Влияние высокоэнергетических электрофизических факторов на свободнорадикальные процессы и структурно-функциональное состояние мембран клеток животных

Зуймач, Елена Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние высокоэнергетических электрофизических факторов на свободнорадикальные процессы и структурно-функциональное состояние мембран клеток животных
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние высокоэнергетических электрофизических факторов на свободнорадикальные процессы и структурно-функциональное состояние мембран клеток животных"

На правах рукописи

Зуймач Елена Анатольевна

□03488028

ВЛИЯНИЕ ВЫСОКОЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕКТРОФИЗИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН КЛЕТОК

ЖИВОТНЫХ

03.00.13 физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 О ДЕК 2009

Нижний Новгород - 2009

003488028

Работа выполнена в научно-исследовательской группе физико-химических воздействий НИИ Прикладной и фундаментальной медицины ГОУ ВПО Нижегородской государственной медицинской академии Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

Научный руководитель:

Доктор биологических наук Иванова Ирина Павловна

Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор Чурмасов Александр Васильевич

2. Кандидат медицинских наук Мартусевич Андрей Кимович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского

Защита состоится 23 декабря 2009 года в 14°° часов на заседании диссертационного совета Д 220.047.01 при ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 603107, Н. Новгород, пр. Гагарина, 97

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»

Автореферат разослан 20 ноября 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета

М.Н. Иващенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность

Возрастание электромагнитной составляющей техногенной нагрузки является актуальной проблемой в исследовании биологических эффектов различных физических фактов, с целью выявления диапазонов негативного или позитивного воздействия и прогноза возможных последствий, как для клетки, так и для организма в целом. Изменение свободнорадикальных процессов имеет важное значение при развитии отклика клеточных мембран на физико-химические воздействия.

Уровень свободнорадикальных процессов в клетке строго контролируется антиоксидантными системами. Однако интенсификация свободнорадикальных процессов и изменение соотношения окисленных и восстановленных продуктов может приводить к необратимым нарушениям в мембранах клеток, тканях и органах (Владимиров, 1972, Каган, 1986, Бароненко, 1988, Савич, 1993,).

В последнее время, как в России, так и за рубежом ведется исследование биологических эффектов высокоэнергетических импульсных электрофизических факторов. Особенностью высокоэнергетических импульсных факторов является высокая плотность энергии и микросекундная или наносекундная длительность импульса. Изменение интенсивности и длительности действия высокоэнергетических импульсных факторов приводит к изменению свободнорадикальной активности в среде (Авраменко Р.Ф.,1990, 1992, Pettersson J.B., Lindroth Н.С. 1992, Franke К.-Р, Meissner Н. 2000, Ивановский А. В., 2000, Бугаенко Л.Т., 2002, Спиров, Иванова 2005). Поэтому в настоящее время высокоэнергетические импульсные воздействия применяют для очистки воды, разложения органических веществ, стерилизации и дезинфекции (Верещагин И.П., 2000, Hoeben W.F., 2000, Пискарев И.М, 2000, 2001,2003 Иванова И.П., Зуймач Е.А. 2008).

В результате действия высокоэнергетических факторов образуются электронновозбужденные состояния молекул с переносом энергии кванта, что влечет за собой электролитическую диссоциацию и ионизацию молекул (Райзер Ю.П. 1992, Базслян Э.М., 1997, 1998, 1998, Пискарев, 2008), которые в свою очередь могут изменять структурно-функциональное состояние мембран и метаболизм клеток. В связи с этим актуальным является изучение свободнорадикальных процессов и структурно-функционального состояния клеток после воздействия высокоэнергетических электрофизических факторов короткоимпульсных разрядов.

Цель и задачи исследования

Цель работы - исследование свободнорадикальных процессов и структурно-функциональных изменений мембран эритроцитов, лимфоцитов, костного мозга при действии высокоэнергетических электрофизических факторов для определения диапазонов воздействия, ведущих к эффектам стабилизации и дестабилизации клеточных структур.

Основные задачи исследования.

1. Изучение свободнорадикальных процессов и суммарной концентрации радикалов под действием основных факторов высокоэнергетических разрядов (некогерентное излучение, озон) в дистиллированной воде, водном растворе хлорида натрия, растворе Хенкса, водных растворах фенола и гидрохинона.

2. Оценка вклада основных факторов высокоэнергетических разрядов в свободнорадикальные процессы и перекисное окисление липидов мембран эритроцитов, лимфоцитов и клеток костного мозга.

3. Исследование фосфолипидного состав мембран и состояния надмембранных структур после высокоэнергетического воздействия.

4. Определение адгезивной активности, резистентности мембран клеток и уровня молекул средней массы после высокоэнергетических воздействий в различных режимах.

Научная новизна.

Впервые изучен вклад основных факторов высокоэнергетических разрядов озона и некогерентного излучения в свободнорадикальные процессы модельных систем и мембран клеток.

Выявлены закономерности свободнорадикальных процессов под действием высокоэнергетических факторов, на основе которых разработан способ активации свободнорадикальных процессов и оценки антирадикальной и антиоксидантной активности веществ.

Показано, что после воздействия основными факторами высокоэнергетических разрядов возрастает концентрация радикалов и уровень свободнорадикальных процессов в воде и растворах солей. Исследована динамика разложения органических соединений фенола и гидрохинона после воздействия высокоэнергетическими факторами.

Оценены изменения структурнофункциональных свойств клеточных мембран, адгезии, резистентности и клеток при воздействии основными факторами высокоэнергетических импульсных разрядов. Основные факторы высокоэнергетических импульсных разрядов вызывают активацию или торможение свободнорадикальных реакций, определяя стабилизацию или деструкцию мембран в зависимости от режима воздействия.

Установлено, что высокоэнергетические факторы изменяют фосфолипидный состав мембран, что приводит к изменению резистентности.

Теоретическая и практическая значимость работы Анализ проведенных исследований показал, что полученные данные позволяют объяснить биологические эффекты высокоэнергетических импульсных воздействий и обосновать рекомендации по их использованию при исследовании биологических мембран. По результатам работы предложен метод изучения антирадикальной и антиоксидантной активности веществ «Способ оценки антиокислительной активности химиических соединений и биологических жидкостей» Патент на изобретение РФ N

2337359 2008 г.

Результаты исследований положены в основу разработанных РФЯЦ-ВНИИЭФ г. Сарова в 2005 и 2008 году устройств используемых для медико-биологических и электрохимических исследований в НИИ ПФМ НижГМА г. Н.Новгород, РФЯЦ ВНИИЭФ г. Саров.

Положения, выносимые на защиту.

1. Высокоэнергетическое воздействие активирует свободнорадикальные процессы в модельных растворах. После воздействия искровым разрядом в течение 100 секунд свечение хемилюминесценции сохраняется в течение 1,5 часов. Наибольшее суммарное количество активных форм кислорода детектируется в растворе Хенкса. Высокоэнергетическое воздействие искровым разрядом в течение 0,3 -1,5 часов на растворы фенола и гидрохинона вызывают разложение этих органических соединений.

2. Основные факторы высокоэнергетических импульсных воздействий вызывают активацию или торможение свободнорадикальных реакций в суспензиях клеток, в зависимости от режима воздействия. Наибольшая активация свободнорадикальных процессов наблюдается после воздействия плазмой разряда, а торможение после некоторых режимов искрового и коронного разряда. Вклад озона не является определяющим в развитии свободнорадикальных процессов, инициируемых в растворах и клетках.

3. Режимы воздействия высокоэнергетических факторов определяют степень адгезии, стабилизации и деструкции мембран и надмембранных структур клеток. Наибольшую степень деструкции мембран вызывает воздействие энергоемким плазменным образованием. Некоторые режимы искрового и коронного разрядов стабилизируют мембраны эритроцитов.

4. Высокоэнергетические факторы изменяют фосфолипидный состав мембран, изменение фосфолипидного состава мембран после воздействия коррелирует с их устойчивостью.

Апробация работы.

International conference "Reaktive oxygen and nitrogen species antioxidants and human health" Smolensk 2003; Международное совещание "Человек и электромагнитные поля", Саров 2003; III съезд биофизиков России, Воронеж, 2004; Международный симпозиум «Актуальные проблемы биофизической медицины» г. Киев, 27-29 мая 2004 года; Международный научный семинар «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии» апрель Саров,2004; Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2005» Пущино, 2005, Международная конференция "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" Смоленск,2005,. II Международная научная конференция "Человек и электромагнитные поля" Саров, 2007;0бщероссийский медицинский форум «Медицина за качество жизни» ноябрь 2008 Нижний Новгород; II Международная научная конференция «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии,

медицине, сельском хозяйстве и экологии» Саров, апрель 2008;

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ из них 3 работы в журналах рекомендованных ВАК и 1 патент на изобретение РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов. Список цитируемой литературы включает 220 источников (156 отечественных и 64 зарубежных). Работа содержит 9 рисунков и 18 таблиц.

Материалы и методы исследования.

Характеристика экспериментального материала.

Объектом исследования являлись водные растворы солей, углеводородов и клетки эритроцитов, лимфоцитов и костного мозга беспородных крыс самцов.

Первоначально изучались особенности свободнорадикальных процессов после воздействия основными высокоэнергетическими факторами - озоном и некогерентным излучением на растворы солей и органических соединений. Одним их наиболее важных субстратов в клетке, воспринимающим высокоэнергетическое физическое воздействие, является вода. Поэтому целью данного этапа исследования явилась оценка вклада основных факторов импульсных искровых разрядов в изменение спонтанных свободнорадикальных реакций после воздействия высокоэнергетическими импульсными факторами искровых разрядов в таких субстратах как вода, 0,9% раствор хлорида натрия и раствор Хенкса. Микроэлементный состав раствора Хенкса (К, Na, Са, CI, Р, Mg,) соответствует плазме крови.

Для изучения влияния на органические соединения обрабатывались растворы ароматических углеводородов фенола и гидрохинона (концентрация 10 мг/л). Фенол является устойчивым циклическим соединением, входит в состав соединений, участвующих в клеточном метаболизме.

Далее в работе исследовалось влияние высокоэнергетических факторов на мембраны клеток (эритроцитов, лимфоцитов, клеток костного мозга) в экспериментах in vitro.

Для приготовления взвеси эритроцитов животных декапитировали под эфирным наркозом. Гепаринизированную кровь осаждали при 3000 об/мин. Эритроциты трижды отмывали забуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,4) и готовили суспензию в растворе Хенкса (1:4). Количество клеток в суспензии - (7,0 - 7,5) хЮ12 в литре, что соответствует физиологической норме эритроцитов в цельной крови.

Суспензию кроветворных клеток миелоидного и лимфоидного ряда ткани костного мозга получали следующим образом: костный мозг, извлекали из левой бедренной кости, затем вымывали 5-ю мл стерильного раствора Хенкса и разводили до концентрации 108 клеток в ] мл.

Лимфоциты получали путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографин, (р=1,076 г/см ) (Клаус, 1990). Рабочая концентрация лимфоцитов составляла 10"9кл/мл.

Основные этапы исследования

На первом этапе исследований проводилась оценка свободнорадикальной активности после воздействия основными факторами высокоэнергетических разрядов в растворах. Режимы воздействия некогерентного излучения от 5 до 600 секунд, и озоном в течение 600 секунд.

На втором этапе изучались резистентность и степень повреждения мембран эритроцитов после действия высокоэнергетическимх импульсных факторов и озояо-кислородной смеси на суспензии клеток in vitro. Режимы воздействия от 5 до 600 секунд - некогерентным излучением, и озоном в течение 600 секунд.

На третьем этапе изучалось влияние некогерентного импульсного излучения высокоэнергетических воздействий на свободнорадикальные процессы перекисное окисление липидов, надмембранные структуры (Камышников B.C., 2003), адгезию клеток к пластику и фосфолипидный состав. Воздействию подвергались: взвесь эритроцитов, лимфоцитов, костного мозга. Режимы воздействия от 5 до 600 секунд - некогерентным излучением, 600 - секунд - озон.

Характеристика исследуемых высокоэнергетических факторов.

В работе использовались высокоэнергетические электроразрядные установки, мобильные и переносные устройства, созданные на базе РФЯЦ-ВНИИЭФ г. Сарова. Исследовалось воздействие высокоэнергетических факторов сильноточных электрических искровых, коронных разрядов мгновенной импульсной мощности и энергоемких плазменных образований.

Виды воздействия отличались по длительности и энергии генерируемых импульсов, частоте воздействия, по набору факторов включающих некогерентное импульсное электромагнитное излучение широкого диапазона (от инфракрасного до ультрафиолетового) и озон.

1. Плазма разряда. Плазма формировалась при дуговом разряде в капилляре плазмообразующего материала и ламинарном истечении плазменной струи с высокой степенью фокусировки ее в пространстве. Воздействие осуществлялось в 3 режимах, отличающихся количеством разрядов. При обработке растворов и клеточных взвесей in vitro, исследуемый объект помещали в плазменной струе. Диапазон энергии разряда: 0,5+2,0 кДж, длительность импульса 1-5 микросекунд.

2. Наносекундный коронный стримерный разряд (НСКР)

Воздействие на исследуемый объект осуществлялось тонким

плазменным шнуром (диаметр микроны), возникающим при коронном

разряде. Разряд формировался между коронирующим и плоским электродами. Исследовалось воздействие НСКР одного и шести (НСКРМ) коронирующих электродов однократными импульсами и в частотном режиме. Частота следования импульсов достигала 20 Гц. При воздействии НСКР, исследуемый объект помещали в зоне разряда, между плоским и игольчатым электродами. Энергия - 100-500 мДж, длительность импульса 10-60 не.

3. Некогерентное световое импульсное излучение широкого спектра.

Источником излучения является высокотемпературная плазма,

искрового разряда образующаяся при поступлении энергии в проводящий канал разряда. Спектр излучения охватывает области вакуумного и ближнего ультрафиолета (180-800 нм). Воздействие осуществлялось в однократном и частотном режимах (частота до 20 Гц). При обработке растворов и клеточных взвесей in vitro, исследуемый объект помещали в зоне излучения, под электродами. Максимальная энергия импульса 4-5 Дж, длительность импульса - 50 - 100 мкс.

4. Озон.

Одним из факторов при генерации разрядов является озон, поэтому, для оценки и сопоставления вклада озона в исследуемые процессы применялось воздействие озоно - кислородной смеси на растворы и суспензию эритроцитов крыс, Использовалась концентрация озона 5,5 мкмоль и 1500 мкг\л. Для получения озона использовали озонатор «МЕДОЗОНС».

Характеристика методов исследования

Концентрация активных форм кислорода при действии высокоэнергетических электрофизических факторов определялась йодометрическим методом (Разумовский С.Д., 1974).. Молекулярные окислители, которые могли образоваться при электрическом разряде (озон,гидроксил-радикал, перекись водорода, окись азота) определялись суммарно.

Особенности протекания свободнорадикальных процессов изучены методом хемилюминсценции (Кузьмина Е.И., 1982) и (Иванова, Кирилов, Зуймач, 2008).

Для оценки степени разложения фенола и гидрохинона использовался метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). В качестве «метчиков» использовали растворы фенола (10 мг/л) и гидрохинона (10 мг/л) в бензоле.

Структурно - функциональное состояние мембран эритроцитов в условиях окислительного стресса изучено методами оценки кислотной резистентности эритроцитов, спонтанного гемолиза эритроцитов (Гиттельзон А.И., Терсков В.Н., 1962), определения концентрации внеклеточного гемоглобина, количества эритроцитов (Меньшиков В.В., 1999).

Структурно - функциональное состояние мембран эритроцитов, лимфоцитов, клеток костного мозга изучалось методом оценки адгезивной активности клеток к пластику. Посев клеток производили на чашки Петри

диаметром 40 мм в среде ДМЕМ. 1 мл исследуемого материала и Змл среды ДМЕМ вносили в чашки, инкубировали в термостате 1 час при температуре 37С, затем непрекрепившиеся клетки смывали, фиксировали метанолом и окрашивали по Романовскому, затем микроскопировали,

Окислительно-востановительное и свободнорадикальное состояние клеток оценено по интенсивности свободнорадикальных реакций методом измерения индуцированной и спонтанной хемилюминсценции в течение 30 секунд (Кузьмина Е.И., 1983).

Определение молекулярных продуктов перекисного окисления липидов.

Определение продуктов перекисного окисления липидов осуществили по методу Аэби (Aebi, 1970).

Анализ фосфолипндного состава мембран, отражающего структурно-функциональные изменения, определяли методом тонкослойной хроматографии. Экстракция липидов проводилась по методу Folch (Folch 1959). Разделение фосфолипидов по фракциям по методу Шаршуновой М.,1980.

Для определения степени деструктивных процессов клеток измерялась концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы. Регистрацию спектра поглощения исследуемых веществ проводили спектрофотометрически в диапазоне волн 238-298 нм с шагом 8 нм. Содержание веществ низкой и средней молекулярной массы выражали в условных единицах (Малахова М.Я., 1995).

Деструкцию надмембранных структур оценивали по уровню сиаловых кислот (Камышников B.C., 2003)в надосадочной жидкости после исследуемых воздействий.

Методы статистической обработки данных.

Математическую обработку результатов проводили, анализируя средние значения, с использованием критерия Стьюдента, для оценки достоверности различий двух выборок. Различие считалось достоверным при Р< 0,05. Статистическая обработка средних проводилась на компьютере IBM PC с использованием пакета прикладных программ EXEL.

Основные результаты исследования.

1. Оценка влияния высокоэнергетических импульсных факторов на показатели свободпорадикалыюго окисления в растворах.

При исследовании действия излучения высокоэнергетических разрядов на водные растворы наблюдалось значительное возрастание уровня свободнорадикальных процессов. Показано, что при увеличении длительности обработки растворов детектируется возрастание количества свободных радикалов. Динамика изменения концентрации свободных радикалов при увеличении времени воздействия от 50с до 600с практически одинакова для всех растворов (Рисунок 1). Концентрация радикальных продуктов увеличивается в 10 раз после воздействия в течение 600 секунд по сравнению с образцами без воздействия.

Свободнорадикальная активность дистиллированной воды и раствора хлорида натрия после обработки высокоэнергетичесими разрядами в изученных режимах регистрировалась на одном уровне и была в 1,6 раза ниже, чем в растворе Хенкса.

Динамика электронновозбуждённых состояний, которая оценивалась по величине хемилюминесценции, индуцированной высокоэнергетическими факторами искрового разряда, отличалась от концентрации свободных радикалов. Наибольшая величина хемилюминесценции наблюдается, сразу после воздействия в течение 5 с в воде, этот показатель в 7 раз выше, чем в солевых растворах (Таблица 1), однако через 1,5 часа в воде хемилюминесценция не регистрируется. В растворе Хенкса сразу после воздействия уровень хемилюминесценции наименьший, а через 1,5 часа нарастает, при этом в растворе хлорида натрия и воде хемилюминесценция практически отсутствует. Это свидетельствует о том, что в растворе Хенкса свободнорадикальные реакции с течением времени интенсифицируются. При больших экспозициях хемилюминесценция регистрируется в растворах в течение 1,5 часов на одинаковом уровне.

МОЛЬ10'7/Л _„ , -............--,. . • ---^ ------- - -._--------

■ раствор Хенкса

□ вода

5 25 50 100 200 300 600 длительность воздействия, с

Рис. 1. Уровень радикальных продуктов в воде и солевых растворах после воздействия некогерентного излучения импульсного искрового разряда

Для оценки вклада в свободнорадикальные процессы озона - одного из основных факторов высокоэнергитических воздействий, проведена серия с озонированием воды и хлорида натрия. Озонирование проводилось до концентрации 5,5 мкмоль.

Таблица 1

Уровень хемилюминесценции в воде и солевых растворах после воздействия некогерентного излучения импульсного искрового разряда М±ш (N = 8)

Серии Хемилюминесценции, мВ (М+гп)

NaCl 0,9% Р-р Хенкса Н20

Некогерентное излучение

5с 0,09±0,009 0,07±0,007 0,45±0,042

50 с 0,35±0,03 0,14±0,01 0,91±0,09

100 с 0,6±0,06 0,41±0,04 0,6±0,06

200 с 0,59±0,06 0,43±0,04 0,62±0,0 6

Озон

600 с 0,25 ±5,2 0,30±0,05 0,21±0,03

Концентрация свободных радикалов и хемилюминесценции воды после воздействия озоном гораздо ниже, чем после воздействия некогерентным излучением искрового разряда.

Таким образом, установлена зависимость концентрации свободных радикалов и уровня хемилюминесценции в растворах от времени воздействия факторов искрового разряда.

В результате исследования действия факторов импульсного электрического разряда на растворы ароматических углеводородов показана динамика разложения фенола и гидрохинона. Воздействие в течение 10 минут не приводило к снижению концентрации фенола, так как по результатам, полученным методом тонкослойной хроматографии, не обнаруживался продукт реакции разложения фенола - гидрохинон. После воздействия в течение 15 минут начиналось разложение фенола, отмечено появление гидрохинона на хроматографической пластине. Через 25 минут воздействия фенол в обработанном растворе не регистрировался. Обработка гидрохинона в течение 60 минут приводила к его полному разложению до Н20 и С02. Высокоэнергетические электроны и радикальные продукты разрядов способны разрушать органические молекулы - основной структурный материал клеток. Плазмохимические реакции при действии разрядов высокой мгновенной мощности ведут к образованию химических соединений, не образующихся или имеющих крайне низкие равновесные концентрации в обычных условиях. (Верещагин И.П.,1985, Бортник ИМ., 1993).

Гидрохинон - одно из соединений, играющих ключевую роль в окислительно-восстановительных процессах при передаче электронов в электронно-транспортной цепи.

Таким образом, показана высокая способность высокоэнергетических импульсных воздействий к разложению структуры ароматических углеводородов.

2. Оценка влияния высокоэнергетических импульсных воздействий различной длительности и энергии на структурно-функциональное состояние и перекисное окисление липидов мембран эритроцитов

При оценке влияния высокоэнергетических импульсных воздействий на мембраны эритроцитов был изучен суммарный показатель свободнорадикального окисления, а также резистентность и проницаемость мембран эритроцитов через сутки после воздействия.

При изучении резистентности эритроцитов через сутки после воздействия плазмы разряда наблюдалось незначительное увеличение количества неразрушенных эритроцитов - на 18% по отношению к контролю. Однако концентрация внеклеточного гемоглобина возрастала в 6 - 8,5 раз. Кислотная резистентность эритроцитов снижалась на 22 %, а при увеличении дозы воздействия в 3 раза снижение составило 15,5%. Концентрация молекул средней и низкой массы при однократном воздействии увеличивалась на 41%. Хемилюминесценция суспензии эритроцитов при воздействии плазмой разряда возрастала в 1,5 - 2 раза.

Таблица 2

Структурно-функциональное состояние и свободнорадикальные процессы на мембранах эритроцитов после воздействия плазмой разряда М±ш(Н=10)

Показатель Контроль Плазма разряда

Однократно Двукратно Трехкратно

Хемилюминесценция, мВ 30± 0,4 38±2,5* 51±3,6* 58±1,8*

Внеклеточный гемоглобин,г/л 9±0,76 60±5* 90±5* 70±3*

Кол-во клеток ЫхЮ12/л 1,7±0,16 2±0,12 2,2±0,09* 2,2±0,1 *

Кислотный гемолиз 3±0,12 2,3±0,05* 2,3±0,02* 2,5±0,15*

ВНСММ 1,7±0,05 2,4±0,08* 1,3±0,04* 1,6±0,02

р<0,005

Через сутки после воздействия на эритроциты наблюдалось достоверное увеличение количества негемолизированных эритроцитов. Число неразрушенных эритроцитов возрастало с увеличением кратности воздействия, т.е. времени и суммарной энергии воздействия. Увеличивалась кислотная резистентность эритроцитов, однако, концентрация внеклеточного гемоглобина возрастала после воздействия на клетки. По видимому, интенсификация процессов ПОЛ и образование сшивок липидов с белками в мембранах эритроцитов способствует сохранению устойчивости мембран.

Сохранение клетки при потере содержимого свидетельствует о процессе образования пор. Этот процесс после воздействия высокоэнергетических импульсов исследуется в последнее время с целью доставки химиотерапевтических препаратов в опухолевые клетки (Шоенбах, 2009).

Исследование влияния наносекундного коронного стримерного разряда (НСКР) на мембраны эритроцитов показало значительное (в 3 раза) снижение уровня хемилюминесценции при воздействии в течении 40 и 80 секунд, возрастание концентрации гемоглобина при всех изученных режимах (в 3-6 раз по сравнению с контролем), а количество неразрушенных эритроцитов увеличивалось в 1,5-5 раза по сравнению с контрольной группой (Таблица 3).

Таблица 3

Структурно-функциональное состояние и свободнорадикальные процессы на мембранах эритроцитов после воздействия наносекундным коронным стримерным разрядом M±m (N = 7)

Показатель Контроль Коронный разряд Коронный разряд 6-ти электродный

Время воздействия 20 с 40 с 80 с Юс 20 с

Хемилюминес-ценция, мВ 30± 0,4 23±2 i0±0,5 10±0,7 30±1 20±1,2

Внеклеточный гемоглобин, г/л 9±0,768 60±3* 60±2* 50±2,8 30±2 40± 2,3

Целые эритроциты №Ю,2/л 1,7±0,16 2,3±0,08 2,6±0,12 3,3±0,1 5,1 ±0,22 4±0,06

Кислотный гемолиз 3±0,12 3,4±0,1 2,1 ±0,05 2,5±0,1 2 2,3±0,08 2,5±0,1

*- различия достоверны по сравнению с контрольной группой, р<0,005

При изучении количества негемолизированных эритроцитов и концентрации внеклеточного гемоглобина через сутки после обработки искровым разрядом с частотами 0,2 Гц и 22 Гц показано, что количество неразрушенных эритроцитов возрастало на 70 %, причем максимально и достоверно при воздействии искровым разрядом с частотой 0,2 Гц (Таблица 4). Количество внеклеточного гемоглобина в этой серии не отличалось от контроля. Наблюдалась стабилизация мембран без образования больших пор. Отмечалось возрастание уровня хемилюминесценции в ответ на минимальные воздействия в течение 20, 40 и 80 секунд, а с увеличением количества энергии при воздействии частотными искровыми разрядами уровень хемилюминесценции снижался до контрольных значений.

Таблица 4

Структурно-функциональное состояние и свободно-радикальные процессы на мембранах эритроцитов после воздействия некогерентным импульсным

Показатель Контроль Искровой разряд Искровой разряд частотный

20 с 40 с 80 с 0,2 Гц Юс 22 Гц 10с

Хемилюминес-ценция, мВ 30± 0,4 71± 0,5 * 60±1,1 * 63± 0,2 * 40± 2,5 * 30± 3,2

Внеклеточный гемоглобин, г/л% 9±0,76 8±0,26 8±0,4 8±0,33 30±2,7* 40±0,9*

Целые эритроциты ЫхЮ12/л 1,7±0,16 2,9*±0,1 2,9*±0,14 2,8*±0,11 2,4*±0,09 2,6*±0,2

Кислотный Гемолиз, мин 3±0,12 3±0,2 2,5*±0,2 3,1±0,15 5,3*±0,2 3,1±0,07

*- р<0,005

При исследовании воздействия озона в концентрации 5-50 мкг/л (соответствует уровню озона при разрядно-импульсных воздействиях) на структурно-функциональное состояние эритроцитов показано, что озон в этой концентрации вызывает незначительные изменения в структурно-функциональном состоянии мембран по сравнению с другими изученными факторами. При увеличении концентрации озона в 30 раз и длительности воздействия в 6 раз наблюдается возрастание концентрации внеклеточного гемоглобина как при воздействиях с большой мощностью в импульсе - при наносекундном коронном стримерном разряде и плазме разряда. Однако действие озона в высокой концентрации вызывает гемолиз 50% клеток, а при высокоэнергетических воздействиях клетки не разрушались.

Таким образом, при воздействиях с большей энергией (коронный разряд и энергоемкое плазменное образование) в мембранах эритроцитов образуются крупные норы. Увеличение количества энергии и времени обработки эритроцитов высокоэнергетическими импульсными разрядами ведет к увеличению проницаемости. Снижается интенсивность хемилюминесценции, возможно в процессе воздействия происходит рекомбинация свободных радикалов (Пискарёв И.М.2000). При воздействии с меньшей энергией уровень хемилюминесценции увеличивается. Сохранение эритроцитарных мембран без изменения внутриклеточного содержимого вызывает воздействие искровым разрядом в течение 10 секунд (частота 0,2 Гц).

При исследовании влияния некогерентного импульсного излучения искрового разряда на молекулярные продукты перекисного окисления липидов эритроцитов наблюдалась общая тенденция снижения концентрации

первичных продуктов перекисного окисления липидов. Максимальное снижение уровня концентрации диеновых коньюгатов в 2,3 раза, в 2,2 раза, в 3 раза наблюдалось при воздействии в течение 120 с, 180 с и 240 с. Значительное снижение концентрации диеновых коньюгатов регистрировалось при воздействии в течение 30 с в 1,79 раза, в 1,69 и 1,66 раза при 60 с и 300 с соответственно. После воздействия некогерентным импульсным излучением в течение 30 с, 60 с, 120 с, 180 с и 240 с на эритроциты наблюдалось снижение концентрации вторичных продуктов триеновых коньюгатов в 1,7 раза. После воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда на эритроциты наблюдалась общая тенденция к снижению уровня оснований Шиффа - конечных продуктов перекисного окисления липидов. Максимальное снижение концентрации оснований Шиффа в 3 раза наблюдалось при длительности воздействия 300 с, в 2,75 раза при 30 с и в 2,54 раза при 120 с.

Таким образом, при воздействии некогерентным импульсным излучением искрового разряда на эритроциты наблюдается снижение уровня концентрации первичных, вторичных и конечных продуктов перекисного окисления липидов.

После исследования адгезивной активности эритроцитов при воздействии некогерентным импульсным излучением искрового разряда показано что при воздействии в течение 10 с и 30 с наблюдается рост адгезивной активности эритроцитов в 1,48 и 1,34 раза соответственно. При других изученных длительностях количество адгезированных клеток снижалось: при 60 с на 21%, при 120 с в 1,77 раза, при 240 с на 18% и при 300 с на 12% по сравнению с контролем (Рис 2).

30 60 120 180 240 к время воздействия, с

Рис.2 Адгезивная активность эритроцитов после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда в различных режимах

Таким образом, наблюдается общее снижение способности эритроцитов к адгезии после воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда в течение 60 - 300 секунд.

Изучение деструкции мембран эритроцитов по уровню веществ низкой и средней молекулярной массы при воздействии некогерентного импульсного излучения искрового разряда, показало, что при воздействии в течение 20 и 40 с некогерентными импульсами, значительно увеличивается концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы в 2-2,5 по сравнению с необработанными клетками. При увеличении воздействия до 80 секунд концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы снижается в 2,5 раза по сравнению с необработанными клетками. Это может указывть на деструкцию надмембранных структур (Малахова, 1999) клеток при более коротких воздействиях при интенсификации свободнорадикальных процессов, а при увеличении длительности воздействия уровень свободнорадикальных процессов снижается за счет рекомбинационных процессов и соответственно снижается уровень молекул средней массы и деструкция надмембранных структур.

3. Структурно-функциональное состояние мембран лимфоцитов после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда

Исследование воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда на лимфоциты, показало изменение интенсивности спонтанной хемилюминесценции лимфоцитов. Уровень свободнорадикальных процессов значительно снизился в 3,43 и 2,77 раза после воздействия в течение 10 с и 30 с. Уровень интенсивности свечения взвеси лимфоцитов после воздействия снижался при всех режимах обработки.

250

° 200 ®

с;

0 150 ш

£ 100 х

1 50

-0О1ПООООО

0 т- <м со о.

1 Длительность воздействия

А . " 1

* ' • ; - V

г*- ш

-2Н Г*1 рС- 1

'' Щ :

Рис.3 Адгезивная способность лимфоцитов после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда

Установлено, после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда на лимфоциты изменяется их адгезия к пластику. При воздействии втечение 10 с и 60 с наблюдается рост адгезивной активности лимфоцитов на 27% и 10% соответственно. Воздействие при других длительностях снижало количество адгезированных лимфоцитов: 15 с на 17%, 30 с на 10%, 300 с на 30% (Рис.3).

Таким образом, при увеличении времени обработки наблюдалась общая тенденция к снижению способности лимфоцитов к адгезии после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда.

При изучении влияния некогерентного импульсного излучения искрового разряда на надмембранные структуры лимфоцитов установлена динамика изменения концентрации сиаловых кислот в суспензии лимфоцитов. После обработки взвеси клеток лимфоцитов частотным искровым разрядом в течение 300 с достоверно возрастала концентрация сиаловых кислот в 2 раза с 1,2±0,07 мМ/л до 2,4±0,03 мМ/л (р<0,05). При воздействии в течение 800 с наблюдалось возрастание концентрации сиаловых кислот в 1,4 раза до 1,6±0,03 мМ/л (р<0,05) по сравнению с контролем.

При исследовании степени деструкции мембран лимфоцитов по уровню веществ низкой и средней молекулярной массы при воздействии некогерентного импульсного излучения искрового разряда показано, что при воздействии в течение 100 с снижается концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы на 25% по сравнению с необработанными клетками. При увеличении времени воздействия до 300 с концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы увеличивается на 16% по сравнению с необработанными клетками.

Таким образом, изучено влияние основных факторов высокоэнергетических разрядов на структурно-функциональное состояние мембран лимфоцитов. Показано: воздействие в течение 100 с некогерентным импульсным излучением снижает деструктивные процессы на мембране лимфоцитов. Увеличение времени воздействия приводит к возрастанию деструктивных процессов.

4. Исследование влияния некогерентного импульсного излучения искрового разряда на структурно-функциональное состояние мембран клеток костного мозга

При исследовании молекулярных продуктов перекисного окисления липидов после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда на клетки костного мозга отмечено повышение концентрации диеновых коньюгатов. При воздействии в течение 1 минуты концентрация диеновых коньюгатов возросла на 33%, при воздействии в течение 2 мин на 7% по сравнению с клетками без воздействия.

После воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда на клетки костного мозга в течении 1 минуты наблюдался рост концентрации триеновых коньюгатов на. 90%, а увеличение времени

воздействия до 2 мин привело к снижению концентрации на 10% по сравнению с контрольной серией. Наблюдалось незначительное снижение концентрации оснований Шиффа - на 13% при воздействии в течение 2 мин.

Изучение процессов адгезии клеток костного мозга к пластику после воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда показало снижение количества адгезированных клеток костного мозга. При обработке в течение 1мин число клеток снижается на 43%, при 2мин - на 51%, при трёхкратном воздействии в течение 1мин - на 26%, при трёхкратном воздействии в течение 2мин - на 49%.

Таким образом, показано, что воздействие некогерентным импульсным излучением искрового разряда на клетки костного мозга снижает их способность к адгезии и вероятно влияет на состояние рецепторного аппарата клеток.

5. Изменение фосфолипидного состава мембран после действия основных факторов высокоэнергетических разрядов на клетки.

После воздействия озоном концентрации 1500 мкг/л в липидном спектре эритроцитов происходят следующие изменения: сразу после озонирования увеличивается содержание фосфатидилсерина, лизолицетина и сфингомиелина. Снижается процентное содержание холестерина в 2 раза. Изменяется процентное соотношение холестерин.'фосфолипид. В контрольной группе это соотношение - 1:1, а после озонирования - 1:3. Содержание лизоформ увеличивается в несколько раз по сравнению с эритроцитами не подвергшимися действию озона.

После воздействия коронного разряда на лимфоциты снижается содержания холестерина на 70%, на 50% снижается содержание фосфатидилхолина и в 2 раза увеличивается содержание лизофосфатидилхолина. Происходит также снижение сфингомиелина при действии импульсного некогерентного излучения в течение 80 с. Расхцепление сфингомиелина может приводить к накоплению сфингозина, одного из предполагаемых участников апоптоза.

Таким образом, высокие концентрации озона вызывают значительные изменения в фосфолипидном составе, эти изменения сопоставимы с изменениями при действии высокоэнергетических импульсных разрядов.

Заключение. Таким образом, установлена зависимость концентрации свободных радикалов и уровня хемилюминесценции в растворах от времени воздействия факторов искрового разряда. Показана высокая способность высокоэнергетических импульсных воздействий к разложению структуры ароматических углеводородов.

Высокоэнергетические импульсные воздействия вызывают развитие и рекомбинацию радикальных реакций клеточных взвесей в зависимости от времени воздействия. Увеличение времени воздействия приводит к увеличению проницаемости мембран, и снижению показателей хемилюминесценции ниже контрольных значений. При воздействиях с большей энергией (коронный разряд и энергоемкое плазменное образование)

в мембранах эритроцитов образуются крупные поры, снижается интенсивность хемилюминесценции, возможно в процессе воздействия происходит рекомбинация свободных радикалов. При воздействии с меньшей энергией уровень хемилюминесценции увеличивается. Воздействие некогерентным импульсным излучением искрового разряда на лимфоциты и клетки костного мозга приводит к снижению адгезивной активности за счет перекисной модификации липидов и белков мембран. Изменения в фосфолипидном составе, мембран при действии высокоэнергетических импульсных разрядов сопоставимы с изменениями при действии озона в высоких концентрация.

Выводы

1. Воздействие основными факторами искрового высокоэнергетического разряда - озоном и некогерентным излучением активируют свободнорадикальные процессы в водных средах и солевых растворах. Уровень свободнорадикальных процессов повышается при увеличении времени воздействия. После воздействия искровым разрядом в течение 100 секунд свечение хемилюминесценции сохраняется в течение 1,5 часов. Наибольшее суммарное количество активных форм кислорода при всех режимах воздействия детектируется в солевом растворе Хенкса.

2. Высокоэнергетические импульсные воздействия способны эффективно разлагать ароматические углеводороды - фенол и гидрохинон в течение 0,3 -1,5 часов.

3. Основным фактором, инициирующим свободнорадикальные процессы в растворах является некогерентное излучение. Вклад озона при генерации разряда в свободнорадикальные процессы незначительный. Для получения эффекта равнозначного эффекту воздействия некогерентного излучения требуется увеличение концентрации озона в 30 раз или увеличение времени воздействия озоном в б раз (60 минут).

5. Основные факторы высокоэнергетических импульсных разрядов изменяют фосфолипидный состав мембран. Высокоэнергетических импульсные разряды вызывают значительные изменения фосфолипидного состава мембран. После воздействия коронным разрядом на лимфоциты снижается содержание холестерина на 70%, фосфатидилхолина на 50%, содержание лизофосфатидилхолина увеличивается в 2 раза.

6. После воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда в течение 60 - 240 секунд снижается концентрация продуктов перекисного окисления липидов и наблюдается снижение

способности клеток к адгезии. Адгезия клеток костного мозга после воздействия снижается при всех изученных режимах.

7. Некогерентное импульсное излучение изменяет состояние надмембранных структур клеток. После обработки взвеси клеток некогерентным импульсным излучением искрового разряда в течение 300 с достоверно в 2 раза возрастает концентрация сиаловых кислот.

8. Уровень веществ низкой и средней молекулярной массы при воздействии некогерентного импульсного излучения искрового разряда в течение 100 с снижает концентрацию веществ низкой и средней молекулярной массы на 25%. При увеличении времени воздействия до 300 с концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы увеличивается на 16% по сравнению с необработанными клетками.

Практические рекомендации

1. На основании полученных данных разработано и запатентовано «Средство оценки антиокислительной активности химических соединений и биологических жидкостей». Патент на изобретение РФ №2337359 2008 г. Способ рекомендуется использовать для определения степени антиоксидантной активности водорастворимых соединений.

2. Полученные данные по активации свободнорадикальной активности в растворах являются частью разработанного способа оценки антиокислительной активности химических соединений и биологических жидкостей. Патент на изобретение РФ №2337359 2008, рекомендуемого для применения в ветеринарной практике и биологических исследованиях.

3. Новые данные о свободнорадикальных процессах и структурно-функциональных изменениях мембран эритроцитов, лимфоцитов, костного мозга при действии высокоэнергетических электрофизических факторов могут быть включены в программы по биологии, физиологии, биохимии, патофизиологии при подготовке специалистов медико-биологического и ветеринарного профиля.

Список работ опубликованных по теме диссертации

Публикации в рецензируемых изданиях рекомендованных ВАК РФ:

1. Зуймач Е.А., Иванова И.П., Спиров Г.М., Кирилов A.A. Экспериментальные исследования действия факторов электрического разряда высокой мгновенной импульсной мощности на свободнорадикальное состояние и структурно - функциональные свойства клеток // Биомедицинская радиоэлектроника. - 2009. - № 9. - С. 55-58

2. Зуймач Е.А., Спиров Г.М., Ковалёва JI.H., Усенко С.И., Цедрик П.Н. Очистка воды от фенола методом разложения при действии комплекса электрофизических факторов // Наукоёмкие технологии. - 2009. - №11. - С. 27-32.

3. Пискарев И.М., Ушканов В.А., Селемир В.Д., Спиров Г.М., Малеванная (Пикарь) И.А., Зуймач Е.А. Образование озона и УФ-излучение мощных импульсных электрических разрядов // Журнал физической химии. -2008. - Т. 82, №9. - С.. 1754-1758.

Патенты:

1. Иванова И.П., Кирилов A.A., Зуймач Е.А. Способ оценки антиокислительной активности химиических соединений и биологических жидкостей. Патент на изобретение РФ Патент на изобретение от 27.10.2008 г. N2337359. // Бюллетень 2008. - №30. - С. 285.

Публикации в научных журналах, сборниках научных статей, материалах конференций:

1. Иванова И.П., Спиров Г.М., Зуймач Е.А., Шлепкин С.И Исследование биологических эффектов высокоэнергетических факторов наносекундных коронных и сильноточных электрических разрядов // Тез.док. Международное совещание "Человек и электромагнитные поля". - Саров. -2003. - С. 33-34.

2. Иванова И.П., Заславская М.И., Зуймач Е.А. Влияние некогерентного импульсного излучения на активность фагоцитоза и ПОЛ крови крыс // Тез.докл. 3-го съезда биофизиков России. - Воронеж. - 2004. - С. 650-651.

3. Зуймач Е.А., Иванова И.П., Литвинова Л.Г., Семериков А.Е. Оценка влияния импульсного некогерентного излучения на свободно-радикальные процессы в системах in vitro // Естествознание и гуманизм. - Томск. - 2007. -Т. 4, №1. -С.39.

4. Ковалёва Л.И., Зуймач Е.А., Девяткова Н.С., Спиров Г.М., Сухаренко В.И., Лобкаева Е.П., Иванова И.П. Влияние импульсных электромагнитных полей на содержание пероксидов в липидах биологических сред // Тр. II Международной конференции «Человек и магнитные поля». - Саров. - 2007. -С. 126-131.

5. Зуймач Е.А., Иванова И.П., Спиров Г.М., Кирилов A.A. Исследование действия факторов импульсного электрического разряда на моделируемые свободно-радикальные процессы // Тр. II Международной научной конференции «Высокоинтенсивные физические факторы в биологин, медицине, сельском хозяйстве и экологии». - Саров. - 2009. - С. 82-88.

Тираж 100 экз. Объём 1,4 п.л. Заказ 327. Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия 603107, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, 97 Типография НГСХА

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зуймач, Елена Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Физикохимические процессы при высокоэнергетических импульсных разрядах

1.2. Свободнорадикальные процессы в животном организме. Перекисное окисление липидов —

1.3 .Мембраны, структура и функции

1.4. Эритроциты

1.4.1. Характеристика эритроцитов в норме

1.4.2. Сведения о эритроцитарной мембране и функционировании мембраносвязанных ферментов

1.5 Лимфоциты

1.5.1 Представительство лимфоцитов в иммунной системе

1.5.2 Филогенез лимфоцитов

1.5.3 Роль клеточной мембраны в осуществлении функции лимфоцитов

1.6 Костный мозг

1.7. Изменение липидного и жирнокислотного состава мембран при инициировании ПОЛ

1.8. Экстрацеллюлярные контакты

Адгезионные взаимодействия

Функциональная роль адгезии для клеток костного мозга.

1.9. Теоретические предпосылки использования импульсных высокоэнергетических воздействий для изучения стуктурно-фуниональных изменений мембран

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние высокоэнергетических электрофизических факторов на свободнорадикальные процессы и структурно-функциональное состояние мембран клеток животных"

Актуальность проблемы.

В последнее время, как в России, так и за рубежом ведется исследование биологических эффектов высокоэнергетических импульсных электрофизических факторов. Особенностью высокоэнергетических импульсных факторов является высокая плотность энергии и микросекундная или наносекундная длительность импульса. Изменение интенсивности и длительности действия высокоэнергетических импульсных факторов приводит к изменению соотношения окислительно-восстановительных процессов и свободнорадикальных продуктов в среде (Авраменко Р.Ф.,1990, 1992, Pettersson J.B., Lindroth Н.С. 1992, Franke К.-Р, Meissner Н. 2000, Ивановский А. В., 2000, Бугаенко JI.T., 2002, Спиров, Иванова 2005). Поэтому в настоящее время высокоэнергетические импульсные воздействия применяют для очистки воды, разложения органических веществ, стерилизации и дезинфекции (Верещагин И.П., 2000, Hoeben W.F., 2000, Пискарев И.М, 2000, 2001, 2003 Иванова И.П., Зуймач Е.А. 2008).

В результате действия высокоэнергетических факторов образуются электронно-возбужденные состояния молекул с переносом энергии кванта, (внутренний фотоэффект), что влечет за собой электролитическую диссоциацию и ионизацию молекул (Райзер Ю.П. 1992, Базелян Э.М., 1997, 1998, 1998, Пискарев, 2008), которые в свою очередь могут изменять структурно-функциональное состояние мембран и метаболизм клеток. В связи с этим актуальным является изучение свободнорадикильных процессов и структурно-функционального состояния клеток после воздействия высокоэнергетических электрофизических факторов короткоимпульсных разрядов.

Цель и задачи исследования

Цель работы - исследование свободнорадикальных процессов и структурно-функциональных изменений мембран клеток крови, лимфоцитов, костного мозга при действии высокоэнергетических электрофизических факторов для определения диапазонов воздействия, ведущих к эффектам стабилизации и дестабилизации органических молекул и клеточных структур.

Основные задачи исследования.

1. Изучение свободнорадикальных процессов и суммарной концентрации окислителей под действием основных факторов высокоэнергетических разрядов с различными параметрами в дистиллированной воде, водном растворе хлорида натрия, растворе Хенкса

2. Исследование способности высокоэнергенических. факторов разлагать органические молекулы фенола и гидрохинона в водных растворах.

3. Оценка вклада основных факторов высокоэнергетических разрядов в свободнорадикальные процессы мембран эритроцитов, лимфоцитов и клеток костного мозга.

4. Определение резистентности мембран клеток и уровня молекул средней массы после высокоэнергетических воздействий в различных режимах.

5. Оценка влияния высокоэнергетических короткоимпульсных воздействий на перекисное окисление липидов мембран клеток.

6. Исследование фосфолипидного состав мембран и состояния надмембранных структур после высокоэнергетического воздействия.

Научная новизна.

Выявлены закономерности изменения свободнорадикальных процессов под действием высокоэнергетических факторов, на основе которых разработан способ активации свободнорадикальных процессов и оценки антирадикальной и антиоксидантной активности веществ.

Оценены изменения структурно - функциональных свойств клеточных мембран при воздействии основными факторами высокоэнергетических импульсных разрядов. Основные факторы высокоэнергетических импульсных разрядов вызывают активацию или торможение свободнорадикальных реакций определяя стабилизацию или деструкцию мембран в зависимости от режима воздействия.

Теоретическая и практическая значимость работы Анализ проведенных исследований показал, что полученные данные позволяют объяснить биологические эффекты высокоэнергетических импульсных воздействий и дать физиологически обоснованные рекомендации по их использованию при исследовании биологических мембран. По результатам работы предложен метод изучения антирадикальной и антиоксидантной активности веществ «Способ оценки антиокислительной активности химиических соединений и биологических жидкостей» Патент на изобретение РФ N 2337359 2008 г.

Положения, выносимые на защиту.

1. Высокоэнергетическое воздействие основными факторами искрового разряда активирует свободнорадикальные процессы в модельных растворах. После воздействия искровым разрядом в течение 100 секунд свечение хемилюминесценции сохраняется в течение 1,5 часов.

2. Установлено, что наибольшее суммарное количество активных форм кислорода детектируется в растворе Хенкса. Высокоэнергетическое воздействие искровым разрядом в течение 0,3 -1,5 часов на растворы фенола и гидрохинона вызывают разложение этих органических соединений.

3. Основные факторы высокоэнергетических импульсных воздействий вызывают активацию или торможение свободнорадикальных реакций в суспензиях клеток, в зависимости от режима воздействия. Наибольшая активация свободнорадикальных процессов происходила после воздействия энергоемким плазменным образованием, а торможение вызывали некоторые режимы искрового и коронного разряда.

4. Режимы воздействия высокоэнергетических факторов определяют степень стабилизации и деструкции мембран и надмембранных структур клеток. Наибольшая степень деструкции мембран зарегистрирована после воздействия энергоемким плазменным образованием. Стабилизация мембран происходила после действия некоторых режимов искрового и коронного разряда.

5. Высокоэнергетические факторы изменяют фосфолипидный состав мембран, изменение фосфолипидного состава мембран после воздействия влияет на устойчивость мембран.

Апробация работы.

Общероссийский медицинский форум «Медицина за качество жизни» ноябрь 2008 Нижний Новгород; II Международная научная конференция «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии, медицине, сельском хозяйстве и экологии» Саров, апрель 2008; II Международная научная конференция "Человек и электромагнитные поля" Саров, 2007; Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология-2005» Пущино, 2005, Международная конференция "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" Смоленск,2005,.III съезд биофизиков России, Воронеж, 2004; Международный симпозиум «Актуальные проблемы биофизической медицины» г. Киев, 27-29 мая 2004 года; Международный научный семинар «Высокоинтенсивные физические факторы в биологии , медицине, сельском хозяйстве и экологии» апрель Саров,2004; International conference "Reaktive oxygen and nitrogen species antioxidants and human health" Smolensk 2003; Международное совещание "Человек и электромагнитные поля", Саров 2003; VI Международная конференция "Биоантиоксидант"- Москва, 2002.

Публикации

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на — страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов. Список цитируемой литературы включает — источников (— отечественных и — зарубежных). Работа содержит ~ рисунков и ~ таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Зуймач, Елена Анатольевна

Выводы

1. Воздействие основными факторами искрового высокоэнергетического разряда - озоном и некогерентным излучением активируют свободнорадикальные процессы в водных средах и солевых растворах. Уровень свободнорадикальных процессов повышается при увеличении времени воздействия некогерентным излучением после воздействия искровым разрядом в течение 100 секунд свечение хемилюминесценции сохраняется в течение 1,5 часов. Наибольшее суммарное количество активных форм кислорода при всех режимах воздействия детектируется в солевом растворе Хенкса.

2. Высокоэнергетические импульсные воздействия способны эффективно разлагать ароматические углеводороды — фенол и гидрохинон в течение 0,3 -1,5 часов.

3. Основным фактором инициирующим свободнорадикальные процессы в растворах является некогерентное излучение плазма. Вклад озона, являющегося одним из факторов высокоэнергетических разрядов в свободнорадикальные процессы не является определяющим в концентрации, соответствующей концентрации АФК исследуемых воздействий. Для получения эффекта действием озона, равнозначного эффекту воздействия некогерентного излучения требуется увеличение концентрации озона в 30 раз или увеличение времени воздействия озоном в 6 раз (60 минут).

4. Увеличение количества энергии и времени обработки эритроцитов высокоэнергетическими импульсными разрядами ведет к увеличению проницаемости и деструкции мембранной структуры. При воздействии энергоемкого плазменного образования и наносекундного коронного стримерного разряда в мембранах эритроцитов образуются поры. Стабилизацию эритроцитарных мембран без изменения внутриклеточного содержимого вызывает воздействие искрового разряда в течение 4-8 секунд (частота 0,2 Гц).

5. Озон в концентрации и длительности воздействия, соответствующем уровню озона при разрядно-импульсных воздействиях (длительность: наносекунды- микросекунды, концентрация 5- мкМ), не оказывает влияния па структурно-функциональное состояние эритроцитов. В концентрации 1500 мкг/л производит выраженное токсическое действие на клетки.

6. Основные факторы высокоэнергетических импульсных разрядов изменяют фосфолипидный состав мембран. Высокоэнергетических импульсные разряды вызывают значительные изменения фосфолипидного состава мембран. После воздействия коронным разрядом на лимфоциты снижается содержания холестерина на 70%, фосфатидилхолина на 50%, содержание лизофосфатидилхолина увеличивается в 2 раза.

7. После воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда при длительности обработки 60с, 120с, 240с вместе с уменьшением концентрации продуктов ПОЛ мембран наблюдается снижение способности клеток к адгезии. Адгезия клеток костного мозга после воздействия снижается при всех изученных режимах.

8. Некогерентное импульсное излучение изменяет состояние надмембранных структур клеток. После обработки взвеси клеток частотным ИР в течение 300 с в эксперименте достоверно возрастает концентрация сиаловых кислот в 2 раза.

9. Уровень веществ низкой и средней молекулярной массы при воздействии некогерентного импульсного излучения искрового разряда в течение 100 с снижает концентрацию веществ низкой и средней молекулярной массы на 25%. При увеличении времени воздействия до 300 с концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы увеличивается на 16% по сравнению с необработанными клетками.

10. Установлен диапазон короткой длительности воздействия ИР, ведущего к стабилизации мембран, активации АО защиты, без её напряжения, активации адгезии.

Заключение

Исследование действия основных факторов высокоэнергетических импульсных разрядов на модельные растворы показало значительный уровень инициируемых свободнорадикальных процессов. При увеличении длительности обработки излучением частотного искрового разряда увеличивается количество свободных радикалов в растворах. Уровень постепенно увеличивается к 600 секундам в 10 раз. Динамика увеличения уровня свободных радикалов при увеличении времени воздействия от 50с до 600с практически одинакова для всех растворов.

Режимы диапазона короткой длительности воздействия вызывают активацию всех процессов в эритроцитарной взвеси- ПОЛ, АО защиты, адгезии клеток, резистентность. При действии ИР на лимфоциты показано изменения спонтанной хемилюминееценции, уровень свободно-радикальных процессов снижался при всех режимах, при низких дозах произошло значительное снижение в 3,43 и 2,77 раза при 10с и 30с соответственно, после обработки в остальных режимах длительности снижение значения S составило 11%-20%. Интенсивность свечения взвеси лимфоцитов после обработки 10с и 15с статистически значимо снизилась в 1,61 раза. Увеличение длительности воздействия не вызвало столь ярко выраженного снижения показателя. Тенденция снижения уровня свободно-радикальных процессов при исследовании индуцированной ХЛ наблюдалась при всех режимах воздействия ИР на фоне не критической активации свободнорадикальных процессов. Возможно, при коротких диапазонах длительностей воздействия, стимуляция активности антиоксидантных систем приводит к снижению ПОЛ. При увеличении времени воздействия свободнорадикальные процессы уравновешиваются с антиоксидантной защитой. В отличие от. клеточных взвесей свободнорадикальные показатели в растворах стабильны в течении длительного времени и снижаются после внесения антиоксидантов.

Высокоэнергетические импульсные воздействия вызывали развитие и рекомбинацию радикальных реакций клеточных взвесей в зависимости от времени воздействия. Увеличение времени воздействия приводило к увеличению проницаемости мембран, и снижению показателей хемилюминесценции ниже контрольных значений. Таким образом, воздействие некогерентным импульсным излучением искрового разряда на лимфоциты при всех режимах длительности снижает уровень свободнорадикальных процессов в клетках, возможно вследствие рекомбинации радикалов свободнорадикальные процессы после воздействия искровым разрядом реализуются за счет перекисной модификации липидов и возможно белков мембран.

Основные факторы высокоэнергетических импульсных разрядов изменяют фосфолипидный состав мембран. Высокоэнергетические импульсные разряды вызывают значительные изменения фосфолипидного состава мембран. После воздействия коронным разрядом на лимфоциты снижается содержания холестерина на 70%, фосфатидилхолина на 50%, содержание лизофосфатидилхолина увеличивается в 2 раза.

При действии озона изменения в фосфолипидном составе близки к изменениям отдельных фракций, вызванных действием высокоэнергетических импульсных разрядов. Но для эффекта, вызываемого действием разрядов требуется гораздо меньшее время ( Например, при действии НСКР в требуется мгновение, а при инкубировании с озоном i * - , требуентся 5 минут.

Стабилизацию эритроцитарных мембран без изменения ij v внутриклеточного содержимого вызывает воздействие искрового разряда

ИР) в течение 4-8 секунд, диапазон короткой длительности воздействия, 1 частота 0,2 Гц). Увеличение количества энергии и времени обработки мембран эритроцитов высокоэнергетическими импульсными разрядами ведет к увеличению проницаемости и разрушению мембранной структуры.

Наблюдается общее снижение способности эритроцитов к адгезии после воздействия некогерентного импульсного излучения искрового разряда. Однако, при низких дозах воздействия проявляется стимуляция адгезивных свойств. Изучение процессов на мембране эритроцитов по уровню веществ низкой и средней молекулярной массы при воздействии излучения искрового разряда, показало, что при воздействии 20 и 40 некогерентными импульсами, значительно увеличивается концентрация веществ низкой и средней молекулярной массы в 2-2,5 по сравнению с необработанными клетками. Режимы диапазона короткой длительности воздействия вызывают активацию всех процессов — ПОЛ, АО защиты, адгезии, резистентности на фоне не критической активации свободнорадикальных процессов.

Адгезивная способность лимфоцитов после воздействия некогерентным импульсным излучением искрового разряда. В тоже время снижается уровень спонтанной и индуцированной хемилюминесценции после воздействия на лимфоциты. При длительных воздействиях, от 300 с, увеличивается концентрация сиаловых кислот и содержание веществ низкой и средней молекулярной массы, что свидетельствует о деструктивных процессах, прошедших на мембране лимфоцитов.

При однократном воздействии импульсным искровым разрядом в течение 300 с ХЛ костномозговой суспензии достоверно увеличивается на 70,7%, а АОА снижается на 41% по сравнению с контрольной серией. При увеличении числа импульсов в данном исследовании уровень ХЛ перестает достоверно отличаться от контроля. Возможно такой эффект наблюдается из-за того, что в процессе облучения клетки в ней образуется такое количество радикалов, которое приводит к их рекомбинации друг с другом. Показано снижение интегрального показателя ЭТ и продуктов белкового обмена при действии в течение 300 и 100 с. Также происходит снижение адгезивности клеток при увеличении длительности воздействия. ^

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зуймач, Елена Анатольевна, Нижний Новгород

1. Авраменко Р.Ф. Исследование плазменных образований, инициируемых эрозионным разрядом /Р.Ф. Авраменко и др.//.-ЖТФ.-1990.-Т.60, вып.12.-С.57-64

2. Амиров P. X. Динамика диссипации энергии в наносекундном коронном разряде /Р. X. Амиров и др //Теплофизика высоких температур.-1991.-Т.29, №6.- С.1053-1059

3. Анохина Е. Б., Буранкова JI. Б. Цитология 2007 т.49 №9, с.712

4. Аристова Н.А., Пискарев И.М. Генерирование озоно-гидроксильной смеси в коронном электрическом разряде. / Н.А Аристова, И.М. Пискарев //Журнал физической химии.- 2003 .-Т. 77, № 5,- С. 813 816.

5. Астахова B.C. Остеогенные клетки- предшественники костного мозга человека.- Киев: Феникс, 2000.-С:7-20

6. Афанасьев И.Б. Свободнорадикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах. // Кислородные радикалы в химии биологии и медицине. Рига : РМИ. - 1988.- с. 9 - 23.

7. Афанасьев Ю. И., Юрина Н. А. Гистология, цитология, эмбриология, М.: Медицина.- 2000.- с.737

8. Бабушкин В.А., Бычковская С.В.,Караченцева Н.В. Микровязкость области белок-липидного взаимодействия в мембранах лимфоцитов и эритроцитов у детей с атоническим дерматитом и бронхиальнойастмой//4-й Конгресс Российской Ассоциации Аллергологов и1135

9. Клиническихиммунологов (РААКИ)., Сборник трудов, том 2, тезисы докладов. 29-31 мая 2001года, Москва. М.,2001. С. 225.

10. Базелян Э. М., Ражанский И. М. Искровой разряд в воздухе. // Э. М Базелятт., И. М. Ражанский.-Новосибирск: Наука, 1988. -164 с.11 .Базелян Э.М., Райзер Ю.П. Искровой Разряд ,-М.: МФТИ, 1997. 317 с.

11. Барабой В.А. Перекисное окисление, биоэнергетика в механизме стресса. Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. / Барабой В.А. М. 1993. - С. 27-33.

12. Бароненко В.А.- Эритроцит-мишень для стресса. // Наука в СССР." 1988.Т.ЗО.-№1.-С.5-18.

13. Бахтаев Ш. А. Коронный разряд на микропроводах./ Ш. А. Бахтаев. -Алма-Ата: Наука, 1984. 208 с.

14. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М,- Медицина.- 1989.-370 с.

15. Боголюбов В.М., Пономаренко Г.Н. • Общая физиотерапия.// В.М Боголюбов., Т.Н. Пономаренко.- М., СПб.: СЛП,- 1998.- 480с.

16. Бойтлер Э. Нарушение метаболизма эритроцитов и гемолитическая анемия // М.- Медицина.- 1981 с. 13-33.

17. Буеверова Э. И, Брагина Е. В. Неадгезивные клеточные субпопуляции полипотентных мезенхимных стромальных клеток из кроветворных органов крыс и мышей.// Цитология -2007.- т.49. №9, с.721-722

18. Буеверова Э. И, и др. Сравнительный анализ адгезивности мезенхимных стволовых клеток костного мозга и эмбриональной печени крысы к культуральному пластику и фибронекгину. // Цитология .-2007.- т.49. №9, с.722

19. Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в. клетке/ Е.Б. Бурлакова // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ,- М.: Наука.-1981.- С. 23 34.

20. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Молочкина Е.М. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. / Е.Б. Бурлакова , А.Н Голощапов, Е.М. Молочкина.- М.Д 982. 184 с.

21. Бурлакова Е.Б., Пальмина Н.П. Антиоксиданты в химиотерапии опухолей//.-Вопр.онк. 1990. Т.36, № 10. С.1155-1162.

22. Бурлакова, Е.Б. Сверхмалые дозы- большая загадка природы //.- Наука и биотехнологии в промышленности.- 2002.-В. 3.- №4.-С. 24-27

23. Бурлакова Е.Б., Хохлов А. П. Изменение структуры и состава липидов после воздействия природных и синтетических антиоксидантов. Влияние на передачу информационных сигналов на клеточном уровне. //Биол. мембраны, 1985 Т2 №6 С. 557-565

24. Бычков В.Л.Об электрическом заряжении полимерных структур / B.JI. Бычков,- М: МИФИ.- 1992.-16с.

25. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача. // -Екатеринбург: Уральский рабочий.- 1994. 384 с.

26. Ветохин С.С., Семенкова Г.Н., Черенкевйч С.Н. Хемилюминесцентные методы анализа, процесса активации клеток. // Люминесцентный, анализ, в медико-биологических исследованиях. Рига,! 987: РМИ. 81—85:

27. Владимиров Ю. А. Лекции по биофизике мембран /ДО. А. Владимиров.-М:.,МГУ,- 1999.

28. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика, L987.-вып. 5. С.838-839.

29. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и патология клетки./ Ю.А. Владимиров .- М.,1979.47 с.

30. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты//Вестник РАМН. -1998. № 7. -С 47-50

31. Владимиров Ю.А. Три гипотезы о механизме действия лазерного облучения на клетки и организм человека // Ю.А. Владимиров /Эфферентная медицина. М.: ИБМХ РАМН, 1994 - С. 51-67.

32. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. Свободные радикалы в живых системах Итоги науки и техники. Сер. Биофизика./ Ю.А Владимиров, О.А Азизова, А.И. Деев .-М., 1991.т. 29. 249 с.

33. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах./ Ю.А Владимиров, А.И. Арчаков.- М.: Наука.-1972.-272с.

34. Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов./ Ю.А Владимиров, А .Я Потапенко.-М.:Высшая школа, 1989. 237 с.

35. Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. / Ю.А Владимиров., А.Я Потапенко.-М.1. Высшая школа.-, 1989.-е.

36. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Н.В. Грудина и др. Хемилюминесцентный метод при обследовании животных, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения. \\ Бюл. Эксп. Биол. и мед; 1996. - № 1.- С. 39-41.t

37. Гаврилов O.K., Козинец Г.И., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови. Москва: Медицина, 1985; 288с

38. Гиттельзон А.И., ТерсковВ.Н. Факторы влияющие на стойкость эритроцитов в кровяном русле Вопросы биохимии, биофизики и патологии эритроцитов / А.И Гиттельзон., В.Н. Терсков Новосибирск,- 1962 е.- 342.

39. Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц ; Перевод с англ. Ю. А. Данилова; Под ред. Н. Е. Бузикашвили, Д. В. Самойлова. -М. Изд. дом "Практика".- 1999.-459 с.

40. Гогвадзе Г.В. Участие фосфолипазы А2 в индуцированном продуктами ПОЛ разобщении митохондрий печени крыс /Г.В. Гогвадзе и др.//.-Биохимия.- 1990,- Т.55, вып. 12.- С. 2195-2199.

41. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфолипидов/Г.А.Грибанов/.-Вопросы мед.химии.-1991.-Т. 37, вып.4.- с.2-7.

42. Грошинская И.А. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных / И.А. Грошинская//.-Вопросы мед.химии.- 1999.- Т. 45, вып. 1.-С.53-57.

43. Гуреева Н.В., Дарюхина У.Н., Крысин А.И. О взаимосвязи строения иактивности природных и синтетических антиоксидантов. \\1

44. Свободнорадикальные процессы: экологические; фармакологические и клинические аспекты. \\ Интернациональная конференция, С-Петербург.-1999.-с.769.

45. Гуськов Е.П. , Лукаш А.И. Системная реакция многоклеточных организмов на окислительный стресс. \\ Биоантиоксидант. 1989.- т.2.-с.ЗЗ.

46. Деев А.И., Добрецов Г.Е., Аркхольд И.И., Владимиров Ю.А. Уменьшение площади поверхности фосфолипидных мембран при перекисном окислении липидов. \\ Биол. мембраны, 1989,- Т. 6.- №11.-с.1227-1231.

47. Ермакова И.И., Сакута Г.А, Черткова Т.А., Романюк, А.В., Морозов В.И. Выделение и характеристика протеогликанов культуры миобластов крысы. Биохимия, 2007 т 72 с. 560—567.

48. Ермакова И.И. и др. Протеогликаны внеклеточного матрикса миобластов L6J1. характеристика и влияние на адгезию. Цитология, 2008 т 50 с. 692-698

49. Жаворонок Т.В., Степовая Е.А., Рязанцева Н.В. и др. Нарушение окислительного метаболизма при острых воспалительных заболеваниях // Клиническая лабораторная диагностика. 2006. - № 12. - С. 10-14.

50. Журавлев А.И. Закономерности свободнорадикального окисления в тканях животных организмов/ А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982. С. 15-65.

51. Журавлев А.И. Свечение живых тканей/ А.И Журавлев/ М.:Наука,1966. 250 с.54.3енков Н.К. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика/ Н.К. Зенков, Е.Б Меньшикова, С.М Шергин./. -Новосибирск: РАМН, Сибирское Отделение. 1993. - 181 с.

52. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах/ Н.К. Зенков , Е.Б Меныцикова. // Успехи современной биологии. 1993. Т.113, вып.З. С.286-296.

53. Иванова, И.П. Влияние некогерентного импульсного излучения на активность фагоцитоза и ПОЛ крови крыс с оральным кандидозом / И.П. Иванова, М.И. Заславская, Е.А. Зуймач //3-й съезд биофизиков

54. России: Материалы 3-го съезда биофизиков России., Воронеж, Россия, 24-29 июня. 2004,-Воронеж., 2004.- С. 650-651.

55. Иванова, И.П. Озон и активные формы кислорода высокоэнергетических импульсных разрядов. / И.П. Иванова, М.И. Заславская //Нижегородский медицинский журнал. Раздел «Озонотерапия».- 2005.- С.ЗО .-ISSN 0869-0936.

56. Иванова, И.П. Фунгицидное действие некогерентного импульсного света / И.П Иванова. // Современные наукоемкие технологии .-2005.-№3.- С.91-92.- ISSN 1812-7320.

57. Иванова, И.П. Торможение пролиферативной активности клеток лимфосаркомы Плисса высокоэнергетическими импульсными факторами журнал / И.П. Иванова // Современные наукоемкие технологии,- 2005,- №3.- С.92-93.- ISSN 1812-7320.

58. Ивков В.Г., Берестовский Т.Н. Липидный бислой биологических мембран.-М. :Наука.-224с.

59. Каган В.Е., Орлов О.Н., Пршгапко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. / В.Е Каган., О.Н Орлов., Л.Л. Прилипко // Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Биофизика. М. ,1986. Т18 .136 с.

60. Камышников B.C. Справочник по по клинико-биохимической лабораторной диагностике. ./ B.C. Камышников /.- Минск: Беларусь, 2003. 465 с.

61. Казеннов A.M., Маслова • М.Н., Шалабодов А.Д. Роль белков мембранного скелета безъядерных эритроцитов в функционировании мембранных ферментов. // Докл. АНСССР.-1990.-Т312.-№1.-с.223-226.

62. Кару Т. И., Пятибрат Л. В., Есеналиев Р. О. Влияние монохроматизированного света красной и ближней инфракрасной областей спектра на адгезивные свойства кисточной мембраны в зависимости от длины волны. / Т. И Кару., Л. В Пятибрат., Р. О.

63. Есеналиев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1994. -№6. -С.670-672.

64. Клебанов Г.И., Ю.А. Владимиров/ Клеточные механизмы прайминга илактивации фагоцитов/ Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Успехи соврем. биол.-1999- Т. 119, №5.- С.462-475.

65. Климов А.Н., Васильева JI.E., Маковейчук Е.Г, Лозовский В.Т.,Марачева Е.Я., Хейфец Г.М,, Алексеева Э.М. Зависит ли содержание холестерина в клетках крови от его уровня в плазме? \\ Биохимия.-1994.-№1.-с. 9-77.

66. Ковальчук Л. В., Чередеев А. Н. Иммунорегуляторная роль моноцитов в норме и при патологии. Итоги науки и техники. Сер. «Иммунология». М., 1991.: ВИНИТИ. 27: 217 с.

67. КожевниковаМ. К, Паюшина О. В., Микаелян А. С. Сравнительная характеристика мезенхимных стромальных клеток из костного мозга крысы на ранних и поздних пассажах.//Цитология 2007 т.49 №9, с.756

68. Козлов К.В. Современный уровень понимания механизма барьерного разряда в смесях кислорода с азотом/ К.В Козлов.// Доклад на первой» всероссийской конференции «Озон и другие экологические окислители. Наука и технология» 2005 г

69. Козлов Ю. П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах/Ю. П Козлов./. М.: МГУ, 1973,- 175 с.

70. Козлов М.М., Маркин B.C. Втягивание мембраны эритроцита в микропипетку: перераспределение мембранного скелета. // Биол мембраны.-1989,- Т. б.- с. 754-764.

71. Коломийцева И. К. Радиационная биохимия мембранных липидов./ Коломийцева И. К. / М., 1989. 270 с.

72. Кольман Я., Рем К.Г. Наглядная биохимия/ Я.Кольман, К.Г Рем. — М., Мир, 2000. — 469 с.

73. Конторщикова К.Н Влияние озона на метаболические показатели крови в эксперименте in vitro \\ Гипоксия и окислительные процессы : Сб. научн. трудов Нижегородский мед. ин-т.- Н.Новгород, 1992. -с.50-54.

74. Конторгцикова К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии. /К.Н. Конторщикова / Нижний Новгород, 2000.23 с.

75. Корнев Я.И. и др. Барьерный разряд в водовоздушной среде и его применение в технологии очистки воды. / Я.И Корнев. и др. // Доклад на первой всероссийской конференции «Озон и другие экологические окислители. Наука и технология.» 2005 г. Москва.

76. Костюк В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты. /В.А. Коспок, А.И.Потапович/. Мн.: БГУ, 2004. - 174 с.

77. Кравец Е. Б. Молекулярные нарушения мембран эритроцитов и тромбоцитов при сосудистых осложнениях сахарного диабета типа 1 / Е. Б. Кравец, Н. В. Рязанцева, Н. М. Яковлева и др. ; Сибирский медицинский университет // 2006.

78. Крылов В.И. Физиология и патология клеточных мембран./ В.И. Крылов / Свердловск,1984. С. 13-18.

79. Крюков А. А., Е П. Семенкова, Черенкевич С. П. Генерация активных форм кислорода в моноцитах при адгезии к стеклу /Цитология, Том 48, 2006, с. 112

80. Кузмина Е.И., Нелюбин А.С., Щенников М.К. Применение индуцированной хемилюминесценции для оценки свободно-t.o. пелюиин, ivi.iv щенников. //Межвузовский сборник биохимии и биофизики микроорганизмов. Горький.-1983.-с 179-183.

81. Кузнецов А.Н. Биофизика электромагнитных воздействий (Основы дозиметрии)/ А.Н Кузнецов./. М.:Энергоатомиздат, 1994. с.

82. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред, защита / В.И. Кулинский // Соровский образовательный журнал. 1999.№ 1.С.2-7

83. Кутепов A.M., Захаров А.Г., Максимов А.И. Химические процессы, инициируемые неравновесной плазмой в растворах. / А.М. Кутепов, А.Г. Захаров, А.И. Максимов // Теоретические основы химической технологии. 2000. Т. 34. № 1. С. 76.

84. Ланкин В. 3. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ/ В. 3. Ланкин /. М.: Наука, 1981. - 244 с.

85. Липидно-связанные сиаловые кислоты сыворотки крови в комплексной диагностике рецидивов рака яичников / Л.С. Бассеалык и др // Вестник АМН СССР. 1985. № 9. С.67-69.

86. Лапшина Е.А., Заводник И.Б. Структурные изменения эритроцитарных мембран в присутствии СЖК и их производных. \\ Биол. мембраны.-1995.-Т12.-№2.-С.157-163.

87. Литвинко Н.М., Кучуро С.В., Жукова М.В. /Н.М. Литвинко, С.В. Кучуро , М.В. Жукова /.-Динамика образования лизоформ при ферментативном гидролизе фосфатидилалканов .- Биохимия,- 2002.- Т. 76, вып. 9.- С. 1241-1245.

88. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А., Каган Э.М. Холестериноз. \\ М.- 1983,- 352 с.

89. Малахова М. Я. Лабораторная диагностика эндогенной интоксикации/ М. Я. Малахова //Медицинские лабораторные технологии и диагностика. С.-Петербург: Интермедика. 1999.С.618-649

90. Малахова М. Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме/ М. Я. Малахова//Эфферентная терапия. 2000. Т.6. №4. С.3-14.

91. Маршак И.С., Дойников А.С., Жильцов В.П. Импульсные источники света/ И.С Маршак., А.С Дойников., В.П. Жильцов/. М.: Энергия, 1972472 с.

92. МаянскийА. Н., Маянский Д. II. 1987. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука. 256 с.

93. Мельникова A.M., Матус H.JI. Механизмы стимуляции физиологической активности дрожжевых клеток и клеточные мишени действия озона/Тез. докл. 2 Всероссийской научно-пректической конференции с международным участием// Н. Новгород.- 1995.- с. 6.

94. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов/ Е. Б. Меньшикова, Н. К.Зенков //Успехисовременной биологии.1993. Т.113.вып.4. С.442-454.

95. Наследникова И.О., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Типовые изменения поверхностной архитектоники лимфоцитов при хронической вирусной инфекции // Цитология. 2005. - Т. 47, № 2. - С. 136-140.

96. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А. Физиология и патофизиология эритроцита// Томск: Издательство Томского университета, 2004. 200 с.

97. Новицкий В.В., Наследникова И.О., Рязанцева Н.В. и др. Лимфоциты при хроническом вирусном гепатите С: поверхностная* архитектоника, микровязкость мембраны и функциональная^ активность // Бюллетень СО РАМН. 2005. - № 3 (117). - С. 78-82.

98. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А., Быстрицкий Л.Д., Ткаченко С.Б. Атлас. Клинический патоморфоз эритроцита// Томск; Москва: Изд-во Томского университета; Издательский Дом <ГЭОТАР-МЕД>. 2003. - 208 с.

99. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А. и др. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при патологии разного генеза являются типовой реакцией организма: контуры проблемы // Бюллетень сибирской медицины. 2006. - Т. 5, № 2. - С. 61-68.

100. Новицкий В .В., Рязанцева Н.В., Кублинская М.М. и др. Изменения белкового и липидного мембран эритроцитов при нормальном старении и болезни Аггьцгеймера // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Прил. 1. - С.92-95.

101. Образование активных частиц при вспышечном коронном электрическом разряда на жидком электроде./ Пискарев И.М. и др. II Химия высоких энергий. 2005 г., т.39. № 3. с.228-231.

102. Пальцев М. А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина. 1995. 224с.

103. Панин Л.Е., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. и др. Аполипопротеин-АГ, обладающий свойствами дифенсиновых белков, модифицирует структуру плазматических мембран// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - № 10. - С. 402-404.

104. Перельман, В.И. краткий справочник химика / В.И. Перельман// М.,ГНТИХЛ 1951.-С.

105. Пискарев И.М. Окисление фенола частицами ОН, Н, О и 03, образующимися в электрическом разряде. / И.М Пискарев. // Кинетика и катализ.-1999.- т. 40. -№ 2.- С. 505 511.

106. Пискарев И.М. Окислительно-восстановительные процессы в воде, инициированные электрическим разрядом над ее поверхностью./ Пискарев И.М. // Журнал общей химии. 2001. -т. 71.- вып. 10.- 1622 -1623.

107. Пискарев И. М., Образование озона и уф-излучение мощных импульсных электрических разрядов. Пискарев И. М., Ушканов В. А.,

108. Селемир В. Д., Спиров Г. М., Малеванная (Пикарь) И. А. Зуймач Е.А. Журнал физической химии. 2008. том 82, № 9, с. 1754-1758

109. Покровский В.М., Коротько Г.Ф. Физиология человека М: Медицина, 2001, с. 273-285

110. Пол У., Сильверстайн А., Купер М. и др. Иммунология М: Мир 1988, с.26 76.

111. Путвинский А. В., Пучкова Т. В. Протонная проницаемость и электрический пробой фосфолипидных мембран после УФ-облучения. / А. В Путвинский., Т. В. Пучкова // Биофизика. Т. 26, №3. - С. 481486.

112. Райзер Ю.П. Физика газового разряда / Ю.П.Райзер /, М.Наука, 1987,- 592с.

113. Райзер Ю.П. Физика газового разряда. Учебное руководство для вузов. / Ю.П Райзер. /М.: Наука, 1992, 536.

114. Разумовский С.Д., Заиков Г.Е. Озон и его реакции с органическими соединениями. М.: Наука, 1974. 322 с.

115. Рязанцева Н. В. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при токсическом действии метгемоглобинобразователей / Н. В. Рязанцева, В. В. Новицкий, И. А. ТТТперлинг и др.; Сибирский медицинский университет и др. // 2006.

116. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Агарков А.П., Степовая Е.А. Патология клеточных мембранпри шизофрении // Томск: Изд-во гос. университета. 2004. - 126 с.

117. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Типовые нарушения молекулярной организации мембраны эритроцита при соматической ипсихической патологии // Успехи физиологических наук. 2004. - № 1. - С. 53-65.

118. Рязанцева Н.В., Панин JI.E., Токарева Н.В. и др. Структурно-функциональные особенности плазматической мембраны лимфоцитов и эритроцитов при вирусных инфекциях // Сибирский медицинский журнал. 2003. - №3. - С. 34-38.

119. Рязанцева Н.В., Жукова О.Б., Новицкий В.В. и др. Активность ДНК-репарационной системы лимфоцитов периферической крови у пациентов с хронической вирусной персистенцией // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. - № 6 (13). - С. 27-29.

120. Рязанцева Н.В., Степовая Е.А., Колосова М.В. и др. Типовая реакция периферического звена эритрона при патологических процессах//Бюллетень сибирской медицины. 2002. - №1. - С.29-35.

121. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Кублинская М.М. Изменения липидной фазы мембраны эритроцитовпри параноидной шизофрении // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - № 1. -С. 99-101.

122. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Структурные нарушения и изменения активности Иа+,К+-АТФазы в мембране эритроцитов у пациентов с невротическими расстройствами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - № 7. - С. 85-88.

123. Сарксян Д.С. Информативность определения сиаловых кислот в Эритроцитах для оценки гемореологических нарушений при Г Л ПС / Д.С. Сарксян, О.В. Малинин, Ж.И. Бородина // Дальневосточный медицинский журнал, 2003, 3.-С.27

124. Савич А.В. Роль супероксидного радикала в норме и при патологических состояниях / А.В. Савич // Нарушения биоэнергетики в патологии и пути их восстановления. М. 1993. - С. 33-41.

125. Семенкова Г. Н. Генерация активных форм кислорода при стимуляции лимфоцитов и нейтрофилов крови человека: Автореф. канд. дис. Минск,1989.: БГУ: 24 с.

126. Спиров Г. М. Возможности и перспективы применения импульсных энергетических установок в промышленности / Г. М. Спиров // Международная конференция "Физика и промышленность" ФИЗПРОМ-96.- Голицыно, Московская область 22-26 сентября 1996

127. Справочник биохимика / Досон Р. и др. М.: Мир, 1991.

128. Сторожок С.А., Изменения физико-химических свойств биологических мембран при развитии толерантности к этанолу/ Цитология 2001t V

129. Сторожок С.А., Соловьев С.В. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембран эритроцита. \\ Вопросы медицинской химии.- 1992.- т.38.- № 2.- с. 14 17

130. Титов В. Н. Взаимоотношение спиртов холестерина, глицерина и двойных связей жирных кислот в сыворотке крови и липопротеинах. / Титов В. Н. и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. -№12. -С. 3-7.

131. Терещенко И.П., Кашулина А.П. Патофизиологические аспекты злокачественного роста./ И.П. Терещенко, А.П. Кашулина / М.: Медицина, 1983. 260 с.

132. Тонкослойная хроматография в фармации ' и клинической биохимии: (Пер. с словацкого Сергеев А.П., Ушаков А.Н.).-М.- Мир,-1980 г., 1т. -295 с. 2 т.-535 с.

133. Ужанский Я.Г. Стресс и гемолиз. \\ Пробл. гематол.-1973.-№11,-с.13-15.

134. Черницкий Е.А., Сенькович О. А. Гемолиз эритроцитов детергентами.\\ Биол. мембраны.-1997.-Т.14.-№4.-С.З 85-393.

135. Шперлинг И.А., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Жаткин О.А. Патология эритроцита при экзогенных интоксикации // Томск: Изд-во Томского университета, 2005. 130с.

136. Шперлинг И.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. и др. Структурно-функциональный статус эритроцитов периферической крови при остром воздействии оксида углерода // Токсикологический вестник,- 2006.-№6.- С. 2-6.

137. Шперлинг И.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. и др. Механизмы нарушения функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной фенилгидразининдуцированной метгемо-глобинемии // Бюллетень сибирской медицины. 2005. - № 3. - С. 3541.

138. Шуваева В. Н., Кузнецова Н.П., Левтов В.А. Реологические свойства крови при частичном замещении ее у крыс раствором модифицированного гемоглобина. \\ Физиол.журн.СССР.-1990.-Т.76.-1Ч 2.-С.192-199.

139. Эккерт Р., Рендел Д., Огастин Д. Физиология животных. М,-Мир.-1991.-т. 2.- с.85-95.

140. А1 Chalabi, С. С. Miller, Bioessays 2003, 25, 346-355.

141. Aebi Н. Methoden der erymatiechen analyses. 1970.'- V. 2. - P.636-647.

142. Apostolski S, Marinkovic Z, Nikolic A, Blagojevic D, Spasic MB, Michelson AM. Glutathione peroxidase in amyotrophic lateral sclerosis: the effects of selenium supplementation. W J. Environ Pathol Toxicol Oncol.-1998,- N17.- p.325-329

143. Baenziger J. U., Fiete D. Structural determinants of concanavalin A specificity for oligo. saccharides, 3. Biol. Chern., 254, 2400—2407 (1979).

144. Bink . J., Montecucco C., Hesketh В., Tsien B. Y. Lymphocyte membrane potential assessed with fluorescent probes, Biochim. Biophys. Acta, 595, 15—30 (1980).

145. Bocci V., Luzzi E., Corradeschi F., Paulesu L. Studies on the biiological effects of ozone: evaluation of immunological parameters and tolerability in normal volunteers receiving ambulatory autohaemotherapy. \\ Biotherapy. 1994.- V.7.-P.83-90.

146. Bossinger О., E. Knust, Science 2002, 298, 1955-1959//Biologie fur Mediziner: Biologische Membranen und Signaltransduktion", 2008

147. Bowry V. W., Stanley К. K., Stoker R. High density lipoprotein is the major carrier of lipid hydroperoxides in human blood plasma from fasting donors./ Bowry V. W., Stanley К. K., Stoker R. // Proc. Natl. Acad Sci. USA. 1992. - V. 89. - P. 10316-10320

148. Baumann О., B. Walz, Int. Rev. Cytol. 2001, 205, 149-214. R. Sitia, I. Braakman, Nature 2003, 426, 891-894.

149. Buselmaier: Biologie fur Mediziner, Springer, Berlin, 10. Aufl., 2006.i

150. Bechard D., Scherpereel A., Hammad H., Tsicopoulos A., Aumercier M./ Human endothelial-cell specific molecule-1 binds directly to the integrin CD 11 a/CD 18 and blocks binding to intercellular adhesion molecule-2001. J. Immunol. 167 : 3099—3106.

151. Blagden S. P., D. M. Glover, Nat. Cell Biol. 2003, 5, 505-511.

152. Campbell E., T. J. Hope, Adv. Drug Deliv. Rev. 2003, 55, 761-771.

153. Cerutti P., Larsson R., Krupitza G. et. ol. Pathophysiological mechanisms of active oxygen. \\ Mutat. Res. 1989 v. 214,- p. 81 - 88.

154. Cochrane C.G. Mechanism of oxidant injury of cells. \\ Molecular Aspects of Medicine.-1991.- v,12.-p. 137 147

155. R. Cossins, M. Behan, G. Jones, K. Bowler, Biochem. Soc. Trans. 1987, 15, 77-81.

156. Cronstein B.N., Weissmann G. The adhesion molecules of inflammation // Arthr. And Rheum. 1993.V. 36. P. 147-157.

157. Davies K.J. Protein damage and degradation by oxyden radikals. General aspekts. \\ Biologikal Chemistri.- 1987,- v. 262.- p. 9895-9901.

158. Esterbauer H Cytotoxicity and genotoxicity of lipid-oxidation products. WProc. Ozone Application in Medicine.- Zurich.-1994.- p. 62.

159. J. Eichler, V. Irihimovitch, Bioessays 2003, 25, 1154-1157.

160. Ebel H., Kreis R., Gunther T. 2004. Regulation of Na+/Mg2+ antiport in rat erythrocytes. Biochim. biophys. acta. 1664 : 150— 160.

161. Т. M. Embley, M. van der Giezen, D. S. Horner, P. L. Dyal, P. Foster, Philos. Trans. R. Soc. bond. B. Biol. Sci. 2003, 358, 191-201.

162. Gaulton, Т. K. Attwood, Bioinformatics approaches for the classification of G-protein-coupled receptors., Curr. Opin. Pharmacol. 2003, 3,114-120

163. E. J. Helmreich, Biophys. Chem. 2003, 100, 519-534.

164. Hirsch-Kauffinann, Schweiger: Biologie fur Mediziner und Naturwissenschaftler, Thieme, Stuttgart, 6. AufL, 2006.

165. Hirabayashi Т., Shimizu T. 2000. Localization and regulation of cytosolic phospholipase A (2). Biochim. biophys. acta. 1488 124—1 38.

166. E. Knust, O. Bossinger, Science 2002, 298, 1955-1959.

167. Fletcher D. L.,Dillared C. J., Tappel A. Y.\ Measurement of fluorescent lipid peroxidation products in biological system and tissues. \\ Analyt. Biochem.-1973.-V.52. P.497-499.

168. Folch J., Less M., Stanley A. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. / J Folch., M Less., A. Stanley // Biol. Chem.-1957.-V.226,- №2.-P.497-509.

169. Franke K.-P., Meissner H. and Rudolph R. Cleaning of air streams from organic pollutants by plasma-catalytic oxidation. / K.-P Franke., H.Meissner // Plasma Chemistry and Plasma Processing.- 2000. -V. 20. -N. 3. -P. 393-403.

170. Franke K.-P., Meissner H., Rudolph R. Cleaning of air streams from organic pollutants by plasma-catalytic oxidation/ K.-P Franke., H.Meissner, R Rudolph. //Plasma Chemistry and Plasma Processing. -2000. -V. 20. -N. 3. -P. 393-403.

171. Hickling A. Electrochemical processes in glow discharge at the gas-solution interface. Modem aspects of electrochemistry. / A.Hickling // Ed. J. O'M Bockris and B.E. Conway. London.: Butterworths. -1971. -V. 6. -P.329.

172. Hoeben W.F.L.M. Pulsed corona induced degradation of organic materials in water. Eindhoven. /Hoeben W.F.L.M.- Eindhoven.-Technische Universities Eindhoven.- 2000,- 163 p.

173. Gascard P. Sauvage M., Sulpice I.C., Giraud F. et al. Characterization of structural and functionalphosphoinositide domains in human erythrocyte membranes. \\Biochemistrv.-1993.-V.23.-P.594b5948

174. Halliwel В., Cbirico S. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement, and significance. \\ Am. J. Clin. Natr.- 1993. V. 57,- p. 715725.

175. Harris M.L., Scbiller H.J., Reilly P.M. et al. Free padicals and other reactive oxygen metabolites in inflammatory bowel disease: cause,consequence or epiphenomenon? \\ Pharmac. Ther.- 1992.- v. 53 .- p. 375408.

176. Jjzanov- Stankov O, Demajo M, Djujic I, Mandic M. Selenium intake as a modulator of responsiveness to oxidative stress. \\ J Environ Pathol Toxicol Oncol.- 1998.- N 7,- p.251

177. Johnson Т., Schoenbach K. N,Tseng C. Subcellular Investigations into RF effects./ T Johnson., К Schoenbach , C.Tseng // International Symposium ElectroMed 2003, San Antonio, Texas ,Record Abstracts .2003.- p.28-29

178. Joshi RP, Schoenbach KH. Mechanism for membrane electroporation irreversibility under high-intensity, ultrashort electrical pulse conditions./ RP Joshi, KH.Schoenbach //Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys.- 2002,-V.66.-P. 52901.

179. Kamiya N., Watanabe H., Habuchi H., Takagi H., Shinomura Т., Shimizu K., Kimata K. Versican/PG-M regulates chondrogenesis as an extracellular matrix molecular crucial for mesenchymal condensation: J. Biol. Chem, 2006. 281 : 2390—2400.

180. Luzio J. P., V. Poupon, M. R. Lindsay, В. M. Mullock, R. C. Piper, P. R. Pryor, Mol. Membr. Biol. 2003, 20, 141-154.

181. MacDonald R. J. Temperature and ionic effects on the interaction of eiythroid spectrin with phosphotidylserine membranes \\ Biochem 1993.- v. 32.- № 27.- p. 6957 6964.

182. Masuda S. Pulse corona induced plasma chemical process: a horizon of new plasma chemical technologies / S. Masuda // Pure & Appl. Chem. -1988. -Vol. 60.- № 5.- P. 727-731.

183. McCord J.M. Superoxide radical: controversies, contradictions, and paradoxes / McCord J.M. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1995,- V. 209.-№2. -P. 112-117.

184. P. L. McNeil, R. A. Steinhardt, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2003, 19, 697-731.

185. Medizinische Biochemie von: Roland Scholz, Zuckschwerdt Verlag, 2003Roland Scholz T5 3-8 43-46

186. Medizinische Biochemie von: Roland Scholz, Zuckschwerdt Verlag, 2003Roland Scholz Холестерин Т11стр39

187. Medizinische Biochemie von: Roland Scholz, Zuckschwerdt Verlag, 2003Roland Scholz т9 c.55-62

188. H. W. Meyer, W. Richter, Freeze-firacture studies on lipids and membranes., Micron. 2001, 32, 615-644

189. Mosior M., Mikotazak A., Gomutkiewicz J. The effect ofATP on the order and the mobility of lipids in bovine erythrocyte membrane. \\ Biochem. et biophys. acta biomembranes.-1990.-V.1022.-Xo3.-P.361-364.

190. Nishicimi M., Roo A., Xagi K. The occurrence of superoxide anion in reactions of redused phenaxi-nemetasulfate and molecular oxygen. / M.Nishicimi, A Roo., К Xagi. // Biochem. Biophys. res.commun.-1972.-V. 146.- №2,- P.849-854.

191. Nisoli E., E. Clementi, S. Moncada, M. O. Carruba, Biochem.s1. Pharmacol. 2004, 67, 1-15

192. M. Richter, B. Ludwig, Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2003, 147, 47-74.

193. E. A. Schon, S. DiMauro, Curr. Med. Chem. 2003,10, 2523-2533.

194. Smith E et al. "Universality in intermediary metabolism" Proc Natl Acad Sci USA, 101(36):13168-73, Sep 7 2004

195. G. J. Schutz, M. Sonnleitner, P. Hinterdorfer, H. Schindler, Mol. Membr. Biol. 2000; 17, 17-29.

196. Schoenbach K.H., Non-equilibrium air plasmas at atmospheric pressure / Ed. by U. Kogelschatz, K.H. Schoenbach, R.J. Barker et al. Institute of Physics. Series in Plasma Physics. Bristol and Philadelphia : IOP Publishing Ltd, 2005. P. 53-62.

197. Piskarev I.M. Electrodeless electrochemical oxidation reactions as a technique for water purification. / I.M Piskarev. // Theoretical Foundation of Chemical Engineering // 2000. V. 34. № '3. P. 298-300.

198. Parthiban A, Vijayalingam S, Shanmugasundaram KR, Mohan R Oxidative stress and the development of diabetic complications--antioxidants and lipid peroxidation in erythrocytes and cell membrane. \\ Cell Biol Int.- 1995,-N12,- p.987

199. Rice-Evans C., Burdon R. Free radical lipid interactions and their pathological consequenses. WProg. Lipid Res. - 1993 .-v. 39.-p. 71 - 110.

200. Rodgers W., Glaser M. Distributions of proteins and lipids in the erythrocyte membrane \\ Biochem.- 1993 v.32.- № 47.- p. 12591 - 12598.

201. Rokitansky O. Klinik und biochemie der ozontherapie. \\ Ozontherapie.- 1982.- N 52.- p. 643 -711.

202. Shinomura Т., Nshida Y., Kimata K. 1991. In: Articular cartilage and osteoarthritis. New York: Raven Press. 35—44.

203. P. StaMen Phosphatidylinositol, phosphatidic acid and diacyiglycerol in rat and human lymphocytes, Biochim. Biophys. Acta, 666, 252—258 (1981).

204. Subcellular Investigations into RF effects. / T.Johnson et.al. //International Symposium ElectroMed 2003, San Antonio Texas. Record Abstracts.- San Antonio .-2003.- p.28-29

205. Timoshkin I.V., MacGregor S.J., Fouracre R.A., M.J. Given and

206. J.G.Anderson "Forces acting on biological cells in external electrical fields". Proceedings of the IEEE Conference on Electrical Insulation and Dielectric Phenomena, Kansas City, Missouri,(2006)., USA, p 676 679.

207. Timoshkin, I.V., MacGregor, S.J., Fouracre, R.A., Crichton, B.H. and Anderson, J.G. Transient electrical field across cellular membranes pulsed electric field treatment of microbial cells. Journal of Physics D: Applied Physics (2006). 39, 596 - 603.

208. The effects of intense submicrosecond electrical pulses on cells./ J. Deng et.al. // Biophys J.- 2003.- V.84.-N 4.-p.2709-2714 Diverse effects of nanosecond pulsed electric fields on cells and tissues. DNA Cell Biol. 2003 Dec;22(12):785-96

209. Shenstone F. S. Ultraviolet and visible spectroscopy of lipids.-N. Y. 1971.-p. 77-93.

210. Udey M. C., Parker C. W. Membrane protein synthesis in mitogen-stimulated human ^lymphocytes, S. Immunol., 126, 1106—1113 (1981).

211. Voeikov V. Reactive Oxygen Species, Water, Photons, and Life./ V. Voeikov // Rivista di Biologia/Biology Forum 94.-2001.- p. 193-214

212. Velleman S. G. 2002. Role of the extracellular matrix in muscle growth and development. J. Anim. Sci. 80 : E8—E13.

213. Wetzel G. D., Kettman J. B. Activation of murine В cells. П. Dextran sulfate removes the requirement for cellular interaction during lipopolysaccharide-induc mitogenesis, Cell, Immunol., 61, 176—189 (1981).

214. Winnemoller M., Schmidt G., Kresse H. 1991. Influence of decorin on fibroblast adhesion to fibronectin. Eur. J. Cell Biol. 54

215. Wojcicki W.E. Beth A.H. Structural and binding properties of the stilbenedisulfonate sites on erythrocyte bands 3: an electron paramagnetic resonance study using spin labeled stilbenedisulfonates \\ Biochem.- 1993.-v. 32.- № 32,- p. 9454 - 9464

Информация о работе

Зуймач, Елена Анатольевна
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Влияние высокоэнергетических электрофизических факторов на свободнорадикальные процессы и структурно-функциональное состояние мембран клеток животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы