Характеристика и распространение бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы

Курако, Ульяна Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика и распространение бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика и распространение бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы"

Курако Ульяна Михайловна

ХАРАКТЕРИСТИКА И РАСПРОСТРАНЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА CAMPYLOBACTER В ПРОДУКТАХ УБОЯ ПТИЦЫ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов 2008

003459300

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор Щербаков Анатолий Анисимович

доктор биологических наук, профессор Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Самойлова Любовь Владимировна

ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Защита диссертации состоится «29» января 2009 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО ' «Саратовский государственный, аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».

Автореферат диссертации разослан «£$>> 2008 г. и размещен на

сайте: www.sgau.ru.

Отзыв на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Театральная пл., 1, ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Л.В. Карпунина

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Острые кишечные инфекции (ОКИ) широко распространены во многих странах мира и представляют серьезную опасность для современного общества (Светоч и др., 2007).

Важное место среди ОКИ занимает кампилобактериоз ввиду его широкой распространенности, множественности резервуаров, постоянной тенденции к росту заболеваемости и наносимого им значительного социально-экономического ущерба. Микроорганизмы рода Campylobacter в качестве этиологического фактора ОКИ встречаются чаще, чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы. По данным ВОЗ, в зависимости от географического положения региона и сезонности, кампилобактеры вызывают от 3 до 73 % ОКИ (Сафонова и др., 1988; Сичинский, 1991; Иванов, Бойцов, Порин, 1995: Кирик, 1995; Черкасский, Подунова, Акулова, 1995; Friedman et al„ 2001).

Значимость проблемы распространения кампилобактериоза подтверждает тот факт, что ВОЗ включила эту инфекцию в национальную программу по борьбе с инфекционными заболеваниями в 108 странах.мира, в том числе и в России (Клево, 2006).

Кампилобактериоз подлежит обязательной регистрации - в США, Великобритании, Франции, Германии и во многих других европейских странах. В России диагностика кампилобактериоза проводится редко, что приводит к отсутствию четкой информации о распространенности этого заболевания в РФ (Кветная, Железова, Партина, 2008).

Основным естественным резервуаром бактерий рода Campylobacter является промышленная птица, в первую очередь, бройлерная, и животные. В США бройлерная птица в возрасте 30 - 45 дней обсеменена кампилобактерами, при этом концентрация микроорганизмов у птицы в среднем составляет 106 - 107 КОЕ/г фекалий (Светоч и др., 2007).

Контаминация бактериями рода Campylobacter бройлерной птицы может достигать 100 %, а послеубойная обработка ее не всегда предотвращает попадание указанных бактерий на тушки птицы (Жакиибаева, 1992: Болохович и др., 1995;Wallace, Stanley, 1998).

Кроме этого кампилобактериоз наносит существенный экономический ущерб птицеводству за счет снижения яйценоскости, живой массы, падежа-птицы и затрат на ликвидационные мероприятия (Кирьянов, 1992).

Актуальность проблемы связана с тем, что при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса птицы, появляется риск возникновения кампилобактериоза у людей.

Бессимптомное течение инфекции и опасность реализации населению контаминированных продуктов убоя кур, резко увеличивает их роль в распространении кампилобактериоза среди потребителей. (Свирина, 1992; Новикова, 2001).

Эпидемиологическая опасность мяса возрастает в связи с тем, что бактерии рода Campylobacter высококоитагиозны, что позволяет рассматривать их как возможный этиологический фактор профессионального заболевания у работников птицеводства (Blaser et al., 1986; Tee et al., 1987; Кирьянов, 1992).

В нашей работе, мы исследовали материал из птицефабрик и птицеводческих хозяйств Саратовской области, на наличие С. jejuni и С.coli, так как в большинстве случаев именно эти виды вызывают ОКИ животных и птиц.

Сведений о распространенности кампилобактериоза среди птиц в районах Саратовской области в литературе отсутствовали, до настоящего времени, поскольку бактериологические исследования на кампилобактериоз не проводились. Такое положение и определяет актуальность исследования материалов из птицефабрик и птицеводческих хозяйств, а также продуктов убоя кур на наличие возбудителя кампилобактериоза.

Цель работы - изучение распространения и идентификации бактерий рода Campylobacter на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области, а также выявление кампилобактеров в продуктах убоя птицы.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ по содержанию кампилобактеров в содержимом желудочно-кишечного тракга (ЖКТ) и в смывах с тушек здоровой птицы и больной, направленной на санитарный убой на птицефабриках и в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

2. Определить видовой состав выделенных кампилобактеров и изучить их биологические свойства.

3. Оценить влияние условий обработки тушек птицы на степень их бактериальной контаминации перед упаковкой.

4. Провести выявление С. jejuni в мясе и субпродуктах кур, реализуемых в торговой сети города Саратова, с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР): сравнить эффективность бактериологического метода диагностики кампилобактеров и метода ПЦР.

5. Разработать рациональную схему бактериологического исследования продуктов убоя птиц для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter.

Научная новизна

• Впервые установлен факт обнаружения бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя кур на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области; подтверждена роль мяса и продуктов убоя птицы, как источника передачи кишечного кампипобактериоза при несоблюдении санитарно-гигиенических требований.

• Впервые показано, что С. jejuni и С. coli сохраняются в продуктах убоя птицы, в том числе, в желудках и печени кур, поступающих в сети розничной торговли, а также присутствуют в смывах с тушек, как больной, так и здоровой т ипы.

• Основными видами, выделенными при кампилобактериозе у птиц, явились C.jejuni и С. coli; были изучены их биологические свойства

• Установлено, что ПЦР является эффективным методом индикации С jejuni в продуктах убоя птицы и по чувствительности, и времени постановки анализа существенно превосходит общепринятый бактериологический метод.

Практическая значимость работы

Полученные данные расширяют представление о распространении бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы птицефабрик и племрепродукторов Саратовской области, открывая новые возможности для научно-обоснованного подхода к применению современных методов диагностики.

Для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter была разработана рациональная схему бактериологического исследования продуктов убоя птиц.

По результатам исследований опубликованы «Методические рекомендации по выделению качпилобактеров из продуктов убоя птицы и их дифференциация», предназначенные для проведения практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области ветеринарной микробиологии, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 4 от 26 октября 2007 г.)

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии, факультета ветеринарной медицины и на кафедре технологии мяса и мясопродуктов факультета технологии продуктов питания ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И, Вавилова».

Основные положения, выносимые на защиту

1. На птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области впервые выделены бактерии рода Campylobacter, в материале от птиц и продуктах ее убоя, которые сохраняются в процессе переработки.

2. Для индикации С. jejuni в материале от птиц и продуктах ее убоя использовали метод ПЦР.

3. Разработан доступный для практических исследований метод бактериологического анализа и идентификации С. jejuni и С. coli в материале от птиц и продуктах ее убоя.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ имени Н.И. Вавилова», в рамках ассоциации «Аграрное образование и наука» за 2007 - 2008 гг.

Апробация работы

• Материалы диссертации доложены на:

• Научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов СГАУ, посвященной 119 годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова (2006 г.);

• Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и животноводства» (2007 г.);

• Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (2007 г.);

• Международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы производства продукции животноводства» (2007 г.);

• Научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СГАУ по итогам научно - исследовательской работы за 2007 - 2008 гг. (2008 г.);

• Четвертой международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера (2008 г.);

• Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича «Актуальные проблемы ветеринарной патологии сельскохозяйственных животных и птиц» (Саратов, 2008):

• И Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (Саратов, 2008).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 12 работ. из них одна статья н журнале, входяшем в перечень ВАК РФ.

C"ipyk-iypa к оГи.см диссертации

Диссертация сост от из введения. обзора .imcpaiypi.i. собственных исследований, обсуждении полученных результатов. заключения, выводок. списка использованных диlepaiypitbix источников и приложении. Материалы лиссергашш изложены на 109 страницах машинописного к'кста. иллюстрированы I 1 таблицами и 9 рисунками. Список исподыованных лшературных источников включает 145 наименований, том числе 82 зарубежных

(Обеi пенные исследовании

Материалы и ме) оды

Май-риалами. для исследования бактериологическим методом. in птицефабрик, племенных птицеводческих заводов и частых холмист Сараювскои области послу жили:

• содержимое ЖКТ клинически здоровой шины:

• содержимое ЖКТ шины, ко юру ю при внешнем осмофе и по клиническим признакам направляли на санитарный убой:

• смывы ич брюшной полости тушек после потрошения (до промывки):

• емьшы из брюшной полости тушек ют оных к у наковке.

Содержимое ЖКТ здоровых кур отбирали в момент отделения от iушек при механическом или ручном потрошении па конвейере. 'Забор ЖКТ кур направленных на санитарный убой осуществляли после ру чною потрошения тушек.

Отобранный материал упаковывали в по.нптилен и доставляли в лабораюрию. не позднее трех часов после выделения. Делали надрезы в тонком или толстом oiдедах кишечника, на желудке, откуда материал 'забирался oaKiepno.ioiичсской петлей и пересевался па селективную среду - основа агара для бруиелл (Brucella Agar Base (без добавок) N1074 - 500G. производства lliMedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai - 400086. India) с антибиотиками (фузидин. рифамшшии. амфотеришш В) и с добавлением лефнбринированной крови барана.

Чашки Петри с посевами помешали в тксикатор. Для создания микроа трофильных условии пользовались тазовыми пакетами (Anaerogas Campy loPack 5.5 I. (LL002D). производства lliMedia Laboratories Pvt. I.id. Mumbai -400086. India: BBI, 43-71045 CampyPakPlus and GasPak are trademarks of Boston Dickinson and Company. USA) или меюдом ■»торящей свеч и v. Кроме пою. для увеличения количества углекислого i аза. в жсикатор со свечей помешали колбу с

10 мл водопроводной воды и 2 - 3 г кристаллизованной лимонной кислоты. Герметично закрытый эксикатор помещали в термостат при 42 'С на 48 часов. Подозрительные колонии отбирали при помощи лупы и проводили их биохимическую идентификацию. Биохимические тесты проводили в следующей последовательности: определение каталазной и оксидазной (ОКСИтест (MIKRO-LA-TEST OXItest), производства PLIVA - Lachema Diagnostika s.r.o., Brno. CZ) активности и способности гидролизовать гиппурат натрия (ГИППУРАТтест (MIKRO-LA-TEST HIPPURATEtest), производства PLIVA - Lachema Diagnostika s.r.o., Brno, CZ или диски с гиппуратом натрия (Hippurate Hp DD035), производства HiMedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai -400086, India).

Следующим этапом нашей работы стало выделение кампилобактерий из смывов с брюшной полости тушек здоровых кур. Смывы с тушек брали после потрошения до промывки и непосредственно перед упаковкой.

Сухим стерильным ватным тампоном забирали материал из брюшной полости тушки и помещали его в пробирку с тиогликолевым бульоном, который используют в качестве транспортной среды (питательная среда для контроля стерильности сухая) производства ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова).

Из транспортной среды производили высевы на селективную среду.

По разработанной методике составили схему лабораторной диагностики кампилобактериоза (рис. 1).

Исследования методом ПЦР проводили в научно-исследовательской лаборатории «Геном» при кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии, факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ имени Н.И. Вавилова».

Отбор и подготовка исследуемого материала проводили согласно временному наставлению по применению тест-системы «КАМ-БАК» для выявления и идентификации возбудителя кампилобактериоза Campylobacter jejuni методом ПЦР (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор, АмплиСенс, Москва).

Методом ПЦР - анализа было исследовано 40 индивидуальных проб мяса и субпродуктов кур, направленных на реализацию, с трех птицефабрик Саратовской области. Параллельно проводили бактериологическое исследование.

Статистическую обработку полученных данных проводили по общепринятой методике (Плохинский, 1970).

Отбор проб патматернала и посев в транспортную среду

-а

Посев на селективную среду Выращнванис культур

Идентификация кампилобактеров ^ / \ \

Рисунок 1 - Схема лабораторной диагностики кампилобактериоза

Результаты исследований

Исследование желудочно-кишечного тракта кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области на наличие С. jejuni и С. coli

При исследовании птицы с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, обследовали ЖКТ как здоровой птицы' так и больной, направленной на санитарный убой. Результаты выделения бактерий вида С. jejuni и С. coli из ЖКТ клинически здоровых кур и кур, направленных на санитарный убой, представлены в таблицах 1 и 2.

'• Таблица 1

Результаты обследования желудочно-кишечного тракта клинически здоровых кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

п/п Наименование предприятия Количество исследуемых проб Кол-во выделенных штаммов ■ С.]е]ит Кол-во выделенных штаммов С.соП

1 Птицефабрика "Михайловская" -Татищевский район 11 1

2 Племенной птицезавод "Царевщенский-2" -. Балтайский район 10 1 1

3 Племрепродуктор I порядка "Маркс" -Марксовский район 10 1

4 "Птицефабрика имени Карла Маркса" -Энгельский район 12 1

5 Птицефабрика "Лысогорская"-Лысогорский район 25

6 ПлемрепродукторI порядка"Зоринский" — Саратовский район 18 1

7 Птицефабрика «Петровская» -Петровского района 5

8 "Татищевская птицефабрика" -Татищевский район 15

Итого: шт. (%) 106 (100 %) 4 (3,8 %) . 2(2%)

Таблица 2

Результаты обследования желудочно-кишечного тракта кур направленных на санитарный убой, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской

области

№ п/п Наименовшше предприятия Количество исследуемых проб Кол-во выделенных штаммов C.jejuni Кол-во выделенных штаммов С.coli

1 Птицефабрика "Михайловская" -Татищевский район 10 1

2 Племенной птгщезавод "Царевщенмшй-2" -Б алтайский район 10 3 1

3 Племрепродуктор I порядка "Маркс" -Марксовский район 10 1 1

4 "Птицефабрика имени Карла Маркса" -Энгельский район 13 1

5 Птицефабрика "Лысогорская"-Лысогорский район 25 3

6 Племрепродуктор I. порядка"Зоринский" -Саратовский район 18 1 о

7 ■ "Татшцевская птицефабрика" -Татищевский район 15 1 1

Итого: шт. (%) . 101(100%) 10(10%) 6 (6 %)

Соотношение количества выделенных штаммов С. jejuni и С. coli из ЖКТ кур клинически здоровых и направленных на санитарный убой, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области представлено на рисунках 2 иЗ.

Все выделенные штаммы по культурально - морфологическим свойствам были типичны для кампилобактеров: на плотных питательных * средах наблюдались негемолитические, сероватые, плоские, влажные, блестящие, колонии, .иногда более плотные, выпуклые; при 42. °С рост обильный, иногда в виде влажной прозрачной пленки на поверхности питательной среды. В мазках бактерии представляли собой мелкие грамотрицательные палочки в виде запятой . или соединенные .в виде «крыльев чаики».

. Все исследуемые культуры, которые проявляли положительные результаты с тестами на продукцию каталазы, цитохромоксидазы и гидролиз гиппурата натрия,

были отнесены к С. jejuni, как обладающие типичными свойствами (табл. 3).

Таблиц

Биохимические свойства камнилобактеров

Тесты

Вид кампилобактеров иитохром-| окендача j каталаза I j гиппурат натрия

...... _ С jejuni..... + +

С. coh + +

11римечание: (+) - положительный тест; (-) - отрицательный тест.

Рисунок 2 - Соотношение количества выделенных штаммов С. jejuni из желудочно-кишечного тракта кур клинически здоровых и направленных на санитарный убой

Примечание;

□ Штаммы С. jejuni выделенные от клинически здоровых кур

В Штаммы С. jejuni выделенные от кур направленных на санитарный убой

Рисунок 3 - Соотношение количества выделенных штаммов С. coli из желудочно-кишечного тракта кур клинически здоровых и направленных на санитарный убой

Примечание:

В Штаммы С. coli выделенные от клинически здоровых кур В Штаммы С. coli выделенные от кур направленных на санитарный убой

Ьлльгуры. \ которых тест на гидролиз пишурата натрия был отрицательным, отнесены нами к С coli, как обладающие соответствующими свойствами.

На основании биохимических тестов 14 выделенных штаммов были отнесены к С.jejuni и 8 штаммов к С. coli.

В результате бактериологического исследования 207 индивидуальных проб содержимого ЖКТ кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского. Энгельского. Татищевского. Марксовского, Петровского. Лысогорского и Бал тайского районов Саратовской области, выделено 14 штаммов С jejuni и 8 штаммов С. coli. (табл. 4). То есть соотношение количества выделенных штаммов С. jejuni из ЖКТ клинически здоровых кур и кур. направленных на санитарный убой составило 29 % к 71 %. а С. coli 25 % к 75 %, соответственно.

Процент инфицированное™ кур бактериями вида С. jejuni, по результатам применения бактериологического метода, составлял 6,8 %, а вида С. coli около 3.9 %.

Таким образом, общий процент инфицирования кур бактериями рода Campylobacter на исследованных птицефабриках и племенных птицеводческих заводах, по результатам применения бактериологического метода составил 10.6 %.

Таблица 4

Данные по выделению С. jejuni и С. coli из желудочно-кишечного тракта кур с ■ птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п Наименование предприятия Кол-во выделенных штаммов С. jejuni Кол-во выделенных штаммов C.coli

1 Птицефабрика "Михайловская" -Татшцевский район 1 1

2 Племенной птицезавод "Царевщенский-2" - Балтайский район 4 2

3 Племрепродуктор I порядка "Маркс" -Марксовский район 1 2

4 "Птицефабрика имени Карла Маркса" - Энгельский район 2 -

5 Птицефабрика "Лысогорская"-Лысогорский район 3 -

6 Племрепродуктор I порядка "Зоринский" - Саратовский район 2 '2

7 "Татшцевская птицефабрика" — Татищевский район 1 .1

Итого: шт. (%) 14(6,8%) 8 (3,9 %)

Определение контаминации С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе

переработки

Для определения контаминации бактериями видов С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе переработки нами были исследованы:

• смывы из брюшной полости тушек после потрошения (до промывки);

• смывы из брюшной полости тушек, готовых к упаковке.

Всего было исследовано 109 проб смывов из брюшной полости кур после потрошения (до промывки) с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области, выделено 6 штаммов С. jejuni и 6 штаммов С. coli.

Результаты выделения бактерий рода Campylobacter из смывов брюшной полости кур после потрошения представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты исследования смывов с брюшной полости кур после потрошения с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

На п/п Наименование предприятия Количество исследуемых смывов Кол-во выделенных штаммов C.jejuni Кол-во выделенных штаммов С.coli

1 Племрепродукгор I порядка "Маркс" -Марксовский район 30 2 1

2 Племрепродуктор I порядка "ЗоринскшТ' -Саратовский район 19 1 3

3 Птицефабрика "Лысогорская"^-Лысогорский район 20 1 1

4 "Птицефабрика имени Карла Маркса" -Энгельский район 40 2 1

Итого: шт. (%) 109 б (5,5 %) 6 (5,5 %)

Было исследовано 75 проб смывов брюшной полости кур, после промывки направленных на упаковку и дальнейшую реализацию с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области, выделено 2 штамма С. jejuni-я 2 штамма С. coli.

Результаты выделения бактерий рода Campylobacter из смывов брюшной полости тушек готовых к упаковке представлены в таблице 6.

На основании биохимических тестов 8 выделенных штаммов были отнесены к C.jejuni и 8 штаммов к С. coli.

Таблица 6

Результаты исследования смывов с брюшной полости кур, направленных на упаковку и дальнейшую реализацию, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов

Саратовской области

№ п/п Наименование предприятия Количество исследуемых смывов Кол-во выделенных штаммов C.jejuni Кол-во выделенных штаммов C.coli .

1 Племрепродуктор I порядка ""Маркс" -Марксовский район 10 1 1

2 Племрепродуктор I порядка "Зориными"-Саратовский район 17 - 1

3 Птицефабрика "Лысогорская"-Лысогорский район 20 1 -

4 "Птицефабрика имени Карла Маркса" -Энгельский _район . 28 - -

Итого: шт. (%) 75 2 (2,7 %) 2 (2,7 %)

Таким образом, общий процент инфицирования тушек кур бактериями рода Campylobacter на исследованных птицефабриках и племенных птицеводческих заводах по результатам применения бактериологического метода составил:

• после потрошения -11%.

• направленных на упаковку и дальнейшую реализацию - 5,3 %.

В результате данного эксперимента было установлено, что:

• контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит, в основном, в результате попадания содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере, что соответствует данным многих исследователей: M.J. Blaser et al. (1982);

. R.C.Baker,M.D.Paredes,R.A. Qureshi(1987).

• промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой не является достаточно эффективной, и в ряде случаев может способствовать большей

обсемеиенности, что отмечали в своих работах некоторые исследователи: М.Е. Berrang, R.J. Buhr, J.A. Cason (2001); N.J. Stem et al. (2001); F. Jorgensen et al. (2002).

На основании проведенных исследований молено предположить, что для снижения контаминации тушек кур в хозяйствах должны проводиться следующие мероприятия:

• автоматические потрошильные машины н автоматы для обработки мышечных желудков должны быть натажены так, чтобы не допускать разрыва кишечника и перекрестного обсеменения тушек;

• после промывки тушек кур их следует подсушивать, что значительно снижает возможность обсеменения продукции Campylobacter spp., поскольку данные микроорганизмы очень чувствительны к воздействию кислорода и температуры.

• внесение в воду для промывки определенных концентраций органических кислот, электрохимически активированного раствора натрия хлорида существенна уменьшает контаминацию, что отмечали в своих работах некоторые исследователи: Т.В. Алабутина, Н.В. Нефедов, М.Ю. Штукарева (1994), Е.И. Клево (2006).

Использование ПЦР для обнаружения С. jejuni в мясе и су бпродуктах птицы

Методом ПЦР нами были исследованы мясо и субпродукты кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова.

Отбор и подготовка исследуемого материала проводилась согласно временному наставлению № 13-7-2/1878 от 16 февраля 2000 года, по применению тест-системы «КАМ-БАК» для выявления и идентификации возбудителя кампилобактериоза Campylobacter jejuni методом ПЦР (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор, АмплиСенс, Москва).

Результаты исследования продуктов убоя кур представлены в таблице 7.

Методом ПЦР исследовали материал из племрепродуктора 2 порядка . «Возрождение - 1» и птицефабрики "Михайловская"' Татищевского района и Аткарской птицефабрикз!, Аткарского района, всего 40 проб и параллельно их же исследовали бактериологическим методом.

Также, методом ПЦР нами было исследовано мясо уток, приобретенное в частном хозяйстве из Пугачевского района. Пробы мяса от 3 тушек уток отбирались из области клоаки.

При исследовании проб мяса уток в ПЦР, одна из проб была положительной на наличие С. jejuni.

Бактериологические исследования на наличие возбудителей в материатах из племрепродуктора 2 порядка «Возрождение — 1» и птицефабрики "Михайловская"

Татишевского района. Ач карской птицефабрики. Лткарского района и образцов мяса уток не выявили С ]е}ип\.

Таблица 7

Исследование с помощью ПЦР продуктов убоя птицы, приобретенных и сетях розничной торговли города Саратова, на наличие (\jejuni

№ Наименование предприятия Исследуемый Кол-во Кол-во

n/л материал проб положительных

П.темрегшод\кгор2 порядка

,, " /ke.tv.mi

«Возрождение -

1 »Тзтищсвекого района

результатов

неочищенные

Л i карская пт инефабрнка. Лткарского района

.Мясо О]

размороженных и 17

кромытыч г\ шек кур :

-■■-+- -.........

Птицефабрика

,, ,. Ле.лдкм очищенные и ,,

"Михайловская • (13 13

печень

1 аинцсвскии район ! ___

14 (35 "<,)

Итого, шт. (%) 40

_________________I (100%)_____

Обозначение: «-» - положительные результаты отсутствуют.

Результаты исследования с помощью ПЦР материала (желудки кур) с п.темренроду кгора 2 порядка «Возрождение - 1» Гитищевского района, приобретенных в сети розничной торговли города Саратова представлены на рисунке 4.

- | ж У К

- Щ

111 112 01 02 1 2 3 4 5 6 7 8 У I» Рисунок 4 Анализ материала (желудки кур) с племрепродуктора 2 порядка «Возрождение - 1» Гатищевского района (приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова) методом ПЦР

I (римечание:

111 - положительный контроль на тише выделения ДНК:

112 - положительный контроль на папе амплификации участка Д11К: 01 - orpimaie.TbHbii'i контроль па »тане выделения ДНК:

О 2 - отрицательный контроль на папе амплификации участка Д11К.

Как следует из данных таблицы 7, выявление бактерий вида С. jejuni с помощью ПЦР в мясе и субпродуктах кур, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова составляет 35 %. При этом посев на селективную среду не выявил роста кампилобактерий.

Таким образом, результаты исследований подтвердили важность применения метода ПЦР в индикации бактерий вида С. jejuni.

Отсутствие роста кампилобактеров на питательных средах вполне объяснимо низкой посевной концентрацией, то есть чувствительностью используемого метода (1*103 - 1 *1 05 КОЕ/мл), что согласуется с данными, полученными в исследованиях О.Д.Склярова, И.Л. Обухова и М.Ю.Сорокина (1999).

Таким образом, метод ПЦР существенно превышает информативность бактериологического метода и позволяет провести анализ за 5 - 7 часов, тогда как по бактериологическое исследование выделения бактерий рода Campylobacter, на это требуется 6-7 суток.

Все выше сказанное делает возможным рекомендовать ПЦР в качестве эффективного дополнительного экспресс - метода лабораторной диагностики бактерий рода Campylobacter у птиц и индикации кампилобактеров в продуктах убоя кур.

Выводы

1. На птицефабриках и племенных птицеводческих заводах Саратовской области бактериологическим методом было обнаружено и выделено 22 штамма С jejuni (5,1 %) и 16 штаммов С. coli (3,7 %).

2. Анализ выделенных штаммов показал, что в содержимом желудочно-кишечного тракта кур, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области выявлено: от клинически здоровых кур 29 % - С. jejuni и 25 % -С. coli, а от кур, направленных на санитарный убой (с остро протекающей инфекцией и явными клиническими признаками) - 71 % и 75 % соответственно.

3. Впервые установлено, что контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит в результате попадания на них содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере (5,5 % - С. jejuni и 5,5 % - С. coli), а промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой не является эффективной и далее может способствовать большей обсемененности.

4. Методом ПЦР в продуктах убоя птицы идентифицировано 14 положительных проб С. jejuni Высокая чувствительность метода и короткое время анализа делает возможным рекомендовать ПЦР в практику ветеринарных лабораторий для индикации кампилобактеров в продуктах убоя птицеводческих

хозяйств.

5. Для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter предложена рациональная схема бактериологического исследования продуктов убоя птиц, предусматривающая следующие этапы: отбор проб; посев на селективные среды; идентификация.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курако У.М. Первые случаи кампилобактериоза кур в Саратовской области / У.М. Курако, [Л.Ф. Зыкин), А.Н. Шнякина // Вавиловские чтения - 2006: материалы конференции посвященной 119-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 4-8 декабря 2006. - Саратов, 2006. - С. 58 - 62.

2. [Зыкин Л.Ф. 1 Кишечный кампилобактериоз - современная оценка проблемы / Зыкин), У.М. Курако // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и животноводства : материалы Всероссийской научно - практической конференции, 29 января - 2 февраля 2007 г. - Саратов, 2007. - С. 38 - 39.

3. Курако У.М. Выделение Campylobacter jejuni от кур в Саратовской области / У.М. Курако, [Л.Ф. Зыкин), А.Н. Шнякина // Ветеринарная патология. - 2007. -№2.-С. 44-46.

4. Курако У.М. Влияние кишечного кампилобактериоза на качественные показатели мяса птицы и птицепродуктов / У.М. Курако, |Л.Ф. Зыкин) // Технология и продукты здорового питания : материалы Международной научно - практической конференции. - Саратов, 2007. - С. 76 - 78.

5. Курако У.М. Обсемененность тушек птицы бактериями рода Campylobacter на птицефабриках и птицеплемзаводах Саратовской области / У.М. Курако // Актуальные проблемы производства продукции животноводства : материалы Международной научно - практической конференции, сентябрь 2007 г. -Саратов, 2007. - С. 47 - 49.

6. Курако У.М. Птица и птицепродукты, как источник кишечного кампилобактериоза / У.М. Курако // Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции : материалы Всероссийской научно - практической конференции, 4-8 февраля 2008 г. - Саратов, 2008. - С. 147 - 149.

7. \3ыкин Л.Ф.| Кишечный кампилобактериоз - современная оценка проблемы / [Зыкин ./7.Ф..] Курако У.М. // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова.-2008,-№2.-С. 30-33.

8. Хапцев З.Ю. К вопросу о распространении возбудителей некоторых эмерджентных пищевых зоонозов на Территории Саратовской области / З.Ю. Хапцев,

У.М. Курако, А.Н. Шнякина // Памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича : материалы Всероссийской научно - практической конференции, 24-25 апреля 2008 г. - Саратов, 2008. -С. 19-23.

9. Курако У.М. Выделение и идентификация некоторых видов Campilobacter - возбудителей пищевых токсикоинфекций из продуктов убоя кур в Саратовской области / У.М. Курако, A.A. Щербаков // Памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича : материалы Всероссийской научно - практической конференции, 24-25 апреля 2008 г. - Саратов, 2008. - С. 69 - 72.

10. Курако У.М. Использование ПЦР для быстрого обнаружения С. jejuni в мясе и субпродуктах кур / У.М. Курако, Т.В. Спиряхина, A.A. Щербаков // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями : тезисы 4 международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера, 2-4 июня 2008. — Санкт - Петербург, 2008. - С. 80.

11. Курако У.М. Выделение и идентификация Campilobacter jejuni из продуктов убоя кур / У.М. Курако, A.A. Щербаков // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: тезисы 4 международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера, 2-4 июня 2008. - Санкт - Петербург, 2008. - С. 127.

12. Курако У.М. Распространение кампилобаюериоза на птицефабриках и племрепродукторах Саратовской области / У.М. Курако / Технология и продукты здорового питания : материалы II Международной научно - практической конференции, Саратов: Научная книга, 2008. - С. 84 - 86.

Подписано в печать 18.12.2008 Формат 60x84'/i6. Бумага Офсетная. Гарнитура Times

_Печ. л. 1,1. тираж 100. Заказ 781/2008_

Типография ОООп «Орион» 410031 г. Саратов, ул. Московская 62 Тел.:(8452)23-60-18

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Курако, Ульяна Михайловна

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Краткая историческая справка.

1.2. Таксономия кампилобактерий.

1.3. Морфологические свойства кампилобактерий.

1.4. Культуральные свойства кампилобактерий.

1.5. Дифференциально-диагностические признаки кампилобактерий.

1.6. Антигенная структура кампилобактерий.

1.7. Факторы вирулентности кампилобактерий.

1.8. Эпизоотология кампилобактериоза.

1.9. Эпидемиология кампилобактериоза.

1.10. Устойчивость кампилобактеров.

1.11. Лабораторная диагностика кампилобактериоза.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Штаммы кампилобактерий.

2.1.2. Питательные среды.

2.1.3. Антибиотики.

2.1.4. Газовые пакеты.

2.1.5. Тест — системы для изучения биохимических свойств кампилобактерий и реактивы.

2.1.6. Методы выделения, изучения и идентификации штаммов возбудителя кишечного кампилобактериоза.

2.1.7. Обследование хозяйств и материал для исследования.

2.1.8. Изучение контаминации С. jejuni и С. coli желудочно-кишечного тракта клинически здоровых кур и кур, направленных на санитарный убой.

2.1.9. Изучение контаминации С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе переработки.

2.1.10. ПЦР - анализ С. jejuni в продуктах убоя кур.

2.2. Результаты исследования и их обсуждение.

2.2.1. Исследование желудочно-кишечного тракта кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области на наличие

С jejuni и С.coli.

2.2.2. Определение контаминации С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе переработки.

2.2.3. Использование ПЦР для обнаружения С. jejuni в мясе и субпродуктах птицы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика и распространение бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы"

Актуальность работы

Острые кишечные инфекции широко распространены во многих странах мира и представляют серьезную опасность для современного общества. По оценке ВОЗ ОКИ уносят ежегодно 3 миллиона жизней людей. В России экономические потери от кишечных инфекций, куда включаются и пищевые, исчисляются 51 миллиардом рублей (Светоч и др., 2007).

Важное место среди ОКИ занимает кампилобактериоз ввиду его широкой распространенности, множественности резервуаров, постоянной тенденции к росту заболеваемости и наносимого им значительного социально-экономического ущерба. Микроорганизмы рода Campylobacter в качестве этиологического фактора ОКИ встречаются чаще, чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы. По данным ВОЗ, в зависимости от географического положения региона и сезонности, кампилобактеры вызывают от 3 до 73 % ОКИ (Сафонова и др., 1988; Сичинский, 1991; Иванов, Бойцов, Порин, 1995; Кирик, 1995; Черкасский, Подунова, Акулова, 1995; Friedman et al., 2001).

Значимость проблемы распространения кампилобактериоза подтверждает тот факт, что ВОЗ включила эту инфекцию в национальную программу по борьбе с инфекционными заболеваниями в 108 странах мира, в том числе и в России (Клево, 2006).

Кампилобактериоз подлежит обязательной регистрации в США, Великобритании, Франции, Германии и во многих других европейских странах (Блюстад, Блад, Гисеке, 2005). В России диагностика кампилобактериоза проводится редко, что свидетельствует об отсутствии четкой информации о распространенности этого заболевания в РФ.

В нашей стране официальная регистрация кампилобактериоза введена с 1992 года, и с этого времени проводиться эпидемиологический надзор, а с

1999 года формируется система наблюдения за инфекцией (Новости об инфекциях. pasteur-nii.spb.ru. // (Рус.). URL: http://www.pasteur-nii.spb.ru/news/globalnews/2004/03/31/events20601/ [31 Марта 2004]). За вышеуказанный период в Санкт-Петербурге зарегистрировано 2536 случаев кампилобактериоза, что составляет почти 60 % от отмеченных по Российской Федерации. Соответственно показатели заболеваемости за все годы превышают средние республиканские в 15-20 раз.

Опасность заключается в том, что основную группу больных составляли дети от 14 до 16 лет - 75,4 %, так как частота их обследования и высеваемость в этой группе выше, чем среди взрослых. В возрастной структуре наибольший удельный вес составляют дети первых 3 лет жизни - 29 % и с 3 до 6 лет - 26 % (Новости об инфекциях. pasteur-nii.spb.ru. II (Рус-)- URL: http://www.pasteurnii.spb.ru/news/globalnews/2004/03/31/events20601/ [31 Марта 2004]).

Основным естественным резервуаром бактерий рода Campylobacter является промышленная птица, в первую очередь бройлерная, и животные (Светоч и др., 2007).

Контаминация бактериями рода Campylobacter бройлерной птицы может достигать 100 %, а послеубойная обработка ее не всегда предотвращает попадание указанных бактерий на тушки птицы (Жакипбаева, 1992; Болохович и др., 1995;Wallace, Stanley, 1998).

Кроме этого кампилобактериоз наносит существенный экономический ущерб птицеводству за счет снижения яйценоскости, живой массы, падежа птицы и затрат на ликвидационные мероприятия (Кирьянов, 1992).

Эпидемиологическая опасность мяса возрастает в связи с тем, что бактерии рода Campylobacter высококонтагиозны, что позволяет рассматривать их как возможный этиологический фактор профессионального заболевания у работников птицеводства (Blaser et al., 1986; Tee et al., 1987; Кирьянов, 1992).

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ по содержанию кампилобактеров в содержимом желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и в смывах с тушек здоровой птицы и больной, направленной на санитарный убой на птицефабриках и в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

2. Определить видовой состав выделенных кампилобактеров и изучить их биологические свойства.

3. Оценить влияние условий обработки тушек птицы на степень их бактериальной контаминации перед упаковкой.

4. Провести выявление С. jejuni в мясе и субпродуктах кур, реализуемых в торговой сети города Саратова, с использованием полимеразной цепной реакции (ПНР); сравнить эффективность бактериологического метода диагностики кампилобактеров и метода ПЦР.

Научная новизна

• Впервые установлен факт обнаружения бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя кур на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области; подтверждена роль мяса и продуктов убоя птицы, как источника передачи кишечного кампилобактериоза при несоблюдении санитарно-гигиенических требований.

• Основными видами, выделенными при кампилобактериозе у птиц, ^ явились С. jejuni и С. coli; были изучены их биологические свойства.

• Установлено, что ПЦР является эффективным методом индикации

С jejuni в продуктах убоя птицы и по чувствительности, и времени * постановки анализа существенно превосходит общепринятый бактериологический метод.

Практическая значимость работы

По результатам исследований опубликованы «Методические рекомендации по выделению кампилобактеров из продуктов убоя птицы и их дифференциация», предназначенные для проведения практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области ветеринарной микробиологии, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 4 от 26 октября 2007 г.)

Основные положения, выносимые на защиту

2. Для индикации С. jejuni в материале от птиц и продуктах ее убоя использовали метод ПНР.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», в рамках ассоциации «Аграрное образование и наука» за 2007 — 2008 гг.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на:

• Научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», посвященной 119 годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова (2006 г.);

• Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (2007 г.);

• Научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по итогам научно - исследовательской работы за 2007 -2008 гг. (2008 г.);

• Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича «Актуальные проблемы ветеринарной патологии сельскохозяйственных животных и птиц» (Саратов, 2008);

• II Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (Саратов, 2008);

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 12 работ, из них одна статья в журнале, входящем в перечень ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка использованных литературных источников и приложения. Материалы диссертации изложены на 109 страницах машинописного текста, иллюстрированы 11 таблицами и 9 рисунками. Список использованных литературных источников включает 145 наименований, в том числе 82 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Курако, Ульяна Михайловна

Выводы

1. На птицефабриках и племенных птицеводческих заводах Саратовской области бактериологическим методом было обнаружено и выделено 22 штамма С.jejuni (5,1 %) и 16 штаммов С. coli (3,7 %).

2. Анализ выделенных штаммов показал, что в содержимом желудочно-кишечного тракта кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области выявлено: от клинически здоровых кур 29 % - С. jejuni и 25 % - С. coli, а от кур, направленных на санитарный убой (с остро протекающей инфекцией и явными клиническими признаками) — 71 % и 75 % соответственно.

3. Впервые установлено, что контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит в результате попадания на них содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере (5,5 % - С. jejuni и 5,5 % - С. coli), а промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой не является эффективной и даже может способствовать большей обсемененности.

Заключение

Кишечный кампилобактериоз - широко распространенная инфекционная болезнь человека, животных и птицы.

Кампилобактериоз подлежит обязательной регистрации в США, Скандинавских странах, Германии и странах Балтии. На территории России образцы фекалий редко исследуются на наличие кампилобактерий (Блюстад, Блад, Гисеке, 2005).

Официальная регистрация кампилобактериоза в Российской Федерации введена с 1992 года, и с этого времени стал проводиться эпидемиологический надзор, а с 1999 года формируется система наблюдения за инфекцией. Однако в 2003 году в Российской Федерации было зарегистрировано всего 391 случай заболевания кампилобактериозом, из них 315 у детей до 14 лет или 0,3 % на 100 тысяч населения, тогда как истинный уровень заболеваемости этой инфекцией, по данным ряда исследователей, составляет 15-20 % на 100 тысяч населения (Иванов, 1987).

При регистрации в Российской Федерации сальмонеллеза на уровне 50 тысяч случаев в год, регистрируется только 400-500 случаев заболевания кампилобактериозом. Это свидетельствует о том, что лабораторная диагностика этой инфекции в России практически не проводится (Иванов, 1987).

Таким образом, информация о фактической заболеваемости этой инфекцией практически отсутствует. Во всех регионах России сообщают только о лабораторно подтверждённых случаях кампилобактериоза. Как правило, источники инфекции и основные факторы передачи не выявлялись. Между тем, по литературным данным многие авторы главным фактором передачи инфекции человеку называют употребление продуктов птицеводства (Blaser et al., 1986; Tee et al., 1987; Кирьянов, 1992; Блюстад, Блад, Гисеке, 2005; Светоч и др., 2007). Так, контаминация бактериями рода Campylobacter бройлерной птицы может достигать 100 % (Жакипбаева, 1992; Болохович и др., 1995;Wallace, Stanley, 1998).

По мнению ряда авторов, кампилобактеры могут попадать на тушки птицы с оборудования, тары и воды для промывки (Berrang, Buhr, Cason, 2001; Stern et al., 2001; Jorgensen et al., 2002). Многие авторы основным источником заражения кур на птицефабриках, считают корм, воду в поилках и подстилку (Шманов, 1986; Колычев, Госманов,2003).

Основным методом лабораторной диагностики кампилобактериоза является бактериологический метод исследования. Так как возбудитель кампилобактериоза является комменсалом ЖКТ, для бактериологического контроля можно использовать метод прижизненной диагностики, в частности, исследование объединенных проб помёта или взятие материала из клоаки птицы. Практическая ценность данного метода состоит также в том, что он дает возможность в выборе средств профилактики и не требует обязательного убоя птицы.

Другим эффективным метод лабораторной диагностики кампилобактериоза является ПЦР. Метод имеет ряд существенных преимуществ перед бактериологическим, но пока редко применяется, так как требует относительно больших затрат на приобретение тест-систем и оснащение лаборатории.

Первые случаи кишечного кампилобактериоза птицы в Саратовской области были зарегистрированы в ходе наших исследований в 2006 году (Курако, Зыкин, Шнякина, 2006). Официальные данные по заболеванию людей в Саратовской области отсутствуют.

Целью работ стало изучение распространения и идентификации бактерий рода Campylobacter на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области, а также выявление кампилобактеров в продуктах убоя птицы.

Нами была усовершенствована методика выделения, изучения и идентификации штаммов возбудителя кишечного кампилобактериоза, которая вошла в «Методические рекомендации по выделению кампилобактеров из продуктов убоя птицы и их дифференциация», утвержденные УМС Факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» (протокол №4 от 26 октября 2007 г.). Данная методика выделения, изучения и идентификации штаммов возбудителя кишечного кампилобактериоза, включала и опыты по исследованию кампилобактеров Н.В. Сафонова и соавторов (1989), Б.Л. Черкасского и соавторов (1989).

Всего за период с марта 2006 года по февраль 2008 года было исследовано 431 проба от кур различного происхождения, из хозяйств Татищевского, Балтайского, Марксовского, Энгельского, Петровского, Лысогорского, Аткарского и Саратовского районов Саратовской области.

Бактериологическим методом было исследовано 207 индивидуальных проб содержимого ЖКТ кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Татищевского, Марксовского, Петровского, Лысогорского и Балтайского районов Саратовской области, выделено 14 штаммов С. jejuni и 8 штаммов С. coli.

Было исследовано 106 проб от клинически здоровых кур и 101 пробу от кур, направленных на санитарный убой. В результате эксперимента от клинически здоровых кур выделили 4 штамма С. jejuni и 2 штамма С. coli, а от кур, направленных на санитарный убой выделили 10 штаммов С. jejuni и 6 штаммов С. coli. То есть, соотношение количества выделенных штаммов Cjejuni из ЖКТ клинически здоровых кур и кур, направленных на санитарный убой составило 29 % к 71 %, а С. coli - 25 % к 75 %, соответственно.

В большинстве случаев у кур заболевание протекало остро с явными клиническими признаками, по которым их направляли на санитарный убой. По-видимому, это свидетельствует о том, что не были проведены своевременные профилактические мероприятия против распространения кишечного кампилобактериоза в хозяйствах.

Процент инфицированности кур бактериями вида С. jejuni на исследованных птицефабриках и племенных птицеводческих заводах

Саратовской области, по результатам исследования ЖКТ кур бактериологическим методом, составляет около 7 %, а С. coli около - 4 %.

При исследовании бактериологическим методом 184 индивидуальных проб смывов с брюшной полости тушек в процессе переработки, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области, выделено 8 штаммов С. jejuni и 8 штаммов С. coli.

При исследовании 109 проб смывов с брюшной полости кур после потрошения было выделено 6 штаммов С. jejuni и 6 штаммов С. coli, а из 75 проб смывов с брюшной полости кур, направленных на упаковку и дальнейшую реализацию, выделено 2 штамма С. jejuni и 2 штамма С. coli.

В ходе данного эксперимента было установлено, что контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит, в основном, в результате попадания на них содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере, что соответствует данным многих исследователей: M.J. Blaser et al. (1982); R.C. Baker, M.D. Paredes, R.A. Qureshi (1987).

Также установлено, что промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой, не является достаточно эффективной и и в ряде случаев может способствовать большей обсемененности, что отмечали в своих работах некоторые исследователи: М.Е. Berrang, R.J. Buhr, J.A. Cason (2001); N.J. Stern et al. (2001); F. Jorgensen et al. (2002).

Во избежание контаминации продуктов птицеводства бактериями рода Campylobacter в хозяйствах должны строго соблюдаться схема потрошения и качество промывки. Р1еобходимо применять дополнительные меры дезинфекции поверхностей оборудования и воды для промывки.

Заключительный этап работы посвящен использованию ПНР для индикации С. jejuni в продуктах птицеводства.

ПЦР - это современный метод генодиагностики, лишенный ряда недостатков, присущих бактериологическому методу, это:

• длительность проведения анализа 6 — 7 суток;

3 5

• низкая чувствительность (1 * 10 - 1 * 10 КОЕ/ мл);

• высокая специфичность;

• трудности, связанные с контаминацией исследуемого материала большим количеством посторонней флоры

• подбор сред и т.д.

С помощью данной «Амплитест - системы» "КАМ-БАК" нами были исследованы мясо и субпродукты кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова.

Было исследовали 40 индивидуальных проб мяса и субпродуктов кур, при этом 14 показали положительный результат, на наличие бактерий вида С. jejuni, что составляет 35 % от числа исследуемых проб. При этом использование параллельно бактериологического метода кампилобактеры не выявлены.

Также методом ПЦР нами было исследовано мясо уток, приобретенное в частном хозяйстве Пугачевского района Саратовской области. Из 3 проб мяса уток был обнаружен 1 положительный результат, бактериологическим методом не выявлено наличие возбудителей ни в одной из исследуемых проб.

Таким образом, чувствительность и специфичность используемого ПЦР - анализа подтвердили существенную роль этого метода в идентификации бактерий вида С. jejuni, что соответствует данным, полученным в исследованиях О.Д. Склярова, И.Л. Обухова и М.Ю. Сорокина (1999), М.Ю. Сорокина (1999) и I.V. Wesley et al. (1997).

Особенная ценность метода заключается в том, что с его помощью можно устанавливать диагноз без выделения чистой культуры возбудителя, и в то же время он может быть использован для идентификации культур кампилобактеров при наличии соответствующих праймеров. Кроме этого ПЦР позволяет обнаружить некультивируемые микроорганизмы, значение которых в патологии животных и человека с каждым годом увеличивается (Скляров, Обухов, Сорокина, 1999).

Результаты эксперимента дают возможность рекомендовать ПЦР в качестве эффективного дополнительного экспресс - метода лабораторной диагностики бактерий рода Campylobacter у птиц и индикации кампилобактер в продуктах убоя кур.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Курако, Ульяна Михайловна, Саратов

1. Васильев Д.А. Методы частной бактериологии : учебно-методическое пособие / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.М. Никишина ; Ульяновский ГС А. Ульяновск, 2006. - С. 175 - 183.

2. Ветеринарная микробиология и иммунология. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза) / H.A. Радчук и др.. М., 1991. - С. 74 - 88.

3. Глушков A.A. Вибриоз (кампилобактериоз) животных : лекция / A.A. Глушков. М., 1983. - 24 с.

4. Голиков A.B. Селективная среда для выделения термофильных кампилобактерий / A.B. Голиков, И.В. Зенин // Ветеринария. 1987. №4. - С. 66 - 67.

5. Гроссклаус Д. Кампилобактериоз специальные меры профилактики и борьбы : бюллетень Всесоюзного ордена Ленина / Д. Гроссклаус ; НИИ эксперементальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. - М.,1984.-Вып. 56.-С. 28-33.

6. Демченко Г.Г. Возможность получения антигенного эритроцитарного диагностикума / Г.Г. Демченко // Меры борьбы с инфекционными паразитарными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане. Алма - Ата., 1985. - С. 85 -88.

7. Евсейченко Р.И. Вибриоз / Р.И. Евсейченко // Яндекс. Словари Электронный ресурс. . Электрон, журн. - 2006. - Режим доступа: http://slovari.yandex.ru/dict/bse/article/00013/33200.htm.

8. Жакипбаева Б.Т. Микробиологическая характеристика и санитарно-эпидемиологические особенности кампилобактериозов на промышленных птицекомплексах : автореф. дис. . канд. мед. наук / Жакипбаева Б.Т. Алма - Ата, 1992. - 21 с.

9. Зенин И.В. Биологические свойства термофильных кампилобактерий выделенных от домашних свиней и диких кабанов : бюллетень / И.В. Зенин ; ВИЭВ. 1987. - Вып. 61. - С. 44 - 45.

10. Зенин И.В. Биологические свойства термофильных кампилобактерий выделенных от свиней, кабанов и людей : дис. . канд. вет. наук / Зенин И.В.; 16.00.03. М., 1986. - 123 с.

11. Иванов В.П. Кампилобактеры и кампилобактериозы / В.П. Иванов, А.Г. Бойцов, A.A. Порин. СПб., 1995. - С. 144.

12. Изучение свойств штаммов кампилобактерий, выделенных от крупного рогатого скота : сб. научн. тр. ВГНКИ, т. 55 / В.З. Бондаренко и др. .-М., 1994.-С. 102- 109.

13. Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза / Б.Л. Черкасский и др.. М., 1989. - С.39.

14. Кампилобактериоз животных / К.В. Шумилов и др.. // Ветеринария. М., Колос. - 1999. -№ 9. - С. 6 - 13.

15. Кампилобактериоз овец в Ставропольском крае : сб. науч. тр. / Г.А. Башкатов и др. . Ставрополь, 1989. - С. 44 - 50.

16. Кампилобактериоз у людей / Т.Б. Сафонова и др.. // Лабораторное дело. 1988. - № 6. - С. 41 - 44.

17. Каравайчик A.A. Кампилобактериоз собак в Санкт-Петербурге : автореф. дис. . канд. вет. наук / Каравайчик A.A. СПб., 2002. - 19 с.

18. Каравайчик A.A. Роль С. jejuni и С. fetus в кампилобактериозной патологии собак : сб. научн. тр. ВГНКИ, т. 62 / A.A. Каравайчик. М., 2001. -С. 75-85.

19. Кирьянов Е.А. Кампилобактериоз животных : лекция / Е.А. Кирьянов // Приморский с.-х. ин-т. Уссурийск, 1992. - 23 с.

20. Клево Е.И. Применение раствора нейтрального анолита АНК в убойных цехах птицефабрик для предотвращения контаминации тушек и субпродуктов птицы возбудителями кампилобактериоза : дис. . канд. вет. наук / Клево Е.И. ; 16.00.06. М., 2006. - 113 с.

21. Колычев Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. 3-е изд. - М. : Колос, 2003. - 587 с.

22. Маниатис Ф. Молекулярное клонирование / Ф. Маниатис, Э. Фриг, Д. Симбруг. М., 1984. - С. 6 - 21.

23. Матвеев З.Н. Питательные среды для сохранения и культивирования микроорганизмов рода кампилобактер / З.Н. Матвеев // Острые кишечные инфекции. Ленинград : Ленинградское НИИ эпидемиологии и микробиологии. - 1987. - № 11. - С. 53 - 63.

24. Методические рекомендации Этиология, клиника и диагностика кампилобактериоза / Н.В. Сафонова и др.. М., 1989. - 25 с.

25. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Д.И. Скородумов и др.. М., 2005. - С. 546 - 561.

26. Минаев В.И. Лабораторная диагностика кампилобактериоза всовременных условиях / В.И. Минаев, A.B. Горелов, М.А. Головинова // Микробиология, вирусология, иммунология. 1991. - № 8. - С. 18 - 20.

27. Ниманд Х.Г. Кампилобактериозы : Практ. руководство / Х.Г. Ниманд, П.Ф. Сутер // Болезни собак. М., 1998. - С. 254 - 273.

28. Новости об инфекциях, pasteur-nii.spb.ru. // (Рус.). URL: http://www.pasteur-nii.spb.rU/news/globalnews/2004/03/3 l/events20601/ 31 Марта 2004.

29. Новый класс антимикробных препаратов — бактериоцины и их применение для борьбы с кампилобактериозом и сальмонеллезом у бройлерной птицы : материалы 3 Международного ветеринарного конгресса по птицеводству / Э.А. Светоч и др.. М., 2007. - С. 205 - 212.

30. О кампилобактериозе кур / А. Борисенкова и др. ; Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2003. -№ 4. - С. 32.

31. Определитель бактерий Берджи : под ред. Дж. Хоулта, Н. Крша, П. Снита и др. М. : Мир, 1997. - 800 с.

32. Орел Н.Г. Разработка ассоциированной вакцины против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота : дис. . канд. вет. наук/ Орел Н.Г. ; 16.00.03.-М., 1984.-С. 6-21.

33. Особенности эпидемиологии кампилобактериоза в современныхусловиях / Д.JT. Кирик и др.. // Микробиология. М., 1995. - № 5. - С. 60 -63.

34. Партии О.С., Грачева Н.М., Щербаков И.Т. Клинико-патогенетические аспекты кампилобактериоза. medlinks.ru II (Рус.). URL: http://www.medlinks.ru/article.php?sid=15099 15 Апреля 2004.

35. Письмо о мерах по совершенствованию эпиднадзора за кампилобактериозами от 16.04.2004 № 1100 / 1067 04 - 113 / С.И. Иванов // Острые кишечные инфекции. - 1987. - № 11. - С. 53 - 63.

36. Плохинский H.A. Биометрия / H.A. Плохинский. М. : Изд-во Московский ун-т, 1970. - 367 с.

37. Профилактика и борьба с болезнями, общими для человека и животных: Сборник санитарных и ветеринарных правил. М.: Инф. -Госкомсанэпиднадзор России, 1996.- 256 с.

38. Пыхтарева Е.И. Выделение и биологические свойства термофильных кампилобактерий : автореф. дис. . канд. вет. наук / Пыхтарева Е.И. ; 16.00.03. М., 1990. - 13 с.

39. Свирина C.B. Выделение и идентификация кампилобактерий от кур : сб. науч. тр. молодых ученых / C.B. Свирина // Проблемы ветеринарной санитарии. М., 1992. - Вып. 2. - С. 32 - 35.

40. Седова Е.В. Патоморфологическое исследование органов при экспериментальном кампилобактериозе : сб. науч. тр. / Е.В. Седова // Морфология сельскохозяйственных животных ; Ленинградское НИВИ. -Ленинград, 1987. С. 85 - 88.

41. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. -М., 1995. 319 с.

42. Сичинский Л. А. Кампилобактериозы. Этиология и лабораторная диагностика / Л. А. Сичинский // Здравоохранение Молдавии. 1991. - №2. - С. 51-55.

43. Скирроу М.Б. Эпидемиология и взаимосвязь между кампилобактериозами человека и животных кабанов : бюллетень Всесоюзного ордена Ленина / М.Б. Скирроу // НИИ эксперементальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. М., 1984. - Вып. 56. - С. 18 - 22.

44. Скляров О.Д. Использование полимеразной цепной реакции для выделения С. jejuni : сб. науч. тр. / О.Д. Скляров, И.Л. Обухов, М.Ю. Сорокина ; ВГНКИ. — М., 1999.-Т. 61.-С. 90-93.

45. Триленко П.А. Вибриоз крупного рогатого скота и овец / П.А. Триленко. М., 1961. - 248 с.

46. Триленко П.А. Диагностика инфекционных абортов крупного рогатого скота / П.А. Триленко. М. - Сельхозиздат. - 1956. - 287 с.

47. Трубицкий А. Н. Серологическая диагностика кампилобактериоза овец : бюллетень Всесоюзного ордена Ленина / А.Н. Трубицкий // НИИ эксперементальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. М., 1984.-Вып. 56.-С. 33 -35.

48. Чайка H.A. Кампилобактериоз / H.A. Чайка, Л.Б. Хазенсон, Ж.П. Бутцлер // Медицина. 1988. - № 8. - С. 40 - 43.

49. Чайка H.A. Электронно-микроскопическое изучение кампилобактеров / H.A. Чайка, Л.Б. Хазенсон, Ж.П. Бутцлер // Медицина. — 1988.-№ 8.-С. 136- 155.

50. Черкасский Б.Л. Кампилобактериоз Руководство по эпидемиологии / Б.Л. Черкасский, В.И. Минаев М., 1993. — Т. 2. - С. 51 — 60.

51. Черкасский Б.Л. Пищевые зоонозы у людей в России / Б.Л. Черкасский, Л.Г. Подунова, И.К. Акулова // Пищевые зоонозы — сальмонеллезы, кампилобактериозы, иерсиниозы, листериозы. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики : Междунар. симпозиум,

52. Москва, 1 3 марта 1995 г.-М., 1995.-С. 18-19.

53. Шевелева С.А. Загрязненность пищевых продуктов бактериями рода Campylobacter / С.А. Шевелева, Ж.Н. Шурышева, И.И. Пискарева // Вопросы питания. 2006. - Т. 75, № 6. - С. 38 - 43.

54. Шманов К.С. Изоляция Campylobacter jejuni от животных / К.С. Шманов // Ветеринария. 1986. - № 4. - С. 37.

55. Шманов К.С. Некоторые биологические свойства Campylobacter jejuni : бюллетень Всесоюзного ордена Ленина / К.С. Шманов, И.П. Иренков // НИИ эксперементальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. М., 1984. -Вып. 56.-С. 36-39.

56. Штукарева М.Ю. Антибиотикоустойчивость кампилобактерий : сб. науч. тр. / М.Ю. Штукарева // Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции М., 1997. — Ч. 2. — С. 20.

57. Abbolt J. Stereotyping of Campylobacter jejuni (coli) / J. Abbolt, D. Bas, E. Joan et al. // J. Clin. Pathol. 1980. - V. 33. № 8. - H. 762 - 766.

58. Adherence to lipids and intestinal mucin by a recently recognized human pathogen, Campylobacter upsaliensis. / F.A. Sylvester et al.. // Infect. Immun. 1996, 0ct;64(10). - P. 4060 - 4066.

59. Al Maschat R.R. Campylobacter spp. in enteric lesions in cattle / R.R. Al - Maschat, D.J. Taylor // Vet. Rec. - 1980. - V. 107. - P. 31 - 34.

60. Al Maschat R.R. Production of Campylobacter fetus subspecies jejuni / R.R. Al - Maschat, D.J. Taylor // Vet. Rec. - 1980. - V. 107. - P. 459 -464.

61. Application of multiplex polymerase chain reaction of Campylobacter jejuni/coli associated with reproductive failure / J.V. Wesley et al.. // Am. J. Vet.

62. Res. 1997. - V. 58, № 10. - P. 1070 - 1075.

63. Atypical Campylobacters associated with gastroenteritis / W. Tee et al.. // J. Clin. Microbiol. 1987. - V. 25. - P. 1248 - 1254.

64. Baker R.C. Prevalence of Campylobacter jejuni in eggs and poultry med in New York State / R.C. Baker, M.D. Paredes and R. A. Qureshi // Poult. Sei.- 1987.-V. 66.-P. 1766- 1770.

65. Berrang M.E. Broiler carcass contamination with Campylobacter from feces during defeathering / M.E. Berrang, R.J. Buhr, J.A. Cason // J. Food. Prot. -2001. V. 64. - P. 2063 - 2066.

66. Biochemical and serological characterization of Campylobacter strains isolated from aborted bovine fetuses / J. Varga et al.. // Acta. Vet. Hung. -1986.-V. 34, № l.-p. 55 -59.

67. Blaser M.J. Campylobacter enteritis / M.J. Blaser, L.B. Reller // N. Engl. J. Med. 1981, Dec 10;305(24). - P. 1444-52.

68. Blaser M.J. Epidemiology of Campylobacter jejuni infections / M.J. Blaser, D.J. Taylor and R.A. Feldmar // Epidemiol. Rev. 1983. - V. 5. - P. 157 -176.

69. Bryner J.H. Dissociation Studies of vibrios from the bovine genital track / J.H. Bryner, A.H. Frank, P.A. SO'Berry // Am. J. Vet. Res. 1962. - V. 23. -P. 32-41.

70. Bryner J.H. Vibrio infection of the digestive organs of cattle / J.H. Bryner, A.H. Frank, P.A. SO'Berry // Am. J. Vet. Res. 1964. - V. 25. - P. 1048

71. Buck G. Composition of the antigenic material removed from Campylobacter jejuni by Keat / G. Buck, J. Smith, K. Parshall // J. Clin. Microbiol. 1984. - V. 20, № 6. - P. 1094 - 1098.

72. Butzler J.P. Campylobacter Infection in Man and Animals / J.P. Butzler // Boca Raton : CRC Press. 1984. - 4 p.

73. Buzbu J.C. Economic costs and trade impact of microbial food borne illness / J.C. Buzbu, T.H. Roberts // World Heath Stat. 1997. - Q. 50 (1 - 2). -P. 57-66.

74. Campylobacter 2 Proceedings of the 3rd Internal Workshop on Campylobacter Infections / A. Pearson et al.. // 1983. P. 200.

75. Campylobacter enteritis associated with unpasteurized milk / M.J. Blaser et al.. // Am. J. Med. 1979. V. 67. - P. 715 - 719.

76. Campylobacter entertains associated with food borne transmission / M.J. Blaser et al.. // Am. J. Epidemiol. - 1982. V. 116. - P. 886 - 894.

77. Campylobacter fetus subspecies fetus / K. Uematsu et al.. // Japan Veterinary Medical Association. 1990. -V. 13, № 10. - P. 713 - 718.

78. Cappelier J.M. Demonstration of a protein synthesis in starved Campylobacter jejuni cells / J.M. Cappelier, A. Rossero, M. Federighi // Int. J. Food. Micr. 2000, № 10. - V. 1 - 3. - P. 63 - 67.

79. Characteristics of the internalization and intracellular survival of Campylobacter jejuni in human epithelial cell cultures / M.E. Konkel et al.. // Microb. Pathog. 1992, Nov; 13(5). - P. 357 - 370.

80. Characterization of a post-translational modification of Campylobacter flagellin: identification of a serospecific glycosyl moiety. / P. Doig et al.. // MoL Microbiol. 1996, Jan; 19(2). - P. 379 - 387.

81. Clark B.L. The occurrence of Vibrio fetus (intestinalis) in Australian cattle / B.L. Clark, M.J. Monsburgh and J.H. Dufly // Aust. vet. J. 1969. - V. 45, №4.-P. 137- 139.

82. Cottbal G.E. Campylobacter and Vibrio / G.E. Cottbal // Manual ofstandardized methods for veterinary microbiology. Cornell Univ. Press, Jthaca, 1978.-P. 461 -471.

83. Distribution of Campylobacter spp. in selected U.S. poultry production and processing operations/ N.J. Stern et al.. // J. Food Prot. 2001. -V. 11.-P. 1705- 1710.

84. Effect of Drinking Water Chlorination on Campylobacter spp. Colonization of Broilers / N.J. Stern et al.. // J. Avian Diseases. 2002. - P. 401 -404.

85. Eldige J. Serological response to Campylobacter jejuni/coli infection / J. Eldige // J. Clin. Pathol. 1980. - V.33 - P. 767 - 769.

86. Epidemiology of Campylobacter jejuni infection in the United States and other industrialized nations / C.R. Friedman et al.. // Campylobacter / eds J. Nachamkin, M.J. Blaser. Washington: ASM Press, 2001. - P. 5.

87. Evaluation of transport and storage teebnigues for isolation of Campylobacter fetus subspecies jejuni from turkey fecal Specimens / N.W. Luechtefeld et al.. // J. Clin. Mikrobiol. 1981. - V. 13. - P. 438 - 443.

88. Evalyation of transport media for Campylobacter jejuni in human fecal specimens / W.L. Wang et al.. // J. Clin. Microbiol. 1983. - V. 18, № 4. -P. 803 - 807.

89. Evans M.R. Hazards of healthy living: bottled water and salad vegetables as risk factors for Campylobacter infection / M.R. Evans, C.D. Ribeiro, R.L. Salmon // Emerg. Infect. Dis. 2003. - V. 10. - P. 1219 - 1225.

90. Fenlon D.R. Birds as a source of Campylobacter infections / D.R. Fenlon, T.M.S. Keich and J.A. Porter // Campylobacter Epidemiology, Pathogenesis and Bio Chemistru Edited by D.G. Newell. 1982. - P. 261 - 263.

91. Firehammer B.D. Campylobacter fetus subspecies jejuni it s possible significance in enteriedisease of calves and lambs / B.D. Firehammer, L.L. Myers 11 Amer. J. Vet. Res. 1981. - V. 42. - P. 918 - 922.

92. Firehammer B.D. The isolation of Vibrio fetus from the ovine gallbladder / B.D. Firehammer, Lovelace S.A., Hawkins W.W. // J. Cornell. Vet.1962.-V. 52.-P. 21 -35.

93. Hanninen M. The occurrence of thermophilic Campylobacters in mink and an experimental oral infection of Pregnant mank bu Campylobacter jejuni / M. Hanninen, T. Ercoan, M. Valtonen // Aeta. veler. Scand. 1988. - V. 29, № 3 - 4. -P. 463-468.

94. Hepatotoxic activity of Campylobacter jejuni / E. Kita et al.. // JT, Med. Microbiol. 1990. - Nov;33(3). - P. 171 - 82.

95. Hofstad M.S. Hepatitis chickens. A roport of progress in vererinapy medical rescareb / M.S. Hofstad, // Vet. Med. Res. Jnst., Statocoll. Ames. Jowa, 1956.-P. 56-58.

96. Hossain A. Heat-labile and heat-stable toxins of Campylobacter jejuni / A. Hossain, J.H. Freer and D.E.S. Stewart-Tull // FEMS Medical Microbiology and Immunology. 1993. - V. 6. - P. 331 - 340.

97. Hunt J.M., Abeyta C. and Tran T. Isolation of Campylobacter Species from Food and Water. cfsan.fda.gov II (Англ.). URL: http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-7.html 08 Март 2001.

98. Ivanovic S. Chicken meatfoodstuff or Campylobacter jejuni vector /th

99. S. Ivanovic, M. Zutic, T. Kocovski 11 Book of Abstracts International 54 meatproduction and processing. 2007. - Belgrade, P. 50-51.

100. Jones F.S. Vibrios (Vibrio jejuni) associated with intestinal disorders of cows and calves / F.S. Jones, M.T. Oreutt, R.B. Little // J. exp. Med. — 1931. — V. 53.-P. 853 -864.

101. Karmali M. Differentiation it catalase positive Campylobacters with special reference to morphology / M. Karmali, A. Allen, P. Flleming // Int. Systematic Bacteriol. - 1981. - V. 3.-P. 64-71.

102. Karmali M. Tax anomy of the genus Campylobacter / M. Karmali,

103. M.B. Skiirow // Jn. Infection in Man and Animals, CRC Press, Boca Raton, FL. -1984.-P. 1-20.

104. King E.O. The laboratory recognition of Vibrio fetus and a closely related Vibrio isolated from cases of human Vibriosis / E.O. King // Ann. N.Y. Acad. Sei. W. 1962. - P. 700 - 711.

105. Lauwers S. Campylobacter serotiping and epidemiology / S. Lauwers, L. Vlaes, J. Buzler // Lancet. 1981. - V. 1, № 8212. - P. 158 - 159.

106. Logan S. Molecular identification of surface protein antigen of Campylobacter jejuni / S. Logan, T. Trust // Jnfect. and Jmmun. 1982. - V. 38, № l.-P. 210-216.

107. McCardell B.A. Production of cytotoxins by Campylobacter / B.A. McCardell, J.M. Madden, J.T. Stanfield // Lancet. 1986. - May V. 3, № 1. - P. 1031 - 1031.

108. McFadien J. 1913 Final report of the departmental Committed appointed by the board and agriculture and fisheries to inquire into epizootic, abortion / J. McFadian, T. Ctockman // III Abortion in sheep. London : His Majestys Stationery Office, 1993.

109. McSweegan E. Identification and characterization of two Campylobacter jejuni adhesins for cellular and mucous substrates / E. McSweegan, R. Walker//Infect. Immun. 1986. - V. 53. - P. 141 - 148.

110. Mills S. Isolation and characterization of a common antigen in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli / S. Mills, W. Bradburg, J. Penner // J. Clin. Microbiol. 1986. - V. 24, № 1. - P. 69 - 75.

111. Nachamkin J. In: Murrary R.R. eds. Manual of Clinical Microbiology. 6th Edition ASM Press Washington D.C., 1995. P. 483 - 489.

112. Nachamkin J. Western bljt analysis on the humen antibody response to Campylobacter jejuni, coli, lari antigens during gastrointestinal infection / J. Nachamkin, A. Hart // J. Clin. Microbiol. 1985. - V. 21, № 1. - P. 33 - 38.

113. Newsam I.D. Diagnosis of bovine vibriosis. The production and use of standard suspensions of Vibrio fetus agglutinating antigen / I.D. Newsam, M.I. Monsbourgh // Aust. Vet. J. 1967. - V. 43, № 7. P. 237 - 242.

114. Pathogenic properties of Campylobacter jejuni: assay and correlation with clinical manifestations / F.A. Klipstein et al.. // Infect. Immun. 1985, October V. 50, № 1. - P. 43 - 49.

115. Pathophysiology of Campylobacter enteritis / R.I. Walker et al.. // Micr Rev. 1986. - V. 50. - P. 81 - 94.

116. Patton D.M. et al.. // J. Clin. Microbiol. 1989. - V. 27. - P. 6673.

117. Perez Perez G. Lipopolysacharide characteristics of pathogenic Campylobacters / G. Perez - Perez, M. Blaser // Jnfect. and Jmmun. - 1985. - V. 47, №2.-P. 353-359.

118. Pinckard K. et al.. // Campylobacter III London, 1985. - P. 171172.

119. Prescott J.F. Campylobacter colitis in gnotobiotic dogs / J.F. Prescott, I.K. Barker//Vet. Ree. 1980, Sep 27.-V. 13.-P. 314-315.

120. Prevalence and numbers of Salmonella and Campylobacter spp. on raw, whole chickens in relation to sampling methods / F. Jorgensen et al.. // Int. J. Food Microbiol. 2002. - V. 76. - P. 151 - 164.

121. Roberts I. The experimental infection of neonatal pigs with Campylobacter sputorum subsp. mucosalis / I. Roberts, G.H. Lawson, A.C. Rowland//Ree. Vet. Sei. 1980. - V. 28. - № 2. -P. 145-147.

122. Robinson D.A. Infective dose of Campylobacter jejuni in milk / D.A. Robinson//British Medical. J. 1981.-V. 282.-P. 1584.

123. Robinson D.A. Milk-borne Campylobacter infection / D.A. Robinson, D.M. Jones // Br. Med. J. (Clin. Res.). 1981. -V. 282. - P. 1374- 1376.

124. Sensitivity and specificity of serology in determining recent acute Campylobacter infection / B.V. Taylor et al.. // Inter. Med. J. 2004. - V. 34. -P. 250-258.

125. Serological research of Campylobacter jejuni / coli investigation of National Reference serological typing system in Japan / S. Kohiko et al.. H J. Jap. Assoc. Jnfect. Deseases. 1992. -V. 66, № 3. - C. 340 - 348.

126. Smibert R.M. The genus Campylobacter / R.M. Smibert // Ann. Rev. Microbiol. 1978. - V. 32. - P. 673 - 709.

127. Smibert R.M. Vibrio fetus var. intestinal is isolated from fecal and intestinal contents of clinically normal sheep: isolation of microaerophilie vibrios / R.M. Smibert // Am. J. Vet. Res. 1965. - V. 26. - P. 315 - 319.

128. Smith T. The etiological relation of Spirilla (Vibrio fetus) to bovine abortion / T. Smith // J. exp. Med. 1919. - V. 30. - P. 313 - 323.

129. Specific identification of Campylobacter fetus PCR targeting variable regions of the 16S rDNA / O.A. Oyarabal et al.. 11 Veter. Microbiol. 1997. - V. 58. - P. 67-71.

130. Stern N.J. Reservoirs for Campylobacter jejuni and approaches for intervention in poultry / N.J. Stern // American Society for Microbiology, Washington. D.C., 1992. P. 49 - 60.

131. Survival of Campylobacter fetus subsp. jejuni in biological milieus / M.J. Blaser et al..//J. Clin. Micr., 1980.-V. 11. № 4.-P. 309-313.

132. The galE gene of Campylobacter jejuni is involved in LPS synthesis and virulence. Infection and Immunity / B.N. Fry et al.. // Microbiology. 2000. -V. 144.-P. 2049-2061.

133. Vellinga A. The dioxin crisis as experiment to determine poultry-related Campylobacter enteritis / A. Vellinga, F. Van Loock // Emerg. Infect. Dis.

134. Wallace A. Stenley J. // J. Appl. Microbiol. 1998.V. 85. - P. 224

135. Wanyenya J., Muyanja C., Nasinyama G. // J. Food Prot. 2004. - V. 9.-P. 1957- 1960.

136. Yao R. et al.. // Mol Micr. 1994. - V. 14. - P. 883 - 893.

Информация о работе

Курако, Ульяна Михайловна
кандидата биологических наук
Саратов, 2008
ВАК 03.00.07

Диссертация

Характеристика и распространение бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы