Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы и важнейшие физиологические системы организма интактных и опухолевых животных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы и важнейшие физиологические системы организма интактных и опухолевых животных"

На правах рукописи

1М&4 иаЖ

Иванова Ирина Павловна

ВЛИЯНИЕ ВЫСОКОЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ИМПУЛЬСНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫИ ВАЖНЕЙШИЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ИНТАКТНЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ ЖИВОТНЫХ

03.00.13 физиология 16.00.02 -патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Нижний Новгород-2006

Работа выполнена ГОУ ВПО Нижегородской государственной медицинской академии в отделе биохимии Центральной научно-исследовательской лаборатории, и ФГОУ ВПО Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии на кафедре физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных

Научные консультанты

Доктор биологических наук, профессор Мухина Ирина Васильевна

Доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, Орлов Борис Николаевич

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Тельцов Леонид Петрович

Доктор ветеринарных наук, профессор Пахмутов Игорь Аркадьевич Доктор биологических наук, профессор Самарцев Виктор Николаевич

Ведущая организация:

НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН

Защита диссертации состоится 2 ноября 2006 года в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 220.047.01 при ФГОУ ВПО Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия, 603107, г. Нижний Новгород, проспект Гагарина, 97.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан 28 сентября 2006 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета г£Ш£ли/ М.Н.Иващенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность

Активация или угнетение свободнорадикальных процессов имеет важное значение при развитии отклика клеточных мембран на физико-химические воздействия. Баланс свободных радикалов, постоянно образующихся в организме, контролируется антиоксидантной системой, и поддерживается на определенном стационарном уровне (Барабой В.А., 1993, Storey K.B.,1996, Владимиров Ю.А., 1998, 2000, Зенков Н.К., 2001, Vicini F, Harris J. 2002, Костток В.А., Потапович А.И., 2004). Избыточное образование радикальных продуктов или недостаточная активность антиокислителей приводит к изменению ненасыщенности липидов, нарушениям структуры и функции мембраносвязанных ферментов, нуклеиновых кислот и, в конечном счете, к гибели клеток (Бышевский А.Ш., 1994, Кулинский В.'И., 1999, Ченцов Ю.С. 2004). Поэтому исследование факторов, регулирующих интенсивность свободнорадикальных реакций ' в биологических системах, является актуальным.

В этой связи представляют особый интерес высокоэнергетические импульсные электромагнитные воздействия. Во время генерации высоких импульсных напряжений миллисекундных и наносекундных длительностей за счет высокой напряженности электромагнитного поля в межэлектродном промежутке нарабатываются фотоны с высокой энергией и скоростью, являющиеся основными участниками процессов ионизации, диссоциации и рекомбинации возбужденных молекул и радикальных продуктов (Авраменко Р.Ф.,1990, 1992, Pettersson J.B., Lindroth Н.С. 1992, Райзер Ю.П. 1992, Базелян Э.М., 1997, 1998, Franke К.-Р., Meissner Н. 2000, Ивановский А. В., 2000, Бугаенко JI.T., 2002). Высокоэнергизированные частицы излучают энергию в видимом и ультрафиолетовом диапазоне (Спиров Г.М., 2004). Изменяя интенсивность и длительность излучения при генерации высокоэнергетических импульсных факторов, можно добиться увеличения продукции радикалов или наоборот процессов их рекомбинации (Верещагин И.П., 2000, Hoeben W.F., 2000, Пискарев И.М., 2000, 2001,2003).

Это свойство высокоэнергетических импульсных воздействий может быть использовано для стимуляции каскада окислительных реакций в опухолевых клетках и торможения свободнорадикальных процессов в организме с опухолью. Известно, что опухолевые клетки обладают высоким уровнем антиоксидантной активности, а организм опухоленосителя свободнорадикальной (Козлов Ю.П., 1973, Бурлакова Е.Б. 1982, Liebler D.C., 1993, Дейчман Г.И., 2000, Алехина С.П., Щербатюк Т.Г. 2003).

В основе существующих в настоящее время лимитирующих осложнений нехирургических методов лечения злокачественных новообразований -химиотерапии и радиационной терапии (кардиотоксичность,

пневмотоксичность, кожная токсичность) - лежат механизмы свободнорадикальных реакций;

До настоящего времени исследования по изучению влияния высокоэнергетических импульсных воздействий проводились только на

клеточном уровне (Johnson Т., 2003, Hair P.S.,2003, Chen N., 2004), при этом свободнорадикальные процессы и структурно-функциональная целостность различных систем организма остаются практически не изученными.

Окислительно-востановительные свойства импульсных разрядов используют при создании озонаторов и других устройств медицинского назначения (Karelin V.l., 1999, Sladec R.E.J. 2003, Kolb J., 2003, Перетяган СЛ., 2005). Известны работы по изучению биологических эффектов наносекундных разрядов в культуре опухолевых клеток (Schoenbach, К.Н., 1997, Johnson Т., 2003, Beebe S.J. 2003).

Исследование физико-химических и биологических эффектов высокоэнергетических импульсных воздействий, выявление режимов этих воздействий, дестабилизирующих опухоль, а также метаболических процессов в интактном организме и организме с опухолью являются актуальными в поиске высокоэффективных методов контроля и коррекции свободнорадикальных процессов в организме в норме и при патологии.

Цепь исследования: оценить влияние высокоэнергетических импульсных электромагнитных воздействий на свободнорадикальные процессы и важнейшие физиологические системы организма интактных крыс и с перевитой лимфосаркомой Плисса.

В соответствии с целью решались следующие задачи:

1. Изучить особенности изменения свободнорадикальных реакций и структурно-функциональных свойств клеточных мембран in vitro под действием высокоэнергетических импульсных разрядов.

2. Выявить закономерности действия высокоэнергетических импульсных разрядов на про - и антиоксидантную активность систем организма крыс.

3:- Оценить влияние высокоэнергетических импульсных разрядов на обменные процессы и жизненно важные физиологические системы.

4: Провести морфофизиологическую оценку влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на внутренние органы интактных животных, определить органы мишени.

5. Проанализировать изменения свободнорадикальных и обменных процессов крью с экспериментальной лимфосаркомой Плисса при высокоэнергетических импульсных воздействиях. Изучить влияние высокоэнергетических воздействий на жизненно важные физиологические системы крыс с опухолью.

6. Оценить структурные изменения ткани лймфосаркомы Плисса на фоне высокоэнергетических импульсных воздействий.

■ Научная новизна Впервые: .....

• изучены особенности свободнорадикальных реакций, оценены структурно-функциональные свойства клеток in vitro при высокоэнергетических импульсных воздействиях в широком интервале доз; установлен различный временной диапазон интенсификации свободнорадикальных процессов в клетках крови, лймфосаркомы Плисса и микроорганизмах;

• показано торможение пролиферативной активности клеток, выявлен бактерицидный и фунгицидный эффект высокоэнергетических импульсных

искровых разрядов;

• определен основной действующий фактор высокоэнергетического импульсного излучения, оказывающий биологическое действие - некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазона;

• установлены закономерности изменения свободнорадикального гомеостаза у крыс при различных режимах высокоэнергетических импульсных воздействий, показаны динамические изменения свободнорадикальных процессов в цельной крови, плазме и тканях внутренних органов интактных крыс;

• выявлен режим импульсного воздействия, увеличивающий фагоцитарную активность крови;

• проведено комплексное морфофизиологическо'е исследование, влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на функциональную активность центральной нервной системы, сердца, печени и почек крыс;

• установлены режимы, изменяющие выделительную функцию почек;

• показано снижение тревожно-фобических реакций крыс при высокоэнергетических импульсных воздействиях;

• выявлено снижение уровня молекулярных продуктов перекисного окисления липидов, нормализация антиоксидантной активности, снижение интегрального показателя эндогенной токсичности, нормализация обменных процессов у крыс с лимфосаркомой Плисса при высокоэнергетических импульсных воздействиях;

• изучены в динамике структурные изменения в ткани лимфосаркомы Плисса после воздействия высокоэнергетическими импульсными разрядами;

• показана активация апоптотических процессов в опухолевой ткани при воздействии высокоэнергетическими импульсными разрядами в течение 50-300 секунд;

•разработана концептуальная схема, объясняющая структурно-функциональные изменения в опухолевой ткани, снижение системного влияния опухолевого процесса на гомеостаз животных с лимфосаркомой Плисса под влиянием высокоэнергетического импульсного излучения. Теоретическая значимость работы

Анализ проведенных исследований позволяет раскрыть механизмы биологических эффектов высокоэнергетических импульсных воздействий и дать физиологически обоснованные рекомендации по рациональному использованию их в медико-биологических целях.

Совокупность экспериментальных данных, полученных с использованием многоуровневого подхода (клетки, ткани, органы, целостный организм в норме и патологии) и комплекса физиологических, биофизических, биохимических и морфологических методов позволили оценить метаболические сдвиги в организме 1фыс в ответ на действие высокоэнергетических импульсных разрядов. Результаты проведенных исследований позволили выявить бактерицидный и фунгицидный эффект -высокоэнергетических импульсных воздействий. Полученные в работе данные доказывают снижение пролиферативной активности опухолевых клеток за счет свободнорадикальной

дестабилизации мембранного аппарата и внутриклеточных структур, а также отсутствие -/повреждающего- действия* изученных режимов » высокоэнергетических импульсных воздействий для организма в делом независимо от наличия опухоли.

Полученные данные имеют фундаментальное значение для биологии, ветеринарии и медицины, ' : . -

Практическая значимость работы -

Защищены патентами на изобретение РФ № 2020945 и № 2112982 способы активации антиоксидантной системы организма и оценки антиоксидантной активности биологических субстратов. ; . . " ,

Результаты - исследованийг по активации антиоксидантных систем организма крыс, торможению - пролиферативной активности ^ клеток, бактерицидной и фунгицидной активности высокоэнергетических импульсных -, разрядов положены в основу разработанных совместно с ВНИИЭФ г. Сарова в 2003-2004 гг. устройств «VISTA» и «БРИГ», предназначенных для медико-биологических и электрохимических исследований в специализированных профильных научно-исследовательских учреждениях (ЦНИЛ НижГМА НЛовгорода, РФЯЦ ВНИИЭФ:г. Сарова). ■

■ Положения. выносимые на защиту: . . ,

. 1. Высокоэнергетические импульсные воздействия в широком диапазоне доз неоднозначно изменяют свободнорадикальные процессы клеток крови крыс, клеток лимфосаркомы Плисса и одноклеточных микроорганизмов in vitro.

2. Импульсные высокоэнергетические воздействия вызывают, деструктивные изменения в надмембранных, мембранных и внутриклеточных структурах опухолевых клеток и , микроорганизмов, определяя „торможение их пролиферативной активности.

3. Воздействие высокоэнергетическими импульсными, разрядами приводит к изменениям свобода орадикальных и обменных процессов в .организме интактных животных и живогных с перевитой лимфосаркомой.

4. Высокоэнергетические импульсные разряды не вызывают значительных морфофункциональных изменений жизненноважных органов и

.. физиологических систем организма интактных крыс и с перевитой опухолью.

5. Регионарное. воздействие высокоэнергетических импульсных разрядов на область перевитой подкожно лимфосаркомы Плисса снижает темпы роста опухоли и уменьшает ее системное влияние на организм. ^ v Апробация работы . . . >

Основные результаты диссертации • доложены-, и обсуждены на: Республиканской научно-практической конференции ."Актуальные проблемы физико-химической медицины" (Конаково, 1988); Всесоюзном совещании «Люминесцентный - анализ в медицине - и биологии и его аппаратурное обеспечение» (Рига, 1989); International conference on «Regulation free radical reactions» . (Varna, ■ 1989); 3-rd Congress ; of - «International Association of Gerontology European Region - clinical section» (Thessaloniki, Greece, 1996); 2 International Symposium- on Ozone—Applications . (Havana, Cuba, 1997);

Международном симпозиуме «Актуальные проблемы биофизической медицины» (Киев, 2000); Международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы клинической и экспериментальной терапии" (Минск, 2000); II . Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000); 3 Internationa] Symposium on Ozone Application (Havana, Cuba, 2000); VI Международной конференция "Биоантиоксидант" (Москва, 2002); Международном совещании "Человек и электромагнитные поля" (Саров, 2003); Региональной научно-практической конференции "Новые диагностические и лечебные технологии в онкологии" (Томск, 2003); International conference "Reactive oxygen and nitrogen species antioxidants and human health" (Smolensk, 2003); 7-м конгрессе Международной ассоциации Морфологов (Казань, 2004); 3-м съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); Международном научном семинаре «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии» (Саров, 2004); 4-м Международном симпозиуме «Актуальные проблемы биофизической медицины» (Киев, 2004); Российском съезде Физиологов (Екатеринбург, 2004); 3-м Всероссийском Конгрессе по Медицинской Микологии (Москва, 2005); 3-й международной научно-практической конференции "Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения" (Томск, 2005); Всероссийском симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика, принципы коррекции» (Волгоград, 2005); I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); VII Международной конференции «Импульсные лазеры на переходах атомов и молекул» (Томск, 2005); Международной конференции "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" (Смоленск, 2005); Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2005); VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Озон в биологии и медицине» (Нижний Новгород, 2005); 8-м Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2005» (Пущино, 2005).

Публикации

Основные научные результаты по материалам диссертации опубликованы в 54 научных работах, из них в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях рекомендованных ВАК РФ 19 публикаций, и 2 патента на изобретения РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 350 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, с выводами и заключениями по каждой главе, общими выводами по работе и общим заключением. Список цитируемой литературы включает 404 публикации (322 отечественных и 82 зарубежных источника). Работа содержит 66 рисунков и 53 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В работе использовались высокоэнергетические импульсные устройства, продуцирующие: импульсные искровые разряды (ИР) миллисекундной длительности; коронные разряды (КР) наносекундной длительности, генерирующие некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазона (180-800 нм), созданные на базе ВНИИЭФ г. Сарова. Источник генерации ИР работал с заданным распределением импульсов во времени в режимах с частотой 0,2-1,0-11,0 Гц (длительность одного импульса 1-10 миллисекунд, энергия - 5 Дж в 1 импульсе). Напряженность электромагнитного поля между электродами достигалаЮ кВ/см, ток в канале искрового разряда достигал 1,0 кА. Стримерный КР генерировался в газовой фазе в сильно неоднородном электрическом поле между 2-мя электродами. Первый электрод с малым радиусом кривизны поверхности (игольчатый электрод). Второй электрод плоский диаметром 7-8 см. Источник излучения КР работал с заданным распределением импульсов во времени в режимах с частотой 0,2 и 22,0 Гц, (длительность одного импульса 50 наносекунд, энергия - 100-500 мДж). Напряженность электромагнитного поля между электродами достигала 50 .кВ/см, ток в канале коронного разряда — 80 А. Излучение и плазма ИР и КР неравновесны.

Таблица 1

_Основные этапы исследования__■

Этапы исследования Экспериментальные серии Число крыс

Влияние ИР на СРП в системах in vitro 0,9 % p-pNaCl (п=20) 0,9 % р-р NaCl+HjOz (п=20) -

Диапазон режимов ВЭИВ ИР: от 5 до 900 сек-1 Гц Плазма крови интактн. (п=60) Плазма крови ЛСП (п=60) 8 8

Влияние ИР, КР на СРП клеток in vitro Диапазон режимпн ВЭИВ ИР: от 5 до 600 сек., 0,2 и 1,0 Гц КР: от 10 до 100 сек - 0,2 Гц Эритр. интактн. (п= 108) Эритр.опух. (п=110) Клетки ЛСП (п-68) Staph.epidermidis (п=35) £ со/i (п=35) С. albicans (п=40) Букал. эпителий (п= 15) 28 13 12

Влияние ВЭИВ на организм крыс Диапазон режимов ВЭИВ ИР: от 100 до 800 сек. 0,2 и 1,0 Гц КР: от S до 50 сек. ОД Гц Контроль(п=55) ВЭИВ 1-е сутки n/в (п=154) ВЭИВ 6-ть суток п/в (п=122) ВЭИВ 12-ть суток п/в (п=84) ВЭИВ выживаемость (п=60) 475

Влияние ВЭИВ на крыс с лимфосаркомой Диапазон режимов ВЭЙВ ИР: от! 00 до бООсек. - 0,2-1,0-11,0 Гц .. КР: от 5 до 200 сек. - 0,2 и 22,0 Гц ЛСП Контроль (п=75) ЛСП+ВЭИВ 1 -е сутки (п=52) ЛСП+ВЭИВ 6-ть суток п/в (п=234) ЛСП+ВЭИВ 12-ть суток п/в (п=12) 373

■ ■ ■ '■ ■ . Всего крыс ■■•.■■■■■■ • . 917

Принятые- i сокращения: ВЭИВ - высокоэнергетические импульсные воздействия, СРП - свободнорадикальные процессы, ЛСП — лимфосаркома П.чисса, п/в - после воздействия.

При обработке ИР исследуемые объекты in vitro и in vivo помещали в зоне

излучения под электродами. При воздействии КР исследуемые объекты помещали в зоне излучения между плоским и игольчатым электродами. В экспериментах in vitro воздействию подвергали физиологический раствор, плазму крови крыс, взвесь эритроцитов, эпителиоцитов, микроорганизмов и клеток лимфосаркомы Плисса. Эксперименты in vivo проведены на нелинейных крысах самцах и крысах с перевитой лимфосаркомой массой 230±10 г. Основные этапы исследования, экспериментальные серии и количество животных представлены в таблице 1. Эксперименты in vitro

Влияние ВЭИВ на интенсивность и длительность свободнорадикальных процессов изучали при обработке стерильного, физиологического раствора и плазмы крови крыс. Обработку ВЭИВ проводили в нескольких режимах (Таблица 1) и регистрировали спонтанное свечение ХЛ (ХЛ) в течение 30 сек. -30 мин.

Глубину структурно - функциональных изменений на клеточном уровне после воздействия ВЭИВ, исследовали на эритроцитах интактных и крыс с опухолью, бактериальных и фунгальных клетках, букальных эпителиоцитах человека и клетках лимфосаркомы. Пробы анализировали в динамике в течение 24 час. после воздействия ВЭИВ. Контролем служила взвесь клеток без воздействия.

Для приготовления взвеси эритроцитов животных декапитировали под эфирным наркозом, гепаринизированную кровь осаждали, эритроциты трижды отмывали забуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,4) и готовили суспензию в растворе Хенкса (1:4).

Культуры бактерий и Candida albicans взяты из коллекции кафедры микробиологии и иммунологии НижГМА. Бактерии выращивали на мясо-пептонном агаре (МПА), С. albicans - на агаре Сабуро. Из суточной культуры готовили взвесь в забуференном физиологическом растворе (ЗФР) в концентрации 1"105 -Г103 кл/мл. После воздействия ВЭИВ суспензию микроорганизмов

(0,1 мл) засевали на чашки Петри со специальными или селективными средами методом "сплошного газона". После инкубации (24 час., 37°С), подсчитывали количество КОЕ (колониеобразующих единиц) на каждой чашке.

Букальные эпителиоциты получали у здоровых доноров, путем соскоба эпителия с внутренней поверхности щеки, дважды отмывали ЗФР (40g, 5 мин) и готовили взвесь в концентрации 106 кл/мл. После обработки ВЭИВ клетки инкубировали с суспензией С. albicans Г107 (30 мин, 37°С). Эпителиоциты трехкратно отмывали ЗФР от неприкрепившихся кандид (40g, 5 мин). Из осадка эпителиоцитов готовили мазок, который после фиксации этанол-эфирной смесью окрашивали 0,25% раствором азура А. Определяли индекс адгезии (среднее количество кандид в пересчете на один эпителиоцит, учитывали 100 клеток).

Взвесь опухолевых клеток получали измельчением опухолевой ткани в стерильном растворе Хенкса. Опухолевую взвесь (1х" 106) подвергали однократному воздействию ВЭИВ. Изучали уровень свободнорадикальных

процессов, состояние надмембранных структур, фосфолипидный состав мембран и жизнеспособность клеток. Эксперименты in vivo

Эксперименты in vivo с интактными (здоровыми) животными были выполнены на 475 белых нелинейных крысах-самцах. Животных содержали в стационарных условиях вивария на стандартном рационе питания.

Таблица 2

Методы исследования_

Свободнорадикаль-ные процессы и состояние проокси-дантной системы 1.Уровень хемипюминесценции (Imax и вхл) (Кузьмина Е.И., 1983); 2. Молекулярные продукты ПОЛ: диеновые коньюгаты (ДК), триеновые коньюгаты (ТК) (Камышников B.C., 2000), малоновый диальдегнд (МДА -ТЕК активные продукты), индекс окисленности (ИО) (Smith J.В., 1976)

Состояние антиоксидантной системы 1. Суммарная антиоксидантная активность (АОА= 1 / вхл); 2. Активность супероксцодисмутазы (СОД) (Nishicimi M., 1972), 3. Активность каталазы (Aebi H., 1970), 4. Концентрация витамин Е (Кмышников B.C., 2003)

Функциональное состояние клеток крови 1 .Количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов; 2. Уровень гематокрита, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), концентрация гемоглобина (Меньшиков В.В., 1999); 3. Резистентность эритроцитов, спонтанный гемолиз эритроцитов (Гиттельзон А.И., ТерсковВ.Н., 1962)

Фагоцитарная активность 1. Показатель индуцированной и спонтанной хемилюминесценцни нейтрофильных гранулоцитов (Tono-Oka Т., 1983 .Thomas V.L.et al., 1988)

Оценка функции сердца 1 .Активность аминотрансфераз (АСАТ, АЛАТ) (Камышников B.C., 2003)

Оценка двигательной активности и тревожнофобичес-кого состояния 1 .Двигатеотная активность 2.Тревожно-фобическое состояние (Буреш Я.,1991)

Функциональная активность гепатоцитов 1. Активность аминотрансфераз 2.Концентрация холестерина (Камышников B.C., 2000, 2003)

Состояние выделительной системы 1 .Концентрация мочевины, креатинина 2.Клиренс креатинина, (Камышников B.C., 2000,2003)

Степень эндогенной интоксикации организма 1 .Концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) (Малахова М.Я., 1995)

Белковый обмен 1.Общий белок (Камышников B.C., 2000) 2.Концентрация олигопептидов (Малахова М.Я., 199S) 1 .Концентрация мочевины (Камышников B.C.,2003)

Углеводный обмен ¡.Концентрация лактата, пирувата, глюкозы (Камышников B.C., 2003)

Липидный обмен, фосфолипидный состав клеток ЛСП 1 .Концентрация холестерина (ХЛ), триглицеридов (ТГ), ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП (Камышников B.C., 2000). 2.Экстракция липидов методом Folch (Folch, 1959). 3.Разделение фосфолипидов по фракциям (Шаршунова М., 1980).

Морфологическая оценка внутренних органов и опухолевой ткани Методы оптической микроскопии (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996)

Перед проведением обработки ВЭИВ интактных животных делили на серии (Таблица 1). Крыс наркотизировали диэтиловым эфиром. Троекратной обработке ВЭИВ подвергали область передней брюшной стенки. Обработку проводили один раз в сутки. Кровь, плазму крови, ткани органов отбирали для

исследования в 1-е, 6-е и 12-е сутки после воздействия. Контролем служили кровь, плазма крови и ткани животных, не подвергавшихся воздействию.

Эксперименты in vivo на животных с экспериментальной перевитой лимфосаркомой проведены на 373 белых нелинейных крысах-самцах. Животным подкожно в область правой нижней трети передней брюшной стенки трансплантировали клетки лимфосаркомы Плисса.

Лимфосаркома Плисса представляет собой соединительнотканную метастазирующую опухоль с интенсивной инфильтраций пограничных тканей: соединительной, жировой и мышечной. Штамм лимфосаркомы Плисса (Плисс Б.Б., 1962) получен из Банка опухолевых штаммов ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН (г. Москва). Первый пассаж выполняли 2-м крысам по 0,5 мл 30% взвеси клеток из ампулы. Для поддержания штамма выполняли последующие пассажи крысам по 1,0 мл 50% взвеси опухолевой ткани в растворе Хенкса.

Перед проведением обработки ВЭИВ крыс с лимфосаркомой Плисса делили на серии (Таблица 1) и наркотизировали диэтиловым эфиром. Троекратному воздействию импульсными факторами подвергали область передней брюшной стенки в месте трансплантации опухоли. Обработку проводили один раз в сутки. Воздействие на область опухоли начинали после того, как опухолевый узел достигал объема не менее 1,0 см3. На 6-е сутки после троекратного воздействия наркотизированных крыс декапитировали. Кровь, плазму крови, ткани органов и опухоли отбирали для биохимического исследования на 6-е сутки после воздействия. Ткань лимфосаркомы для морфологического анализа забирали в 1-е, 6-е и 12-е сутки после ВЭИВ. В контрольной группе выполняли те же исследования в аналогичные сроки. Основные методы исследований представлены в таблице 2.

Статистическая обработка. Данные, полученные в эксперименте, были обработаны статистически на IBM PC/AT с помощью пакетов прикладных программ EXCEL, Statistica — 6.0, и статистической диалоговой системы "Stadia" версия 4.51 с использованием методов одномерной статистики.

Результаты представлены в виде М±ш, где М - среднее арифметическое, ш — ошибка среднего. Достоверность различий между группами определяли по критерию t Стьюдента и критерию Вилкоксона. Две выборки считались принадлежащими к разным генеральным совокупностям (являлись достоверными) при р<0,05 (Гланц С., 1999).

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.Оценка влияния высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы в системах in vitro

В механизме фотобиологического действия высокоэнергетического импульсного излучения определяющим является поглощение энергии световых квантов атомами и молекулами. В результате образуются электронновозбужденные состояния молекул с переносом энергии кванта (внутренний фотоэффект), что влечет за собой электролитическую диссоциацию и ионизацию биологических молекул, и разрушение ковалентных

связей.

Наиболее важным субстратом, воспринимающим оптические воздействия, в организме является водно-солевая среда, составляющая 2/3 массы млекопитающих. Поэтому первоначально была проведена оценка изменений свободнорадикальных реакций в физиологическом растворе.

Показано, что при обработке высокоэнергетическим импульсным излучением наблюдается возрастание свободнорадикальной активности в физиологическом растворе (без добавления усилителей ХЛ). При увеличении времени обработки от 5 до 50 сек. происходит увеличение уровня ХЛ от 0,3±0,001 мВ до 1,3±0,02 мВ (р<0,05), соответственно. Свечение ХЛ было стабильным в течение нескольких минут, через 20 минут происходило незначительное постепенное снижение уровня ХЛ до 1,1±0,006 мВ, различия достоверны, р<0,05.

При обработке физиологического раствора ИР за счет выбивания электронов из молекул воды образуются радикалы, активные формы кислорода и перекись водорода. Основная часть радикальных продуктов имеет достаточно короткое время жизни 10"6—10~9 сек., однако к активным формам кислорода относится перекись водорода, время жизни которой на несколько порядков больше. При внесении в физраствор 0,1 мл 3% Н202 был зарегистрирован уровень свечения ХЛ в 3,7±0,04 мВ, достоверно р<0,05 более высокий по сравнению с обработкой ИР 5 и 50 сек.(0,3±0,001 мВ и 1,3±0,02 мВ соответственно), однако после обработки ИР физиологического раствора с Н202 свечение не регистрировалось. Эти данные позволили заключить, что импульсное воздействие, а также поток электронов из межэлектродной области вызывают разложение Н202 на О' и ОН", которые, в свою очередь, рекомбинируют и образуют Н20, не способную светиться.

Таким образом, высокоэнергетическое импульсное воздействие вызывает нарастание или рекомбинацию радикальных продуктов в зависимости от первоначального свободнорадикального статуса субстрата.

Активация свободнорадикальных процессов и их интенсификация под действием физико-химических факторов может приводить к необратимым нарушениям в биомембранах. В норме свободнорадикальные процессы поддерживаются на определенном стационарном уровне благодаря активности антиоксидантной системы.

При оценке влияния высокоэнергетических импульсных воздействий (КР и ИР) на функциональное состояние мембран эритроцитов выявлено, что через сутки в крови интактных крыс по сравнению с необлучениой кровью этих же крыс происходит достоверное увеличение резистентности клеток, снижается количество гемолизированных эритроцитов в 2,7-1,5 раза (Рис. 1). Гемолиз снижается с увеличением, времени и энергии воздействия. Одновременно возрастает уровень гемоглобина по сравнению с контрольной серией в 3-7 раз при воздействии КР (Рис. 1Б) и до 5 раз при воздействии ИР (Рис.1 А). Эритроциты крыс с опухолью в контрольной серии в 2 раза более устойчивы к спонтанному гемолизу,„чем эритроциты интактных животных. Резистентность эритроцитов животных, с опухолью возрастает в 2,1 раза после воздействия КР

в течение 50 сек., более продолжительное воздействие КР в течение 100, 200, 400 сек. повышает уровень гемолиза эритроцитов животных с экспериментальной опухолью до 1,7 раза.

Рис. 1. Количество негемолизированных эритроцитов (ЕР) и концентрация внеклеточного гемоглобина (Hg) в крови интактных (Инт) крыс и крыс с опухолью (Опух.) после обработки искровыми разрядами (ИР) (А) и коронными разрядами (КР)(Б) в различных диапазонах в эксперименте in vitro. *- различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

Таким образом, наименее повреждающее действие на эритроцитарные мембраны интактных крыс и крыс с опухолью оказывают режимы: КР в течение 50 сек. и ИР в течение 100 и 200 сек.

Свободнорадикальные реакции эритроцитов и плазмы крови интактных крыс и с перевитой опухолью в ответ на воздействие ИР и КР представлены в таблице 3. После воздействия на цельную кровь интактных животных искровым разрядом в течение 5, 25, 100, 600 сек. светосумма ХЛ не изменялась. Более чувствительны к воздействию искровым разрядом оказались эритроциты.

Воздействие ВЭИВ в течение 5 сек. на суспензию эритроцитов интактных животных приводило к возрастанию уровня индуцированной ХЛ в 3,1 раза. При увеличении времени воздействия до 25 и 100 сек. происходило снижение XJT до контрольных значений, обработка в течение 600 сек. приводила к 30% снижению ХЛ по сравнению с контролем. После воздействия на кровь опухолевых животных искровым разрядом длительностью 5, 25, 100, 600 сек. светосумма ХЛ снижалась в 1,8-3,2 раза. Причем с увеличением дозы происходило все большее снижение уровня ХЛ. Воздействие на взвесь опухолевых клеток и кандид искровым разрядом длительностью 25 и 100 сек. увеличивало уровень индуцированной ХЛ в 1,3-1,5 и 2,5-5 раз, соответственно (Таблица 3). Таким образом, высокоэнергетические импульсные воздействия вызывали развитие и рекомбинацию радикальных реакций клеточных взвесей в

зависимости от времени воздействия. Увеличение времени воздействия приводило к увеличению проницаемости мембран и снижению показателей ХЛ ниже контрольных значений.

Таблица 3

Интенсивность хемилюминесценции (S, mV) цельной крови, плазмы крови, эритроцитов крыс, клеток кандид и лимфосаркомы после воздействия ИР разной длительности в экспериментах in vitro, (M±m)_

Серия Цельная кровь Плазма крови Взвесь клеток

Интак. Опухол. Интакт. Опухол. Эр.интак. Кандиды Опух.кл.

Контроль 12,29± 1,23 49,58± 4,96 85,80± 8,58 55,81± 5,60 47,5 8± 4,76 5,13 ±0,07 15,17± 1,52

ИР 5 сек. 12,22± 1,22 27,87*± 2,79 88,51± 8,85 34,94*± 3,49 146,95*± 14,70 8,37 ±0,13 13,18± 1,31

ИР 25 сек. П,98± 1,20 23,65*± 2,37 79,21± 7,92 80,94*± 8,09 51,71± 5,17 12,53 ±0,21* 20,48*± 2,05

ИР 100 сек. 12,06=1= 1,21 21,97*± 2,19 84,52± 8,45 37,37*± 3,73 45,45± 4,54 25,44 ±0,34* 22,40*± 2,24

ИР 600 ек. 11,99± 1,20 15,63*± 1,56 75,73± 7,57 33,12*± 3,31 34,23 *± 3,43 3,72 ±0,11 4,84± 1,48

различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

При возрастании интенсивности свободнорадикальных процессов, а соответственно и перекисного окисления липидов в опухолевых клетках, изменяется и фосфолипидный состав мембран за счет окисления липидов и перекисной модификации ненасыщенных жирных кислот. После воздействия ИР и КР на клетки лимфосаркомы Плисса отмечено увеличение содержания фракции лизофосфатидилхолина с 5,93±0,41% до 16,06±0,77% (р<0,05), снижение содержания сфингомиелина с 10,61 ±1,31% до 5,51± 0,39% (р<0,05) и холестерина с 19,1±2,37% до13,73±0,82% (р<0,05).

Накопление в мембранах лизофосфолипидов более чем на 60% рассматривается как токсический фактор, оказывающий ингибирующее действие на протеинкиназу С, которая является одним из ключевых ферментов клеточной пролиферации, дифференцировки и апоптоза. Расщепление сфингомиелина сопровождается накоплением церамидов и сфингозина, Церамиды участвуют в процессах ингибирования роста клеток, индукции дифференцировки, старения, апоптоза и являются супрессорами роста опухолей. Снижение уровня холестерина свидетельствует о снижении стабильности липидного бислоя мембраны. Накопление свободнорадикальных продуктов, активация перекисного окисления липидов, изменение фосфолипидного состава, снижение . стабильности мембран при высокоэнергетических импульсных воздействиях может приводить к изменению активности мембранно-белковых комплексов и углеводных комплексов, как на поверхности клетки, так и во внутриклеточных структурах. Поверхностный:^ заряд клетки в основном определяется заряженными «хвостами» сиаловых кислот. Показано, что концентрация сиаловых кислот после, обработки взвеси клеток лимфосаркомы Плисса ИР в течение 300 сек. в эксперименте in vitro достоверно возрастала в 2 раза с 1,2±0,07 мМ/л до

2,4±0,03 мМ/л. (р<0,05). При воздействии в течение 800 сек. наблюдалось возрастание концентрации сиаловых кислот в 1,4 раза до 1,6±0,03 мМ/л (р<0,05) по сравнению с контрольной серией. Сиаловые (N-ацетилнейраминовые) кислоты входят в состав гликолипидов, гликопротеинов, ганглиозидов и содержит сфингозин, жирную кислоту и несколько углеводных остатков. Сиаловые кислоты содержатся во всех мембранных структурах, главным образом в наружном липидном слое плазматических мембран. Остатки сиаловых кислот находятся обычно на концах углеводных боковых цепей, и, в основном, именно они ответственны за общий отрицательный заряд клеточной поверхности. Таким образом, отщепление углеводных структур после высокоэнергетического воздействия определяет и изменение общего заряда клетки. Для уточнения механизмов действия высокоэнергетических импульсных факторов проведена серия экспериментов на моделях с микроорганизмами.

Концентрация сиаловых кислот после обработки взвеси клеток C.albicans ИР изменялась в супернатанте следующим образом: при обработке взвеси клеток ИР в течение 300 сек. концентрация сиаловых кислот возрастала в 2 раза по сравнению с контрольной серией с 0,75±0,002 мМ/л до 1,55±0,0б мМ/л (р<0,05). Образующиеся радикальные продукты повреждали участки нейраминовых кислот и буквально отрезали их от мембран клетки, изменяя общий заряд. Рецепторные свойства мембран оценены по степени адгезивной активности букальных эпителиоцитов к C.albicans.

Показано, что после воздействия ИР на клетки букальных эпителиоцитов течение 300 и 600 сек., в 2 раза снижаются их адгезивные рецепторные свойства к C.albicans с 6,3±0,03 ед. до 2,8±0,01 ед. (р<0,05) С. albicans на один эпителиоцит. Для установления адгезионного контакта бактериальная клетка и клетка-мишень преодолевают электростатическое отталкивание, так как их поверхностные молекулы в норме несут отрицательный заряд, и прикрепляются адгезинами к рецепторам эпителиоцитов.

После обработки букальных эпителиоцитов высокоэнергетическим импульсным воздействием происходит стимуляция ПОЛ мембран эпителия, одновременно имеет место окисление белковых рецепторных молекул и перезарядка мембран, т.к. в норме клетки C.albicans имеют высокое сродство к эпителиальным мембранам и буквально приклеиваются к их поверхности за счет гидрофобных взаимодействий.

Известно, что активация свободнорадикальных процессов может приводить к необратимым нарушениям в биомембранах, ведущим к гибели клетки, а также к активации или торможению пролиферативной активности. Поэтому была проведена оценка жизнеспособности бактериальных и опухолевых клеток после воздействия ИР и КР. После оценки жизнеспособности клеток в эксперименте in vitro показано, что ИР в режимах 400, 200 сек. полностью ингибировал пролиферацию микроорганизмов. При снижении длительности воздействия ИР до 100 сек. пролиферативный эффект снижался с 368±15 КОН в контрольной серии до 1,5+0,001 КОЕ (р<0,05), сохранялась жизнеспособность части клеток. При воздействии КР в течение 100

сек. пролиферативная активность клеток лимфосаркомы Плиса в течение 6-ти суток снижалась в 8 раз с 28,2+2,6 см3 до 3,5±0,17 см3 (р< 0,05), после воздействия ИР в течение 100 сек. в 3 раза до 9,5±0,34 см3 (р< 0,05).

Таким образом, воздействие высокоэнергетическими импульсными факторами в изученных режимах вызывает активацию свободнорадикальных реакций, окислительную модификацию липидов, фосфолипидов, углеводов, белков и влияет на процессы размножения клеток.

Для выявления действующего фактора, обуславливающего биологические эффекты высокоэнергетических импульсных воздействий, была исследована пролиферативная активность суспензии С. albicans в режимах исключения основных составляющих компонентов газового разряда. Зону генерации излучения последовательно перекрывали экранами полностью блокирующими световой поток, видимое излучение, ультрафиолетовое излучение. При этом максимальное подавление роста клеток получено при экранировании электродов кварцевым стеклом с 750±5б до 90±6 КОЕ (р<0,05). Кварцевое стекло, пропускающее УФ - излучение снижало количество колониеобразующих единиц в 8,3 раза. Следовательно, световое

некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазонов, являющееся неотъемлемым фактором высокоэнергетических разрядов, вносило наиболее значимый вклад в подавление роста клеток. Увеличение уровня свободнорадикальных реакций при высокоэнергетическом воздействии и изменение стабильности липидного бислоя мембран приводило к снижению активности мембраносвязанных ферментов и торможению пролиферативной активности клеток т.к. известно, что активные формы кислорода (в том числе и перекись) способны стимулировать каскад каспазных реакций запускающих апоптоз.

Выявленные в проведенном исследовании эффекты активации свободнорадикальных реакций во взвесях опухолевых клеток, стабилизации мембран эритроцитов, снижения рецепторной активности, торможения пролиферативной активности и снижение жизнеспособности бактериальных и опухолевых клеток могут быть использованы для воздействия на опухолевую ткань in vivo. До настоящего времени не проводились исследования по влиянию ВЭИВ на организм in vivo как в норме, так и при развитии патологических состояний. Поэтому дальнейшие исследования посвящены изучению влияния ВЭИВ на свободнорадикальные процессы и функциональное состояние важнейших физиологических систем организма крыс в норме и с перевитой лимфосаркомой Плисса.

2.Анализ влияния высокоэнергетических импульсных факторов искровых и коронных разрядов на свободнорадикальный статус и функциональные системы организма интактных крыс

2.1. Выживаемость интактных животных на фоне импульсных высокоэнергетических воздействий

Во время генерации высоких импульсных напряжений в неоднородном электромагнитном' поле " образуются активные формы кислорода; потоки

фотонов, сравнимые с потоком ускоренных частиц, некогерентное излучение ультрафиолетового и видимого диапазона. Каждый из этих факторов в отдельности, а тем более их совокупность, может влиять на изменения гомеостаза животных. Поэтому выявление изменений и необратимых последствий этих воздействий, определение органов мишеней в организме интактных крыб было целью исследования в этой части работы.

Показано, что обработка брюшной области ИР в режиме 1200 сек. в течение 24-х суток не вызывала гибели животных (Рис.2). После воздействия КР в режиме 600 сек. (10 минут) в течение 24-х суток выживало 46% животных. При снижении времени обработки животных КР до 300 и 150 сек. к 24-м суткам выживало 66,6% и 80% экспериментальных животных. После воздействия импульсными КР на животных, сказывалась очень высокая напряженность электромагнитного поля до 50 кВ/см в межэлектродном промежутке, которая в 5 раз превышает напряженность ИР (10 кВ/см).

0 10 20 30 40 50 60 70

I ИКР 600 ИКР 300 DKP150 ШИР 1200 |

Рис.2. Выживаемость интактных животных после ежедневного воздействия высокоэнергетическими импульсными разрядами в разных режимах в течение 24-х суток.

*-различия достоверны по сравнению с серией 1-х суток, р<0,05

Таким образом, воздействие ИР на интактных животных в течение, 24-х суток длительностью 1200 сек. не вызывало гибели крыс, при воздействии коронным разрядом в течение 24-х суток длительностью 150 сек. выживало 80% животных. Именно поэтому в данном исследовании для изучения биологических эффектов импульсных разрядов были выбраны режимы КР в несколько раз ниже 5 и 50 сек. и режимы ИР не превышающие 800 сек..

2.2. Влияние высокоэнергетических импульсных разрядов на про- и антиоксидантныс системы интактных животных

После воздействия на интактных животных как КР, так и ИР уровень XJI эритроцитов возрастал в 1,4- 1,9 раза и оставался повышенным к 12-м суткам после воздействия (Таблица 4). Соответственно уровень общей АОЛ эритроцитов снижался также в 1,4-1,9 раза. Однако концентрация малонового диальдегида (МДА) в крови животных после воздействия КР уменьшалась в 1-е

сутки в 3,4-6,1 раза, а затем восстанавливалась до контрольных значений. Вероятно снижение МДА, обусловлено перераспределением антиоксидантов между плазмой крови и эритроцитами. Концентрация МДА после воздействия ИР в течение 100 сек. возрастала на 6-е сутки в 1,75 раза с 11,7±1,23 до 20,4 ± 1,9 мкМ/л (р<0,05), а к 12-м суткам восстанавливалась до контрольных значений.

Таблица 4

Интенсивность хемилюминесценции и концентрация малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и эритроцитах интактных животных после воздействия

Серии МДА мкмоль/л Хемилюминесценции,тУ

Эритроциты Плазма Эритроциты Плазма

Контроль 11,7±1,2 16,84*0,42 111,4*2,25 16,84*0,42 111,4*2,25

КР 5 сек. ИР 100 сек.

1-е сут. 3,2*1 31,32*0,7* 115,9*1 ,68 21,2*0,31* 109,3*3,50

6-е сут. 8,6±1,38 21,0±0,31 165*6,04* 30,7*1,49* 132,5*2,022

12-е сут. 11,7*1,28 23,53*0,32 126,1 ±3,1 22,36*0,48 94,63*2,09

КР 50 сек. ИР 300 сек.

1-е сут. 1,89*0,66 23,13±0,65 123,5*6,45 18,66*0,52 108,88*3,29

6-е сут. 9,8*2,36 29,46*0,8* 135,7±3,11 29,7*0,84* 115*3,93

12-е сут. 17,25*1,8 29,27*0,5 * 98,41±2,15 26,52*0,37 112,9*2,44

различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05 После воздействия КР в обеих дозах в 1-е сутки в крови животных не наблюдалось изменения количества молекулярных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) диеновых (ДК), триеновых (ТК) коньюгатов, общих липидов (ОЛ) и индекса окисленности (ИО) (Таблица 5). Интенсивность ПОЛ на 6-е сутки в крови была снижена, уменьшено количество ДК в 2,2 -2,9 раза и количество ТК - в5,1 - 6,5 раза. Содержание ОЛ было увеличено на 43,8% -47,4%. ИО снижен на 39,1% - 44% по сравнению с группой интактных животных без воздействия. Количество ОЛ и ИО к 12-м суткам приближено к значениям контрольной серии.

ИР в 1-е сутки после воздействия вызывал в крови интактных животных интенсификацию процессов ПОЛ, увеличение количества ТК соответственно в 3,8 и 5,5 раза, количества ДК - в 3 и 2,7 раза, а также уменьшение количества ОЛ соответственно на 47,4% и 55,5% .

К 12-м суткам после воздействие ИР в течение 100 сек. происходило уменьшение количества ДК и ТК соответственно в 4,7 и 2,3 раза по сравнению с животными без воздействия, количество ОЛ превышало значения контрольной серии на 21,2%, при воздействии ИР в течение 300 сек. показатели ПОЛ не отличались от контрольных значений.

После воздействия коронным разрядом на 6-е и 12-е сутки в крови интактных животных достоверно снижен уровень продуктов ПОЛ. К 12-м суткам после воздействие искровым разрядом процессы ПОЛ в крови не

отличимы от контрольных значении.

Таблица 5

Концентрация общих липидов (ОЛ), уровень диеновых коньюгатов (ДК), триеновых коньюгатов (ТК) и индекс окисленности (ИО) в крови интактных животных после воздействия коронным и искровым разрядами в разных

t,n/B, (сутки) Серии ОЛ, мг/дл ИО, отн. ед. ДК, отн. ед. ТК, отн. ед.

Контроль 274117 58,814,9 28,5±3,4 11,711,3

1 КР 5 сек 239+8 74,5±10,7 29,315,9 12,513,0

КР 50 сек 290±20 62,8±10,0 21,712,3 15,211,5

ИР 100 сек 14418* 181123,1* 85,4125,4* 44,414,2*

ИР 300 сек 122±11* 244129* 77,9119,3* 63,918,1*

6 КР 5 сек 394114* 35,815,0* 12,7±2,1 * 1,8710,8*

КР 50 сек 404138* 32,9+5,2* 9,911,7* 8,4+4,0

ИР 100 сек 19617* 10715,2* 39,3+3,4* 33,711,9*

ИР 300 сек 14314* 87,4±6,7* 38,515,0 30,115,0

12 КР 5 сек 213117* 4б,5±5,3 17,411,5* 2,310,3*

КР 50 сек 299±29 4б,5±7,3 10,011,6* 2,310,4*

ИР 100 сек 332112* 44,914,8 6,0211,5* 5,110,6*

ИР 300 сек 257±13 45,5±6,3 27,614,1 12,8+2,4

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

Таблица 6

Интенсивность хемилюминесценции гомогенатов органов интактных крыс после воздействия искровым разрядом в разных дозах, в течение 12 суток после

Хемилюминесценция.тУ

Сердце Легкие Печень Почки Мозг

Контроль 35,46±5,87 60,03=t 13,68 36,92±1,32 51,41 ±2,40 24,1±6,41

Искровой разряд 200 сек.

1-е сутки 72,52*±12,37 97,79*±4,40 48,43**2,8 52,б±0,70 16,2±2,32

6-е сутки 75,0б*±5,94 81,79±2,73 55,81**6,3 51,6±2,5 19,1±1,09

12-е сутки 63,55*±3,74 71,32±8,01 53,69*±6,2 48,0*±1,42 15,0±2,8

Искровой разряд 400 сек.

1-е сутки 75,74*±9,64 84,19±8,48 48,93**1,6 51,4±1,74 18,23±1,62

6-е сутки 71,31*±],45 63,31*3,90 66,2*±3,9 50,4±2,81 12,2± 1,59

12-е сутки 78,92**5,24 73,96*1,79 49,97*±2,8 48,6±2,91 18,5*2,81

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

При исследовании влияния ВЭИВ на свободнорадикальных статус организма интактных животных был оценен уровень ХЛ гомогенатов тканей жизненноважных органов (мозга, сердца, печени, легких и почек), т.к. повреждение радикальными метаболитами клеток может сказаться на функциональной активности ткани, органа, физиологической системы и организма в целом.

В гомогенатах сердца, легких и печени интактных животных после воздействия искровым разрядом в течение 200 и 400 сек. в 1-е, 6-е, 12-е сутки уровень ХЛ увеличен на 1,2-2,3 раза по сравнению с контрольной серией

(Таблица 6). В гомогенатах мозга при воздействии ИР 200 и 400 сек. происходило снижение ХЛ в 2 раза, и соответственно возрастание АОА, что может являться следствием компенсаторных реакций организма в ответ на стрессовое воздействие.

Воздействие искровым разрядом в течение 200 и 400 сек. на интактных животных приводило к активации процессов ПОЛ в гомогенатах сердца, легких и печени. В результате воздействия происходило снижение уровня АОА в тканях сердца и печени. Ткани этих органов богаты большим количеством ненасыщенных жирных кислот, поэтому воздействие искровым разрядом приводило к активации ПОЛ в первую очередь в тканях содержащих большое количество субстратов для свободно-радикального окисления. Образующиеся продукты ПОЛ выполняют в организме определенные функции — регулируют процессы обновления биологических мембран, оказывают влияние на проницаемость клеточной мембраны, изменяют митотическую активность клетки.

2.3. Структурно-функциональное состояние клеток крови интактных животных после воздействия искровым и коронным разрядами

Исследование структурно-функциональных свойств клеток крови интактных животных после воздействия высокоэнергетическими импульсными факторами показало, что в некоторых сериях наблюдалось снижение резистентности эритроцитов после воздействия КР в течение 5 сек. на 6-е сутки и в 1-е сутки после воздействия ИР 300 с 0,48±0,1 отн.ед. в контрольной серии до 0,36±0,06 отн.ед. и до 0,32±0,02 отн.ед. (р<0,05) соответственно. Возрастание концентрации гемоглобина отмечено на 6-е сутки после воздействия КР 5 сек. с 110±31 г/л в контрольной серии до 160±30 г/л (р<0,05). Отмечено снижение гематокритной величины с 43,б±18,5 % до 18,5±8,6 % (р<0,05) и 13±3,2 % (р<0,05) на 6-е сутки после воздействия ИР. Уровень ХЛ нейтрофильных гранулоцитов был значительно увеличен в 3,1 раза после воздействия КР в течение 5 сек. с 5,7±0,9 отн.ед. в контрольной серии до 17,7±3,3 отн.ед. (р<0,05), что является показателем активации фагоцитарной активности крови. Дальнейшее увеличение времени воздействия не приводило к существенному изменению уровня свободнорадикальных реакций в фагоцитирующих клетках.

Таким образом, после воздействия высокоэнергетическими импульсными факторами ИР и КР на интактных животных показано, что изменение гематологических показателей в 1-е и 6-е сутки после воздействия к 12-м суткам зарегистрировано восстановление данных показателей до уровня контрольной серии.

2.4. Биохимическая оценка состояния внутренних органов интактных животных после воздействия высокоэнергетических импульсных разрядов

От функциональной активности печени во многом зависит метаболизм других органов и систем. При этом функциональная активность гепатоцитов обеспечивает защиту от воздействия токсических продуктов обмена при воздействии физико-химических факторов.

При изучении липидного обмена, характеризующего синтетическую активность печени, после воздействия на интактных животных ВЭИВ показано, что через 12-ть суток во всех изученных режимах в плазме крови достоверно в 1,4 - 1,2 раза уменьшено количество общего холестерина (ОХС) и триглицеринов (ТГ) в 1,8 - 1, 2 раза, что свидетельствовало о снижении их синтеза в печени (Таблица 7).

Таблица 7

Концентрация общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), общего белка (ОБ) и уровень отношения пировиноградная кислота/ молочная кислота (ПВК/МК), АсАТ/АлАТ в плазме крови интактных животных в течение 12-ти суток после воздействия КР и ИР в разных режимах, (М+т)

Время (сут) Серии ОХС. мг/дл ТГ. мг/дл ПВК/МК АсАТ/ АлАТ ОБ г/л

Контроль 72,3413,56 32,1014,30 1,2± 0,023 1,3±0,01 54,65 ± 1,81

1 КР 5 с 53,67±4,25 23,9212,21 1,5± 0,012 1,1 ±0,06 64,17 ± 1,71*

КР 50 с 74,6212,48 28,4512,25 1,3±0,05 0,7±0,03 64,17 ±2,79*

ИР 100 с 36,1714,64* 15,0011,32« 17,02*0,023* 0,6±0,023 57,13 ± 1,08

ИР 300 с 74,08±5,41 21,6712,02* 1,23 ±0,033* 0,8±0,01 57,54 ± 1,92

6 КР 5 с 80,08±7,74 18,3311,58* 1,1 ±0,031* 0,8±0,09 59,41 ±0,81

КР 50 с В8,2015,41 32,8914 ,21 3,88 ±0,015 3,73±0,01 58,27 ± 1,10

ИР 100 с 7б,75±4,25 19,2110,88* 1.7 ±0,037* 1,8±0,02* 59,29 ±2,70 '

ИР 300 с 78,7613,22 21,0512,98* 1,1±0,013* 1,65±0,04 58,81 ± 1,39

12 КР 5 с 57,3715,80* 26,8412,28 3,87 ± 0,043 1,44±0,02 -

КР 50 с 55,4313,09* 17,0211,40* 1,19*0,07 1,7±0,06* -

ИР 100 с 52,0911,55* 26,1010,39* 1,40 ±0,18 1,53±0,03 -

ИР 300 с 52,6111,55* 26,3010,41* 1,1 ±0,03 Э,75±0,01 -

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

Показатели углеводного обмена (основные из которых глюкоза, пировиноградная кислота (пируват), молочная кислота (лактат), являются весьма информативным при оценке гомеостаза организма и функциональной активности печени.

Воздействие на интактных животных ИР в течение 100 сек. приводило к повышению концентрации пирувата и лактата плазме крови, что, по всей видимости, связано с активацией гликолиза под действием данных факторов в 1-е сутки после воздействия. Однако на 12-е сутки после воздействия данные показатели были на уровне контрольных значений.

Функциональная активность гепатоцитов обеспечивает защиту от воздействия токсических продуктов обмена при воздействии физико-химических факторов. Показанное нами ранее снижение уровня суммарной АО активности в гомогенатах печени требовало дополнительных исследований. В связи с этим была проведена оценка функционального состояния гепатоцитов.

Анализ значения коэффициента де Ритиса, отношение активности аспартатаминотрансферазы к активности аланиламинотрансферазы (АсАТ/ АлАТ), показал достоверное в 1,8 - 1,6 раза возрастание активности аспартатаминотрансферазы в плазме крови (Таблица 7), что свидетельствовало о возрастании проницаемости гепатоцитов и как следствие снижение синтетической активности печени, уменьшение концентрации холестерина и триглицеринов.

Импульсные воздействия, используемые в нашем эксперименте, являются стрессорными факторами и способствуют активации стресс-реализующих механизмов. Реакция живых объектов на данные факторы повторяет общебиологические закономерности.

2.5. Оценка выделительной активности почек интактных животных на фоне импульсных высокоэнергетических воздействий

Согласно полученным данным (Таблица 8), концентрация мочевины в сыворотке крови животных после влияния КР в течение 5 сек. Была увеличена на 21,4% по сравнению с контролем. Через 6-ть суток после воздействия показатель практически сравнялся с результатом, полученным у интактных крыс.

Таблица 8

Клиренс креатинина, концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ), мочевины и мочевой кислоты интактных

крыс после воздействия ИР и KP в разных режимах, (М+ш)

Серии Клиренс креатинина ВНиСММ Отн.ед. С,мочевина (г/л) С,Моч.х-та Мм/л

Контроль 0,8±0,04 12,45 ±0,46 5,93 ±0,31 448,3 ± 23,8

ИР 100 сек 1-е сут. 1,02±0,57 15,19 ±0,70* 4,66 ± 0,44 443,0 ± 26,2

ИР 100 сек 6-е сут, 1,78±0,66* 13,60 ±0,84 5,78 ±0,48 1135,0± 71,7*

ИР 300 сек 1-е сут. 1,064±0,04 15,41 ±,24* 5,21 ±0,48 587,6 ±88,0

ИР 300 сек 6-е сут. 1,63±0,02* 13,28 ±0,61 6,90 ± 0,39 975,6 ±28,9*

КР 5 сек 1 -е сут. - 17,00 ±0,32* 3,9 ±0,10* 1478,0 ±248,2*

КР 5 сек 6-е сут. - 10,81 ±0,21* 4,77 ±0,42 199,0 ± 47,7*

КР 50 сек 1-е сут. - 10,53 ±0,2* 4,56 ±0,34 1127,0 ± 106,6*

КР 50 сек 6-е сут. - 10,82 ±0,25 8,02 ± 0,54 172,3 ±164*

*- различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05

Клиренс креатинина при воздействии ИР на интактных крыс импульсными факторами в режиме 200 и 400 сек. в 1-е и 6-е сутки повышен, наибольший подъем наблюдался на 6-е сутки в 2,2 раза и в 2,03 раза (Таблица 8). Такое повышение клиренса можно объяснить тем, что под действием физических факторов повышается выделительная функция почек.

При воздействии на организм крыс ИР, на 6-е сутки после воздействия наблюдалось увеличение концентрации мочевой кислоты в 2,5 раза, при воздействии в режиме 100,сек. и в 2 раза - в режиме 300 сек. Такое возрастание концентрации дожег быть следствием нарушения выделения данного субстрата с мочой, а. также свидетельствовать об активации метаболизма пуриновых оснований. .К, суткам,после воздействия происходило восстановление уровня мочевой кислоты до контрольных значений.

Проведенная оценка интегрального уровня веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ), которые могут быть отнесены к компонентам остаточного азота и получили известность как важные универсальные факторы интоксикации, показала, что после воздействия КР и ИР на интактных животных происходило увеличение количества ВНиСММ на 25,8%- 46,6% по сравнению с контрольной серией (Таблица 8). Через 6-ть суток показано-снижение уровня эндогенной токсичности до значений достоверно не отличающихся от контрольного показателя (ниже на 8-10 %).

Основная масса среднемолекулярных продуктов инактивируегся внутри проксимальных канальцев нефрона. В физиологических условиях 95% ВНиСММ удаляется путем гломерулярной фильтрации. Полученные нами результаты свидетельствуют о стабильной работе экскреторной функции почек. Уровень веществ низкой и средней молекулярной массы, характеризующий эндогенную токсичность снижается к 6-м суткам после воздействия до контрольных показателей.

2.6. Влияние высокоэнергетического импульсного воздействия на частоту сердечных сокращений интактных крыс

В ходе проведенных исследований зарегистрировано, что ИР и КР влияют на ЧСС у животных в целом сходным образом. Непосредственно после воздействия не было получено достоверных изменений частоты сердечных сокращений (Таблица 9).

Таблица 9

Изменение частоты сердечных сокращений (ЧСС) в течение 6-ти суток после

Серии КР 5 с КР 50 с ИРЮОс ИР 300с

Контроль 339,14 ± 13,22 357,90 ± 11,97 321,71 ±11.65 340,29 ± 17,57

1-е сутки 334,50 ± 13,98 320,33 ± 11,40 287,43 ±26.71 | 366,83 ±15,21

6-е сутки 436,2 ± 20,05** 395,20 ± 19,6** 341,29± 19,63 | 405,33± 19,9**

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией, р<0,05 **-различия достоверны по сравнению с серией 1-е сутки, р<0,05

Однако к 6-м суткам после воздействия было зарегистрировано небольшое, но достоверное повышение ЧСС в сравнении с исходными (до воздействия) значениями. ЧСС увеличивалась после воздействия КР в течение 5 и 50 сек. в 1,3 и 1,1 раза, после воздействия ИР в 1,2 раза.

Увеличение ЧСС к 6-м суткам после воздействия у всех групп может быть следствием увеличения симпатической активности.

Возрастание активности аспартатаминотрансферазы в плазме крови, служит показателем изменения функционального состояния кардиомиоцитов. В проведенном исследовании показано незначительное, но достоверное возрастание активности АсАТ через 6-ть суток после воздействия с 0,660±0,017 мккат/л до 0,847±0,032" мккат/л (р<,0,05) которая скорее характеризует возрастание ' проницаемости кардиомиоцитов, чем снижение их функциональной активности. Через 12-ть суток после воздействия наблюдалось ' восстал овленйё активности АсАТ до контрольных значений.

Таким образом, высокоэнергетические импульсные воздействия КР и ИР

не оказывают значительных изменений в функциональной активности кардиомиоцитов.

2.7. Оценка двигательной активности и тревожно-фобических реакций крыс после воздействия высокоэнергетическими импульсными факторами

Исследовано влияние ВЭИВ на центральную нервную систему (ЦНС) и ее высшие интегративные функции.

Показано, что после ВЭИВ у животных отмечается развитие ярко-выраженной пассивно-заторможенной мотивации в поведении крыс в ответ на воздействие: время замирания животных возрастало после воздействия КР с 5,3±0,3 сек в контрольной серии до 19,б±0,8 сек (р<0,05) к 12-м суткам после воздействия.

Снижались двигательная горизонтальная активность с 12,7±1,1 ст. до 1,5±0,004 ст. (р<0,05) и 3,3±0,1 ст. (р<0,05) и вертикальная активность с 44,9±2,1 кв. до 23,1±1,02 кв. (р<0,05) и 26+1,4 кв. (р<0,05) к 12-м суткам после воздействия КР и ИР соответственно.

Показатели оставались сниженными по сравнению с контрольной серией, по всей видимости, 12-ти суток недостаточно для восстановления двигательной активности после стрессового воздействия. В постстрессовом периоде достаточно долго не происходит восстановления исходного уровня поведенческой активности животных. КР оказывал более выраженный эффект торможения по сравнению с ИР.

Таким образом, после воздействия высокоэнергетическими импульсными факторами преобладает эффект активации пассивно-оборонительного рефлекса в ответ на стрессовое воздействие.

2.8. Морфологические особенности внутренних органов крыс при воздействии высокоэнергетическими импульсными разрядами

В отечественной и зарубежной литературе отсутствуют данные о структурных изменениях в жизненно важных органах после воздействий такого рода.

Исследованы структурные особенности внутренних органов крыс в норме на 6-е сутки после воздействия высокоинтенсивными физическими факторами, т.к. именно на 6-е сутки некоторые биохимические показатели оказывались выше или ниже контрольных значений.

Проведено морфологическое исследование образцов ткани мозга, сердца, легких, печени, почек, селезенки и прямой кишки через 6 суток после однократного высокоинтенсивного электромагнитного импульсного воздействия КР в режиме 50 сек. и ИР в режиме 300 сек.

Структура тканей мозга, легких, почек, селезенки и прямой кишки в сериях после высокоэнергетических воздействий не отличалась от структуры тканей в контрольной серии. В структуре тканей печени и сердца в единичных случаях отмечались изменения.

Паренхима печени имела дольчатое строение, гепатоциты с хорошо окрашенной мелкозернистой цитоплазмой. Отмечались участки с

просветлением, цитоплазмы гепатоцитов, расширением синусоидных капилляров и центральных вен в некоторых печеночных дольках (в основном при воздействии ИР). Ядра гепатоцитов округлой формы, светлые, с глыбками хроматина и ядрышками, располагались в центре клеток. Полученные данные согласуются с биохимическими показателями увеличения ПОЛ в гомогенатах печени на 6 - 12-е сутки максимально в 1,4- 1,7 раза. Радикальные продукты способны повреждать мембранные фосфолипиды и белки гепатоцитов, повышать проницаемость клеток и снижать синтетическую активность. На возрастание проницаемости гепатоцитов указывает увеличение активности АлАТ в плазме крови с 0,603±0,023 до 0,827±0,039 мккат/л (р<0,05) на 6-е сутки после воздействия КР в режиме 50 сек., к 12-м суткам происходило снижение активности фермента до 0,377±0,030 мккат/л (р<0,05). Липиды плазмы крови синтезируются паренхимными клетками печени. Показано снижение в плазме крови концентрации общего холестерина в 1,3 раза при воздействии коронным разрядом и в 1,4 раза при воздействии ИР и триглицеридов в 1,8 - 1,2 раза соответственно по сравнению с показателями контрольной серии (Таблица 7). Уровень общих липидов был снижен при воздействии ИР в 1-е и б-е сутки после воздействия максимально в 2,2 — 1,9 раз (Таблица 5).

К 12-м суткам после воздействия синтетическая активность восстанавливалась, нормализовался уровень ОЛ и ТГ в плазме крови крыс. Возрастание интенсивности ХЛ гомогенатов печени свидетельствует о снижение АОА после обработки животных ВЭИВ. Известно, что при развитии ответа организма на радиационное воздействие важным фактором является изменение АОА липидов печени. При облучении АОА падает, причем тем больше, чем выше доза облучения.

Ткань сердца состояла из плотно расположенных пучков мышечных волокон, равномерно окрашенных эозином. На продольных срезах выявлялась поперечная исчерченность. В сосудистом русле определялось небольшое-количество эритроцитов. В единичных случаях (в основном после воздействия КР) отмечались участки умеренно выраженного интерстициального отека. Интенсивность ХЛ гомогенатов сердца у интактных животных возрастала, АОА на 6 -12 после воздействия ИР снижалась в 2,2 - 2,1 раза (Таблица 6). ЧСС после воздействия ИР и КР к 6-м суткам достоверно увеличена в 1,2 - 1,1 раза по сравнению с исходными значениями (Таблица 9), активность АсАТ в плазме крови в 1-е сутки после воздействия КР в режиме 5 Осек, снижена в 1,3 раза с 0,660±0,017 до 0,420±0,020 мккат/л (р< 0,05), к 6-м и 12-м суткам отмечено восстановление до контрольных значений. Незначительные изменения в структуре миокарда и восстановление биохимических показателей до уровня контрольных значений к 12-м суткам, указывает на сохранение адаптивных возможностей организма после воздействия КР в течение 50 сек. ИР в режиме 300 сек. не оказывал влияния на структуру клеток миокарда.

В гомогенатах мозга после ВЭИВ отмечено снижение уровня свободнорадикальных реакций и возрастание АОА в 1,2-2 раза, однако в структуре тканей мозга после воздействия на крыс ВЭИВ не обнаружено изменений по сравнению с контрольной серией. Кора головного мозга покрыта

мягкой мозговой оболочкой, под которой определялись сосуды, содержащие клетки крови. Четко определялись все слои сенсомоторной зоны коры. Нейроны пирамидного и ганглионарного слоев содержали центрально расположенные богатые хроматином ядра округлой формы с ядрышками. В цитоплазме нейроцитов определялось большое количество глыбок хроматофильного компонента.

Таким образом, ВЭИВ в изученных режимах не вызывали морфологических изменений внутренних органов интактных крыс изменение биохимических показателей имело динамический характер и восстанавливались к 6-12-м суткам после воздействия.

3. Исследование влияния высокоэнергетических импульсных искровых и коронных разрядов на свободнорадикальный статус и функциональные системы организма крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса

Исследование влияния высокоэнергетических импульсных факторов искровых и коронных разрядов на свободнорадикальный статус и функциональные системы организма крыс с перевитой лимфосаркомой Плиса является актуальным в поиске наименее повреждающих и наиболее эффективных противоопухолевых средств.

ЗЛ.Свободнораднкальный статус и антиоксидантная активность организма опухоленосителя при воздействии ВЭИВ

Известно, что при опухолевом росте происходит активация процессов перекисного окисления липидов в организме и снижение антиоксидантной активности тканей, за счет действия опухоли как ловушки антиоксидантов.

В исследовании проведена оценка влияния высокоэнергетических импульсных факторов на суммарный показатель ПОЛ цельной крови и плазмы крови животных с опухолью. Показано, что в крови контрольных животных с лимфосаркомой АОА в 2,4 раза ниже по сравнению с интактными животными (Таблица 10).

Таблица 10

Интенсивность ХЛ, концентрация малонового диальдегида (МДА) и витамина Е в цельной крови и плазме крови опухолевых животных после ВЭИВ, (М+ш)

ХЛ, шУ

Серии Эритроциты Плазма С,МДА(мкмоль/л) С,Вит. Е (мг/п)

Контроль инт. 16,84±0,42 111,4*2,255 11,743*1 573,18*50,48

Контроль опух. 35,52*0,673 109,1*2,653 11,794*1,923 215,00**35,63

КР 5 сек 40,44*0,29 109,4*2,006 8,2051*1,0615 -

КР 50 сек 34,72*0,3765 111,8*2,125 12,051*0,8205 583,30***48,1

ИР 200 сек. 31,45*1,01 80,68*1,17 19,93*, 17 569,40***81,6

ИР 300 сек. 36,45***0,23 80,98*0,70 17,64*1,99 416,6***125,2

ИР 400 сек. 23,43*0,91 76,97*1,56 27,56***1,39 687,30***132,3

ИР 450 сек. 45,62**±2,63 90,27*1,34 16,66*2,22 -

ИР 800 сек. 42,45***0,69 79,95***1,92 12,39***0,42 333,33***55,57

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией инт., р<0,05 **- различия достоверны по сравнению с контрольной серией опух, р<0,05

После воздействия на животных с опухолью КР в течение 5 сек. в цельной крови АОА уменьшена на 12 %, в плазме была заметна тенденция к увеличению АОА. Содержание вторичного продукта ПОЛ МДА в крови животных с опухолью после воздействия коронным разрядом 5 импульсов уменьшено в 1,4 раза по сравнению с контрольными животными с лимфосаркомой. Таким образом, после воздействия на животных с опухолью коронным разрядом в течение 5 сек. происходило снижение активности ПОЛ плазмы крови.

После воздействия КР в течение 50 сек. АОА в крови и плазме не изменялась по сравнению с контрольными животными с опухолью, однако концентрация витамина Е, одного из антиоксидантов возрастала в 2,7 раза по сравнению с контрольной серией крыс с лимфосаркомой. После воздействия на животных с лимфосаркомой ИР длительностью 200 сек. уровень ПОЛ в крови был достоверно увеличен на 19,2%, АОА достоверно снижена на 18,4%, концентрация витамина Е увеличена в 2,6 раза.

После воздействия на крыс с опухолью ИР в течение 300 и 400 сек. концентрация витамина Е была выше в 1,9 и 3,2 раза соответственно. Концентрация витамина Е в плазме контрольной серии животных с опухолью в 2,6 раза ниже, чем у интактных животных, а после воздействия искровым и коронным разрядами концентрация витамина Е возрастает в 2,6 - 3,2 раза. Таким образом, высокоэнергетйческие воздействия в изученных режимах приводили к нормализации уровня витамина Е и поддержанию процессов ПОЛ в крови животных с лимфосаркомой на стационарном уровне.

Таблица 11

Концентрация общих липидов (ОЛ), индекс окисленности (ИО), уровень диеновых (ДК), триеновых коньюгатов (ТК) и активность каталазы в крови животных с лимфосаркомой на 6-е сутки после воздействия коронным (КР) и

Серии ОЛ, мг/дл ИО, отн. ед. ДК, отн.ед. ТК, отн. ед. Катал аза ед.акт./г бл.с

Контр, инт. 274±17 58,8±4,9 28,5±3,4 11,7±1,3 2,93 ±1,80

Контр.опух. 140±28* 93,6117,0* 102123,1* 3517,6* 2,45 ± 1,02

КР 5 сек. 267±12** 68,9±4,8 38,2±5,2** 12,7±0,7** 5,03±1,13**

КР 100 сек. 371117** 51,7±3,4** 29,9±2,5** 12,7±1,2** 2,54± 0,630

ИР 100 сек. 168+10 138,1±42,5 25,6±6,3** 59,7±4,0** 4,57 ± 0,72

ИР 300 сек. 155±7 106,4±8,6 29,8±3,5** 10,1±1,3** 2,40 ± 0,84

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией инт., р<0,05 * *- различия достоверны по сравнению с контрольной серией опух, р<0,05

Изучение содержания молекулярных продуктов ПОЛ в крови животных с лимфосаркомой показало (Таблица 11), что после воздействия импульсными разрядами в крови наблюдалось достоверное снижение уровня ДК в 2,6 - 4 раза, ТК в 2,9 раза. После воздействия КР в течение 100 сек. уровень общих липидов был выше в 2,6 раза, а индекс окисленности липидов ниже в 1,3 - 1,8

раза по сравнению контрольной серией крыс с опухолью. На 6-е сутки после воздействия ИР на животных с лимфосаркомой отмечено возрастание индекса окисленности и уровня триеновых коныогатов, однако активность каталазы была в 2 раза выше по сравнению с контрольной серией животных с опухолью.

При изучении активности антиоксидантных ферментов в крови животных с лимфосаркомой после воздействия ВЭИВ показано, что активность каталазы плазмы крови контрольных животных с опухолью по сравнению с интактными животными снижена в 2 раза. После воздействия ИР в течение 100 сек. активность каталазы достоверно выше на 41,18% по сравнению с данными показателями животных с лимфосаркомой не подвергнутых ВЭИВ.

Воздействие КР на крыс с опухолью, привело к увеличению активности каталазы плазмы крови по сравнению с контрольной серией животных с лимфосаркомой, при чем активность фермента снижалась с увеличением времени воздействия.

Таким образом, после высокоэнергетических импульсных воздействий в крови крыс с перевитой лимфосаркомой наблюдалось возрастание уровня антиоксидантной активности как за счет концентрации витамина Е, так и за счет увеличения активности каталазы.

3.2. Структурно-функциональное состояние клеток крови крыс-опухоленосителей после высокоэнергетических воздействий

Далее в нашей работе изучено влияние высокоэнергетических импульсных разрядов на структурно-функциональное состояние клеток крови крыс с перевитой лимфосаркомой. Было установлено, что при воздействии высокоэнергетических импульсных разрядов количество эритроцитов достоверно возрастало с 4,1±1,1х1012 в контрольной серии до 6,5±0,56х1012 (р< .0,05), концентрация гемоглобина повышалась с 102±5,8 г/л до 131±3,0 г/л (р< 0,05), гематокритная величина возрастала с 26±5,3 % до 42±14 % (р< 0,05) при воздействии КР в течении 5 сек. по сравнению с животными с опухолью в контрольной серии. Количество лейкоцитов снижалось с 8,25±0,96х109 до 4,5±1,8х109 (р< 0,05) при воздействии ИР 300 сек. и до 5,76±0,2х109 при воздействии КР 5 сек., количество тромбоцитов недостоверно снижалось до показателей интактных .животных с 430±174х106 до 360±106х106 при воздействии ИР 300 сек. и до 376±118 хЮ6 при воздействии ИР 100 сек., индекс ХЛ нейтрофильных гранулоцитов снижался с 30,1 ±8,9 отн.ед в контрольной серии крыс с перевитой опухолью до 7,2±2,1 отн.ед. (р< 0,05) при воздействии КР 5 сек. и до 4±0,8 отн.ед. (р< 0,05) при воздействии ИР 100 сек.

Таким образом, при воздействии высокоэнергетических импульсных разрядов на животных с перевитой лимфосаркомой Плисса гематологические показатели выравнивались до показателей интактных животных.

3.3, Влияние высокоэнергетических импульсных воздействий на некоторые показатели углеводного и липидпого обмена крыс с опухолью

Изменение углеводного обмена является маркером опухолевого процесса. Так, в организме опухоленосителя наблюдается гипогликемия, повышается уровень лактата и пирувата в крови и опухолевой ткани.

Воздействие на крыс с опухолью ИР в режиме 300 сек. привело к

снижению уровня молочной кислоты в плазме крови с 2,90 ± 0,27 мкМ/л до 2,37 ± 0,16 мкМ/л (р< 0,05), что может быть связано со снижением выведения этого субстрата опухолевыми клетками, за счет снижения интенсивности гликолиза.

Уровень общих липидов, характеризующий синтетическую активность паренхимы печени, в крови животных с лимфосаркомой после воздействия высокоэнергетических импульсных факторов повышен (Таблица 11) по сравнению с контрольной серией крыс с лимфосаркомой, что также может свидетельствовать о нормализации синтетической активности печени.

В организме, пораженном злокачественным ростом, липиды играют роль источника энергии и субстратов для образования сложных липидов, участвующих в построении и в обмене фосфолипидов цитоплазматических мембран.

Для опухолевого организма характерна мобилизация липидов из жировых депо и мышц, липидемия. Ограниченное потребностями опухоли поступление глюкозы в ткани вынуждает организм использовать жирные кислоты, в качестве дополнительного источника энергии, субстрата окисления, после высокоэнергетического воздействия происходит нормализация уровня липидов к крови и снижение молекулярных продуктов ПОЛ.

3.4.Биохимическая оценка функциональной активности внутренних органов животных при воздействии высокоэнсргстических импульсных разрядов

Изменение функциональной активности кардиомиоцитов и гепатоцитов после воздействия ВЭИВ оценивали по активности аминотрансфераз в плазме крови. Коэффициент де Ритиса, характеризующий функциональную активность гепатоцитов и кардиомиоцитов, у крыс с опухолью после воздействия ИР был повынен на 20,7 - 50,3%, по сравнению с контрольной серией животных с лимфосаркомой в с 1,6± 0,06 до 2,06± 0,13 (р< 0,05) при воздействии ИР 100 сек. и до 2,63±0,07 (р< 0,05), при воздействии ИР 300 сек.. При воздействии КР коэффициент де Ритиса был снижен в 2,5 раза по сравнению' с' показателем крыс с опухолью без воздействия с 1,6± 0,06 до 0,7±0,07 (р< 0,05) при воздействии КР 5 сек., и до 0,8±0,07 (р< 0,05) при воздействии КР 50 сек. Гепатоциты и кардиомиоциты подвергаются свободиорадикальным воздействиям, в мембранах накапливаются перекисные продукты, изменяется проницаемость мембран. Полученные результаты по изменению активности гепатоцитов и кардиомиоцитов крыс с опухолью на 6-е сутки после воздействия ВЭИР сопоставимы с результатами по увеличению ПОЛ в крови животных с лимфосаркомой после воздействия.

Метаболическим ответом организма на злокачественный рост является накопление токсических продуктов в плазме крови и на мембранах эритроцитов. Эндогенная интоксикация является одним из осложнений, который нередко определяет исход патологического процесса.

Лимфосаркома Плисса характеризуется инфильтративным ростом, ее границы четко не определены. Такие опухоли характеризуются ускоренным течением, ранним и бурным метастазированием, 100% летальностью.

Рис. 3, Изменение уровня коэффициента интоксикации (КИ) в крови животных с лимфосаркомой на 6-е сутки после воздействия искровым разрядом (ИР) и коронным разрядом (КР) в разных режимах

*-различия достоверны по сравнению с контрольной серией инт., р<0,05 * *-различия достоверны по сравнению с контрольной серией опух, р<0,05

Показано, что при моделировании неоплазии у подопытных животных развивается эндогенная интоксикация, которая выражается в увеличении концентрации токсинов в плазме крови. В контрольной серии крыс с опухолью коэффициент эндогенной интоксикации возрастал на 55,3% по сравнению с интактной группой (Рис.3) После воздействия ИР зарегистрировано достоверное снижение коэффициента интоксикации на 49 - 75%, а после воздействия КР коэффициент интоксикации также "достоверно снижен на 32 -49% по сравнению с контрольной серией без воздействия.

Таким образом, воздействие высокоэнергетическими импульсными разрядами снижало уровень эндогенных токсинов в крови животных с лимфосаркомой в 1,6- 3,6 раза уменьшая, таким образом, их влияние на функциональную активность клеток, тканей, органов и организма в целом.

Одним из проявлений системного влияния опухоли является дисбаланс между процессами синтеза и распада белка на уровне организма. Опухолевая ткань за счет повышенной проницаемости мембран поглощает азот тканевых белков, пептидов, аминокислот и азотистых оснований.

Изучение концентрации мочевины в сыворотке крови контрольных животных с лимфосаркомой показало увеличение в 1,8 раза этого показателя по сравнению с интактными животными.

Согласно полученным данным, ВЭИВ приводило к снижению концентрации мочевины в сыворотке крови животных с лимфосаркомой на 49,6% с 10,74 ± 1,11 г/л в контрольной серии до 4,08 ± 0,37 г/л (р<0,05) при воздействии ИР 100 сек. и до 5,41 ± 0,10 г/л (р<0,05) при воздействии КР 50 сек.. Полученный результат оказался практически равным показателю интактных крыс.

Влияние ВЭИВ также приводило к нормализации уровня общего белка в сыворотке крови животных с лимфосаркомой с 45,02 ± 2,88 г/л в группе животных с опухолью без воздействия до 62,19 ± 1,50 г/л (р<0,05) при воздействии ИР в течение 100 сек. и до 58,27 ± 1,00 г/л (р<0,05) и при воздействии КР 50 сек. Увеличение показателя составило 23,5% по сравнению с контрольной серией животных с лимфосаркомой. Таким образом, ВЭИВ нормализовали азотный обмен и соответственно белковый обмен крыс с экспериментальной лимфосаркомой.

Клиренс креатинина при воздействии ИР и КР на животных с перевитой опухолью в общей сложности повышался, наибольшее изменение наблюдалось при воздействии в режиме КР 5 сек. (в 1,47 раз) с 1,2± 0,03 отн.ед. в серии крыс с лимфосаркомой без воздействия до 1,7± 0,01 отн.ед. (р<0,05). Такое повышение клиренса можно объяснить тем, что повышается выделительная активность почек. Активное выведение метаболитов способствует снижению эндогенной токсичности и стабилизации функциональной активности органов и систем органов животных с лимфосаркомой.

3.5. Оценка состояния ЦНС по некоторым поведенческим реакциям крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса под воздействием высокоэнергетических импульсных разрядов

Основные значения двигательной активности у крыс с опухолью после воздействия импульсными высокоэнергетическими факторами повышены в 2 -4 раза по сравнению с контрольной серией животных слимфосаркомой.

Наличие опухолевого процесса значительно (в 4 -10 раз) снижало двигательную активность животных с 44,9±2,1 кв. в интактной группе крыс до 5,6±0,8 кв. (р<0,05) в контрольной серии крыс с лимфосаркомой на 12-е сутки после перевивки опухолевого штамма. После высокоэнергетических воздействий горизонтальная активность возрастала до 12±1,3 кв. (р<0,05) при воздействии КР 50 сек. и до 24±2,4 кв. (р<0,05) при воздействии ИР 300 сек.

Механизм активации двигательной активности животных после импульсного электрофизического воздействия, определяется улучшением функционального состояния организма за счет снижения уровня эндогенной токсичности, повышения антиоксидантной активности крови и возрастания выделительной активности почек, что опосредовано влияло на активацию интегративных функций головного мозга крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса.

3.6. Структурные особенности ткани лимфосаркомы Плисса после воздействия высоко энергетическими факторами

При изучении структурных особенностей ткани лимфосаркомы Плисса, показано, что в контрольной серии ткань состоит из большого количества плотно расположенных клеток округлой формы, с округлым крупным гиперхромным ядром и тонким ободком базофильной цитоплазмы. В ткани встречаются очаги- некроза, отделенные от остальной опухоли зоной с выраженными нарушениями микроциркуляции, которые в отдельных участках сливаются. Строма опухоли представлена тонкими прослойками

рыхлой соединительной ткани, локализующейся по ходу сосудов. Васкуляризация опухоли умеренно выражена, в основном состоит из сосудов небольшого диаметра.

На б-е сутки после воздействия на область опухоли КР в режиме 50 сек. в опухолевой ткани отмечалось разрыхление, значительное снижение объемной плотности клеток, обширные зоны некроза, в несколько раз превышающие таковые в опухолевой ткани без воздействия. В зонах, граничащих с участками некротических и некробиотических изменений опухоли, выявлено полнокровие сосудов, появление большого количества активных макрофагов.

На 6-е сутки после воздействия на опухолевую ткань животного ИР в течение 300 сек. установлено, что наряду с обширными зонами некроза и участками со снижением объемной плотности клеток отмечаются очаги опухолевой ткани с плотным расположением клеток, граничащие с некротизированной тканью, кровоизлияниями, многочисленными участками деструкции клеток в виде отдельных мелких фрагментов цитоплазматического и ядерного материала. Отмечается большое количество активных макрофагов.

Ультраструктурные изменения в ткани лимфосаркомы Плисса после высокоэнергетических импульсных воздействий были оценены в динамике в 1-е и 6-е сутки после воздействия, а также на 12-е сутки после воздействия у животных с выраженной деградацией опухоли.

Показано, что клетки лимфосаркомы Плисса в контрольной серии имели плотную цитоплазму, высокое ядерно-цитоплазматическое отношение, наблюдались фигуры митоза. Ядра у большей части клеток с хорошо выраженными ядрышками и многочисленными складками, в кариоплазме отмечалось преобладание эухроматина.

В 1-е сутки после воздействия ИР и КР в большей части опухолевых клеток отмечалось уплотнение кариоплазмы, глубокие инвагинации ядер и увеличение содержания гетерохроматина. В цитоплазме было выражено набухание митохондрий, расширение цистерн эндоплазматической сети, снижение ядерно-цитоплазматического отношения. Часть клеток лимфосаркомы сохраняли тесные межклеточные контакты, высокое ядерно-цитоплазматическое отношение, наблюдалось большое количество рибосом в цитоплазме.

После воздействия ИР и КР на 6-е сутки у части животных с лимфосаркомой макроскопически отмечалось снижение объема опухолевого узла. В этой экспериментальной серии при ультраструктурной оценке ткани лимфосаркомы показано преобладание некротических и апоптотических процессов. Выявлено нарушение микроциркуляции, отёк эндотелия капилляров и кровоизлияния.

На 12-е сутки после воздействия ИР и КР у животных с деградацией опухоли, наблюдалась соединительная ткань с преобладанием активных макрофагов, наличием лимфоцитов, моноцитов, активированных фибробластов с выраженным гранулярным эндоплазматическим ретикулумом. Микроциркуляторное русло характеризовалось капиллярами с обычным эндотелием, содержащими плазму, эритроциты, единичные моноциты.

Изучение свободнорадикальных процессов в опухолевой ткани, показало, что ВЭИВ приводило к 6 - 12-м суткам к возрастанию уровня ХЛ в опухолевой ткани с 41,36±3,2 шУ в контрольной серии до 62,1±2,6 шУ (р<0,05) при воздействии КР в течение 5 сек. и до 77,62±4,8 шУ (р<0,05) после воздействия ИР в течение 300 сек.. Активация свободнорадикального окисления вызывала развитие серии внутриклеточных реакций, которые приводили к активации некротических и апоптотических процессов в клетках лимфосаркомы Плисса.

Таким образом, электронно-микроскопическое • исследование ткани лимфосаркомы Плисса показало, что воздействие искровым и коронным разрядами вызывает деструктивные изменения опухолевых клеток и приводит к формированию полноценной в функциональном отношении соединительной ткани, о чем свидетельствует наличие фибробластов и восстановление микроциркуляции.

Заключение

Анализ литературных и собственных данных по накоплению и рекомбинации радикальных продуктов при высокоэнергетических импульсных воздействиях, а также предоставленная инженерами ВНИИЭФ г.Сарова возможность работать с уникальными устройствами, позволили вскрыть разнонаправленные закономерности реакций интактного организма и с экспериментальной опухолью в ответ на воздействие высокоэнергетическими искровыми и коронными разрядами миллисекундной и наносекундной длительности.

Применение высокоэнергетических воздействий в широком интервале доз и использование различных методических приемов дало возможность разобраться в механизмах их влияния на свободнорадикальные процессы и важнейшие физиологические системы интактных животных и животных с лимфосаркомой. При этом одинаково важное значение имеют выявленные закономерности физиологических и клеточных реакций на продолжительное и короткое высокоэнергетическое воздействие.

Проведенное исследование позволило сформулировать концепцию, касающуюся механизмов действия высокоэнергетических импульсных факторов на пролиферативную активность опухолевых клеток, а также функциональные процессы в интактном организме крыс и с опухолью.

Первоначальный этап высокоэнергетических импульсных воздействий связан со свободнорадикальными реакциями, протекающими на клеточном уровне. Значительная энергетическая емкость импульсов, некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазона, а также активные формы кислорода, образующиеся в процессе генерации высокоэнергетических разрядов, непосредственно изменяют надмембранные структуры, перекисное окисление липидов и фосфолипидный состав мембран, белковые комплексы и процессы деления клеток. В результате происходит изменение функционального состояния клеток. Как показало данное исследование, особенно выражено затрагиваются пролиферативные процессы одноклеточных

организмов и опухолевых клеток.

В интактном организме активация некоторых звеньев прооксидантной системы в ответ на высокоэнергетические импульсные воздействия приводит к компенсаторному возрастанию активности антиоксидантных систем крови и снижению свободнорадикальных процессов в тканях мозга.

В опухолевой ткани активация свободнорадикального окисления импульсными факторами вызывает изменения в фосфолипидном составе клеток, проницаемости мембран и внутриклеточных структур, активирует процессы апоптоза. В ответ на изменения функций отдельных клеток и снижение метаболический активности опухолевой ткани формируются общие системные физиологические реакции организма с опухолью. В частности, в организме животных с лимфосаркомой, свободнорадикальный статус которых повышен, высокоэнергетические импульсные воздействия активируют рекомбинационные процессы, снижая перекисное окисление липидов и активируя антиоксидантную систему. Снижается уровень эндогенной интоксикации, нормализуются обменные процессы, восстанавливается функциональная активность органов и жизненноважных физиологических систем.

Таким образом, высокоэнергетические импульсные воздействия в изученных режимах не оказывают повреждающего действия на организм интактных животных. При воздействии на область опухоли вызывают деструктивные процессы в опухолевой ткани и снижают системное влияние опухолевого процесса на организм животных с лимфосаркомой.

Полученные в работе эффекты торможения пролиферативной активности клеток, активации антиоксидантных систем организма, активации апоптотических процессов в ткани лимфосаркомы Плисса при воздействии высокоэнергетическими импульсными факторами искровых и коронных разрядов представляют не только общебиологический интерес, но и имеют большое значение для решения народнохозяйственных задач в области ветеринарии и медицины.

ВЫВОДЫ

1. В результате комплексных экспериментальных исследований в системах in vitro и in vivo с использованием современных методических средств изучены системные и клеточные механизмы высокоэнергетических импульсных воздействий в широком интервале доз, что дает основу для понимания явлений, развивающихся при изменении свободнорадикального гомеостаза организма. Разработана концептуальная схема развития биологических и физиологических эффектов при высокоэнергетических импульсных воздействиях на интактный организм, организм с опухолью и опухолевую ткань.

2. Анализ режимов активации свободнорадикальных реакций in vitro в эритроцитах, фунгальных, бактериальных и опухолевых клетках показал, что высокоэнергетические импульсные воздействия вызывают развитие или

рекомбинацию, радикальных реакций в зависимости от времени воздействия и свободнорадикального статуса.

3. Наиболее высокую свободнорадикальную активность в опухолевых и бактериальных клетках вызывает воздействие искровым разрядом в режиме 25 и 100 сек., эритроцитов в режиме 5 сек. Увеличение времени воздействия высокоэнергетических импульсных разрядов на клетки до 300 - 600 сек. приводит к снижению уровня свободнорадикальных реакций. Наименее повреждающее действие на эритроциты интактных и крыс с опухолью in vitro оказывают режимы: коронный разряд в течение 50 сек., и искровой разряд в течение 100 и 200 сек.

4. Высокоэнергетические импульсные коронные и искровые разряды вызывают изменение гомеостаза клеток за счет изменения проницаемости, заряда, рецепторных свойств и фосфолипидного состава мембран, определяющих выраженное торможение пролиферативной активности бактериальных и фунгальных микроорганизмов. Пролиферативные свойства клеток лимфосаркомы Плисса снижаются в 2 - 8 раз после высокоэнергетических воздействий искровыми и коронными разрядами в экспериментах in vitro.

5. Определен основной фактор высокоэнергетического импульсного излучения, оказывающий биологическое действие - некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазона

6. Проведен сравнительный анализ повреждающего действия высокоэнергетических импульсных разрядов на организм крыс в широком интервале доз. Наиболее выраженное повреждающее действие оказывает коронный разряд в режиме 600 сек., наименее выраженное повреждающее действия оказывает искровой разряд в режиме 1200 сек.

7. Установлено, что воздействие высокоэнергетическими импульсными разрядами вызывает активацию свободнорадикальных и антиокислительных процессов в крови интактных животных. Свободнорадикальные процессы изменяются динамически и нормализуются к 6 - 12-м суткам после воздействия.

8. Морфофизиологический анализ показал, что воздействие коронным разрядом и искровым разрядом не вызывает структурно-функциональных изменений в клетках крови и внутренних органах животных. Показано, что обменные процессы интактных животных после воздействия высокоэнергетических импульсных разрядов изменяются динамически и нормализуются к 6 - 12-м суткам после воздействия. В ответ на импульсное высокоэнергетическое воздействие отмечается развитие пассивного оборонительного рефлекса.

9. Воздействие импульсными искровыми и коронными разрядами на животных с перевитой лимфосаркомой Плисса приводит к снижению уровня молекулярных продуктов перекисного окисления липидов в 2,6 - 4 раза, к увеличению уровня антиоксидантной активности в 1,5 - 1,7 раз, возрастанию концентрации витамина Ев 1,9 - 2,6 раза.

10. Импульсные высокоэнергетические воздействия вызывают у животных с лимфосаркомой нормализацию гематологических показателей, снижение уровня эндогенной интоксикации крови в 1,6- 3,6 раза, возрастание

функциональной активности почек. Активное выведение токсичных метаболитов способствует стабилизации функциональной активности органов и систем органов животных с лимфосаркомой

11. Воздействие искровым и коронным разрядами на область опухолевого узла приводит к возрастанию уровня свободнорадикальных процессов в опухолевой ткани в 1,3-1,8 раз, вызывает изменения в структурной организации опухолевых клеток и внутриклеточных структур, активирует деструктивные некротические и апоптотические процессы в клетках лимфосаркомы Плисса.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании полученных данных разработан и запатентован способ оценки антиоксидантной активности химических соединений и биологических субстратов (Пат. № 2112982), который рекомендуется использовать для определения степени антиоксидантной активности водорастворимых соединений.

2. Полученные данные по активации антиоксидантной активности в организме являются частью разработанного способа активации систем антиоксидантной защиты организма (Пат. № 2020945), рекомендуемого для применения в ветеринарной практике.

3. Разработанные методики внедрены и используются для стерилизации жидких сред, лабораторной посуды, перевязочного материала, помещений в ЦНИЛ ГОУ ВПО НижГМА Росздрава.

4. Результаты исследования положены в основу разработанных совместно с инженерами НТЦФ РФЯЦ ВНИИЭФ устройств «VISTA» и «БРИГ», используемых при выполнении научно-исследовательских работ в ЦНИЛ НижГМА Росздрава и НТЦФ РФЯЦ ВНИИЭФ, и рекомендуются для доклинических исследований.

5. Полученные результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре биохимии ГОУ ВПО НижГМА при чтении лекций по теме «Обмен липидов, метаболизм мембран, перекисное окисление липидов» для студентов 2 курса лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов.

6. Новые данные о механизмах действия высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы и функциональное состояние организма интактных и крыс с опухолью являются основанием для клинических исследований, а также могут быть включены в программы по биологии, физиологии, биохимии, патофизиологии и онкологии при подготовке специалистов медико-биологического и ветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Публикации в рецензируемых изданиях рекомендованных ВАК РФ:

1. Иванова, И.П. Опухолевые процессы и высокоэнергетические импульсные факторы /И.П. Иванова, Е.А. Зуймач, Г.М. Спиров// Нижегородский медицинский журнал.- 2003.- №1.- С. 81-85.

2. Иванова, И.П. Вариабельность сердечного ритма и особенности структуры сердечной мышцы крыс при воздействии высокоэнергетическими импульсными электромагнитными факторами /И.П.Иванова, [и . др.].// Российский физиологический журнал имени И.М. Сеченова.- 2004,- Т.90.-№8.-, Пр.,2ч.-С. 507 .-ISSN 0869-8139.

3. Заславская, М.И. Фунгицидный эффект некогерентного импульсного, излучения видимого диапазона света в системах с Candida 'albicans /М.И. Заславская, И.П. Иванова, Г.М. Спиров// Вестник Санкт-петербургской медицинской академии им. Мечникова И.И. -2004.-№ 3,- вып.5.- С.54-56 .-ISSN 0371-9367.

4. Иванова, И.П. Оральный кандидоз крыс на фоне некогерентного импульсного излучения /И.П.Иванова, М.И. Заславская//Проблемы медицинской микологии.- 2004.- № 2.-Т. 6.-С.82-83.

5. Иванова, И.П. Морфологические изменения внутренних органов крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса при воздействии некогерентным импульсным излучением /И.П. Иванова, H.H. Проданец, Г.М. Спиров// Морфология.- 2004.-№ 4 .- С.52.- ISSN 0004-1947.

6. Иванова, И.П. Морфологические изменения внутренних органов крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса при воздействии коронным разрядом /И.П. Иванова, Л.Б. Снопова, Г.М. Спиров// Морфология.- 2004.-№ 4 .- С.52.- ISSN 0004-1947.

7. Иванова, И.П. Активные продукты высокоэнергетических импульсных разрядов /И.П.Иванова, И.М. Пискарев, В. А.Калинин// Бюллетень Нижегородского государственного университета им. Н.В. Лобачейского.- серия Биология.-2005.- Вып. 2 (10).-С.167-170

8. Иванова, И.П. Синтетическая и утилизационная функция паренхимных клеток печени у животных с лимфосаркомой после обработки неоплазмы импульсной газоразрядной плазмой /Иванова И.П.// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2005.- Т. 15, №1.-Пр,- № 24.-С.44,-ISSN 1382-4376.

9. Иванова, И.П. Оценка патоморфологических особенностей и перекисного окисления липидов печени крыс с опухолью на фоне воздействия импульсной плазмой /И.П. Иванова, H.H. Проданец, Ю.В. Буренина// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.- 2005.- Т. 15, №1,- Пр.- № 24.-С.44,-ISSN 1382-4376.

10. Иванова, И.П. Эффект влияния высокоэнергетического импульсного излучения на метаболизм животных в норме и с лимфосаркомой Плисса. /И.П.Иванова//Бюллетень сибирской медицины. -2005.- №2-Пр.- С. 88-90.

11. Заславская, М.И. Фунгицидный эффект некогерентного импульсного излучения при экспериментальном оральном кандидозе крыс /М.И. Заславская, И.П. Иванова// Проблемы медицинской микологии.- 2005.-Т. 6, С. 285.

12. Иванова, И.П. Механизм фунгицидного эффекта высокоэнергетического импульсного излучения /И.П. Иванова, М.И. Заславская// Проблемы медицинской микологии. -2005.-Т. 6.-С. 286.

13. Иванова, И.П. Регуляция сердечного ритма крыс на фоне электромагнитных импульсных воздействий /И.П. Иванова, A.B. Дворников// Кардиоваскулярная терапия и профилактика.- 2005.- Т. 4.- № 4,- Пр.-С.132.

14. Иванова, И.П. Озон и ультрафиолетовое излучение как определяющие факторы противоопухолевого действия миллисекундных и наносекундных импульсных электрических разрядов. /И.П. Иванова// Нижегородский медицинский журнал. - 2005.-Пр.-Озонотерапия.-С. 26-27.- ISSN 0869-0936.

15. Иванова, И.П. Сравнительный анализ эффективности озонотерапии, химиотерапии и импульсных высокоэнергетических при экспериментальной лимфосаркоме /И.П. Иванова// Нижегородский медицинский журнал. - 2005.-Пр,-Озонотерапия.-С.27-28.- ISSN 0869-0936.

16. Иванова, И.П. Озон и ультрафиолетовое излучение как биоцидные факторы высокоэнергетического импульсного некогерентного излучения/ И.П. Иванова, М.И. Заславская // Нижегородский медицинский журнал. - 2005.-' Пр,-Озонотерапия.-С. 29.-ISSN 0869-0936.

17. Иванова, И.П. Озон и активные формы кислорода высокоэнергетических импульсных разрядов. /И.П. Иванова, М.И. Заславская// Нижегородский медицинский журнал. - 2005.- Пр.-Озонотерапия,- С.30 .-ISSN 0869-0936.

18. Иванова, И.П. Изменение эндогенной токсичности и уровня XJ1 в крови животных с лимфосаркомой после воздействия некогерентным световым излучением. /И.П. Иванова// Нижегородский медицинский журнал.- 2006.-№2.-С.183-188.- ISSN 0869-0936.

19. Иванова, И.П. Действие некогерентного импульсного излучения на сиаповые кислоты и адгезивные свойства в системе «C.albicans-букальные эпигелиоциты» /И.П. Иванова, М.И. Заславская// Проблемы медицинской микологии. -2006.-Т. 8.-С. 43-44.

Патенты:

1. Пат. 4927153/14 РФ, МКИ А61 К35/14. Способ активации систем антиоксидантной защиты организма / С.П. Перетягин и др. (РФ).- N. 2020945; заявлено 11.04.91; опубл. 15.10.94, Бюл. № 19.- 35 с.

2. Пат. 95113538/14 РФ, МКИ в01 N 33/48. Способ оценки антиоксидантной активности химических и биохимических соединений / К.Н. Конторщикова, И.П. Иванова,- № 2112982; заявлено 02.08.95; опубл. 10.06.98, Бюл. № 16.-217 с.

Публикации в научных журналах, сборниках научных статей, материалах конференций:

1. Ivanova LP. The ozone influence jn dynamic oscillation of biochemical erythrocyte indexes /LP. Ivanova// 2 --'■ International Simposium on Ozone Applications: abstrakt, Havana, Cuba, 19-22 feb. 1997. Havana. 1997.-P. 25-26. . ,;v

2. Артеменко, А.Г.Синдром эндогенной интоксикации и возможности его коррекции с помощью УФО крови /А.Г. Артеменко» Лямкин М.В...И.П. Иванова// Международная научно-практическая конференция Актуальные вопросы клинической и экспериментальной терапии: Тез .докл. Минск, Беларусь, 12-14 июн. 2000.- Минск.-2000,- С. 39-40 ^ Д л

3. Активность свободно-радикальных процессов организма-опухоленосителя при физико-химических воздействиях /Т.Г. Щербатюк и [др.]// Российский конгресс по патофизиологии: Тез.докл. Москва, Россия, 25-27 сент. 2000.- М., 2000. С.203г204.

4. Biological effects'of ozone and radiation therapy of malignant neoplasms: experimental research /T.G.Scherbatyuk [et al]// 3 International Symposium on Ozone Application: abstract,' Havana, Cuba, 13-16 oct. 2000: Havana .2000.- P. 2728.' V V ' ' V'"^ ' ' " - - ' - . ■ 'v:"v1- ■

5. Experimental research of biological effects of oxygen/ozone therapy and radiation therapy in cancer animals /T.G.Scherbatyuk [et al]//. -The Journal of the international ozone association.-London.-2001.-P.340-348. ■■■'■'•■' ' • r

6. Биологические эффекты комбинированного использования ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора при ^лечении . экспериментальных опухолей /Т.Г.Щербатюк [и др.].// Ф)3!олопчнлй журнал.-Киев, 2001. -№1-Т.47, вып.2.-С. 20-27.

7. Ivanova, LP. Influence of the high-energy impulsive factors on animals with a lymphosarcoma Pliss./I.P. Ivanova., E.A. Suimach; G.M. Spirov// Reactive oxygen and nitrogen species antioxidants and human health: Abstract-Internationalconf., Smolensk, Russia, 22-25 sept.-Smolensk, 2003.-P. 160.

8. Исследование возможности применения высокоэнергетических факторов наносекундных коронных и сильноточных электрических ' разрядов для подавления раковых опухолей. '/И.П.Иванова - [и - др.]//-' Человек - 'и электромагнитные поля: Сб. докл. Междунар; Совещ: Саров, Россия, 27-29 мая 2003,-Саров: ВНИИЭФ.-2003.- С.356-363. ; •

9. Иванова, И.П.Влияния высокоэнергетических импульсных факторов на липидный состав ' опухолевой ткани крыс с лимфосаркомой - Плисса. УИ.П. Иванова.// Актуальные проблемы биологии /Сб. научн.- работ/ Сибирск. Гос. Ун-т,-2004.-Т.З.-№1 .-С.79-80. ; . :-г

10. Иванова,* И.П. Углеводный обмен животных с опухолью после воздействия импульсных разрядов /И.П.Иваяова, Н.В. Прохорова, Е.А: Зуймач// Актуальные проблемы биологии/Сб. научн. раб&т/ Сибирск. Гос. Ун-ТЛ2004л-Т.З.-С.80-81. '' ' . ^ i ■

11. Иванова, ,И.П. Активность 'нейтрофилов крыс , после воздействия высокоэнергетическими импульснымйми разрядамиУИ.П. Иванйва//'С53. на^чн.

работ/Естествознание и гуманизм Сибирс. Гос..Ун-т.- 2004.- Т.1.-№ 3.- С.43.

12. Иванова, И.П. Динамика функционального состояния гепатоцитов крыс после воздействия импульсными разрядами./И.П. Иванова// Сб. научн. работ/ Естествознание и гуманизм Сибирс. Гос. Ун-т,- 2004.- Т.1.-№ 3.- С.44. ; .

13. Иванова, И.П. Влияние импульсных коронных и искровых разрядов на изменение активности кардиомиоцитов крыс. /И.П.Иванова// Сб. научн. работ/ Естествознание и гуманизм Сибирс. Гос. Ун-т,- 2004,- Т.1.-№ 3.- С.45.

14. Иванова, И.П.Изменения в липидном, углеводном и белковом обмене крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса после воздействия высокоэнергетаческими импульсными факторами /И.П. Иванова, Е.А. Зуймач, Г.М. Спиров// 3-й съезд биофизиков России: Материалы --3-го съезда биофизиков России, Воронеж, Россия, 24-29 июня. 2004.-Воронеж, 2004.-С. 652-653. V

15.:;Иванова,'^ И.П.; Влияние - некогерентного импульсного .излучения на активность фагоцитоза и • ПОЛ крови крыс с оральным кандидозом /И.П. Иванова, М.И. Заславская, Е.А. Зуймач// 3-й съезд биофизиков. России: Материалы 3-го. съезда биофизиков России, Воронеж, Россия, 24-29 июня. 2004,-Воронеж,2004.- С. 650-651. :

16. Иванова, И.П.Влияние физико-химических факторов на мембраны клеток крови крыс с лимфосаркомой ПлиссаТИ.П. Иванова, Т.Г. Щербатюк// 3-й съезд биофизиков России: Материалы 3-го съезда биофизиков России., Воронеж, Россия, 24-29 июня. 2004.-Воронеж, 2004.-С. 653-654.

17. Иванова, И.П. Динамическое влияние коронных и искровых импульсных разрядов на метаболические процессы. /И.П. Иванова [и др.].// Ф1зюлопчний журнал.-Киев, 2005. - Т.51, вып. 5. - С.37 -~42.

18. Влияние высокоэнергетических импульсных факторов на; свободно-радикальные процессы в организме крыс в норме и с перевитой лимфосаркомой ПлиссаТИ.П. Иванова [и др.].// Высокоинтенсивные физические факторы в биологии , медицине, сельском хозяйстве и экологии: Труды междунар. конф., Саров, Россия, 26-28 апр. 2004,- Саров, РФЯЦ-ВНИИЭФ., 2005.-С. 96-102.

19. Иванова, И.П. Влияние высокоэнергетических импульсных факторов на обменные процессы крыс в норме и с перевитой лимфосаркомой Плисса /И.П. Иванова, В.Д. Селемир, Г.М.Спиров// Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии: Труды междунар. конф., Саров, Россия, 26-28 апр. 2004.- Саров, РФЯЦ-ВНИИЭФ., 2005 .-С. 113-122.

20. Бактерицидные свойства высокоэнергетических импульсных разрядов. /И.П. Иванова [и др.].// Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии: Труды междунар. конф., Саров, Россия, 26-28 апр. 2004.-Саров, РФЯЦ-ВНИИЭФ., 2005.-С. 144-148. . ^ -

21. Патоморфологические и биохимические- особенности изменений внутренних органов крыс в норме и с перевитой лимфосаркомой Плисса при воздействии высокоинтенсивными физическими факторами./И.П. Иванова [и др.].// Высокоинтенсивные физические факторы в , биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии: Труды междунар. конф., Саров, Россия, 26-28 апр. 2004.-Саров, РФЯЦ-ВНИИЭФ., 2005.-С. 187-194. . , ; .

22. Иванова, И.П. Изменение поведенческих реакций крыс в норме и с

перевитой лимфосаркомой Плисса под влиянием высокоэнергетических импульсных факторов /И.П. Иванова, Е.А.Зуймач, С.И. Шпепкин// Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии: Труды междунар. конф., Саров, Россия, 26-28 апр. 2004.-Саров, РФЯЦ-ВНИИЭФ., 2005.-С. 200-207.

23. Иванова, И.П.Изменение эндогенной токсичности крыс после воздействия импульсной газоразрядной плазмой /И.П. Иванова// Бюллетень Волгоградского Научного Центра РАМН,- 2005.- № ].- С.75-76.

24. Постнова, C.B. Коррекция интегрального показателя эндогенной токсичности крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса импульсными электромагнитными воздействиями /C.B. Постнова, И.П. Иванова// Бюллетень Волгоградского Научного Центра РАМН.- 2005.- № 1,- С.79-80.

25. Иванова, И.П. Торможение пролиферативной активности клеток лимфосаркомы Плисса высокоэнергетическими импульсными факторами журнал /И.П. Иванова// Современные наукоемкие технологии.- 2005,- №3.-С.92-93.- ISSN 1812-7320.

26. Иванова, И.П. Фунгицидное действие некогерентного импульсного света /И.П Иванова// Современные наукоемкие технологии .-2005.- №3.- С.91-92-ISSN 1812-7320.

27. Иванова, И.П. Изменение липопротеидного профиля крови крыс на фоне импульсных воздействий /И.П. Иванова// Успехи современного естествознания,- 2005,- №4,- С.28-30.- ISSN 1681-7494.

28. Иванова, И.П. Свободнорадикальное окисление липидов и изменение липидного обмена крови крыс под воздействием импульсных коронных и искровых разрядов /И.П.Иванова// Радикалы кислорода и оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека: Докл. Междунар. Конф. Смоленск, Россия, 26-30 сент. 2005.- Смоленск, 2005.-С. 358-359.

29. Иванова, И.П. Хемилюминесценция нейтрофилов крыс после воздействия высокоэнергетическими импульсными разрядами /И.П. Иванова// Радикалы кислорода и оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека: Докл. Междунар. Конф. Смоленск, Россия, 26-30 сент. 2005,- Смоленск, 2005.-С. 359360.

30. Ivanova, I.P., Biological effects of not coherent pulse optical radiation millisecond and nanosecond duration /I.P.Ivanova, S.I. Shlepkin// Abstr.-VII International Conference Atomic and Molecular Pulsed Lasers Tomsk, Russia, 12-16 September 2005.:- Tomsk.-P. 156.

31. Иванова, И.П., Изменение поведенческих реакций крыс в ответ на импульсные воздействия /И.П. Иванова.// 1 Съезда физиологов СНГ Сочи, Россия, 19-23 сентября 2005: Научные труды под. ред. Р.И. Сепиашвили.-М:Медицина-Здоровье.-2005.- Т.2.- С.30.- ISBN 5-94255-017-6.

32. Иванова, И.П., Изменение функциональной активности почек крыс после воздействия некогерентным импульсным светом видимого диапазона. /И.П.Иванова// 1 Съезда физиологов СНГ Сочи, Россия, 19-23 сентября 2005.: Научные труды под. ред. Р.И. Сепиашвили.- М:Медицина-Здоровье.-2005,-Т.2.- С.62,- ISBN 5-94255-017-6.

33. Электронно-микроскопический анализ лимфосаркомы Плисса после воздействия ВЭИФ /Е.И. Яковлева и [др.]/ XXI Российская конференция по электронной микроскопии ЭМ 2006 Черноголовка, Россия, 5-10 июня 2006.:-Тезисы докладов .-М :ИПТМР АН.- 2006.-С.286.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АО- антиоксидант;

АОА - антиокидантная активность;

АОС - антиоксидантная система;

ВНиСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы;

ВЭИВ - высокоэнергетические импульсные воздействия;

ДК - диеновые конъюгаты;

ИО - индекс окисленности;

ИР - искровой разряд;

КОЕ - колониеобразующие единицы;

КР - коронный разряд;

ЛСП - лимфосаркома Плисса;

ОЛ - общие липиды;

ОХС - общий холестерол;

ПОЛ — перекисное окисление липидов;

СРП - свободнорадикалъные процессы;

ТК - триеновые конъюгаты;

ХЛ - хемилюминесценция;

Подписано к печати 27.09.2006. Формат 60x84 '/ц Бумага писчая. Печать офсетная. Объем 2,8 п.л. Тираж 100 экз. Заказ 302 Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия 603007, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, 97 Типография НГСХА

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Иванова, Ирина Павловна

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Физико-химические основы высокоэнергетических импульсных разрядов.

1.2. Искровой разряд.

1.3. Коронный разряд.

1.4. Активные продукты высокоэнергетических импульсных разрядов.

1.2. Свободнорадикальные процессы в живых системах.

1.3. Особенности про - и антиоксидантных систем в организме при злокачественном росте.

1.4. Теоретические предпосылки использования высокоэнергетических импульсных разрядов при адаптации организма в условиях опухолевого роста.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика экспериментального атериала.

2.2. Характеристика высокоэнергетических импульсных разрядов.

2.2.1. Искровой разряд.

2.2.2. Коронный разряд.

2.3. Основные этапы исследования in vitro.

2.3.1. Оценка свободнорадикальных процессов в физиологическом растворе после воздействия высокоэнергетических импульсных разрядов.

2.3.2. Исследование влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на кровь, взвесь эритроцитов, плазму крови интактных и опухолевых животных и на суспензию опухолевых клеток лимфосаркомы Плисса.

2.3.3. Исследование влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на взвесь бактериальных клеток.

2.4. Основные этапы исследования ш vivo.

2.4.1. Исследование влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на интактных животных.

2.4.2. Исследование влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на животных с экспериментальной перевитой лимфосаркомой Плисса.

2.5. Характеристика методов исследования.

2.5.1. Гематологические методы.

2.5.2. Биохимические методы.

2.5.3. Физиологические методы.

2.5.4. Морфологические методы.

2.5.5. Методы статистической обработки данных.

3. ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ВЫСОКОЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ИМПУЛЬСНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ НА ПОКАЗАТЕЛИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В СИСТЕМАХ IN VITRO.

3.1. Влияние высокоэнергетических импульсных искровых разрядов на свободнорадикальные реакции в физиологическом растворе.

3.2. Оценка влияния высокоэнергетических импульсных воздействий различной длительности и энергоемкости на функциональное состояние мембран эритроцитов интактных и опухолевых животных в эксперименте in vitro.

3.3. Анализ влияния высокоэнергетических импульсных искровых разрядов на свободнорадикальные процессы суспензии эритроцитов, плазмы крови, цельной крови, опухолевых клеток in vitro.

3.3.1. Влияние высокоэнергетических импульсных разрядов на поверхностные структуры и фосфолипидный состав опухолевых клеток в эксперименте in vitro.

3.3.2. Оценка жизнеспособности взвеси опухолевых клеток после обработки высокоэнергетическими импульсными разрядами.

3.4. Исследование механизмов действия наносекундного коронного разряда и искрового разряда в системах с микроорганизмами.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы и важнейшие физиологические системы организма интактных и опухолевых животных"

Активация или угнетение свободнорадикальных процессов имеет важное значение при развитии отклика клеточных мембран на физико-химические воздействия. Баланс свободных радикалов, постоянно образующихся в организме, контролируется антиоксидантной системой, и поддерживается на определенном стационарном уровне (Барабой В.А., 1993, Storey К.В.,1996, Владимиров Ю.А., 1998,2000, Зенков Н.К., 2001, Vicini F, Harris J. 2002, Костюк В.А., Потапович А.И., 2004). Избыточное образование радикальных продуктов или недостаточная активность антиокислителей приводит к изменению ненасыщенности липидов, нарушениям структуры и функции мембраносвязанных ферментов, нуклеиновых кислот и, в конечном счете, к гибели клеток (Бышевский А.Ш., 1994, Кулинский В.И., 1999, Ченцов Ю.С. 2004). Поэтому исследование факторов, регулирующих интенсивность свободнорадикальных реакций в биологических системах, является актуальным.

В этой связи представляют особый интерес высокоэнергетические импульсные электромагнитные воздействия. Во время генерации высоких импульсных напряжений миллисекундных и наносекундных длительностей за счет высокой напряженности электрического поля в межэлектродном промежутке нарабатываются фотоны с высокой энергией и скоростью, являющиеся основными участниками процессов ионизации, диссоциации и рекомбинации возбужденных молекул и радикальных продуктов (Авраменко Р.Ф.,1990, 1992, Pettersson J.B., Lindroth Н.С. 1992, Райзер Ю.П. 1992, Базелян Э.М., 1997, 1998, Franke К.-Р., Meissner Н. 2000, Ивановский А. В., 2000, Бугаенко JI.T., 2002). Высокоэнергизированные частицы излучают энергию в видимом и ультрафиолетовом диапазоне и не выделяют в окружающую среду радиоактивных продуктов (Спиров Г.М., 2004). Изменяя интенсивность и длительность излучения при генерации высокоэнергетических импульсных факторов, можно добиться увеличения продукции радикалов или, наоборот, процессов их рекомбинации (Hoeben W.F., 2000, Верещагин И.П., 1999, Пискарев И.М, 2000,2001, 2003).

Это свойство высокоэнергетических импульсных воздействий может быть использовано для стимуляции каскада окислительных реакций в опухолевых клетках и торможения свободнорадикальных процессов в организме с опухолью. Известно, что опухолевые клетки обладают высоким уровнем антиоксидантной активности, а организм с опухолью - свободнорадикальной (Козлов Ю.П., 1973, Бурлакова Е.Б. 1982, Liebler D.C., 1993, Дейчман Г.И, 2000, Алехина С.П., Щербатюк Т.Г. 2003).

В основе существующих в настоящее время лимитирующих осложнений нехирургических методов лечения злокачественных новообразований -химиотерапии и радиационной терапии (кардиотоксичность, пневмотоксичность, кожная токсичность) - лежат механизмы свободнорадикальных реакций.

До настоящего времени исследования по изучению влияния высокоэнергетических импульсных воздействий проводились только на клеточном уровне (Johnson Т., 2003, Hair P.S.,2003, Chen N., 2004). При этом свободнорадикальные процессы и структурно-функциональная целостность различных систем организма остаются практически не изученными.

Окислительно-востановительные свойства импульсных разрядов используют при создании озонаторов и других устройств медицинского назначения (Karelin V.I., 1999, Sladec R.E.J. 2003, Kolb J., 2003, Перетягин С.П., 2005). Известны работы по изучению биологических эффектов наносекундных разрядов в культуре опухолевых клеток (Schoenbach, К.Н., 1997, Johnson Т., 2003, Beebe S.J. 2003).

Исследование физико-химических и биологических эффектов высокоэнергетических импульсных воздействий, выявление режимов этих воздействий, дестабилизирующих опухоль, а также метаболических процессов в интактном организме и организме с опухолью являются актуальными в поиске высокоэффективных методов контроля и коррекции свободнорадикальных процессов в организме в норме и при патологии.

Цель исследования: оценить влияние высокоэнергетических импульсных электромагнитных воздействий на свободнорадикальные процессы в клеточных мембранах и важнейшие физиологические системы организма интактных крыс и с перевитой лимфосаркомой Плисса.

В соответствии с целью решали следующие задачи:

1. Изучить особенности изменения свободнорадикальных реакций и структурно-функциональных свойств клеточных мембран in vitro под действием высокоэнергетических импульсных разрядов.

2. Выявить закономерности действия высокоэнергетических импульсных разрядов на про - и антиоксидантную активность систем организма крыс.

3. Оценить влияние высокоэнергетических импульсных разрядов на обменные процессы и жизненно важные физиологические системы.

4. Провести морфофизиологическую оценку влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на внутренние органы интактных животных, определить органы мишени.

5. Проанализировать изменения свободнорадикальных и обменных процессов крыс с экспериментальной лимфосаркомой Плисса при высокоэнергетических импульсных воздействиях. Изучить влияние высокоэнергетических воздействий на жизненно важные физиологические системы крыс с опухолью.

6. Оценить морфологические и ультраструктурные изменения ткани лимфосаркомы Плисса на фоне высокоэнергетических импульсных воздействий.

Научная новизна Впервые:

• изучены особенности свободнорадикальных реакций, оценены структурно-функциональные свойства клеток in vitro при высокоэнергетических импульсных воздействиях в широком интервале доз; установлен различный временной диапазон интенсификации свободнорадикальных процессов в клетках крови, лимфосаркомы Плисса и микроорганизмах;

• показано торможение пролиферативной активности клеток, выявлен бактерицидный и фунгицидный эффект высокоэнергетических импульсных искровых разрядов;

• определен основной действующий фактор высокоэнергетического импульсного излучения, оказывающий биологическое действие - некогерентное излучение видимого и ультрафиолетового диапазона;

• установлены закономерности изменения свободнорадикального гомеостаза у крыс при различных режимах высокоэнергетических импульсных воздействий, показана динамическа свободнорадикальных процессов в цельной крови, плазме и тканях внутренних органов интактных крыс;

• выявлен режим импульсного воздействия, увеличивающий фагоцитарную активность крови;

• проведено комплексное морфофизиологическое исследование, влияния высокоэнергетических импульсных разрядов на функциональную активность центральной нервной системы, сердца, печени и почек крыс;

• установлены режимы, изменяющие выделительную функцию почек;

• показано снижение тревожно-фобических реакций крыс при высокоэнергетических импульсных воздействиях;

• выявлено снижение уровня молекулярных продуктов перекисного окисления липидов, нормализация антиоксидантной активности, снижение интегрального показателя эндогенной токсичности, нормализация обменных процессов у крыс с лимфосаркомой Плисса при высокоэнергетических импульсных воздействиях;

• изучены в динамике структурные и ультраструктурные изменения в ткани лимфосаркомы Плисса после воздействия высокоэнергетическим импульсным некогерентным излучением;

• показана активация апоптотических процессов в опухолевой ткани при воздействии высокоэнергетическими импульсными разрядами в течение 50-300 секунд;

• разработана концептуальная схема, объясняющая структурно-функциональные изменения в опухолевой ткани, снижение системного влияния опухолевого процесса на гомеостаз и выживаемость животных с лимфосаркомой Плисса под влиянием высокоэнергетического импульсного излучения.

Теоретическая значимость работы

Анализ проведенных исследований показал, что полученные данные позволяют объяснить биологические эффекты высокоэнергетических импульсных воздействий и дать физиологически обоснованные рекомендации по рациональному использованию их в медико-биологических целях.

Совокупность экспериментальных данных, полученных с использованием многоуровневого подхода (клетки, ткани, органы, целостный организм в норме и патологии) и комплекса физиологических, биофизических, биохимических и морфологических методов позволили оценить метаболические сдвиги в организме крыс в ответ на действие высокоэнергетических импульсных разрядов. Результаты проведенных исследований позволили выявить бактерицидный и фунгицидный эффект =высокоэнергетических импульсных воздействий. Полученные в работе данные доказывают снижение пролиферативной активности опухолевых клеток за счет свободнорадикальной дестабилизации мембранного аппарата и внутриклеточных структур, а также отсутствие повреждающего действия изученных режимов высокоэнергетических импульсных воздействий для организма в целом независимо от наличия опухоли.

Полученные данные имеют фундаментальное значение для биологии, ветеринарии и медицины

Практическая значимость работы

Защищены патентами на изобретение РФ № 2020945 и № 2112982 способы активации антиоксидантной системы организма и оценки антиоксидантной активности биологических субстратов.

Результаты исследований по активации антиоксидантных систем организма крыс, торможению пролиферативной активности клеток лимфосаркомы Плисса, бактерицидной и фунгицидной активности высокоэнергетических импульсных разрядов положены в основу разработанных совместно с ВНИИЭФ г. Сарова в 2003-2004 гг. устройств «VISTA» и «БРИГ», предназначенных для медико-биологических и электрохимических исследований в специализированных профильных научно-исследовательских учреждениях РФ (ЦИИЛ НижГМА Н.Новгорода, РФЯЦ ВНИИЭФ г. Сарова).

Положения, выносимые на защиту:

1. Высокоэнергетические импульсные воздействия в широком диапазоне доз неоднозначно изменяют свободнорадикальные процессы клеток крови крыс, клеток лимфосаркомы Плисса и одноклеточных микроорганизмов in vitro.

2. Импульсные высокоэнергетические воздействия вызывают деструктивные изменения в надмембранных, мембранных и внутриклеточных структурах опухолевых клеток и микроорганизмов, определяя торможение их пролиферативной активности.

3. Воздействие высокоэнергетическими импульсными разрядами приводит к динамическим изменениям свободнорадикальных и обменных процессов в организме интактных животных и животных с перевитой лимфосаркомой.

4. Высокоэнергетические импульсные разряды не вызывают значительных морфофункциональных изменений жизненноважных органов и физиологических систем организма интактных крыс и с перевитой опухолью.

5. Регионарное воздействие высокоэнергетических импульсных разрядов на область перевитой подкожно лимфосаркомы Плисса снижает темпы роста опухоли и уменьшает ее системное влияние на организм.

Апробация работы

Основные результаты диссертации докладывали и обсуждали на: Республиканской научно-практической конференции "Актуальные проблемы физико-химической медицины" (Конаково, 1988); Всесоюзном совещании

Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение" (Рига, 1989); International conference on "Regulation free radical reactions» (Varna, 1989); 3-rd Congress of «International Association of Gerontology European Region - clinical section» (Thessaloniki, Greece, 1996); 2 International Symposium on Ozone Applications (Havana, Cuba, 1997); Международном симпозиуме «Актуальные проблемы биофизической медицины» (Киев, 2000); Международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы клинической и экспериментальной терапии" (Минск, 2000); II Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000); 3 International Symposium on Ozone Application (Havana, Cuba, 2000); VI Международной конференция "Биоантиоксидант" (Москва, 2002); Международном совещании "Человек и электромагнитные поля" (Саров, 2003); Региональной научно-практической конференции "Новые диагностические и лечебные технологии в онкологии" (Томск 2003); International conference "Reactive oxygen and nitrogen species antioxidants and human health" (Smolensk, 2003); 7-м конгрессе Международной ассоциации Морфологов (Казань, 2004); 3-м съезде биофизиков России (Воронеж 2004); Международном научном семинаре «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии» (Саров 2004); 4-м Международном симпозиуме «Актуальные проблемы биофизической медицины» (Киев, 2004); Российском съезде Физиологов (Екатеринбург, 2004); 3-м Всероссийском Конгрессе по Медицинской Микологии (Москва, 2005); 3-й международной научно-практической конференции "Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения" (Томск, 2005); Всероссийском симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика, принципы коррекции» (Волгоград 2005); I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); VII Международной конференции «Импульсные лазеры на переходах атомов и молекул» (Томск, 2005); Международной конференции "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" (Смоленск,2005); Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2005); VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Озон в биологии и медицине» (Нижний Новгород, 2005); 8-м Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2005» (Пущино, 2005).

Публикации

Основные научные результаты по материалам диссертации опубликованы в 54 научных работах, из них в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях рекомендованных ВАК РФ 19 публикаций, и 2 патента на изобретения РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 350 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, с выводами и заключениями по каждой главе, общими выводами по работе и общим заключением. Список цитируемой литературы включает 404 источника (322 отечественных и 82 зарубежных публикации). Работа содержит 66 рисунков и 53 таблицы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Иванова, Ирина Павловна

4. Результаты исследования положены в основу разработанных совместно с инженерами НТЦФ РФЯЦ ВНИИЭФ г. Сарова устройств «VISTA» и «БРИГ», используемых при выполнении научно-исследовательских работ в ЦНИЛ НижГМА Росздрава и НТЦФ РФЯЦ ВНИИЭФ, и рекомендуются для доклинических исследований.

5. Данные по влиянию высокоэнергетических импульсных коронных и искровых разрядов на жидкие среды и биологические объекты внедрены и используются в 300 «Светотехника» г. Саров и ООО «Мегастрой» г. Москва.

6. Полученные результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре биохимии ГОУ ВПО НижГМА при чтении лекций по теме «Обмен липидов, метаболизм мембран, перекисное окисление липидов» для студентов 2 курса лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов.

7. Новые данные о механизмах действия высокоэнергетических импульсных воздействий на свободнорадикальные процессы и функциональное состояние организма интактных и животных с опухолью являются основанием для клинических исследований, а также могут быть включены в программы по биологии, физиологии, биохимии, патофизиологии и онкологии при подготовке специалистов медико-биологического и ветеринарного профиля.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании полученных данных разработан и запатентован способ оценки антиоксидантной активности химических и биохимических соединений (Пат. №2112982)

2. Полученные данные по активации антиоксидантной активности в организме являются частью разработанного способа активации систем антиоксидантной защиты организма (Пат. № 2020945), рекомендуемого для применения в ветеринарной практике.

3. Разработанные методики внедрены и используются для стерилизации жидких сред, лабораторной посуды, перевязочного материала, помещений в ЦНИЛ ГОУ ВПО НижГМА Росздрава.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Иванова, Ирина Павловна, Нижний Новгород

1. Агеенко, А. И. овая диагностика рака: теория, диагностика, лечение, реабилитация. / А.И Агеенко. .-М.: Медицина XX1.- 2004. -442 с.

2. Агулова, Л.П. Принципы адаптации биологических систем к космогеофизическим факторам. / Л.П. Агулова // Биофизика. 1998, т.43, вып.4, с.561-564.

3. Адо, А.Д. Патофизиология / А.Д.Адо и др..-М.: Медицина, 1973.-535 с.

4. Айказин, Э.С. Клиническая лабораторная диагностика / Э.С Айказин., В.В Чемоданов. .-1998.- С.23-24.

5. Активность свободно-радикальных процессов организма-опухоленосителя при физико-химических воздействиях / Т.Г. Щербатюк и др..]// Российский конгресс по патофизиологии: Тез.докл. Москва, Россия, 25-27 сент. 2000.- М., 2000. С.203-204.

6. Алексеенко, А.А. Применение КВЧ терапии в комбинированном лечении ортопедических больных. / А.А Алексеенко, Л.Б. Манкевич, М.Б. Голант // Миллиметровые волны в медицине. М.: Медицина, Т.1.- 1991. -С. 120-124.

7. Алесенко, А.В. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток/ А.В. Алесенко //Биохимия,-1998.-Т. 63, вып.1.- С. 1053-1059.

8. Алехина, С.П. Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты./ С.П.Алехина, Т.Г Щербатюк- Н.Н.: Литера, 2003. 240 с.

9. Андреев, Д.Н. Органический синтез в электрических разрядах. / Д.Н. Андреев.-М.-Л.: Доклады АН СССР. -1953.- 334 с.

10. Апоптоз: начало будущего./ А.Н. Маянский и др. //ЖМЭИ.- 1997.-N 2.-С.88-94.

11. Аристова, Н.А. Сравнение окислительных методов очистки сточных вод. Теоретические основы химической технологии. / Н.А Аристова, И.М. Пискарев //Теоретические основы химической технологии.- 2003,- Т. 37, №2.-С.38.

12. Аристова, Н.А. Генерирование озоно-гидроксильной смеси в коронномэлектрическом разряде. / Н.А Аристова, И.М. Пискарев //Журнал физической химии.- 2003 .-Т. 77, № 5.- С. 813 816.

13. Аристова, Н.А. Изменение рН среды и скорости уменьшения химического поглощения кислорода при разложении фенола под действием электрического разряда. / Н.А Аристова., И.М. Пискарев //Журнал прикладной химии. -2000.-Т. 73, Вып. 10.- С. 1670 1673.

14. Ашмарин, И.П. Пептиды, обучение, память/ И.П Ашмарин., Р.И. Кругликов // Нейрохимия.- 1983. -Т.2, №3. -С.327-341.

15. Ашмарин, И.Т. Элементы патологической физиологии и биохимии. / И.Т. Ашмарин.-М.: Изд-во МГУ.- 1997.204 с.

16. Баглей, Е.А. Антиокислительная активность и радиочувствительность нормальных и опухолевых тканей // Сб. статей «Физико-химические механизмы злокачественного роста». М.: Наука, 1970. С.24-45.

17. Баевский, P.M. Кибернетический анализ процессов управления сердечным ритмом / Р.М.Баевский // Актуальные проблемы физиологии и патологии кровообращения. М.: Медицина, 1976. С. 161.

18. Баевский, P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы патологии. / Баевский P.M. -М.: Медицина, 1976. 295 с.

19. Баевский, P.M. Математический анализ изменений сердечного ритма при стрессе./ Р.М Баевский, О.И Кириллов, С.З. Клецкин М.: Наука, 1984. - -221с.

20. Базелян, Э. М. Искровой разряд в воздухе./ Э. МЪазелян., И. М Ражанский. Новосибирск: Наука, 1988.- 164 с.

21. Базелян, Э.М. Искровой Разряд / Э.М.Базелян.-М.: МФТИ, 1997.317 с.

22. Баньков, В.И. Низкочастотные импульсные сложномодулированные электромагнитные поля в медицине и биологии (экспериментальные исследования)./ В.И. Баньков, Н.П Макарова., Э.К. Николаев. Екатеринбург: Изд-во Урал. Ун-та, 1992.- 100 с.

23. Барабой, В.А. Перекисное окисление, биоэнергетика в механизме стресса. Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. / Барабой В.А.-М.- 1993.-С.27-33.

24. Баскаков, И.В.Л. Роль электронно-возбужденных состояний вбиохимических процессах. / И.В Баскаков, B.J1. Воейков // Биохимия,- 1996.Т. 61, N 7. С. 1169-1181.

25. Бахтаев, Ш. А. Коронный разряд на микропроводах./ Ш. А. Бахтаев. -Алма-Ата: Наука, 1984. 208 с.

26. Беличковский, Б.Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б.Т. Беличковский //Вестник РАМН.-2001.-№ 6. -С. 45-52.

27. Белушкина, Н.Н. Молекулярные основы патологии апоптоза / Н.Н Белушкина., С. Е. Северин // Архив патологии. 2001. - № 1. - С. 51-60.

28. Беляев, Д.Г. Гипертермическое воздействие как метод противоопухолевой терапии / Д.Г. Беляев // Онкология для врачей. -2002.-Т. 4, № 3.- С. 28-32

29. Березов, Т.Т. Биологическая химия./ Т.Т Березов, Б.Ф. Коровкин.- М.: Медицина, 1990.- 528 с.

30. Беркенгейм, М. JI. Технология озонотерапии/ М. Л. Беркенгейм // Онкология для врачей.- 2003. -Т. 3, №5. -С. 35-37

31. Биологические эффекты комбинированного использования ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора при лечении экспериментальных опухолей /Т. Г.Щербатюк и др./; // Физиологический журнал. -2001. Том 47, Вып. 1., Часть 2.- С. 20-27.

32. Биологические эффекты комбинированного использования ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора при лечении экспериментальных опухолей / Т.Г.Щербатюк и др..// Ф1зюлопчний журнал.- Киев, 2001. -№1-Т.47, вып.2.-С.20-27.

33. Биологические эффекты физико- химических воздействий, изученные на модели Лимфосаркома Плисса" /Т. Г.Щербатюк и др. // Тезисы II Международного симпозиума "Актуальные проблемы биофизической медицины". -Киев, 2000. С. 14.

34. Биохимические основы патологических процессов / Под ред. чл.-кор. РАН Е.С. Северина. М.: Медицина, 2000. - 302 с.

35. Боголюбов, В.М. Общая физиотерапия./ В.М Боголюбов., Г.Н.

36. Пономаренко.- М., СПб.: СЛП.- 1998.- 480с.

37. Бойчук, С. В. Апоптоз: характеристика, методы изучения и его роль в патогенезе атопических заболеваний / С. В Бойчук., И.Г Мустафин., Р.С. Фассахов // Казанский медицинский журнал. 2000. - Т. LXXXI, № 3. - С. 217-222.

38. Бредбери, М. Концепция гематэнцефалического барьера./ М Бредбери. -М.: Медицина, 1983.-480 с.

39. Бриль, Г.Е. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на генетический аппарат клетки. Учебное пособие./ Г.Е Бриль., Н.П.Панина .-Саратов:-Саратовский медицинский университет,- 2000.- 33 с.

40. Бугаенко, JI.T. Химия высоких энергий./ JI.T. Бугаенко, М.Г. Кузьмин ,Л.С. Полак. М.: Химия. 1988. 365 с.

41. Буйлин, В.А. Лазерная рефлексотерапия с применением аппарата "Креолка". Информационно-методический сборник. / В.А. Буйлин.-М.: ООО "Техника-Про".- 2002.- 67 с.

42. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения./ Я. Буреш, О. Бурешова, Дж. П Хьюстон. / Под ред. проф. А.С. Батуева. М.Наука.- 1991.- 400 с.

43. Бурлакова, Е. Б. О некоторых физико-химических критериях химиотерапии злокачественных новообразований./ Е. Б. Бурлакова //Физико-химические механизмы злокачественного роста. Труды МОИП, т. XXXII. М.: Наука, 1970. - С. 41-47.

44. Бурлакова, Е.Б. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте/Е.Б. Бурлакова. -. М.,1975. 159 с.

45. Бурлакова, Е.Б. Роль антиокислителей в физико-химических процессах в регулировании и размножении клеток./ Е.Б. Бурлакова //Физико химические основы авторегуляции в клетках. М., Наука.-1968.-С. 15-25.

46. Бурлакова, Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке/ Е.Б. Бурлакова // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ.- М.: Наука.-1981.-С. 23 -34.

47. Бурлакова, Е.Б. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме ипатологии./ Е.Б Бурлакова., Г.В Архипова., А.Н Голощапов. М.: Наука, 1982. С. 74-83.

48. Бурлакова, Е.Б. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. / Е.Б. Бурлакова , А.Н Голощапов, Е.М. Молочкина.- М.,1982. 184 с.

49. Бурлакова, Е.Б. Антиоксиданты в химиотерапии опухолей/ Е.Б Бурлакова, Н.П. Пальмина//.-Вопр.онк. 1990. Т.36, № 10. С.1155-1162.

50. Бурлакова, Е.Б. Сверхмалые дозы- большая загадка природы / Е.Б Бурлакова//.- Наука и биотехнологии в промышленности.- 2002.-В. 3.- №4.-С. 24-27

51. Бухарин, О.В. Патогенные бактерии в природных экосистемах/ О.В Бухарин., В.Ю. Литвин Екатеринбург, 1997.-е.

52. Бычков, В.Л.Об электрическом заряжении полимерных структур / В.Л. Бычков.- М: МИФИ.- 1992.-16с.

53. Бышевский, А.Ш. Биохимия для врача./ А.Ш Бышевский., О.А Терсенов. -Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. 384с.

54. Веремеенко, К. Н. П. Протеолиз и злокачественный рост/ К. Н Веремеенко., О. П Голобородько.//. Вопросы медицинской химии.- 1986. Т.32. Вып.6. С.677-680.

55. Верещагин, И.П. Коронный разряд в аппаратах электронно-ионной технологии./ И.П. Верещагин, В.П Ларионова. —М.: Энергоатомиздат, 1993. 543с.

56. Верещагин, И.П. Высоковольтные электротехнологии. Учебное пособие по курсу «Основы электротехнологии»/ И.П. Верещагин .-М: МЭИ .-1999.-204с.

57. Взаимоотношение спиртов холестерина, глицерина и двойных связей жирных кислот в сыворотке крови и липопротеинах. / Титов В. Н. и др.. // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - №12. - С. 3-7.

58. Владимиров, Ю.А. Свободнорадикальное окисление и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров //

59. Биофизика, 1987.-вып. 5. С.838-839.

60. Владимиров, Ю.А. Биологические мембраны и патология клетки./ Ю.А. Владимиров .- М., 1979.47 с.

61. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты/ Ю.А. Владимиров // Вестник РАМН. -1998. № 7. -С 47-50

62. Владимиров, Ю.А. Три гипотезы о механизме действия лазерного облучения на клетки и организм человека / Ю.А. Владимиров // В кн.: Эфферентная медицина. М.: ИБМХ РАМН, 1994 - С. 51-67.

63. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах Итоги науки и техники. Сер. Биофизика./ Ю.А Владимиров, О.А Азизова, А.И. Деев М., 1991.т. 29. 249 с.

64. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах./ Ю.А Владимиров., А.И. Арчаков.- М.: Наука.-1972.-272 с.

65. Владимиров, Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов./ Ю.А Владимиров, А.Я Потапенко.- М.:Высшая школа, 1989. 237 с.

66. Владимиров, Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов. / Ю.А Владимиров., А.Я Потапенко.-М. Высшая школа.-, 1989.-С.6.

67. Владимирская, Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. / Е.Б Владимирская. -М.: Агат-Мед. -2001.- 110 с.

68. Владимирская, Е.Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста. / Е.Б., Владимирская А.А., Масчан А.Г. Румянцев // Гематол трансфузиол.-1997.-№ 5.-С. 4-9.

69. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на функциональный потенциал лейкоцитов/Г.И. Клебанов и др./ // Бюлл. Эксп. Биол. мед.- 1997-.Т.123, №4,- С. 395-398.

70. Воейков, B.JL Активный кислород, организованная вода и процессы жизнедеятельности. / B.JI Воейков. //Труды II Международного конгресса Слабые и сверхслабые излучения в биологии и медицине. Санкт-Петербург.-2000.-С. 1-4.

71. Воейков, B.J1. Благотворная роль активных форм кислорода. / B.J1. Воейков // "Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии" 2001 год, том XI, № 4, С. 128-135.

72. Возможности немедикаментозной коррекции нарушений реологии крови при ишемической болезни сердца / Н.Б. Амиров и др. //Российский кардиологический журнал. 2003. №4. С. 42-45.

73. Высоковольтные электротехнологии Учебное пособие по курсу «Основы электротехнологии»/ ред.И.П. Верещагин.- М: МЭИ .-1999,- 204 с.

74. Германов, В.А. Эритроциты, тромбоциты, лейкоциты, Куйбышевсое книжное издательство / В.А Германов, О.Н. Пиксанов- 1966.- 163 с.

75. Гиттельзон, А.И. Факторы влияющие на стойкость эритроцитов в кровяном русле Вопросы биохимии, биофизики и патологии эритроцитов / А.И Гиттельзон., В.Н. Терсков -Новосибирск,- 1962 .- С.- 342.

76. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц ; Перевод с англ. Ю. А. Данилова; Под ред. Н. Е. Бузикашвили, Д. В. Самойлова.- М. Изд. дом "Практика".- 1999.-459 с.

77. Гогвадзе, Г.В. Участие фосфолипазы А2 в индуцированном продуктами ПОЛ разобщении митохондрий печени крыс /Г.В. Гогвадзе и др..//.-Биохимия.- 1990.- Т.55, вып. 12.- С. 2195-2199.

78. Годик, Э.Э. Человек "глазами радиофизики". / Э.Э Годик., Ю.В. Гуляев // .-Радиотехника .-1991.- №8.- С. 50-62.

79. Грибанов, Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфолипидов/Г.А.Грибанов/.-Вопросы мед.химии,-1991.-Т. 37, вып.4.-С.2-7.

80. Дворецкий, Л.Н. Паранеопластические синдромы. Справочник поликлинического врача / Л.Н. Дворецкий .- 2003.- Т.З, №3. С.

81. Девятков, Н. Д. . Применение миллиметровых волн в медицине/ Н. Д. Девятков, Ю. Л Арзуманов.-. М.: Медицина, 1987. 279 с.

82. Девятков, Н. Д. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности/ Н. Д., Девятков М. Б Голант., О. В Бецкий.-. М.: Радио и связь, 1991. 168 с.

83. Дейчман, Г.И. Естественный отбор и ранние изменения фенотипа опухолевых клеток in vivo: приобретение новых механизмов защиты/ Г.И Дейчман./. Биохимия 2000, том 65, вып. 1, С. 92-111

84. Демецкий, A.M. Искусственные магнитные поля в медицине/ А.М Демецкий, А.Г Алексеев/. Минск, 1981.94 с.

85. Динамика диссипации энергии в наносекундном коронном разряде /Р. X. Амиров и др. //Теплофизика высоких температур.-1991.-Т.29, №6.- С. 10531059

86. Долгих, В. Т. Опухолевый рост. Избранные лекции/ В. Т Долгих./.- М.: Мед. книга, Н.Новгород: Издательство НГМА, 2001. 81с.

87. Другова, О.В. Эффекты воздействия красного света на постишемический миокард при реперфузии/ О.В Другова, В.А Монич, О.В. Житникова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2001.Т.131. №4. С.351-352.

88. Дятловицкая, Э.В. Сфинголипиды и злокачественный рост / Э.В. Дятловицкая /.- Биохимия.- 1995.- Т.60, вып. 6.-С.843-849.

89. Жанаева, С.Я. Стимуляция макрофагов усиливает, а депрессия тормозит метастазирование двух перевиваемых опухолей мышей в печень и легкие / С.Я. Жанаева и др../.- Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2005.-Т.140.-№10.-с.450-453.

90. Жемайтите, Д.И. Вегететивная регуляция синусового ритма сердца у здоровых и больных. Вильнюс: Мокслас,1982. - 130 с.

91. Журавлев, А. И. О радиации и радикалах в живых организмах. // Свободнорадикальные процессы в биологических системах. / А. И. Журавлев Тр. МОИП. Т. XVI. М.: Наука, 1966. - С. 290-291.

92. Журавлев, А.И. Закономерности свободнорадикального окисления в тканях животных организмов/ А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982. С. 15-65.

93. Журавлев, А.И. Свечение живых тканей/А.И Журавлев/М.:Наука,1966. 250 с.

94. Зайцев, В. А. Энергетический обмен при спонтанной регрессииперевиваемых опухолей/ В. А Зайцев, Т. С Морозкина. //Вопросы онкологии.- 1980. T.XXVI. №7. С. 46-51.

95. Зайцев, В. Г. Свободнорадикальные процессы в живых организмах/ В.Г. Зайцев // электронная монография on-line.- 2000. -Доступно по URL: http://froxi.nm.ru/

96. Зайцев, В. Г. Методологические аспекты свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма/ В. Г Зайцев, В. И. Закревский //Вестник Волгоградской медицинской академии. Вып. 4. Волгоград. 1998. Вып. 4.-С.49-53.

97. Заславская, М.И. Фунгицидный эффект некогерентного импульсного излучения при экспериментальном оральном кандидозе крыс / М.И. Заславская, И.П. Иванова // Проблемы медицинской микологии.- 2005 .-Т. 6, С. 285.

98. Зенков, Н.К. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика/ Н.К. Зенков, Е.Б Меныцикова, С.М Шергин./. Новосибирск: РАМН, Сибирское Отделение. - 1993. - 181 с.

99. Зенков, Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах/ Н.К. Зенков , Е.Б Меньшикова. // Успехи современной биологии. 1993. Т.113, вып.З. С.286-296.

100. Иванов, А. В. Фотодинамическая терапия опухолей: пути повышения эффективности/ А. В.Иванов/.- 2001.- 80 с

101. Иванов В. И. Роль липидных компонентов микросомальных мембран гепатоцитов среднеазиатской черепахи в реализации лучевых повреждений./ В. И Иванов, А. А Турдыев., И. А. Аббасова // Радиобиология.-1985.-Т. 25, вып. 2.-С. 191-195.

102. Иванов, И. И. Токоферолы липидные антиоксиданты. / И. И Иванов// Физико-химические основы функционирования надмолекулярных структур клетки. М.: Наука, 1974.- С. 85-87.

103. Иванов, И. И. Физико-химические основы функционирования надмолекулярных структур клетки/ И. И Иванов./. М.: Наука.- 1974.- С. 8587.

104. Иванов, И.И. Перераспределение антиоксидантов липидной природы в организме животного при раке / И.И Иванов., Б.Н. Тарусов // Физико-химические механизмы злокачественного роста. М.: Наука, 1970. С. 112 -116.

105. Иванова, И.П. Опухолевые процессы и высокоэнергетические импульсные факторы. / И.П Иванова., Е.А Зуймач., Г.М Спиров. //Нижегородский медицинский журнал. 2003. № 1. С. 81-85.

106. Иванова, И.П. Механизм фунгицидного эффекта высокоэнергетического импульсного излучения / И.П. Иванова, М.И. Заславская //Проблемы медицинской микологии. -2005.-Т. 6.-С. 286.

107. Иванова, И.П. Озон и ультрафиолетовое излучение как биоцидные факторы высокоэнергетического импульсного некогерентного излучения/ И.П. Иванова, М.И. Заславская //Нижегородский медицинский журнал. Раздел «Озонотерапия».- 2005.-С. 29.- ISSN 0869-0936.

108. Иванова, И.П. Динамическое влияние коронных и искровых импульсных разрядов на метаболические процессы. / И.П. Иванова и др..// Ф1зюлопчний журнал.-Киев, 2005. Т.51, вып. 5. - С.37 - 42.

109. Иванова, И.П. Озон и активные формы кислорода высокоэнергетических импульсных разрядов. / И.П. Иванова, М.И. Заславская //Нижегородский медицинский журнал. Раздел «Озонотерапия».2005.- С.30 .-ISSN 0869-0936.

110. Иванова, И.П. Опухолевые процессы и высокоэнергетические импульсные факторы / И.П. Иванова, Е.А. Зуймач, Г.М. Спиров// Нижегородский медицинский журнал.- 2003.- №1.- С. 81-85.

111. Иванова, И.П. Оральный кандидоз крыс на фоне некогерентного импульсного излучения /И.П.Иванова, М.И. Заславская //Проблемы медицинской микологии.- 2004.- № 2.-Т. 6.-С.82-83.

112. Иванова, И.П. Сравнительный анализ эффективности Озонотерапии, химиотерапии и импульсных высокоэнергетических при экспериментальной лимфосаркоме / И.П Иванова // Нижегородский медицинский журнал. Раздел «Озонотерапия».- 2005.-С.27-28.- ISSN 08690936.

113. Иванова, И.П. Фунгицидное действие некогерентного импульсного света / И.П Иванова. // Современные наукоемкие технологии .-2005.- №3.-С.91-92.- ISSN 1812-7320.

114. Иванова, И.П. Эффект влияния высокоэнергетического импульсного излучения на метаболизм животных в норме и с лимфосаркомой Плисса./ И.П.Иванова // Бюллетень сибирской медицины. 2005, .-2005.- №2- С. 8890.

115. Иванова, И.П. Изменение липопротеидного профиля крови крыс на фоне импульсных воздействий журнал / И.П. Иванова //Успехисовременного естествознания,- 2005,- №4,- С.28-30,- ISSN 1681-7494.

116. Иванова, И.П.Изменение эндогенной токсичности крыс после воздействия импульсной газоразрядной плазмой / И.П. Иванова //Бюллетень Волгоградского Научного Центра РАМН,- 2005.- № 1.- С.75-76.

117. Иванова, И.П.Морфологические изменения внутренних органов крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса при воздействии коронным разрядом/ И.П. Иванова, Н.Н. Проданец, Г.М. Спиров // Морфология.2003.-№ 4.- С. 52.-ISSN 0004-1947.

118. Ивановский, А. В. О механизме распространения положительного лидера / А. В. Ивановский // ЖТФ.- 2000.- т. 70. -Вып. 6.- С. 43-51.

119. Ивановский, А. В. О механизме распространения положительного лидера / А. В. Ивановский // ЖТФ, 2000, том 70. Вып. 6. С. 43-51.

120. Ивановский, А. В. О стримерном пробое воздуха в однородном электрическом поле/ А. В. Ивановский //ЖТФ. 1996. Т. 66. Вып. 8. С. 59-72.

121. Ивановский, А. В. Об установившемся лидерном пробое. Атмосфера азота / А. В. Ивановский // ЖТФ. 1998. Т. 68. Вып. 6. С. 37-44.

122. Изменение показателей перекисного окисления липидов в процессе лечения детей, страдающих различными онкологическими заболеваниями/Казанова Г. В. и др. //Вопросы онкологии. 1997. Т.43. №4. С. 453-456.

123. Импульсно-периодические системы наработки озона разрядом микросекундной / Буранов С.Н. и др. //Тез. Докл. Конф. "Озон в биологии и медицине". Н.Новгород, 1995г., С. 102.

124. Исследование плазменных образований, инициируемых эрозионным разрядом /Р.Ф. Авраменко и др.//.-ЖТФ.-1990.-Т.60, вып.12.-С.57-64 Кабардин О.Ф. Физика: Справочные материалы/ О.Ф Кабардин./. М.: Просвещение, 1991. 367 с.

125. Каган, В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. / В.Е Каган., О.Н Орлов., J1.J1. Прилипко // Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Биофизика. М. ,1986. Т18 .136 с.

126. Каменец, JI. Я. Цитотоксическая активность лимфоидных клеток при раке/ J1. Я Каменец., Ю. А. Гриневич //Вопросы онкологии. 1980. T.XXVI. С. 81-85.

127. Камышников, B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике/ Камышников B.C./. Минск: Беларусия, 2000. 495 с.

128. Камышников, B.C. Справочник по по клинико-биохимической лабораторной диагностике. ./ B.C. Камышников /.- Минск: Беларусь, 2003. -465 с.

129. Кареева, Н.П. Нарушения антиоксидантного статуса больных лимфомами и возможности его коррекции. / Н.П. Кареева и др../ Онкология СО РАМН.- №3.-117,- 2005.-С.30-36

130. Кашулина, А.П. Особенности свободнорадикальных процессов при первично-множественных злокачественных заболеваниях у людей / А.П. Кашулина // Медицинская консультация. 2000, -№ 3. -С. 4 -7.

131. Клебанов Г.И. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов / Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Успехи соврем. биол.-1999- Т.119, №5.-С.462-475.

132. Климов, А. Н. Иммунореактивность и атеросклероз/ А. Н Климов./. Л.: Медицина, 1986. - 192 с.

133. Климов, А.Н. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. / А.Н Климов., Н.Г. Никульчева /СПб.- Питер.- 1995. С. 10-15.

134. Коган, А.Х. Опухоль / А.Х Коган. //Патофизиология: Курс лекций.-М.: Медицина, 1997. С. 252-282.

135. Коган, А.Х. Ингибирование углекислым газом генерации активных форм кислорода клетками внутренних органов и его биологическое значение/ А.Х Коган., С.В Грачев., С.В. Елисеева // Бюл. экспер. биол. и мед. -1996. -Т. 121.-№ 4.-С. 407-4 10.

136. Коган Е. Патология митоза и апоптоза при опухолевом росте/ Е Коган., С. Д Демура., М.Пальцев // Врач. 2001. - № 9. - С. 35-37.

137. Козлов, В.И. Современные направления в лазерной медицине/ Козлов В.И/ .-1997;.-№1.- с.6-12

138. Козлов, В.И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии / В.И Козлов., В.А Буйлин., Н.Г. Самойлов /Самара-Киев: «Здоров'я», 1993. 216 с.

139. Козлов, К.В. Современный уровень понимания механизма барьерного разряда в смесях кислорода с азотом/ К.В Козлов.// Доклад на первой всероссийской конференции «Озон и другие экологические окислители. Наука и технология» г. Н.Новгород, 2005. С.45.

140. Козлов, Ю. П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах/ Ю. П Козлов./. М.: МГУ, 1973.- 175 с.

141. Козлов, Ю.П. Свободнорадикальные процессы в биологических системах/ Ю.П Козлов., Б.Н Тарусов./. М.: Наука, 1966. С 31.

142. Коломийцева, И. К. Радиационная биохимия мембранных липидов./ Коломийцева И. К. / М., 1989. 270 с.

143. Кольман, Я. Наглядная биохимия. / Я. Кольман, К.-Г. Рем /- М.: Мир, 2000. 496 с.

144. Кондратьева, А.П Основные направления современной лучевой терапии злокачественных опухолей/ А.П. Кондратьева /.- // Онкология для врачей . 2002. Т. 4. №3. С. 17-19

145. Кондратьева, А.П. Лучевая терапия злокачественных опухолей./ А.П. Кондратьева /.-РМЖ.- 1998.-Т.-6.- № Ю.-с.,

146. Кондратьева, А.П. Лучевая терапия рака предстательной железы./ А.П. Кондратьева/.-Клиническая Онкология.--1999 Т. 1.- №1, с.28

147. Конторщикова, К. Н. Перекисное окисление липидов при коррекции гипоксических нарушений физикохимическими факторами /К.Н. 151. Конторщикова / // Автореф. докт. биол. наук.- СПб.- 1992.- 32 с.

148. Конторщикова, К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии. /К.Н. Конторщикова / Нижний Новгород, 2000.23 с.

149. Конторщикова, К.Н. Биохимические основы эффективности озонотерапии /К.Н. Конторщикова / Озон в биологии и медицине. Тез. докл. II Всероссийской научно-практической конференции. Н. Новгород, 1995. с 8.

150. Барьерный разряд в водовоздушной среде и его применение в технологии очистки воды. / Я.И Корнев. и др.. // Доклад на первой всероссийской конференции «Озон и другие экологические окислители. Наука и технология.» Москва, 2005 . с. 182.

151. Костюк, В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты. /В.А. Костюк, А.И.Потапович/. Мн.: БГУ, 2004. - 174 с.

152. Красильников, М.А. Опухолевый рост/ М.А Красильников., В.С Шапот., А.В Лихтенштейн. / //Патологическая физиология.-М.: Медицина, 2000.С. 290-314.

153. Кривчик, А. А. Патофизиологические аспекты опухолевого роста/ А. А Кривчик./. Минск, «Вышэйшая школа», 1997. 143 с.

154. Крылов, В.И. Физиология и патология клеточных мембран./ В.И. Крылов / Свердловск, 1984. С. 13-18.

155. Кулагин, Д. А. Исследования эмоциональности у крыс линий Вистар Крушинского-Молодкиной методом открытого поля/ Д. А. Кулагин, В. Н Фёдоров. /.- В кн.: Генетика поведения. Л.: Наука, 1969, с. 35-42. 17

156. Кулинский, В.И. Активные формы кислорода и оксидативнаямодификация макромолекул: польза, вред, защита / В.И. Кулинский // Соровский образовательный журнал. 1999. № 1.С.2-7

157. Кутепов, A.M. Химические процессы, инициируемые неравновесной плазмой в растворах. / A.M. Кутепов, А.Г. Захаров, А.И. Максимов // Теоретические основы химической технологии. 2000. Т. 34. № 1. С. 76.

158. Куценок, В.В., Гамалея Н.Ф.Фото динамическая терапия злокачественных опухолей/ В.В Куценок, Н.Ф Гамалея/ Онкология т.5, № 1, 2003. с.69-72,

159. Влияние видимого света на содержание белка в крови. /Л. С. Дорофеева и др.. / Межвуз. сб. науч. тр. Мордовский университет - Саранск, 1989. С. 15-18.

160. Лаврова, В.С Нейтрофилы и злокачественный рост / B.C. Лаврова /Томск: Изд-во Томского ун-та, 1992, 124 с.

161. Ланкин, В. 3. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ/ В. 3. Ланкин /. М.: Наука, 1981. - 244 с.

162. Ленинджер, А. Биохимия: Молекулярные основы структуры и функций клетки/ А Ленинджер.- М.: Мир, 1974. С. 1056

163. Липидно-связанные сиаловые кислоты сыворотки крови в комплексной диагностике рецидивов рака яичников / Л.С. Бассеалык и др. // Вестник АМН СССР. 1985. № 9. С.67-69.

164. Литвицкий, П.Ф. Патофизиология. Курс лекций./ П.Ф. Литвицкий / М.: Медицина, 1997. 752 с.

165. Лихтенштейн, А.В. Введение в проблемы биохимии и физиологии опухолевого роста / А.В Лихтенштейн., Л.С. Бассалык //Элементы патологической физиологии и биохимии.-М:МГУ, 1997.С. 140-152.

166. Лихтенштейн, А.В. Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы / А.В. Лихтенштейн, B.C. Шапот. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 1998.- №3.- С.25-44.

167. Лозаннский, Э. Д. Теория искры/ Э. Д. Лозанский ,0. Б.Фирсов /.- М.: Атомиздат,1975. 271 с.

168. Лушников, Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз)./ Е.Ф Лушников., А.Ю.

169. Абросимов.- М.: Медицина, 2001. - 190 с.

170. Лушников, Е.Ф. Сравнительная морфология апоптоза и некроза клеток опухолей. / Е.Ф Лушников., А.Ю. Абросимов //Тезисы 1 Белорусского съезда патологоанатомов и судебных медиков.- Минск 1990-1991.-Т. 2.-е. 299-300.

171. Лущак, В.И. Окислительный стресс и механизмы защиты от него у бактерий / В.И. Лущак // Биохимия. 2001.Т.66, вып 5. С.592-609.

172. Лю, Б.Н. Физико-химические и биокибернетические аспекты онкогенеза/ Б.Н Лю., Е.М Шайхутдинов.-Алма-Ата:Гылым, 1991.271 с.

173. Любимов, А. Введение в экспериментальную физику частиц / А Любимов., Д Киш. -ДубнаЮИЯИ РАН.- 1999.-330с. ISBN 5-85165-522-4

174. Любимова, Н.В. Биохимические показатели в комплексной диагностике рака легкого/ Н.В.Любимова, Н.Е.Хайленко, М.И. Давыдов //Вопросы онкологии. 1994. Т. 40. №4-6. С. 156-160.

175. Малахова, М. Я. Лабораторная диагностика эндогенной интоксикации/ М. Я. Малахова //Медицинские лабораторные технологии и диагностика. С.Петербург: Интермедика. 1999.С.618-649

176. Малахова, М. Я. Методы биохимической регистрации эндогенной интоксикации (сообщение второе)/ М. Я. Малахова // Эфферентная терапия.-1995.-Т.1.- №2 С.61-64

177. Малахова, М. Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме/ М. Я. Малахова//Эфферентная терапия. 2000. Т.6. №4. С.3-14.

178. Манойлов, С.Е. Биохимические основы злокачественного роста/ С.Е Манойлов./.-Л.: Медицина, 1971. 230 с.

179. Маршак И.С. Импульсные источники света/ И.С Маршак., А.С Дойников., В.П. Жильцов/. М.: Энергия, 1972- 472 с.

180. Маршалл, В. Дж. Клиническая биохимия/ В. Дж Маршалл./. М.-СПб.: «Издательство БИНОМ» «Невский диалект», 2000. 368с.

181. Маянский, А.Н Микробилология для врачей.- А.Н Маянский /.Нижний Новгород.: Изд-во НГМА., 1999.- 400с.

182. Маянский, А.Н./Клинические аспекты фагоцитоза.- А.Н Маянский., О.И. Пикуза / Казань: Магариф, 1993.-192 с.

183. Меерсон, Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон.-М.:Наука, 1981.277 с.

184. Меньшиков, В.В. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории/ В.В. Меньшиков.- Клиническая лабораторная аналитика Т. 2.М.: Лабинформ РАМЛД, - 1999, 352 с.

185. Меньшикова, Е. Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов/ Е. Б. Меньшикова, Н. К.Зенков // Успехи современной биологии.1993. Т.113.вып.4. С.442-454.

186. Мик, Д.Ж. Электрический пробой в газах/ Д.Ж Мик., Д .Крэгс,/. М. ИЛ.-1960.- 277с.

187. Моисеенко, В. С. Особенности кислородного обмена при опухолевом росте/ В. С. Моисеенко, Л. И. Загоруйко, И. Н. Тодор //Экспериментальная онкология. 1985. Т.7. №5.- С.78-83.

188. Мороз, А.Ф. Синегнойная инфекция/ А.Ф./. Мороз- М:. медицина.-, 1988. с.59

189. Муеил, Я. Основы биохимии патологических процессов/ Я Мусил./.-М.: Медицина, 1985.430 с.

190. Нейфах, Е. А. Биофизика./ Е.А. Нейфах.- М.: Наука, 1979. 350с. Нейфах Е. А. К механизму окисления ненасыщенных жирных кислот раковыми и нормальными тканями / Е. А. Нейфах // Труды VII Международного противоракового конгресса. 1963.-c.248.

191. Новожилова, А.П. Механизмы клеточной смерти: проблемы и перспективы / А.П Новожилова., Н.Н Плужников., B.C. Новиков // Программированная клеточная гибель / Под ред. В.С.Новикова. СПб: Наука, 1996. - С.9-29.

192. Образование активных частиц при вспышечном коронном электрическом разряда на жидком электроде./ Пискарев И.М. и др.. // Химия высоких энергий. 2005 г., т.39. № 3. С.228-231.

193. Определение двойных связей в липидах сыворотки крови: метод титрования озоном, патофизиология и диагностическое значение./ В. Н. Титов и др.. // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - №7. - С. 38.

194. Орлова, С.В. Биологически активные добавки к пище в антиоксидантной терапии / С.В. Орлова // Цитология. 1999.- т.41 ,N9.- С.824.

195. Островский, Ю.М., Величко М.Г., Якубчик Т.Н. Пируват и лактат в животном организме./ Ю.М Островский., М.Г Величко., Т.Н. Якубчик / Минск: Наука и техника, 1984.175 с.

196. Оценка состояния антиоксидантной системы при различных заболеваниях / М.А Данилова, и др. // Клиническая лабораторная диагностика, 2001. №10. С. 37-38.

197. Павлов, А. Н. Электромагнитные поля и жизнедеятельность. Учебное пособие/ А. Н Павлов./. М.: Изд-во МНЭПУ, 1998. - 148 с.

198. Павлов, Р.Н. Некоторые биохимические аспекты действия слабых низкочастотных магнитных полей/ Р.Н Павлова., Н.И Музалевская., В.В.

199. Соколовский // Реакции биологических систем на магнитные поля. М.: Наука, 1978. С. 49-58.

200. Паранеопластическое поражение почек при солидных опухолях / J1.B. Козловская и др.. //Нефрология и диализ. 2002. Т.4, №2. С.116. Перекисное окисление и стресс/ В.А. Барабой [и др.].- С.-Пб.: Наука.1992. -148 с.

201. Перельман, В.И. краткий справочник химика / В.И. Перельман// М., ГНТИХЛ 1951.-С.611.

202. Перетягин, С.П. Фармакологические аспекты воздействия озона на кровь при гипоксии / С.П. Перетягин, В.Ф. Давыдов, К.Н. Конторщикова // Тез. Докл. 2-ой всесоюзной конференции «Фармакологическая коррекция гипоксических состояний», 1991. ч.З. -С. 5.

203. Пикаев, А.К. Современная радиационная химия. Радиолиз газов и жидкостей./ Пикаев А.К. / М.: Наука. 1986. 439 с.

204. Пискарев, И. М. Теоретические основы химической технологии. / И.М. Пискарев/.- 2000. Т. 34. № 3. С. 333.

205. Пискарев, И. М. Реакции в воздухе и азоте в плазме коронного разряда между поверхностью воды и электродом. / И.М. Пискарев // Журнал физической химии. 2001. - Т. 75, № 11. - С. 1997 - 2001.

206. Пискарев, И.М. Выходы продуктов химических реакций под действием электрического разряда в среде воздуха, азота и кислорода. / Пискарев И.М. //Химия высоких энергий. -2000,-т. 34. -№ 6. -С. 475 476.

207. Пискарев, И.М. Разложение высококонцентрированного водного раствора натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты под действием электрического разряда. / И.М. Пискарев //Химия высоких энергий.- 2002.-т. 36.-№ 5.- С. 397 398.

208. Пискарев, И.М. Выходы продуктов химических реакций под действием электрического разряда в среде воздуха, азота и кислорода. / И.М. Пискарев // Химия высоких энергий. 2000. - Т. 34, № 6.- С. 475 - 476.

209. Пискарев, И.М. Модель реакций при коронном разряде в системе 02(г) -Н20. / И.М. Пискарев //Журнал физической химии.- 2000,-т. 74. -№ 3.- С. 546

210. Пискарев, И.М. Модель реакций при коронном разряде в системе 02(г) -Н20. / И.М. Пискарев // Журнал физической химии. 2000.- Т. 74, № 3. С. 546.

211. Пискарев, И.М. Окисление фенола частицами ОН, Н, О и 03, образующимися в электрическом разряде. / И.М Пискарев. // Кинетика и катализ.-1999,- т. 40. -№ 2.- С. 505 511.

212. Пискарев, И.М. Окислительно-восстановительные процессы в воде, инициированные электрическим разрядом над ее поверхностью./ Пискарев И.М. // Журнал общей химии. 2001. -т. 71.- вып. 10.- С. 1622 1623.

213. Пискарев, И.М. Реакции в воздухе и азоте в плазме коронного разряда между поверхностью воды и электродом. / И.М. Пискарев //Журнал физической химии. 2001. Т. 75, № 11. С. 1997.

214. Пискарев, И.М. Условия инициирования активными частицами из газовой фазы реакций в жидкости. / И.М Пискарев //.-Журнал физической химии.- 1998.-Т. 72. -№ 11.- С. 1976 1983.

215. Пискарев, И.М. Условия инициирования активными частицами из газовой фазы реакций в жидкости. / И.М. Пискарев //Журнал физической химии. 1998.-Т.72.№11.С. 1976.

216. Пискарев, И.М. Образование озона и перекиси водорода в электрическом разряде в системе раствор газ./ И.М Пискарев., А.Е Рылова., А.И.Севастьянов // Электрохимия, т. 32. № 7. 1996. С. 895 - 897.

217. Плис, Б. Б. Онкологическая характеристика нового штамма ЛФС крыс/ Б. Б. Плисс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины .-1961.-Т.2, С.95-99.

218. Подавление образования перекиси водорода, кислородных и семихинонных радикалов в ходе формирования резистентности клеток К 562 эритролейкемии человека к доксорубицину/ Е.В. Калинина и др..// -Вопросы онкологии.-2003.-№ З.-С. 125

219. Подколзин, А. А. Индивидуальные вариации ферментов антиоксидантной системы организма и возможности ее коррекцииэлектрохимически активированными системами / АЛ. Подколзин, В.И. Донцов, В.Н. Крутько//Физиология человека. 2002.№3. С.108-111.

220. Подольцева, Е.И. Профилактика и лечение гематологических осложнений химиотерапии у онкологических больных / Е.И. Подольцева // Практическая онкология.- №2.- 2000.- С. 31-37

221. Поиск биологических средств против грибов рода Candida / И.Д. Авдиенко и др. // ЖМЭИ. -2000.- № 6. -С. 79 80.

222. Пурмаль, А.П. Цепные реакции / А.П Пурмаль. // Соросовский Образовательный Журнал. 1998. № 6. С. 35-41.

223. Путвинский, А. В. Протонная проницаемость и электрический пробой фосфолипидных мембран после УФ-облучения. / А. В Путвинский., Т. В. Пучкова // Биофизика. Т. 26, №3. - С. 481-486.

224. Райзер, Ю.П. Физика газового разряда / Ю.П.Райзер /, М.Наука, 1987.592 с.

225. Райзер, Ю.П. Физика газового разряда. Учебное руководство для вузов. / Ю.П Райзер. /М.: Наука, 1992.- 536 с.

226. Райхлин, Н.Т. Апоптоз и его роль в механизмах регуляции роста опухолевых клеток с множественной лекарственной устойчивостью./ Н.Т. Райхлин, Е.А. Смирнова, А.Г. ,Перевощиков // Арх патол .-1996.-Т. 2.-е. 3-8.

227. Резцова, В. В. О связи между интенсификацией гликолиза в опухолевых клетках и увеличением биосинтеза нуклеотидов. / В. В Резцова., В. А. Филов // Вопросы онкологии. 1992. № 11. С. 1283-1287.

228. Ритм сердца при кардиоваскулярных нарушениях невротического генеза// Вейн А.М.и др. -Кардиология.- 1987.-№ 9.- С. 85.

229. Роль активных форм кислорода в изменении мембранного потенциала макрофагов и астроцитов / И.В. Клюбин и др.. // Биологические мембраны. 1999.-Т.16, вып.4.-С.453-460.

230. Рощина, А.А. Состояние воды и перекисное окисление липидов в тканях крыс при массивной кровопотере и облучении Не-Ые-лазером // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003.Т. 136, №2. С.160.

231. Рыжикова, М. А. Хемилюминисцентные методы исследования в лабораторной диагностике / М. А. Рыжикова, Д. М. Габитова, С. В. Сибиряк // Клиническая лабора-торная диагностика. 2001. №11. С. 3 4

232. Савич, А.В. Роль супероксидного радикала в норме и при патологических состояниях / А.В. Савич // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. М. 1993. - С. 33-41.

233. Сагитова О.Я. Взаимосвязь нарушений иммунного статуса и дестабилизации мумбран при активном гломерулонефрите./ О .Я. Сигитова, И.Г Салихов, А.Н Максудова / Казань, Россия, 1999. Доступно по http://ndte.energo.ru/rus/seminar/1999/t49.htm

234. Сапежинский, И. И. Кинетика радиационного и фотоокисления биомакромолекул в водных растворах./ Сапежинский И. И. // Успехи химии. 1985.-№9.-С. 1559-1577.

235. Саркисов, Д.С. Руководство.Микроскопическая техника./ Д.С. Саркисов, Ю.Л. Петров /-М.-Медицина.-1996.-556 с.

236. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия / В.К.Казимирко и др.. — К.: Морион, 2004. — 160 с.

237. Свободно-радикальные механизмы иммунного повреждения опухолевых клеток и роль антиоксидантных систем в их защите / Ланкин В. 3. и др.// Биоантиоксиданты: Тезисы докладов IV Всесоюзной конференции. М., 1989. С. 163-182.

238. Свободные радикалы в главных системах. / Ю. А Владимиров, и др. // Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР). 1991. - Т. 29. - С. 89-99.

239. Сейц, И.Ф. Молекулярная онкология: Руководство для врачей./ И.Ф Сейц, П.Г. Князев /-Л.: Медицина, 1986. 351с.

240. Сергеев, А.Ю. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение./ А.Ю Сергеев, Ю.В. Сергеев // М: Триада-Х, 2000. 472 с.

241. Симонишвили, М.О. Биотерапия предрака. / М.О. Симонишвили // Натуротерапия и гомеопатия. -2003.- Т.З. С.-50-54.

242. Скулачев, В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло/ В.П. Скулачев //Природа.-1997.-N11-C.26-35.

243. Скулачев, В.П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода/ В.П. Скулачев//Биохимия.- 1998.- т.63, вып. 11.- С. 1570-1579.

244. Скулачев, В.П. Работы по запрограммированной смерти клетки увенчаны Нобелевской премией / В.П. Скулачев // Биохимия. 2003. - Т. 68, В.2.-С. 290-291.

245. Скулачев, В.П.Кислород и явления запрограммированной смерти/ Скулачев В.П.//.- Российский биомедицинский журнал .- 2001, с. 115-126

246. Смирнов, В.М. Симпатическая нервная система не участвует в развитии ваготомической тахикардии. / В.М. Смирнов // Бюл.эксп.биол.и мед.- 1995.-Т.114,№8.- С.55-58.

247. Состояние перекисного окисления липидов в плазме крови при свободнорадикальной терапии онкологических больных /Т. Г.Щербатюк и др./; // Тезисы II Международного симпозиума "Актуальные проблемы биофизической медицины". Киев, 2000.-С. 8.

248. Спиров, Г. М. Возможности и перспективы применения импульсных энергетических установок в промышленности / Г. М. Спиров // Международная конференция "Физика и промышленность" ФИЗПРОМ-96.-Голицыно, Московская область 22-26 сентября 1996,- С.148.

249. Сувернев, А. В. Общая управляемая гипертермия человеческого организма"/ А. В. Сувернев // Онкология для врачей. -2000.-Т. 2. -№ 3. -С. 1822.

250. Физико-химические основы авторегуляции в клетках /Е.Б. Бурлакова и др. // Труды МОИП.- 1968.- С.28,213.

251. Физико-химические механизмы биологического действия лазерного излучения/ Н.Д. Девятков и др.// Успехи совр. биол. 1987. - Т. 103, № 1. -С. 31^3.

252. Физиологически активные инфранизкочастотные магнитные поля./ В.Б. Макеев и др.// В сб. "Электромагнитные поля в биосфере." 1985, T.II, с.62-72.

253. Фильченков, А.А. Семинары по гематологии. Выпуск 11. Современные технологии количественной оценки апоптоза и их применение в экспериментальной и клинической онкологии / А.А.Фильченков.- Киев: ДИА, 2003.-76 с.

254. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей основных локализаций с препаратами фотогем и фотосенс (результаты трёхлетних наблюдений)/ Соколов В.В. и др.. // Вопр. онкологии. 1995. - Т. 41, № 1. -С. 134-13.

255. Франк, Г.М. Вопросы биофизики, биохимии и патологии клетки./ Г.М. Франк, В.Т. Поэтова/М.: Наука, 1967.- 350 с.

256. Холодов, Ю.А. Достижения магнитобиологии / Ю.А. Холодов // Реакции биологических систем на магнитные поля. М.: Наука, 1978. С. 3-5.

257. Чагорова, Т. В. Синдром эндогенной интоксикации призлокачественных лимфомах/ Чагорова Т. В., Савченко Р. П., Хайдурова К. JL // Клиническая лабораторная диагностика.-2001 .-№11 .-С. 23 26

258. Чекнев, С.Б. Активные метаболиты кислорода в обеспечении и контроле естественных цитотоксических реакций / С.Б. Чекнев //Вестник РАМН.-1999.-№2.-С. 15-22.

259. Ченцов, Ю.С. Введение в клеточную биологию./ Ю.С. Ченцов.- М. Наука. -2004,- 445 с.

260. Черенков, В. Г. Клиническая онкология/ Черенков В. Г.- М.: Наука, 1999.381с.

261. Механизмы взаимодействия фотосенсибилизаторов с клетками./ Черняева Е.Б. и др.. // Итоги науки и техники. Совр. пробл. лаз. физ. М.: ВИНИТИ, 1990. Т. 3.224 с

262. Шапот, В. С. Прогрессия опухоли и организм/ Шапот В. С. //Вопросы онкологии. 1980. T.XXVI. №3. С. 103-108.

263. Шапот, B.C. Глюконеогенез и растройства гомеомтаза в опухолевом организме/ Шапот B.C., Шелепов В.П., Ушаков В.А. // Вестник АМН СССР. 1982. №9. С.29-34.

264. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В.Шварц, Ч.Михалец .- 1980 с.

265. Шиффман, Фред Дж. Патофизиология крови./ Фред Дж. Шиффман. / М:, СПб: Невский диалект,2000.-446 с.

266. Щербатюк, Т. Г. Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями: автореф. дис.докт.биол.наук:03.00.13., 14.00.16 /Щербатюк Татьяна Григорьевна.-Н.Новгород, 2003.-41 с.

267. Электролиз при последовательном прохождении тока через газовую и жидкую фазы. / Павлов Р.Н. и др.// Известия академии наук СССР. Отделение химических наук. 1944. № 5. С. 309.

268. Эммануэль, А. Б. Количественные основы клинической онкологии. / А. Б.Эммануэль, Л. С. Евсеенко /М.Медицина.-1970.-230 с.

269. Эндогенная интоксикация у больных с доброкачественной гиперплазией предстательной железы II-III стадий/ Соломенников А. В. и др.. //Эфферентная терапия. 2000. Т.6. №2. С.40-44.

270. Яворский, Б. М. Справочник по физике. / Б. М. Яворский, А. А. Детлаф /- М.: Наука, 1979. 944 с.

271. Янковский, О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы / О.Ю. Янковский.- СПб.- 2000,- 294с.

272. Aebi, Н. Methoden der ensimatieshen analyses./ Aebi H. 1970. V. 2.-P.636-647.

273. Beebe, SJ. Nanosecond, high-intensity pulsed electric fields induce apoptosis in human cells. / SJ Beebe et al. // FASEB J.- 2003.- V.17.-P.-1493-14935.

274. Bioelectrics—New Applications for Pulsed Power Technology. IEEE Trans. /Schoenbach K. S., et al// Plasma Sci.- 2002.- 30.-P. 293-300.

275. Burke, D.A. Hydrophobic adhesin of E coli in ulcerative / D.A Burke, A.T. Axon //Colitis.Gut.- 1988.- V. 29.-P. 41-43.

276. Challacombe, S. J. Immunological aspects of oral candidiasis / S. J. Challacombe // Pathol.-1994.-V.78.-N.2.-P.202-210.

277. Cheeseman, К. H. Ah induction to free radical biochemistry./ К. H. Cheeseman, T. F. Slater // Brit. med. bull. 1993. - V. 49. - P. 481 -493.

278. Comparison of different advanced oxidation processes for phenol degradation. / Esplugas S. et al. // Water Research. 2002. -V. -36.- № 4. -P. 1034.

279. Delattre, J. Peroxydation des lipoproteins de haute density (HDL) humnaines par des radicaux libres derives de Ioxygene. / J Delattre., D Bonnefont-Rousselot., A. Khallil //Bull. Acad. Nat. Med. 1993. - V. 177. - P. 1251-1260.

280. Devies, R.A., Hickling A. Glow-discharge electrolysis. Part I. The anodic formation of hydrogen peroxide in inert electrolytes. // J. Chem. Soc. 1952. P. 3595.

281. Differential effects in cells exposed to ultra-short, high intensity electric fields: cell survival, DNA damage, and cell cycle analysis. / Stacey M. et al. //Related Articles.- Links.- Mutat Res. -2003 .-№ 9.- P.65-75.

282. Doxorubicin-Based Chemotherapy in Elderly Patients With Metastatic Breast Cancer. /N.K. Ibrahim, et al/.- Arch Intern Med.- 1996.- V. 156.-P.882-888.

283. Dvorak, A.M. An Apoptotic Eosinophil / A.M. Dvorak // The England Journal of Medicine. 1999. - V. 340.- № 6. - P.437.

284. Electric field pulses can induce apoptosis. /Hoffmann F. H. et al. // J. Membr. Biol.- 1999.-V.169.- P.103-109.

285. Esterbauer, H. M. Effects of antioxidants on oxidative modification of LDL. / H.Esterbauer, H Puhl., M.Dieber-Rotheneber // Annals Med. 1991. - V. 23, №5. -P. 573-581.

286. Folch, J. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. / J Folch., M Less., A. Stanley // Biol. Chem.-1957.-V.226.-№2.-P .497-509.

287. Formation of hydroxyl radicals, hydrogen peroxide and aqueous electrons by pulsed streamer corona discharge in aqueous solution. / Joshi A.A. et al. // J. Hazzard. Mat. 1995. V. 41. P. 3.

288. Franke, K.-P. Cleaning of air streams from organic pollutants by plasma-catalytic oxidation/ K.-P Franke., H.Meissner, R Rudolph. //Plasma Chemistry and Plasma Processing. -2000. -V. 20. -N. 3. -P. 393-403.

289. Free radical pathways in the inflammatory response / P.G Winyard. Ety.al. //Free Radical Damage and its Control/Ed.by C.A.Rise-Evans,R.H.Burdon -Amsterdam e.a.: Elsevier.-1994.- P.361-383.

290. Gallimberti, I. Impulse corona simulation for flue gas treatment / I.

291. Gallimberti I I Pure & Appl. Chem.- 1988. -Vol. 60.- № 5. P. 663-674.

292. Gluconeogenesis in the liver of tumor rats / K.J. Liu et.al. //.-J. Surg. Res.-1990. -Vol. 49.- №2. -P. 179-185.

293. Gurfinkel, Y. High temporal resolution of erythrocyte sedimentation (ESR-graphy) as a tool for evaluating drug action./ Y Gurfinkel., E Bouravleva., V.Voeikov // Biorheology.- 2002- V. 39.- N 5. -P. 675-676.

294. Gutteridge, J.M.C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage/ J.M.C. Gutteridge // Clinical Chemistry. 1995. V. 41. № 12B. -P. 1819-1828.

295. Guyton, K. Z., Kensler T. W. Oxidative mechanisms in carcinogenesis / K. Z., Guyton ,T. W. Kensler // Br. Med. Bull.- 1993. -V. 49.- P. 523-544.

296. Halliwel, В., Cbirico S. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement, and significance./ В Halliwel., S Cbirico. // Am. J. Clin. Natr.- 1993. -V. 57.- P. 715725.

297. Halliwel, В., Gutteridge J. The antioxidants of human exstracellular fluids. / В Halliwel., J.Gutteridge // Archives of Biochemictry and biophysics. 1990. V.280. P.l-8.

298. Heatley, M.K. A high apoptotic index occurs in subtypes of endometrial adenocarcinoma associated with a poor prognosis./ Heatley M.K. // Pathology.-1997.- V.29.-N 3.-P. 272-275.

299. Hermes-Lima, M. Antioxidant and metabolic depression in a pulmonate land snail / M.Hermes-Lima, K.B. Storey // Am. J. Physiol.- 1995. -V. 268. -P. R1386-R1393.

300. Hickling, A. Electrochemical processes in glow discharge at the gas-solution interface. Modern aspects of electrochemistry. / A.Hickling // Ed. J. O'M Bockris and B.E. Conway. London.: Butterworths. -1971. -V. 6. -P. 329.

301. Hoeben, W.F.L.M. Pulsed corona induced degradation of organic materials in water. Eindhoven. /Hoeben W.F.L.M.- Eindhoven.-Technische Universities Eindhoven.- 2000.- 163 p.

302. Inactivation mechanism of superoxide anion production in neutrophils by phosphatase/ M. Yamaguchi et.al. // Frontiers of Reactive Oxygen Species in

303. Biol, and Med. -Amsterdam .- 1994.-P.47-48.

304. Johnson, T. Subcellular Investigations into RF effects./ T Johnson., К Schoenbach , C.Tseng // International Symposium ElectroMed 2003, San Antonio, Texas ,Record Abstracts .-2003.- P.28-29

305. Joshi, R.P. Mechanism for membrane electroporation irreversibility under high-intensity, ultrashort electrical pulse conditions./ RP Joshi, KH.Schoenbach //Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys.- 2002.- v.66.- P. 52901.

306. Joshi, R.P. Self-consistent simulations of electroporation dynamics in biological cells subjected to ultrashort electrical pulses. / Joshi R.P. // Phys. Rev. E. Stat Nonlin Soft Matter Phys.- 2001.- v.64.- P. 11913.

307. Kennedy, M.J. Role of motility, chemotaxis, and adhesion in microbial ecology. / M.J. Kennedy.-Ann.N. Y.Acad.Sci., 1987.- v. 506.-P. 260-273.

308. Kerr, Y.F.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. / Y.F.R Kerr., A.H Wyllie., A.R. Currie //Br J Cancer.- 1972,-v. 26.-N 2.-P. 239-257.

309. Kramer, K. Antioxidanzien in der Onkologie/ K. Kramer //.-Onkologie. -1994.-V.3.- P. 76-83.

310. Krinsky, N.L. Membrane antioxidants / N.L Krinsky // Ann. NY. Acad. Sci. — 1988. —551, —P. 17-33.

311. Liebler, D.C. Antioxidant reactions of carotenoids / Liebler D.C. // Ann. NY. Acad. Sci. — 1993. — 691. — P. 20-31.

312. Leukemic cell intracellular responses to nanosecond electric fields./ N. Chen et al // Biochem Biophys Res Commun. -2004,-v. 30.-P.421-427.

313. Look, M. P. Lipid peroxides in the polychemotherapy of cancer patients / P Look M., E.Muscb //.- Chemotherapy.- 1994. -V. 40. -P. 8-15.

314. Luminol-dependent chemiluminescence microassay for phagocytic function / Thomas V.L. et al. // J.Immunol. Methods.- 1988.- Vol.3.- N.2.-P.227-233.

315. Malik, M.A. Applications of cold plasma techniques for toxic VOCs destruction. // The Nucleus. 1999. V. 36. № 1 2. P. 69.

316. Masuda, S. Pulse corona induced plasma chemical process: a horizon of new plasma chemical technologies / S. Masuda // Pure & Appl. Chem. -1988. -Vol. 60.-№>5.- P. 727-731.

317. McCord, J.M. Superoxide radical: controversies, contradictions, and paradoxes / McCord J.M. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1995.- V. 209.- №2. -P. 112-117.

318. Morel, F. The superoxide-generating oxidase in phagocytic cells. Physiological, molecular and pathophysiological aspects. Review / F Morel., J Doussiere., P.V. Vignais//Eur. J. Biochem- 1991-V.201,N3.-P.523-546.

319. Murerell, G.A.C. Modulation of fibroblast proliferation by oxygen free radicals./ G.A.C Murerell., M.J.O Francis., L. Bromly // Biochem J- 1990- V.265, N3.- P. 659-665.

320. Nanosecond pulsed electric field (nsPEF) effects on cells and tissues: apoptosis induction and tumor growth inhibition / S. J. Beebe et al // IEEE Trans. Plasma Sci.- 2002.-30.-P.286-292.

321. NicoIe, I. Use of UV radiation in water treatment: measurement of photonic flux by hydrogen peroxide actinometry // Water Research.- 1990.- V. 24.- N. 2.- P. 157.

322. Nishicimi, M. The occurrence of superoxide anion in reactions of redused phenaxi-nemetasulfate and molecular oxygen. / M.Nishicimi, A Roo., К Xagi. // Biochem. Biophys. res.commun.-1972.-V.146.- №2.- P.849-854.

323. Ogra, P.L.Vaccination strategies for mucosal immune responses. / P.L Ogra., H Faden., R.C. Welliver //Clin.Microbiol.Rev.- 2001,- v. 14,- P.430-445.

324. Ohshiro, T. Low Level Laser Therapy: A practical Introduction. / T Ohshiro., R.G. Calderhead-Chichester-New-York: John Willy and Sons. -1988.- P. 180.

325. P21/Cip/Sdil and p53 expression in association with DNA strand breaks in idiopathic pulnonary fibrosis. / K.Kuwano et al. //Am J Responce Crit Care Med.-1996.-V. 154.-P. 477-483.

326. Peeliny J. Studies on lipid peroxidation in normal and tumor cells/ J. Peeliny.,

327. G Sutherland., К. Marat//J. Neurjsung. -1988.-Vol.68. -№6. -P.931-937.

328. Piskarev, I. M. Yields of products of chemical reactions induced by electric discharge over a water surface in air, nitrogen or oxygen atmosphere. / I. M. Piskarev // High Energy Chemistry. -2000. -V. 34.- № 6. -P. 416-417.

329. Piskarev, I. M. Formation of ozone and hydrogen peroxide during an electrical discharge in the solution-gas system. /1. M Piskarev., A. E Rylova., A. I. Sevast'yanov // Russian Journal of Electrochemistry. -1996. -V. 32. -№ 7,- P. 827829.

330. Piskarev, I.M. Conditions of Initiating reactions in liquids by gas phase active particles. / I.M Piskarev // Russin Journal of Physical Chemistry. -1998.-V. 72. -№ 11.- P. 1793-1799.

331. Pulsed corona for gas and water treatment/ E. J. Van Heesch et.al. // 11th IEEE International Pulsed Power Conference Baltimore, Maryland USA, June 29-Jule. Maryland .-1997.-P. 103-108.

332. Purshottam, T. Plasma electrolytes in relation to altitude tolerans in rats / T •Purshottam. // Aviat. Spase and Environm. 1979. Vol. 50, N. 4. P. 343-345.

333. Radio frequency electromagnetic field exposure in humans: Estimation of SAR distribution in the brain, effects on sleep and heart rate. /R Huber et.al. // Bioelectromagnetics.- 2003.- v.24.-№ 4.-P.262-276.

334. Related Articles, Links electric fields (nsPEF). / SJ Beebe et al. // J Biol Chem.- 2004 .-N.3.-P.89-91

335. Schoenbach, K.H. Intracellular effect of ultrashort electrical pulses / K.H Schoenbach ,S.J. Beebe,E.S. Buescher// Bioelectromagnetics.- 2001.-v. 8.- P. 440

336. Selection of human cervical epithelial cells that possess reduced apoptotic potential to low-oxygen conditions. / C.Y Kim. et al. //Cancer Res.- 1997,-v. 57.-N 19.-P. 4200- 4204.

337. Sheng, H. Lin, Cho C. Lo. Fenton process for treatment of desizing wastewater. // Water Research. 1997. V. 31. № 8. P. 2050.

338. Sladec, R.E.J. The plasma needle and ITS biomedical applications/R.E.J. Sladec, E.Stoffels, I.E. Kieft- 2005.-P.122-129

339. Storey, K.B. Oxidative stress: Animal adaptations in nature/ K.B Storey // Brazilian Journal of Medical and Biological Research. -1996.- V. 29. -№ 12.- P. 1715-1733.

340. Streamer discharges by spiral transmission line / H. Akiyama et. al. // 11th IEEE International Pulsed Power Conference Baltimore, Maryland USA, June 29-Jule.- Maryland.- 1997.- P. 109-114.

341. Subcellular Investigations into RF effects. / T.Johnson et.al. //International Symposium ElectroMed 2003, San Antonio Texas. Record Abstracts.- San Antonio .-2003.-P.28-29

342. The Effects of Intense Submicrosecond Electrical Pulses on Cells /Jingdong D. et al/ Biophysical Journal.- 2003.-84.-P.2709-2714

343. The effects of intense submicrosecond electrical pulses on cells./ J. Deng et.al. // Biophys J.- 2003.- V.84.-N 4.-P.2709-2714

344. Varro, J. Die krebsbehandlung mit ozon/ J. Varro III- Erfahrung-sheilkunde. -1974. -V. 23.- P. 178-181.

345. Vicini, F. ASCO, educational book./F. Vicini, J.Harris -2002,-P. 296-303.

346. Viebahn-Hansler, R. Ozontherapie -therapeutische Grundidee und Wirksamkeitsmodelee/R.Viebahn-Hansler//Erfahrungsheilkunde. -1991.-V. 4.- P. 296-315.

347. Voeikov, V. Reactive Oxygen Species, Water, Photons, and Life./ V. Voeikov // Rivista di Biologia/Biology Forum 94.-2001.- P. 193-214

348. Weinhouse, S. Isoenzymes in cancer / S.Weinhouse //.- Cancer Res.- 1971. -V. 31.- № 8. -P. 1166-1167.

349. Wide-Range Medical Ozonator with Precise Low-Concentration Ozone Generation /V.I. Karelin et.al. //12 IEEE Intern. Pulsed Power Conf. Monterey, California.-1999.- P. 1421-1424.

350. Wolff, M.M. Das medizinische ozone. / M.M. Wolff.-Berlin, 1988. 270 p.

351. Zabel W. Die zusattzliche therapia der geschwulsterkrankunger. / W. Zabel.-Heidelberg- 1970.-102 p.