Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве"

О VI»

> М1Р 1995

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах, рукописи

Гавриков Александр Михайлович

ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНО.М

СКОТОВОДСТВЕ

03.00.13, - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических, наук

п. Дубровины Московской области 1995

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском инсти туте животноводства (ВИЯ).

Научный консультант: зав.отделом трансплантации эмбрионов сель скохозяйственных животных ВИЖа, доктор биологических наук, профессо Н. И. Сергеев.

Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор Ю.Д.Клинский

2. Доктор биологических наук, профессор А.Н.Успенский

3. Доктор биологических наук С. В. Совегкин

Ведущее учреждение:

Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела.

Защита состоится " /Л ГЬ _1995г. в ' У>_часов

ка заседании специализированного совета Д.020-. 16.02 при Всероссийски научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область. Подольский район, пос. Дубровины.

С диссертацией мс£кс ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан ".

М " 1995 г.

Ученый секретарь • специализированного совета, доктор биологических наук

П. А.Науменко.

- з -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1.Актуальность проблемы. Первостепенной • задачей современного ивотноводства является обеспечение народонаселения страни продуктами итания. Решение проблены увеличения производства мяса возможно путем ффективного использования репродуктивного потенциала животных, спо-обных интенсивно увеличивать массу тела с высоким коэффициентом рансформации корма в мясную продукцию.

Существенное значение в интенсификации воспроизводства крупного огатого скота и повышения его продуктивности приобретает биотехноло--лческий метод трансплантации эмбрионов. Данный метод является важным актором ускорения процесса качественного улучшения популяций сельско-:озяйственных животных, обеспечивает более полное использование генетических ресурсов маточного поголовья. Применение трансплантации эмб-»ионов направлено на ускорение селекции крупного рогатого скота при издании высокопродуктивных стад, быстрое и широкое распространение (едких и исчезающих пород, ускоренное создание выдающихся семейств ко-юв-рекордисток в целях использования их как матерей будущих быков ро-юначальников линий. Более 60% быков-производителей, используемых для [скусственного осеменения в странах Северной Америки и Европы, получе-¡ы методом трансплантации и доля их продолжает увеличиваться (H. Сашр и ¡р. 1988).

. Практическое применение метода трансплантации эмбрионов в мясном :котоводстве основывается на получении быков-производителей от выда:-:-ихся матерей, ускоренной проверке быков по качеству потомства, цгя 'величения числа двойневости за счет пересадки или подсадки эмбрионов >анее осемененным коровам или телкам(G.Anderson и др. 1982; D.Williams 985; R.Huhn 1990; J.Sreenan 1989). Программы трансплантации эмбрионов I мясном скотоводстве имеют свои особенности, связанные с физиологи-¡ескими особенностями животных мясных пород и спецификой технологии их удержания. При вызывании полиовуляции трудно получить полноценную ре-1кцию на экзогенные гонадотропины у яивотных в период сезонного или ттационного анзструса. У коров с телятами на подсосе даже при доста-'очно высокой реакции полиовуляции оплодотворяемость яйцеклеток при юеменении в индуцированную охоту существенно понижена (W.Hill и др.

тва. является резко выраженная сезонность размножения. В странах За падкой Европы при отгонном пастбищном содержании и естественном осеме нении коров до 8055 отелов проходят в марте, апреле и мае (J.Eldon др. 1988). С сезоном отела связана и продолжительность послеотельног анэструса (W.Hill и др.1976, Е.Convey и др. 1933). Интервал от отел до первой охоты у коров мясных пород колеблется от 46 до 168 дней.

Величина индуцированной полиовуляции у животных разных пород раз лична и зависит от их генетически обусловленной плодовитости и особен ностями гормонального статуса. Число эмбриошо, получаемых от отдель ных доноров даже в пределах одной 'породы зависит от индивидуальны особенностей их эндокринного статуса, а также типа нервной деятельное ти (A.Sluda 1981; P.Renbock и др. 1986; А. Свитаюс 1991;).

Из анализа мировой научной литературы установлено, что в настоя щее время имеются реальные предпосылки более эффективно использоват ценный генетический материал маточного поголовья мясного скота с по мощью метода трансплантации, увеличить выход телят на 30-50%, а эконо мическую эффективность стада на 25-30%.

В тоже время.ряд вопросов, связанных с технологией трансплантаци эмбрионов мясных пород до последующего времени, остаются нерешенными требуют технической доработки, а также научного обоснования исследова ний в новых направлениях. Необходимо разработать новые эффективные ме тоды отбора и подготовки доноров к полиовуляции, прогнозирования и вы зывания множественной овуляции с помощью надежных гонадотропинов. низ котемпературного криоконсервирования зародышей, нехирургического изв лечения:и пересадки эмбрионов с помощью более совершенных приборов формы организации работ по трансплантации эмбрионов в условиях стойло во-пастбищного и отгонно-пастбищного содержания мясного скота, прием '"лемых для различных регионов страны.

Дальнейшее совершенствование метода трансплантации с использова • нием современных" достижений генетики, эмбриологии и эндокринологии обеспечивают перспективность разработки современной технологии транс плантации эмбрионов мясного скота.

1.2. Целью исследований являлась разработка эффективной техноло гии трансплантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Ка захстана с определенными традициями разведения животных мясного нап равления.

Для реализации поставленной цели ставились следующие задачи:

трансплантации эмбрионов;

- - усовершенствовать существующие и разработать новые методы отбора доноров, синхронизации охоты и индуцирования полиовуляции у коров и телок с помощью гонадотропинов. Изучить влияние экзогенных и эндогенных факторов на результаты полиовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов. Определить оптимальные технологические параметры осеменения коров и телок доноров при полиовуляции;

- усовершенствовать методы нехирургического извлечения и пересадок эмбрионов у коров и телок, сконструировать специальные приборы и приспособления для.этих целей. Разработать способы получения двойневой стельности у животных методом трансплантации эмбрионов;

- усовершенствовать технологию глубокого замораживания, длительного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животноводческих ферм;

- разработать технологические параметры проведения работ по трансплантации эмбрионов мясных пород при стойлово-пастбищном и отгон-но-пастбищном содержании животных.

1.3. Научная новизна. Разработана технология трансплантации эмбрионов мясного скота отечественных и зарубежных пород для регионов России и Казахстана.

Изучены физиологические и технологические особенности воспроизведения крупного рогатого скота мясных пород. Усовершенствованы существующие и разработаны новые методы отбора доноров и синхронизации охоты и индуцирования полиовуляции с помощью экзогенных гонадотропинов. Изучено влияние экзогенных и эндогенных факторов на результаты полиовуля-вди, оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов. Определены оптимальные параметры технологии осеменения коров и телок-доноров ."г/ полиовуляции. Сконструирован прибор для искусственного осеменения коров и телок (а.с. N 263078). Усовершенствованы методы нехирургического извлечения и пересадок эмбрионов у коров и телок. Сконструирован специальный прибор (а.с. N 1762914) для нехирургического извлечения эмбрионов у мясных коров, телок и буйволиц. В целях усовершенствования технологии поиска эмбрионов в промывной жидкости сконструирован специальный фильтр (а.с. И 1655486). что позволило сократить Еремя поиска эмбрионов в 4 раза. Разработаны технологические параметры получения двойневой стельности у коров и телок методом трансплантации эмбрионов. Разработаны некоторые технологические режимы глубокого замораживания, длительного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животнсводчес-

К'ИУ Лепм РяяпяЛптянм лдя пяпиянтя трпмпплп-кпнтойноппп лпа тгпяткпппо-

эмбрионами к месту проведения пересадок. Научная новизна исследований подтверждена тремя авторскими свидетельствами.

1.4. Практическая значимость работы. Разработанная технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота мясных пород позволяет эффективно использовать ценный генофонд маточного поголовья при создании высокопродуктивных стад и семейств коров-рекордисток матерей будущих быков-производителей родоначальников линий, увеличить выход телят в 1.5 раза и экономическую эффективность мясного стада в целом.

Разработанные методы предварительного отбора доноров и гормонального вызывания полиовуляции обеспечивают' полиовуляторную реакцию у 76,5% коров и телок-доноров, получение эмбрионов у 80% животных при числе овуляций от 6,0 до 8,0 и выходе 4 нормальных эмбрионов в среднем на донора.

Разработанный катетер для нехирургического извлечения эмбрионов у крупного рогатого скота мясных пород и буйволиц обеспечивает 98,9% извлечения промывной среды от количества введенной и 96,1% зародышей от числа овуляций.

Разработанное специальное фильтрационное устройство позволило сократить непроизводительные затраты времени по обнаружению зародышей в промывкой жидкости в четыре раза и обеспечивает 96,1% извлечений от числа овуляций.

Разработанные методические и технологические условия проведения пересадки двух эмбрионов или подсадки эмбриона ранее осемененным реципиентам позволяют увеличить число двойневых отелов до 75,0% и средний выход телят на 50%.

Разработанные технологические режимы глубокого замораживания и оттаивания эмбрионов обеспечивают эффективное использование метода трансплантации эмбрионов в условиях животноводческих ферм и отдаленных районов пастбищного содержания животных.

По результатам научных исследований разработаны и опубликованы четыре рекомендации для практического использования в мясном скотоводстве:

1. Методические указания за трансплантация на ембриони при месо-дайни породи говеда. Троян. НРБ. 1990. Одобрены сельскостопанской Академией НРБ.

2. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов мясного скота. Дубродицы, 1990г. Одобрены ученым Советом ВЮКа.

оветом ВИЖа.

•л1 4. Технология трансплантации эмбрионов в иясноы скотоводстве (Ре-омендации). Москва. 1994г. Одобрены секцией по аивотноводству вауч-о-технического Совета при Главке аивотноводства Министерства сельско-о хозяйства России (протокол Н 23 от 02.12.1993 г.).

1.5. Апробация работа. Материалы диссертации доловены н обсуадеш» а конференциях, симпозиумах, ученых Советах в производственных сове-аниях специалистов сельскохозяйственных предприятий:

- международный симпозиум "Радиоиммунологическая диагностика репродуктивных процессов в скотоводстве" г. Разград. Болгария 1989г;

- пленарное совещание четвертой интернациональной школы криобио-огии и лиофилизации г. Боровец Болгария 1989;

- научно-практическая конференция "Интенсификация технологии кяс-ого скота и производства говядины" г. Элиста КННИМС 1991 г;

- научно-практическая конференция "Технология производства говя-ины в мясном скотоводстве" г. Оренбург ВНИИМС 1992т;

- научно-практическая конференция "Совершенствование методов се-екции и повышения продуктивности мясного скота" г.Оренбург. 1993г;

- региональная научно-практическая конференция ученых и специа-истов животноводства г. Оренбург. 1994г;

- научно-технический Совет Министерства сельского хозяйства и родовольствия Российской Федерации (протокол N 23 от 2.12.93 г.).

1.6.„Врализаит; pggYJftTWQB' ВССШ9МЯЙ, " .

Реализация научных исследований по разработке технологии транс-лантации эмбрионов мясных пород осуществляется в ГПЗ "Чапаевский" ральской области Казахстана, "Паризская Коммуна" и "Красный Октябрь" олгоградской области, . опытных хозяйствах ВНИИ мясного " скотоводства г.Оренбург). Калмыцкого НИИ мясного скотоводства' (т.Элиста), институ-а горного аивотноводства и земледелия (г.Троян Болгария) и подсобного озяйства "Маяк" Пермской области. ;

1.7. По материалам диссертации опубликовано 59 научных работ. 3 вторских свидетельства на изобретения.

1.8. Основные положения диссертация, выносимые на затиту: резуль-аты научных исследований, позволившие разработать-технологию транс-лантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Казахстана.

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 353 траницах машинописного текста, содержит 66 таблиц. " 21 рисунок. 17

Список литературы включает 308 источников, из них 210 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

Работа выполнена в 1983-1994 годах во Всероссийском научно-исс, довательском институте животноводства (ВИЖ), институте горного жив< новодства и земледелия (г.Троян, Болгария), в ГПЗ "Чапаезский" Ура ской области Казахстана, "Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" В( гоградской области. опытных хозяйствах ВНИИ мясного скотоводе-(г.Оренбург) и Калмыцкого ВНИИ мясного скотоводства (г.Элиста).

Научные исследования проводили на генетически ценном маточном головье крупного рогатого скота шести мясных пород: симментальск, герефорд. калмыцкая, салерс, абердино-ангусская и казахская белого, вая.

Подопытные животные были в условиях отгонно-пастбищного и стой во-пастбищного содержания, кормление их проводили по нормам и рацио ВИЖа.

Е экспериментах по изучению физиологических и технологичес особенностей воспроизведения мясного скота было использовано 568 ров. в р^зрасте от 2,5 до 12 лет и телок случного возраста высокой ных в племенном отношении. При изучении сезонности половой циклик влияния сезона отела на протекание послеотельного периода ректаль путем исследовали состояние матки, яичников и контролировали воспро всдительные функции организма в целом. В послеотельный период опре ляли среднюю продолжительность, сервис-период, стельность животного первого осеменения и индекс осеменения. Одновременно с этим изуч степень влияния совместного содержания коров-матерей и телят на во роизводательные функции самок по аналогичным показателям.

При различных вариантах содержания маточного поголовья (стой во-пастбшцное и отгонно-пастбищное) изучали полноценность уровня ко ления на воспроизводительные функции коров. Биохимические исследова проб крови проводили в лабораториях ВНИИ мясного скотоводства. Каля кого НИИ мясного скотоводства и ВИЖа по общепринятым методикам. Гор нальный фон у подопытных животных определяли в различные дни полое цикла радиоиммунологическим методом в соответствующих лаборатор ВНИИРГНС: и ВИЖа по утвержденным методикам.

При отработке критериев отбора доноров было использовано 459

эоизводства фирмы "Whatman".

При разработке оптимальных схем синхронизации охоты и индударова-■1Я полиовуляции было использовано 568 коров и телок.

Для синхронизации охоты у дампирующих животных использовали метод анократного или двукратного введения с интервалом 10-12 дней аналогов эостагландина F2-альфа: эстрофан (СПОФА), клопростенол (ИЕНАФАРМ). :грумат и суперфан отечественного производства в дозе 500 мкг по юпростенолу.

В анэстральный период,и при овариальной гипофункции использовали гстогены в' имплантатах. Имплантаты ("ЙНТЕРВЕТ") с 3 мг норгестомета золили под кожу уха на 9-10 дней при одновременном внутримышечном зедении 5 мг эстрадиолвалерата. При удалении имплантатов дополнитель-) вводили ГСЖК телкам - 500 И.Е., коровам - 600 И. Е.

При разработке различных схем индуцирования полиовуляции с по->щью экзогенных гонадотропинов.использовали препараты: ГСЖН (прегма-)Н "Дессау" в дозах 2000-2500 И.Е., фоллигон "Интервет" 3000-350С Е.). ФСГ "Бернс-Байотик" 42-50 мг, фоллитропин "Каунас" в дозах .00-1200 И.Е. Препараты вводили на 8-12 дни полового цикла. На пред-юдедний 4 или 5-дневной схеме обработки, животным вводили аналога юстагландина Fg-альфа в дозе 500 мкг по клопростенолу.

Искусственное осеменение коров и телок проводили свежеполученной замороженно-отгаянной спермой визо- и'ректоцервикальным способами с !етом одноразовой дозы спермы, места и кратности ее введения. Однора-вая доза спермы содержала 25, 50 и 75 млн. подвижных живчиков. При тественном осеменении доноров применяли ручную случку быками, пред-рительно проверив их спермопродукдаю.

Е экспериментах по нехирургическому извлечению и пересадке эмбри-ов было использовано 1023 коров и телок. При извлечении эмбрионов именяли четыре типа катетеров производства фирм: "Кассу". "Нойш-дт". ВИЖа и нашей разработки. Конструкцию устройств оценивали по одолжительноети технологических операций (подготовительный цикл, едение. извлечение прибора и заключительный цикл). процента извлека-ой промывной жидкости и эмбрионов и удобства в работе. . Поиск эмбрионов в промывной жидкости проводили по общепринятой тодике и путем фильтрации через специальное устройство, разработан-е нами.

Оценку качества эмбрионов перед пересадкой или замораживанием

зародышей. Пересадку эмбрионов осуществляли нехирургическим способе?.! помощью катетеров "Нойштадт-Айш", "Кассу" и конструкции ВИЖа.

В качестве реципиентов использовали коров и телок случного во: раста, регулярно циклирующих, с нормальным физиологическим развитие! клинически здоровых и не имеющих племенной ценности. Эмбрионы пересг живали на 7 или 8 день полового цикла, при наличии у реципиентов ai тиеного желтого тела на одном из яичников. В экспериментах по получг никГ двойневых отелов пересадку двух эмбрионов проводили в один или о( рога, подсадку одного эмбриона - в противоположный рог от желтого те; беременности.

Замораживание эмбрионов проводили на программных замораживателя; Р-204 (Англия), "Миникул" (Франция), ЗЭМ-З (Харьков. Украина) и мете дом "витрификации" без применения криогенного оборудования. В качест* криопротекторов использовали 1,0 М; 1,4 И растворы глицерина и 1,5 этиленгликоля. Насыщение эмбрионов криопротектором проводили по однос тупенчатой. трехступенчатой и четырехступенчатой схеме. Замораживав"] эмбрионов с помощью программных устройств проводили в автоматическс режиме: от +20° С до -7° С со скоростью 1° С в минуту, эквилибрация в т* чение 2-3 ' минут. от -7° до -36°С со скоростью 0,3° С в минуту, 20-; минут стабилизации при -36°С с последующим погружением и хранением жидком азоте. Замораживание эмбрионов по принципу "витрификации", пос ле плавного насыщения.их 5,6 М раствором глицерина или смесью криопрс текторов. состоящим из 2,8 М глицерина и 2,8 М 1,2-пропандиола, провс дили в парах жидкого азота. Эмбрионы оттаивали в водяной бане при те» пературах +20п и +37°с. Эффективность режимов замораживания и оттаивг ния оценивали по качеству оттаянных эмбрионов и их приживляемости not ле пересадки.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили i методике Меркуловой Е.К. (1970) с использованием компьютерной техник!

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.1. Физиологические и технологические особенности воспроизведения крупного рогатого скота мясных - пород.

Были изучены физиологические особенности воспроизводительш

ЛчтТ*ГГ71ТГ «ГГГ<-*ТТ/-Ь*1Л| гт/лшп nmntfiSAmnAfmr гчг- г г м ^ п плтглмпп Пллш

В результате проведенных исследований по изучению воспроизводите д,ных функций у 321 коровы установлено, что ь зимнее время, особенно в условиях отгонно-пастбшцного содержания, только у 16.555 животных проявлялись признаки спонтанной очотн и ректальный путем у большинства из них (30.2%) диагностировали атонию матки и гипофункцию яичников (табл.1).

Таблица 1

Состояние половой функции мясных коров по сезонам года

Показатели (п-%) Сезоны года

зима весна лето осень

Число коров 91 112 53 65

Проявили спонтанную охоту 15-16.5 96-85.7 33-62.3 49-75,4

Состояние матки:

атония 73-80.2 10- 8.9 - 2- 3,1

норма 18-19.8 56-50. о'. 45-84, 9 52-80,0

увеличенная регидность - 46-41,1 8-15.1 11-16,9

Средние размеры яичников ( ММ)

правый 5X4 16x20 15x10 15x11

левый 4X2 14X10 12X8 12X9

Средняя продолжительность

охоты (час) 8,9±0.75 И. 9±0.4 10,6+0,61 10.8+0.51

В конце марта у животных наблюдали более стабильные признаки половой циклики и в мае они достигали максимума в своем проявлении. Весной число ¡тавотных со спонтанной охотой достигало 85,755. В летнее время, особенно при высоких внешних температурах, половая активность животных несколько подавлялась и число коров с признаками спонтанной охоты снижалось до 62,3%. Видимо, летом коровы с трудом поддерживают нормальную температуру тела при термострессах, особенно при подсос« телят, что сказывается отрицательно на воспроизводительных возможностях животных. В осенний период, при балансированном кормлении воспроизводительные функции животных нормализуются. Более 755? коров проявляли признаки спонтанной охоты и у 8С% животных состояние матки и яичников было нормальным.

В последующей серии опытов на 339 новотельных коровах установлю-

од и воспроизводительные функции ¡тавотных в целом. При отеле коре весенний период продолжительность анэстрального периода достиг 99,0+3,03. а сервис-период Ю6±3,25 дней (табл.2). Если отелы прохс осенью, половая циклика коров восстанавливается через 37,4±1,53 дне сервис-период не превышает 48+1,96 дней. Стельность животных от пер го осеменения осенью достигала 68,7%, а индекс осеменения ра 1.4+0.15.

Таблица 2

Влияние сезона отела на послеотельный период и воспроизводительные функции коров.

Показатели Сезоны отела

зима весна лето осень

Отелилось коров (п) 96 116 62 65

Средняя продолжительность

послеотельного периода (да) 79. 8±2, 4 99.0+3,03 41.0+1.72 37,4±1.

Сервис-период (дн.) 90+3,03 106+3.25 58,0+2.43 48.0+1,

Стельность от первого

осеменения (%} 56. 9±5,05 50,4+4,64 54, 0±6, 33 68,7+5.

Индекс осеменения 1,9+0,14 2,4+0, 14 1.6+0, 16 1.4+0,

Особенностью технологии разведения мясного скота является с местное содержание коров-матерей и телят на подсосе.

Е. Convey и др.(1983) отмечают, что при совместном содержании ; ров и телят в значительной степени удлиняется послеотельный период.

В опытах по изучению влияния подсосного метода содержания теля' матерями на воспроизводительные функции самок нами установлено, ' совместное содержание коров и телят задерживает инволюцию матки и ■ самым удлиняет сервис-период, а также в значительной мере снижает ] зультаты оплодотворения и повышает индекс осеменения. В' группе коро] телятами на подсосе средняя продолжительность послеотельного период сервис-период достигают 96,0*2.47 и 104.0±2,67 дней соответствен) что в 1.5-2 раза больше, чем в группе коров без телят (табл.3). Сте, ность от первого осеменения коров первой группы не превышает 43.9%, индекс осеменения статистически выше (Р<0,001), чем в группе живоп без телят. По всей видимости причиной подобных] последствий являю'

воздействие на секрецию гонадотрошшх гормонов, что приводит к снижении воспроизводительных функций организма животного в целок.

Таблица 3

Влияние совместного содержания коров-матерей и телят на послеотельный период и воспроизводительные функции коров

Показатели

Коровы

с телятами

без телят

Число отелившихся коров (п) Средняя продолжительность послеотельного периода (п) Сервис-период (п) Стельность от первого осеменения (%)

Индекс осеменения

165

96,0±2, 47 104,0±2. 67

43,9

2,6±0,12

41,6±1,6 62,5±2.40

68,9

1. 7±0,15

(***)-Р<0.001

3.1.2. Критерии отбора коровьи.гелок доноров.

Путем целенаправленного отбора высокопродуктивных и генетически ценных животных с хорошими воспроизводительными функциями, способных реагировать полиовуляцией на введение экзогенных гонадотропинов и давать необходимое количество биологически полноценных эмбрионов, возможно б значительной степени повысить эффективность метода -^ансплан-тации.

Одним из первостепенных критериев отбора доноров является объективное определение их клинического состояния. Известно, что при различных формах эндометрита в очаге воспалительного процесса нарушается кровообращение и обмен веществ, в силу чего появляются физико-химические сдвиги, изменяется кислотно-щелочное равновесие, и повышается местный ацидоз. Учитывая этот фактор, мы применили метод определения рН содержимого полости матки как один из критериев отбора доноров и прогнозирования результатов гормонального вызывания полиовуляции"у животных.

величиной рН содержимого матки, ее клиническим состоянием, оплодотво-ряемостью яйцеклеток и качеством извлекаемых эмбрионов.

При рК в пределах 6,2-6,8 до 27,9% яйцеклеток остаются неоплодот-воренными, а число качественных эмбрионов не превышает 34,4% (табл.4).

Таблица 4

Влияние рН содержимого полости матки на оплодотворяемость

яйцеклеток и качество эмбрионов. г_.

Показатели рН содержимого матки

6,2-6,8 6,9-7.5 7,6 и более

Число доноров 30 39 21

Среднее число овуляций

на донора 7,8+0.47 7,1+0.38 8, 3+0,6

Получено в среднем на донора

эмбрионов и неоплодотворенных

яйцеклеток (п-%) 6,1+0.37 5,8+0,31 6, 4+0, 46

в т.ч. нормальных эмбрионов 2,1£0,26-34,4 4, 0+0.32-69.0 3,4±0,4-53,1

дегенерированных . 2,3±0,23-37,7 1, 0±0.16-17.2 1.1±0,23-17,2

неоплодотворенных

яйцеклеток .1,7+0,33-27,9 0. 8+0,14-13,8 1,9+0,3-29,7

При нейтральной среде полости матки (рН=6.9-7,5) получены максимальные результаты по выходу нормальных эмбрионов (4,0±0,32-69,0%)'', при этом число неоплодотворенных яйцеклеток (0,8±0.14-13,8%) было минимальным. При рН равном 7,6 и более, не установлено значительных колебаний по выходу нормальных и дегенерированных эмбрионов по сравнению с величиной рН полоста матки от 6,9' до 7.5.

Различные нарушения в условиях содержания и кормления отрицательно сказываются .на состоянии здоровья и воспроизводительных функциях иивотных. Учитывая это мы изучили основные биохимические показатели крови подопытных йивотных в различные периоды года для того, чтобы установить степень их влияния на результаты индуцирования полиовуляцщ и выход нормальных эмбрионов. . •-

...Результаты исследований биохимических показателей белкового, ли-гидного обмена каротина, витамина -"А" позволили установить, что ову-лнттапая пеакпия яичников и выход нормальных эмбрионов у животных с

;ителььо нормальным обменом (табл.5). У донэрсв с низким числом овуляций (от 2 до 10; 0-5; 2-8) биохимические показатели были достоверно ниже (■р<о,с 5), чем в группе животных с высоким уровнем пслиовуляаии (11-18; 6-12; Э-13).

Б зиккш"! период у доноров с числом овуляций от 11 до 18 по сравнению с животными, имеющими овуляции ст 2 до 11,■ содержалось в крови больше белка на 23.4л. альбуминов и фосфолипидоз на 15.5Т-, общих лкпи-дое - 24,6%, холестерина - 18.4%. триглицеридов, крис тшйнг. каротина и витамина "А" в 2 раза. В весенний период при минимальной (0-5) и максимальной (6-12) овуляции основные биохимические показатели у животных несколько сглажены, исключение составляет креатинин и каротин, цифровые величины которых, при овуляции ст 6 не в деь разе, болы-, чем при минимуме овуляций. В летний период наиболее значительные различия установлены по содержанию в крови триглшеркдов. крпоткнкка. ь-> лочной фосфотазы. каротина и витамина "А". При максимуме овуляций (Э-13) эти показатели были в 1,5-2 раза выше, чем при минимальном числе овуляций у животных. По остальным показателям эта разница не превышает 12-19%.

Гормональный Фон организма животного в различные функциональные стадии полового цикла отражает его полноценность протекания и может варьировать в определенных пределах. Изучив пределы этих колебаний возможно отбирать доноров только с гарантированной эмбриопродукцией. В связи с этим, нами был изучен гормональный фон подопытных животных путем определения в кроки прогестерона, эстрадиола и кортизола. г

Установлена достоверная зависимость между уровнем полиовуляиии. числом извлекаемых эмбрионов и гормональным фоном в крови доноре. При минимальном числе овуляций (0-3) и выходе эмбрионов в среднем на донора (до 3) концентрация прогестерона в крови не превышала 0.б±0,15 нг/мл, а 17ß эстрадиола - 11.85±0.74 пг/мл. что достоверно ниже (Р<0.01) по сравнению с другими группами подопытных животных (табл.6).

При уровне овуляции от 4 до 21 и выходе эмбрионов до 19 в среднем на донора концентрация прогестерона была в пределе от 2.15±0,26 до 2.89±0.34 нг/мл, а уровень 17f$ эстрадиола колебался 18,6+1,53 до 22,8*1.97 пг/мл. Содержание кортизола в крови доноров не отражало уровня овуляции и результатов извлечения эмбрионов, существующая разница по группам (от И.7340.66 до 12,67+0.75 нг/мл) была недостоверной (Р>0,5).

TavMut лппячг.м nvrou иъ\гиеы1ля rnnunun л^нпгл rtinufl тшвптныу япчмпж-

Таблица б

Биохимические показатели крови доноров по периодам года в связи с реакщ.-ей яичников на гонадотропин

гсааатеди Число овуляций по периодам года

ооенне-еимнии весенний летний

А * *

2-10 11-18 0-5 6-12 2-8 9-13

¡ций белок (г/Х) 8,4+0,51 7,9±0,93

ьбуиин 0.7110,05 0,8210,02

липиды (мг/Х) 240*11,6 299±10,3

ЗфОЛИПИДЫ 109+6,2 126±б,9

пестерин -"- 84,3±В,9 99,8+5,1

(Е\зшцериды 40,0+1,8 76,9±б,2

гагишш -"- 0,47+0,01 0,98±0,16

яочная фосфотаза 31,6+1,1 56,1+2,2

ратин 0,194+0,16 0,427+0,22

гамин "А" . 0,112+0,59 0,204±1,.6

(а) - Р<0,05

8,59+1,01 9,39±0,94 7,6±0,73 9,1±0,79

0,е4±0,59 0,70±0,71 0,73±0,83 0,98±0,09

221+10,9 241±13,6 237±16,7 285±11,0

103+5,8 131¿7,Б 112±7,7 128±6б9

82,9+7,1 85,6±5,1 88,5±7,0 97,б±4,3

39,5+1,0 45,8*1,0 45,0*1,1 77,1±0,60

0,49±0,05 0,81+0,12 0;4Б±0,12 0,90±0,1Б

30,9+1,6 38,0+1,0 32,8±1,Б Б5,6±1,9

0,136+0,25 0,288+0,52 0,217±1,62 0,349±1,1

0,111+0,62 0,120±0,95 0,110±0,96 0,19611,93

Таблица 6

Влияние гормонального фона крови коров-доноров на результаты полиовуляпии и извлечение эмбрионов

Я Число Число Число п/п коров овуля- извлечен-доноров ций ных эмбрионов

Гормоны

прогестерон (нг/мл)

эстраднол (пг/мл)-

кортизол - (нг/мл)

1 28 0-3 0- -3 0. 6±0.15 11.85+0,74 11,35+0,74

2 31 4-6 4- -5 2.1510.26 21,5+1.27 12,67+0.75

3 25 7-12 6- -12 2. 89±0. 34 22.8±1.97 12,18+0,8

4 16 13-21 13- -19 2,682:0, 41 18,6+1.53 . 11. 73±0.66

(**) - Р<0. 01

**

**

выход эмбрионов у доноров. Эти показатели возможно использовать как критерии при отборе животных-доноров.

Не менее важным фактором отбора доноров является определение оптимальных возрастных, пределов использования животных для полиовуляип:-:. По данному вопросу в литературе весьма противоречивые сведения. I.2с-паМэоп (1984) установил, что результаты извлечения эмбрионов не заносят от возраста доноров. В то же время 1.Кис1е1 и др. (1990) утвердит, что жизотных старше 15 лет невозможно использовать в качеств^ л > норов эмбрионов. „

Мы изучали возрастные особенности гормонального индуцирования из-лиовуляции у коров и телок доноров.

При гормональном вызывании полиовуляции с помощью экзогенных го-надотропинов у телок получены следующие результаты (табл.7).

Из числа обработанных животных 58.8% реагировали полиовуляцией и в среднем на донора получено 6,7±0.27 овуляций,5.4±0.22 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в т.ч. 3.1±0.12 нормальных зародышей. У коров от 3.6 до 9.5 лет среднее число овуляций на донора составило 8.1±0.27 и 4.4±0,15 качественных эмбрионов, что составляет 62,Ой от общего числа зародышей. В группе коров-первотелок в возрасте от 2.5 до 3,5 лет 54,2% животных реагировали полиовуляцией и в среднем на донора пппучйно 2.2±о.09 или 44.055 качественных эмбрионов. У коров старше 9,с

Таблица 7

...Возрастные особенности гормонального вызывания полиовуляции у коров и телок доноров.

Показатели Возрастные группы доноров (лет)

1 II III 1У ;

' темя

случного 2.5-3.5 3,8-9,5 9,6 и более

возраста-

Число доноров 68 59 96 27

Реагировали полиову-.

ляцией • 40 32 67 17

Процент от числа

обработанных 58.8 54,2 69,8 62. 9

Среднее число овуляций

на донора 6.740,27 7, 040,3 8.1±0.27 7.440. 47

Получено в среднем на

донора эмбрионов и не-

оплодотворенных »

яйцеклеток . 5.440,22 5.010,21 7,140,24 6. 540.41

в т.ч. нормальных

эмбрионов 3.140.12 2,2±0, 09 4,440,15 3.540.22

% 57.4 44.0 62.0 53. 8

дегенерированных 1, 0±0.12 1,640.16 1,640,13 0.940.18

% . 18.5 32.0 22.5 13.9

нео плодотворенных

яйцеклеток 1,340,14 1.240.14 1.140,11 2,140.18

% ' 24,1 24,0 15.5 32.3

третьей группой животных (3,550.22). при этом число неоплодотвореннщ яйцеклеток достигает 32,3%

Из приведенных данных следует, что оптимальный возраст коров для использования в.качестве доноров эмбрионов является от 3,6 до 9.5 лат. Телок мясных пород возможно использовать в качестве доноров эмбрионов.

п'п ппи нйтгптгичрп.кам и->п гририггм яяпппитрй ляжд л иапппкчлйянирм

3.1.3. синхронизация охоты у доноров и реципиентов.

Синхронизация охоты у крупного рогатого скота стимулирует воспроизводительные функции, особенно у телок, ускоряет наступление стельности и обеспечивает планирование работ по трансплантации эмбрионов. Точность синхронизации половых циклов доноров и реципиентов в значительной степени повышает результаты пересадок эмбрионов.

В сравнительных экспериментах по изучению эффективности-однократной и двукратной обработок коров и телок при синхронизации охоты использовали "клопростенол". "эструмат". "эстрофан" и "суперфан" в дозе 500 мкг по клопростенолу.

Наиболее высокие результаты по синхронизации охоты получены при однократной обработке подопытных животных эстрофаном. 85.735 из них пришли в охоту через 72 часа после введения препарата (табл.8). Не установлено достоверных различий в результатах синхронизации охоты у коров и телок с помощью эструмата и суперфана. От 71.8 до 78.055 животных реагировали на- введение препаратов через 72 часа после инъекции. Минимальные результаты по синхронизации охоты у коров и телок получены при использовании клопростенола. Только 64.3% животных пришли в"охоту и 35.1% доноров не проявили даже слабых признаков полового возбуждения.

Таблица 8

Синхронизация охоты у коров и телок доноров с помощью простагландинов. .

Показатели

Простагландин

клопростенол эструмат эстрофан суперфан

Обработано доноров 28 39 63 41 Число доноров с

признаками охоты 18 28 54 " 32

Процент от числа обработанных 64.349.05 71.847.2 85.744.41 78.046.47 в т.ч.пришли в охоту (п-Х)

через 48 часов 14-77.8 24-85.7 50-92.6 30-93.7

через 72 часа 4-22,2 4-14.3 4-7,4 2-,

Не проявили признаков

е

.^Аналогичные результаты по синхронизации охоты получены при двук-ахйой обработке -пивотных простагландинами в дозе 500 мкг. В акзст-ольннЛ период для синхронизации охоты у коров и телок доноров были спользованы гестогены и ГСЖК в сочетании с простагландинами.

Анализ полученных данных показал, что схема обработки коров и те-ок при синхронизации охоты путем подкожного введения имплантатов с 3 г норгестомета и одновременным инъецированием 5 мг эмтрадиолвалерата аиболее эффективна, 67,255 коров и 70,8% телок из числа обработанных ришли в охоту, из них более 60% имели признаки охоты уже через 48 ча-ов после введения простагландина (табл. 9). Использование имплантатов 6 мг норгестомета позволило вызвать охоту у 51,0% коров и 62.1% те-юк. При этом 49,0% коров и 37.9% телок не проявили признаков охоты :пустя 72 часа после обработки простагландином. При использовании ГСЖК ! сочетании с простагландином получены идентичные показатели по с'нх-юнизации охоты у коров и телок. 59.4 и 58,3% животных из числа ютанных были с признакамк^течки и рефлекса неподвижности. Из общего шсла обработанных более 40% животных не проявили охоту.

Таблица 9

Синхронизация охоты у коров и телок в анэстральный период

ipena- Группы Число Приш- Процент В т.ч. » Не пришли

заты живот- обра- ли в от чис- через в охоту

ных ботан- охо- ла об- 48 ч 72 ч (п-%)

ных рабо- (п-%) (п-%) живот- тангах ных

Норгзс- коровы 96 гомет телки 29

Яоргес-

томет коровы 58 эстра-

диол- телки 24 валерат

49 51.015,1 36-73,513,1 13-26,514,1 47-49,0+5,07 18 62,119,0 12-66,715,4 6-33.315,5 11-37,9+9,0

39 67.216.2 24-61,5+4,4 15-38.515.0 19-32.8+8,2 17 70.819,28 12-70.614,2 5-29/414.8 7-2S,2i9,28

пг> со ,г. ог 4*0 с R+-3 а яй_лп к+ft 1Я

- 21 -

4.2.1. Влияние схемы обработки и дозы гонадотропина на результаты полиовуляции и качество эмбрионов.

Индуцирование полиовулядаи является одним из основных моментов технологии трансплантации эмбрионов. Тем не менее до последнего времени не изучены в полной мере вопросы, связанныесгормональным вызыванием полиовуляции, особенно у мясного скота. Остается непредсказуемой реакция организма животного на введение экзогенных гонадотропинов. не ог ределены оптимальные дозы гормональных препаратов при инд: цировании полиовуляции, малоизучено влияние некоторых экзогенных и э» догенных факторов на результаты полиовуляции и качество доноров.

Таблица 10

Эффективность вызывания полиовуляции у коров и телок доноров ГСЖК в разных дозах.

Показатели прегмагон (И.Е.) фоллигон(И.Е.)

2000 2500 3000 3500

Обработано животных 48 93 76 54

Число доноров с поли-

овуляцией 32 57 ' 43 " 38

Процент от числа

обработанных . 66,7 61.3 56,6 ' 70.4

Среднее число овуляций

на донора 5, 440,32 - 6.140,26 5.840, 29 6. 1+0.32

Получено в среднем на

донора эмбрионов и «

неоплодотворенных

яйцеклеток 5,1+0. 30 4.940.21 5.340,27 4,6+0.25

в т.ч. нормальных *«*

эмбрионов 3.940.23 2,740.12 ,4.240.21 2.' 9+0.16

% 76.5 г 55.1 79.3 63,0

дегенерированных 0.5+0,15 0,840.10 0.640.10 1.4+0.19

% 9.8 16.3 11.3 30.5

неоплодотворенных

яйцеклеток 0, 7+0,10 1.440,12 0.540.10 0,340.09

% 13,7 28,6 9.4 6,5

(*«»)-р<0,001

:~ку « усовершенствование схем.гормонального индуцирования полиовуля-iiiîi ^Готггимизацию доз современных препаратов, используемых при этом.

По результатам экспериментов установлено, что применение прегма-:она в дозе 2000 И. Е. обеспечивало полиовуляцию у 66.7% животны: (табл.Ю).

При среднем числе овуляций 5.440,32 на донора, получено 5.1+0, эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 3.940.23 нор яальнкх эмбрионов или 76,5% от числа извлечений. При увеличении дозь препарата до 2500 И.Е. эти показатели заметно снижаются. В среднем н,-лонора получено 4,940,21 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, и; них только 2.7+0.12 были морфологически нормальными эмбрионами. Числе дегенерированных эмбрионов достигает 16.3%, а число неоплодотворенньв яйцеклеток - 28.6%.

Использование фоллигона в дозе 3000 И. Е. при сравнительно м-числе животных, реагирующих суперовуляцией (56,6%), позволило п". "л в среднем на донора 5.340.27 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, из этого числа 4,240,21 или 79,3% зародышей по морфологической оценке были жизнеспособными.

При введении 3500 И.Е. фоллигона выход нормальных эмбрионов снижался яо 2.540.16. а число дегенерированных зародышей достигало 30.5%.

Из приведенных данных следует, что оптимальными дезами для гормональных препаратов прегмагон и фоллигон являются 2000 и 3000 И.Е.. т.к. при этом достоверно увеличивается число нормальных эмбрюно! (Р<0,001). а выход дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток минимален. Применение ФСГ в суммарной дозе 42 мг обеспечил! множественную овуляцию у 75,0% животных, (табл.11).

При среднем числе овуляций 5.940,24 получено на донора 5,340,2; эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, из них 3,7+0,15 или 69,8; были морфологически нормальными эмбрионами. Увеличение дозы ФСГ до 5( мг позволило получить на донора 5,940,30 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 3,540,18 были нормальными эмбрионами. При этом повышение дозы препарата достоверно увеличивало число дегенерированных эмбрионов до 22% (Р<0,05).

При использовании гормонального препарата фоллитропин в суммарной дозе 1100 И.Е. из 71 обработанного животного 64.8% реагировали полиовуляцией. В среднем на донора получено 6,440.31 овуляций и 4.840.23 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. - Средний выхед нормальных ^..й^ппплг, - г.п ллл^щщ *3 «+п 10 ыгн 7R П ж от числа изв-

Таблица 11

Я^е.-огивкость вызывания яолюбуйяшк У коров к телок доноров ;■ помощью ФСГ.

Показатели

4?

Суммарная доза <?СГ (мг) 1>оллитрспина (И. Е.

50 1Ю0 1200

]?раоотано хлеотныу: 34 Число доноров с ^слиовуляиней 62

Процент ст числа обработанных 75.ь

Гролне? число овуляций л£ гонора 5,9+0,24

Ло:'Л'гн: з среднем на лснора эмбрионов и не-оплодотвореккых яйцеклеток 5.3±0,22 б г. ч. нормальных эмбрионов 3.7+0.15 £ 69.8

59 41

69,5

71 46

64. 6

с.8*0.35 6.4+С.31

65' 45

65, 2 7, 1*0.34

5.9x0.30 4.8*0,23 6,2+0,30

3,5*0,18 3,6*0,18 4,0+0.2 59.3 75.0 , 64.5

дегенерирванных

н/яйцеклетки -

%

0.8*0, И

15.1 0,8*0, И 15,1

(*)-Р<С.05

•1,3*0. 19 0, 6*0.И 1.4*0 18

22.0 12,5 22,6

1,1+0.17 0,6*0.11 0,3*0*13 18,7 12.5 12.9

*

легск не превышал 12,5^. Применение препаратов в суммарной дозе 1200 И. Е. незначительно увеличило число животных, реагирующих полнсвуляциеи и среднее число овуляций на донсра, ко число дегенерированных эмбрионов увеличилось до 22.6Х.

4.2.2 Полиовуляторная реакция доноров различных пород.

Известно, что животные различных пород обладают различной генети-

изучению отвётъап реакции мясного скота на введение гормональных щ> 'паратозлмеет научное и- практическое значение.

. В коде эксперимента на коровах симментальской, калмыцкой, гер форд, казахской белоголовой и абердин-ангусской пород установлено. ч от 64,3 до 69.2% доноров от числа обработанных, имели 3 и более овул ций на яичниках (табл. 12). В группе коров калмыцкой породы среди число овуляций'на донора (7.140.39) было несколько ниже по сравнений

Таблица 12

Результаты гормонального вызывания полиовуляции у доноров различных пород.

Показатели

Порода коров-доноров

симмент. калмыцк. герефорд казахск. абер.

белогол. акгу

Обработано животных -Число доноров с полиовуляцией Процент от числа ,. обработанных Среднее число овуляций на донора

Получено в среднем на донора эмбрионов и н/яйцеклеток в 'т. ч. нормальных • эмбрионов '

дегенерированных -

"29 56 34 87

20 36 23 60

69.0 64.3 67.6 6§,0 8.640.63 7.140.39 8.940.61 8.840.37

39 27

69.2 10,040.64

6.140.45 6.940,38 7,340.5 7.140.3 9,040,58

4.940.

80.3 1.040.

16.4

• н/яйцеклеток

0.240, 3.3

(»)- РС0.С5

3 3.140,22 3.340.23 .3.540.15 4; 940.31 44.9 45.2 49.3 54.4 27 1,140.17 1.940.29 2.040.18 1.540.23

16.0 26.0 28.2 16.7

* *

17 2.740.22 2.14063 1.640.16 2.640.32 . 39,1 28.8 : 22.5 28,9

остальными животными. Наиболее высокий показатель по числ^ выхода н<

-агтншк. грушами доноров в 1,5-2 раза больше. У доноров абэрдин-ан-гусской порода отмечена тенденция к увеличению числа нормальных эмбрионов.

В группе доноров калмыцкой и абердино-ангусской пород число неоп-лодотЕзренных яйцеклеток достигало 39.12 и 28.955. что достоверно выше, чем у остальных животных (Р<0,05). Вероятнее всего это можно объяснит] тем. что животные выше указанных пород имеют легко возбудимый ти) нервной системы, что приводит во время осеменения к стрессу и сниженл оплодотворяемости яйцеклеток.

. 4.2.3. Влияние сезонного фактора на результаты полиовуляции

и качественный состав эмбрионов.

Одной из биологических особенностей крупного рогатого скота мяс ных пород является выраженная сезонность размножения. Вариабильност показателей гормонального индуцирования полиовуляшш и результате эмбриопересадок в течение года являются сдерживающими фактором?! ен-л рения метода трансплантации эмбрионов в практику мясного скотоводства

Анализируя экспериментальные данные по гормональному вкзывани полиовуляшш у 242 коров и телок доноров получено, что при срабнитель но одинаковом числе животных с полиовуляцией, показатели выхода нор малькых эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток в среднем на донор различны (табл.13).

Наибольшее число нормальных эмбрионов получено осенью. При сред нем числе овуляций на донора 7, ою.34 получено 4,510,22 качественны эмбрионов или 75,ОЖ от числа извлечений. Разница по числу извлечении эмбрионов, полученных осенью достоверно выше по сравнению с весне (РС0.05). В зимнее время, когда у большинства животных несколько енл жена половая функция, возникают сложности в отборе и осеменении доне ров. что приводит к увеличению числа неоплодотворенных яйцеклеток <; 22.9*). В весенний период года активизируется половая функция у живот ных. В этот период среднее число овуляций на донора достигав 8.310.37. что достоверно выше по сравнению с осенне-зимним и летниь периодами (Р<0.01). однако, выход нормальных эмбрионов составил не бс лее 48.IX, а число дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных я! цеклеток достигает 31.5 и 20.45?.

Наиболее высокая прихивляеиость эмбрионов получена в осенне-зт

Глблина '£

Величина индуцированной попяовулшш у доноров и приживляемости эмбрионов'по сезонам года.

Показатели Сезон го. да

зима весна лето осень

Обработано животных 48 -о : О 49 3"

Число доноров с

полиовуляцией 31 56 33 47

Процент от числа

обработанных 64,6 71.8 67, 3 70. 1

Среднее число овуляций Ж *

на донора 6,4*0,32 8,3*0.37 6. 9*0. 4

Получено в среднем на

донора эмбрионов и

н/яйцеклеток 3. 1*0,3 5, 4*0,28 5.3*0,3 е-. о*с, 2?

в т.ч. нормальных *

эмбрионов 4.0*0.28 2,6*0,22 3, 9*0, 23 4. 5г0,

% 65,6 48, 1 ■7*2 г 75,0

дегенерированных 0.7*0,15 .1,7*0, 17 0, 9*о. 60 .; '*0 15

% 11. 5 •■'31. 5 17,0 16.7

н/яйцеклетки 1,4*0, 14 1.1*0,19 0, 5*0,21 0.5*0, 10

% 22,9 20, 4 9.4 8,3'

Число реципиентов 89 64 75 112

Пересажено эмбрионов 89 71 79 115

Стельных реципиентов" 38 20 21 58

Процент стельнисти 42,7 31,3 28,0 5i.fi

(*>- Р<0,05: {**) - Р<0, 01

живляемость эмбрионов составила 31,3%, в летний период этот показател не превышал 28.0%. Низкая приживляемость эмбрионов в летний перио, объясняется преобладанием высокой температуры внешей среды и ограни ченностью травостоя на пастбищах, что характерно для зон мясного око товодства России и Казахстана.

- 27 -

4.2.4. Влияние совместного содержания коров-матерей и телят на результаты лолиовуляэди.

Совместное содержание коров-матерей и телят на подсосе является дной из особенностей технологии мясного скотоводства, .которое увели-ивает продолжительность послеотельного периода, сервис-период и сни-зет оплодотворяемость маток.

В опыте использованы коровы с продолжительностью подсоса до 3 ме-яцев, от 3 до 5 и более 5 месяцев. Контролем служила группа коров без елят. Во всех группах возраст доноров был одинаковым, а возраст телят г 2,5 до 6 месяцев.

Установлено, что животные с телятами ка подсосе по всем показате-

Таблша 14

Влияние подсоса на результата гормонального вызывания полиовуляции у коров.

Показатели Без телят Продолжительность подсоса

(контроль) (мес.)

до 3-х - 3-5 . более 5

Сработано животных 48 исло доноров с

олиовуляиией 40 роцент от числа

бработанных 83.3 реднее число овуляций * а донора . 10,240,64 олучено в среднем а донора эмбрионов не оплодотворенных

йцеклеток 6.3±0,34

в т.ч. нормальных ***

эмбрионов 4,940.23

% 77,8

дегенерированных о, 640.18

% 9.5 неоплодотворенных

яйцеклеток 0,8±0,14

% 12.7

56 62 74

37 44 50

66 Г1 71,0 67,6

7.140,72 6,8+0.45 ¿.42:0.45

5,740.71 ' 5,940,45 6.440.59

3,140.62 3,640,35 3,6+0.40

54.4 61,0 56,3

1.440,19 1.040,54 1,340,93

24,6 17,0 20.3

1.240,21 1,340,21 1.540.45

21.0 22.0 23.4

ям явно уступали контрольной группе коров без телят (табл.14). ■ Тзтруппе коров без телят среднее число овуляций составило 10.2x0.64, а выход нормальных эмбрионов равен 4,9±0,23 или 77,8% от общего числа извлеченных зародышей, что достоверно выше, по сравнению с другими'группами подопытных животных (Р<0.05: Р<0,001).

Продолжительность подсоса на момент индуцирования полиовуляции не оказывает заметного влияния на конечные результаты. При подсосе от 3 до 5 и более месяцев среднее число овуляций на донора было в пределе от 6,4+0,45 до 7,1±0,72, а выход нормальных эмбрионов не превышал 3,6±0,35 или 61,0% от числа извлечений.

С целью преодоления отрицательного воздействия подсоса на воспроизводительные функции животных был применен кратковременный отъем телят на 6.12,24 и 48 часов перед началом гормональных обработок и осеменением доноров в индуцированную охоту.

По результатам эксперимента установлено, что отъем телят от ■ рей на 6 и 12 часов не оказывает заметного положительного влияния на результаты индуцирования полиовуляции и качественный состав извлеченных эмбрионов (табл.15).

В среднем на донора получено 6,6-6.9 овуляций, а выход качественных эмбрионов не превышал 3,7+0,32. При отъеме телят на 24 и 48 часов достоверно увеличивается среднее число овуляций (до 9, $10,64) и выход нормальных эмбрионов (5,7±0,47) на донора (Р<0,05; Р<0,001). По-видимому. даже кратковременный отъем телят на 24 и 48 часов стабилизирует содержание ЛГ в крови коров-доноров й ограничивает действие гормонов, выделяющихся при сосании вымени. Однако отъем телят на 48 часов отрицательно сказывается на их клиническом состоянии, более 70% из них переболели расстройством желудочно-кишечного тракта.

Таким образом, для уменьшения отрицательного влияния подсоса на репродуктивную функцию коров достаточно использовать 24 часовой отъем телят перед началом гормональных обработок и осеменением доноров, что позволит увеличить результаты гормонального индуцирования полиовуляции и выход нормальных эмбрионов у доноров без отрицательных последствий для молодняка.

Таблица 15

Результаты индуцирования полиовуляции у коров при регламентарозанном подсосе

Показатели

Коровы постоянно с телятами 6

Время отъема телят (час) 12 24 48

5работано животных 36 49

ясло доноров с

злиозуляцией 24 34

эоцент от числа

5работанных 66,7 69.4

эеднее число овуляций з донора 6,440,45 6.640.52

элучено в среднем а донора эмбрионов не оплодотворенных

йцеклеток 5,340,32 6,540,39

в т.ч. нормальных

эмбрионов 3.140.36 3.140,53 % 58.5 . 47,7

де.генерированных 0,440.30 1.040,24

' % 7,5 15,4

неоплодотворенных

яйцеклеток 1,840.14 2,440.22 % 34,0 36,9

(*)- Р<0,05; (***)-

19 14

12

9

17 14

73.7 75.0 82.3 * «

6,940. 45 9.840.64 8. 940.82

6,840.41. 8.840,37 7,6±0.25

- ' *** ***

3, 740. 32 . 5. 440.47 5.740.43

54.4 . 61.4 75.0 1.840,19 1.540,42 1.¿40,21

26.5 17.0 14,5

1.340,17 1,940,28 0.8±0,23

19.1 . 21,6 ''10,5 Р<0.001

4.2.5.- Осеменение коров и телок доноров в индуцированную охоту при.полиовуляции.

Результаты извлечения и качественный состав эмбрионов, полученных

Оптимальные сроки и кратность осеменения, количество и качествек-чый"~2остаа, спермиев. место»введений спермиев в половые пути самок являются главенствующими факторами, определяющими результата оплодотворения яйцеклеток и качество эмбрионов у доноров.

В связи с этим наш последующие исследования были посвящены решению задач по оптимизации технологических приемов осеменения доноров £ индуцированную охоту с целью повышения результативности полиовуляции I метода трансплантации эмбрионов в целом.

По результатам исследований установлено, что способ осеменение доноров при полиовулящш существенным образом влияет на результаты оплодотворения, и качество извлекаемых зародышей (табл.16). При визоцер-викальном способе осеменения, когда одноразовая доза спермы вводится £ лучшем случае за вторую складку шейки матки, оплодотворяемость яйцек-

Таблица 16

Влияние способа и кратности осеменения доноров на результаты извлечения эмбрионов.

Показатели

Виэо-цервикальный Ректо-цервикальньй

Кратность осеменения 1 2 1 2

Число коров (п-258) Число овуляций на донора

Получено эмбрионов и н/яйцеклеток на донора

в т.ч. нормальных эмбрионов

%

дегенерированных

55

неоплодотворенных

яйцеклеток %

Оплодотворяемость яйцеклеток ,

30

8.010,48

2.6+0.29

36.6 1.6±0,23 22.5

2.910.31 40.9

59.1

59

9.310,44

7,110.43 8.9Ю. 42

3. НО. 18

34.8 2.310.22

25.9

3.510,22 39.3

60.7

121 48

8,310.25 8.410.4

7.710.23 ***

4.610.11 59.7 2.010.15 26. О*

1.110,1 14.3

85.7

83.7

1еток не превышает 60,7%, а выход качественных эмбрионов находится в феделе 34,8-36,6%. При ректоцервикальном способе осеменения, когда )беспечивается глубокое введение спермы в половые пути самки, оплодот-зоряемость яйцеклеток достигает 85,7%, а выход качественных эмбрионов -60%, что достоверно выше, чем при осеменении доноров визоцервикальным шособом (Р<0,001).

Установлено, что при осеменении доноров в индуцированную охоту даоразовой дозой спермы с содержанием не менее 50 млн. подвижных жив-дасов оплодотворяемость яйцеклеток достигает 84,756. а-выход-нормальных эмбрионов равен 71,2%. При снижении числа подвижных живчиков в одноразовой дозе спермы до 25 млн. оплодотворяемость яйцеклеток снижается до 53,3%, а выход неоплодотворенных яйцеклеток достоверно увеличивается но 46,735.

Увеличение числа активных живчиков до 75 млн. в одноразовой дозе зпермы не влияет на выход качественных эмбрионов.

Следовательно при индуцированной полиовуляции ректо-цервикальное осеменение животных одноразовой дозой равной -5,0 млн. ■ подвижных живчиков обеспечивает до 85,7Ж оплодотворяемости яйцеклеток и выход качественных эмбрионов 4,8±0.2 на донора. При этом следует отметить, что бо-иее высокие показатели по оплодотворяемости яйцеклеток достигается при эсеменении доноров в рог матки, выход качественных эмбрионов достигает 1,9±0.26 в среднем на донора.

Вариабельность оплодотворяемости яйцеклеток в индуцированную охо-гу зависит от многих факторов, в том числе от типа нервной системы жи-зотных-доноров. Стрессовые ситуации, возникаемые. при искусственном0 эсеменении, приводят К "снижению оплодотворяемости яйцеклеток, цробеннс / животных с повышенной возбудимостью. ■

На двух породах мясного скота; калмыцкая и казахская белоголовая, противоположных по типу нервной системы, были проведены исследования но изучению оплодотворяемости доноров при искусственном и естественном эсеменении. Искусственное осеменение проводили ректоцервикальным способом с помощью одноразовых инструментов, естественное -изменение доноров осуществляли быком ручной случкой.

В группе коров калмыцкой порода при искусственном осеменении в среднем на донора получено 3.0±0.09 нормальных эмбрионов, что составляет 32,6% от числа извлечений и общая оплодотворяемость яйцеклеток не превышала 59.8% (табл.17).

■уюдотворяемость яйцеклеток достигала 78.4%.

доноров калмыцкой породы при естественном осеменении, когда стрессовые ситуации сведены до минимума, оплодотворяемость яйцеклеток возрастала до 76.2%. а выход нормальных эмбрионов - 4,7+0.24 или 56,055 от общего числа извлеченных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, что на 23,4Я больше, чем в группе доноров аналогичной породы при искусственном осеменении и эта разница достоверна ( Р<0,01).

Таблица 17

Сравнительная оплодотворяемость доноров"при искусственном и естественном осеменении.

Показатели Осеменение

Искусственное Естественное-

Порода доноров

калмыцкая казахская калмыцкая казахская белоголовая белоголовая

Число доноров 151 107 42 в 54

Среднее число ову-

ляций на донора 9.240.25 8,640,25 . 8.140.41 9,640,43

Получено эмбрионов

и н/яйцеклеток на

донора 9.240,25 7,440,25 8.440,43 9.240,41

в т.ч. нормальных «*

эмбрионов 3, 040.09 4.140,12 4.740.24 - . 5; 140,23

% 32,6 55,4 56,0 55,4

дегенерированных, 2,540.13 1.740.13 1.740.20 2,140,20

% 27.2 23.0 20.2 22.8

н/яйцеклеток 3.740.15 1,640,13 2,040,22 * 2,040.19

% 40,2 21,6 23,8 21,8

Оплодотворяемость

яйцеклеток (%) 59.8 78.4 76.2 78,2

(**)- Р<0,01

- 33 -

5.3.1. Нехирургическое извлечение, поиск, оценка качества и пересадка эмбрионов.

Биотехнологический метод нехирургического извлечения эмбрионов >лжен быть простым, надежным и эффективным при работе как в стациона-} животноводческих ферм, так и в полевых условиях отгонного животно-щства. Кроме того, он должен быть безопасным для здоровья животных, тем. чтобы многократно использовать их в качестве доноров эмбрионов.

Большинство приборов, ранее разработанных, предназначены для не-¡р:~)гического извлечения эмбрионов у молочного скота. Существующие шологические и анатомические особенности органов воспроизведения юного скота послужили основанием для разработки специального прибор-катетера для нехирургического извлечения эмбрионов у мясных коров и ?лок. В результате длительных поисковых исследований разработан экс-

Таблица 18

Результаты нехирургического извлечения эмбрионов катетерами различных конструкций.

Показатели Типы катетеров

"Кассу" "Нсйштадт-Айш" ВИЖ Опытный

образец

юло доноров 53

зелено среды в оба

)га (%) 100

¡влечено среды от коли-

зства введенной (%) 90,1

зеднее число овуляций

1 донора 8.9±0,40

звлеченс эмбрионов и

'яйцеклеток в среднем

1 донора 6,4±0,29

зоцент извлечений

г числа овуляций 71.9

мучено нормальных

лбрионов в среднем

1 донора. 2,9±0,23

процентах от общего

77 100 96,3 8,8±0,33

46 74

100 100 95,1 98,9

8,0+0,39 7,7±0,3

7.2+0.27 7,5+0.36 7.4+0.28 81.8 .93,7 96,1

3,4+0.13 3,3±0.16 4,2±0,16

.терлмзнтзлькый вариант устройства для нехирургичесхого извлечения эмб-ЬчГпЗЕ--?. коров :: телок мясных пород (авторское свидетельство Ш62$14).

В сравнительных исследованиях по нехирургическому извлечению эмб-рпснсв у д-/-:орсв катетерами фирм Кассу. Нойштадт-Айш. 31Ш и опытного соразца установлено, что эффективность извлечения эмбрионов с помоиьк устройства /катетзра / опытного образца в силу своих коиотруктив-нн:< ссосенностей составила 96,от общего числа овуляций, что на 24. £5 оольле, чем при извлечении катетером Кассу (табл. 18).

Г пскоаью опытного образца получено в среднем на донора ?.4Ю.2£ э:г;.р;::нс5 л неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 4,210,16 качественных эмбрлоноЕ, что значительно выше по сравнению с остальными груп-

Следухщлм важным этапом технологии трансплантации является полег и г^нк^ качества эмбрионов.

ссычио поиск эмбрионов проводят путем предварительного .ьз-ния промывной жидкости в термостате при температуре +37° С в тьче.-::»;: 20 минут, удаления с помощью сифона верхней части жидкости, а исследуя оставшуюся часть (до 100 мл) под бинокулярной лупой при 20-кратном узеллченл;:. Общие затраты времени на поиск эмбрионов составляют 45-50

Разработанный нами принципиально новый по конструкции вариант устройства для фильтрации эмбрионов крупного рогатого скота ('авт. свид. N1655486) позволяет исключить такие непроизводительные операции технологии как отстаивание промывкой жидкости и ее отсасывание сифоном. В итоге общие затраты времени на операции по обнаружению змб-рлонсБ сократились на 36,7 кинут.

При 156 овуляциях получено 151 эмбрионов и неоплодотворенных яй-пеклэток. что составляет 96,8%. в контрольной группе извлекаемость зародышей достигала лишь 83.8%.

Таким образом наряду с положительными технологическими качествами, применение разработанного фильтра сокращает поиск эмбрионов в 4 раза по сравнению с общепринятой методикой, обеспечивает максимальное извлечение зародышей из промывной жидкости.

Оценка качества эмбрионов является последующим этапом технологии трансплантации.

Наблюдаются широкие вариации качества эмбрионов не только у разных доноров, но даже у одного и того же. При этом отмечаются существенные различия морфологического состава змбоионов у лонооов оазличных

. Поэтому в наших исследованиях были изучены морфологические и био-оцнческие особенности эмбрионов, полученных от коров и телок мясных ород с полновуляцией.

По результатам нехирургического извлечения у коров и телок доно-ов мясных пород получено, что из общего числа 766 эмбрионов я яйцек-еток 70,4% были нормальные, 17,1% - дегенерированные и 12.5% - неоп-одоте ; ?нные яйцеклетки.У телок-доноров по сравнению с коровами было еньше нормальных эмбрионов и больше неоплодотворенных яйцеклеток

Наблюдаются некоторые различия в скорости развития одновозраст-ых эмбрионов у доноров разных пород. У мясных доноров на седьмой день ндуцированного цикла поздние морулы, от общего числа извлеченных за-юдашей, составляют 65,8%, в тоже время, у полочного скота этот пока-атель не превышает 36,0%. У мясного скота на стадии ранней морулы ¡аблюдается достоверно низкий процент (23,8±4.2) эмбрионов хорошего ;ачества (Р<0,001) и относительно высокое число удовлетворительных ¡ародышей (66,7+7,19) (Р<0,01). Более поздние стадии характеризуются шстоверным увеличением числа эмбрионов высокого качества и снижением тела удовлетворительных зародышей (Р<0,01). .

Следует отметить, что эмбрионы на стадии морулы имеют более рихтую структуру, связь между бластомерами заметно ослаблена.

5.3.2. Применение метода трансплантации эмбрионов с целью получения двойневости.

Большинство исследователей пришло к единому мнению, что наиболее зезультатавный метод получения двоен является пересадка двух эмбрионов дли подсадка зародышей ранее осемененным животным. Но проблема получения двойневых отелов, имеющее особое значение в мясном скотоводстве не решена в полной мере.

В исследованиях по разработке оптимальных вариантов получения двойневых отелов коровам и телкам реципиентам проводили подсадку эмбриона, пересадку двух эмбрионов ипсилатеряльно, контрлатерально и билатерально. при этом учитывали процент стельности реципиентов, число двойневых абортов и отелов, продолжительность послертельного периода и последующую'оплодотворяемость животных.

При пересадке одного эмбриона ранее осемененным тавотным было.получено 56,9±7,36 процентов стельности, а число двойневых отелов гало 75.0410,8%. что достоверно выше, чем по остальным г*-"

- Зь

Таблица 19

Результаты получения двойневости путем пересадки или подсадки эмбрионов

Показатели "Подсадка I эмбриона Пересадка 2-х эмбрионов в один рог по одному в оба рс;

Число реципиентов 51 98 130

Пересажено эмбрионов 51 196 260

Стельных реципиентов 29 * * 41 51

Процент стельности 56,917,36 41,8410,1 39.247,11

Число двойневых абортов 1 10 2

% 3, 544.42 24,449,49 3, 945. 04

Из числа стельных реци-

пиентов отелилось 28 31 49

Число двойневых отелов 21 13 29

Процент дзойкевости 75,0410,8 42, 0±16,6 59. 249, 3

(**)- Р<0,01; (*) - Р<0,05

Трансплантирование двух эмбрионов в один рог увеличивало числе абортов до 24.449.49, а процент двойневых отелов не превышал 42,0±16.56. По-видимому, это связано прежде всего с тем, что рог матки коровы или телки не в состоянии обеспечить условия развития двух эмбрионов. что и приводит к абортам. При пересадке по одному эмбриону в оба рога процент стельности снижается до 39,2i7.il, что вероятнее всего происходит по причине повышенной возможности заноса инфекции и травмирования половых путей самок, приводящих к гибели эмбрионов.

Таким образом, . пересадка эмбрионов ранее осемененным животным позволяет увеличить стельность более чем на 15%, а число двойневых отелов до 75%. Вероятность перегулов за счет осемененных животных снижается до минимума.

При изучении влияния двойневых отелов на репродуктигаые функции коров-матерей и сохранность молодняка нами установлено, что в груше животных при отеле двойней число абортов и задержания последов было в 1.5-2 раза ¿больше по сравнению с животными отелившимся одинцом (табл. 20}. >

Таблица 20

Репродуктивные функции реципиентов после отела двойней и сдинцом.

Показатели Отелы двойней одинцом

Число стельных животных (п) 63 54

Число абортов (п-%) 8- -12, 7+5.68 3- -5. 6+3,13

Число отелов (п-%) 55- -87, 3+5.68 51- -94,443.13

Задержание последа (п-%) 11- -20,0+7,52 5- -9. 8+4,52

Получено телят (п) 110 51

из них мертворожденных(п -%) 7- -6,4+3.32 3- -5,9+2.71

Пало телят (п-%) 6- -5. 8+3, 02 2- -4Л+2,78

Сохранность телят (п-%) 97- -88,2+4,28 46- -90. 2+3, 67

Средний выход телят на *

I корову (п) 1,5+0.21 0. 8+0.12

(*)-Р<0. 05

Такие показатели, как процент падежа и сохранности телят в обоих группах были практически одинаковыми. Но основной показатель как средний выход телят на одну корову в первой группе подопытных животных был

Таблица 21

Воспроизводительные функции коров после отела двойней и одинцом.

Показатели

Отелы

двойней

одинцом

Число животных (п) Средняя продолжительность инволюции матки (дн) Наступление первой охоты после отела (дн) Оплодотворяемость от 1-го осеменения (35)

63

59.543,42 78.044,48 51.248,7

54

57.142,12 62.542,81 58,646, Т-

-гена 0,7 теленка .вынз. чем зо второй групш при отеле одикцсм и эта ра 'ница б~ла достоверной. (Р<0,05).

Вместе с этим средняя продолжительность инволюции матки у кор после отела двойней и оданцом практически не отличалась, но время да тушения первой охоты после отела в первой группе животных было бол продолжительным, чем во второй (табл.21). Показатели оплодотворяемое от 1-го осеменения и индекс осеменения в обеих группах животные бы равнозначными.

6.4.1. Резимы подготовки, замораживания и оттаивания эмбрионоз, их пркзивляеыостьТ

Технология криоконсервирования биологических" объектов требу строго определенных режимов подготовки замораживания и оттаивания. П; отклонениях или неправильно подобранных режимах как правило, отмечае ся нарушение морфологических качеств зародышей.

В исследованиях по криоконсервированию эмбрионов наш были сдел ны попытки оптимизации вариантов подготовки и замораживания зародыш мясных пород, т.к. большинство из существующих режимов были разработ; ны для эмбрионов молочного скота.

В результате проведенных исследований установлено, что четыре: ступенчатое насыщение 1.0 и 1.4 молярными растворами глицерина являв' ся наиболее оптимальным для эмбрионов мясного скота, что позволяет п; лучить высокие результаты качества зародышей после оттаивания. Из чи< ла замороженных и оттаянных эмбрионов от 7Э.7 до 82,3% зародышей бы; морфологически нормальными. При одноступенчатом насыщении эмбрионе 1,4 М глицерином снижается число нормальных эмбрионов после оттаиваш на 14,2%. В этом же эксперименте установлено, что криозащитные свойс тва этиленгликоля для эмбрионов мясного скота недостаточны по всей в{ дикости в силу своих химических свойств. Разница по числу нормально эмбрионов, обработанных глицерином и этиленгликолем. составляет 185 что вполне достоверно <Р<0,05).

Экспериментальным путем установлено, что конечная температура о> лаждения эмбрионов перед погружением их в жидкий азот, не оказывае существенного влияния на качество и приживляемость зародышей. При-дос тижении температуры -20°, -36° и -60°С с помощью замораживающих усп ройств и последующего хранения их в жидком''азоте после оттаиваш 69,0%; 71.8%} и 70,эмбрионов были морфологически нормальными. Пос/

- 39 -

эмбрионов составила'43.1; 38.4 и 45,655 соответственно.

* Аналогичные результаты по числу нормальных эмбрионов после оттаивания и их приживляемости получены при бистром методе замораживания зародышей в парах жидкого азота. Из 99 замороженных и оттаянных эмбрионов 69,75? были морфологически нормальными. После нехирургической пересадки стельность реципиентов составила 37.7%.

Установлены породные различия в устойчивости эмбрионов к перепаду низких температур. Определено, что наиболее чувствительны к низким температурам эмбрионы калмыцкой породы. Из 113 замороженных и оттаянных эмбрионов только 58,4% были морфологически нормальными, что на 18.1% меньше, по сравнению с эмбрионами породы симментальская и на 15.255. по сравнению с зародышами казахской белоголовой породы.После оттаивания эмбрионов пород герефорд, салерс и абердико-ангус число нормальных зародышей колебалось от 69,8 до 11,2%. т.е. было на одном уровне.

По результатам эмбриопересадок отмечена тенденция увеличения приживляемости зародышей симментальской и абердицо-ангусской породы (дс 48.9% и 43,1% соответственно). Наименьшая стельность реципиентов отмечена при пересадке эмбрионов породы салерс (37.9%).

Установлена прямая зависимость приживляемости оттаянных эмбрионов от качества и стадии их развития. При пересадке морул хорошего (4 балла) и отличного (5 баллов) качества стельность реципиентов составил? 41.3 и 42,055. Приживаемость морул удовлетворительного (3 балла} качества не превышала 31.9%, что на 9.4% и 10.1% меньше по сразнению с эмбрионами хорошего и отличного качества.

При пересадке бластоцист хорошего и отличного качества была поручена стельность реципиентов 48,2% и 62,555, что значительно выше, чем при пересадке бластоцист с оценкой 3 балла (32.1%) и эта разница достоверна (Р<0. 001).

7.5. Технологические и санитарные условия проведения работ по трансплантации эмбрионов.

При разработке технологических и санитарных-условий проведения работ по трансплантации эмбрионов мясного скота мы исходили из поставленных перед нами задач и возможностей их реализации.

Были сделаны попытки усовершенствования технологии проведения ра- -

твовании технологии проведения работ по трансплантации эмбрионов в "стационарных условиях, в опытном хозяйстее Всероссийского научно-исследовательского института мясного скотоводства (г.Оренбург) при нашем консультационном участии был построен центр по- трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Объемно-планировочные решения центра обеспечивают полный цикл технологии трансплантации эмбрионов мясных пород.

Мобильная форма организации работ по трансплантации эмбрионов требует создания определенных условий. Для этих целей нами предложена система прогонов и фиксации животных обеспечивающая спокойный перегон и безопасную работу с животными. Мобильная форма организации работ по воспроизводству стада методом трансплантации была использована в племенном заводе "Красный Октябрь" Волгоградской области и опытном хозяйстве Калмыцкого научно-исследовательского института мясного скотоводства (г.Элиста).

Возможна смешанная форма организации работ по воспроизводству стада методом трансплантации. При данном варианте на центрах (пунктах) необходимо таеть выездные подразделения специалистов для работы на фермах. Как правило эти работы проводятся по сезонам года в наиболее оптимальные сроки воспроизводства мясного поголовья с использованием в качестве лаборатории для работы с эмбрионами пункты искусственного осеменения или других помещений переоборудованных для этих целей.

В племенном заводе "Парижская Коммуна" Волгоградской области был разработан и апробирован один из вариантов смешанной формы организации работ по трансплантации эмбрионов. Предварительно пункт искусственного осеменения был переоборудован и переоснащен для работы с эмбрионами. Предложенная нами система загонов, расколов и фиксационных станкоь обеспечивает технологичность и безопасность работы с мясным скотом.

Разработанные и усовершенствованные варианты организации работ п< трансплантации эмбрионов мясных пород прошли апробацию в пяти хозяйс твах России и Восточного Казахстана в течение последних шести лет.

Нами был сделан анализ степени влияния вариантов организации работ на результаты трансплантации эмбрионов (табл.22). При работе ь стационарных условиях 76,5% животных, от числа обработанных гормональными препаратами, реагировали полиовуляцией и в среднем на донора получено 7,7+0,18 овуляций. При этом получено больше на донора эмбрионоЕ и яйцеклеток )(6.6+0.16), в том числе нормальных эмбрионов (4.6±0.II

ГТП опаоилипп Л илй»г я» ГТГ па МШАМ. - --------^------" "