Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ СЖК И ФСГ-П ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ СЖК И ФСГ-П ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА"



всесоюзный ордена трудового красного знамени научно-ис:~едовательский институт животноводства (виж)

На правах рукописи удк 612.643.02

Смыслова Нина Игнатьевна

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ СЖК И ФСГ-п ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО

СКОТА

03.00.13 - Физиология человека и животных

. АВТОРЕФЕРАТ

[диссертации на соискание ученой степени канцидата биологических каух

п. Дубровицы Московской области 1990

Работа выполнена в Центре трансплантации эмбрионеб сельскохозяйственных животное Всесоюзного научно-исследовательского института животноводства.

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Н.И.СЕРГЕЕВ,

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор А.Д.БУГРОВ,

кандидат биолог^е наук С.В.СОВЕГКИН.

Ведущее учреждение: Белорусский научно-исследовательский институт животноводства.

Защита диссертации состоится " У ' 990 г.

в / 0 часов на заседании специализированного Созета Д.020.16.02 при Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская обл., Подольский район, пос. Дубровицы.

(с диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института)

Автореферат разослан " ^«¿шлф* 1990 г.

Ученый секретарь специалиэиро?анного Созета кандидат б^<<>тг,' ческнх наук

И.И.ШШ'Н

I. (ВДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы» Использование достижений генетики и селекции, новых биотехнологических приемов может существенно повысить продуктивность скота, обеспечить устойчивые рост производства продукции животноводства. Важное значение в этой Проблеме отводится новому биотехкологическому методу - трансплантации вибрионов.

Основным направлением трансплантации эмбрионов в животноводстве является интенсивное использование генофонда высокопродуктивных животных, создание линий и семейств.

За последние годы в технологии трансплантации вибрионов крупного рогатого скота достигнут значительный прогресс. Так, хирургическое извлечение'и пересадка полностью заменены нехирургк-ческинь способам. Разработана технология глубокого замораживания эмбрионов, позволяющая сохранять их неограниченное время.

Тек не менее в технологии трансплантации остаются и нерешенные вопросы. Слабым звеном все еще остается гормональное вызывание суперовуляции у коров. Около 3056 животных не реагирует на гормональную обработку или дают эмбрионы невысокого качества, или они отсутствуй! вообще. Для повышения эффективности метода, его необходимо постоянно совершенствовать, изыскивать более эффективные гормональный препараты и схемы их применения,

Приживлкеность эмбрионов после пересадки их реципиентам остается пока нестабильной, причины этого недостаточно ясны'а требуют дальнейшего детального изучения.

Цель и задачи исследований. Цель работы.заключалась в сравнительной оценке действия гормональных препаратов на уровень суперовуляции, чьсло, ка-частв(^^^Щ^рда^ость^вежепояученных и

. АУЧИАЯ БИБЛИОТЕКА ■ли, сельскохоэ академии ^

заыороженно-оттаднкых эмбрионов после пересадки, определении эли-яяня некоторых факторов на эти показатели.

В соответствии с этим были поставлены следущие задачи:

- выявить эффективность использования гилофизаррого фолли-нудостиыудирующего гормона (ФСГ-п) и стандартного препарата СЖК (фоддигон) при вызывании суперовуляций у коров - доноров зкбрио-нов;

- определить связь концентрации прогестерона и 50?радиола в крови коров-доноров перед гормональной обработкой с уровнем суперовуляции и качеством эмбрионов;

- изучить влияние эндогенного и экзогенного прогестерона на ; прнживляемость эмбрионов у телок-реципиентов;

- установить связь морфологических отклонений свеяелолучек-:иис и занорояенно-оттаянных эмбрионов с их приживляемостью после пересадки.

Научная новизна заключается в определении эффективности ги-пофкзарного фолликулостщулируюцегс гормона {ХГ-п) и стандартного препарата СЖ (фолдигон) при гормональном вызывании суперовуляции у коров, изучении взаимосвязи концентрации прогестерона и эстрадиола в крови коров перед гормональной обработкой и телок-рецяпяентов перед пересадкой с уровнем овуляции, тачествоы смбри-онов и их агрияивляемость». Внесены новые технические и технологические усовершенствования в методику оценки качества эмбризноь серед пересадкой и замораживанием.

л '

Практическое значение работы состоит в выявлении более эффективных гормональных препаратов для в^зыеания суперовуляцяи у коров-доноров, определении факторов, влияющих на примквлр.емость сье-Евполученных и зааороженно-оттаямшх эмбрионов при нехкрургичее-

кой пересадке.

Материалы исследований вошли в методические рекомендации по гормонально^/ ^ыэкванию суперовуляции,(1963, 1988), а также использованы в инструкции по трансплантации эмбри-нов крупного рогатого скота (1987).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены:

- ка енегодных ученых советах ВИЕа;

- на научной конференции молодых ученых, BHHHPIÏ, г. Пушкин Ленинградской "дбл&ти Тиюнь," "19в6'г"');" ' "*"

- на симпозиуме по "Трансплантаций эмбрионов у крупного рогатого скота", г. Тарту, Эстонский НИИдВ (октябрь 1986 г.).

По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Объем работы. Диссертация изложена на III страницах машинописи, включает 20 таблиц, I схему и 9 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, материала и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Слисок использованной литературы содержит 188 источников, в том числе 150 иностранных.

2. МАТ£РИМ И МЕТОДЫ ЖСЛЩОВАНИЗ

Исследования проводились С 1963 по 1969 гг. на коровах и телках черно-пъ~*рой породы опытного хозяйства "Щапово" и в отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных ВИЕа.

В опыте по определению эффективности гормональных препаратов ФСГ-п и СНК (фоллигон) при трансплантации было использовано 470 коров 4-10-летнего возраста^живой массой 550-650 кг с удоеы 4-8 тис. кг молока за лакта^о. Реципиентами служили телки случного возраста с живой массой около 350 кг.

Коровы-доноры и телки-реципиенты были клинически здоровы, с нормальной физиологией половой системы. Гормональной обработке ко ров подвергали не ранее, чем через 60-90 дней после отела. Перед начале« гормональной обработки учитывали состояние матки и яичников, наличие желтого тела.

Препарат СШ-фодянгон вводили коровам на 10-12-я день астрального цикла8 однократно, в дозе 2500-3000 ИЕ внутримышечно, % раз 2 дня инъецировали гтростагландин в дозе СС-» маг. Охота у до но ров наступала через 46 часов после инъекции препарата.

Фоллякуяостимулирующим гормоном ®СГ-п обрабатывали на 8-й день астрального цикла по 5-дневной схеме, двазды в день ло 5 мкг с интервалом между инъекциями 12 часов, общая доза препарата со-стааляла 50мКг. % 4-й день обработки, утром, вводили 500 мкг кростагланднна.

к. ' В стойловый период охоту у коров выявляли один раз в сутки во время прогулки по рефлексу неподвижности, в пастбищный период 2 раза: утром н вечером.

Коров-доноров осеменяли 3 раза с интервалом между осеменениям 12 часов эамороженно-оттаянкым семенем. За сутки перед вымы-вашим эмбрионов рехтально у коров определяли реакцию на горыо-нальнуя обработку путем подсчета желтых тел в яичниках. Наличие 1-2 желтых тел в яичниках рассматривали как отсутствие реакции на гонадотропин.

С целью изыскания более эффективных препаратов для вызывания супвровуляции у коров и увеличения выхода нормальных эмбрионов на донора было проведено на 251 корова ;—"чтание разных препаратов

л

КГ зарубежного и отечественного производства в сравнении с препа ркгом ОК.

г _ ** ^ ^

Для выяснения взккосбязи концентрацией прогестерона и

эстрацаола в кровк с уровнем гуперовуляции, качеством и приживля-емостьа эмориснов пробы кроьи брали у 46 коров на 8-й день спонтанного цякла перед гормональной обработкой и у £00 телок-реципиентов перед пересадкой эмбрионов.

Определение гор:.:онсэ осуществляли радиоиммунологическим методом в лаборатории ВНИИРГЖ.

Извлекали эмбрионы нехирургическим методом на 7-й день, ре-эиновгм катетером фирмы пНойштедт"„

Обнаружение и оценку качества зародышей проводили в пластмассовых чгаках Петри с помощь» бинокулярной пупы при 15-20- и 100-150- крат но:.: увеличении.

Для выявления взаимодействия между донором, эмбрионом и ре-¿Р-лиектом были проанализированы результаты практического опыта трансплантации эмбрионов, проведенного на 712 телках-реципиентах.

Оснсрные цифровые показатели статистически обработаны по Е.П.1Леркурьезой (1964),

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние разных гонгдотронинов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

Сравнительные испытания стандартного препарата СЖ {фолли-гон) и гипофиэарного гормона (ФСГ-п) проводили с 1983 по 1985 гг. на ферме "Кутьино" опытного хозяйства "Щапово",

Исследования показали! что у коров разных групп одной и той же породы четко вырадевы индивидуальные различия в реакции яичников на гонадотропина £. —д. I).

- б -

Результаты суперовуляции у коров-доноров

Показатель Фоллигон : » » «СГ-п

Обработано животных ....... зов 162

Реагировало суперовуляцней . . . 255 152

Процент от числа обработанных корор .............. . 82,8 93,8

Среднее число овуляций на донора. 7,0 8,7

Положительных доноров по извлечении зародышей ......... 180 129

Процент от числа оперированных . . 70,6 ео,з

; Ответная, реакция на гормонадьцую обработку в группе с !КГ-п Ha lß была выше, чем в группе, обработанной фоллнгоном. Аналогичные результаты получены по числу овуляций и положительных доноров по извлечении зародышей. В первой группе у 75 (29,5%), во второй у 23 (15,1%) коров зародьшш отсутствовали.

Основным показателем эффективности гормональной обработки коров-доноров является число нормальных'эмбрионов на донора (табл.2)..

Положительных доноров по извлечении нормальные эмбрионов в группе с CJK было 120 коров (47%), в гдатше с ®СГ - 86 ( 56,6%) илк j на больше. В первой группе £0 коров (33,3%) имели только де-генерирсванше зародыши и неоплодотворенные яйцеклетки, во второй 23 или I7.8J. На положительного донора в первой груше получено Э,Х>нормдльншс эмбрионов, во второй - 4,3.

' .Как по результатам суперогуляции~ так и по числу нормальных эмбрионо» значительное преныущестьс у животных, обработанных 4СГ-П. В этой группе подучено на 1,2 нормальных эмбрионов больше, чем » цервой.

Результаты извлечения эмбрионов у коров-доноров после гормональной обработки (п - %)

Показатель Фоллигон всг

всего на одного донора всего :на °АК0Г0 всего . донора

Реагировало полиовуляцией........... 255 152

Положительных доноров по извлечению нормальных эмбрионов ........ 120-47,0 86-56,6 _

Получено зародышей всего 546 596 6,5

Б т.ч.: нормальные . . . 366-67,0 3,1 . 371-62,0 4,3-

дегенериро^анные 57-17,8 0,6 133-22,2 1,5

неоплодотворен-ные яйцеклетки . 83-15,2 0,7 94-15,7 1,1

Установлено, что у коров, обработанных СШК, эмбрионов отличного качества было на 8,45 меньше, чем з группе коров, обработанных КГ, при разном числе эмбрионов с оценкой "хорошие"(47,5 и 46,9$). На 7,8% было меньше эмбрионов удовлетворительного качества во второй груше (32,1 и 39,9% соответственно), (табл. 3).

Таблица 3

Качестр? и стадия развития эмбрионов у коров-доноров (п - зв)

Качество и стадия развития эмбрионов Группа

СЖ (фоллигон) КГ-п з

I 2

Исследовано эмбрионов . Оценка: отличные . . '.

366 46-12,6

371 78-21,0

Окончание таблица 3

г : 2 : з

-------------------±._______________л________________

хорошие ................174-47,5 174-46,9

удовлетворительные . . 146-39,9 119-32,1

Морулы: ранние ........ 16-4,4 44-11,9

поздние ................190-51,9 153-41,2

Ьласюцисты; ранние............113-30,9 147-39,6

поздние ..... 47-12,8 27-7,3

Отмечены некоторые различия а стадиях развития эмбрионов в зависимости от типа гонадотрооинэ. Так, у коров-доноров, обработанных СХК, ранямх порух и бл&стоцхст было меньше на 7,5 и 8,7;? ■больае поздних морул и бластоцист на 10,7 и Ь,5;5 соответствен-'но, чем в группб с ФСГ.

3.2. Испытания гипофизарннх препаратов £0Г отечественного и импортного производства и гонадотг?т:ина СШ

Высокая вариайельность выхода нормальных эмбрионов обусловлена, вероятно, не только индивидуальными особенное-г я?™ животных в реакции яичников на экзогенный гонадотропин, но и качеством применяемых гонадотропинов,

С этой целью была определена эффективность разных препаратов ®СГ в сравнении с препаратом СШ (фоллигон).

■ Стандартный препарат СЖ (фоллигон) фирмы "Ингерзет" (Голландия) инъецировали в дозе 2500 К2; ^.Г-п (США; - 36 кг, ЗСГ (СССР и ЧССР) - 1000 и 1200 'АЕ (таблГ

Уровень суперовуляции и качество зародышей у короь при кспользоеанйи разных гонадогрэпинов

Гонадотропин

Показатель : КГ-п : ССЩ) : фол™- ; графал-.;|°™-; : тропю : лон ! (ЧССР) : фОЛЛИ- гон

те 120 те го id

67 9S 18 16 13

85,9 78,3 100,0 80,С 86,7

озулкш« на «« jt* «* ti

донора.......11,5+0,6 8,5+0,8 Э,3+1,2 7,7+0,6 II,2¿I,3

.73 15 13 II

77,6 63,3 81,2 84,6

лиили иза-иечепгьд за- «£ ЖХ xt ja

родыаей на донора . 7,2+0,6 6,2^0,6 7,6+0,9 5,7+0,6 6,7+1,0

3 ток Числе нормаль- я ** » ><

них ........ 5,4+0,5 3,1+0,3 2,6^0 ,.9 4,3+0,5 3,3+0,6

По числу реагирующих жлвотщ-'х на гонадотропин разница была кесщеетвенкоЯ (65,9, 76,3, 100,0 и 80,0% соответственно). Нес-г:сяыо больше било овуляций у коров первой группа (11,5). Аналогичная тенденция наблюдалась в обще« числе зародоией и нормальных эмбрионов. Препарат CEíi в данное орыте обеспечивал высокий уровень овудяциД (11,2) и удовлетворительный выход нормальных эмбрионов (3,3) Н1 донора. С :?ди отечественных препаратов КГ лучшие результаты пл числу нормальных эмбрионов были получены от коров, обработанных фоллитропином.

Обработано коров . .

Рйагкрояако супео-озуляцией ......

Процант от числа обработанных , . . . .

Положительных доноров по извлечешь зародышей ....... 53

Процект от ччсяа оперированных ..... 85,6

3.3. Уровень суперовуляции и качество зародышей в - зависимости от гориональгюгэ профиля з крови коров-доноров перед гормональной обработкой

Эффективность трансплантации эмбрионов преаде всего зависит от успешного вызывания суперовуляции у доноров и последующего получения достаточного числа нормальных эмбрионов. Однако высокая вариабельность, непредсказуемость реакции яичников на гормональны« препараты заставляют искать причины, результаты суперовуляции.

Успех гормонального вызывания суперовуляции зависит от состояния яичников на день введения го надотро пи на. Однако отсутствие сведений о степени зрелости имеющихся в яичнике фолликулов перед"началом гормональной обрабдтки приводит к непредсказуемым .результатам, полиовуляции. Наличие зчелтих тел в яичниках на день обработки является недостаточным для отбора коров-доноров. С этой целью в 1985 году нами проведены исследования по определению содержания прогестерона и эзтрадкола в плазме крови коров-доноров перед гормональной обработкой, которые отражают эндокринную функцию желтого тела, что, вероятно, дает возможность дополнить клиническую картину физиологического состояния яичников.

Полученные данные показали, что при содержании прогестерона от 0,36 до 0,87 нг/мл реагирует суперовуяяцией 66,б^ коров при среднем числе овуляций 4,7 га донора. При концентрации прогестерона от 1,2 до 2 кг/мл суперовуляцией реагировали все животное и имели 11,9 овуляция на донора. С дальнейшим увеличение;.; концентраций прогестерона от 2 до о нг/чл сг~:г*>лось число овуляций до

о

8,8 ка донора. Коэффициент изменчивости я числе овуляций составил 95,8, 42,3 и 37,соответственно. Аналогичные результата были

- и -

г,случены е числе нормальных эмбрионов (табл. 5).

ТаОлкца 5

Число сзулкциЕ и нормальных эмбрионов у коров-доноров е зависимости от гормонального профиля перед обработкой

Показатель Груша

; 'п 1 25) : С : (п = 14) : Ш (с = 17)

Прогестерон (нгД-л) .... 0,36-0,87 1,2-2,0 2,2-8,0

20,0-60,0 17,2-66,0 25,2-90,0

Оьулянад на донора .... 4,7±1,1 т- -г 6,^0,79**

Л/ыи®........... 0-16 4-27 5-14 .

Нормальгшх эмбрионов на донора ......_ . . . ♦ 2,2+0,97 6,8*2,Iм 4,5+0,98*'

Таким образок, относительно- стабильный уровень суперовуляции (до II) к достаточное число эчбриокоЕ (до 5) моино получить при концентрации прогестерона в крсви. животных на день обработки от 2 до 3 нг/ил. Меэду ччсяо:в зт/бруонов у концентрацией эстрадиола сйяэ/ нё установлено. уровнем прогестерона перед обработкой

с число;-: озуляцпй и норигльнкх эмбрионов у коров установлена прямая связь. Оптимально уровнем прогестерска з крсви коров перед обмоткой слезет считать 1-2 нг/мл, при котором гарантируется получение в сродна;-; более десяти овуляций и около семи нормальных эмбрионов на донора.

3,4, Прикивляс-мость с в еж: еп о лученных и заыороженнс-оттазкных эмбрионов в зависимости от стадии развития и кх качества .

Для пересадки телна.%:-ре цн ш: е нтам были отобраны экбрионы на стадиях ранней и поздней морулы и бл&стоциста, полученные на 7-и

день. Всего исследовано 1144 эмбриона. Из них 737 (64,4$) были пригодны.для пересадки или замораживания. Дегенерированиях эмбрионов было 230 (2ùfI%) и неоплодотворенных яйцеклеток - 177 (15,5^) Из числа нормальных эмбрионов большинство имело от I до 3 морфологических отклонений, которые могут влиять в различной степени на их приживляемость.

По результата« стельности было установлено, что 44,4^ эмбрионов, пересаженных свежими, без видимых отклокапий, имели самый высокий процент приживляемосгя (51,9), что на 9,9$ выше среднего показателя. В группе эмбрионов о неравномерным развитием клеточного комплекса шеи ввделенными бластерами приживляемость была на ,7,75( ниже, чем в предыдущей группе и на 2,2Й выше сраднего показателя (табл. б). *

. " ' ». . Таблица 6

,';■'":■■ Йряюгвляемость сведелолученных эмбрионов в связи с отклонениями в их морфологической структуре

: Пепалажр ЯрОЦвКТ ОТ&ТеЛЬНЫХ рб^ПИвНТОЗ

Морфологические ; "JР®Ж_:о&чк-о чи-: ------------ : но эмори ,йла эмбри.

: 01,48 ГОНОВ

отклонения

%

Без морфологических отклонений ..... 131 44,4 68 52,9

[Неравномерное развитие, выделены оласто-меры........ 52 17,6 23 44,2

Частичное разрушение бяастомеров «... . 12 4,1 ,4 33,3

^фектзоны педдюци-да или разрушение . б 3,0 * I 15,7

2-3 различных откло- НвИНН щ * « t * « * 94 Р' 31,9 28 29,8

Всего ..... 295 - 124 42,0

Приживляемсеть эмбрионов с частичным разрушением бластоме-роь на 18,6 и 10,била ниже двух предадут груш. Свежеподу-чекные эмбрионы с дефектом или полным разрушением зоны пеллюцида показали са.-.'-ыЕ низкий процент прижиьляемости.

По группе пересаженных эмбрионов с 2-3 отклонениями стельность составила 29,8^, что на 22.,!% ниже, чем у эмбрионов первой группы к на 12,2$ кике среднего показателя. Пересадка свеяепслученных эмбрионов с дефектом зоны пеллкцида или разрушением бластеров, дауе частичным, а также эУбрйоны с 2-3 морфологическими отклонениями дают низкий процент приживляемости. Перед пересадкой таких эмбрионов следует проводить предварительное культивирева да е и в случае раззиткя - пересаживать".

После зауорашвания" и оттаивания у большинства эмбрионов образуются различнее морфологические изменения - повреждение зоны пеллюцида, частичное или полное разрушение клеточного комплекса и др. ■

Было пересачено 221 зшо роженно-оттаянный эмбрион, из них 73 (33&) без видимых морфологических отклонений, 96 (44,4$) с одним отклонением от кормы и 50 (22,6%) - с 2-3-замечаниями (табл. 7).

Приживляемость 43,С^ имела эмбрионы без видимых отклонений; что на 9,0^ висе среднего показателя.

Выше среднего на 0,9$ была приживляемость эмбрионов с вьще-ленньми бластоьзерами или грануляцией в перевителлиновсм пространстве, но на 8,1$ нике, чем у эмбрионов без отклонений.. Эмбрионы с назначит с-дьнЫг.; разрушением бластомероз имели приживляемость на 3,02 нвде среднего лок^^'еля и на 12,0% от наивысшего. В группе эмбрионов с дефектом зоны пеллодида приживляемоеть оказалась на

I3.2S ниже высшего показателя. Самая низкая приживляемость была у эмбрионов с 2-3 морфологическими отклонениями, на 15,8,£ и 6,8;$ ниже высшего и среднего показателей.

Таблица 7

Приживляемость заыороженно-оттаянных эмбрионов в свази с отклонениями в их морфологической структуре

Монологические" ! Й^^С'прэцвнт

отклонения : "нов :сла ;

_ __ L _____ц_ --П •■ - ■--_■- —— .»Ч.'.^ — ________Д _ _ __ ^ Д _____ __

Без морфологических

отклонений..... 73 33,0 32 43,8

Выделены бластомеры, гранултция в перзви-теляиновои пространстве ........ 14 ' 6,3 5 35.7

Незначительное разрушение бластомеров . 22 10,0 7 31,8

Дефект зоны пеллвци-

да или разрушение . 62 28,1 19 30,6

2-3 морфологических

отклонений..........50 22,3 14 28,G

Всего..........221 100,0 77 34,6

В исследованиях была определена приетеляомаоть евекеполучен-ных и замороженно-отталнных эмбрионов в паэис^осгк от типа гота-дотропина, Всего С^ло пересажено 516 сведенолуче hi2¿x и заморояен-но-от тал иных змбриснов разного качества 476 реципиента;.: со спон-тйннъгм астральным циклом.

Свеж еп олуче иные эмбрионы пересаживали, в основном. по одному эмбрион, сомнительного качеств , -п. : деа как с лучюим (табл. 6).

Приживляемость свекеподучзнных эмбрионов в зависимости от типа гонадотропина

Показатель

¿■оллигон : 4СГ

качество эмбрионов (баллы)

5 4 « 3 « 5 4 3

Пересажено эмбрионов . 19 ■64 75 17 42 58

Чксло реципиентов . . . 19 81 . 70 17 42 51

Стельных реципиентов . 8 36 25 7 23 23

Процент стельности . . 42,1 46,9 35,7 ■41,2 54,8 45,1

Процент приживляемости, .42,1 ' 45,2 33,3 41,2 54,е 39; 6

В первой группе пересажено 178 свежих эмбрионов - 170 ргци-пкентам, стельншк стали 71 реципиент (41,£$), во второй - 117 эмбрионов - НО реципиентам, стельках - 53 {4о,2$), что на 5,4£ больше, чем в I группе. Процент 'йрживляемости в. I группе был ниже кг 5,4^.

Эмбрионы, оцененные в 5 баллов в первой и второй группах, имели сходные результаты стельностей - 42,1 и "41,2$ соответственно. Приживляемость эмбрионов во второй группе с оценкой 4 и 3 балла на 9,6 и 6,3% выше, чем в первой группе соответственно. Анализ результатов показывает, что приживляемость свежих эмбрионов, полученных от хоров, обработанных ЮГ, выше, чем в группе с СШ.

Заморокенно-отталнные змбриокы птличного и хорошего качества пересаживали по одному каждому реципиенту с отличным или хорошим желтым телом. Удовлетворительные эмбрионы иногда пересаживали по 2 или с условно годным в одной паетте.

6 первой группе пересалено 103 заморо&енно-сттаянных экбрио-

- IG -

на - 91 реципиенту, стельными стали 32 (35,£ь), во второй группе пересажено IIS заморожешо-от тая н ных эмбрионов - 107 реципиентам, стельныыи стали US (42,1%), что на 1% больше, чем в первой группе (табл. 9).

Процент стельности и приживляемоети ■эмбрионов с оценкой 4 и 3 была был на 8-10% выше во второй группе, чем в первой.

Таблица 9

Результаты пересадки замороиенно-оттаянных эмбрионов а зависимости от их качества

Показатель

Фоллигон : ф:г

оценка качества эмбрионов (баллы)

■, ■ .5 4 ► 4 * * 3 5 4 3

Пересажено эмбрионов , 3 37 63 10 42 65

Число реципиентов . . . 3 37 51 10 42 Р>

Стельных реципиентов . 2 12 ■ 16 3 17 25

Процент стельности . . 66,7 32,4 35,3 30,3 40,5 45,4

Процент приживляемо сти. 66,7 32,4 28,6 30,3 40,5 37,9

Анализ результатов показал, чти положительных доноров по извлечении и выходу нормальных эмбрионов, их ггрихизлле:.юсть поел? нехирургической пересадки свеетдс л заыороженно-отталнных эмбрионов была в пользу 2сг-п. Поэтому для гормональной обработки высокоценных норов предпочтение следует отдавать отс^ препарату.

3.5. Взаимодействие меящу донором, эмбрионом и реципиентом при нехирургической-пересадке

Поддержание беременности после -садки эмбрионов осуществляется в результате биохимических взаимосвязей между эмбрионом и

о ндо:.-атрием. До на^ток^ыго времени зта взаимосвязь определяет с л дву_.я осковшг'и условиями. Во-лераих, для успешного приживления &;.:Ср:;оиов при пересадке необходимо соблюдение точной синхронности эстр&льтн циклов донора к реципиента. Ео-вюрык, обязательна; условием до л".; ни бить наличие хороио развитого цикл!1ру»щего желтого тела в одно:/ из .¿ичников реципиента.

На;.:и была поставлена цель проанализировать параметры, объе-дхнк&^е донора, эмбрион и реципиента, а также в ¡¿целить основные фз:1торк, шторме способствовали бы- поьшению стельности при тран-с-тлантацяи экбриоиов в условиях ферм.

Отсутствие разницы в проценте прк^ивляемости эмбрионов у реципиентов обусловлено большой изменчивостью в стадаи их развития (табл* 10). •

. " • ■ Таблица 10 '

Влияние синхронности астрального цикла у реципиента с донором на при^ивляемость эмбрионов

Показателе : Число : пересадок Стельных реципиентов п : %

Плюс 24 часа ....... 66 23 34,8

Синхронная (день в день) . - 516 214 41,5

¿¿кнус 24 часа...... - иь 54 46,9

Минус 36 часоЕ ...... 15 3 20,0 *

Данные таблицы 10 показывают, что приживляемое?ь эмбрионов была лучшей, когда охота у реципиентов наступала на 24 часа позже, чем у донора. Рецк;.;;?чтш.;и, у которых процент стельности существенно снижался, были животные с астральным циклом плюс 24 часа <34,и 36 часов'позже (20,ОЙ). Исходя из этого, нам пред-

стааляетея более правильным рассматривать результаты нехкрурги-ческой пересадки с учетов только дня астрального цикла у реципиента независимо от синхронности охота с донором. Для каддого реципиента в соответствии с днем охоты необходимо подби^ть эмбрионы соответствующей стадии развития Стабл, II).

Таблица II

Приживляемость эмбриснов в зависикос^« от дня

астрального цикла у реципиента стадии развития эмбриона

Стельных реципиентов п ; %

6 Морули поздние 114 53 45,5

7 .Бластоцисты ранние 1 516 208 40,3

8 Бластоцисты поздние 71 30 42,2

9 Бластоцисты без зоны II 3 27,3

Стадия развития эмбриона оказывает существенное влияние на результаты нехирургической пересадки. Г .>цент стельности от пересадки морул составил 46,Этот показатель был выше, чей при пересадке ранних бластоцист (40,3,ь). Результат стельности для бла-стоцист различных стадий (ранние и поздние) мало отличались друг от друга (40,3 и 42,2%). Исключение составили бластоцисты без зоны педлщкда 9-го дня (27,3$). В нашем исследовании была обнаружена заметная разница в показателях стельности между ;.;орула:.;и (46,5%) и эмбрионами других стадий (40,3 и 42,2л). Различая в при-живдяеиости эмбрионов, вероятно, можно объяснить местом трансплантации* Морулы трансплантировав.: е.., - око в верхушку рога матки с использованием уретрального катетера, бластоцисты в середину рога.

День охоты

Стадия развития

Пересажено эмбрионов

- IS -

Наши результаты нехирургической пересадки согласуются с качеством и стадией развития эмбрионов. При нехирургической пересадке необходимо вести строгий учет дня охоты реципиента и подбирать эмбрионы соответствующей стадии развития индивидуально дяя каждого из них.

З.о.Приживляемость эмбрионов в зависимости от гормонального профиля крови телок-

реципиентов перед пересадкой *

На пршивляемость эмбрионов оказывают влияние различные факторы, но са\:ы,.{ важным из них является правильный отбор реципиентов и подбор к ним полноценных эмбрионов с учетом стадии развития. При отборе реципиентов для трансплантации эморнонов существенное значение имеет Физиологическая активность желтого тела яичника. До сих пор физиологическое состояние реципиента определяли промежутком времени от охоты до пересадки эмбрионов.

Установлено, что приживляемость эмбрионов связана с гормональным статусом в крови реципиентов перед пересадкой иабл. 18).

Таблица'12

Приживляемость эмбрионов в зависимости от содержания прогестерона и эстрадкола в крови реципиентов

Концентрация__" ; Число ре-: Стелыш* : Процент

" пшгестеоона 1 "эстоапиола Чипиек- : реципи- î стель- * прогестерона £ эстр^диола ; Т0Б : ентов : ности

0,8+0,03 47,7+5,8 19 2 10,5

2,0+0,05** 25,6±0,9 III 36 32,4

3,7+0,йГ" 25,7+1,8 44 21 47,7

I^UM*** 26,9+1,7 26 II 42,3

При низком уровне прогестерона (до I нг/мл) концентрация ос-традиола возрастала а среднем до 48 пг/¡.ш при лимите от 24 до 134 пг/мл и коэффициенте изменчивости 52,5, притивдлеиость о:лбр.'-онов при этом фоне была очень низкой (10,55). С увели-инае:.: концентрации прогестерона снижался уровень зстрад^ола в средне« ко группам животных до 25,8 пг/мл, а прютвляемость эмбрионов возрастала с 32,4 до 47,Д.

Таким образом, для получения приемлемой дельности. С50:5) при нехирургической пересадке концентрация прогестерона в ¡грзы: з> вотных должна быть не ниже 2 нг/мл при уровне зстрадиола з пределах 25,8 пг/мл.

С повышением концентрации прогестерона (в средне:-: до 11,1 нг/мл) снижались результаты стельности (42,3а).

Для определения связи концентрации прогестерона и зетрадиола в,крови реципиентов с яриживляемостью эмбрионов били использованы телки со спонтанным и синхронизированным астральным циклом. Отмечено, что синхронизация охоты простагл&ндином несколько повшала концентрацию прогестерона в крови животных. Содержание эстрзд-.ола при этом оставалось на одном уровне (табл. 13).

В спонтаннув охоту содержание прогестерона ниже X нг/мл било у 19 ьашотных (135). приживляемость эмбрионов составила 10,В синхронизированную охоту только у 4 животных концентрация прогестерона была ниже 2 нг/мл (1,6-1,9), остальные 48 реципиентов содержали в крови от 2 до 7 и у двух телок - 20-21 нг/мл. При концентрации прогестерона от I до 3 нг/мл у реципиентов со спонтанной охотой стельность составила 36 С -ютив 16,в синхрошои-

л

рованнув охоту. Увеличение концентрации прогестерона от 3 до 5 нг/иж повышало приживляемость эмбрионов у реципиентов со спочтан-

ной охотой до 57,и о синхронизированной охотой - до 39,15.

Таблица 13

Влияние синхронизации охоту и уровня прогестерона в крови реципиентов на прияивллеыость гчбрионов

Концентрация Число реципиентов : Пшцент

прогестерона {нг/мл} эстрадиола (пг/мя) 1 : етель- всего : стельных : ности * •

Спонтанная охота

0,61+0,03 47,76*5,80 . 19 2 10,5

1,9-;+о,об°" 26,77+1,09 87 32 36,8

3,54+0,Об""' 27,31+3,57 21 12 57,1

10,64+0,63*** 26,55+2,19 19 8 42,1

Синхронизированная охота

2,32+0,09 21,16+0,99 24 4 16,7

3,79+0,10*** 23,78+1,27 23 9 39,1

11,98+2,85™* 29,57+3,07 ■ 7 3 42,8

»**-ри 9.001

Уровень стельности бал одинаковым при концентрации прогестерона от 5 до 15 нг/мл (42,1-42,Повышенное содержание прогестерона у телок-реципиентов в синхронизированную охоту не привело к увеличению стельности.

Как известно, важным условием успешной прижнвляемости эмбрионов является их качество. Анализ экспериментальных данных взаимосвязи прижнвляемости с качеством эмбрионов и гормональным профилем крови реципиентов дал однозначный ответ. При уровне прогестерона до I нг/мл приживляемость эмбрионов, независимо от их качества, очень низкая - 1^,756.

С повышением концентрации прогестерона увеличивалась и приживляемость эмбрионов' отличного и хорошего качества. Аналогичное

результаты получены и при пересадке эмбрионов удовлетворительного качества, при этом также выявлена прямая зависимость результатов стельности от гормонального профиля и качества эмбрионов. При уровне прогестерона от I до 3 нг/мл стельность составила 2Тот 3 до 5 - 38,больше 5 нг/мл - 37,5$ (табл. 14).

Таблица 14

Приживляемое?ь эмбрионов в зависимости от их качества и концентрации прогестерона в кровд реципиентов

Концентрация: нрогестеро- : на, нг/мл : Качество эмбрионов, балл Число реципиентов Стельных : реципиентов; Процент стельности

<1 5+4 13 I 7,7

3 6 I 16,7

5+4 64 25 40,6

1-3 3 46 10 21,7

2 I - -

5+4 25 14 56,0

3-5 3 18 7 38,9

г I - -

5+4 12 б 50,0

5 3 8 3 37,5

2 6 2 33,3

После замораживания-оттаивания эмбрион может оказаться деге-нерированкым, но морфологически выглядеть кизнеспосебныи, взывать удигаение цикла у реципиента, а потом все же погибнуть. Кроме тоге, выживаемость эмбрионов тесно связана с гормональным профилем крови реципиента перед пересадкой (" 15).

Анализ таблицы 15 показывает, что как при пересадке свежих, тев и заиороженно-оттаянных эмбрионов наиболее преемлемым уровнем

прогестерона в крови реципиентов для получения максимальной лри-жизляемости является 3 и более нг/кл.

Таблица 15

Прлкизляекость свежеполученкых и замороженно-оттаянных эмбрионов а связи с концентрацией гормонов в крови реципиентов

Коицентрадая _ [ Чйсд0 ре. { Стельных ! Процент прогестерона : эстсамола клиентов,: реципиен- : стель-

р(нг^лГ : (Ж) : в=его : тов : нсс™

______» _ е » * ^___

Свекепслученные эмбрионы

т *

0,79+0,05 58,2+7,80 12 2 16,7

1,93+0,12" 24,9+1,96 23 7 30,4

3,64+0,20х" 16,8+1,68 . 5 3 60,0

10,37+1,22х* 20,7+4,54 7 . 3 42,0

8амороженно-оттаянные эмбрионы

0,86+0,04 32,1+3,93 7 ; -

2,08+0,00*** 25,8+1,04 * 88 29 32,9

З^О^?1""1 27,0^,04 39 ,18 46,2

11,40+1,12'""' 29,2+1,54 '19 8 . 42,1

При этом из числа реципиентов следует исключать телок с содержанием эндогенного прогестерона при спонтанной охоте до I нг/мл и при синхронизированной от I до 3 нг/мл, так как при таком уровне прогестерона во всех случаях получены низкие результаты приживля-емости эмбрионов.

Концентрация прогестерона в крови телок-реципиентов пзред пересадкой мояет быть использована как дополнительный тест дяя повышения приживляемости эмбрионов. *

4. ВЫВОДЫ I. Препарат СЖ по своему биологическому действии несколько уступает препарату ССГ по выходу нормальных эмбрионов и их приживляемое т я после нехирургической пересадки свежеполуиеннызс и эаыоро-

денно-оттаянных эмбрионов.

2. Дэф$ёты зоны пеллвцида или полное ее разрушение снижают приживляемость свежеполученных эмбрионов ка 35,23, частичное разрушение бластомеров - на 18,6%, 2-3 дефекта в морфологической структуре - на 22,1%, неравномерное развитие бластомеров или их выделение из общей клеточной массы - на 10%,

3. Приживляемость замороженно-оттаянных эмбрионов с дефектом зоны селлщвда снижается на 13,8%, с незначительным разрушением бластомеров - на 12,с 2-3 морфологическими отклонения;.«; - на 16,ввделекие бластомеров - на 1С$.

. 4. Оптимальным уровнем прогестерона,в крови коров-доноров перед гормональной обработкой является 1-2 нг/мл, обеспечивающий получение в среднем более 10 овуляций и около 7 нормальных эмбрионов на донора. ,

■ 5. Оптимальным уровнем прогестерона в крови реципиентов перед пересадкой следует считать от 2 до 5 нг/мл, при котором можно получить до стельностей после нехисургической пересадки.

6. Приживляемость при нехирургической пересадке зависит от синхронности астрального цикла донора и реципиента, соответствия эстрального цикла реципиента со стадией развития и качеством эмбрионов.

ПРАНТИЧЯЖИЕ ПРЕДЛОЖЕНА

При отборе коров для использования'в качестве доноров эмбрионов рекомендуется определять концентрацию прогестерона в крови перед гормональной обработкой. Использоеэть коров для этой цели с концентрацией прогестерона не ге^-.е Г нг/мл. Для повышения при-живляеыости эмбрионов следует использовать реципиентов о коще.чт-рацней прогестерона в крови перед пересадкой от 2 до 5 нг/мл.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Сергеев Н.И,, Смыслова Н.И., Смирнов А.О. - Влияние некоторых факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров-донороз. Бюлл, науч. работ, вып. 87, Биотехнология в животноводстве. Дубровицы, 1987, с. 38-40.

2. Сергеев Н.И., Овчинников A.B., Смыслова Н.И. - "Взаимодействие между донором, эмбрионом и реципиентом при нехирургической трансплантации. Животноводство, 1907, * 6,

с. 52-54.

3. Смыслова Н.И. Качество и прижквляемостъ эмбрионов при вызывании суперовуляции у коров-доноров разными гонадотро-пинами. Бюлл. науч. работ, вып. 89, Применение метода трансплантации эмбрионов в селекции сельскохозяйственных животных. Дубровицы, 1988, с. 26-28.

4. Смыслова Н.К., Ефремова М.Н., Петряков D.H. Приживляе-мость эмбрионов в зависимости' от гормонального профиля крови телок-реципиентов. Бюлл. науч. работ, вып. 89, Применение метода трансплантации эмбрионов в селекции сельскохозяйственных животных, Дубровицы , 1988, с. 50-52.

Подписано к печати 10.08.1990 г. Заказ 611,

Тираж 100 экз. Объем 1,0 уч.-иза. л.

ПМП ВИЖа