Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние озонированного физиологического раствора на прооксидантную и антиоксидантную системы у крыс с саркомой-45

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние озонированного физиологического раствора на прооксидантную и антиоксидантную системы у крыс с саркомой-45"



На правах рукописи

ЩЕРБАПОК Татьяна Григорьевна

ВЛИЯНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА

НА ПРООКСИДАНТНУЮ И АНТИОКСИДАНТНУЮ СИСТЕМЫ У КРЫС С САРКОМОЙ-45

03.00.13 -физиология человека в животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических нгук

Нижний Новгород-1997

Работа выполнена в Нижегородской государственной медицинской академии

Научный руководитель

доктор биологических наук КЖ Копторщикова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук ДЖ Рыжяков, доктор медицинских наук ГА. Бояринов

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии РАМН

Защита диссертации состоится «_» _1997 г. в_часов

заседании диссертационного совета К 063.77.13 по присуждению ученой степени кандидг биологических наук в Нижегородском государственной университете ни. Н.И.Лобаяевскс (603 600, Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета.

Автореферат разослан «_да

1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к. б. н.

АКТУАЛЬНОСТЬ КМЫ, Уровень перекисного окис летя лнпвдов (ПОЛ), отношение количества сродных ингибиторов к концешрации проокендашов при устойчивом состоянии организма -дивидуальнм величина, являющаяся нормой метаболизма живой клетки (Зенков Н.К.. Меньшикова >., Шерпда С.М, 1993). При выходе организма из устойчивого состоим это соотношение «еняется, что приводит, в конечном счете, к патологии, в частности, возникновению и росту (качественных новообразований (Лю RR, Шайхутдинов Е.М. 1991).

Важная особенность злокачественного роста - изменение уровня спободнорадикальных реакций, горое проявляется в повышенной атиокекдзнпгой активности опухолевой ткани, с одной >роны, и истощении еттаоксидангной системы защит организма -опухоленоснгеля, с другой ззлов Ю.П., 1973). Величина антиоксидантной активности существенна для процессов клеточной олиферации в связи с тем, что ажиоксцдангы участвуют в регуляции размножения клеток флакова Е.Б., 1982).

Озон является сильным окислителен (Разумовский С.Д., 1974), активируя свободнорадикальные оцессы, поэтому изучение его влияния на про - к знтиоксидантные системы организма при ошазии представляет особый интерес.

Работами ММ. Wolff (1988), О. Rokitansky (1982), R. Viebahn (198J), S. Riffing (1987), V. Bocci >90), а также основоположников отечественной озонотергпии Г.А. Бояринова (1989), С.П. ртшиа (1991) и КН. Конторщиковой (1992) обосновано использование озона в медицине.

Метаболические сдвиги, происходпцие в опухоли, приводят к тону, что она оказывает стоянное и прогрессирующее воздействие на весь обмен, вызывая, в конечном итоге, совместимые с жизнью нарушения гомеостаза (Балаж А, 1987). Главной биохимической обснностью опухолевой клетки считается повышенная интенсивность гликолиза (Барабой Г.А., 93, Шалот B.C., 1975). В раковых клетках гликолиз идет со скоростью, значительно превышающей можности цикла Кребса. В результате образование пирувата превосходит его потребление. Это, в ою очередь, приводит к избыточному образованию лактата и к локальному повышению плотности в опухолевой ткани (Островский ЮЖ., Величко М.Г., Якубчик Т.Н., 1984). кдовагельно, применение озона, защелачивающего среду (Перетягин C.IL.1991) может оцениваться как средство, нарушающее условия опухолевой прогрессии.

В течение последнего десятилетия учеными Германии, Кубы, Италии. США озон применяется >н злокачественной патологии. Однако, сообщая об антиканцерогенном эффекте озона (Altman ,1994), авторы оставляют открытым вопрос о механизмах действия озона.

Цель работ исследовать влияние озонированного физиологического раствора на зооксидашную и аншоксцдантую системы как в организме яивотного-опухоленосмеля, так и в тухолевой ткани в условиях экспериментального онкогенеза.

Задачи иилмздаши

1. Охарактеризовать уровень свободаорадикального окисления, а также другие биохимические особенности организма экспериментальных животных в процессе роста сзркомы-45.

¿.Оценить биохимические показатели своСоднорадикальных реакций и углеводного обмена гомогенэтов сзркомы-45 в зависимости от сроков ее развило.

3. Определить состояние свободаорадикального статуса организма животных с трансплантированной опухолью саркомой-45 в процессе онкогенеза на фоне воздействия озонированного физиологического раствора.

4. Изучить особенности взаимодействия антагонистических систем, определяющих перскисное окисление липидон в саркоке-45 при локальном введении озонированного физиологического раствора по мере ее роста.

3. Установка влияние локального действия озонированного физиологического раствора на состояние углеводного обмета опухоли по мере бластомной прогрессии.

' б. Выявить важные и необходимые для опухолевого роста отклонения углеводного обмена, фагоцитарной активности, а также степени эндогенной интоксикации организма животных на фоне воздействия озонированного физиологического раствора. Научнагновижа В результате проведенных исследований впервые;

1. Изучены особенности влияния озонированного физиологического раствора на состояние прооксидантной и ашиоксидангной систем организма животных с трансплантированной опухолью сарконой-43 в зависимости от сроков ее развили и роста.

2. Показано, что локальное введение озонированного физиологического распора вызывал рассогласованность взаимоотношений между проокеццангжи и компонентами антиоксидангной системы защиты в опухолевой ткани.

3. Дана оценка изменений углеводного обмена в опухоли и крови, а также фагоцитарной активности и степени эндогенной интоксикации организма живошых-опухолсносигслей на фон« введения озонированного физиологического раствора

4. Установлено, что локальное введение озонированного физиологического раствора приводит 1 увеличении продолжительности жнзш живопшх-опухоленосигелей, а воздействие озонированного физиологического раствора на саркому-45 раннего срока развила приводит к рассасыванию опухоли

3. Дана качественная свсгоопгичгская характеристика альтеративным изменениям опухолево! ткани, вызванных локальный дсйстснси озонированного физиологического раствора.

Учитывая имеющийся опыт применения озона при злокачественной патологии в международно! озонотерапии, необходимо подчеркнул, что настоящее исследование впервые в нашей стран выявило, что озон, включенный в состав инфужонной среды, обладает противоопухолевьп

ффектом (Заявка на изобретение № 96 124 167, от 24.12.96., положительное решение формальной кспертазы от 26.02.97.).

Теоретическое и практическое значение. Особую теоретическую значимость представляют езультаты исследовано свободнорадикального состоим! опугоаи, которые объясняют механизм ротивоолуходевого действия озона. Разрушение антиоксидантной системы защиты некачественного новообразования, вызванное введением озонированного физиологического зствора, способствует тому, что опухоль не в ссстошт сдерживать усиленное свобощерлцщшное кисление, продукты которого, повреждая ииготическое веретено деления (Еурлакова Е.Б., 1985), станавлизают клеточную пролиферацию.

В практическом отношении теоретические положения, объясняющие логику использования озона дя лечения злокачественных новообразований, а также полученные данные могут служить боснованием применения озона в комплексной противоопухолевой терапии.

Положения, выносимые на эдикту;

1. Локальное введение озонированного физиологического раствора, создавая прооксидаишое 'Кружение опухоли, усиливает переписное окисление липидон в саркоие-45. Интенсивное бразовнние продуктов перскисного окисления липидов приводит к истощению компонентов тиоксидантной системы защиты опухолевой ткани и вызывает деструктивные изменения опухоли. 1оследние проявляются в иншбировании интенсивности гликолиза, а также в наличии «итеративных морфологических нарушений опухолевой ткани.

2. Воздействие озонированного физиологического раствора на опухоль корригирует нарушения «етаболизиа, вызванные равитем и ростом злокачественного новообразования. Это приводит к юсстановлению равновесия системы проохеиданш • ангиокендангы организма, а тякже к тостспенной нормализации показателей углеводного обмена, ионного гомеостаза, фагоцитарной наивности крови и общей интоксикации организма животных-опухоленосителей.

3. Использование озонированного физиологического раствора, с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л в виде подкожных инъекций по диаметру опухоли, а также при непосредственном шедении в опухолевую ткань обладает противоопухолевый эффектом.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на II Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Нижний Новгород 1995), II Нижегородской сессии молодых ученш (Нижний Новгород, 1997) и II Международном конгрессе то применениям озона (Гавана, Куба, 1997).

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 184 страницах машинописного текста, иллюстрирована 28 рисунками и 27 таблицами; состоит из введения, обзора литературы, общей-характеристиш методов исследования, четырех глав собственных наблюдений, обсуждения, выводов

и списка литературы, «держащего 248 источников, го которых 92 иностранных. Диссертация содержит приложения, в которые помещены 26 информационных карт регистрации биохемнлюыинссцентного свечения биологических проб.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАЛИ! РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в отделе биохимии Центральной научно-исследовательской лаборатории Нижегородской государственной медицинской академии.

В экспериментах были использованы белы: нелинейные крысы, самцы, массой 200 • 220 г.

Модель нсогаазии создавали путем перевивки опухо левого штамма Саркома -45, приобретенного в Онкологическом научном центре им. Н.Н. ЕлохинаРАН.

Саркоыа-45 (3-45) - экспериментальная опухоль всретеноклеточного происхождения, полученная в результате введения диметилбензашрацена в подкожную клетчатку беспородной крысы (Погошщ Е.Е., 1957).

Штамм 8-45 пассировали на крысах в возрасте 3 месяцев. Саркому брали на 14 день развития. Перевивка начиналась с дачи наркоза крысе-донору, затем подкожная опухоль вылущивалась для измельчения. Кусочки опухолевой ткани диаметром 1 им (инокулуы) с 0,5 -1 мл раствора Хенкса (без фенолового красного) вводились крысе-реципиенту.

Для проведения исследования 260 экспериментальных животных было распределено следующим образом.

1 группа - штакттш. 30 крыс. Животные не подвергались никаким воздействиям, содержались в стандартных условиях. Исследуемые биохимические показатели крови животных этой группы служили норной при срявяпспьнон анализе метаболических изменений, сопровождающих процесс развили опухоли а также вызванных воздействиямиозоннроВанного физиологического раствора.

2 труппа - выживания (контрольная). 10 крыс. Животным была привита опухоль 8-45, срок развития которой на момент перевивки составил 14 суток. Животные не подвергались никаким воздействиям и содержались в стандартных условиях до наступления смерти.

3 труппа - выживания (подопытная) 10 крыс. Животным была привита опухоль 8-45. На 14 сутки развития опухоли животным начинали вводить озонированный физиологический раствор. Концентрация озона в газовой смеси 3000 нкг/д. Частота введения озонированного физио логического раствора составила 3 сеанса в неделю. Первые 10 дней озонированный филологический раствор вводился в объеме 0.5 мл подкожно то диаметру опухоли, в последующие дни - в объеме 1 ш непосредственно в опухоль. Максимальная продолжительность воздействия озонированной

¡шзиологического раствора • 25 дней.

Введение, в эксперимент 2-11 и 3-й групп обосновано соблюдением условий оценки ффективности озонированного физиологического parraopj, т.к. увеличение продолжительности ппни животных. прилгано мннииатныи критерием противоопухолевого эффекта любого гоэдейстаия (БлохинН-Н., 1984).

4 группа • подконтрольная. 20 крыс. Животным была привита опухоль S-45. На 14 сутки извитня опухоли животным начинали вводил физиологический раствор, барботированный ¡нслородон. Скорость подачи кислорода - 1 л/иин, время барботировання - 20 минут. Частота ■ведения физиологического раствора б раз в неделю. Первые 7 дней физиологический раствор (водился в объеме 0.5 ш подкожно по диаметру опухоли, в последующие дни - в объеме 1 мл непосредственно в опухоль. Максимальная продолжительность воздействия физиологического >аствора - 40 дней. Эта груша животных предназначена для определенна эффекта кислорода.

5 группа - Раннее введение озонированного физиологического раствора 20 крыс. Животным Зыла привита опухоль S-45. На 7 сутки развития опухоли начали вводить озонированный Зимологический раствор. Кошдопрацня озона в газовой смеси 3000 мкг/л. Продолжительность зведения озонированного физиологического раствора составила 14 дай. Озонированный физиологический раствор вводился в объеме 0.3 мл подкоано по диаметру опухоли.

6 группа • коюрольная. 25 крыс. Животным была привита опухоль S-45. Через 20 дней после трансплантации опухоли у животных под нембуталовыы наркозом забирали на исследование кропь и опухолевую ткань.

7 группа - контрольная. 30 крыс. Животным была привита опухоль S-45. Через 30 дней после трансплантации опухоли у животных под нембуталовым наркозом забирали на исследование кровь и опухолевую ткань.

8 группа - контрольная. 30 крыс. Животным была привита опухоль S-45. Через 40 дней после трансплантации опухоли у животных под нембуталовым наркозом забирали на исследование кровь и опухолевую ткань.

Выделение животных в группы №№ б, 7 и 8 необходимо для изучения динамики состояния органиэга животных - опухоленосителей в зависимости от стадии развита и роста саркомы -45.

9 группа - подопытная. 23 крыс. Животным была привита опухоль S-45. На 14 сутки разяпия опухоли животным начинали вводить озонированный физиологический раствор. Концентрация озона в газовой смеси 3000 мкг/л. Продолжительность введения озонированного фютолопиеского раствора составила 5 дней. Озонированный физиологический раствор вводился в объеме 0.5 мл подкожно по диаметру опухоли. Срок развития саркомы на момент забора исследуемого материала - 20 дней.

10 группа • подопытная. 30 крыс. Животтым была пришла опухоль S-45. На 14 сутки развития опухоли животным начинали вводить озонированный физиологический раствор. Концентрация озона

в газовой снеси 3000 мкг/л.. Частота введения озонированного физиологического раствора составила б раз в неделю, продолжительность введения - 13 дней. Озонированный физиологический раствор вводили в объеме 0.5 мл подкожно по диаметру опухоли в течение первых 7 дней, в дальнейшем, начиная с 21 дна развита саркомы, озонированный фидаологический раствор вводился в объеме 1 ил непосредственно в опухолевую ткань. Срок развития саркомы на момент забора материала - 30 дней.

11 группа - подопытная. 30 крыс. Животным была привита опухоль 8-4$. На 14 сутки развита опухоли животным начинали вводил, озонированный физиологический раствор. Концентрация озона в газовой смеси 3000 мкг/л. Частота введения озонированного физиологического раствора составила б раз в неделю; общее число сеансов введения • 22. Озонированный физиологический раствор вводила в объеме 0.5 мл подкожно по диаметру опухоли в течение первых 7 дней, в дальнейшей, начиная с 21 дня развития саркомы, ОФР вводился в обьене 1 ш непосредственно в опухолевую ткань. Срок развита саркомы на момент забора исследовательского материала - 40 дней.

Группы 9, 10 и 11 являются материалом исследования влияния озонированного физиологического раствора на биохимические особенности опухолевой ткани и организма животного в процессе онкогенеза.

Озонированный физиологический раствор получали посредством пропускания раствора через озон - кислородную смесь со скоростью газотока 1 л/мин в течение 20 минут при концентрации озона в газовой смеси 3000 мкг/л. Для получения озона использовали генератор озона. Концентрацию озона контролировали в газовой фазе спектрофотометрическин методом на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 234 км, в жидкости - методом йодометрического титрованш (Разумовский С.Д., 1974). Введение озонированного физиологического раствора прекращалось за супси до момента забора биологического материала для исследований.

В конце эксперимента у наркотизированных животных забирали кровь и опухолевую ткань. В качестве наркоза применялся нембугал натрия (30 иг/кг). Биохимические анализы проводились в цельной крови, сьшоротке, плазме, эритроцитах и опухоли. Часть образцов опухолевой ткани направлялась на морфологические исследования.

Поскольку свободнорадикальные процессы изменяются в динамике и определяются соотношением про- и ашиоксидангной систем оргаиэиа, для их изучения применялся комплексный подход

Состояние прооксидантой системы анализировали по наличию промежуточных, молекулярных первичных и конечных продуктов перекисного окислена липцдсв. Промежуточные продукты -свободные радикалы косвенно оценивали методом индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) (Кузьмина ЕИ.,1983) на биохемилюминометре БХЛ-06, сопряженном с компьютером ШМ РС / АТ в диалоговом режиме (разработка Нижегородского НИЦ Биоавтоматика). Молекулярные продукты липоперокевдацин первичные - диеновые коньюгаы (ПК), вторичные - триеновые коньюгагы (ТК)

определяли УФ-спектрофотоиетрически, конечные - основания Шиффа (ОНО спектрофлюориметрически (Fletcher D., 1973). В свяда с тем, что ионы железа и меди участвуют в реакциях перекисного окисления липидов (Каган Й.Е.,1986), а также играют определенную роль в ионном гоиеостазе органижа, пораженного злокачественной опухолью (Бабенко Г.А., 1983), измеряли концентрации ионов этих металлов с помощью наборов реактивов производства «Lachcma» (Чехия). Учитывая многогтрофияьносгь антноксидангной системы организма, определяли содержание антирадикальных компонентов: глутатнона восстановленного (Уцдинцез Г.Н., 1986), а-токоферола (Зуев И.В.,1984), церулоппаэмнна, а также общую антиоксндантную активность (АОА) бносубстрата хемилюминесцентным методом (Кузьмина Е.И., 1983). Оценивали активность ферментативных компонентов: супероксидднсмутазы (СОД) (Nishirimi М., 1972), каталязы (Aebi Н., 1970), > глугегаонпероксвдазы (ГЦ) н глугатионредуктазы (ГР) (Пахомова В.А, 1981).

Так как главной биохимической особенностью опухолевой клетки является повышенная интенсивность гликолиза (Гонский Я.И.Д993) и гипогликемия (Шапот B.C., 1975), в крови животных-опухоленоатгелей определяли уровень глюкозы (Крылов А А ,1981), а также в опухолевой ткани и крови содержание идет и лактата (Асатиани B.C., 1965).Поскольку иммунный статус является одним из маркеров опухолевого процесса (Новиков Д.К., 1988), а реакции фагоцитоза -физиологическими источниками свободных радикалов (Маянский А.Н., 1993), исследовали функциональную активность фагоцитирующих клеток (Зенков ПК.,1985). В связи с тем, что опухолевая прогрессия сопровождает« общей интоксикацией организма (Ашмгрин И.П., 1992), степень эндогенной интоксикации организма оценивали го содержанию молекул средней массы -МСМ (Оболенский С.В.,1993) и уровню люциферазного индекса • ЛИ (Кратасюк В.А., 1990).

Анализ морфологических изменений S-45 проводили в гистологических препаратах опухоли, определяя индекс клеточности и удельный объем некроплированной ткани (Романов B.C.,1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Процесс онкогенеза разделяется на три периода; латентный, интенсивный, конечный (Эмануэль Н.М., 1977).

Первому, латентному, периоду соответствуют животные группы Jfs5 (контрольная -1) со сроком развития опухоли 20 суток. Второму, интенсивному периоду - группы №7 (контрольная -2) со сроком развития 30 суток. Особенности третьей, конечной стадии развития и роста опухоли изучались на 40-й день после трансплантации саркомы у животных группы N& (контрольная -3).

Биохимический анализ крови животных-опухоленосигепей контрольных групп свидетельствует о рассогласованности взаимоотношений между прооксвдангамн и компонентами антиоксвданшой

системы защиты организма. Это явление проявляется, прежде всего, в усилении липидной пероксндзцки.

В результате исследования ПОЛ выявлено две особенности: во-первых, концентрация продуктов ПОЛ: ДК, ТК, ОШ в плазме крови опухолевых животных достоверно выше по сравнению с интактными, во-вторых, инициация ПОЛ возрастает по мере роста опухоли (табл.1).

Табяща 1

Состоите перекисного окисления липидов организма животных-опухоленосигелей на фоне воздействия озонированного физиологического раствора (М*т)_

1шаххл, ДК.ед оп. ТК.ед. оп. ОШ,ед оа ОЛ,г/л ДС.едоп Железо, Медь,

тУ ПЛ./ОЛ пю'ОЛ пл./ОЛ пл./ОЛ мкмоль/л мкмоль/л

1 7,540* 0.125Н 0,172* 97,037* 0^16± 0,757* 55,959* 50,999*

0,175 0,011 0.012 0,924 0,011 0.042 5,008 5,653

2 9,214* 0,162* 0,191* 153Д21* 0,211* 0,566* 53,065* 59,497*

1.615 0,023* 0.002* 1,172* 0,006 0,024 2,785 3,289

3 12,229* 0,168± 0,194* 169,748* 0,144± 0,474* 43,644* 70,549*

3,650 0,002* 0,001* 0597* 0,011* 0,035* 2,882* 1370*

4 13,4681: 0Д88* 0Д19* 180,643± 0,109* 0,359* 34,555* 74,523*

1,501* 0,008* 0,002* 0,187* 0,009* 0,008* 3,529* 7354*

5 8,119* 0,159* 0,209± 85,115* 0,292± 0,746* 53,765* 58.222*

0,165 0,001 0,004 2,149** 0,003 0,039** 1,543 2^78

6 8,371* 0,135± 0,179± 70,368* 0,258* 0,629± 45,817* 53,490*

0,170 0,001** 0,003** 0,076** 0,013** 0,021** 1,291 5029

1 8,171± 0,136* 0,183* 72,446* 0,286* 0,611* 47,564* 49,472*

0,370** 0,001** 0,002** 0,056** 0,013** 0,044** 2,567** 2,138**

Примечания: группы животных: 1 - иншетсш, 2- кошрояьная-1, 3- коюрольная-2, 4-кокгрольная-З, 5- опытная-1,6- опьгтая-2, 7- ольпиая-3; * - достоверность различий показателей по сравнению с интактными (р<0,05), ** - по сравнению с контрольными (р<0,05).

Данные изучения индуцированной ХЛ плазмы крови контрольных животных, свидетельствующие о повышении 1тах, подтверждают, что рашнгие саркомы сопровождается усилением свободнорадикапьньгс процессов органиэма-опухоленосигеля.

Корреляционный анализ выявил высокую степень взаимосвязи между показателями свободнорадикальной активности - 1шах и ДК на трех стадии онкогенеза, соответственно: г = 1,0, г=0,71, г - 0,78 при р< 0,05. Средняя степень взаимосвязи показана между 1шах и ТК и 1шах и ОШ - соответственно г = 0,52 и г=0,63 (р < 0,05).

■Таблица 2

Влияние озонированного физиологического раствора на антиохсидангную систему защиты организма животных с саркомой-45 в процессе онтогенеза (№ш)_

1 2 3 4 5 6 7

СОД, 246,216± 182,753± 180,514± 163,487 ± 200,034 ± 229,239± 237340±

ед. 0354 0,256* 0,083* 0,433* 0.163** 1,134** 1338**

акт/мгНЬ

Каталаза 56,839 ± 30,454 25,041 22,899 38,334 39,045 41,084

ед- 0314 ± ± ± ± ±

акт/мгНЬ 0,129* 0,148* 0,159* 0,111** 0347** 0,235**

ГП,ед. 423,540 314,576 293,645 277,703 321,481 354,132 396,478

акт/мгНЬ ± ± ± ± ± ± ±

10,307 3,254* 5,603* 10,405* 6,384** 5,406** 8,437**

ГР.ед 12,991 5,572 5,436 4,110 6^53 7,847 8,012

акт/мгНЬ ± ± л ± ± ± ±

1,531 0,543* 0,608* 0,986* 1,017** 0,853** 0,904**

Б, отаед 42,227 63,125 75,076 92,595 50,246 57355 47,035

± ± ± ± ± ± ±

7,250 0,465 1,690* 10.154* 1,960 2,090** 0,640**

СБН, 32,576 24,164 20,459 18,427 27,134 27,768 29,459

мкмоль/л ± ± ± ±

0,092 0,082* 0,106* 0,052* 0,179** ОД 15** 0,129**

а-ток. 1,05 0,761 0,641 0,510 0,790 0,810 0,931

Мкмоль ± ± ± ± ± ±

/л 0,004 0,002* 0,003* 0,004* 0,001** 0,002** 0,001**

Цп, 0355 0,451 0,489 0,524 0,426 0,439 0397

ыкмоя/я л ± ± ± ±

0,037 0,119 0,009* 0,007* 0,023 0,014** 0,011**

НЬ, 480,4 380,8 3303 159,7 382,4 418,2* 236.5±

г/л ±30,5 ±6,6* ±11,9* ±12,9* ±6,2 16,1** 22,4**

Примечаиия: группы животные 1 - ингактная, 2- контрольная-1. 3- котрольная-2, 4-конгролыш-3, 5- ога.пная-1,6- опьтш-2,7- слшная-З; * ■ достоверность различий показателей по сравнению с интактными (р<0,05), ** - по сравнению с контрольными (р<0,05).

Установлено, что рост опухоли связан со снижением активности ферментативных внгиоксидантов крови животных с тряштшшированной саркомой СОД, каталазы.

глутатнопероксидазы и глутятонредуктазы Показана средняя степень корреляции (г =0,47, р<0,05) между исследуемыми энзимами на всех стадиях онтогенеза. Обнаружена прямая зависимость содержания ионов железа и активности гемсодержшцего фермента каталазы (г=0.51. р<0,05).

По данным ХЛ анализа. общая актокшдангная наивность (АОА) плазмы крови контрольных животных достоверно ниже уровня ингакшых, причем, показано, что АОА снижается по мере развития и роста саркомы (табл.2).

Снижение содержания восстановленного глутатиона (ОЗН) и а-токоферола, а также высокая степень взаимосвяз! между этими показателями и АОА (г =0,78, р < 0,05) свидетельствует об угнетении атяраднкальнот звена аншоказдзнгной системы защипы организма в процессе онтогенеза. Уменьшение концентрации восстановленного гдушиона, как фактического антиоксиданга, должно усугубить окислительный пресс. В этом смысле падение уровня восстановленного гдушиона, основного донора водорода для репарации кислородзависимых поражений в клетке (Ярмоненко С.П.,1980), не твоего пассивный показатель, отражающий усиление ПОЛ, но и активный участие создания канцерогенного прооксидангного состояния.

Особенно выраженное угнетение аншокевданшой активности крови животных-опухоленосигелей отмечается на териинальных стадиях злокачественной трансформации.

Полученное достоверное увеличение содержания церулопламина в сыворотке крови животных-опухоленосителей по сравнению с ингакшыыи крысами, согласуется с литературными данными.

Известно (Санина К.Л.,1982). что у животных с имплантированными опухолями уровень церуяоплазмина в сыворотке крови значительно увеличивается. По многим признакам неоплазма и атакующие ее фагоциты секретируют в окружающую среду часть образующихся в них активных форы кислорода (АФК), которые затем погадают непосредственно в систему кровообращения и создает прооксиданшое состояние, цитотокаичное для циркулирующих в них форменных элементов крови. По отношению к нимунокошетенгным клеткам такая реакция растущего новообразования предстает как противодействие эффекторам в форме известной нммунодепрессин в опухолевом организме. В указанных условиях организм в порядке самозащиты мобилизует в систему кровообращения некоторые отличающиеся от внутриклеточных ангшоксиданш. Церулоплазнин и является одним из основных таких акгиошадакгов в сыворотке крови. Он способен перехватывать супер оксидр адикалы и ингибировать ПОЛ. Однако, при этом церулоплазнин не различает «своих» и «чужих», что ведет к удалению части супероксидньк радикалов, выделяемых имнунокомпетешными клетками и направленных против неоплазмы (Новиков ДК., 1988).

Корреляционный анализ, выявивший обратную связь между Цп и (г =-0Д8, р < 0,05), позволяет согласиться с представленным объяснением.

Кроме этого, показано, что в процессе прохрессии саркомы-45 в сыворотке крови животных-опухоленосигелей снижается содержание ионов меди. Таким образом, собственные результаты

согласуются с общеприняты мнением, что мезвду содержанием меди и церулоплазыина в сыворотке крови установлена корреляционная взаимосвязь (Доброшна H.A., 1989).

Итак, опухоль в организм: -хозяине вызывает окислительный стресс - свободнорадикальный процесс, сопровождающийся подавлением активности большинства компонентов ангноксидангной системы защиты организма и накоплением продуктов ПОЛ в крови.

Таблица 3

Влияние озонированного физиологического раствора на биохимические показатели саркомы-45 по мере ее роста (Мм)_

контр.-1 контр.-2 контр.-3 0пыт.-1 опит.-2 опыт.З

Imaxxi, mV 3,547t 0,111 3,018t 0,380 2,б24± 0,061 4,608t 0,063* 5,705t 0^51* 8,256* 2,206*

ДК, едоп пл./ОЛ 0,613± 0,024 0,539t 0,003 0Д06± 0.001 0,706t 0,007* 0,602t 0,005* 0,438± 0,012*

ТК, едоп гш./ОЛ 0,416*0,011 0369t 0,005 0,112*0.023 0,461t 0,005 0,426t 0,004* 0.407± 0,009

ОП1, едоп пл./ОЛ 264Д42±0,9 32 221,684*1,2 47 121,428±4,2 12 280,479±1,6 42* 235,582±5,7 00* 140,773t0,5 54*

ОД г/л 0,448t 0,118 0,228*0,016 0,1111:0,003 0Д29± 0,003* 0,072± 0,017* 0,035t 0.012*

ДС, едоп пл./ОЛ 3,483* 0,224 1,436t 0,027 1,072t 0,043 1,141t 0,018* 0,618t 0,009* 0392t 0,018*

S. отн. с д. 20,775t 3340 22,536t 0,413 25,963t 0,203 31.170t 0,181* 34,806t 0,832* 54,705t 2.680*

СОД ед акт/мгНЬ 21,515t 0,121 20,688t 0,067 19,513t 0,036 9,772t 0,036* 8,686t 0,159* 9,J67t 0,039*

Каталаза ед акт/мгНЬ 0,812± 0,003 0,618t 0,002 0,598* 0,002 0,341* 0,002* 0,159t 0,002* 0,039t 0,002

Пнруват, мкмоль/ г ткани 0,104± 0,001 0,122*0,001 0Д31* 0,001 0,041± 0,001* 0,021± 0,001* 0,022* 0.005*

Лактат, мкмоль/ г ткани 1,555± 0,007 1,767± 0,008 1,877* 0,005 0,924* 0,002* 0,954* 0,004* 0,993t 0,008*

Примечание:* - указана достоверность различий показателей по сравнению с исходными (р < 0,05).

Результаты исследованвд гомогензтов саркомьИ5 показали, что, независимо от сроков развита i, опухоли, уровень молекулярных продуктов ПОЛ: ДК, ТО. ОПТ в ней достоверно снижается .. Установлено, что содержание продуктов ПОЛ и интенсивность хемилюминесценшого свечения, гомогенатов опухолевой ткани находится в прямо пропорциональной зависимости (г - - 0,85, р <0,05). >

Дальнейшее исследование гомогенатов саркомы показало, что резистентность опухолевой ткани . : к ПОЛ связана с высоким уровнем активности аншокевдантных ферментов в них. На всех изученных стадиях развития неоплазмы обнаружено повышение активности СОД и каталаал в гомогенатах опухоли (табл.3).

Данные, полученные методом индуцированной XJI, доказывают, что общая атирадикальная активность гомогенатов саркомы-45 возрастает- по мере роста опухоли

Результаты изучены свободнорадикального состояния опухолевой ткани согласуются с теорией ЕЕ Бур лаковой о роли свободных радикалов в регуляции клеточного размножения.

Повышение СОД и каталазы, а также общей АОА в гомогенатах саркомы следует рассматривать как защиту опухолевых клеток от действия свободных радикалов и других продуктов ПОЛ, являющихся супрсссораыи клеточного деления.

Итак, роль снижения интенсивности ПОЛ в опухолевой ткани заключается в обеспечении оптимального течения пролиферативных процессов, которое создается повышенным содержанием опухолевых аншоксидангов. Повышение ПОЛ в организме - опухо леносигеяе - следствие нарушений в регулягорньи взаимоотношениях мсаду опухолевыми клетками и организмом.

Многочисленные исследования указывают на то, что опухолевый рост сопровождается существенными изменениями всех видов метаболизма. Однако, нарушения углеводного обмена составляет одно из наиболее существенных отличий в метаболизме опухоли по сравнению с нормой. Основными среди них считаются гипогликемия, а также повышенное содержание пирувата и лактата (БереговскаяНН, 1993).

Исследование состояния углеводного обмена крови животных-опухоленосигелей выявили следующее.

' Во-первых, животные с трансгаантпрованной саркомой отличаются от интактных крыс пониженным содержанием в крови глюкозы, причем, гипогликемия усиливается по мере роста опухоли. Во-вторых, профессирование саркоыы-45 сопровождается усиленным гликолизом, выраженным в увеличении содержания пирувата н лактата в сыворотке крови животных-опухоленосигелей.

При анализе наблюдаемых изменений углеводного обмена в гомогенатах саркомы различных сроков развила получено, что рост опухоли сопровождается накоплением продуктов гликолиза -пирувата и лактата (табл.4).

Табтща 4

Влияние озонированного физиологического раствора на биохимические показатели крови яадотных-опухоленосителей в процессе онкогенсза (М*т) _

ингактн контр. 1 кошр.2 кошр.З ОПЫГ.-1 опьгг.-2 опыт.3

Глюкоза 2,965 1,841 1,573 1,222 2,005 2,158 2,271

ммоль/л ± ± ± * ± ±

0,112 0,139* 0.108* 0,125* 0,125 0,107** 0,052**

Пируват 0,094 0,123 0,129 0,159 0,108 0,091 0,093

мкмоль/г ± ± ± ± ± ±

ткани 0,002 0,002* 0,001* 0,001* 0,002** 0,001** 0,001**

Лактат, 0349 0.436 0,487 0.538 0,404 0372 0354

мкмоль/г ± ± ± ± ± ±

ткани 0,001 0,002* 0,002* 0.004* 0,001** 0,002** 0,004**

4,112 1,822 0,547 0,438 1332 2,215 3,421

тУ ± ± ± ± ± ±

0,523 0,057* 0,149* 0.073* 0,055** одоо** 0,055**

¡5$аг» 3035,22 1125,13 320,256 257324 1254,28 1850.10 2130,03

отн.ед ± £ ± ±

401,264 243,19* 113,15* 53,72* 1303** 30,5** 150,6**

МСМ,еД-о 0,272 0354 0,429 0,521 0329 0349 0319

ПТ.ПЯ. ± ± ± ± ±

0,013 0,014* 0,014* 0,019* 0,091 0,084** 0,017**

ЛИ, 15,4± 21,6± 45,4± 57,8± 18.5* 25,0± 29,2±

% 0,339 0,521* 0,581* 0,646* 0,428** 1365** 1Д73**

* - достоверность различий показателей по сравнению с интакгными (р<0,05), ** - по сравнению с контрольными (р<0,05).

Кроме того, корреляционный анализ выявил, что иовду показателями углеводного обмена -пирувата и лактата опухолевой ткани существует взаимосвязь, имеющая, соответственно, срокам развития саркомы, следующие степени выраженности: 20-и дневная опухоль г = 038, 30-и дневная опухоль г = 0,48,40-дневная опухоль г = 0,57 (р<0,05).

Известно, что гипогликемнческое давление опухоли на метаболизм нормальных тканей приводит (в связи с фоническим дефицитом основного энергетического субстрата - глюкозы) к мобилизации тканями других энергетических субстратов, в том числе и жирных кислот (Баланс А ,1987). Очевидно,

этан объясняется снижение содержания общих липадов (ОЛ) как в плазме крови (табл.1) животньп-опухоленосигелей, так и в гомогенатах саркомы (табдЗ).

Метаболические сдвиги, происходящие в организме -опухоленосителе по мере роста саркомы, затрагивает иммунологический статус организма.

Данные исследования фагоцитарной активности крови опухолевых животных свидетельствуют об угнетении кислород- зависимых реакций фагоцитов. Обнаружено, что рост злокачественного образования приводит не только к снижению значений показателей Шах»,^ но и нарушает динамические особенности фагоцитарной реакции.

Дистантное действие опухоли проявляется в том, что в силу особенностей своего обмена, опухолевая ткань, с одной стороны, создает дефицит жизненно-важных метаболитов, с другой стороны, способна гцюдуцировап вещества, не свойственные нормальному организму и в еще большей степени дезорганизующие обмен (Терещенко И.П., 1983).

Прежде всего, это продукты распада самой опухоли, оказывающие токсическое воздействие. Большие массы опухолевой ткани недостаточно обеспечены кислородом. В результате в центре опухолевого очага обнаруживаются участки омертвления (некрозы).

Морфологическое исследование выявило, что на поздних сроках онтогенеза удельный объем некротизированной ткани достигает 8% от общего объема опухолевого узла. Продукты распада опухоли, всасываясь в кровь, разносятся по организму, вызывая общую интоксикацию.

Получено, что рост саркомы-45 сопровождается увеличением содержания МСМ и повышением ЛИ (табл.4). При этом установлена корреляционная связь между продуктами ПОЛ и показателями эндогенной интоксикации в плазме крови животных-опухоленосигелей (г=0,48, р <0,305).

Итак, злокачественный рост сопровождается дезорганизацией многих метаболических систем. При этом главной биохимической особенностью опухолевой клетки считается повышенная интенсивность гликолиза, а усиленная АОА злокачественного новообразования рассматривается как защита опухоли от АФК, ингибирукмцкх процессы пролиферации

Если учесть, что интенсивность процессов ПОЛ в злокачественных клетках значительно менее выражена, чем в нормальных тканях, следует ожидать, что селективному уничтожению неоплазмы должно способствовать повышение в ней концентрации сильных окислителей. к .Именно поэтому для достижения поставленной цели использовали лохальный метод введения озонированного физиологического раствора (ОФР) в виде подкожных инъекций по диаметру саркомы, а также непосредственного введения ОФР в опухолевый узел.

В исследовании изначально предполагалось, что введение ОФР приведет к некоторым изменениям метаболизма экспериментальных животных. Для доказательства исключительного действия ОФР была выделена 4 группа. Сравнительный анализ основных показателей свободнорадикального статуса и углеводного обмена был проведен между 4 группой и общим

контроле» Общий контроль представляет совой усредненные значения исследуемых показателей животных с опухолью разных сроков развития (группы б, 7,8).

Y = 3Z„-i X», где Y - общий контроль. Xi • контрольная -1, Х2 -контрольная 2, Xj - конгрольная-3. Результаты анализа биохимических показателей крови животных - опухоленосигелей а также опухолевой ткани животных, в опухоль которых вводили оксигетшрованный физиологический раствор, и животных - опухоленосигелей, на которых ничем не воздействовали (общий контроль) Сравнение, проведенное в 4 и б, 7. 8 группах, выявило, что ишенения биохимических параметров недостоверно. Следовательно, барботнровшный кислородом физиологический раствор не влияет на метаболизм животных - опухоленосигелей. Исходя из этого, принято решение использовать в качестве основного контроля действия ОФР группы б, 7 и 8.

Результаты исследований показали, что использование ОФР, с концентрацией озона в газовой смеси 3000 ккг/л, приведет к существенным изменениям свободнорадикальнш процессов, углеводного обмена, нарушает морфологические структуры саркомы.

Прежде всего, локальное введение ОФР, создающее повышенное своСоднорадикальное окружение опухоли, инициирует процессы пероксвдации в саркоме. Об усилении свободкорадккальной активности саркомы -45, независимо от сроков ее развития, при воздействиях ОФР, свидетельствуют увеличение содержания молекулярных продуктов ПОЛ ДК, ТК, ОШ, а также повышение ХЛ гомогенатов опухолевой ткани (табл.3).

За фоне инициации ПОЛ в клетках саркомы при локальном использовании ОФР наблюдается значительное снижение активности СОД и каталазы.

Логично предположить, что снижение активности СОД приводит к тому, что в опухоли увеличивается скорость образования перекисей, о непереносимости которых опухолевыми клетками неоднократно сообщалось (Козлов Ю.П., 1973).

Необходимо отметить, что введение ОФР привело к снижению активности не только ферментативного звена антиоксидашной системы защиты организма, но и к увеличению общей АОА гомогенатов саркомы-45 трех периодов развития и роста (табл.3).

Вероятно: разрушение антиоксцдангаой системы защиты злокачественного новообразования, вызванное введением ОФР, способствует тому, что опухоль не в состоянии сдерживать усиленное свободнорадикальное окисление, продукты которого, повреждая митотичсское веретено деления (Бурлакова КБ.,1990), останавливают клеточную пролиферацию.

Значительное уменьшение содержания пирувата и лакгата в гомогсште опухолевой ткани подопытных животных можно расценивать как непосредственное угнетение метаболизма саркомы (табл.3).

Однако, наиболее убедительными фактами антиопухолевого эффекта ОФР являются результаты морфологических исследований. При исследовании гнсто логических препаратов выявлены обширные

по площади и объему деструктивные изменения в опухолях, свидетельствующие о значительном повреждающем влиянии ОФР. Среди наблюдаемых альтернивиых изменений опухолей животных, подвергавшихся воздействии! ОФР, необходимо выделить следующие:

1) значительное (свыше 50%) увеличение удельного объема некротизированной ткани;

2) снижение объемной плотности клеток сохранившейся ткани;

3) выраженные расстройства микроциркулэторного русла.

Важно, что направление некротизацни в опухолевом узле определяется локализацией введения ОФР: при подкожных инъекциях область некроза распределяется от подкожной клетчатки по периферической зоне опухолевого узла, фи введении ОФР в строну саркомы наблюдается некротизация центральной и переходной зон опухолевого узла.

Таким образом, локальное использование ОФР создает для опухоли прооксидашное окружение, приближает клетки новообразования к предельным условиям пероксидации, вызывающим их люкс.

Считая основным токсическим действием АФК, образующиеся при озонировании ФР, мы не исключаем, что озон- кислородная смесь, вводимая по диаметру саркомы, может взаимодействовать с межклеточными жвдкостями организма. В подобных реакциях озонолиза образуются перокевды с короткими цепями, которые проникают в клетку и действуют на милгохоцдриальную дыхательную цепь СУоЦГ М.М.,1983). Дезорганизация энергообеспечение опосредованно выражается в снижении продуктов гликолиза- пирувата и лактата.

"Выраженные необратимые повреждения метаболизма опухолевых клеток приводят, вероятно, к ослаблению патологического давления опухоли на организм хозяина

Это проявляется правде всего в восстановлении прооксидзншо- антиоксидянтного, баланса организма- опухоленоштеля.

Установлено, что введение ОФР в организме ингибирует свободнорадикальное окисление, что выражается в снижении содержания как молекулярных продуктов ПОЛ: ДК, ТК, ОШ, так и радикальных. Ингибирование ПОЛ связано с усилением антиоксидангной способности организма. Результаты исследования выявили повышение активности ферментативных компонентов аншоксцданшой системы защиты организма: СОД. каталазы, глутатионпер оксидазы и гдуташонредуктазы (табл.1).

В вдови опухолевых животных, подвергшихся воздействию ОФР, отмечается повышение содержания глутатиона восстановленного и а-токоферола, а также нормализация содержания церулоплазмина в сыворотке крови.

Полученная корреляционная зависимость между содержанием Цп и (г =-0,58, р<0,05), согласуется с тем фактом, что гипогалоидм, в частости ОСТ (на образование которого расходуется 28% потребляемого активированными нейтрофилами кислорода) окисляют Цп (Сенюк О.Ф.,1994).

Деструктивное действие ОФР по отношению к опухолевой ткани сопровождается нормализацией в крови животных-опухоленосителей показателей ионного гомеостаза: увеличивается концентрация ионов железа и уменьшается содержание ионов меди При этом отмечается повышение гемоглобина крови (табл.2) и уровня ОЛ в плазме крови (габл.1).

Установлено, что введение ОФР в опухолевый узел приводит к постепенной нормализации показателей углеводного обмена. Отмечается, с одной стороны, повышение уровня глюкозы в крови подопытных животных, свидетельствующее о выходе организма из гипогликемического состояния, с другой стороны, уменьшение содержания пирувата и лактата, характеризующее подавление гликолиза (табл.4).

Эффективность лечения злокачественных новообразований в известной степени определяется характером влияния лечебных компонентов на системы организма, принимающие участие в контроле опухолевого роста, в частности, иммунитет.

Результаты, полученные при изучении фагоцитарной активности крови методом люминол-зависимой цеолит- индуцированной ХЛ, свидетельствующие о повышении Гтахфя, Эф^-, вероятно, объясняются, во-первых, дезинфицирующим эффектом озона на местном уровне, во-вторых, системным действием озона на иммунную систему.

Первое предположение связано с тем, что АФК, которые, с одной стороны, поступают в организм при введении ОФР, с другой стороны, образуются в процессе озонолиза, представляют собой дополнительный экзогенный резерв биоцвдного аппарата фагоцитоза.

Второе предположение относится, по мнению V. Воса (1994) к иммуномодупирующему эффекту озона. Липопероксвдн, продукты озонолиза, поступая в клетку, вызывают активацию ЭТкВ белка, который способен индуцировать синтез бежа, в том числе и цитокинов (фактор некроза опухоли, ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-6), усиливающих щюдукцию АФК.

Установлено, что несмотря на развитие интенсивных некротических процессов опухоли, вызванное введением в нее ОФР, в крови животных с трансплантированной саркомой уровень общей интоксикации снижается.

Полученная корреляционная взаимосвязь между и МСМ и ЛИ (г =-0,67, р<0,05), позволяет предположить, что снижение интоксикации обеспечивается усилением фагоцитарной активности иммунокомпетентных клеток крови.

Таким образом, воздействие ОФР на опухоль прекращает дезорганизацию обмена организма, вызванную развитием и ростом злокачественного образования.

Противоопухолевый эффект ОФР подтверждается тем фактом, что у 30% животных в результате раннего введения ОФР наблюдается рассасывание опухоли с полной нормализацией биохимических показателей.

И, наконец, эксперимент на выживание показал, <по локальное введение ОФР приводит к увеличению продолжительности жизни животных-опухоленоекгелей на 26,6%.

Таким образом, сопоставление полученных данных с имеющимися литературными сведениями, позволяет считать, что ОФР с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л при комплексном "-■ действии на опухоль, включающей подкожное введение по диаметру саркомы и инъекции непосредственно в строку опухоли, обладает антиканцерогенным эффектом.

Не исключено, что использование озона станет наиболее рациональным способом создания '' - новой терапии новообразований.

ВЫВОДЫ

1. Использование озонированного физиологического раствора, с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л в виде подкожных инъекций по диаметру опухоли, а также при непосредственном ' ' : введении в опухолевую ткань приводит к инициированию процессов пероксидацин и снижению ашиоксидангной активности саркомы-43.

2. Введение озонированного физиологического раствора ингибирует интенсивность гликолиза ' : опухолевой ткани и вызывает в ней регрессивные морфологические изменения, а именно, увеличение удельного объема некротизированной ткани; снижение объемной плотности клеток сохранившейся ' - ткани; выраженные расстройства ыикроциркулягорного русла опухоли.

3. Воздействие озонированного физиологического раствора нз саркому сопровождается восстановлением преоксцдантно •антнокещантиого баланса организма-олухоленосителя. Снижение интенсивности свободнорадикального окисления связано с усилением ферментативных и неферментатнвных компонентов антиоксидштной системы шиты организма.

' 4. Деструктивное действие озонированного физиологического раствора по отношению к опухолевой ткани выражается нормализацией в крови животных-опухоленоентелей показателей углеводного обмена, ионного гоыеостаза, фагоцитарной активности крови и степени эндогенной интоксикации организма.

5. Введение озонированного физиологического раствора способствует увеличению " ' продолжительности жизни жнвотных-опуходеносетелей, а также рассасыванию опухоли на фоне '"*"' инфузий ОФР в ранние сроки после трансплантации саркомы-45.

Список работ. опубликованных по теме диссертации

1.Содержание металлов переменной валентности в сыворотке крови на фоне озонотерапии // Тезисы докладов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Озон в биологии и медицине» - Нижний Новгород 1995. - С. 65-66.(соавт. К.Н. Конгорщикова).

2. Хемилюминесцентный метод оценки функциональной активности полиморфноядерных клеток крови при озонотерапии // Тезисы докладов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Озон в биолопш и медицине» - Нижний Новгород, 1995. - С. 108-109.(соавт. ЕИ. Кузьмина, К.Н. Хоиторщикова).

3. Экспериментальное обоснование озонотерапии при злокачественных новообразованияхШаллипивная медицина и реабилитация в здравоохранении: Сборник научных работ международного конгресса-1996.-С.183-184. (соавт. К.Н. Конгорщикова. Д.В. Козлов).

4. Влияние озона на состояние процессов ПОЛ и спектр макроэргических нуклеотидов у экспериментальных животных при неоплазин // Паллиативная медицина и реабилитация. -1997. - № 2. - С.46-47. (соавт. К.Н. Конгорщккова, Т.А. Гончарова, Д.В. Козлов).

5. Хеми люминесценция как интегральный метод оценки реактивной способности биопрепаратов //Информационные технологии и автоматизация научных исследований: Сб. науч. тр. /Н-Новгород, 1997.- (соавт. Н.А. Добротина,ЕИ. Кузмина, Г.А. Кравченко. Т.П. Ежова).

6. Способ лечения злокачественных новообразований в эксперименте. - Заявка на изобретение Кя 96 124 167, приоритет от 24.12.96. (соавт. К.Н. Конгорщикова).

7. Использование озона при лечении экспериментальной опухоли животных И Тезисы докладов II Нижегородской сессии молодых ученых.- Н.Новгород.1997. • С. 248.

8.0гопе influence oil some metabolistic indices in experimental animals with sarcoma // Abstract of the 12"1 International Congress. - Istanbul, Turkey. 1996. (соавт. К.Н. Конгорщикова).

9. Ozone application in neoplasia treatment of experimental animals // Abstract of the 2"* International Symposium on Ozone Application.-Havana, Cuba, 1997. P.23-24. (соавт. К.Н. Конгорщикова).

lO.Ozone influence on pro- and antioxidant systems in neoplasia // Abstract of the 13th Ozone Worid Congress, - Osaka, Japan, (соавт. К.Н. Конгорщикова).