,28 0,26

Аллель Ala 0,150 0,121

Генотип Val/Val 0,760 0,803 1,01 0,60

Генотип Val/Ala 0,179 0,152

Генотип Ala/Ala 0,061 0,045

уровней значимости для алелей и генотипов полиморфного маркера Leu54Phe указывают на возможную малочисленность выборки, что не позволило обнаружить ассоциацию с ИБС На основе полученных данных можно говорить о тенденции повышения частоты генотипа Phe/Phe и понижения частоты генотипа Leu/Leu в группе "ИБС+" и о возможном предрасполагающем и защитном действиях этих генотипов соответственно

Таким образом, полиморфные маркеры Leu54Phe и Val762Ala гена ADPRT1 не ассоциированы с развитием ИБС у русских г. Москвы

1.8. Исследование ассоциации полиморфного маркера A(-431)G гена PARG с

ИБС.

Ген PARG кодирует недавно открытую гидролазу поли(АДФ-рибозы) и действует в клетке в тесном взаимодействии с поли(АДФ-рибоза)-полимеразой В настоящий момент основная часть исследований посвящена установлению структуры и функций поли(АФД-рибоза)-гидролазы и данные по изучению ассоциации гена PARG с какими-либо заболеваниями отсутствуют Для изучения ассоциации с ИБС нами был выбран однонуклеотидный полиморфизм A(-431)G, расположенный в промоторной области гена PARG

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера A(~431)G гена PARG в группах "ИБС+" и "ИБС-" статистически достоверных различий получено не было (табл 12)

Таким образом, полиморфный маркер A(-431)G гена PARG не ассоциирован с развитием ИБС у русских г. Москвы

1.9. Исследование ассоциации полиморфного маркера С242Т гена CYBA с ИБС.

Выше была отмечена роль окислительного стресса в развитии сердечно-сосудистых патологий Потенциальными источниками высокореакционных частиц в сердце являются митохондрии, NO-синтетазы и оксидазы НАДФ Все оксидазы НАДФ состоят из каталити-

Таблица 12.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и геноти-

пов полиморфного маркера A(-431)G тепа PARG в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Уровень значимости Р

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Аллель Л 0,800 0,761 1,69 0,19

Аллель в 0,200 0,239

Генотип АА 0,681 0,621 1,48 0,48

Генотип Ай 0,240 0,280

Генотип вв 0,080 0,098

ческой субъединицы Nox (существует пять подтипов Noxl-5) и субъединицы с низкой молекулярной массой p22phox, общей для всех оксидаз НАДФ Было установлено, что экспрессия Nox2, Nox4 (эти субъединицы являются основными субъединицами НАДФ-оксидаз в сердце) и p22phox увеличивается после инфаркта миокарда (Fukui et al, 2001), а количество супероксидных радикалов, образуемых оксидазами НАДФ, возрастает при различным эндотелиальных дисфункциях (Bauersachs et al., 1999) Все это дает основания предполагать, что полиморфные маркеры в генах, кодирующих субъединицы НАДФ-оксидаз, могут быть ассоциированы с развитием различных сердечно-сосудистых патологий

Наиболее изученным полиморфным маркером гена, кодирующего субъединицу p22phox, является полиморфизм С/Г в положении 242 мРНК, которому соответствует аминокислотная замена His на Туг в положении 72 аминокислотной последовательности белка p22phox Ряд исследований обнаружили ассоциацию этого полиморфного маркера с неблагоприятными исходами при ИБС (Kuroda et al, 2007), гипертонией (Moreno et al, 2006) и ишемической болезнью сердца (Mata-Balaguer et al., 2004) в различных еворопейских популяциях, но подобных исследований среди русских не проводилось

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С242Т гена CYBA (табл 13) были обнаружены статистически достоверные различия Было показано, что носители аллеля Г и генотипа ТТ имеют повышенный риск развития ИБС (OR = 1,49 и 3,90, соотв), в то время как носители аллеля С - пониженный риск (OR - 0,67)

Таким образом, полиморфный маркер С242Т гена CYBA ассоциирован с развитием ИБС у русских г. Москвы.

Таблица 13.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С242Ттет СУВА в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости Р OR [CI95%]

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п= 132)

Аллель С 0,746 0,814 4,85 0,03 0,67 [0,47-0,96]

Аллель Т 0,254 0,186 1,49 [1,04-2,14]

Генотип СС 0,601 0,659 7,31 0,03 -

Генотип СТ 0,291 0,311 -

Генотип ТТ 0,109 0,030 3,90 [1,36-11,22]

1.10. Исследование ассоциации полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с ИБС. G-белки экспрессируются во всех клетках человеческого организма и играют главную роль в передаче сигналов от множества рецепторов с поверхности клетки G-белки являются гетеротримерами и состоят из a-, ß- и у-субъединиц Семейство G-белков насчитывает 18 а-субъединиц, 5 ß-субъединиц и 12 у-субъединиц, кодируемых различными генами (Downes et al, 1999), что позволяет образовывать различные варианты гетеротримеров Было показано, что вид a-, ß- и у-субъединиц определяет специфичность образуемого ими G-белка (Gautam et al, 1998)

Из-за ключевого положения G-белков в системе передачи сигналов, предполагается, что мутации, изменяющие экспрессию или структуру этих белков, вносят свой вклад в большое количество заболеваний. Было найдено большое количество полиморфизмов в генах, кодирующих различные субъединицы G-белков, но наиболее интересным оказался полиморфный маркер С825Т гена GNB3, который кодирует GßS-субъединицу Этот полиморфизм расположен в экзоне 10 и связан с альтернативным сплайсингом экзона 9, который приводит к укороченному варианту субъединицы Gß3, называемому Gß3s (Siffert et al, 1998) Позже были найдены полиморфные маркеры A(-3S0)G, расположенный в промотор-ной области гена GNB3, и С1429Т, расположенный в 3' -нетраслируемой области гена GNB3, но оба они оказались функционально незначимыми (Rosskopf et al, 2000) Биохимические исследования доказали, что вариант Gß3s может образовывать димеры с различными у-субъединицами (Rosskopf, Koch et al, 2003, Rosskopf, Manthey et al, 2003) Эти исследования также подтвердили, что аллель 825Т приводит к образованию варианта Gß3s, обладающего повышенной биологической активностью, что значительно усиливает способности образуемых G-белков к передаче сигналов (Virchow et al, 1999, Lindemann et al, 2001) Все это вместе дает основания рассматривать аллель 82ST полиморфного маркера С825Т гена GNB3 в качестве генетического маркера усиленной сигнальной трансдукции

К настоящему времени проведено большое количество исследований, посвященных изучения ассоциации полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с гипертонией (Benjafield et al., 1998, Siffert et al., 1998, Hengstenberg et al, 2001), атеросклерозом (Schafers et al, 2001, Hanon et al., 2002, Nürnberger et al, 2004) и ИБС (von Beckerath et al, 2000, von Beckerath et al., 2003) Данные этих исследований носят противоречивый характер и сравнение их затруднено в силу различных подходов к формированию выборок, этнических неоднородно-стей и методов обработки результатов, что безусловно потребовало проведения аналогичного исследования в России, которое для полиморфизма С825Т гена GNB3 было проведено впервые.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С825Т гена ОИВЗ (табл 14) были обнаружены статистически достоверные различия Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск развития ИБС (ОЯ = 1,55 и 1,63, соотв ), в то время как носители аллеля Г- пониженный риск (СУ? = 0,65) Таким образом, полиморфный маркер С825Т гена йИВЗ ассоциирован с развитием ИБС у русских г Москвы

Таблица 14.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С825Т гена вИВЗ в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости Р 011

"ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п=132)

Аллель С 0,759 0,670 7,40 0,01 1,55 [1,13-2,12]

Аллель Т 0,241 0,330 0,65 [0,47 - 0,89]

Генотип СС 0,591 0,470 6,76 0,03 1,63 [1,08-2,46]

Генотип СТ 0,335 0,402 -

Генотип ТТ 0,073 0,129 -

На основании полученных результатов можно сделать вывод о том, что в развитии ИБС существенную роль играют гены, кодирующие факторы, определяющие уровень образования супероксидных радикалов (СУВА), эффективность регуляции энергетичского баланса (РРА1Ф) и скорость передачи сигналов (ОЫВЗ)

выводы.

1 Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов PPARG3, PPARGC1A, PPARD, ADRB1, ADRB2, АСЕ, GNB3, ADPRT1, PARG и СУВА в группах больных ишемической болезнью сердца, а также в контрольной группе русских г Москвы

2 Для ряда полиморфных маркеров генов PPARG3, PPARGC1A, ADRB1, ADRB2, АСЕ, ADPRT1 и PARG показано отсутствие ассоциации с ишемической болезнью сердца и инфарктом миокарда у русских г Москвы

3 Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Т(-87)С гена PPARD с развитием ишемической болезни сердца у русских г Москвы Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск, в то время как носители аллеля Т и генотипа ТС -пониженный риск развития ИБС

4 Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Tyr72His гена CYBA с развитием ишемической болезни сердца у русских г Москвы Было показано, что носители генотипа Туг/Туг имеют повышенный риск, в то время как носители генотипа Hys/Hys - пониженный риск развития ИБС

5 Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с развитием ишемической болезни сердца у русских г Москвы Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск, в то время как носители аллеля Т - пониженный риск развития ИБС

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Никитин, А Г , Горашко, Н М, Минушкина, Л О , Кудряшова, О Ю, Затейщиков, Д А, Сидоренко, Б А, Носиков, В.В (2003) Изучение ассоциации полиморфного маркера G7831A гена АСЕ с ишемической болезнью сердца в московской популяции Молекулярная биология, 32(1), 54-56

2 Никитин, А.Г, Чудакова, Д А, Спицина, Е В , Минушкина, Л О , Затейщиков, Д А , Носиков, В В , Дебабов, В.Г (2007) Ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с ишемической болезнью сердца Генетика, 43(8), 1129-33

3 Zateyshchikov, DA, Mmushkma, LO, Brovkin, AN, Savel'eva, EG., Zateyshchikova, A A, Manchaeva, В В , Nikitm, A G , Sidorenko, В A, Nosikov, V V (2007) Association of CYP2D6 and ADRB1 genes with hypotensive and antichronotropic action of betaxolol m patients with arterial hypertension Fundamental Climmcal Pharmacology, 21.(4), 437-43

4 Nosikov, V V , Zateyshchikov, D A., Nikitm, A G , Mmushkma, L О , Babunova, N В , Sidorenko, В A Association of MTHFR and GNB3 genes with coronary artery disease among Russians. Abstracts of the Second "Biologie Prospective" Conference "From Human Genetic Variations to Prediction of Risks and Responses to Drugs and Environment", p A54, Santonni Island, Greece (September 30 - October 4,2004)

5 Затейщиков, Д A, Никитин, А Г, Минушкина, Л О, Затейщикова, А А, Носиков, В В , Сидоренко, Б А Ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с регуляцией тонуса сосудов у больных ишемической болезнью сердца Материалы Российского национального конгресса кардиологов "Российская кардиология от центра к регионам", стр 174, г Томск, Россия (12-14 октября 2004 г )

6 Носиков, В В , Затейщиков, Д А, Никитин, А Г, Чумакова, О С , Воронько, О.Е., Минушкина, Л О, Бабунова, Н Б, Сидоренко, Б А Генетические основы наследственной предрасположенности к ишемической болезни сердца Анализ ассоциации генов GNB3, NOS3 и AT2R1 Материалы Российского национального конгресса кардиологов "Российская кардиология от центра к регионам", стр. 355, г Томск, Россия (12 - 14 октября 2004 г.)

7. Nosikov, V V, Zateyshchikov, D А, Nikitm, A G, Chumakova, О S , Savost'yanov, К V, Mmushkma, L О, Voron'ko, О E, Babunova, N В, Sidorenko, В A Genetic basis of inherited predisposition to coronary artery disease Abstracts of the 75th Congress of European Atherosclerosis Society, p 14 (Abstract W03-P-008), Prague, Czech Republic (April 23 - 26,2005).

8. Никитин, А Г, Затейщиков, Д А, Воронько, О.Е , Минушкина, Л О, Бабунова, Н Б , Чумакова, ОС, Горашко, НМ, Чудакова, ДА, Сидоренко, Б А, Носиков, ВВ. Генетические основы наследственной предрасположенности к ишемической болезни сердца Материалы V Съезда Российского общества медицинских генетиков, стр 238, г Уфа, Россия (24 - 27 мая 2005)

9 Zateyshchikov, D А, Dankovtseva, Е N, Nikitm, A G, Koroleva, О S , Brovkin, А N, Yakumna, N Yu, Chudakova, D A, Nosikov, V V, Sidorenko, В A Genetic predisposition to early onset of coronary artery disease Abstracts of the XIV International Symposium on Atherosclerosis, p. 131 (Abstract Mo-P6 387), Rome, Italy (June 18-22, 2006)

10 Zateyshchikov, DA, Nosikov, VV, Brovkin, AN, Minushkma, LO, Nikitm, AG, Sidorenko, В A Relationship between clinical response to betaxolol (lokren) in Russian patients with essential hypertension and polymorphous markers of ADRB1, CYP1A1, CYP1A2 and CYP2D6 genes Abstracts of the Third "Biologie Prospective" Conference "From Human Genetic Variations to Prediction of Risks and Responses to Drugs and Environment", p.A77 - A78, Santonm Island, Greece (September 29 - October 2,2006)

11 Носиков, B.B, Затейщиков, ДА, Никитин, АГ, Чумакова, ОС, Бровкин, АН, Минушкина, Л О, Чудакова, Д А, Шестаков, А Е, Воронько, О Е, Бабунова, Н Б , Сидоренко, Б А Генетические основы наследственной предрасположенности к ишемической болезни сердца среди этнических русских, проживающих в Москве Материалы Российского национального конгресса кардиологов "От диспансеризации к высоким технологиям", стр 263, Москва, Россия (10-12 октября 2006 г )

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25 09.2000 г. Подписано в печать 22 02 08 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,43 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Никитин, Алексей Георгиевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Полиморфные маркеры.

1.1.1. Типы полиморфизмов и методы их исследования.

1.1.2. Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики многофакторных заболеваний.

1.2. Ишемическая болезнь сердца: общая характеристика заболевания.

1.2.1. Основные аспекты этиологии и патогенеза ИБС.

1.2.2. Генетические факторы риска ИБС.

1.3. Характеристика исследованных в работе генов и полиморфных маркеров.

1.3.1. Рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типауЗ

PPARG3).

1.3.2. Коактиватор 1а рецептора, активируемого пролифератором пероксисом типа у (PPARGC1A).

1.3.3. Рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа

СPPARD).

1.3.4; Адренорецепторы pi, р2 (.ADRB1, ADRB2).

1.3.5. Фермент, превращающий ангиотензин 1 {АСЕ).

1.3.6. (33-субъединица G-белка (GNB3).

1.3.7. Поли(АДФ-рибоза)-полимераза 1 (ADPRT1).

1.3.8. Поли(АДФ-рибоза)-гидролаза (PARG).

1.3.9. а-субъединица цитохрома b(-245) (CYBA).

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Реактивы и ферменты.

2.2. Буферные растворы.

2.3. Формирование групп больных и здоровых индивидов.

2.4. Выделение геномной ДНК человека методом фенол-хлороформной экстракции.

2.5. Амплификация ДНК.

2.6. Расщепление продуктов амплификации рестриктазами.

2.7. Электрофоретическое разделение ДНК.

2.8. Статистическая обработка результатов.

2.8.1. Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов.

2.8.2. Оценка относительного риска. Odds ratio. Доверительный интервал.

2.8.3. Коррекция уровня значимости.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Общая характеристика исследованных групп.

3.2. Иследование ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов с ИБС.

3.2.1. Исследование ассоциации полиморфного маркера C(-681)G гена PPARG3cmC.

3.2.2. Исследование ассоциации полиморфного маркера Gly482Ser гена PPARGC1A с ИБС.

3.2.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера Т(—87)С гена PPARD с ИБС.

3.2.4. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Ser49Gly и Gly389Arg гена ADRB1 с ИБС.

3.2.5. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Glyl6Arg и Glu27Gln гена ADRB2 с ИБС.

3.2.6. Исследование ассоциации полиморфного маркера G7831A гена АСЕ с ИБС.

3.2.7. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Leu54Phe и Val762Ala гена ADPRT1 с ИБС.

3.2.8. Исследование ассоциации полиморфного маркера A(~431)G гена

PARG с ИБС.

3.2.9. Исследование ассоциации полиморфного маркера С242Тгена CYBA с ИБС.

3.2.10. Исследование ассоциации полиморфного маркера С825Тгена GNB3 с ИБС.

3.3. Коррекция уровней значимости.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с ишемической болезнью сердца"

В настоящее время сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной инвалидности и смертности в экономически развитых странах, при этом на долю ишемической болезни сердца (ИБС) и инфаркта миокарда приходится примерно две трети случаев смерти от сердечнососудистых заболеваний.

Известно, что данные сердечно-сосудистые патологии являются многофакторными заболеваниями с многочисленными звеньями патогенеза. Для таких заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. Исходя из современных представлений о механизмах развития ИБС, можно выделить группы так называемых генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.

Так как атеросклероз является основным этиологическим фактором ишемической болезни сердца, к генам-кандидатам, определяющим развитие ИБС и ее осложнений, можно отнести группу генов системы антиокислительной защиты, генов системы репарации ДНК и генов, кодирующих адренорецепторы и рецепторы, активируемые пролифераторами пероксисом. Современная стратегия исследования генетической составляющей многофакторных заболеваний включает в себя поиск полиморфных маркеров в генах-кандидатах и оценку их ассоциации с заболеванием.

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента. Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии б ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров.

Цели и задачи работы

Целью данной работы было изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с развитием ишемической болезни сердца.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, кодирующих рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа уЗ (PPARG3), коактиватор 1а рецептора, активируемого пролифератором пероксисом типа у (PPARGC1A), рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа 5 (PPARD), адренорецепторы [31, (32 (ADRB1, ADRB2), фермент, превращающий ангиотензин I (АСЕ), (33-субъединицу G-белка ОGNB3), поли(АДФ-рибоза)-полимеразу 1 (ADPRT1), поли(АДФ-рибоза)-гидролазу (PARG) и а-субъединицу цитохрома Ь(—245) (CYBA) в группе больных ишемической болезнью сердца и группе здоровых индивидов среди русских г. Москвы.

2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.

Научная новизна и практическая значимость работы

В данной работе впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров C(-681)G гена PPARG3, Gly482Ser гена PPARGC1A, Т(-87)С гена PPARD, Ser49Gly и GIy389Arg гена ADRB1, Glyl6Arg и GlulJGln гена ADRB2, G7831A гена АСЕ, С825Т гена GNB3, Leu64Phe и Val762Ala гена

ADPRT1, A(—43I)G гена PARC и Tyr72His гена СУВА с ишемической болезнью сердца (ИБС). Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Tyr72His гена СУВА с развитием ИБС. Установлено, что носители генотипа Туг/Туг данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа His/His имеют пониженный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Т(-87)С гена PPARD с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС. Все вышеизложенные результаты получены впервые.

Показано, что исследованные полиморфные маркеры генов СУВА, GNB3 и PPARD могут использоваться для прогноза течения заболевания у больных с ИБС. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов СУВА, GNB3 и PPARD с развитием ИБС открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Никитин, Алексей Георгиевич

выводы.

1. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов PPARG3, PPARGC1A, PPARD, ADRB1, ADRB2, АСЕ, GNB3, ADPRT1, PARG и CYBA в группах больных ишемической болезнью сердца, а также в контрольной группе русских г. Москвы.

2. Для ряда полиморфных маркеров генов PPARG3, PPARGC1A, ADRB1, ADRB2, АСЕ, ADPRT1 и PARG показано отсутствие ассоциации с ишемической болезнью сердца и инфарктом миокарда у русских г. Москвы.

3. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Т(-87)С гена PPARD с развитием ишемической болезни сердца у русских г. Москвы. Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск, в то время как носители аллеля Т и генотипа ТС — пониженный риск развития ИБС.

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Tyr72His гена CYBA с развитием ишемической болезни сердца у русских г. Москвы. Было показано, что носители генотипа Туг/Туг имеют повышенный риск, в то время как носители генотипа Hys/Hys - пониженный риск развития ИБС.

5. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с развитием ишемической болезни сердца у русских г. Москвы. Было показано, что носители аллеля С и генотипа СС имеют повышенный риск, в то время как носители аллеля Т- пониженный риск развития ИБС.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

На основании полученных результатов можно сделать вывод о том, что в развитии ИБС существенную роль играют гены, кодирующие факторы, определяющие уровень образования супероксидных радикалов ОCYBA), эффективность регуляции энергетического баланса (PPARD) и скорость передачи сигналов (GNB3).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Никитин, Алексей Георгиевич, Москва

1. Иванов, В.И., Геномика медицине под ред. В. И. Иванова и Л. Л. Киселева. 2005, М.: Академкнига. 392 с.

2. Щипков, В.П. and Г.Н. Кривошеина, Обгцая и медицинская генетика : Учеб. пособие для студентов высш. мед. учеб. заведений. 2003, М.: Academia. 252 с.

3. Гинтер, Е.К., Медицинская генетика : Учеб. для студентов мед. вузов. 2003, М.: Медицина. 446 с.

4. Тимолянова, Е.К., Медицинская генетика: Учеб. пособие для студентов образоват. учреждений сред. проф. образования, обучающихся по мед. специальностям. 2003, Ростов н/Д: Феникс. 303 с.

5. Brookes, A.J., The essence ofSNPs. Gene, 1999. 234(2): p. 177-86.

6. Lander, E.S., The new genomics: global views of biology. Science, 1996. 274(5287): p. 536-9.

7. Бочков, Н.П., Медицинская генетика : Учеб. для студентов мед. училищ и колледжей. Среднее профессиональное образование. 2001, М.: Мастерство. 190 с.

8. Saiki, R.K., S. Scharf, F. Faloona, K.B. Mullis, G.T. Horn, H.A. Erlich, and N. Arnheim, Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science, 1985.230(4732): p. 1350-4.

9. Schumm, J.W., R.G. Knowlton, J.C. Braman, D.F. Barker, D. Botstein, G. Akots, V.A. Brown, T.C. Gravius, C. Helms, K. Hsiao, and et al.,1.entification of more than 500 RFLPs by screening random genomic clones. Am J Hum Genet, 1988. 42(1): p. 143-59.

10. Thomson, G., Analysis of complex human genetic traits: an ordered-notation method and new tests for mode of inheritance. Am J Hum Genet, 1995. 57(2): p. 474-86.

11. Mackness, M.I., B. Mackness, P.N. Durrington, P.W. Connelly, and R.A. Hegele, Paraoxonase: biochemistry, genetics and relationship to plasma lipoproteins. Curr Opin Lipidol, 1996. 7(2): p. 69-76.

12. Witztum, J.L., The role of oxidized LDL in atherosclerosis. Adv Exp Med Biol, 1991. 285: p. 353-65.

13. Witztum, J.L. and D. Steinberg, Role of oxidized low density lipoprotein in atherogenesis. J Clin Invest, 1991. 88(6): p. 1785-92.

14. Heinecke, J.W., Oxidants and antioxidants in the pathogenesis of atherosclerosis: implications for the oxidized low density lipoprotein hypothesis. Atherosclerosis, 1998. 141(1): p. 1-15.

15. Berliner, J.A. and J.W. Heinecke, The role of oxidized lipoproteins in atherogenesis. Free Radic Biol Med, 1996. 20(5): p. 707-27.

16. Berry, C.E. and J.M. Hare, Xanthine oxidoreductase and cardiovascular disease: molecular mechanisms and pathophysiological implications. J Physiol, 2004. 555(Pt 3): p. 589-606.

17. Ferrari, R., G. Guardigli, D. Mele, G.F. Percoco, C. Ceconi, and S. Curello, Oxidative stress during myocardial ischaemia and heart failure. Curr Pharm Des, 2004. 10(14): p. 1699-711.

18. Li, Y.Y. and A.M. Feldman, Matrix metalloproteinases in the progression of heart failure: potential therapeutic implications. Drugs, 2001. 61(9): p. 1239-52.

19. Sorescu, D. and K.K. Griendling, Reactive oxygen species, mitochondria, and NAD(P)H oxidases in the development and progression of heart failure. Congest Heart Fail, 2002. 8(3): p. 132-40.

20. Szabo, G., L. Liaudet, S. Hagl, and C. Szabo, Poly(ADP-ribose) polymerase activation in the reperfused myocardium. Cardiovasc Res, 2004. 61(3): p. 471-80.

21. Tyagi, S.C. and M.R. Hayden, Role of nitric oxide in matrix remodeling in diabetes and heart failure. Heart Fail Rev, 2003. 8(1): p. 23-8.

22. Molnar, A., A. Toth, Z. Bagi, Z. Papp, I. Edes, M. Vaszily, Z. Galajda, J.G. Papp, A. Varro, V. Szuts, Z. Lacza, D. Gero, and C. Szabo, Activation of the poly(ADP-ribose) polymerase pathway in human heart failure. Mol Med, 2006. 12(7-8): p. 143-52.

23. Fukui, Т., M. Yoshiyama, A. Hanatani, T. Omura, J. Yoshikawa, and Y. Abe, Expression of p22-phox and gp9l-phox, essential components of NADPH oxidase, increases after myocardial infarction. Biochem Biophys Res Commun, 2001. 281(5): p. 1200-6.

24. Zeiher, A.M., T. Krause, V. Schachinger, J. Minners, and E. Moser, Impaired endothelium-dependent vasodilation of coronary resistance vessels is associated with exercise-induced myocardial ischemia. Circulation, 1995. 91(9): p. 2345-52.

25. Zeiher, A.M., Endothelial vasodilator dysfunction: pathogenetic link to myocardial ischaemia or epiphenomenon? Lancet, 1996. 348 Suppl 1: p. si 0-2.

26. Ohara, Y., Т.Е. Peterson, and D.G. Harrison, Hypercholesterolemia increases endothelial superoxide anion production. J Clin Invest, 1993. 91(6): p. 2546-51.

27. Гогин, E.E., Гипертоническая болезнь Новое в диагностике и лечении. Клинич. оценка причин и механизмов развития. 1997, М.: Известия. 399 с.

28. Cambien, F., O. Poirier, C. Mallet, and L. Tiret, Coronary heart disease and genetics in epidemiologist's view. Mol Med Today, 1997. 3(5): p. 197203.

29. Lusis, A.J., Atherosclerosis. Nature, 2000. 407(6801): p. 233-41.

30. NavaiTO-Lopez, F., Genes and coronary heart disease. Rev Esp Cardiol, 2002. 55(4): p. 413-31.

31. Lusis, A.J., A.M. Fogelman, and G.C. Fonarow, Genetic basis of atherosclerosis: part II: clinical implications. Circulation, 2004. 110(14): p. 2066-71.

32. Lusis, A.J., A.M. Fogelman, and G.C. Fonarow, Genetic basis of atherosclerosis: part I: new genes and pathways. Circulation, 2004. 110(13): p. 1868-73.

33. Lusis, A. J., R. Mar, and P. Pajukanta, Genetics of atherosclerosis. Annu Rev Genomics Hum Genet, 2004. 5: p. 189-218.

34. Brown, M.S. and J.L. Goldstein, A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis. Science, 1986. 232(4746): p. 34-47.

35. Wilson, P.W., E.J. Schaefer, M.G. Larson, and J.M. Ordovas, Apolipoprotein E alleles and risk of coronary disease. A meta-analysis. Arterioscler Thromb Vase Biol, 1996.16(10): p. 1250-5.

36. Liu, A.C. and R.M. Lawn, Vascular interactions of lipoprotein (a). Curr OpinLipidol, 1994. 5(4): p. 269-73.

37. Wittrup, H.H., A. Tybjaerg-Hansen, and B.G. Nordestgaard, Lipoprotein lipase mutations, plasma lipids and lipoproteins, and risk of ischemic heart disease. A meta-analysis. Circulation, 1999. 99(22): p. 2901-7.

38. Gotto, A.M., Jr., Triglyceride as a risk factor for coronary artery disease. Am J Cardiol, 1998. 82(9A): p. 22Q-25Q.

39. Lusis, A., A. Weinreb, and T. Drake, Genetics of atherosclerosis, in Textbook of Cardiovascular Medicine. 1998, Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia.

40. Miettinen, H.E., K. Korpela, L. Hamalainen, and K. Kontula, Polymorphisms of the apolipoprotein and angiotensin converting enzyme genes in young North Karelian patients with coronary heart disease. Hum Genet, 1994. 94(2): p. 189-92.

41. Glisic, S., J. Prljic, N. Radovanovic, and D. Alavantic, Study of apoB gene signal peptide insertion/deletion polymorphism in a healthy Serbian population: no association with serum lipid levels. Clin Chim Acta, 1997. 263(1): p. 57-65.

42. Wilson, P.W., R.H. Myers, M.G. Larson, J.M. Ordovas, P.A. Wolf, and E.J. Schaefer, Apolipoprotein E alleles, dyslipidemia, and coronary heart disease. The Framingham Offspring Study. JAMA, 1994. 272(21): p. 166671.

43. Hokanson, J.E., Lipoprotein lipase gene variants and risk of coronary disease: a quantitative analysis of population-based studies. Int J Clin Lab Res, 1997. 27(1): p. 24-34.

44. Agerholm-Larsen, В., B.G. Nordestgaard, and A. Tybjaerg-Hansen, ACE gene polymorphism in cardiovascular disease: meta-analyses of small and large studies in whites. Arterioscler Thromb Vase Biol, 2000. 20(2): p. 484-92.

45. Keavney, В., Genetic association studies in complex diseases. J Hum Hypertens, 2000. 14(6): p. 361-7.

46. Jeron, A., C. Hengstenberg, S. Engel, H. Lowel, G.A. Riegger, H. Schunkert, and S. Holmer, The D-allele of the ACE polymorphism is related to increased ОТ dispersion in 609 patients after myocardial infarction. Eur Heart J, 2001. 22(8): p. 663-8.

47. Gardemann, A., M. Harnami, N. Katz, H. Tillmann, and W. Haberbosch, The chyrnase A(-1903)G gene polymorphism is not associated with the risk and extent of coronary heart disease. Atherosclerosis, 2000. 150(2): p. 4456.

48. Patel, S., R. Steeds, K. Channer, and N.J. Samani, Analysis of promoter region polymorphism in the aldosterone synthase gene (CYP11B2) as a risk factor for myocardial infarction. Am J Hypertens, 2000.13(2): p. 134-9.

49. Ortlepp, J.R., O. Breithardt, F. Ohme, P. Hanrath, and R. Hoffmann, Lack of association among five genetic polymorphisms of the renin-angiotensin system and cardiac hypertrophy in patients with aortic stenosis. Am Heart J, 2001. 141(4): p. 671-6.

50. DeFronzo, R.A. and E. Ferrannini, Insulin resistance. A multifaceted syndrome responsible for NIDDM, obesity, hypertension, dyslipidemia, and atherosclerotic cardiovascular disease. Diabetes Care, 1991. 14(3): p. 17394.

51. Grundy, S.M., Small LDL, atherogenic dyslipidemia, and the metabolic syndrome. Circulation, 1997. 95(1): p. 1-4.

52. Reaven, G.M., Y.D. Chen, J. Jeppesen, P. Maheux, and R.M. Krauss, Insulin resistance and hyperinsulinemia in individuals with small, dense low density lipoprotein particles. J Clin Invest, 1993. 92(1): p. 141-6.

53. Sanchez-Recalde, A. and J. Carlos Kaski, Diabetes mellitus, inflammation and coronaiy atherosclerosis: current and future perspectives. Rev Esp Cardiol, 2001. 54(6): p. 751-63.

54. Martin, B.C., J.H. Warram, A.S. Krolewski, R.N. Bergman, J.S. Soeldner, and C.R. Kahn, Role of glucose and insulin resistance in development of type 2 diabetes mellitus: results of a 2 5-year follow-up study. Lancet, 1992. 340(8825): p. 925-9.

55. Despres, J.P., B. Lamarche, P. Mauriege, B. Cantin, G.R. Dagenais, S. Moorjani, and P.J. Lupien, Hyperinsul in em ia as an independent risk factor for ischemic heart disease. N Engl J Med, 1996. 334(15): p. 952-7.

56. Inoue, N., S. Kawashima, K. Kanazawa, S. Yamada, H. Akita, and M. Yokoyama, Polymorphism of the NADH/NADPH oxidase p22 phox gene in patients with coronary artery disease. Circulation, 1998. 97(2): p. 135-7.

57. Schachinger, V., M.B. Britten, S. Dimmeler, and A.M. Zeiher, NADH/NADPH oxidase p22 phox gene polymorphism is associated with improved coronary endothelial vasodilator function. Eur Heart J, 2001. 22(1): p. 96-101.

58. Boushey, C.J., S.A. Beresford, G.S. Omenn, and A.G. Motulsky, A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease. Probable benefits of increasing folic acid intakes. JAMA, 1995. 274(13): p. 1049-57.

59. Sanghera, D.K., N. Saha, and M.I. Kamboh, The codon 55 polymorphism in the paraoxonase I gene is not associated with the risk of coronary heart disease in Asian Indians and Chinese. Atherosclerosis, 1998. 136(2): p. 217-23.

60. Woods, A., D.J. Brull, S.E. Humphries, and H.E. Montgomery, Genetics of inflammation and risk of coronary artery disease: the central role of interleukin-6. Eur Heart J, 2000. 21(19): p. 1574-83.

61. Momiyama, Y., R. Hirano, H. Taniguchi, H. Nakamura, and F. Ohsuzu, Effects of interleukin-1 gene polymorphisms on the development of coronary artery disease associated with Chlamydia pneumoniae infection. J Am Coll Cardiol, 2001. 38(3): p. 712-7.

62. Gonzalez, P., R. Alvarez, A. Batalla, J.R. Reguero, V. Alvarez, A. Astudillo, G.I. Cubero, A. Cortina, and E. Coto, Genetic variation at the chemokine receptors CCR5/CCR2 in myocardial infarction. Genes Immun, 2001. 2(4): p. 191-5.

63. Hubacek, J.A., G. Rothe, J. Pit'ha, Z. Skodova, V. Stanek, R. Poledne, and G. Schmitz, C(-260)-->T polymorphism in the promoter of the CD 14 monocyte receptor gene as a risk factor for myocardial infarction. Circulation, 1999. 99(25): p. 3218-20.

64. Sell, S.M., C. Song, and F.M. Booyse, PCR-RFLP genotyping assay for the Bel I polymorphism of the beta-fibrinogen gene. Genet Test, 2001. 5(1): p. 45-6.

65. Folsom, A.R., N. Aleksic, C. Ahn, E. Boerwinkle, and K.K. Wu, Beta-fibrinogen gene -455G/A polymorphism and coronary heart disease incidence: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study. Ann Epidemiol, 2001. 11(3): p. 166-70.

66. Anvari, A., E. Schuster, M. Gottsauner-Wolf, J. Wojta, and K. Huber, PAI-14G/5G polymorphism and sudden cardiac death in patients with coronary artery disease. Thromb Res, 2001. 103(2): p. 103-7.

67. Petrovic, D., M. Zorc, V. Kanic, and B. Peterlin, Interaction between gene polymorphisms of renin-angiotensin system and metabolic risk factors in premature myocardial infarction. Angiology, 2001. 52(4): p. 247-52.

68. Mikkelsson, J., M. Perola, A. Penttila, P.J. Goldschmidt-Clermont, and P.J. Karhunen, The GPIIIa (betaS integrin) PIA polymorphism in the early development of coronary atherosclerosis. Atherosclerosis, 2001. 154(3): p. 721-7.

69. Cecil, J.E., P. Watt, C.N. Palmer, and M. Hetherington, Energy balance and food intake: the role of PPARgamma gene polymorphisms. Physiol Behav, 2006. 88(3): p. 227-33.

70. Lehman, J .J., P.M. Barger, A. Kovacs, J.E. Saffitz, D.M. Medeiros, and D.P. Kelly, Peroxisome proliferator-activated receptor gamma cocictivator-l promotes cardiac mitochondrial biogenesis. J Clin Invest, 2000. 106(7): p. 847-56.

71. Huss, J.M. and D.P. Kelly, Nuclear receptor signaling and cardiac energetics. Circ Res, 2004. 95(6): p. 568-78.

72. Finck, B.N. and D.P. Kelly, PGC-1 coactivators: inducible regulators of energy metabolism in health and disease. J Clin Invest, 2006. 116(3): p. 615-22.

73. Lin, J., C. Handschin, and B.M. Spiegelman, Metabolic control through the PGC-1 family of transcription coactivators. Cell Metab, 2005. 1(6): p. 36170.

74. Soyal, S., F. Krempler, H. Oberkofler, and W. Patsch, PGC-lalpha: a potent transcriptional cofactor involved in the pathogenesis of type 2 diabetes. Diabetologia, 2006. 49(7): p. 1477-88.

75. Puigserver, P., Z. Wu, C.W. Park, R. Graves, M. Wright, and B.M. Spiegelman, A cold-inducible coactivator of nuclear receptors linked to adaptive thermogenesis. Cell, 1998. 92(6): p. 829-39.

76. Нага, К., K. Tobe, T. Okada, H. Kadowaki, Y. Akanuma, C. Ito, S. Kimura, and T. Kadowaki, A genetic variation in the PGC-J gene could confer insulin resistance and susceptibility to Type П diabetes. Diabetologia, 2002. 45(5): p. 740-3.

77. Xie, G., D. Guo, Y. Li, S. Liang, and Y. Wu, The impact of severity of hypertension on association of PGC-lalpha gene with blood pressure and risk of hypertension. BMC Cardiovasc Disord, 2007. 7: p. 33.

78. Aberle, J., I. Hopfer, F.U. Beil, and U. Seedorf, Association of the T+294C polymorphism in PPAR delta with low HDL cholesterol and coronaiy heart disease risk in women. Int J Med Sci, 2006. 3(3): p. 108-11.

79. Skogsberg, J., K. Kannisto, T.N. Cassel, A. Hamsten, P. Eriksson, and E. Ehrenborg, Evidence that peroxisome proliferator-activated receptor delta influences cholesterol metabolism in men. Arterioscler Thromb Vase Biol, 2003.23(4): p. 637-43.

80. Johnson, J.A. and S.G. Terra, Beta-adrenergic receptor polymorphisms: cardiovascular disease associations and pharmacogenetics. Pharm Res, 2002. 19(12): p. 1779-87.

81. Maqbool, A., A.S. Hall, S.G. Ball, and A.J. Balmforth, Common polymorphisms of beta 1-adrenoceptor: identification and rapid screening assay. Lancet, 1999. 353(9156): p. 897.

82. Rathz, D.A., K.M. Brown, L.A. Kramer, and S.B. Liggett, Amino acid 49 polymorphisms of the human beta 1-adrenergic receptor affect agonist-promoted trafficking. J Cardiovasc Pharmacol, 2002. 39(2): p. 155-60.

83. Mason, D.A., J.D. Moore, S.A. Green, and S.B. Liggett, A gain-of-function polymorphism, in a G-protein coupling domain of the human beta I-adrenergic receptor. J Biol Chem, 1999. 274(18): p. 12670-4.

84. Bengtsson, К., O. Melander, M. Orho-Melander, U. Lindblad, J. Ranstam, L. Rastam, and L. Groop, Polymorphism in the beta(I)-adrenergic receptor gene and hypertension. Circulation, 2001. 104(2): p. 187-90.

85. Borjesson, M., Y. Magnusson, A. Hjalmarson, and B. Andersson, A novel polymorphism in the gene coding for the beta(l)-adrenergic receptor associated with survival in patients with heart failure. Eur Heart J, 2000. 21(22): p. 1853-8.

86. Liggett, S.B., Polymorphisms of the beta2-adrenergic receptor and asthma. Am J Respir Crit Care Med, 1997.156(4 Pt 2): p. SI56-62.

87. Chong, L.K., J. Chowdry, P. Ghahramani, and P.T. Peachell, Influence of genetic polymorphisms in the beta2-adrenoceptor on desensitization in human lung mast cells. Pharmacogenetics, 2000. 10(2): p. 153-62.

88. Green, S.A., J. Turki, P. Bejarano, LP. Hall, and S.B. Liggett, Influence of beta 2-adrenergic receptor genotypes on signal transduction in human airway smooth muscle cells. Am J Respir Cell Mol Biol, 1995. 13(1): p. 2533.

89. Green, S.A., J. Turki, M. Innis, and S.B. Liggett, Amino-terminal polymorphisms of the human beta 2-adrenergic receptor impart distinct agonist-promoted regulatory properties. Biochemistry, 1994. 33(32): p. 9414-9.

90. Bengtsson, К., M. Orho-Melander, O. Melander, U. Lindblad, J. Ranstam, L. Rastam, and L. Groop, Beta(2)-adrenergic receptor gene variation and hypertension in subjects with type 2 diabetes. Hypertension, 2001. 37(5): p. 1303-8.

91. Rosmond, R., O. Ukkola, M. Chagnon, C. Bouchard, and P. Bjorntorp, Polymorphisms of the beta2-adrenergic receptor gene (ADRB2) in relation to cardiovascular risk factors in men. J Intern Med, 2000. 248(3): p. 23944.

92. Liggett, S.B., L.E. Wagoner, L.L. Craft, R.W. Hornung, B.D. Hoit, T.C. Mcintosh, and R.A. Walsh, The lie 164 beta2-adrenergic receptor polymorphism adversely affects the outcome of congestive heart failure. J Clin Invest, 1998. 102(8): p. 1534-9.

93. Bristow, M.R., beta-adrenergic receptor blockade in chronic heart failure. Circulation, 2000. 101(5): p. 558-69.

94. Tanaka, R., K. Iijima, R. Murakami, M. Koide, FI. Nakamura, and N. Yoshikawa, ACE gene polymorphism in childhood IgA nephropathy: association with clinicopathologic findings. Am J Kidney Dis, 1998. 31(5): p. 774-9.

95. Downes, G.B. and N. Gautam, The G protein subunit gene families. Genomics, 1999. 62(3): p. 544-52.

96. Gautam, N., G.B. Downes, K. Yan, and O. Kisselev, The G-protein betagamma complex. Cell Signal, 1998. 10(7): p. 447-55.

97. Siffert, W., D. Rosskopf, G. Siffert, S. Busch, A. Moritz, R. Erbel, A.M. Sharma, E. Ritz, H.E. Wichmann, K.H. Jakobs, and B. Horsthemke, Association of a human G-protein beta3 subunit variant with hypertension. Nat Genet, 1998. 18(1): p. 45-8.

98. Rosskopf, D., S. Busch, I. Manthey, and W. Siffert, G protein beta 3 gene: structure, promoter, and additional polymorphisms. Hypertension, 2000. 36(1): p. 33-41.

99. Rosskopf, D., K. Koch, C. Habich, J. Geerdes, A. Ludwig, S. Wilhelms, K.H. Jakobs, and W. Siffert, Interaction of Gbeta3s, a splice variant of the G-protein Gbeta3, with Ggamma- and Galpha-proteins. Cell Signal, 2003. 15(5): p. 479-88.

100. Lindemann, M., S. Virchow, F. Ramann, V. Barsegian, E. Kreuzfelder, W. Siffert, N. Muller, and H. Grosse-Wilde, The G protein beta3 submit 825T allele is a genetic marker for enhanced T cell response. FEBS Lett, 2001. 495(1-2): p. 82-6.

101. Benjafield, A.V., C.L. Jeyasingam, D.R. Nyholt, L.R. Griffiths, and B.J. Morris, G-protein beta3 subunit gene (GNB3) variant in causation of essential hypertension. Hypertension, 1998. 32(6): p. 1094-7.

102. Hanon, О., V. Luong, J J. Mourad, L.A. Bortolotto, M. Safar, and X. Girerd, Association between the G protein beta3 subunit 825t allele and radial artery hypertrophy. J Vase Res, 2002. 39(6): p. 497-503.

103. Moreno, M.U., G. San Jose, A. Fortuno, O. Beloqui, J. Diez, and G. Zalba, The C242T CYBA polymorphism of NADPH oxidase is associated with essential hypertension. J Hypertens, 2006. 24(7): p. 1299-306.

104. Le, C.T., Introductory biostatistics. 2003, Hoboken, N.J.: Wiley-Tnterscience. xvi, 536 p.

105. Sham, P.C. and D. Curtis, Monte Carlo tests for associations between disease and alleles at highly polymorphic loci. Ann Hum Genet, 1995. 59(Pt 1): p. 97-105.

106. Герасимов, A.H., Медьщинская статистика : учебное пособие для студентов медъщинских вузов. 2007, Москва: Мед. информ. агентство (МИА). 475 с.

107. Лукьянова, Е.А., Медицинская статистика : Учеб. пособие, 2. изд., испр. ed. 2003, М.: Изд-во Рос. ун-та дружбы народов. 245 с.

108. Медик, В.A. and М.С. Токмачев, Математическая статистика в медицине и биологии. 1998, Новгород. 242 с.

109. Реброва, О.Ю., Статистический анализ медиг{инских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. 2002, М.: Изд-во Медиа Сфера. 305 с.

110. Westfall, Р.Н. and S.S. Young, Resampling-based multiple testing : examples and methods for P-value adjustment. Wiley series in probability and mathematical statistics. Applied probability and statistics. 1993, New York: Wiley, xvii, 340 p.