Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетические факторы при сердечно-сосудистых заболеваниях: идентификация генов кандидатов и фармакогенетика терапии бетаксололом

ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Генетические факторы при сердечно-сосудистых заболеваниях: идентификация генов кандидатов и фармакогенетика терапии бетаксололом"

004613033

На правах рукописи

БРОВКИН АЛЕКСЕЙ НИКОЛАЕВИЧ

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ПРИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ: ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ И ФАРМАКОГЕНЕТИКА ТЕРАПИИ

БЕТАКСОЛОЛОМ

03.01.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискапие ученой степени кандидата биологических наук

1 8 НОЯ 2010

Москва - 2010

004613033

Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» (ФГУП «ГосНИИ генетика»).

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, ФГУП «ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов»,

г. Москва. Носиков Валерий Вячеславович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор,

ГУ Медико-генетический научный центр

РАМН, г. Москва. Залетаев Дмитрий Владимирович

доктор медицинских наук, профессор, Московский государственный медико-стоматологическиий университет им. H.A.

Семашко, г. Москва. Джаиани Нино Амирановна

Ведущая организация: Институт молекулярной

Защита состоится «16» ноября 2010 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д.217.013.01 при Государственном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов по адресу: 117545, Москва, 1-й Дорожный проезд, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика».

Реферат разослан «15» октября 2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

биологии РАН, г. Москва

кандидат химических наук

Т. Л. Воюшина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ), наравне с онкологическими заболеваниями и диабетом, прочно удерживают первенство среди самых распространенных заболевания в экономически развитых странах и значительное увеличение количества этих заболеваний иногда сравнивают с эпидемией. При этом на долю ишемической болезни сердца (ИБС) и иифаркта миокарда приходится примерно две трети случаев смерти от сердечно-сосудистых заболевший.

Исходя го современных представлений о механизмах развития ИБС, можно выделить группу генов-кандидатов, белковые продукты которых участвуют или потенциально могут быть вовлечены в патогенез ИБС. Так как атеросклероз является основным этиологическим фактором развития ишемической болезни сердца, к генам-кандидатам, определяющим развитие ИБС и ее осложнений, можно отнести группу генов, кодирующих белковые факторы системы липидного обмена.

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений б зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента. Поэтому з настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетичесхих маркеров.

При назначении медикаментозной терапии все более широкое распространение начинает получать подход, учитывающий индивидуальные генетические особенности пациента, в частности, структурную организацию его генома. Именно такой подход позволяет добиться максимальной эффективности, исключающей развитие осложнений и побочных эффектов.

Цель и задачи работы. Целью данной работы было изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с развитием ишемической болезни сердца и выявление генов, определяющих индивидуальную чувствительность к терапии бетаксалолом. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, кодирующих переносчик холестерина СБИР (АВСА1), переносчик эфиров холестерина

Г

¿цЛ7

СЕТР (СЕТР), липазу липопротеинов {LPL), редуктазу ГМГ-КоА (HMGCR), синтетазу сквалена (FDFT1), рецептор аполипопротеина Е (LRP1).

2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.

3. Провести идентификацию генотипов полиморфных маркеров генов цитохрома Р450 типа 1А2 (CYP1A2), p-адренорецептора типа 1 (ADRB1), p-адренорецептора типа 2 (ADRB2), p-адренорецептора типа 3 (ADRB3) в группе пациентов с мерцательной аритмией, принимавших бетаксолол и определить индивидуальную чувствительность к терапии бетаксололом носителей различных генотипов полиморфных маркеров этих генов.

Научная новизна работы. В данной работе впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров С(-1947)А гена HMGCR, G(-198)A гена FDFT1, TaqlB, С(-724)Т, Л(-629)С и Ile405Va! гена СЕТР, С(-565)Т гена ABCAL С200Т гена LRP1, SerWTer и Asn29ISer гена LPL с ишемической болезнью сердца (ИБС). Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(-565) Т гена ABC Al с развитием ИБС. Установлено, что носители генотипа ТТ данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа СС имеют пониженный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ser447Ter, гена LPL с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Тег и генотипа Тег/Тег данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС. Также обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ile405Val гена СЕТР с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Val и генотипа Val/Val данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(~1947)А гена HMGCR с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС. Все вышеизложенные результаты получены впервые.

Практическая ценность работы. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов АВСА1, LPL, СЕТР и HMGCR с развитием ИБС открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии. Полученные данные о влиянии полиморфного маркера А(-163)С гена CYP1A2 на эффективность терапии бетаксололом у больных мерцательной аритмией создают основу для индивидуализированной медицины.

Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на заседании.

Секции молекулярной биологии Ученого Совета ФГУП «ГосНИИ генетика» 21 мая 2010 г. Результаты настоящей работы докладывались на Российском национальном конгрессе кардиологов "Российская кардиология: от центра к регионам" (г. Томск, Россия, 12 - 14 октября 2004 г.); на Конгрессе Европейского общества атеросклероза (г. Прага, Чехия, 23 - 26 апрель, 2005); иа A7F-OM Международном симпозиуме по атеросклерозу (г. Рим, Италия, 18 - 22 июня, 2006); на /Я-ей международной конференции "Перспективное прогнозирование в биологии" (о. Саютрин, Греция, 29 сентября - 2 октября 2006 г.); на Российском национальном конгрессе кардиологов "От диспансеризации к высоким технологиям", (г. Москва, Россия, 10 - 12 октября 2006 г.) и на Л'-ой международной конференции "Перспективное прогнозирование в биологии" (о. Санторин, Греция, 21 - 23 сентября 2008 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, включая 5 статей, а также тезисы докладов и сообщений на конференциях.

Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, выводы и список литературы. Материалы диссертации изложены на 118 страницах машинописного текста и содержат 18 таблиц и 14 рисунков. В работе процитировано 154 зарубежных и 12 отечественных литературных источников.

СОДЕРЖАНИЕРАБОТЫ 1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов с ИБС проводили, используя две группы пациентов, общая характеристика которых приведена в таблице 1. В исследование включались пациенты с ИБС, поступившие в стационар Городской клинической больницы (ГКБ) № 51. Диагноз ставили на основании клинических и биохимических исследований и данных коронароангиографии (у части больных). У части больных ИБС был диагностирован инфаркт миокарда (ИМ). Контрольная группа представляла собой случайную выборку пациентов, имеющих аналогичный профиль основных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, у которых проведенная эхо- и электрокардиография не выявила достоверных признаков ИБС.

Выборки были этнически однородны и составлены из русских (на основании анкетных данных), проживающих в г. Москве. Геномную ДНК пациентов использовали для амплификации фрагментов ДНК, содержащих полиморфные маркеры ряда генов-

кандидатов, предположительно вовлеченных в патогенез атеросклероза и ишемической болезни сердца.

Анализ нуклеотидных последовательностей осуществляли с помощью системы NCBI в сети Интернет (www.ncbi.nlm.nih.gov). Использовали следующие разделы: MapView (построение генетической карты), dbSNP (информация о полиморфных маркерах). Для подбора праймеров и рестриктаз использовали пакет программ Invitrogen Vector NTI Advance 10 (версия Education).

Таблица 1.

Общая характеристика обследованных групп больных с наличием ("ИБС+") и

отсутствием ("ИБС-") ишемической болезни сердца.

Показатель "ИБС+" (п = 313) "ИБС-" (п = 132)

Возраст, лет (среднее значение ± 5 .0*) 60,2 ± 4,9 55,5+9,0

Пол (мужчины / женщины) 167/146 69/63

Курящие 66 15

Сахарный диабет типа 2 в анамнезе 67 0

Систолическое давление (мм.рт.ст.) 137,1 ± 1,18 144,1 ±1,82

Диастолическое давление (мм.рт.ст.) 81,7 ±0,59 88,8 ±0,97

Уровень холестерина (мм/л) 6,2 ± 0,09 5,6 ±0,21

Уровень триглицеридов (мм/л) 2,56 ±0,094 1,90 ±0,17

*5.0. - стандартное отклонение

Таблица 2.

Клиническая характеристика обследованной группы пациентов с мерцательной аритмией, принимавшей бетаксолол (п = 81)

Показатели До приема бетаксолола На фоне приема бетаксолола Динамика показателя

ЧСС на ЭКГ, (ударов в минуту) 114,14 ±3,680 94,12 ±3,106 20 ±3,15

Максимальная ЧСС (ударов в минуту) 160,16 ±3,646 128,22 ±3,343 31,9 ±3,05

Средняя ЧСС (ударов в минуту) 103,38 ±8,79 87,60 ±2,204 15,7 ±2,02

Минимальная ЧСС (ударов в минуту) 71,31 ±2,786 64,16 ±2,244 7,15 ±2,07

Идентификация аллелей полиморфных маркеров проводилась с использованием полимеразной цепной реакции, последующего расщепления фрагментов ДНК рестршсгазами, и электрофоретического разделения фрагментов ДНК в 8%-ном полиакриламидном геле или2%-ном агарозном геле.

1.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров TaqIB, С(-724)Т,

А(-629)Си JkmVal гена СЕТР с ИБС.

В регуляцию метаболизма ЛПВП вовлечен белковый транспортер эфиров холестерина плазмы крови (СЕТР - cholesteryl ester transfer protein), осуществляющий перенос эфиров холестерина из состава ЛПВП во фракцию лииопротешюв очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеинов низкой плотности (ЛПНП). Поскольку функция СЕТР ориеютрована на понижение содержания холестерина в составе ЛПВП в плазме, избыточная транспортная активность либо гиперпродукция данного белка в крови может предрасполагать к развитию ИБС. Действительно, в ряде работ показано, что наблюдается достоверно более высокое содержание СЕТР либо повышенная транспортная активность данного белка в крови больных сердечно-сосудистыми заболеваниями по сравнению со здоровыми индивидами. Кроме того, повышенная концентрация СЕТР у пациентов с ИБС была связана с клинически выраженным сосудистым атеросклерозом (Klerkx et al., 2004).

Белковый транспортер эфиров холестерина кодируется геном СЕТР, расположенном на хромосоме 16ql2-q21 и состоящем из 15 шпронов и 16 экзонов. В гене СЕТР и прилегающих к нему областях найдено свыше 700 полиморфных участков, из которых наиболее хорошо изучен полиморфизм TaqIB, расположенный в интроне 1 гена СЕТР. Для аллеля TaqlB2, характеризующегося отсутствием участка узнавания рестриктазы Taql, обнаружена ассоциация со сниженным риском сердечно-сосудистых заболеваний, пониженной транспортной активностью белка СЕТР и повышенным содержанием холестерина в составе ЛПВП в плазме крови (Kuivenhoven et al., 1997; Boekholdt et al., 2004).

Исследования структуры блоков неравновесия по сцеплению в гене СЕТР показали, что у европеоидов имеет место слабо выраженное сцепление полиморфного участка TaqIB с полиморфизмом Ile405Val, расположенным в экзоне 14 (Boekholdt et al., 2004) Полиморфизм TaqIB находится в протяженном блоке сцепления длиной порядка 1000 п.н., расположенном в 5'-концевой части гена СЕТР и охватывающем промоторную область, экзон 1 и начало интрона 1. В промоторной области гена СЕТР так же обнаружены два полиморфных маркера С(-724)Т и С(-629)А (Bauerfeind et al., 2002). Как и для аллеля А полиморфного участка TaqIB, для минорных аллелей обоих полиморфных маркеров в промоторном участке гена СЕТР выявлена достоверная связь с пониженным содержанием белкового транспортера эфиров холестерина и повышенным уровнем холестерина в составе ЛПВП и аполипопротеина А1 в плазме (Corbex et al., 2000). В случае маркера С(-629)А наблюдаемые ассоциации могут быть объяснены функциональным эффектом аллеля А,

понижающим транскрипционную активность промотора СЕТР вследствие нарушения связывания факторов транскрипции Spl и/или Sp3 (Dachet et al., 2000).

В нашей работе при исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров С(-724)Т, А(-629)С и TaqlB гена СЕТР (Табл. 3-5) в группах ИБС+ и ИБС-статистически достоверных различий получено не было.

Таблица 3.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркеров С(-724)Ттаа СЕТР в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости р

"ИБС+" (« = 271) "ИБС-" («=110)

Аллель С 0,705 0,678 0,82 0,36

Аллель Т 0,295 0,332

Генотип СС 0,428 0,400 5,26 0,07

Генотип СТ 0,554 0,536

Генотип 7Т 0,018 0,064

Таблица 4.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера-А(-629)С гена СЕТР в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости р

"ИБС+" (п = 271) "ИБС-" (п= 110)

Аллель А 0,472 0,473 0 1,0

Аллель С 0,528 0,527

Генотип АА 0,256 0,254 0,17 0,92

Генотип АС 0,423 0,436

Генотип СС 0,321 0,310

Однако в случае полиморфного маркера Ile405Val нами была обнаруженаа достоверно более высокая частота аллеля Val у больных ИБС по сравнению с контрольной группой (Табл. 6), что свидетельствует об ассоциации аллеля VaI405 гена СЕТР с повышенным риском развития ИБС (OR = 1,49) у русских г. Москвы. Нельзя исключить, что аллельный вариант гена СЕТР, содержащий остаток Val в положении 405, обладает повышенным

уровнем транспортной активности данного белка в крови, что и объясняет его ассоциацию с ИБС.

Таблица 5.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркеров Тад!В гена СЕТР в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Р

"ИБС+" (и = 271) "ИБС-" (Й=110)

Аллель Л 0,458 0,432 0,48 0,49

Аллель G 0,542 0,568

Генотип АА 0,214 0,212 1,37 0,50

Генотип AG 0,487 0,433

Генотип GG 0,299 0,355

Таблица 6.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Пе405Уа1 гена СЕТР в группах "ИБС+" и "ИБС-1.

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Р OR [CI 95%]

ИБС+ (л = 271) ИБС-(п= 110)

Аллель Ile 0,717 0,791 4,35 0,03 0,67 [0,46-0,98]

Аллель Val 0,283 0,209 1,49 [1,03-2,16]

Генотип Ile/Ile 0,528 0,627 4,17 0,12 0,66 [0,42-1,04]

Генотип Ile/Val 0,380 0,328 1,26 [0,79-2,01]

Генотип Val/Val 0,092 0,045 2,13 [0,80-5,73]

1.2. Ассоциация полиморфных маркеров Ахп291$ег и 8ег447Тег гена 1Р1. с ИБС.

Известно, что повышенное содержание триглицеридов в плазме крови (свыше 2,25 мМ или 0,2 г/л) связано с ускоренным развитием атеросклероза и прочих сердечнососудистых патологий. Липаза липопротеинов, осуществляющая гидролиз триглициридов в составе хиломикронов и ЛОНП, а также способствующая увеличению уровня холестерина в составе ЛПВП, может быть функционально вовлечена в патогенез сердечно-сосудистых заболеваний. Это пред ложение подтверждается рядом исследований, указывающих на связь

между низкой активностью данного фермента в крови и ранним развитием сосудистых нарушений (Henderson et al., 1999).

Липаза липопротеинов - это гликопротеин, состоящий из двух доменов. N-концевой домен обладает каталитической акгавностью и содержит участок связывания кофактора -аполипопротеина СИ, тогда как С-концевой домен фермента отвечает за связывание субстрата. Для осуществления липолитической активности липаза липопротеинов образует гомодимер, в котором С-концевой домен одной субъединицы взаимодействует с N-концевым доменом другой субъединицы (Wong et al., 1997).

Ген липазы липопротеинов (LPL) расположен на хромосоме 8р22, состоит из 10 экзонов и кодирует предшественник фермента длиной 474 аминокислот. Полиморфный маркер Ser447Ter, находящийся в экзоне 9, приводит к потере 37 С-концевых аминокислот и связан с повышением каталитической активности липазы липопротеинов и, как следствие, к 8%-ному снижению среднего уровня триглицеридов в плазме (Rip, et al., 2006). Недавний масштабный мета-анализ 89 популяционных исследований выявил общую защитную роль носительства аллеля Тег447 гена LPL по отношению к раннему развитию ИБС (OR = 0,84) (Talmud et al., 2007).

Таблица 7.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Asn29ISer гена LPL в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости р

"ИБС+" (л = 271) "ИБС-" (и =110)

Аллель Asn 0,982 0,986 0,22 0,64

Аллель Ser 0,018 0,014

Генотип Asn/Asn 0,963 0,973 0,22 0,89

Генотип Asn/Ser 0,037 0,027

Генотип Ser/Ser 0,000 0,000

В российских популяциях проведено несколько исследований ассоциации различных вариантов гена 1Р1 (полиморфизмы НШШ и РупП) с сосудистыми поражениями мозга (Костомаров и др., 2008) и сердца (Малыгина и др., 2002). Однако ассоциация полиморфных маркеров 5ег447Тег и А$п2915ег гена ЬРЬ с сосудистыми патологиями в русской популяции ранее исследована не была. В настоящей работе представлены результаты исследований ассоциации данных полиморфных маркеров гена ЬРЬ с ИБС.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Asn29]Ser гена LPL у больных ИБС существенно не отличалось от такового в контрольной группе (Табл. 7).

Напротив, для другого маркера в гене липазы липопротеинов - Ser447Ter -наблюдали достоверно более высокое содержание аллеля Ser (91,5% против 83,6%) и гомозиготного генотипа Ser/Ser (83% против 69,1%) у больных ИБС, чем у контрольных доноров (Табл. 8). Данное наблюдение говорит в пользу ассоциации аллеля Ser447 гена LPL с повышенным риском развития ИБС {OR = 2,19) в русской популяции. У людей, гомозиготных по аллелю риска Ser полимофного маркера Ser447Ter гена LPL, каталитическая активность липопротешшииазы в плазме крови достоверно понижена по сравнению с гомозиготами Тег/Тег, что связано с более высоким содержанием триглицеридов и прочих биохимических показателей неблагоприятного липидного профиля крови, способствующего pamieMy развитию сердечно-сосудистых заболеваний.

Таблица 8.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера 5ег447Тег гена ЬРЬ в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Р OR[CJ95%]

ИБС+ (л = 271) ИБС-(л= 110)

Аллель Ser 0,915 0,836 9.31 0,002 2,19 [1,31-3,66]

Аллель Тег 0,085 0,164 0,50 [0,29-0,84]

Генотип Ser/Ser 0,830 0,691 12,46 0,0023 2,11 [1,32-3,37]

Генотип Ser/Ter 0,170 0,291 0,48 [0,30-0,76]

Генотип Тег/Тег 0,000 0,018 0,10 [0,0-12,10]

1.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера Т(-565)С гена ABCAI с ИБС.

Ген АВСА1 кодирует трансмембранный белок CERP, состоящий из 2261 аминокислоты. Его функция заключается в обратном переносе холестерина и фосфолипидов через клеточную мембрану при участии липопротеинов апо-А1. Этот ген активно экспрессируется в лейкоцитах и макрофагах, а также во многих других тканях и органах, таких как печень, лёгкие, надпочечники и плацента (Klein et al., 1999; Schmitz et al., 2001; Langmann et al., 1999). Кроме функции транспорта холестерина было показано участие CERP в регуляции эндотелиальиых сигнальных путей (Bisoendial et al., 2003).

В ряде исследований была выявлена ассоциация нескольких полиморфных маркеров этого гена с понижением уровнем ЛПВП в основной популяции и у пациентов с атеросклерозом, но эти данные во многом противоречивы и не однозначны (Frikke-Schmidt et al., 2004; Cohen et al„ 2004; Clee et al., 2001).

Таблица 9.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера

Т(~565)С тепа АБСА1 в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости Р OR[CI95%\

ИБС+ (и = 271) racial 10)

Аллель С 0,354 0,432 4,01 0,04 0,72 [0,52 - 0,99]

Аллель Т 0,646 0,568 1,39 [1,01 -1,91]

Генотип СС 0,048 0,136 9,47 0,008 0,32 [0,15-0,70]

Генотип СТ 0,613 0,591 1,09 [0,70 - 1,72]

Генотип ТТ 0,339 0,273 1,37 [0,84 - 2,24]

В нашей работе бил использован полиморфный маркер Т(-565)С гена ABCAL Ранее предпринимался ряд попыток обнаружить ассоциацию полиморфных маркеров гена АБСА] с сердечно-сосудистыми заболеваниями (Lusis et а!., 1998). Была показана ассоциация полиморфного маркера Т(-565)С с незначительным снижением уровней ЛПВП и аро-А1 и сильная ассоциация этого полиморфизма с тяжестью течения ишемической болезни сердца, выражаемой степенью повреждения органов сердечно-сосудистой системы

Достоверные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Т(-565)С гена ABCAI в группах больных ИБС и контрольной группой полученные в нашем исследовании свидетельствуют о наличии ассоциации между полиморфным маркером Т(-565)С гена АБСА! и риском развития ССЗ.

При этом носительство гомозиготного генотипа СС связано г устойчивостью к развитию ИБС (OR = 0,72; CI = 0,52-0,99), а гсмозиготноаъ ТТ по данному маркеру повышает риск развития патологии (OR = 1,39; CI = 1,01-1,91). Полученные данные согласуются с многонациональным исследованием в США, выявившим ассоциацию носительства аллеля Т с увеличением риска развития сердечно-сосудистых заболеваний (Benton, 2007).

1.4. Исследование ассоциации полиморфпого маркера С200Т гена LRP1 с ИБС.

Рецептор аполипопротеина Е (APOER), который также известен как альфа2-

макроглобулиновый рецептор, во многом гомологичен рецептору липопротекнов низкой плотности и другим рецепторам этого семейства (Ншзаш е1 а1., 1999). Этот рецептор может связывать и подвергать эндоцигозу более 30 лигандов, многие из которых могут быть важны в патогенезе ишемической болезни сердца, включая липопротеины, обогащенные аполипопротеином Е, ХМ, ЛПОНП, и другие не липидные лиганды, такие как ингибитор активатора плазминогена.

В исследовании, проведенном в Австралии (РосаИикогп й а!., 2006) была обнаружена ассоциация данного полиморфного маркера с уровнем синтеза мРНК. Носители генотипа СС имели более высокий уровень синтеза мРНК. Для изучения ассоциации с ИБС нами был выбран однонуклеотидный полиморфизм С200Т, расположенный в экзоне 22.

Таблица 10.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С200Т гена I в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Р

"ИБС+" (л = 271) "ИБС-" (п=110)

Аллель С 0,68 0,66 0,17 0,68

Аллель Т 0,32 0,34

Генотип СС 0,42 0,43 1,37 0,50

Генотип СТ 0,51 0,47

Генотип ТТ 0,07 0,10

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С200Т гена ЬкР1 в группах ИБС+ и ИБС- статистически достоверных различий обнаружено не было. Таким образом, данный полиморфный маркер не ассоциирован с развитием ИБС у русских г. Москвы.

1.5. Исследование ассоциации полиморфного маркера С(-1947)А гена НМвСЯ с ИБС.

Редуктаза З-пщрокси-З-метилглутариш-КоА (НМбСК) представляет собой мембранный белок, локализованный в эндоплазматическом ретикулуме. Фермент состоит из двух доменов: Ы-концевого мембранного и цитоплазматического С-концевого домена, обладающего каталитической активностью (1л5сит е! а1., 1985). Фермент играет важную роль на первой стадии синтеза холестерина, катализируя превращение ацетил-КоА в мелавонат путем двухступенчатого восстановления при участии КАОН. Данная реакция является

основной стадией, лимитирующей скорость синтеза холестерина. В настоящее время для регуляции уровня холестерина в плазме крови используются ингибиторы редуктазы ГМГ-КоА - статинм, связывание которых с каталитическим доменом фермента приводит к его ингибированию (Ьйгап е! а!., 2001). Под действием статинов, которые широко используются при лечении гиперхолестеринемии и сердечно-сосудистых патологий, происходит подавление синтеза холестерина, что, в свою очередь, приводит к повышению уровня рецепторов ЛПНП, усилению опосредуемого данными рецепторами выведения ЛПНП из плазмы крови и итоговому снижению уровня циркулирующего в плазме крови холестерина в составе ЛПНП. Таким образом, понижение уровня синтеза холестерина снижает риск развития сердечно-сосудистых заболеваний.

Редукгаза ГМГ-КоА кодируется геном //МОСЙ, расположенном на хромосоме 5я13.3-ч14.3. Широкомасштабные исследования в различных популяциях показали достоверную связь между определенными вариантами гена НМССК и атерогенным липидным профилем (повышенное содержание триглицеридов, ЛПНП и холестерина в составе ЛПНП, пониженное содержание ЛПВП в плазме крови), повышающим риск развития сердечно-сосудистых патологий. Нами была изучена ассоциация полиморфного маркера С(-!947)А гена НМаСЯ.

В случае полиморфного маркера С(-1947)А гена НМОСК нами было обнаружено достоверное увеличение частоты аллеля А (0,37 против 0,22) и генотипа АЛ (0,14 против 0,07) у больных ИБС по сравнению с контрольной группой (Табл. 11).

Таблица 11.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера

С(~1947)А гена НМОСИ в группах "ИБС+" и "ИБС-".

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение хг Уровень значимости Р ОН [С 195%]

ИБС+ (п = 271) ИБС-(я = 110)

Аллель С 0,63 0,78 17,62 2Д4Е-05 0,46 [0,32 - 0,66]

Аллель А 0,37 0,22 2,17 [1,50-3,13]

Генотип СС 0,39 0,63 18,26 1,09Е-04 0,38(0,24 - 0,60]

Генотип АС 0,46 0,30 2,00 [1,25-3,20]

Генотип А А 0,14 0,07 2,40 [1,04 - 5,55]

Эти данные указывают на наличие достоверной ассоциации данного маркера с развитием ИБС среди русских г. Москвы, причем наличие аллеля А, особенно в гомозиготном состоянии, существенно увеличивает риск развития ИБС, о чем

свидетельствуют высокие значения OR (2,40 в случае генотипа АЛ и 2,17 в случае аллеля А). Пока не ясно, является ли маркер С(-1947)А функционально значимым, или же он просто сцеплен с другими маркерами, определяющими уровень сшггеза редукгазы ГМГ-КоА. Тем не менее, полученные нами данные позволяют сделать вполне обоснованный вывод об ассоциации гена HMGCR с ИБС среди русских г. Москвы.

1.6. Исследование ассоциации полиморфного маркера G(-198)A гена FDFT1 с ИБС.

Синтетаза сквалена (FDFT1) является мембранным ферментом с молекулярной массой 47 кДа, катализирующим димеризацию двух молекул фарнезилдифосфата в сквален, который является ключевым предшественником холестерина (Poulter et al., 1990).

Синтетаза сквалена занимает особое место в мелавонатном пути. Обратная регуляция активности данного фермента холестерином и другими стеролами определяет дальнейшее направление метаболизма мелавоната по стероидному или нестероидному пути. Влияние синтетазы сквалена на содержание липидов в плазме крови очевидно: сверхэкспресия данного фермента приводила к повышению у трансгенных мышей как общего холестерина, так и холестерина в комплексе с ЛПНП и ЛПВП. Ферментативная активность FDFT1, а также количество белка и мРНК уменьшаются до минимального уровня в ответ на избыток холестерина и резко увеличиваются при недостатке холестерина (Tansey et al., 2000). Ингибиторы фермента приводят к понижению уровня холестерина и рассматриваются в качестве эффективных заменителей статинов, обладающих выраженным побочным действием, при лечении гиперхолестеринемии и сердечно-сосудистых патологий (Cohen et al., 1989)

Ген FDFTI, кодирующий синтетазу сквалена, картирован на хромосоме 8р22-р23.1 (Shechter et al., 1994). Генетические исследования роли гена FDFT1 в предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям и регуляции уровня липидов крови начались лишь недавно. Анализ семей франко-канадцев выявил сцепление локуса D8S552, расположенного неподалеку от локуса FDFT1, с риском раннего развития семейной формы ИБС (Engert et al., 2008). Во франко-канадской популяции также показана ассоциация аллеля Arg полиморфного маркера Lys45Arg гена FDFT1 с метаболическими факторами риска ИБС (то есть повышенным уровнем общего холестерина, холестерина в составе ЛПНП и триглицеридов). Данный маркер локализован в регуляторном участке, усиливающем сплайсинг, и, следовательно, может влиять на внутриклеточную выработку холестерина.

Маркер G(-I98)A был выбран нами, поскольку расположен в промоторной области и, следовательно, может влиять на экспрессию гена FDFTJ. Данный маркер может иметь

функциональное значение, так как он находится в, так называемой, последовательности SRE-like, расположенной на расстоянии 127 - 198 п.н. от участка инициации траскрипции и являющейся участком связывания транскрипционного фактора CREBP (Guan et al., 1997), который регулирует экспрессию ферментов биосинтеза холестерина (Horton et al., 2002). Однако нам не удалось выявить достоверные различия между частотами аллелей и генотипов данного маркера в группе больных ИБС и контрольной группе (Табл.12), что свидетельствует об отсутствии ассоциации маркера G(-J98)A гена FDFT1 с развитием ИБС среди русских г. Москвы.

Таблица 12.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера G(-198)A гена FDFT в группах "ИБС+" и "ИБС-"

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение у} Уровень значимости р

"ИБС+" (я =271) "ИБС-" (я = 110)

Аллель в 432 / 0,797 172 / 0,782 0,22 0,64

Аллель А 110/0,203 48/0,218

Генотип вО 170/0,627 70 / 0,636 3,32 0,19

Генотип йА 92 / 0,339 32/0,291

Генотип АА 9/0,033 8/0,073

1.7. Исследование ассоциации полиморфного маркера Cly389Arg гена ADRB1 с

индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом. ß-адренергические рецепторы играют важную роль в функционировании сердечнососудистой системы и развитии ее заболеваний, ßl-рецепторы превалирует в сердце, составляя примерно 80% от всех ß-рецепторов миокарда, а ßl- и р2-рецепторы в почках стимулируют высвобождение ренина, который активирует ренин-апгиотензин-альдосте-роновую систему. ß2-рецепторы также находятся в артериях, где их стимуляция ведет к расширению сосудов. рЗ-рецепторы были обнаружены относительно недавно и их роль до конца не установлена (Johnson et al., 2002).

Роль ß-адренорецепгоров в работе сердечно-сосудистой системы подтверждается широким применением лекарственных средств, действие которых основано на связывании с ß-адренорецепторами. Так называемые, бета-адреноблокаггоры используются при лечении хронических заболеваний сердца, гипертонии, инфаркта миокарда и т.д. Исходя из этого, представляется интересным исследовать ассоциацию полиморфных маркеров генов,

кодирующих p-адренорецепторы, с развитием сердечно-сосудистых патологий, таких как ИБС. Полиморфизмы в гене ADRB1, который кодирует pi-адренорецептор, были обнаружены в 1999 г. (Maqbool et al., 1999). Наиболее изученными являются полиморфные маркеры Ser49Gly и Gly389Arg. Позже были найдены еще 12 однонуклеотидных полиморфизмов, пяти из которых соответствовали аминокислотные полиморфизмы, но так как все эти полиморфизмы обнаружены одной группой исследователей, требуется независимое подтверждение их существования (Podlowski et al., 2000)

Таблица 13.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера й1у389Л^ гена /ШЙЙ/ в группах пациентов с мерцательной аритмией

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Х2 Р

Уменьшение ЧСС меньше, чем на 19 уд/мин (п = 40) Уменьшение ЧСС больше, чем на 19 уд/мин (п = 41)

Аллель Arg 0,539 0,500 0,22 0,64

Аллель Gly 0,461 0,500

Генотип Arg'Arg 0,132 0,195 3,32 0,19

Генотип Arg/Gly 0,816 0,610

Генотип Gly/Gly 0,052 0,191

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера ау389Агена /ШЛВ/ в группе больных с мерцательной аритмией (Табл. 13), принимавших бетаксолол, не было выявлено ассоциации данного полиморфного маркера со снижением ЧСС под влиянием бетаксолола.

1.8. Исследование ассоциации полиморфного маркера Т(-47)С гена АОЯВ2 с индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом.

Известно, что р2-адренорецепторы, также как и р1-адренорецепторы расположены в клетках синоатриального и агриовенгрику парного узла, миокарде желудочков. Соотношение рецепторов типа 1 и 2 в сердечной мышце примерно 2:1. Эффект стимуляции Р2-адренорецепторов совпадает с эффектами стимуляции рецепторов типа 1. Они участвуют в регуляции ЧСС, функции автоматизма сердца, а также проводимости и сократимости. Большинство бета-адреноблокаторов обладают селективностью в отношении Р2-адренорецепторов, однако при применении препаратов в высоких дозах их селективность, как правило, снижается. Это позволяет рассматривать р2-адренорецепторы как гены-кандидаты, возсмжно ассоциированные с эффективностью бета-адреноблокаторов.

К настоящему времени обнаружено 11 полиморфизмов в гене ADRB2, который кодирует (32-адренорецептор, четырем из которых соответствуют аминокислотные полиморфизмы в позициях 16, 27, 34 и 164 (Liggett, 1997). Полиморфный маркер Val34Met имеет очень низкую частоту встречаемости минорного агшеля и малоинтересен для исследований ассоциации с сердечно-сосудистыми заболеваниями. В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С(-47)Т гена ADRB2 в группе больных с мерцательной аритмией, принимавших бетаксолол (Табл. 14), не было выявлено ассоциации данного полиморфного маркера со снижением ЧСС под влиянием бетаксолола.

Таблица 14.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера

С( 41)7" гена ЛDRB2 в группах пациентов с мерцательной аритмией

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Р

Уменьшение ЧСС меньше, чем на 19 уд/мин (п = 40) Уменьшение ЧСС больше, чем на 19 уд/мин (п = 41)

Аллель Gly 0,539 0,5 0,15 0,70

Аллель Arg 0,461 0,5

Генотип Gly/Gly 0,132 0,195 1,95 0,38

Генотип Gly/Arg 0,816 0,610

Генотип Arg/'Arg 0,052 0,191

1.9. Исследование ассоциации полиморфного маркера Тгр64Аф гена АОКВЗ с индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом.

рЗ-адренорецепгор является наименее изучешшм из семейства р-адрепорецепторов, но недавно проведенный мета-анализ позволил объединить разрозненные данные по ассоциации полиморфного маркера Тгр64Аг% гена АОЯВЗ с сердечно-сосудистыми патологиями (гаГагшапс! е( а!., 2008). Ранее д тя этого полиморфного маркера были найдены ассоциации с ожирением, инсулинорезистентностыо, гипертонией н сахарным диабетом типа 1. Мета-апализ, объединивший данные о более чем 15-ти тысячах пациентов, не выявил увеличения риска ИБС у носителей какого-либо генотипа полиморфного маркера Тгрб4Аг§ гена АйЯВЗ.

В нашей работе при исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Тгр64Агд гена АОЯВЗ в группах больных с мерцательной аритмией статистически достоверных различий получено не было (Табл. 15). Таким образом,

полиморфный маркер Тгр64А^ гена АОНВЗ по результатам проведенного нами исследования не ассоциирован со снижением ЧСС под влиянием бетаксолола у больных с мерцательной аритмией.

Таблица 15.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Тгр64А^ тепа АОНВЗ в группах в группах пациентов с мерцательной аритмией

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов *2 Р

Уменьшение ЧСС меньше, чем на 19 уд/мин (п = 40) Уменьшение ЧСС больше, чем на 19 уд/мин (п =41)

Аллель Тгр 0,812 0,835 0,11 0,73

Аллель Arg 0,188 0,165

Генотип Тгр/Тгр 0,722 0,759 0,20 0,90

Генотип Trp/Arg 0,179 0,150

Генотип Arg/Arg 0,099 0,090

1.10. Исследование ассоциации полиморфного маркера А(-163)С гена С1Т1А с индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом.

Ген СУР1Л2 расположен на хромосоме 15 в локусе 15ц22-ц1ег. Для ряда полиморфных маркеров этого гена обнаружена ассоциация с ферментативной активностью цитохрома 1А2. Так, в случае полиморфного маркера 0(-2964)А гена СУР1А2 было обнаружено, что носители аллеля А имеют более низкую скорость метаболизма теофиллина, чем гомозиготные носители аллеля С (ОЬаэе е! а1., 2003). Также была обнаружена ассоциация между эффективностью терапии антипсихотическими препаратами у больных шизофренией и полиморфным маркером С1545Т гена СУР1А2 (П\уап е1 а1., 2006).

В случае полиморфного маркера С(-146)А обнаружено, что носители аллеля А имеют более высокую ферментативную активность цитохрома 1А2, а также более значимое возрастание его активности у курильщиков. В тоже время было показано, что уровень индукции ферментативной активности цетохрома 1А2 существенно ниже у носителей аллеля С этого маркера, у них в целом ниже ферментативная активность и выше риск развития ревматоидного артрита (УозЫ(1а е( а1., 2002). При этом, оказалось, что ген СУР1А2, содержащий остаток С, в положении -146 менее индуцибилен, и у носителей этого аллеля ниже активность цитохрома и выше риск развития заболевания (УозЫйа е1 а1, 2003). В нашем исследовании носительство аллеля С оказалось ассоциировано с более выраженным отрицательным хронотропным эффектом бетаксолола, что подтверждено данными холтеровского мониторирования ЭКГ.

17

Таблица 16.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера

С(-1бЗ)Т гена CYP1A2 в группах в группах пациентов с мерцательной аритмией.

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Х2 Р OR

Уменьшение ЧСС меньше, чем на 19 уд/мин (п = 40) Уменьшение ЧСС больше, чем на 19 уд/мин (п = 41)

значение [С195%]

Аллель А 0,813 0,585 9,90 0,01 3,07 [1,50 - 6,26]

Аллель С 0,188 0,415 0,33 [0,16-0,66]

Генотип АА 0,700 0,439 7,16 0,03 2,98 [1,19-7,45]

Генотип АС 0,225 0,293 0,70 [0,26-1,91]

Генотип СС 0,075 0,268 0,22 [0,06 - 0,87]

Возможно, это связано с меньшей степенью экспрессии гена и более низкой активностью изофермеига у этих больных, вследствие чего концентрация препарата в плазме у них выше. В группе больных с хорошей реакцией на прием бетаксолола достоверно большей оказалась частота аллеля С и генотипа СС полиморфного маркера A(~t63)C тена C.YPIA2.

ВЫВОДЫ.

1. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов АБСА], СЕТР, LPL, HMGCR FDFT1, LRP1 в группах больных ишемической болезнью сердца, а также в контрольной группе русских г. Москвы. Для ряда полиморфных маркеров генов СЕТР, LPL, LIPC, LRP1, FDFT1 показано отсутствие ассоциации с ишемической болезнью сердца у русских г. Москвы.

2. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(~565)Т гена АВСА1 с развитием ИБС. Установлено, что носители генотипа 77 данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа С С имеют пониженный риск развития ИБС.

3. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ser447Ter гена LPL с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Тег и генотипа Тег/Тег данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС.

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ile405Val гена СЕТР с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Val и генотипа Val/Val данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развили ИБС.

5. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(-1947)А гена HMGCR с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС.

6. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов CYP1A2, ADRB1, ADRB2, ADRB3 в группе больных мерцательной аритмией. Для ряда полиморфных маркеров генов ADRB1, ADRB2, ADRB3 показано отсутствие ассоциации с индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом.

7. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера полиморфного маркера А(-163)С гена CYPIA2 с более существенным уменьшением ЧСС на фоне терапии бетаксололом. Больные мерцательной аритмией, являющиеся носителями аллеля С и генотипа СС более чувствительны к терапии бетаксололом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Данковцева, E.H., Затейщиков, Д.А., Чудакова, Д.А., Королева, О.С., Бровкин, А.Н., Носиков, В.В., Гайдукова, Н.В., Тгаценко, В.А., Сидоренко Б.А. (2005) Ассоциация генов факторов гемостаза с ранним развитием ишемической болезни сердца и манифестацией инфаркта миокарда в молодом возрасте. Кардиология, 45(12), 17-24.

2. Zateyshchikov, D.A., Minushkina, L.O., Brovkin, A.N., Savel'eva, E.G., Zaieyshchikova,

A.A., Manchaeva, B.B., Nikitin, A.G., Sidorenko, B.A., Nosikoy, V.V. (2007) Association of CYP2D6 and ADRBl genes with hypotensive and antichronotropic action of betaxolol in patients with arterial hypertension. Fundamental and Clinical Pharmacology, 21, 437-443.

3. Минушкина, Л.О., Затейщикова, A.A., Затейщиков, Д.А., Манхаева, Б.Б., Савельева, Е.Г., Кочкина, М.С., Бровкин, A.B., Никитин, А.Г., Носиков, В.В., Сидоренко, Б.А. (2008) Генетические аспекты индивидуальной чувствительности к бетаксололу у больных артериальной гипертонией. Кардиология, 48(3), 20-26.

4. Закирова, В.Б., Бровкин, А.Н., Галева, З.М., Никитин, А.Г., Галявич, A.C., Агапкина, Ю.В., Евдокимова, М.А., Якунина, Н.Ю., Осмоловская, B.C., Асейчева, О.Ю., Носиков,

B.В., Затейщиков, Д.А. (2008) Генетическая предрасположенность к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца у больных после острого коронарного синдрома. Кардиология, 48(H), 13-18.

5. Минушкина, JI.O., Никитин, А.Г., Бражник, В.А., Бровкин, А.Н., Носиков, В В., Затейщиков, Д А. (2010) Гипертрофия миокарда у больных гипертонической болезнью: роль генетического полиморфизма Р-адрепореактивных структур. Кардиология, 50(1), 9-14.

6. Zateyshchikov, D.A., Tchudakova, D.A., Dankovtseva, E.N., Nikitin, A.G., Koroleva, O.S., Brovkin, A.N., Minushkina, L.O., Yakunina, N.Yu., Babunova, N.B., Spitsina, E.V., Nosikov, V.V., Sidorenko, B.A. Polymorphism C(-426)T of F5 gene can be involved in early development of myocardial infarction in Russian patients. Abstracts of the 75th Congress of European Atherosclerosis Society, p.95 (Abstract W14-P-007), Prague, Czech Republic (April 23 -26, 2005).

7. Zateyshchikov, D.A., Dankovtseva, E.N., Nikitin, A.G., Koroleva, O S., Brovkin, A.N., Yakunina, N.Yu., Chudakova, D.A., Nosikov, V.V., Sidorenko, B.A. Genetic predisposition to early onset of coronary artery disease. Abstracts of the XIV International Symposium on Atherosclerosis, p.131 (Abstract Mo-P6:387), Rome, Italy (June 18 - 22,2006).

8. Zateyshchikov, D.A., Nosikov, V.V., Brovkin, A.N., Minushkina, L.O., Nikitin, A.G., Sidorenko, B.A. Relationship between clinical response to betaxolol (lokren) in Russian patients with essential hypertension and polymorphous markers of ADRB1, CYP1A1, CYP1A2 and CYP2D6 genes. Abstracts of the Third "Biologie Prospective" Conference "From Human Genetic Variations to Prediction of Risks and Responses to Drugs and Environment", p.A77 - A78, Santorini Island, Greece (September 29 - Octobcr 2,2006).

9. Минушкина, Л.О., Никитин, А.Г., Савельева, E.C., Бровкин, A.H., Затейщиков, Д.А., Носиков, В.В. Ассоциация полиморфных маркеров генов ADRBI, CYP1A1, CYP1A2 и CYP2D6 с эффективностью терапии бетаксололом у больных с артериальной гипертонией. Материалы конференции Российского национального конгресса кардиологов "От диспансеризации к высоким технологиям", стр. 237, Москва, Россия (10-12 октября 2006 г.).

10. Никитин, А.Г., Королева, О.С., Бровкин, А.Н., Азизова, О.А., Носиков, В.В., Затейщиков, Д А. Ассоциация уровня окисления липидов плазмы с полиморфным маркером С(~1947)А гена HMGCR у больных с ранней ишемической болезнью сердца на фоне терапия аторвастатином. Материалы конференции Российского национального конгресса кардиологов "От диспансеризации к высоким технологиям", стр. 259, Москва, Россия (10 - 12 октября 2006 г.).

11. Nosikov, V.V., Koroleva, O.S., Brovkin, A.N., Nikitin, A.G., Azizova, О.A., Zateyshchikov, D A. The association of APOE, CYP3A4 & HMGCR1 genes polymorphisms with effects of atorvastatin in patients with early coronary artery disease. Abstracts of the Fourth "Biologie

Prospective" Santorini Conference "Functional Genomics Variations towards Personalized Health Care", р.Л135, Santorini Island, Greece (September 21 - 23, 2008).

12. Zateyshchikov, DA., Brovkin, A.N., Evdokimova, M.A., Nikitin, A.G., Kudijachova, O.Yu., Minushkina, L.O., Osmolovskaja, V.S., Agapkina, Yu.V., Nosikov, V.V. Promoter polymorphism of protein С gene associated with unfavorable outcomes in patients after acute coronary syndrome: results of multicentral study based on 1143 Russian patients. Abstracts of the Fourth "Biologie Prospective " Santorini Conference "Functional Genomics Variations towards Personalized Health Care", p.A145, Santorini Island, Greece (September 21 - 23, 2008).

13. Горшкова, E C., Затейщикова, A.A., Манхаева, Б.Б., Минушиша, Л.О., Бровкин, А.Н., Носиков, В.В., Затейщиков, Д А. Ассоциация полиморфизма гена р2-адренорецептора с эффективностью бетахсолола у больных с мерцательной аритмией. Материалы конференции Российского национального конгресса кардиологов "Повышение качества и доступности кардиологической помощи", стр. 96, Москва, Россия (07 - 09 октября 2008 г.).

14. Бровкин, А.Н., Благодатских, К.А., Минушкина, Л.О., Агапкина, Ю.В., Никитин, А.Г., Затейщиков, ДА., Носиков, В.В. Генетическая предрасположенность к ишемической болезни сердца: ассоциация генов, продукты которых регулируют синтез холестерина и его метаболизм. Материалы конференции Российского национального конгресса кардиологов "Кардиология: реалии и перспективы", стр. 55, Москва, Россия (06 - 08 октября 2009 г.).

Подписано в печать: 14.10.2010

Заказ № 4300 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш„ 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бровкин, Алексей Николаевич

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Ишемическая болезнь сердца.

2.1.1. Основные аспекты этиологии ишемической болезни сердца.

2.1.1.1. Атеросклероз - основной этиологический фактор.г. ишемической болезни сердца.

2.1.1.2. Липидный обмен.

2.1.2. Патогенез ишемической болезни сердца.

2.1.3. Генетические факторы риска ишемической болезни сердца.

2.2. Характеристика полиморфных маркеров,. исследованных в работе.

2.2.1. Типы полиморфизмов и методы их исследования.

2.2.2. Использование полиморфных маркеров в исследовании. генетики мультифакториальных заболеваний.

2.2.3. Характеристика полиморфных маркеров гена HMGCR.

2.2.4. Характеристика полиморфных маркеров гена FDFT1.

2.2.5. Характеристика полиморфных маркеров гена СЕТР.

2.2.6. Характеристика полиморфных маркеров гена LPL.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Анализ ассоциации полиморфного маркера С(-1947)А.!. гена HMGCR с ишемической болезнью сердца.

4.2. Анализ ассоциации полиморфног маркера G(-198)A. гена FDFT1 с ишемической болезнью сердца.

4.3. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров гена СЕТР с ишемической болезнью сердца.

4.3.1. Анализ ассоциации полиморфного маркера TaqlB с ишемической болезнью сердца.

4.3.2. Анализ ассоциации полиморфного маркера А(-629)С. с ишемической болезнью сердца.

4.3.3. Анализ ассоциации полиморфного маркера 1405V. с ишемической болезнью сердца.

4.4. Анализ ассоциации полиморфного маркера S447X. гена LPL с ишемической болезнью сердца.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетические факторы при сердечно-сосудистых заболеваниях: идентификация генов кандидатов и фармакогенетика терапии бетаксололом"

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ), наравне с онкологическими заболеваниями и диабетом, прочно удерживают первенство среди самых распространенных заболевания в экономически развитых странах, и увеличение количества заболеваний иногда сравнимы с эпидемией.

В структуре смертности от CG3 два заболевания составляют около 60% от всех случаев смерти: это ишемическая болезнь. сердца (ИБС) и инфаркт миокарда: Смертность от ИБС в 1,5 разапревышает смертность от всех онкологических заболеваний и составляет 415 случаев на 100 ООО населения в год (Boerwinkle Е. et al., 1996). Средняя частота инфаркта миокарда (ИМ), как одного из проявлений ИБС, составляет 0,08 на 1000 человек; в то время как в группах 30-39 лет - 0;76; в группах 40—49 лет — 2,13; в группах 50-59 лет -5,81; в группах 60-64 года - 17,12 на 1000 человек (American Heart Association, 2001). В 'нашей стране смертность от ССЗ составляет у мужчин 52%, у женщин — 63%. У женщин в возрасте до 50 лет ИМ встречается, в 5-6 раз реже, чем у мужчин. После 50 лет эта разница нивелируется (Шулутко Б.И., Макаренко С.В., 1998).

Известно, что ИБС является многофакторным заболеванием с многочисленными звеньями патогенеза. В отличие от наследственных нарушений, обусловленных дефектом в одном гене, для таких заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды (Galtion D. et al., 1995).

Исследование молекулярно — генетических основ многофакторных заболеваний, в том числе и ССЗ, относится к одной из наиболее серьезных задач современной генетики. Знание генетических факторов, предрасполагающих к развитию заболевания и его осложнений, имеет важное прогностическое значение и может использоваться при досимптоматической диагностике, т.е. до появления каких-либо клинических или биохимических симптомов болезни. Таким образом, предиктивную медицину уместно рассматривать как первый и наиболее ранний этап активного воздействия человека на организм с целью своевременной коррекции потенциально возможной патологии или патологического процесса (Baranova Н., 2001).

Современная стратегия исследования генетической составляющей многофакторных заболеваний включает в себя поиск полиморфных маркеров в генах, которые могут вносить вклад в развитие заболевания (генах-кандидатах) и оценку их ассоциации с заболеванием (Пузырев В., Степанов В., 1997). Под ассоциацией полиморфного маркера с заболеванием понимают достоверно различающиеся частоты определенного аллеля или генотипа этого маркера у больных и у здоровых лиц одной и той же популяции. При этом для каждого конкретного заболевания можно выделить группу генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.

Установление ассоциации гена с заболеванием позволяет количественно определить риск развития патологии, сформировать группы повышенного риска, организовать их мониторинг и в случае необходимости назначать превентивную терапию в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента.

Исходя из современных представлений о механизмах развития ИБС, можно выделить группу генов кандидатов, белковые продукты которых участвуют или потенциально могут быть вовлечены в патогенез ИБС. Из-за этиологической многофакторности ИБС вряд ли можно ожидать наличия сильной ассоциации с полиморфным маркером какого-либо одного гена (Bishop Т. et al., 2000). Среди генов-кандидатов особого внимания заслуживают гены системы липидного обмена, играющие важную роль в развитии данной патологии (Gordon Т. et al., 1977).

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента. Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров

Нами впервые было проведено исследование ассоциации ряда генов системы липидного обмена с ишемической болезнью сердца в популяции этнических русских, проживающих в г. Москва. Исследование проводилось на двух группах лиц: с наличием ИБС и с отсутствием ИБС. Оно позволило выявить аллели и генотипы, в различной степени ассоциированные с предрасположенностью к развитию ИБС. Полученные данные о влиянии полиморфных маркеров генов адренорецепторов 01, 02 и 03 (АВКВ1, АВКВ2, АОЯВЗ) на эффективность терапии бетаксололом у больных мерцательной аритмией создают основу для индивидуализированной медицины

Цели и задачи работы

Целью данной работы было: изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с развитием ишемической болезни сердца; выявить гены, определяющие индивидуальную чувствительность к терапии бетаксололом.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, АТФ-связанного кассетного переносчика типа I (АВСА1), переносчика эфиров холестерина СЕТР (СЕТР), липазы липопротеинов (ЬРЬ), печеночной липазы (ЫРС), редуктазы ГМГ-КоА (НМОСК), синтетазы сквалена (РОРТ1), рецептор-связанного белка ЛПНП (ЬЯР1). Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.

Провести идетификацию генотипов полиморфных маркеров генов ци-тохрома типа 1А1 (СУР1А1), цитохрома типа 2Б6 (СУР2В6), бета-адренорецептора типа 1 (АВКВ1), бета-адренорецептора типа*2 (АВКВ2), бе-та-адренорецептора типа 3 (АВЯВЗ) в группе пациентов с мерцательной аритмией принимавших бетаксолол и контрольной группой.

Научная новизна работы.

В данной работе впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров С(—1947)А гена НМвСЯ, в(-198)А гена /^ЖГ7, Тад1В, С(-724)Т, А(-629)С и Пе405¥а1 гена СЕТР, С(-565)Т гена АВСА1, С200Т гена ЬЯР1, 5ег447Тег и Азп2918ег гена ЬРЬ с ишемической болезнью сердца (ИБС). Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(-565)Т гена АБСА! с развитием ИБС. Установлено, что носители генотипа ТТ данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа СС имеют пониженный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ser447Ter, гена LPL с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Тег и генотипа Тег/Тег данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС. Также обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ile405Val гена СЕТР с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Val и генотипа Val/Val данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(-1947)А гена HMGCR с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС. Все вышеизложенные результаты получены впервые.

Практическая ценность работы.

Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов ABC Al, LPL, СЕТР и HMGCR с развитием ИБС открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии. Полученные данные о влиянии полиморфного маркера А(—163)С гена CYP1A2 на эффективность терапии бетаксололом у больных мерцательной аритмией создают основу для индивидуализированной медицины.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Бровкин, Алексей Николаевич

5. ВЫВОДЫ

1. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов АВСА1, СЕТР, LPL, HMGCR, FDFT1, LRP1 в группах больных ишемиче-ской болезнью сердца, а также в контрольной группе русских г. Москвы.

2. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов CYP1A2, ADRB1, ADRB2, ADRB3 в. группе больных мерцательной арит-мией.Для ряда полиморфных маркеров генов СЕТР, LPL, LIPC, LRP1, FDFT1 показано отсутствие ассоциации с ишемической болезнью сердца у русских г. Москвы.

3. Для ряда полиморфных маркеров генов ADRB1, ADRB2, ADRB3 показано отсутствие ассоциации с индивидуальной чувствительностью к терапии бетаксололом.

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(—565)Т гена ABCAlc. развитием ИБС. Установлено, что носители генотипа ТТ данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС, тогда как носители генотипа СС имеют пониженный риск развития ИБС.

5. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ser447Ter гена LPL с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Тег и генотипа Тег/Тег данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС.

6. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Ile405Val гена СЕТР с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля Val и генотипа Val/Val данного полиморфного маркера имеют повышенный риск развития ИБС.

7. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С(—1947)А гена HMGCR с развитием ИБС. Установлено, что носители аллеля С и генотипа СС данного полиморфного маркера имеют пониженный риск развития ИБС.

8. Генотип С С полиморфного маркера А(—163)С гена СУР-1А2 ассоциирован с более существенным уменьшением ЧСС на фоне терапии бетаксоло-лом. Больные мерцательной аритмией, имеющие генотип СС полиморфного маркера А(—1бЗ)С гена СУР1А2 более чувствительны к терапии бетаксоло-лом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бровкин, Алексей Николаевич, Москва

1. Acton S, Rigotti A, Landschulz KT, Xu S, Hobbs HH, Krieger M 1996 Identification of scavenger receptor SR-BI as. a high density lipoprotein receptor. Science 271:518-520.

2. Agellon L., E. Quinet, T. Gillette, D. Drayna, M. Brown, A. R. Tall, Organi-zation^of the'human cholesteryl ester transfer protein gene, Biochemistry 29 (1990) 1372-1376.

3. Altmuller J., Palmer L.J., Fischer G. et al. Genomewide scans of complex human diseases: true linkage is hard to find // Am. J. Hum. Genet.- 2001.- V. 69.-P. 936-950.

4. American Heart Association. 2001 heart and stroke statistical,update. Available from http://www.americanheart.org/ statistics. Accessed September, 2001.

5. American Heart Association: Heart and Stroke Facts Statistical Suplement, 2-15(1995).

6. Baranova H. Predictive medicine what is it about? / Int.Congr. in Predictive Medicine. Program and Abstracts. Vishy. France. 2001. P. 3-7.

7. Barter PJ, Brewer Jr HB, Chapman MJ, Hennekens CH, Rader DJ, Tall AR 2003 Cholesteryl ester transfer protein: a novel target for raising HDL and inhibiting atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vase Biol 23:160-167

8. Beisiegel, U. 1996. New aspects on the role of plasma lipases in lipoprotein catabolism and atherosclerosis. Atherosclerosis. 124: 1-8.

9. Berg K., Twin studies of coronary heart disease and its risk factors // Acta genet Med Gemell. 1984. 33. 349-361.

10. Berliner J.A., Heinecke J.W., The role of oxidized lipo-proteinsinathero-genesis // Free Radic Biol Med. 1996. 20. 707-727.

11. Bishop T., Sham P. Analysis of multifactorial disease BIOS Ltd., 2000.345p.

12. Boekholdt SM, Kuivenhoven JA, Hovingh GK, Jukema JW, Kastelein JJ, van Tol A 2004 CETP gene variation: relation to lipid parameters and cardiovascular risk. Curr Opin Lipidol, 15:393-398.

13. Boers G.H., Smals A.G., Trijbels F.J., Heterozygosity for homocystinuria in premature peripheral- and cerebral occlusive arterial disease // N. Engl. J. Med; 1985.313.709-715.

14. Boerwinkle E., Ellsworth D., Hallman M., Biddinger A., Genetic analysis of atherosclerosis: a research pparadigm for the common chronic diseases // Hum Mol. Genet. 1996. 5. 1405-1410.

15. Botstein D., White R.L., Skolnick M., Davis R.W. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms // Am. J. Hum. Genet.- 1980.- V. 32.- P. 314-331.

16. Breitling R. and S. K. Krisans A second gene for peroxisomal HMG-CoA reductase? A genomic reassessment J. Lipid Res., 2002; 43(12): 2031 2036.

17. Breslow JL. Genetics of lipoprotein abnormalities associated with coronary heart disease susceptibility. Ann Rev Genet 2000;34:233-54.

18. Brewer Jr HB 2004 Increasing HDL cholesterol levels. .N Engl J Med 350:1491-1494.

19. Brookes A.J., The essence of SNP // Gene. 1999. 234.177-186.

20. Brown M.S., J.L. Goldstein, The SREBP pathway: regulation of cholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor, Cell 89 (1997)331-340.

21. Bruce, C., Chouinard, R.A., Jr and Tall, A.R. (1998) Plasma lipid transfer proteins, high-density lipoproteins, and reverse cholesterol transport. A. Rev. Nutr., 18, 297-330.

22. Cargill M., Altshuler D., Ireland J., Characterization of single-nucleotide polymorphism in coding regions of human genes // Nature Genetics. 1999. 22. 231-238.

23. Clee,S.M., Loubser,0., Collins,J., Kastelein,JJ. and Hayden,M.R. (2001) The LPL S447X cSNP is associated with decreased blood pressure and plasma triglycerides, and reduced risk of coronary artery disease. Clin.Genet. 60, 293-300.

24. Cotton R.G.H., Scriver C.R. Proof of "Disease causing" mutations // Hum. Mut. 1998. Vol. 12, P. 1-10.

25. Deeb SS, Peng RL. Structure of the human lipoprotein lipase gene published* erratum appears in Biochemistry 1989 Aug 8;28(16):6786. Biochemistry 1989;28:4131.

26. Eisenberg, D.A. (1998) Cholesterol Lowering in the Management of Coronary Artery Disease: The Clinical Implications of Recent Trials, Am. J. Medt 28, 53-64.

27. Faust R.A., J.J. Albers, Synthesis and-secretion of plasma cholesteryl ester transfer protein by human hepatoma cell line, HepG2, Arteriosderosis 7 (1987) 267-275.

28. Faust, J. R., Luskey, K. L., Chin, D. J., Goldstein, J. L. & Brown, M. S. (1982) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79, 5205-5209.

29. Fruchart J.-Oh., Duriez P. 2001 Fundamental basis of atherosclerosis disease. Ann Endocrinol (Paris). V. 62(1). p. 93 — 100.

30. Gagne,S.E., Larson,M.G., Pimstone,S.N. et al. (1999) A common truncation variant of lipoprotein lipase (Ser447X) confers protection against coronary heart disease: the Framingham Offspring Study. Clin.Genet. 55, 450-454.

31. Galtion D., Gavanna J. Kay A., Zhang Q., Coronary artery disease in Europe: what are the genetic risk factors? // J. of the Royal College of Physicians in London. 1995. 29. 429-430.

32. Goldberg IJ, Le NA, Paterniti JR Jr, Ginsberg HN, Lindgren FT, Brown WV. Lipoprotein metabolism during acute inhibition of hepatic triglyceride lipase in the cynomolgus monkey. J Clin Invest 1982; 70:1184-1192.

33. Goldberg, I. J. 1996. Lipoprotein lipase and lipolysis: central roles in lipoprotein metabolism and atherogenesis. J. Lipid Res. 37: 693-707.

34. Gordon T., W.P. Castelli, M.C. Hjortland, K.B. Kannel, T.R. Dawber, High density lipoproteins as a protective factor against coronary heart disease, Am. J. Med. 62(1977) 707-714.

35. Griffon N., Budreck E. C., Long C. J., Broedl U. C., Marchadier D. H. L., Glick J. M., Rader D. J. 2006 Substrate specificity of lipoprotein lipase and endothelial lipase: studies of lid chimeras. J. of Lipid Res., 47, 1803-1811.

36. Groenendijk M, Cantor RM, de Bruin TW, Dallinga-Thie GM. The apoAI-CIII-AIV gene cluster. Atherosclerosis 2001;157:1-11.

37. Hajjar D.P., Nicholson A.C., Atherosclerosis, American Scientist, 8: 460-467(1995).

38. Havel RJ, Kane JP. Structure and metabolism of plasma lipoproteins. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D (editors). The metabolic and molecular bases of inherited disease. New York: McGraw-Hill; 1995. pp. 1841-1851.

39. Heinecke J.W., Lusis A.J., Paraoxonase -gene polymor-phisms associated with coronary heart disease: Support forthe oxidative damage hypothesis? // Am J Hum Genet. 1998. 62. 20-24.

40. Hirano K, Yamashita S, Sakai N, Arai T, Yoshida Y, Nozaki S, Kameda-Takemura K, Matsuzawa Y 1995 Molecular defect and atherogenicity in cho-lesteryl ester transfer protein deficiency. Ann NY Acad Sci 748:599-602.

41. Hirschhorn J.N., Daly M.J. Genome-wide association studies for common diseases and complex traits // Nat. Rev. Genet.- 2005.- V. 6.- P. 95-108.

42. Hokanson; J. E. 1999. Functional variants in the lipoprotein lipase gene and risk cardiovascular disease. Curr. Opin. Lipidol. 10: 393-399.

43. Hopkins P.N., Williams R.R., Human genetics and coronary heart disease: a public health perspective // Annu. Rev. Nutr. 1989. 9. 303-345.

44. Kastelein JJP, JukemaJW, Zwinderman AH et al. Lipoprotein lipase activity is associated with severity of angina pectoris. Circulation 2000: 102: 1629-1633.

45. Keiper, T., J. G. Schneider, and K. A. Dugi. 2001. Novel site in lipoprotein lipase (LPL415;-438) essential for substrate interaction and dimer stability. J. Lipid Res. 42: 1180-1186.

46. Khot UN, Khot MB, Bajzer GT, Sapp SK, Ohman EM, Brener SJ, Ellis SG, Lincoff AM, Topol EJ. Prevalence of conventional risk factors in patients with coronary heart disease. JAMA 2003;290:898-904. PubMed: 12928466.

47. Klein R.J., Ziess C., Chew E.Y. et al. Complement factor H polymorphism in age-related macular degeneration // Science.- 2005.- V. 308.- P. 385-389.

48. Mackness M.L, Mackness B., Durrington P.N., Connelly P.W., Hegele A., Paraoxonase: biochemistry, genetics and'relationship to plasmalipoprotein // Curr Opin Lipidol. 1996. 7. 69 -76.

49. MacLean PS,.Vadlamudi S, MacDonald KG, Pories WJ, Barakat HA 2005 Suppression of hepatic cholesteryl ester transfer protein expression in obese humans with the development of type 2 diabetes mellitus. J Clin Endocrinol Metab 90:2250-2258.

50. Mahley RW, Rail SC. Apolipoprotein E: Far more than a lipid transport protein. Ann Rev Genomics Hum Genet 2000; 1:507~37.

51. Marotti KR, Castle CK, Boyle TP, Lin AH, Murray RW, Melchior GW 1993 Severe atherosclerosis in transgenic mice expressing simian cholesteryl ester transfer protein. Nature 364:73-75.

52. Meirhaeghe A., Bauters C., Helbecque N., Hamon M., McFadden E., Lab-lanche J:M:, Bertrand M., Amouyel P., The human G-protein beta3 subunit C825T polymorphism is associated with coronary artery vasoconstriction // Eur Heart J 2001.Vol.22(10).P.845—848.

53. Nagano M, Nakamura M, Kobayashi N, Kamata J, Hiramori K 2005 Effort angina in a middle-aged woman with abnormally high levels of serum high-density lipoprotein cholesterol: a case of cholesteryl-ester transfer protein deficiency. Circ J 69:609-612.

54. Ohara Y., Peterson T.E., Harrison D.G., Hypercholesterolemia increases endothelial superoxide anion production // J Clin Invest. 1993. 91. 2546-2551.

55. Olender, E. H., and R. D. Simoni. 1992. The intracellular targeting and membrane topology of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase. J. Biol. Chem. 267: 4223^4235.

56. Poulter, C. D. (1990) Acc. Chem. Res. 23, 70-77

57. Radeau T., P. Lau, M; Robb, M. McDonnell, G. Ailhaud; R. McPherson, Gholesteryl ester transfer protein (CETP) mRNA- abundance in human adipose tissue ; relationship to cell size and membrane cholesterol content, J. Lipid Res. 36 (1995) 2552-2561.

58. Renier G, Lambert A. Lipoprotein lipase synergizes with interferon gamma to-induce macrophage nitric oxide synthetase mRNA expression, and nitric oxide production. ArteriosclerThromb Vase BioM995: 15: 392-399.

59. Rong J.X., Rangaswamy S., Shen L. et al., Arterial injury by cholesterol oxidation products causes endothelial dysfunction and arterial wall cho-lesterol accumulation//Arterioscler Thromb Vase Biol. 1998. 18. 1885-1894.

60. Russell D.W. Cholesterol biosynthesis and metabolism. Cardiovasc Drugs Ther 1992; 6: 103-10.

61. Saiki R., Scharf S., Faloona F., Mullis K., Horn G et al, Enzymatic amplification of p-globin genomic gene sequence and restriction site analysis for diagnosis of stickle cell anaemia // Science. 1985. 230. 1350-1354.

62. Saikku P., Leinonen M., Tenkanen L. Chronic Chlamidia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Studi // Ann. Intern. Med.-1992. Vol. 116. - P. -273-278.

63. Sattar N, Petrie JR, Jaap AJ. The atherogenic lipoprotein phenotype and vascular endothelial dysfunction. Atheroscler 1998: 138: 229-235.

64. Shen G.X., J.Y. Zhang, R. Blanchard, H.-F. Zhang, M. Hayden, R. McPher-son, A. Angel, Analysis of cholesteryl ester transfer activity in adipose tissue, Int. J. Obes. 20 (Suppl. 3) (1996) S114-S120.

65. Solberg LA, Strong JP. Risk factors and atherosclerotic lesions. A review of autopsy studies. Arterioscler 1983: 3: 187-198.

66. Swenson T., J. Simmons, C. Hesler, C. Bisgaier, A.R. Tall1, Cholesteryl ester transfer protein is secreted by HepG2 cells and contain.asparagine-linked carbohydrate and sialic acid, J. Biol. Chem. 262 (1987) 16271-16274.

67. Tansey T.R., I. Shechter, Squalene synthase: structure and regulation, Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 65 (2000)157-195.

68. Terese R. Tansey, Ishaiahu Shechter. Structure and regulation of mammalian squalene synthase. Biochimica et Biophysica Acta 1529 (2000) 49-62).

69. Von Eckardstein, A., Nofer, J.R. and Assmann, G. (2001) High density lipoproteins and arteriosclerosis. Role of cholesterol efflux and reverse cholesterol transport. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 21, 13—27.

70. Wang D.G., Fan J.-B., Siao CJi, et al. Large-scale identification, mapping and genotyping of single-nucleotide polymorphism in the human genome // Sci-ence.1998. 280: 1077-1082:

71. Wang N, Lan D, Chen W, Matsuura F, Tall AR 2004'ATP-binding cassette transporters G1 and G4 mediate cellular cholesterol efflux to high-density lipoproteins. Proc Natl Acad Sci USA 101:9774-9779.

72. Wittrup HH, Nordestgaard BG, Steffensen R, Jensen G, Tybjaerg-Hansen A. Effect of gender on phenotypic expression of the S447X mutationJn LPL: the Copenhagen City Heart Study.Atherosclerosis 2002; 165:119-126.

73. Wong H., Schotza M. C. 2002 The lipase gene family. J. of Lipid Res., 43, 993-999.

74. Wong, H., D. Yang, J. S. Hill, R. C. Davis, J. Nikazy, and M. C. Schotz. 1997. A molecular biology-based approach to resolve the subunit orientation of lipoprotein lipase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94: 5594-5598.

75. Wright J.M., Bentzen P. Microsatellits: Genetic markers for the future // Rev. Fish Biol. Fish. 1994. 4. 384-388.

76. Xydakis, A.M., and Jones, P.H. (2003) Use of Statins for Secondary Prevention, Curr. Treat. Options Cardiovasc. Med. 5, 63-73.

77. Yamashita, S., Hirano, K., Sakai, N. and Matsuzawa, Y (2000) Molecular biology and pathophysiological aspects of plasma cholesteryl ester transfer protein. Biochim. Biophys. Acta, 1529, 257-275.

78. Zeiher A.M., Fisslthaler B., Schray-Utz B., Busse R., Nitric oxide modulates the expression of monocyte chemoattractant protein 1 in cultured human endothelial cells // Circ Res. 1995. 76. 980-986.

79. Zupanic I, Balazic J., Romel R. Analysis of nine short tandem repeat (STR) loci in the Slovenian population // Int. J. Leg. Med. 1998. 111. 248-250.

80. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А., Полиморфизм ДНК в популяционной генетике // Генетика. 2002, том 38. №9. 1173-1195.

81. Баранов B.C., Хавинсон В.Х. Определение генетической предрасположенности к некоторым мультифакториальным заболеваниям. Генетический паспорт / Ред. Хавинсон В.Х. СПб.: ИКФ-«Фолиант». 2001. 48 с.

82. Карпов P.C., Дудко В.А. Атеросклероз: патогенез, клиника, функциональная диагностика, лечение. Томск, STT, 1998, 650 с.

83. Пузырев В., Степанов В., Паталогическая анатомия генома человека. Новосибирск, Наука, 1997, с 70-98.

84. Ройтберг Г.Е., Струтынский A.B. Внутренние болезни. Сердечнососудистая система. Москва, Бином-пресс, 2003, 856 с.

85. Сидоренко Б.А., Грацианский H.A., Хроническая ишемическая болезнь сердца. М., Медицина, 1992, т 2, с 5—52.

86. Шулутко Б.И., Макаренко C.B., Ишемическая болезнь сердца. Ренкор., Санкт-Петербург, 1998. •

87. Оганов Р.Г. Профилактика сердечно-сосудистых заболеваний: возможности практического здравоохранения. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2002. *1. С.5-9.