Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПОЛУЧЕНИЕ, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ПЕРЕСАДКА ЭМБРИОНОВ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ АЗЕРБАЙДЖАНА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ПОЛУЧЕНИЕ, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ПЕРЕСАДКА ЭМБРИОНОВ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ АЗЕРБАЙДЖАНА"

/) тТЯЯЧ

ЙСЕСОВЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУИО-ИССЯ£ДОВАТ£1ЬСКНЙ ¡ИНСТИТУТ Ш00Т НОвОДСЛГВі

На правах руколмоя

АХАДОВ Агахьк Дк&н киви о мы

УДК 612.6^6.02

ПОЛУЧЕНИЕ, ОЦША КАЧВСТаЛ И ПЕРЄСАДКА ЭМБРИОНОВ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ АЗЕРБАЙДЖАНА

03,00,13 - Фиаиология человека м животных /фиіиология овл*скожо»яйат»вннмх хюютних/

А втор в ф о р я т

•иоовртацми на соивкаккв ученой степени каядкдата виолошчеоки* туп

п. Дуйровяш. Москонкой обл.,

■ І9ЄВ г.

Диоое ртаїшонкая работа вішолнем в jatoparopKU : suripHOJurmt ' животных Инотнт/тв зоологи* АН Азербайджанской ССР щ цвятрв по трАНОпланпцин вибрионов оедьоксхозяйственных животных ВНИИ животноводатвл...,..'.':

Научте руководите^: доктор ¿мологнчеохнх наук, профессор Н.И.Ахмедоъ; доктор био логических на/к, профессор Н. И.Сергеев, .,",

Официальные оппонента t доктор бшлогнчвокнкиаук, профессор О.І.Клииокий; доктор ветеринарних наук« профвооор Г,А.Кононов. . ■- '. ■ ■ ■ .-*.; ■."1 ' '■„., .- .'-;..■■'.. ■ ■:

Седужее учрежденив-Всерооонйский научно-исследовательский институт племенного дела.

За«ита диссертации состоится * часов на еаоеданик Специализированного совета

: А. 020. К,Се при Воеооявном ордена Трудового Красного Знаке»* t '' ; нв/чно-коолвдзвателско* институте животноводства. г

Адрес институтаі 142012» Моокоммя область. Подол»окия .■'■■' раяон, поселок Аудровицы, . 1

С диссертацией ношо овиахоммтвся м библиотека института, -

' ." Автореферат реэоолан '// * 1588 г. '■■■;

И.И.0ШПИ

I. ОБЩАЯ ХАРЖГЕНСТИКА РАБОТЫ

В соответствии с Постановление« ЦК КПСС и Совета Министров СССР, принятым в декабре 1986 г., "О мерах по повышению эффективности и улучшению организации племенного дела в животноводстве" Госагропромом СССР разработана и утверждена программа качественного совершенствования сельскохозяйственных животных, предусматривающая широкое использование лучших отечественных и мировых генетических ресурсов, достижения науки в области генетики, селекции и других направлений научно-технического прогресса.

Для получения выдающихся быков-проиэводителей с высоким генетический потенциалом от коров с рекордной продуктивность» будут расширяться работы по трансплантации эмбрионов.

Ыетод трансплантации эмбрионов открывает новые перспективы в создании генетического фонда, обеспечивает резкое увеличение репродуктивных показателей высокоценных сельскохозяйственных животных. Этот же метод является ценным для изучения раннего периода эмбриогенеза и других вопросов.

Однако многие вопросы метода трансплантации ранних эмбрионов недостаточно научены и являются до сих пор спорными. Для повышения эффективности внедрения метода трансплантации эмбрионов а практик/ большое значение имеет выяснение роли различных фан-торов, влияющих на уровень суперовуляции, качество вибрионов и их прмживляемость при нехирургической пересадке. Необходимы также определенные коррективы по отдельным звеньям технологии трансплантации эмбрионов в условиях Азербайджанской ССР.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в определении роли некоторых факторов, а также в разработке наиболее эффективных способов г оулунальцого '"выпивания суперовуляции у

ошбовтидоинадвцигв"вшивания суперовуляции

¿Ка/Я'ЙЪ /)-2в#</

коров, нехирургического извлечения эмбрионов и пересадки их телкам-реципиентам.

Дія разрешения данной целм быдн поставлены следующие за»

дачи:

- изучить влияние различных факторов (тип, схема и доза го-надотропина, порода и возраст животных, сезон года и др.) на уровень суперовуляции я выход нормальных вибрионов у хоров-доноров ;

- усовершенствовать технологи» извлечения вибрионов с использованием инструментов различное конструкции;

- по полученный результатам исследований внести'коррективы в технологию трансплантации вибрионов у крупного рогатого скота применительно к условиям Азербайджанской ССР.

Научная новизна исследований состоит в той, что изучены различные факторы, влияющие на уровень супдровуляции и качество эмбрионов, уточнена эффективность различных схем гормональной обработки и нехирургического извлечения зародышей приборами разной конструкции* Выявлена зависимость выхода общего числа зародышей и эмбрионов, пригодных для пересадки, от дня-их извлечения.

Практическое значение работы заключается в том, что разработанная схема гормонального вызывания суперовуляции в условиях Апиерона Азербайджанской ОСР обеспечивает высокий уровень суперовуляции и получение достаточного числа нормальних эмбрионов для пересадки. Модернизированное новое устройство для извлечения вибрионов облегчает процедуру промывания рогов матки и предохраняет промывную среду от загрязнения иикрофдороа. ■

Впервые в нашей республике был применен метод транспланта-

ции вибрионов у крупного рогатого скота, который имеет большое значение в наших условиях лрехда всего для улучшения породного состава крупного рогатого скота. Телята* полученные от высокопродуктивных коров-доноров методой трансплантации эмбрионов, представляют исключительную ценность дня выяснения ряда биологических вопросов н хозяйственного использования. Бычки-трансплантанты является ценшми. племенными животными для использования на пунктах искусственного осеменения.

Апробация^о^ууенньгх результатов. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:

- научной конференции аспирантов АзербаЛдканской ССР (г. Баку, 1986, 1967 гг.)і

- научной кок£врекфШ молодых ученых АН Азербайджанской ССР (г. Баку, 1987 г.){ ." ;

- научной конференции отдела наземных позвоночных животных ,8 научном семинаре Института зоологии АН Азербайджанской ССР

(г, Баку, 1988 г.);

- научной конференции Центра по трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных ШХа (I96Q г,). -

Внедрение. Вээультаты экспериментальной работы внедрены в Р&маиинском молочном комплексе Алавронского района Азербайджанской ССР. , .

■OfeeM и структура диссертации. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста» содержит 27 таблиц, 6 рисунков. Список литературы включает 276 наименований, в той числе 127 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДУ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования были проведены в I983-1987 гг. на ыолочно-то-варной ферме Хурдаланского н РЬманинекого совхозов Апщеронекого района Азербайджанской ССР и опытном хозяйстве ВИЕа "¡Цапозо"» Опыты по изучению эффективности гормонального вшивания супэр-овуляции в зависимости от различных факторов проведены на 142 коровах бурой латвийской и черно-пестрой пород» нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов - на Z84 норовах-донорах и реципиентах.

Вызывание суперовуляции различными гонадотропними препаратами осуществляли на коровах с учетом возраста, состояния воспроизводительной функции. Использовали в опытах коров как со спонтанной* так и синхронизированной охотой. После выявления охоты у коров, отобранных в качестве доноров или же реципиентов, ректально определяли состояние матки и яичников. Исключали из эксперимента животных с различными отклонениями в половых органах (эндометриты, фолликулярные кисты, отсутствие желтого тела в яичниках и др.). Предпочтение отдавали таким коровам, от которых уже были получены высокоценные потомки, и сохранившим хорошие воспроизводительные функции после двух-трех отелов. Интервал от отела до обработки у коров в среднем был равен 60-65, а от отела до получения эмбрионов - 100-105 дней.

В день проявления охоты коровам инъецировали внутримышечно витамин £ в масляном растворе в дозе 60-100 кг, или тетр&вмт (А, Д, £, Р) в объеме 10,0 мл. Через 10 дней инъекции витаминов повторяли в половинной дозе от первоначальной. Суперовуляцию вызывали нативнда и стандартным препаратом CSC, гипофкзаркым фоллкку-лостицуяирущим гормоном.

При применении комплексной обработки с 1-го по 20-й день астрального цикла один раз в день животным дополнительно давали орально микроэлементы в водном растворе в дозе: сернокислая медь-140 иг, сернокислий цинк - 700 иг, хлористый кобальт - 20 иг и селенит натрия - 00 мг.

Лоза препарата СЖ - 2500-3000 ИЕ, 4СГ-п - 32-50 мг. Перед гормональной обработкой коров подвергали гинекологическому обследованию на наличие желтого тела в яичнике и его функциональное состояние.

Проотогландин (эстрофан) инъецировали через двое суток после введения гонадотрогшна СЖ и на третий или четвертый день обработки йСГ-п, после которой, как правило, большинство коров приходили в охоту через 43 часов. Коров покрывали быками или же осеменяли замороженно-оттаякной спермой двойной дозой, трижды, с интервалом между осенененияыи НЫ2 часов.

Контроль оуперовуляторной реакции яичников осуществляли за день до извлечения эмбрионов, путем ректальной пальпации. Дня промывания рогов матки использовали двухканальный катетер модели "Нойштадт* (ФРГ), с приспособлениями для подачи и сбора среди нашей конструкции. Эмбрионы извлекали на 7-8-й день после первого осеменения. В случаях отсутствия эмбрионов у коров при первом вымывании рога матки иногда промывали повторно.

' В нашей практике на первом этапе освоения техники вшивания эмбрионов работу проводили на выбракованных коровах, при одиночной овуляции» без горыонального вызывания суперовуляции.

Обнаружение вибрионов проводили под бинокудярной лупой (МВС-9} при 15-25-кратнои увеличении в универсальной бактерицидной камере. Морфологическую оценку осуществляли под световым микроскопом НШ-6 (или же ШІ-І5), по методике ШЖ. При этом учити-• 5

вали соответствие стадии развития вибриона его возрасту, правильность формы прозрачной оболочки и ее целостность, равномерность дробления бластомеров, состояние цитоплазми, прозрачность пернпи-теляинового пространства. Эмбрионы, пригодные к пересадке, были трансплантированы коровам- или телкам-реципиентам нехирургическим способом через 1-3 часа после их извлечения.

Рырстиектоя отбирали а основном из числа телок или молодых клинически здоровых коров, как правило со спонтанной охотой. Рііз-кица во времени в астральной цикле между реципиентом и донором ' составляла часов. .

Пересадку осуществляли металлическим катетером модели "Ганновер" СФРГ) с полиэтиленовым чехлом, на пункте и в условиях фермы. Результаты змбриопереседок учитывали по трехмесячной стельности и по отелам. Полученный цифровой материал обработан биометрическим методом.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИГСДЭДШНИЙ '

3.1. влияние различных гормональных препаратов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров-доноров

Одной ив задач наших исследований было выяснение эффективности применения гонадотропного препарата СПС (нативкый и стандартный - фоллигон) и гипофизарного фоллнкудосткыулируицего гормона (4СГ-п), уточнение их доз при вызывании суперовуляции у коров в условиях Атверонекого полуострова. Применение натйаного -СЯК в наших исследованиях оказалось не эффективным. Так, при вызывании суперовуляции препаратом суперовуляцией реагировало только 27,3$ коров. Кроме того, при втом наблюдалась у отдельных животных сильная аллергическая реакция на препарат. Среднее число овуляций составило 3,3 и неовулировавоих фолликулов - 0,7 (16,7Х)

на донора.

По всей показателям результаты были вше в группе животных, обработанных фоллигонои, чей в груше с нативнш С2К. А по Сравнению о обработанными ФСГ-л розница била в пользу ЙСГ-п. Однако существенной разнкцр в числе нормальных вибрионов между второй и третьей группами не выявлено (табл. I).

- Таблица I Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров в зависимости - от типа гонадотролина ----:---------ь-—•—

Гонадотропин

Показатель

С К К

I имивнмй ! стандартный * ниивныи * (фоялигон)

ФСГ-п

Обработано коров , » „. II 62 79

Реагировало суперовуляцией (п -%)..... , 3 -27,3 37 - 71,2 64 - 81,0

Число фолликулов, ивду- 12 347 ■ : 656

циро&анных к росту , . ,

Число овуляций (п - %):

10 - 83,3 299 - 66,2 8,1*0,68*' 646 - 83,2

6,5*0,51

Неовулировавших фодди-нулов ..-.«..... 0,7*0,17 1,340,23^

Оперировано коров ... г ■ 34 ' 63

Извлечено зародышей!

всего . . ...... I 90 189

на донора ... . . V I 4,2^0,52

& том числе;

нормальных ..... I 2,57 2,9x0,48

дегенерированных . . 0,3±0,1б О.^ОДб

неоплодотворекных 1.3*0.41 0,7+0,23

Р < 0,001.

В наших исследованиях применение разлітних доз стандартного препарата СШК (фолдигон) - 2500-3000 ИЕ о бес печи зал о во всех случаях фоллииулости^улирующее действие. Однако по степени действия эти дозы оказались неодинаковыми. Более эффективной оказалась доза 3000 ИЕ.

Применение їСГ-п в дозе 42 мг обеспечивало сравнительно высокий уровень суперовуляции и выход нормальных эмбрионов (4,7 на донора). Отмечена высокая вариабельность реакции яичников на этот гонадотропин. Наряду с отим у отдельных коров нпблвдалось отсутствие овуляции фолликулов, а также наблодались случаи, когда уровень суперовуляции был высоким, но эмбрионы отсутствовали.

Проведены сравнительные исследования по выявлению эффективности гормонального вызывания суперовуляции у коров препаратом ФСГ-п при обработке их на 8-й (пятидневная схема) и 9-й день (четырехдневная схема) астрального цикла.

Установленої что при обработке хоров на 9-й день астрального цикла по четырехдневной схеме реагировало суперовуляцией животных от числа обработанных, против 80,при обработке их на 8-й день по пятидневной схеме. Однако существенных различий в числе овуляций не выявлено. Так, среднее число овуляций составило в первой группе 6,0, во второй - 8,2 на донора. Максимальное. число овуляций наблюдалось при обработке препаратом ССГ-п в течение 5 дней.

Из общего числа оперированных коров зародыш получены в первой группе у 81,8£ и во второй - у 65,<6 животных. Среднее число зародышей на положительного донора составило при четырехдневной обработке 3,4, пятидневкой - 4,3. Имещиеся различия не были до» стоверны. Число нормальных эмбрионов било меньше на 4,4% во второй группе, чем в первой (2,3 против 2,4).

8

Хотя м не установлено достовёрной разниц» между двумя схе-кгмк обработки, но сокращение срока обработки на один день м ухънызете лоза препарата до 42 иг имеет определенное экономическое значение,

Прг* виборе гызокопродуктквгсяс коров для использования в качестве докороз змбрионоз кухіш знания о, потекцнагьшк и факти-«єсісїх аозиокностяг вдзотных той мян другой породы реагировать оупаровуляцией ка экзогенные гошдотрогшны. Нет пока единого ккекхя, какие именно породы скота лучше реагируют на гормональную обработку. Для зыяснення этого вопроса нами быхи проведены хсследозакия ка корозах бурой латвийской к черно-пестрой породы, которые оироко распространены в хозяйствах республики. ■

Число коров черно-пестрой порода, реагкроааззаос суперовуля-Щ'.ей, было на 17,8$ больше, чем бурой латвийской. Среднее число оэуляций на донора в этой группа было больше № 43,3£ (8,6 про-г тип 6,8). Число овуляций варьировало от 3 до 22.

Число извлеченных эмбрионов было значительно больше в группа коров черно-пестроЗ породы* Однако число нормальных эмбрионов было яочти одинаковое (таЗл, 2). "

Вгэультаты исследований показывает, что »а уровень суперовуляции кроме индквкдуадыасс особенностей корок определенное влияние оказывает тип (серия)* доза гонадотропика, способ обработки и порода животных'. Для получения более, высоких результатов суперовуляции и сюекекия вариабельности в реакции яичников является перспективны* применение ЮГ-п.

В наших исследованиях получено всего лишь 32,эароддаей от числа овуляций, что свидетельствует 6 низком техническом уровне извлечения эмбрионов.

Таблица 2

Уровень суперовуляции и качество зароднпей у коров

разных пород

* » 1 ■ ---------------------------1——-—

Показатель

бурая латвийская

Порода и---

: черно-пестрая

Обработано животных ....... 23 40

Реагировало суперовуляцией (п - %) 12 - 52,2 5,8+0,71*' 28 - 70,0 8,3+0,96^

Число овуляций на донора ....

Число неовулировавших фолликулов 2, Су), 41 0,9+0,50

Положительных доноров по извлечению зародылюй (п - %)..... 7 - 70,0 18 - 69,2

Число зародышей на донора . . . . 2,7+0,68 4,0+0,40

В том числе:

нормальных эмбрионов ..... 2,2±0,76 2,1+0,73

дегенерированных ....... 0,1+0,06 0,4+0,14

неоплодот во реиных яйцеклеток • 0,4+0,21 1,5*0,80

** Р < 0,05.

3.2. Влияние возраста й промежутка времени от отела до обработки на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

Анализ экспериментальных данных показал, что в обоих возрастных группах (4-7 и 8-11 лет) примерно равное число животных реагировало сулеровуляцией. Среднее число овуляций на донора э каждой группе также было одинаковым (8,5). Однако вариабельность по этому показателю у коров в возрасте 4-7 лет была высокой (59,1 против 40,7%). Среднее число неовулхровавпмх фолликулов было больше во второй группе нл 33,3$.

Разница по числу извлеченных эмбрионов и яйцеклеток была не существенная (4,0 и 4,4). Это свидетельствует о том, что хоров до II лет можно вполне успешно использовать в качестве доноров

10

эмбрионов.

Из литературы известно, что больше значение при гормональ-

ном вызывании суперовуляции имеет период времени от отела до начала гориокалькой обработки. В наших исследованиях были взяты дзе группы коров с промежутком от отела до обработки в средней 38 к 129 дней. Из 61 коровы-донора первой группы 38, или 62,3%, реагировали суперовуляцией. Во второй группе реагировавших супер-озуляцией оказалось на 19,Йв больше, чем в первой. Процент вариабельности по чисду овуляций был выше а первой группе (46,1 против 35,656).

С поешгениеи числа фолликулов, индуцированных к росту увеличивалось число неовулировавших фолликулов и составило в первой группе 14,и во второй - 16,'Еб (табл. 3).

Таблица 3

! Среднее число дней от оте: да до гормональной обра: ботки

Показатель

ботки

38 * 129

Обработано коров ........ .

{Датировало суперовуляцией (п -Число овуляций на донора-, , ,, , Неовулировавших фолликулов . . . .

61

38 - 62,3

6,7±о,9ІУ э.ьр.ао^

1,1±0,37

49

81

66 - 81,5

1,8^0,35 БО

Оперировано коров .

Положительных доноров нив зародшей {л - %)

¡в по извлече-

33 - 67,3 37 - 74,0 1,ЗД)»67 3,ЁцО,76

Число нормальных эмбрионов на донора ..............

Р с 0,05,

Число нормальных эмбрионов на донора также было в два раза больше у хоров второй группы и составило соответственно 49,7 к 68,3% от числа извлеченных эародщеЯ. Число нормальных эмбряоков на донора колебалось от I до 10, при высоком коэффициенте кэнэм-чивости (136,7% в первой группе и 77,- во второй).

Приведенные данные даат основание заключить, что от коров, длительное время находящихся в половом покое, можно получить сравнительно высокие результаты, нежели от коров, обработанных ранее 60-го дня после отела.

Таким образом, гормональну» обработку с целью вызывания суперовуляции целесообразно начинать не ранее 60-го дня' после отела, так как пик лактации, вероятно, тормозит реакция ямчккков гей гонадотропним, и это может быть одной из причин низких результатов гормонального вызывания суперовуляции.

Э.Э. Влияние сезона года и географической зоны на уровень суперовуляции и качество вибрионов

Как известно, воспроизводительная способность коров неразрывно связана с сезонной сменой погоды и другими комплексными факторами. Анализ експериментом, проведенных в разные сезоны года на 142 коровах, похазал, что процент животных, реагировавших суперовуляцией, был примерно одинаковым в весенний и зимний периоды. Осенний этот показатель был выше наП-106 (табл. 4).

Разница в среднем числе овуляций между первой и второй группами по сезонам года не существенная, но в зимний период уровень овуляции был очень низким. Разница по этому показателю мецду первой и третьей, а также между второй и третьей группами статистически достоверна (Р < 0,05 и Р < 0,01). Вариабельность па это»<у показателю была значительной во все сезоны года, особенно осенью.

Каксимальное число эмбрионов получено в период апрель-моль ме~ скца (4,5 на донора).

Таблица 4

вровень овуляции и выход кори&хькых эмбрионов у корсв в зависимости о? сезона года

Показатель

Ї-. ї апрель-| нюнь

Сезон года

, сентябрь-І_ноябрь

декабрь-карт

Обработано коров ...

Реагкроа&ли суперовуля цией їп - %) .....

Число овуляции ка донора

Число кеовулировавоих фолликулов на донора .

Оперировано коров . ,

Положительных доноров по извлечении зародышей <п - %> ........

Число зародышей ка до-

КОрА

Процент от числа овуляЦИЙ *9»»1#|4«

В той числе:

нормальных .....

дегенеркроваккык . .

неопл одот в о реинмх яйцеклеток . . . .

52

35 - 67,3 0,3^0,

1,2+0,29 34

45

45

37 - 62,2 / 32 - 71,1 9,Єі0,69хх/ 6,3+0,75**'

1,3+0,30 36

г,г$о,зг

29

27 - 79,4 25 - 69,4 19 - 62,1

4.5*0,79 3,9*0,66 3,^0,79

42,1 26,3 30,0

2.8+0,76 0,7+0, 21х* 2,7*0,50 0,5+0,23 2,3+0,76 0,2+0,10*'

1,0*0,33 0,7+0,24 0,9+0,64

Р < 0,05;

Ы

Р< 0,01.

В естественных условиях влияние сезона на половые функции коров безусловны, но изменения, происходящие в воспроизводительной системе, у крупного рогатого скота не проявляются под влиянием только одного фактора, они взаимосвязаны с комплексными факторами.

Данные опытов, проведенных в хозяйствах двух различных географических регионов страны (ОПХ "і^апооо" Кос ко веко Я области и

13

Рвманинекой совхозе Апшеронского радона Азербайджанекой ССР) без учета сезонов года, не выявили больших различий по основный показателям. Так, число овуляций на донора по отдельным зонам составило 7,8 и 8,3 соответственно, а число нормальных эмбрионов - 2,8 и 2,6.

3.4. Влияние витаминов и микроэлементов на уровень супзровуляции и' качество эмбрионов у коров

Для продуцирования яйцеклеток в достаточном количестве и для других жизнекно-ваожес процессов организму животных необходимы все основные компоненты питательных веществ. Одним из таких компонентов, играющих больщу» роль в процессах обмена веществ в организме, являются витамины и микроэлементы.

Установлено, что в отдельных зонах Азербайджанской ССР, а также на Ащцеромсхоа полупустынном субрегионе в почвах и кормовых растениях недостаточное содержание некоторых микроэлементов, в том числе меди, кобальта, цинка, селена и др. микроэлементов (Гаджиев Ф.Ц., 1567; Эюбов и др., 1980). А ото в определенной степени влияет к® продуктивность скота. '

. Поэтому в наших исследованиях была сделана попытка выяснить эффективность вызывания суперовуляции и получения эмбрионов при обработке <ЮГ-п в сочетании с указанными выше биологически активными веществами, повышающими реактивность м потенциальные возможности организма животных.

В день проявления охоты коровам опытной группы инъецировали масляный раствор тетравита в объеме 10,0 мл, который состоял иэ витамина А - 50 ООО ЫЁ, Д - 25 ООО МЕ, Е (токоферол) - 20 мг и Р (линетол) - 5 мг (в I мл). Кроме того, с 1-го по 20-Й день астрального цикла один раз в день давали орально микроэлементы в

водном растворе.

Экспериментальное испытание такой схемы обработки с целью вызывания суперовуляции у коров показало, что процент животных, реагировавших суперовуляцией, был несколько выше в опытной группе, чем в контрольной. Число овуляций на донора было в опытной группе на 46,Зл больше (табл. 5),

Таблица 5

Уровень овуляций и качество эмбрионов у коров-доноров при применении 4СГ-п в сочетании с биологически активными веществами

Показатель

контрольная

Группы

■Т"™

опытная

Обработано хоров .........

датировало суперовуляцией (п - %)

Число овуляций на донора ....

Вариабельность (Í) ...... .

Число неовулировавших фолликулов на донора •

Положительных доноров по извлечению эмбрионов (л — JE).....

Число зародышей на.донора ...

В том числе:

нормальных эмбрионов ....

двгенерированных эмбрионов .

неоплодотворенкш яйцеклеток

31

25 - 80.7 8,2+0,53*' 36.5

1,7+0,41

17 - 54,8 4,3+0.41

2,4+0,45 0,9+0.12 1,0+0,13

12

10 - 83,3 12,0+1,04*' 31,7

1,7+0,39

6 - 50,0 5,8+1,06

4,3+1,19 0,5+0,17 1,0+р,50

Р < 0,01.

Указанная схема обработки позволяет осуществлять четкую синхронизацию охоты у хоров-доноров. Так, все обработайте животные через 48 часов после введения простогландина, проявили признаки охоты. Степень овуляторноЯ реакции на применение одной и той же дозы ЗСГ-п в сочетании с витаминами и микроэлементами а данном

15

опыте была замзтно т.

Одним на крмтеркев эффективности гормональной обработки коров считеатол ~?оцект изэдечакньес вмбрхонсз, годгедс к пересадка реципиентам. 3 данной опыте ка донора получено в £,8 раза больсе нормальных габрконоэ, чей в контроле. Сплодотворяемость яЯцэклеток была тапкэ яучшэ в опытной группе (£2,8 «ротиэ 76,

Таким обрезом, используемая иаия схема комплексной обработка1 обеспечивала високий уровень супероэуляции и выход нормальних эмбрионов. Вероятно»'это обусловлено благоприятным влиянием мхд-роэлементсв х «хтаминоэ на физиологические функции половых яэлэз и в целой з» организм животных*

3.5. Оадсдотворяемоеть яйцеклеток в зависимости о« числа овуляций и разных методов * осеменения

По данкюі различиях авторов, воходотворяемость яйцеклеток и выход змбриовоз, пригодных к пересадке, в определенной мера зависят от уровня суперовуляции. В наших исследованиях лимит овуляций находился в пределах от 3 до 22. С г.озмэением числа овуляций соответственно позшаяось чксло в&роддаеа и нормальных эмбрионов на донора. Пр» уровне овудяцмй от 16 до 22 в среднем било получено 9,3 зародыша.. Вариабельность числа нормальных вибрионов была значительной (80.ЗД. Пять коров-доноров реагировали 17-ю и одна - 22-мл овуляциями, в среднем на донора - 17,8. При этом от них подучено 52,3£ зародышей от числа овулнров&ввиэс фолликулов (табл. 6).

В литературе очень мало сведений о результатах осеменения коров после гормонального вызывания суперовуляции. Первые попытки осеменения коров с суперовулядоей в наших исследованиях были

Таблица б

Распределение хоров по числу овуляций к качеству * эмбрионов

————- —--—----1--------—------—--------

Число овуляций

Показатель

3-І' ; " 6-Ю ПІЇБ" :" 16-22

Число коров, реагировавших^« ^»уляци- ^ _ ^ ^ _ зди ZQ _ 19<г & _ b Q

Число овуляций на

донора ....... 4,4+0,20 8,0+0,22 I2,&vG,30 17,8+0,50

Оперировано коров . 33 40 20 6

Положительных доноров по извлечению

зародышей (п - І) . 14 - 42,4 30 - 75,0 ' 20 - 100 6 - 100

Число зародышей на „/ „/ „/ _/

донора. . ..... 0,SW3,20*/ г.б+О.Зб*' б,7+0,64*'9,3+1,56*/

Число нормальных эм- „/ „/ /

б pito нов Г .... . 0,7¿0,24'o</1,7+0, ЙТ^ 4,2+0,76*/ 6,8+2,24*/

Р < 0,001; W р < 0>01<

неудачными, что было связано с отсутствием оплодотворяемоети яйцеклеток у иоров. В связи с этим были проведены сравнительные опыты по определению эффективности естественной случки к трехкратного искусственного осеменения с содержанием 75 иан. живчиков в дозе семени.

. В результате оказалось, что разница в числе положительных доноров по извлечение эмбрионов среди сравниваемых групп была в пользу первой группы. Число овуляций и эародшей на донора было на 38,1 и 27t3í£ соответственно больше в группе искусственно осемененных коров. Также в два раза было больше нормальных эмбрионов (табл. 7).

Полученные данные позволяют заключить, что на оплодотворяв» мость яйцеклеток у коров влияет многочисленные факторы, связан-

мыв одновременно и с индивидуальными особенностями животных, питанием. сезоном года, качеством спермы, методом осеменения и др.

Таблица 7

Оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров при

различных методах; осеменения " * —- ------------------------г_

Показатель

Метод осеменения

• естественная : искусственное

. Р№Ш1Гй * ПЛАкІАийииа

.X.

случка : осеменение

Оперировано коров ....................20 79

Положительных доноров по извлечению зародышей (п - %)..... 16 - 80,0 54 - 68,4

Число овуляций-на донора .... 6,3+0,87 8,7+0,92

Получено зародышей» всего . ... 52 228

На положительного донора по извлечению ............ 3,3+0,85 4,2^0,87

В том числе!

нормальных вибрионов . , . . . 1,5±0,7Й 3,0+0,68

неоплодотворенных яйцеклеток . 1,2±0,б8 . 0,8+0,43

Оплодотворяемость яйцеклеток {%). 63,6 81,1

3.6. Нехирургическое извлечение и пересадка вибрионов

Традиционные способы промывания рогов матки с помощью впри- -цев емкостью 50-60 ил менее удобны для этой цели. Так как для промывания одного рога матки коров оператор должен 10-12 раз повторить соединение пустого шприца с флаконом со средой и с набранной средой - с катетером, отсоединение от катетера после обратного получения среды и слив ее в мерные цилиндры* на что затрачивается много времени. Плюс необходимо иметь дополнительно двух помощников. При этих манипуляциях не исключена возможность загрязнения среды микрофлорой.

Сконструированное нами устройство исключает большинство отій .

меченных недостатков. При работе с ним максимально предохраняются эмбрионы от вредных воздействий внешней среды (температура, свет« микробное загрязнение, взбалтывание смывного раствора я Др.). Поставленная цель достигается тем, что введение промывной среды' в рог матки и удаление ее производится по закрытой системе. Ори этом влияние светового фактора снижается до минимума. В устройстве вмонтирован термостат, сохраняющий постоянство температуры извлеченной из матки среды с эмбрионами в пределах 36-37%. При работе с атин устройством средний выход среды на промывание одного рога матки составил 94,3Í от объема введенной среды. А при вымывании шприцами потери раствора составили 14,

Число навлеченных эмбрионов составило в среднем на донора 4,2, или на 10,5(5 больше, чем при вымывании шприцами. Вымыто 35,эмбрионов от числа овуляций.

Лругое преимущество предложенного нами устройстая было а том, что сокращается ііочти вдвое продолжительность времени на вымывание.

В наших исследованиях не все обработанные гормональными препаратами животные подвергались вымывании эмбрионов* Д> ЗО,2Л коров по различим причинам выбывали при извлечении эмбрионов. Основная причина выбытия доноров была в отсутствии суперовуляции (16,3£), охоты в конце обработки гонад отропюпи препаратами {7,050. непроходююсти канала шейки маткм катетером (4,9Х).

В наших исследованиях всего произведено 99 »хирургических вымываний. От 70 хоровt или 70,7Í животных от числа оперировании* удалось извлечь эмбрионы и яйцеклетки. Среднее число извлеченных яйцеклеток и эмбрионов на положительного донора составило 4,0 при лимите от I до 15, Процент извлеченных эмбрионов составил мсшьше половины (32,756) «тот числа овуляций (табл. 8).

■■' ■" ■ " - 19

Таблица в

Результати \ [ехирурги чес ко го извлечения эмбрионов у коров-доноров

Показатель : М ± щ

Лимит

Положительных доноров по извлечение зародышей (п - %)..... 70 - 70,7

Число овуляций на донора .... 8,2+0,17 3-22

Число зародышей на донора , . , 4,0_»0,I-I5

В том числе:

нормальных...............2,6+0,37 I-I5

дегенерировонных..............0,5*0,16 1-8

неоплодотворенных яйцеклеток ♦ 0,9+0,21 1-7

На 7-й день вымывания у коров-доноров било получено 31,9J вибрионов от числа овуляций, на 8-й этот показатель был на 8,1% больше. По числу зародышей в зависимости от дня извлечения разни» ца была в пользу первой группы. Нормальных эмбрионов на донора оказалось больше, чем в три раза при извлечении их на 7-Й день, по сравнении с извлечением на 8-й день (Р < 0,01).

Всего было получено и морфологически оценено 280 зародышей, которые были разделены с учетом качества и стадии развития (табл. 9).

В наших экспериментах из числа свежеполученньпс эмбрионов по качеству отличные составили 8,7$, хорошие - 39,0$, условно годные (удовлетворительные) - 36,7$ и непригодные - 15,

Из числа эмбрионов, пригодных для пересадки, ранние и поздние морулы хорошего качества составляли 27»7£, удовлетворительные - 46,3%, непригодных для пересадки было XI,•

Процент ранних и поздних бластоцист относительно небольшой, из них 79,0% отличного и хорошего качества. Только в некоторых

случаях встречались бластоцисты с небольшими отклонениями.

20

Таблица 9.

Распределение св еже полученных зародышей по стадиям их развития

Стадия развития Число за-родьеоей : Процент от общего ; числа зародышей

Неоплодотворенкые яйцеклетки . - 62 22,1

16 5.7

Морула;

56 19,6

81 28,9

Еластоциста:

40 14,3

ПОЗДНЯЯ .....г.... 17 6,1

без прозрачной зоны .... 2 0.7

Пустые прозрачные оболочки . . 7 2,5

После оценки качества эмбрионы пересаживались коровам-реципиентам с соответствующим эстральнш циклом. Результаты пересадки эмбрионов показали, что прняивляемость в основном зависит от качества эмбрионов (табл. 10).

Таблица 10

Результаты пересадки свежеподученных эмбрионов разных стадий развития и качества

Стадия развития и качество I Пересажено омбрионов эмбрионов

Стельных реципиентов <п - %)

82 16 - 19,6

6 3 - 50.0

. 46 II - 23,9

удовлетворительны»'. ... 30 2 - 6,7

22 10 45,5

6 4 - 66,7

16 6 - 37,5

104 26 25,0

Нехирургичвским методом было пересажено 104 эмбриона 65 коровам-реципиентам, из них в оба рога матки 10 реципиентам было пересажено 26 эмбрионов, остальным - по одному эмбриону.

Данные таблицы 10 показывают, что процент стельности от пересадки норул составил 19,5, а бластоцисг - 45,5, что указывает на лучщуо прнживляеыость вибрионов на стадии бластоцисты. Высокий уровень приживляемое™ составил при пересадке ранних и поздних бластоцист с морфологической оценкой "отлично* и "хороню*

(66,7 н 37t6i соответственно), а также поздних иорул отличного качества (50,Ц$), Наши результаты согласуются с данными Н. Я. (1961), ЫжЫй, Я. (1932), Сергеева Н.И. и др. (1964), Букаровой В.И. (1985).

Низкий уровень стельности от пересадки морул обусловлен, по-видимому, большим количеством эмбрионов с отклонениями от кормы, которые не обнаруживаются при визуальной морфологической оценке.

В наших опытах также была проведена пересадка удовлетворительных эмбрионов, обычно по два в одни рог матки, или.же в сочетании с эмбрионами хорошего качества. Опыт мировой и отечественной практики показывает ка целесообразность пересадки таких вибрионов, ибо от них возможно получение приплода. В результате подобной пересадки в наших исследованиях, только в двух случаях подучена стельность, когда были пересажены две морулы в один рог матки, и рождение нормального теленка. Вторая стельность прорвалась на третьем месяце.

От 104 пересаженных свежих эмбрионов всего прижилось 26, или примерно четвертая часть. Низкая приживляемость эмбрионов (25,0%), по нашему мнении, может быть связана со сроком и условиями хранения эмбрионов перед пересадкой, неполноценными корм*

22

дєниями реципиентов и несбалансированностью рационов «рвотных в хозяйствах по питательным верствам.

Полученные телята были хорошо развитыми и имели нормальную , живу» кассу (32 кг). Три бычка от ценных элитных пар родителей переданы на элэвер для дальнейшего выравнивания.

ВЫВОДЫ

1. Показатели гормонального вызывании супвровуляцни у коров-доноров были выше при использовании 4СГ-П в дозе 42 «г по сравнения со стандартным (фоллигон) и нативным препаратом СЮ. Не выявлено существенных различий при применении четырех- и пятидневкой схемы введения гипофиэарного гормона.

2. Выявлены некоторые межпородные различил у коров-доноров в уровне суперовуляция п$и гормональной обработке их одинаковыми препаратами. Коровы черно-пестрой породы лучше реагировали на гормональную обработку; по сравнению с бурой латвийской,

3. Установлено, что продолжительность срока от отела до гормональной обработки коров заметно влияет на уровень суперовуляции и ее результаты* Чем больше срок от отела до обработки, тем • «ше показатели в числе овуляций и нормальних эмбрионов.

4. На уровень суперовуляций и выход нормальних эмбрионов оказывает определенное влияние сезон года. Число овуляций в весенние к осенние месяцы достоверно вше« чем в зимние.

. 5. Обработка коров гонадотропином ССГ-л в сочетании с вита- . минами и микроэлементами способствовало улучшение воспроизводительной функции коров и повьшеюю выхода нормальных эмбрионов с 2,4 до 4,3 на донора.

6. С увеличением числа овуляций (до 13-22} не снижалась оп-

ло дотво ря е ко ст ь яйцеклеток и выход пригодных для пересадки эмбрионов. Прнживляемость при нехирургической пересадке зависит от стадии развития и качества оибрионов. Лучшая приживляенооть получена после пересадки бластоцист Л5, %f, чек ко руд /19,

ПРАКТИЧЕСКИ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для вызывания суперовуляции у коров рекомендуется применять ФСГ-п по четырехдневной схеме в дозе иг на животное. Для лови пения уровня суперовуляции и увеличения числа нормальных .эмбрионов в условиях Апяерона целесообразна комплексная обработка коров-доноров с использованием гонадотропных препаратов в сочетании о биологически активными веществами /витамины и микроэлементы/.

Список работ, опубликованных по 1 теме диссертации:

1. Ахадов А.Д. Влияние некоторых факторов естественной среды на вызывание полиовуляции у коров // Материалы Республиканской научной конференции аспирантов. -Баку, "Зли", 1966. -0.12-14.

2. К изучении уровня лолковуляцки к качества эмбрионов при применении ФСГ-п и фоллигона / Ахмедов H.H., Зобов Керимов Т.Д., Саркксова J.M., Ахадов А.Д, // Известия АН Азербайджанской ССР, биологические науки. -1986,-*б. -С. 42-46.

3. Ахадов А.Д, Влияние разных методов осеменения на оллодо-творяемооть яйцеклеток у коров-доноров яри трансплантации зародышей // Труды науч, конф. молодых ученых АН Азербайджанской ССР. -Баку, М3лм\ 196?. -С. 142-Ю.

4. Пересадка эародыией у коров /Зобов Н.Э., Ахмедов H.M.j Саркисова I.M., Ахадов А.Д., Аливзаде С,// Вестник с.-х. науки. -Баку, 1988. -*2. -С. 43-47.

ШійІ'рафЦД минил '.

\л -

Формат