Связь акушерско-гинекологических патологий с инфицированностью Campylobacter Fetus подвид Fetus

Шихама Якобус Ангара

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Связь акушерско-гинекологических патологий с инфицированностью Campylobacter Fetus подвид Fetus
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Связь акушерско-гинекологических патологий с инфицированностью Campylobacter Fetus подвид Fetus"

На правах рукописи

Шихама Якобус Ангара

СВЯЗЬ АКУШЕРСКО-ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ ПАТОЛОГИЙ С ИНФИЦИРОВАННОСТЬЮ CAMPYLOBACTER FETUS ПОДВИД FETUS

03.00.07- микробиология 03.00.04- биохимия

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени Кандидата биологических наук

Казань-2008

003450260

Работа выполнена на кафедре микробиологии Казанской государственной медицинской академии МЗ СР РФ

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Оскар Кимович Поздеев доктор биологических наук, профессор Ольга Николаевна Ильинская

Официальные оппоненты: кандидат биологических наук,

Елена Владимировна Никитина (доцент Казанского государственного технологического университета, г. Казань)

доктор биологических наук, профессор Владислав Моисеевич Чернов (зам. директора Казанского института биохимии и биофизики РАН, г. Казань)

Ведущая организация: ФГУП Казанский научно-исследовательский

институт эпидемиологии микробиологии, г, Казань

Защита диссертации состоится «13» ноября 2008 г. в 13:00 часов на заседании диссертационного совета Д.212.081.08 при Казанском государственном университете по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, д. 18, главное здание, ауд. 209.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И. Лобачевского Казанского государственного университета

Автореферат разослан « 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор, доктор биологических наук З.И. Абрамова

Актуальность проблемы. В настоящее время спектр возбудителей акушерско-гинекологических патологий в значительной степени пополняется за счет представителей условно-патогенной микрофлоры, роль которых в патогенезе микробно-воспорительных инфекционных заболеваниях (МВИЗ) человека установлена сравнительно недавно [Bryan et al., 1993; Blaser M.J., 1998; GrogonoThomas et al, 2003; Kalka-Moll et al., 2005]. Среди таковых большое внимание привлекает Campylobacter fetus, так как существенно возросла частота заболеваний вызванных этим видом бактерии и он составляет важную медико-социальную и экономическую проблему в разных регионах земного шара [Бородин, 1999; Carole Tremblay et al., 2000; Kalka-Moll et al, 2005]. C. fetus - широко распространен патогенная бактерия (Санитарные правила СП 1.2.731-99 МЗ РФ), ранее считавшаяся условно-патогенной [Graham L.L., 2002; Tremblay et al., 2000]

Несмотря на то, что это вид кампилобактеров был идентифицирован McFadyean J. и Stockman S. еще в 1909 году, его связь с патологией человека впервые установлена лишь в 1947 г. Vinzent R при выделении бактерий от беременных женщин, госпитализированных с лихорадкой неясного генеза [Чайка, 1988; Blaser et al., 1998; William et al., 1977]. Связь острой кишечной инфекции (ОКИ) человека с кампилобактером подтверждена только в 70-е годы [Бутцлер и соавт., 1992]. Клиническое проявление внекишечного кампилобактериоза обуславливается физиологическим и иммунологическим состоянием человека. В факторы риска входят состояние женщины при беременности, низкий иммунный статус новорожденных, хронические заболевания, алкоголизм, а также условия питания, профессия, гигиена и половая активность [Hum et al., 1994; Kelly, 2001]. Широкое распространение кампилобактера является причиной от 5 до 10% всех острых диарейных болезней во всем мире переходящие во внекишечный кампилобактериоз. В США наблюдались эпидемические вспышки кампилобактериоза, связанные с употреблением зараженной воды, молока и мясопродуктов. При вспышках, связанных с употреблением сырого молока

заболеваемость кишечного кампилобактериоза достигается 60% [Bokkenheuser,

1970; Harvey et ai, 1983]. Наблюдаются профессиональные заболевания лиц, постоянно контактирующих с животными [Hum et ai, 1994; Berger et ai, 1992; Kelly, 2001]. Также возможно заражение от человека, при инфицировании новорожденных детей (трансплацентарно или при родах). Могут происходить заражение взрослых от детей, при появлении семейных очагов, связанных с бактерионосительством. Отмечена осенне-летняя сезонность камбилобактериозных заболеваний. Давно установлено, что возбудитель попадает в организм преимущественно через желудочно-кишечный тракт алиментарным путем, другие пути передачи мало принимали во внимание, хотя возможно проникновение через поврежденную кожу (контакт с животными, укусы), половой путь передачи также не исключается [Clark, 1972; Creasy et al., 2002; Dekeyser et al., 1986].

Хронические формы кампилобактериоза, связанные с персистенцией кампилобактера в организме, стали все чаще описываться при иммунодепрессивных состояниях, в частности, в сочетании с факторами риска и ВИЧ-инфекцией [On, 2005, Blaser et al., 1988; Francioli et ai, 1985 ]. У женщин чаще поражаются половые органы, что приводит к репродуктивным осложнениям, невынашиванием беременности, выкидышам и бесплодию.

Выше сказанное требует изучения истинного значения бактерий, а также разработку подходов к ее элиминации, что может внести существенный вклад в государственную программу решения демографической проблемы. К сожалению, в настоящее время идентификацию кампилобактера как агента, вызывающего акушерско-гинекологические заболевания не проводят.

Указанное делает перспективным поиск и внедрение в практику новых доступных подходов диагностики и элиминации С. fetus, направленных на улучшение результатов лечения акушерско-гинекологических заболевании, связанных с внекишечной кампилобактериозной инфекцией.

Бактериологическая диагностика выделением возбудителя из биоматериала является «золотым стандартом» при кишечных и внекишечных

кампилобактериозных инфекциях. Для улучшения результатов бактериологического исследования разрабатывают селективную транспортную среду и модифицируют специальные питательные среды [Barrett et al, 1988; Barot et al., 1984; Cardarelli-Leite et al., 1996; Blaser et ai, 1998; Newellet a!, 2000]. Тем не менее, до сих пор в клинико-микробиологической лабораторной диагностики клиницисты и микробиологов сталкиваются с ложноположительными результатами и трудоемким получением точных результатов диагноза.

Цель данной работы - определение частоты встречаемости С. fetus подвид fetus и изучение его этиологической значимости в развитии акушерско-гинекологических патологий среди населения Республики Татарстан. Основные задачи исследования:

1. Разработать доступные методы транспортировки, выделения и идентификации С. fetus.

2. Разработать новую питательную среду и модифицировать глициновый тест для разделения подвидов С. fetus на подвид fetus (клинически значимый) и подвид venerealis (не вызывающий поражений у человека).

3. Определить частоту встречаемости и степень обсемененности С. fetus подвид fetus у пациенток с акушерско-гинекологическими заболеваниями, в зависимости от нозологии и сроков беременности.

4. Изучить вирулентные свойства выделенных штаммов, способность к персистенции и резистентность к антибактериальным препаратам.

5. Исследовать возможность длительного сохранения выделенных штаммов С. fetus в лаборатории с последующей рекультивацией и изучением. Научная новизна. Впервые разработан доступный метод быстрого

выделения, идентификации и культивирования С. fetus подвид fetus. Подтверждена связь между акушерско-гинекологическими заболеваниями и инфицированностью С fetus подвид fetus. Впервые разработан и использован на практике глициновый

кровяной агар с антибиотиками (ГКАА) — амфотерицином и ванкомицином для ускоренной идентификации подвидов С. fetus из клинического биоматериала.

Установлена корреляция между степенью обсемененности клинического биоматериала, нозологии, и сроком беременности. На поздних сроках беременности наблюдалась высокое степень обсемененности, при этом умеренная степень обсемененности была выявлена на ранней стадии беременности и при легкой стадии заболевания. Определена дифференциальная чувствительность Campylobacter к антибактериальным препаратам, устанавливающая отличие между внекишечных и кишечных кампилобактеров по сравнению с литературными данными. Впервые предложена методика длительного сохранения выделенных штаммов С. fetus в консервирующей смеси при -10°С, что позволяет рекультивацию С. fetus с первоначальными свойствами роста и патогенности.

Практическая значимость. Новые методы выделения и идентификации С. fetus подвид fetus, предложенные в работе, значительно облегчают культивирование, идентификацию и выделение патогенна из клинического материала и осуществить ускоренную, точную диагностику кампилобактериозной инфекции.

Модифицированный метод дает возможность провести ранее недоступную ускоренную диагностику и идентификацию С. fetus подвид fetus. Практическая значимость нашей работы обусловлена применением метода в акушерстве и гинекологии, с помощью которого можно идентифицировать и различить С. fetus подвид fetus от подвида venerealis, которые отличаются эпидемиологической и клинической степенью значимости. Решается сложный вопрос изучения патогенетических свойств сохранённых штаммов С. fetus подвид fetus с первоначальными свойствами. Работа вносит вклад в решение медико-социальных и демографических проблем.

Научные положения диссертации и выводы базируются на собственных результатах исследований автора.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработаны доступные на практике методы транспортировки, выделения и идентификации С. fetus при акушерско-гинекологических патологиях.

2. Установлена высокая степень вирулентности, сочетающаяся с высокой адгезивностью и способностью к синтезу гиалуронидазы выделенных штаммов С. fetus подвид fetus.

3. Частота встречаемости и степень обсемененности С. fetus подвид fetus зависит тяжести патологии и сроков беременности.

4. Разработана методика длительного сохранения выделенных изолятов С. fetus подвид fetus при -10°С в консервирующей смеси (сахарозо-желатиновой среде в буферном растворе) на срок более 12 месяцев.

Апробация материалов работы. Основные положения диссертации

доложены на XV и XVI научно-практических конференция Поволжского региона

«Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2007, 2008); на научно-

практической конференции молодых ученых «Казанская Государственная

Медицинская Академия» (Казань 2007, 2008); на научно-практической

конференции, «Актуальные вопросы инфекционной патологии» Казанской

Государственной Медицинской Унивеситет (Казань 2007); на научно-

практическойй конференции иностранных студентов и аспирантов Российский

Федерации (Томск 2007), на 36 съезде Российского общества биохимиков и

молекулярных биологов (Новосибирск 2008), а также на итоговых конференциях

КГУ (Казань,2006 - 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Благодарности. Автор искренне выражает огромную благодарность своим

научным руководителям: д.б.н., профессору заведующему кафедре микробиологии

КГУ Ольге Николаевне Ильинской и д.м.н., профессору заведующему кафедре

микробиологии КГМА и КГМУ Оскару Кимовичу Поздееву за представленную

возможность выполнить диссертационную работу, по интересной теме, актуальную

в моей стране, за ценные идеи в процессе обучения, за воспитание и родительскую

опеку. Автор выражает искреннюю благодарность всему преподавательскому составу кафедры микробиологии КГУ, биолого-почвенного факультета и признателен к.б.н. КГУ Маргулис Анне Борисовне, за неоценимую помощь при выполнении научного исследования.

Автор искренне признателен всему составу кафедре микробиологии КГМА, за огромную помощью при выполнении экспериментальной части работы и кафедре акушерства и гинекологии КГМУ, за представленные клинические материалы. Автору признателен уже родному Казанскому государственному университету.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследований, обсуждения результатов, заключения, выводы, приложения к работе и списка литературы, включающего 295 источников, из них 280 на иностранному языке. Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 7 таблицы и 17 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

При выполнении работы нами было обследовано 253 беременных женщин родильного отделения Республиканской клинической больницы (РКБ) №1 и клиники акушерства и гинекологии Казанского государственного медицинского университета (КГМУ) с различными акушерско-гинекологическими патологиями (пиэлонефрит, эрозия шейки матки, гестоз, мертворожденный плод и др.). Материалом для исследования являлись биоптаты, слизь из шейки матки и цервикального канала, околоплодные воды, смывы с плаценты и ее кусочки с видимыми изменениями. В работе были использованы следующие методы исследования: биохимические, бактериоскопические, бактериологические и молекулальнные методы исследования. Метод полимеразной цепной реакции применялся для подтверждения результатов бактериологического метода.

Тест-штаммы. Escherichia coli (К 12), Micrococcus lysodeicticus, Proteus vulgaris 019, Pseodomonas aerugenosa, Staphylococcus aureus. Питательные среды и реагенты.

Транспортная полужидкая тиогликолевая среда: питательный бульон 1000 мл, 0,1% агара, 0,5% глюкозы, 0,1% натрия тиогликолата.

КА: 4% агар с экстрактом сердечной мышцы (HIA) (Difco), 12,5 мл дефибринированной крови кролика, дН20 1000мл.

КАА: 4% агар с экстрактом сердечной мышцы (Н1А) (Difco), 12,5 мл

дефибринированной крови кролика, Змг амфотерицин В, дН20 1000мл.

IJLIAA: протеозопептон 20,00мг, глюкоза 0,5мг, хлорид натрия 5мг, натрия

гдрофосфат 5мг, агар-агар 15мг, раствора гемогробина 2%, дН20 1000мл.

ГК: гиалуроновая кислота, полученная из пупочных канатикбв.

ГКАА: глицин 1г, 12,5 мл дефибринированной крови кролика, Змг Амфотерицин

В, 7,5мг Ванкомицин, дН20 1000мл.

Определение чувствительности к антибактериальным препаратам: использовали стандартные диски, содержащие: амоксицилин (20мкг/мл); нифулоксазид (15мкг/мл); Ципрофлоксацин-5мкг/мл; Тетрациклин-ЗОмкг/мл; Эритромицин- 15мкг/мл; Цефозалин-ЗОмкг/мл; Джозамицин-ЗОмкг/мл; Цефтриаксон-ЗОмкг/мл; Ампициллин-ЗОмкг/мл; Метронидазол-ЗОмкг/'мл. Культивирование и выделение С fetus подвид fetus

Для выделения Campylobacter fetus повид fetus, биоматериалы и биоптаты от акушерско-гинекологических больных помещали в пробирки с 5 мл транспортной полужидкой тиогликолевой средой и доставляли в микробиологическую лабораторию. Часть биоптата использовали для бактериоскопического и биохимического исследования, другую часть - для приготовления гомогената, необходимого для бактериологического и повторного биохимического исследования.

Принадлежность выделенных культур к роду Campylobacter определяли по

совокупности положительных результатов при бактериоскопическом,

бактериологическом и биохимическом исследованиях. Определение степени вирулентности проводили с помощью анилиновых красителей согласно методике предложенной И.А. Григорьевой с соавт. (1991). Определение гиалуронидазной, фибринолитической активностей и устойчивости к лизоциму среди выделенных штаммов осуществляли с помощью доступных стандартных методов (основанные на гидролизе гиалуроновой кислоты и фибрина). Изучение адгезивных свойств штаммов С. fetus подвид fetus проводили в реакции прямой гемагглютинации на стекле в присутствии D-маннозы по Б.Г. Каральнику и соавт. (1990). Чувствительность 114 штаммов С. fetus к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом со стандартными дисками.

Возможность длительного сохранения при -10°С в консервирующей смеси, (10% сахарозо-желатиной среды, модифицированной нами добавлением буферно-физиологического раствора) с последующим рекультивированием была определена у 35 штаммов С. fetus. Через 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 и 24 месяца производили медленное размораживание культур при комнатной температуре с последующим высевом на кровяной агар с добавлением 10% бараньей крови и 3 мкг/мл амфотерицина В (КАА).

Разработка новой питательной среды для ускоренного выделения и идентификации подвидов С, fetus

Для выделения кампилобактера при инфекции кишечного тракта чаще используют КАА. Недостатком этой среды является невозможность дифференцирования С. fetus на подвиды С. fetus подвид fetus и С. fetus подвид venerialis. Мы модифицировали среду, добавлением 1% глицина, который позволил идентифицировать С. fetus подвид fetus (т.к. С. fetus подвид venerialis не растет в присутствии глицина). Поскольку глицин не подавляет рост С. jejuni, то дополнительно определяли наличие гипуразы, синтезируемой только С. jejuni.

Проводили посевы газоном по 1 капле суспензии посевного материала и культивировали 48 ч в микроаэрофильных условиях при 37° С и 98% влажности.

Контролем служили суточные культуры С. jejuni.

Для подтверждения результатов, полученных микробиологическими методами, провели идентификацию изолятов, выращенных на ГКАА, с помощью ПЦР анализа. Идентификацию проводили с помощью специфических праймеров (MG3F и MG4R) Campylobacter fetus подвид fetus. Отрицательным контролем являлась ДНК Campylobacter fetus подвид venerealis, положительным контролем служила музейная культура Campylobacter fetus подвид fetus. Определение устойчивости к лизоциму С fetus подвид fetus

Устойчивость к лизоциму выделенных изолятов С. fetus подвид fetus проводили по методу О.В. Бухарина с соавт. (1990). Использовали 5 и 15% растворы лизоцима в 0,5% растворе NaCl. Тест-культуру (Micrococcus lysodeicticus) выращивали 48 часов при 37°С на кровяном и шоколадном агарах. Штаммы С. fetus подвид fetus ресуспендировапи в пробирках с различными концентрациями фермента; контролем служил физраствор. Пробирки инкубировали при 37°С 30, 60, 120 минут и 24 часа. Затем проводили высев на питатьную среду и подсчитывали число выросших колоний. Исследование гиалуронидазной активности С. fetus подвид fetus

Гиалуронидазную активность бактерий проводили в отношении гиалуроновой кислоты, выделенной из пупочных канатиков новорожденных (500 г пупочных канатиков полученных из родильного отделения клиники им. В.С.Груздева КГМУ). Полученный пупочный субстрат (раствор содержащий гиалуроновую кислоту) не изменял своих свойств в течение 30 дней хранение при 4°С в холодильнике. Рабочую дозу определяли титрованием, в пробирках, содержащих минимальное количество гиалуроновой кислоты в субстрате, при котором образовывался хорошо выраженный муциновый сгусток, Гиалуронидазную активность определяли по лизису сгустка.

Статистическая обработка данных: Для вычисления средних величин, средней квадратичной ошибки и критерия достоверности разности средних величин использовали программный пакет Microsoft Office 2003 Windows и

Statistica 6.0. Полученные данные мы подвергли статистической обработке с вычислением средней ошибки показателя - т.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Частота встречаемости Campylobacter при акушерско-гинекологических

заболеваниях. В наших исследованиях из 253 обследованных пациенток отделения акушерской гинекологии, у 121 (48,8±3,1%) были выделены бактерии рода Camplobacter. При этом 101 (83,5±3,4%) изолятов принадлежал к С. fetus подвид fetus, 13 (10,7±2,8%) к С. fetus подвид venerealis и только 7 (5,8±2,1%) к С. jejuni.

С. jejuni, 5.8 %

ус. fetus подвид fetus, 83 5 %

Рис.1. Видовой и подвидовой состав выделенных культур Campylobacter.

Факт моноинфекции Campylobacter установлен в 48,8% случаев, что указывает на высокую значимость бактерий в акушерско-гинекологических патологии. В 51,2% случаев имела место смешанное инфицирование несколькими бактериями (рис. 2).

Рис.2. Частота встречаемости других микроорганизмов, обнаруженные в ассоциации с С. fetus иодвидом fetus при акушерско-гинекологических заболеваниях.

Анализ зависимости частоты встречаемости С. fetus от возраста пациенток показал, что самый высокий процент выделения С. fetus подвид fetus (44.4 %) наблюдали среди женщин в возрасте 21-25 лет. Среди пациенток от 26 до 30 лет она составила 32.6 %. Реже всего бактерии выявляли у женщин моложе 20 лет и старше 41 года (рис. 3).

Рис.3. Частота

встречаемости Campylobacter fetus подвид fetus в зависимости от возраста пациентки.

21-25 26 - 30 31 - 35 36-40 более 41 Воэрастмые группы (годы)

Частота выделения бактерий зависел от типа патологии. В частности, при хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН) их выявляли у 62,5±7,6% женщин, при гестозах — у 57,5±8,4%, при бесплодии — у 50±15,8%. При внутриутробных инфекциях (ВУИ) С. fétus подвид fétus выявляли у 70±8,4% пациенток. При мертворождении бактерии обнаруживали у 55±11,1% женщин, при

выкидышах — у 56,7±9,0%, при акушерском анамнезе — у 33,3±8,2%, тогда как при физиологических родах только у 21,8±5,6% пациенток (рис. 4).

Рис. 4. Встречаемость С. fetus подвид fetus в зависимости от нозологии акушерско-

гинекологических патологий.

Также мы исследовали степень инфицирования кампилобактерами на разных сроках беременности. Нами установлено, что инфицированность С. fetus подвид fetus чаще была выявлена в третьем триместре (31 - 40 недель) беременности и составляла от 70,9±4,1% до 73,7±4,0%. Выявили, что на 16 - 25 неделях беременности частота выделения С. fetus подвид fetus гораздо ниже, чем на последних неделях и послеродовом периоде (рис. 5). На ранних сроках (до 15 недели) ни у одной из обследованных женщин не был выделены С. fetus подвид fetus.

5.70 §60 J 50

о«

| 30 5 20 ho

Рис. 5. Частота выделения С. fetus подвид fetus в

зависимости

беременности.

срока

1 -5нея 6-Юнед 11 -15чед. 16-3}нед 21-25мед 2б-30нед.31 -35нед 36 - 40нед 41-Срок бере«ености (недели)

Зависимость степени обсемененности С. fetus от сроков беременности

Уровень обсемененности кампилобактерами беременных женщин с гинекологическими патологиями возрастал с увеличением сроков беременности. Наибольшим он был во втором триместре (16-30 недель) от 20±3,6%% до 69,2±4,2%. При этом в 66,7±4,3% случаев регистрировали умеренную и только в 33,3±4,3% — высокую обсемененность. В третьем триместре (31-41 недель) высокий уровень обсемененности выявляли, в среднем, у 72% женщин (рис. 6).

Эти данные указывают на то, что при увеличении срока беременности обсемененность инфицированных органов С. fetus подвид/ё/щ повышается.

Ряс. 6. Степень обсемененности С. fetus подвид fetus в зависимости от сроков беременности: умеренная - S103 КОЕ/г, высокая - >103 КОЕ/г

16-20 21 -25

Срок беремености (недели) И Умереная степень Я Высокая степень

Таким образом, можно полагать, что инфицированность беременных женщин кампилобактерами является фактором риска возникновения ХФПН, которая поддерживает хронические воспалительные процессы, способные приводить к невынашиванию беременности либо к инфекционным абортам.

В наших исследованиях бактерии наиболее часто обнаруживали в эндометрии и плаценте, реже — в соскобах цервикального канала, слизи шейки матки и околоплодных водах. Наиболее редкими были находки С. fetus подвид fetus в пуповинной крови, что, по-видимому, связано с наличием мощных антибактериальных сывороточных систем и определенной сложностью выделения микроорганизмов из крови.

Определение факторов патогенности С. fetus

Отсутствие у кампилобактеров видимых и быстро определяемых признаков патогенности, усложняет изучение их значимости в развитии акушерско-гинекологических осложнений. Тем не менее к таковым можно отнести чрезвычайно высокую подвижность, способность перемещаться в межклеточных пространствах, высокую инвазивность и способность синетзировать широкий спектр ферментов, в том числе разлагающих супероксидные радикалы, продуцируемые фагоцитирующими клетками. Нами были исследованы следующие признаки патогености: способность к синтезу мембраноповреждающих токсинов (гемолизинов), фибринолизина, гиалуронидазы, адгезивные свойства, а также устойчивость к действию лизоцима. Все выделенные изоляты Campylobacter не проявляли гемолитическую активность. Установили, что ни один из них не вызывал гемолиз. Однако определение наличия или отсутствия гемолизина недостаточно для установления патогенетической значимости выделенного изолята. Для заключения этиологической роли С. fetus при определенном гинекологическом заболевании во время беременности, необходимо было определить адгезиность штаммов.

Исследование адгезии штаммов, выделенных при разных нозологиях, показало, что кампилобактеры обладают значительным количеством фимбрии 1 типа (манноза-чувствительные). При большинстве патологий бактерии проявляли 100% адгезивность. При ХФПН этот показатель снижался до 80±3,6%, а у штаммов, выделенных от женщин с гинекологическим анамнезом либо при родах, уровни адгезии составили 80±3.6% и 83,3±3,4% соответственно. Исследование действия лизоцима на 30 выбранных штаммов С. fetus подвид fetus показало, при обработке бактерий различными концентрациями и временем воздействия, на вторые сутки колонии появились почти на всех чашках. При высеве количество КОЕ на чашку составляло от 104 до 106 (таб. 1). Таким образом, лизоцим, как фактор неспецифической зашиты не оказывал бактерицидного эффекта на

выделенные изоляты С. fetus подвид/eft«.

Таблица. 1

Действие лизоцима на выживаемость выделенных штаммов С. fetus подвид, fetus in vitro

Время обработки 30 мин 60 мин 120 мин

Концентрация лизоцима (%) 5 15 5 15 5 15

Количество штаммов, выросших после обработки лизоцимом 30 30 30 28 30 28

Мы сравнивали действие лизоцима на культуры С. fetus подвид fetus, Е. coli и М. lysodeicticus. Дополнительным контролем являлся рост М. lysodeicticus без лизоцима (в физиологическом растворе). На рисунке 8 четко видно угнетение роста культур Е. coli и М. lysodeicticus при увеличении времени инкубации с лизоцимом до полный гибели бактерии после 120 мин воздействия. При этом динамика роста С. fetus подвид fetus практически совпадала с М. lysodeicticus в физиологическом растворе (см. рис. 7).

Рис. 7. Устойчивость к лизоциму выделеных изолятов С. fetus подвид fetus

30 мин 60 мин

Время инкубации (мин)

- м. lysodeicticus в 15% р - ре газоцима

- Е coli в 15% р - ре шзоцима

-С fefejs в 15%р-ре гтооцима - М Lysodeicticus в физ р - ре

Одним из важнейших ферментов, участвующих во внедрении и диссеминирования в организме хозяина является гиалуронидаза. Этот фермент вызывает распад гиалуроновой кислоты — основного межуточного вещества соединительной ткани, особенно значимого в барьерных органах. Кроме того, гиалуронидаза увеличивает проницаемость сосудов и чувствительность больного к различным веществам (ферменты и токины). Было установлено, что выделенные

штаммы С. fetus подвид fetus синтезируют гиалуронидазу. При этом у у 74,1% всех 30 исследованных штаммов выявлена умеренная (++), а у 11,1% штаммов низкая (+) степень активности фермента. Лишь 14,8% штаммов не обладали способностью синтезировать гиалуронидазу. При этом было установлено, что синтез гиалуронидазы носит индуцибельный характер и на фоне снижения рН среды, частота обнаружения штаммов с высокой и средней гиапуронидазной увеличивалась, а штаммов с низкой гиалуронидазной активностью либо не способных продуцировать фермент — снижалась.

Для изучение и выявления активности фибринолизина у Campylobacter fetus использовали плазму барана. Плазму разводили 1:3 и 1:5 физиологическим раствором и по одной петле 48 часовой культуры вносили в пробирки с 0,2 - 0,3 мл цитратной плазмы и тщательно размешивали. Пробирки выдерживали при 37°С в течение суток, и обязательно просматривали их дважды, через 3-4 и 18-24 часа. Учитывали как полную коагуляцию плазмы, так и образование небольших сгустков, коагулазо-позитивные штаммы, обильно продуцирующие фибринолизин, вызывают в начале образование сгустков, а к концу - сгусток их расплавляется под действием фибринолизина. На фибринолизин исследовали 25 штаммов, из которых 21 (84%) обнаружили этот фермент. Вирулентные штаммы микроба отличаются от невирулентных высокой скоростью размножения. В связи с этим вирулентные штаммы более интенсивно адсорбируют анилиновые красители, чем невирулентные. При ВУИ, бесплодии, выкидышах и анамнезе все исследованные штаммы были вирулентным в тесте поглощения красителя Романовского-Гимзы. Количество вирулентных штаммов, выделенных при ХФПН, гестозах и мертворождениях составило, соответственно, 88±3,0%, 95±2,0%, 90,9±2,6%. Только при нормальных родах процент вирулентных штаммов составил 66,7±4,3%.

Из сводной гистограммы, где представлены все исследованные признаки, видно, что выделенные штаммы С. fetus подвид fetus обладают свойствами, которые определяют их патогенную значимость (рис. 8). Более 60% штаммов

обладают всеми исследованными патогенными признаками.

Рис.8. Частота встречаемости плазмидозависимых факторов патогенноети выделенных изолятов С. fetus подв на fetus

Нозология

а Адгезия ■ =buCpnHOiV3HH □ Гиалуронадаза в Усто*мвость к гизоциму И Вирулентность

Таким образом, из полученных данных видно, что С. fetus синтезирует агрессивные и защитно-адаптивные ферменты, которые позволяют внекишечным кампилобактерам проникать в ткани и органы, адаптироваться к условиям макроорганизма и противостоять защитным механизмам хозяина. Данные наших исследований позволяют нам причислят С. fetus подвид fetus к числу этиологически значимых в развитии различных акушерско-гинекологических патологий.

Чувствительность выделенных штаммов С. fetus подвид fetus к антибактериальным препаратам

Мы исследовали диско-диффузионным методом чувствительность 50 выделенных изолятов С. fetus подвид fetus к антьибактериальным препаратам. Большинство штаммов (93,4±2,3% и 91,7±2,7%) были чувствительны к нифулоксазиду и цефтриаксону соответственно. Также значительное число штаммов было чувствительно к джозамицину, ампицилину, амоксицилину и пипрофлоксацину — от 84,4±3,3% до 90,1 ±2,7% (рис. 9).

Рис. 9. Чувствительность выделенных изолятов С. fel us подвид fetus к различным антибактериальным препаратам

Ш Чувствиттельнность Я Резистентность

Мы отметили высокую устойчивость к тетрациклину и эритромицину (35,5±4,4% и 57,0±4,5% соответственно). Наиболее устойчивыми бактерии были в отношении цефозолина (92,9±3,4%). Число изолятов, устойчивых к метронидазолу, составило 40,5±4,5%.

Разработка новой схемы диагностики С. fetus подвид fetus при акугаерско-гинекологических заболеваниях

Метод разработан на основе известного способа выделения и идентификации С. fetus из биоптата от разных животных и человека [Hunt et al., 1998]. Предлагаемая схема дает возможность более быстро выделить и идентифицировать С. fetus подвид fetus при акушерско-гинекологических патологиях. Мы использовали модифицированную среду ГКАА при первичном посеве. В дальнейшем после 48 часов проводили изучение каталазной, оксидазной и гемолитической активностей, способность к адгезии, микроскогтирование методом раздавленной капли.

Применение модифицированной среды ГКАА позволило не только сохранить высокую скорость роста подавляющего большинства тестируемых штаммов (что отличает КАА, применяемый при выделении кампилобактеров), но и дифференцировать С. fetus подвид fetus и С. fetus подвид venerealis уже на первом этапе культивирования. Таким образом, мы исключили второй посев на КАГ, и необходимость в дополнительных тестах для определения подвида исчезла,

сократив при этом время выделения и идентификации на 48 часов. Было исследовано 50 штаммов, 100% из которых показали хороший рост на КАА. При высеве исследуемых штаммов на ГКАА 94% из них также показали высокую скорость роста, как и на КАА. Два штамма оказались чувствительны к глицину, что означает их принадлежность к С. fetus подвид venerealis (таб. 2). Таким образом все последующие тесты мы проводили с интересующим нас подвидом/е/г«.

Таблица 2

Рост выделенных штаммов С. fetus подвид fetus на ГКАА

Число тест штаммов (КАА) Число выросшие на ГКАА изолятов, % Число изолятов чувствительных к глицину, %

50(100%) 48 (94%) 2 (6%)

Таким образом, 94% штаммов выделенных при акушерско-гинекологических патологиях оказались устойчивыми к глицину и принадлежали к С. fetus подвид fetus, но выделялись и чувствительны к глицину С. fetus подвид venerealis. Точность нашего метода подтверждают результаты ПЦР теста (рис. 10).

Рис. 10. Обнаружение ДНК С. fetus подвид/eto: 1-8 -ДНК изолятов; М-маркер; 9-отрицательный контроль; 10- положительный контроль.

Длительное сохранение и рекультивирование выделенных штаммов С. fetus

Для сохранения культур в клинической лабораторной практике наиболее часто используют метод пересева. Однако, как показали наши исследования при таком способе сохранения штаммы С. fetus подвид fetus теряли жизнеспособность. При пересеве культур каждые 2 недели большинство из них прекратили свой рост после 4 пассажа. Только 2 культуры сохранили жизнеспособность после 5-го пересева. С каждым пассажем происходило уменьшение зоны газонного роста и размеров колоний до точечных. Параллельно с пересевами проводили анализ мазков-отпечатков, в которых с увеличением числа пассажей росло количество инволюционных кокковидных форм.

Нами был предложен и испытан новый метод сохранения выделенных клинических изолятов. Он основан на замораживании суспензии культуры в консервирующей смеси при -10°С (10% сахарозо-желатиновая среда, модифицированная нами добавлением буферно-физиологического раствора.). Так как при высеве культур после 2-х, 4-х и 6-ти недель сохранения данным методом, высеваемость штаммов составляла 100%, мы увеличили время между пассажами до 3 месяцев. Длительное сохранении данным методом исследуемых культур до 24 месяцев пассажированием через каждые 3 месяца позволило сохранить 88% штаммов (рис. 13).

120 1

i-£

Рис.13. Рекультивация С. fetus в зависимости от срока хранения в консервирующей

Срок сохранение (месяцы)

При этом в течение 6 месяцев высеваемость составляла 100%. Рекультивированные штаммы С. fetus подвид fetus мы исследовали на изменения морфологических и культурапьных свойств, а также вирулентности. Проводили сравнительный анализ свойств культур, выросших после 12 месяцев сохранения (4 пасаж) предложенным нами способом и культур после 5-го пассажа при классическом методе пересева.

Установлено, что при пересевах подвижность сохраняют менее 20% штаммов, тогда как при замораживании около 90% культур сохранило высокую подвижность. Характерная спиралевидная форма сохранилась более чем у 70% штаммов при культивировании в консервирующей смеси, и лишь у 20% при сохранении методом пересева. При сохранении новым методом более 90% выделенных культур обладали вирулентностью, при классическом методе пересева в 2 раза меньше.

Таким образом, большинство штаммов С. fetus подвид fetus сохранили характерные свойства при применении метода замораживания в консервирующей смеси. Консервирование выделяемых штаммов бактерий имеет большое значение для ретроспективного изучения их биологических свойств, для создания банка штаммов С. fetus, циркулирующих в определенных регионах, экологических нишах, и для обучающих целей. Новый метод выделения и идентификации С. fetus подвид fetus, предложенный в работе, значительно облегчает культивирование и идентификацию бактерий, выделенных из клинического материала.

выводы

1. Разработаны доступные методы транспортировки, выделения и идентификации С. fetus при акушерско-гинекологических патологиях.

2. Разработан новый метод быстрой и упрощенной идентификации С. fetus.

3. Инфицированность С. fetus прямо зависит от тяжести заболевания: чаще их выделяли при ВУИ (71%), ХФПН (63%), гестозах (58%), выкидышах (58%) и мертворождениях (51%).

4. Установлена корреляция между сроками беременности и степенью обсемененности бактерий, достигающее своего максимума в третьем триместре беременности.

5. Установлено высокая степень вирулентности (89%), сочетающаяся с высокой адгезивностью (92%), способностью к синтезу гиалуронидазы (95%) и фибринолизина (84%) у выделенных изолятов С fetus подвид fetus.

6. Выделенные изоляты проявляют чувствительность к цефтриаксону (91%), джозамицину (86%), нифулйксазиду (93%), ампициллину (85%), амоксициллину (90%) и ципрофлоксацину (84%). Большинство штаммов устойчивы к цефозолину (92%), эритромицину (43%), тетрациклину (64%) и метронидазолу (40%).

7. Предложен метод длительного сохранения выделенных бактерий (до 24 месяцев) при -10 °С в модифицированной консервирующей смеси на основе сахарозо-желатиновой среды в буферно-физиологическом растворе с последующей рекультивацией 89% штаммов.

Работы, опубликованные по теме диссертации

1. Морозова Л.Г. Метод выделения Campylobacter fetus при выявлении внутриутробной инфекции у беременных женщин / Л.Г. Морозова, Я.А. Шихама, А.А. Ибрагимова, Н.К. Минуллина, Ж.П. Федорова // Научно-практическая конференция молодых ученых КГМА, - Казань, 2007, С 99 - 101.

2. Шихама Я.А. Связь гинекологических патологий с инфицированность Campylobacter fetus subsp. fetus / Я.А. Шихама, O.K. Поздеев, А.А. Хасанов, Н.К. Минуллина, Ж.П. Федорова, Г.Н. Лапшина, А.А. Ибрагимова // окружающая среда и здоровье: материалы XV научно-практической конференции поволжского региона, ГОУ ДПО КГМА росздрава, - Казань, 2007, С 94 - 96.

3. Шихама Я.А. Этиологическая значимость Campylobacter fetus подвид fetus в инфекционных осложнениях беременности / Я.А. Шихама, И.А. Бакирова, O.K. Поздеев, А.А. Хасанов // Актуальные вопросы инфекционной патологии: материалы юбилейной научно-практической конференции КГМА, - Казань, 2007, С 94.

4. Шихама Я.А. Значение инфицирования Campylobacter fetus как причины репродуктивных потерь в обществе. « всероссийский сморт работ иностранных студентов и аспирантов вузов Российский Федерации »/ ТПУ, Томск, 2007

5. Шихама Я.А. Встречаемость вирулентных видов Campylobacter в акушерско-гинекологической практике / Я.А. Шихама, O.K. Поздеев, А.А. Ибрагимова, О.Н. Ильинская, А.А. Хасанов // IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, - Новосибирск, 2008, С 816,

6. Шихама Я.А. К изучению признаков патогенности и вирулентности у Campylobacter fetus subsp. fetus, как возбудителя патологии беременности / Я.А. Шихама, Л.Г. Морозова, А.А. Ибрагимова, Н.К. Минуллина, Ж.П. Федорова // научно-практическая конференция молодых ученых КГМА, - Казань, 2008, С 43 -44.

7. Шихама Я.А. Клинико-бактериологические параллели между различными

формами патологии беременных и кампилобактериозной инфицированностью /

Я.А. Шихама, O.K. Поздеев, Н.К. Минуллина, А.А. Ибрагимова, Г.Н. Лапшина, А.А. Хасанов, О.Н. Ильинская, М.П. Шулаева // окружающая среда и здоровье: XVI научно-практической конференции поволжского региона, ГОУ ДПО КГМА росздрава, - Казань, 2008, С 120 - 123.

8. Шихама Я.А. Патогенетическое значение ферментов патогенности кампилобактеров в акушерско-гинекологической практике / Я.А. Шихама, O.K. Поздеев, Л.Г. Морозова, Н. Осоманы, А.А. Ибрагимова, Г.Н. Лапшина // Материалы научно-практической конференции Поволжского региона « Окружающая среда и здоровье населения», - Казань, 2008, С 48 - 52.

9. Шихама Я.А. Этиологическая значимость и плазмидозависимые признаки патогенности Campylobacter fetus fetus в структуре акушерско-гинекологических инфекционных осложнений беременных / Я.А. Шихама, Г.Н. Лапшина, О.Н. Ильинская, O.K. Поздеев // Ученые записки Казанского государственного университета. - Казань, 2008. - Т!50 (2). - С 259-264.

Контакт:

E-mail sheehamajacob@yahoo.com

Отпечатано е ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф.2в7

Тел: 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51. Лицензия ПД№7-0215 от 01.11.2001 г. Выдача Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 08.10.2008г. Усл. п.л 1,6 Заказ № К-6575. Тираж 100 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шихама Якобус Ангара

СПИСОК СОКРАЩЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Фенотипические и генотипические признаки С. fetus

1.2 Современные методы диагностики и идентификации С. fetus подвид 17 fetus.

1.3 Факторы патогенности С. fetus 22 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Материалы клинического исследования

2.2 Культивирование и выделение С. fetus

2.3 Изучение характеристики и признаков патогенности С. fetus

2.4 Определение чувствительности выделенных штаммов С. fetus к 42 антибактериальным препаратам

2.5 Разработка методов сохранения выделенных изолятов С. fetus 43 подвид fetus с последующей рекультивацией

2.6 Разработка новой питательной среды для ускоренного выделения и 44 идентификации подвидов С. fetus

Статистическая обработка данных

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Частота встречаемости Campylobacter при акушерско- 47 гинекологических заболеваниях.

3.2 Чувствительность и резистентность выделенных штаммов С. fetus 64 подвид fetus к антибактериальным препаратам

3.3 Разработка новой схемы диагностики С. fetus подвид fetus при 66 акушерско-гинекологических заболеваниях

3.4 Длительное сохранение выделенных штаммов С. fetus

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Связь акушерско-гинекологических патологий с инфицированностью Campylobacter Fetus подвид Fetus"

Актуальность: В настоящее время спектр возбудителей акушерско-гинекологических патологий в значительной степени пополняется за счет представителей условно-патогенной микрофлоры, роль которых в патогенезе МВИЗ человека установлена сравнительно недавно [Bryan et al., 1993; Blaser, 1998; Grogono-Thomas et al., 2003; Kalka-Moll et al., 2005].

Среди таковых большое внимание привлекает Campylobacter fetus, так как существенно возросла частота заболеваний вызванных этой бактерии и они составляют важную медико-социальную и экономическую проблему в разных регионах земного шара [Бородин, 1999; Tremblay et al., 2000; Kalka-Moll et al., 2005]. C. fetus широко распространенная патогенная бактерия ранее считавшаяся условно патогенной [Tremblay et al., 2000; Graham, 2002].

Несмотря на то, что кампилобактер был идентифицирован John McFadyean и Stewart Stockman еще в 1909 году, его связь с патологией человека впервые установлена лишь в 1947г. Vinzent, выделением бактерии от беременных женщин, госпитализированных с лихорадкой неясного генеза [William et al1977; Чайка, 1988; Blaser et al., 1998]. Связь острой кишечной инфекции (ОКИ) человека, и кампилобактер а подтверждена только в 70-е годы [Бутцлер и соавт., 1992; Blaser et al., 1998].

В настоящее время род Campylobacter насчитывает более 14 видов и подвидов, выделенных от животных и человека, и их число постоянно растет. Уточняются потенциальные возможности этих микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний у человека. Наибольшее значение имеют С. jejuni, С. coli, С. laridis, С. fetus. Отмечено, что С. fetus, чаще поражает ослабленных интеркуррентными заболеваниями людей с развитием гематогенно-диссеминированных форм [Blaser et al., 1979; Yanagisawa, 1980].

Установлено, что внекищечной кампилобактериоз, это энзоотической болезни передающиеся человеку через пищевых продуктов и контактным путем. Распространен повсеместно и глобально, но его полному выявлению и своевременной регистрирование препятствуют сложности лабораторной 5 диагностики. Во многих странах, где широко проводится обследование на внекишечной кампилобактериозной инфекции показано, что, доля ее среди причин микробно-воспалительных инфекционных заболеваний составляет 315%. Однако в отдельных регионах внекишечном инфицированность населения кампилобактером может достигать 44-73% и превышать заболеваемость сальмонеллезами и шигеллезами, вместе взятыми [William et al., 1977; Yanagisawa, 1980; On, 2005].

Клиническое проявление внекишечного кампилобактериоза обуславливается физиологическим и иммунологическим состоянием человека. В факторы риска входят состояние женщины при беременности, низкий иммунный статус новорожденных, хронические заболевания, алкоголизм, а также условия питания, профессия, гигиена и половая активность [Hum et al., 1994; Kelly, 2001]. Широкое распространение кампилобактера является причиной от 5 до 10% всех острых диарейных болезней, во всем мире переходящих во внекишечный кампилобактериоз. В США наблюдались эпидемические вспышки кампилобактериоза, связанные с употреблением зараженной воды, молока и мясопродуктов. При вспышках, связанных с употреблением сырого молока заболеваемость кишечного кампилобактериоза достигается 60% [Bokkenheuser, 1970; Harvey et al., 1983]. Наблюдаются профессиональные заболевания лиц, постоянно контактирующих с животными [Berger et al., 1992; Hum et al., 1994; Kelly, 2001]. Также возможно заражение от человека, при инфицировании новорожденных детей (трансплацентарно или при родах). Могут происходить заражение взрослых от детей, при появлении семейных очагов, связанных с бактерионосительством. Отмечена осенне-летняя сезонность камбилобактериозных заболеваний. Давно установлено, что возбудитель попадает в организм преимущественно через желудочно кишечный тракт алиментарным путем, другие пути передачи мало принимали во внимание, хотя возможно проникновение через поврежденную кожу (контакт с животными, укусы), половой путь передачи также не исключается [Clark, 1972; Dekeyser et al, 1986; Creasy et al, 2002].

Внекишечные случаи заболеваний, вызванные С. jejuni и С. coli, регистрируются нечасто (менее 2%) [Dekeyser et al, 1986; Creasy et al,2002]. Развитие генерализованного или септического процесса чаще наблюдается у детей, первые месяцы жизни (53%), у пожилых людей (24%) и ослабленных взрослых, особенно с низким статусом иммунной системы (23%). Заболевание варьирует от транзиторной бактериемии и локализованной инфекции до фульминантного сепсиса с формированием новых очагов инфекции в разных органах [Doyle, 1981; Francioli et al, 1985; Alary, D. Nadeau, 1990]. Поэтому в диагностически сложных случаях, особенно при отсутствии адекватного ответа на проводимую терапию, целесообразно проводить бактериологические исследования с целью обнаружения кампилобактера как возможную причину заболевания в анамнезе [Tremblay et al, 2003].

Хронические формы кампилобактериоза, связанные с персистенцией кампилобактера в организме, стали все чаще описываться при иммунодепрессивных состояниях, в частности, в сочетании с факторами риска и ВИЧ-инфекцией [ Francioli et al, 1985; Blaser et al, 1988; On, 2005]. У женщин чаще поражаются половые органы, что приводит к репродуктивным осложнениям, невынашиванием беременности, выкидышам и бесплодию.

Выше сказанное требует изучения истинного значения бактерии С. fetus в области акушерства и гинекологии, а также разработки подходов к их элиминации, что может внести существенный вклад в государственную программу решения демографической проблемы. К сожалению, в настоящее время поиски кампилобактера как агента, вызывающего акушерско-гинекологические заболевания, не проводят.

Бактериологическая диагностика методам выделения возбудителя из биоматериала является «золотым стандартом» при диагностики кишечных и внекишечных кампилобактериозных инфекции. Для улучшения результатов бактериологического исследования разрабатывают селективную транспортную среду и модифицируют специальные питательные среды [Barot et al., 1984; Barrett et al., 1988; Cardarelli-Leite et al., 1996; Blaser et al., 1998; Newell et al., 2000]. Тем не менее, до сих пор в клинико-микробиологической лабораторной диагностике клиницисты и микробиологи сталкиваются с ложноположительными результатами исследовании и трудоемким получением точных результатов диагноза.

Цель: определение частоты встречаемости С. fetus подвид fetus и изучение его этиологической значимости в развитии акушерско-гинекологических патологий среди населения Республики Татарстан.

Задачи исследования: в соответствии с целью решались следующие задачи:

1. Разработать доступные методы транспортировки, выделения и идентификации С. fetus.

3. Определить частоту встречаемости и степень обсемененности С. fetus подвид fetus у пациенток с акушерско-гинеко логически ми заболеваниями, в зависимости от нозологии и сроков беременности.

4. Изучить вирулентные свойства выделенных штаммов, способность к персистенции и уровень резистентности к антибактериальным препаратам.

5. Исследовать возможность длительного сохранения выделенных штаммов С. fetus в лаборатории с последующей рекультивацией и изучением.

Научная новизна

Впервые разработан доступный метод быстрого выделения, идентификации и культивирования С. fetus подвид fetus. Подтверждена связь между акушерско-гинекологическими заболеваниями и инфицированностью С fetus подвид fetus. Впервые разработан и использован на практике глициновый кровяной агар с антибиотиками (ГКАА) — амфотерицином и ванкомицином для ускоренной идентификации подвидов С. fetus из клинического биоматериала.

Установлена корреляция между степенью обсемененности клинического биоматериала, нозологии, и сроком беременности. На поздних сроках беременности наблюдалась высокое степень обсемененности, при этом умеренная степень обсемененности была выявлена на ранней стадии беременности и при легкой стадии акушерско-гинекологического заболевания. Определена дифференциальная чувствительность Campylobacter к антибактериальным препаратам, устанавливающая отличие между внекишечных и кишечных кампилобактеров по сравнению с литературными данными.

Впервые предложена методика длительного сохранения выделенных штаммов С. fetus в консервирующей смеси при — 10°С, что позволяет рекультивацию С. fetus с первоначальными свойствами роста и патогенности.

Практическая значимость

Новые методы выделения и идентификации С. fetus подвид fetus, предложенные в работе, значительно облегчают культивирование, идентификацию и выделение патогенна из клинического материала и осуществить ускоренную, точную диагностику кампилобактериозной инфекции.

Модифицированный метод дает возможность провести ранее недоступную ускоренную диагностику и идентификацию С. fetus подвид fetus. Практическая значимость нашей работы обусловлена применением метода в акушерстве и гинекологии, с помощью которого можно идентифицировать и различить С. fetus подвид fetus от подвида venerealis, которые отличаются эпидемиологической и клинической степенью значимомсти. Решается сложный вопрос изучения патогенетических свойств сохраненных штаммов С. fetus подвид fetus с первоначальными свойствами. Работа вносит вклад в решение медико-социальных и демографических проблем.

Положения, выносимые на защиту

2. Устоновлена высокая степень вирулентности, сочетающаяся с высокой адгезивностью и способностью к синтезу гиалуронидазы, выделенных штаммов.

3. Частота встречаемости и степень обсемененности С. fetus подвид fetus зависит тяжести патологии и срока беременности.

4. Разработана методика длительного хранения выделенных изолятов С. fetus подвид fetus при -10°С в консервирующей смеси (сахарозо-желатиновой среде в буферном растворе) на срок более 12 месяцев.

Апробация материалов работы.

Основные положения диссертации доложены на XV и XVI научно-практических конференция Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2007, 2008); на научно-практической конференции молодых ученых «Казанская Государственная Медицинская Академия» (Казань 2007, 2008); на научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии» Казанского Государственного Медицинского Унивеситета (Казань 2007); на научно-практическойй конференции иностранных студентов и аспирантов Российский Федерации (Томск 2007), на XVI съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск 2008), а также на итоговых конференциях КГУ (Казань,2006 - 2008).

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Несмотря на то, что Campylobacter fetus был обнаружен John McFadyean и Steward Stockman еще в 1909 году при инфекционных абортах у домашних животных, их связь с патологией человека впервые была установлена R. Vincent лишь в 1947 году. При этом С. fetus были выделены от беременных женщин, госпитализированных с лихорадкой неясного генеза [Vinzent et al, 1950; William et al, 1977; Чайка, 1988; Blaser et al, 1998]. В тоже время способность кампилобактеров вызывать у человека острые кишечные инфекции — наиболее массовые формы кампилобактериозов — была выявлена только в 70-е годы [Butzler et al, 1973; Blaser et al, 1998]. Основными возбудителями кишечных поражений являются С. jejuni, С. coli и С. lari, внекишечных — С. fetus подвид fetus [William et al, 1977; Blaser et al, 1998]. До недавнего время считалось, что другие виды кампилобактеров, циркулирующие среди животных, не играют роли в патологии человека и их не включали в число патогенов [Hum et al., 1994; Kelly, 2001]. Недавние исследования, проведенные в Великобритании, США и других странах показали, что частота инфекций, вызванных этими видами, например, группы С. fetus, в 10 раз выше, чем считалось ранее. Эти результаты подвергли сомнению представление о роли бактерий группы С. jejuni — как основных возбудителях кампилобактериозов и адекватности методов их селективного обнаружения и идентификации [Morris, Patton, 1985; Newell et al, 2000].

В настоящее время род Campylobacter уже насчитывает более 14 видов и подвидов, выделенных от животных так и от человека, и это число постоянно растет. Уточняются потенциальные возможности этих бактерий в этиологии и патогенезе заболеваний человека. В настоящее время кампилобактериозы принято разделять на кишечные (С. jejuni, С. coli, С. lari) и внекишечные (С. fetus, С. rectus ) Поражения, вызванные С. fetus чаще наблюдают у лиц с сопутствующей патологией с последующим развитием диссеминированных форм заболевания (метаболические заболевания, кахексия, туберкулез, алкоголизм, цирроз печени, злокачественные новообразования, ВИЧ-инфекция и др.) [Hum et al, 1994; Kelly, 2001]. Внекишечные поражения связывают с прогрессированием транзиторной бактериемии, переходящим в сепсис и развитием вторичных инфекционных очагов в различных органах и тканях [Mead et al, 1999; Luber et al, 2003]. Наиболее поражения регистриют у беременных женщин и детей раннего возраста [Mead et al., 1999; Thompson et al, 2000; Luber et al, 2003, Tu et al, 2005; Bhavsar et al, 2007]. (

Ряд авторов предполагают наличие у кампилобактеров определенной тропности к различным органам и тканям [Skirrow, 2000; Bhavsar et al., 2007]. Отмечена высокая встречаемость гинекологических и сердечномышчных инфекций С. fetus. У беременных женщин отмечается трансплацентарная передача инфекции, что приводит к абортам, внутриутробному заражению детей и другим тяжелым хроническим акушерско-гинекологическим осложнениям таким, как бесплодие. У ослабленных людей или людей, входящих в группу риска, заболевание принимает септическое течение с формированием вторичных очагов инфекции в различных органах и тканях [Mead, Slutsker, 1999; Luber et al, 2003; Swati et al., 2007]. Подобное течение кампилобактериоза наблюдают на фоне цирроза печени, алкоголизма, при кахексии, а также у новорожденных и престарелых. У лиц с хорошо функционирующей иммунной системой инфицирование кампилобактерами обычно не приводит к клинически выраженными проявлениям (субклиническая форма, здоровое бактерионосительство) [Lastovica et al., 1996; Thompson et al., 2000; Tu et al., 2005]. Исследования о распространенности и клинической значимости С. fetus в человеческом сообществе показывают, что кампилобактериоз имеет большую значимость в медицине XXI века. Существует уже достаточно данных о том, что С. fetus вызывает сердечную недостаточность и ассоциирован с миокардитом, миоперикардитом и другими внекишечными осложнениями [Francioli et al., 1985; Thompson et al., 2000; Tu et al., 2005].

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шихама Якобус Ангара

выводы

2. Разработан новый метод быстрой и упрощенной идентификации С. fetus.

4. Установлена корреляция между сроками беременности и степенью обсемененности бактериями, достигающее своего максимума в третьем триместре беременности.

6. Выделенные изоляты С. fetus подвидам.? проявляют чувствительность к цефтриаксону (91%), джозамицину (86%), нифулоксазиду (93%), ампициллину (85%), амоксициллину (90%) и ципрофлоксацину (84%). Большинство штаммов устойчивы к цефозолину (92%), эритромицину (43%), тетрациклину (64%) и метронидазолу (40%).

7. Предложен метод длительного сохранения выделенных бактерий (до 24 месяцев) при -10°С в модифицированной консервирующей смеси на основе сахарозо-желатиновой среды в буферно-физиологическом растворе с последующей рекультивацией 89% штаммов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шихама Якобус Ангара, Казань

1. Бородин, Ю.И. Кампилобактериоз в патогенезе заболеваний женской половой системы Текст./ Ю.И.Бородин, И.К. Минуллин, Н. К. Минуллина // Казанский медицинский журнал.-1999.- № 6. Т 83.-С.439-440.

2. Бутцлер, Ж.П. Кампилобактериоз Текст./ Ж.П. Бутцлер, Л.Б. Хазенсон. М.: Медицина, 1990. - 188 с.

3. Бухарин, О.В. Механизмы выживания бактерий Текст./ О.В. Бухарин, А.Л. Гинцбург, Ю.М. Романова, Г.И. Эль-Регистан М.: Медицина; 2005, - 366 с.

4. Гагаро, М.А. Коррекция интенсивности свободнорадикальных процессов приэкспериментальной тромбопластинемии Текст./ В.Г. Соловьев, В.В. Галкин, М.А.Гагаро, A.B. Соловьева // Медицинская наука и образование Урала. 2004. -№ 3-4. - С. 188-189.

5. Голиков, A.B. Вибриоз животных и птицы Текст./ A.B. Голиков. М., 1978.- 110 с.

6. Григорьева, Л.В. Использование красок для выявления факторов патогенности эшерихий и сальмонелл Текст./ Л.В. Григорьева, Г.И. Корчак, Л.А. Малахова // Лаб. дело. 1992. - № 2. - С.57-59.

7. Егоров, А.М. Микроэволюция патогена в течение инфекционного процесса Текст./ А. М. Егоров, Ю. Созыкин // Антибиотики и химиотерапия 2000. - №1. - С.3-4.

8. Жебрун, А.Б. Диагностика профилактика и лечение заболеваний ассоциированных с Helicobacter pylori -инфекцией (Пособие для врачей) Текст./ А.Б. Жебрун, В.А. Александрова, Л.Б. Гончарова, Е.И. Ткаченко. Санкт Петерсбург. - 2002.

9. Каральник, Б.Г. Стандартизация определения фимбрий (адгезинов) Citrobacter Текст./ Б.Г. Каральник, Ш.И. Сарбасова, Т.Д. Укбаева // Лаб. дело. 1990. - № 2. - С.46-49.

10. Ю.Минуллина, Н.К. Роль кампилобактерной инфекции в возникновении женского бесплодия Текст./ Н. К. Минуллина, П.В. Мочалов // Казанский медицинский журнал.-2002 № 5.-Т 83.-С.380-381.

11. П.Поздеев, О.К. Медицинская микробиология Текст./ О. К. Поздеев; Под ред.акад. РАМН В. И. Покровского. М.: ГЭОТАР-мед, 2001. - 765 с.

12. Чайка, Н.А. Кампилобактериоз Текст./ Н. А.Чайка, JI. Б. Хазенсон, Ж. П. Бутцлер.- М.: Медицина, 1988 - 350 с.

13. Черкасский, Б.Л. Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза / Б.Л. Черкасский, Н.С. Воротынцева // М.: ЦНИИ эпидемиологии МЗ СССР, 1991.

14. Aarestrup, F.M. The effects of antibiotic usage in food animals on the development of antimicrobial resistance of importance for humans in Campylobacter and Escherichia coli. / F. M. Aarestrup, and H. C. Wegener, // Microbes Infect., 1999. 1:639-644.

15. Acha, P. Zoonoses and communicable diseases common to man and animals Текст./ P. Acha, B. Szyfres //. Pan American Health Organization, Washington, DC. 1987. - P. 49-54.

16. Afset, J.E. Erythromycin and ciprofloxacin resistant Campylobacter jejuni Текст./ J. E. Afset, and J. A. Maeland, // Tidsskr. Nor. Laegeforen., 2001. — Vol.121.-P.2152-2154.

17. Alary, M. An outbreak of Campylobacter enteritis associated with a community water supply Текст./ M. Alary, and D. Nadeau, // Can. J. Public Health, 1990.- Vol.81. -P.268- 271.

18. Alfredson, D.A. Sequence analysis of a cryptic plasmid pCJ419 from Campylobacter jejuni and construction of an Escherichia coli-Campylobacter shuttle vector. Текст./ D. A. Alfredson, and V. Korolik. // Plasmid 2003. - 50. - P.152-160.

19. Allen, D.G. Handbook of veterinary drugs Текст./ D. G. Allen, J. K. Pringle, D. A. Smith //. Lippincott-Raven, Philadelphia, PA. 1998. - Vol. 421.-P. 552.

20. Alios, B. Campylobacter jejuni strains from patients with Guillain-Barre syndrome Текст./ В. M.Alios, F. T.Lippy, A. Carlsen, R. G.Washburn, and M. J. В laser // Emerging Infectious Diseases. 1998. - Vol.4. - P.263-268.

21. Altekruse, S. Campylobacter jejuni-an emerging foodborne pathogen Текст./ S. F.Altekruse, N. J. Stern, P. I.Fields, and D. L. Swerdlow // Emerg. Infect. Dis., 1999. - Vol.5. - P.28- 35.

22. Ames, G.F.L. Resolution of bacterial proteins by polyacrylamide gel electrophoresis on slabs Текст./ G. F. L. Ames // J. Biol. Chem. 1974. — Vol.249.-P.634-644.

23. Anderson, Y. Waterborne Campylobacter in Sweden the cost of an outbreak Текст./ Y. Anderson // Water Sci. Technol., - 1997. - Vol. 35. P.ll-14.

24. Anderson, Y. Outbreak of Campylobacter enteritis associated with cross-contamination of food—Oklahoma, 1996 / Y. Anderson, B. Dejong, and A. Studahl //. MMWR Morb Mortal. Wkly. Rep., 1998. - Vol.47. - P. 129131.

25. Anonymous. Bovine genital campylobacteriosis Текст./ Anonymous // In OIE (World Organisation for Animal Health) Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines, 4th Ed. OIE, Paris, 2008. - P.346-358.i 90

26. Anonymous. Bovine genital campylobacteriosis Текст./ Anonymous // In OIE (World Organisation for Animal Health) Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 5th Ed. OIE, Paris, 2004. - P.439-450.

27. Arvanitidou, M. The occurence of Salmonella, Campylobacter and Yersinia spp. in river and lake waters Текст./ M. Arvanitidou, G. A. Stathopoulos, Т. C. Constantinidis, and V. Katsouyannopoulos // Microbiol. Res., 1995. - Vol.150.-P.153-158.

28. Atabay, H.I. The prevalence of Campylobacters and Arcobacters in broiler chickens Текст./ H.I. Atabay, and J. E. L.Corry, //. J. Appl. Microbiol; -1997.-Vol. 83. P.619-626.

29. AusubeI, F.M. Current protocols in molecular biology Текст./ F.M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. A. Smith, J. G. Seidman, and K. Struhl //John Wiley & Sons, New York, NY. 1987.

30. Bacon, D.J. Involvement of a plasmid in virulence of Campylobacter jejuni 81-176 Текст./ D. J. Bacon, R. A. Alm, D. H. Burr, L. Hu, D. J. Kopecko, C. P. Ewing, T.J. Trust and P. Guerry // Infect Immun, 2000. - Vol. 68. -P.4384-90.

31. Baig, B.H. Utilization of exogenous siderophores by Campylobacter species Текст./ В. H. Baig, I. К. Wachsmuth, and G. К. Morris. // J. Clin. Microbiol. 1986.-Vol.23. - P.431-433.

32. Barker, J. Survival of Salmonella in bathrooms and toilets in domestic homes following salmonellosis Текст./ J. Barker, and S. F. Bloomfield, // J. Appl. Microbiol., 2000. - Vol.89. -P.137-144.

33. Barot, M.S. Systematic investigation of enrichment media for wildtype Campylobacter jejuni strains Текст./ M.S. Barot, and V.D. Bokkenheuser, // J. Clin. Microbiol., 1984.- Vol. 20. - P.77-80.

34. Barrett, T.J. Differentiation of Campylobacter species using phenotypic characterization Текст./ T.J. Barrett, С. M. Patton, and G. K. Morris // Lab. Med. 1988.-P.19:96-102.

35. BaserisaIehi, M. Effect of heat and chemical preservatives on surival of Campylobacter in food products Текст./ M. Baserisalehi, N. Bahador, B. P. Kapadnis // Res J Microbiol, 2006. - Vol.1. P. 512 -16.

36. Berger, P.S. Control of biofilm growth in drinking water distribution systems Текст./ P.S. Berger, M. W. LeChevallier, and D. J. Reasoner // U.S. Environmental Protection Agency, Washington, D. C. 1992.

37. Berndtson, E. Campylobacter incidence on a chicken farm and the spread of Campylobacter during the slaughter process Текст./ E. Berndtson, M. L. Danielsson-Tham, and A. Engvall, // Int. J. Food Microbiol., 1996. — Vol.32. -P.35-47.

38. Beuchat, L.R. Efficacy of media and methods for detecting and enumerating Campylobacter jejuni in refrigerated chicken meat Текст./ L.R.Beuchat // Appl Environ Microbiol, 1985. - Vol. 50. - P. 934-39.

39. BIaser, M. Epidemiology of Campylobacter jejuni infections Текст./ M. Blaser, D. N. Taylor, and R. A. Feldman // Epidemiol. 1983. - Vol. 5. -P.157-176.

40. Blaser, M.J. Campylobacter enteritis Текст./ MJ. Blaser, and L.B. Reller //N. Engl. J. Med. 1981.-Vol.305.-P. 1444-1452.

41. BIaser, M.J. Campylobacter enteritis associated with canine infection Текст./ Blaser M. J., J. Cravens, B. W. Powers, and W.-L. L. Wang // Lancet ii: 1978. -P.979-981.

42. Blaser, M.J. Campylobacter enteritis: Clinical and epidemiological features Текст./ M. J. Blaser, I. D. Berkowitz, F. M. LaForce, J. Cravens, L. B. Reller, and W.-L. L. Wang // Ann. Intern. Med. 1979. - Vol.91. - P. 179185.

43. Blaser, M.J. Campylobacter fetus—emerging infection and model system for bacterial pathogenesis at mucosal surfaces Текст./ M.J. Blaser, //. Clin. Infect. Dis. 1998. - 27. - P.256-258.

44. Blaser, M.J. Epidemiologic and clinical features of Campylobacter jejuni infections Текст./ M. J. Blaser // J. Infect. Dis., -.1997. Vol.176 (2). -P.103-105.

45. BIaser, M.J. Experimental Campylobacter jejuni infection of adult mice Текст./ M. J. В laser, D. J. Duncan, G. H. Warren, and W.-L. L. Wang // Infect. Immun. 1983.-Vol.39.-P.908-916.

46. Blaser, M.J. High-frequency S-layer protein variation in Campylobacter fetus revealed by sapA mutagenesis Текст./ M. J. Blaser, E. Wang, M. K. Tummuru, R. Washburn, S. Fujimoto, and A. Labigne // Mol. Microbiol. -1994. Vol.14. - P.453^162.

47. Blaser, M.J. Survival of Campylobacter fetus subsp. jejuni in biological milieus Текст./ M.J. Blaser, H. L. Hardesty, B. Powers, W. L. Wang I I J Clin Microbiol, 1980. - Vol. 27. - P. 309-13.

48. BIaser, M.J. Susceptibility of Campylobacter isolates to the bactericidal activity of human serum Текст./ M. J. Blaser, P. F. Smith, and P. F. Kohler // J. Infect. Dis. 1985. - Vol.151. -P.227-235.

49. Bokkenheuser V. D. Campylobacteriosis: A foodborne disease Текст./ Bokkenheuser V. D. and G. D. Mosenthal // J. Food Safety 1981. - Vol.3. -P.127.

50. Bokkenheuser, V.D. Detection of enteric campylobacteriosis in children Текст./ V.D. Bokkenheuser, N.J. Richardson, J.H. Bryner, D.J. Roux, A.B. Schutte, H.J. Koornhof, I. Freiman and E. Hartman // J. Clin. Microbiol. -1979.-Vol.9.-P.227.

51. Bolton, F.J. A most probable number method for estimating small numbers of Campylobacters in water Текст./ FJ. Bolton, P.M. Hinchcliffe, D. Coates, and L. Robertson // J. Hyg., 1982. - vol.89. - P.185-190.

52. Bolton, F.J. A study of thermophilic Campylobacters in a river system Текст./ F. J. Bolton, D.vCoates, D. N. Hutchinson, and A. F. Godfree, // J. Appl. Bacterid., 1987. - Vol.62. -P.167-176.

53. Bowler, I.C. Quinolone resistance and Campylobacter species Текст./ I.C. Bowler, M. Connor, M.P. Lessing, and D. Day, // J. Antimicrob. Chemother., 1996. - Vol.38. - P.315.

54. Boyd, A.C. Characterization of the ColEl mobilization region and its protein products Текст./ A. C. Boyd, J. A. Archer, and D. J. Sherratt // Mol. Gen. Genet. 1989. - Vol.217. - P. 488-498.

55. Bradbury, W.C. Occurrence of plasmids and antibiotic resistance among Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolated from healthy and diarrheic animals Текст./ W.C. Bradbury, and D.L. Munroe // J. Clin. Microbiol., 1985. - Vol.22. - P.339-346.

56. Brooks, B.W. Monoclonal antibodies specific for Campylobacter fetus lipopolysaccharides / B.W. Brooks, R.H. Robertson, C.L. Lutze-Wallace & W. Pfahler // Vet. Microbiol., 2002. - Vol.87. - P. 37-49

57. Brouwer, R. An explosive outbreak of Campylobacter enteritis in soldiers Текст./ R. Brouwer, M.J.A. Mertens, Т.Н. Siem and J. Katchaki // Antonie van Leeuwenhoek 1979. - Vol.45. - P.517.

58. Brown, J.C. Quinolone resistance Текст./ J.C. Brown, and S. G. B. Amyes // In N. Woodford and A. P. Johnson (ed.), Molecular bacteriology: protocols and clinical applications, Humana Press, Totowa, NJ. 1998. — Vol. 15. P.617-639.

59. Brown, P. An outbreak of food-borne Campylobacter jejuni infection and the possible role of cross-contamination Текст./ P. Brown, D. Kidd, T. Riordan, and R. A. Barrell, // J. Infect., 1988. - Vol.17. - P.171-176.

60. Bruce, D. Campylobacter enteritis / D. Bruce, W. Zochowski and I. R. Ferguson// . Brit. Med. J. 1977. - Vol.2. - P. 1219.

61. Bruce, J.P. Chemotactic response to formate by Campylobacter concisus and its potential role in gingival colonization Текст./ J.P. Bruce, J.B. Ronald // Infec Immun, 1986. - Vol.52. - P. 378-83.

62. Bruton, W.A.T. Campylobacter associated diarrhoea in Edinburgh Текст./ W.A.T. Bruton and D. Heggie // Brit. Med. J. 1977. - Vol.2. - P.956.

63. Bryan, F.l. Health Risks and Consequences of Salmonella and Campylobacter jejuni in Raw Poultry Текст./ F.l. Bryan, and M.P. Doyle, // J. Food Prot. 1995. - Vol.58. - P.326-344.

64. Bryner, J.H. Studies of vibrios from gallbladder of market sheep and cattle Текст./ J.H. Bryner, P.A. O'Berry, P.C. Estes and J.W. Foley // Amer. J. Vet. Res. 1972. - Vol.33. - P.1439-1444.

65. Bullen, M. Iron and infection. In Iron in Biochemistry and Medicine Текст./ M. Bullen, A. Jacobs and M. Worwood // editors. Academic Press, Inc., New York. 1974. - P. 649-679.

66. Butzler, J.P. Related vibrio in stools Текст./ J.P. Butzler, P. DeKeyser, M. Detrain and F. Dehaen // J. Pediat. 1973. - Vol.82. - P.493.

67. Calver, G.A. Iron as a replacement for mucin in the establishment of meningococcal infection in mice Текст./ G.A. Calver, C.P. Henney, and G. Lavergne // Can. J. Microbiol. 1976. - Vol.22. - P.832-838.

68. Cappelier, J.M. Double staining (CTC-DAPI) for detection and enumeration of viable but non-culturable CampyloX Текст./ J.M. Cappelier, B. Lazaro, A. Rossero, A. Fernandez- Astorga, and M. Federighi, // Food Technol. 1997. - Vol.36(3). - P.89.

69. Chang, W. Transduction and mutation to glycinetolerance in Vibrio fetus Текст./ W. Chang and J.E. Ogg. // Am. J. Vet. Res. 1971. - Vol.32. -P.649-653.

70. Chedid, L. Failure ofendotoxin to increase nonspecific resistance to infection of lipopolysaccharide low-responder mice Текст./ L. Chedid, M. Parant, C. Damais, F. Parant, D. Juy, and A. Galelli // Infect. Immun. 1975.- Vol.13. -P.722-727.

71. Clark, B.L. A method for maintaining the viability of Vibrio fetus var. venerealis in samples of preputial secretions collected from carrier bulls Текст./ B.L. Clark, J.H. Dufty, M.J. Monsbourgh // Aust Vet J 1972. -Vol.48. - P.462^464.

72. Clark, B.L. Isolation of Campylobacter fetus from bulls Текст./ B.L. Clark, J.H. Dufty // Aust Vet J 1978. - Vol.54. - P.262-263.

73. Cools, I. Solid phase cytometry as a tool to detect viable but non-culturable cells of Campylobacter jejuni Текст./1. Cools, E. D'Haese, M. Uyttendaele, E. Storms, H.J. Nelis, J. Debevere // J Microb Meth, 2005. - Vol. 63. - P. 107-14.

74. Dekeyser, P.J. Bovine genital campylobacteriosis Текст./ P. J. Dekeyser // In: Current therapy in theriogenology, ed. Morrow DA, WB Saunders, Philadelphia, PA. 1986. - P. 263-266.

75. Deshpande, L.M. Plasmid mediated silver resistance in Acinetobacter baumannii Текст./ L.M. Deshpande, B. A. Chopade // BioMetals, 1994. -Vol. 7. - P.49-56.

76. Devlin, H.R. Campylobacter fetus subsp. fetus in homosexual males Текст./ H.R. Devlin, and L. Mclntyre // J. Clin. Microbiol. 1983. -Vol.18.-P. 999-1000.

77. DoIman, C.E. Epidemiology to meat-borne disease Текст./ C.E. Dolman // In Meat hygiene. WHO Monogr. 33, WHO, Geneva, Switzerland. 1957.

78. Doyle, M.P. Campylobacter fetus subsp, jejuni: An old pathogen of new concern Текст./ M.P. Doyle // J. Food Prot. 1981. - Vol.44. - P.480.

79. Doyle, M.P. Response of Campylobacter jejuni to sodium chloride Текст./ M. P. Doyle and D. J. Roman // Appl. Environ. Microbiol. 1982b. -Vol.43.-P.561.

80. Doyle, M.P. Sensitivity of Campylobacter jejuni to drying Текст./ M.P. Doyle, and D.J. Roman // J. Food Prot. 1982a. - Vol.45. P.507.

81. Dufty, J.H. Diagnosis of vibriosis in the bull Текст./ J.H. Duflty // Aust. vet. J., 1967. - Vol.43 (10). - P. 433-437.

82. Dworkin, J. Nested DNA inversion of Campylobacter fetus S-layer genes is recA dependent Текст./ J. Dworkin, O. L. Shedd, and M. J. Blaser // J. Bacteriol. 1997. - Vol.179. - P.7523-7529.

83. Edwards, R.A. Increasing DNA transfer efficiency by temporary inactivation of host restriction Текст./ R.A. Edwards, R.A. Helm and S.R. Maloy //. BioTechniques 1999. - Vol.26. - P. 892-900.

84. Englen, M.D. Evaluation of a commercial diagnostic PCR for the identification of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli Текст./ M.D. Englen and P.J. Fedorka-Cray // Lett. Appl. Microbiol. 2002. -Vol.35.-P.353-356.

85. Eubanks, E.R. Virulence factors involved in the intraperitoneal infection of adult mice with Vibrio cholerae. Текст./ E.R. Eubanks, M. N. Guentzl, and L. J. Berry // Infect. Immun. 1976. - Vol.13. - P.457-463.

86. Fauchere, J.L. Association with Hela cells of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolated from human feces Текст./ J.L. Fauchere, A. Rosenau, M. Veron, E.N. Moyen, S. Richard, A. Pfister // Infec Immun, -1986.-Vol. 54.-P. 283-87.

87. Fernandez, H. Isolation of thermotolerant species of Campylobacter from commercial chicken livers Текст./ H. Fernandez and V. Pison // Int. J. Food Microbiol., 1996. - Vol.29. - P.75-80.

88. Fernie, D.S. The isolation and nature of Campylobacters (microaerophilic vibrios) from laboratory and wild rodents /D.S. Fernie, and R.W. A. Park//J. Gen. Microbiol. 1977. - Vol.10. -P.325-329.

89. Florent, A. Les deux vibriosis genitales: la vibriose due a V. fetus venerealis et la vibriose d' origine intestinale due a V. fetus intestinalis. Meded Текст./ A. Florent, // Veeartesenijsch. Rijksuniv. Gent 1959. — Vol.3.-P.l-60.

90. Francia, M.V. A classification scheme for mobilization regions of bacterial plasmids Текст./ M.V. Francia, A. Varsaki, M.P. Garcilla'n-Barcia, A. Latorre, C. Drainas, and F. de la Cruz //. FEMS Microbiol. Rev. -2004. Vol.28. - P.79-100.

91. Francia, M.V. Amplification of the tetracycline resistance determinant of pAMl in Enterococcus faecalis requires a sitespecific recombination event involving relaxase / M. V. Francia and D. B. Clewell // J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184. -P.5187-5193.

92. Francioli, P. Campylobacter fetus subspecies fetus bacteremia / P. Francioli, J. Herzstein, J.-P. Grob, J.-J. Vallotton, G. Mombelli, and M. P. Glauser // Arch. Intern. Med. 1985. - Vol. 145. - P.289-292.

93. Fry, B.N. The gale gene of Campylobacter jejuni is involved in lipopolysaccharide synthesis and virulence Текст./ B.N. Fry, Shi Feng, Yuen-Yuen Chen, G.N. Diane, J.C. Peter, K. Victoria // Infec Immun, -2000. Vol. 68. - P. 2594-3601.

94. Garcia, M.M. Campylobacters important in veterinary medicine Текст./ M.M. Garcia, M.D. Eaglesome & C. Rigby // Vet. Bull., 1983. -Vol.53 (9), - P.793-818.

95. Gaudreau, C. Antimicrobial Resistance of Campylobacter jejuni subsp. jejuni Strains Isolated from Humans in 1998 to 2001 in Montréal, Canada Текст./ С. Gaudreau, H. Gilbert // Antimicro Agent Chemo, 2003. -Vol. 47.-P. 2027-29

96. George, H.A. Improved Media for Growth and Aerotolerance of Campylobacter fetus Текст./ H.A. George, P.S. Hoffman, R.M. Ssmibert // Applied and Enviromental Microbiology, July 1978. - P. 36-41.

97. Glode, L.M. Resistance of macrophages from C3H/HeJ mice to the in vitro cytotoxic effects of endotoxin Текст./ L.M. Glode, A. Jacques, S.E. Mergenhagen, and D.L. Rosenstreich // J. Immunol. 1977. - Vol.119. -P. 162-166.

98. Glode, L.M. Significant contribution of spleen cells in mediating the lethal effects of endotoxin in vivo Текст./ L.M. Glode, S.E. Mergenhagen, and D.L. Rosenstreich // Infect. Immun. 1976. - Vol.14. - P.626-630.

99. Graham, L.L. Campylobacter fetus adheres to and enters INT 407 cells Текст./ L.L. Graham // Can J Microbiol, 2002. - Vol. 48. - P. 9951007.

100. Grogono-Thomas, R. Roles of the surface layer proteins of Campylobacter fetus subsp. fetus in ovine abortion Текст./ R. GrogonoThomas, J. Dworkin, M J. Blaser, and D.G. Newell // Infect. Immun. 2000. -Vol.68.-P.1687-1691.

101. Guerrant, R.L. Campylobacterosis in man: pathogenic mechanisms and review of 91 blood stream infections Текст./ R.L. Guerrant, G.R. Lahita, W.C. Winn Jr., and R.B. Roberts // Am. J. Med. 1978. - Vol.65. -P.584-592.

102. Guerry, P. Systems of experimental genetics for Campylobacter species Текст./ P. Guerry, R. Yao, R.A. Aim, D.H. Burr, and T.J. Trust // Methods Enzymol. 1994. - Vol.235. - P. 474-481.

103. Hagan, J.R. Diagnostic techniques in avian vibrionic hepatitis / J.R. Hagan // Avian Dis. 1964. - Vol.8. - P.428-437.

104. Harvey, S.M. Probable Campylobacter fetus subsp. fetus gastroenteritis / S.M. Harvey, and J.R. Greenwood // J. Clin. Microbiol. -1983.-Vol.18.-P.1278-1279.

105. Harvey, S.M. Relationship among catalase-positive Campylobacters determined by deoxyribonucleic acid-deoxyribonucleic acid hybridization

106. Текст./ S.M. Harvey, and J.R. Greenwood // Int. J. Syst. Bacterid. 1983. -Vol.33.-P.275-284.

107. Hofreuter, D. Characterization of two cryptic Helicobacter pylori plasmids: a putative source for horizontal gene transfer and gene shuffling Текст./ D. Hofreuter, and R. Haas // J. Bacterid. 2002. - Vol.184. -P.2755—2766.

108. Hughdahl, M.B. Chemotactic behavior of Campylobacter jejuni / M.B Hughdahl, T.B. John, P.D. Michael // Infec Immun, 1988. - Vol. 56. -P. 1560-66.

109. Hum, S. Evaluation of a PCR assay for identification and differentiation of Campylobacter fetus subspecies Текст./ S. Hum, K. Quinn, J. Brunner & S.L.W. On // Aust. vet. J., - 1997. - Vol.75 (11). -P.827-831.

110. Hum, S. Bovine venereal campylobacteriosis Текст./ S. Hum // In Campylobacters, Helicobacters and related organisms (D.G. Newell, J.M. Ketley & R.A. Feldman, eds). Plenum Press, New York, 1996. - P.355-358.

111. Hum, S. Evaluation of cultural methods and selective media for the isolation of Campylobacter fetus subsp. venerealis from cattle Текст./ S. Hum, J. Brunner, A. Mclnnes, et al.: Vet. J. // 1994. -Vol. 71. - P. 184186.

112. Hunt, J.M. Isolation of Campylobacter Species / J.M. Hunt, Carlos Abeyta and Tony Tran // Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition, Revision A, 1998 Chapter 7.

113. Humphrey, T.J. Prevalence and Subtypes of Ciprofloxacin-Resistant Campylobacter spp. in Commercial Poultry Flocks before, during, and after

114. Treatment with Fluoroquinolones Текст./ T.J. Humphrey, F. J0rgensen, J.A. Frost, H.Wadda, G. Domingue, N.C. Elviss, D.J. Griggs, J.V. Piddock. // Antimicro Agent Chemo, 2005. - Vol. 49. - P. 690-98.

115. In, P. Gerhardt. Methods for general and melecular bacteriology Текст./ P. Gerhardt In, R. G. E. Murray, W. A. Wood, and N. R. Krieg // ASM Press, Washington, DC.

116. Jones, F.S. Vibrionic enteritis in calves Текст./ F.S. Jones, and R.B. Little // J. Exp. Med. 1931. - Vol.53. - P.845-851.

117. Kalka-MoII, W.M. Genetic manipulation of Campylobacter fetus 4629 / W.M. Kalka-Moll, M.A. Van Bergen, G. Plum, and M. Kronke. // Clin. Microbiol. Infect. 2007. - VOL. 73 (11). - P.341-342.

118. Kalka-Moll, W.M. The need to differentiate Campylobacter fetus subspecies isolated from humans Текст./ W.M. Kalka-Moll, M.A. Van Bergen, G. Plum, M. Kronke, and J.A. Wagenaar // Clin. Microbiol. Infect. -2005.-Vol.11.-P.341-342.

119. Kapperud, G. Epidemiological investigation of risk factors for Campylobacter colonization in Norwegian broiler flocks Текст./ G. Kapperud, E. Skjerve, L. Vik, // Epidemiol. Infect., 1993. - Vol.111. -P.243-255.

120. Kazmi, S.U. Animal passed, virulence-enhanced Campylobacter jejuni causes enteritis in neonatal mice Текст./ S.U. Kazmi, B.S. Roberson, and N.J. Stern // Curr. Microbiol. 1984. - Vol. 1 (1). - P.159-164.

121. Kelly, D.J. The physiology and metabolism of Campylobacter jejuni and Helicobacter pylori / D.J. Kelly // J Appl Microbiol, 2001. - Vol. 90. -P. 16-24.

122. Kienesberger, S. Development of Experimental Genetic Tools for Campylobacter fetus Текст./ S. Kienesberger, G. Gorkiewicz, M.M. Joainig, S.R. Scheicher, E. Leitner, and E.L. Zechner // Applied and Enviromental Microbiology. 2007. -P. 4619^630.

123. Knill, M. Environmental isolation of heat-tolerant Campylobacter in the Southampton area Текст./ M. Knill, W.G. Suckling, and A.D. Pearson. // Lancet 1978. - Vol. 2. - P.1002-1003.

124. Kochan, I. Effects of injected iron and siderophores on infections in normal and immune mice Текст./ I. Kochan, J. Wasynezuk, and M.A. McCabe // Infect. Immun. 1978. - Vol.22. - P.560-567.

125. Kochan, I. The role of iron in bacterial infections with special consideration of host-tubercle bacillus interaction Текст./1. Kochan // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1973. - Vol.60. -P.l-30.

126. Kodaka, H. Practical procedure for demonstrating bacterial flagella Текст./ H. Kodaka, A.Y. Armfield, G.L. Lombard, and V.R. Dowell Jr. // J. Clin. Microbiol. 1982. - Vol.16. - P.948-952.

127. Kortright, F.H. The ducks, geese, and swans of North America Текст./ F.H. Kortright //. American Wildlife Institute, Washington, D.C. -1943.

128. Kru'ger, R. Participating elements in the replication of iteron-containing plasmids, / R. Kru'ger, S.A. Rakowski, and M. Filutowicz //In B.

129. E. Funnell and G.J. Phillips (ed.), Plasmid biology. ASM Press, Washington, DC.-2004.-P. 25-45.

130. Labigne-Roussel, A. Gene disruption and replacement as a feasible approach for mutagenesis of Campylobacter jejuni Текст./ A. Labigne-Roussel, P. Courcoux, and L. Tompkins // J. Bacteriol. 1988. - 170. -P. 1704-1708.

131. Lander, K.P. The application of a transport and enrichment medium to the diagnosis of Campylobacter fetus infections in bulls Текст./ Lander K.P. IIBr. vet. J., - 1990. - Vol.146 (4). - P.334-340.

132. Lander, K.P. The development of a transport and enrichment medium for Campylobacter fetus Текст./K.P. Lander //. Br Vet J 1990. -Vol.146.-P.327-333.

133. Lankford, C.E. Bacterial assimilation of iron Текст./ C.E. Lankford // Crit. Rev. Microbiol. 1973. - Vol.2. - P.273-331.

134. Lastovica, A.J. Prevalence and distribution of Campylobacter spp. in the diarrhoeic stools and blood cultures of pediatric patients Текст./ A.J. Lastovica and E.L. Roux, // Acta Gastroenterolog. Belg., 1993. - Vol.56. -P.34-35.

135. Leaper, S. Differentiation between Campylobacter jejuni and allied thermophilic Campylobacters by hybridization of deoxyribonucleic acids Текст./ S. Leaper, and R.J. Owen //. FEMS Microbiol. Lett. 1982. -Vol.15. -P.203-208.

136. Levy, A.J. A gasteroenteritis outbreak probably due to a bovine strain of vibrio Текст./ A.J. Levy, // Yale J. Biol. Med. 1945. - Vol.18. - P.243-248.

137. Luckey, M. Iron uptake in Salmonella typhimurium: utilization of exogenous siderochromes as iron carriers Текст./ M. Luckey, J.R. Pollack, R. Wayne, B.N. Ames, and J.B. Neilands // J. Bacteriol. 1972. - Vol.l 11.-P.731-738.

138. Luechtefeld, N.A.W. Isolation of Campylobacter fetus ssp. jejuni from migratory waterfowl Текст./ N.A.W. Luechtefeld, M.J. Blaser, L.B. Relier and W-L.L. Wang // J. Clin. Microbiol. 1980. - Vol.12. - P.406.

139. Luechtefeld, N.W. Animal reservoirs of C. fetus ssp. jejuni. In: Proc. Int. Workshop on Campylobacter Infections Текст./ N.W. Luechtefeld and W-L.L. Wang // Public Health Laboratory System, London. 1982. - P. 36.

140. Luo, N. Molecular characterization of a cryptic plasmid from Campylobacter jejuni Текст./ N. Luo and Q. Zhang // Plasmid. — 2001. — Vol. 45. — P.127-33.

141. Manavathu, E.K. Nucleotide sequence analysis and expression of a tetracycline-resistance gene from Campylobacter jejuni Текст./ E.K. Manavathu, K. Hiratsuka, and D.E. Taylor // Gene 1988. - Vol. 62. — P. 17-26.

142. Markwell, M.A.K. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determination in membrane and lipoprotein samples Текст./ M.A.K. Markwell, S.M. Haar, L.L. Bieber, and N.E. Tolbert // Anal. Biochem. 1978. - Vol.87. -P.206-210.

143. Marti'nez-Bueno, M. pS86, a new theta-replicating plasmid from Enterococcus faecalis Текст./M. Marti'nez-Bueno, E. Valdivia, A. Galvez, and M. Maqueda // Curr. Microbiol. 2000. - Vol.41. - P.257-261.

144. McCoy, E.C. Major outer membrane protein of Campylobacter fetus: physical and immunological characterization Текст./ E.C. McCoy, H.A. Wiltberger, and A.J. Winter // Infect. Immun. 1976. - Vol.13. - P.1258-1265.

145. McCoy, E.C. Superficial antigens of Campylobacter (Vibrio) fetus: characterization of an antiphagocytic component Текст./ E.C. McCoy, D.

146. Doyle, К. Burda, L.B. Corbell, and A J. Winter // Infect. Immun. 1975. -P.517-525.

147. McFadyean, J. Report of the departmental committee appointed by the Board of Agriculture and Fisheries to enquire into epizootic abortion Текст./ J. McFadyean and S. Stockman // His Majesty's Stationary Office, London. 1913.

148. Mead, P.S. Foodrelated illness and death in the United States Текст./ P.S. Mead, L. Slutsker, V. Dietz, L.F. McCaig, J.S. Bresee, C. Shapiro, P.M. Griffin, and R.V. Tauxe, // Emerg. Infect. Dis., 1999. -Vol.5.-P.607-625.

149. Miller, J.F. High-voltage electroporation of bacteria: genetic transformation of Campylobacter jejuni with plasmid DNA Текст./ J.F.Miller, W.J. Dower, and L.S. Tompkins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1988. Vol.85. - P.856-860.

150. Milles, A.A. Enterobacterial chelators of iron: their occurrence, detection, and relation to pathogenicity Текст./ A.A. Milles, and P.L. Khiji // J. Med. Microbiol. 1975. - Vol.8. - P.477-490.

151. Morris, G.K. Campylobacter / G.K. Morris, and C.M. Patton I I In E. H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler Jr., and HJ. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology 4th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C 1985. - P. 302-308.

152. Mu'ller, W. Identifizierung und Differenzierung der Campylobacter-/efas-Subspezies mittels PCR. Dtsch. Tiera'rztl. / Mu'ller, W., H. Hotzel, and F. Schulze // Wochenschr. 2003. - Vol. 110. - P.55-59.

153. Miiller, W. Identifizierung und Differenzierung der Campylobacter-yb/M.v-Subspezies mittels PCR Текст./ W. Miiller, H. Hotzel, and F. Schulze // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr. 2003. - Vol.110. - P.55-59.

154. Nakamura, M. The replicon of the cryptic plasmid pSBOl isolated from Streptococcus bovis JB1 Текст./ M. Nakamura, K. Ogata, T. Nagamine, K. Tajima, H. Matsui, and Y. Benno // Curr. Microbiol. 2001. -Vol.43.-P.l 1-16.

155. Neilands, J.B. Microbial iron compounds / J.B. Neilands // Annu. Rev. Biochem. 1981. - Vol.50. -P.715-731.

156. Oakley, B.R. A simplified ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels Текст./ B.R. Oakley, D.R. Kirsch, and N.R. Morris // Anal. Biochem. 1980. Vol.105. - P.361-363.

157. O'Brien, A.D. Additional evidence that the LPS gene locus regulates the natural resistance to S. typhimurium in mice Текст./ O'Brien A.D., D.A. Weinstein, M.Y. Soliman, and D.L. Rosenstreich // J. Immunol. 1985. -Vol.134.-P.2820-2823.

158. On, S.L.W. Assessment of enzyme detection tests useful in identification of campylobacteria Текст./ S.L.W. On and B. Holmes // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30. - P.746-749.

159. On, S.L.W. Identification methods for Campylobacters, helicobacters, and related organisms Текст./ S.L.W. On. // Clin. Microbiol. Rev. 1996. -Vol. 9. - P.405-422.

160. On, S.L.W. Reproducibility of tolerance tests that are useful in the identification of campylobacteria Текст./ S.L.W. On, and B. Holmes // J. Clin. Microbiol. 1991. - Vol.29. -P.1785-1788.

161. Ono, K. Contamination of meat with Campylobacter jejuni in Saitama, Japan Текст./ К. Ono and K. Yamamoto // Int. J. Food Mocrobiol., 1999. - Vol.47. - P.211-219.

162. Oosterom, J. Campylobacter jejuni in poultry processing and pig slaughtering Текст./ J. Oosterom // In: Proc. 2nd Int. Workshop on Campylobacter Infections. Public Health Laboratory Systems, Brussels, Belgium. 1983.-P 176.

163. Owen, R.J. Nucleic acids in the classification of Campylobacters Текст./ R.J. Owen // Eur. J. Clin. Microbiol. 1983. - Vol.2. - P.367-377.

164. Owen, R.J. Restricrion endonuclease digest patterns of chromosomal DNA from nitratenegative Campylobacter like organisms Текст./ R.J. Owen, A. Beck, and P. Borman, // Eur. J. Epidemiol., 1985. Vol. 1. -P.281-287.

165. Pai, C.H. Campylobacter gastroenteritis in children Текст./ C.H. Pai, S. Sorger, L. Lackman, R.E. Sinai, and M.I. Marks // J. Pediatr. 1979. Vol.94.-P.589-591.

166. Palyada, K.A. Iron acquisition and regulation in Campylobacter jejuni Текст./ К. Palyada, D. Threadgill, A. Stintzi // J Bacterid, 2004. -Vol. 186. -P.4714-29.

167. Patil, R.V. Corrosion of metals and alloys: Analytical studies of some natural water, effluents and soil environment in Pune region. Ph.D. Thesis, Dept of Environmental Science, / R.V. Patil; University of Pune 1977. -P.50-70.

168. Pei, Z. Purification and characterization of a family of high molecular weight surface-array proteins from Campylobacter fetus Текст./ Z. Pei, R.T. Ellison III, R.V. Lewis, and M.J. Blaser // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263. - P.6416-6420.

169. Perez, G.I. Lipopolysaccharide characteristics of pathogenic Campylobacters Текст./ G.I. Perez and M.J. Blaser // Infect. Immun. -1985. Vol.47. - P.353-359.

170. Perez, G.I. Lipopolysaccharide structures of Campylobacter fetus are related to heat-stable serogroups Текст./ G.I. Perez, M.J. Blaser, and J.H. Bryner // Infect. Immun. 1986. - Vol.51. - P.209-212.

171. Pesci, E.C. Genetic, enzymatic and pathogenic studies of the iron superoxide dismutase of Campylobacter jejuni Текст./ E.C. Pesci, L.C. Daniel, C.L. Pickett // Infec Immun, 1994. - Vol.62. - P. 2687-94.

172. Philpott, M. The dangers of disease transmission by artificial insemination and embryo transfer Текст./ M. Philpott // Br Vet J 1993. 149:1-32.

173. Pickett, C.L. Iron acquisition and haemolysin production by Campylobacter jejuni Текст./ C.L. Pickett, T. Auffenberg, E.C. Pesci, V.L. Sheen, Jusuf S D // Infec Immun, 1992. - Vol.60. - P.3872-77.

174. Plastridge, W.M. Antibiotic mediums for the isolation of vibrios from bull semen Текст./ W.M. Plastridge, M.E. Koths and L.F. Williams I I Amer. J. Vet. Res. 1961. - Vol. 22. -P.867-869.

175. Ponka, A. Infection with Campylobacter fetus Текст./ A. Ponka, R. Tilvis, J. Helle and T.U. Kosunen // Scand. J. Infect. Dis. 1984. - Vol.16. P.127-128.

176. Pratt, A. Tetracycline resistance of Australian Campylobacter jejuni and Campylobacter coli isolates Текст./ A. Pratt, V. Korolik // J Antimicro Chemo, 2005. - Vol. 55. - P. 452-60.

177. Ridsdale, J.A. Prevalence of Campylobacters and Arcobacters in ducks at the abattoir Текст./ J.A. Ridsdale, H.I. Atabay and J.E.L. Corry // J. Appl. Microbiol. 1998. - Vol.85. - P.567-573.

178. Robinson, D.A. Infective dose of Campylobacter jejuni in milk Текст./ D.A. Robinson // Brit. Med. J. 1981. - Vol.282. - P. 15 84.

179. Rollins, D.M. Viable but non culturable stage of Campylobacter jejuni and its role in survival in the natural aquatic environment Текст./ D.M. Rollins, R.R. Colwell // Appl Environ Microbiol, 86. - Vol. 52. - P. 531-38.

180. Roop, R.M. Differential characteristics of catalase-positive Campylobacters correlated with DNA homology groups Текст./ R.M. Roop II, R.M. Smibert, J.L. Johnson, and N.R. Krieg // J. Microbiol. 1984. -P.938-951.

181. Russell, R.R. A vibrio associated with scouring and mortality in hoggets in New Zealand Текст./ R.R. Russell // N.Z. Vet. J. 1955. Vol.3. -P.60-63.

182. Saatkamp, H.W. Economic aspects of the control of classical swine fever outbreaks in the European Union Текст./ H.W. Saatkamp, P.B. Berentsen & H.S. Horst II Vet. Microbiol., - 2000. - Vol.73 (2-3). P. 221237.

183. Salama, S.M. Differentiation of the subspecies of Campylobacter fetus by genomic sizing Текст./ Salama S.M., M.M. Garcia, and D.E. Taylor// Int. J. Syst. Bacteriol. 1992. Vol.42. P.446-450.

184. Schmidt, U. The clinical spectrum of Campylobacter fetus infections: report of five cases and review of the literature Текст./ U. Schmidt, H. Chmel, Z. Kaminski, and P. Sen // Q. J. Med. New Ser. 1980. - Vol.49. -P.431-442.

185. Schulze, F. Identification of Campylobacter fetus subspecies by phenotypic differentiation and PCR Schulze Текст./ F. Schulze, A. Bagon; W. Müller, H. Hotzel // J Clin Microbiol. 2006. - Vol. 44(6). - P.2019-24.

186. Sebald, M. Teneur en bases de I'ADN et classification des vibrions Текст./ M. Sebald and M. Veron // Ann. Inst. Pasteur 1963. - P. 105. -P.897.

187. Shepler, V.M. Isolation of Vibrio fetus from bovine preputial fluid using Millipore filters and an antibiotic medium Текст./ V.M. Shepler, G.J. Plumer, and J.E. Faber // Amer. J. Vet. Res. 1963. - Vol.24. - P.749-755.

188. Shin, S.J. A new antibiotic combination for frozen bovine semen Текст./ S.J. Shin, D.H. Lein, V.H. Patten, H.L. Ruhnke // Theriogenology -1988. Vol.29. - P.577-591.

189. Simmons, N.A. Campylobacter ssp. in oven ready poultry Текст./ N.A. Simmons and F.J. Gibbs / J. Infect. 1979. - Vol.1. - P. 159.

190. Simor, A.E. Premature labor and neonatal sepsis caused by Campylobacter fetus subsp. fetus-Ontario Текст./ A.E. Simor, M.A. Karmali, T. Jadavji // , Centers for Disease Control. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 1984. - Vol.33. - P.483-489.

191. Skerman, V.B.D. Approved lists of bacterial names Текст./ V.B.D. Skerman, V. McGowan and P.H.A. Sneath // Int. J.Syst. Bacteriol. 1980. -Vol.30.-P.225.

192. Skirrow, M.B. Clinical aspects of Campylobacter infections Текст./ M.B.Skirrow and M.J. Blaser. // In I. Nachamkin and M. J. Blaser (ed.), Campylobacter, ASM, Washington, DC. 2000. - 2nd ed. - P. 69-88.

193. Skirrow, M.B. Diseases due to Campylobacter, Helicobacter and related bacteria Текст./ M.B. Skirrow // J. Сотр. Pathol. 1994. - Vol.111. -P.l 13-149.

194. Smibert, R.M. A human strain of Campylobacter fetus subsp. intestinalis grown at 42°C Текст./ R.M. Smibert and A. Von Graevenitz // J. Clin. Pathol. 1980. - Vol.33. - P.509.

195. Smibert, R.M. Campylobacter Текст./ R.M. Smibert // In N. R. Krieg and J. G. Holt (ed.), Bergey's manual of systematic bacteriology, The Williams & Wilkins Co., Baltimore. 1984.-Vol. 1.-P. 111-118.

196. Smith, T. Some morphological and biological characters of the spirilla (Vibrio fetus N. Sp) associated with disease of the fetal membranes in cattle Текст./ Т. Smith and M.S. Taylor // J. Exp. Med. 1919. Vol.30. -P.294.

197. Soonattrakul, W. Raw liver as a possible source of Vibrio fetus septicemia in man Текст./ W. Soonattrakul, B.R. Anderson and J.H. Bryner // Amer. J. Med. Sci. 1971. - Vol.261. - P.245-249.

198. Sprincova, A. Occurrence of pS86/pEF47-related plasmids in grampositive cocci Текст./ A. Sprincova, V. Stovcik, P. Javorsky, and P. Pristas // Curr. Microbiol. -2005. Vol.51. - P. 198-201.

199. Stern, N.J. Campylobacter fetus ssp. jejuni: Recovery methodology and isolation from lamb carcasses Текст./ N.J. Stern // J. Food Sci. 1981a.- Vol.46.-P.660.

200. Stern, N.J. Selectivity and sensitivity of three media for recovery of inoculated Campylobacter fetus ssp. jejuni from ground beef Текст./ N.J. Stern, // J. Food Safety 1982c. - Vol.4. - P.l69.

201. Sultzer, B.M. Genetic control of leukocyte responses to endotoxin Текст./ B.M. Sultzer // Nature (bond.). 1968. - Vol.219. - P.1253-1254.

202. Suveges, I. Piglet losses due to parenteral application of iron dextran preparation Текст./ I. Suveges, and R. Glavits // Acta. Vet. Acad. Sci. Hung. 1976. Vol.26. - P.257-262.

203. Swartz, M.N. Human diseases caused by foodborne pathogens of animal origin Текст./ M.N. Swartz // Clin. Infect. Dis., 2002. - Vol.34. -P.111-122.

204. Swati, P. Bhavsar. Virulence factors of Campylobacter Текст./ Swati P. Bhavsar, Balu P. Kapadnis // The Internet Journal of Microbiology.- 2007. Vol. 3 (2)

205. Tauxe, R.V. Illness associated with Campylobacter laridis, a newly recognized Campylobacter species Текст./ R.V. Tauxe, C.M. Patton, P.

206. Edmonds, T.J. Barrett, D.J. Brenner and P.A. Blake // J. Clin. Microbiol. -1985. Vol. 21. - P.222-225.

207. Taylor, D.E. Transmissible plasmids from Campylobacter jejuni Текст./ D.E. Taylor, S.A. De Grandis, M.A. Karmali, and P.C. Fleming // Antimicrob. Agents Chemother. 1981. - Vol.19. - P.831-835.

208. Thompson, S.A. Pathogenesis of Campylobacter fetus infections Текст./ S. A. Thompson and M.J. Blaser // ASM Press 2nd ed., Washington, DC. 2000. -P.321-347.

209. Thornsberry, C. Antimicrobial susceptibility tests for Streptococcus pneumoniae Текст./ С. Thornsberry, and J.M. Swenson // Lab. Med. -1980.-Vol.11.-P.83-86.

210. Thornsberry, C. Rifampin: spectrum of antibacterial activity / C. Thornsberry, B.C. Hill, J.M. Swenson and L.K. McDougal // Rev. Infect. Dis. 1983. - Vol.5(3). - P.5412-5417.

211. Tiehan, W. Waterborne Campylobacter gastroenteritis-Vermont Текст./ W. Tiehan, and R.L. Vogt // Morbid. Mortal. Weekly Rep. 1978. - Vol.27. -P.207.

212. Tilse, M.H. Isolation of Campylobacter fetus from blood culture Текст./ M.H. Tilse, and T.V. McAlister // Med. J. 1981. Aust. - Vol.1. -P.337-338.

213. ToIIefson, L. Impact of resistant campylobacteriosis in humans due to fluoroquinolone use in chickens Текст./ L. ToIIefson // International des Epizooties 8th ed, Paris, France. 1999. - P. 157-158.

214. Towbin, H. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gel to nitrocellulose sheets: procedure and some applications Текст./ H.

215. Towbin, T. Staehelin and J. Gordon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. -Vol.76. -P.4350-4354.

216. Tremblay, С. Epidemiology and Antimicrobial Susceptibilities of 111 Campylobacter fetus subsp. fetus Strains Isolated in Québec, Canada, from 1983 to 2000 / C. Tremblay, Christiane Gaudreau, and Manon Lorange // JCM. 2003. - Vol.41. (1.). -P.463-466.

217. Trieu-Cuot, P. In vivo transfer of genetic information between grampositive and gram-negative bacteria Текст./ P. Trieu-Cuot, G. Gerbaud, T. Lambert and P. Courvalin // EMBO J. 1985. - Vol.4. - P.3583-3587.

218. Tiwari, S.K. Rapid diagnosis of Helicobacter pylori infections in dyspeptic patients using salivary secretions: a non-invasive approach Текст./ S. К. Tiwari, A. A. Khan, K. S. Ahmed et al. // Singapore Med. J.-2005.-Vol.46(5).-P. 224.

219. Tu, Z.C. Evidence that the Campylobacter fetus sap locus is an ancient genomic constituent with origins before mammals and reptiles diverged Текст./ Z. C. Tu, F.E. Dewhirst and M.J. Blaser // Infect. Immun. 2001. - Vol.69. -P.2237-2244.

220. Tu, Z.C. Mechanisms underlying Campylobacter fetus pathogenesis in humans: surface-layer protein variation in relapsing infections Текст./ Z.C. Tu, С. Gaudreau, and M J. Blaser // J. Infect. Dis. 2005. - Vol.191. -P.2082—2089.

221. Tu, Z.C. Structure and genotypic plasticity of the Campylobacter fetus sap locus Текст./ Z.C. Tu, T.M. Wassenaar, S.A. Thompson and M.J. Blaser // Mol. Microbiol. 2003. - Vol.48. - P.685-698.

222. Tummuru, M.K. Characterization of the Campylobacter fetus sapA promoter: evidence that the sapA promoter is deleted in spontaneous mutant strains Текст./ M.K. Tummuru and M J. Blaser // J. Bacteriol. 1992. -Vol.174.-P.5916-5922.

223. Ursing, J. Base composition and sequence homology of deoxyribonucleic acid of thermotolerant Campylobacters from human andanimal sources Текст./ J. Ursing, M. Walder, and K. Sandstedt // Curr. Microbiol. 1983. - Vol.8. - P.307-310.

224. Valdivia, R.H. Applications for green fluorescent protein (GFP) in the study of host-pathogen interactions Текст./ R.H.Valdivia, A.E. Hromockyj, D. Monack, L. Ramakrishnan and S. Falkow // Gene. 1996. -Vol.173.-P.47-52.

225. Valdivia, R.H. Fluorescence-based isolation of bacterial genes expressed within host cells Текст./ R.H. Valdivia and S. Falkow // Science 1997. - Vol.277. - P.2007-2011.

226. Vandamme, P. Taxonomy of the family Campylobacteraceae / P. Vandamme // In I. Nachamkin and M. J. В laser (ed.), Campylobacter, 2nd ed. ASM Press, Washington, DC. 2000. P. 3-26.

227. Vargas, A.C. Phenotypic and molecular characterization of bovine Campylobacter fetus strains isolated in Brazil Текст./ A.C. Vargas, M.M. Costa, M.H. Vainstein, L.C. Kreutz and J.P. Neves. // Vet. Microbiol. -2003.-Vol.93.-P.121-132.

228. Veron, M. Taxonomic study of the genus Campylobacter Текст./ M. Veron and R. Chatelain // Int. J. Syst. Bacteriol. 1973. - Vol.23. - P.122.

229. Vinzent, J. L'infection placentaire a Vibrio foetus Текст./ J. Vinzent, J. Delarue and H. Herbert // Ann. Med. 1950. - Vol. 51. -P.23-68.

230. Vliet, A.H.M. The role of iron in Campylobacter gene regulation, metabolism and oxidative stress defense Текст./ A.H.M. Vliet, J.M. Ketley, S.F. Park, C.W. Penn // FEMS Microbiol Rev, 2002. - Vol. 26. - P. 17386.

231. Von Jeney, N. Mitogenic stimulation of murine spleen cells: relation to susceptibility to Salmonella infection Текст./ N. Von Jeney, E. Gunther and K. Jann // Infect. Immun. 1977. - Vol.15. -P.26-33.

232. Wang, Y. Chloramphenicol resistance in Campylobacter coli: nucleotide sequence, expression, and cloning vector construction Текст./ Y. Wang and D.E. Taylor // Gene 1990. - Vol.94. - P.23-28.

233. Wang, Y. Cloning and nucleotide sequence of the Campylobacter jejuni gyrA gene and characterization of quinolone resistance mutations Текст./ Y. Wang, W.M. Huang and D.E. Taylor // Antimicrob. Agents Chemother. 1993. - Vol.37. -P.457-463.

234. Wang, Y. Natural transformation in Campylobacter species Текст./ Y. Wang and D.E. Taylor // J. Bacteriol. 1990. - Vol.172. - P.949-955.

235. Wassenaar, T.M. Genetic manipulation of Campylobacter: evaluation of natural transformation and electro-transformation Текст./ T.M.Wassenaar, B.N. Fry and B.A. van der Zeijst // Gene 1993. - Vol.132. P.131-135.

236. Watson, J. The genetic mapping ofa defective LPS response gene in C3H/HeJ mice Текст./ J. Watson, K. Kelly, M. Largen, and B.A. Taylor // J. Immunol. 1978. - Vol.120. - P.422-424.

237. Weinberg, E.D. Iron and infection. Microbiol Текст./ E.D. Weinberg, //Rev. 1978. Vol. 42: P.45-66.

238. Weinberg, E.D. Iron and susceptibility to infectious disease Текст./ E.D. Weinberg, // Science (Wash. DC). 1974. - Vol.184. - P.952-956.

239. Weinberg, E.D. Role of iron in host-parasite interactions Текст./ E.D. Weinberg, // J. Infect. Dis. 1971. - Vol.124. - P.401-410.

240. Wiesner, R.S. Natural transformation of Campylobacter jejuni requires components of a type II secretion system Текст./ R.S. Wiesner, D.R. Hendrixson and V.J. DiRita // J. Bacteriol. 2003. Vol.185. - P.5408-5418.

241. William, A.D. Role of catalase in Campylobacter jejuni intracellular survival Текст./ A.D. William, L.S. Jaime, M.P. Todd, A.J. Lynn // Infec Immun, 2001. - Vol. 65. - P. 6337-45.

242. Wilma, C.H. Physiological activity of Campylobacter jejuni far below the minimal growth temperature Текст./ C.H. Wilma, A.W. Jeroen, M.R. Frank, A. Tjakko // Appl Environ Microbiol, 1998. - Vol. 64. -P.3917-22.

243. Winter, A.J. Evaluation of a transport medium for Campylobacter (Vibrio) fetus Текст./ A.J. Winter, B.S. Caveney //J Am Vet Med Assoc -1978. Vol.173. - P.472-473.

244. Wo'sten, M.M. Cloning and characterization of the gene encoding the primary sigma-factor of Campylobacter jejuni Текст./ M.M. Wo'sten, M. Boeve, W. Gaastra and B.A. van der Zeijst // FEMS Microbiol. Lett. -1998. Vol.162. - P.97-103.

245. Wo'sten, M.M. Identification of Campylobacter jejuni promoter sequences Текст./ M.M. Wo"sten, M. Boeve, M.G. Koot, A.C. van Nuene and B.A. van der Zeijst // J. Bacteriol. 1998. - Vol.180. - P.594-599.

246. Yanagisawa, S. Large outbreak of Campylobacter enteritis among school children Текст./ S. Yanagisawa // Lancet 1980. - Vol.2. — P. 153.

247. Yao, R. Construction of new Campylobacter cloning vectors and a new mutational cat cassette Текст./ R. Yao, R.A. Aim, T.J. Trust and P. Guerry// Gene 1993. - Vol.130. - P. 127-130.

Информация о работе

Шихама Якобус Ангара
кандидата биологических наук
Казань, 2008
ВАК 03.00.07

Диссертация

Связь акушерско-гинекологических патологий с инфицированностью Campylobacter Fetus подвид Fetus - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы