Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение телят-двоен методом трансплантации эмбрионов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Получение телят-двоен методом трансплантации эмбрионов"



ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИ« ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи

КЬ1СА Иван Степанович

УДК 612.646.02

Получение телят-двоен методом трансплантации

03.00.13 — физиология человека и животных

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы, Московская обл.

1990

Работа выполнена и Центре трансплантации змирпонов сельскохозяйственных животных Всесоюзного научно-исследовательского института животноводства.

Научный руководитель:

доктор биологических паук, профессор Н. 11. СЕРГЕЕВ. Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор И. Я. 1Ш1ХОВ; кандидат сельскохозя!ктвеш1ых паук А. В. ВАГЕНЛЕЙТНЕР.

Ведущее учреждение:

Научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи >1 Полесья УССР.

Защита диссертации состоится « Ф. » . . . 1903 Г.

н . [0 часок па заседании специализированного Совета Д.020.10.02 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012. Московская область. Подольский район, нос. Дуброницы.

С диссертацией .можно ознакомиться в библиотеке института.

1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических: наук

И. И. ШМЫПШ

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В основных направлениях экономического н социального развития СССР 1986—1990 годы п на период до 2000 года определена неотложная необходимость повышения уровни селекционной работы но совершенствованию племенных п продуктивных качеств животных за счет использования научио-техпнческого прогресса I! области 1енетики, селекции п биотехнологии.

Методу трансплантации эмбрионов в этой проблеме отведена роль как средству, которое позволяет получать большее количество однотипных потомков от высокопродуктивных животных, ценных в племенном н товарном отношении.

Среди наиболее перспективных направлении современной биотехнологии значительный интерес представляет метол микрохирургического деления эмбрионов на части. Целесообразность этой микрооперации заключается в повышении в полтора-два раза выхода эмбрионов от высокопродукшв-пых животных.

Использование трансплантации эмбрионов в программах воспроизводства высокопродуктивных н пользовательпых животных может стать надежным методом получения двоен. Развитие простои н надежной техники получения двоен I! мясном и .молочном скотоводстве сыграет полезную роль п удешевлении мясной продукции за счет увеличения числа тетя т д-'я выращивания на мясо без дополнительного поголовья коров. . I

Цель и задачи исследований. Основная цель псследопа-тпи заключалась в определении эффективности н п усовершенствовании методов получения двоен с использованием целых и разделенных эмбрионов от коров-доноров с супер овуляцией.

Исходя нз этого, были поставлены па разрешение следу-опию задачи:

■— определить эффективность получения двоен после не-кпрургической пересадки свежеполученных, замороженно-оттаянных и половин разделенных эмбрионов но два-одно-иу реципиенту и по одному осемененным реципиентам;

— выявить эффективность различных типов гонадотропи-на при вызывании суперовуляции у коров-доноров и изучить эффективность различных способов синхронизации охоты у реципиентов;

— изучить влияния различных факторов (число лактации, продолжительность сервис-периода и интенсивности охоты у реципиентов, синхронность эстрального цикла реципиентов п доноров, качество и стадия развития эмбрионов и др.) на прнживляемость целых п разделенных эмбрионов.

Научная новизна работы состоит в усовершенствовании методов по,лучения двоен и определении их эффективности при исхирургичргкоп пересадке эмбрионов от высокопродуктивных коров молочных и мясных пород, изучены факторы, влияющие на результаты пересадки эмбрионов.

Практическое значение работы заключается в разработке методических и технических приемов перосадки эмбрионов, позволяющих получать до 72,5% стельностей и 51,7% огелов двойнями.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку:

— на Республиканской научной конференции «Состояние и перспективы развития биологии в животноводстве (21 —22 сентября), г. Харьков, 1988 г.;

— на 42-ои научно-методической конференции аспирантов и молодых ученых по теме «Проблемы интенсификации животноводства (25—26 мая) Дубровннцы. ВИЖ, 1989 г.;

— на Республиканском совещании «Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота», г. Жодино, 1990 г.

Объем работы. Диссертация изложена на 98 страницах машинописного текста, включая 22 таблицы, 1 рисунок Синеок литературы включает 128 источников, в том числе 75 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

Исследования проводили в Центре по транспрантацпи эмбрионов сельскохозяйственных животных (ВИЖ)> плсм-заводе «Луч» Брестской области и колхозе «Атжалинас» Ппнепежского |)айона Литовской ССР.

В качество доноров использовали коров черно-пестрой породы в возрасте от 4 до 8 лет, живой массой 600—650 кг, с удоем по наивысшей лактации более 7000 кг молока, жнр-г ностыо 3,7% и более. Реципиентами служили молодые коровы (но 1—3 лактации) и телки в возрасте 16—18 месяцев с живой массой 340—420 кг. Кормление и содержание осуществляли по нормам ВИЖа.

Для синхронизации охоты у телок реципиентов применяли СЖК в дозе 400—500 И. Е. в сочетании с простагландн-ном (500 мкг), а также двукратное введение эстрофана. с интервалом 11 дней. Учитывали влияние стрессов на синхронизацию и приживляемость эмбрионов.

Гормональное вызывание суперовуляцин у доноров осуществляли фоллпкулостимулнрующпми гормонами — ФСГ (США), фоллитропином (СССР) и. фоллнкотропином (ЧССР). Препараты вводили на 10-й день полового цикла по 4-дневной схеме (табл. 1).

Таблица 1

СХЕМА

обработки коров-доноров различными гоиадотропинами

День эк-стралыю-го цикла

10 11 12

13

14 21

ФСГ производства

США (МГ) СССР (ЕД) ЧССР (ME)

утром вечером утром J вечером утром й, р: Й Л

150 150 150

150 150 150

просгоглондин 500 мкг 5 5

Искусствтенное осеменение Нехирургическое извлечение

просгогла.ндин 500 мкг 150 150

80 80 40

80 80 40

простогландин 500 мкг 40 40

Искусственное осеменение коров-доноров проводили за-мороженно-оттаянной спермой трижды с интервалом 10—12 часов.

Перед извлечением эмбрионов на 6-и или 7-й день полового цикла, ректально определяли число желтых- тел и пе-овулнровавших фолликулов в яичниках. После извлечения учитывали общее число зародышей, а также число нормальных и дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток.

Эмбрионы у коров-доноров извлекали нехирургичеекп ч методом, используя катетер конструкции «Нойштадт» (ФРГ).

В опытах по получению двоен путем пересадки эмбрионов осемененным реципиентам, использовали коров и телок черно-пестрой породы.

Эмбрионы извлекали у коров-доноров па 7-й день полового цикла. Кратковременное хранение эмбрионов осуществляли в фосфатно-солевом буфере Дюльбскко с добавлением 20% феталъной сыворотки крови теленка и антибиотиков.

Морфологическую оценку качества эмбрионов осуществляли в соответствии со шкалой оценки качества морул и бластоцнст и согласно инструкции по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (1987).

Животных-реципиентов осеменяли двукратно- глубокоза-мороженнои спермой. За день до пересадки у животных ректально определяли наличие, местонахождение и качество желтого тела в яичнике.

Для определения эффективности получения телят-двоен путем пересадки двух эмбрионов одному реципиенту, использовали свежеполученные и заморожегно-оттаяипые эмбрионы от коров-допоров черно-пестрой, герефордской, абердин-ангусской породы и породы салерс. В качестве реципиентов были подобраны телкн черно-пестрой породы.

Пересадку двух эмбрионов одному реципиенту производили двумя катетерами конструкции «Нойштад» и новым, нами предложенным катетером.

В задачу наших исследований также входило получение телят двоен от пересадки половин разделенных эмбрионов. Для деления использовали эмбрионы отличного и хорошего

качества, достигшие стадии развития поздней морулы или ранней бластоцисты. После морфологической оценки качества, эмбрион переносили на предметное стекло с минимальным количеством среды, которое помещали под лупой со 100-кратным увеличением. Деление проводили металлическим микроскальнелем и с помощью мнкроманипулятора.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Синхронизация ох<?ты у телок-реципиентои

и гормональное вызь вание суперовуляции у керов-докоров различными гонадотрспииаг и

Телкам-реципиентам первой группы на 9—13 день полового цикла вводили СЖК в дозе -400—500 ИЕ. Через 48 часов инъецировали простаглаидин в дозе 500 мкг. Вторую контрольную группу животных обрабатывали простагланди-пом двукратно с интервалом между инъекции 11 дней.

Отмечена некоторая разница между группами в число животных пришедших в охоту. В контрольной группе телох, этот показатель был на 6% меньше, чем в опытной. В опыт-ион группе через 48 часов пришли в охоту на 21,4% телоч больше- чем в контроле.

Данные таблицы 2 показывают, что животиы:: с наличием желтого тела в яичнике в первой группе было больше па 17%. Что касается качества желтого тела, то по этому показателю первая группа имела незначительнее прспмухце. по все же число отлично развитых желтых тел в эюй групп^ превышало контрольную на 14,4%.

Эмбрионы пересаживали телкам, имеющим отличное желтое тело в яичнике. Процент приживляемости эмбрионов в опытной группе был на 15,6% выше, чем в контроле.

Из приведенного можно заключить, что применение СЖК в сочетании с простагландином в период с 9-го по 13-й день полового цикла активизирует функцию яичников, что •характеризуется большим числом телок с отлично развиты:,! желтым телом в яичниках, причем 72% этих животных приходят в охоту через 48—60 часов. Это, вероятно, обеспечивает лучшие условия для приживляемое™ эмбрионов при нехирургической пересадке (табл. 2).

Качество желтых тел и приживляемость эмбрионов в зависимости от способа синхронизации охоты у телок-реципиентов

Группы (п-%)

Показатель

СЖК-Ь простагландин простагландин

Число, животных 36 63

Количество животных с активным желтым телом в яичнике * 33—91,7 47—74,6

В том числе:

отличного качества 23—69,7 26—55,3

хорошего качества 4—12,1 9—19,1

удовлетворительного качества 6—18,2 12—25,5

Отсутствовали желтые тела в яич-1 пике 3— 8,3 16—25,4

Пересажено эмбрионов 18 22

Стельных реципиентов ^ 11—61,1 10—45,5

Опыты по определению влияния стрессов механического л физического характера на синхронизацию охоты и приживляемость эмбрионов, были проведены на 73 телках черно-пестрой породы. Синхронизацию охоты проводили путем двукратного введения простагландина с интервалом между инъекциями 11 дней.

Из 30 телок второй группы признаки охоты проявили только 21 телка или 70%, в первой группе из 43 пришли в охоту 39 телок или 90,7%. Существенной разницы во времени прихода в охоту в обеих группах не наблюдалась.

Основная масса телок обеих групп пришли в охоту чере. 48—60 часов (95%). Продолжительность проявления при знаков охоты различалось незначительно (табл. 3).

Результаты синхронизации охоты и приживляемость эмбрионов с учетом влияния стресс-фактора (п-%)

Покзатель

Группы

II

(оличестпо животных в группе ¡исло телок: с хорошими признаками охоты слабо выраженной охотой охота отсутствовала качество желтого тела у телок на 7-й день цикла: отличное хорошее

удовлетворительное ■К-елтые тела отсутствовали 1ересажено эмбрионов Зтельных реципиентов

43

39—90,7 2— 4,С 2— 4,6

24—58,5 4— 9,8 2— 4,9 11—20,8 12 7—58,3

30

21—70,0 1— 3,3 8—26,7

10—45,5 3—13,6

2—9,11 7—31,8

10

3—30,0

Число животных с отлично развитыми желтыми телами з яичниках было на 13% в пользу телок первой группы. Отмечена тенденция увеличения числа удовлетворительных и хорошо развитых желтых тел в яичниках у животных второй группы.

I На 7-й день полового цикла 12 телкам первой группы и 10 второй с отлично развитыми желтыми телами пересадили ¡амороженно-отгаянные эмбрионы. Все эмбрионы были удовлетворительного качества. По истечению двух месяцев было установлено, что уровень стельности в группе телок, лодверг-:я стрессу за день до ожидаемой охоты оказался йа 28,3% шже, чем в первой группе.

Полученные результаты дают основание утверждать, гго накануне предполагаемой охоты стресс оказывает неблагоприятное влияние на функцию желтого тела и приживляемость эмбрионов после нехирургической пересадки.

Для сравнительного изучения действия разных препаратов ФСГ было сформировано три группы коров, обработку которых провидили по 4-дневной схеме ( ,-:бл. 1). В таблице % приведены' результаты исследовании.

Результаты сравнительного испытания действия разных препаратов ФСГ на уровень суперовуляции

ФСГ производства

Показатель США СССР ЧССР

Обработано коров-доноров 20 18 10

Реагировало суперовуляцией 20 — 100 18 — 100 9 — 90

Число овуляций на донора э;е 12,9 8,1

Положительных доноров по извлечению эмбрионов 17 — 85,0 15 - • 83,3 9 — 100

Число эмбрионов на положительного донора 5,0 8,0 4,6

В том числе: нормальных 3,8— 76,0 4,5— 56,3 2,6— 56,5

дегенерированпых 0,8— 16,0 2,1 — 26,2 1,8— 39,1

нсоплоаот|вореннЫ'Х 0,5— 8,0 1,4— 17,5 0,2— 4,3

яйцеклеток

Существенных различий з числе коров реагировавших суперовуляцией не наблюдалось. Однако, число овуляций на одного донора в группе животных, обработанных фоллитро-пином было выше на 25,6%. чем в первой и на 37,36%, чем в третьей группе.

Основным показателем эффективности гормональной обработки является число нормальных эмбрионов на донора. Нормальных эмбрионов на одного положительного донора отмечено больше в группе животных обработанных фолли-трогшном.

Исследования показывают, что фоллитрошш в дозе 1200 БД по сравнению с ФСГ н филликотронином заметно повышал уровень супервовуляции и за счет этого увеличивался выход нормальных эмбрионов на донора.

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ПОЛУЧЕНИЯ ДВОЕН.

3.2.1. Пересадка одного эмбриона предварительно осемененному рецидиенту

Пересадку свежеполученных эмбрионов проводили на 7-й день астрального цикла в противоположный рог матки с

желтым телом в яичнике. Всего было пересажено --'(О эмбрионов. стельными оказались 29 реципиентов, или 72-5%. Двойнями отелилось 15 коров (51,7%). В таблице 5' приведены результаты пересадки эмбрионов осеменным коровам разно го возраста и числа лактации.

Таблица П.

Приживляемость эмбрионов у осемененных коров в зависимости от возраста и числа лактации

Возраст коров, год

Показатель 3 4 1 5

Число лактации

первая | вторая третья

Число осемененных коров-реципиентов < 11 16 13

Пересажено эмбрионов 11 16 13

Стельных реципиентов 6 13 10

Общий процент стельности 54,5 81,3 76,9

Стельных реципиентов двойнями 2 8 5

Процент стельности двойнями от числа реципиентов 33,3 61,5 50,0

Процент приживляемостн эмбрио-нот от числа пересаженных 18,2 50,0 38,5

Получено телят 8 21 15

Из таблицы 5 видно, что пересадка эмбрионов осемененным первотелкам не эффективна. Они хуже осеменялись (54,5%) и значительно снижалась приживляемость эмбрионов в противоположном роге матки (18,2%). Меньше было получено отелов двойнями (33,3%) от числа стельных реципиентов. Наиболее подходящими для этой цели являются коровы в возрасте 4-х лет по второй лактации. У них отмечена высокая оплодотворяемость после первого осеменения (81,3%), стельность двойнями (61-5%), и приживляемость эмбрионов (50%). Высокие показатели были получены по группе коров пятилетнего возраста на третьей лактации. Оп-додотворяемость от первого осеменения составила 76,9%. :тельность двойнями — 50%, приживляемость эмбрионов — 38,5%. Однако, эти показатели были ниже, чем у коров по второму отелу на 4,4% , Ц.5%- 11,5%, соответственно. В це-

лом. от 29 коров с подсадкой эмбрионов было получено 44 теленка или 1,5 теленка на корову.

В наших исследованиях сделана попытка выяснить влияние продолжительности сервис-периоДа на оплодотворяе-мость коров и приживляемоеть эмбрионов после нехирурги-ческоу пересадки (табл. 6).

Таблица 6.

Влияние продолжительности сервис-периода на оплодотворпемость коров и приживляемоеть эмбрионов

Продолжительность сервис-периода

Показатель до 60 | (день) 60—100 100—130

Число коров в группе 12 17 И

Пересажено эмбрионов 12 17 11

Стельных реципиентов 7 14 8

Процент стельности 58,3 82,4 72,7

Стельных реципиентов двойнями 3 10 2

Процент стельности двойнями 42,9 71,4 25,0

Процент ириживляемости эмбрио-

нов от числа пересаженных 25,0 58,8 18,2

Так, при осеменении коров до 60 дня после отела, опло-дотворяемость составила 58-3%, приживляемоеть эмбрионог - 25%.

С увеличением продолжительности сервис-периода от 6( до 100 дней оплодотворяемость коров и стельность двойням; заметно повышалась и составила 82,4 и 71,4 % соответствен но. Повышался и уровень ириживляемости эмбрионов д( 58,8%. Дальнейшее увеличение сервис-периода от 100 до 13( дней снижало оплодотворяемость коров на 9,7%, стельност] ^двойнями (25%) -и приживляемоеть эмбрионов (18,2%).

При нехирургпческой пересадке также прослеживаете; зависимость уровня стельности от стадии развития эмбрио нов. Оказалось, что наиболее подходящими для пересадю были ранние бластоцисты на стадии развития 7-го дн. (табл. 7).

Прижпвляемость эмбрионов у коров г. зависимости от стадии их развития

Стадия развития

Показатель поздние морулы ранние ила- СТОЦИСТЫ Всего

Число реципиентов Пересажено эмбрионов Стельных реципиентов Процент стельности

16 16 11

68,8

24 ' 24 18 75,0

40 40 29 72,5

Стельность от пересадки ранних бластоцист достигала 50% и была выше на 6,2%, чем в группе коров, которым пересаживали поздние морулы.

Лучшие результаты были получены, когда донор и реципиент совпадали по астральному циклу день в день (табл. 8).

Таблица 8.

Прижпвляемость эмбрионов в зависимости от синхронности астрального цикла у донора и реципиента

Показат ель Синхронность цикла эетралыгого (день)

+ 1 0 —1

Число реципиентов 10 21 9

Пересажено эмбрионов 10 21 9

Стельных реципиентов 7 17 5

Процент стельности .70,0 »1,0 . 55,6

Стельных реципиентов двойнями 4 10 ■ . , 1

Процент двойневости от числа пересаженных эмбрионов 40,0 47„6. . 11,1

Получено телят 11 . . .27 6 '

Стельность наступила в 17 случаях (81,0) при точно син-

хронизированнои охоте у реципиента с донором, в семи — когда реципиент был раньше донора в с хоте на один день

(70%) и в пяти случаях (55,6%) — когда на один день позже.

В итоге можно заключить, что существенное влияние на получение двоен, путем пересадки одного эмбриона предварительно осемененному реципенту. оказывает число лактации, возраст, продолжительность эстрального цикла реципиента с донором, качество и стадия развития эмбриона.

3.2.2. Пересадка двух свежеполученных эмбрионов одному реципиенту

Было пересажено всего 212 эмбрионов: из них 56 эмбрионов по одному такому же числу реципиентов, 106 эмбрионов 53 реципиентам по два эмбриона в один рог, 50 эмбрионов — 25 реципиентам по одному в каждый рог матки (табл. 9).

Таблица 9.

Результаты получении двоен при пересадке разного числа эмбрионов

Группы

Показатель один два два

эмбрион эмбкона эмбиона

в 1 рог в 1 рог в оба рога

Число реципиентов 56 53 25

Пересажено эмбрионов 56 106 50

Число стельных реципиентов 29 33 18

Процент стельности 51,8 62,3 72,0

Процент стельности от числа

пересаженных эмбрионов 51,8 31,1 36,0

Число стельнестей двойнями — 14 9

Процент двойневых сгельностей 42,4

от общего числа стелъностей — 50

Получено телят 27 41 26

Процент полученных телят от чис- 93,1 124,2 144,4

«та стельных реципиентов

Самый высокий процент стельности был в группе, гд; реципиентам пересаживали по одному эмбриону в каждьп рог матки (72%), в группе реципиентов, которым два эмбри

она пересаживали в один рог матки процент стельности составил 62,3%' а в группе телок, которым пересаживали один эмбрион — 5178%. Число двойневых стельностей в третьей группе был выше на 7.6%, чем во второй (50% против 42,4%). Необходимо отметить, что во всех трех группах наблюдались аборты. В первой группе один аборт — 3,4%. во второй три аборта — 9%, в третьей один аборт — 5,5%. По выходу телят показатель был выше в третьей группе 144,4% против 124,2%. во второй и 93,1% в первой.

По результатам исследований установлено, что наиболее эффективным способом получения телят-двоен является пересадка двух эмбрионов одному реципиенту в разные рога.

Нами изучено влияние стадии развития эмбрионов на эффективность получения телят-двоен. Высокий процент стельности получен при соответствии обоих эмбрионов одной стадии развития (Мо+Мо или Бл-1-Бл) (табл. 10).

Таблица 10.

Прнживляемосгь эмбрионов в зависимости от стадии развития эмбриона

Мо+Мо Бл + Бл .Мо + Бл

га СЧ - га со га

Показатель £ <-, а, о *2 с- Ж £ « и Си. О о Р. О и а. о ХО С^н 1 я я л [ с I £. о 1 ^ - СЗ 3 1- е. о *о с.

ГГ) 1—1 (Г, —» т 041

N С Сч* со СМ И еч са | сч а сч а

Количество реципиентов 18 5 22- 14 14 6

Число пересаженных эмбрионов 36 10 44 26 28 12

Стельных реципиентов 11 4 14 10 8 4

Процент стельности реципиентов 61,1 80 63,6 71,4 57,1 66,7

Процент стельности от

числа пересаженных эмбрионов 30,5 40 31,8 38,5 28,6 33,3

В зависимости от числа эмбрионов, пересаженных в один или два рога матки, процент стельности был различный. Он был выше когда две морулы аплицировали в разные рога матки (80%) и заметно ниже, когда два эмбриона пере-

саживали в один рог матки (61,1%). Аналогичные результаты были получены при пересадке бластоцнст и эмбрионов разной стадии развития.

Таблица 11.

Приживляемость в зависимости от качества желтого тела в яичнике реципиента и числа пересаженных эмбрионов

К-во желтого тела и число пересажен, эмбрионов К-во реципиентов Стельных реципиентов Процент стельности | ! Число отелов двои- Процент | отелов I двойнями

Отличное: 1 27 16 59,3 —

2 17 12 . 70,6 6 50,0

3 13 • 10 76,9 6 60,0

Хорошее: 1 16 8 50,0 — —

2 18 11 61,1 5 45,5

3 10 7 70,0 3 42,9

Удовлетворительное: 1 13 Э 38,5 — —

1 2 | 18 ■ 10 55,6 3 30,0

3 2 1 . 50,0 — —

. Примечание: 1 — пересажено по одному эмбриону

2 — два эмбриона в один рог матки

3 — два эмбриона в разные рога матки.

Из таблицы 11 видно, что приживляемость эмбрионов . находится в прямой зависимости от качества желтого тела в яичнике у реципиентов на день пересадки. Прослеживается зависимость этого показателя и от числа пересаживаемых эмбрионов. Со снижением качества желтого тела (удовлетворительные) процент приживляемости повышается при пересадке двух эмбрионов в один рог матки.

Нами разработан'способ пересадки эмбрионов и сконструирован катетер, позволяющий проводить пересадку двух эмбрионов поочередно в каждый рог матки реципиента, не удаляя его из канала шейки матки. Получена приоритетная справка по заявке № 4735372/15 от 27.06.89 г.

Животным пересаживали по два эмбриона в каждый рог матки двумя способами. Первый способ — пересадка двух эмбрионов двумя катетерами, при двукратном прохождении шейки матки. Второй способ — пересадка новым катетером, позволяющим одновременно пересадку двух эмбрионов не вынимая катетера из шейки матки.

25 телкам первой группы было пересажено 50 эмбрионов я вторым — 27 телкам пересажено 54 эмбриона. Число "•тельных реципиентов оказалось в первой группе 18 (72,0% ) и во второй 21 (77-8%) или больше на 5,8% (табл. 12).

Таблица 12.

Результаты пересадки двух эмбрионов одним и двумя катетерами в оба рога матки

Показатель Пересадка двух эмбрионов двумя катетерами Пересадка двух эмбрионов одним катетером

Число реципиентов 25 27

Пересажено эмбрионов 50 54

Стельных реципиентов 18 21

Процент стельности 72,0 77,8

Процент стельности от числа пересаженных эмбрионов 36,0 38,9

Получено отелов двойнями 9 9

Процент отелов двойнями от числа стельных реципиентов 50,0 42,9

Получено телят 24 30

Процент полученных телят от числа стельных реципиентов 133,3 142,9

Процент стельных реципиентов от числа пересаженных эмбрионов во второй группе, также был несколько больше (2,9%). Однако, отелов двойнями в обеих группах было одинаковым, а в процентном отношении этот показатель был в пользу первой группы (7,1%). Процент выхода телят от числа стельных реципиентов составил 133,3 в первой группе н 142,9 во второй.

На основе полученных данных можно сделать вывод, что использование нового катетера для пересадки двух эмбрионов позволяет получать приемлемые результаты приживляемое™ эмбрионов.

3.2.3. Пересадка замороженио-оттаиниых эмбрионов мясных пород телкам-реципиентам черно-нестрой породы

Изучена возможность . пересадки замороженно-отгаян-иых эмбрионов от мясных пород телкам-реципиентам молочной породы с целью получения телят-двоен. Для этого из Болгарии были завезены замороженные эмбрионы от коров-доноров герефордской, абердин-ангусской породы и породы салерс.

Всего предполагалось пересадить 92 эмбриона. Однако, после оттаивания было установлено, что 54,4% зародышей к пересадке были не пригодны. Остальные были удовлетворительного качества ¡1 условно годные.

Всего было пересажено 42 эмбиона 27 телкам-реципиентам. Все эмбрионы были низкого качества. Телки были разделены на три группы. Первой группе телок (п = 12) пересадили по одному эмбриону в один рог матки, телкам второй группы (п = 9) — по два эмбриона в один рог матки и реципиентам третьей группы (п =6) — по одному эмбриону з каждый рог матки.

Более высокий процент стельности был зарегистрирован во второй группе — 50%. в первой и третьей группах этот показатель был одинаковым — 33,3% (табл. 13).

Результаты межпородной пересадки замороженно-отгаянных эмбрионов мясных пород

Показатель 1 эмбрион в 1 рог матки 2 эмбриона в 1 рог матки 2 эмбриона в 2 рога матки 1 Всего

Число эмбрионов 12 18 12 42

Число реципиентов 12 8 б 27

Стельных реципиентов 4 4 2 10

Прсг.ент стельности 33,3 50,0 33,3 37,0

Число отелов двойнями — 1 1 2

Пропенг отелов двойнями от

числа стельных реципиентов — 25,0 50,0 20,0

Получено телят 4 3 3 10

У одной телки второй и у одной третьей группы полу

чены отелы двойнями. Одна телка - реципиент второй группы на пятом месяце стельности абортировала двойней, поэтому выход телят в этой группе составил 37,5%.

■ Всего в результате опыта было получено 10 телят-трансплантатов, из них 9 телят герефордской породы и 1 теленох породы саллерс. В целом приживляемость эмбрионов составила 37%.

3.2.4. Деление и пересадка половинок эмбрионов

В эксперименте использовали эмбрионы только «отличного» и «хорошего» качества. Оценку качества эмбрионов производили по их морфологической характеристике в соответствии со шкалой оценки морул и бластоцист.

Деление эмбрионов производили двумя методами. Первый метод — деление осуществляли металлическим микроскальпелем под лупой, без посадки в зоны пеллюцида (в .•-ловиях производства). Второй метод — эмбрионы делили с использованием микроманипулятора в лабораторных условиях. После деления эмбрионов все половинки оценивались в зависимости от их размера и морфологической характерис-

17

тики. Было разделено 22 эмбриона и получено 40 нормальных половинок (90,9 %).

Округлившиеся, компактные, симметричные половинки эмбрионов оценивались как «отличные». Полуэмбрионы выглядевшие неравномерными, неправильной формы относились к «хорошим». «Условно годными» половинками считались полуэмбрионы совершенно не округлившиеся и размер которых был меньше половины целого эмбриона.

После деления эмбрионов «отличного» и «хорошего» качества было получено 29,5% «отличных» половин, 38,6% «хороших», 22,7% «условно годных» и 9,1% не пригодных к пересадке. Первым методом было разделено 10 эмбрионов н получено 18 (90%) половин, вторым — 12 эмбрионов и получено 22 половинки (91,7%). Телкам первой группы (п = 8) пересаживали полуэмбрионы разделенные первым методом, а второй группе (п= 10) полуэмбрионы разделенные вторым методом.

В обеих группах получено по 4 стельности (тал. 14).

Таблица 14.

Результаты пересадки разделенных эмбрионов

Методы деления

Показатель

первый второй всего

Разделено эмбрионов 10 12 22

Получено половинок (п-%) 18—90,0 22- -91,7 40- -90,9

Пересажено половин 16 20 36

Число реципиентов 8 10 18

Стельных реципиентов 4 4 8

Процент стельности 50,0 40,0 44,4

Получено телят 5 6 11

в том числе:

двойневых 2 4 С

ОДИНЦОВ 3 2 5

Приживляемость половинок 31,2 30,0 30,6

Стельность реципиентов после пересадки половин эм-

брионов в первой группе была выше на 10%, чем во второй. В результате эксперимента получено три стельности двойня-

мн — одна в первой и две во второй группе. Из 11 полученных телят шесть были из числа отелов двойнями. Выход телят в первой группе, так же был несколько выше и составил 62,5%.

Одним из основных показателей является уровень при-живляемостп половинок. Он незначительно был выше в группе телок, которым пересаживали половинки, разделенные первым методом.

Из таблицы 15 видно, что при использовании одинакового числа целых эмбрионов получено в первой группе телок 8 стельностей. во второй — 10 стельностей. Уровень стельности был выше в первой группе (48,9%). чем во второй (/|5,5%). Показатель выхода телят от числа целых эмбрионов составил в первой группе 50%, во второй 45,5%. а от числа стельных реципиентов превышение в первой группе составило 37,5% ч

Таблица 15.

Уровень использования эмбриомагериала при пересадке половинок и целых эмбрионов

Показатель

Полуэмбрионы

Целые эмбрионы

Использование эмбрионов 22 22

Пересажено половинок и целых

эмбрионов 36 22

Число реципиентов 18 22

Стельных реципиентов 8 10

Процент стельности реципиентов 44,4 45,5

Получено телят 11 10

Процент выхода телят от числа

целых эмбрионов 50,0 45,5 ■

Процент выхода телят от числа 137,5 100,0 стельных реципиентов

Анализ полученных данных позволяет заключить, что з результате деления эмбрионов без микроманипулятора в производственных условиях можно получить дополнительно до 37,5 телят. Приживляемость половинок при этом методе достигала 31,2%.

При уровне стельности 44,4% и прнживляемости половинок 30,6% не снижается эффективность использования эм-бриоматерпала, в сравнении с пересадкой целых эмбрионов.

3.4. Экономическая эффективность трансплантации

эмбрионов в племзаводе «Луч» Брестской области

В племзаводе «Луч» внедрен метод трансплантации эмбрионов, как биотехнологический прием ускоренного воспроизведения высокопродуктивных животных и как одно из средств интенсивного использования генетического потенциала выдающихся коров-рекордисток. Для этого в племзаводе построены помещения, лаборатория с необходимым оборудованием, подобраны коровы-доноры и телки-реципиенты.

Все имеющиеся основные и оборотные фонды арендованы коллективом пункта. В арендный коллектив, работающий в условиях внутрихозяйственной аренды, входит семь человек: 3 специалиста и 4 человека обслуживающего персонала.

На пункте трансплантации эмбрионов одновременно находится 30—35 коров-доноров и около 200—250 телок-реципиентов. Технология содержания организована таким образом, чтобы для осуществления пересадок имелось необходимое число реципиентов. Для этих же целей ежемесячно поступа-/ ют новые партии телок случного возраста живым весом 350 —380 кг и более. В качестве реципиентов используются в основном телки, не представляющие генетической ценности, закупленные у населения.

Животные, которые не были использованы для пересадки эмбрионов или перегулявшие после пересадки эмбрионов искусственно осеменяются и после установления трехмесячной стельности передаются на другие фермы.

Взаимоотношение между администрацией хозяйства и арендным коллективом регулируется арендным договором и положением по внутрихозяйственному расчету.

Основные показатели работы пункта трансплантации эмбрионов за 1989 года приведены в таблице 16.

20

I!

Результаты работы пункта трансплантации эмбрионов племзавода «Луч» за 1989 год

Показатели п

Наличие коров-доноров 35

Произведено вымываний 51

Получено пригодных к пересадке эмбрионов 234

Число эмбрионов на обработанного донора 4,6

Произведено пересадок эмбрионов 206

Получено стелытостей, л-% 104—50,5

Стоимость произведенной продукция, руб. 177G98

Общая сумма затрат, руб. 124557

и том числе: затраты па трансплантацию, руб. 24547

Чистый доход, руб. 53147

Согимость 3-месячнон стельности реципиента, р. 700

Себеетои.моаь одной стельн., руб. 236

Себестоимость оного эмбриона, руб. 104

Одним пз основных показателен работы пункта трансплантации, влияющим на сумму дохода коллектива, является размер материально-денежных затрат. Общая сумма затрат за год по пункту составила 124547 руб.

Сумма затрат на трансплантацию эмбрионов, с учетом содержания стельных реципиентов в течении 3-х месяцев составила 245-17 руб. Себестоимость 3-месячнон стельности реципиента для арендного коллектива составила 236 рублен, а одного эмбриона 104 рубля.

Доход арендного коллектива был обеспечен, главным образом- за счет снижения себестоимости стелыюстен. Основными факторами- оказавшими влияние на себестоимость, явились высокий процент приживляемости эмбрионов и экономия материально-денежных затрат.

4. В Ы В О Д Ы

1. Применение для синхронизации охоты у реципиентов СЖК в сочетании с простагландином на 9—13 день полового

21

цикла увеличивает число животных имеющих активно функ ционирующее желтое тело в яичнике и повышает уровеш стельности реципиентов на 15,6%. Отрицательное влияние m синхронизацию охоты и приживляемость эмбрионов оказыва ют стресс-факторы механического н физического характера

2. Оптимальной дозой фоллитропина для вызывания су перовуляцни у коров-доноров следует считать 1200 ЕД, но зволяющей получить до 4,5 эмбриона на донора.

3. Пересадка эмбрионов предварительно осемененному реципиенту позволяет получать до 72,5% стелыюстей реципиентов и 51,7% отелов двойнями. Существенное влияние щ получение двоен оказывает возраст, число лактации, продол жительность сервис-периода, качество желтого тела в яичнике у коров-реципиентов, качество и стадия развития эмбриона.

4. Высокая приживляемость двух эмбрионов достигается при пересадке их в разные рога матки одному реципиенту и при наличии в яичнике желтого тела отличного качества. Межпородная пересадка двух замороженно-оттаянных эмбрионов одному реципиенту увеличивает выход телят до 120%.

5. Деление эмбрионов в производственных условиях без специального оборудования позволяет получать до 90% нормальных полуэмбрионов и выход телят до 137,5%.

6. Организация работы пункта трансплантации эмбрионов на условиях внутрихозяйственной аренды позволяет снизить себестоимость стельности с 700 рублей до 236, себестоимость одного эмбриона до 104 рублей.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Пересадку двух эмбрионов одному реципиенту осуществлять в разные рога матки, используя катетер новой конструкции. Для получения телят-двоен использовать осемененных коров-реципиентов со второй лактации с продолжительностью сервис-периода от 60 до 100 дней. С целью увеличения выхода телят н повышении уровня использования эмбрио-материала производить пересадку разделенных эмбрионов.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Кыса И. С. Получение двоен методом пересадки половинок эмбрионов. Информационный листок № 46—89. Брестский ЦНТИ, 1989

2. Кыса И. С. Применение метода трансплантации эмбрионов в программе разведения высокопродуктивных животных в племзаводе «Луч» Брестской области — Информационный листок ЛЬ 19—89. Брестский ЦНТИ, 1989 г.

3. Сарунджиев Е., Влахов К-, Маслев Т., Допчев Р.- Гавриков А., Алексеенко А., Сергеев Н., Мадисон В., Дроннн А., Карецкая Л., Кыса И. Криобиология и лиофилизация. Четвертая интернациональная школа. Доклады. Боровец— Болгария. 29.07—06.08 1989 С. 40.

1. Кыса И. С. Влияние стрессов па синхронизацию охоты и ириживляемость эмбрионов. Информационный листок Л'э 20—83. Брестский ЦНТИ, 1989.