Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Возрастные и половые отличия лимфатических узлов у норок от рождения до 18 месяцев

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Возрастные и половые отличия лимфатических узлов у норок от рождения до 18 месяцев"

На правах рукописи

^ислл*.--

КОШКИНА НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

Возрастные и половые отличия лимфатических узлов у норок от рождения до 18 месяцев

06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онколог ия и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

5 АВГ 2015

005571

Саранск - 2015

005571328

Работа выполнена на кафедре медико-биологических дисциплин и безопасности жизнедеятельности ФГБОУ ВПО «Вятский государственный гуманитарный университет».

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация

доктор биологических наук, профессор Сунцова Надежда Анатольевна

доктор ветеринарных наук, профессор Чумаков Виктор Юрьевич ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет имени Н.Ф. Катанова», зав. кафедрой морфологии и физиологии животных, (г. Абакан)

доктор медицинских наук, профессор

Зайцев Валерий Борисович

ГБОУ ВПО «Кировская государственная

медицинская академия» Минздрава России,

профессор кафедры гистологии, эмбриологии

и цитологии, (г. Киров)

ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д.К. Беляева», (г. Иваново)

Защита диссертации состоится 14 сентября 2015 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.15 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Диссертация, объявление о защите и автореферат диссертации размещены на официальных сайтах ФГБОУ ВПО «Мордовскии государственный университет имени Н.П. Огарева» www.mrsu.ru и Высшей Аттестационной комиссии Минобрнауки РФ Ьйр//уак2.ес1/£0у.ш

Автореферат разослан «<Д/ » Ц^СоЬЛ^- 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Романова Т. А.

1. Введение

1.1. Актуальность темы исследования.

За последние десятилетия разведение норок стало ведущей отраслью клеточного пушного звероводства, как в нашей стране, так и за рубежом, основной задачей которого является повышение эффективности производства (Балакирев H.A., 2005, 2009; Федорова О.И., 2014). Оно сопровождается применением нетрадиционных кормов, сосредоточением большого поголовья на небольших производственных площадях, ограничением двигательной активности зверьков, неблагоприятными параметрами микроклимата. Все эти факторы инициируют понижение резистентности организма норок (Газизов В.З., 1991; Балакирев H.A., Волкова М.В., 2005; Сунцова H.A., 2008). Известно, что в адаптации организма к факторам окружающей среды, обеспечении антигенного гомеостаза и антиинфекционной устойчивости принимает участие иммунная система (Рева И.В., 2006; Сапин М.Р., 2007; Аминова Г.Г., 2013). Особое место отводится периферическим органам иммунной системы, в частности лимфатическим узлам, участвующим в механизмах возникновения иммунного ответа (Бородин Ю.И., 1992; Соколов В.И., 1993; Абрамов В.В., 1997; Карсонова М.Н., 2003; Рева И.В., 2006; Аминова Г.Г., 2013).

1.2. Степень разработанности темы исследования. В доступной нам литературе сведения о лимфатических узлах норок фрагментарны, недостаточно изучены их преобразования в возрастном и половом аспектах (Чумаков В.Ю., 1990; Маталасов В.П., 1997; Панфилов А.Б., 2005; Сунцова H.A., 2008).

Вместе с тем, эти данные имеют важное теоретическое и прикладное значение для совершенствования кормления, содержания норок, раскрытия закономерностей их индивидуального развития и потенциальных возможностей зверьков (Тельцов Л.П., 2008, 2011).

1.3. Цель и задачи исследования. Изучить возрастную морфологию и половые отличия лимфатических узлов у норок.

• Установить особенности макроморфологии лимфатических узлов в постнатальном развитии у самцов и самок норок от рождения до 18-месячного возраста;

• Изучить гистологические особенности лимфатических узлов и ультраструктуру их клеток.

1.4. Научная новизна. С помощью комплексных анатомических, гистологических, электронно-микроскопических и статистических методов исследования описаны закономерности постнатального морфогенеза лимфатических узлов у самцов и самок норок стандартного темно-коричневого окраса. Впервые получены данные об особенностях цитоархитектоники лимфатических узлов на разных уровнях ее структурной организации и определены сроки функционального становления лимфатических узлов. Изучены электронно-микроскопические особенности клеток (лимфоциты, иммунобласты, плазмобласты, ретикулярные клетки, зрелые плазматические клетки) лимфатических узлов норок, их возрастные отличия. Выявлена асимметрия морфометрических показателей лимфатических узлов у норок.

1.5. Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты, полученные на основании комплексных методов, в значительной степени конкретизируют и дополняют сведения о видовой и возрастной морфологии лимфатических узлов у норок и вносят теоретический вклад в представление об индивидуальном развитии организма. Установленные особенности цитоархитектоники и сроки функционального становления лимфатических узлов позволяют получить объективное представление о потенциальных возможностях иммунной системы этих животных, что позволяет спрогнозировать определенную реакцию организма на различные воздействия, в том числе на меняющиеся факторы внешней среды, условия содержания и кормления.

Полученные данные об особенностях строения и развития лимфатических узлов у норок, возможно, использовать в клинической практике при диагностировании заболеваний различной этиологии, при разработке лечебно-профилактических мероприятий. Сведения о морфологической асимметрии лимфатических узлов у самцов и самок целесообразно учитывать при подборе пар аналогов.

Результаты исследований необходимо использовать в учебном процессе, а также при проведении научных исследований в области биологии и ветеринарии.

1.6. Реализация результатов исследования. Материалы исследований используются в научных и учебных целях на кафедрах морфологического цикла Вятской, Костромской, Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова, Самарской, Пермской государственной сельскохозяйственной академии им. акад. Д.Н. Прянишникова, Ивановской, Казанской государственных сельскохозяйственных академий; Башкирского, Оренбургского, Дагестанского государственного аграрного университета им. М.М. Джамбулатова, Донского, Красноярского, Ставропольского, Брянского государственных аграрных университетов; Дагестанской государственной медицинской академии, Вятского государственного гуманитарного университета». Акты внедрения представлены в диссертационный совет.

Положения, выносимые на защиту:

1. Макроморфология лимфатических узлов у норок в возрасте от рождения до 18 месяцев;

2. Возрастные и половые изменения гистологической структуры, цитоархитектоники и ультраструктурные характеристики клеток лимфатических узлов норок от рождения до 18 месяцев.

1.7. Апробация полученных результатов. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на Международной студенческой научной конференции «Знания молодых - новому веку» (Киров, 2012); Международной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и соискателей «Науке нового века - знания молодых» (Киров, 2012, часть 1); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова «Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства» (Киров, 2012); Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию заслуженного деятеля науки РФ, д.б.н., проф. Тельцова Л.П. «Механизмы и закономерности индивидуального развития человека и

животных» (Саранск, 2013); Международной научно-практической интернет-конференции «Научный поиск - животноводству России» (Ставрополь, 2013).

1.8. Публикации результатов исследования.

По теме диссертационной работы опубликовано 10 научных работ, в том числе четыре в изданиях ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК РФ: в журнале «Актуальные вопросы ветеринарной биологии». - 2013, 2014; «Вестник ветеринарии». - 2013, 2014.

1.9. Объем и структура работы.

Диссертационная работа изложена на 173 страницах компьютерного текста. Состоит из разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы и практических предложений. Работа иллюстрирована 48 фотографиями с макро- и микропрепаратов, содержит 19 таблиц. Список литературы включает 181 источник, в том числе 20 иностранных авторов.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 2.1. Материалы и методы исследования

Развитие и формирование лимфатических узлов в постнатальном онтогенезе изучено у американской норки (Mustelavison Sehr., 1777) различных половозрастных групп: новорожденные n<j=10, n==l 1; 7 дней п-:=3, пс=3; 14 дней n(j=3, nj=3; 21 день 11(5=8, п$=6; месяц п<;=3, пс=5; 1,5 месяца п,?=3, пс=3; 3 месяца п,?=4, пс=3; 8 месяцев n<i=30, п;=30; 18 месяцев nf=25, nj=25. Итого: 178 животных.

Материалом служили комплекты левых и правых лимфатических узлов (нижнечелюстные, заглоточные медиальные, поверхностные шейные, подмышечные, добавочные подмышечные, медиальные подвздошные, подколенные) самцов и самок норок стандартного темно-коричневого окраса (СТК). Комплекты лимфатических узлов получали в зверохозяйстве «Вятка» Слободского района Кировской области. Гистологические исследования выполнялись на кафедре зоогигиены, физиологии и биохимии ФГБОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия». Все животные подобраны методом аналогов, клинически здоровы. Возраст животных клеточного содержания устанавливали по зоотехническим журналам, которые ведутся в этом зверохозяйстве. Кормление животных осуществлялось по общепринятым в хозяйстве рационам, сбалансированным по основным питательным веществам. Все действия, обеспечивающие контакты с экспериментальными животными, осуществлялись согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ №755 от 12.08.1977 г. МЗ СССР) (Каркищенко Н. Н„ 2004) и в соответствии с «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18.13.1986 г.

Изучение проводили морфометрическими, гистологическими, электронно-микроскопическими; а также зоотехническими методами исследования.

Лимфатические узлы взвешивали на торсионных весах WT-500 с точностью до 0,001 г. Вычисляли массу лимфатических узлов относительно массы тела. Основные промеры лимфатических узлов (длина, ширина, толщина) измеряли с

помощью микроштангенциркуля с точностью до 0,01 мм. Объем лимфатических узлов вычисляли математическим методом на основании полученных морфометрических показателей (длины, ширины и толщины). Измерения проводили непосредственно на тушках животных, что минимизировало возможность ошибки оператора.

Гистометрические измерения производили окулярной сеткой с помощью микроскопа марки МБИ - ДЗУ11. Определяли длину и ширину лимфоидных узелков в лимфатических узлах в поле зрения микроскопа при увеличении 20x8.

Параллельно фиксировали лимфатические узлы в жидкости Толесницки (1976) и в нейтральном формалине. Материал заливали в парафин по общепринятой методике, срезы толщиной 4-5 микрометров изготовляли на микротоме. Полученные срезы окрашивали гематоксилином Гарриса с последующей окраской эозином, а также метиловым зеленым пиронином по Браше.

Клеточный состав определяли в функционально различных зонах лимфатического узла: коре, герминативном центре при его отсутствии в лимфоидном узелке, паракортикальной зоне (тимусзависимой), мякотных тяжах. Подсчитывали все клетки в 10 полях зрения морфологической специализированной, усовершенствованной сеткой случайного шага С.Б. Стефанова (1985, 1988), Н.С. Кухаренко (1974) на микроскопе марки МБИ - ДЗУ11. Идентификацию клеток проводили по Г.С. Катинас (1981). Фотографировали цифровым фотоаппаратом Samsung MW 800.

Для электронно-микроскопического исследования в постэмбриональный период у норок в возрасте 1 месяц и 3 месяца брали лимфатические узлы. Материал фиксировали в 3% буферном растворе глютарового альдегида, дофиксировали в 1% осмиевой кислоте. Обезвоживали материал в спиртах различной крепости и ацетоне. На ультрамикротоме типа NOVA получали полутонкие и ультратонкие срезы. Полученные полутонкие срезы окрашивали 1% раствором толуидиного синего. Ультратонкие срезы контрастировали до 60 минут в уксуснокислом ураниле и 5-15 сек. в цитрате свинца по Рейнольдсу. Просматривали ультратонкие срезы в трансмиссионном микроскопе JEM - 100С "YEOL". Электронно-микроскопические исследования проводились в ФГБУН Институте биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН.

Полученные в работе цифровые данные обработаны методами вариационной статистики программой «Biostatistica» версия 6.0. Нормальность распределения выборки проверяли при помощи программы «Biostatistica» версии 9,0. Для каждой величины определяли средние арифметические значения и ошибку средней арифметической величины, критерий Ньюмена Кейлса при уровне вероятности (Р<0,05). Интенсивность прироста абсолютной массы лимфатических узлов определяли по формуле С. Броди:

, _ Щ-\У0) X 100%

К ~ ОД+ИУ«. 2

К— интенсивность прироста в % за определенный отрезок времени;

Wt — показатель в данном возрасте;

Wo — начальный показатель.

2.2. Морфология лимфатических узлов у норок

У новорожденных норок исследованные лимфатические узлы визуально просматриваются, кроме добавочного подмышечного, который формируется к 14 суткам. Нижнечелюстной, поверхностный шейный, подмышечный, подколенный лимфатические узлы имеют округлую форму и серый цвет. Заглоточный медиальный и медиальный подвздошный лимфатические узлы представлены в виде тонких нитей серо-красного цвета. Заглоточный медиальный является наиболее крупным среди всех исследованных лимфатических узлов по морфометрическим параметрам (от 0,7x0,6x0,4 до 13x7x5) и показателям абсолютной массы (от 0,002 до 0,228 г) за весь период постнатального развития.

Абсолютная масса всех лимфатических узлов норок с возрастом увеличивается. Так, у самцов и самок на 1 сутки абсолютная масса всех лимфатических узлов колеблется в пределах от 0,001 ±0,001 до 0,002±0,001 г. К 14 суткам у самцов этот показатель увеличивается в 6-9 раз и составляет от 0,006±0,002 до 0,019±0,003 г, у самок - в 3-6 раз и находится в интервале от 0,003±0,001 до 0,012±0,006 г соответственно. Разница между абсолютной массой лимфатических узлов у самок и самцов в этом возрасте составляет 36% (Р<0,05). В период с 14 до 45 суток абсолютная масса лимфатических узлов продолжает увеличиваться. Так, к этому возрасту, наиболее значимые изменения абсолютной массы зафиксированы у заглоточного медиального и поверхностного шейного лимфатических узлов (до 9 раз). Абсолютная масса остальных лимфатических узлов у животных увеличивается в 2-5 раз и варьирует от 0,007±0,001 до 0,030±0,009 г в данном возрасте. Однако, этот процесс происходит менее интенсивно, чем в предыдущих возрастных группах.

В 3 месяца происходит увеличение абсолютной массы лимфатических узлов. У самцов данный показатель возрастает в 2-4 раза и колеблется от 0,048±0,008 до 0,252±0,023 г, по сравнению с месячным возрастом. У самок происходит увеличение абсолютной массы лимфатических узлов в 1,5-3,5 раза и варьирует от 0,032±0,005 до 0,184±0,049 г соответственно, по сравнению с предыдущим возрастом (Р<0,05).

В дальнейшем, с 3 до 18 месяцев изменения показателей абсолютной массы лимфатических узлов у норок происходят незначительно.

Наиболее интенсивный рост абсолютной массы большинства лимфатических узлов за весь период постнатального развития наблюдается в период с 7 по 14 сутки, в период начала подкормки с 21 по 45 сутки и в переходный период с 61 по 120 сутки (рис. 1-6).

Относительная масса лимфатических узлов норок за весь период онтогенеза колеблется в пределах от 0,008±0,002 до 0,108±0,048%. Резкое изменение относительной массы наблюдается в период подкормки с 30 по 45 сутки, а незначительные ее изменения отмечены в период истинной зрелости с 8 до 18 месяцев.

-самцы -самки

7сут 14 сут 21 сут 1мес 1,5 мес Змее 8 мес 18мес Возраст

Рис. 1. Интенсивность прироста абсолютной массы нижнечелюстных лимфатических узлов у самцов и самок, %

-самцы -самки

7 сут 14 сут 21сут 1мес 1,5мес Змее 8 мес 18мес Возр а ст

Рис. 2. Интенсивность прироста абсолютной массы заглоточных медиальных лимфатических узлов у самцов и самок, %

-самцы -самки

7сут 14сут 21 сут 1мес 1.5мес Змее 8мес 18мес Вочряст

Рис. 3. Интенсивность прироста абсолютной массы поверхностных шейных лимфатических узлов у самцов и самок, %

£ о

7сут 14 сут 21сут 1мес 1,5 мое Змее 8 мес 18 мое Вотрасг

Рис. 4. Интенсивность прироста абсолютной массы подмышечных лимфатических узлов у самцов и самок, %

Возраст

Рис. 5. Интенсивность прироста абсолютной массы медиальных подвздошных лимфатических узлов у самцов и самок, %

7сут 14 сут 21 сут 1 мес 1.5мес Змее 8мес 18мес

Рис. 6. Интенсивность прироста абсолютной массы подколенных лимфатических узлов у самцов и самок, %

С возрастом у самцов и самок норок наблюдается увеличение морфометрических параметров (длина, ширина, толщина) лимфатических узлов.

Длина нижнечелюстного и медиального подвздошного лимфатических узлов у самцов увеличивается в период с 1 суток до 18 месяцев равномерно. Наиболее интенсивный рост длины этих лимфатических узлов зафиксирован во время начала

подкормки с 21 по 45 сутки. Так, длина нижнечелюстного и медиального подвздошного лимфатических узлов на 1 сутки колеблется от 0,40±0,01 до 1,00±0,01 мм. К 45 суткам увеличивается в 4-9 раз и варьирует от 3,66±0,66 до 4,00±0,02 мм, что на 3 - 3,26 мм больше, по сравнению с суточными (рис. 7, 10).

Динамика изменения длины лимфатических узлов у самок, по сравнению с самцами, иная. Так, на 1 сутки длина нижнечелюстньтх, поверхностных шейных, подмышечных и медиальных подвздошных лимфатических узлов варьирует от 0,40±0,01 до 0,90±0,01 мм. К 45 суткам она увеличивается в 8-10 раз и составляет от 4,16±0,16 до 7,33±0,33 мм, что на 3,17-3,76 мм больше, по сравнению с суточными (рис. 7-10). Возрастные и половые различия по этому показателю в 45-суточном возрасте статистически достоверны (Р<0,05). Далее, начиная с 3 и до 18 месяцев, изменения длины этих лимфатических узлов незначительны.

Длина заглоточного медиального, поверхностного шейного, подмышечного и подколенного лимфатических узлов у самцов и заглоточного медиального и подколенного у самок за исследованный возрастной период изменяется неравномерно и скачкообразно (рис. 8, 9, 11, 12). Наиболее интенсивное увеличение этого параметра зафиксировано для заглоточного медиального лимфатического узла. Так, на 1 сутки у самцов длина составляет 0,70±0,03 мм и у самок - 0,60±0,02 мм. С 21 до 45 суток длина этого лимфатического узла у самцов увеличивается в 12 раз, а у самок в 16 раз и составляет 8,66±0,66 и 10,17±0,16 мм соответственно, что на 7,96 и 9,57 мм больше, чем в суточном возрасте. Далее к 3 месяцам наблюдается некоторое снижение длины, по сравнению с предыдущим возрастом, и к 18 месяцам происходит восстановление показателей 45-суточных животных, причем только у самцов (рис. 11).

1сут 7сут 14 су г 21 суп 1мес 1,5 мес Змее 8мес 18мес возраст

в левый 1 правый ■ левый ^правый

Рис. 7. Динамика длины нижнечелюстных лимфатических узлов у самцов и самок

1 сут 7 сут 14 сут 21сут 1 мое 1,5 мес Змее 8мес 18мес возраст

и левый правый Яловый {-'правый

Рис. 8. Динамика длины поверхностных шейных лимфатических узлов у самцов и самок

I * | '

I з

I1

1

1Т1- ИТш- 1

1сут 7 сут 14 сут 21 сут 1мес 1,5 мес Змее 8 мес 18 мес возраст

левый ' правый ■ левый и правый

Рис. 9. Динамика длины подмышечных лимфатических узлов у самцов и самок

1сут 7 сут 14 сут 21 сут 1мес 1.5 мес Змее 8 мес 18 мес возраст

■ левый и правый Я левый ** правый

Рис. 10. Динамика длины медиальных подвздошных лимфатических узлов у самцов и самок

азкэ в-.кз

1сут 7сут 14сут 21сут 1 мсс 1,5 мес Змее 8 мес 18 мес

возраст

правый Влсоый ^правый

Рис. 11. Динамика длины заглоточных медиальных лимфатических узлов у самцов и самок

5 з

Рис. 12. Динамика длины подколенных лимфатических узлов у самцов и самок

Иные морфометрические параметры лимфатических узлов (ширина и толщина) у норок увеличиваются с возрастом равномерно.

У самцов на 1 сутки ширина поверхностного шейного, подмышечного и подколенного лимфатических узлов колеблется от 0,30±0,01 до 0,50±0,01 мм. К 45 суткам ширина этих лимфатических узлов увеличивается в 4 раза и составляет от 2,00±0,00 до 2,33±0,33 мм, что на 1,70-1,83 мм больше, чем у суточных. Наиболее интенсивное увеличение ширины (с 21 до 45 суток) характерно для нижнечелюстного, заглоточного медиального и подколенного лимфатических узлов. Этот период характеризуется началом подкормки молодняка. Так, на 1 сутки данный показатель варьирует от 0,30±0,01 до 0,60±0,02 мм. К 45 суткам увеличивается в 6-7 раз и составляет от 2,00±0,00 до 4,66±0,33 мм, что на 1,70-4,06 мм больше, чем у суточных (Р<0,05).

У самок ширина нижнечелюстного, подмышечного и подколенного лимфатических узлов на 1 сутки составляет 0,30±0,01 мм. К 45 суткам увеличивается в 3 раза и варьирует от 3,00±0,00 до 3,33±0,33 мм, что на 2,70-3,03 мм больше, чем в суточном возрасте. Ширина заглоточного медиального, поверхностного шейного и медиального подвздошного лимфатических узлов

увеличивается с 1 по 45 сутки в 2 раза (от 0,40±0,01 до 0,80±0,02 мм и от 3,66±0,66 до 5,16±0,16 мм соответственно) (Р<0,05).

Толщина - наименее изменчивый показатель среди морфометрических параметров лимфатических узлов. Наиболее интенсивный рост толщины у всех исследованных лимфатических узлов наблюдается с 21 до 45 суток. У нижнечелюстного, поверхностного шейного, подмышечного и подколенного лимфатических узлов самцов толщина увеличивается с 1 к 45 суткам в 4 раза и варьирует в этот возрастной период от 1,00±0,00 до 1,66±0,33 мм. Толщина заглоточного медиального и медиального подвздошного лимфатических узлов на 1 сутки зафиксирована в пределах от 0,40±0,01 до 0,70±0,03 мм, к 45 суткам увеличивается в 3-5 раз, по сравнению с суточными и составляет от 2,33±0,33 мм до 3,50±0,50 мм (Р<0,05).

У самок толщина всех лимфатических узлов на 1 сутки варьировала от 0,25±0,01 до 0,60±0,02 мм. В период наиболее интенсивного роста абсолютной массы лимфатических узлов (с 21 по 45 сутки) данный показатель увеличился почти в 5-8 раз, по сравнению с суточными и составил от 2,00±0,00 до 3,16±0,16 мм. Возрастные различия этого показателя статистически достоверны (Р<0,05). В дальнейшем с 3 до 18 месяцев морфометрические параметры (ширина и толщина) лимфатических узлов изменяются незначительно.

В ходе исследований, зафиксирована асимметрия показателей абсолютной и относительной массы и морфометрических параметров лимфатических узлов у самцов и самок норок в возрасте 8 и 18 месяцев.

Самцы имеют достоверно значимые различия по некоторым показателям морфометрии и абсолютной массы лимфатических узлов в сравнении с самками. У самцов правые лимфатические узлы по морфометрическим параметрам больше на 25-27%, чем левые. У самок выявлена обратная закономерность: левые лимфатические узлы достоверно больше правых на 23-25% (Р<0,05). Вероятно, это связано с особенностями гормонального фона у животных, так как взаимодействие нейро-эндокринной и иммунной систем посредством своих гормонов оказывает влияние на формирование эндокринных и иммунных функций (Абрамов В.В., 1994; Бессалова Е.Ю., 2011; Гонтова И.А., 2011).

Несмотря на установленные различия в морфометрических параметрах правых и левых лимфатических узлов у животных, отмечено, что 3% самцов и 7% самок от общего числа исследованных животных имеют равную абсолютную массу лимфатических узлов, а также среди самок встречаются особи с наиболее выраженными правыми лимфатическими узлами, а среди самцов с левыми.

Вероятно, что выявленные изменения связаны с доминированием одного из контрлатеральных полушарий головного мозга, тесном взаимодействие и интеграции нейро-эндокринной и иммунной систем (Абрамов В.В., 1990, 1991, 1996).

2.3. Гистология лимфатических узлов у норок

У новорожденных норок в лимфатических узлах нет разделения на корковое и мозговое вещество, нет четких границ между зонами. Лимфоидные узелки в корковом веществе отсутствуют.

Преобладающими клетками являются лимфоциты - 96-97% и ретикулярные клетки 2-3%. Клетки других популяций иммунобласты, плазмобласты, макрофаги -единичны.

В 7-14-суточном возрасте начинается формирование зон лимфатических узлов. Соотношение коры и мозгового вещества составляет 1:1. Наиболее активно эти процессы происходят у самцов и самок в нижнечелюстном и заглоточном медиальном лимфатических узлах. Вероятно, это связано с тем, что корни нижнечелюстного и заглоточного медиального лимфатических узлов берут начало с передней части головы, собирают лимфу от глотки, пищевода и гортани (Маталасов В.П., 1990), соответственно раньше всех сталкиваются с антигенами различной природы, а значит и структурируются быстрее, чем остальные. В этих возрастных группах просматриваются первичные лимфоидные узелки овальной или округлой формы. Причем, у самок, в отличие от самцов, обособление лимфоидных узелков происходит активнее. К данному возрасту, они уже оформлены. На срезах нижнечелюстного и заглоточного медиального лимфатических узлов у самцов насчитывается один, у самок - два первичных лимфоидных узелка размером 67x100,5 мкм. Они относительно «малых» размеров и к этому возрастному периоду варьируют у самцов от 134x167,5 до 167,5x201 мкм, у самок от 100,5x134 до 134x167,5 мкм. Величина самого наименьшего лимфоидного узелка составляет 67x100,5 мкм (рис. 13, 14).

Рис. 13. Нижнечелюстной лимфатический Рис ]4 Заглоточный медиальный

узел самки норки в возрасте 7 суток. лимфатический узел самца норки в возрасте

Гематоксилин-эозин. 06.8 х ок. 10. 1 - кора; 2 7 сут(ж Гематоксилин-эозин. Об.8 х ок. 10.

- мозговая зона; 3 - формирующийся , _ кора; 2 _ мозговая 30на; 3 _

первичный лимфоидный узелок. формирующийся первичный лимфоидный

узелок.

К 21 суткам количество лимфоидных узелков в лимфатических узлах у животных возрастает. У самцов максимальное их число зафиксировано в нижнечелюстном лимфатическом узле - 6, в остальных их количество колеблется в пределах 3-4.

У самок, в отличие от самцов, к этому возрасту завершается процесс формирования зон, лимфатические узлы хорошо структурированы. Число лимфоидных узелков меньше (4-5), чем у самцов. Величина лимфоидных узелков остается прежней. В нижнечелюстном и заглоточном медиальном лимфатических узлах впервые выявлены герминативные центры. Митозы отсутствуют. У самцов на 21 сутки только в коре нижнечелюстного лимфатического узла зафиксированы незрелые плазматические клетки (1,00±0,14%), у самок они встречаются почти во всех лимфатических узлах (рис. 15, 16).

К месячному возрасту у самцов происходит окончательное формирование зон. Границы всех зон лимфатических узлов отчетливо просматриваются. Соотношение коры и мозгового вещества составляет 1:2. Каждая зона лимфатического узла характеризуется особенностями цитоархитектоники, при этом наиболее лабильными по клеточному составу являются герминативный центр и мякотные тяжи.

В этом возрасте в лимфоидных узелках заглоточного медиального и поверхностного шейного лимфатических узлов самцов просматриваются герминативные центры. У самцов и самок выявляются митозы. Их число у самцов составляет 2,00±0,14% (наибольшее - в заглоточном медиальном и подмышечном), у самок 3,00±0,24% (наибольшее - в заглоточном медиальном). Для самок этот показатель максимален среди всех возрастных групп, а у самцов наибольшее их количество наблюдается в возрасте трех месяцев (до 4%) в герминативном центре заглоточного медиального лимфатического узла.

У самцов число иммунобластов и плазмобластов увеличивается к месячному возрасту до 5%, затем к 3 месяцам снижается до 1% и вновь увеличивается в 8-месячном возрасте до 4%. При этом наибольшее их количество выявлено в герминативном центре нижнечелюстного лимфатического узла. К 18 месяцам число иммунобластов и плазмобластов остается на уровне 2-3%, причем у самцов этих клеток больше, чем у самок (Р<0,05).

Рис. пижнечелюстнои лимфатическим

узел самца норки в возрасте 21 сутки. Гематоксилин-эозин. Об.8 х ок.10. 1 - кора; 2 - мозговая зона; 3 - первичный лимфоидный узелок.

Рис. 16. Заглоточный медиальный лимфатический узел самки норки в возрасте 21 сутки. Гематоксилин-эозин. Об.8 х ок.10. 1 — кора; 2 - мозговая зона; 3 - формирующийся герминативный центр.

В месячном возрасте число незрелых плазматических клеток у самцов больше, чем у самок (у самцов 3-4%, у самок 1-2%). Локализуются они в основном в мякотных тяжах.

Лимфоциты, по данным электронно-микроскопических исследований самцов и самок норок месячного возраста, имеют округлое интенсивно окрашенное ядро, содержащее большое количество гетерохроматина. Мелкодисперсный хроматин рассеян в виде небольших глыбок по всему срезу ядра. Цитоплазма располагается в виде узкого тонкого ободка вокруг ядра с единичными митохондриями овальной формы и немногочисленными рибосомами (рис. 17).

В целом, в месячном возрасте ультраструктура лимфоцитов, иммунобластов (рис. 18) и плазмобластов (рис. 19), ретикулярных и зрелых плазматических клеток не имеет значительных отличий у самцов и самок.

В 1,5-месячном возрасте в лимфатических узлах количество лимфоидных узелков остается стабильным. У самцов к 1,5 месяцам в коре лимфатических узлов число иммунобластов и плазмобластов снижается с 4,00±0,32 до 1,00±0,18% (Р<0,05). Количество ретикулярных клеток находится в пределах 3%, митозов - 1-2%. Незрелые плазматические клетки встречаются регулярно, их число остается на одном уровне и составляет 2-3%. У самцов их больше, чем у самок. Митозы у самок в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков отмечены в нижнечелюстном, заглоточном медиальном, медиальном подвздошном и подколенном лимфатических узлах. Их количество в этом возрасте снижается до 1%, по сравнению с предыдущей возрастной группой.

Рис.17. Лимфоцит из лимфоидного узелка подмышечного лимфатического узла самки норки в возрасте 1 месяца: я - ядро; яд - ядрышко; ц -цитоплазма; м - митохондрии; р - рибосомы. Ув. х 12000 р.

Рис. 18. Иммунобласт из корковой зоны заглоточного медиального лимфатического узла самца норки в возрасте 1 месяца: я -ядро; яд - ядрышко; ц - цитоплазма; м -митохондрии; р - рибосомы. Ув. х 10000 р.

В 3-месячном возрасте у норок впервые обнаружены зрелые плазматические клетки (рис. 20). У самцов они выявлены в заглоточном медиальном и подмышечном лимфатических узлах (2%), у самок в нижнечелюстном и заглоточном медиальном -1,00±0,14%.

В возрасте 3 месяцев у самцов зафиксирована самая высокая митотическая активность клеток (4%) в заглоточном медиальном лимфатическом узле. Наблюдается некоторое снижение числа ретикулярных клеток до 2% в корковой зоне.

У самок количество митозов к 3 месяцам снижается с 3,00±0,24 до 1,00±0,14%, число незрелых плазматических клеток становится максимальным и в герминативном центре нижнечелюстного лимфатического узла составляет 3,00±0,24%.

Рис. 19. Корковая зона поверхностного шейного лимфатического узла самца норки в возрасте 1 месяца: 1 - лимфоциты; 2 - плазмобласты. Ув. х 5000 р.

Рис. 20. Зрелая плазматическая клетка из лимфоидного узелка нижнечелюстного лимфатического узла самки норки в возрасте 3 месяца: я - ядро; яд - ядрышко; митохондрии; эпс - эндоплазматическая сеть. Ув. х 15000 р.

К 3 месяцам ультраструктура клеток (лимфоциты, иммунобласты, плазмобласты, ретикулярные и плазматические клетки) у самцов и самок становится гетерогенной. В лимфоцитах количество митохондрий увеличивается почти в 3 раза, по сравнению с месячным возрастом (рис. 21).

Рис. 21. Лимфоцит из лимфоидного узелка подмышечного лимфатического узла самца норки в возрасте 3 месяца: я - ядро; яд - ядрышко; ц - цитоплазма; м — митохондрии; р - рибосомы. Ув. х 10000 р.

К 8 месяцам у самцов и самок наблюдается значительное увеличение лимфоидных узелков в лимфатических узлах. Лимфоидные узелки имеют двухрядное расположение. При этом у самцов они более многочисленны, чем у самок. Больше всего лимфоидных узелков встречается в заглоточном медиальном лимфатическом узле у самцов - до 8-9. В остальных лимфатических узлах их не более 7. У самок насчитывается 6-7 лимфоидных узелков.

В корковой зоне у 8-месячных самцов количество иммунобластов, плазмобластов и ретикулярных клеток вновь увеличивается, по сравнению с 3-месячными. Возрастает число ретикулярных клеток в заглоточном медиальном лимфатическом узле с 2,00±0,14 до 6,00±0,36%. Митозы единичны. Число незрелых плазматических клеток резко уменьшается, по сравнению с трех месячными животными (с 4 до 1%). Появляются неидентифицированные клетки (их количество варьирует от 1,00±0,14 до 2,00±0,18%).

Зрелые плазматические клетки отмечены во всех лимфатических узлах в этом возрасте, их число составляет 2%. У самок они встречаются чаще.

К 18 месяцам в лимфатических узлах у норок наблюдаются процессы, характерные для инволюции. Это проявляется в сглаживании зон, появление в них жировой ткани, уменьшение размера лимфоидных узелков до 167,5x201 мкм. Число лимфоидных узелков уменьшается до 5-6. В корковой зоне встречаются лимфоидные узелки неправильной формы (Р<0,05).

У самцов количество лимфоцитов в лимфоидных узелках лимфатических узлов достоверно больше, чем у самок на 8-11% (Р<0,05). Число иммунобластов и плазмобластов у самцов и самок уменьшается и остается в пределах 2-3%, по сравнению с предыдущим возрастом. У самцов с 8 месяцев количество ретикулярных клеток значительно уменьшается (2-3%), в сравнении с самками (34%). Количество макрофагов увеличивается до 4-5%, причем у самцов их больше, чем у самок (2%).

К 18 месяцам незрелые и зрелые плазматические клетки у самцов не выявлены, а у самок единичны. Становится больше неидентифицированных клеток (до 2-3%).

Митотическая активность клеток в герминативном центре лимфоидных узелков лимфатических узлов у самок колеблется в пределах от 1,00±0,14 до 2,00±0,18%, а у самцов они единичны (Р<0,05).

Клеточный состав в 8 и 18-месячном возрастах у самцов и самок имеет следующие различия. У самцов в правых лимфатических узлах лимфоцитов на 2-3%, ретикулярных клеток на 3-4%, макрофагов на 2-3% больше, чем в левых (Р<0,05). У самок в левых лимфатических узлах лимфоцитов на 1-3%, иммунобластов и плазмобластов на 2-3%, ретикулярных клеток на 2-4% больше, чем в правых (Р<0,05). По количеству зрелых, незрелых плазматических клеток и митозов имеются незначительные различия в правых и левых лимфатических узлах.

Среди всех исследованных лимфатических узлов самыми функционально «активными» с рождения и до 18 месяцев являются нижнечелюстной и заглоточный медиальный лимфатические узлы, клеточный состав которых, по сравнению с другими лимфатическими узлами, более разнообразен. Самым «слабо» функционально-активным является добавочный подмышечный лимфатический узел.

выводы

1. Установлены закономерности формирования лимфатических узлов у норок в постнатальный период развития. Количественные и качественные структурные признаки лимфатических узлов у норок определяются их топографией, клеточным составом, полом и возрастом животных и характеризуются гетерохронией.

2. Окончательное формирование лимфатических узлов у самцов и самок происходит после рождения и гетерохронно. У новорожденных животных подразделение на зоны и лимфоидные узелки отсутствуют. Первичные лимфоидные узелки выявлены с 7-суточного возраста. У самок появление герминативных центров и окончательное формирование зон происходит к 21 суткам, у самцов - к месяцу. Митозы впервые зафиксированы в месячном возрасте. У самцов максимальное их количество выявлено в 3 месяца (4%), у самок - в возрасте месяца (3%). За весь период постнатального развития у самцов более всего отмечено митозов (до 4%), иммуно - и плазмобластов (до 5%), по сравнению с самками. У самок колебания митозов составляют до 3%, иммуно-, плазмобластов и плазмоцитов до 4%. У самцов абсолютная масса лимфатических узлов больше, чем у самок на 1751%.

3. С периода новорожденное™ до 18 месяцев выявлена периодичность в развитии абсолютной массы лимфатических узлов. Наиболее интенсивное увеличение абсолютной массы большинства лимфатических узлов зафиксировано в период с 7 по 14 сутки (у самцов в 6-9 раз, у самок - в 3-6 раз), в период начала подкормки (с 21 по 45 сутки) - в 2-3 раза. В переходный период (с 61 по 120 сутки) - в 4-5 раз.

4. Наиболее функционально активными среди всех исследованных лимфатических узлов у норок является нижнечелюстной и заглоточный медиальный. Это выражается в более раннем появлении первичных лимфоидных узелков, более интенсивным обособлением на зоны (с 7-суточного возраста) и появлением формирующихся герминативных центров (на 21 сутки). За весь период постнатального развития в этих лимфатических узлах отмечено наибольшее количество лимфоидных узелков (у самцов - 8-9, у самок - 6-7), митозов (до 4%), иммуно- и плазмобластов (до 5%), незрелых плазматических клеток (до 4%), зрелых плазматических клеток (до 2%) и ретикулярных клеток (до 8%).

5. Цитоархитектоника соответствует структурному компоненту лимфатического узла. Преобладающими клетками во всех зонах являются лимфоциты (от 76 до 98%) и ретикулоциты (от 1 до 6%). С возрастом в лимфоцитах увеличивается количество митохондрий и рибосом. Дифференцировка плазмобластов в плазмоциты начинается с 14-суточного возраста в лимфоидном узелке лимфатического узла. С 21 суток митозы, плазмо-, иммунобласты и макрофаги локализуются, в основном, в герминативном центре лимфоидных узелков. Зрелые плазматические клетки обнаруживаются в 3-месячном возрасте в корковой зоне и мякотных тяжах.

6. В 8 и 18-месячном возрастах у самцов и самок норок установлена морфометрическая асимметрия лимфатических узлов. Длина (до 26%), ширина (до 19%), толщина (до 11%) и абсолютная масса (до 32%) большинства правых

лимфатических узлов у самцов больше, чем левых. У самок аналогичные параметры левых лимфатических узлов больше, чем правых по длине (до 18%), по ширине (до 14%), по толщине (до 11%) и абсолютной массе (до 25%) (Р<0,05).

7. Начальные инволютивные процессы во всех лимфатических узлах у самцов и самок норок происходят с 18-месячного возраста равномерно. Это выражается в сглаживании зон, уменьшение количества и размера лимфоидных узелков, расширении мозговой зоны, появление в них жировой ткани. Изменение клеточного состава выражается в снижении числа митозов, иммунобластов и плазмобластов, увеличении количества неидентифицированных клеток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы по возрастной и половой морфологии лимфатических узлов норок с учетом биологических периодов могут быть использованы в звероводстве на промышленной основе и ветеринарии.

2. Исследование морфогенеза лимфатических узлов необходимо использовать в качестве материала для написания монографий, учебников, учебных пособий, в учебном процессе при чтении лекций и ведении лабораторно-практических занятий по морфологическим дисциплинам на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах учебных заведений.

3. Количественные и качественные показатели лимфатических узлов необходимо использовать в научно-исследовательской работе в качестве морфологической нормы.

4. Фотографии, отражающие особенности лимфатических узлов у норок, можно использовать в атласах по морфологии.

5. Состояние лимфатических узлов необходимо учитывать при постановке патологоанатомического диагноза.

6. Материалы диссертационной работы используются в учебном и научном процессах в 16 вузах РФ на кафедрах ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гибадулин, А.Д. Распределение абсолютной массы лимфатических узлов в левой и правой половинах тела у норок / А.Д. Гибадулин, H.A. Сунцова, В.З. Газизов, H.A. Кошкина // Материалы Международной студенческой научной конференции. - Знания молодых-новому веку. - Киров, 2012. - С. 43-44.

2. Русских, Д.А. Явление асимметрии у животных и человека / Д.А. Русских, H.A. Сунцова, В.З. Газизов, H.A. Кошкина // Материалы Международной студенческой научной конференции. - Знания молодых-новому веку. - Киров, 2012.

- С. 77-79.

3. Макаров, Д.А. Изменчивость абсолютной массы лимфатических узлов в левой и правой половинах тела у норок / Д.А. Макаров, H.A. Сунцова, В.З. Газизов, H.A. Кошкина // Материалы Международной студенческой научной конференции.

- Знания молодых-новому веку. - Киров, 2012. - С. 77-79.

4. Кошкина, H.A. Морфологические особенности лимфатических узлов у самок норок / H.A. Кошкина, В.З. Газизов, H.A. Сунцова // Материалы

Международной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и соискателей: Часть 1.-Киров, 2012.-С. 115-117.

5. Кошкина, H.A. Особенности асимметрии некоторых контрлатеральных лимфатических узлов у самцов и самок норок / H.A. Кошкина, H.A. Сунцова, В.З. Газизов // Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства: Сб. материалов Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова (22-25 мая 2012 г.). -Киров, 2012.-С. 619-620.

6. Кошкина, H.A. Морфологические особенности и клеточный состав контрлатеральных лимфатических узлов у самок норок / H.A. Кошкина, H.A. Сунцова, В.З. Газизов // Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2013. -№2 (18).-С. 21-25.

7. Кошкина, H.A. Клеточный состав лимфатических узлов у самцов и самок норок / H.A. Кошкина, H.A. Сунцова, В.З. Газизов // Механизмы и закономерности индивидуального развития человека и животных. Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию заслуженного деятеля РФ, д.б.н., профессора Тельцова Л.П. - Саранск, 2013. - С. 7579.

8. Кошкина, H.A. Морфологические особенности лимфатических узлов норок / H.A. Кошкина // Вестник ветеринарии. 2013. - № 3 (66). - С. 43-47.

9. Кошкина, H.A. Морфологические особенности лимфатических узлов у самцов и самок норок / H.A. Кошкина, H.A. Сунцова // Вестник ветеринарии, 2014. - № 70 (3). - С. 41-44.

10. Кошкина, H.A. Цитоархитектоника поверхностных лимфатических узлов у самок норок в раннем постнатальном онтогенезе / H.A. Кошкина, H.A. Сунцова // Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2014. - №4 (24). - С. 42-46.

Подписано к печати 17.07.2015 г. Формат 60x84/16. Объем 1,4 п.л. Тираж 110 экз. Заказ 280.

Отпечатано в ООО «Издательство «Аверс». 610020, г. Киров, ул. Труда, 70. т.: (833-2) 47-42-77, +7 (905) 870-88-77. e-mail: avers@kirovnet.net