Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПОЛУЧЕНИЕ ТЕЛЯТ-ДВОЕН МЕТОДОМ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ПОЛУЧЕНИЕ ТЕЛЯТ-ДВОЕН МЕТОДОМ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ"

Л-%9№

всесоюзный нлучно-Исследовательскии институт животноводства (виж)

На нрапах рукописи

КЫСД Пиан Степагог.пч

УДК 612.646,02

Получение телят-двоен методом трансплантации эмбрионов

03.00.ІЗ — физиология человека и животных

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы, Московская обл. 1990

РаПото ш.гпо.ик'иа л Центре трансгмаитацтг ¡таыршпоа (т.чьекохсь гшпстнещшх приютных Всесоюзного научно-исследовательского института ¡от о иг) дет ил.

Научный руководитель:

доктор ^гголопнеп.чп- паук, профессор П, II, СЕРГЕЕВ,

Официальные оппоненты:

доктор опологлчеекпх наук, профессор 1!. Я. 1НИХ0В; кандидат сельскохозяйственных но у к Л. В, ВЛГЕНЛЕПТГШР,

Ведущее учреждение:

Иаучпо-песледонптельскпп институт шмиотиовпдстпп Лоеогтеип Полесья УССР.

■ ¡¡НЦНТа Д|!( ('1'|1Т;| !ШП СОСТОИТСЯ , М^ОЛ^ . . . !',-№ т.

II (0 '¡агон на :!;н(>д(иц[ц споцнплнгшрооанного Совета Д.020.10.02 по патшгте диссертации на соленанне ученой степени доктора иду;; при Всесоюзном иаучпо-нсследопательгком институте и.чтвотпоггодгтпл.

с миг- ' линч.облает?!. Подольегши раной,

.песгртлцией мои; по ознакомиться в библиотеке института. Литорсфсрат разослан ^^ • • • . ИШОг.

Учены» секретарь

ПЮЦС иН РОПЛПГШГО СЛШС'ТД,

к<шд>' СшолС"-веских наук' И. Я. 1Ш1ЫГ1Ш

{ 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В основных направлениях эконодш-ческого и социального развития СССР 1986—1990 гады и на период до 2000 года определена неотложная необходимость повышения уровня селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных за счет использования научно-технического прогресса в области генетики, селекции и биотехнологии.

Методу трансплантации эмбрионов в это» проблеме отведена роль как средству, которое позволяет получать большее количество однотипных потомков от высокопродуктивных животных, ценных в племенном и товарном отношении.

Среди наиболее перспективных к а правлен г и'! современной биотехнологии значительный интерес представляет метод микрохирургического деления эмбрионов на части. Целесообразность этой микрооперации заключается в повышении в полтора-два раза выхода эмбрионов от высокопродуктивных животных.

Использование трансплантации эмбрионов в программах воспроизводства высокопродуктивных и пользовательных животных может стать надежным методом получения двоел. Развитие простой н надежной техники получения двоен в мясном и молочном скотоводстве сыграет полезную роль в удешевлении мясной продукции за счет увеличения числа телят для выращивания на мясо без дополнительного поголовья коров. I

Цель н задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в определении эффективности и в усовершенствовании методов получения двоен с использованием целых и разделенных эмбрионов от коров-доноров с суперовуляцией.

Исходя из этого* были поставлены па разрешение следующие задачи;

— определить эффективность получения двоен после ие-хирургической пересадки свежеполученных, замороженио-оттаянных и половин разделенных эмбрионов по два-одно-му реципиенту и по одному осемененным реципиентам;

V,'центральная 1

ыаучная библиотека №оск, со л ы к охо з академии

— выявить эффективность различных типов гонадотропи-па при вызывании суперовуляции у коров-доноров и изучить эффективность различных способов синхронизации охоты у реципиентов;

— изучить влияния различных факторов (число лактации. продолжительность сервис-пер иода и интенсивности охоты у реципиентов, синхронность эстрального цикла реципиентов л доноров, качество и стадия развития эмбрионов и др.). на прнжнвляемость целых и разделенных эмбрионов.

Научная новизна работы состоит в усовершенствовании методов получения двоен и определении их эффективности при нехирургической пересадке эмбрионов от 6ысокопродук-тивных корос молочных и мясных пород, изучены факторы, влияющие, на результаты пересадки эмбрионов.

Практич1Ч-кое значение работы заключается в разработке методических и технических приемов перосадки эмбрионов, позволяющих получать до 72,5% стельностей и 51,7% отелов двойнями.

Апробация подученных результатов. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку:

— на Республиканской научной конференции «Состояние и перспективы развития биологии в животноводстве (21 —22 сентября), г. Харьков, 1988 г.;

— на 42-оГ( научно-методической конференции аспирантов и молодых ученых по теме «Проблемы интенсификации животноводства (25—26 мая) Дубровницы/ВИЖ, 1989 г.;

— па Республиканском совещании «Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота», г. Жодино, 1990 г.

Объем работы. Диссертация изложена на 98 страни-' цах машинописного текста, включая .22 таблицы, 1 рисунок, Список литературы включает 128 источников, в том числе 75 иностранных авторов.

2 1

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводил» в Центре по транспрантацни эмбрионов сельскохозяйственных животных (ВИЖ)> ллем-заводе «Луч» Брестской области и колхозе «Атжалинас» Папе веж с кого района Литовской ССР.

и В качестве доноров использовали коров черно-пестрой породы в возрасте от 4 до 8 лет- живой массой 600—650 кг, с удоем го наивысшей лактации более 7000 кг молока, жир> иостыо 3-7% и более. Реципиентами служили молодые коро-вы'(но 1—3 лактации) и телки в возрасте 16—18 месяцев с живой массой 340—420 кг. Кормление и содержание осуществляли по нормам ВИЖа.

Для синхронизации охоты у телок реципиентов применяли СЖК в дозе 400—500 И. Е. в сочетании с простагландином (500 мкг), а также двукратное введение эстрофана с интервалом II дней. Учитывали влияние стрессов на синхронизацию и прижпвляемость эмбрионов.

Гормональное вызывание сунеровуляции у доноров осуществляли фолликулостимулирующнми гормонами — ФСГ (США), фоллнтропином (СССР) и фолликотропином (ЧССР). Препараты вводили на 10-н день полового цикла по 4-дневной схеме (табл. 1).

Таблица 1

СХЕМА

обработки корйв-доноров различными гонадотрогшнами

ФСГ производства

День ак-стра л мого цикла США <МГ) СССР (ЕД) ЧССР (МЕ)

утром вечером утром вечном утром і я й- о о в

10 11 12

13

14 21

150 150 150

150 150 150

простоглондия 500 мкг 5 5

Искусств теплое осеменение Нехврургичт;ое извлечение

простогландин 500 мкг 150 150

80 80 40

80 80 40

простогландин 500 мкг 40 40

Искусственное осеменение коров-доноров проводили . за-мороженно-оттаянной спермой трижды с интервалом 10—12 часов.

Перед извлечением эмбрионов па 6-й или 7-й день полового цикла, ректально определяли число желтых тел1 и не-овулировавшнх фолликулов в яичниках. После извлечения учитывали общее число зародышей, а также число нормальных н дегенернрованных эмбрионов и неоплодотворенных яґіцеклеток.

Эмбрионы у норов-доноров извлекали нел'нрургическнм методом, используя катетер конструкции «Нойштадт» (ФРГ).

В опытах по получению двоен путем пересадки эмбрионов осемененным реципиентам, использовали коров и телок черно-пестрой породы.

Эмбрионы извлекали у коров-доноров ил 7-й день полового цикла. Кратковременное хранение эмбрнояо" псущест-влялн в фосфатно-солевом буфере Дюльбскко с добавлением 20% фетальной сыворотки крови теленка п антибиотиков.

Морфологическую оценку качества эмбрионов осуществляли в соответствии со шкалой оценки качества морул и бластоцист и согласно инструкции по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (1987).

Животных-реципиентов осеменяли двукратно, глубокоза-мороженной спермой. За день до пересадки у животных ректально определяли наличие, местонахождение и качество желтого тела в яичнике.

Для определения эффективности получения телят-двоен путем пересадки двух эмбрионов одному реципиенту, использовали свежепо,пученные и замороженпо-оттаяшіне эмбрионы от коров-доноров черно-пестрой, герефордскоп, абердин-лнгусской породы и породы салерс. В качестве реципиентов были подобраны телки черно-пестрой породы.

Пересадку двух эмбрионов одному реципиенту производили двумя катетерами конструкции «Нойштад» и нобым, нами предложенным катетером.

В задачу наших исследований также входило получение телят двоен от пересадки половин разделенных эмбрнонов. Для деления использовали эмбрионы отличного и хорошего

качества, достигшие стадии развития поздней морулы или ранней бластоцнсты. После морфологической оценки качества, эмбрион переносили па предметное стекло с минимальным количеством среды, которое помещали под лупой со 100-кратным увеличением. Деление проводили металлическим мнкроскальпелем и с помощью мнкромашшулятора.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Синхронизация ох<}ты у телок-реци^и^пчм;

и гормональное вызывание суперовуляции у ксрсв-докоров различными пжадотропимггш

Телкам-реципиентам первой группы на 9—13 день полового цикла вводили СЖК в дозе 400—500 ИЕ. Чере^ 48 чз-соз инъецировали простагландпн в дозе 500 мкг. Вторую контрольную группу животных обрабатывали простаглаиди-мом двукратно с интервалом между инъекции 11 дней.

Отмечена некоторая разница между группам» в число животных пришедших в охоту. В контрольной группе телок, этот показатель был на 6% меньше, чем в опытной, В опытной группе через 4# часов пришли в охоту на 21.4% тело больше, чем в контроле.

Данные таблицы 2 показывают, что животиь::; с нали чием желтого тела в яичнике в первой группе было больше н;-! 17%. Что касается качества желтого тела, то по этому показателю первая группа имела незначительнее препмуис^ < ио все же число отлично развитых желтых тол в у то ¡"| труп,;, превышало контрольную на 14,4%,

Эмбрионы пересаживали телкам, имеющим отличное желтое тело в яичнике. Процент (трнжнвляемости эмбрноно» в опытной группе был на 15,6% выше, чем в контроле.

Из приведенного можно заключить- что применен не СЖК в сочетании с простагландином в период с 9-го по 13-и день полового цикла активизирует функцию янчннков, что характеризуется большим числом телок с отлично развитым желтым телом в яичниках, причем 72% этих животных приходят в охоту через 48—60 часов. Это, вероятно, обеспечивает лучшие условия для приживляемостн эмбрионов при нехирурги чес кои пересадке (табл. 2).

о

Качество желтых тел и нриживляемость эмбрионов в зависимости от способа синхронизации охоты у телок-реципиентов

Группы (п-%)'

Показатель СЖК+п р остагл а ндин прост а гландин

Число животных 36 63

Количество животных с активным желтым телом в личинке 33—91,7 47-74,6

В том числе:

отличного качества 23—69,7 26-55,3

хорошего качества 4—12,1 9-19,1

удовлетворительного качества 6-18,2 12-25,5

Отсутствовали желтые тела в яич-» пике 3— 8,3 16-25,4

Пересажено эмбрионов 18 22

Стельных реципиентов

11—61,1

10—45,5

Опыты по определению влияния стрессов механического и физического характера на синхронизацию охоты и прижнв-'лясмость эмбрионов, были проведены на 73 телках черно-пестрой породы. Синхронизацию охоты проводили путем двукратного введения простагландина с. интервалом между инъекциями 11 дней.

Из 30 телок второй группы признаки охоты проявили только 21 телка или 70%, в первой группе из 43 пришли в охоту 39 телок или 90,7%. Существенной разницы во ,-времени прихода в охоту в обеих группах не наблюдалась.

Основная масса телок обеих групп пришли в охоту через 48—60 часов {95%). Продолжительность проявления признаков охоты различалось незначительно (табл. 3).

Результаты синхронизации охоты и прнживляемость эмбрионов с учетом влияния стресс-фактора (п-%)

Группы

Поюатель

I II

Количество животных в группе 43 30

Число телок:

с хорошими признаками охоты 39—90.7 21-70,0

слабо выраженной охото¡1 2- 4,6 1— 3,3

охота отсутствовала 2— 4,6 8—26.7

Качество желтого тела у телок

на 7-й день цикла:

отличное 24—58,5 10—45,5

хорошее 4— 9,8 3-13,0

удовлетворительное 2— 4,9 2-9,11

Желтые тела отсутствовали 11-26,8 7—31,8

Пересажено эмбрионов 12 10

Стельных реципиентов 7-58,3 3—30,0

Число животных с отлично развитыми желтыми телами в яичниках было на 13% в пользу телок первой группы. Отмечена тенденция увеличения числа удовлетворительных }[ хорошо развитых желтых тел в яичниках у животных второй группы.

На 7-и день полового^цикла 12 телкам периой группы я 10 второй с отлично развитыми желтыми телами пересадили замороженно-оттаяиные эмбрионы. Все эмбрионы были удовлетворительного качества. По истечению двух месяцев было установлено, что уровень стельности в группе телок, подвергся стрессу за день до ожидаемой охоты оказался Па 28,3% ниже, чем в первой группе.

Полученные результаты дают основание утверждать-что накануне предполагаемой охоты стресс оказывает неблагоприятное влияние на функцию желтого тела и прнживляемость эмбрионов после нехирургпческой пересадки.

Для сравнительного изучения действия разных препаратов ФСГ было сформировано три группы коров, обработку которых провидили по 4-дневной схеме (тлбл. 1;. В таблице 4 приведены результаты исследований.

Результаты сравнительного испытания действия разных препаратов ФСГ на уровень суперовуляции

ФСГ производства

Обработано коров-доноров Реагировало суперовулящией Число овуляций на донора Полож и тельных доноров по извлече-

20

20 —100 9,6

18 10 18 —100 9 —'»О

12,9

нию эмбрионов

Число эмбрионов на положительного донора

В тон числе: нормальных

17 — 85,0 15 — 83,3 9 —100

5,0

8,0 4,6

дегенерировали ых неон лодотроре н н ык яйцеклеток

76,0 0,8— 16,0 0,5— 8,0

4,5— 56,3 2,6— 56,5 2,1— 26,2 ),8— 39,1 1,4— 17,5 0,2— 4,3

Существенных различии в числе коров реагировавших суперовуляцией не наблюдалось. Однако, число овуляций на одного донора в группе животных, обработанных фоллнтро-пином было выше на 25,6%, чем в первой и на 37,36%, чем' в третьей группе.

Основным показателем эффективности гормональной обработки является число нормальных эмбрионов на донора. Нормальных эмбрионов на одного положительного донора отмечено" больше в группе животных обработанных фоллц-трошшом.

Исследования показывают, что фоллнтропии в дозе 1200 ЕД по сравнению с ФСГ и .филдикотропином заметно повышал уровень супервовуляции и за счет этого увеличивался выход нормальных эмбрионов на донора.

3,2. РЕЗУЛЬТАТЫ ПОЛУЧЕНИЯ ДВОЕН.

3,2.1. Пересадка одного эмбриона предварительно осемененному рецидиенту

Пересадку свежеполученных эмбрионов проводили на 7-й день астрального цикла в противоположный рог матки с

желтым телом с яичнике. Всего было пересажено Н) эмбрн опои- стельными оказались 29 реципиентов, или 72-5%. Дкопиями отелилось ¡5 корон {51,7%). В таблице Г> приведен;-: результаты пересадки эмбрионов осеменимы коровам ранце-го возраста и числа лакташпї.

Таблица Г>.

Прпжииляемость эмбрионов у осемененных ьоров в зависимости от возраста и числа лактации

ІІГЖЛ.З.'ПС.'ЇІ.

Число осемененных кпров-решпш

ОН TOB

Пересажено эмбрионов

Стельных реципиентов

Обшиґі процент стельности

Стельных реципиентов ДВОІІІІЯМИ

Процент стельности двойнями от числа реципиентов

Процент приживляє мости эмбрно нот от числа пересаженных

Получено телят

Из таблицы 5 видно, что пересадка эмбрионов осемененным первотелкам не эффективна. Они хуже осеменялись (54,5%) л значительно снижалась нрижнвлнемость эмбрионов в противоположном роге матки (!Х,2%). Меньше Ou.n> получено отел о(і двойнями (33,3'iu) от числа гіельиих peius ішеитоп. Наиболее подходящими для :-лоіі цели являются Кировы в возрасте 4-х лет по второіі лактації". V них отмочеіі.і высокая ОИЛОДОТВОрЯеМоС'ГЬ ИОСЛе IiepROlO ОСЄМОНЄІІИН

(81,3%), стельность двойнями (6Ь5%), и приживляє мост:, эмбрионов (50%). Высокие показатели были получепь; tiu группе коров пятилетнего возраста на третьей лактации, Он-лодотворяемость от первого осеменения составила 70-9 стельность двойнями — 50%, прнжнвляемость эмбрнонос — 38,5%. Однако, эти показатели были ниже, чем у коров їм второму отелу на 4,4% , 11-5%. 11,5%. соответственно, В це

Іїигфлст Киров, год Числи ллк'іпши'і

первая і вторая | _ третьи

11 1С 13

il IG ГІ

Гі 13 10

5-1,5 öl,3 70,9

2 S 5

61,5 Ли,її

50,0 ;w,5

6 2\ 15

joj-i. от 29 корон с подсадкой эмбрионов было получено 44 теленка пли 1,5 теленка на корову.

В наших исследованиях сделана попытка выяснить влияние продолжительности сервис-периода на оплодотворяе-мость коров и прижнвлясмость эмбрионов после нехпрургн-ческоу пересадки (табл. 6).

Таблица 6.

Влияние продолжительности сервис-периода па оилодотворяемость коров и приживляемость эмбрионов

Показатель

11родолж1пель11осгь сервис-периода (день)

л<> № 60—100 100—130

Число корон и группе 12 17 11

Пересажено эжфнонок 12 17 1)

Cre.'lblIUX pcuilli lien TOI! t (-1 S

1 Ipuuenr етмытпети 58,3 82.4 72,7

(Ле.-|ЬН1ЛХ peUlIlllieilTflR .HlofllINMI! з îfl 2

1Ip'iiteiir еп-лытеги ;jBi)j'ii)w.Mii 123 ГМ 25,0

1 IpdueiiT прлжнвляемости SMÔpun-

1юв ht числа пересаженных 25,0 58.8 18,2

Так, при осеменении коров ДО (Î0 ДНЯ после отела, опло-

дотноряемоегь составила 58-3%, приживляемость эмбрионов - 25%.

С увеличением продолжительности сервис-периода от (30 до 100 дней оплодотаоряемоеть коров и стельность двойня мл заметно попыталась и составила 82,4 и 71,4 % соответственно. Повышался II уронень ИрНЖ!1ВЛЯеМОСГН эмбрионов до 53,8%, Дальнейшее упелпченне сервис-периода от 100 до 130 днеГ( еннжало оплодотвориемост!, коров на 9.7%, стельность двойнями (25%) п приживляемость эмбрионов (18.2%).

При иехирурглческои пересадке также прослеживается записи .«ость уровня стельности от стадии развития эмбрионов. Оказалось, »по наиболее подходящими для пересадки были ранние 6,7 а стон исты на стадии развития 7-го дня (табл. 7).

Таблица 7.

Прижнвляемость эмбрионов у коров и зависимости от стадии их развития

Стадия развития |

Показатель поздние морулы ранние ола-{ стоцнсты Всего

Число реципиентов 16 24 411

Пересажена эмирпшкш 1С 24 40

Стельнык реципиентов 11 18 29

Процент стельности 68,8 75,0 72,5

Стельность от пересадки ранних бдастоцнст достигала 50% и была выше на 6,2%, чем с группе коров, которым пересаживали поздние морулы.

Лучшие результаты были получены, когда донор и реципиент совпадали по астральному ішклу день в день (табл. 8),

Таблица 8.

Приживляемость эмбрионов в зависимости от синхронности зстрального цикла у донора и реципиента

Показатель Синхронность цикла астрального (день)

+ ! а 1 — 1

Число реципиентов 10 21 9

іїерсеажсчю чибр[гожій 10 21

Стельных рОЦНПИСІІТОІ) 7 17 5

І ¡£ч>не;п егелыюстя 7(1,0 8!,0 55,6

Стельных реіи-кшентов двойнями 4 10 1

Процент двойке вое ги от чгісла пересаженных эмбрионов 40,0 47.0 11.1

Получено телят И 27 6

Стельность наступила в 17 случаях (81,0) при точно синхронизированной охоте у реципиента с донорам, в семи — когда реципиент был раньше донора I; , мче на одни дорп,

(70%) гт в пяти случаях (55,6%) — когда на один дсш> позже.

В итоге можно заключить, что существенное влияние на получение двоен. путем пересадки одного эмбриона предварительно осемененному решшенту- оказывает число лактаций. возраст, продолжительность эстрального цикла реципиента с донором, качество и стадия развития эмбриона.

3.2.2, Пересадка двух свежеполученных эмбрионов одному реципиенту

Било пересажено всего 212 эмбрионов: из них 56 эмбрионов но одному такому же числу реципиентов, 100 эмбрионов 53 реципиентам по два эмбриона в одни рог, 50 эмбрионов — 25 реципиентам по одному в каждый рог матки (табл. 9).

Таблица 9.

Результаты получения двоен при пересадке разного числа эмбрионов

Показатель ш чмйрнок 1І I рог Группы ! л.ва ¡■эмбпона і в 1 рог два эмбпола в оба рога

Число реципиентов 56 53 25

Пересажено эмбрионов 56 106 50

Число стельных решіпкеїпоп 29 33 18

Процент стельности 51,8 62,3 72,0

Процент стельности от числа пересаженных эмбрионов 51,8 31.1 36,0

Число етельтіестеґі двойнями — 14 9

Процент двопневмх стельноетем от общего числа стсльностей — 42,4 50

Получено телят 27 41 26

Процент полученных телит от чис- 93,1 124,2 144,4

л а стельных реципиентов

Самый высокий процент стельности был в группе, где реципиентам пересаживали по одному эмбриону в каждый рог матки (72%), в группе реципиентов, которым два эмбрн-

она пересаживали в один рог матки процент стельности составил 62,3%' а и группе телок- которым пересаживали один эмбрион — 5Ь8%. Число двойневых стельностеп в третьей груши1 бил выше на 7-6%, чем во второй (50% проти з 12.4%). Необходимо отметить, что во всех трех группах наблюдались аборты. В первой группе один аборт — 3,4%, во втором три аборта — 9%, в третьей один аборт — 5-5%- По выходу телят показатель был выше в третьей группе, 144-4% против 124.2%, во второй и 93,1% в первой.

По результатам исследовании установлено, что наиболее эффективным способом получения телягдвоен является пересадка двух эмбрионов одному реципиенту в разные рога.

Нами изучено влияние стадии развития эмбрионов на '■эффективность получения телят-двоен. Высокий процент стельности получен при соответствии обоих эмбрионов ОД1Ю>"( стадии развития (Мо+Мо или Бл-гБл) (табл. 10),

Таблица Ю.

Прюкивлисмость эмбрионов в зависимости от стадии развития эмбриона

Мо+Л\о Бл + Бл \ Л\(1+Бл

Е 2 2 1 й 2

Показатель В Lj с. О *=> о-^ ÍFJ І2 £- ° О съ í ÍM 3 5 U а. о >Q СЬ, t .Т- —" Я « t леч 1 ^ 1 о 1 О, о 1 & І щ а. о w?

їм S ГМ и 1 сч - и а | (М »

Кол »честно реципиентов 18 5 22 14 14 6

Число пересаженных эмбрионов 36 10 44 26 28 12

Сіельньїч рецпшіеіпов и 4 14 10 8 4

Процент стельности реципиентов 61,1 S0 63,6 71,4 57,1 66.7

Процент стельности от числа пересаженных аж'ір нонов 30,5 40 31,8 38,5 28,6 33,3

В зависимости от числа эмбрионов, пересаженных в одші пли два рога матки- процент стельности был различный. Он был выше когда две морулы аиллиировали в разные рога матки (80%) и заметно ниже, когда два эмбриона пере

саживали в один рог матки (61,1%)- Аналогичные результаты были получены при пересадке бластоцист и эмбрионов разной стадии развития.

Таблица 11.

Приживлпсмость в зависимости от качества желтого тела в яичнике реципиента и числа пересаженных эмбрионов

К-ви желтого тела к число пересажен. "іМОріЮИОИ я і. ¡д п. ^ 5 о І = 3 * 3 ці зі -м г: X ^ гґ я ^ 1. с — ^ ¿4 £ ■—1 о ¿> , С Сй с 1-і ы ¿а 5 ™ -і ~ К К ТІ ^ 3 О.Ї 2-кІ т О 1-І

Отличное; 1 27 16 59,3 —

2 17 12 70,6 6 50,0

3 13 10 76,9 6 60,0

Хорошее: 1 16 8 50,0 - —

2 18 и 61,1 5 15,0

3 10 7 70,0 3 12.9

Удшистпорительпос: 1 ІЗ 0 38,5 - —

2 18 10 5o.fi 3 30,0

3 2 1 50,0 — —

Примечание: і — і'іересажено но одному эмбриону

2 — два эмбриона в один рос матки

3 — ■■ два "эмбриона и равные рога матки.

І і:і таблицы II яндно. чго прнжпнлясмост:-, ч.ибрпопог. находится в прямой зависимости ш качества желтого тгля и яичнике у реципиентов на день пересадки. Прослеживаете*! чавнспмосгь этого показателя п от числа пересаживаемых эмбрионов. Со снижением качества желтого им а (удовлетворительные) процент приживляемое™ попытается при м<>-роейдке двух эмбрионов в одни рог матки.

Нами разработан способ пересадки эмбрионов п сконструирован катетер, позволяющий проводить пересадку двух эмбрионов поочередно в каждый рог матки реципиента, пс удаляя его из канала шеііки матки. Получена ггрнорптетиад справка по заявке № 4735372/15 от 27.06.89 г,

Животным пересаживали но два эмбриона в каждый рог матки двумя способами. Первый способ — пересадка двух эмбрионов двумя катетерами, при двукратном прохождении шейки матки. Второй способ — пересадка новым катетером, позволяющим одновременно пересадку двух эмбрионов И" вынимая катетера н:( шеикн матки.

25 телкам первой группы было пересажено 50 эмбрионов и вторым — 27 телкам пересажено 54 эмбриона. Число "тельных реципиентов оказалось в первой группе 18 (72,0%) и во второй 21 (77-8%) или больше на 5,8% (табл. 12).

Таблица 12.

Результаты пересадки двух эмбрионов одним и двумя категорами в оба рога матки

Показатель Пересадка двух эмбрионов дзу-мя катетерами Пересадка .ниух эмбрионов одітії катетером

Число реципиентов 25 27

Пересажено эмбрионов 50 5-1

Стельтш.х реципиентов 18 21

Процент стельности 72,0 77,8

Процент стельности от числа

переса женны* эмбрионов 36,0 38,9

Получено отелов двоГшями 9 9

Процент отелов двоГшями от числа

стельных реципиентов 50,0 42,9

Получено телят 24 30

Процент полученных телят от числа

стельны* реципиентов 133,3 142,9

Процент стельных реципиентов от числа пересаженных эмбрионов во второй группе, также был несколько больше (2,9%). Однако, отелов двойнями в обеих группах было одинаковым, а в процентном отношении этот показатель был в пользу первой группы (7.1%). Процент выхода телят от числа стельных реципиентов составил 133,3 в первой группе н 142.9 во второй.

На основе полученных данных можно сделать вывод, что использование нового катетера для пересадки двух эмбрионов позволяет получать приемлемые результаты прнжннляе-моетн эмбрионов.

3.2.3. Пересадка замороженно-оттаянных эмбрионе» мясных пород телкам-реципиентам черно-нестрон ¡юроды

Иду чел а возможность пересадки за морожен но-отта я и пых эмбрионов от мясных пород телкам-рециішептам молочной породы с целыо получения телят-двоен. Для ЭТОГи 11:1 Болгарии были завезены замороженные эмбрионы от коров доноров герефордскоіі, абердіпі-ангусской породы н породы талере.

Всего предполагалось пересадить 92 эмбриена. Одної«), после оттаивания было установлено, что 54,4% зародышей к пересадке были не пригодны. Остальные были удовлетворительного качества и условно годные.

Всего было пересажено 42 эмбноиа 27 тел к а м-реципиентам. Все эмбрионы были низкого качества. Телки были разделены на три группы. Первой группе телок (п—12) пересадили по одному эмбриону в одни рог матки, телкам второй группы (п=9) — по два эмбриона в один рог матки и реципиентам третьей группы (п = 6) — по одному эмбриону каждый рог матки.

Более высокий процент стельности был зарегистрирован по второй группе — Г>0%. ІЇ первой и третьей Группах этот показатель был одинаковым — 33.3% (табл. 13).

Результаты межпородной пересадки замороженно-оттаяиных эмбрионов мясных пород

Показатель ге о £ «О, ф О * й ч я о О. І й - н <" я 2 3 и 5 л. О О СцИ * г лсч « о и <и

" со я еч а з- (М й К т

Число амбрмонов' 12 18 12 , . 42

Число реципиентов 12 & . 6 27

Стельных ре шише нто з 4 4 2 10

Прсцент стельности 33,3 50,0 33,3 37,0

Число отелов двойнями — 1 1 2

Прсчгрит отелов двойнями от числа стельных реципиентов _ 25,0 50,0 20.0

Получено телят 4 3 3 10

У одной телки второй и у одной третьей группы получены отелы двойнями. Одна телка-реципиент второй группы на пятом месяце стельности абортировала двойней, поэтому выход телят в этой группе составил 37,5%.

Всего в результате оныта было получено 10 телят-транс-плаитатов, из нн.х 9 телят герефордской породы и 1 теленок породы саллерс. В целом пркживляемость эмбрионов составила 37%.

З.2.4.- Деление и пересадка половинок эмбрионов

В эксперименте использовали эмбрионы только «отличного» и «хорошего» качества. Оценку качества эмбрионов производили по их морфологической характеристике в соот-гетствпи со шкалой оценки морул и бластоцнст.

Деление эмбрионов производили двумя методами. Пер. внй метод — деление осуществляли металлическим микроскальпелем под лупой, без посадки в зоны пеллюцнда (и условиях производства). Второй метод — эмбрионы делили с использованием мпкроманипулятора в лабораторных условиях. После деления эмбрионов все половники оценивались в зависимости от их размера и морфологической харацтерис-

17

тики. Было разделено 22 эмбриона и получено 40 нормальных половинок ,{90.9%).

Округлившиеся, компактные- симметричные половинки эмбрионов оценивались как «отличные». Полуэмбрионы выглядевшие неравномерными, неправильной формы относились к «хорошим*. «Условно годными» половинками считались полуэмбрионы совершенно не округлившиеся н размер которых был меньше половины целого эмбриона.

После деления эмбрионов «отличного» и «хорошего» качества было получено 29,5% «отличных» половин. 38,6% «хороших», 22-7% «условно годных» и 9,1% не пригодных к пересадке, Первым методом было разделено 10 эмбрионов и получено 18 (90%) половин, вторым — 12 эмбрионов и получено 22 половинки (91,7%). Телкам первой группы (п = 8) пересаживали полуэмбрионы разделенные первым методом, а второй группе (п=10) полуэмбрионы разделенные вторым методом.

В обенх группах получено по 4 стельности (тал. 14),

Таблица 14.

Результаты пересадки разделенных эмбрионов

Методы дел&ния

Показатель первый второй всего .

Разделено эмбрионов 10 12 22

Получено половинок (п-%) 18—90,0 22—91,7 40—90,9

Пересажено половин 16 20 36

Число реципиентов 8 10 1&

Стельных реанш:ентов 4 4 Э

Процент стельности 50,0 40,0 44,4

Получено телят 5 6 11

в том числе:

д войневых 2 4 С

одинцов 3 2 5

Приживляемость половинок 31,2 30,0 30.6

Стельность реципиентов после пересадки половин эмбрионов в первой группе была выше на 10%, чем во второй, В результате эксперимента получено три стельности двойня-

ми — одна в первой и две во второй группе. Из II полученных телят шесть были из числа отелов двойнями. Выход телят в первой группе- так' же был несколько выше и составил 62,5%.

Одним из основных показателен является уровень прн-живляемости половинок. Он незначительно был выше в группе телок, которым пересаживали половинки, разделенные первым методом. 1 |

Из таблицы 15 видно, что при использовании одинакового числа целых эмбрионов получено в первой группе телок 8 стельностен. во второй — 10 стельностей. Уровень стельности был выше в первой группе (48,9%). чем во второй (45,5%). Показатель выхода телят от числа целых эмбрионов составил в первой группе 50%, во второй 45,5%. а от числа стельных реципиентов превышение в первой группе составило 37,5%.

Таблица 15.

Уровень использования эмбриоматериала при пересадке половинок и целых эмбрионов

Показатель ' I Полуэмбрномы

Целые эмбрионы

Использование эмбрионов

Пересажено половинок і: целых эмбрионов

Число реципиентов

Стельных реципиентов

Процент стельности реципиентов

Получено телят

Процент выхода телят от числа целых эмбрионов

Процент выхода телят от числа стельных" реципиентов

Анализ полученных данных позволяет заключить, что з результате деления эмбрионов без микроманипулятора в производственных условиях можно получить дополнительно до 37-5 телят. Приживляемость половинок при этом методе достигала 31.2%,

22 22

36 22

18 22

8 10

44,4 45,5

11. 10

50,0 45,5

137,5 100,0

При уровне стельности 44,4% и приживляемое™ половинок 30,6% не снижается эффективность использования эм-брпоматернала. в сравнении с пересадкой целых эмбрионов,

3.4. Экономическая эффективность трансплантации

эмбрионов в племзаводе «Луч» Брестской области

В племзаводе «Луч» внедрен метод трансплантация эмбрионов, как бнотехнологпческни прием ускоренного воспроизведения высокопродуктивных животных н как одно 113 средств интенсивного использования генетического потенциала выдающихся коров-рекордисток. Для этого в племзаводе построены помещения, лаборатория с необходимым оборудованием, подобраны коровы-доноры и телки-реципненты.

Все имеющиеся основные и оборотные фонды арендованы коллективом пункта. В арендный коллектив, работающий в условиях внутрихозяйственной аренды, входит семь человек: 3 специалиста и 4 человека обслуживающего персонала.

На пункте трансплантации эмбрионов одновременно находится 30—35 коров-доноров и около 200—250 телок-реципиентов. Технология содержания организована таким образом, чтобы для осуществления пересадок имелось необходимое число реципиентов. Для этих же целей ежемесячно поступают новые партии телок случного возраста живым весом 350 . —380 кг и более. В качестве реципиентов используются в основном телки, нс представляющие генетической ценности, закупленные у населения.

Животные, которые не были использованы для пересадки эмбрионов или перегулявшие после пересадки эмбрионов искусственно осеменяются и после установления трехмесячной стельности передаются на другие фермы.

Взаимоотношение между администрацией хозяйства и арендным коллективом регулируется арендным договором и положением по внутрихозяйственному расчету.

Основные показатели работы пункта трансплантации эмбрионов за 1989 года приведены в таблице 16,

Результаты работы пункта трансплантации эмбрионов племзавода «Луч» за 1989 год

Показатели

Наличие коров-доноров 35

Произведено вымываний 51

Получено пригодных, к пересадке эмбрионов 234

Число эмбрионов на обработанного донора 4,6

Произведено пересадок эмбрионов 206

Получено стельностен, п-% 104—50,5

Стоимость произведенной продукции, руб. 177696

Общая сумма затрат, руб. 124557

в том числе: затраты на трансплантацию, руб. 24547

Чистый доход, руб. 53147

Сотимость 3-месячлой стельности реципиента, р, 700

Себестоимость одно Г; стель к., руб. 236

Себестоимость оного эмбриона, руб. 104

Одним из основных показателей работы пункта трансплантации, влияющим на сумму дохода коллектива, является размер материально-денежных затрат. Общая сумма затрат за год по пункту составила 124547 руб.

Сумма затрат на трансплантацию эмбрионов, с учетом содержания стельных реципиентов в течении 3-х месяцев составила 245-17 руб. Себестоимость 3-месячной стельности реципиента для арендного коллектива составила 236 рублей, а одного эмбриона 104 рубля.

Доход арендного коллектива был обеспечен, главным образом. за счет снижения себестоимости стельностен. Основными факторами- оказавшими влияние на себестоимость, явились высокий процент приживляемостп эмбрионов и экономия материально-денежных затрат.

4, В Ы В О Д Ы

I. Применение для синхронизации охоты у реципиентов СЖК в сочетании с простагландином на 9—13 день полового

21

цикла увеличивает число животных имеющих активно функционирующее желтое тело в яичнике и повышает уровень стельности реципиентов на 15,6%. Отрицательное влияние на синхронизацию охоты и прижнвляемость эмбрионов оказывают стресс-факторы механического и физического характера.

2. Оптимальной дозой фоллитропина для вызывания суперовуляции у коров-доноров следует считать 1200 ЕД,. позволяющей получить до 4.5 эмбриона на донора,

3. -Пересадка эмбрионов предварительно осемененному реципиенту позволяет получать до 72,5% стелыюстей реципиентов и 51,7% отелов двойнями. Существенное влияние на получение двоен оказывает возраст, число л актаций, продолжительность сервис-периода, качество желтого тела в яичнике у коров-реципиентов, качество и стадия развития эмбриона.

4. Высокая прижнвляемость двух эмбрионов достигается при пересадке их в разные рога матки одному реципиенту и при наличии в яичнике желтого тела отличного качества. Межпородная пересадка двух, замороженно-оттаянных эмбрионов одному реципиенту увеличивает выход телят до 120%. :

5. Деление эмбрионов в производственных условиях бет специального оборудования позволяет получать до 90% нормальных полуэмбрионов и выход телят до 137-5%.

6. Организация работы пункта трансплантации эмбрионов на условиях внутрихозяйственной аренды позволяет снизить себестоимость стельности с 700 рублей до 23С, себестоимость одного эмбриона до 104 рублей.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Пересадку двух эмбрионов одному реципиенту осуществлять в разные рога матки, используя катетер новой конструкции. Для получения телят-двоен использовать осемененных коров-реципиентов со. второй лактации с продолжительностью сервис-периода от 60 до 100 дней: С целью увеличения выхода телят и повышении уровня использования эмбрно-материала производить пересадку разделенных эмбрионов.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Кыса И. С. Получение двоен методом пересадки половинок эмбрионов. Информационный листок № 46—89. Брестский ЦНТИ, 1989

2. Кыса И. С. Применение метода трансплантации эмбрионов в программе разведения высокопродуктивных животных в племзаводе «Луч» Брестской области — Информационный листок № 19—89. Брестский ЦНТИ, 1989 г.

3. Сарунджиев Е., Влахов К-, Маслев Т., Допчев Р.. Гавриков А., Алексеенко А.. Сергеев Н., Мадисон В., Дроннн А., Карецкая Л., Кыса И. Криобиология и лнофнлизация. Четсертая интернациональная школа. Доклады. Боровец— Болгария. 29.07—06.08 1989 С. 40.

4. Кыса И. С. Влияние стрессов на синхронизацию охоты и приживляемость эмбрионов. Информационный листок № 20—83. Брестский ЦНТИ, 1989.

. Сдано в набор 10.05,90 г. Подписано к печати 16.05.90 г. Форма 60Х84'/16. Печатных листов 1,5. Тираж 100. Заказ 1427.

Березовская типография управления по печати Брестского облисполкома.