Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ВЫЗЫВАНИЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ВЫЗЫВАНИЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА"

(Ы -Яе

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИП ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

<ВИЖ>

На правах рукописи

СВИТОЮС Арунас Гядиминович

УДК 612.646.02

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ВЫЗЫВАНИЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.13 —физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровнцы, Московской обл. 1939

Работа выполнена в Литовском научно-исследовательском институте животноводства к ветеринарии.

Научный руководитель:

док той биологических наук, профессор Н. И. СЕРГЕЕВ.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор К>. Д. КЛИНСКИЇЇ; кандидат сельскохозяйственных наук И. И. БУДЕВИЧ.

Ведущее учреждение:

Эстонский научно-исследовательский институт животноводства п ветеринарии.

Заїші-и диссертация состоится « * іОМСг&ф^ 19 г. в і І/ час. на заседании специализированного Совета Д.020.16.02 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область. Подольский раной, пос. Дубровины.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. А. • -"."»слан

з ознакомиться в библиотеке института.

М т± ,

і

спецналнэнрокип.,, - і .; кандидат биологических наук

И. И. ШМЫГИН

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В основных направлениях экономического и социального развития СССР на 1986—1990 годы и на период до 2000 года предусмотрено обеспечить дальнейший рост производства продукции животноводства, за счет использования научно-технического прогресса в области генетики, селекции и биотехнологии.

Трансплантация эмбрионов — один из генетических приемов селекции в животноводстве. Внедренне метода трансплантации эмбрнонов в производство позволит существенно повысить темпы селекции высокопродуктивного молочного скота, Увеличение с помощью метода трансплантации эмбрионов коэффициента размножения в 2 или 5 раз (8—20 потомков от коровы) повышает селекционный эффект в 1,8—2,4 раза, соответственно.

Для повышения эффективности внедрения метода трансплантации эмбрионов в практику большое теоретическое и практическое значение имеет выяснение роли различных факторов, влияющих на уровень суперовуляции и качество эмбрионов, а также на приживляем ость после пересадки.

Индуцирование высокой степени множественной овуляции не обеспечивает достаточного выхода нормальных эмбрионов. Высокая вариабельность и непредсказуемость реакции яичников на гонадотропин, появление отрицательных факторов после применения гормональных препаратов на воспроизводительную способность животных делает известные методы вызывания суперовуляции весьма ненадежными и рискованными.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключается в усовершенствовании н разработке наиболее эффективных способов гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров, определении влияния некоторых факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов, а также в изучении влияния всей технологии получения эмбрионов на молочную продуктивность и воспроизводительную способность коров-доноров.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

— усовершенствовать и разработать новые методы гормонального вызывания суперовуляции путем применения наиболее эффективны^ препаратов в нами и другими биологически акт!

сочет^^^да^едагланрн-врздш вещее

Мос!(. . , *кадемии

1>. ' > ".СВЗ

■Инд

— изучить влияние различных факторов (качество желтого тела, уровень прогестерона, иммуноглобулинов в крови) на уровень суперовуляции и выход нормальных эмбрионов у коров-доноров;

— на основе полученных результатов дать оценку влияния гормональных обработок, нехирургнческого извлечения эмбрионов и последующего введения простагландина на молочную продуктивность и воспроизводительные функции коров-доноров;

— определить взаимосвязь между качеством желтого тела в яичнике реципиента н качеством эмбриона, пересадкой одного или двух эмбрионов с их прижнвляемостью после не-хнрургической пересадки.

Научная новизна исследований состоит в усовершенствовании существующих способов гормонального вызывания су-перовуляцнн у высокопродуктивных коров. Изучена эффективность отечественного препарата фоллитропина и лютеинп-знрующего гормона при вызывании суперовуляции. Определена степень влияния гормонального вызывания суперовуляции и нехирургнческого извлечения эмбрионов на воспроизводительную способность и молочную продуктивность коров-доноров эмбрионов.

Практическое значение работы. Полученные данные позволяют целенаправленно отбирать коров-доноров для использования их в качестве доноров эмбрионов и получать стабильные результаты гормонального вызывания суперовуляции. Разработаны методические и технические условия пересадки двух эмбрионов одному реципиенту, позволяющие получать высокий процент стельности и отелов двойнями.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку:

— па ежегодных научных советах Литовского НИИЖВ;

— на научной конференции молодых ученых, г. Вильнюс, 1987 г.;

— па Республиканской научной конференции «Состояние и перспективы развития биологии в животноводстве» (21.—22 сентября), г. Харьков, 1988 г.;

— на Республиканской научной конференции «Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота», г. Жодино, 1989 г.

По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Объем работы. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, включая 22 таблицы и I график. Состоит из введения, обзора литературы, материала и методики, результатов исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 169 источников, в том числе 117 на иностранных языках,

ч

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

^Исследования проводил» на коровах черно-пестрой и красной породы 4—8-летнего возраста в Литовском научно-исследовательском институте животноводства и ветеринарии, Бай-согальском экспериментальном хозяйстве, колхозе «Атжали-нас» Паневежского района, колхозах «Драугисте», «Науяс гиаяннмас» и экспериментальном хозяйстве Йонишкелис Пас-вальского района.

Для гормонального вызывания суперовуляции использовали отечественный препарат ФСГ — фоллитропин в разных дозах, ФСГ-п (США) в дозе 40 мг, фоллитропин с пролон-гатором в дозе 1200 ЕД с однократной его инъекцией, фоллитропин в сочетании с ЛГ и СЖК (фоллигон) в дозе 2500— 3000 ИЕ.

Схемы обработки коров различными гоиадотропинами приведены в таблицах 1, 2 и 3.

Таблица I. Схемд гормональной (юработкиї коров-доноров препаратом фоллитропин

День полового цикла Название препарата Доза. ЕД утро j вече» Общая доза

9 Фоллитропин 180 160 360

10 Фоллитропин 150 150 300

11 Фоллитропин 150 150 300

Простагландин 500 мкг 500

13 Фоллитропин 120 120 240

13 Охота и осеменение

20 Нехирургическое извлечение

эмбрионов

Таблица 2, Схема гормональной обработки коров-доноров препаратом ФСГ-п производства! США

День Доза, мг

астраль- Название препарата Общая

ного утро вечер доза

цикла

9 ФСГ-п 7 7 14

10 ФСГ-п 6 6 12

11 ФСГ-п 4 4 8

Простаглэндин. мкг 500 500

12 ФСГ-п 3 3 6

13 Охота и осеменение

20 Нехнрургическое извлечение эмбрионов

Та о л а да 3. Схема обработки" коров-доноров препаратом СЖК (фолпигон)!

День

Доза

астрального цикла

Название препарата

препарата

Ю И 12

13 Н 21

ГСЖК (фоллнгон), ИЕ

Простаг лам дины, мкг

Охота к осеменение Нехирургнческое извлечение эмбрионов

2500—3000 500

Для выяснения взаимосвязи между качеством желтого тела, исходной концентрацией прогестерона и иммуноглобулинов 1§0|, 1&М с результатами супероауляции у коров брали пробы крови перед гормональной обработкой.

Определение концентрации прогестерона в крови проводили радиоиммунологическим методом в лаборатории ВНИИ РГЖ. Количественные исследования иммуноглобулинов — методом радиальной иммунодиффузии в Институте биохимии Литовской ССР.

Восстановительный период у коров-доноров определяли по промежутку времени от извлечения эмбрионов до последующей охоты и восстановления до нормальных размеров яичников у доноров. Учитывали число дней от извлечения зародышей до последующей стельности, повторного вызывания суперовуляции.

Для установления изменений молочной продуктивности суточный удой молока определял» за 2 дня перед гормональной обработкой и спустя 3—4 дня после нехирургического извлечения эмбрионов. Для более тщательного определения колебаний молочной продукции на протяжении суперовуля-торной обработки, удой измеряли каждый день, начиная со дня гормональной обработки до 5-го дня после нехирургического извлечения эмбрионов.

Результаты приживляем ости оценивали с учетом качества н количества пересаженных эмбрионов, также состояния желтых тел реципиентов.

Основная часть экспериментального материала обработана биометрически по методике Н. А. Плохннского (1970).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Влияние дозы фоллитропина на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

Одной из задач исследований было изучение действия разных доз фоллитропина на уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров.

Коров обрабатывали в течение 4-х дней с интервалом между инъекциями 12 часов по убывающим концентрациям препарата. Первая группа коров получила в общей дозе 900 ЕД (300, 240, 200 и 160 ЕД), вторая — 1000 .ЕД {300, 300, 240 н 160 ,ЕД), третья — 1100 ЕД (300, 300, 300 и 200 ЕД), четвертая — 1200 ЕД (360, 300, 300 к 240 ЕД), пятая — 130о ЕД (420, 360, 300 и 220 ЕД) и шестая — 1500 ЕД (480, 420, 360 и 240 ,ЕД) фоллитропина.

Данные таблицы 4 показывают, что в 1-ой группе (900 ЕД) суперовуляцией реагировал]! 55,5% коров, во 2-ой — 70%. Этот показатель на 13,3% повышался при введении 1100 и 1200 ЕД и на 20,9% и 18,8% соответственно при инъекции 1300 и 1500 ЕД по сравнению со второй группой (Р< <0,05). Аналогичные результаты получены и в числе овуляций. С увеличением дозы фоллитропина повышалось число овуляций и составило 4,6, 7,7, 9,4, 11,1, 10,6 и 14,2 соответственно по группам на донора. Отмечено увеличение коэффициента изменчивости в группах коров, обработанных высокими дозами фоллитропина (1300, 1500 ЕД), который составил 45,4 и 57,1%:

Число зародышей на донора оказалось наименьшим у коров I п 2-ой групп, обработанных небольшими дозами препарата (2,6 и 4,4), Аналогичные результаты были получены и в числе нормальных эмбрионов (1,6 и 2,7 на донора). Высоким было число зародышей в 3, 4, 5 и 6-й группах коров. В 4-м группе нормальных эмбрионов получено на 14,6% больше, чем в 3-ей н на 2,6'% и 5,2%, чем в 5 и 6-ой группах. Самое высокое число овуляций (14,2) было у коров 6-ой группы, у них же было зарегистрировано и большее число деге-перированных эмбрионов (2,5) на донора.

Приведенные данные позволяют заключить, что доза фоллитропина 900 ЕД является самой минимальной. Увеличение дозы фоллитропина до 1000 ЕД сопровождалось повышением числа овуляций и нормальных эмбрионов на донора. Однако результаты были заметно ниже, чем при более высоких дозах. Оптимальными дозами следует считать 1100 и 1200 ЕД, при использовании которых суперовуляцию можно получить у 83% коров, от 9,4 до 11,1 овуляций, 3,6 и 4,2 нормальных эмбриона на донора,

Таблица 4. Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров в зависимости от дозы фоллитропина

Доза фоллитропина, БД

Показатель 900 ' 1000 1100 | 1200 1300 1500

Отобрано коров Реагировало сулеоову-ляцией (п-%) Число овуляций на донора

Число неовулировав-шнх фолликулов на донора Лимит

Коэффициент изменчивости (%) Положительных доноров по извлечению эмбрионов (п-%) Число зародышей на донора В том числе: нормальных дегенеопрованных неоп л о дотв оренн ы к яйцеклеток

9 10 12 12 II 9

5-65.5 7—70,0 10-83,3 10—83,3 10—90,9 8—88,8 4,6±0.50 7,7±0,77 9,4±1,10 11,1±1,26 10.6±1.52 14,2±2,87

0,4±0,40 0.6±0,29 0.6±0,27 0,8+0.25 КЗ±0,33 1.5±2,87 4—7 4—10 4—17 4—19 4—20 4—30

24.8

26,7

37.3

35.8

45,4

57,1

5—100,0 7—100,0 10—100,0 0^-90,0 9-90.0 6—77,7

2,6 + 0,60 4,4± 1,17 6.4±1,24 6.7±1.01 6.8+1.13 7,2±1,03

1 6±0,50 2,7± 1,16 3,6±0,88 4.2±0.86 4,1 ±0,86 4,0±0,73

0,8±0,20 1,3±0,42 2,1 ±0,38 1,9±0,58 2,0±0,54 2.5±0,71

0,2±0.20 0,4 ±0,20 0.7±0,33 0.6±0,29 0.7±0,29 0,7±0,33

Таблица 5. Результаты суперовуляции и качества эмбрионов у коров при применении оптимальных доз фоллитропина

Доза фоллитропнпа, ЕД

Показатель

1 группа

II группа

Обработано коров Реагировали суперовуляцией (П-%) Число овуляций на донора Коэффициент изменчивости, % Положительных доноров по извлечению эмбрионов (п-%)

Число зародышей на донора В том числе: нормальных дегенерированных неоплодотворепиых яйцеклеток

35 38

29—82,8 34—86,8

Ч0,8±0,96 11.8 ±1,09

46,0 53,2

27—9вД 30—87,5

6,8 ±0,90 7,6 ± 1,00

3,6 ±0,64 4,4 ±0.63

2.2 ±0,30 2.1 ±0,40

1,0 ±0,44 1,1 ±0,52

В таблице 5 приведены результаты производственной проверки эффективности оптимальных доз (1100 и 1200 ЕД) в разных хозяйствах Литовской ССР, Первой группе корок (п = 35) фоллитропин вводили в общей дозе 1100 ЦД (300,

300, 300 и 2О0 ,ЕД), второй (п-38) — 1200 ЕД (360, 300. 300 н 240 ЕД) по 4-дневной схеме. Положительных доноров по извлечению эмбрионов было в пользу первой группы (93,1. против 87,5%) или меньше во второй группе на 5,6% по сравнению с первой. Отмечено снижение числа овуляций в первой группе коров (10,8 против 11,8). Аналогичные результаты были получены в числе зародышей (6,8 против 7,6) и нормальных эмбрионов (3,6 против 4,4). Существенных раз-личин в числе дегеперированных эмбрионов (2,2 против 2,1) н неоплодОтворенных яйцеклеток (1,1) не выявлено. В итоге выявлена только тенденция некоторого улучшения большинства показателей при использовании фоллитропина в дозе

3.2. Влияние фоллитропина в сочетании с ЛГ и фоллитропина с пролонгатором на уровень суперовуляции, оплодотвори ем ость яйцеклеток и качество зародышей

Анализ экспериментальных данных показал, что применение фоллнтропниа в сочетании с ЛГ повышает число овуляций па 11,9% и снижает на 62,5% число неовулировавших фолликулов. Отмечено незначительное повышение числа нормальных эмбрионов (4,6 против 4,2) и снижение неоплодот-воренных яйцеклеток на донора (0,4 против 0,6) при равном числе дегенерированных зародышей (табл, 6). Таким образом, включение в общую схему гормональной обработки препарата ЛГ дало возможность несколько улучшить результаты суперовуляции и оплодотворяемость яйцеклеток.

Таблица 6. Уровень суперовуляцнн и качество эмбрионов у коров при применении препарата фоллитропина я сочетании с ЛГ

1200 ЕД.

Гоиадотропіщ

Показатель

фодлптро- фоллитоо-І11Ш пин+ЛГ

фоллитро-пнн+про-лонгатор

Отобрано коров

12

11

9—81,8 12,6±2,02

12

9—75,0 7,8 ±0.84

Реагировали суперовуляцией (п— %ї 10—83.3

Число овуляций па донора

Число неовулировавших фолликулов

на донора

Положительных допоров по извлечению эмбрионов (п—%) Число зародышеЛ на донора В тон числе:

И Л ±1.26

0,8-0,25 0,3—0,24 1,0 ±0,33

9-90,0 8—88,8 8—88.8 6,7 ±11.02 6,9± '1,33 5,4 ± 1,09

нормальны л дегенернровашшх Неоп.тодотворенцых яйцеклеток

4.2±0.81 4,6 ±0,98 2.6±0,75 1,9 ±0.58 1,9 ±0,50 1.8 ±0.55 0,6 ±0,29 0,4±0,18 1.0 ±0,46

Выяснено, что обработка коров фоллитропином в течение 4-х дней на 8,3% увеличивала число коров, реагировавших суперовуляцией по сравнению с третьей группой. Аналогичные результаты были получены в числе овуляций к нормальных эмбрионов. Превышение в пользу первой группы коров составило в числе овуляций на 29,7% (Р<0,05), нормальных эмбрионов на 38,1% и почти в 2 раза снизилось число неоп-лодотворенных яйцеклеток на донора,

3.3 Сравнительное изучение влияния разных гонадотроп-ных препаратов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

В результате наших опытов установлено, что обработка коров препаратами ФСГ обеспечивает высокий уровень реакции яичников на гонадотропин по сравнению с препаратом СЖК. Так, в группах коров, обработанных ФСГ, суперовуляцией реагировало 83,1 и 86,8% животных при среднем числе овуляций 11,7 и 11,8. Несколько ниже эти показатели были у коров, обработанных СЖК {81,1% и 10,8 овуляций). Аналогичные результаты были получены в числе положительных доноров по извлечению зародышей (табл. 7).

Таблица 7. Уровень суперовулящш и качество эмбрионов при обработке коров разными гонадотропинами

Покачатель

ФСГ-гт

Гоиадотропи 11

фол лит роли н

фоллиггщ

Обработано коров 65 38 37

Реагировало суперовуляцией (п— %) 54—83,1 34 -86,8 30-81,1

Число овуляций на донора ¡1,1 ±0,60 11,8+1,09 10,8 ±0,70

Коэффициент изменчивости (%) 38,5 53,2 35,7

Положительных доноров по извлече-

нию эмбрионов Сп—%) 49-90,7 30—87,5 24—80.0

Число зародышей па донора 0,6 ±0,57 7,6 ±4,00 4,7 ±0,56

В том числе:

нормальных 4.2 ±0.45 4.4±0.63 3,3±0,51

дегенерировашгых 1,9 ±0,33 2,1 ±0,40 0,9 ±0,25

неоплодотворежшх яйцеклеток 0,5±0,14 1,1 ±0.52 0,5±0,18

Среднее число извлеченных зародышей на положительного донора составило в первой группе 6,6 на донора или 56,4% от числа овуляций. Этот показатель был заметно выше во второй группе коров (7,6 и 64,4%). В третьей группе коров достоверно (Р<0,05) было получено меньше зародышей на донора (4,7) и наблюдалось снижение числа извлеченных зародышей от числа овуляций (43,5%),

Таким образом, приведенные данные показывают, что отечественный препарат ФСГ (фоллнтропин) по своему биологическому действию не уступает импортному ФСГ (США). Применение СЖК (фоллигон) оказалось менее эффективным по сравнению с гнпофизарными фолликулостимулирую-щими препаратами.

3.4. Влияние эндогенных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

Степень успеха суперовуляторных обработок во многом зависит от гормонального статуса и общего состояния организма донора на день обработки. Для этого провели сопоставление качества желтого тела, уровня прогестерона и иммуноглобулинов 1^0], 1^2 и в крови перед гормональной обработкой, с показателями суперовуляции.

Качество желтого тела перед суперовуляторной обработкой незначительно влияло и на уровень суперовуляцин (9,3, 9,8 и 11,2 овуляций соответственно). Связи между числом зародышей, качественных и дегенерированных эмбрионов, не-олл од отворенных яйцеклеток и качеством желтого тела не наблюдалось.

Исследованиями установлена прямая связь концентрации прогестерона в крови коров на день обработки с числом овуляций (г=0,5, п = 79).

При концентрации прогестерона от 1,1 до 2,0 нг/мл число овуляций повышалось с 4 до 9 и более (табл. 8).

Таблица Уровень овуляций в зависимости от концентрации прогестерона в крови коров на день1 гормонально» обработки (п=79);

Число овуляций

Количество коров

Концентрация прогестерона

Процент от числа обработанных

< и 4 10 1.1 ±0,26 12,6

5—8 27 (.6± 0,14 34.3

9 и < 29 2,0±0,15 36.7

Отсутствие реакции на гонадотропнії ІЗ 0,7±0,18 1С,4

Приемлемая реакция яичников на гонадотропин была получена у 63% коров с уровнем прогестерона — 2,0 нг/мл.

При обработке коров препаратом ФСГ наиболее высокие результаты оказались у животиых с уровнем прогестерона больше 2,0 цг/мл, Коровы почти не реагировали, когда кон-

Таблица д. Уровень суперовуляции и качество эмбрионов« при рааиой концентрации прогестерона в крови доноров на деигі гормональной обработки

Концентрация прогестерона, нг/мл

Показатель до 0,7 0.7-1.0 1.6--) ,9 2,0

18 20 II 17

13 37 10 15

72,2 85,0 90,9 88.2

8,5 ±0,69 10,1 ±1,07 11Л'±16 11] .8 ±1.28

3,5 ±0,73 4,5 ±0,75 5,1 ±1,21 6,7 ±11,15

2.4 ±0,4] 2,8 ±0,53 3,0 ±0,62 4.3 ±0,76

0,5 ±0.24 1,0 ±0,35 Ы ±0,30 1,6 ±0.46

0,5 ±0,18 0,7 ±0,23 1,0+0.31 0,8 ±0.26

Число коров 13

Реагировало с^торовчля-иней 1

Процент от общего числа 7,7 Число овуляций на донора 5

Число зародышей ¡ш донора I В том числе: нормальных I дегенерировании х — неоплодотвореншх яйцеклеток —

центрацня прогестерона п день вызывания суперовуляции не достигала 0,7 нг/мл (табл. 9).

Выявлена связь между количеством иммуноглобулинов ^й] и ГдМ в крови с числом нормальных эмбрионов (г = 0,5, п = 53). Аналогичной зависимости числа нормальных эмбрионов от концентрации иммуноглобулинов не наблюдалось. От животных с уровнем иммуноглобулина 1^1 в крови ог 12,7 до 13,9 мг/мл было получено по 4,1 нормальных эмбриона на донора. При концентрации иммуноглобулина от 9,5 до 12,6 мг/мл нормальных эмбрионов было 3,6 на донора, но при этом заметно возрастало число дегенернрованных зародышей, В группе коров, в крови у которых содержание иммуноглобулина не достигало 9,4 мг/мл, число нормальных эмбрионов снижалось в 2 раза (табл. 10).

Таблиц;! 10. Число нормальных эмбионов я зависимости;' от концентрации иммуноглобулина

Показатель

|_Концентрация І^Ді. м,г/мл

| 6,13-9,4

9.5—12,6

12.7—13.9

Число коров

Число овуляций на донора Получено зародышей В том числе: нормальных дегенермрованных неоплодотворенпых яйцеклетоц

24 14 22

8.2 ± 1,33 9,4± 1,3 9,8 ±0.82

4.3 ± 0,93 5,4±!,1 5,6 ±0,55

1,5 ±0.43 3,3±0,93 4,2±0,41

1,7±0,44 1,4 ±0,40 0,7±0,18

(,0±0,44 0,7 ±0,33 0,7±<Ш

Та 0 лицл И. Число нормальных эмбрионов в зависимости от концентрации иммуноглобулина 1цМ

Концентрация 1{?М, мг/мл

Показатель

1,0—1,4 1.5—0.4 2.5-5.0

Число коров

10

8.1 ±1,00 3,2 ±0.79

22

9,7 ±1,31 5.2 ±1.06

21

10,9 ±1.09 6,3 ±1,05

Овуляций на донора Получено зародышей на донора

В том числе;

нормальных дегенернрованных 11еон лодотвор еииых яйцеклеток

0.9 ±0,26 2.9 ± 0.41 4,5+0.61 1.6±0,46 1,3 ±0,44 0.9 ±0,33

0.7 ±0.26 0,9±0,45 0,9±0.22

При концентрации в крови доноров ниже 1,5 мг/мл, получено в среднем 3,2 зародыша, из них 0,8 нормальных. Повышение концентрации от 1,5 до 2,5 мг/мл сопровождалось увеличением числа нормальных эмбрионов (2,9). В группе коров с уровнем выше 2,5 мг/мл, отмечено увеличение эмбрионов до 4,4 на донора с одновременным снижением в 1,5—2 раза дегенернрованных эмбрионов (табл. 11),

3.5. Влияние гормональной обработки, нехирургического извлечения зародышей на молочную продуктивность и последующую воспроизводительную способность коров-доноров

В наших исследованиях изучено влияние гормональной обработки и нехирургического извлечения на молочную продуктивность коров-доноров. Установлено, что из 64 доноров, подвергнутых обработке п промыванию матки, у 20 коров (31,3%) суточный удой не изменялся. Снижение суточной продуктивности на 3 кг наблюдалось у 19 коров (29,7%). Значительное снижение молочной продуктивности более 3 кг было у 13 коров (20,3%). У 12 коров (18,7%) молочная продуктивность заметно повысилась (более 1 кг). В целом количество молока на одну корову в период от начала обработки до извлечения эмбрнонов понизилось на 1,3 кг.

Для выяснения причин снижения молочной продуктивности на протяжении всей суперовуляторной обработки, удой измеряли каждый день. Установлено, что первое понижение молочной продуктивности произошло в день охоты и осеменения. Удой в среднем за сутки понизился с 21.7 кг до 20,8 кг (4,1%). Заметное снижение удоя молока в опытной группе наблюдалось в день извлечения зародышей и особенно на следующий день и составило 1,9 кг или 8,8% по сравнению

с исходным уровнем, В течение следующих пяти дней молочная продуктивность постепенно повышалась, но не достигла5 первоначального уровня.

Средний показатель восстановительного периода в группе коров, которым не вводился эстрофан, составил 33 дня. У коров-доноров в день извлечения эмбрионов однократно обработанных простагландином, этот период на 1,2 дня был меньше (табл. 12).

Таблица 12. Влияние простагландин а на восстановление янчннков у корок-доноров

Показатель

Группы

опытные

однократ- двух крат-1 однократно на 7 (но на 7—8 но на 12 день цикла! дни цикла лень никла

Число коров Ш 15 12 13

Количество дней от извлечения зародышей до восстановления яичников 13± 1.81

Вариабельность 20,3 33 7 21.9 И.7

Число коров с КИСТ03НММП заболеваниями 13 1 — Процент от общего числа 10 20 8,3 —

3!,8± 1,87 28,3± 1,58 29,8±0,84

В третьей группе восстановительный период был самым коротким — 28,3 дня или на 4,7 дня короче, чем в контрольной группе. У корой четвертой группы восстановительный период яичников составил 29,8 дня или на 3,2 дня меньше, чем в контроле п на 1,5 дня больше, чем в третьей группе.

В наших опытах из 13 коров контрольной группы в охоту пришли в среднем через 26,2 дня 12 (табл. 13).

Тп блина 13 Влияние простагланднна на в осс та нов лемме половых функций коров-доноров

Группы

Показатель

контроль

однократно на 7 день цикла

двухкрат- однократно на 7—8 но на 12 дни цикла день цикла

Число коров 13 17 13 16 Пришли в охоту 12 15 13 16 Число дней от извлечения эмбрионов до первой охоты 26,2 ±2, И 7.3 ± 1,51 7,8 1,26 10,6+1.20 Вариабельность <%) 25,9 52.7 33,6 36*4 Период от первой до повторной охоты 19,5±1Л8 25,7±3,27 19,7±2,47 21,9±1,15 Вариабельность (%) 19,( 49,2 45.3 20,9

Во второй группе из 17 коров-доноров после прныенення простагландина в охоту пришли 15 коров. Средний показатель от извлечения зародышей до первой охоты был 7,3 дня. В третьей группе коровы пришли в охоту через 7,8 дня. В четвертой этот период был немного длиннее — 10,6 дня. Сравнительно стабильные результаты по времени от первой до второй охоты были в контрольной группе и составили в среднем 19,5 дня с вариабельностью 19,1%. Во второй группе наблюдалась большая изменчивость в половом цикле (49,2%) и составила в среднем 25,7 дня. Четыре коровы были с нарушенной половой цикличностью. В третьей группе промежуток времени между циклами был несколько меньше (19,7 дня) при высокой вариабельности (45,3%). У одной коровы было отмечено нарушение полового цикла. Стабильные результаты в половой цикличности наблюдались в 4-ой группе. Интервал между первой и второй охотой составил 21,9 дня при коэффициенте изменчивости 20,9%.

Из приведенного следует, что при трансплантации эмбрионов целесообразнее применять простагландии однократно на 5-й день после извлечения эмбрионов или на 12 день от начала предыдущей охоты. Однократное применение простагландина сразу же после извлечения эмбрионов (7-й день) сопровождается высоким коэффициентом изменчивости (49,2j и 45,3%).

3.6. Нехирургическая пересадка эмбрионов

В наших исследованиях после извлечения зародышей определяли стадию их развития и качество. Эмбрионы пересаживали телкам-реципиентам с соответствующим эстральным циклом.

Эмбрионы по результатам морфологической оценки классифицировали — морулы раннне и поздние и бластоцисты ранние и продвинувшиеся в своем развитии. По качеству — отличные, хорошие, удовлетворительные и условногодные для пересадки.

Результаты пересадки показали, что приживляемость эмбрионов в основном зависит от их качества.

При пересадке свежеполученных эмбрионов общий процент стельности составил 42,1% (75 из 178). Высокий уровень приживляемое™ был при пересадке ранних и поздних бластоцист с морфологической оценкой «отличные» и «хорошие» (60,0 и 47,5%, соответственно).

Низкий уровень стельности был после пересадки удовлетворительных и условногодных бластоцист (36,4 и 25,0%) и морул (33,3 и 20,0%). Общий процент приживляемости блас-

тоцист составил 44,5% и оказался на 6,3% выШе, чем морул (38,2%),

Процент стельности после пересадки эмбрионов реципиентам с отличными желтыми телами был несколько выше, чем с хорошими желтыми телами (48,9 и 45,6%, соответственно). Значительно ниже процент стельности оказался у реципиентов с удовлетворительными желтыми телами (30%).

В результате пересадки 178 эмбрионов такому же числу реципиентов стельными стали 75 животных или 42,1%. Процент стельности был заметно выше (53,3%) в группе реципиентов, которым пересаживали по два эмбриона в один рог матки. В этой группе из 32 стельных реципиентов получено 38 телят, в том числе 6 отелов двойнями. Двойневость от числа стельных реципиентов составила 18,8% (табл. 14).

Таблица 14. Результаты прнжнвлпемост» эмбрионов-при нехирур гич еской пер «садке

Показатель Группы

один эмбрион (контроль) 1 два эмбриона в 1 рог матки два эмбриона в оба рога матки

Число реципиентов 178 60 25

Пересажено эмбрионов 178 ■120 50

Число стельных реципиентов 75 32 17

Процент стельности 42,1 53.3 68.0

Количество двоен — 6 6

Процент от числа стельных — 18,8 35,3

Процент приживляемости эмбрионов повысился до 68% после пересадки двух эмбрионов в разные рога матки. Из 25 реципиентов стельными стали 17. В расчете на один эмбрион приживляемость составила 34% или на 7,4% больше, чем при пересадке двух эмбрионов в один рог матки. Пересадка двух эмбрионов в разные рога матки обеспечила 35,3% двойневос-тн от числа стельнціх реципиентов и 24% от числа использованных реципиентов.

ВЫВОДЫ

1. Оптимальной дозой препарата фоллнтропнна следует считать 1200 ЕД, который обеспечивает получение в среднем 11,8 овуляции, 7,6 зародышей н 4,4 нормальных эмбрионов на донора.

2, Сочетание фоллитропина с препаратом ЛГ способствует повышению числа овуляций у коров до 12,6, выходу нормальных эмбрионов до 4,6 на донора. Применение фоллитро-

пика с пролонгатором ухудшает показатели суперовуляцнн н выход нормальных эмбрионов.

3. Оптимальной исходной концентрацией прогестерона в крови коров-доноров перед гормональной обработкой на 9 день полового цикла следует считать 2,0 нг/мл и выше. Оптимальным количеством 1§0[ является 12,7—13,9 мг/мл, а ^М — 2,5—5,0 мг/мл, при котором можно получать свыше 70% нормальных эмбрионов от общего числа зародышей.

4. Гормональное вызывание суперовуляции и нехирургическое извлечение эмбрионов не оказывают существенного влияния на молочную продукцию и последующую воспроизводительную способность коров-доноров.

5. Одноразовое применение простагландина через 5 дней после извлечения эмбрионов сокращает суперовуляторный восстановительный период и промежуток времени от извлечения зародышей до повторных гормональны« обработок.

6. Приживляемость при нехирургической пересадке зависит от стадии развития и качества эмбрионов. Лучшая приживляемость получена после пересадки бластоцист (44,5%), чем морул (38,2%). Пересадка по одному эмбриону в каждый рог матки повышает процент стельности до 68% и отелов двойнями до 35,3%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для гормонального вызывания суперовуляции у высокопродуктивных коров рекомендуется использовать фолликуло-стимулирующий препарат фоллитропин в дозе 1200 ЕД в сочетании с ЛГ, При отборе коров для использования в качестве доноров эмбрионов определять уровни прогестерона и иммуноглобулинов и 1дМ. Отбирать коров следует преимущественно с концентрацией прогестерона в крови 2,0 нг/мл н выше и количеством иммуноглобулина 12,7—

13,9 мг/мл, — 2,5—5,0 мг/мл. Для получения высокого уровня стельностей и увеличения выхода телят целесообразно использовать метод двойневых пересадок по одному эмбриону в каждый рог матки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Свнтоюс А. Влияние суперовуляции на физиологическое состояние яичников н их восстановление // Тезисы докладов конференции молодых ученых. Вильнюс, 1987. — С. 63—64.

2. Свитоюс А, Г., Вашкас Г, Ю. Некоторые факторы, влияющие на уровень суперовуляции // Респ. научи, конф. «Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве (Тезисы докладові 21—22 сентября. — г. Харьков, 1988. — С. 100—101.

3. Свнтоюс А. Г., Сергеев Н. И. Результаты гормонального вызывания суперовуляцин у коров-доноров фоллитропином // Применение метода трансплантации сельскохозяйственных животных. — Бюллетень научных работ, 89 выпуск. — П. Дубровицы, И988. — С. 23—25.

4. Отбор коров-доноров и тело к-реципиентов для трансплантации эмбрионов / Свнтоюс А., Вашкас Г., Анюлис Е„ Стуглис М. // Информационный листок. — Вильнюс, 1988, — 7 с,

5. Вашкас Г., Свитоюс А, Результаты суперовуляции у коров с использованием пролонгированной формы ФСГ II Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота. — Жодино, 1989. — С. 79.

Подписано к печати 20.1,1.1989 г. ЛВ 00313. Бумага 60X90'/«. Заказ № 4835. Тираж 100 экз. Объем 1 п. л. Бесплатно,

233000 Лит. ССР, г, Каунас, пр. Внтауто, 23. Типография имени В. Капсукаса-Мицкявичюса