Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Выделение термофильных кампилобактеров от людей и животных в Монголии

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Выделение термофильных кампилобактеров от людей и животных в Монголии"

3 и С ?

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ' ГОСУДАРСТВЕННЫЙ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 576.851.48

ТОГМШШН ГУНСМАА

ШДЕЛЕНИЕ ТЕРМОФИЛЬНЫХ КАМПИЛОЕАКТБРОВ ОТ ЛЮДЕЙ И ЖИВОТНЫХ В МОНГОЛИИ

03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкг-Петербург 1992

Работа выполнена 'на .кафедре микробиологии Санкт-Петербургского государственного санитарно-гигиенического медицинского института ......

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор ": В.Е.Иванов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

В.Г.Кубась

доктор медицинских наук, профессор

B.В.Тэц

Ведущая организация - Военно-медицинская ордена Ленина

Краснознаменная академия имени

C.М.Кирова

Защита дисоертации состоится 24 ноября 1992 года в /Iе0 часов на заседании Специализированного Совета (шифр К.Ш4.21.01) по присуждению ученой отепени кандидата наук при Санкт-Петербургском государственном оаниарио-гигиеническом медицинском институте по адреоу: 195СБ7, г.Санкт-Петербург, Пискаревский проопект, дом 47 в зале заоеданиГ Ученого совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке СПГСП.Ш.

Автореферат разослан года

Ученый секретарь Специализированного совета, доктор медицинских наук

А.Г.Бойцов

îOfV'MOKAP

v .

r^'H '

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Диагностика, лечение и профилактика острых кишечных инфекций составляют одну из наиболее значительных продлен заравоохранэтя во всех странах мира л привлекают особое внимание Всемирной Организации Здравоохранения. По данным ВОЗ среда детой в возрасте 5 лет и старше в странах Азии, Африки и Латинской Америки ежегодно регистрируется около I миллиарда случаев заболеваний, сопровождающихся диарей-шм синдромом, Каждый год на зекпом оарэ от диареи умирает до 5 млн. детей (Чалка H.A., 1988). ОКИ приносят огромный социальный и экономический ущерб странам своего распространения.

Наибольшие трудности для эпидемиологического контроля представляют диарейные заболевания, этиология которих не р.тс-шифровована вследствие недостаточной изученности возбудителя, отсутствия соответствующих методов диагностики лля технической сложности выделения и идентификации. Особый интерес к отой группе ОКИ представляет кашшлобактериоз, зарегястрировзшшй во многих странах шра. Так, в Великобритании заболеваемость каыпилобактериозом в IS85-86 гг составила 30% общего число ОКИ (Сафонова Н.В. .и соавт., IS87). В России заболеваемость лашилобзятериозом составляагб,98% (Иорин A.A., 1990).

Возбудители кампллобактериоза интенсивно циркулируют среди животных и людей, обусловливая бактерионосительство, спорадические случаи заболевания и вспышки, порой вовлекающие сотни и тысячи людей ( ßoen. Ee-éal, 1984; Glan.il. e-lul, IS83; X£-éze (г. eiitL ; IS84 и др. ). Установлено, что наиболее существенным резервуаром инфекции являются домашние птицы и крупный рогатый скот ( &1UC.I Ъ

еЫ ., 1977; Р-ЖоН J e/ad,

1982 и др.).

Данные о заболеваемости камцилобактериозом и о выделении кампилобактеров от людей и сельскохозяйственных животных в Монголки отсутствуют. Одной из причин этого является отсутствие рутинных методов и общедоступных сред диагностики; техническая слокнооть и высокая стоимость исследований. Это, в свою очередь, определяется такш.ш биологическими особенностями возбудителя, как термофильность, ыикроаврофильность, неустойчивость цри транспортировке и хранении.

В Монголии благодаря широкому внедрению профилактических прививок в практику здравоохранения, снизилась заболеваемость воздушно-капельными инфекциями, в то же время частота острых кишечных инфекций остается высокой. В стране регистрируется заболеваемость дизентерией, тифо- паратифозными заболеваниями, сальмонеллезом. В то ка время, в значительном проценте случаев ОКИ возбудитель остается неизвестным. Не производится лабораторная диагностика камшшобактериоза, не известны резервуары, пути циркуляции и уровень инфицированнооти населения Монголии.

В связи с этим предотавляется актуальным определение наличия и изучение распространения возбудителей кампилобактери-оза среди людей и кивотних в условиях Монголии.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Вышить термофильные кампилобактеры и распространенность камшшобактериоза о помощью оптимальных методов выделения и идентификации возбудителей среди людей и сельскохозяйственных животных в Монголии.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЭДОВДНИЯ

- Провести сравнительную оценку существующих методов

лабораторной диагностики кампилобактериоза, выбрать методы, пригодные для внедрения в бактериологических лабораториях Монголии.

- Провести лабораторное обследование на камцилобактериоз больных о диарейным синдромсм, госпитализированных в стационары Монголии для выявления кампилобактериоза и установления его актуальности в данном регионе.

- Обследовать сельскохозяйотвешшх животных и птиц в Монголии и Санкт-Петербурге для сравнительной оценки интенсивности циркуляции кампилобакгеров,

- Охарактеризовать морфологические и биологические свойства штаммов камдилобактеров, выделенных в Монголии и в Саннт-Нетербурге.

- Выбрать метод внутривидового типнрования термофильных кампилобактеров, перспективный для эпидемиологического анализа камшлобактериоза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

- Впервые ооущестЕлана лабораторная диагностика кампило-бактериоза в Монголии и дана оценка удельного веса данного заболевания среди острых ктючнах инфекций.

- Установлен ряд преимуществ метода ядерных фильтров при диагностике кампилобактериоза, что позволяет рекомендовать этот метод для широкого внедрения в лабораториях республики.

- Впервые получены сведения об экологии кампилобакгеров

и об их распространенности среди сельскохозяйственных животных в Монголии - стране, отличавшейся резко континентальным климатом и развитым 2ЛЕ0Тноводстаом. ,

- Установлено, что для внутривидового тшшрования кэмли-

лобактеров в лабораторной практике целесообразно использовать биотипировакие по способности возбудителя к продукции ДЕК-азы и щелочной фосфатазы, а также сопоставление антибиограммы.

Методы лабораторной диагностики кампплобактериоза внедрены в лаборатории кишечных инфекций Государственного института гигиены, эпидемиологии и микробиологии Министерства здоровья Монголии и в бактериологической лаборатории научно-исследовательского центра по охране здоровья матери и ребенка ЬШ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫВДСИШЗ НА ЗА1Щ7

1. Кашшлобактериоз - это актуальная для Монголии острая кишечная инфекция. Каышлобактеры обнаружат у 6,3$ больных, госгктализированаых в стационары г.Уланбатора с диареШшм синдромом.

2. Среди детей в возраоте до 2 лет в г.Уланоаторе зарегистрировано камлилобактериозное нооительство.

3. Наиболее значительным источником инфекции в условиях Монголии являются куру. Камгшлобактеры обнаружены в 30-47,? проб куриного помета, в 35-45$ смывов с тушек товарной птицы, в то время как у других домашних зшвотшх (кролики, коровы, верблюды) каыпилобактеры выделялись в 6%.

4. Для проведения маосовой лабораторной диагностики каы-пилобактериозной инфекции в условиях Монголии целесообразно использовать метод ядерных фильтров, а для внутривидового титрования возбудителя - метод биптшшрования и антибиотико-граммы.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные материалы работы доложены на итоговых научно-практических конференциях СПСГШ в 1991-92 гг и на заседаниях

общества микробиологов Санкт-Петербурга в 1990 г, на У1 Всероссийском съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, Москва, 1991 г.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, 5 глав, заключения и выводов. Работа излечена на fl9 страницах машинописи, содержи 2h таблиц и рисунка, снабжена указателем литературы, включающим 215 источников.

Лстор вырахаег глубокую благодарность научному руководителю, доктору медицинских паук, профессору В.П.Иванову за руководство научными наследованиями л ценные замечания при выполнении диссертации, доктору медицинских наук А.Г.Еойцову, кандидату медицинских наул А.Л.Порину, зз постоянную помощь и ценные замечания, а также всем сотрудникам кафедры микробиологии СПСГШ.

Автор признателен гаяяе сотрудникам лаборатории хиптних инфекций ГИГЭМ MEM, лаборатории ШЩ по 02МР МЗМ, лаборатории инфекционной больницы г.Уланбатора за содействие в выполнении л внедрении результатов работы.

ЖТШАПЫ И МЕТОДЫ Для выделения камшлобактеров был исследован материал от людей, животных, из объектов внешней среди. Всего исследовано 1921 проба (733 пробы от людей, 1068проб от животных, 120 проб вода), в том числа в Монголии 1145 проб (315 проб от людей, 83U проб от животнпх); в Санкт-Петербурге 776 проб (418 проб от людей, 238 проб от тавотных и 120 проб воды). Во время выполнения работы .выделено и идентифицировано 454 штаммов термофильных кампилобактеров,

В качестве основы плотной ороды о кровью использовали эритрит агар (НПО "Питательные среды" г.Махачкала) или трип-

тазный агар ( ). В качестве основы для среды на-

копления были использованы ыясо-пептонпый бульон (Бел ННИЭМ, г.Шнек) и сухой питательный бульон (НЮ "Питательные среды", г.1<1ахачквла). В ряде экспериментов была использована селективная питательная среда для кашшлобактеров без крови {СатруЬ-¿ас{еъ В1<м1 Рги ¿¡Лс^'м ЙгЛ/ит, ОХШ^К). Были использованы ядерные фильтры Объединенного института ядерных исследований (г.Дубна) с диаметром пор 0,45-0,55 мнм.

Идентификация выдеченшх культур проводилась на основе изучения их морфологии, отношения к окраске по Граму, продукции каталазы, оксидазн, способности к гидролизу гиппурата натрия и чувствительности к налидикоовой кислоте.

Внутривидовое тишрованле проводили в форме биотшшрова-ния и серотипированля для сравнительной оценки эффективности данных методов. С целью биотипирования нами изучалась способность выделенных штаммов продуцировать щелочную фосфатазу, ДНК-азу, циотиназу и расти на среде с трифенллтетразолийхлори-дом (ТТХ). Серотишрование штаммов по схемам Лиор и Пеннер проводили в НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Паотера, СШ .

Определение чувствительности к антибиотикам проводили в соответствии о "Методическими указаниями по определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков" (И., 1983 г).

Электронно-микроскопическое исследование проводили в лаборатории Государственного института гигиены, эпидемиологии и микробиологии при Министерстве здоровья Монголии.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Метод лабораторной диагностики кампилобактериоза, пред-

назначенный для массового внедрения в лаборатории Монголии, должен отвачать ряду требований:

1. Высокая эффективность.

2. Доступность и ¡шзкая стоимость лабораторных материалов.

3. Техническая простота л возможность его быстрого освоения бактериологами диагностических лабораторий.

4. Возможность обнаружить с его помощью максимального числа вздов кампилобактеров, играющих роль в патологии человека.

11а основании ан гизэ данных литературы для экспериментальной сравнительной оценки били выбраны следующие методы:

1. Прямой посев материала на среды с кровью п антибиотиками.

2. Прямой посев материала па среды с углем и с антибиотиками.

3. Посев через ядерный фильтр на среды с кровью.

Метод ядерных фильтров был разработан А.А.Поринкм и А.Г. БоГщовыы на кафедре микробиологии СШГШ. Накопленный к настоящему времени опыт показал его значительные преимущества по сравнению с другими методами, основанными на фильтрации. В рамках сравнительных испытаний сопоставляемых методов нами были исследованы 70 проб испражнений больнмх, госпитализированных в инфекционную больницу им.С.П.Боткина г.Санкт-Петербурга с диагнозом острая кишечная инфекция. Из общего числа обследованных каыпшюбактеры были обнаружены у 8 больных. Во всех случаях выделение кампилобактеров было достигнуто путем посева методом ядерных фильтров, в 7 - при использовании угольного агара и лишь в 2 - при посеве на среду со смесью антибиотиков.

Сопоставление испытуемых методов по стоимости необходимых для их осуществления материалов подтвердила неоспоримые прей-

- ю -

мущества в этом отношении метода ядерных фильтров. Высокую экономическую эффективность этого метода обеспечивает также возможность повторного использования фильтров (А.Л.ПорииДЭЭО).

Наиболее высокие требования к квалификации персонала при лабораторной диагностике клмпялобактериоза предъявляются на этапе отбора колоти с плотной питательной среды.

Эффективность работы при этом зависит от наличия и интенсивности роста сопутствующей микрофлоры. Очевидно, что чем выше селективность метода и ыоныде рост сопутствующей микрофлоры, тем менее жесткие требования мокно предъявлять к квалификация персонала, тем легче организовать его обучение.

Нами сопоставлен уровень контаминации среды сопутствующей микрофлорой при использовании 3 методов выделения кампз-лобактеров из исправлений людей. Полученные результаты свидетельствуют о наиболее высокой эффективности метода ядерных фильтров. При использовании фильтров с диаметром пор 0,45 икм в подавляющем большинства случаев рост сопутствующей микрофлоры отсутствует, что значительно упрощает процедуру лабораторной диагностики.

Результаты проведенных исследований позволили выбрать в качестве наиболее перспективного метода для лабораторной диагностики кампилобактеркоза в условиях Монголии метод ядерных фильтров.

Ддя сопоставления удельного веса кампклобактериоза в Монголии по сравнению с другими регионами были проведены исследования в Санкт-Петербурге.

Методом ядреных фильтров исследовано 344 пробы испражнений от больных, госпитализированных в инфекционную больницу

им.С.П.Боткина. Всего в Санкт-Петербурге проведены бактериологические обечодования 418 больных с остригли кишечнши инфекци-ш, при этом кампилобактеры обнаружены у 3ü (7.15®.

Исследовании в Монголии выполнены в лаборатории кишечных инфекций ГИГаМ Ш1.

Всего нами было обследовано 315 человек, которые мокно подразделить на следующие категории: взрослые, больные острыми кишечными инфекциями, госпитализированные в больницы г.Улан-батора (142 человека), взрослые, контактные в очагах (14 человек), здоровые дети до 2-х лет (49 человек). В большинстве случаев выделение каыпилобактеров выполнено с использованием метода ядерных фильтроч. C.jijuni были обнаружены у 9 из 142 (6,3$) обследованных больных, госпитализированных в инфекционную больницу с диарешшм синдромом. Было обследовано ICO пациентов Научно-исследовательского центра по охране здоровья матери и ребенка, госпитализированных о различными соматическими заболеваниями и 49 здоровых детей, посещающих один из яслей г.Уланбатора. Кампилобактеры обнаружены в 9 случаях (2 -пациенты 1ИЦ по ОЭДЦ ЫЕМ, 7 - дети, посещающие ясли).

Таким образом, бактерионосительство кампилобактеров выявлено у 6,1% обследованных детей в возрасте до 2 лет. У новорожденных кампилобактеры обнаружены не были.

В настоящее время является общепризнанным то, что одним из основных источников камшлобактериоза в большинстве стран являются куры {Chl/Ste/Iion IV e^al. - 1983, Comi& etat- 1984, HaiivpB., téaé - 1983, ¡Zostf.O dal - 1982).

В связи с этим, нами было цроведено камплексное бактериологическое обследование трех птицефабрик, две из которых расположены в Монголии, а одна в Ленинградской области. На Улан-

баторской птицефабрике и птицефабрике Ленинградской области применяются сходные технологические режимы выращивания птицы клеточная система содержания, лотковые системы поения и т.д. Фабрика аймака Ховц отличается меньшей мощностью. Здесь практикуется напольное содержание птицы, используются выгоны, т.е. куры содержатся в условиях более приближенных к естественным.

Бри обследовании птицефабрик отбирались пробы куриного помета, смывы с оборудования убойного цеха и куриных тушек готовых к отправке в торговую сеть.

Дроби помета забирались без консерванта. Для посек суспензии помета применяли метод ядерных фильтров. В Монголии смывы забирали при помощи тампонов, смоченных тиогликолевой средой. Тампон погружали в пробирки с этой же средой и транспортировали в лабораторию.

При обследовании птицефабрики Ленинградской области смывы забирали с помощью тампонов, увлажненных гвдкой питательной средой с кровью и антибиотиками. Тампоны погружали в эту же среду и инкубировали посевы 48 часов при 42,5 градусах в мик-роаэрофильних условиях. Затем производили высев методом ядерных фильтров.

Всего было обследовано 313 проб куриного помета, 6G проб оодеряимого кишечника кур, 105 смывов с оборудования убойного цеха и 100 смывов с тушек птицы. При этом было выделено 326 штаммов камшшобактеров. Все они были идентифицированы как C.jejuni . Наиболее низкий уровень инфицированное™ птицы был зарегистрирован на птицефабрике акмака Ховд. Самый высокий уровень контаминации камшиобактериями проб помета кур отмечен на птицефабрике Ленинградской области (74,1/2). Высокий' уровень инфицированности .камшшобактериями помета позволяет

предположить роль копрофагии в распространенности камгаиобак-теров среди птиц. По мнению рада авторов (А.Г.Бойцов, 1991) копросагия имеет большое значение в перекрестном инфицировании птиц при сальмоналлезе. Возможно, это явление имеет значение и при кампилобактериозе.

Известно, что кроме кур источником инфекции при кампилобактериозе могут быть и другие сельскохозяйственные животные (коровы, свиньи и т.д.). Для изучения роли домашних яивотных, как возможных источников камшлобактериозной инфекции в условиях Монголии нами было проведено обследование 340 коров и телят госхоза Гачуурт, ICO кроликов вивария ГИГЭМ МЗМ, 20 коз, 20 верблюдов и 10 лошадей.

При обследовании помета коров и телят кампилобактеры об наружеш в 6,2? случаев. Из 21 выделенных при этом штаммов кампи/обактеров 17 были идентифицированы как C.Jyunt , а 4 - как С. сой. .

Исследование 100 ректальных мазков от кроликов позволило обнаружить кампилобактер в &% случаев. Все выделенные при этом штаммы идентифицированы как С. JíJunL . I штамм C.Jejurtt был выделен ог верблюда. Таким образом домашние животные являются одним из возможных источников кампилобактериозной инфекции.

В литературе описано несколько крупных вспышек кампило-бактериоза с доказанным воднш путем передачи инфекции (Яаи. Ül'nJI dcti. 1987, ТауЬгВ eéa¿, 1983). Имеются многочисленные публикации о выделении кампилобактеров из воды открытых водоемов ( &oUm ¿-éaL , 1982; Knl¿¿ téa¿, 1988; Яеа/isoyi eéd¿ , IS77). Исследования уровня контаминации воды нампилобактериями проводились на кафедре микробиологии СПС1Ш. Воду из открытых водоемов и сточных вод отбирали для исследова-

ния в стерилыше емкости в количестве 500 мл с резиновыми цроб-каьш. Наследуемую пробу воды предварительно фильтровали через фильтр "Владипор". ША-МА й 4-5. Объем воды, фильтруемый через I фильтр, зависел от мутности вода и ог предполагаемого уровня контаминации. Фильтруемый объем варьировал при исследовании сточной воды в пределах ЗС-50 мл, а води открытых водоемов -50-200 мл. После фильтрации воды фильтр помещали в цробирку с обогатительной средой и инкубировали в никроаарофилышх условиях при 42,5 градусах в течение 43 часов. Высев из накопительной среды производился через мембранные фильтры 0,45-0,55 мкм. Всего было исследовано 30 проб сточных вод и 90 проб воды поворхносгнь'х водоемов.

Камтшобактеры были обнаружены в 83,3^ проб сточных вод Санкт-Петербурга, в 42,8$ проб воды из р.Кева и в 16,3/2 проб воды из Невской губы.

Таким образом, высокий уровень контаминации кампилобак-теряями вода подтверждает интенсивность циркуляции кампилобактеров па территории Саши-Петербурга. Вследствие этого микробиологический контроль загрязненности воды поверхностных водоемов должен быть признан ванным компонентом в общей схеме профилактики кампилобактериоза.

Для решения эпидемиологических вопросов необходима разработка методов внутривидового типирования кампилобактеров, служащих для эпидешологического маркирования данных микроорга- ••' ниамов. В настоящее время применяются такие методы, как биоти- . пировакиа ( НеЬлЛ.С.Й Ыа£ , 1982; Каятай М.еШ, 1983;

Яоор Я , 1984), соротиштрование ( Калжай М Ы<х1,

1983; Ра-Иоп С ), фаготипирование ( вяср&Н'Ми 8 1985).

В данной работе ми провели сравнительную оценку мотодое биотипирования и серотипирования. В нашем распоряжении была коллекция штаммов кампилобактеров, выделенных из различных источников в Санкт-Петербурге и области (Г7 штаммов), а также 28 штаммов, выделенных от животных в Монголии. Все штаммы идентифицированы как С. ¿уит ,

Для биотипирования нами были использованы следующие тесты: наличие ДНК-азы, щелочной фосфзтазы, продукция сероводорода из цистина и резистентность к трифешитетразолийхлориду (ТЕХ).

В результате предварительных опытов наиболее вариабельными оказались продукция ДНК-азы и щелочной фосфатазы. Ни один из штаммов, выделенных из воды реки Невы,не обладал ДНК-азной активностью, в то время как щелочную фосфатазу продуцировали все изученные штаммы данного происхождения. Среди культур, выделенных от животных в Монголии, были выявлены как ДНК-аза позитивные, так и негативные штаммы, однако, ни один из этих штаммов не обладал фосфатазкой активностью. Все изученные штаммы продуцировали сероводород из цистина и были устойчивы к ТГХ, поэтому данные тесты были исключены из схемы биотипирования.

В результате, для составления схемы биотипирования нами использованы два теста: продукция ДНК-азы и щелочной фосфатазы. К первому биовару отнесены штаммы, обладающие как ДНК-азной, так и фосфатазной активностью, ко второму - продуцирующие только ДНК-азу, к третьему - продуцирующие только фосфатазу и к четвертому - не обладающие ни фосфатазной, ни ДНК-азной активностью.

Классификация изученных штаммов по предложенной схеме позволила установить, что от больных с диарейным синдромом в

Санкт-Петербурге выделены С. je.ju.ru. всех четырех биоваров, в то время как из невской воды выделялись кампилобактерн только Ш-го биовара. Культуры С. ¿^ип'с , выделенные от животных в Монголии, принадлежали к I, П и 1У биоварам, а штаммы Ш-го биовара среди этих культур отсутствовали.

Получениае результаты демонстрируют лерсЕоктивность дальнейшей разработки ферментоиширования каышлобактеров. При этом использование ДНК-азного и фосфатазного тестов в качестве ключевых не исключает в дальнейшем расширения перечня тестов, входящих в схему биотиплрования нампнлобактеров.

Для серогипирования были отобраны 28 штаммов,выделенных от животных в Монголии, и 5 штаммов, выделенных от людей в Са нкт-Петербурге.

Несмотря на то, что в работе был использован широкий набор иммунных сывороток (35 по схеме Денвер и 12 по схеме Лиор) удалось серотищровать лишь 5 штаммов. Вое тигшрованные штаммы принадлежали к следующим сероварам: 4 етамма к сероварам 4.20.7 по схеме Лиор, I штамм к серовару 16.35 по схеме Пеннер.

Нами определена чувствительность 117 штаммов камшлобактеров, выделенных от людей, кивотных и из воды к 18 антибактериальным препаратам, которые можно разделить на 3 группы:

1. Препараты, используемые для лечения кампилобактериоза

- эритромицин, гентамицин, канамицин, левомицетин, тетрациклин, стрептомицин, ампициллин, доксацихлин, линкомицин.

2. Препарата, которые используются в составе элективных питательных сред для кампилобактеров: цефалотия, полимиксин, фузидин, рифаышции.

3. Препараты, данные о чувствительности к которым кампи-бактеров в доступной нам литературе отсутствуют или лротиворе-

чивы: пенициллин, карбенициллин, оксациллин, ме-

тициллин, неомицин.

Анализ результатов изучения чувствительности к антибиотикам С. , выделенных методом ядерных фильтров, показал, что штаммы, умеренно устойчивые и чувствительные к препаратам, используемым в составе элективных питательных сред встречаются с определенной частотой. Среди 113 изученных штаммов чувствительными к полимиксину оказались 9 (7,9%), к цефолотину - 6 (5,3$), к рифампицину - 3 (2,7$); к фузидину - I (0,9$). Это также свидетельствует в пользу целесообразности применения метода ядерных фильтров для выделения кампилобактеров. Мы считаем па основании полученных данных, что использованию элективных питательных сред с антибиотиками должно предшествовать определение антибиотикорезистэнтности штаммов, выделенных методом ядерных фильтров.

Оценивая уровень чувствительности кампилобактеров к препаратам, которые могут быть использованы для лечения кампило-бактериоза, в первую очередь необходимо отметить низкий процент штаммов, резистентных к эритромицину. Устойчивость к этому антибиотику зарегистрирована лишь у 7 из 113 изученных штаммов, еще 2 штамма характеризовались умеренной устойчивостью, что согласуется с данными литературы по этому вопросу (Чайка, 1988). Остальные антибиотики этой группы по нарастанию числа устойчивых штаммов можно разместить в следующем порядке: левомицетин, стрептомицин, линкомицин, гентамицин, тетрациклин, доксациклин, ампициллин, канамицин. При этом количество штаммов, чувствительных к ампициллину и канамицину было наименьшим (13,2 и 12,За ооответственно), что ставит под сомнение целесообразность применение данных антибиотиков при ле-

чении кампилобактериоза.

Что касается антибиотиков, условно отнесенных наш к 3 группе, то все они за исключением неомицина принадлежат к полу синтетическим пеншщллтам. В то же время известно, что кам-пилобактеры обладают несколькими типами £ лактамаз, отличающимися по своей активности по отношению к отдельным полисинтетическим пенивдллинаы (Чайка, 1988) и это нашло отражение и в результатах, полученных при изучении нашей коллекции: к пени-цылину были резистентны все шгашы, к карбешщиллину - 85%, к оксацшшшу - 61,1$, к метациллину - 83,2$, изученных штаммов.

Таким образом, вследствие значительной гетерогенности кампилобактеров по чувствительности к полусинтетическим пени-циллинам, эти антибиотики нецелесообразно использовать как для лечения кампилобактериоза, так и в составе элективных питательных сред. К неомвцину оказались чувствительными, лишь 31,8? изученных штаммов, что также не позволяет определить возмогшую сферу использования этого антибиотика при каыпило-бактериозиои инфекции.

Выявлено 63 различных спектра антибиотикорезистентности, большинство из которых характерно для 1-2 штаммов.

Необходимо отметить, что при исследовании воды в ряде случаев из одной цробы удавалось выделить 2 штамма кампилобактеров, отличающихся по спектрам антибиотикорезистентности. Это, в совокупности с зарегистрированным разнообразием спектров антибиотикорезистентности, позволяет предположить, что анмбиотжзэтшшрованиэ моает оказаться полезным и наиболее' доступным для практики методом внутривидового типирования кампилобактеров.

выводы

1. Кампилобактериоз является актуальной для Монголии острой кишечной инфекцией. Термофильные кампилобактеры выделены от 6,3$ больных с диарейным синдромом, от 2% больных соматическими заболеваниями и от 6,1$ детей в возрасте до 2 лет.

2. Наиболее эффективным способом бактериологической диагностики кампилобактериоза в условиях Монголии, обеспечивающим максимальное выделение возбудителя, является метод ядерных фильтров. ¡Летод отличается высокой чувствительностью, технической простотой и экономичностью.

3. Установлена инфацированность ¿Уип-1 , составляющая 6/5 таких домашних животных, как коровы, верблюды кролики. Наиболее высокий уровень инфицированное«! зарегистрирован у кур на птицефабриках. Кампилобактеры выявлены в 30-47$ проб помета и в 35-45$ смывов с тушек птиц, поступающих в торговую сеть. Это позволяет считать кур одним из наиболее значимых резервуаров инфекции и ее источником для людей.

4. В Санкт-Петербурге термофильные кампилобактеры выделены у 7,15$ больных острыми кишечными инфекциями. Установлена массивная контаминация кур на птицефабриках Ленинградской области СатруЫсиМъ. ¿-Е^иги. , выделенным у 74,1? проб помета и 62,5-75$ смывов о тушек птиц. С. ¿уши. обнаружены в 63,3$ проб сточных вод, в 42,8$ проб воды из р.Невы и в 16,3$ проб воды Невской губы.

5. Большинство штаммов термофильных кампилобактеров, выделенных в Монголии и Санкт-Петербурге, идентифицированы нами как СатруЬбасМг Jyu.nL (99/0 и лишь 1% как С. сой. ,

Штаммы, выделенные в различных географических регионах из различных источников не отличались ш культуральнкм, морфологическим, биохимическим признакам и электронно-микроскопической структуре.

6. Изучение чувствительности выделенных культур к антибиотикам методом стандартных дисков показало, что антибиотико-устойчивыми являются 38,8/5 штаммов, у которых выявлено 63 спектра резистентности.

7. Сравнение существующих методов внутривидового нитрования не дает стабильных результатов, а в лабораторной практике целесообразно использовать определение ферментотипа по ДНК-аза и щелочной фосфатазе, а такие антибиотикограмму.

8. Штаммы C.jfyunt , выделенные от животных в Монголии, принадлежали к I, П и 1У биоварам, при отсутствии Ш биовара. От больных ОКИ в г.Санкт-Пётербурге выделены штаммы

I, П, 1В и 1У биоваров, а из воды р.Нева только Ш биовара.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Применение фильтров для выделения возбудителей кампи-лобактериоза. Л., 1991, 22 с. Рекомендации для врачей.

2. Совершенствование методов выделения кампилобактеров. Тезисы докладов У1 Всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов. Москва, 1991, с.82-83.

3. Биотипирование кампилобактериоза. Сборник "Острые кишечные инфекции". Л:, 1992.

Подписано к печати 2C.I0.92. Формат 60x84 I/I6. Bvm.газетная. Печать офсетная. Печ.л. 1,0. Тираж 200 экз. Заказ № 702,

Малое предприятие "ТеплоКон" Санкт-Петербургского ордена Трудового Красного Знамени технологического института холодильной промышленности. 191002, Санкт-Петербург, ул.Ломоносова,У