Физиологическая оценка трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона

Агалакова, Татьяна Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологическая оценка трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологическая оценка трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона"

. На правах рукописи

•э

Агалакова Татьяна Владимировна

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ХОЗЯЙСТВАХ ВОЛГО-ВЯТСКОГО РЕГИОНА

03.00.13 - Физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нижний Новгород 1998

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте сельского хозяйства Северо-Востока им. Н.В.Рудницкого Россельхозакадемии

Научный руководитель: заслуженный зоотехник Российской Федерации, кандидат биологических наук, доцент Е. А.Тяпугин. Научный консультант: доктор биологических наук, профессор А. Н. Успенский.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор М.Г.Миролюбов. доктор биологических наук, профессор В.И.Великанов;

Ведущая организация

Вятская государственная сельскохозяйственная академия.

заседании диссертационного совета К 120.40.20 при Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 603107, г. Нижний Новгород, проспект Гагарина, 97.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан « ^» 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Н.Н.Асафова

Защита состоится

в // часов на

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В 70-е -80-е годы в Советском Союзе и за рубежом )лучил распространение новый биотехнологический способ размножения >упного рогатого скота - трансплантация эмбрионов.

Метод трансплантации позволяет эффективно использовать репродук-геный потенциал, так как имеется реальная возможность получате от одной асокопродуктивной коровы несколько десятков потомков за год.

Успех работ по пересадке зародышей в большой мере зависит от пра-шьного подбора доноров, гормонального препарата и схемы его применения.

Усовершенствование методов подбора животных для использования их в лестве доноров, способов стимуляции полиовуляции с учетом всех влияющих акторов позволит стабильно получать необходимое количество жизнеспособ-ах, пригодных для пересадки эмбрионов.

В настоящее время для нехирургического извлечения и пересадки эм-эионов используют целый ряд катетеров производства различных отечествен-ых предприятий и зарубежных фирм. Надо оценить, какие из них наиболее юбны и пригодны для практической работы.

Приживляемостъ эмбрионов после нехирургической пересадки невелика, еобходимо изучить причины низкой приживляемости, предложить и апроби-эвать способы для улучшения этого показателя.

Представляет интерес исследовать эффективность пересадки эмбрионов г доноров одной породы реципиентам другой породы крупного рогатого ско-I.

В связи с тем, что одним из способов практического применения транс-иантации является получение двоен, необходимо иметь сведения об уровне :тественного многоплодия в стадах молочного скота Волго-Вятского региона.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в совершенствовании технологических приемов, используемых при трансплантации эмбрионов.

Исходя из поставленной цели, было необходимо решить следующие задачи:

- изучить интенсивность реакции множественной овуляции у коров-доноров в зависимости от породы, возраста и состояния обмена веществ;

- изучить влияние вида гормонального препарата, дня полового цикла при извлечении, числа овуляций, состояния эндометрия на количество и качество эмбрионов;

- провести технологическую оценку технических устройств, применяемых для извлечения и пересадки эмбрионов;

- изучить факторы, влияющие на приживляемость эмбрионов коров после пересадки;

- сравнить эффективность ряда гормональных препаратов при применении их с целью профилактики гибели эмбрионов после трансплантации;

- изучить эффективность пересадки эмбрионов от коров-доноров мясных пород телкам-реципиентам черно-пестрой породы;

- дать оценку естественного многоплодия в стадах молочного скота Волго-Вятского региона.

Научная новизна работы. Впервые изучена возможность получения и пе ресадки эмбрионов у коров местной истобенской породы крупного рогатогс скота.

Получены первые телята- трансплантаты истобенской породы, установ лена возможность сохранения генофонда скота истобенской породы с помощьк метода трансплантации эмбрионов.

Усовершенствована и апробирована герметическая система подачи и из влечения промывной среды, необходимая для работы в условиях фермы.

Теоретически обосновано и показано в практических условиях значение применения гормональных препаратов для профилактики гибели эмбрионов после пересадки. Предложен наиболее оптимальный способ сохранения беременности с помощью синтетического аналога гонадотропного релизинг-гормона сурфагона.

Практическое значение. Полученные данные дают возможность проводить практические работы по сохранению генофонда коров исчезающей исто-бенской породы скота.

Рекомендуется использовать при трансплантации эмбрионов катетеры наиболее удобных и рекомендуемых нами конструкций фирмы "Минитуб" (Германия) в комплексе с герметичной системой для введения и извлечения промывной среды.

Применять при пересадке эмбрионов метод сохранения стельности. Доказано, что инъекции сурфагона позволяют улучшить приживляемость эмбрионов после пересадки, и увеличить число стельных реципиентов на 12,5-20,8%.

Выявлены условия, способствующие увеличению получению двоен искусственным методом. Предложено результаты исследований по естественной двойневости использовать в работе для получения двоен искусственными методами.

Положения выносимые на защиту.

1. Дается физиологическая оценка трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона.

2. Обосновывается использование метода трансплантации эмбрионов у местной истобенской породы крупного рогатого скота.

3. Дается технологическая характеристика усовершенствованной герметичной системы для вымывания эмбрионов.

4. Предлагается оптимальный метод сохранения стельности у реципиентов

Апробация работы. Материалы диссертации доложены:

1. Научно-производственной конференции молодых ученых и специалистов сельского хозяйства "Внедрения достижений науки, техники и передового опыта на уровень современных требований", (июнь 1990 г., г. Киров).

2. Конференция молодых ученых и специалистов, посвященная 60-летию Сиб-НИПТИЖ, "Проблемы животноводства и как их решать". (2-4 октября 1990 г., Новосибирск).

3. Научная сессия РАСХН, "Пути совершенствования научного обеспечения агропромышленного комплекса Северо-Востока России в рыночных условиях", к 100-летнему юбилею Вятской сельскохозяйственной науки. (4-7 июля 1995 г., г. Киров).

4. 64-я научная конференция профессорско-преподавательского состава и аспирантов ВГСХА по итогам 1995 года. (4 апреля 1996 г., г. Киров).

5. Научно-методическое совещание, организованное Северо-Восточным НМЦ "Концепция развития научного обеспечения животноводства СевероВосточного региона России". (29-30 мая 1997 г., НИИСХ Северо-Востока, г. Киров).

6. Научная конференция преподавателей и студентов ВГСХА. (25 июня 1997 г., г. Киров)

7. Всероссийская научно-практическая конференция ученых и специалистов АПК "80 лет сельскохозяйственному образованию и науке на Урале. Итоги и перспективы. (11-14 февраля 1998 г., г. Пермь)

8. Всероссийская научная конференция «Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве». (6-7 октября 1998 г., г. Киров).

По материалам диссертации опубликовано 8 статей и 7 информлистков Кировского ЦНТИ.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает в себя введение, обзор литературы (5 разделов), материалы и методы исследований, собственные исследования (6 разделов), заключение, выводы, практические предложения, список литературы.

Диссертация изложена на 118 страницах машинописи, содержит 22 таблицы, список литературы включает 185 источников, в том числе 43 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования по трансплантации эмбрионов проводили в течение 19891997 годах в колхозе "Красный октябрь" Куменского, ОПХ "Пригородное" Ки-рово-Чепецкого, племсовхозе "Луговой" Оричевского районов, Фаленской селекционной станции Кировской области и в агрофирме "Толмачево" Нижегородской области.

В опытах были использованы животные черно-пестрой, холмогорской, истобенской пород крупного рогатого скота и их помеси с голштино-фризами различной степени кровности, а также мясные коровы породы герефорд. Научно-хозяйственные опыты проводили согласно разработанной схемы исследований, приведенной далее на 7 странице.

Проведены исследования зависимости количества и качества зародышей от вида гормонального препарата, от дня их извлечения и интенсивности реакции полиовуляции.

Извлечение эмбрионов из половых путей доноров проводили катетерами производства Германии, России и Польши. Была применена герметичная система подачи промывной среды в матку и из нее в приемный стерильный сосуд, разработанная и созданная сотрудниками лаборатории трансплантации эмбрионов НИИСХ Северо-Востока. Пересадку полученных зародышей реципиентам

проводили катетерами фирмы "Нойштадт" (Германия) и фирмы ИМВ (Кассу, Франция).

Нами изучены некоторые причины плохой приживляемости, зависящие от телок-реципиентов и опыта операторов: качество желтых тел в яичниках у реципиентов, время, затраченное на оценку качества эмбриона, оттаивание и отмывание от криопротектора, заправку в соломину и непосредственно на пересадку. Исследована возможность улучшения приживляемости эмбрионов и увеличения числа стельных реципиентов при применении гормональных препаратов прогестерона, ГСЖК, ХГЧ и сурфагона.

В опытах по межпородной пересадке пересаживали эмбрионы от мясных коров герефорд, шароле и молочных холмогорских коров телкам-реципиентам черно-пестрой породы.

При проведении исследований и постановке научно-хозяйственных опытов использовали руководство А.И. Овсянникова (1976), инструкции и методические рекомендации, разработанные в ВИЖе, ВНИИплем, В НПО по племенному делу.

Полученные данные обрабатывали статистически по соответствующей программе на компьютере ГОМ 6x86-166.

СХЕМА

исследований по трансплантации эмбрионов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние породы, возраста, состояния обмена веществ коров-доноров на реакцию яичников при обработке гонадотропинами

Исследования по получению и пересадке зародышей в ряде хозяйств Волго-Вятского региона показали (таблица 1), что коровы-доноры черно-пестрой, холмогорской, истобенской пород и герефорды в местных условиях имели реакцию полиовуляции и выход пригодных для трансплантации эмбрионов близкие к аналогичным показателям указанных пород в других зонах России.

Особый интерес представляют местные коровы истобенской породы и их помеси, которые в настоящее время разводятся только в Кировской области и в чистом виде сохранились в сельскохозяйственном предприятии "Истобенское" в количестве около 100 голов взрослых животных.

Нами была проведена сравнительная оценка качества реакции суперовуляции и получения эмбрионов у пород крупного рогатого скота, разводимых в Северо-Восточном регионе Европейской части России (таблица 1). Из таблицы видно, что лучше реагировали на реакцию суперовуляции доноры холмогорской породы (100%), интенсивность полиовуляции лучше у истобенской (7.9).

После обработки гормонами у доноров-истобенок реагировали полиовуляцией 86% животных, у доноров других пород 84-100%. От коров истобенской породы получено несколько меньше качественных эмбрионов (47%) от общего числа вымытых зародышей, чем от доноров черно-пестрой (65%) и холмогорской (60%) пород. Еще ниже этот показатель у герефордов-40%.

Таблица 1

Интенсивность реакции суперовуляции и качество полученных

эмбрионов у различных пород крупного рогатого скота_

Показатели П о р оды

черно-пестрая холмогорская истобснская герефорд

Число доноров 19 24 28 19

Реагировало полиовуляцией, (гол.-%) 18-95,0 24 - 100 24 - 86,0 17-89,0

Интенсивность полиовуляции (количество ж т на одного донора) 7,3 ± 0,748 7,3 ± 0,566 7,9 ± 0,709 7,0 ± 0,527

Положительных но извлечению ог числа реагировавших полиовуляцией, (гол.-%) 16-88,8 21 -87,5 18-75,0 14-82,3

Получено зародышей в среднем на одного донора 4,6 ± 0,807 3,8 ± 0,647 4,7 ± 0,720 5,0 + 0,817

в том числе нормальных 3,0 ± 0,568 2,3 ±0,571 2,2 ± 0,540 2,0 ± 0,480

дегенерированных 0,8 ± 0,355 0,5 ±0,158 0,5 ±0,138 0,8 ± 0,233

неоплодотворенных 0,8 ± 0,347 1,0 ±0,240 2,0 ± 0,448 2,2 ±0,613

Результаты исследований показали (таблица 2) что лучше реагировали на обработку гормонами половозрастные коровы (2-5 отелов -100%).В тоже время первотелки в первой опытной группе на 60%, доноры в третьей группе на 62%. Соответственно и результаты по извлечению эмбрионов у второй группы доноров лучше: получено всего зародышей на одного донора 3,6, у первотелок - 3,0, у коров после 6-ти отелов - 2,0.

Таблица 2

Влияние возраста доноров на результаты суперовуляции

Возрастные группы

ПОКАЗАТЕЛИ I группа первотелки П группа доноры 2-5 отелов III группа доноры 6 отелов и более

Число доноров 5 12 8

Реагировало полиовуляцией, (гол.-%) 3 - 60,0 12-100 5 - 62,0

Интенсивность полиовуляции (количество ж т на одного донора) 10,0 + 2,07 8,9 ±1,06 6,2 ±1,14

Положительных по извлечению от числа реагировавших полиовуляцией, (гол.-%) 1 - 33,0 10 - 83,0 1 - 20,0

Получено зародышей в среднем на одного донора 3,0 ± 0,60 3,6 ± 0,96 2,0 ± 0,25

в том числе нормальных дегенерированных неоплодотворенных 1,0 ±0,20 2,0 ± 0,40 2,4 ± 1,03 0,3 ±0,13 0,9 ±0,30 2,0 ± 0,25

Очевидно, что наиболее пригодны для использования в качестве доноров коровы в возрасте 4-7 лет, так как они практически все отвечают суперовуляцией на гормональную обработку, из них от 80% получены эмбрионы. В среднем на одного донора получено 2,4 качественных эмбриона, пригодных к пересадке. Значительно ниже аналогичные показатели у коров после 6 отелов и старше.

амые низкие показатели у коров - первотелок, что возможно, связано со ста-овлением у них молочной функции.

. Нами проведены исследования интенсивности реакции суперовуляции, оличества и качества зародышей у 34 доноров от которых получена мутная, одержащая хлопья промывная среда и 20 доноров с нормальной - прозрачной редой.

Результаты наших исследований свидетельствуют о том, в группе здоро-ых животных больше коров реагировало полиовуляцией (85%) и получено юлыпе качественных эмбрионов из расчета на 1-го донора (3,4), чем в группе, де наблюдали скрытый эндометрит (соответственно 53% и 0,1).

3.2. Количество и качество получаемых эмбрионов в зависимости от ряда технологических факторов и интенсивности реакции полиовуляции

Нами было изучено 6 гормональных препаратов: грофоллон, ФСГ-супер, "СЖК (Россия), фоллитропин (Литва), фолликотрогаш (Чехия) и ФСГ-п США). Наибольший процент доноров, реагировавших суперовуляцией, пока-¡ал препарат ФСГ-п (США) - 80%, таблица 3. Только половина животных про-зеагировала на препарат ГСЖК - 53,1%. Остальные препараты дали реакцию :уперовуляции в пределах от 64,8% до 61,3%.

Мы изучали процентное соотношение доноров, имеющих желтые тела в шчниках и как желтые тела, так и фолликулы. В этом отношении лучше себя показал препарат ФСГ-супер (Боровск): количество доноров, имеющих желтые гела и фолликулы - 3,3%, фолликотропин (Чехия) - 11,1% и ФСГ-п (США) -22,8%, при применении остальных препаратов этот показатель был выше 36%.

Наиболее эффективно, когда доноры дают среднюю и высокую реакцию полиовуляци, и в этом отношении лучше был препарат фолликотропин (Чехия) - среднюю реакцию показали 71,4% доноров. Более половины доноров имели высокую и среднюю степень суперовуляции. При применении препаратов гро-фоллона - 65,0%, фоллитропина - 54,4% и ФСГ-супер - 52,6%

Таблица 3

Результаты вызывания суперовуляции в зависимости от гормонального препарата

Гормональные препараты

Показатели Фоллитропин Грофоллон Фолликотропин ФСГп ФСГ супер ГСЖК

Каунас Ленинград Чехия США Боровск Владимир

Всего доноров 88 31 11 35 31 49

голов % голов % голов % голов % голов % голов %

Реагировавших 57 64,8 20 64,5 7 63,6 28 80,0 19 61,3 26 53,1

Доноры имеющие

ж т + фол. 30 36,1 11 36,7 1 11,1 8 22,8 1 3,3 18 37,5

Интенсивность полио-

вуляции

4 - 6 ж т (слабая) 26 45,6 7 35,0 2 28,6 18 64,3 9 47,4 18 69,2

7 - 11 ж т (средняя) 25 43,9 10 50,0 5 71,4 7 25,0 10 52,6 6 23,1

12 и более (высокая) 6 10,5 3 15,0 - - 3 10,7 - 2 7,7

и использовании препарата ГСЖК, среднюю и высокую реакцию полиову-ши показали всего 30,8% доноров.

Анализ полученных нами данных показывает, что для стимуляции су-эовуляции у животных доноров более эффективно использовать гормональ-е препараты, имеющие высокую степень очистки - ФСГ-супер и ФСГ-п.

В опытах по изучению количества и качества зародышей исследовали брионы, полученные нехирургическим способом от 54 доноров на 6-й, 7-й и I дни после их осеменения.

Наибольшее число доноров, от которых были получены эмбрионы -,9%, наблюдали в группе животных, где вымывание проводили на 7-й день 1блица 4). Аналогичные показатели на 6-й день извлечения - 76,9%, на 8-й нь - 83,3%.

Таблица 4

гияние дня извлечения зародышей после осеменения доноров на количество и

качество полученных эмбрионов

Показатели срок извлечения эмбрионов, день

6-й 7-й 8-й

шоров всего 13 23 18

шоры, от которых получены эмбр. 10 20 15

тоцент 76,9 86,9 83,3

элучено зародышей в ср. на 1 донора 3,8+0,92 4,2±0,76 2,4±0,48

гом числе: нормальных 1,3±0,50 1,5±0,37 1,0±0,26

дегенерированных 0,5±0,21 0,9±0,33 0,7±0,27

неоплодотворенных 2,0+0,75 1,8+0,45 0,7+0,22

фесажено эмбрионов 13 29 16

гельных реципиентов 4 10 4

эоцент стельности 30,7 34,4 25,0

Получено эмбрионов в среднем на одного донора в группе 7-го дня изучения 4,2, в том числе нормальных 1,5, тогда как на 8-й день извлечения эти жазатели были соответственно 2,4 и 1,0. Соответственно и процент стелыю-и животных, которым пересаживали эмбрионы 7-го дня, был - 34,4, извлечение на 6-й день - 30,7, на 8-й день всего составил 25,0%.

3. 3. Технические устройства, применяемые для извлечения и пересадки эмбрионов у крупного рогатого скота

В настоящее время для нехирургического извлечения эмбрионов у коров-доноров используют различные типы катетеров, как отечественного, так и импортного производства. Принцип устройства и действия всех катетеров идентичен.

Наиболее полное извлечение промывной среды из рогов матки наблюдали при применении катетеров польской фирмы "Томель" (90,4%) и немецкой фирмы "Минитуб" (88,6%). Число доноров, от которых получены эмбрионы было выше при работе с немецким катетером "Минитуб" (83,9%). Также получено зародышей на одного донора с немецким катетером больше (4,2), соответственно и полнота извлечения зародышей к числу овуляций была больше у устройства фирмы "Минитуб" (61,8), тогда как у украинского устройства ЗРТИ всего составила - 37,3%.

Большое значение имеет толщина и упругость стенки катетера. Устройства с незначительной толщиной стенки (катетеры производства Киевского завода, Украина) в процессе работы иногда пережимаются в канале шейки матки, что препятствует извлечению промывной среды.

В лаборатории трансплантации эмбрионов НИИСХ Северо-Востока усовершенствована замкнутая система для извлечения эмбрионов, за счет введения в ее комплект шприца-полуавтомата из комплекта ветеринарного манипулятора. Масса манипулятора около 0,8 кг, размеры 170x170 мм, емкость шприца 20 мл, то есть легче и удобнее, чем применяемые подставки или насосы.

Эксплуатация герметичной системы показала, что она имеет определенные преимущества перед технологией введения и извлечения промывной среды с помощью пластиковых шприцев. Сравнительные результаты эксплуатации этих систем показаны в таблице 5.

Применение герметичной системы для извлечения эмбрионов у коров-доноров дает возможность предотвратить микробную контаминацию промыв-

ной среды при работе в производственных условиях, провести более полное извлечение среды из матки донора (93,5%), чем при использовании шприцев ^79,1%). Количество доноров, от которых получены эмбрионы, было выше при использовании герметичной системы - 79,5% от числа коров, реагировавших суперовуляцией. При работе со шприцами аналогичный показатель равен 62,5%. Показатель полноты извлечения эмбрионов не имел существенной разницы при использовании герметичной системы и шприцев - 58,0% и 56,5%, соответственно.

Таблица 5

Применение различных систем для подачи и извлечения промывной среды при _нехирургическом извлечении эмбрионов_

Показатели

Устройства для подачи и извлечения промывной среды

Пластиковые шприцы _(60 мл)_

Герметичная система

Количество доноров Полнота извлечения промывной среды, (%) Доноры, от которых получены эмбрионы, (гол. - %) Обнаружено желтых тел в среднем на 1 донора Получено зародышей в ср. на одного донора

Полнота извлечения зародышей, (%)

79,1±2,49 25 - 62,5 6,9±0,58 3,9±0,46 56,5

93,5±1,30 31-79,5 6,2±0,46 3,6±0,56 58,0

Применение двух видов катетеров для пересадки эмбрионов показало, что несколько лучше показатели по числу полученных телят при применении катетера французской фирмы Кассу (22,5%), при работе с немецким катетером "Мишпуб" - 18,2% от общего числа пересаженных эмбрионов. Однако, при работе в производственных условиях на ферме проще и лучше применять катетер фирмы "Минитуб", так как он состоит из 2-х составляющих предметов, в то время как катетер фирмы Кассу из 4-х составляющих.

3. 4. Результаты исследований по профилактике ранней эмбриональной смертности у коров после трансплантации

В первом опыте изучали влияние качества желтых тел в яичниках у телок-реципиентов на приживляемость пересаженных зародышей (таблица 6). Всего было пересажено 72 зародыша реципиентам, имеющим желтые тела различного качества. Было пересажено 5 эмбрионов реципиентам с отличными желтыми телами, 41 эмбрион реципиентам с хорошими желтыми телами, 19 -среднего и 7 - слабо выраженпых желтых тел реципиентов. Реципиенты, имеющие отличное желтое тело, показали 60,0% стельности. При хорошем качестве желтого тела имели 39,0%, среднее - 36,8%, а реципиенты со слабо выраженными желтыми телами все были не стельными.

Таблица 6

Влияние качества желтых тел яичников у реципиентов на приживляемость за-

родышей после пересадки

Показатели Качество желтых тел реципиентов

отличное хорошее среднее слабо

выраженное

Пересажено эм-

брионов 5 41 19 7

Стельных реци-

пиентов 3 16 7 -

Процент

стельности 60,0 39,0 36,8 -

Можно сделать вывод, что для использования в качестве реципиентов, необходимо использовать животных только с желтыми телами отличного и хорошего качества.

Во втором научно-хозяйственном опыте изучали приживляемость эмбрионов, в зависимости от времени, затраченного на получение, подготовку и пересадку зародышей. В связи с тем, что при проведении исследований работа проводилась с криоконсервированными эмбрионами, учитывались следующие показатели: затраты времени на оттаивание соломины с эмбрионом, отмывание эмбриона от криопротектора, морфологическую оценку качества эмбрионов, заправку эмбриона в катетер и пересадку его реципиенту.

У стельных реципиентов, время, затраченное на манипуляции от отгаива-[ия и до пересадки эмбриона, составило 1 час (100%), у не стельных 1 час 17 1инут- 117%. Время, затраченное на пересадку, зависит от квалификации опе->атора и, конечно, чем меньше затрачено времени, тем приживляемость выше. I стельных реципиентов это время составило в среднем 3,05 минут - 100%, а у 1е стельных 3,53 минуты - 115%.

Для предотвращения эмбриональной смертности, увеличения количества ¡тельных животных-реципиентов мы применяли различные гормональные пре-тараты (таблицы 7 и 8).

По данным таблицы 7 видно, что процент стельности во всех опытных группах был выше, чем контрольных. Лучше были показатели при применении препарата ГСЖК, в опытной группе процент стельности составил 66,6, а в кон-грольной 12,5%. При использовании сурфагона процент стельности в опытной группе был 44,8 - это выше чем в контроле на 20,8%. При применении прогестерона разница между контрольной и опытной группой составила 7,5%.

Таблица 7

Эффективность применения различных препаратов замороженно-оттаянных

эмбрионов

Группы Препарат Всего Из них стель- %

реципиентов ных

1 - опытная Сурфагон 29 13 44,8

контрольная без препарата 25 6 24,0

2 - опытная ГСЖК 6 4 66,6

контрольная без препарата 8 1 12,5

3 - опытная Прогестерон 5 1 20,0

контрольная без препарата 8 1 12,5

Исходя из полученных данных таблицы 8 можно сделать вывод, что во всех опытных группах стельных животных было больше, чем в контрольных. Наиболее лучшие результаты были при применении сурфагона, где процент стельности был 50,0, а в контрольной группе 37,5. При использовании прогестерона и ХГЧ процент стельности составил 35,0 и 33,3 соответственно. Но при применении ХГЧ процент стельности был выше в опытной группе на 16,7, чем в контроле.

Таблица 8

Влияние различных препаратов на приживляемость свежеполученных эмбрио-_ нов у животных реципиентов_|___

Группы Препарат Всего Из них стель- %

реципиентов ных

1 - опытная Сурфагон 6 3 50,0

контрольная без препарата 8 3 37,5

2 - опытная Прогестерон 20 7 35,0

контрольная без препарата 10 3 30,0

3 - опытная ХГЧ 6 2 33,3

контрольная без препарата 6 1 16,6

Таким образом, для предотвращения эмбриональной смертности, увеличения количества стельных реципиентов эффективно использовать биологически активные препараты Г'СЖК, сурфагон, и ХГЧ.

3. 5. Опыты по межпородной пересадке эмбрионов Нами было пересажено всего 89 замороженно-оттаянных эмбрионов различных пород крупного рогатого скота реципиентам черно-пестрой породы (таблица 9).

Таблица 9

Эффективность межпородной пересадки замороженно-оггаянных эмбрионов различных пород крупного рогатого скота реципиентам черно-пестрой породы

Породы

Всего голов Стельных

эмбрионы молочных пород

Голштино-фризская Холмогорская

итого

31 10 41

8 4 12

25,8 40,0 29,2

эмбрионы мясных пород

Абердино-ангусская Шароле Герефорд итого

18 13 17 48

6 8 4 18

33,3 61,5 23,5 37,5

Всего

33,7

По данным таблицы 9 видно, что приживляемость эмбрионов, полученных от коров мясного направления выше на 8,3%, по сравнению с эмбрионами молочных пород. Лучшая приживляемость была у эмбрионов мясной породы шароле (61,5%), самая низкая при пересадке эмбрионов молочной голштино-

тазской породы - 25,8%. Общий процент приживляемости замороженно-таянных эмбрионов составил 33,1%.

. 6. Особенности естественного многоплодия у крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона В агрофирме "Толмачево" за период с 1991 до 1995 годы всего было поучено 68 двойневых отелов, что составило от среднего поголовья коров 1,5% с элебаниями по годам от 1,0% до 2,3%. В Лугоболотной опытной станции с 985 до 1994 год было получено 78 двойневых отелов. В этом хозяйстве их ко-ичество составляло в среднем 1,74% с колебаниями от 1,1% до 3,8%.

В таблице 10 показано влияние сезона года на количество двойневых оте-ов в процентах.

Таблица 10

Влияние сезона года на количество двойневых отелов

Хозяйство Отелы по сезонам года (гол. - %)

зима весна лето осень

1/ф. "Толмачево" Нижего-юдской области 1угоболотная опытная гтанция Кировской области 11-16,2 23 - 24,5 17 - 25,0 28 - 29,8 21 - 30,9 23 - 24,5 19 - 27,9 20-21,2

В агрофирме "Толмачево" основной процент (30,9) приходится на летние

месяцы и меньший (16,2%) в зимнее время, а в Лугоболотной опытной станции эсновная масса отелов (29,8%) приходится на весенний период и меньшее чисто отелов (21,2%) осенью.

Таблица 11

Влияние возраста коров на количество двойневых отелов

Хозяйство Возраст коров, года (гол.

3 4 5 6 7 8

з/ф. "Толмачево" Ни-

жегородской области 10- 12- 6-18,8 3-2,3 - 1-

31,3 37,5 3,1

Лугоболотная опытная

станция Кировской об- 16- 30- 14- 26- 13- 2 -

ласти 15,8 29,7 13,9 25,7 12,9 2,0

На молочной ферме агрофирмы "Толмачево" большее количество отелов двойнями было у коров в возрасте 4-3 года (37,5 и 31,3%) и уменьшалось с возрастом. В возрасте шести лет произошло всего 2,3%. В Лугоболотной опытной станции основной возраст коров с двойневыми отелами был в четыре года и шесть лет (29,7 и 25,7%), также понижалось их число с возрастом и в возрасте восьми лет было всего 2,0% двойневых отелов.

В обоих хозяйствах более половины коров после отела двойнями имели увеличенный сервис-перид: агрофирма "Толмачева" -62%; Лутоболотная станция 56% животных. Оптимальную величину сервис-периода до 60 дней имели в агрофирме "Толмачево" 31% коров, в Лугоболотной станции 21%.

ВЫВОДЫ

1. Коровы-доноры истобенской породы и их помеси с голштино-фризами реагировали поли овуляцией в 86% случаев, от 75% реагировавших животных были получены зародыши, в среднем на одного донора получено 2,2 жизнеспособных эмбриона.

Полученные данные близки соответствующим показателям у коров других молочных пород, разводимых в Кировской области.

2. Коровы-первотелки непригодны для использования их в качестве доноров эмбрионов, так как слабо реагируют суперовуляцией на обработку гона-дотропными гормонами (60% животных), из числа реагировавших эмбрионы получены только от 33% животных, в среднем на одного донора получено по одному пригодному для пересадки зародыша.

3. Герметичная система для введения и извлечения промывной среды имеет преимущество перед пластиковыми шприцами, так как при ее применении увеличивается на 14,4% полнота извлечения промывной среды, на 17% число доноров, от которых получены эмбрионы, предотвращается микробная контаминация среды при работе на ферме.

4. Введение ГСЖК реципиентам улучшало приживляемость заморожен-но-оттаянных эмбрионов на 54,1% (в опыте 66,6% стельных реципиентов, в контроле -12,5%).

При использовании сурфагона соответствующие показатели 44,8% и в контроле 24,0%.

5. Приживляемость свежеполученных эмбрионов увеличивалась при инъекции ХГЧ на 16,7% (опыт - 33,3% стельных реципиентов, контроль- 16,6%).

При применении сурфагона 50% и 37,5%, соответственно.

6. Естественные отелы двойнями у молочных коров по данным двух хозяйств за 5 и 10 лет наблюдались, в основном, в летний или весенний период (29,8 - 30,9%). Коровы в возрасте 4 года имели 29,7% и 37,5% двоен. С возрастом число двоен резко снижается и составляет у коров в возрасте 7 лет - 12,9%, 8 лет-2,0-3,1%.

Телята-двойни, в основном, были представлены разнополыми животными: бычки-телки - 40,4-47,1%, на втором месте животные типа бычки-бычки -29,4-33,6%, двойни телки-телки - 23,5-26%.

Отрицательным моментом при рождении двоен является увеличение продолжительности сервис-периода у 56,1-62% животных до 80-120 и более дней.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Применить метод трансплантации эмбрионов для ускоренного размножения и сохранения генофонда исчезающей истобенской породы скота.

2. При получении эмбрионов в условиях фермы использовать герметичную систему для введения и извлечения промывной среды.

3. Использовать сурфагон для улучшения приживляемости эмбрионов после пересадки, как дешевый и доступный препарат.

4. Данные по естественному многоплодию у молочных коров применять при работе по искусственному получению двоен: вызывать двойни или подса-

живать второй эмбрион молодым здоровым животным в возрасте 4-6 лет, оплодотворение которых проводить в осенний период.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Агалакова Т. В., Нетеча В И., Малиновский А.М. Опыт пересадки заморо-женно-отгаянных эмбрионов в хозяйствах Кировской области // Сборник научных трудов.: Сельскохозяйственная наука Северо-Востока европейской части России. - Киров, 1995. - Т.З - С. 69-72.

2. Агалакова Т.В. Об особенностях многоплодия в скотоводстве. // Молочное и мясное скотоводство. - 1998. - N1. - С. 16-17.

3. Агалакова Т.В., Перминова Л.В. Зависимость уровня полиовуляции и количества полученных эмбрионов от возраста коров-доноров и состояния у них слизистой эндометрия // Пермский аграрный вестник: Научно-производственный журнал. - Пермь, 1998. - Вып. 2. - С. 181-182.

4. Агалакова Т.В. Применение гормональных препаратов для стимулирования полиовуляции у коров-доноров // Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве: Тезисы докладов научной конференции, 6-7 октября 1998 г., Киров, 1998. - С. 5-6.

5. Бакина И.И., Перминова Л.В., Агалакова Т.В. Изучение эффективности одно- и двукратного введения сывороточного гонадотропина (ГСЖК) с целью вызывания реакции суперовуляции // Материалы научно-производствен-ной конференции молодых ученых и специалистов сельского хозяйства. Киров, 1990. - С. 65-67.

6. Нетеча В.И., Агалакова Т.В., Перминова Л.В. Применение некоторых гормональных препаратов для увеличения приживляемости эмбрионов после нехирургической пересадки // Пермский аграрный вестник: Научно-производственный журнал. - Пермь, 1998. - Вып. 2. - С. 183-184.

7. Тяпугин Е.А., Гавриков A.M., Агалакова Т.В., Перминова Л.В., Калягин A.A. Методы улучшения приживляемости эмбрионов. // Зоотехния. - 1996. - N5. - С. 27-28.

8. Тяпугин Е.А., Агалакова Т.В., Перминова Л.В. Качество зародышей у коров-доноров разных пород, возраста и состояния эндометрия. \\ Зоотехния. - 1998. -N6.-С. 26-28.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Агалакова, Татьяна Владимировна, Киров

О 7 * ^ ^^ - о / з

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СЕВЕРО-ВОСТОКА имени Н. В. РУДНИЦКОГО

На правах рукописи Агалакова Татьяна Владимировна

03.00.13 - Физиология человека и животных

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: кандидат биологичесих наук,

доцент, Заслуженный зоотехник Российской Федерации Е. А. Тяпугин.

Научный консультант: доктор биологических наук,

профессор А. Н. Успенский.

Киров 1998

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ....................................................................... 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...................................................... 10

1.1 Метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота: основы, значение, проблемы.......................................... 10

1.2 Подбор и подготовка коров-доноров эмбрионов и реципиентов........................................................................... 21

1.3 Особенности стимуляции полиовуляции у коров-доноров..... 28

1.4 Устройства для извлечения и пересадки эмбрионов............. 34

1.5 Причины и профилактика гибели ранних эмбрионов у коров. 38

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................... 47

2.1 Материалы и методы исследований................................. 47

2.2 Результаты исследований............................................. 55

2.2.1. Влияние породы, возраста, состояния обмена веществ коров-доноров на реакцию яичников при обработке гонадотропинами................................................ 55

2.2.2. Количество и качество полученных эмбрионов в зави-

симости от ряда технологических факторов и интенсивности реакции полиовуляции............................ 63

2.2.3. Технические устройства, применяемые для извлечения

и пересадки эмбрионов у крупного рогатого скота...... 69

2.2.4. Результаты исследований по профилактике ранней эм-

бриональной смертности у коров после трансплантации.................................................................. 77

2.2.5. Опыты по межпородной пересадке эмбрионов............ 82

2.2.6. Особенности естественного многоплодия крупного ро-

гатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона..... 84

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.......................................... 88

ВЫВОДЫ..................................................................................................................................................97

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..............................................................................98

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................................... 99

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Увеличение продукции животноводства в стране в большой мере зависит от знаний в прикладной биологии, в частности, технологии воспроизводства сельскохозяйственных животных. Прогресс в этой области можно значительно ускорить благодаря возможности регулировать процессы воспроизводства крупного рогатого скота.

В 70-е -80-е годы в Советском Союзе и за рубежом получил распространение новый биотехнологический способ размножения крупного рогатого скота - трансплантация эмбрионов. Этому способствовал ряд факторов:

- значительный прогресс в области знаний по биологии воспроизводства домашних животных;

- разработка и промышленное освоение производства гормональных препаратов: фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ) и других;

- разработка способов синхронизации полового цикла и стимуляции полиовуляции у крупного рогатого скота.

- появление устройств и методов для нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов у коров;

- разработка способов и приборов для глубокого замораживания, хранения и оттаивания зародышей.

Освоение и внедрение в производство способа трансплантации эмбрионов открывает большие возможности в разведении молочного скота.

Низкая плодовитость крупного рогатого скота является тормозом генетического прогресса в скотоводстве. В то же время в яичниках телочек содержится свыше 75 тысяч потенциальных яйцеклеток. Метод трансплантации эмбрионов позволяет эффективно использовать репродуктивный потенциал, так как имеется реальная возможность получать от одной высокопродуктивной коровы несколько десятков потомков за год.

Значительное преимущество дает применение трансплантации эмбрионов в селекции скота, так как позволяет получить большое число племенных быков

от высокопродуктивных родителей, провести их быструю оценку к 3-х летнему возрасту по показателям полных сестер (сибсы), создавать высокопродуктивные семейства скота. Создание многочисленных семейств и линий позволит обеспечить наиболее полное их взаимодействие в селекционно-племенной работе.

Способ пересадки зародышей можно также использовать для получения молодняка от выбракованных, ценных в племенном отношении коров; для получения двоен, длительного хранения в банке глубокозамороженных эмбрионов и транспортировки их в сосудах Дьюара в любое удобное время и место для проведения работ по пересадке.

Большое значение метод трансплантации эмбрионов имеет для научных исследований в области биологии размножения. В частности, изучение данного метода значительно продвинуло наши знания о механизме взаимодействия го-надотропных гипофизарных гормонов и их роли в стимуляции реакции суперовуляции яичников.

Метод пересадки зародышей состоит из нескольких технологических операций, выполняемых последовательно друг за другом:

1. Подбор животных доноров эмбрионов и синхронизация у них полового цикла.

2. Стимуляция суперовуляции у коров-доноров с помощью препаратов ФСГ.

3. Подбор животных -реципиентов и синхронизация охоты у доноров и реципиентов путем использования препаратов простагландина р2а-

4. Искусственное осеменение доноров.

5. Нехирургическое извлечение зародышей у коров-доноров оценка их жизнеспособности и пересадка реципиентам.

6. Криоконсервирование (при необходимости) качественных эмбрионов и хранение их в глубокозамороженном состоянии в жидком азоте в банке.

Увеличение масштабов применения метода трансплантации эмбрионов в производстве ограничивается высокой стоимостью и трудоемкостью работ, а также невысокой эффективностью пересадок. Для успешного внедрения в

практику большое значение имеет изучение и усовершенствование используемых инструментов, оборудования, технологических приемов. Необходима работа над упрощением метода и повышением надежности получаемых результатов.

Практические работы по пересадке эмбрионов показывают, что необходимо выяснить влияние различных факторов при подборе доноров, так как часть животных оказывается непригодными из-за строения или заболеваний половых органов. Около 10-15% доноров и реципиентов не приходят в охоту после введения простагландинов. Из числа обработанных гонадотропинами коров-доноров около 25-30% животных не реагируют суперовуляцией и лишь от 20-25% получают 5-12 зародышей на одну голову.

В настоящее время для нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов используют целый ряд катетеров производства различных отечественных предприятий и зарубежных фирм. Надо оценить, какие из них наиболее удобны и пригодны для практической работы.

Приживляемость эмбрионов после нехирургической пересадки невелика - в лучших предприятиях страны при трансплантации свежеполучен-ных зародышей - 40-50%, замороженно-отгаянных - 30-40%.

Необходимо изучить причины низкой приживляемости, предложить и апробировать способы для улучшения этого показателя.

Представляет интерес исследовать эффективность пересадки эмбрионов от доноров одной породы реципиентам другой породы крупного рогатого скота.

В связи с тем, что одним из способов практического применения трансплантации является получение двоен, необходимо иметь сведения об уровне естественного многоплодия в стадах молочного скота Волго-Вятского региона.

Исходя из поставленной цели, было необходимо решить следующие задачи:

- провести технологическую оценку технических устройств, применяемых для извлечения и пересадки эмбрионов;

- изучить факторы, влияющие на приживляемость эмбрионов коров после пересадки;

- дать оценку естественного многоплодия в стадах молочного скота Волго-Вятского региона.

Научная новизна работы. Впервые изучена возможность получения и пересадки эмбрионов у коров местной истобенской породы крупного рогатого скота. Получены первые телята- трансплантаты истобенской породы, установлена возможность сохранения генофонда скота истобенской породы с помощью метода трансплантации эмбрионов.

Дана техническая характеристика устройств (катетеров) для нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов у коров, установлены наиболее пригодные и удобные в работе конструкции.

Усовершенствована и апробирована герметическая система подачи и извлечения промывной среды, необходимая для работы в условиях фермы.

Расширены наши знания о естественных двойневых отелах на крупных молочных фермах.

Практическое значение. Полученные данные дают возможность проводить практические работы по сохранению генофонда коров исчезающей исто-бенской породы скота, размножению и увеличению ее поголовья с помощью метода пересадки зародышей.

Проводить более эффективный отбор коров для использования их в качестве доноров эмбрионов, что позволит получать более стабильные результаты при стимуляции полиовуляции.

Приобретать, использовать при пересадке эмбрионов катетеры наиболее удобных и рекомендуемых нами конструкций.

Применять при пересадке эмбрионов метод сохранения стельности, что увеличит на 15-20% выход телят после трансплантации.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

2. Конференция молодых ученых и специалистов, посвященная 60-летию Сиб-НИПТИЖ, "Проблемы животноводства и как их решать". (2-4 октября 1990 г., Новосибирск)

4. 64-я научная конференция профессорско-преподавательского состава и аспирантов ВГСХА по итогам 1995 года. (4 апреля 1996 г., г. Киров)

6. Научная конференция преподавателей и студентов ВГСХА. (25 июня 1997 г., г. Киров)

По материалам диссертации опубликовано 7 статей и 7 информлистков Кировского ЦНТИ.

Положения выносимые на защиту.

3. Дается технологическая характеристика усовершенствованной герметичной системы для вымывания эмбрионов.

4. Предлагается оптимальный метод сохранения стельности у реципиентов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота: основы,

значение проблемы

Современное животноводство России характеризуется развитием много-укладности, то есть появлением наряду с крупными специализированными производствами небольших фермерских, кооперативных и частных предприятий. Рыночные отношения определяют меняющийся спрос на животных с разнообразными хозяйственно-полезными признаками. Необходимо ускоренное создание новых пород, линий, семейств высокопродуктивного скота, качество которого удовлетворяют требованиям рынка.

Это повышает значение интенсификации селекционных программ, темпов генетического совершенствования животных. В скотоводстве вследствие малоплодия вклад особей женского пола в совершенствование пород невысок. В связи с этим встает вопрос об увеличении получении потомства от ценных в генетическом отношении коров путем использования современных биотехнологических методов, в том числе трансплантации эмбрионов.

Практическая значимость и перспективы развития трансплантации эмбрионов подробно представлены в ряде обзоров Эрнста Л.К. и др. [135,136,139,138,140.], а так же в работах Сергеева Н.И. [110] Голубева А.К. [25] First N.L.[151] Leides Т.Е. [168] и др.

Трансплантация эмбрионов представляет собой биотехнологический метод воспроизводства животных по материнской линии, заключающийся в получении ранних эмбрионов из половых путей высокопродуктивных коров-доноров и пересадке их для выращивания в матку животных-реципиентов. В качестве реципиентов используют коров и телок, не имеющих высокой племенной ценности. Данный способ дополняет метод искусственного осеменения.

Метод трансплантации эмбрионов используют в практике животноводства в ряде отраслей:

1. Воспроизводство - получение потомства от высокопродуктивных коров; получение двойневых отелов; получение телят от выбракованных коров.

2. В селекции - получение быков-производителей от ценных животных. Создание семейств от высокопродуктивных коров.

3. Криоконсервирование - хранение и экспорт замороженных зародышей. Создание банка эмбрионов с целью сохранения генофонда.

4. В экологии - криоконсервирование и длительное хранение в банках генофонда эмбрионов редких и исчезающих пород скота.

5. В ветеринарии - оздоровление стада от инфекционных вирусных заболеваний (лейкоза, ринотрахеита и др.).

Перспективно применение данного способа также в научных исследованиях по разработке новых биотехнологических методов, которые включают в себя трансплантацию, как конечный этап для получения потомства. К ним относятся:

1. Деление эмбрионов на две или четыре части с последующей пересадкой "половинок" реципиентам.

2. Пересадка зародышей, полученных в результате оплодотворения яйцеклеток in vitro.

3. Пересадка эмбрионов, полученных в результате стимуляции партеногенети-ческого деления.

4. Пересадка эмбрионов, полученных при пересадке ядер соматических клеток в оплодотворенную яйцеклетку.

5. Создание и пересадка химер.

Возможно, в будущем, вышеуказанные методы будут играть большую роль в размножении сельскохозяйственных животных.

Многочисленные научные исследования и многочисленное практическое применение метода показали, что полученное в результате трансплантации потомство не отличается от такового, полученного при искусственном или естественном осеменении.

Соотношение полов, число уродств в потомстве, полученном после пересадки эмбрионов у коров, такое же, как и при традиционных способах размножения [11].

С развитием метода трансплантации эмбрионов и получением большого числа телят остро встал вопрос о влиянии реципиентов на продуктивные качества трансплантатов, об экономической эффективности способа при его внедрении в практическую работу. В связи с этим проведены многочисленные исследования по этой проблеме, как в России, так и в зарубежных странах.

Ferrell C.L. [150] проводил пересадку зародышей коров породы брахман коровам породы шароле и наоборот. В контрольной группе коров, указанных пород, спаривали с быками. Изучение в крови матери и плода концентрации кислорода, глюкозы, массы плода на 231-й день стельности, плаценты показало, что рост и развитие плода на последней стадии беременности определяет его генотип. Данные показатели не за�

Информация о работе

Агалакова, Татьяна Владимировна
кандидата биологических наук
Киров, 1998
ВАК 03.00.13

Диссертация

Физиологическая оценка трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в хозяйствах Волго-Вятского региона - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы