Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Выяснение роли Su(Hw)-инсулятора в стимуляции транскрипции и идентификация новых регуляторных элементов Bithorax-комплекса Drosophila melanogaster

ВАК РФ 03.00.26, Молекулярная генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мельник, Елена Сергеевна

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Регуляторные элементы эукариот.

2.2. Свойства и разнообразие инсуляторов.

2.2.1. Инсуляторы в локусе гена теплового шока.

2.2.2. Инсуляторные свойства промотора eve.

2.2.3. Инсулятор в локусе гена Notch.

2.2.4. Инсуляторный элемент внутри ретротранспозона Idefix.

2.3. Свойства 8и(Н\у)-инсулятора.

2.4. Пространственная и функциональная организация ^Шюгах-комплекса.

3. Материалы и методы.

3.1. Генетические методы.

3.1.1. Линии и мутации Drosophila melanogaster, использованные в данной работе.

3.1.2. Трансформация эмбрионов Drosophila melanogaster и получение трансгенных линий.

3.1.3. Фенотипический анализ экспрессии генов yellow и white в трансгенных линиях.

3.1.4. Генетические скрещивания.

3.2. Биохимические методы.

3.2.1. Выделение ДНК из дрозофилы.

3.2.2. Саузерн-блот анализ.

3.2.3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3.2.4. Секвенирование плазмид и ПЦР продуктов.

3.2.5. Молекулярное клонирование.

3.2.6. Трансформация бактериальных клеток плазмидами.

3.2.7. Выделение ДНК плазмид методом щелочного лизиса.

3.2.8. Выделение фрагментов ДНК из геля

3.2.9. Создание конструкций.

4. Результаты.

4.1. Исследование новых свойств инсулятора Su(Hw).

4.1.1. Su(Hw) стимулирует транскрипцию гена yellow, если удалена регуляторная область перед промотором.

4.1.2. Уровень стимуляции транскрипции напрямую зависит от числа сайтов связывания белка Su(Hw).

4.1.3. Предполагаемые участки прикрепления к ядерному матриксу в инсуляторе Su(Hw) не участвуют в стимуляции тот. yellow.

4.1.4. Инсулятор Su(Hw) не обладает способностью компенсировать отсутствие энхансера yellow.

4.1.5. Функциональный анализ доменов белка Su(Hw).

4.1.6. Анализ влияния инсулятора Su(Hw) на экспрессию гена white.

4. 2. Новые регуляторные элементы Я/гЛогах-комплекса.

4.2.1. Регуляторная область гена Abd-B взаимодействует с МСР при активации гена white энхансером глаз.

4.2.2. Регуляторная область гена Abd-A содержит сайленсер.

4.2.3. Фрагмент из домена iab б не репрессирует транскрипцию гена yellow и не взаимодействует с МСР.

4.2.4. Фрагмент из домена iab4 проявляет свойства инсулятора.

5. Обсуждение результатов.

5.1. Новые свойства 8и(Н\у)-инсулятора.

5.1.1. Su(Hw) является стимулятором работы промотора, действующим на больших расстояниях.

5.1.2. Функции блокирования энхансера, репрессии и активации обеспечиваются различными доменами белка Su(Hw).

5.1.3. Возможные механизмы стимуляции транскрипции инсулятором Su(Hw).

5.2. Новые данные о Bithorax-комплексе.

5.2.1. Исследованные фрагменты ^//Логах-комплекса проявляют свойства регуляторных элементов.

5.2.2. Модель функциональной организации Bithorax-коштекса.

6. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Выяснение роли Su(Hw)-инсулятора в стимуляции транскрипции и идентификация новых регуляторных элементов Bithorax-комплекса Drosophila melanogaster"

Геном высших эукариот содержит огромное количество генов и элементов, регулирующих их экспрессию, промоторов, энхансеров и сайленсеров. Энхансеры активируют транскрипцию гена и могут взаимодействовать непосредственно с белками транскрипционного комплекса, который образуется на промоторе. Сайленсеры негативно влияют на экспрессию. И те, и другие элементы действуют независимо от ориентации и могут находиться от промотора на расстоянии, достигающем нескольких сотен тысяч пар нуклеотидов. Многие энхансеры не имеют специфичности к определенному промотору и способны активировать транскрипцию разных генов. В геноме гены часто располагаются достаточно близко друг к другу, поэтому должны существовать механизмы, обеспечивающие взаимодействие энхансера с промотором своего гена и предотвращающие активацию чужих промоторов. Около пятнадцати лет назад был открыт новый тип регуляторных элементов, названных инсуляторами. Инсуляторы блокируют взаимодействия между энхансером и промотором гена, если находятся между ними, и ограждают ген от действия сайленсеров.

В настоящее время наиболее изученным инсулятором Drosophila melanogaster является элемент Su(Hw), входящий в состав ретротранспозона gypsy. Он содержит сайты связывания белка Su(Hw), который и определяет его функции. В блокировании энхансера также принимает участие белок Mod(mdg4)-67.2, который не оказывает влияния на барьерную функцию Su(Hw). Однако регуляторные функции элемента Su(Hw) не ограничиваются только лишь свойствами инсулятора. В отсутствии белка Mod(mdg4)-67.2 инсулятор Su(Hw) становится специфичным дальнодействующим ингибитором транскрипции. Данные исследований показывают, что он может репрессировать промотор гена white на эмбриональной стадии и промотор гена yellow. Помимо этого Su(Hw) может быть и активатором транскрипции. Недавно было продемонстрировано, что он оказывает стимулирующее влияние на промоторы генов алкоголь-дегидрогеназы (Adh) и gypsy. До сих пор не существует единого мнения о механизмах, лежащих в основе действия инсуляторов. Изучение новых свойств Su(Hw) поможет установить характер взаимодействий между различными элементами, участвующими в регуляциии экспрессии. Задачей этой работы являлось исследование влияния, оказываемое Би(Н\у)-инсулятором на работу промоторов генов yellow и white, и определение функциональных элементов инсулятора Su(Hw) и белка Su(Hw), необходимых для стимуляции промотора.

Другая часть нашей работы была посвящена изучению одной из интереснейших регуляторных систем, которой является Bithorax-комплекс Drosophila melanogaster. Гомеозисные гены, входящие в состав этого комплекса, определяют развитие и приобретение индивидуальных черт сегментов тела дрозофилы. Инфра-абдоменальные участки регуляторной последовательности комплекса представляют собой серию изолированных хроматиновых доменов, которые содержат по одному энхансеру, активирующему экспрессию одного из генов. В каждом парасегменте промотор гомеозисного гена активируется энхансером, расположенным в соответствующем домене. Обособленность такого функционального взаимодействия обеспечивается регуляторными модулями, расположенными на границах доменов. К настоящему моменту описаны только три таких модуля: Fab-8, Fab-7 и МСР. Логично предположить существование других регуляторных модулей в составе 5г7йогах-комплекса, а также то, что в области промоторов гомеозисных генов имеются элементы, взаимодействующие с регуляторными модулями инфра-абдоменальных доменов. Мы решили отобрать фрагменты Бг'/Тюгах-комплекса, которые по своим структурным характеристикам могли бы являться регуляторными элементами, и изучить их функциональное взаимодействие с МСР и другими элементами модельной генетической системы.

Полученные нами данные являются вкладом в изучение функциональных взаимодействий между различными регуляторными элементами 5//Логах-комплекса. Результаты проведенной работы также являются полезными для понимании генетических основ процесса развития организма и для генной терапии, в которой инсуляторы, обеспечивающие специфичную активацию и независимую экспрессию трансгенов, находят все большее применение.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная генетика", Мельник, Елена Сергеевна

6. ВЫВОДЫ.

1. Впервые показано, что инсулятор Su(Hw) способен стимулировать транскрипцию с ослабленных промоторов генов yellow и white.

2. Экспериментально продемонстрировано, что способность 8и(!^)-инсулятора стимулировать транскрипцию обусловлена ДНК-связывающим доменом белка Su(Hw).

3. В промоторной области гена Abd-A Bithorax-комплекса идентифицирован регуляторный элемент, который обладает свойством репрессировать транскрипцию генов yellow и white в трансгенных линиях.

4. Между третьим и четверым инфра-абдоменальными доменами Bithorax-комплекса обнаружен новый регуляторный элемент, который проявляет свойства инсулятора.

5. В промоторной области гена Abd-B комплекса Bithorax выявлен элемент, который функционально взаимодействует с элементом МСР, определяющим границу между четвертым и пятым ифра-абдоменальными доменами.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мельник, Елена Сергеевна, Москва

1. Георгиев П.Г., Муравьева Е.Е., Головнин А.К., Грачева Е.М., Беленькая Т.Ю. Инсуляторы и взаимодействие между регуляторными элементами на больших дистанциях у высших эукариот // Генетика. 2000. Т.36. № 12. С. 1588-1597.

2. Куллыев А. П., Паршиков А. Ф., Георгиев П. Г., Груздева Н. М. Анализ взаимодействия между инсулятором Su(Hw)h регуляторными элементами Abdominal-B гена у Drosophila melanogaster II ДАН. 2004. т.398. с.268-271

3. Burgess-Beusse В., Farrell C., Gaszner M., Litt M., Mutskov V. et. al. The insulation of genes from external enhancers and silencing chromatin // Proc Natl Acad Sci USA. 2002. V.99(4). P.16433-16437

4. Bell A.C., Felsenfeld G. Methylation of a CTCF-dependent boundary controls imprinted expression of the Ig/2 gene //Nature. 2000. V.405. P.482-485.

5. Bell A., West G., Felsenfeld G. Insulators and boundaries: versatile regulatory elements in the eukaryotic genome // Science. 2001. V.291. P.447-450.

6. Belenkaya Т., Barseguyan K., Hovhannisyan H., Biryukova I., Kochieva E., Georgiev P. P element sequences can compensate for a deletion of the yellow regulatory region in Drosophila melanogaste II Mol. Gen. Genet. 1998. V. 259. P.79-87

7. Bi X., Broach J. Chromosomal boundaries in S. cerevisiae II Curr. Opin. Gen. Dev. 2001. V. 11. P.l99-204.

8. Breiling A., Bonte S., Ferrari P. et al. The Drosophila polycomb protein interacts with nucleosomal core particles in vitro via its repression domain // Mol. Cell. Biol. 1999. V.19. P.8451-8460.

9. Brown J. L., Mucci D., Whiteley M., Dirkesen M.L., Kassis J.A. The Drosophila Polycomb group gene Pleohomeotic encodes a DNA binding protein with homology to the transcription factor YY1// Mol. Cell. 1998. Vol. 1. P. 1057-1064.

10. Buchner K., Roth P., Schotta G., Krauss V., Saumweber H., Reuter G., Dorn R. Genetic and molecular complexity of the position effect variegation modifier mod(mdg4) in Drosophila II Genetics. 2000. V.155. P.141-157

11. Butler J.E. and Kadonaga J.T. Enhancer-promoter specificity mediated by DPI or TATA core promoter motifs // Genes Dev. 2001. V. 15. P.2515-2519

12. Busturia A., Bienz M. Silencers in Abdominal-B, a homeotic Drosophila gene // Embo J. 1993. Vol. 12. P. 1415-1425.

13. Busturia A., Lloyd A., Bejarano F., Zavortink M.,Xin H., Sakonjo S. The MCP silencer of the Drosophila Abd-B gene requires both Pleoihomeotic and GAGA factor for the maintenance of repression // Development. 2001. Vol. 128. P. 2163-2173.

14. Busturia A., Wrightman C., Sakonju S. A silencer is required for maintenance of transcriptional repression throughout Drosophila development // Development. 1997. Vol. 124. P. 4343-4350.

15. Cai H., Levine M. Modulation of enhancer-promoter interactions by insulators in the Drosophila embryo // Nature. 1995. Vol. 376. P. 533-536.

16. Cai H., Levine M. The gypsy insulator can function as a promoter-specific silencer in the Drosophila embrio // EMBO J. 1997. V. 16. P. 1732-1741.

17. Cai H., Shen P. Effects of cis arrangement of chromatin insulators on enhancer-blocking activity // Science. 2001. V. 291. P.293-295.

18. Cai H.N., Zhang Z., Adams J.R., Shen P. Genomic context modulates insulator activity through promoter competition // Development. 2001. V.128. P.43-39-43-47

19. Casanova J., Sanchez-Herrero E., Morata G. Identification and characterization of a parasegment specific regulatory element of the Abdomenal-B gene of Drosophila // Cell. 1986. V. 47. P.627-636

20. Casanova J., White R.A.N. Trans-regulatory functions in the Abdomenal-B gene of the Bithorax complex // Development. 1987. V.101. P.l 17-122

21. Celniker S. E., Sharma S., Keelan D. J.,Lewis E. B. The molecular genetics of the Bithorax complex of Drosophila: cw-regulation in the Abdominal-B domain // EMBO J. 1990. Vol.9. P.4227-4286

22. Chen S., Corces V. G. The gypsy insulator of Drosophila affects chromatin structure in a directional manner// Genetics. 2001. V.159. P.1649-1658.

23. Chung J., Whitely M., Felsenfeld G. A 5' element of the chicken p-globin domain serves as an insulator in human erythroid cells and protects against position effect in Drosophila II Cell. 1993. V. 74. P. 505-514.

24. Chiang A., O'Connor M. В., Paro R., Simon J.,Bender W. Discrete Polycomb-binding sites in each parasegmental domain of the Bithorax complex // Development. 1995. Vol. 121. P. 1681-1689.

25. Conte C., Dastugue В., Vaury C. Coupling of enhancer and insulator properties identified in two retrotransposons modulate their mutagenetic impact on nearby genes // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P. 1767-1777.

26. Cuvier O., Hart C.M., Laemmli U.K. Identification of a class of chromatin boundary elements // Mol. Cell. Biol. 1998. Vol. 18. P. 7478-7486

27. DeLorenzi M., Bienz M. Expression of Abdomenal-B homeoprotein in Drosophila embryos // Development. 1990. V.108. P.323-329

28. Donzer D., KamakakaR.T. RNA polymerase III and RNA polymerase II promoter complex are heterohromatin barriers in Saccharomyces cerevisiae // EMBO J. 2001. V.20. P.520-531

29. Dorsett D. Distant liaisons: long range enhancer-promoter interactions in Drosophila II Curr. Opin.Genet. Dev. 1999. Vol. 9. P. 505-514.

30. Duncan I.The Bithorax complex // Annu. Rev. Genet. 1987. Vol. 21. P. 285-319.

31. Eberl D.F., Duyf B.J., Hilliker A.J. The role of heterochromatin on the expression of a heterochromatic gene, the rolled locus of Drosophila melanogaster // Genetics. 1993. V.134. P.277-292

32. Farkas G., Gausz J., Galloni M., Reuter G., Gyurkovics H., Karch F. The Trithorax-like gene encodes the Drosophila GAGA factor // Nature. 1994. Vol. 371. P. 806-808.

33. Farkas G., Udvardy A. Sequence of scs and scs1 Drosophila DNA fragments with boundary function in the control of gene expression // NAR. 1992. Vol. 20. P. 2604.

34. Fourel G., Boscheron C., Revardel E., Lebrun E. et al. An activation-independent role of transcription factors in insulator function // EMBO Rep. 2001. V.2. P. 124-132

35. Fritsch C., Brown J., Kassis J., Mtiller J. The DNA-binding Polycomb group protein Pleiohomeotic mediates silencing of a Drosophila homeotic gene // Development. 1999. V.126. P.3905-3913.

36. Galloni M, Gyurkovics H, Schedl P, Karch F. The bluetail transposon: evidence for independent си-regulatory domains and domain boundaries in the Bithorax complex // Embo J. 1993. Vol. 12. P. 1087-1097.

37. Garcia E., Marcos-Gutierrez C., del Mar Lorente M., Moreno J., Vidal M. RYBP, a new repressor protein that interacts with components of the mammalian Polycomb complex and with the transcription factor YY1 // EMBO J. 1999. Vol. 18. P. 3404-3418.

38. Gaszner M., Vazquez J., Schedl P. The Zw5 protein, a component of the scs chromatin domain boundary, is able to block enhancer-promoter interaction // Genes Dev. 1999. Vol.13. P. 2098-2107.

39. Gelbart W. Synapsis-dependent allelic complementation at the decapentaplegic gene complex in Drosophila melanogaster// Proc. Natl. Acad. Sci. Usa. 1982. Vol.79. P.2636-2640.

40. Gdula D., Corces V. Characterization of functional domains of the su(Hw) protein that mediate the silencing effect of mod(mdg4) mutations // Genetics. 1997. V.145. P.153-161.

41. Georgiev P., Corces V. The su(Hw) protein bound to gypsy sequences in one chromosome can repress enhancer-promoter interactions in the paired gene located in the other homolog //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V.92. P.5184-5188.

42. Georgiev P., Kozycina M. Interaction between mutations in the suppressor of Hairy wing and modifier of mdg4 genes of Drosophila melanogaster affecting the phenotype of gy/wy-induced mutations // Genetics. 1996. Vol. 142. P. 425-436.

43. Gerasimova Т. I., Gdula D. A., Gerasimov D. V., Simonova O., Corces V. G. A Drosophila protein that impacts directionality on a chromatin insulator is an enhancer of position-effect variegation // Cell. 1995. Vol. 82. P.587-597.

44. Gerasimova T.I., Corces V.G. Polycomb and Trithorax group proteins mediate the function of a chromatin insulator // Cell. 1998. Vol. 92. P.511-521.

45. Geyer P. К. The role of insulator elements in defining domains of gene expression // Curr. Opin. Genet. Dev. 1997. Vol.7. P.242-248.

46. Geyer P.K., Green M.M., Corces V.G. Tissue-specific transcriptional enhancers may act in trans on the gene located in the homologous chromosome: the molecular basis of transvection in Drosophila // EMBO J. 1990. V.9(7). P.2247-2256

47. Geyer P. K., Clark I. Protecting against promiscuity: the regulatory role of insulators // Cell. Mol. Life Sci. 2002. V.59. P.2112-2127

48. Geyer P. K., Corces V. G. DNA position-specific repression of transcription by a Drosophila zinc finger protein // Genes Dev. 1992. Vol. 6. P.1865-1873.

49. Geyer P. K., Spana C., Corces V. G. On the molecular mechanism of gypsy-induced mutations at the yellow locus of Drosophila melanogaste // EMBO J. 1986. V.5. P.2657-2662.

50. Ghosh D., Gerasimova Т., Corces V. Interactions between the su(Hw) and Mod(mdg4) proteins required for gypsy insulator function// EMBO J. 2001. V.20. P.2518-2527.

51. Golic K. G. Local transposition of P elements in Drosophila melanogaster and recombination between duplicated elements using a site-specific recombinase // Genetics. 1994. V.137. P.551-63.

52. Gorczyca M., Popova X., Budnik V. The gene mod(mdg4) affects synapse specificity and structure in Drosophila I I J. Neurobiol. 1999. V.39. P.447-460.

53. Gyurkovics H., Gausz J., Kummer J., Karch F. A new homeotic mutation in the Drosophila Bithorax complex removes a boundaiy separating two domains of regulation // Embo J. 1990. Vol. 9. P. 2579-2585.

54. Hagstrom K., Muller M., Schedl P. Fab-7 functions as a chromatin domain boundary to ensure proper segment specification by the Drosophila Bithorax complex // Genes Dev. 1996. Vol. 10. P. 3202-3215.

55. Hagstrom К., Muller M., Schedl P. A Polycomb and GAGA dependent silencer adjoins the Fab-7 boundary in the Drosophila Bithorax complex // Genetics. 1997. Vol. 146. P. 1365-1380.

56. Harrison D. A., Gdula D. A., Coyne R. S., Corces V. G. A leucine zipper domain of the suppressor of Hairy-wing protein mediates its repressive effect on enhancer function // Genes Dev. 1993. Vol. 7. P.1966-1978.

57. Hart C.M., Cuvier O., Laemmli U.K. Evidence for an antagonistic relationship between the boundary element-associated factor BEAF the transcription factor DREF // Chromosoma. 1999. V. 108. P.375-383

58. Hart C., Zhao K., Laemmli U. The scs' boundary element: characterization of boundary element-assaciated factors // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.999-1009.

59. Hogga I., Mihaly J., Barges S., Karch F. Replacement of Fab-7 by the gypsy or scs insulator disrupts long-distance regulatory interactions in the Abd-B gene of the Bithorax complex // Mol. Cel. 2001. Vol. 8. P. 1145-1151.

60. Karess R.E. and Rubin G.M. Analysis of P transposable element functions in Drosophila. //Cell. 1984. V.38. P.135-146.

61. Karch F., Galloni M., Sipos L., Gausz J.,Gyurkovics H., Schedl P. Мер and Fab-7: molecular analysis of putative boundaries of cw-regulatory domains in the Bithorax complex of Drosophila melanogaster // Nucleic Acids Res. 1994. Vol. 22. P. 3138-3146.

62. Katsani K., Hajibagheri M., Verrijzer C. Cooperative DNA binding by GAGA transcription factor requires the conserved BTB/POZ domain and reorganizes promoter topology // EMBO J. 1999. V.18. P.698-708.

63. Kellum R., Schedl P. A position-effect assay for boundaries of higher order chromosomal domains // Cell. 1991. Vol. 64. P. 941-950.

64. Kellum R., Schedl P. A group of scs elements function as domain boundaries in an enhancer-blocking assay // Mol. Cel. Biol. 1992. Vol. 12. P. 2424-2431.

65. Kim J., Shen В., Rosen C., Dorsett D. The DNA-binding and enhancer-blocking domains of the Drosophila suppressor of Hairy-wing protein // Mol. Cel. Biol. 1996. Vol. 16. P.3381-3392.

66. Krebs J. E., Dunaway M. // Mol. Cell. 1998. Vol. 1. P. 301-308.Kaufman P.D. and Rio D.C. P element transposition in vitro proceeds by a cut-and-paste mechanism and uses GTP as a cofactor. // Cell. 1992. V.69. P.27-39.

67. Lewis E. B. A gene complex controlling segmentation in Drosophila II Nature. 1978. Vol.276. P.565-570.

68. Lindsley D. L., Zimm G. G. The Genome of Drosophila melanogaster // Academic Press, New York. 1992.

69. Litt M.D., Simpson M.s Recillas-Targa F., Prioleau M.N., Felsenfeld G. Transitions in histoneacetylation reveal boundaries of three separately regulatory neighboring loci // EMBO J. 2001. V. 20. P.2224-2235.

70. Lu L., Tower J. A transcriptional insulator element, the Su(Hw) binding site, protects a chromosomal DNA replication origin from position effects // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.2202-2206.

71. Mallin D., Myung J., Patton J. et al. Polycomb group gene repression is blocked by the Drosophila suppressor of Hairy-wing Su(Hw). insulator // Genetics. 1998. V.148. P.331-339.

72. Martin, M., Y. B. Meng and W. Chia Regulatory elements involved in the tissue-specific expression of Пае, yellow gene of Drosophila II Mol. Gen. Genet. 1989 V.218 P.l 18-126.

73. Maurange C., Paro R. A cellular memory module conveys epigenetic inheritance of hedgehog expression during Drosophila wing imaginal disc development // Genes Dev. 2002. V.20. P.2672-2683

74. Mazo A., Mizrokhi L., Karavanov A. et al. Suppression in Drosophila: su(Hw) and su(f) gene products interact with a region of mdg4 (gypsy) regulating its transcriptional activity // EMBO J. 1989. V.8. P.903-911.

75. Mihaly J., Hogga I., Barges S., Gallon M., Mishra R., Hagstrom K., Muller M., Schedl P., Sipos L., Gausz J., Gyurkovics H., Karch F. Chromatin domain boundaries in the Bithorax complex // Cell. Mol. Life Sci. 1998. V.54. P.60-70.

76. Mihaly J., Hogga I., Gausz J., Gyurkovics H., Karch F. In situ dissection of the Fab-7 region of the Bithorax complex into a chromatin domain boundary and a Polycomb-response element//Development. 1997. Vol.124. P. 1809-1820.

77. Mohrmann L., Kal A., Verrijzer P. Characterization of extended Myb-like DNA-binding domain of Tritorax group protein Zeste // Biol. Chem. J. 2002. V.227. P.47385-47392.

78. Morris J.R., Chen J.L., Geyer p.K., Wu C.T. Two modes of transvection: enhancer action in trans and bypass of insulator protection in cis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 95. P. 10740-107-45.

79. Muller M., Hagstrom K., Gyurkovics H., Pirrotta V., Schedl P. The Мер element from the Drosophila melanogaster Bithorax complex mediates long-distance regulatory interactions // Genetics. 1999. Vol.153. P. 1333-1356.

80. Muravyova E., Golovnin A., Gracheva E., Parshikov A., Belenkaya Т., Pirrotta V., Georgiev P. Loss of insulator activity by paired su(Hw) chromatin insulators // Science. 2001. Vol.291. P.495-498.

81. Mutskov V.J., Faarrell C.M., Wade P.A., Wolffe A.P., Felsenfeld G. The barrier function of an insulator couples high histone acetylation levels with specific protection of promoter DNA from methilation // Genes Dev. 2002. V.16. P. 1540-1554

82. Nabirochkin S., Ossokina M., Heidmann T. A nuclear matrix/scaffold attachment region co-localizes with the gypsy retrotransposon insulator sequence // J.Biol.Chem. 1998. V.273. P.2473-2479.

83. Ohtsuki S., Levine M. GAGA mediates the enhancer blocking activity of the eve promoter in the Drosophila embryo // Genes Dev. 1998. V.12. P.3325-3330.

84. O'Donnell K.H., Wensink P.C. GAGA factor and TBF1 bind DNA elements that direct ubiquitous transcription of the Drosophila alpha 1-tubulin gene // Nucleic Acids Res. 1994. V.22. P.4712-4718.

85. O'Kane C.J. and Gehring W.J. Detection in situ of genomic regulatory element in Drosophila // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1987. V. 84. P. 9123-9127

86. Oki M., Kamakaka R. T. Blockers and barriers to transcription: competing activities? // Curr. Opin. Cell Biol. 2002. V. 14. P.299-304.

87. Orihara M., Hosono C., Kojima Т., Saigo K. Identification of engrailed promoter elements essential for interactions with a stripe enhancer in Drosophila embryos // Genes Cells. 1999. V.4. P.205-218.

88. Palla F., Melfi R., Anello L., Di Bernardo M., Spinelli G. Enhancer blocking activity located near the 3' end of the sea urchin early H2A histone gene // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.2272-2277.

89. Paro R., Harte P. J. The role of Polycomb group and trithorax group chromatin complexes in the maintenance of determined cell states// Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1996. P.507-528.

90. Pattatucci A. M., Kaufman Т. C. The homeotic gene Sex combs reduced of Drosophila melanogaster is differentially regulated in the embryonic and imaginal stages of development // Genetics. 1991. Vol.129. P.443-461.

91. Pirrotta V. PcG complexes and chromatin silencing // Curr.Opin.Gen.Dev. 1997. V.7. P.249-258.

92. Pirrotta V. Polycomb silencing and the maintenance of stable chromatin states // Results Probl. Cell Differ. 1999. V.25. P.205-228.

93. Qian S., Vaijavand В., Pirrotta V. Molecular analysis of the zeste-white interaction reveals a promoter-proximal element essential for distant enhancer-promoter communication // Genetics. 1992. V.131. P.79-90.

94. Ringrose L., Rehmsmeier M., Dura J., Paro R. Genom-wide prediction of Polycomb/Tritorax response elements in Drosophila melanogaster II Development. 2003. V.5. P.759-751.

95. Robinett C., O'Connor A., Dunaway M. The repeat organizer, a specialized insulator element within the intergenic spacer of the Xenopus rRNA genes // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.2866-2875.

96. Roseman R. R., Johnson E. A., Rodesch С. K., Bjerke M., Nagoshi R. N., Geyer P. К. A P element containing suppressor of Hairy-Wing binding region has novel properties for mutegenesis in Drosophila melanogaster И Genetics. 1995. Vol.141. P.1061-1074.

97. Rubin G. M., Spradling A. C. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors // Science. 1982. V. 218. P. 348-353.

98. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning: a Laboratory Manual, Ed.2. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY //1989

99. Sanchez-Herrero E. Control of the expression of the Bithorax complex abdominal-A and Abdominal-B by m-regulatory regions in Drosophila embryos // Development. 1991. Vol.111. P.437-449.

100. Sanger F., Nicken S., Coulson A. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V.74. P.5463-5487.

101. Sanchez-Herrero E., Vernos I., Marco R., Morata G. Genetic organization of Drosophila Bithorax complex // Nature. 1985. Vol.313. P.108-113.

102. Scott K., Taubman A., Geyer P. Enhancer blocking by the Drosophila gypsy insulator depends upon insulator anatomy and enhancer strength // Genetics. 1999. V.153. P.787-798.

103. Siegal M. L., Hartl D. L. Application of Cre/loxP in Drosophila. Site-specific recombination and transgene coplacement // Methods Mol. Biol. 2000. V.136 P.487-495.

104. Simon J., Chiang A., Bender W., Shimell M. J., O'Connor M. Elements of the Drosophila Bithorax complex that mediate repression by Polycomb group products// Dev. Biol. 1993. Vol. 158. P. 131-144.

105. Simon J., Peifer M., Bender W., O'Connor M. Regulatory elements of the Bithorax complex that control expression along the anterior-posterior axis// Embo J. 1990. Vol. 9. P.3945-3956.

106. Sipos L., Mihaly J., Karch F., Schedl P., Gausz J. Et Al. Transvection in the Drosophila Abd-B domain: Extensive upstream sequences are involved in anchoring distant cw-regulatory regions to the promoter // Genetics. 1998. Vol. 149. P. 1031-1050.

107. Smith P., Corces V. The suppressor of Hairy-wing binding region is required for gypsy mutagenesis // Mol.Gen.Genet. 1992. V.233. P.65-70.

108. Spana C., Corces V. DNA bending is a determinant of binding specificity for a Drosophila zink finger protein // Genes Dev. 1990. V.4. P.1505-1515.

109. Spana C., Harrison D., Corces V. The Drosophila melanogaster supressor of Hairy wing protein binds to specific sequences of the gypsy retrotransposon // Genes Dev. 1988. V.2. P.1414-1423

110. Strutt H., Cavalli G., Paro R. Co-localization of Polycomb protein and GAGA factor on regulatory elements responsible for the maintenance of homeotic gene expression.// EMBO J. 1997. V.16. P.3621-3632

111. Torigoi E., Bennani-Baiti I.M., Rosen C., Gonzalez K., Morcillo P., et al. Chip interacts with diverse homeodomain proteins and potentiates bicoid activity in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V.97. P.2686-2691

112. Udvardy A. Dividing the empire: boundary chromatin elements delimit the territory of enhancers // EMBO J. 1999. V.18. P. 1-8.

113. Vazquez J., Schedl P. Deletion of an insulator element by the mutation facet-strawberry in Drosophila melanogaster // Genetics. 2000. Vol. 155. P. 1297-1311.

114. Wakimoto B.T., Hearn M.G. The effect of chromosome rearrangements on the expression of heterochromatic genes in chromosome 2L of Drosophila melanogaster II Genetics. 1990. V.125. P.1410-154

115. Wei, W., Brennan M. D., The gypsy insulator can act as a promoter-specific transcriptional stimulator // Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.7714-7720.

116. Zavortink M., Sakonju S. The morphogenetic and regulatory functions of the Drosophila Abdominal-B gene are encoded in overlapping RNAs transcribed from separate promoters // Genes Dev. 1989. V.3. P. 1969-1981.

117. Zhao K., Hart С. M., Laemmli U. K. Visualization of chromosomal domains with boundary element-associated factor BEAF-32 // Cell. 1995. Vol.81. P.879-889.

118. Zhong X., Krangel M. An enhancer-blocking element between alpha and delta gene segments within the human T cell receptor alpha/delta locus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.5219-5224.

119. Zhou J, Ashe H, Burks C, Levine M. Characterization of the transvection mediating region of the Abdominal-B locus in Drosophila II Development. 1999. Vol.126. P.3057-3065.

120. Zhou J, Levine M. A novel cw-regulatory element, the PTS, mediates an anti-insulator activity in the Drosophila embryo // Cell. 1999. Vol.99. P.567-575.

121. Zhou J., Barolo S., Szymanski P., Levine M. The Fab-7 element of the Bithorax complex attenuates enhancer-promoter interactions in the Drosophila embryo // Genes Dev. 1996. Vol.10. P.3195-3201.

122. Zuckerkandl E. Sectorial gene repression in the control of development// Gene. 1999. V.238. P.63-76.

123. Груздева H. M., Куллыев А. П. Инсуляторы Drosophila melanogaster: структура, функции // Успехи биологической химии. 2002. т.42. с. 161-176