Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНОМ СКОТОВОДСТВЕ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНОМ СКОТОВОДСТВЕ"



ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи

Гаврилов Александр Михайлович

' "'ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНОЛ

СКОТОВОДСТВЕ

03.00.13. - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степеии доктора биологических наук

п. Дубровины Московской области 1995

Работа выполнена во Всероссийском на учно-исследовательской институте иивотноводства (ВИЯ).

Научный консультант: зав.отделом трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных ВИЖа. доктор.биологических наук, профессор К.И.Сергеев.

Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор ю.Д. Клинский

2. Доктор биологических наук, профессор А.Н.Успенский

3. Доктор биологических;наук C.B.Советкин

Ведущее учреждение:

Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела.

Защита состоится -А.- МЦ _1995г. в МУ часов на заседании специализированного совета Д.020.16.02 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес §н статута: 142012. Московская область. Подольский район,.

пос. Дубровицы. * ,

С диссертацией мояно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан * ^ " ' иээя г.

Ученый секретарь • специализированного совета, доктср биологических наук "

П. А. Науменко.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Актуальность проблемы. Первостепенной задачей современного животноводства является обеспечение народонаселения страны продуктами питания. Решение проблемы увеличения производства мяса возможно путем эффективного использования репродуктивного потенциала животных, способных интенсивно увеличивать массу тела с высоким коэффициентом трансформации корма в мясную продукцию.

Существенное значение в интенсификации воспроизводства крупного рогатого скота и повышения его продуктивности приобретает биотехноло-гаческий метод трансплантации эмбрионов. Данный метод язляется важным Фактором ускорения процесса качественного улучшения популяций сельскохозяйственных животных, обеспечивает более полное использование генетических ресурсов маточного поголовья. Применение трансплантации эмбрионов направлено на ускорение селекции крданого рогатого скота r.zx создании высокопродуктивных стад, быстрое и широкое распространение редких и исчезающих пород, ускоренное создание выдающихся семейств коров-рекордисток в целях использования их как матерей будущих быков родоначальников линий. Более 60* быков-производителей, используемых для искусственного осеменения в странах Северной Америки и Европы, получены методом трансплантации и доля их продолжает увеличиваться (Н.Сапр и др. 1988).

Практическое применение метода трансплантации эмбрионов в мяснгг. скотоводстве основывается на получении быков-производителей от был;:-'-щихся матерей, ускоренной проверке быков по качеству потомства, увеличения числа двойневости за счет пересадки или подсадки эмбрионов ранее осемененным коровам или телкам^.Anderson и др. 1982: D.Williams 1985: Б.Huhn 1990: J.Sreenan 1989). Программы трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве имеют свои особенности, связанные с физиологическими особенностями животных мясных пород и спецификой технологии ИХ содержания. При вызывании полиовуляции трудно получить полноценную реакцию на экзогенные гонадотропины у животных в период сезонного или лактационного анэструса. У коров с телятами на подсосе даже при достаточно высокой реакции полиовуляции оплодотворяемостъ яйцеклеток при осеменении в индуцированную охоту-существенно понижена (W.Jüll и др. 1976; Е. Convey и др. J^i'iUftfrl&b^д |

Другим фактором, j тесно Связанным i. с, технрЛогией мясного скотоводе-

тва. является резко выраженная сезонность размножения. В странах Западной Европы при отгонном пастбищном содержаний и естественном осеменении коров до 8055 отелов проходят в марте, апреле и мае (J.Eldon и др. 1988). С сезоном отела связана и продолжительность послеотелького аяэструса (if.Hill и др.1976, E.Convey и да. 1933). Интервал от отела до первой охоты у коров мясных пород колеблется от 46 до 168 дней.

Величина индуцированной полиовуляции у животных разных пород различна и зависит от их генетически обусловленной плодовитости И особенностями гормонального статуса. Число эмбриониь, поручаемых от отдельных доноров даже в пределах одной -порош зависит от индивидуальных особенностей их эндокринного статуса, а также типа нервной деятельности (A.Sluda 1981: P.Renbock и др. 1986; А.Свитаюс 1991:).

Из анализа мировой научной литературы установлено, что в настоящее время имеются реальные предпосылки более эффективно использовать ценный генетический материал маточного поголовья мясного скота с помощью метода трансплантации, увеличить выход телят на 30-50%, а экономическую эффективность стада на 25-30%.

В тоже время.ряд вопросов, связанных с технологией трансплантации эмбрионов мясных пород до последующего времени, остаются нерешенными и требуют технической доработки, а также научного обоснования исследований в новых направлениях. Необходимо разработать новые эффективные методы отбора и подготовки доноров к полиовуляции, прогнозирования и вызывания множественной овуляции с помощью надежных гонадотропинов, низкотемпературного криоконсервирования зародышей, нехирургического извлечения :И пересадки эмбрионов с помощь» более совершенных приборов. 1 Формы организации работ по трансплантации эмбрионов в условиях стойло- , во-пастбищкого и отгонно-пастбищного содержания мясного скота, прием-•лемых для различных регионов страны.

Дальнейшее совершенствование метода трансплантации с использованием современных достижений генетики, эмбриологии и эндокринологии, обеспечивают перспективность разработки современной технологии трансплантации эмбрионов мясного скота.

V 1-2- Целью исследований являлась разработка эффективной технологии трансплантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Казахстана с определенными традициями разведения животных мясного направления.

Для реализации поставленной цели ставились следующие задачи:

- изучить влияние особенностей физиологии.воепроизведения и технологии содержания крупного рогатого скота мясных пород на результаты

трансплантации эмбрионов:

- усовершенствовать существующие и разработать новые методы отбора доноров, синхронизации охоты и индуцирования полиовуляции у коров и телок с помощью гонадотропинов. Изучить влияние экзогенных и эндогенных Факторов на результаты полиовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов. Определить оптимальные технологические параметры осеменения коров и телок доноров при поляовуляши;

- усовершенствовать методы нехирургического извлечения и пересадок эмбрионов у коров и телок, сконструировать специальные приборы и приспособления для этих целей. Разработать способы получения двойневой стельности у животных методом трансплантации эмбрионов;

- усовершенствовать технологию глубокого замораживания, длительного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животноводческих Ферм;

- разработать технологические параметры проведения работ по трансплантаций эмбрионов мясных пород при отойлово-пастбищном и отгон-но-пастбшцном содержании животных.

1.3. Научная новизна. Разработана технология трансплантации зк*-рионов мясного скота отечественных и зарубежных пород для регионо£ России и Казахстана.

Изучены физиологические и технологические особенности воспроизведения крупного рогатого скота мясных пород. Усовершенствованы существующие и разработаны новые методы отбора доноров и синхронизации охотъ: и индуцирования полиовуляции с помощью экзогенных гонадотропинов. Изучено влияние экзогенных и эндогенных факторов на результаты полиовул=-ции, оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов. Определены оптимальные параметры технологии осеменения коров и телок-доноров полиовуляции. Сконструирован прибор для искусственного осеменения :<:-ров и телок {а.с. N 263078). Усовершенствованы методы нехирургического извлечения и пересадок эмбрионов у коров и телок. Сконструирован специальный прибор (а.с. N 1762914) для нехирургического извлечения эмбрионов у мясных коров, телок и буйволиц. В целях усовершенствования технологии поиска эмбрионов в промывной жидкости сконструирован специальный фильтр [а.с. N 1655486). что позволило сократить время поиска эмбрионов в 4 раза. Разработаны технологические параметры получения двойневой стельности у коров и телок методом трансплантации эмбрионов. Разработаны некоторые технологические режимы глубокого замораживания, длительного хранения и оттаивания эмбрионов в условиях животноводческих ферм. Разработаны два варианта термосов-контейнеров для кратковременного хранения (до 1 часа) и транспортировки приборов и пайетт с

эмбрионами к месту проведения пересадок. Научная новизна исследований подтверждена тремя авторскими свидетельствами.

1.Л- практическая значимость работы. Разработанная технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота мясных пород позволяет эффективно использовать пенный генофонд маточного поголовья при создании высокопродуктивных стад и семейств коров-рекордисток матерей будущих быков-производителей родоначальников линий, увеличить выход телят в 1,5 раза и экономическую эффективность мясного стада в целом.

Разработанные метода предварительного отбора доноров и гормонального вызывания полиовуляции обеспечивают' полиовуляторную реакцию у 76,5% коров я телок-доноров, получение эмбрионов у 80% животных при числе овуляций от 6.0 до 8,0 и выходе 4 нормальных ЭМбрИОНОЕ в среднем на донора.

Разработанный катетер для нехирургического извлечения эмбрионов у крупного рогатого скота мясных пород и буйволиц обеспечивает Э8.9Ж и se лечения промывной среды от количества введенной и 96.1% зародышей от числа овуляций.

разработанное специальное Фильтрационное устройство позволило сократить непроизводительные затраты времени по обнаружению зародышей з промывкой жидкости в четыре раза и обеспечивает 96.1% извлечений от числа овуляций.

Разработанные методические и технологические условия проведения пересадки двух эмбрионов или подсадки эмбриона ранее осемененным реципиентам позволяют увеличить число двойневых отелов ДО 75. OSE И средний выход телят на 505S.

Разработанные технологические режимы глубокого замораживания и оттаивания эмбрионов обеспечивают эффективное использование метода трансплантации эмбрионов в условиях животноводческих ферм и отдаленных районов пастбищного содержания животных:

По результатам научных исследований разработаны и опубликованы четыре рекомендации для практического использования в мясном скотоводстве:

1. Методические указания за трансплантация на ембриони при месо-дайни порода говеда. Троян. НРБ. 1990. Одобрены сельскостопанской Академией НРБ.

2. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов мясного скота. Дуброчицы, 1990г. Одобрена учены* Советом ВИЖа.

3. Методические рекомендации яо отбору, Подготовке « суперовуляции и осеменения коров мясных пород. Дубровицы, 1993. Одобрены ученым

Советом Bffla.

*l i. технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве (Рекомендации) . Москва. 1994г. Одобрены секцией по животноводству научно-технического Совета при Главке животноводства Министерства сельского хозяйства России (протокол н 23 от 02.12.1993 г.).

1.5. ДпрпГУяпия ряГюты- Материалы тссестатш. жившим ■ обсуждеШ на конференциях, симпозиумах, ученых советах м производственных совещаниях специалистов сельскохозяйственных предприятий:

- международный симпозиум "Радионмнунологическая диагностика репродуктивных процессов в скотоводстве" г. Разград. Болгария 1989т;

- пленарное совещание четвертой интернациональной кколы хриобмо-логии н лиофилизации г. Боровец Болгарая 1989;

- научно-практическая конференция *Интенсификация технологии мясного скота ^производства говядины" г. Элиста КНЮМС 1991 г:

- научно-практическая конференция "Технология производства говядины в мясном скотоводстве" г. Оренбург ВННИМС 1992г; ;

- научно-практическая конференция "Совершенствование методов селекции и повышения продуктивности мясного скоте* г. Оренбург. 1993г;

- региональная научно-практическая конференция ученых и специалистов животноводства г.Оренбург, 1994г:

- научно-технический Совет Министерства сельского' хозяйства я продовольствия Российской Федерации (протокол II 23 от 2.12.93 г.).

1-В- Реализяпкя результатов исследований

Реализация научных исследования по разработке технологии транр-плантации эмбрионов мясных пород осуществляется в ГПЗ "Чапаевский" г Уральской области Казахстана. "Парижская Коммуна" и "Краоой октябрь" Волгоградской области.. опытных хозяйствах ВНИИ мясного' скотоводства (г.Оренбург). Калмыцкого НИИ мясного скотоводства" (г*Элиста), института горного животноводства и земледелия (г.Троян Болгария) и подсобного хозяйства "Маяк" Пермской области.

Г 7 Пп пилгйртатпг ппуйликпамп ЕЙ нятгаинт работ. 3

авторских свидетельства на изобретения.

1.8. Основные положения диссертанта вищишт fffl ЯПЖГ'

таты научных исследований, позволившие разработать технологию трансплантации эмбрионов мясного скота для регионов России и Казахстана.

1.9. Объем ..у структура диссертации. Диссертация изложена на 353 страницах машинописного текста, содержит 66 таблиц, * 21 рисунок. 17 приложений, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических орикшеюа.

Список литературы включает 308 источников, из них 210 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

Работа выполнена в 1983-1994 годах во Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства (БВД, институте горного животноводства и земледелия (г.Троян. Болгария), в ШЗ "Чапаевский" Уральской области Казахстана. "Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" Волгоградской области. опытных хозяйствах ВНИИ мясного скотоводства (г.Оренбург) и Калмыцкого ВНИИ мясного скотоводства (г.Элиста).

Научные исследования проводили на генетически ценном маточном поголовье крупного рогатого скота шести мясных пород: симментальская, герефорд, калмыцкая, салерс, абердино-ангусская к казахская белоголовая.

Подопытные животные были в условиях отгонно-пастбищного и стойло-во-пастбищного содержания, кормление их проводили по нормам и рационам ВИЖа.

Е экспериментах по изучению физиологических и технологических особенностей воспроизведения мясного скота было использовано 568 коров, в р"зрасте от 2,5 до 12 лет и телок случного возраста высокоценных в племенном отношении. При изучении сезонности ПОЛОВОЙ ииклики и влияния сезона отела на протекание послеотельного периода ректальным путем исследовали состояние матки, яичников и контролировали воспроиз-всдительные функции организма в целом. В послеотельный период определяли среднюю продолжительность, сервис-период, стельность животного от первого осеменения и индекс осеменения. Одновременно с этим изучали степень влияния совместного содержания коров-матерей и телят на воспроизводительные Функции самок по аналогичным показателям.

При различных вариантах содержания маточного поголовья (стойло-во-пастбищное и отгонно-пастбищное) изучали полноценность уровня кормления на воспроизводительные функции коров. Биохимические исследования проб крови проводили а лабораториях ВНИИ мясного скотоводства. Калмыцкого НИИ мясного скотоводства и ВИЖа по общепринятым методикам. Гормональный фон у подопытных животных определяли в различные дни полового цикла радиоимкунологическим методом в соответствующих лабораториях 8НИИРГХ;- к ВИЖа по утвержденным методикам.

При отработке критериев отбора доноров было использовано 459 ко-.■.-. ров и телок. Определение рН содержимого полости матки животных проводили с помощью прибора рН-метра и высокочувствительного индикатсг

троизводства фирмы "Whatman".

При разработке оптимальных схем синхронизации охоты и индуцирова-шя полиовуляции было использовано 568 коров и телок.

для синхронизации охота у циклируших животных использовали метод однократного или двукратного введения с интервалом 10-12 дней аналогов ¡ростагландина Fs-альфа: эстрофан (СПОФА). клопростенол (ИЕНАФАРМ). эструмат и суперфан отечественного производства в дозе 500 мкг по гслопростенолу.

В анэстральный период и при овариальной гипофункции использовали гестогены в имплантатах. Имплантаты {"ИНТЕРНЕТ") с 3 мг норгестомета вводили под кожу уха на 9-10 дней при одновременном внутримышечном введении 5 мг эстрадиолвалерата. При удалении имплантатов дополнительно вводили ГСЖК телкам - 500 И.Е., коровам - 600 И.Е.

При разработке различных схем индуцирования полиовуляции с помощью экзогенных гонадотропинов. использовали препараты: ГСЖК (прегма-гон "Дессау" в дозах 2000-2500 И.Е., фоллигон "Интервет" 3000-35СС И.Е.), ФСГ "Бернс-Байотик" 42-50 мг. фоллитропин "Каунас" в лозах 1100-1200 И.Е. Препараты вводили на 8-12 дни полового цикла. На предпоследний 4 или 5-дневлой схеме обработки, животным вводили аналоги простагландина F£-альфа в дозе 500 мкг по клопростенолу.

Искусственное осеменение коров и телок проводили свежеполученнсй и замороженно-оттаянной спермой визо- и ректоцервлкальнда способами с учетом одноразовой дозы спермы, места и кратности ее введения. Одноразовая доза спермы содержала 25, 50 и 75 млн. подвижных живчиков. При естественном осеменении доноров применяли ручную случку быками, предварительно проверив их слермопродукци».

В экспериментах по нехирургическому извлечению и пересадке эмбрионов было использовано 1023 коров и телок. При извлечении эмбрионов применяли четыре типа катетеров производства фирм: "Кассу". "Нойш-тадт". ВИЖа и нашей разработки. Конструкцию устройств оценивали по продолжительности технологических операций (подготовительный цикл, введение, извлечение прибора и заключительный цикл), процента извлекаемой промывной жидкости и эмбрионов и удобства в работе.

. Поиск эмбрионов в промывной жидкости проводили по общепринятой методике и путем фильтрации через специальное устройство, разработанное нами.

Оценку качества эмбрионов перед пересадкой или замораживанием проводили по морфологическим признакам четырехбальной системы под микроскопом "Wild" при 140-кратном увеличении. Было оценено более 1300

зародышей. Пересадку эмбрионов осуществляли нехирургическим способом с помощью катетеров "Нойштадт-Айш", "Кассу" и конструкции ВИЖа.

В качестве реципиентов использовали коров и телок случного возраста, регулярно цитирующих, с нормальным физиологическим развитием, клинически здоровых и не имеющих племенной ценности. Эмбрионы пересаживали на 7 или 8 день полового цикла, при наличии у реципиентов активного желтого тела на одном из яичников. В экспериментах по получению' двойневых отелов пересадку двух эмбрионов проводили в один или оба рога, подсажу одного эмбриона - в противоположный рог от желтого тела беременноста.

Замораживание эмбрионов проводили на программных замораживателях: Р-204 (Англия). "Миникул" (Франция). ЗЭМ-З (Харьков. Украина) и методом "витрификации" без применения криогенного оборудования. В качестве криопротекторов использовали 1,0 М; 1,4 М растворы глицерина и 1.5 № этпленгликоля. Насыщение эмбрионов криопротектором проводили по одноступенчатой, трехступенчатой и четырехступенчатой схеме. Замораживание эмбрионов с помощью программных устройств проводили в автоматическом режиме: от +20°С до -7°С со скоростью 1°С в минуту, эквилибрация в течение 2-3 ' минут, от -7° до -36°С со скоростью 0,3°С в минуту. 20-30 минут стабилизации при -36°С с последующим погружением и хранением в жидком азоте. Замораживание эмбрионов по принципу "витрификации", после плавного насыщения.их 5,6 М раствором глицерина или смесью криопротекторов, состоящим из 2,8 М глицерина и 2;8 М 1,2-пропандиола, проводили в парах жидкого азота. Эмбрионы оттаивали в водяной бане при температурах +20° и +37°С. Эффективность режимов замораживания и оттаивания оценивали по качеству оттаянных эмбрионов и их приживляемое™ после пересадки.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по методике Меркуловой Е.К. (1970) с использованием компьютерной техники.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.1. Физиологические и технологические особенности : воспроизведения крупного рогатого скота мясных - .пород..

Были изучены физиологические особенности воспроизводительной - Функции мясного скота отечественных и зарубежных пород регионов России и Казахстана. г

- И -

В результате проведенных исследований по изучению воспроиззош-те.»кых фикций у 321 коровы установлено, что ь зимнее время, особенно в условиях отгонно-пастбищного содержания. только у 16.5* животных проявлялись признаки спонтанной охоты и ректалънш путем у больякнства из них (30,2*) диагностировали атонию матки я пшгофующию яичников (табл. 1). .■ ч

Таблица 1

Состояние половой функции мясных коров по сезонам года

Показатели (п-ЯЕ) Сезоны года

зима весна лето осень

Число коров 91 112 53 65

Проявили спонтанную охоту 15-16.5 96-85.7 33-62,3 49-75.4

Состояние матки:

атония 73-80.2 10- 8.9( - 2- 3.1

норма 18-19,8 56-50.0*. 45-84.9 52-80.0

увеличенная регидность - 46-41.1 8-15.1 11-16.9

Средние размеры яичников { мм)

правый 5x4 16X20 15X10 15X11

левый 4X2 14X10 12x8 12X9

Средняя продолжительность

охоты (час) В, 9±0,75 11.910.4 10,610.61 10.810.51

В конце марта у животных наблюдали более стабильные признаки половой цикляки и в мае они достигали максимума в своем проявлении. Весной число животных со спонтанной охотой достигало 85,7%. в jföraee время, особенно при высоких внешних температурах, половая активность жи-потных несколько подавлялась и число коров с признаками спонтанной охоты снижалось до 62. 3%. Видимо, летом коровы с трудом поддерживают нормальную температуру тела при термострессах, особенно при подсосе телят, 1гго сказывается отрицательно на воспроизводительных возможностях животных. В осенний период, при балансированном кормлении воспроизводительные функции животных нормализуются. Более 75% коров проявляли признаки спонтанной охоты и у sex животных состояние матки и яичников было нормальным.

В последующей серии опытов на 339 новотельных коровах установлено, что сезон отела существенным образом влгяет на тю^леотельнь-а пери-

од и воспроизводительные Функции животных в целом. При отеле коров ь весенний период продолжительность акзстрального периода достигала 99,0±3,03, а сервис-период 10643,25 дней (табл.2). Если отелы проходя-осенью, половая циклика коров восстанавливается через 37,4+1.53 дней и сервис-период не превышает 4811,96 дней. Стельность животных от первого осеменения осенью достигала 66,73Е, а индекс осеменения равен 1.4±0,15.

Таблица 2

Влияние сезона отела на послеотельный период и воспроизводительные функции коров.

Показатели Сезоны отела

зима весна лето осень

Отелилось коров (п) 96 116 62 65

Средняя продолжительность

послеотельного периода (дн) 79.8±2, 4 99.013,03 41,011,72 37,411.53

Сервис-период (дн.) 9013,03 10613,25 58,012.43 48,011.96

Стельность от первого

осеменения (5Е) 56.915.05 50,414,64 54, 016, 33 68.715.75

Индекс осеменения 1,910,14 2,410,14 1. 6Ю, 16 1.410,15

Особенностью технологии разведения мясного скота является совместное содержание коров-матерей и телят на подсосе.

E.Convey и др.(1983) отмечают, что при совместном содержании коров и телят в значительной степени удлиняется послеотельный период.

В опытах по изучению влияния подсосного метода содержания телят с матерями на воспроизводительные функции самок нами установлено, что совместное содержание коров и телят задерживает инволюцию матки и тем самым удлиняет сервис-период, а также в значительной мере снижает результаты оплодотворения и повышает индекс осеменения. В'группе коров с телятами на подсосе средняя продолжительность послеотельного периода и сервис-период достигают 96.0±2.47 и 104,012,67 дней соответственно, что в 1,5-2 раза больше, чем в группе коров без телят {табл.3). Стельность от первого осеменения коров первой группы не превышает 43.9SS, а индекс осеменения статистически выше (Р<0,001), чем в группе животных без телят. ПЬ всей видимости причиной подобных! последствий являются гормоны, выделяющиеся при сосании вымени, оказывающие ингибирующее

воздействие на секрецию гонадотропных гормонов, что приводит ксннже-шш б о спроиэв одительвых функций организма животного в цело«.

Таблица 3

Влияние совместного содержания коров-матерей и телят на послеотельный период и воспроизводительные функции коров

Показатели

с телятами

Коровы

без телят

Число отелившихся коров (п> Средняя продолжительность лослеотельного периода (п) Сервис-период (п) Стельность от первого осеменения (X)

Индекс осеменения

165

96,0±2.47 104,012.67

43.9 ***

2,610.12

74

41.611.6 62,512.40

68.9

1.710,15

(***)-Р<0,001

3.1.2. Критерии отбора коров и телок доноров.

Путем целенаправленного отбора высокопродуктивных и генетически ценных животных с хорошими воспроизводительными. функциями, способных г реагировать полиовуляцией на введение экзогенных говадотрогогаов и давать необходимое количество биологически полноценных эмбрионов, возможно в значительной степени повысить эффективность метода Рраасплан-тащи. V -; '.Г ■

Одним из первостепенных критериев отбора доноров является объективное определение их клинического состояния. Известно, что при различных формах эндометрита в очаге воспалительного процесса нарушается кровообращение и обмен веществ* в силу чего появляются физико-химические сдвиги, изменяется кислотно-щелочное равновесие"и повивается местный ацидоз. Учитывая этот фактор, мы применили метод определения рн содержимого полости матки как один из 1дн!териев отбора доноров и прогнозирования результатов гормонального вызывания полновуляции у живот-

• ных. :>■'.■

В результате исследований установлена : прямая зависимость между

ведавшей рй содержимого натки, ее клиническим состоянием,-оплодотво-ряемостью яйцеклеток и качеством извлекаемых эмбрионов.

При рК в пределах 6.2-6,8 до 27,9* яйцеклеток остаются неоплодот-воренными. а число качественных эмбрионов не превшает 34.456 (табл.4).

таблица 4

Влияние ра содеряимого полоста матки на оплодотворлемость яйцеклеток и качество эмбрионов.

Показатели.

6,2-6,8

рН содержимого матки

6.9-7.5 - 7,6 И более

30

39

21

Число доноров Среднее число овуляций .

tie донора 7,8+0.47 7.110.38 8,3+0,6

fio лучено в среднем на донора змбрионов 'л неоплодотворенных

Яйцеклеток (п-ЗЕ) 6.1+0.37 5.8±0,31 6,4±0,46

в т.ч. нормальных эмбрионов 2.1+0.26-34,4 А, 0±0,32-69.0 3,4*0,4-53,1 дегенерированных . 2,3+0.23-37,7 1.0±0,16-17,2 1.1±0,23-17,2

неоплодотворенных

Яйцеклеток . .1,7+0,33-27.9 0.8±0,14-13,8 1.910,3-29,7

При нейтральной среде полости матки .(рН=б,9-7,5) получены максимальные результаты- по выходу нормальных эмбрионов (4,0±0,32-69, ОХ)'', (фи этом число неоплодотворенных яйцеклеток (0,8+0.14-13.8%) было минимальным. При рН равном 7.6 и более, не установлено значительных колебаний по выходу нормальных и дегенерированных эмбрионов по сравнению с величиной рН полости матки от 6.9 ДС 7, 5.

:: Различные нарушения в условиях содержания и кормления отрицательно сказываются .на состоянии здоровья и воспроизводительных функциях животных. Учитывая это мы изучили основные биохимические показатели крови подопытных животных в различные периоды года для того, чтобы установить "степень- их влияния на результаты индуцирования полиовуляции и выход-нормальных эмбрионов. ' *

Результаты исследований биохимических показателей белкового. . ли-пндного обмен» ■ кщ)отина, витамина "А" позволили установить, что ову-дарувщая реакция яичников и выход нормальных эмбрионов у животных с отклонениями в обмене веществ в 1.5-2 раза ниа4/ чем у доноров с отно-

стельно нормальным обменом (табл.5). У донора снизким числом овуляций (от 2 до 10; 0-5; £-3) биохимические покагатзли были достоверно ниже (?<0.0 5), чем в группе кивотных с высоким уровнем полювулнаии í 11—18; 6-12; Э-13). ..

Б зчмкіій периэд у доноров с числом овуляций от 11 до 18 по сравнению с животными, имеющими оеуляшіі? с? 2 до И. содержалось в крови больше бежа на 23,4", альбуминов и фосфслипидоз на 15,5S, обаих лепк-дов - 2.4. холестерина - 18.45, триглицеркдов. кркстинйна. каротина и витамина "А" в 2 раза. Б весенний период яри Ю'нимальной (0-5) і: хаксимальной (6-12) овуляции основные биохимичеш^ показатели у животных несколько сглажены, исключение составляет креатинин и карзткн. цифровые величины которых, при СБУ"ЯЦ!ІІ! 07 6 НС 1.", В ДЕЬ рЬЗС. бСЛЬ^. чек при минимуме овуляций. В летний период наиболее значительные личия установлены по содержанию в крови тригл:иеридоБ, кристмкіїна. лочной фосфотазы, каротина и витамина "А". При максиму є овудящ:?. (Э-13) эти показатели были в 1,5-2 раза выше, чем при минимальном ч:::-л? овуляций у животных. По остальным показателям эта разнша не пртн-:-щает 12-19S.

Гормональный фон организма животного в разданные функциональные стадии полового никла отражает его полноценность протекания и может варьировать в определ&нных пределах. Изучив пределы- этих колебаний возможно отбирать доноров .только с гарантированной эмбриопродукшеа. Б связи с этим, нами был научен гормональный Фон подопытных животных путем определения в кроьи прогестерона, эстрадиола и кортизола. р

Установлена достоверная зависимость между уровнем полиовуляции, числом извлекаемых эмбрионов и гормональным фоном в крови доноре. При минимальном числе овуляций (0-3) и выходе эмбрионов в среднем на докера (до 3) концентрация прогестерона в крови не превышала 0,6±0.15 кг/ил, а 17р эстрадиола - И,85±0,74 лг/мл. что достоверно ниже (Р<0,01) по сравнению с другими группами подопытных животных (табл.6).

При уровне овуляшй от 4 до 21 и выходе эмбрионов до 19 в среднем на донора концентрация прогестерона была в пределе от"2,15±о,2б до 2,BSto.34 нг/мл. а уровень 17р эстрадиола колебался 18.6±1.53 до 22.8il.97 пг/мл. Содержание кортизола в крови доноров не отражало уровня овуляции и результатов извлечения эмбрионов, существующая разница по группам (от 11.73±0,66 до 12.67+0.75 нг/мл) была недостоверной (Р>0,5).

Таким образом, путем изучения гормонального фона животных возможно прогнозировать результаты индуцирования полиовуляции и качественный

Таблиц» Я

Биохимические показатели крови доноров по периодам года в связи с реакцшй яичников на гонадотропнн

Показатели Число овуляций по периодам года

ооевне-еимний весенний легкий

* т» А

2-10 11-18 0-5 6-12 2-8 9-13

ОбЩИЙ белок (т/%) 6,4+0,61 7,9Ю,93 8,5911,01 9.39±0,94 7,010,73 9,110,79

Альбумин 0,71±0,05 0,8210,02 0,6410,69 0,7010,71 0,7310,83 0,98±0,09

Общие лвдиды (иг/Х) 240111,6 299±10,3 221110,9 241113,6 237118,7 285±11,0

Фоофолипиды 109+6,2 12616,9 103+5,8 131±7,6 11217,7 1281669

Холестерин -"- 84,316,9 99,845,1 82,917,1 85,6+5,1 86,517,0 97,614,3

Тригдадердцы 10,0*1,8 76,9±6,2 39,511,0 45,8+1,0 45,011,1 77,110,90

Крбыннш - 0,47Ю,01 0,98Ю,16 0,49±0,05 0,81±0,12 0,4510,12 0,9010,16

Щелочная фосфотаэз 31,611,1 56,112,2 30,9+1,6 38,011,0 32,811,5 56,611,9

Каротин 0,19410,16 0,427¿0,22 0,136±0,25 0,28810,52 0,21711,62 0,34911,1

Витамин "А" - 0,11210,59 0,204±1,6 0,111±0,62 0,120±0,96 0,11010,96 0,19611,93

(а) - Р<0,05

Таблица 6

Влияние гормонального Фона крови коров-доноров на результаты полиовуляции и извлечение эмбрионов

К Число Число Число Гормоны

п/п коров доноров овуляций извлечен- .

ных эмб- прогестерон эстраднол кортизол

рионов (НГ/МЛ) (ПГ/МЛ)- -■(НГ/МЛ)

• * **

1 28 0-3 0-3 0,6+0,15 11.8510,74 11,3510.74

2 31 4-6 4-5 2.15Ю, 26 21.511,27 12.6710.75

3 25 7-12 6-12 2,8910,34 22.811.97 : 12,1810.8

4 16 13-21 13-19 2.68±0,41 18,611,53 11,7310,66

- Р<0.01

выход эмбрионов у доноров, эти показатели возможно использовать как критерии при отборе животных-доноров.

Не менее важнш фактором отбора доноров является определение ст:-тимальных возрастных пределов использования животных для полиоеуля::;:::. По данному вопросу в литературе весьма противоречивые сведения. L. mldson (1984) установил, что результаты извлечения эмбрионов не сят ст возраста доноров. В то же время l.kuciel й др.(1S90) утве'л;*:--ют, что животных старше 15 лет невозможно использовать в качеств- ; норов эмбрионов. ■

(fei изучали возрастные особенности гормонального индуцирования „з-лиовуляции у коров и телок доноров.

При гормональном вызывании полиовуляции с помощью экзогенных ГО-надотропинов у телок получены следующие результата (табл.7).

Из числа обработанных животных 58,855 реагировали полиовуляцкей и в среднем на донора получено 6.7±0, 27 овуляций.5.4+0.22 эмбрионов и неоплсдотворенных яйцеклеток, в т.ч. з.но, 12 нормальных зар<шг?Г1. У коров от 3.6 до 9,5 лет среднее число овуляций на донора составил;-8,110.27 и 4,4±0,15 качественных эмбрионов, что составляет 62.OS от общего числа зародышей. В группе коров-первотелок в возрасте от 2,? ZÜ 3,5 лет 54,2% животных реагировали полиовуляцией и в среднем на донора получено 2,2±0,09 или 44.05G качественных эмбрионов. У коров старше 9.с лет выход качественных эмбрионов несколько снижается по сравнен-.'-

Таблица 7

.Возрастные особенности гормонального вызывания п'олиовуляции у коров и телок доноров.

Показатели возрастные группы доноров (лет)

' I II III IY : телки

случного 2.5-3.5 3.6-9.5 9.6* и-более ■ возраста

Число доноров ^ i 68 „ v 59 ' 96 , 27 Реагировали полиовуляцией ; ' 40 32 67 17 Процент от числа

обработанных 58,8 54,2 69.8 62,3 среднее число овуляций""

на донора 6.7Ю.27 7.0Ю.З 8.U0.27 7.410,47 Получено в среднем на донора эмбрионов й не-

оплодотворенных . - »

яйцеклеток . 5.410.22 5.040.21 7.U0.24 6,5±0,41 в т.ч. нормальных

эмбрионов 3.1Ю.12 2,210.09 4.4Ю.15 3.5Ю.22

3 ■ 57,4 . 44.0 62,0 53.8

дегенерированных 1.0Ю.12 1,6±0,16 1.6Ю,13 0.910.18

% . 18,5 32,0 22,5 13.9

неоплодотворенных ■ '

яйцеклеток : 1,310,14 1,210,14 1,110.11 2. НО. 18

Я 24.1 24.0 15,5 32.3

третьей группой животных (3.5+0.22), при этом число неоплодотворенны* яйцеклеток достигает 32. зж

Из приведенных данных следует, что оптимальный возраст коров для использования в качестве доноров эмбрионов является от 3,6 до 9,5 лет. Телок мясных пород возможно использовать в качестве доноров эмбрионов, но при нехирургическом извлечении зародышей, даже с ^пользованием специальных катетеров, часто возникают проблемы прохождения канала шейки матки.

3.1.3. СШОфОНЯМЩИ охота у доноров я решим ентов.

Синхронизация охоты у крупного рогатого скота симулирует воспроизводительны« «ушщии, особенно у телок, ускоряет наступление стельности к обесюгаввп пдашфоват^

Точность еяироигаадщ поломи июиюаждоровнреаиииггов в значительной степеп помвет результата пересадок жврюнов.

в срваиктельаюс зкспершватах по изучая» »вимити» і и - однократное к двукратноеобработоккоров ■ тздо* щ* сюсхрониэацнш охота использовал* *ы»гроств»м\ '»стружг. "эстроФан" и 'суовр*м' в юзе 500 мкг по клопростжолу. ''--Й-Р'

Наиболее высоте результата по синхронизации охоти получены при однократної обработке подоштвнх животных эстрофавом. 85.7Х из них пришли в оаюту черв» 72 часа поем введевнцяпврата (табл. 8). Не установлено достоверных различна в результатах аюхроиизацми охоты у коров и телок с помощью ктрумата в суоерфаиа. >4? 71.8 до 78.0* животных реагировали на введение препаратов через 72 чвеа после шьекцин. Минимальные результат« по синхронизации охоты у корю и телок получены при использовании клоцростгоола. Только 64, зх животных пряшш в* окоту и 35.7* доноров не проявил дам слабых признаков полового возбуждения.

Таблица 8

синхронизация охоты у коров и телок ДОШрбв'с ПОМОЧЬ® простаглашшновї

Показателя - '• Простагландин , *

. мопростеяол »струмвт зстрофан суперфан

Обработано доноров. . 28 39/ 63 41

Число доноров с

признакам! охоты: 18 : 28 -'-54~ 32

Процент от числа обработанных 64.349.05 71.8*7.2 И.7*4,41 78.046.47 В т.ч.ПрИМН В ОХОТУ (П-Х)

через 48 часов Г 14-77.8 24-65,7 50-92,6 30-93.7

через 72 часа 4-22,2 4-14.3 4-7,4

Не проявили признаков

охота 10-35.7*9.05 11-28.2*7.2 9г1«*4.41 9-22.0*6,47

___Аналогичное результаты по синхронизации охоты получены при двук-

рагног~с?ра<5атке квотных щ5остагландинами в дозе 500 мкг. В анзст-р^ьк^й Период для синхронизации охоты у коров и телок доноров были использованы гестогенн и ГСЖК в сочетании с простагландинами.

Анализ полученных данных показал, что схема обработки коров и телок 1фи синхронизации охоты путем подкожного введения имплантатов с 3 мг норгестомета и одновременным инъецированием 5 мг эмтрадиолвалерата наиболее эффективна, 67,2% коров в 70.8% телок из числа обработанных', пришли .в-охоту, из них более 60% имели признаки охоты уже через 48 часов после введения простагландина (табл.9). Использование имплантатов с 6 кг норгестомета позволило вызвать охоту'у 51,0% коров и 62.1%; телок. При этом 49,0* л коров и 37,9% телок не проявили признаков охота спустя 72 часа после-обработки простагландином. При использовании ГСЖК в сочетании с простагландином получены идентичные показатели по синхронизации охота у коров и телок, 59.4 и 58,3% животных из числа отработанных были с'п^знакам!^гечки и рефлекса неподвижности. Из общего числа обработанных более 40% животных не проявили охоту. .' ;

. _' ".■: Таблица 9

Синхронизация охоты у коров и телок в анэстральный период

Препа- Группы Число Приш- Процент 1 В т.ч. « '" .. Не пришли

раты живот- . обра- ли в от чис- через в охоту

ных ботан- 0X0- ла об- 48 Ч 72 ч (п-Я>'

ных рабо-' (п-%). (п-%)

живот- таких

ных

Нсргес- коровы 96 49 5i,0±5,1 36-73.5t3.1 13-26,514.1 47-49,0±5.07

томет телки 29 IS 62.1±9.0 12-66,7±5.4 6-33.345,5 11-37,919,0

Норгес- .

томет коровы 58 39 67,216,2 24-61,514,4 15-38.515,0 19-32,6*6,2 эстра-

диол- телки 24 17 70,819,28 12-70,614.2 5-29.4+4,8 -7-29,2:9.23

валерат..- "

ГСЖК коровы- 64 телки' 12

38 59.416,13 26-68,413.6 12-31.613,9 S6-40.6i6,13 7 58.ЗИ4;2 3-42,913,9 4-57. И4.0 5-41.7114,7

- 21 -

4.2.1. влияние схемы обработки и дозы гонадотротгаа на

результаты полиовуляши и качество эмбрионов. иядуиирование полиовуляшю является одним КЗ основных моментов технологии трансоланташп эмбрионов. Тем немеяев до последнего времени не изучены в полной мере вопросы, связанные сгормональиш вьашанием полиовуляши. особенно у мясного скота. Остаетсявепредсказуемой реак-шя сргаяима анвотаого на введение экзогенных гоаадотропинэв. не ог ределены оптимальные; доам гормональных препаратов щи явд одроваяш полиовуляшш, малоязучено вжяние некоторнхэкаогенныхи э» догенных факторов на результаты лолябвулядаиикачестводоноров. '.■■■"С-- . Таблша 10

Эффективность внимания полиовуляши у коров н телок донгов ГОК в разных доаах.

Показатели прегмагон (М.Е.) фоллнгон(И.Е.)

2000 2500 3000 3500 л

Обработано животных 48 93 • 76 54 Число доноров с полиовуляцией 32 57 43 " 38 Процент от числа

обработанных ■ . 68.7 61.3 56.6 ' 70.4 Среднее число овуляций

на донора 5.4*0.32 . 6.1*0/26 5.8*0.29 6.120.32 Получено в среднем на

донора эмбрионов н ф неоплодотворенных

Яйцеклеток 5.1*0.30 4,9*0.21 5.3*0.27 4.640.25

в т.ч. нормальных ••• »••

эмбрионов ' 3.9*0.23 2,7*0.12 ,4.2*0.21 2.9*0,16

' * ■■ ' .■ 76,5 ■ V . 55.1 . ■ 79.3 . 63,0 .,

дегенермрованных 0,5*0,15 0.8*0.10 0.8*0г*0 1.4*0.19

* ■ .9.8 - 18,3' . /11,3 ; 30.5 неоплодотворенных

Яйцеклеток..' 0.7*0.10 : 1.4*0,12 0.5*0.10 0.3*0.09

* . 13.7 ' 28.6 9.4 6.5

{•м)-р<о,оо1 :."..:

В связь с этим дальнейшие исследования были направлены на разра-

;тку и усовершенствование схем гормонального индацирования полиоеуля-{Гйггнмизацию доз современных препаратов, используемых при этом.

По результатам экспериментов установлено, что применение прегма-гона в дозе 2000 И.Е. обеспечивало полиовуляцию У 66,7%. животаы: •табл.1С). .V

-Пря среднем числе овуляций 5,4*0,32 на донора, получено '5.1*0. эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 3.9±0.23 нср яальных эмбрионов или .76,5% от числа извлечений. При увеличении доз! препарата до-2500 И.Е. эта показатели заметно снижаются. В среднем н;-jOHcpa получено.4.9±0,21 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, и; них только 2.7±0.12 были морфологически нормальными эмбрионами. Числе лггенерированных эмбрионов достигает 16,ЗЭЕ. а число неоплодотворенныэ яйцеклеток - 28.6Х. -

Использование фоллигона в дозе 3000 И.Е, при сравнительно м-числе животных., реагирующих суперовуляцией (56, 65Е), ПОЗВОЛИЛО И"- :ti в среднем на донора 5.3±0,27 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, из,этого числа 4,2±0.21 или 79,ЗХ зародышей по морфологической оценке были жизнеспособными.

При введении 3500 И.Е. фоллигона выход нормальных эмбрионов снижался до 2,SíO,16, а число дегенерированных зародышей достигало 30.5%.

Из приведенных данных следует, что оптимальными дезами для гормональных препаратов прегмагон и фоллигон являются 2000 и 3000 И.Е., т.к. при этом достоверно увеличивается число нормальных ЭМбрГ^НО! (Р<о,001), а выход дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток минимален. Применение ФСГ в суммарной дозе 42 мг обеспечив множественную овуляцию У 75,ОХ ЖИВОТНЫХ, (табл.11).

При среднем числе овуляций 5,9*0.24 получено на донора 5.3to.2: эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, из НИХ 3,7±0,15 или 69.8? были морфологически нормальными эмбрионами. Увеличение дозы ФСГ до 5( мг позволило получить на донора 5,9±0,30 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, в том числе 3,5±0,18 были нормальными эмбрионами. При этом повышение дозы препарата достоверно увеличивало число дегенерированных эмбрионов до 2255 (Р<0.05).

При использовании гормонального препарата фоллитропин в суммарной дозе 1100 И.Е, /из 71 обработанного животного 64,8Х реагировали полиовуляцией. В среднем на донора получено 6,4±0.31 овуляций и 4.8±0.23 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. - Средний вывдд нормальных эмбрионов на донора составил 3,6±0.18 или 75.0 SE от числа извлечений. Процент дегенерированных эмбрионов и.неоплодотворенных яйцек-

Таблица п

'¿•¡Гект^гнссгь чызыЕанил йленоеуляшп: у коров л телок лонсгюе. - псмошью ФСГ.

Гх'Казате.п:

Суммарна* лоза ФСГ(кг! Фоллитрсгтина (И.

50 НОС 1200

расотано злеотных 8-1 4«! С Л С ЛОлОрОБ С чслиовуляинея 52

Процент с: числа обработанных ?5.о

орелкее члст.о овуляций Л С ,:0Н0р2 5,ЭЮ,24

.Получено 5 среднем ча лскора эмбрионе? и не-:■ плод о творениях яйцеклеток 5.310.гг 5 г.ч. нормальных эмСрионсв 3,710,15 % 6?, 5

59,!

64.6

е.зю.зг 6, «с. 31

65,2 ?. ни. з;

5,910,30 4,610.23 £,2Ю.ЗС

3.510,18 3.610,18 4,010.С 53.3 75,0 . 64.5

дегэнерирванных

н/яйцеклетки %

0.810,11

15.1 0,810.11 15.1

(*)-Р<С,05

■1.ЗЮ.19 0. 610,11 1.4±С 18

■ 22.6

22.0 12.5 1.110.17 С. 650.11

16.7

12.5

0,310*13 12.9

легск не превышал 12.5«. Применение препаратов в суммарной дозе 120с И,Е. незначительно уединило число животных, реагирующих полисвуляцие^ и среднее число овуляций на донсра. но число дегенерированиях' эмбрионов увеличилось ДО 22,6%.

4.2.2 Полковуляторная реакция доноров различных пород.

Известно, что животные различных пород обладают различной генетически обусловленной плодовитостью проявляемой при индуцировании вуяяцни с■ помощью экзогенных гокадотропинов. Поэтому исследования ко

изучению отвёгшж реакции мясного скота на введение гормональных пре-Гпа^атовлмеет научное и* практическое значение.

. 5 ходе эксперимента на коровах симментальской, калшцкой, герс* Форд, казахской "белоголовой и абердин-ангусской пород установлено, ч* от 64,3 до 6Э. 2% доноров от числа обработанных, июли 3 и более свул: ций на яичниках (табл. 12). В группе коров шишкой породы среди число овуляций"на донора (7,1*0,39) было несколько ниже по сравнений

Таблша 12

Результати гормонального вызаюния полмвуляии у доноров < различит ворох.

Показатели Порода корое-доноров

сшмент. калмоос. гарафорв кааахск. авер.*"

■■"- белого*. ангу

Обработано животных "' 29 56 34 87 39

Число доноров с

поли овуляцией 20 36 23 60 2?

Процент от числа ,.

обработанных 69,0 64.3 67.6 6^.0 69.2

Среднее число овуляций

на донора 8.610.63 7.1«0,39 8.9*0.61 8.8*0.37 10.0*0.64 Получено в среднем , ^ :

на донора эмбрионов г ■-,"■■■ 1

И Н/Яйцеклеток 6.1*0.45 6,9*0.38 7,3*0,5 7.1*0,3 9,0*0.58 . в 'т. ч. нормальных ■ ,

эмбрионов 4,9*0,3 3,1*0,22 3,3*0,23.3,5*0,15 4;9*0,31 X 80,3 44.9 45.2 49.3 54.4

дегенерированиы* 1.0*0,27 1,1*0.17 1.9*0.29 2.0*0,18 1,5*0.23 * 16,4 16,0 26,0 28,2 16.7

• н/яйцеклеток 0.2*0.17 2.7*0,22 2.1*063 1,6*0.16 2.6*0.32

% 3.3 39.1 28.8 22,5 28.9

, (•)- р<о.С5 .../;:.;*:'■. - -

остальными кивотнши. Наиболее высокий показатель по числу выхода нор : мальных эмбрионов на донора получен в группе коров симментальской по роды (80,351) от числа извлечений,, что по сравнении с остальными подо-

amonnu группами доноров в 1.5-2 раза больше. У доноров абгрдин-ан-гусской породы отмечена тенденция к увеличению числа нормальных эмбрионов. -'■■■.:

В груше доноров калмыцкое и аберяино-акгусской пород число неоплодотворенных яйцеклеток достигало 39.1% И 28.9%. ЧТО достоверно вше.' чем у остальных животных (Р<0,05). Вероятнее всего это можно объяснить тем. что животные вше указанных пород имеет легко возбудимый тип нервно« системы, что приводит во время осеменения к стрессу й снижению оплодотворяемое« явиеклеток. .

. 4.2.3. Влияние сезонного фактора иа результаты полиовуляпии и качестееимв состав эмбрионов.

Одной из биологических особенности іфупвого рогатого скота мясных пород является віфажвнімя сезонность разіиоження... ВариаОкльность показателе® гормонального индуцирования полиовуляпии и результатов, энбриопересадок в течение года является сдерживаююми Факторами вкеи-решп метода трансплантации эмбрионов в практику мясного скотоводства.

Днадезкруя экспериментальные данные по гормональному вызыванию пожовуляцю у 242 коров и телок доноров получено, что при сравнительно олшакпвом числе животных с полиовуляцией, показатели выхода нор-мяльных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток в среднем на донора различи*(тасл, 13).

Наибольшее число нориаАиых эмбрионов получено осенью. При среднем числе овуляций на донора 7.0t0,34 получено 4,5*0.22 качественных эмбрионов яш 75. OX or числа извлечение. Разница по числу извлеченных эмбрионов, полученных осень» достоверно вше по сравнению с весной (Р<0.05). в зимнее время, когда у большнства «квотных несколько снижена поломи Функция, возникает сложности в отборе и осеменении доноров. что приводит к увеличении числа неоплодотворенных яйцеклеток (АС 22.9»). в весашшя период года активизируется половая функция у животных. Ь »тот период среднее число овуляций на донора достигает 8.3*0,37. что достоверно вше по сравнению с осенне-зимним и летни» периодам (Р<0.01). однако, выход нормальных эмбрионов составил не более 48. IX. а число дегенермрованных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток достигает 31.5 К 20.4%.

Наиболее високая лрюивляемость эмбрионов получена в осенне-зимний период. Осенью, из числа пересаженных эмбрионов 51.8Х прижились, зимой этот показатель был несколько ниже к достигал 42,7Х. Весной при

Гі0лина із

Величина шдлшрордянсй по таовуллиик у лснорсв приживляемости эмбрионов по сезона*) гоїа.

Показатели Сезон г ■ода

зима весна лето ОСёНЬ

Обработано жизотных 48 "3 49

Число'доноров с

полиовуляпией 31 Зо 33 47

Процент от числа

обработанных 64.6 71.6 67, 3 70. 1

Среднее число овуляций <1 *

на донора 6.410,32 3.310,37 6. 5±0, 4

Получено в среднем на

донора эмбрионов и

л/яйцеклеток 3,110.3 5.410.2Є 5,310,3

в т.ч. нормальних *

эмбрионов 4.010.28 2.610.22 3,9Ю, 29 4.5го,:;-

% 65.6 48. 1 73,г 75, 0

дегенерированных 0,710.15 1.7Ю.17 I, -.-±0.15

• % 11.5 31.5 17.0 16.7

н/язцеклетки 1,410.14 1,110,19 0.510,?1 0. 5+0, 10

22.9 20.1 9.4 8.3"'

Число реципиентов 89 64 75 112

Пересажено эмбрионов 89 71 79 115

Стельных реципиентов 38 ф 20 21 ■5В £

Процент стельности 42,7 31.3 £8,0 51,Я

(»)- Р<О.С5; (**) - р<о,01

живляемость эмбрионов составила 31,355. в летний период этот показатель не превышал 28,0%. Низкая приживляемость эмбрионов в летн;:й период объясняется преобладанием высокой температуры енешей среда и ограниченностью травостоя на пастбищах, что характерно для зон «ясного скотоводства России и Казахстана.

- 27 -

4.2.4. Влияние совместного содержания коров-матерей в телят на результаты полиовуляций? ~~ ^

Совместное содержание- коров-матерей и телят на подсосе является одной из особенностей технологии мясного скотоводства, .которое-увеличивает продолжительность лослеотельного периода, . сервис-период и снижает оплодотворяемость маток.

В опыте использованы коровы с продолжительность» подсоса до 3 месяцев. от 3 до 5 и более 5 месяцев. Контролем служила группа коров без телят, во всех группах возраст доноров был одинаковым,-^ возраст телят от 2.5 до 6 месяцев.

Установлено, что животные с телятами ка подсосе'по веек показате-

Таблица 14

Влияние подсоса на результаты гормонального вызывания .ь.. полиовуляции у коров.

Показатели Без телят Продолжительность подсоса

(контроль) •, (мес.)

до 3-х 3-5 . ' - более 5

Обработано животных 48 56 " 62 : .

Число доноров с Г- •

полиовуляиией 40 ■ 37 44 ■ 50 Ч

Процент от числа

обработанных 83.3 ■ 66 л 71,0 ' 67,6

Среднее число овуляций *

на донора . - : 10.210,64 7.140.72 ■6,840;45 4Ю, 45

Получено в среднем

на донора эмбрионов

и не оплодотворенных г, . .

яйцеклеток 6. 3+0. 34 5,710,71 ' 5.910.45 " 6.410.59

в т.ч. нормальных ***

эмбрионов 4.9+0.23 3,110,62 ■ 3,'640. "35 ' 3.6Ю.40

77,8 54,4 61,0 '■;■ 56,3

дегенерированных 0,610.18 1,410,19 1,040.54 - - 1.310.93

% 9.5 24.6 17,0 20.3

неошюдотворенных

яйцеклеток 0,8+0,14 1.210.21 1,340,21 . 1,540.45

12.7 21.0 ■22.0 23.4

<•> - Р<0,05; (*«*) - Р<0,001

ям явно уступали контрольной группе коров без телят (табл.14). -■ """"""В-Т^уппе : коров без телят среднее число овуляций составило 10.210.64. а выход нормальных эмбрионов равен 4.910.23 или 77,8* от общего числа извлеченных зародив ей. что достоверно вше. по сравнению с другими группами подопытных животных (р<0,05: р<0.001).

Продолжительность подсоса на момент индуцирования полиовуляции не оказывает заметного влияния на конечные результата. При подсосе от 3 до 5 и более месяцев среднее число овуляций на донора было в пределе от 6.410,45 до 7,110,72, а выход нормальных эмбрионов не'превышал , 3.6І0.35 ИЛИ 61, ох от числа извлечений.

с целые преодоления отрицательного воздействия подсоса на воспроизводительные функции животных бая применен кратковременный отъем телят на 6.12.24 и 48 часов перед началом гормональных обработок и осеменением доноров в индуцированную охоту.

По реэультатам эксперимента установлено, что отъем телят ст . .е-рейна 6 и 12 часов не оказывает заметного положительного влияния на результаты индуцирования" полиовуляции н качественный состав извлеченных эмбрионов (табл. 15).

В среднем на донора получено 6.6-6,9 овуляций, а выход качественных эмбрионов ее превши 3,710,32. При отъеме телят на 24 и 48 часов достоверно увеличивается среднее число овуляций (ДО 9.(^0,94) и выход нормальных эмбрионов (5.710,47) на донора (Р<0.05; Р<0.001). По-виданому. даав кратковремвяай отьем телят на 24 и 48 часов стабилизирует содержание ЛГ в крови коров-доноров и ограничивает действие гормонов, выделяющихся при сосании вдоени. Однако отъем телят на 48 часов отрицательно сказывается на их клиническом состоянии, более 70Х из них переболели расстройством желудочно-кивечного тракта.

Таким образок, для уменьшения отрицательного влияния подсоса на репродуктивну» функцию коров достаточно использовать . 24 часовой отъем телят перед началом гормональных обработок и осеменением доноров, что позволит уввл*ч1ш» рвзультаты гор««алкого индуцирования полиовуляшщ и выход нормальных эмбрионов у доноров без отрицательных последствий для молодняка.

Таблица 15

Результаты индуцирования полиовуляции у коров при регламентированном подсосе

Показатели Коровы по- Время отъема телят (час)

■ СТОЯННО С ■ '

телятами 6 . 12 '24 ; / 48

Обработано животных 36 49 ' 19« 12 17 Число доноров с

полиовуляцией 24 ■ 34 14 9 14 Процент от числа ■ 1

обработанных 66.7 69.4 73,7 75,0 82.3

Среднее число овуляций ■ ' ; * ^ »

на донора 6,410.45 6.6*0.52 6.9*0.45 9.8*0.64 8.9±0.82 Получено в среднем ■ "

на донора эмбрионов ^ • и не оплодотворенных

яйцеклеток 5,3*0.32 6.5*0,39 6,8*0.41. 8.8*0.37 7,6*0.25 .

в т.ч. нормальных ...• - *** . • ***

эмбрионов 3.1*0,36 3,1*0.53 3.-7*0,32 5,4*0.47 5,7*0.43

. % . 58.5 47,7 54.4 61.4 75.0 ' '

дегенериїзованша 0.440.30 1,0*0.24 1.8*0,19 1,5*0,42 1.^*0,21

'■'."' * ' ;."" .7,5 . . 15.4 . 26.5 17,0 14.5

неоплодотворенных . '

Яйцеклеток 1.840,14 2,4*0.22 1.3*0,17 1,9*0.28 0,8*0,23

* 34,0 36,9 19.1 . 21,6 10.5

(»)- Р<0,05; {»«•)- РС0.001

4.2.5. Осеменение коров и телок доноров в индуцированную охоту при полиовуляции.

Результаты извлечения и качественный состав эмбрионов, полученных нехирургическим путем, во многом зависят от правильной организации осеменения доноров.

^ оптимальные сроки к кратность осемеяшия. воллестео я качеотвен-«¿Ггоетав^спержев, место*введения сперивев в половив пути санок является главенствующими факторами. определявших результаты оплодотворения яйцеклеток ■ качество эмбриовов у доноров.

В связи с этим ваш пооледуюе исследования были посвящены реше-. шт задач пооптимизашш технологических приемов осеменения доноров в индуцированную охоту о целью довивши результативности полиовуляции и метода трансдлантащш эмбрионов в налом.

По результатам исследований установлено, что способ осеменения доноров при полковуляцих существен* образом влияет на результаты оплодотворения.* качество извлекаемых заромей (табл. 16). Прм визоцер-викальнои способе оккшпаииа, когда одноразовая доза слерш вводится г лучшем случае за вторую складку мах* матки, оплодотеоряемость яйцек-

'. Таблица 16 " Влияние способа и кратаости осеменения доноров

на результаты извлечении »мбрионов.

... > --—...■'■

Показатели , Виэо-оервикальиый Ректо-цервикалыпй

Кратность осеменения

■ ..-',. ■; ; 1 2 \ 1 .2

I. I I.. ————— ... . — * ...—-......—

ЧИСЛО коров (0*258) 30 59 121 48 Число овуляций на ■

донора • 6.0*0.48 9.3*0.44 8.3*0,25 8.4*0.4

Получено эмбрионов И ... " н/яйцекдеток на

донора 7.1*0.43 8.9*0.42 7.7*0.23 8,0*0.38

в т.ч. нормальных •

эмбрионов 2.6*0,29 3,1*0,18 4,6*0,11 4,8*0,22

. ... * ; - 36.6 34,8 59,7 60,0 .

дегенерярованшх. 1.6*0.23 2.3*0,22 2,0*0,15 I; 9*0,23

* ' \ 22,5 25,9 26,0' ¿5.7 неоолодотворенных -/:;у . ■ яйцеклеток ; 2;9*0,31 3,5*0,22 .1,1*0,1 ; 1,3*0.16

* , . ' ' : 40.9 : 39,3 Ооподотворяемость' . у/..,;.- /,'.:

Яйцеклеток • 59,1 60,7 , 85,7 83,7

".. I (•••)- р<о,оо1 . ....'.'-.-■■ Л.'.','!''■^.г^1/:'-'."

леток не превышает 60,7%, а выход качественных эмбрионов находится в пределе 34,8-36,6%. При ректоцервикальном способе осеменения, когда обеспечивается глубокое введение спермы в половые пути самки, ошюдот-воряемость яйцеклеток достигает 85.7Ж. а выход качественных эмбрионов -60%. что достоверно выше, чем при осеменении доноров визоцервйкальным способом (Р<0,001).

Установлено, что при осеменении доноров в индуцирова1шую охоту одноразовой дозой спермы с содержанием не менее 50 млн, подвижных живчиков оплодотворяемость яйцеклеток достигает 84,7*. а выход нормальных эмбрионов равен 71,25?. При снижении числа подвижных живчиков в одноразовой дозе спермы до 25 млн. оплодотворяемость яйцеклеток снижается до 53,3%, а выход неоплодотворенных яйцеклеток достоверно увеличивается до 46.7%.

- Увеличение числа активных живчиков до 75 млн. в одноразовой доге спермы не влияет на выход качественных эмбрионов.

Следовательно при индуцированной полиовуляции ректо-цервикальное осеменение животных одноразовой дозой равной 5р млн. - подвижных живчиков обеспечивает до 85,7* оплодотворяемости яйцеклеток и выход качественных эмбрионов 4.8±0,2 на донора. При этом следует отметить, что более высокие показатели по оплодотворя емо ста яйцеклеток достигаЬтся при осеменении доноров в рог матки, выход качественных эмбрионов достигает 4.940.26 в среднем на донора. :: . : : ■ ■

Вариабельность оплодотворяемости яйцеклеток в индуцированную охоту зависит от многих факторов, в том числе от типа нервной системы животных-доноров. Стрессовые.. ситуации, возникаемые. при искусственном* осеменении, приводят к снижению оплодотворяемости яйцеклеток. цроСенкс у животных с повышенной возбудимостью. ;

На двух породах мясного скота:' калмыцкая и казахская белоголовая, противоположных по типу нервной системы, были проведены исследования по; изучению оплодотворяемости доноров при искусственном и естественном осеменении. Искусственное осеменение проводили ректоцервикальным способом с помощью одноразовых инструментов, естественное осеменение доноров осуществляли быком ручной случкой.

В группе коров калмыцкой породы при искусственном осеменении в среднем на донора получено з.о±о.09 нормальных эмбрионов, что составляет 32,6% от.числа извлечений и общая оплодотворяемость яйцеклеток не превышала 59.8Ж (табл.17).

У доноров казахской белоголовой породы при искусственном и естественном осеменении выход качественных эмбрионов составил 55,4%, а

- Зк.

~*лодотворяемость яйцеклеток достигала 78.4)6.

Втруппе.^ доноров калмыцкой породы при естественном осеменении, когда стрессовые ситуации сведены до минимума, оплодотворяемость яйцеклеток возрастала до 76,2%, а выход нормальных эмбрионов - 4,7+0.24 или 56, ох от общего числа извлеченных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток, что на 23,4Ж больие. чем в группе доноров аналогичной породы при искусственном осеменении и эта разница достоверна ( Р<0,01).

Таблица 17

Сравнительная оплодотворяемость доноров при искусственном и естественном осеменении.

Показатели Осеменение

Искусственное Естественное-

Порода доноров

калмыцкая казахская ' калмыцкая казахская белоголовая белоголовая

Число доноров: 151 107 42 * 54

Среднее число ову-

ляций на донора 9.240.25 8,640,25 8.140.41 9.640, 43

Получено эмбрионов

и н/яйцеклеток на

донора 9,2+0.25 7.440,25 8.440.43 9.240.41

в т.ч. нормальных **

эмбрионов 3.040.09 4.140,12 4.740.24 5:140.23

% 32.6 55,4 56,0 55.4

дегенерированных г, 540.13 1,740.13 1,740,20 2.140.20

X 27.2 23,0 20.2 22,8

н/яйцеклеток 3.740.15 1.640,13 2,040,22' 2.040,19

% , 40,2 21.6 23,8 21,8

Оплодотворяемость

яйцеклеток (55) 59.8 78,4 76,2 78.2

<*»)- Р<0.01

- 33 -

5.3.1. Нехирургическое извлечение, поиск, оценка качества и пересадка эмбрионов.

Биогезшологический метод нехирургического извлечения эмбрионов должен быть простым, надежным и эффективным при работе как в стационаре животноводческих ферм, так И В полевых УСЛОВИЯХ ОТГОННОГО ЖИВОТНО" водства. Кроме того, он должен быть безопасным для здоровья животных, с тем, чтобы многократно использовать их в качестве доноров эмбрионов;

Большинство приборов, ранее разработанных, предназначены для не; хирургического извлечения эмбрионов у молочного скота. Существующий физиологические и анатомические особенности органов воспроизведет)^ мясного скота послужили основанием для разработки специального прибора-катетера для нехирургического извлечения эмбрионов у мясных коров Л телок. В результате длительных поисковых исследования разработан экс-

Таблица 18

Результаты нехирургического извлечения эмбрионов катетерами различных конструкций.

Показатели

Типы катетеров

"Кассу" "Нсйштадт-Айш" ВИЖ Опытный

образец

Число доноров Введено среды в оба рога (Ж)

Извлечено среды от количества введенной (X) Среднее число овуляций на донора

Извлечено эмбрионов и н/яйцеклеток в среднем на донора Процент извлечений от числа овуляций Получено нормальных эмбрионов в среднем на донора

В процентах от общего числа зародышей

53

100

90.1

8,910,40

6.410,29 71,9

2,910.23

45.3

77 100 96,3 8,810,33

7,210,27 81,8 .

3.4±0,13 47.2

46 100 95,1

74 ■ 100 98.9

8.010.39 7.710.3

7.510.36 7.410,28

.93.7 96.1

3.310.16 4.2±0,16

44.0 56.7

"ер:; ментальный вариант устройства для нехирургичесхого извлечения

кзрое И г ело К мясных ЇЇОрОД (авторское свидетельство 1)1762914 і. з сравнительных исследованиях по нехирургическому извлечению эмбрионов у лонорог катетерами' фирм Кассу, Нойштадт-Айш, ВШ а опытного образца установлено, что эффективность извлечения эмбрионов с помэаыс уотрой:теа /катетера / опытного образна в салу своих конструктивны:-: особенностей составила 56. і% от общего числа овуляшй, что на больше, чем при извлечении катетерам Кассу (табл.18). : лсмоаою опытного образна получено в среднем на донора 4*0,25 :-м:рп:ноз н е о пл о ло тв ор єн ч ых лйие:;летск, з том числе 4.2±С, 16 качественных ом'слонов. что значит ель не вше по сравнению с остальными группами полспіітньГ'і животных.

"лелулсд::.! езжкчи этапом технологии трансплантации являете« полог а качестза эмбрионов.

поиск эмбрионов проредят путем предварительного от- -нил промывной жидкости в термостате при температуре +З73с в тече-лл: ¿0 минут, удаления с помощью сифона верхней часта жидкости, а исследуя оставшуюся часть (до 100 мл) под бинокулярной лупой при 20-кратном увеличении. Обике затрату зремєни на поиск эмбрионов составляют 45-50 минут.

Разработанный наїли принципиально новый по кенртрукшш вариант устройства для Фильтрации эмбрионов крупного рогатого скота швт.евид. ¡¡1655486) позволяет ио ¡стачить такие непроизводительные операции технологии как отстаивание промывной лидкости к ее отсасывание сифоном. Ъ итоге общие затраты времени на операции по обнаружению эмбрионов сократились кг 36,7 кинут.

При 156 овуляциях получено 151 эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. что составляет 96.8%. в контрольной группе извлекаеыость зародышей достигала лишь 33,8%.

Таким образом наряду с положительными технологическими качествами, применение разработанного Фильтра сокращает поиск эмбрионов в 4 раза по сравнен!« с общепринятой методикой, обеспечивает максимальное извлечение зародышей из промывной жидкости.

Оценка качества эмбрионов является последующим этапем технологии трансплантации.

Наблюдаются широкие вариации качества эмбрионов не только у разных доноров, ■ но даже у одного и того же. При зтом отмечаются существенные различии морфологического состава эмбрионов у доноров различных пород.

. Поэтому в наших исследованиях били изучены морфологические и биологические особенности эмбрионов, полученных от коров и телок мясных пород с полиовуляцией.

По результатам нехирургического извлечения у коров и телок доноров мясных пород получено; что из обоего числа 766 эмбрионов и яйпек-леток 70.45? были нормальные. 17. IX - дегенерирозанные и 12,5% - неоп-лодотг -у энные яйцеклетки.У телок-доноров по сравнению с коровами йыю меньше нормальных эмбрионов и больше неоплодотворенных яйцеклеток

Наблюдаются некоторые различия в скорости развития одновозраст-ных эмбрионов у доноров разных пород.У мясных доноров на седьмой день индуцированного цикла поздние морулы, от общего числа извлеченных зародышей. составляют 65,8Х, в тоже время, у молочного скота этот показатель не превышает 36.055. У мясного скота на стадии ранней морулы наблюдается достоверно низкий процент (23.8±4,2) эмбрионов хорошего качества (Р<0,001) и относительно высокое число удовлетворительных зародышей (66.7±7,19) (Р<0.01). Более поздние стадии характеризуются достоверным увеличением числа эмбрионов высокого качества к снижением числа удовлетворительных зародышей (Р<0.01). .

следует отметить, что эмбрионы на стадии морулы имеют более рыхлую структуру, связь между бластомерами заметно ослаблена.

5.3.2. Применение метода трансплантации эмбрионов с целью получения двойневости.

Большинство исследователей пришло к единому мнению, что наиболее результативный метод получения двоен является пересадка двух эмбрионов им подсадка зародышейранее осемененным животным. Но проблема получения двойневых отелов, имеющее особое значение в мясном скотоводстве не решена в полной мере.

В исследованиях по разработке оптимальных вариантов получения двойневых отелов коровам и телкам реципиентам проводили подсадку эмбриона. пересадку двух эмбрионов ипсилатеряльао, контрлатерально и билатерально. При этом учитывали процент стельности реципиентов, число двойневых абортов и отелов, продолжительностьпослеотельного периода, и последующую оплодотворяемость ЖИВОТНЫХ. *' ^ :

При пересадке одного эмбриона ранее осемененнш животнш было:получено 56,917,36 процентов стельности, а число двойневых отелов достигало 75.0И0.8Х. что достоверно вше. чем по остальным группа* животных (Р<0.01; Р<0..05) (табл. 19) .

- зь

Таблица 19

Результаты получения двойневости путем пересадки или подсадки эмбрионов

Показатели Подсадка I Пересадка 2-х эмбрионов в

эмбриона ■ один рог по одному в оба рс;

Число реципиентов 51 98 130

Пересажено эмбрионов 51 196 260

Стельных реципиентов 29 * і 41 51

Процент стельности 56,9+7.36 41,8110,1 39,2+7.

Число двойневых абортов 1 10 2

% 3,514,42 24.419, 49 3,915,'

Из числа стельных реци-

пиентов отелилось 28 31 49

число двойневых отелов 21 13

Процент двойневости 75. ОНО. 3 42,0116,6 59. 213.;

<*«)- Р<0.01; {«) - Р<0.05

Трансплантирование двух эмбрионов в один рог увеличивало числі абортов до 24,4±9.49, а процент двойневых отелов не превышав 42,0116,56. По-видимому, это связано прежде всего с тем, что рог матки КирСЕЫ или телки не в состоянии обеспечить условия развития двух эмбрионов. что и приводит к абортам. При пересадке по одному эмбриону р оба рога процент стельности снижается до 39.217, И, что вероятнее всего происходит по причине повышенной возможности заноса инфекции к травмирования половых путей самок, приводящих к гибели эмбрионов.

Таким образом, . пересадка эмбрионов ранее осемененным животным позволяет увеличить стельность более чем на 15Ж. а число двойневых отелов до 75%. Вероятность перегулов за счет осемененных животных снижается до минимума.

При изучении влияния двсйневых отелов на репродуктигные функции коров-матерей и сохранность молодняка нами установлено, что в группе животных при отеле двойней чксло абортов и задержания последов било в Л.5-2 раза Дольше по сравнению с животными отелившимся свинцом (табл.20). '

Таблица 20

Репродуктивные функции реципиентов после отела двойней и сдшщои.

Показатели Отелы

двойней одинцом

Число стельных животных (п) 63 54

*

3-5.613,13

51-94,413,13 *

5-9,8±4.52 51

3-5,912.71 2-4,112,78 46-90.213.67

0.8Ю, 12

Такие показатели, как процент падежа и сохранности телят в обоих группах были практически одинаковыми. Но основной показатель как средний выход телят на одну корову в первой группе подопытных животных был

Таблица 21

Воспроизводительные функции коров после отела двойней и одинцом.

Показатели Отелы

двойней одинцом

Число животных (п) 63 54

Средняя продолжительность

инволюции матки (дн) 59.513.42 57.112.12

Наступление первой охоты

после отела (дн) 78.014.48 62.512,81

Оплодотворяемость от 1-го

осеменения (X) 51,218.7 58.616,70

Индекс осеменения 2.2310.26 1.9610.19

Число абортов (П-Зь) 8-12,715.68

Число отелов (п-Э£> 55-87,315,68

Задержание последа (п-%) 11-20,0+7,52 Получено телят (п) 110

ИЗ НИХ мертворожденных(п-%) 7-6.413,32 Пало телят (п-%) 6-5,813,02

Сохранность телят (п-Ж) 97-88,214.28 Средний выход телят на *

I корову (п) 1.5Ю.21

(*)-Р<0,05

на о, 7 теленка .аше, чей зо второй групие при отеле одинцси а эта раз '¡ада бчяа достоверной (?<0.05).

Вместе с 5тих средняя продолжительность инволгции матки у коро! после отела двойней и оданцом практически не отличалась, но время наступления первой охоты после отела в первой группе животных было боле« продолжительным, чем во второй (табл.21). Показатели оплодотворяемостт от 1-го осеменения и индекс осеменения в обеих грушах животные бьш равнозначными.

6.4.1. Режимы подготовки, замораживания и оттаивания эмбрионов, их приживляемость.

Технология криоконсервирования биологических объектов требуег строго определенных режимов подготовки замораживания и оттаивания. Пр! отклонениях или неправильно подобранных режимах как правило, отмечается нарушение морфологических качеств зародышей.

В исследованиях по криоконсервированию эмбрионов нами были сделаны попытки оптимизации вариантов подготовки и замораживания зародыше? мясных пород, т.к. большинство аз существующих рекимов были' разработаны для эмбрионов молочного скота.

В результате проведенных исследований установлено, что четырехступенчатое насыщение 1.0 к 1,4 молярными растворами глицерина является наиболее оптимальным для эмбрионов мясного скота, что позволяет получить высокие результаты качества зародышей после оттаивания. Из числа замороженных и оттаянных эмбрионов от 79.7 до 82,3% зародышей были морфологически нормальными. При одноступенчатом насыщении эмбрионов 1,4 М глицерином снижается число нормальных эмбрионов после оттаивания на 14,2Ж. В этом же эксперименте установлено, что криозащитные свойства этиленгликоля для эмбрионов мясного скота недостаточны по всей видимости в силу своих химических свойств. Разница по числу нормальных эмбрионов, обработанных глицерином и этиленгликолем, составляет 18%, что вполне достоверно (Р<0,05).

Экспериментальным путем установлено, что конечная температура охлаждения эмбрионов перед погружением их в жидкий азот, не оказывает существенного влияния на качество и приживляемость зародышей. При* достижении температуры -20°, -36° и -60°С с помощью замораживающих устройств и последующего хранения их в жидком азоте после оттаивания 69,0%: 71,8%* и 70,1% эмбрионов были морфологически нормальными. После нехирургической пересадки коровам и телкам реципиентам приживляемость

- 39 -

эмбрионов составила43.1; 38,4 и 45.6Х соответственно.

Аналогичные результаты по числу нормальных эмбрионов после оттаивания и их приживляемости получены при быстром методе замораживания зародышей в парах жидкого азота. Иь 99 замороженных и оттаянных эмбрионов 69,7% были морфологически нормальными. После нехирургической пересадки стельность реципиентов составила 37.75Е.

Установлены породные различия в устойчивости эмбрионов к перепаду низких температур. Определено, что наиболее чувствительны к низким температурам эмбрионы калмыцкой породы. Из 113 замороженных и оттаянных эмбрионов только 58,4% были морфологически нормальными, что на 18.IX меньше, по сравнению с эмбрионами породы симментальская и на 15.2%, по сравнению с зародышами казахской белоголовой породы.После оттаивания эмбрионов пород герефорд. салерс и абердино-ангус число нормальных зародышей колебалось от 69.8 до 71,255, т.е. было на одном уровне.

По результатам эмбриопересадок отмечена тенденция увеличения приживляемости зародышей симментальской и абердичо-ангусской породы Еде 48.9% и 43,1% соответственно). Наименьшая стельности реципиентов отмечена при пересадке эмбрионов порода салерс (37.9ЭЕ).

Установлена прямая зависимость приживляемости оттаянных эмбрионов от качества и стадии их развития. При пересадке морул хорошего (4 балла) и отличного {5 баллов) качества стельность реципиентов составил? 41,3 и 42.ОХ. Приживляемость морул удовлетворительного (3 балла) качества не превышала 31.9%, что на 9,4% и 10,1* меньше по сравнению с эмбрионами хорошего и отличного качества.

При пересадке бластоцист хорошего и отличного качества была поручена стельность реципиентов 48.2% и 62,5Ж. что значительно выше, чем при пересадке бластоцист с оценкой 3 балла (32.1%) и эта разница достоверна (Р<0,001).

7.5. Технологические и санитарные условия проведения работ по трансплантации эмбрионов.

При.разработке технологических и санитарных условий проведения работ по трансплантации эмбрионов мясного скота мы исходили из поставленных перед нами задач и возможностей их реализации.

Были сделаны попытки усовершенствования технологии проведения работ по трансплантации эмбрионов с целью повышения ее эффективности и возможности применения в регионах России и Казахстана. При усоверюенс-

твовании технологии проведения работ по трансплантации эмбрионов в 'стационарных условиях, в опытном хозяйстве Всероссийского научно-исследовательского института мясного скотоводства (г.Оренбург) при нашем консультационном участии был построен центр по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Объемно-планировочные решения центра обеспечивают полный цикл технологии трансплантации эмбрионов мясных пород.

Мобильная форма организации работ по трансплантации эмбрионов требует создания определенных условий. Для этих целей нами предложена система прогонов и фиксации животных обеспечивающая спокойный перегон и безопасную работу с животными. Мобильная форма организации работ по воспроизводству стада методом трансплантации была использована в племенном заводе "Красный Октябрь" Волгоградской области и опытном хозяйстве Калмыцкого научно-исследовательского института мясного скотоводства (г.Элиста).

Возможна смешанная форма организации работ по воспроизводству стада методом трансплантации. При данном варианте на центрах (пунктах) необходимо иметь выездные подразделения специалистов для работы на фермах. Как правило эти работы проводятся по сезонам года в наиболее оптимальные сроки воспроизводства мясного поголовья с использованием в качестве лаборатории для работы с эмбрионами пункты искусственного осеменения или других помещений переоборудованных для этих целей.

В племенном заводе "Парижская Коммуна" Волгоградской области был разработан и апробирован один из вариантов смешанной формы организации работ по трансплантации эмбрионов. Предварительно пункт искусственного осеменения был переоборудован и переоснащен для работы с эмбрионами. Предложенная нами система загонов, расколов и фиксационных станков обеспечивает технологичность и безопасность работы с мясным скотом.

Разработанные и усовершенствованные варианта организации работ п< трансплантации эмбрионов мясных пород прошли апробацию в пяти хозяйствах России и Восточного Казахстана в течение последних шести лет.

Нами был сделан анализ степени влияния вариантов организации работ на результаты трансплантации эмбрионов (табл.22). При работе ь стационарных условиях 76,5% животных, от числа обработанных гормональными препаратами, реагировали полиовуляцией и в среднем на донора получено 7,7±о,18 овуляций. При этом получено больше на донора эмбрионог и яйцеклеток з(6.6+0.16), в том числе нормальных эмбрионов (4.6+0.II по сравнению с мобильным проведением работ. При комбинированном вари анте организации работ выход нормальных эмбрионов в среднем на донор

составил 4,040,4, т.е. был практически одинаковш с аналогичными показателями при работе в стационарных услрвиях.

При пересадке эмбрионов в стационарных условиях наблюдалась заметная тенденция увеличения процента стельности реципиентов.

Таблица 22

Влияние вариантов организации работ на результаты трансплантации эмбрионов.

Показатели Варианты организации работ

Стационар- Мобильный Комбини-ный рованный

Обработано животных (п) 247 200 121

Число доноров с полиову-

ляцией <п > 189 136 85

Процент от числа обра- 1

ботанных 76.5 68.0 70.2

Среднее число ову-

ляций на донора 7.740,18 6.840.19 7,1±0.25

Получено в среднем на

донора эмбрионов

и н/яйцеклеток 6.6±0.16 6.540.18 5,940,21

в т.ч. нормальных

эмбрионов 4.640.11 3.940,11 4,040,4

% 69.7 60,0 67.8

дегенерированных 1,140,08 1,040.08 0,9±0.10

% 16,7 15.4 15.3

н/яйцеклеток 0. 940.07 1,640, И 1,040,11

% 13.6 .24.6 16.9

Проведено энбриопересадок 367 241 146

Стельных реципиентов 172 89 59

Процент стельности 46,9 36,9 40,4

Получено телят 163 84 56

- с -выводы

1, сезониие ііуолвленне деловое циклики является одной из особен ностей воспроизводительной функции мясного скота. Наиболее оптимальну дременем года для реализации воспроизводительных возможностей маточно* jha поголовья является , осень.

2.; Подсосный метод содержания телят с матерями увеличиваетпродолжительность послеотельного периода и сервис-период в 1,5-2 раза, а индекс осеменения- коров достигает 2,6±0,12. что на 30% больше, чем в •группе коров без телят.

Э.оптимальный возраст использования мясных коров в качестве доноров эмбрионов является от 3.6 до 9,5 лет, что обеспечивает стабильные результата по числу овуляций {8.1 1 0,27) и выходу нормальных эмбрионов (4,4±0,15) на донора.

4. Определены оптимальные дозы гормональных препаратов для инду-

■; цирования полиовуляши - у мясного скота: для ГСЖК она составляет от 2000 до 3000 И.Е., ФСГ - 42 мг. фоллитропина - 1100 И.Е.

5. Совместное содержание коров-матерей и телят на подсосе существенно снижает результаты индуцирования полиовуляции у доноров. Кратковременный отъем телят от матерей на 24 часа перед началом гормональных обработок и осеменением доноров достоверно увеличивает овуляторную реакции яичников (Р<0.05) .до 9.810.64 и выход качественных эмбрионов достигает sU±0,47 в. среднем на корсву-донора (Р<0.001).

•6. Ректо-цервикальное осеменение доноров в индуцированную охоту обеспечивает 85.7% оплодотворяемости яйцеклеток.и выход качественных эмбрионов 4,8±0.22. что составляет 60,0% от общего числа извлечений.

7. Усовершенствована технология нехирургического метода извлечения эмбрионов с помощью разработанного устройства для этих целей. Опытный образец катетера, в силу своих конструктивных особенностей, обеспечивает 96,1% извлечений от числа овуляций, без отрицательных последствий на воспроизводительные возможности и плодовитость коров-доноров.

8. Разработана технология обнаружения эмбрионов в промывной жидкости с использованием принципиально нового варианта устройства, предложенного нами. Новая технология сокращает время поиска эмбрионов в четыре раза и процент обнаружения эмбрионов достигает 96,8%.

9. Устамвлены некоторые морфологические особенности зародышей мясных пород на определенных стадиях их развития. Эмбрионы на стадии морулы имеют более рыхлую структуру и связь между бластомерами заметне

ослаблена. Поздние морулн отличаются трудноразличимы« друг от фуга бластомерами с тенденцией к образованию компактной массы.

Ю. наиболее рациональный вариант получения двойневых отелов путем пересадки одного эмбриона ранее осемененнш животным обеспечивает 56.9ss стельности реципиентов и ло 75. ох двойневых отелов.

11. Разработанный вариант ускоренного режима замораживания эмбрионов до -20°с с последующим погружением в жидкий азот обеспечивает сокращение времени замораживания зародышей на 1 час при сохранении их жизнеспособности 69,ох и средней приживляемости до 43.ist. Быстрый режим замораживания эмбрионов со скоростью охлаждения 5°С/мин от +20° до -50°С в парах жидкого азота позволяет получить после оттаивания 69,7? качественных эмбрионов, приживляемость которых после нехирургической пересадки составляет 37,1%;

12. Установлены породные различия в устойчивости эмбрионов к ннз-ким температурам. Только 58.4% эмбрионов калмыцкой породы после оттаивания сохраняют свои морфологические качества, что на 18,1 и 15.2л ниже по сравнению с зародышами породы симментальская и казахская белоголовая,

13. Качество оттаянных эмбрионов взаимосвязано с их прижиеляе-мостью. При пересадке бластоцист хорошего и отличного качества стельность реципиентов достигает 48,2% и 62,535. что достоверно выше (Р<0.001) по сравнению с эмбрионами оценкой 3 балла. Стадия развития эмбрионов практически не оказывала влияния на их приживляемость.

14. Разработанные варианты технологии воспроизведения маточного поголовья мясных пород методом трансплантации, обеспечивают гормональное индуцирование полиовуляции у 68.0-76,5* обработанных животных, средний выход нормальных эмбрионов от 3.9±0, и до 4.6+0.11 или 60, 0;~ и 69.735 от общего числа извлечений, что является вполне удовлетворительными результатами для мясного скота. При этом стельность реципиентов при нехирургической пересадке свежеполученных и замороженно-оттаянных эмбрионов достигает 46.9%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Разработанная технология трансплантации эмбрионов приемлема для практического использования в мясном скотоводстве регионов России и Казахстана.

2. Для повышения результативности гормонального индуцирования по-лиовулящщ и оплодотворяемости яйцеклеток у доноров необходимо прово-

дить кратковременный отъем телят от матерей на 24 часа перед началом гормональных.обработок и.осеменением коров-доноров.

3. Для нехирургического извлечения эмбрионов предлагается устройство. KOTORoe в силу своих конструктивных особенностей обеспечивает максимальное извлечение эмбрионов без отрицательных последствий на воспроизводительные возможности коров-доноров.

4. Предлагается принципиально новый вариант устройства для фильтрации эмбрионов из промывной жидкости, который сокращает время поиска эмбрионов в четыре раза при их максимальном обнаружении.

5. С цель» увеличения числа двойневых отелов и выхода телят в среднем по стаду предлагается проводить пересадку эмбрионов ранее осемененным животным.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ОСНОВНЫМ ПОЛОЖЕНИЯМ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Гавриков A.M., Иаслев Ц.. Алексеенко А., Кракосевич А., Чичи-лов А. Резултати от използуването на крови от месодайни породи в ка-чеството на донори за получаване на ембриони //Животновъдни науки 1988 80-82.

Г

2. Алексеенко А.. Гавриков А... Кракосевич А., Маслев Ц. .Прилагане на допъянителни биотехнически методи в програмата за трансплантация на эмбриони //животновъдни науки, 1988 N6. София. С. 84-86.

3. Алексеенко А.. Гавриков А.. Маслев Ц., Карадочев М.. Ралчев И.. лалев И, Изучаване на връзката между концентрацията на прогестерона в кръвта и овариалния отговор при крави - донори на ембриони //Ш-вотаовъдни науки. 1989. Я 8. София, С. 63-65.

4. Гавриков А.. Маслев Ц., Алексеенко А., Карадочев М. Някои аспекта на криоконсервацията и реанимацията на говяади ембриони// Животновъдни науки. 1989, Н8. СОФИЯ. С. 66-69.

5. Гавриков A.M.. Алексеенко А.Н., Маслев Ц.И. Эффективность режимов замораживания и оттаивания эмбрионов//Зоотехния, '1989, И 7. с. 54-55. .

_ .6. Гавриков А, , . Маслев Ц., Дронин А. Усьвьршенствуване на техно-гинята за нехирургично получаване и трансплантация на ембриони при ^ іфави//Ливитновьдни науки. 1990. N8. София. С. 17-20.

, 7. Маслеу Ц.. Влахов К.. Ралчев И., Карадочев М.. Лалев И., Гавриков А.. Алексеенко А., дронин А,- Методически--указания за трансплантація на ембриони при месодайни породи говеда. ;Троян. Болгария. 1990.

С. 1-32.

л 8. Сергеев Н.И., Гавриксв А.И., Алесеенко А.Н., Дронин А:П.. Ик» лев Ц.И;. Корецкая Л.И. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов мясного скота. Дубровицы. 1990. С. 1-40. .

9. Гавриков А.М.. Маслев Ц.И., Алексеенко A.ii.. фонин А.П. Ускоренное воспроизведение высокопродуктивного мясного скота методом трансплантации эмбрионов // Доклады ВАСХНИЛ, 1991. N2. С. 40-42.

Ю. Гавриков А.М., Кракосевич А. Н., Адексеенко А.Н.. Маслев Ц. УстройЬтво для фильтрации эмбрионов / Авт. сайд. N 1655486 от 15 февраля 1991 Г.

11. Gavrlcov А.К., MaslevT.J., AleKseer.Ro А.К.. Dronln А.Р. Ас-celerated reproduction of hlgh-yleldlng beef cattle 1эу embruo transplantation method. New York. N. Y.Allerton Press Soviet agrlcultural sciences 1991. P. 39-41.

12. Гавриков A.M., Сергеев Н.И. Устройство для нехирургического извлечения эмбрионов у буйволиц и коров / Авт. свид. H1762914 ОТ 22 мая 1992.

13. Гавриков А.К., Абуов А.. Кинзеев В.. Мукминов М. Осеменение коров-доноров мясных пород при суперовуляции // Молочное и мясное скотоводство. 1992. N3. С. 16-17.

14. Гавриков А.К.. Алексеенко А.Н..Маслев Ц.И. Суперовуляторная реакция у коров-доноров на экзогенные гонадотропины // молочное и мясное скотоводство. 1991> N6. С. 25-26.

15. Гавриков А.М., Мукминов M.М.. Кинзеев В.Н. Индивидуальные и породные особенности коров-доноров мясных пород при гормональном вызывании суперовуляции, сборник научных трудов, г. Оренбург. 1992, С. 34-37.

16. Гавриков А.М., Маслев Ц.И. Особенности использования мясных коров в качестве доноров эмбрионов //Зоотехния 1992. N9-10, С. 34-35. .

17. Гавриков А.М.. мукминов м.м.. Кинзеев В.Н.. Юлдашев U.C. Критерии отбора и подготовки мясных доноров к суперовуляции, тезисы докладов XII Межрегиональной Научно-практической конференции. 31 марта -2 апреля. Оренбург. 1993. С. 54-55.

18. Гавриков А.М., Сергеев Н.И. Методические рекомендации по отбору. подготовке к суперовуляции и осеменению коров мясных пород. Дубровицы. 1993. С. 1-24.

19. Гавриков А.М., кинзеев З.Н . Мукминов М.К.. Юлдашев U.C. влияние сезона года на результаты трансплантации эмбрионов // Молочное и мясное скотоводство. 1993. {15. С. 19-21.

20. Гавриков А.. Кинзеев В., Абуов А., Мукминов М., Басанов Е. Использование мясных коров в качестве доноров эмбрионов // Полочное и мясное скотоводство. 1993, Ш. С. 22-24.

21. Гавриков A.M., Смыслова H.И.. Тарадайник Т.Е.. Суменкова Н. Качество я прихивляемость эмбрионов // Молочное и мясное скотоводство. 1994, КЗ. С. 16-18.

22. Гавриков А., Дронин А. Прихивляемость эмбрионов мясных короз // Зоотехния. 1994, N7. С. 30-31.

23. Гавриков А.М., Сергеев Н.И., Прокофьев М.И., Павлов Е.А.. Со-веткин C.B. Технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве (Рекомендации). Москва. 1994. с. 1-61.

j

Подписано к печати 7.04,1995 г. Заказ 851.

Тираж 100 экз. Объем 1,9 уч.-иза. п.

ПМП ВИЖа