Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ КОРОВ МОЛОЧНЫХ И МЯСНЫХ ПОРОД

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ КОРОВ МОЛОЧНЫХ И МЯСНЫХ ПОРОД"



ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА /ВИ1/

На правах рукописи

ТАВЛАДА Наринкина Густаво

УСОВЕРИЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ КРИОКОНСЕРВЙРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ КОРОВ МОЛОЧНЫХ И МЯСНЫХ ПОРОД

03.00.13. Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п.Дубровицы, Московской области 1995 г.

Работа выполнена в центре по трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных кивотных Всероссийского научно-исследовательского института животноводстве.

* »

НцучшЯ руководитель - доктор биологических наук,

профессор И.И.Сергеев.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Б.П.Кононов;

кандидат биологических наук А.Н.Нолгородов.

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, Скохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Защита диссертации состоится " " декабря 1995 г., в 10 часов, нй заседании диссертационного совета Д 020,16.02 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область, Подольский

район, пос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЖа.

Автореферат разослан 41 " ноября 1995 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биол.наук

П.А.Науменко

- а -

I. ОБЗДЯ ШШШШЦ РАБОТЫ

Актуальность Повышение продуктивности скота, увеличение производства молока и мяса - продукция, жизненно необходимо Я для человека - актуальная проблема животноводства. Одна из отраслей науки, способной решать подобные задачи является биотехнология и оё основное направление - трансплантация эмбрионов.

Одним из главных путей перевода нетода трансплантации на промышленную основу является ирноконсервирование эмбрионов. Замораживание эмбрионов имеет большое значение как для практика сельского хозяйства, так и для, фундаментальных научных исследований. С помощь» этого метода возможно создание генетических банков, накопление необходимого числа однородных зародаией для молекулярно-биологических, биохишческих я других исследований, сохранение генетического фонда редких и исчезающее видов животных. Хркокон-сервирование эмбрионов позволяет осуществлять транспортировку зародышей на дальние расстояния, подбирать спонтанных реципиентов, соответствующих по половой циклике возрасту эмбрионов в проводить пересадку в условиях ферм, что значительно сникает стоимость программы трансплантации, так как отпадает необходимость в содержании большого стада потенциальных реципиентов.

В России метод трансплантации эмбрионов получил большое распространение в молочном скотоводстве. Его развитие и внедрение а практику ведения животноводства позволяет увеличивать коэЛ^пце-ент размноаения высокопродуктивных животных в 2,5 раза и повышать селекционный эффект на 25% (Николаев A.C., 1989; Сергеев H.H., Смирно» O.K., Шихов И.П.,1982; Сергеев Н.И., 1989). В мясном скотоводстве метод трансплантации находится пока на стадии изучения и внедрения. При проведении работ в данном направлении необходимо обращать внимание на приемы кряоконсервпрования эмбрионов коров и способы их усовершенствования, чему и посвящена настоящая диссертация.

Цель и задачи научной рабоуы. Основная цель исследований заключалась в усовершенствовании технологических приемов крио-консервирования эмбрионов крупного рогатого скота.

ЦЕНТРАЛЬНАЯ НАУЧНАЯ г,. с- г Моск. р

> L- ■ L J

Для этого решали следующие задача:

- Определить одтпмалыше решили замораживания зародышей;

- Выяснить влияние биологических, физических и механических факторов на гшзнеспособность пприкЕвляеглость зародышей;

- Определить влияние на жизнеспособность эмбрионов разных концентраций криопротектора глпцерпна с использованием сахарозы;

- Усовершенствовать технологию криоконсервкроэания эмбрионов культивированных ин витро.

Поставленные задачи решались путем проведения опытов на коровах и телках молочных и мясных пород.

Научная нрвизнг\. Изучена факторы, влияющие на назкеспособ-ность и прикивляемость эмбрионов крупного рогатого скота; определена зависимость ндзиеспособности я пркяивляешстп зародышей от количества эмбрионов, полученных от донора при одном вымыва-вш; от примененных реаинов охлаждения, типов заиораяявателей; концентрации криопротектора, Установлено влияние времени хранения эмбрионов в жидком азоте на их жизнеспособность после оттаивания. Доказана неустойчивость к кряоконсервированию культивированных пн'витро эмбрионов коров мясного направления.

ррак|тЕгее.с:-зя.зцдчимость работы. Заключается в определении эффективности замораживания эмбрионов на мобильных зшлора^вате-лях, что позволило использовать эти установка в условиях ферм с одинаковыми результатами жизнеспособности и прпживляшости после оттаивания как при затрагивавши юс на стационаротх затло-раживателях. Использование полученных данных о влпяшш техники и технология замораживания л оттаивания на жизнеспособность эьй-.'. рионов значительно снизят трудоемкость процесса криоконсервиро- ; ваияя и повысит производительность труда в несколько раз. Мате-пиалы могут быть применены 6 практической трансплантации для по-вшцеяия жизнеспособности эмбрионов после замораживания и оттаивания и их прикивляеыости при нехирургяческой пересадке,

Дгтппг^Ад работы. Материалы диссертации представлены в отчете центра по трансплантации эмбрионов с.-х. яиеотекх за 19СЗ-1994 гг. Докладывались на 2-й международной конференции по биотехнологии, г. Харьков, 1994 г., Первой межгосударственной ка-

учно-практической конференции до трансплантации эмбрионов, г. Брест, 1295 г. и опубликованы в яурналё "Зоотехния", 1095 г.

Об>ем рабо-щ. Диссертация изложена наиО страницах машинописного текста, иллюстрирована X! таблицами и ? рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материала, методов я результатов исследований, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает Ift? источников, в той числе tï.5 иностранных.

г. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ШЖДРВАНИЙ

Исследования проводились в центре по трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных дивотшх, опытном хозяйстве "Дубровины", агрофирме "Щапово", племзаводе "Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" Волгоградской области, а/о "Владимирское" и "Наэа-роэское" Красноярского края, п/х "Приютовсклй" (Башкирия) на эмбрионах, полученных от коров-доноров чернопестрой, абердинан-гусской и казахской белоголовой пород. В качестве реципиентов использовали телок случного возраста (18-20 месяцев) чернопост-. рой а красной голщтинской пород, клинически здоровых, без отклонений в репродуктивных органах в нормальной половой цикликой. Коров-доноров отбирали по племенной ценности, воспроизводительным качествам на основе данных зооветеринарного учета и по физиологическому состоянию половых органов, • ^

При отборе животных учитывали общее состояние организма, упитанность, физиологическое состояние репродуктивных органов и ответную реакцию яичников на гонадотропип. Эструс определяли во •время прогулка на выгульной площадке. В зимне-стойловый период одна раз в сутки, а в летний - два раза - утром и вечером, но наличию четко выраженного рефлекса неподвижности.

Зевотных перед началом гормональной обработки подвергали • повторному гинекологическому обследованию. Учитывали состояние матки, яичников и наличие в них яелтого тела и степень его выраженности. Для, гормональных обработок использовали животных с нормальным чередованием половых циклов. При обнаружении отклонений от физиологического состояния они исключались из опыта.

- Б -

После проведения ректального исследования на наличие желто- . го тела у доноров осуществляли гормональную обработку. Для этой цела использовала препарат ФСГ - фоллитрошш (Литва) в дозе 1200 НЕ. Обработку проводила на 8-12 день полового цикла, В исследовании была применена 4-х дневная схеыа гормональной обработки препаратом ФСГ с введением простаглакдина (эстрогена) в дозе 500 ;,жг,

Исскуственное осеменение коров-доноров осуществляю через 48 часов после введения острогала двухкратно с интервалом 10 часов даоГ-ной дозой замороженной, разбавленной спермой с активностью 5 баллов и концентрацией 25-30 млн/:.уг сперматозоидов в дозе. Эмб-рионн извлекали у коров-доноров нехпрурглческнм методом с использованием резиновых катетеров.

Сведенодученные и заморояенно-етталинне зародыш подвергали морфологической оценке о учетом стадии развития и качества под световым инвертированным микроскопом при 100-кратном увеличении. Также исследовали влияние времени хранения эмбрионов в кидкои азоте на юс жизнеспособность й пржшзляеиость.

Заыораяивакяе эмбрионов проводили на программном зашражива-телв УОП-1, УСП-4. В качестве криспротекторов использовали глицерин в различных концентрациях с применением сахарозы. Использовали ускоренный радии охлаждения к замораживайле в газообразном азоте.

Полученные цифровые данные подвергала статистической обработке по методике Н.А.Плохпнского (1969).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕЛОЕШЙ

3.1. Оценка качества эмбрионов молочнкх и (.ясных коров

В технологии трансплантации эмбрионов большое практическое значение имеет оценка их биологической полноценности перед пересадкой или криоконсерзированием.

Исследования по морфологической оценке доказали, что из общего числа 317 свежеполученных эмбрионов нормальккх было 221 или 69,дегенерированннх 96 (30,2$), неоплодотворекнос яйцеклеток 60 (18,9$). При гормональном вызывании супероэулпцпя эмбрионов отличного качества на разных стадиях развития можно поучить лишь незначительное количество - 30,83 от общего числа зародышей (таблД)

СХЕМА. ШСЛЕДОВАЛИ^

Таблица I

Качество и стадия развития эмбрионов коров на 7-й , день извлечения

Стадия развития

Показатель морулы бластоцисты

ранняя поздняя ранняя поздняя

Исследовано эмбрионов 317 18-2,5 107-31,9 102-32,2 10-3,2 В т.ч. иормальннх 221-69,8 8-3,0 101-45,7 102-40,2 10-4,5 Из них: хороших 89-40,3 2-25,0 45-44,5 4Г-40.2 1-ГО,О

отличных 88-39,8 3-37,5 18-17,8 58-50,9 9-90,0

удовлетворительных 44-19,0 3-37,5. 38-37,6 3- 2,0 дегейорирошшшх 26-30,2 10-55,5 6- 5,6 -

Меньше всего отличных эмбрионов на стадия ранней в поздней морулы (37,5 и 17,8^)» Процент их увеличивается на стадии ранней (56,9$) в поздней бластоцисты (903),

На стадии ранкой морулы отмечен низки!! процент эмбрионов хорошего качества (25^) я относительно висоии!! процент удовлетворительных (37 ,5^). Более поздние стадии развития характеризуются наличием вксокого числа хороших- эмбряонов (44*,и 40,2^),

Стадия:ранней бластоцисты от поздней морулы отличается меньшим числом амбриопов удовлетворительного качества (2,9, против 37,б£) и равнш процентом хороших эмбрионов (40,2? и 44,5«), соответственно.' Для поздних бластоцист характерно наличие впсокого процента эмбрионов отличного я хорошего качества при отсутствия удовлетворительных и дегенерпрованних. :

Наблюдается некоторая разница а качестве одновоэрастннх эмбрионов у коров-доноров молочных и мясных пород, подвергшихся замораживанию и оттаиванию (табл. 2).

Количество эмбрионов отличного и хорошего качества от коров-доноров молочтсс пород составило 88,9^. тогда как от короа-доно-ров мясных пород - Достоверные отличия пабли^ались и до

стадиям развития. Так, 84,4Й эмбрионов от коров молочных пород находились на стадии поздней морулы, тогда код: эмбрионы гашх

- а -

пород в большинстве своем (72,2$) да стадии ршшей бластоцис-ты (табл. 3).

Таблица Й

Качество эмбрионов после заморашгвания в оттаивания

"Качество эмбрионов

Количество эмбрионов

Порода, п - %

молочные

мнение

Отлвчние

Хорошие

Удовлетворительные

Итого

■ 50 59,

а

117

12 - 26,7 28 - 62.2

5 - 11,1

45

30 - 52,8

31 - 43,1

3 - 4,1 72

Таблица 3

Зависимость стадий развития 7-я дневных эмбрионов от породной принадлежности хоров-доноров

Стадия развитая

Количество эмбрионов

Порода, п - %

молочная

мясная

Морула поздняя 57 33,- 84,4 19 -26,4

Бластоцкста ранняя 54 2 - 4,4 52 - 72,2

Бластоциота поздняя С 5 - 11,1 I - 1,4

Итого 117 45 72

Приведение результаты по стадиям развития одноооэраотных эмбрионов молоч!уас и >4ясн12с коров согласуются с данными других исследователей* Показатели морфологической оценки эмбрионов, применяемые для молочных коров, с успехом можно использовать и для оцешш эмбрионов ыяснюс коров.

3.2. Биологические факторы, влияниие на жизнеспособность эмбрионов иря замораживании , и оттаивании

Важной задачей криобиологии является увелпчкение выхода пригодных доя трансплантации эмбрионов. Представляет интерес изучение взаимосвязи качества эмбрионов до замораживания с их жизнеспособностью после замораживания и оттаивания и влияние глубокого эамор&таваиия и времени хранения на выживаемость и нрпясвлпекость эмбрионов на стадии развитая морулы и бластоцис-ти (табл. 4).

Таблица 4

Качество эмбрионов до и поель заморалпзания и оттаивания Сп - %)

Стадгл развития эмбрионов

Качество эмбрионов

До замораживания

После оттаивания

Поздянз морудн

Ранние

отлн чшг

хоросль

удовлетворительные

условно— годные

0?ЛПЧ1И10

хороша

удовлетворительнее

усло^о-год:и:е

¡хгедг—а

13 - 43,4 10 - 33,3

7 - 23,3

10 - 66,7 4 - 26,7

I - 6,6

14 - 43,7 9 - 30,0 3 - 10,0

IX - 73,3

2 - 13,3

1-6,7 I - 6,7

Пел:; до 5;\:.:сра*к;1и;нгл 43 мпрул и 6ь, 7% бластоцпст были отл::ч::ого г-ачагпк!, пос.-.е стта:;вЕ;:1:л отлп~г.кх у?:е не было. Зато йг;глз::л;:г1, и пегашшо дот лереецгл; эмбрионы -мсгул :: с-ласто^ст.

Для успешного получения стельности от пересадки эмбрионов важную роль играет стадия развития а качество замороженао-отта-явных эмбрионов (табл. 5).

Таблица 5

Жизнеспособность и приживляемость зшорохенио-рттаяикых эмбрионов в зависимости от стадии развптиг

Стадия развития

Показатель Морулы Едастоцпсты

поздние

ранние позднее

Заморожено и оттаяно эмбрионов

Пригодных к пересадке

Процент от числа замороженных

Количество пересадок

Стельных реципиентов

Процент стельности

79 81 56

72 75 65

91,1х* 93,8 98,5

70 60 62

24 22 28

34,2х ЗС.6 45,1*

х> - Р < 0,001; ^ - Р < 0,01

Из таблица 5 следует, чт~> пр;иивляе:,:ость эмбрионов у реципиента возрастает с увелячиением возраста э:,1бр;юна. Так стельность в 34,2^! случаев была обнаружена при пересадке поздних (,го-рул и увеличивалась до 36,6% и 45,при пересадке ра:ш::х и поздних бластоцдст, соответственно.

Продолжительность хранения эмбрионов в г^даои азоте нестгъ-ко сказывается на их жизнеспособности и прп-узллеглэстп. После от Танзания л пересадки статыюсть реципиентов состаЕ::ла 40С при хра;генл« э;.;бр:;онсв в ккдком азоте не болео 7 коспцез. С угал;1чв-нпем пр од о лдг.т ел к-: о с тк хра:!е:;;:я э:,:бр::онов с^Г'Пласъ их е;.:ость после перэсадки. Та:::::,1 образом, из слод^ст,

что >:ра::эк::е в дздком азоте бол«.о одного года нецеле-

сообразно Стлбл. С).

Таблица 6

Влияние времени хранения эмбрионов в жидкой азоте на их приживляемость и жизнеспособность

Продолжительность хранения

Показатель

ыосяцц

годы

I ■ 7 1.5 3 4 7

Заморожено и оттаяно 19 40 6 31 55

эмбрионов . 3

Жизнеспособных 19

эмбрионов 39 8 31 3 53

Процент от числа 100,0

оттаянных 100,0 100,0 100,0 90,4

Пересалено эмбрионов 19 39 8 31 3 53

Стельных реципиентов 7 16 3 8 I

Процент стельности 36,8 40,0* 25,0' 25,8 33,3 32,1

*> Р< 0,

001

В сов ершекств овал па метода трансплантации большое внимание уделяется изысканию новых и у соэ ершекствопашш супестзунцих схем обработок коров-доноров. В наших исследованиях использовали пре-сарат ФСГ - {.оллитрошш а вводили его в течение 4-х днеГ; а равной дозе утром я вечером а убивапаей. Обедая доза препарата в обеих случаях составила 1200 НЕ (таЗл. 7).

Введение препарата 4СГ яо уЗьгэапде" схеме способствовало увеличено числа овуляций на 9,1$, нормальных эмбрионов на 135 и оплодотворяе:,;ости я^еклегок аа 7,6^.

Интереснее результаты были получены дрл изучения влияния количества эмбрионов, полученных от донора при одной валквангш, на их прплшвля&мость (табл. 8).

Данные таблищ 8 доказывав, что наявусси;; процент пр:*.гавдя-емости эмбрионов бел подучен от коров, которое даят от 5-ти до 10-тц о^лодотзоренных яГ-цеклеток на одно ви^за.чпе. Меньли" процент 35,3> и 32,1% при.?лвляе^;остг дзеле пересадки б!:л получен

Таблица б.

СОДЕРЖАНИЕ МЕТАБОЛИТОВ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА В КРОВИ КОРОВ

ПОКАЗАТЕЛИ

ГРУППА

I II 1 Ш 1 ( IV

Обще липиды, мгХ 1 574.7 492.0 | 1 474,1 | 450.3

+43.31 +31.35 | +22,32 | +J3.1

Фосфолипиды, мгХ | 219.2 208.3 1 196. Й | 194.2

+30.53 +10.28 J +7.50 | +13.33

Холестерин, мгХ | 156.2 163.7 1 154.3 | 147.0

+8.2 +А.8 1 +4._4 | +С.5

Бета- | 387.0 363.0 | 343.2 | 336.4

липопротеиды, мгХ ( +11.3 ■Ü4.0 ( +ЭР.1 1 +24.7

Триглицериды, ыгх 1 33.82 33.11 1 31.89 | *31.14

+2.23 +2.79 | +¿.07 | +1.07

3,4. Молочная продуктивность подопытных коров.

При анализе влияния дополнительного включения в рацион высокопродуктивных коров цеолите одержаще й добавки и авотаиа на уровень их молочной продуктивности было установлено, что коровы опытных групп превосходили своих аналогов иэ контрольной группы (таблица 7).

Среднесуточный удой молока 4Х жирности у коров опытных групп был выше контроля на 2,3 кг - во II , 2,3 кг - Ш и 2,7 кг - IV группах или 11,2-11,2-13,21 соответственно (таблица 7).

Вместе с тем, следует отметить, что скармливание коровам авотана оказало положительное влияние только на валовый удой натурального молока, тогда как введение цеолита в состав белко-во-витамиюсо-минеральной добавки коров II группы привело к увеличению содержания жира в молоке на 0.14 и 0.26X абсолютны» процента по сравнение с Ш и IV группами, а белка иа 0,20 и 0,27 абсолютных процента соответственно.

Исходя из полученных данных целесообразно получать овуляций в пределах от 5 до 10, т.к. в этих пределах обнаружен наи-виспшЛ процент прииивляемостя.

3.3. Воздействие физико-химических процессов на криоконсервирование эмбрионов крупного рогатого скота

Основным направлением исследований в области криоконсерви-рования является поиск наиболее простых и экономичных, но в то же время эффективных методов замораживания и оттаивания зародышей, позволящлх максимально сохранить их жизнеспособность. В последние года появились сообщения о возможности упрощения технологии крко коне ервир ован ия эмбрионов путем использовшшя ускоренного режима охлатщенпя,

Проведешше испытания разных замора^вателаЯ показали, что жизнеспособность в группах после оттаивания была практически одинаковой. Так, при заморативании на ЗЭ14-4 жизнеспособность эмбрионов составила 82,2%, на ЗЭ:,И - 80,0$ н в газообразном азоте - 79,4% (табл. 9). Стельность после пересадки заыороженно' оттаянных эмбрионов составила 39,1; 37,5 и 30,0$, соответственно.

Таблица 9

Влияние способа заморашшания аа жизнеспособность и приживляемость эмбрионов

Показатели

Заворожено и оттаяно эмбрионов

&1знеепособнгх эмбрионов Процент от ч;;еда оттзяшшх Пересажено эмбрг.опов Стслы;;:х реципиентов Нроцоит стелиюстл

- Р < и.ОъХ

Замораяизатели ЗЭМ-4 ЗЭМ-1 . газообразный

90 80 63

74 64 50

82,2 80, С 70,4

74 64 ьо

С9 л ьЧ 10

,1'" 37,6х 3 о, С

Результаты испытании показалп, что любое из этих устройств может бить использовано к криобиологической практике в рашго* степени, а икещпеся незначительнее различия связаны скорее всего с качеством эмбрионов перед замораживанием.

Существенна! интерес представляет влияние скоростей охлаждения эмбрионов на их дальне^то жизнеспособность после оттаивания и пршшвляемость после пересадки. Эксперименты по усовершенствованию обще!; технологии краокоисервированпя проведены на 112 эмбрионах, охлаждение которых прогодили от +20°С до -7°С со скорость» 1°С/шн, при -7°С искусственная кристаллизация, от -7°С до -35°0 со скоростью 0,5°С/мии. Стабилизация в течение 10 (.¡инут л погружение в жидки!! азот, Б качестве контроля бил использован общепринятый способ замораживания эмбрионов (табл. 10),

Таблица 10

Влияние скоростей охлавдения на жизнеспособность эмбрионов

Общепринятый Охлаздеиие

Показатель режим о хлам- со скогюстьэ

дения. 0,3 С/мин 0,5°С/шн

Заморожено эмбрионов 176 112

Оттаяно эмбрионов IX 112

Жиэнеспособшос эмбрионов 126 94

Процент от числа оттаянных 92,6 ■ 63,0

Пересажено эмбрионов 112 94

Стельных реципиентов 42 36

Процент стельности 37,5х 38,3х

х) - Р > 0,01

Данные таблицы 10 показывают, что увеличение скорости охлаждения на 0,2°С/щщ после кристаллизации не оказывает отрицательного влияния на .жизнеспособность эмбрионов после оттаивания, которая составила при общепринятом методе заморозки 92,б£, а при охлаждении со скорость» 0,5^/мин - 83,9^.

В последние годы.появились сообщения о возможности упрощения процесса удаления криопротектора путем использования раствора сахародо 0,5; 1,0 и 1,4Ы концентрации и сокращения этапов разбавления криопротектора с 6 до 1-2 ступеней. После необходимой выдержки эмбрионы пересаживают реципиенту в той же паете.

Состав среда для замораживания варьировал в зависимости от концентраций применяемого глицерина и наличия сахарозы Стабл. IX).

Таблица II

Жизнеспособность и дриживляемость эмбрионов а завися- . посте от способа их подготовки перед зашраживанием и после оттаивания

Способ насыщения эмбрионов

4 этапа 3 этапа I этап

Показатель -;-

концентрация глицерина

1,4М без 1.01Д-+ саха- 1,4М I са-сахарозы роза хароза

Заморожено и оттаяно эмбрионов

Пригодных к пересадке

Процент от числа оттаянных

Число реципиентов

Стельных реципиентов

Процент стеьности

х)

- Р < 0,001

65 32 20

53 28 24

81,5 ' 87,5 85,7

50 25 20

12 7 6

24,0х 28,0 30,0*

Охлазденпе проводили ло общепринятой схеме. Применение сахарозы для разбавления криопротектора упрощает подготовку эмбрионов к пересадке и позволяет значительно ускорить технологию трансплантации э^брсолов, что идее? большое значение для практики, особенно в услозпях £ерм.

■ 3.4. Результаты заморагквачия эмбрионов, полученных методом культивирования и оплодотворения пк Еитро ооцнто из яечнйков коров

Успехи в области генетической и клеточной инженерии позволяют надеяться, что на основе нетрадиционных методов создания яи~ вотяых возможно повышение эффективности их генетического совершенствования. Главным препятствием, стоящим на пути рекспил этой про-блеж, является стабильное получение достаточного количества зи-: гот сельскохозяйственных яазотных. Ключевым моментом в рошекип этой проблемы может стать смоделированный пя витрг процесс созревания, оплодотворзняя, культивирования ооцятов и замораживание эмбрионов с последупцей дересадао?..

Исследования по эаморазигаанлв-оттаиванию, определена» лшзнеспособности и приаивдяемости эмбриоков после пересадки проведены совместно со специалистами из ФРГ (Гашозер). Подготовку эмбрионов к замораживанию и оттаиваний осуществляли по методике, разработанной ФРГ (проф. И.Хан). Таких эмбриоцоз (п=66) было пересажено в госсельхозпредприятии "Толиачезо" Нижегородской области 60-ти регдаиеягам и 25 - в опытном хозяйстве "Цапово" 21 реципиенту. Результаты пересадка приведены в таблице 12.

Таблица 12

Приживляемость культивированных заморочеяно-оттаякяых эмбрионов после нехпруртаческой пересадки

Хозяйства

Показатель -

"Толмачено" "Щапово"

Оттаяно и пересалено эмбрионов 66. 25

Число реципиентов 60 21

Стельных реципиентов 3 4

Процент стельности 8,3 19,0

Получено телят 6 4

Процент от числа эмбрионов 9,0 16,0

Данные таблицы 12 показывают, что прижпвляемость культивируема ни вцтро я зшлороженко-оттаяшшх эмбрионов очень низкая» По хозяйствам она в АФ Толмачев о" 8 от числа реципиентов я

от числа пересаженных эмбрионов , в ОПХ "Щапово" - 19 и 16$, соответственно.

Из вшесказанного следует» что ранние культивированные зародыши не1'сто1^швы к криоконсервированию и длительному хранению без смены кулыурально2 среда.

Вероятно, ддл получения более высоких показателей приживляемо с ти эмбрионсв необходимо перед пересадков вести селекцию по их качеству. Исключение звена оценки качества замороженно-оттаянннх эмбрионов перед пересадкой на наш взгляд, является преждевременным. Цель упращения технологии пересадки эмбрионов оказалась не достигнутой.

ШВОДН

1. Результаты пересадки сведих и заморояенно-оттаянных эмбрионов находятся в прямой зависимости от их качества а стадии развития. При пересадке зародышей .отличного качества можно достигнуть 75%<$ стельности, хорошего - 39,4Й; удовлетворительного -25,5,0, Наиболее устойчивые и приемлемые для заморааивапия являются забрани на стадии ранней и зкепандированной бластоцисты.

2. При пересадке эмбрионов на стадии поздней морулы, ранней и поздней бластоцисты можно получить 34,2; 35,6 и 45,1% стельиос-тей у реципиентов, соответственно. На 7-й день извлечения эмбрионов коров мясных пород они в основном находятся на стадии поздней морулы и ранней бластоцисты {26,4 и 72,2;а).

3. Охлаждение на мобильных эашраживателях и в газообразном азоте но оказывают отрицательного влияния на жизнеспособность эмбрионов и дает возможность проводить замораживание в условиях ферм даже при отсутствии электроэнергии.

4. Использование глицерина в качестве краепротоктора в 1,01Л и 1,4Ц концентраций с добавлением сахарозн при трехступенчатом

и одноступенчатом введении и выведении обеспечивает сохранение жизнеспособности эмбрионов после заморазивангл и оттаивания до 05,7 и Ь7,5£.

-IB -

5.,Лри дальней транспортировке замороженных вибрионов щ пересадке их в условиях ферм в разных хозяйствах установлена зависимость результатов стельности от подготовки реципиентов, условий хранения и работы с зародышами при трансплантации. Выявлена связь ариживляемости эмбрионов с длительностью их хранения в жидком азоте.

6. Заморозка культивированных и оплодотворенных ин витро ооцитсв коров без смены кулътуральной среда и их пересадка, минуя звено сценки качества (с целью упрощения метода трансплантации) не дало ожидаемых результатов, при которая была получена стельность только в 8,3 и 19,0Í случаях. ■

- ПРАКТИЧЕСКИЕ П2Щ0ШШ

Для трансплантации рекомендуется использовать эаморажввание эмбрионов на мобильных эамораживателях а в газообразном азоте с использованием в качестве криопротектора 1,4Ы глицерин в сочетании о сахарозой при одноэтапном насыщении и выведении, что дает возможность сократить процесс криоконсервироваядя и использовать метод в условиях ферм и хозяйств, где проблематична подача электроэнергии ..

Основное содержание диссертации опубликовано в статье Таб-лада ОДшшшна Густаве Ернесте Фактор, влиящие на яиздеспособность эмбрионов при замораживании и оттаивании // Зоотехния, 1995, X * с. m*.

Подтек-то к пе^ггт 31Г.ТЭЭ5Г. Об:,эм 7,2 '

Эакгэ 'г 139

■ Т'грел (00 экз.

Учеоток лотшгре?:::!