Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями

Щербатюк, Татьяна Григорьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями"

На правах рукописи

Щербатюк Татьяна Григорьевна

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И ИХ КОРРЕКЦИЯ У ЖИВОТНЫХ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМИ ОПУХОЛЯМИ

03.00.13 - физиология человека и животных 14.00.16- патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Нижний Новгород - 2003

Работа выполнена в Нижегородской государственной медицинской академии, в Центральной научно-исследовательской лаборатории

Научный консультант

доктор биологических наук Мухина Ирина Васильевна Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Великанов Валериан Иванович доктор медицинских наук, профессор Рыжаков Дмитрий Иванович доктор биологических наук, профессор Самарцев Виктор Николаевич

Ведущая организация:

НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН

Защита диссертации состоится «4» ноября 2003 г. в 11.00. часов на заседании диссертационного совета Д 220.047.01 при Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии, 603107, г. Нижний Новгород, проспект Гагарина, 97.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, д. б.Н

Асафова H.H.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность.

Свободнорадикальное окисление непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов и свободнорадикальные процессы при их низкой интенсивности являются одним из типов нормальных метаболических процессов (Бурлакова Е.Б., 1982). Интенсификация свободнорадикальных процессов в тканях может быть следствием гиперпродукции свободных радикалов и (или) недостаточности антиоксидантной системы (Афанасьев И.Б., 1999, Биленко М.В., 1989, Дубинина Е.Е., 2000, Подопригорова В.Г., 2001). Подобное физиологическое состояние клеток, сопряженное с нарушением нормальной регуляции свободнорадикальных реакций, называют «окислительным стрессом» (Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б., 2001), являющимся универсальным механизмом клеточных повреждений (Крыжановский Г.Н., 2000, Владимиров Ю. А., 2001), которые приводят к развитию разнообразных патологических состояний, включая злокачественные новообразования (Журавлев А.И., 1993). Таким образом, проблема изучения молекулярно-клеточных механизмов развития окислительного стресса, а также поиск эффективных физиологических модуляторов его является необычайно актуальной.

Успех любого корригирующего метода с использованием физических факторов воздействия определяется знаниями природы нарушений, на коррекцию которых они направлены, с одной стороны, и механизмов их биологического действия, с другой.

Поскольку в обмене бластомных клеток превалирует брожение, филогенетически более древним процесс, чем окисление, то опухоль представляет собой своеобразный возврат к более ранней эволюционной ступени существования, при этом более поздний и менее глубоко укоренившийся регуляторный механизм утрачивается. В связи с этим логично предположить, что создание «эволюционного скачка» -искусственное оксидантное окружение опухоли - может внести дезорганизацию в примитивный анаэробный метаболизм неоплазмы.

Важная особенность злокачественных новообразований изменение уровня свободнорадикальных реакций, которое проявляется в повышенной антиоксидантных активности опухолевой ткани, с одной стороны, и истощении антиоксидантной системы защиты организма-опухоленосителя, с другой (Козлов Ю.П., 1973). Согласно кислородно-перекисной концепции онкогенеза многие противоопухолевые мероприятия можно разделить на две группы. Воздействия первой группы направлены на снижение уровня свободнорадикального окисления (СРО). Напротив, г/""1""гтп1п групг" тяг тп иначе

связаны с еще большей интенсификацией ifcWWBI^^Ixro^TKax и

CJkw»W

летальным их повреждением токсическими продуктами СРО (Лю Б.И., Шайхутдинов Е.М., 1991). В связи с этим, озон, обладающий мощными окислительными свойствами, может быть использован как противоопухолевое средство второй группы.

Sweet F. в 1980 г., Karlic Н. в 1987 и Столяренко Г.С. в 2001 г. с коллегами представили доказательство ингибирующего действия озона по отношению к опухолевым клеткам в условиях in vitro.

Анализ современной литературы показал, что физические воздействия, направленные на коррекцию системы «организм-опухоль», будь то фото динамическая терапия (Миронов А.Ф., 1996), низкоинтенсивное лазерное излучение (Клебанов Г.И., 2001), гипербарическая оксигенация (Ефуни С.Н., 1989), так же как и один из основных методов терапии злокачественных новообразований-ионизирующее излучение (ИИ) (Ярмоненко С.П., 1992) имеют общие механизмы действия, связанные с теми процессами, которые включают развитие свободнорадикальных реакций.

В настоящее время проблема повышения эффективности лучевой терапии приобретает важное социально-экономическое значение и требует постоянного внимания и поиска оптимальных средств ее решения. Логично, что озонированный физиологический раствор, представляющий собой смесь активных форм кислорода, в комбинированном использовании с ионизирующим излучением, приведет к повышению избирательности действия последнего, основанной на кислородном эффекте.

Цель исследования: разработать комплексный подход дестабилизации свободнорадикального уровня бластотрансфор-мированных клеток и коррекции свободнорадикального баланса организма животных с экспериментальными опухолями.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить механизм действия интра- и паратуморального введения озонированного физиологического раствора на организм крыс с Лимфосаркомой Плисса.

2. Посредством оценки дозозависимого эффекта выявить возможности и ограничения парентерального введения озонированного физиологического раствора животным с Лимфосаркомой Плисса раннего срока роста.

3. Разработать способ воздействия, позволяющий усилить повреждающее действие ионизирующего излучения на опухолевые клетки.

4. Исследовать действие комбинированного подхода при парентеральном

введении озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки и ионизирующего излучения с уменьшенной

дозой на организм крыс с лимфосаркомой Плисса раннего и позднего сроков роста опухоли. Научная новизна

Впервые проведено комплексное исследование, позволяющее опреденить возможности и ограничения нового способа дестабилизации свободнорадикальных процессов животных с экспериментальными опухолями.

Впервые выявлено, что озон в высоких концентрациях, включенный в состав инфузионной среды при интра- и паратуморальном введении, создает свободнорадикальную блокаду опухоли, вызывая рассогласованность между прооксидантами и компонентами антиоксидантной системы защиты в опухолевых клетках, что приводит к их патологической гибели.

Приорететным является изучение, направленное на разработку комплексного подхода, заключающегося в использовании озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки и ионизирующего излучения.

Впервые показано: действие озона и ионизирующего излучения потенциируются, что в конечном счете дает повышенный противоопухолевый эффект. Благодаря потенциирующим связям озона и ионизирующего излучения доза последнего может быть снижена, в связи с чем уменьшается вероятность побочных эффектов лучевого воздействия.

Дана оценка изменений свободнорадикальных процессов, углеводного обмена, уровня эндогенной интоксикации, электрофоретической подвижности эритроцитов, вязкости и фагоцитарной активности крови, а также микрокристаллоскопической картине плазмы животных-опухоленосителей на фоне комплексного введения озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения на раннем и позднем сроках роста опухоли.

Впервые установлено, что озон в высоких концентрациях при локальном введении обладает антиканцерогенным действием, а в комбинированном использовании с ионизирующим излучением повышает эффективность противоопухолевых воздействий. Теоретическое и практическое значение.

Результаты проведенного исследования позволяют патогенетически обосновать применение озона для дестабилизации свободнорадикального уровня бластотрансформированных клеток и коррекции свободнорадикального баланса организма -опухоленосителя. Анализ механизмов известных противоопухолевых физико-химических воздействий показывает, что все они направлены на изменение кислородного, свободнорадикального гомеостаза, отсюда, использование

ОФР - наиболее физиологический, эффективный и доступный метод, позволяющий воздействовать на свободнорадикальные процессы организма-опухоленосителя.

Результаты, полученные при апробации использования озона у собак со злокачественными новообразованиями и опубликованные в журнале «Ветеринария», успешно применяются в ветеринарных клиниках Нижнего Новгорода.

Результаты, полученные при изучении влияния озона в комплексе с гипертермией, лучевой и полихимиотерапией, доложенные на 3 и 4 Всероссийской конференциях «Озон и методы эфферентной терапии в медицине» применяются на кафедрах хирургии ЦПК и ППС, онкологии, акушерства и гинекологии НГМА, полевой терапии ВМИ ФС РФ, в клинике новых медицинских технологий. Результаты, доложенные на 2 Международном симпозиуме по применению озона в биологии и медицине (Гавана, Куба, 1997) и опубликованные в журнале "Ozone News", используются в Озоновом Центре (Гавана, Куба).

Опубликованные данные работы о механизмах действия озона на свободнорадикальный уровень бластотрансформированных клеток и процессы пероксидации организма-опухоленосителя включены в программу тематического усовершенствования врачей всех специальностей Центра повышения квалификации и постдипломной подготовки специалистов (ЦПК и ППС) Нижегородской государственной медицинской академии. Положения, выносимые на защиту:

1. Интра- и паратуморальное введение озонированного физиологического раствора, создавая прооксидантное окружение опухоли, усиливает перекисное окисление липидов в опухоли. Интенсивное образование продуктов перекисного окисления липидов приводит к истощению компонентов антиоксидантной системы защиты опухолевой ткани и вызывает деструктивные изменения опухоли. Последние проявляются в ингибировании интенсивности гликолиза, а также в наличии альтеративных морфологических нарушений опухолевой ткани.

2. Биологическими эффектами противоопухолевого характера обладает исключительно озонированный физиологический раствор, поскольку электронно-микроскопическое и биохимическое исследования действия оксигенированного физиологического раствора не выявляют каких-либо значительных изменений в ультраструктуре и биохимии опухолевых клеток.

возможности организма животного и создает, таким образом, канцерофильные условия нормальных тканей, что приводит к метастазированию опухоли у 17% крыс.

4. Установлены потенциирующие связи озона и ионизирующего излучения, способствующие более значительному усилению свободнорадикальных реакций в опухолевой ткани, однако приводящие к чрезмерному усилению уровня перекисного окисления липидов по сравнению с интактными животными, что позволило предположить возможность снижения используемой дозу облучения при выбранном режиме озонотерапии.

5. Комбинированное использование парентерального введения озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки и ионизирующего излучения с меньшей дозой облучения животным с Лимфосаркомой Плисса раннего и позднего сроков роста опухоли является эффективным противоопухолевым подходом, направленным как непосредственно на повреждение лимфосаркомы Плисса за счет повышения радиочувствительности опухолевой ткани, так и на опосредованные реакции активации антиоксидантной системы организма-опухоленосителя.

6. Оценка эффективности используемого комплексного подхода по проценту торможения роста опухоли на позднем сроке ее роста выявила, что воздействия располагаются в следующей последовательности по степени убывания: «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «озонированный физиологический раствор» «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения».

Апробация работы.

»< ••

патофизиологии" (С-Петербург, 2002), 4 Международной междисциплинарной научно-практической конференции «Современные проблемы науки и образования» (Ялта, 2003) Международной конференции по химии органических и элементо-органических пероксидов (Москва, 2003); а также представлены в виде публикаций на Международном конгрессе "Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении" (Москва-Ялта, 1996), 12 Международном конгрессе по актуальным проблемам биологии и медицины (Стамбул, Турция, 1996), 13 Международном конгрессе по озону (Осака, Япония, 1997), 20 Европейской конференции по микроциркуляции (Париж, Франция, 1998), 1 Тихоокеанской научно-практической конференции "Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины" (Владивосток, 2000), 3 Международном симпозиуме по применениям озона в биологии и медицине (Гавана, Куба, 2000), научно-практической конференции "Актуальные проблемы патофизиологии" (С-Петербург, 2001), 1 и 2 Всеукраинской конференции с международным участием "Местное и парентеральное использование озонотерапии в медицине"(Харьков, 2001, 2002 гг.), 15 Всемирном конгрессе по озону (Лондон, Великобритания, 2001), Международном симпозиуме "Приоритетные направления противораковой борьбы в России", (Екатеринбург, 2001), 3 Межвузовской конференции "Актуальные медико-биологическиеи проблемы" (Ижевск, 2003), 5 Межрегиональной научная конференции по актуальным проблемам биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных, (Екатеринбург, 2003), 2 Межвузовской конференции "Обмен веществ при адаптации и повреждениях" (Ростов-на-Дону, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 54 работы, в том числе 1 монография, 1 работа выполнена на уровне изобретения и защищена патентом.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 330 страницах машинописного текста, иллюстрирована 55 рисунками и 23 таблицами; состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики методов исследования, пяти глав собственных наблюдений, обсуждения, выводов и списка литературы, содержащего 300 источников, из которых 102 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты были выполнены на 586 белых нелинейных крысах, самцах массой 200±10 г. Животных содержали в стационарных условиях вивария.

Модель неоплазии создавали путем перевивки опухолевого

штамма, приобретенного в НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН (г. Москва).

Характеристика и перевивка опухолевого штамма Лимфосаркома (ЛФС) Плисса, - экспериментальная опухоль, была получена в 1958 году после подкожной перевивки опухоли, возникшей у крысы, получавшей 3,3 дихлорбензидин (Плисс, 1961).

Таблица 1.

Основные этапы исследования.

№ Этап исследования Группы подопытных животных п

1 Интра- и парату моральное введение озонированного физиологического раствора (ОФР) крысам с лимфосаркомой Плисса позднею срока роста опухоли 1- интактные (п= 30), 2-ЛФС. d= 5 см, без воздействий (п=30), 3- ЛФС+кислород (п=30), 4- ЛФС+ОФР (п=30). 120

2 Дозозависимый эффект парентерального введения ОФР крысам с лимфосаркомой Плисса раннего срока роста опухоли 1-интактные (п= 10), 2-ЛФС, d= 2 см, без воздействий (п= 10), 3-ЛФС+ОФР [100 мкг/л] (п= 18), 4-ЛФС+ОФР [400 мкг/л] (п= 18), 5-ЛФС+ОФР [900 мкг/л] (п= 18). 74

3 Комбинированное применение ОФР и ионизирующего излучения (ИИ) с дозой облучения 2 Гр ОФР крысам с лимфосаркомой Плисса позднего срока роста опухоли 1-интактные (п= 10), 2- ЛФС, d- 5 см, без воздействий (п= 21); 3- Моно- ионизирующее излучение (ИИ), доза 2 Гр, (п= 21); 4 -Кислород интра-, паратуморально + ИИ, до ¡а 2 Гр (п= 21), 5- Кислород внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр, (п= 21); 6- ОФР интра-, паратуморально + ИИ, доза 2Гр, (п= 21). 7- ОФР внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр, (п= 21), 8- ОФР интра-, паратуморально, внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр (п= 21); 9- ОФР интра-, паратуморально, внутрибрюшинно (п= 21). 178

4 Комбинированное применение ОФР в плане предлучевой подготовки с ИИ (дозы облучения 0,5 и 022 Гр) крысам с лимфосаркомой Плисса раннего срока роста опухоли 1-интактные (п= 20),— 2-ЛФС, d - 2 см, без воздействий (п= 20), 3- ЛФС, d- 2 см +Моно- ИИ, доза 0,5 Гр, (п= 20); 4- ЛФС, d - 2 см+ ОФР внутрибрюшинно (п= 20) 5- ЛФС, с1~ 2 см+ ОФР внутрибрюшинно + ИИ, доза 0,22 Гр, (п= 20); 100

5 Комбинированное применение ОФР в плане предлучевой подютовки с ИИ (дозы облучения 2 и 1 Гр) крысам с лимфосаркомой Плисса позднего срока роста опухоли 1-интактные (п= 15), 2-ЛФС, d~ 5 см, без воздействий (п= 15), 3- ЛФС, d- 5 см +Моно- ИИ, доза 2 Гр, (п= 15); 4- ЛФС, d 3 5 см+ ОФР внутрибрюшинно (п= 15) 5- ЛФС, d - 5 см+ ОФР внутрибрюшинно + ИИ, доза 1 Гр (п= 15), 75

6 Комплексное использование ОФР, ИИ и янтарной кисло 1ы на позднем сроке роста опухоли 1-интактные (п=9), 2-ЛФС, d 5 см, + ЯК(п= 10), 3-ЛФС, d 5 см, + ЯК + ИИ. доза 2 Гр, (п= 10), 4-ЛФС. d 5 см, + ЯК-ЮФР (п= 10) 39

Опухоль обладает ярко выраженным инфильтративным ростом. Инфильтрует пограничные соединительную и жировую ткань, а также мышцы. Опухоль метастазирует.

Штамм пассировался на крысах в возрасте трех месяцев. Опухоль брали на 14 день развития. Перевивка начиналась с дачи наркоза крысе-донору, затем подкожная опухоль вылущивалась для измельчения. Кусочки опухолевой ткани диаметром 1 мм (инокулум) с 0,5 - 1 мл раствора Хенкса (без фенолового красного) вводились крысе-реципиенту.

Основные этапы исследования и количество экспериментальных животных представлены в таблице 1.

Условия получения ОФР на всех этапах эксперимента были одинаковыми и включали следующие манипуляции. Через флакон емкостью 50 мл со стерильным физиологическим раствором в течение 10 мин пропускали озонокислородная смесь со скоростью газотока 1 л/мин. Озонокислородную смесь получали из медицинского сверхчистого кислорода на озонаторе (ННИПИ). Воздействия ОФР осуществляется сразу после барботирования. Использовались концентрации озона в газовой смеси - 100, 400, 900, 3000 мкг/л. Концентрацию озона контролировали в газовой фазе спектрофотометрическим методом на СФ-26 при длине волны 254 нм. Продолжительность воздействий ОФР - 5 сеансов. Оксигенированный физиологический раствор получали путем барботирования физиологического раствора кислородом со скоростью газотока 1 л/мин.

Облучение животных проводил врач-радиолог Городского онкологического центра Синельщиков А.Д. на установке АГАТ Р-1. Крысы помещались в деревянный ящик (размеры 20x20 см) и подвергались воздействию гамма-излучения (дозы: 2, 1 Гр для животных с лимфосаркомой позднего срока роста, 0,5 и 0,22 Гр- для животных с опухолью раннего срока роста) на фокусном расстоянии 20 см.

Оценка результатов воздействий осуществлялась на следующий день после окончания манипуляций. В конце экспериментов животные, наркотизированные эфиром, забивались путем декапитации; исследованию подвергалась кровь и гомогенаты опухолевой ткани.

Для физиологической оценки свободнорадикального статуса организма, а также выявления физиологических эффектов используемых воздействий были применены методы исследования, представленные в таблице 2

Оценка противоопухолевого эффекта осуществлялась по проценту торможения опухоли, который высчитывался по формуле: Средний показатель массы опухоли в контроле - средний показатель массы опухоли в опытной группе / средний показатель массы опухоли в контроле х 100% (Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США, 1980).

Таблица 2.

Методы исследования.

Соегояние прооксидантной системы ГХемилюминесцентная активность (Imax) (Кузьмина Е И ,1983), 2. Молекулярные продукты ПОЛ: диеновые конъюгаты (ДК), триеновые конъюгаты (1 К), основания Шиффа (ОШ) (Fletcher. 1973), З.Фагоцитарная активность крови (ЗенковН К ,1985)

Состояние I радикальной II ферментативной антиокси-дантной системы 1. 1.Общая антиоксидантная активное!ь (s-ci) (AOA=l/S) (Кузьмина Е И ,1983), 2. Глутатион восстановленный (Ундинцев В Г.,1986) 11 Супероксиддисмутаза (СОД) (Nishirimi, 1972), 2.Кагалаза (Aebi, 1970), 3 Глутатионпероксидаза, 4. Глутатионредуктаза 5 Глутатионтрансфераза (Гаврилова А Р, Хмара H Ф., 1986)

Состояние углеводного обмена I Пируват2. ЛактатЗ. Глюкоза (Аса1иани В С . 1965)

Степень эндогенной интоксикации Вещества низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) (МалаховаМ Я.,1995),

Электрофоретичес кая подвижность эритроцитов Микроэлектрофоретический метод (Харамонснко С С, 1984)

Характеристика апьтеративных изменений опухолевой ткани Методы оптической микроскопии (Вочкова О В , 1982)

Состояние системной структурной организации биологической жидкое ги Метод клиновидной дегидратации биологических жидкостей (Шаболин В.Н , Шатохина С Н., 1992)

Полученные данные были обработаны на IBM PC/AT с помощью пакетов прикладных программ Statistica - 6.0. (для Windows 95) и Microsoft Excel с использованием методов одномерной статистики. Результаты представлялись в виде Mim, где М - среднее арифметическое, ш - стандартное отклонение. Достоверность различий средних определялась по t-критерию Стьюдента. Две выборки считались принадлежащими к разным генеральным совокупностям при р<0.05. Взаимосвязь параметров биохимических исследований оценивалась методом корреляционного анализа (Гланц Стентон, 1999).

г ■»

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Интра- и паратуморальное введение озонированного физиологического раствора крысам с лифосаркомой Плисса позднего срока роста опухоли.

Поскольку интенсивность процессов ПОЛ в злокачественных клетках значительно менее выражена, чем в нормальных тканях (Сидорик Е.П., Баглей Е.А., 1989), следует ожидать, что селективному уничтожению неоплазмы должно способствовать повышение в ней концентрации сильных окислителей.

Именно поэтому на первой стадии исследования для создания локального усиления окислительных реакций в опухолевой ткани использовали интра- и паратуморальное введение озонированного физиологического раствора.

Результаты исследований показали, что интра- и паратуморальное использование ОФР, с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л, приводит к существенным изменениям свободнорадикальных процессов, углеводного обмена, нарушает морфологическую структуру опухоли.

Прежде всего, локальное введение ОФР, создающее повышенное свободнорадикальное окружение опухоли, инициирует процессы пероксидации в лимфосаркоме. Об этом свидетельствуют увеличение содержания молекулярных продуктов пероксидации липидов: ДК, ТК, ОШ а также повышение хемилюминесцентного свечения гомогенатов опухолевой ткани (табл.3). На фоне инициации ПОЛ озоном в лимфосаркоме наблюдается значительное снижение активности СОД и каталазы. Вероятно: разрушение антиоксидантной системы защиты злокачественного новообразования, вызванное введением ОФР, способствует тому, что опухоль не в состоянии сдерживать усиленное свободнорадикальное окисление, продукты которого, способствуют развитию оислительного стресса, сопровождающегося разрушением биомембраны, нарушением метаболизма, деструкцией и гибелью клеток Лимфосаркомы Плисса.

Полученное значительное уменьшение содержания пирувата и лактата в гомогенате опухолевой ткани подопытных животных, которым вводили озонированный физиологический раствор, можно расценивать как результат угнетения обменных процессов опухоли (табл.3).

Обращает на себя внимание исключительное действие именно озона по сравнению с другим окислителем - кислородом. Действие кислорода (оксигенированного физиологического раствора) не приводят к изменениям свободнорадикального статуса опухоли. А именно: уровень хемилюминессцентного свечения, содержание молекулярных продуктов ПОЛ, а также состояние компонентов

антиоксидантной системы защиты опухоли в группах животных, подвергшихся воздействиям оксигенированного физиологического раствора, по сравнению с животными без воздействия, не являются достоверными (табл.3).

Таблица 3

Влияние интра- и паратуморального введения оксигенированного и озонированного физиологических растворов на уровень ободнорадикальной активности и состояние углеводного обмена

Группы животных

Показатели ЛФС кислород интра-. паратуморально озон интра-, паратуморально

1тахХл, тУ 1,76± 0,08 1,84± 0,18 7,86± 0,07*

Б (1/АОА),отн ед. 14,1± 0,4 17,1±2,5 51,2± 5,1*

ДК,ед оп. пл/ОЛ 0,415± 0,097 0,344± 0,033 0,806± 0,007*

ТК,ед. оп. пл /ОЛ 0,112± 0,023 0,092± 0,039 0,407± 0,009*

ОШ, ед. оп. пл /ОЛ 118,43±4,21 121,21+2,48 140,77±0,55*

СОД,ед акт/гткани 78,5± 10,2 62,5± 10,1 30,2± 2,9*

Каталаза,ед акт/гт. 28,8± 0,3 29,1 ±0,9 20,6± 2,1*

Пируват, мкмоль/г ткани 0,23± 0,04 0,22± 0,05 0,15± 0,01*

Лактат, мкмоль/г ткани 1,88± 0,01 1,76± 0,12 0,99± 0,08*

* -Различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой «кислород интра-, паратуморально».

Результаты исследования ультраструктуры клеток Лимфосаркомы Плисса показали, что озонированный физиологический раствор обладает более выраженным действием, чем оксигенированный. При введении оксигенированного физиологического раствора наблюдается незначительное увеличение участков некроза, которое было отмечено при световой микроскопии полутонких срезов. Местами встречаются небольшие очаги деструкции, среди которых имеются крупные клетки с большим гиперхромным ядром, очевидно, как результат терапевтического патоморфоза. Электронно-микроскопическое исследование не выявило каких-либо значительных сдвигов в ультраструктуре опухолевых клеток.

Воздействие озонированного физиологического раствора в концентрации озона в газовой смеси 3000 мкг/л вызывает резко выраженные нарушения лимфосаркомы. Среди наблюдаемых альтеративных изменений опухолей животных, подвергавшихся воздействиям ОФР, необходимо выделить следующие. В опухолевом узле отмечаются признаки полнокровия, отека, дистрофических изменений. В строме наблюдаются множественные участки кровоизлияний, нарушается проницаемость сосудов, целостность сосудистых стенок, что свидетельствует о выраженных нарушениях микроциркуляции.

Характерно возрастание количества некротических явлений в цитоплазме клеток вплоть до разрушения плазмолеммы и выхода органелл в окружающее пространство. Выявлено увеличение удельного объема некротизированной ткани (70%) и значительное снижение объемной плотности клеток сохранившейся ткани.

Очевидно, что бытующее представление об одинаковых свойствах растворенных в жидких средах кислороде, перекиси водорода и озона, неверно: продукты реакции этих окислителей с природными соединениями и их аналогами могут быть принципиально различными. Пока только в отношении озона можно сказать, что эти соединения проявляют биохимическую активность, которая может быть использована в лечебных целях (Разумовский С.Д., 1995). Таким образом, локальное использование ОФР создает для опухоли окислительную блокаду, приближает клетки новообразования к предельным условиям пероксидации, вызывающим их лизис.

Выраженные необратимые повреждения метаболизма опухолевых клеток приводят, вероятно, к ослаблению системного действия злокачественного новообразования на организм хозяина. Это проявляется прежде всего в восстановлении прооксидантно- антиоксидантного баланса организма- опухоленосителя.

Таблица 4

Влияние локального воздействия оксигенированного и озонированного физиологических растворов на биохимические показатели организма

животных -опухоленосителей (М±т).

Группы животных

Показатели интактная без воздействий кислород иитра-. паратуморально озон интра-, паратуморально

1таххл, тУ 7,5± 0,2 13,5± 1,0* 12,3± 1,1 8,1± 0,5**

8,отн ед 42,2±4,5 97,9± 8,2* 99,8± 6,8 49,0± 2,6**

ДК,едоп л/ОЛ 0,537± 0,024 1,022± 0,057* 0,958± 0,067 0,439± 0,035**

ТК,ед оппл /ОЛ 0,172± 0,012 0,219± 0,002* 0.264± 0,04 0,183± 0,01**

ОШ,ед.оп п /ОЛ 97,04±0,92 180,64+0,19 174,34±1,8 72,45±0.06**

СОД,едак/мгНЬ 261,8±18,7 110,5±11,1 * 118,8±10,3* 184,6 ±6,5**

Катал аза, ед акт/мгНЬ 40,2 ±7,1 17,2±1,9* 18,3± 1,4* 33,9±2,7**

ГП, ед акт/мгНЬ 19,98± 0,05 7,99± 2,98* 7,81± 0.09* 14,46± 0.51**

ГР, ед.акт/м|НЬ 13± 0,04 7,11± 0,21* 6,3 5± 0,93* 12,47± 0,39**

08 Н, мкмоль/л 32.57±0,09 15,34± 0,52* 14,27± 1,02* 27,54±0.13**

Глюкоза 3,165± 1,102± 1,123± 2,351±

ммоль/л 0,121 0,128* 0,141* 0,047**

Пиру ват мкмоль/л 0,094±0,02 0,158± 0,04* 0.149± 0,14* 0,108± 0,02**

Лактат, мкмоль/л 0,65± 0,12 1,24± 0,16* 1.22±0.32* 0,88± 0,03**

5 фаГ, отн ед 1109,2± 22.6 257,3± 54.3* 212,2± 10,4* 985,5± 34,9**

ВНСММ, ед опт пл. 11,04± 1,47 36,65±8,71* 36,73±6,5* 25,8±2,93**

* -Различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой «интактная»;** -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с

группой «кислород интра-, паратуморально».

Установлено: воздействие ОФР на опухоль, в организме животных подавляет свободнорадикальное окисление, что выражается в снижении содержания как радикальных, которые косвенно оценивались по XJT активности плазмы крови, так и молекулярных продуктов ПОЛ: ДК, ТК, ОШ. Ингибирование ПОЛ связано с усилением антиоксидантной способности организма. Результаты исследования выявили повышение активности ферментативных компонентов АОС защиты организма: СОД, каталазы, глутатилнпероксидазы и глутатинредуктазы, а также увеличение содержания глутатиона восстановленного (табл. 4).

Установлено, что введение ОФР в опухолевый узел приводит к нормализации показателей углеводного обмена. Отмечается, с одной стороны, повышение уровня глюкозы в крови подопытных животных, свидетельствующее о выходе организма из гипогликемического состояния, с другой стороны, уменьшение содержания пирувата и лактата, характеризующее подавление гликолиза (табл.4).

Результаты, полученные при изучении фагоцитарной активности крови методом люминол-зависимой цеолит- индуцированной хемилюминесценции (табл. 2), свидетельствующие о повышении активности респираторного взрыва (параметр S<|,ar), вероятно, объясняются, во-первых, дезинфицирующим эффектом озона на местном уровне, во-вторых, системным действием озона на иммунную систему.

Первое предположение связано с тем, что АФК, которые, с одной стороны, поступают в организм при введении ОФР, с другой стороны, образуются в процессе озонолиза, представляют собой дополнительный экзогенный резерв биоцидного аппарата фагоцитоза. Второе предположение относится, по мнению V. Bocci к иммуномодулирующему эффекту озона. Липопероксиды, продукты озонолиза, поступая в клетку, вызывают активацию NFkB белка, который способен индуцировать синтез белка, в том числе и цитокинов (TNF, ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-6), усиливающих продукцию АФК (Bocci V., 1999).

Установлено, что несмотря на развитие интенсивных некротических процессов опухоли, вызванное введением ОФР, в крови экспериментальных животных уровень общей интоксикации снижается (табл. 2). Полученная корреляционная взаимосвязь между 8фаг и МСМ (г =-0,67, р<0,05), позволяет предположить, что снижение интоксикации обеспечивается усилением фагоцитарной активности

иммуннокомпетентных клеток крови.

Таким образом, воздействие ОФР на опухоль прекращает дезорганизацию обмена организма, вызванную ростом злокачественного новообразования.

Одним из критериев эффективности антиканцерогенного воздействия считается увеличение продолжительности жизни экспериментальных животных. Наши наблюдения показали, что локальное введение ОФР приводит к увеличению продолжительности жизни животных-опухоленосителей с лимфосаркомой Плисса на 30%. Интра- и паратуморальное использование озонированного физиологического раствора, с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л создает свободнорадикальную блокаду опухоли, в результате которой разрушается ее антиоксидантная система защиты, и чрезмерная продукция активных кислородных метаболитов ингибирует размножение опухолевых клеток, нарушая метаболические процессы неоплазмы.

Таким образом, полученные данные позволяет считать, что интра-и паратуморальное введение озона в виде ОФР с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л обладает антиканцерогенным эффектом.

2. Дозозависимый эффект озонированного физиологического раствора, изученный в условиях модели «Лимфосаркома Плисса» раннего срока роста опухоли.

На втором этапе исследования производился подбор наиболее эффективной концентрации ОФР для парентерального введения крысам с лимфосаркомой Плисса. Критерием эффективности служило уменьшение диаметра опухоли при минимальном повреждающем действии озона на целостный • организм. В экспериментах были использованы озонированные физиологические растворы с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 100, 400, 900 мкг/л. Оценивались свободнорадикальная активность плазмы крови, концентрация глутатиона восстановленного, активность антиоксидантных ферментов СОД и каталазы, электрофоретическая подвижность эритроцитов (ЭФПЭ), содержание веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ), отражающих уровень эндогенной токсичности, организма-опухоленосителя с лимфосаркомой Плисса раннего срока роста.

Изучение дозозависимого эффекта парентерального введения ОФР выявило, что концентрация озона в озоно-кислородной смеси 100 мкг/л, при парентеральном введении ОФР не приводит к достоверным изменениям регистрируемых параметров по отношению к животным с лимфосаркомой Плисса без воздействия (рис. 1).

Парентеральное введение ОФР с концентрациями 400 и 900 мкг/л приводит к достоверному увеличению подвижности эритроцитов и снижению содержания ВНСММ, что может быть расценено как улучшение реологических свойств крови и окисление эндогенных

токсинов. Однако внутрибрюшинное введение ОФР с концентрацией 900 мкг/л вызывает повышение уровня свободнорадикальной активности крови на 47% по сравнению с интактными животными. Это может быть расценено, как нарушение баланса между прооксидантной и антиоксидантной системами организма, в результате которого развивается окислительный стресс.

б/в ЛФС+ОФР-а ЛФС+ОФР-б ЛФС+ОФР-в IЭФ11Э I-11птах —-к— ВНСММ - -X - С8Н

16 14 12 10 8 6 4 2 0

Рис. 1. Хемилюминесцентная активность плазмы крови, содержание глутатиона восстановленного, электрофоретическая подвижность эритроцитов и уровень эндогенной интоксикации организма крысопухоленосителей на фоне введения озонированного физиологического раствора с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси а- 100, б- 400, в -900 мкг/л.

Парентеральное введение ОФР с концентрациями 400 и 900 мкг/л приводит к достоверному увеличению подвижности эритроцитов и снижению содержания ВНСММ, что может бьпь расценено как улучшение реологических свойств крови и окисление эндогенных токсинов. Однако внутрибрюшинное введение ОФР с концентрацией 900 мкг/л вызывает повышение уровня свободнорадикальной активности крови на 47% по сравнению с интактными животными. Это может быть расценено, как нарушение баланса между прооксидантной и антиоксидантной системами организма, в результате которого развивается окислительный стресс.

На начальных этапах окислительного воздействия в крови происходит активация свободнорадикальных процессов (Зенков, 2000). При достижении определенного уровня этого процесса запускается компенсаторная стресс-реакция, сопровождаемая выходом в кровь тканевых антиоксидантов, о чем свидетельствует полученное достоверное повышение концентрации восстановленного глутатиона при парентеральном введении ОФР с концентрацией 400 мкг/л (рис.1.).

На первых этапах гипероксического воздействия наблюдается стадия первичной активации СРО. Она развивается в результате накопления в крови первичных АФК и их атаки на клетки извне. Если действие повреждающего фактора оказывается продолжительным или чрезмерным (парентеральное введение ОФР с концентрацией 900 мкг/л), развивается вторичный патологический процесс, связанный с аутокаталитической генерацией АФК, наступает стадия повторной активации СРО. На этом этапе происходит исчерпание пула антиоксидантов (достоверное снижение концентрации глутатиона восстановленного при действии озона в концентрации 900 мкг/л, рис.1.), радикалзависимое ингибирование ферментов антиоксидантной защиты (в таблице 5 представлены данные активности СОД и каталазы), накопление прооксидантов и продуктов СРО и, как следствие, повреждение биоструктур. При истощении антиоксидантных ресурсов в нормальных тканях организма возникает состояние окислительного стресса, создающее условия для бластотрансформации и/или метастазирования.

количество сеансов введения ОФР - - - - а-ОФР-100 —а— в-ОФР-400 * - с-ОФР-900 ■

Рис. 2. Динамика изменения диаметра опухоли у животных с Лимфосаркомой Плисса на фоне введения озонированного физиологического раствора.

Полученные данные позволяют судить об ограничениях е локального использования озона, который в высоких концентрациях становится источником чрезмерной продукции АФК- универсального инструмента опухолевой трансформации.

При внутрибрюшинном введении ОФР с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 400 и 900 мкг/л уменьшение диаметра опухоли наблюдалось уже на третьем и втором сеансе введения ОФР и после четвертого сеанса произошло 100%-ое рассасывание опухоли (рис.2-в, с). Однако при вскрытии крыс в группе животных, которым вводился ОФР с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 900 мкг/л у 17% крыс были обнаружены метастазы.

ОФР с концентрацией озона в озон-кислородной смеси 900 мкг/л, несмотря на то, что приводит к деструкции первичного опухолевого узла, вызывает мощную свободнорадикальную атаку, превышающую антиоксидантные возможности организма животного и создает, таким образом, канцерофильные условия, способствующие метастазированию Лимфосаркомы Плисса.

Таблица 5.

Активность антиоксидантных ферментов на фоне парентерального

интакт ные ЛФС без воздействия ЛФС+ОФР -100 мкг/л ЛФС+ОФР -400 мкг/л - ЛФС+ОФР-900 мкг/л.

сод, ед акт/мгНЬ 262,75 ±8,07 170,15 +4,86* 167,39 ±5,02* 250,04 +9,45** 102,43 ±3,04**

Каталаза, ед акт/мгНЬ 41,19 ±3,24 29,11 ±2,71* 30,27 ±3,12* 38,71 ±2,85** 15,48 ±2,14**

* -Различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой «интактные»;** -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой «ЛФС без воздействия».

Исходя из полученных данных, можно заключить, что парентеральное введение ОФР с концентрацией озона в газовой смеси 400 мкг/л оказывает наиболее эффективное воздействие на организм-опухоленоситель, вызывая явную деструкцию опухолевых клеток, не повреждая при этом другие структуры организма.

3. Комбинированное использование озонированного физиологического раствора и гамма-излучения с большой дозой облучения на позднем сроке роста лимфосаркомы Плисса. Поскольку поиск средств, позволяющих усилить повреждающее дейс1вие ионизирующего излучения на опухолевые клетки с минимальным отрицательным воздействием на нормальные клетки по-прежнему

актуален, необходимо представлять механизм действия его действия. Ведущей радиационно-химической реакцией действия ионизирующего излучения является разрыв химических связей и возникновение свободных радикалов Н* и ОН* в результате первичной ионизации воды, составляющей 2/3 массы млекопитающих (Козлов А.П., Акимов А.А., 1989). Под действием активных радикалов происходит свободнорадикальное окисление липидов, углеводах, белках, нуклеопротеидах, которые в конечном итоге ведут к функциональным и морфологическим изменениям клеточных и тканевых структур.

Присутствие кислорода в облучаемом объекте значительно увеличивает выход многих радиационно-химических реакций. Анаэробные опухолевые клетки резистентны к действию ионизирующего излучения. В настоящее время стало общепризнанным, что усиление поражения клеток при облучении в присутствии кислорода определяется не особенностями их функционирования и метаболизма, а исключительно физико-химическим взаимодействием облучаемых соединений со свободным кислородом (Ярмоненко С.П., 1992). Универсальное фундаментальное явление радиобиологии- феномен зависимости радиочувствительности от концентрации кислорода называется кислородным эффектом (Киселева Е.С., Голдобенко Г.В., 1996). В связи с этим все существующие противоопухолевые подходы к повышению эффективности ионизирующего излучения сводятся к одной задаче-расширению терапевтического интервала в радиочувствительности опухоли и нормальных тканей (Голдобенко Г.В., 2000).

На наш взгляд, комбинированное использование озона и ионизирующего излучения приведет к повышению избирательности действия последнего, основанной на кислородном эффекте.

■ ЛФС_б/в

вио

MOKJ.p-tum+l/IO

■ ОК_в/б+ИО

■ 03_i,p,-tum+H0

■ <ЭЗ_в/б+ИО

■ 03_i,p-tum,B/6+M0 H03J,p-tum,B/6

Рис. 3. Максимальная интенсивность хемилюминесцентного свечения гомогенатов Лимфосаркомы Плисса на фоне моно- и комбинированных воздействий оксигенированного и озонированного физиологических растворов а также ионизирующего излучения.

Для изучения эффектов комплексного воздействия озона и ионизирующего излучения решения задач третьего этапа исследований экспериментальные животные были распределены в группы следующим образом: 1-интактные (п= 10), 2- ЛФС, с1= 5 см, без воздействий (п= 21); 3-Моно- ионизирующее излучение (ИИ), доза 2 Гр, (п= 21); 4 -Кислород интра-, паратуморально + ИИ, доза 2 Гр (п= 21); 5- Кислород внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр, (п= 21); 6- ОФР интра-, паратуморально + ИИ, доза 2Гр, (п= 21); 7- ОФР внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр, (п= 21); 8- ОФР интра-, паратуморально, внутрибрюшинно + ИИ, доза 2 Гр (п= 21); 9- ОФР интра-, паратуморально, внутрибрюшинно (п= 21). Доза облучения составила 2 Гр. В плане предлучевой подготовки животным-опухоленосителям проводилось 5 сеансов воздействия озонированного физиологического раствора по 0,5 мл, которые осуществлялись через день, последний сеанс - за час до облучения. Концентрация озона в озоно-кислородной смеси для парентерального введения- 400 мкг/л, для интра- и пратуморального - 3000 мкг/л.

Рис.4. Содержание диеновых конъюгатов и триеновых конъюгатов в гомогенатах Лимфосаркомы Плисса на фоне моно- и комбинированных воздействий озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения.

ИОЗ_|,р-Шт,в/б ШОЗ_| р-Шт,в/б+ИО ШОЗ_в/б+ИО ■ (>3_1,р,-шт+ИО ЕЮКв/б+ИО

□ ОК_1,р-шт+ИО

□ ИО 2 ■ ЛФС_б/в

Рис.5. Содержание Оснований Шиффа в гомогенатах Лимфосаркомы Плисса на фоне комбинированных воздействий озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения.

Учитывая свободнорадикальный механизм действия лучевой терапии, становится понятным, что чем больше активных кислородных метаболитов присутствует в опухоли в момент облучения, тем сильнее повреждеющее действие ионизирующего излучения. ОФР является поставщиком короткоживущих свободных радикалов в опухоль и инициатором цепных свободнорадикальных процессов. Вместе с током -

крови в опухоль доставляются такие продукты озонолиза, как долгоживущие озониды и гидроперекиси липидов, которые могут участвовать в реакциях продолжения цепи свободнорадикального окисления, усиливая свободнорадикальное окисление в неоплазме.

При пара-, интратуморальном введении ОФР и воздействии ионизирующим излучением достоверно повышалась

свободнорадикальная активность опухолевых клеток (рис. 3): 1тах на 97% больше значения свободнорадикальной активности гомогенатов опухолей контрольной группы. Введение оксигенированного физиологического раствора, как и на первом этапе исследования не дает биологических эффектов, вызываемых озонированием: 1шах на 82% выше относительно значения при интра- и паратуморальном введении оксигенированого раствора и облучения. Концентрация молекулярных продуктов ПОЛ также достоверно больше в группе животных «ОФР интра-, паратуморально + ИИ», чем соответственные значения в группах «моно-ИИ» и «Кислород интра-, паратуморально + ИИ» (рис.4, 5). Под влиянием пара-, интратуморального и парентерального введения ОФР и облучения эта тенденция сохраняется. С повышением уровня ПОЛ связано достоверное снижение активности антиоксидантных ферментов в клетках Лимфосаркомы Плисса (рис. 6.).

Рис.6. Активность супероксиддисмутазы и каталазы гомогенатов Лимфосаркомы Плисса на фоне комбинированных воздействий озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения.

Таким образом, комбинированное использование озона и ионизирующего излучения приводит к интенсификации ПОЛ и накоплению молекулярных продуктов этого процесса в гомогенатах

опухолей в большей степени, чем лучевое воздействие. Специфичность такого модификационного действия озона по сравнению с оксигенацией очевидна в свете полученных результатов: свободнорадикальное окисление в злокачественных клетках крыс групп «Кислород внутрибрюшинно + ИИ» и «Кислород интра-, паратуморально + ИИ» не изменяется.

Зачастую локализация опухоли в организме- хозяине не позволяет непосредственно воздействовать на нее. В таких случаях приходиться ограничиваться лишь общим на организм воздействием (группа «ОФР внутрибрюшинно + ИИ). В результате гамма облучения после внутрибрюшинного введения ОФР активность СОД и каталазы достоверно меньше контрольного значения (рис. 6). Таким образом, тенденция изменений показателей ПОЛ гомогенатов опухолей при таком воздействии озона и ионизирующего излучения сохраняется.

Известно, что озон повышает эластичность эритроцитов и парциальное давление кислорода в артериальной крови (Перетягин С.П., 1991). В результате ускорения гликолиза в эритроцитах образуется 2,3-дифосфоглицерат, сдвигающий кривую диссоциации в сторону высвобождения кислорода, облегчая его поглощение для тканей.

Улучшение кислородного режима опухоли, повышение в ее гипоксических клетках парциального давления кислорода вероятно, приводит, согласно кислородному эффекту, к повышению их радиочувствительности, к усилению повреждающего действия радиации.

Итак, комбинация ионизирующего излучения и озона приводила к интенсификации ПОЛ, накоплению молекулярных продуктов липопероксидации, а также снижению общей АОА гомогенатов опухолей в большей степени по сравнению с лучевым воздействием и гамма облучением при оксигенации тканей. Результаты изменений параметров свободнорадикальных поцессов, углеводного обмена, фагоцитарной активности и эндогенной интоксикации в организме- опухоленосителе на фоне воздействий представлены в таблице 6.

Специфичность озона, как модификатора облучения, основана на его биологической активности, которая по мнению V.Bocci, является результатом динамического равновесия, поддерживаемого прооксидантными свойствами производных озона, с одной стороны, и компонентами антиоксидантной системы защиты- с другой (Bocci, 1996).

Нами достоверно показано восстановление про-антиоксидантного баланса организма-опухоленосителя при использовании ОФР в плане предлучевой подготовки по сравнению с группами «без воздействий», «Моно- ионизирующее излучение», «Кислород интра-, паратуморально + ионизирующее излучение», «Кислород внутрибрюшинно + ионизирующее излучение». Результаты, полученные при изучении

фагоцитарной активности крови методом люминол-зависимой, цеолит-индуцированной ХЛ, свидетельствуют об усилении бактерицидного аппарата иммунокомпетентных клеток.

Таблица 6.

Влияние комбинированных воздействий озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения на биохимические показатели организма животных с Лимфосаркомой Плисса (М±ш).

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1тах\л, mV 7,54 13 46 14 99 14 21 14,51 12,03 12,74 13 09 9.34

±0 16 ± 1,04 ± 1 73* ± 1,56* ± 1,78 ± 1,49 ± 1 33 ±0,72 ±021

S (1/АОА), 42,23 97 95 89,31 87.15 86,49 64,17 68,46 71 23 43,51

огн ед ±4,52 ±8 17 ± 5 34 ±3,42 ±4,93 ±3,13 ±4.19 ± 5 41 ±4,28

ДК. едоп 0 517 1,022 1,356 1.305 1,328 1,398 1,407 1.478 0 678

пл/ОЛ ±0 024 ±0 057 ± 0 024* i 0,031* ± 0,052 ± 0,021 ±0,015 ± 012 ±0,013

ТК, ед оп 0.172 0,219 0.293 0 274 0.286 0,275 0,312 0,303 0,183

пл/ОЛ ±0012 ±0 002 ±0 003' ±0 004 ± 0,005 ±0 06 ±0,003 ± 004 ± 0,011

СОД. 261,75 110 52 88 33 80,59 84,31 135,5 139.01 136 191.64

ед акт/мгНЬ ±18 66 ±11,11* ±6 21** ±11,32** ±10,15** ±9,51 ±9,12 ± 7,04 J 5,74

Каталаза 40,19 17 24 18 38 19,04 18,53 25,03 23,14 27 8 30,54

ед акт/мгНЬ ±7 14 ±1 91* ±1 02** ±2,11** ±1,28** ±3,21 ±2,44 ±3,62 i 2,17

ГП, ед 19 98 7.99 8 28 8 99 8,72 9,31 9,63 9,78 14,51

Акт/мгНЬ ±0,05 ± 2,98 ±009 ±0,44 ±0,31 ±0,09 ± 1 12 ± 1,35 ±0,73

ГР, ед 13 7,11 8,51 8 03 8,42 9,58 10,87± 11 02 12,59

Акт/мгНЬ ±0,04 ±021 ±0 47 ±0,25 ±0,19 ±0,31 0,24 ±0 63 ±0,41

GSH, 32,57 15,34 9.2 10.14 9,31 17,27 18,41 18 08 29.45

мкмоль/л ±0,09 ±0 52 ±0,79 ±0,85 ± 1,24 ±2,39 ±2 73 ± 2,41 ±2,16

Пируват 0.094 0,158 0.133 0 139 0,137 0,121 0,119 0,108 0,106

мкмоль/л ±0,02 ±004 ±0 004 ± 0,07 ±0,03 ±0,02 ±001 ±0,01 ±0,01

Лактат, 0 65 1,24 1.13 1.11 1.14 1.01 0,99 0,97 0,9

мкмоль/л ±0 12 ±0 16 ±0 02 J 001 ±0,02 ±0 02 ±001 ±,009 - 0,02

Бфаг, отн ед 1109.22 257,32 114.37 112,53 115,32 705,28 694,33 719,8 1051,18

±2,58 ±54 28 ± 21.43 ±28,71 ±30,18 ±27,73 ±28,14 ±31,2 ±37,25

ВНСММ, 11,04 36 65 34 65 33 48 34,18 31,57 27,14 26.18 20,58

ед опт пл ±1,47 ±8 71 ±7 1 15 03 ±5 14 ±1,42 ±1 89 ±2,24 ±3,49

Примечания: Группы животных: 1 -«интактная»; 2- «ЛФС без воздействий»; 3 - «Моно- ионизирующее излучение»; 4 - «Кислород интра-, паратуморально + ионизирующее излучение»; 5- «Кислород внутрибрюшинно + ионизирующее излучение»; 6- «Озон интра-, паратуморально + ионизирующее излучение»; 7- «Озон внутрибрюшинно + ионизирующее излучение»; 8- «Озон интра-, паратуморально, внутрибрюшинно + ионизирующее излучение»; 9- «Озон интра-, паратуморально, внутрибрюшинно». * - указана достоверность различий показателей по сравнению с исходными (р < 0,05).

Электрофоретическая подвижность эритроцитов (ЭФПЭ) -важный физиологический показатель, отражающий электрокинетический статус эритроцитов, непосредственно связанный с величиной поверхностного заряда клеток, определяет реологические свойства и суспензионную стабильность крови и относится к числу жизненно важных и потому наиболее устойчивых характеристик внутренней среды организма (Матюшичев, Шамратова, 1996).

Снижении ЭФПЭ крыс с лимфосаркомой Плисса по сравнению с интактными животными (рис.7.) объясняется опосредованной через

изменение ионной проницаемости мембран зависимостью биоэлектрических свойств эритроцитов от интенсивности ПОЛ, которое приводит к увеличению пассивной катионной проницаемости мембран, сопровождающейся утечкой из клеток ионов калия и снижением ЭФПЭ (Матюшичев, 1996).

Корреляционный анализ выявил среднюю степень обратной взаимосвязи между показателями ЭФПЭ и свободнорадикальной активности плазмы (1тах)- Коэффицент корреляции г=-0,58 при р<0,05. При исследовании влияния комбинированного воздействия ОФР и гамма-излучения на ЭФПЭ животных-опухоленосителей было установлено достоверное повышение подвижности эритроцитов по сравнению с контролем.

Принимая во внимание тот факт, что общим свойством повреждающего действия лучевой терапии является инициация процессов перекисного окисления липидов с последующим свободнорадикальным повреждением клеточных мембран и ДНК (Ярмоненко С.П., 1992), можно предположить, что активная элиминация избытка антиоксидантов опухоли озоном при параллельном усилении реакций ПОЛ, дает картину патогенетического действия обоих методов -к инициированным определенной дозой облучения, реакциям ПОЛ в опухоли будут суммироваться реакции пероксидации липидов, вызванные озоном, - отсюда усиление биологического эффекта.

4 5 6 7 8 9 группы животных

Рис.7. Влияние комбинированного воздействия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения на электрофоретическую подвижность эритроцитов крыс с Лимфосаркомой Плисса.

Таким образом, использование озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки животным с Лимфосаркомой Плисса позднего срока роста опухоли повышает уровень свободнорадикальных реакций в опухолевой ткани, что приводит к усилению повреждающего действия ионизирующего излучения за счет повышения радиочувствительности опухоли.

Однако чрезмерное усиление уровня перекисного окисления липидов в организме -опухоленосителе по сравнению с интактными животными, позволило предположить возможность снижения используемой дозу облучения при выбранном режиме введения ОФР.

4. Биологические эффекты комбинированного действия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения с уменьшенной дозой облучения на организм крыс с лимфосаркомой разных сроков роста.

Согласно положениям комплексной патогенетической терапии (Крыжановский Г.Н,. 2000) дозы воздействий, характеризующихся потенцирующими связями, могут быть снижены, вследствие чего уменьшается вероятность побочных эффектов этих препаратов. На данном этапе исследования получено, что уменьшение дозы облучения при предлучевой подготовке в виде парентерального введения ОФР (400 мкг/л) крысам с Лимфосаркомой Плисса раннего срока роста (диаметр опухоли 2 см) - более щадящий режим воздействия по отношению к свободнорадикапьным процессам целостного организма.

Полученные результаты, свидетельствующие о снижении уровня пероксидацни липидов, а также - повышения АОА, являются доказательством принципиальной возможности комплексного подхода коррекции свободнорадикальных процессов организма-опухоленосителя.

В группе животных-опухоленосителей, которые подверглись комбинированному воздействию ОФР с концентрацией озона в газовой смеси 400 мкг/л и ионизирующего излучения (доза 0,22Гр) отмечено достоверное увеличение ЭФПЭ на 23% (от 0,90±0,02 до 1,10±0,04 мкм см В"'с"') и достоверное снижение хемилюминесцентного свечения плазмы на 24% (от 11,05±0,12 до 8,46±0,04 мВ) по сравнению с животными с лимфосаркомой Плисса, которые не подвергались никаким воздействиям.

Кроме того, в ходе эксперимента было выявлено уменьшение диаметра опухоли в группах животных, получавших ОФР, которое начиналось на третьи сутки воздействия и приводило к рассасыванию опухоли у 80% животных.

25 20 15 10 5 0

¿Г /

Ч1-

С)

1шах

Л"

. ст АОА -^внсмм

Рис.8. Хемилюминесцентная активность, общая антиоксидантная активность плазмы крови крыс и уровень эндогенной интоксикации при использовании ОФР и ионизирующего излучения с уменьшенной дозой.

Методом клиновидной дегидратации (Шаболин В.Н., Шатохина С.Н., 1992) оценивалось влияние выбранных физико-химических воздействий на состояние системной структурной организации биологической жидкости при переводе ее в твердую фазу путем высушивания капли плазмы на предметном стекле. Описание фаций плазмы крыс разных экспериментальных групп.

«ЛФС, (1= 2 см»: периферическая зона с неравномерными радиальными трещинами без конкреций, в центре - агломераты мелких густоветвящихся дендритов, иногда ветвящихся под углом 90°, трещин нет.

«ЛФС, с!= 2 см +Моно- ИИ, доза 0,5 Гр»: периферическая зона с небольшим количеством радиальных трещин и с мелкими складками, в центральной зоне - очень мелкие густоветвящиеся дендриты, на фоне которых встречаются более крупные дендриты, ветвящиеся под углом 90°, трещин нет.

«ЛФС, с1= 2 см+ ОФР внутрибрюшинно + ИИ, доза 0,22 Гр»: периферическая зона с равномерными радиальными трещинами и мелкими складками без конкреций, в центре - агломераты мелких дендритов, мелкие короткие трещины.

«ЛФС, с1= 2 см+ ОФР внутрибрюшинно»: периферическая зона с равномерными радиальными аркообразными трещинами, которые доходят почти до самого центра фации, конкреций нет, иногда встречаются мелкие складки, в центре - сеть мелких ломаных трещин и нечеткие густоветвящиеся дендриты. Картина фации близка норме.

Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод о том, что использование ОФР в комплексе с ионизирующим излучением позволяет снизить дозу облучения, при этом приводит к деструкции опухоли и улучшению общего состояния животного-опухоленосителя, которое проявляется в снижении перекисного окисления липидов и увеличении ЭФПЭ, уменьшении степени эндогенной интоксикации, а также нормализации клиновидной дегидратации плазмы.

Характер метаболических изменений при использовании ОФР в плане предлучевой подготовки животным с лимфосаркомой Плисса раннего срока роста подтвердился и на позднем сроке роста опухоли (диаметр ЛФС - 5 см). Полученные результаты свидетельствуют о достоверном увеличении активности АО ферментов в эритроцитах крыс из группы "озон + ИИ" по сравнению с этими показателями у животных из группы "ИИ". В гомогенатах опухолевой ткани данных групп животных наблюдается достоверное (р<0,05) снижение антиоксидантной активности: активность СОД в группе "озон+ИИ" на 51% ниже этого показателя в группе "ИИ", а активность каталазы- на 61%. Несмотря на повреждающее свободнорадикальное действие на неоплазму данных методов, в эритроцитах крыс интактной группы и группы "озон+ИИ" не наблюдается отличий в 1шах (рис. 9).

25 20 15 10 5 0

ги

•'Л*

<г>

<<Г

СШ] организм ■■ опухоль . ВНСММ

Рис 9. Интенсивность хемилюминесцентного свечения плазмы крови и юмогенатов опухоли крыс с лимфосаркомой Плисса позднего срока роста а также уровень эндогенной токсичности (ВНСММ) на фоне комплексного введения озонированного физиологического раствора ионизирующего излучения с уменьшенной дозой.

Рис. 10 Зоны фаций плазмы эксперимешальных животных' а) «ИНТАКТНЫЕ» (справа - налево: периферическая, промежуточная и центральная зоны фации пчазмы), б) животные-опухоленосители «БЕЗ ВОЗДЕЙСТВИЯ» (справа - налево периферическая и центральная зоны фации плазмы) в) «МОНО-ИИ» (справа - налево: периферическая и центральнаязоны фации плазмы), г) «ОФР+ИИ» (справа - шпево'. периферическая, промежуточная и центральная зоны фации плазмы).

Таким образом, комбинированное воздействие озона и ионизирующего излучения восстанавливает интенсивность реакций свободнорадикального окисления до значений, соответствующих здоровому организму.

Выявленные особенности микрокристаллоскопической картины плазмы крови крыс-опухоленосителей (рис.10) можно обобщить следующим образом. Во- первых, структура фации крыс-опухоленосителей радикально отличается от таковой интактных крыс отсутствием средней зоны, большим количеством изломанных трещин в периферической зоне и отсутствием трещин в центре, а также наличием в ней больших дендритоподобных структур. Во-вторых, каждое из использованных в эксперименте физико-химических воздействий приводит к характерным изменениям в микрокристаллоскопической картине плазмы крови: озон - к появлению линейных складок, параллельных краю капли, и структур типа «листа» в периферической зоне, ионизирующее воздействие - к появлению «языков» Арнольда. В-третьих, при комплексном использовании ОФР и ионизирующего излучения имеется тенденция к нормализации формы и расположение трещин в периферической зоне.

Одним из критериев оценки эффективности противоопухолевых воздействия является процент торможения роста опухоли (Эксперим. оценка..., 1980). По проценту торможения роста опухоли на позднем сроке ее роста используемые воздействия располагаются в следующей последовательности по степени убывания: «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения»- 50%, «озонированный физиологический раствор»-48%, «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения»-14%.

- Таким образом, разработанный комплексный подход использования озона и ионизирующего излучения, приводящий к дестабилизации свободнорадикального уровня бластотрансформированных клеток, с одной стороны, является методом селективного управления тканевой радиочувствительностью, и, с другой стороны, способом коррекции свободнорадикального баланса организма животных с экспериментальными опухолями, в результате которой повышения терапевтического интервала между опухолевой и нормальной тканями. Озон можно рассматривать как химический агент, модифицирующий действие ионизирующего излучения, усиливая лучевое поражение опухоли. Сенсибилизирующее свойство озона, действующего на основе кислородного эффекта, позволяет использовать его для повышения радиочувствительности опухоли путем ее искусственной оксигенации (преодолевая радиорезистентность гипоксических клеток опухоли). Это позволяет снизить используемую

дозу облучения, а следовательно уменьшить повреждающее действие ионизирующего излучения на ткани, не затронутые опухолью.

5. Сравнительная оценка противоопухолевой активности озонированного физиологического раствора, ионизирующего излучения и янтарной кислоты в условиях модели «Лимфосаркома Плисса».

Второе направление свободнорадикальной биологии- поиск физиологических модуляторов, позволяющих разработать способ избирательной антиоксидантной защиты только нормальных тканей, но не опухолей (Суколинский В.Н., 1990). Исследования последних лет показали наличие у янтарной кислоты биологической активности с уникальным сочетанием проявлений: по отношению к здоровому организму сукцинаты выступают в роли адаптогенов, а при наличии патологических проявлений демонстрируют нетипично высокий для адаптогенов терапевтический эффект (Кондрашова М.Н., 1996, Романцов М.Г., 2000, Зозуля Ю.А., 2000). Янтарная кислота (ЯК) является нормальным клеточным метаболитом, играет большую роль в обеспечении энергетического баланса в клетке (Кондрашова М.Н.1997), обладает антигипоксическим (Лукьянова, 1999), антиоксидантным (Кондрашова М.Н., 1973, 1997) и радиопротекторным (Косенко Е.А., Каминский Ю.Г., 1997) действиями, устраняет метаболический ацидоз (Маевский Е.И и др. 2001), ослабляет токсическое действие ряда лекарственных средств (Ананенко и др., 1997). Показано применение янтарной кислоты в качестве «биохимического сопровождения» (термин М.Н. Кондрашовой) у животных с опухолями для поддержания реакции активации (Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., 1997), использование ЯК в лечении онкологических больных (Козырева Е.В., 1997).

Собственные исследования показали, что янтарная кислота, которую животные получали в виде раствора в концентрации 800 мг/л per os. (рекомендация профессора М.Н. Кондрашовой) в комплексе с ОФР и ИИ повышает антиоксидантный статус организма-опухоленосителя. Об этом свидетельствует снижение свободнорадикальной активности плазмы крови крыс (рис. 11.).

Изучение влияния комплексного воздействия янтарной кислоты, ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора на дегидратационную кристаллизацию плазмы крови экспериментальных животных выявило следующие особенности.

Структура фации плазмы крыс-опухоленосителей, которые подвергались введению янтарной кислоты и ионизирующему излучению характеризуется нормализацией формы и расположения трещин в периферической зоне, с сохранением небольшой складчатости у 10% проб, отсутствием "языков" Арнольда; промежуточная зона не появилась;

центральная зона без трещин с кристаллами в виде мелких зерен и мелких густоветвящихся дендритов, не объединенных в массивы. Характерно, что грубых радиальных складок, которые наблюдались у крыс-опухоленосителе после воздействия ионизирующего излучения нет. Структура фации плазмы крыс-опухоленосителей, которым вводили озон и янтарную кислоту: нормализация формы и расположения трещин в периферической зоне, но уменьшение количества трещин, складчатость исчезла; промежуточная зона с изогнутыми игольчатыми кристаллами (как у интактных крыс), центральная зона без трещин с большим количеством мелких зерен. Таким образом, комплексное введение озона и янтарной кислоты наиболее полно восстанавливает структуру высушенной капли плазмы, максимально приближая ее к таковой у интактных крыс. Особенно это касается морфологии периферической зоны, в которой практически полностью исчезают аномальные элементы.

Рис.11. Хемилюминесцентное свечение плазмы крови и гомогенатов опухоли крыс с лимфосаркомой Плисса позднего срока роста на фоне комплексного введения янтарной кислоты, ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора.

Таким образом, наиболее эффективным с точки зрения степени нормализации свободнорадикальных процессов и структуры фации плазмы крови является комплексное введение ОФР и янтарной кислоты. По проценту торможения роста опухоли на позднем сроке ее роста используемые воздействия располагаются в следующей

от

последовательности по степени убывания: «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения»-50%, «озонированный физиологический раствор + янтарная кислота»-22%, «янтарная кислота+ ионизирующее излучение»-18%, «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения» -14%.

Анализ собственных результатов и современных знаний особенностей свободнорадикальных процессов организма-опухоленосителя позволил разработать комплексный подход дестабилизации свободнорадикального уровня

бластотрансформированных клеток и коррекции свободнорадикального баланса организма животных с экспериментальными опухолями.

Биологическая активность озона проявляется в результате изменения свободнорадикального статуса организа в ответ на внешний источник активных кислородных и озоновых метаболитов. Действительно: низкие концентрации озона не проявляют токсического действия, т.к. свободные радикалы нейтрализуются антиоксидантной системой защиты организма, тогда как высокие концентрации вызывают чрезмерное насыщение свободными радикалами- окислительный стресс, приводящий к цитотоксическому эффекту.

Все противоопухолевые физико-химические воздействия направлены на изменение кислородного, свободнорадикального гомеостаза. Использование озонированного физиологического раствора -наиболее физиологический, экономически и технически доступный метод, позволяющий воздействовать на свободнорадикальные процессы организма.

Озон, применяемый в комбинации с ионизирующим излучением, уменьшает резистентность онкоклеток и повышает терапевтическую эффективность без увеличения токсичности. Это дает возможность снизить дозу облучения и, следовательно, уменьшить нагрузку на здоровые ткани, мобилизовать антиоксидантные ресурсы, восстановить защитные свойства организма.

Понимание механизмов компенсации повреждения, вызванного окислительным стрессом, способствует правильному выбору стратегии при подготовке животных к действию свободнорадикальных подходов. В связи с этим перспективными являются результаты по изучению эффектов комбинированного использования озона и янтарной кислоты.

Таким образом, озон в высоких концентрациях при локальном воздействии обладает антиканцерогенным эффектом, а в комплексном использовании с ионизирующим изл^ противоопухолевых воздействий.

•пением повышает эффектавность

РОС. НАЦИОНАЛЬНА* | БИБЛИОТЕКА | СЛеирвург | О® ГО« е-» *

выводы

1. Первичным патогенетическим механизмом противоопухолевого действия озона (в виде интра- и паратуморального введения озонированного физиологического раствора с концентрацией озона в газовой смеси 3000 мкг/л) является усиленная генерация кислородных и озоновых метаболитов, инициирующих свободнорадикальное окисление, которое сопровождается повреждением биомембран, нарушением метаболизма, деструкцией и гибелью клеток Лимфосаркомы Плисса.

2. Дестабилизирующее действие озонированного физиологического раствора по отношению к опухолевой ткани выражается а) нормализацией в крови животных-опухоленосителей показателей свободнорадикального окисления, углеводного обмена, фагоцитарной активности крови и степени эндогенной интоксикации организма; б) увеличением продолжительности жизни животных-опухоленосителей с лимфосаркомой Плисса позднего срока роста.

3. Биологические эффекты противоопухолевого характера проявляет исключительно озонированный физиологический раствор, поскольку действие оксигенированного физиологического раствора не вызывает изменений в ультраструктуре и биохимии опухолевых клеток и состоян ии орган изма-о пухоленосител я.

4. Оценка дозозависимого эффекта озонированного физиологического раствора выявила возможности и ограничения его паренгерального введения крысам с лимфосаркомой Плисса раннего срока роста опухоли: а) концентрация озона 400 мкг/л приводит к полной деструкции опухолевых клеток и восстановлению метаболического дисбаланса организма, которое проявляется в нормализации свободнорадикального окисления, электрофоретической подвижности эритроцитов, степени эндогенной интоксикации; б) концентрация озона 900 мкг/л способствует рассасыванию первичного опухолевого узла, однако вызывает мощную свободнорадикальную атаку, превышающую антиоксидантные возможности организма животного и создает, таким образом, канцерофильные условия нормальных тканей, что приводит к метастазированию опухоли у 17% крыс.

5. Озонированный физиологический раствор в плане предлучевой подготовки животным с Лимфосаркомой Плисса позднего срока роста опухоли повышает уровень свободнорадикальных реакций в опухолевой ткани, что приводит к усилению повреждающего действия ионизирующего излучения за счет повышения радиочувствительности опухоли; при этом уровень перекисного окисления липидов в организме -опухоленосителе выше, чем у интактных животных, что позволяет предположить возможность снижения используемой дозы облучения при

выбранном режиме введений озонированного физиологического раствора.

6. Комбинированное использование парентерального введения озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения с меньшей дозой облучения животным с Лимфосаркомой Плисса раннего и позднего сроков роста опухоли является эффективным подходом, направленным как на дестабилизацию свободнорадикального уровня бластотрансформированных клеток, так и на коррекцию свободнорадикального баланса организма-опухоленосителя.

7. Оценка противоопухолевой эффективности выбранных воздействий по обязательному критерию процента торможения роста опухоли распределила примененные подходы на раннем сроке роста Лимфосаркомы Плисса в следующей последовательности: «озонированный физиологический раствор», «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения», на позднем сроке роста лимфосаркомы Плисса-«озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «озонированный физиологический раствор» «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения».

8. Оценка комплексного воздействия озона, ионизирующего излучения и янтарной кислоты выявила, что наиболее эффективным с точки зрения степени восстановления свободнорадикального баланса и системной структурной организации биологической жидкости является введение озонированного физиологического раствора совместно с янтарной кислотой. По проценту торможения роста опухоли на позднем сроке ее роста используемые воздействия располагаются в следующей последовательности по степени убывания: «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «озонированный физиологический раствор + янтарная кислота», «янтарная кислота+ ионизирующее излучение», «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения».

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью лечения злокачественных новообразований у домашних животных рекомендуется интра- и паратуморальное применение высоких концентраций озонированною физиологического раствора; при использовании в курсе лечения ионизирующего излучения показано снижение дозы облучения при введении ОФР в плане предлучевой подготовки.

2. Новые данные о патогенетических механизмах действия озона, комбинированного использования озона с ионизирующим излучением на

свободнорадикальный гомеостаз организма-опухоленосителя могут стать основой для клинических исследования, а также могут быть включены в программы по биологии, физиологии, биохимии, патофизиологии и онкологии при подготовке специалистов медико-биологического и ветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Конторщикова К.Н., Щербатюк Т.Г. Содержание металлов переменной валентности в сыворотке крови на фоне озонотерапии // Озон в биологии и медицине: Материалы II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Нижний Новгород, 1995. - С. 65-66.

2. Кузьмина Е.И., Щербатюк Т.Г., Конторщикова К.Н. Хемилюминесцентный метод оценки функциональной активности полиморфноядерных клеток крови при озонотерапии // Озон в биологии и медицине: Материалы II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Нижний Новгород, 1995. - С. 108-109.

3. Щербатюк Т.Г., Конторщикова К.Н., Козлов Д.В. Экспериментальное обоснование озонотерапии при злокачественных новообразованиях//Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении:Сб. науч. работ междунар. конгресса.- Москва, 1996.-С.183-184.

4. Щербатюк Т.Г., Конторщикова К.Н. Способ лечения злокачественных новообразований в эксперименте. - Патент на изобретение № 2137481 96 124 167, приоритет от 24.12.96.

5. Scherbatyuk T.G., Kontorschikova K.N. Ozone influence on some metabolistic indices in experimental animals with sarcoma// 12th Intern. Congress. - Istanbul, Turkey, 1996,- P. 123.

6. Щербатюк Т.Г., Конторщикова K.H., Гончарова T.A., Козлов Д.В. Влияние озона на состояние процессов ПОЛ и спектр макроэргических нуклеотидов у экспериментальных животных при неоплазии//Паплиативная медицина и реабилитация. -1997.-№ 2,- С.46-47.

7. Добротина H.A., Кузьмина Е.И., Щербатюк Т.Г., Кравченко Г.А., Ежова Г.П. Хемилю-минесценция как интегральный метод оценки реактивной способности биопрепаратов // Вестник Верхне-Волжского отделения Академии техн. наук РФ- 1997,- № 2 (4) С.33-38.

8. Scherbatyuk T.G., Kontorschikova K.N. Ozone application in neoplasia treatment of experimental animals // Ozone News, V. 25.-№ 3.-P. 45-46.

9. Scherbatyuk T.G., Kontorschikova K.N. Ozone influence on pro- and antioxidant systems in neoplasia // Abstract of the 13th Ozone World Congress. - Osaka, Japan, 1997.

10. Щербатюк Т.Г., Конторщикова K.H., Романов B.C., Снопова Л.Б., Гончарова Т. А. Противоопухолевый эффект озона в условиях экспериментального онкогенеза // Озон в биологии и медицине: Материалы III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Н. Новгород, 1998. - С.23-24.

11. Щербатюк Т.Г., Гончарова Т.А., Послов Г.А., Илларионов В.Ю. Опыт использования озона при лечении злокачественных новообразований у собак // Озон в биологии и медицине: Материалы III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Н. Новгород, 1998. -С.24-25.

12. Гончарова Т.А., Конторщикова К.Н., Сиднев Б.Н., Щербатюк Т.Г. Влияние озонированного физиологического раствора на функциональное состояние печени крыс - опухоленосителей с саркомой-45// Озон в биологии и медицине: Материалы III Всерос. научно-практич. конференции с международным участием, Н. Новгород, 1998. -С.25-26.

13. Щербатюк Т.Г., Послов Г.А., Илларионов В.Ю. Применение озона при лечении некоторых злокачественных новообразований у собак //Ветеринария. -1998. -№7 С.58-60.

14. Гончарова Т.А., Конторщикова К.Н., Сиднев Б.Н., Щербатюк Т.Г.Вторичные мессенджеры, липидный состав и перекисное окисление липидов в гепатоцитах крыс-опухоленосителей при озонотерапии // Оротерапия /Доклады академии проблем гипоксии. Т.2. - Киев, 1998. С.70-71.

15. Щербатюк Т.Г., Гончарова Т.А., Конторщикова К.Н., Романов B.C. Обоснование озонотерапии в условиях экспериментального онкогенеза // Оротерапия /Доклады академии проблем гипоксии. Т.2. Киев, 1998. -С.138-139.

16. Гончарова Т.А., Конторщикова К.Н., Щербатюк Т.Г., Романов B.C. Влияние озонированного физиологического раствора на метаболизм печени экспериментальных животных-опухоленосителей // Острые отравления и эндокринные интоксикации: Сб. науч. тр. -Екатеринбург, 1998. -С.228-230.

17. Scherbatyuk T.G., Kontorschikova K.N., Romanov V. S., Snopova L. B. Alteration changes in microcirculatory bed of experimental malignant tumor "sarcoma-45" caused by ozonated saline // 20lh European conference on microcirculation Paris, France, 1998 - P.74.

18. Щербатюк Т.Г., Конторщикова K.H., Козлов Д.В. Свободнорадикальный статус организма - опухоленосителя при ингра- и паратуморальном введении озона // Цитология 1999. - Т.41.- №9. С. 831.

19. Добротина Н.А., Щербатюк Т.Г.. Кравченко Г. А. Хемилюминесценция как метод выявления иммуномодулирующей способности биопрепаратов // Цитология 1999. - Т.41.- №9. С. 815.

20. Щербатюк Т.Г., Полынкина Е.В., Баюра О.Б., Седунова Н.В. Биологические эффекты свободнорадикальной терапии злокачественных новообразований в экспериментальных условиях //Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины: Тр. Тихоокеанской научно-практич. конферен., Владивосток, 2000.-С. 17-18.

21. Щербатюк Т.Г., Иванова И.П., Баюра О.Б., Седунова Н.В. Биологические эффекты физико-химических воздействий, изученные на модели "Лимфосаркома Плисса" // Актуальные проблемы биофизической медицины: Материалы 2 Международного симпозиума, Киев, 2000,- С.14.

22. Щербатюк Т.Г., Горячев М.Е., Бобкова Е. Ю, Марков С.В. Состояние перекисного окисления липидов в плазме крови при свободнорадикальной терапии онкологических больных //Актуальные проблемы биофизической медицины: Материалы 2 Международ, симпозиума, Киев, 2000.- С.8.

23. Scherbatyuk Т., Ivanova I, Yakovleva Y, Skvorchova I. Biological effects of ozone and radiation therapy of malignant neoplasms: experimental research // 3 International Symposium on Ozone Application.-Havana, Cuba, 2000.- P. 27-28.

24. Scherbatyuk Т., Goryachev M., Samochvalova Yu., Polinkina E. The research of dynamics of parameters of lipid peroxidation of a blood of the oncologic patients // 3 International Symposium on Ozone Application.-Havana, Cuba, 2000,- P.28.

25. Scherbatyuk Т., Poslov G., Illarionov Yu. Ozone application in the treatment of malignant neoplasias in dogs //3 Intern. Symposium on Ozone

— Application.-Havana, Cuba, 2000.- P.29.

26. Щербатюк Т.Г., Романов B.C., Синелыциков Д.А. Влияние озона и гамма-излучения на активность свободнорадикальных процессов организма-опухоленосителя // Совр. аспекты теорет. и клинической медицины: Межвузовский сб. науч. тр., Саранск, 2000. С.77-79.

27. Щербатюк Т.Г., Иванова И.П., Дудина М.В., Московцева О.М. Активность свобод нора-дикальных процессов организма-опухоленосителя при физико-химических воздействиях //Материалы II Российского конгресса по патофизиологии. - Москва, 2000. С.203-204.

28. Щербатюк Т.Г., Бояринов Г.А., Горячев М. Е., Самохвалова Ю.В., Полынкина Е. В. Свободнорадикальное окисление липидов в плазме крови при терапии онкологических больных //Материалы II Российского конгресса по патофизиологии - Москва,2000. С.203.

29. Щербатюк Т.Г., Иванова И.П., Синелыциков А.Д., Баюра О.Б., Потехина Ю.П. Комбинированное использование озона и гамма-

излучения в условиях экспериментального онкогенеза // Озон и методы эфферентной терапии в медицине: Материалы JV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Н. Новгород,

2000. С.13-14.

30. Щербатюк Т.Г., Романов B.C., Скворцова И.Е., Яковлева Е.И., Казакова О.В., Патрушев И.В. Морфофункциональные изменения опухолевой ткани штамма Лимфосаркома Плисса, вызванные интра- и паратуморальным введение озонированного физиоло-гического раствора.//Озон и методы эфферентной терапии в медицине: Материалы IV Всерос. научно-практич. конференции с междунар. участием, Н. Новгород, 2000. С. 12-13.

31. Щербатюк Т.Г., Московцева О.М., Седунова Н.В., Ляпина О.В., Плескова А.Н., Пьявкина A.A., Марков C.B. Дозозависимый эффект озонированного физиологического раствора на некоторые показатели гомеостаза животных- опухоленосителей в условиях in vitro и in vivo./Юзон и методы эфферентной терапии в медицине: Материалы IV Всерос. научно-практической конференции с международным участием, Н.Новгород, 2000. С.11-12.

32. Щербатюк Т.Г., Иванова И.П., Романов B.C., Скворцова И.Е. Биологические эффекты комбинированного использования ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора при лечении экспериментальных опухолей. // Физиологический журнал.

2001.- т.47.-№1 (2).-С.20-27.

33. Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П., Скворцова И.Е. Экспериментальное обоснование комбинированного использования озоно- и лучевой терапии при неоплазии. // Медицинская физика, 2001. -№11. С. 93-94.

34. Щербатюк Т.Г., Баюра О.Б., Седунова Н.В. Комбинированное использование ионизирующего излучения и озонированного физиологического раствора в условиях экспериментального онкогенеза. // Актуальные проблемы патофизиологии. / Под ред. H.A. Гавришевой. -Санкт-Петербург, 2001,- С.200-202.

35. Щербатюк Т.Г., Романов B.C., Иванова И.П. Обоснование озонотерапии в онкологии. // Местное и парентеральное использование озонотерапии в медицине: Сб. науч. тр.- Харьков, 2001. С. 90-91.

36. Scherbatyuk Т., Alechina S., Ivanova I., Romanov V. Experimental research of biological effects of oxygen/ozone therapy and radiation therapy in cancer animals. // The Journal of the international ozone association.- 2001.-P.340-348.

37. Щербатюк Т.Г., Мухина И.В., Алехина С.П. Биологические эффекты свободнорадикальных воздействий при злокачественных новобразованиях. // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни

человека: Труды национальной научно-практической конференции с международным участием, Смоленск, 2001. С.321-322.

38. Щербатюк Т.Г., Романов B.C. Обоснование свободнорадикальной терапии злокачественных новообразований. // Приоритетные направления противораковой борьбы в России: Материалы Международного симпозиума, Екатеринбург, 2001. С.88-90.

39. Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П., Плескова А.Н. Изучение особенностей свободнорадикальных процессов и дегидратационной самоорганизации плазмы крови животных -опухоленосителей на фоне физико-химический воздействий.//Актуальные проблемы патофиз./Под ред. H.A. Гавришевой. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2002. С 108-109.

40. Щербатюк Т.Г., Снопова Л.Б., Яковлева Е.И. Морфофункциональные изменения ткани опухолей штаммов саркома-45 и Лимфосаркома Плисса, вызванные интра- и паратуморальным введением озонированного физиологического раствора. // Морфология. Т. 121.- №2-3. -2002.- С. 186.

41.Щербатюк Т.Г. История озонотерапии злокачественных новобразований.//Новые техно-логии оздоровления природными факторами: Сб.науч. тр.- Харьков, 2002. С. 163-167.

42. Алехина С.П., Щербатюк Т.Г. Лимфотропное введение озонокислородной смеси.// Новые технологии оздоровления природными факторами:Сб.науч. тр.-Харьков, 2002. С. 198-200.

43. Щербатюк Т.Г. Использование озона и ионизирующего излучения в условиях экспериментального онкогенеза. // Вестник Спб гос. Мед. академии им. И.И. Мечникова,- №4 (3), 2002.- С.86-91.

44. Щербатюк Т.Г. Озонотерапия злокачественных новообразований: за и против. // Нижегородский медицинский журнал.- 2003.-№1.-С. 52-56.

45. Щербатюк Т.Г., Бобкова Е.Ю., Синелыциков А.Д. Фагоцитарная активность крови на фоне физико-химических воздействий при различных состояниях организма. // Нижегородский медицинский журнал. Приложение "0зонотерапия"-2003,- С. 54-55.

46. Парфенова И.Е., Щербатюк Т.Г., Кондрашова М.Н. Фосфолипидный спектр крыс-опухоленосителей на фоне воздействия янтарной кислоты. // Нижегородский медицинский журнал. Приложение "Озонотерапия"-2003.-С. 51-52.

47. Щербатюк Т.Г. Биологические эффекты свободнорадикальных воздействий, изученные на моделях экспериментальной онкологии. // Современные проблемы науки и образования: Труды 4 Международной междисциплинарной научно-практической конференции,- Ялта, 2003.-С.108.

48. Щербатюк Т.Г. Озонотерапия злокачественных новообразований: за и против. // Нижегородский медицинский журнал. -2003. Приложение "Озонотерапия"- С. 48-49.

49. Щербатюк Т.Г., Никитина Ю.В., Московцева О.М., Кулакова К.В. Свободнорадикальная активность плазмы крови в зависимости от концентрации озона и длительности озонирования.// Там же, С. 52-53.

50. Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П., Парфенова И.Е. Дегидратационная самоорганизация плазмы крови животных-опухоленосителей на фоне физико-химических воздействий. // Вопросы теоретической и практической медицины: Материалы 68 Республиканской конференции с международным участием. - Уфа, 2003.-С. 18.

51. Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П., Парфенова И.Е. Изменение структуры дегидратированной плазмы при озонировании. // Нижегородский медицинский журнал. -2003. Приложение "Озонотерапия"- С. 49-51.

52. Щербатюк Т.Г., Мухина И.В., Парфенова И.Е. Биологические эффекты свободнорадикальных воздействий в условиях экспериментального онкогенеза. // Материалы Международной конференции по химии органических и элементно-органических пероксидов, Москва, 2003 -С. 92-93.

53. Щербатюк Т.Г., Потехина Ю.П. Свободнорадикальные и морфологические особенности плазмы крови животных-опухоленосителей. // Вестник новых медицинских технологий. - 2003. № 1 (2). -С.83-85.

54. Алехина С.П., Щербатюк Т.Г. Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты. // Н. Новгород: Литера, 2003. 240 с.

s i

1525-1 ó 251

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Щербатюк, Татьяна Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ (ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Свободные радикалы: основные характеристики, источники образования в организме.

1.2. Перекисное окисление липидов: условия протекания и продукты реакций.

1.3 Антиоксидантная система защиты организма.

1.4. Свободнорадикальные процессы при злокачественном росте.

1.4.1.Свободнорадикальное окисление как инициатор и промотор опухолевого процесса.

1.4.2. Метаболические особенности организма-опухоленосителя.

1.5. Основные направления противоопухолевых воздействий.

1.6. Биологические эффекты озона.

1.6.1. Механизмы действия озона в условиях in vivo, in vitro.

1.6.2. Использование озона при опухолевом процессе.

Глава 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика и перевивка опухолевого штамма.

2.2 Схема эксперимента. Условия воздействий.

2.3 Методы исследования.

2.3.1 Биохемилюминесцентные методы исследования.

2.3.2 Методы исследования активности процессов ПОЛ.

2.3.3 Методы исследования компонентов антиоксидантной системы.

2.3.4. Методы определения количества субстратов углеводного обмена 91 2.3.5 Определение фагоцитарной активности клеток крови хемилюминесцентным методом.

2.3.6. Метод оценки электрофоретической подвижности эритроцитов.

2.3.7.Метод определения эндогенной интоксикации.

2.3.8 Морфологические методы исследования.

2.3.9 Метод клиновидной дегидратации биологических жидкостей.

2.3.10. Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. ИНТРА- И ПАРАТУМОРАЛЬНОЕ ВВЕДЕНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА КРЫСАМ С ЛИФОСАРКОМОЙ ПЛИССА НА ПОЗДНЕМ СРОКЕ РОСТА ОПУХОЛИ.

3.1. Влияние озонированного физиологического раствора на биохимические и морфологические особенности опухолевой ткани.

3.2. Влияние озонированного физиологического раствора на показатели свободнорадикальных процессов, углеводного обмена, фагоцитарную активность и уровень эндогенной интоксикации крови животных -опухоленосителей.

ГЛАВА 4. ДОЗОЗАВИСИМЫЙ ЭФФЕКТ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА, ИЗУЧЕННЫЙ НА МОДЕЛИ «ЛИМФОСАРКОМА ПЛИССА» РАННЕГО СРОКА РОСТА ОПУХОЛИ

ГЛАВА 5. КОМБИНИРОВАННОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА И ГАММА - ИЗЛУЧЕНИЯ С БОЛЬШОЙ ДОЗОЙ ОБЛУЧЕНИЯ

НА ПОЗДНЕМ СРОКЕ РОСТА ЛИМФОСАРКОМЫ ПЛИССА.

5.1. Влияние комбинированных воздействий оксигенированного, озонированного физиологических растворов и ионизирующего излучения на показатели свободнорадикальной системы состояние углеводного обмена Лимфосаркомы Плисса.

5.2. Влияние комбинированных воздействий оксигенированного, озонированного физиологических растворов и ионизирующего излучения на состояние про- антиоксидантной системы, углеводного обмена, фагоцитарную активность и уровень эндогенной интоксикации организма крыс с Лимфосаркомой Плисса.

ГЛАВА 6. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ

КОМБИНИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА И ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ С УМЕНЬШЕННОЙ ДОЗОЙ ОБЛУЧЕНИЯ НА ОРГАНИЗМ КРЫС С ЛИМФОСАРКОМОЙ НА РАЗНЫХ СРОКАХ РОСТА

6.1. Биологические эффекты комбинированного действия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения с уменьшенной дозой облучения на организм крыс с лимфосаркомой раннего срока роста.

6.2. Биологические эффекты комбинированного действия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения с уменьшенной дозой облучения на организм крыс с лимфосаркомой позднего срока роста.

6.2.1. Влияние комбинированного воздействия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения в уменьшенной дозе на свободнорадикальные процессы Лимфосаркомы

Плисса

6.2.2. Влияние комбинированного воздействия озонированного физиологического раствора и ионизирующего излучения в уменьшенной дозе на состояние про- антиоксидантной системы, уровень эндогенной интоксикации организма и особенности дегидратационной самоорганизации плазмы крови животных-опухоленосителей.

ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА, ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ И ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ НА МОДЕЛИ

ГЛАВА

СРАВНИТЕЛЬНАЯ

ОЦЕНКА

ЛИМФОСАРКОМА ПЛИССА»

ГЛАВА 8. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АКМ-активные кислородные метаболиты АОА - антиоксидантная активность АОС - антиоксидантная система АФК - активные формы кислорода БХЛ - биохемилюминесценция

ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы

ГБО -гипербарическая оксигенация

ГП - глутатионпероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ГТ-глутатионтрансфераза

ДК - диеновые конъюгаты

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИИ - ионизирующее излучение

ЛФС-лимфосаркома

МДА - малоновый диальдегид

МЦР - микроциркуляторное русло

НАД - никотинамидадениндинуклеотид

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный

НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат

НАДФН2 - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восста-новленный

НИЛИ-низкоинтенсивное лазерное излучение

ОАА- общая антиоксидантная активность

ОФР - озонированный физиологический раствор

ОШ - основания Шиффа

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СКЭ- светокислородный эффект

СОД - супероксиддисмутаза

CP - свободные радикалы

СРО - свободнорадикальное окисление

ТК - триеновые конъюгаты

ФДТ- фото динамическая терапия рака

ФНО- фактор некроза опухоли

ФР - физиологический раствор

XJI - хемилюминесценция

Цн-церулоплазмин

ЭАС-электрон-акцеаторные соединения

ЭФПЭ- электрофоретическая подвижность эритроцитов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями"

Актуальность.

Свободнорадикальное окисление непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов и свободнорадикальные процессы при их низкой интенсивности являются одним из типов нормальных метаболических процессов [13, 48, 49]. Интенсификация свободнорадикальных процессов в тканях может быть следствием гиперпродукции свободных радикалов и (или) недостаточности антиоксидантной системы [51, 83, 99, 168]. Подобное физиологическое состояние клеток, сопряженное с нарушением нормальной регуляции свободнорадикальных реакций, называют «окислительным стрессом» [83], являющимся универсальным механизмом клеточных повреждений [114], которые приводят к развитию разнообразных патологических состояний, включая злокачественные новообразования [79]. Таким образом, проблема изучения молекулярно-клеточных механизмов развития окислительного стресса, а также поиск эффективных физиологических модуляторов его является необычайно актуальной.

Поскольку в обмене бластомных клеток превалирует брожение, филогенетически более древним процесс, чем окисление, то опухоль представляет собой своеобразный возврат к более ранней эволюционной ступени существования, при этом более поздний и менее глубоко укоренившийся регуляторный механизм утрачивается. В связи с этим логично предположить, что создание «эволюционного скачка» искусственное оксидантное окружение опухоли - может внести дезорганизацию в примитивный анаэробный метаболизм неоплазмы.

Важная особенность злокачественных новообразований - изменение уровня свободнорадикальных реакций, которое проявляется в повышенной антиоксидантных активности опухолевой ткани, с одной стороны, и истощении антиоксидантной системы защиты организма-опухоленосителя, с другой [98, 99]. Согласно кислородно- перекисной концепции онкогенеза многие противоопухолевые мероприятия можно разделить на две группы. Воздействия первой группы направлены на снижение уровня свободнорадикального окисления (СРО). Напротив, воздействия второй группы так или иначе связаны с еще большей интенсификацией СРО в опухолевых клетках и летальным их повреждением токсическими продуктами СРО [128]. В связи с этим, озон, обладающий мощными окислительными свойствами, может быть использован как противоопухолевое средство второй группы.

Анализ современной литературы показал, что физические воздействия, направленные на коррекцию системы «организм-опухоль», будь то фотодинамическая терапия [86], низкоинтенсивное лазерное излучение [96], гипербарическая оксигенация [77], так же как и один из основных методов терапии злокачественных новообразований- ионизирующее излучение (ИИ) [195] имеют общие механизмы действия, связанные с теми процессами, которые включают развитие свободнорадикальных реакций.

Цель исследования: разработать комплексный подход дестабилизации свободнорадикального уровня бластотрансформированных клеток и коррекции свободнорадикального баланса организма животных с экспериментальными опухолями.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

4. Исследовать действие комбинированного подхода при парентеральном введении озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки и ионизирующего излучения с уменьшенной дозой на организм крыс с Лимфосаркомой Плисса раннего и позднего сроков роста опухоли.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное исследование, позволяющее определить возможности и ограничения нового способа дестабилизации свободнорадикальных процессов животных с экспериментальными опухолями.

Приоритетным является изучение, направленное на разработку комплексного подхода, заключающегося в использовании озонированного физиологического раствора в плане предлучевой подготовки и ионизирующего излучения.

Теоретическое и практическое значение.

Анализ механизмов известных противоопухолевых физико-химических воздействий показывает, что все они направлены на изменение кислородного, свободнорадикального гомеостаза, отсюда, использование ОФР - наиболее физиологический, эффективный и доступный метод, позволяющий воздействовать на свободнорадикальные процессы организма-опухоленосителя.

Результаты, полученные при изучении влияния озона в комплексе с гипертермией, лучевой и полихимиотерапией, доложенные на 3 и 4 Всероссийской конференциях «Озон и методы эфферентной терапии в медицине» применяются на кафедрах хирургии ЦГЖ и 1111С, онкологии, акушерства и гинекологии НГМА, полевой терапии ВМИ ФС РФ, в клинике новых медицинских технологий. Результаты, доложенные на 2 Международном симпозиуме по применению озона в биологии и медицине (Гавана, Куба, 1997) и опубликованные в журнале "Ozone News", используются в Озоновом Центре (Гавана, Куба).

Положения, выносимые на защиту;

3. При изучении дозозависимых эффектов озона выявлена концентрация ОФР (900 мкг/л), которая при его парентеральном введении способствует рассасыванию первичного опухолевого узла, однако вызывает мощную свободнорадикальную атаку, превышающую антиоксидантные возможности организма животного и создает, таким образом, канцерофильные условия нормальных тканей, что приводит к метастазированию опухоли у 17% крыс.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены (в виде 13 устных и 2 стендовых докладов) и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Озон в биологии и медицине" (Н. Новгород, 1995), 2 Международном симпозиуме по применениям озона в биологии и медицине (Гавана, Куба, 1997), III, IV и V Всероссийской конференциях "Озон и методы эфферентной терапии в медицине" (Н. Новгород, 1998, 2000, 2003 гг.), Международной конференции "Свободные радикалы в биологии и медицине" (С- Петербург, 1999), 2 Международном симпозиуме "Актуальные проблемы биофизической медицины" (Киев, 2000), II Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000), Международном съезде по биофизике (Москва, 2001), Национальной научно-практической конференции с международным участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" (Смоленск, 2001), научно-практической конференции "Актуальные проблемы патофизиологии" (С-Петербург, 2002), 4 Международной междисциплинарной научно-практической конференции «Современные проблемы науки и образования» (Ялта, 2003) Международной конференции по химии органических и элементо-органических пероксидов (Москва, 2003); а также представлены в виде публикаций на Международном конгрессе "Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении" (Москва-Ялта, 1996), 12 Международном конгрессе по актуальным проблемам биологии и медицины (Стамбул, Турция, 1996), 13 Международном конгрессе по озону (Осака, Япония, 1997), 20 Европейской конференции по микроциркуляции (Париж, Франция, 1998), 1 Тихоокеанской научно-практической конференции "Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины" (Владивосток, 2000), 3 Международном симпозиуме по применениям озона в биологии и медицине (Гавана, Куба, 2000), научно-практической конференции "Актуальные проблемы патофизиологии" (С-Петербург, 2001), 1 и 2 Всеукраинской конференции с международным участием "Местное и парентеральное использование озонотерапии в медицине"(Харьков, 2001, 2002 гг.), 15 Всемирном конгрессе по озону (Лондон, Великобритания, 2001), Международном симпозиуме "Приоритетные направления противораковой борьбы в России", (Екатеринбург, 2001), 3 Межвузовской конференции "Актуальные медико-биологические проблемы" (Ижевск, 2003), 5 Межрегиональной научной конференции по актуальным проблемам биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных, (Екатеринбург, 2003), 2 Межвузовской конференции "Обмен веществ при адаптации и повреждениях" (Ростов-на-Дону, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 54 работы, в том числе 1 монография.

1. СВОБОНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Щербатюк, Татьяна Григорьевна

ВЫВОДЫ

3. Биологические эффекты противоопухолевого характера проявляет исключительно озонированный физиологический раствор, поскольку действие оксигенированного физиологического раствора не вызывает изменений в ультраструктуре и биохимии опухолевых клеток и состоянии организма-опухоленосителя.

4. Оценка дозозависимого эффекта озонированного физиологического раствора выявила возможности и ограничения его парентерального введения крысам с лимфосаркомой Плисса на раннем сроке роста опухоли: а) концентрация озона 400 мкг/л приводит к полной деструкции опухолевых клеток и восстановлению метаболического дисбаланса организма, которое проявляется в нормализации свободнорадикального окисления, электрофоретической подвижности эритроцитов, степени эндогенной интоксикации; б) концентрация озона 900 мкг/л способствует рассасыванию первичного опухолевого узла, однако вызывает мощную свободнорадикальную атаку, превышающую антиоксидантные возможности организма животного и создает, таким образом, канцерофильные условия нормальных тканей, что приводит к метастазированию опухоли у 17% крыс.

5. Озонированный физиологический раствор в плане предлучевой подготовки животным с Лимфосаркомой Плисса на позднем сроке роста опухоли повышает уровень свободнорадикальных реакций в опухолевой ткани, что приводит к усилению повреждающего действия ионизирующего излучения за счет повышения радиочувствительности опухоли; при этом уровень перекисного окисления липидов в организме -опухоленосителе выше, чем у интактных животных, что позволяет предположить возможность снижения используемой дозы облучения при выбранном режиме введений озонированного физиологического раствора.

Плисса на раннем и позднем сроках роста опухоли является эффективным подходом, направленным как на дестабилизацию свободнорадикального уровня бластотрансформированных клеток, так и на коррекцию свободнорадикального баланса организма-опухоленосителя .

7. Оценка противоопухолевой эффективности выбранных воздействий по обязательному критерию процента торможения роста опухоли распределила примененные подходы на раннем сроке роста Лимфосаркомы Плисса в следующей последовательности: «озонированный физиологический раствор», «озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения», на позднем сроке роста Лимфосаркомы Плисса-«озонированный физиологический раствор + ионизирующее излучение с уменьшенной дозой облучения», «озонированный физиологический раствор» «ионизирующее излучение в высокой дозе облучения».

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Щербатюк, Татьяна Григорьевна, Нижний Новгород

1. Абелев Г.И. Что такое опухоль // Соросовский образовательный журнал.-1997,- №10,- С.85-90.

2. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: Наука, 1985. - 232 с.

3. Абросимов А.Ю. Спонтанная и индуцированная облучением гибель опухолевых клеток // Вопросы онкологии.-1992.-Т.38, №4,-С. 515-526.

4. Агеенко А.И., Гордиенко С.П., Саканделидзе О.Г. Иммунитет и терапия экспериментальных опухолей. Кишинев: Штиинца, 1982.-312 с.

5. Адо А.Д., Маянский А.Н. Современное состояние учения о фагоцитозе // Иммунология 1983 - №1- С.20-27.

6. Акоев И.Г. Биофизика познает рак. М.: Наука, 1987. - 160 с.

7. Алейников С.О., Чучалин А.Г. Респираторные эффекты озона // Пульмонология,- 1997,-№3-С. 81-91.

8. Александров Н.Н., Савченко Н.Е., Фрадкин С.З., Жаврид Э.А. Применение гипертермиии и гипергликемии при лечении злокачественных опухолей.-М.: Медицина, 1980. 265с.

9. Артюхов В.Г., Башарина О.В. Кинетические закономерности термоинактивации супероксиддисмутазы // Украинский биохимический журнал. 1995. - Т.67. - № 4. - С.29 - 33.

10. Арутюнян А.В. Свободно-радикальные процессы сыворотки крови, печени и толстой кишки при канцерогенезе у крыс // Вопросы онкологии 1997.-Т.43, №6-С.618-622.

11. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма// Методические рекомендации СПб: ИКФ "Фолиант", 2000.- 104 с.

12. Асатиани B.C. Новые методы биохимической фотометрии. М.: Наука, 1965.-541с.

13. Афанасьев И.Б. Кислородные радикалы в химии и биологии.- Минск: Наука и техника, 1984 С. 13- 29.

14. Афанасьев И.Б. Свободнорадикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. Рига: РМИ, 1988. - С.9-23.

15. Бабенко Г. А. Злокачественный рост, металлы и хелатирующие агенты // Биологическая роль микроэлементов. -М.: Наука, 1983. С. 170 - 182.

16. Балаж А. Биология опухолей. Сомнения и надежды- М.: Мир,-1987,- 206 с.

17. Барабой В.А. Ионизирующая радиация в нашей жизни М.: Наука, 1991.-224 с.

18. Барабой В.А. и др. Перекисное окисление и радиация / В.А.Барабой, В.Э.Орел, И.М.Карнаух, Д.М.Гродзинский.-Киев: Наукова думка, 1991 -256 с.

19. Барабой В.А. и др. Перекисное окисление и стресс /

20. B.А.Барабой, И.И.Брехман, В.Г.Голотин, Ю.Б.Кудряшов. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

21. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов // Успехи современной биологии. 1991. - Т. 111, вып.6.1. C.923-932.

22. Барабой В.А. Перекисное окисление, биоэнергетика в механизме стресса // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. М, 1993. - С.27-32.

23. Барабой В.А., Орел В.Э. Спонтанная хемилюминесценция сыворотки крови в норме и при воздействии ионизирующей радиации // Биохемилюминесценция М.: Наука, 1983. - С. 222240.

24. Басиев З.Г. Противоболевая лазерная терапия при раке легкого и его метастазах // Паллиативная медицина и реабилитация. 1997-№2. - С.26.

25. Белоусова М.Н. Биохимические особенности опухолевых клеток // Биология злокачественного роста. М.: Медицина, 1965. - С.78-89.

26. Белянин И.И. Биологические и лечебные свойства озона: Авторизованный аналитический обзор М.: ТОО «Фирма БЛОК», 1998,- 16 с.

27. Бережная Н.М., Горецкий Б.А. Биологические эффекты ИЛ-2 перспективы его использования для иммунотерапии злокачественных новообразований // Экспериментальная онкология. 1989. - Т. 11, № 6. - С.38-45.

28. Бережная Н.М., Кшевецкая СМ., Слинчак С.М., Безверхий

29. B.Д. Функциональные и гистохимические параметры оценки состояния нейтрофилов больных со злокачественными новообразованиями // Экспериментальная онкология 1984 - Т.6, №4 — С.49-52.

30. Березовский В.А., Левашов М.И. Введение в оротерапию-Киев, 2000. 76 с.

31. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов -М: Медицина, 1989-370С.

32. Блохин Н.Н., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний // АМНСССР. -М. Медицина, 1984. 303 с.

33. Бондарь Т.Н., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидроперекисей глутатионпероксидазой и глутатион-8-трансферазой: влияние структуры субстрата // Докл. АН СССР. 1989.-Т.304, №11. C.217-220.

34. Борунов Е.В. Высокая активность антиоксидантных ферментов в опухоли как фактор "избегания контроля" иммунной системы // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1989—№4 .-С.25—26.

35. Бояринов Г.А. Гордецов А С. Растворимость и распад озона в физиологическом растворе // Нижегородский медицинский журнал. 2000,- №2. - С. 40^5.

36. Бурлакова Е.Б. Антиоксиданты как универсальные модификаторы состава, структуры и свойств мембран // Свободные радикалы и болезни человека. Национальная научнопрактическая конференция с международным участием.-Смоленск, 1999-С.49-50.

37. Бурлакова Е.Б. О некоторых физико-химических критериях химиотерапии злокачественных новообразований // Физико-химические механизмы злокачественного роста М.: Наука, 1970- С.41-49.

38. Бурлакова Е.Б. Роль антиокислителей в физико-химических процессах регулирования размножения клеток // Биофизикаю .-1968.-Т. 28.-С.15.

39. Бурлакова Е.Б., Архипова Г.В., Голощапов А.Н. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. -М.: Наука, 1982.- С. 74-83.

40. Бурлакова Е.Б., Баличева Л.В., Козлов Ю.П., Пухов В.А., Шестакова С.В. О некоторых физико-химических свойствах фосфолипидов тканей животных с привитой опухолью // Физико-химические механизмы злокачественного роста. М.: Наука, 1970.- С.49-55.

41. Бурлакова Е.Б., Пальмина Н.П. Антиоксиданты в химиотерапии опухолей // Вопросы онкологии-1990.-Т.36, №3 — С.1155-1162.

42. Бурлакова Е.Б., Пальмина Н.П. Регуляторная функция мембран при злокачественном росте // Вестник АМН СССР. -1982. №3. - С.74-86.

43. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов и природные антиоксиданты//Успехи химии.-1985.-Т.54,№9-С.1540- 1558.

44. Бяков В.М, Степанов С.В., Степанова О.П. Новая модель первичного радиобиологического действия // Медицинская физика (материалы 1-го Евразийского конгресса).-2001.-№11.-С.24.

45. Вайнберг М.Ш. Радиация и опухоль М.: Знание, 1985 - 64 с.

46. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и патологияклетки. М.: Наука, 1979. - 47 с.

47. Владимиров Ю.А. и др. Хемилюминесцентный метод при обследовании животных, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения / Владимиров Ю.А., М.П.Шерстнев Н.В. Грудина и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,- 1996 № 1.-С.39-41.

48. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции // Соросовский образовательный журнал.-1999 №6- С.25-32.

49. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соровский образовательный журнал- 2000.-Т.6, №12 С.13-19.

50. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика,-М.: ВИНИТИ, 1991,-Т. 29. 184 с.

51. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах М.:Наука, 1972.-210 с.

52. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика М.: ВИНИТИ, 1991. - Т. 29. - 170 с.

53. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Грудина Н.В. Хемилюминисцентный метод при обследовании животных, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины- 1996-№1- С.39-41.

54. Власов Т.Г. Патофизиология опухолевого роста- СПб.: издательство СПб.: ГМУ, 1998.- 40 с.

55. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой-М.: Медицина, 1982. 303 с.

56. Вядро М.М. Активированные макрофаги эффекторные клетки противо-опухолевой защиты//Вопросы онкологии-1981-Т.27, №6.-С.80-84.

57. Гаврилова А.Р., Хмара Н.Ф. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщенных концентрациях субстрата // Лабораторное дело. 1986. - №12. -С.721 -724.

58. Галактионов С.Г., Михнева Л.М., Николайчик В.В., Биргер П.С. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лабораторное дело 1988 - №9 - С.22-24.

59. Герард B.C. Озон в медицине: обзор и перспективные направления // Материалы 9-го Всемирного конгресса «Озон в медицине»,- Горький, 1989 С.6-24.

60. Гершанович M.JL, Филов В.А., Акимов М.А. Введение в фармакотерапию злокачесственных опухолей. СПб.:Сотис, 1999. -152 с.

61. Гильмутдинов Р Я. Электрокинетические характеристики клеток крови и их взаимосвязь с другими гематологическими показателями в норме и патологии: Автореф. дисс. докт.биол.наук.-Казань, 1994-34с.

62. Гистология / Под ред. Афанасьева Ю.И., Юриной Н.А.- М.: Медицина, 1989. 662 с.

63. Гланц Стентон. Медико-биологическая статистика,- М.: Практика, 1999,- 560 с.

64. Голдобенко Г.В., Канаев С.В. Современные проблемы радиационной онкологии // Вопросы онкологии- 1997- Т.34, №5.-С. 15-22.

65. Гонский Я.И. Роль металлов с постоянной и переменной валентностью в биохемилюминесценции // Теоретические и методические основы биохемилюминесценции М.: Наука, 1986 — С.31-32.

66. Гонский Я.И., Береговская Н.Н. Энергообеспечивающее и свободнорадикальное окисление при опухолевом росте ииндуцированном бластогенезе // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления М., 1993. — С.21-26.

67. Гончарова Т.А. Влияние озонированного физиологического раствора на функциональное состояние печени крыс в норме и с саркомой- 45: Автореф. дисс. канд. биол. наук- Нижний Новгород, 1997.-35 с.

68. Гонян С.А. Поверхностный заряд клеток при их различных функциональных состояниях: Автореф. дисс. канд.биол. наук.-Ереван, 1993-21с.

69. Грачева JI.A. Цитокины в онкогематологии. М.:Алтус, 1996. -168 с.

70. Густов А.В. и др. Озонотерапия в неврологии / А.В.Густов, С.А.Котов, К.Н.Конторщикова, Ю.П.Потехина Н.Новгород:Литера, 1999.-179 с.

71. Гуськов Е.П., Лукаш А.И. Системная реакция многоклеточных организмов на окислительный стресс // Биоантиоксидант. 1989. - Т.2. - С. 33.

72. Дубинина Е.Е. Некоторые особенности функционирования ферментативной антиоксидантной защиты плазмы крови человека // Биохимия,- 1993.-Т.58, вып.2. -С.268-273.

73. Дударев А.Л. Лучевая терапия. Л.: Медицина, 1988. - 192 с.

74. Ермолин С.В., Родичев Б.С., Кожаков М.Ю. Устройство для контроля биохемилюминесценции, БХЛ 06 // Тез. докл. 3-го Всесоюзного совещания по хемилюминесценции - Рига, 1990-С.128.

75. Есакова Т.Д., Тарусов Б.Н. Исследование антиоксидантных свойств фосфолипидов при индуцированном раке молочнойжелезы крыс // В кн. Физико-химические механизмы злокачественного роста, Труды московского общества испытателей природы. -1970. Т.32 - С.86-90.

76. Ефуни С.П. Руководство по гипербарической оксигенации: Теория и практика практического применения / Авт. А.Ю.Аксельрод, Л.А.Ашурова, Н.Н.Бажанов и др.- М.: Медицина, 1986,-416 с.

77. Журавлёв А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии // В сб. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М: Наука, 1982.-240 с.

78. Журавлев А.И. Свободнорадикальная биология: ЛекцияМ.: Московская ветеринарная академия, 1993- 70С.

79. Журавлев А.И. Спонтанная биохемилюминесценция животных тканей // Биохемилюминесценция М.: Наука, 1983-С.3-30.

80. Зайцев В.Г. Свободнорадикальные процессы в живых организмах электронная монография on-line.-2000. Доступно по URL: http://froxi.nm.ru/

81. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимические и патофизиологические аспекты- М.: МАИК «Наука / Интерпериодика», 2001.- 343 с.

82. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Успехи современной биологии. 1993. - Т.113, вып.З. - С.286-296.

83. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. Новосибирск: РАМН, Сибирское Отделение, 1993. - 181 с.

84. Зенков Н.К., Куликов В.Ю. Хемилюминисцентный метод исследования функциональной активности фагоцитирующих клеток // Лабораторное дело 1985 -№1- С.43-45.

85. Иванов А.В., Корочкин И. М., Захаров С.Д. Светокислородная терапия: принципы и возможности // Медицинская физика (материалы 1-го Евразийского конгресса).-2001 .-№11 -С.25-26.

86. Иванов И.И., Тарусов Б.Н. Перераспределение антиоксидантов липидной природы в организме животного при раке // Физико-химические механизмы злокачественного роста. -М.: Наука, 1970. С. 112 - 116.

87. Иванова И.П. Влияние антиоксидантов на структурно-функциональное состояние эритроцитов крови собак при окислительном стрессе.: Автореф. дисс. канд. биол. наук- Н. Новгород, 2000,- 34 с.

88. Иванова И.П., Конторщикова К.Н. Физико-химические свойства озонированных растворов // Тез. докл. 2-й Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине».- Н.Н.: Поволжье, 1995. -С.32-33.

89. Идов И.Э. Аспекты применения озона в медицине // Анестезиология и реаниматология . 1997. - № 1. - С. 90-94.

90. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов // Биофизика,- 1986,- Т. 18.- С. 191.

91. Калашников С.П., Маянский А.Н., Загоскин П.П., Маянский НА. Оксид азота новый биологический модулятор // Нижегородский медицинский журнал - 1999- №1 - С.69-82.

92. Карандашов В.И., Петухов Е.Б. Ультрафиолетовое облучение крови М.: Медицина, 1997. -224 с.

93. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып.4-С.456-460.

94. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета // Иммунология. 1995. - №3- С. 30-44.

95. Клебанов Г.И. Свободнорадикальные механизмы лазеротерапии // Тез. докл. научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека».-Смоленск, 2001 .-С. 42.

96. Когл Дж. Биологические эффекты радиации- Москва, 1986,- 184 с.

97. Козлов Ю.П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах М: МГУ, 1973.-175 с.

98. Козлов Ю.П. Перекисное окисление липидов и проблема канцерогенеза // Актуальные вопросы современной онкологии -М: МГУ, 1979,- Т. 5,- С. 72-83.

99. Козырева Е.В. Использование янтарной кислоты и других компонентов энергетического обмена в лечении онкологических больных // Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. Пущино, 1997. - С. 113118.

100. Кокшаров И.А., Перетягин С.П., Яхно В.Г. Вызываемые озоном изменения физических параметров эритроцитарныхмембран, дозозависимые эффекты // Озон в биологии и медицине: Тез.докл. II Всероссийск.конф.-Н.Новгород,1995.-с. 12-13.

101. Колесниченко JI.C., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы //Успехи современной биологии. 1989. - Т. 107, вып. 2. - С. 179— 195.

102. Коноплянников А.Г. Стимулирующее выход эндогенных селезеночных колоний у облученных мышей действие озона. // Материалы 1-ой Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине»,- Н.Новгород, 1992. С.26-27.

103. Кондрашова М.Н. Выясненные и наметившиеся вопросы на пути исследования регуляции физиологического состоянияянтарной кислотой // Терапевтическое действие янтарной кислоты. -Пущино, 1976.-С.4-12.

104. Конторщикова К.Н. Влияние озона на метаболические показатели крови в эксперименте in vitro // Гипоксия и окислительные процессы: сб.науч.тр. / Нижегородский мед. институт Н.Новгород, 1992. - С.50-54.

105. Конторщикова К.Н. Перекисное окисление липидов при коррекции гипоксических состояний физико-химическими факторами: Автореф. дис. докт. биол. наук СПб, 1992.-30 с.

106. Конторщикова К.Н., Щербатюк Т.Г., Усачева О.Н. Фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов крови при озонотерапии поздних токсикозов беременности // Нижегородский медицинский журнал 1997. - №4- С. 13-14.

107. Королюк М.А. и др. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лабораторное дело 1988.-№1-С.16-19.

108. Косенко Е.А., Каминский Ю.Г. Янтарнокислый натрий -радиопротектор. //Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. Пущино, 1997. С. 128-133.

109. Костылев В.А., Черняев А.П., Антипина Н.А. Ионизирующее излучение в терапии М: АМФ - Пресс, 2001.- 44 с.

110. Костюк П.Г. Физиология человека: В 4т М.:Мир,1985.-Т.4. - С.142-143.

111. Костылев В.А., Черняев А.П., Антипина Н.А. Ионизирующее излучение в терапии,- М: АМФ-Пресс, 2001 .-44 с.

112. Крыжановский Г.Н. Введение в общую патофизиологию. М., РГМУ, 2000.-71 с.

113. Крылов А.А., Кац A.M., Конторович А.С. Руководство для лаборантов клинико-диагностических лабораторий. М.: Медицина, 1981.-С. 186 - 190.

114. Кудряшов Ю.Б. Химическая защита от лучевого поражения // Соровский образовательный журнал 2000 - Т.6, №6.-С.21-26.

115. Кудряшов Ю.Б., Беренфельд Б.С. Основы радиационной биофизики.- М: МГУ, 1982.-304 с.

116. Кузьмина Е.И., Нелюбин А.С., Щенникова М.К. Применение индуцированной хемилюминесценции для оценкисвободнорадикальных реакций в биологических субстратах // Межвузовский сборник биохимии и биофизики микроорганизмов. -Горький, 1983.-С. 179-183.

117. Кулинский В.И., Колисниченко J1.C. Структура, свойства, биологическая роль глутатиона и регуляция глутатион-пероксидазы // Успехи биологической химии. —1993—Т.113— С.107-122.

118. Ланкин В.З., Герасимова Е.Н., Касаткин Л.Б. Перекиси липидов и атеросклероз//Кардиология-1979.-№6-С.71-75.

119. Лихтенштейн А.В., Шапот B.C. Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы // Патологическая физиология и экспериментальная терапия-1998 №3- С.97-115.

120. Лобко Г.Н., Порубова Г.М. Резистентность опухолей: Генетические аспекты.- Минск: Наука и техника, 1989.-143 с.

121. Лукьянова Л.Д. Новые подходы к созданию антигипоксантов метаболического действия // Вестник РАМН. 1999. - №3. - С.18-25.

122. Ломакин М.С., Арцимович Н.Г. Интерлейкины как биологически активные полифункциональные молекулы // Успехи современной биологии-1991-Т. 111, вып. 1-С.34-46.

123. Лунин В.В., Попович М.П., Ткаченко С.Н. Физическая химия озона. М.:МГУ, 1998. - 480 с.

124. Лучевая терапия злокачественных опухолей / Под ред. Е.С.Киселевой-М.: Медицина, 1996.-464 с.

125. Лучник А.Н. Формула рака // Наука и жизнь. 2002-№5-С.60-63.

126. Лю Б.И., Шайхутдинов Е.М. Физико-химические и биокибернетические аспекты онкогенеза. Алма-Ата: Гылым, 1991— 270 с.

127. Маеда X., Акайте Т. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке // Биохимия. -1998 Т.63, вып.7.— С.1007-1019.

128. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при онкопатологии // Биофизика.-1996.-т.41,вып.5.-с.1093-1096.

129. Малахова М Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации СПб: М.А.П.О.-1995.-35 с.

130. Манойлов С.Е. Биохимические аспекты опухолевого роста-Л.: Медицина, 1971.-232 с.

131. Мари Э., Пол А. Секреты гематологии и онкологии М.: БИНОМ, 1997,- 560 с.

132. Масленников О.В., Конторщикова К.Н. Озонотерапия: Внутренние болезни .-Н.Новгород. :НГМА, 1999 -56 с.

133. Маянский А.Н. Актуальные проблемы фагоцитоза // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций-Горький, 1989-С.5-15.

134. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань, 1993. - 192 с.

135. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи современной биологии-1993. Т. 113, Вып.4. - С.442-454.

136. Миронова И.Г., Антипов А.В. Влияние озона на химическую структуру физиологического раствора // Нижегородский медицинский журнал 1999 - №1- С.29-31.

137. Морозкина Т.С. Энергетический обмен и питание при злокачественных новообразованиях / Под ред. В.С.Шапота-Минск: Беларусь, 1989 191 с.

138. Мосиенко B.C., Загоруйко Л.И. Динамика напряжения кислорода в нормальных и опухолевых тканях при злокачественном росте // Материалы Всесоюзной конференции «Проблемы взаимодействия организма и опухоли».-Киев: Наукова думка,1982.-С.117-118.

139. Мосиенко B.C., Загоруйко Л.И., Тодор И.Н. Особенности кислородного обмена при опухолевом росте // Экспериментальная онкология. 1985. - Т.7, №5. - С.8-14.

140. Мосиенко B.C., Тодор И.Н., Хасанова Л.Т. Фармакологическая коррекция хронической тканевой гипоксии при опухолевом процессе // Экспериментальная онкология. 1991. - Т.13, №3. - С.7-11.

141. Мустафаев Н.С. Национальный институт здоровья США // Вестник биофизической медицины 1994 - №2.- С.58.

142. Мухина И.В. Влияние препаратов с антигипоксическими свойствами на функциональное состояние сердца и мозга в реперфузионном периоде: Автореф. дисс. докт. биол. наук -Москва, 2000. 40 с.

143. Нейфах Е.А. К механизму окисления ненасыщенных жирных кислот раковыми и нормальными тканями // Тр. VII Междунар. противорак. конгр. 1963.

144. Нейфах Е.А., Каган В.Е. Накопление перекисей липидов в органах животных- опухоленосителей //Биохимия-1969- Т.34, № 4,-С. 692- 695.

145. Несынов Е.П. Живое глазами химика. Киев: Наукова думка, 1981.-205 с.

146. Оболенский С.В., Малахова М Я. Лабораторная диагностика интоксикаций в практике интенсивной терапии СПб.: Спб ИУВ, 1993.- 16 с.

147. Общая онкология. Руководство для врачей / Под ред. Напалкова Н.П.- Л.: Медицина, 1989. 648с.

148. Озон в биологии и медицине. Тезисы докладов 1-ой Всероссийской научно-практической конференции.-Н.Новгород, 1992,- 111 с.

149. Озон в биологии и медицине. Тезисы докладов 2-ой Всероссийской научно-практической конференции-Н.Новгород, 1995,- 111 с.

150. Озон в биологии и медицине. Тезисы докладов 3-ой Всероссийской научно-практической конференции-Н.Новгород, 1998. 248 с.

151. Озон в биологии и медицине. Тезисы докладов 4-ой Всероссийской научно-практической конференции.- Н.Новгород, 2001.- 130 с.

152. Островский Ю.М., Величко М.Г., Якубчик Т.Н. Пируват и лактат в животном организме. М.: Наука, 1984. - 173 с.

153. Патологическая физиология. Учебное пособие / Под ред. А.Д. Адо, Л.И.Ишимовой.- М.:Триада-Х, 2000.-574 с.

154. Патологическая физиология. Учебное пособие / Под ред. А.Д. Адо.-М.-.Медицина, 1980.-520 с.

155. Пахомов В.И., Практические и потенциальные возможности гипербарической оксигенации в лечении атеросклероза, острого лейкоза, в радиобиологии и генетике М.: Наука, 1995.-96 с.

156. Первая международная научно-практическая конференция «Местное и парентеральное использование озонотерапии в медицине» // Сборник научных работ. Харьков: Украинская ассоциация озонотерапевтов и работников мед оборудования, 2001.- 128 с.

157. Перетягин С.П. Патофизиологическое обоснование озонотерапии постгеморрагического периода: Автореф. дисс. докт.мед. наук. Казань, 1991. - 30 с.

158. Пецев Н., Коцев Н. Справочник по газовой хроматографии. -М.: Мир, 1987.-263 с.

159. Плисс Б.Б. Онкологическая характеристика нового штамма лимфосаркомы крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины-1961 -Т.2, №3.-С.95-99.

160. Поберезкина Н.Б., Осинская Л.Ф. Биологическая роль супероксиддисмутазы // Украинский биохимический журнал-1989—Т.61, №2. С. 14-27.

161. Применение гипертермии и гипергликемии при лечении злокачественных опухолей / Н.Н. Александров, Н Е. Савченко, С.З. Фрадкин, Э.А. Жаврид. М.Медицина, 1980. - 256 с.

162. Разумовский С.Д. Кислород элементарные формы и свойства. - М: Химия, 1979. - 304 с.

163. Разумовский С.Д., Заиков Г.Е. Озон и его реакции с органическими соединениями М.: Наука, 1974. - 322 с.

164. Ройт А. Основы иммунологии М: Мир, 1991.- 328 с.

165. Романов B.C. Количественно-качественная характеристика альтеративных изменений раков молочной железы при терморадиотерапии // Тез. докл 6-ой конференции молодых ученых Волго-Вятского региона. 1989. - С. 150 - 151.

166. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло // Соросовский образовательный журнал., 1999. №3,- С.4-16.

167. Савич А.В. Роль супероксидного радикала в норме и при патологических состояниях // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления М., 1993. - С.33-43.

168. Сидорик Е.П., Баглей Е.А., Данко М.И. Биохемилюминисценция клеток при опухолевом процессе.-Киев: Наукова думка, 1989.-216 с.

169. Соколов В В., Странадко Е.Ф. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей основных локализаций с препаратами фотогем и фотосенс (результаты 3 летних наблюдений) // Вопросы онкологии, 1995- №2.-С. 134-1338.

170. Софронов Б.И., Левин М.Я., Орехов Л.Ю. Введение в иммунологию С.-Пб., 1995.-116 с.

171. Стрелков Р.Б. Повышение эффективности лучевой и химиотерапии в онкологии с помощью нормобарической гипоксии // Физиологический журнал, 2001,- Т. 47, № 1 (2). С. 13-19.

172. Суколинский В.Н. Перспективы применения антиоксидантов в комбинированном лечении злокачественных опухолей // Вопросы онкологии, 1990 -Т.36, №2 -С.138-143.

173. Ундинцев Г.Н., Бланк В.К., Кравец Д.А. Определение глутатиона // Пособие по клинико-лабораторным методам исследований.-Л.: Медицина, 1986. С. 68-70.

174. Фрейдлин И.С. Цитокины и межклеточные контакты в противоинфекционной защите организма // Соровский образовательный журнал-1996.- №7 -С. 19-25.

175. Фридович И.В. Радикалы кислорода, пероксида водорода, и токсичность кислорода // Свободные радикалы в биологии.-М.:Мир, 1979.-Т. 1 -С .273-314.

176. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток-М.: Энергоатомиздат, 1985 152 с.

177. Харамоненко С.С., Ракитянская A.J1. Электрофорез клеток крови в норме и патологии. -Минск: Беларусь, 1974. -144 с.

178. Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. Диагностическое значение профильной дегидратации сыворотки крови: структурная форма информации // Лаборатория. №4, 1999. - С. 3-5.

179. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. -М.:Медицина, 1975.-304 с.

180. Шапот B.C. Прогрессия опухоли и организм // Вопросы онкологии.- 1980,- №3,- С. 103-108.

181. Щербатюк Т.Г. Влияние озонированного физиологического раствора на прооксидантную и антиоксидантную системы у крыс с саркомой-45 // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Н. Новгород, 1997.-25 с.

182. Щербатюк Т.Г., Послов Г. А., Илларионов В.Ю. Озонотерапия собак при некоторых злокачественных новообразованиях // Ветеринария-1998. -№7 С. 57-60.

183. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США / Г.Аттаси и др. Под ред. З.П.Софьиной (СССР), А.Голдина (США) и др.- М.: Медицина, 1980.-295 с.

184. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М.: Наука, 1977. - 419 с.

185. Эмануэль Н.М. Физико-химия рака //Природа. -1982-№1-С.76-83.

186. Ярилин А.А., Добротина Н.А. Введение в современную иммунологию. Н.Н.: ННГУ, 1997,- 238 с.

187. Ярмоненко С П. Жизнь, рак, радиация.- М.: AT, 1993.- 160 с.

188. Ярмоненко С.П. и др. Биологические основы терапии опухолей / С.П.Ярмоненко, А.А.Вайсон, Г.С.Календо, Ю.И.Рампан-М.Медицина, 1976.-272 с.

189. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. -М.:Высш. шк., 1988. 424 с.

190. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А. Кислородный эффект и лучевая терапия опухолей // Лучевая терапия злокачественных опухолей-М: Медицина, 1996 С.58-79.

191. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А., Магдон Э. Кислородный эффект и лучевая терапия опухолей (Совместное издание СССР-ГДР).- М.: Медицина, 1980 248 с.

192. Ярмоненко С.П., Конопляников А.Г., Вайнсон А.А. Клиническая радиобиология-М.: Медицина, 1992.-323 с.

193. Abiko Т., Kumikawa М. Mean molecular uremic toxins // Biochem. and biophys. res. communs.- 1983.-Vol.87, №2,- P. 707-715.

194. Adelman R., Saul R.L., Ames B.N. Oxidative damage to DNA: Relation to species metabolic rate and fife span // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1988,- Vol.85.-P.2706-2708.

195. Aebi H. Methodon der eryematechen analyses.-1970.-Vol.2.-P.636-647.

196. Altman N. Oxygen healing therapies: for optimum health and vitality. Vermont: Healing Arts Press Rochester, 1994. - 200 p.

197. Antiproliferative effect of the piperidine nitroxide temprol on neoplastic and nonneoplastic mammalian cell lines / Gariboldy M B., Lucche S., Caserini C., Supino R., Oliva C., Monti E. // Free Radical Biology & Medicine. -1998.-Vol.24, №6.-P.913-923.

198. Arnan M., DeVries L.E. Effect of ozone/oxygen gas mixture directly injected into the mammary carcinoma of the female C3H/HEJ mice // Medical applications of ozone.- 1983,- P. 101-107.

199. Bast A., Haenen G.R.M.M., Doelman C.J.A. Oxidants and antioxidants: State of the art // Amer. J. Med.-1991.- Vol. 91- P. 2-13.

200. Becker S. Ozone effect on respiratory syncytial virus infectivity and cytokine production by human alveolar macrophages // Environ. Res.- 1993.- Vol.60, №2. P. 178-186.

201. Bocci V. Determinants of erythrocyte ageing: A reappraisal // Brit. J. Haematol -1981,- Vol. 48. P. 515-522.

202. Bocci V. Ozone as a bioregulator. Pharmacology and toxicology of ozonetherapy today // J. Biolog. Regulators and Homeostatic agents.- 1997,- Vol. 10, № 2/3,- P. 31-53.

203. Bocci V. Ozone: a Mixed Blessing. New mechanism of the action of ozone on blood cells make ozonated major autohaemothrapy (MAH) a rational approach // Karger. 1996. - Vol.3.- P.25-33.

204. Bocci V. Roles of interferon produced in physiological conditions. A speculative review//Immunology.- 1988,- Vol. 64. P.l-9.

205. Bocci V. Tumor therapy with biological response modifiers. Why is progress slow? // EOS-J Immunol Immunopharmacol. -1990.-Vol. 10. -P.79-82.

206. Bocci V., Luzzi E., Corradeschi F., Paulesu L. Studies on the biiological effects of ozone: evaluation of immunological parameters and tolerability in normal volunteers receiving ambulatory autohaemotherapy // Biotherapy. 1994,- Vol.7.- P.83-90.

207. Bocci V., Paulesu L. Studies on the biological effects of ozone: 1. Induction of interferon gamma on human leucocytes // Haematologica. 1990,- Vol.75 -P.510-515.

208. Bocci V. Does ozone therapy normalize the cellular redox balance? Implications for therapy of human immunodeficiency virus infection and several other diseases // Med. Hypotheses.-1996.- Vol. 46, №2. -P. 150-154.

209. Braun D.P., Harris J.E. Chemiluminescence in peripheral blood mononuclear cells of soid tumor cancer patients // Chem. And Phys. Lipids. 1987,- Vol. 45, № 2-4. - P. 207-239.

210. Byczkowski J.Z., Gessner T. Biological role of superoxide ion-radical // Int.J.Biochem. -1998,- Vol.20.- P.569-580.

211. Cabrera C., Bohr D. The role of nitric oxid in the central control of blood pressure // Biochem and Biophys. Res. Commun. 1995.-Vol. 206.- P.77-81.

212. Carrol E., Cross C., Abraham Z. et al. Oxidative damage to human plasma proteins by ozone // Free Rad. Res. Comms.- 1992,-Vol.52.-P.347-352.

213. Cederbaum A.I., Cohen G. Microsomal oxidation of hydroxyl radial scavening agenrs // Handbook of Methods for oxygen radical research.- Boca Raton: CRC Press, 1986.-P.81-87.

214. Cerutti P., Larsson R., Krupitsa G. et al. Pathophysiological mechanism of active oxygen // Mutat. Res.- 1989. Vol.214. - P. 8188.

215. Chidambaram N., Baradarajan A. Effect of selenium on lipids and some lipid metabolising enzymes in DMBA induced mammary tumor rats // Cancer Biochem. Biophys. 1995,- Vol. 15, №1,- P. 4147.

216. Cohen H.J. Continuous monitoring of superoxide production by phagocytes // Handbook of Methods for oxygen radical research.-Boca

217. Raton: CRC Press, 1986.-P.143-148.

218. Cohen M.S.et al. Phagocytes, O2 reduction, and hydroxylradical / Cohen M.S., Britigan B.S., Hassett D.J., Rosen G.M. //Revs Infect.Dis. 1988,- Vol.10.-P.1088-1096.

219. Corcho I. et al. Innune system changes in flamotory process during ozone therapy applications / Corcho I., Hernandez F., Reyes N., Carballo A., Reyes Т., Jonez L. // 2 International Symposium on Ozone Application.- Havana, Cuba, 1997,- P. 12.

220. Cornwell D.G., Morisaki N. Fatty acid paradoxes in the control of cell proliferation: Prostaglandins, lipid peroxides, and cooxidation reactions //Free Radicals in Biology. 1984,- Vol.6. - P.96-149.

221. Crawford D. et al. Oxidant stress induced the proto-oncogenes c-fos and c-myc in mouse epidermal cell / Crawford D., Zbinden I., Amstad P., Cerutti P. // Oncogen.-1988.-Vol.3. P.27-32.

222. Cross С. et.al.Oxidative demage to human plasma proteins by ozone / Cross C., ReznickA., Packer L., Davis P. // Free Rad.Res.Comms.-l992,-Vol. 15, №15 P.374-352.

223. Davies K.J. Protein damage and degradation by oxygen radicals. General aspects // Biological Chemistry.-1987.-Vol.262.-P.9895-9901.

224. Deby C., Goutier R. New perspectives on the biochemistry of superoxide anion and the efficiency of superoxide dismutases // Biochem. Pharmacol. 1990.-Vol.39. - P.399-405.

225. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary // J.Lab and Clin. Med. -1991.-Vol.118,- P.3-4.

226. Fahmy Z. Immunological effect of ozone (O2/O3) in rheumatic diseases // Proc. Ozone Application in Medicine.- Zurich, 1994,- 62 p.

227. Fidelius R.K. The generation of oxygen radicals: A positive signal for lymfocyte activation // Cell. Immunol. 1988.-Vol.113.-P.175-182.

228. Folch J., Stanley A., Less M. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // Biol. Chem. -1957. Vol.226, №2. - P.497-509.

229. Fridovich I. Superoxide radical: an endogenous toxicant // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 1983,- Vol.23.- P.239-257.

230. Goldemberg R.L. Free radicals // Drug & Cosmetic Industry.-1993.-Vol.153, №5.-P.48-51.

231. Goldstein S., Czapski G. The reaction of NO-with O2- and H02*: A pulse radiolysis study // Free Radical Biol. And Med. 1995. -Vol.19.-P.505-510.

232. Halliwell В. Reactive oxygen species in living systems // Amer. Journal ofMed.-1991.-Vol.91.-P. 14-23.

233. Imlay J.A., Linn S. DNA damage and oxygen radical toxicity // Science.- 1989,- Vol. 50. P.135-136.

234. Jenkins D.S., Charles I.G., Thomsen L.L. Roles of nitric oxide in tumor growth // Proc. Natl. Acand.Sci. USA.-1995.-Vol.92.- P. 43924396.

235. Jones O.T.G., Hancock J.T., Jones S.A. Mechanisms of superoxide formation by neutrophils and other cell types // Biol.Chem.-1992,-Vol.373.-P. 737.

236. Kam P.C. A., Govenger G. Nitric oxide: basic science and clinical application // Anaesthesia.-1994.- Vol.49. P. 515-521.

237. Karlic H., Kucera H., Metka M. Ozone and ionisi- sierender Strahlung in vitro- model- eine pilostudie an vier gynakologischen tumorenl // Strahlenther and Oncol.- 1987.-Vol.163,- P.37- 42.

238. Keevil N., Mason H.S. Molecular oxygen in biological oxidation- An overview //Methods in Enzymology. -N.Y.:Acad. Press, 1978 -Vol.52.- P.3-40.

239. Klebanoff S.J. Oxigen metabolites from phagocytes // Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates.- N.Y.: Raven Press, 1992,- P.541-588.

240. Koren H.S. Chemical nature and immunotoxicological properties of arachidonic acid degradation products formed by exposure to ozone // Environ-Health-Perspect. 1993. - Vol.101, № 2. - P. 154-164.

241. Kramer K. Antioxidanzien in der Onkologie // Onkologie. -1994.- №3. P. 76-83.

242. Lai. G., Moscow I.A., Alvarez M.G. Contribution of glutathione and glutathione-dependent enzymes in the reversal of adriamycion resistance in colon carcinoma cell lines // Int. J. Cancer.-1991.-Vol.49.- P.588-695.

243. Last J.A., Warren D.L. Modification by ozone of lung tumor development in mice // J. Natl. Cancer. Inst.- 1987. Vol.78. - P. 149154.

244. Majchrowicz Martin A. Ozone/Oxygen.- Baden-Baden, 2000,187 p.

245. Mills C.D. Molecular basis of suppressor macrophages. Arginine metabolism via the nitric oxide synthetase pathway // J.Immunol.-1991.- Vol.146.- P.2719-2723.

246. Moleiro J, Zamora Z. Oleozon // 2 International Symposium on Ozone Application .- Havana, Cuba, 1997,- P.2.

247. Muller F. Reactive oxygen intermediates and human immunodeficiency virus (HIV) infection // Free Radical Biol. And Med. -1992.-Vol. 13,- P.651 -657.

248. Nathan C.F., Cohn Z.A. Antitumor Effects of Hydrogen Peroxide in Vivo // Experimental Medicine.- 1981,- P. 1548.

249. Neuzil J., Zhao M., Ostermann G. alpha-Tocopheryl succinate, an agent with in vivo anti-tumour activity, induces apoptosis by causing lysosomal instability // Biochem. J. 2002. - Vol.362, №3. - P.709-715.

250. Nishicimi M., Roo A., Xagi K. The occurrence of superoxide anion in reactions of redused phenaxi-nemetasulfate and molecular oxygen // Biochem. Biophys. res.commun.-1972.-Vol.146, №2,- P.849-854.

251. Oberley T.D., Oberley L.W. Antioxidant enzyme levels in cancer // Histol. Histopathol. 1997. - Vol. 12, №2,- P.525-535.

252. Ozone Applications // Abstracts 2nd International Symposium on Ozone Applications.-1997.-75p.

253. Ozone in medicine: Proceedings of 12th Word congress of international ozone association. 1995. - V.3.- 305 p.

254. Ozone in medicine: Proceedings of 15th Word congress of international ozone association. 2001. - V.2.- 300 p.

255. Paulesu L., Luzzi E., Bocci V. Studies on the biological effects of ozone: 2. Induction of tumor necrosis (TNF-alpha) on human leucocytes // Lymphokine Cytokine Res. 1991.- Vol.10, №5. - P. 409-412.

256. Player T.J. Lipid peroxidation in rat liver, hepatomas and regenerating liver // Free radicals lipid peroxidation and cancer. 1982. -P. 173-214.

257. Pryor W.A., Squadrito G.L., Friedman M. The cascade mechanism to explain ozone toxicity: the role of lipid ozonation products // Free Radic. Biol. Med. 1995. - Vol. 19, №6. - P. 935-941.

258. Punnonen K. et al. Antioxidant enzyme activities and oxidative stress in human breast cancer / Punnonen K, Ahotupa M., Asaishi K., Hyoty M., Kudo R., Punnonen R. // J. Cancer. Res. Clin. Oncol. -1994. Vol.120, №6,-P. 374-377.

259. Richelmi P., Franzini M., Vandenassi L. Oxigeno-ozonoterapia. -Pavia-Bergamo, 1995. 80 p.

260. Rilling S. The basis clinical application of ozone therapy // Ozonachrichten. -1985,- № 4. P.7-17.

261. Rilling S., Vieban R. The use of ozone in medicine. New York: Haug,1987.- 180 p.

262. Rodriguez Y., Bello J.L., Menendez S. Antitumor activity of ozone.Experimental research // Abstracts of 2nd International symposium on ozone applications.- Havana, Cuba, 1997. P. 22.

263. Rokitansky O. Klinik und biochemie der ozontherapie // Ozontherapie.-1982. -Vol.3, ?52.- P.643-711.

264. Rokitansky O., Rokitansky A. Electron microscopic studies on endothelium cells and on the peritenium after application on ozone-oxygen in animals // 8 Ozone World Congress.- Zurich, Switzerland, 1987,- P. 134-135.

265. Rubanyi C.M. Vascular effects of oxygen -derived free radicals // Free Radical Biol, and Med. 1988. -Vol.4. -P.107-121.

266. Schulz S. Antitumor effect of ozone oxygen inhaled at mice of a line NMRI, subjected to uretan influence // Proc. 9-th Ozone World Congress.- New York, 1989,- Vol.3.- P.83- 93.

267. Schulz S. Effekte von ozon/oxigen bei der clindamycin-induzierten enterocolitis beim sibirischen zwerghamster // Ozonachrichten. -1984,- Vol.3. P.2-16.

268. Schulz S., Wagner M. The influence of ozonized oxygen on lung tumor development (multiplicity after different forms of application on mice (NMRI) // Abstracts of 2nd International symposium on ozone applications.- Havana, Cuba, 1997,- P 23.

269. Scoter H. Oxidative stress: damage to intact cells and organs // Phil. Trans. Roy. Soc. London/.- 1985,- V. 311. №1152. P. 617-629.

270. Scherbatyuk T.G., Kontorschikova K.N. Ozone application in neoplasia treatment of experimental animals I I Ozone News, V. 25.-№ 3.-P. 45-46.

271. Scrollavezza P., Abblondi M. Ozone treatment in mastitis and retention of fetal membranes in the cow // Abstracts of 2nd Internationa. symposium on ozone applications.- Havana, Cuba, 1997.-P.35.

272. Shearer J.D., Buzby G.P., Mullen J.L., Miller E., Caldwell M.D. Alteration in pyruvate metabolism in the liver of tumor-bearing rats // Cancer. Res. 1984. - Vol.44, №10.- P.4443-4446.

273. Sies H., Ketterer B. Glutathione conjugation: mechanisms and biological significance // Acad. Press. 1988.- P.480.

274. Stahelin J., Buhler R., Hoine J. Ozone decomposition in water studies by pulsa radiolysis: comparison of mechanisms // Ozone science and engineering.- 1992. -№ 14. P. 33-49.

275. Sunnen G.V. Ozone in Medicine: overview and future direction // Proc.9th Ozone World Congress.- New York, 1989. Vol.3 - P.l-16.

276. Suzuki Y., Mizuno M, Packer L. Signal transduction for nuclear factor-kappa В activation. Proposed location of antioxidant-inhibitable step. //J. Immunol. 1994.-Vol.153,-P. 145-147.

277. Sweet F. Ozone selectivity inhibits growth of cancer cells // Science -1980,- Vol.209. P.931-933.

278. Varro J. Die krebsbehandlung mit ozon // Erfahrung-sheilkunde. -1974,-Vol. 23. P. 178-181.

279. Varro J. Ozone applications in cancer cases // Medical Applications Of Ozone.—1983,- P. 94-95.

280. Viebahn R. The biochemical process underlying ozone therapy // Ozonachrichter.- 1985. № 4,- P. 18-30.

281. Viebahn-Hansler R. Ozontherapie-therapeutishe Grundidee und Wircsamkeitsmodelee // Erfahrungsheilkunde 1991. - № 4. - P. 296315.

282. Washuttl J., Viebahn R., Steiner I. Immunological examinations in patients with chronic conditions under administration of ozone/oxygen mixtures // Ozone Sci. Engin.- 1989.- Vol.11. P. 411417.

283. Weber G. Enryme-pattern directed chemotherapy and cell proliferation rate // Meeting of the Europ. Study group for cell proliferation. Budapest, 1983. - P.46.

284. Weber G., Lea M.A. The molecular correlation concept of neoplasia//Adv. Enryme Regul. -1966. -Vol.4.-P. 115-145.

285. Weinhouse S. Isoenzymes in cancer // Cancer Res.- 1971.-Vol.31,?8-P.l 166-1167.

286. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen // Enzymes: Tools and Targets. Basel: Karger, 1988,- P.161-167.

287. Winterbourn C.C. Free radical reactions of the blood // Chem. N.Z.- 1989,-Vol.53.-P.10-11.

288. Wolff. M.M. Das medizinische ozone. -1988. 270 p.

289. Wu К., Zhao Y., Liu B. Alpha-tocopheryl succinate inhibits human gastric cancer SGC-7901 cell growth by inducing apoptosis and DNA synthesis arrest // World J. Gastroenterol. 2002 - Vol.8, №1. -P.26-30.

290. Yu B.P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species // Physiol. Revs.- 1994.-V.74,- P139-162.

291. Zamora Z. et al Ozone Profilactic Effect and Antibiotics as Modulator of Inflamatory Septic process in Rats // The journal of the international ozone association Conference on ozone in medicine and Environment and Health.-UK, 2001.

292. Zanker K., Kroczek R. The mystery of molecule-ozone: antiproliferative, immunmodulative, synergistic to chemotherapy and carcinogenetic // IX Congress of Ozone.- 1989. P.55-68.

293. Вегеринарный лечебно-диагностический центр

294. Эврика» 603002, Нижний Новгород, ул. Даля, 14.1. АКТоб использовании результатов диссертационной работы Щербатюк Т.Г. «Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями»

295. Директор ветеринарногс лечебно-днагностическо1. Г.А. Послов

Информация о работе

Щербатюк, Татьяна Григорьевна
доктора биологических наук
Нижний Новгород, 2003
ВАК 03.00.13

Диссертация

Свободнорадикальные процессы и их коррекция у животных с экспериментальными опухолями - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы