Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ, КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ, КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ"



На правах рукописи

Родольфо^Рамирес Родригес

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ, КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ

03,00,13 - физиология человека и животных

Автореферат ^ диссертации на соискания ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы Московская область ~ 2000

^. рсг?. (йсс/у? -

Диссертационная работа выполнена в российском университете дружбы народов и в отдел« трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИЖ).

Научные руководители:

доктор биологически?! наук, профессор II. И. СЕРГЕЕВ

доктор биологических наук, профессор И. А. МОРФИРЬКВ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, А. М. ЧОМЛЕП кандидат биологических наук, А. Н. НОВГОРОДОВ

Ведущее учреждение:

Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела

м.

Защит» диссертации состоится " 2000т

в 10:00 часов, на заседании диссертационного совси Д.020.16 02 во Всероссийском научно-исследовательском институте * и всггиоводстм. Адрес; 141012. п. Дубровины, Подольского района, московской области.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

Автореферат разослан

- Г-

2000г

/

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук .

В.П. ГУБАНОВА

ЦЕНТРАЛЬНАЯ -( НАУЧНАЯ С.ЧБЛИО ГЕКА '

Ммк.-сельскохоэ, ададэмии К. А, Ъыкацг™а

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА Р^ИЙЕНК'о

' Современные экономические условия д|.....

необходимость повышения интенсивности селекционной ■ работы:' по- совершенствовании! племенных и продуктивных качеств животных, а также создания современных высокопродуктивных пород, линий и' гибридов скота, отвечающих требованиям постоянна меняющейся конгактуры рынка. Мощным средством интенсификации воспроизводства' служит метод трансплантации эмбрионов. 1'

Однако у крупного рогатого скота основным лимитирующим' фактором успешного развития и применения метода* трансплантации является высокая степень- нарушений репродуктивной функции коров (около 40%),'

Существенным ограничением возможностей .трансплантации зародышей является 'также низкая оплодпгтворяемость яйцеклеток и отклонения в их развитии после их оплодотворен«* с высоким процентом гибели эмбрионов. " >•' *'■' ч"*

Проявление фенотидачееких признаков имеет генетические ивнешние' компоненты, которые можно представлять соответственно как присушив и неприсущие организму. Если жизнеспособность или выживаемость эмбрионов рассматривать, как фенстнпический признак, то гибель эмбрионов может происходить в результат« дефектов в одном. или обоих из этих -компонентов или от взаимодействия между ними. Наблюдается три обшив тенденции. Во-первых, независимо от метода оплодотворения, процент гибели эмбрионов всегда имеет место. Во-вторых, чем бол ьшему'воздействию подвергаете» эмбрион, тем выше эмбриональная' смертность. В третьих, результативность пересадки - повышается по мере совершенствования ■ метода, это предполагает, что некоторые негативные внешние факторы могут бьггь устранены.

Однако существо причин эмбриональной смертности изучены" недостаточно и вполне очевидно, насколько это важны для внедрения трансплантации в производство.1 1

■ Эффективность применения трансплантации эмбрионов в 'практике селекции молочного скотоводства во многом зависит от правильного отбора коров-доноров по способности выделять-достаточное - число качественных эмбрионов после гормональной обработки и искусственного осеменения. Разработка возможных объективных тестов прогнозирования змбрнопродуктивиостн доноров имеет важное теоретическое н практическое значение для улучшения воспроизводства высокопродуктивных коров. 'Г *

В России, с 1991 года, происходит устойчивое" сокращение 1 поголовья' скота, сопровождающееся повышением доли коров в> стаде и одновременном ' снижением кх. продуктивности. Это уменьшает возможности увеличения производства иолом.; По мииым <РАО популяция крупного рогатого скота в России к 199? году составлял!39.696 млн. За 3'года, с 1994 года по 1997 году,- численность крупного рогатогоскот» сократилось на 9,3 млн,' голов

Удой на фуражную корову уменьшился на 536 кг. В нынешней экономической апуацми , при отсутствий государственной „ поддержки . появились серьезные симптомы разрушения . племенного животноводства-' . ..

. , . Пересадка эмбрионов » частности важна ь развиваюшняся странах, а том числе в Латинской Америке.- На результаты трансплантации эмбрионов влияют и физиологические особенности доноров и реципиентов, а также квалификационная способность специалиста, осуш вселяющего процедуры., , Известны исследования по изучению этих факторов в странах умерен кого'Климата на животных европейского происхождения (Эрнст Л. К,, Сергеев Н И 1989, Куанышбекоа Б М. , 1990; Самоделкин А. Г., Гавриков _ А. М, Сергеев Н И 1996). Однако мало известны иауч но-обоснованн ые исследования этих факторов в тропических условиях

Зарубежные авторы отмечают, что несколько стран центральной и южной америки имеют .значительное количество скот» что развитие животноводства способствует значительным образом улучшению в потребностях питания населения и экономики страны. Однако усилия по созданию государственных программ по трансплантации эмбрионов в большинстве эти* стран не дали заметные результаты, н почти невозможно получить достоверную информацию.

Популяция скота в Гватемале насчитывается 1^734 млн. Работа по пересадкам эмбрионов , началась в 1976 г, г С 1976 по 1978 гг. ^трансплантация эмбрионов проводилась на фермах, . используя Сут, Ме1оте и иидо-брикльские породы скота и было получено 400 стелъностей- Между 1979 и 1980 гг. пересадки проводились на коровах брахмаиой, голштикой и бурой шведской город. С 1983 гга 1986 гг. сообщалось о 70 сгельностей в результате трансплантации эмбрионов. Некоторые попытки проводились по пересадке .замороженно-оттаянных эмбрионов -

Относительно трансплакгации. эмбрионов у других сельскохозяйственных животных, в Латинской Америке были сделаны только отдельные попытки. Было сообщение о рождении ягнят, козлят н жеребят, но число их незначительно. К сожалению исследования, не проводились на аборигенных видах, такцх как южно-американские мозоленсгие (лама, альпака, викунья), которые имеют большое значение в Перу, Боливии и Чили. . _

, , . .Несмотря на то. что некоторые страны имеют основные нормы контроля ввоза заболеваний путем ввозимых эмбрионов, нет четких, хорошо разработанных правил для эмбрионов и . пересадок, что затрудняет международную коммерцию эмбрионов. ,

■ ■ .О продаже замороженных .эмбрионов зарубежного или отечественного происхождения были сообщения только в тегах. К сожалению, невозможно узнать с уверенностью уровень коммерциализации замороженных эмбрионов. .... , . Цель и мрачи исследований. Целью настоящих, исследований являлось повысить эффективность. синхронизации .охоты у' коров-Доноров к - телок-реципнен-гов до 95% и гормональное индуцирование.«уперовуляцин на 25%, Определить эффективность применена

фолднку лостимулирутошет гормон! и сурфагона пдя повышения огцллотворисмости яйцеклеток и выхода эмбрионов, пригодных для трансплантации у доноров прп супсрокуляции. ' '

2 * г ' . ' " . ■ " * -

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи.

1 изучить эффективность комбинированного применения биологически активных препаратов-при синхронизации охоты у коров доноров и телок реципиентов;

2 определить эффективности гипофнэарных препаратов фолликулостнмулируюшего гормона в сочетании с рклиэинг-гормонами при стимуляции овуляции у короа-доноро» эмбрионов;

3 изучить влияние различные факторов на уровень суперовулвцн» и качество эмбрионов;

4 ■ изучить влияние рилизинг-гормоков на гормональный фон крови при стимуляции овуляции, . 5 изучить влияние различных факторов на приживляемость эмбрионов при их пересадке

телкам-реципиентам * ^

У^ау^ная .идв^на. Усовершенствованы методы синхронизации охоты у коров и теяок на основе применения современных- гормональных препаратов. Повышена эффективность икдушеров&кия охоты да 86,6-90,0 % Определены факторы, влияющие - на показатели . оплодотворяеиости в индуцированную охоту и при суперову ллцни, Разработаны методы овариостимуляции с целью ускоренного завершения послеродового периода ■ и периода восстановления после использования коров в качестве допоров эмбрионов. Изучены эндокринные факторы, лежащие в основе биотехнических методов управления половым циклом коров.- ,, Практическаязначимостьработа. ' _ .

Усовершенствованные методы синхронизации охоты у коров и ,телок. позволяют эффективно планировать и проводить индуцирование суперовуляции у доноров и экономически. эффе>яивно проводить эмбриолересадкн реиипи&нтам.

Ускоренное восстановление репродуктивной функции лакткруюших коров доноров после-извлечения, • также корректирование послеотельной воспроизводительной активное™ позволяет получать, эмбрионы эа период времени не превышающий экономически обоснованный сервис* период. ' - 1 ' ■ - " ■ ■ ■ ' '

Дпрдбаиия работы, Матери»яы диссертации доложены иа ежегодных научно-практических конференциях Российского университет« дружбы пародов (1998-1999).

Публикации,- По материалам диссертации опубликована I печатная работа в центральном журнале России * Племенное дело". - ' ' . : ...

■ Структура и объем диссертации. Диссертационная работ» изложена «а IIJ страницах машинописного текст* и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов'собственных исследований,, обсуждения, выводов и практическое, предложение. Цифровой материал представлен в.12 таблицах, иллкхггриромн I рисунок. Слисок литературы включает 120 источников отечественны* и зарубежных авторов ■

' ' I. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве допоров эмбрионов были использованы высокопродуктивные племенные коровы и телки черно-пестрой породы опытного хозяйства «Щапово», фермы «Кузенево» и фермы « Лу кош кино» экспериментального хозяйства «Кленово-Чегодаево» ВИЖа Московской области Реципиентами служили 417 телок случного возраста черно-пестрой породы живой массой 350-380 кг. ' ' ' '

Для синхронизации охоты доноров и реципиентов и стимуляции оварнальной активности были использованы простагланпнны - Ра Г2а, эстрофан, а также в сочетании с гнпофмарными гормонами ФСГ фодлитропин в ГСЖК, гоиадояиберииы - лиригистран и сурфагон.

Доноры были обработаны на 10-12-й лень или на 7-9-й день к 13-15-й день полового цикла, а зависимости от поставленного опыта,- гипофвзарными гормонам« ФСГ фодлитропин и ГСЖК, Лереа обработкой инъецировали 2-х кратно тегравнт в дозе по 10 ил по общепринятой схеме. Первая инъекция в день'обрабслгки и вторая - через 48 часов после первой. Гонадолиберины и лютеинюирующий гормон вводили 48 > часов после применения простагландина, перед осеменением. : »■■■'.

4 На 7-ой лень от первого осеменения — извлечение эмбрионов по методике ВИЖа. Первый день охоты принимается за «О» день полового цикла.

Обнаружение, оценка качества, кратковременное хранение эмбрионов, подготовка их к пересадке осуществились по методикам ВИЖа

Группа Число животных Препарат Доза ' День введения препарата

1 30 Эстрофан 500 мкг 10-12

И 30 Эстрофан + 500 мкг

* . ■ ' ' ■■- сгжк 15 мкг 7-9,13-15

ш. , 30 . сгжк + 1000 ИЕ

Эстрофан + 500 мкг 7-9,13-15

1 . * Сурфагон - 15 мкг

2.2. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ ПО СТИМУЛЯЦИИ ПОСЛЕРОДОВОЙ ОВАРНАЛЬНОЙ,

АКТИВНОСТИ У КОРОВ

Группа Число животных Препарат" Дом День введения препарата

после отела

I 50 . . . . .

11 ' 30 Фоллнтропин 500 ИЕ 5

+ Сурфагон 15 мкг 12 ■

Ш 50 ГСЖК 1000 ИЕ 5

+ Сурфагон 15 мкг • 12

IV 30- Фодлитропин 1000 ИЕ ' ■ ■ ■ 12

+ РвР2в + 500 мкг 12

+ Сурфагон ' 15 мкг 14

■ .. V ■. . 50 ГСЖК . 1000 ИЕ 11

+ РзГ2а + 500 мкг 13

+ Сурфагон 15 мкг 15

Т ■

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1 1 Мочение эффективности комбинированного применения биологически активных ррепарато?

Целью синхронизации охоты коров являете» получение качественного индуцированного иикла. Сурфагон • препарат способный, ло имеющимся экспериментальным данным, е определенной степени корректировать гормональный фон, а также наряду с этим ослаблять или устранять последствия его нарушения. 1 . '

Провели еравн отельные исследования эффективности комбинированного применения проста) ланаина в сочетании с гонадогропииом и гонадолиберином на трех группах животных (схема 1} | : ...,.-".".' ■ '

Результаты опыта представлены в таблице. I. В группе I, в которой . при синхронизации охоть» проводили только эстрофаном, н получили наилучшие результаты при обработке корове 10 по 12-й день подового цикла, служила контролем. Животных, опытных групп обрабатывали в период с 7-9 и 13-15-Й день полового цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников. Группы 11 и III обработали простатдакдином эстрофаном а дозе 500 мкг а сочетании с ГСЖК в дозе 500 M E. Животным группы Ш, перед первым осеменением дополнительно вводили синтетический гонадолиберин (сурфагон) в дозе 15 мкг;

Анализ результатов - опыта показал, что в веление гонадетротшов положительно корректирует недостатки, связанные с неблагоприятными исходными факторами, на момент начала обработок. В группе II общее количество животных пришедших в охоту было S6,6%; это близко к показателю в контрольной группе: 90,0%, Количество животных, проявивших признаки: охоты в оптимальный 48-часовой интервал после применения простаглаидика - 66,7 %, оказалось также близко к показателю в контрольной группе - 70,0 %. Введение в комплекс синтетического гонадолиберина (сурфагона) увеличивало процент прихода в охоту до уровня в контрольной группе. При атом необходимо отметить, что большинство коров в группе П1 (83.4 %) пришло в . охоту через оптимальные 4S часов после обработкипротнв 70,0 % в контроле.

Таким образом, введение в режим обработок с просгаглаидинами гоналотропинов улучшает результаты синхронизации охоты. Синтетический гонадолиберин корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно1 возрастает. _ i •

1. ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО МЕТОДА ОБРАБОТКИ КОРОВ-ДОНОРОВ НА , РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ

'■ ■ '*■ ¿ Показатель Группа

1 (контроль) Эстрофан И Эстрофан + гежк Ш Эстрофан + ГСЖК + ■ Сурфагон

Число животных, II 30 - 100,0 30- 100.0 30-100,0

Пришло в охоту, П - % 27 . 90,0 26 - 86,6 27 - 90,0

В том числе через, П-% 24 часов 3 • 10,0 2-6,7 2-6,6

■ 48 часов ■ - 21 - 70,0 ' 20--66,7 25 - 83,4

72 часов 3 - 10.0 4 - 13,2 .

Не проявили признаков охоты, П » % 3 - 10,0 4- 11.3 3- 10,0

Пригодные к индуцированию суперовуляции; П-% 27 - 90.0 • 24 - 80,0 27 - 90,0

3,7- Определение эффективности гипофтарных препаратов фолликулостимулируц?|цего ' гормона у «?четации с рил динг^гормоиамн при стимуляции овуляции у иоро^-донцроч ' Восстановление в послеродовой период воспроизводительной функции у коров является одной'Из серьезных задач зооветеринарной службы. Чаше всего нарушения этой функции возникают на почве задержания последа, атонии матки или заболевания яичников (персистеитное желтое тело, гипофункция, киста и другие) и для и* устранения используют различные лекарственные и гормональные препараты. При этом удастся профнлактнроватъ послеродовые осложнения, ко надежно гарантировать в короткое время восстановление воспроизводительной функции не удается, так как асе применяемые препарат не моделируют тот гормональный фон, который характерен для стадии возбуждения полового цикла.

Испытали действие гонадотропинов в сочетании с гонадолиберинами, а также их сочетание с синтетическими простаглкдинами при стимуляции овуляции у коров доноров после отела (схема 1

' При клинических исследованиях контролировали наличие желтого тела беременности н развития фолликула.

Влияние введения препаратов на развитое овариальной активности после отела приведено в таблице 2. У опытных животных, в сравнении с контрольной группой, достигнуто более раннее наступление овуляции,-Первая овуляция после стела у животных экспериментальных групп наступила в среднем на 3,7-2;0 дня раньше,. чем в контроле. При анализе. стимулирующего овуляцию действия обработок констатировали более выраженное действие ■ группах IV и V: число животных с овуляцией до 15 дней после «тела возросло до 36,7-40,0 число животных с овуляцией после 15 дней после отела соответственно понизился до 63,3-60,0%.

Для боле« детального анализа степени воспроизводительного статуса животных после проведения осеменения вывели показатели индексов осеменения (таблица 3). Окончательные

результаты наиболее благоприятные в группа*'.!V к'V: У 62,00-63,33 "Л животных достигла оплодотворяемость после 1-го осеменения; общая ошюдот&оряемость доведена до91,ЭЗ-96,00 % и индекс осеменения до 1,65. При тгом сервис-период сокращен до 72,3-67.5 дней.1 . ■ 1 ■ Таким образом, это лает основание предполагать возможным вызывать супероауляиию- к индуцированный поме отела цикл или последующий спонтанный, "ку есть боле« раннее после отела использование коровы в качестве донора. >*'• ." 1 .--..- - * '''

■2. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЕ ГИПОФИЗ АРНЫХ ПРЕПАРАТОВ: :■<■ ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА В СОЧЕТАНИИ С РИЛИЗИНГ-ГОРМОНАМИ *

Число животных с . ■ - ' Срок первой'овуляции ' -

Число , наличием в яичниках . " -■■1 ■ ■ ..> ч »-! ■ 1

Группа Препарат живо] на день обработки

ных • Желтое ■ Желтое: Интервал; ■'Число Число

тело . тело и. ■ после животных ЖИВОТНЫХ:

беремен: ности, -, П. фолликула или только фолликула, П отела, дней■ ' с овуляцией до 15 дней после с овуляцией после 15 дней

* - ■■ ' ■ '. : 'I ■' , '' + * и отела;-П-У.1 после , отела, П-%

1 Контроль 50 27 23 20.1 ± 3.4 "10.20,0 40-80,0

Фоллитропин + Сурфагон , 30 . . - 12.. 18,1 ±4,0 6 -20.0 . 24 • 80,0

* ш >■■ ГСЖК -+ Сурфагон 50 ' * 27 ■ 23 17,4 ±3,4 - 19 - 33,0 31 - 62,0

IV Фоллитропин + РВ Р2а + ' ■ Сурфагон. 30 ■ 16 ' '"И 16,4*2,1 11 - 36,7 19-63,3

V ГСЖК . '16,443.1'

■ + н Р2а+ Сурфагон » 50 26 ' 24 • 20-'40,0! 30-60,0

3. ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ПОСЛЕ ОТЕЛА НА, ,

Группа Препарат ,; - + Число. Животных ' Оплодотворае-мостъпосле. 1-тоосеме-' ' ■ Общая ; . оплолотаоря; < иостъ, П-% | Индекс осеменении, 1' Сервис-1 . период,: , Сутки

1 Контроль 50 26 - 52,00 48 - 96,00 1,95 85,05 ± 44.05

11 Фоллитропин ■ + Сурфагон * 30 17 - 56,67 29 - 96.67 ' 1,70 75,6 * 29,00

111 ^ ГСЖК + Сурфагон , 28 - 58,00. , ,49 - 98,00, 1Л5- 74,6 42,65

IV Фоллитропин + РйР2а + Сурфагон 30 19 - 63,33 25-93,13 1,65 72,3* 21,75:

V ГСЖК + Р8Р2а + Сурфагон 50 31-62,00. • 48-96,00 1,65 67,5 ^ 21,75

3.3 1 Изучение влияния продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и н< качество

Процесс овуляции индуцированных к росту фолликулов затягивается во времени:: Это подтверждаете* тем, «то на 7-8 день индуцированного цикл» после осеменения находят эмбрионы на разной стадии развития. .1

Проведены исследования на 51 корове (таблица 4) после индуцирования суперовудяцни фодлитропином в синхронизированный (группе 1) и спонтанный циклы (группе И) Выяснили, что у части коров-доноров охота продолжалась на второй и третьи сутки. Этих животных осеменяли, соответственно, ) и.4 раза с интервалом 12 часов на всем протяжении охот. Увеличению продолжительности охоты и кратности осеменения соответствовало увеличение числа овуляций на положительного донора, с 7,3 до 8,7 в группе I и с 6,9 до 8,4 в группе II. Однако наилучшая оплодотворяемость установлена при трех кратном осеченеки и - 93,9 и 93,6 %. Увеличение продолжительности охоты до Зб часов и числа осеменении до 4 приводило к снижению оплодотворяемостн яйцеклеток до 72 к 84,6 соответственно. ,

Таким образок оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением , кратности проведения осеменения до 3: " ' Дальше, было изучено влияние продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов н их .^качество: По • результатам проведенного опыта (таблица 5) установлено, что отклонение продолжительности охоты от среднего показателя, то есть до 12 часов и ее увеличение до 36 часов, не влияет на показатели среднего числа клеточных структур на донора, но отмечается

уменьшение:числа эмбрионов пригодных для трансплантации Причем число эмбрионов на

* -

близких стадиях развития (поздние морулы и ранние бластоциегы) колебалось^ в пределах 49,151,9 %. При наличии эмбрионов на стадии ранней и поздней мору л ы и поздней бластонисты число эмбрионов пригодных для трансплантации,'снизилось до 11,1-23,1 %. Лучшие результаты былн получсны (тт доноров, у которых охот* -длилась ■ 12-24 часов - Большинство эмбрионов находились на'стадии < поздней морулы и^ ранней ^бяастоцисты. При этом пригодных для трансплантации эмбрионов было почти в два раза больше, чем в других случаях (86,7 против 49,1 и 51,9 ♦/.).' ' • ■

Таким образом, количество эмбрионов пригодны* пял трансплантации и стадия их-развитня' у супертвулировавшнх ■ короа-доноров ' в определенной' степени' зависят от. продолжительности охоты.

4 ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ - И КРАТНОСТИ ОСЕМЕНЕНИЯ НА УРОВЕНЬ ОПЛОДОТВОРЯЕМ ОСТИ ЯЙЦЕКЛЕТОК У КОРОВ-ДОНОРОВ

Продолжится ьность охоты,часов Кратность осеменснкя Группа Число коров м. Среднее число»"' овуляции. Оплодотвори емосгь. яйцеклеток, %

Синхронизированный половой цикл

12 | 2 ' . 1 ■ ■4 20 7,5 ■ 85,0

24 3 10 50 ■ ■ 3,0 - 93,2

36 4 6 30 8.7 72.7

С поктанный половой цикл 1

12 2 И г 25,8 .. 6,9 -85,0

24 5 16 Я.6 7,3 93.6

36 4' 7 • 12,6 8,4 84,6

5. ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕСЬНОСТИ ОХОТЫ НА СТАДИЮ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ И -_:_ИХ КАЧЕСТВО _

Продолжительность охоты. Часов Стадам развития извлеченных эмбрионов Обшее число ■ клеточных структур ' Число -клеточных структур надонора,-П Число Эмбрионов -' пригодных для трансплантации на донора,. П

Число доноров, . П П\ в том числе, эмбрионов■ * ПряГОДНЬИ ДМ- трансплантации

П %

<12 Поздние морулы и ранние бластоциегы 11 57 28 1 , 2,6 ±0,6

Ранние и поздние - ■ , морулы н* бласгоцисты 3 26 6' 23,1 8,7 ±1,1 2,0 ±<^5

12-24 Поздние морулы И ' ранние бласгоцисты 23 128' 111 ' 86,7 5,6 ±1,4 ^ * 4,8 ± 0,6 • а V-, 5

Ранние и поздние-морулы и бластоичсты 43- 10 . ; 233 ■ «,6±1,б ; ■ 2,0 ±0.3

>24 Поздние морулы и . ранние бластоцисты И 52 .27: 51,9 - 4,7 ±0,9 . 2,5 ± 0,4

Ранние и поздние морулы И' бласгоцисты 10 72 8 11,1 7,2± 1,2 0,8 ± ОД

2, Цтучение влияния ^юрфо-фуккциональнопз состояния яичников, которое пршодпт^.нг момент начала обработок на результаты синхронизации охоты ' '.: ; ' Изучали мияння-морфо-фунхционального;состояния яичников! которое приходится на момент начала обработок ш результаты синхронизации охоты.

.. У 90 коров трехгрупп охоту синхронизировали простагландином зстрофаном в дозе 500 мкг (таблица б). Группы подбирали с учетом стадий полового цикла 1 группу сформировали из животных; находившихся на 7-9-й день полового цикла; II группу из животных, находившихся на 10-12-й день полового цикла, и Ш группу из животных,, находившихся на 13-15-й день полового цикла. В одном из яичников всех животных было диагностировано типичное желтое тело Перед обработкой .брали пробы крови для определения концентраций прогестерона и -»страдиола.

: ■ ■. Лучшие результат показали животные И группы. Большинство из них пришло в охоту,

причем через равный интервал времени - 48 часов после инъекции эстрофана. До 24 и после 4£

часов пришли » окоту лишь по 3 особи. Признаки охоты не проявили лишь 10 *Л коров У 90 %%

обработанных.животных, то есть у всех пришедших в охоту, на 8-10-й день' индуцированного

цикла диагностировали - желтое тело при отсутствии пальпируемого фолликула. . Это служило

основным показателем для вызывания суперовуляцни. . '■ ' " '''"

Результаты, полученные от животных других групп, оказались низкие., Сроки прихода в

охоту коров 'в группах 1н'Ш значительно варьировали. Не 'проявивших признаков охоты

животных в группах I н 1П было 26,7 'Л, Пригодных же для использования в качестве доноров

было меньше:: 16Д 36,1%, то есть в 5 и 2,5раза меньше. ' <

Анализ показателей гормональных профилей показывает, что уровень прогестерона в крови

животных трупп I и Ш перед обработкой - 0,5-0,7 м/мл — был низок н характеризовал отсутствие

возможности быстрого лизиса под действием экзогенного простагланянна.Тем не менее, такое

функциональное состояние характерно для соответствующих периодов цикла, так как всего лишь

13,4 и 29,5 % коров в этих группах имели приемлемые концентрации прогестерона - в 1,8 и 2,0

иг/мл соответственно. ..Это в определенной степени обусловило 48-часовой интервал прихода этих

животных в охоту, я следовательно, физиологическое состояние их яичников, позволяющее

стимулировать суперовуляцию. ~ > ' - ■ ;

Сопоставление соотношений концентрации прогестерона и эстрадиола с' результатами г , . ■ ' * ■■ . -; |

синхронизации показываем, что характерное для середины дютеальной фазы;цикла (группа II)

сочетание" высоких концентраций прогестерона и средних концентрации эстр&айола

соответствовало оптимальному интервалу прихода коров в охоту — 48 часов. .Сочетание более

высокого значения эстрадиола! с .более-.низким . значением^прогестерона соответствовало

сокращению аналогичного интервала до 24 часов, » сочетания более низких концентраций как

эстрадной», так и прогестерона - увеличению интервала до 72 часов.

*

Приемлемые результаты. 48-часовой интервал прихода животных в охотун наибольший процент пригодных для последующего использования иэних'в-группая I и Ш получены при соотношениях - близких к средним показателям концентрации . эстраднола,, Этичных для соответствующнх стадий , цикла н.1 удовлетворительных показательных прогестерона, подтверждающих секреторную активность желтого тела. Отклонения в сторону увеличения либо уменьшения от такой концентрации эстраднола при низких показателях прогестерона приводят либо к рассеиванию срока прихода в охоту животных 8 группах I к II], либо к ее отсутствию во всех трех группах.,. "...

Таким обраэоч общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в периоде 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтоготел4в одном из яичников происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-п> го 9-й день и с 13-го по 15-й день.полового цихяа,При этом необходимо отметить,. что подавляющее большинство коров, пригодных длл индуцированной суперовуляции, оказались в числе пришедших., в охоту через 48 часовпосле обработки: Применение простагландина Ра, вызывает лизис желтого тела « течение нескольких часов, затем овуляцию фолликула.. При этом большинство особей приходкг в охоту через '48 часов после инъекции препарата Простагландин р1. оказывает лютелитическое действие с 5-6-го по 15-16-й день спонтанного полового цикла Однако обработка ло 10-го и после 12-го дня цикла даже при наличии типичного желтого тела в янчниках нл всегда обеспечивает полноценный и синхронный его лизис у части коров, что приводит к разбросу сроков прихода в охоту или ее отсутствию: ■ ..

Данные по гормональному профилюперед проведением синхронизации половых циклоа коров-доноров только простаглакдином служат ценным диагностическим тестом.; Оптимальными <

концентрации прогссгеронаможносчнтатьЗ,1.нг/мл и эстрадном 28,9 пг/ил^г. ■ .. •

6. ВЛИЯНИЯ СТАДИИ ПОЛОВОГО ЦИКДА Н ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ НА ' _ РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ -_

Группа Интервал от обработки до начала охоты, в часаЯ" Число ' ^ животных пришедших надх'оту ' Гормональный профиль " *,.,,/перед обработкой-• ■ Числе -1 1, ¡при и иду: ' супе| животных, ГОДНЫХ ■ лированаю , . »овуляЦин-'

п *Ч ."> • % Прогестерон,', нг/мл ,1ч. , - Эстраднод, > пг/мл г.'|. -, ■■ , П В % к числу животных, пришедших * в окату- ■"

I п-зо 24 4 13Г3 0.5 ±0.3 18,0 ±1,4 • -

48 5 16,7 1.8 ±0.2 19.5 ±0,1 4 13,4

.72 10- 33,4 < 0.8 ±0.1 ■ 20,6 ±0,1' • 1

ВСЕГО 19 63,3 .... • • - 5 Л6.7

II П-ЗО ' 24' 3 10,0 1.9 ±0,2 31,9 ±2,0 3" ■ 10.0

■ ' 4 48 ' ■ ■ 21 ■70,0 3.1 ±0.3' ' 28,9 ± 1,7 ' 2Г 70,0

.-■ 72. . .. .3 10,0 ■ 26,0 ±2,0 : : Э : - 10.fr' "

Продолжение ТП&ТКЦШу

Группа Интервал от обработки до начала охоты, • часах ' Число -: животных пришедших на охоту ■ ■ Гормональный профиль ; ■ перед обработкой - Число при _Г . ИНДу! супе животных, годных к трованню. . ^овуляции •

п Прогестерон, -иг/мл Эстрад иол, пг/мл П, В % к числу животных, пришедших в охоту ■

ВСЕГО- 27 90,0 • - 27 90,0

т п-Зр 14 11 36,7 0.7 ± 0,3 30,1 ± 3,0 2: 6,6

4» 4 13,3 2,0 ±0,2 27.012,1 9 39,5

72 4 13,3 0.7 ±0,1 21,6 ±2.3 . -■ -

ВСЕГО' № 63,3 - - И 36,1

ВСЕГО ПО 3 ГРУППАМ 63 70,0 - - 3» 42,2 ■

3,3.3 Итучение влияния исход нот гормонал^фр) профиля на сулеоову/пггорную реакцрто ,. рцчннкп; ц качество эмбрионов.

Проведен ¡ опыт С ■ целью изучение .влияния- исходного гормонального профиля на суперовуляторкую реакцию яичников и качество эмбрионов. ■> • ■

В опыт брали животных, находящихся в состоянии спонтанного и индуцированного цикла л од медее чем через-дм месяца посве^отела, в группу I отобрали животных по наличию спонтанной охоты; в: группу И - синхронизированной г охоты Р£ Р2о/СЖК. Животных обрабатывали фолдктропином/Рв Р2а начиная с 10-го дня цикла по 4-днеоиой схеме." Через 43; часе» после инъекции простагланди на провопили'осеменения ректо-цервикальиым методом иа протяжении охоты , с интервалом 12 часов двойными лозами замороженно-оттмнной спермы одного и того же. производителя. Перед началом обработок брали пробы крови для определения концентрации прогестерона и эстраднола. *,

Иа основании клинических данных состояния яичников ъыдеяили 4 уровня реакции суперовуляции: 1-й уровень—12 н более желтым тел; 2-й уровень-8-П желтых тел; 3-й уровень — 4-7 желтых тел; 4-й уровень — 3 и меньше желтого тела. Аналогично,' по результатам извлечения1 пригодных, для пересадки эмбрионов, выделили также четыре уровня: - 1-й уровень - 9 н больше эмбрионов, 2-й уровень — 5-$ эмбрионов; 3-й уровень — 1-4 эмбрионов; 4-й уровень — отсутствие пригодных для таересадки эмбрионов (таблице 7) -

. . Затем сопостаишк средние значения концентраций прогестерона и эстраднола в крови доноров с уровнем их реакции

, . . Полученные данные показывают, что в группе, коров, обработанных • индуцированный цикл (группа П)," каждому уровню реакции, как по количеству овуляции, так и по получению пригодных для пересадки эмбрионов соответствует определенный, исходный гормональный фон. Наиболее отчетливо это-находит: выражение в: отношении - концентраций; прогестерона.. С повышением концентрации прогестерона, увеличивается число овуляций (от 3 при 1,2 иг/мл до 1?

нг/мл)' Также увеличивается - выход числа нормальных эмбрионов (от О при ис/мя до 9 при 4,0 нг/мл). Аналогичная корреляция наблюдается, и в группе I.

Необходимо отметить,' что средние значения исходных концентраций прогестерона в группе II (с индуцированным циклом) выше аналогичных значений в группе I, обработанной в спонтанный цикл. Это по видиму, связано с увеличением обшей массы ямзтеальной ткани, образованной вследствие примененной схемы синхрон юацнк. . .

Из 'проведенных данных следует, что оптимальная активность желтого; тела, предполагающая результативность гормонального индуцирования суперовуляции, обусловливает концентрацию прогестерона в крови доноров от 2,9 до 4,0 «г/мд. При всем этом возможны отступления от выявленной тенденции, связанные, вероятно, с индивидуальными особенностями обработанных животных и с тем, что число клеточных структур не взаимосвязано с исходной концентрацией прогестерона при минимальных ее значениях. В то же время корреляция числа овуляций и неоеудировавшых фолликулов даже С минимальными значениями прогестерона имеет место. Взаимосвязь между исходными концентрациями эстраднола м числом клеточных структур выявлена не была... ■;.■-. ■■■■." - *

Таким образом, определение исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров

позволяет в определенной мере предсказывать об эмбрнопродуктнвностн отбираемых животных.

7. ВЛИЯНИЕ ИСХОДНОГО ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ' нл СУПЕРОВУДЯТОРНУЮ РЕАКЦИЮ ЯИЧНИКОВ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ

Показатель Уровень • реакций суперовуляцин ■ . Группа I ''*■' спонтанный цикл ' ь Синхр Групп* II. юннзнровакный цикл ГРкПо-ГСЖК) ■ •

Число' животных, п Прогестерон," ■ ... нг/мл Эстрадная, гг/мл Число Живот. ных, П Прогестерон, . нг/мл - Эстрадиол, пг/мд -

Число "' овуляции : (желтых • тел> ■ ■ >12 15 3Г1 ± 1,2 29.7 ±2.6 26 4.0*1.7 23.5 ±1.6

8-11 - 25. 2,9 ± 03 - 24,7 ±2,8 : .40 3,2 ± 1,7 19,8 ± 1,4 '

4-7 30 2,6 ±0.3 29,0 ± 2.0 30 2,9*0.7 18.3 ± 1,2

<3 12 1,2 ±0,3 26.7 ±2.3 16 1,2 ±0.8 19.1 ± 1X

Число змбрионов>, пригодных для-трансплантации £9 * 8' - 3,4 ± 0,2 ' 33,6±S.O ' 12 • 4.0 ± 1,9 21.5 ±5,7

3-8 15" 2.9 ± 0,4 23,8 ± 2.3 23 . 3.4 ±0.7 ■20,6 ±1,5

1-4 15 2.5±0.4 26,0 ± 2,4 17 2,8 ± 0.3 17.3 ±1,2

Отсутствие 6- 1,2 ±0.3 29,0 ± 2,8' 16 13*0,4 173 ±1,0

3 3.4, Влияние включения в схему обработок коров-доноров синтетических гонааолибевнноа

или -яюгеиниднруюшего гормона на продолжительность охоты и качество эмбрнтпв С учетом того, что колебания продолжительности охоты при гормональном индуцирований суперовуляцин коррелируют с ее показателями, а также литературных данных о том, что введение экзогенного гонадолиберииа или люгеинизируюшело гормона оптимизирует продолжнтеяьность '

охот1>( и компенсирует возможный дефицит ЛГ, изучали влияния экзогенного гонадолиберина или лгатеннизируюшего гормона на продолжительность охоты и результаты суперовуляции.

При вызывании суперовуляции фолликудостмму лиру ющи м ^ тор мо»ом/рд-р2а по четырехдневной сцене на четырех 1-руппах хоров, через 48 часов,после введения просгагла ндина^ оереа первым осеменением животные опытам* групп вводили синтетические гонадолиберины или ЛГ (таблица 8) ,

Животным группы I не вподили сиитегическке гонадолиберины, и она служила контролем; группе Л ввели 0,5г днгиеграна (Чехия), группе Ш 15 мкг сурфагона; группе IV 1000 ИЕ овогои-ТИО. В опытных группах (II IV) осеменение проводили двукратно с интервалом ,12: часов < Осеменение , коров .в, контрольной группе проводили спустя 48 часов, после., введения простагламдина, иапрртяжеиии охоты с интервалом 12 часов. . ...

, , Средняя продолжительность охоты коров групп 11, Ш.и IV,составила соответственно 20,7; 18,0 и 19,0 против. 28,8 часов в контроле, В среднем, клеточныхструктур на до нора было больше в группе I. Однако, эмбрионы пригодных для трансплантации на донора были в пользу опытных групп. При этом следует отметить снижение числа дегенерированных эмбрионов и неоплодотворснных яйцеклеток^, Процент эмбрионов, пригодных для трансплантации, в опытных группах составил (к^группам: ,74,6; 74.6 и 81,1 */*, соответственно.* В то же времякак в котроле -этот, -.показатель - был1 лишь--, 47,3 ■ %. • > Количество - дсгенерированных эыбрибнев и неоплодотворёмных яйцеклеток*в - контрольной, труппе (28,0 и -24,7 более чем в два раза превышало аналогичные показатели.» опытных группах; 11,9 и13,5 */• - И, 13,4 и 11,9 У» * 111,9,5 и 9,5%. IV соответственно._....1 ... , . ,.. - ■ - _ V . ! '

Такнм образом, включение синтетических гонадолиберинов няи ЛГ в схеме индуцирования супсроауляиии корректирует процесс овуляции при возможных его.нарушениях При снижении числа-,извлеченных, клеточных1: структур, возрастает процент' эмбрионов, пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляинн существенно возрастает.

Проведен опит по использованию определения концентрации ЛГ для выбора оптимального времени осеменения коров-доноров при суперовуляторном процессе (таблица 9). Исследования проводили на 19 коровах-донорах. " ■ - ' - ■

| .,''■■ Параллельно с определением- гормональных параметров' регулярно использовали метод ректальной пальпации яичников, начиная с момента инъекции лроетагяаидинаи во время всей продолжительности эструса. .,; ." '. ..."'■.'/*,,

Как видно по данным таблицы 9, в интервале, да- 41,0-42.0 часа после «текиин. Р£ Гга наступает течка, а через 44,0 часои предовуляториый пик ЛГ.;- ; . ,г ■ -

; Применение ректальной пальпшин - показало, тго после пика. ЛГ интервал до начала овуляций составляет 20-24.час«.,. Поэтому,время осеменения необходимо определить:таким

образом, чтобы сперма, введенная в проводимую систему самки, завершила процесс капашггаиии к моменту овуляторного процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 48 часов после 1 инъекции простагландина. ., --,,-.-

8. ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК" КОРОВ ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИВКРННОВ ИЛИ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА НА _ ПРОДОЛЖИТЕЛНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ ■ ■■

Показатель Гр гппы

КОНТРОЛЬ 11 5,0 Г ДИРИГЕС-; ТРАПА III 15МКГ СУРФАГОНА IV 1000 ИЕ овогон-ТИО

Число обработанных коров, п-'Л 13-100 11-100 ■ 20-100 13 - 100

Число положительных доноров, п . % 13-100 .11-100 20-100 13-100

Средняя продолжительность охоты, часов ■28,8 ±2,3 20,7 ±2^ ■ ■ 18,0 ±2,4-1 19.0 ±2,4

Получено клеточных структур. П - % Всего, 93-100 67-100 134-100 74-100

В среднем 7,1 ±0,6 "6,1 ± 1.0 ■ 6,7 ± 0,7 5,7 ±0,8:

Получено пригодных для трансплантации эмбрионов, п - % Всего. 44 - 47.3 50 - 74,6 100 - 74,6 60-81,1

В среднем, 3.4 ±0.8 4,5 ±0.6 5,0 ±0,7 4,6 ±0,5

Получено ■ дегенерировали ых ЭмбрИОНОВ. П ' % Всего, 26-28,0 8-11,9 18-13,4- 7-9.5

В среднем 2,0 ±0,8 0,7 ±0,2 * 0,9 ± 1,4 0,5 ±0,5

Получено не оплодотворенных яйцеклеток, л -% Всего, р 23-24,7 9-13,5 ■ 16-11,9" • 7-9,5

В среднем 1,8 ±0,7 0,8 ±0,3 0,9 ±0^ 0,5 ± 0,1

9, ИНТЕРВАЛ МЕЖДУ ИНЪЕКЦИЕЙ ПРОСТАГЛАНДИНА, НАЧАЛОМ ЭСТРУСА И ПИКОМ

ЛЮТЕ ИНИЗИ РУЮЩЕГО ГОРМОНА

Препараты; Число животных,. П Интервал времени от вевдени* простагландина до начала эструса. часов Интервал времени от введения простагландина до пика ЛГ. часов

ФСГ-Ре Рл 9 41,3 ±2,3 48,5 ± 3,0

Фоллитропнн - Ря РгО ■ 10 ■ '42.0*5.5 48,1 ± 3,9 -

3.4. Влияние рюнзинг^гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овумиии. ....... ¡,- .

Большое значение для прогнозирования,, понимания сущности и создания, приемлемых в ■ условиях практики методов корректировки процесса суперовуяяции, в случае его нарушения, имеет изученность, гормональных, профилей суперовулнруюших. коров в ответ надсйствнс. гонадотропныхпрепаратов , , ...... ......1 .. . .ч

Был« произведены исследования с . целью анализа, эндокринного аспект*, лежащего а основе стимулирования воспроизводительной активности. Для этого соответствие объединенных* показателей суперовуляции, вызванной фоллитропином/р£ Р2а у корм в послеотельный период при наиболее типичных проявлениях спонтанных -половых инедов.. гормональным профилям

отразили графически (рисунок I).

" Гормональные - исследования проиллюстрировали причину неудовлетворительных показателей суперовулянин,', индуцированной в первый половой цикл после родов: это низкая концентрация прогестерона перед обработкой (рисунок 1А) Однако гормональное индуцирование активности функциональной деятельности яичников в послеотельный период дало возможность получить удовлетворительные показатели суперовуляции (3-5 эмбрионов на донора) в индуцированный полосой цикл и позитивные показатели (<5 эмбрионов) в последовавший спонтанный половой цикл (рисунки 1Б и 1В)

Общепризнанно считать/ что вызывание суперовуляции в первый после отела цикл оказывается безуспешном. В то же время наши исследования показали возможность вызывать положительные показатели суперовуляторной реакции.

Большой интерес представляет выяснение роли эндокринных факторов, лежащих в основе воспроизводительной активности на протяжении послеотельного периодов Наиболее показательна в этом отношении - низкая концентрация прогестерона. ' Это, происходит вследствие функциональной неполноиенност» желтого тела, что в свою очередь, вызвано отсутствием завершения инволюции^матки-и оби^й послеотельной перестройки (рисунок 1А> Однако направленная стимуляция активности функциональной» деятельности . яичников ведет, к активизации восстановления репродуктивной функции в. целом. Значения концентрации прогестерона, аналогичным среднестатическим показателям, которые - являются нормой для соответствующего периода' спонтанных циклов, сформировавшихся' после окончательного завершения .'поел«отельного- периода,- свидетельствуют о / наступлении ^ полной - нормализации половой функции (рисунки 1Б и 1В).

"Исследования показали, .что ■ пригодность коров для индуцирования • суперовуляции определяется градацией концентрации прогестерона в крови животного. Причем, показанием к началу обработки будет неуклонное повышение концентрации от базальиого значения в нулевой день цикла до'наивысшего значения, характерного для середины цикла

Непосредственной причиной нарушений процесса сулероауляцнн являются преждевременная или; поздняя овуляций,'отсутствие овуляции большого1 или меньшего числа фолликулов и сочетание этих нарушений. Они в свою очередь, обуславливают послеовуляторные сдвиги • гормональном балансе,, ответственном за регуляцию нормального оплодотворения и развития • эмбрионов, Своевременно зафиксированный гормональный . дисбаланс позволяет нормализировать процесс путем введения препаратов гонадолнбернна или ЛГ.

~ Таким образом, исследования указывают на состоятельность корректирования овариальной функции в ранний период после отела.' Показатели суперовуляиии вызванной в спонтанный цикл, последовавшей за индуцированным указывают на.тенденцию к последовательному улучшении

показателей Это говорит о более медленном. процессе восстановления к стабилизации морфофункиионального состояния ■ эндометрия и вкутриматочной среды относительно срока стабилизации циклических процессов в яичниках. С другой стороны, очевидно, что, достигаемая за счет послеродовой овариостимуляиии, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке.

А < (ГучГшуд я 1-Я ' ' «■«пациент I

ЛЫЭ1Ы)

г

-V- 1 1=5

! ; \ 1—с

« я «ь.

Рисунок /. Иьмененин хочфтгцкгции прогестерона в крови у коров-доноров при индуцировании суччровулмции в послеродовой период,

М . :

3 5. Пересадка эмбрионов телка м-реи клиентам Факторы, влияющие на их ' приживляемость "" " ' ' ' ■*

Изучали влияния различных уровней суперовуляторного ответа коров-доноров и качества вымываемых эмбрионов на уровень- приживляемоши при пересадке телкам-реинпцентам. Для этого были проанализированы результаты 274-х пересадок свежепол ученных эмбрионов (таблица 10), • ••

Пересаживаемые эмбрионы были извлечены за 2-3 часа до пересадок у 38 коров-доноров черно-пестрой породы. Дм вызывания суперовуляции использовали -ФСГ в дозе 45 мг, который инъецировали в течение 4-х дней убывающими«« дозами.

Приживляемость установили путем ректальных исследований на стельность через три месяца после пересадки.^ .

Процент эибрионоа хорошего и отличного качества при увеличении уровня суперовуляции достоверно снижался. При среднем уровне реакции (5-8 овуляции) он составил 33,0 и 29,0%, при очень высокой реакции (от 13 до 16 овуляции) было получено лишь 10,0 и 28,0 % эмбрнонов отличного н хорошего качества соответственно.

Эмбрионы получены при высоком уровне суперовуляции, приживлялись хуже, чем при низком и среднем; при очень высокой реакции - 28,0 % против 43,0 и 42,0 % при низкой и средней реакции. . -

Анализ приживляемости эамороженно-оттаянных эмбрионов (таблица 11) также показал, что при высоком.уровне суперовуляции,- приживлялись хуже; чем при низком и среднем: эмбриопродуктивиост донора 1-4 эмбрионов приживляемость составила 48,3 '/•, тогда как при эмбриопродуктивкостн от 9 и более только 30,4 */•.- >.'■'•

Важным фактором, влияющим на результаты эмбриопересадок у крупного рогатого скота, является физиологическое состояние желтого- тела яичника, которое обеспечивает соответствующий для данного периода полового цикла уровень прогестерона в крови. Доказано,, что существует связь уровня приживляемости эмбрнонов и концентрацией прогестерона в крови телок-реиипиектоа.

В таблице 12 приведены данные о влиянии качества' желтого тела яичников на прнжнвлияемость заморожеино-оттаянных эмбрионов.

При использовании .реципиентов, у которых диагностировали отличное жеотое тело яичника, приживляемость составляла 48,2 */«, хорошее - 36,2 %, удовлетворительное - 28,8 %. -

Из приведенного следует, что средний уровень эмбрнопродуктнвности (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрнонов отличного н хорошего качества к более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-еттаянных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы полученные егт коров-доноров с низкой и средней

эмбриопродуктивностькз. При трансплантации особо иен ныл эмбрионов следует использовать телок-реи ипнентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересадки

10ВЛИЯНИЕ УРОВНЯ СУПЕРОВУ ЛЯI »1» И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ НА ИХ ПРИЖИВЛЯКМОСТЪ ■ ' '

. Показатели. -.; . - V Число овуляции

ОТО до 4-х от 5 до 8 , ох 9 ло 12 От 13 до 16

■ - ' Число коров-доноров - 6 ■ 7 - • 13 • 12 -

Получено эмбрионов 17 52 Кб 119

На донора 2,8 7,4 ■6,6 ' 9,9

Процент эмбрноноа от числа овуляций 70.0 ± 11.1 93.0 ±3,5 55.0 ±5,4 62,0 ± 4.5

Извлеченные клеточные ' структуры, *А Эмбрионы Отличные 33.0 ±4,3 23,0 ±2,7 10,0 ± 1,4

Хорошие 57,0 к 10,8 29,0 ± 4,3: 27,0 ±2,6 28,0 ± 1,5

Удовлетворительные. 35,0 ± 10.8 15,0 ± 3,1 30,0 ±2,8 36.0 ± 1,7

Де генерированные . 8,0 ± 4,2 6.0 ±3,8 13,0 ±1,8 И,0 ± 0,8

Неоплодотворенные -яйцеклетки 17,0 ± 1,3 7.0 ± 1,4' 17,0 ±1,2:

Приживляемастъ после пересадки, % 43 0 ± 12.0 42,0 ± 6.8 34 0 ± 5,1 28.0 ± 4.1

П. ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕННО-ОТТАЯННЫХ ЭМБРИОНОВ

Разовая эмбриопролуктнвность "

От 1 до 4 • эмбрионов От 5 до 8-эмбрионов • От 9 и больше эмбрионов -

Оттаяно эмбрионов 33 75 48

Нежнэ неспособные . .. 4 . - - .... 7~ ■'.'• ■ • "2 - ■

Процент от числа оттаянных ■ 12.1 > - -9.3 - ... 4Г2

Пересажено эмбрионов • 29 68 46

Стеяьные реципиенты 14 " "24.....- ■ ■• ". И'

Процент приживляемосги - - 48,3 ■ ■ •• 35.3 • . ■■ - -30,4

12 ВЛИЯНИЕ КАЧЕСТВА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ЯИЧНИКА НА ПРКЖИВЛЯЕМОСП»

Показатели ■"■■-- -•-" Качество желтого тела -1

Отличное Хорошее Удовлетворительное

Пересажено эмбрионов 33 58 52 ->.

- Стельные реципиенты - 16 ' 21 ■ > • - ^ -з: ' . .15 ' ' > -

Процент стельности . 48.2.- 1 36,2 . 28,8 . ■

4. ВЫВОДЫ. .

1. При индуцировании охоты с целью получении синхронного течения индуцированного цикла у доноров и реципиентов, гонадотропнны, вводимые в сочетании с простзгланднном, унифицируют овариальные процессы в период с1-ге по 15-й день цикла, что улучшает ..результаты синхронизации охоты.. .Синтетический понадолибермн корректирует - процесс овуляции . при возможных его существенно возрастает. ^

нарушениях, неэффективность синхронизации охоты

2. Введение в схемы оварностимуляиШ! препаратов гонадолиберина на 14-15 лень после отела стимулирует первую овуляцию и становление регулярности половых циклов Вследствие этого на - более ранний срок можно иерздвигат», . одноразовое получение эмбрионов от высокопродуктивных' лаширутоших коров. Это позволяет максимально приблизить ме*отельный итервал у лактирующич коров-доноров к экономически обоснованному для условий' молочио-товарного производства межотельному . интервалу, А при возможных

' отклонениях функциональной деятельности яичников и эндометрия служит как лечебно-профилактическое.:. мероприятие .' Возможно ускорение, восстановления репродуктивной . ; функции коров после инауцироеаки* супероауляиии1

3. Рассеянность овуляций, огиюдотворяемость яйцеклеток, количество эмбрионов пригодных для .трансплантации и стадня их развития у суперовулировавшнх коров-доноров в определенной степени - зависят от продолжительности охоты. Оплолотворяемость яйцеклеток у корсв-

, доноров повышается с увеличением продолжительности,охоты от; 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменеиня до 3.

4. Данные, по гормональному профилю перед проведением'Синхронизации половых циклов коров-доноров только простагпандином служат, ценным диагностическим тестом.' Общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-л> по 15-й день спонтанного циклапри наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников

, происходит, из-за : неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, ... обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день полового цикла. Оптимальными ■ " концентрации прогестерону можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиол«29,9 пг/мп. ' - .

5. Определением исходных, концентраций прогестерона »< крови : коров-доноров позволяет правильно оценить овариальную активность' после отела и уточнять' данные клинического контроля перед скнхроиюааией о*оты и индуцированием суперовуляции и в определенной мере предсказывать эмбриопродуктнвности отбираемых животных.- (

6. Включение синтетических гонадолнберинов или ЛГ в схему индуцирования суперовуляции,

корректирует процесс овуляции при > возможных его нарушениях,- При снижении числа

извлеченных клеточных структур возрастает процент: эмбрионов пригодных- для

трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.

*7. Время осеменения'необходимо определить таким. образом, чтобы-сперма,, введенная в % ■ í ■ ■ ■ - ? ' . , - ■- ....

проводящую систему самки, завершила процесс капаиитации < к. моменту овуляториого

процесса/то есть'первое' осеменение надо проводить через 48 часов после инъекции

просгаглаидииа. . 1 " '' ' '' ' ''

8. Показатели суперовуляиии, вызванной в спонтанный- цикл, последовавший за

индуцированным, указывают на тенденцию к. последовательному улучшению. С другой

»

стороны, очевидно, что достигаемая м счет послеродовой оварчосткулиции, схабидюаци* функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы а матке. 9. Средний уровень эмСуриопропукшвности (5-Я овуляини) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемое™. При трансплантации замороженно-оттаянвых эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы, полученные от коров-доноров с низкой и средней эмбрнепродуктивностью При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике надень пересадки.

S. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ С мелью профилактики послеотелных расстройств и улучшения показателей суперовуляции коровам донорам следует проводить раннее стимулирование активности яичников комбинированным применением гонадотропина, простагяанднна и гонадодиберина на 11-Й, 13-й и ) î-й день после стела соответственно.

6. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОПУБЛИКОВАНЫ В СТАТЬИ 1. Р. Раинрсс, И Порфирьев, H Сергеев / ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК КОРОВ-ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИБЕРИНОВ И ОВОГОН-ТНО НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМЕРИНОВ // Племенное Дело - 2000т,-

Jftl.

V J А-Ч У* ' ' I ~ ' ---- —

7 JCto*Л*Л, w- PffWW-*'?'<■<»

У/?£ мЫ.