Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение, ценка качества и пересадка эмбрионов крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Получение, ценка качества и пересадка эмбрионов крупного рогатого скота"

ВСЕР0СС1ЙШЙ ЯАУ10!О-1!СаЛЕЛОЗАТЕЛЬСШ1а ШЮТПТХ ЖИВОТНОВОДСТВА

(ВКЗ)

о* ^

X - На правах рукописи

4 Л

«АССОЙА .Лейба Дьедашю

Палучегаю, оценка качества и пвреоадгш' зыбрконов крупного рогатого спота

03.00.13. - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы, Московской области, 1995г.

Работа выполнена в центре трансплантации 'эмбрионов с.-х. животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства, ОПХ "Дубровицы", АФ "Щапово" и ГСХП "Толмачево" Нижегородской области.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Н.И.СЕРГЕЕВ

Официальные оппоненты - заслуженный^деятель науки

Российской Федерации, доктор биологических наук, профессор Ю.Д.КЛИНСКИЙ

доктор биологических наук С.В.СОВЕТКИН -

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский селекционно-генетический институт животноводства.

Защита диссертации состоится " ' $ " ?1995 года

в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.020.16,02. при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан Йо * ^ 1995 года.

Хченый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Л.А.Науменко

- а -

л. ОЕШДЛ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. В результате достижения в области искусственного осеменения, появилась возможность эффективно влиять на улучшение племенных качеств животных через высокоценных производителей. Селекция через высокопродуктивных маток ограничена. Повторяемость рекордной продуктивности в потомстве рекордисток составляет 8-15% (Л.К.Зкнст, В.Г.Самохин, Н.Т.Семенов).

Метод трансплантации эмбрионов является важным дополнительным средством ускорения качественного улучшения продуктивности скота, обеспечивает более полное использование генетических ресурсов маточного поголовья путем увеличения коэффициента размножения ценных особей.

Этот метод позволяет значительно сократить время на создание выдающихся семейств, линий и новых типов молочного и мясного скота. В последние годы метод трансплантации эмбрионов стал преобладать в управлении функция размножения. Однако, несмотря на достигнутые успехи, существует еще ряд нерешенных вопросов, сдерживающих введение широкой запрограммированной работы. Одним из недостатков применения гонадотропинов и га производных является непредсказуемость реакции яичников на введение экзогенных препаратов и широкая вариабельность в числе овуляций и нормальных эмбрионов у разных животных на одинаковые дозы препаратов. В настоящее время разработаны и предложены разные схемы вызывания множественной овуляции. Однако индуцированная полиовуляция в аспекте трансплантации эмбрионов приобретает более конкретное значение и вызывает необходимость иэыскивания новых способов стимулирования множественного роста фолликулов в яичниках.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в усовершенствовании и разработке более эффективных методов получения, оценки качества и нехирургической пересадки эмбрионов.

Исходя иэ этого были поставлены следующие задачи:

- усовершенствовать приемы синхронизации охоты у доноров и реципиентов;

- провести сравнительные испытания эффективности применения ЗСГ разных фирм (США, Литва, Россия) на уровень суперовулчции и качество эмбрионов;

- определить степень влияния одноразового гормонального вы-

зывания суперовуляции и нехирургического извлечения эмбрионов на последующую производительную способность доноров;

- изучить влияние биотммуляторов (сурфагон, диригистрзн, лютеовиман) на уровень овуляции, оплодотЕоряемость яйцеклеток у доноров и прилшвляемость эмбрионов у реципиентов.

Научная новизна заключается в усовершенствовании существующих способов вызывания множественной овуляции у коров-донороЕ и изучении взаимосвязи между временем введения ГнРг и оплодотворя-емостью яйцеклеток.

Практическая значимость работы. Разработанный способ вызывания суперовуляции у доноров обеспечивает высокий уровень индуцирования роста фолликул.чв, овуляции и выхода нормальных эмбрионов, пригодных для пересадки.

Апробация работы. Материалы диссертации дожжены на Республиканской научно-практической конференции молодых ученых "Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве" Украинского института йШЕОтноводства (Харьков, 1993 г.). Вошщ в отчет отдела трансплантации эмбрионов с.-х. животных.

Объем работы. Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 5 рисунков,

Список литературы включает 193 источника, з том числе 147 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ V. ШЩЩА ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная работа выполнена в период с 1992 по 1994 г. в отделе трансплантации эмбрнглю* ОПХ БИЕз "Дубровицы" и "Щапово", агрофирме "Толмзчезо" Нилнегсродокой области. В качестве доноров использовали коров черно-пестро;': породы в возрасте 4-5 лет с живой массе 500-570 кг и продуктивностью 5000-6000 кг молока за лактацию. Реципиентами служили телки черно-пестрой породы в возрасте 16-18 месяцев с живой массой 360-580 кг.

Для определения уровня гормонов в крови, отбор проб крови осуществляли перед синхронизацией охоты, в день охоты, перед гормональной обработкой, в день осеменения доноров и пересадкой эмбрионов у реципиентов. Для синхронизации .охоты использовали простагландин (анипрос ) и вызывания суперовуляции 2СГ (США), фоллитропин (Литва) и супэр-ФСГ (Россия), ГнРг - диригестран и сурфагон, и препарат ЛГ - л^теозиман (Болгария).

Синхронизации охоты у телок реципиентов проводили одно или двукратным введением простатланднна в дозе 500 мкг и в сочетании с фоллитропином (200 ЕД) и супер-ФСГ (10 мг). Гонадотропнн и простзглзндина инъекцировали одновременно. Для подготовки коров-доноров попытаны 3 схеш синхронизации охоты с использованием простзграндина в комбинации с ФСГ (Литва - 300 ЕД, Россия -10 мг, США - 10 мг). Для профилактической санации матки коров-доноров перед обработкой использоьзли препарат ГАМП и иоди-кол. Для определения влияния гормональных препаратов на продолжительность охоты у коров-доноров и качество эмбрионов использовали гонадотропнн в дозе 5 чл :: ЛГ - i5D0 ИЕ. Извлечение эмбрионов осуществляли двухканальным катетером модель Нойштадт-Айш (ФРГ) и Elite. Пересадку эмбрионов проводили нехирургическим методом заранее подготовленным реципиентам в рог матки с желтом телом в яичнике катетерами ЕШа и Нойлтадт-Айш (ФРГ). Для снятия напряжения с шейки и рогов матки использовали 2% новокаин (5 мл) сокрально и маточный релаксант внутримышечно (10 мл).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

5.1. Изучение эффективности комбинированного применения препаратов для синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов

Включение е схем;/ синхронизации охсты гонадотропинов в определенной степени унифицируют процессы, происходящие в яичниках животных, обработанных прсстагландином и как следствие, обуславливает равный промежуток времени наступления охоты у максимального числа животных. В свою очередь, это отражается на качестве вновь образованного желтого тела, а следовательно на пригодности доноров для вызывания суперовуляции и реципиентов для пересадки эмбрионов (табл. 1).

Ео всех группах от числа обработанных проявило признаки охоты приблизительно одинаковое число коров.

Основное число их пришли в охоту в течение 48 ч. Однако число коров по каждой группе было различными (62,5; 73,7; 75,0 и 84,2% соответственно).

Результаты синхронизации охоты у коров при использовании простаглапдина в сочетании с гонздотропинзмп

ГРУППЫ, п - %■

Показатель Контроль (ПГФ2й) (ПГФ?.&)+ (ПГ02&)+

+500 MIT + СОСГ-П Фсл-иин Супер-ФСГ

(1ГГФ2&) 10 ■ мг S00 ЕД 10 мг

Обработано коров 20 20 20 20

Пришш в охоту 15-80.0 19-95,0 18-90,0 19-25,0

В т.ч. через 24 ч 1 -6.0 - 2 -11,1 3 -15,8

43 ч 10-62,5 14-73,7 15-75.0 16-84,2

72 ч 5 -31,2 5 -26,3 1 -5,5 -

Не проявили призна- •1 -5,0

ки охоты 4 -20.0 2 -10,0 1 -5,0

Число коров пригод-

ных для суперовуля-

ции . '• ■ •14-87,5 16-84,2 17-94,4 18-94,7

В контрольной группе не пришли в охоту 20%, в опытных групп 5 и 10% коров. Число коров, имеющих в яичниках к началу обработки (10-12 день) хорошо выраженное желтое тело было одинаковым в первой н второй группе ( 87,5.и 84,27.) и несколько больше з третьей (94,47.) и в четвертой (94,7% ).

Приведенные данные показывают, что применение простатланди-

Таблпцс. 2

Сравнительные результаты синхронизации охоты у телок-реципиентов при применении 4-х схем обработки

■ Показатель ГРУППЫ, п-%

( ПГЗЙй- ) (ПГФ25-) + Фол-пин 300 ЕД (ПГФ2&)+ Супер-ФСГ 10 мг

однократно двукратно

однократно

Обработано телок 71 55 44 42

Пришли в охоте 47-66,2 44-80,0 39-Я8.6 38-90,5

в т.ч. через 24 ч 3-6,4 6-13,6 5-12,8 3-7,9

48 ч 23-48,9 25-56,8 31-79.5* 29-76,ЗА

72 ч 21-44,7 13-29,5 3-7,6 6-15,8

Не-пришли а охоту 24-33,8 11-20,0 5-11,4 4-9,5

Число телок пригод-

ных для пересадки 32-68,1 31-70,4 30-76,9 31-81,6

* Р < 0,05

на в комбинации с гонадотропинзш не оказывает существенное влияние на общее число животных, пришедших в охоту, но обеспечивает проявление ее признаков в более разном промежутке Бремени у мак-симапьного числа обработанных животных. В результате число ко-

рое, пригодных для вызывания суперовуляции достигло 94,72.

На телках-реципиентах было проведено сравнительное испытание 4-х схем синхронизации охоты (табл. 2).

Наибольшее.число телок, пришедших в охоту в группе после обработки простатландином в сочетании с супер-ФСГ (90,5%), наименьшее - при однократной обработке одним яростагдзнтином (66,2%). ' ' .

В двух группах при синхронизации охоты простагландином в сочетании с гипофизарным гонадотропином подавляющее число телок пришли в охоту через 48 ч (79,5 и 76,3%), что достоверно превышает соответствующий показатель первой и второй групп (Р<0,05). При однократном введении простагландина, число телок пригодных для пересадки эмбрионов на 7-й день.астрального цикла было меньше (63,IX), чем в группах телок синхронизированных двукрзтно (70,4%) к в сочетании с гонадатропинами (76,9 и 81,6%).

3.2. Сравнительное испытание отечественных и зарубежных препаратов ФСГ при вызывании супероЕулнции у коров

Высокая эффективность гипофизарных препаратов по сравнению о ГСЖК предполагает более широкое их применение/ возросшие г последнее время потребности в них сложности в приобретении импортных препаратов стимулировали организацию их изготовления в России.

В процессе научно' производственных опытоа, нами было проведено на 63 коровах черкопестрой породы, испытание препарата ССГ различных фирм изготовителей (табл. 3).

Данные таблицы 3 показывают, что число положительных доноров по суперовуляции, числу овуляции и нормальных эмбрионов было несколько больше при применении супер-ФСГ в дозе 50 мг. При применении фоллитропина и супер-йСГ среднее число овуляции и нормальных вибрионов было несколько больше, чем в первой группе. Разница по числу нормальных эмбрионов на донора была в пользу супер-ЙСГ и фоллитропина. Однако число дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток было больше во второй группе (табл. 4).

Основным показателем оценки эффективности" того или иного препарата является число нормальных эмбрионов' и их качество.

Результаты суперовуляции при применении препаратов 2СГ разных фирм изготовителей

ГРУППЫ

Показатель ФСГ, 50 США мг ФСГ, ЛИТВА 1200 ФСГ.РОССИЯ 50 мг

Обработано коров 21 21 21 Реагировало суперовуляцией 19 18 № Процент от числа обработанных (X) 90,5 85,7 95,2 Число овуляции на донора 9,8+0,9 11,2±1,1 10,8±0,8 Положительных доноров по

извлечению эмбрионов 16 17 ' 20 Процент от числа реагировавших суперовуляцией (%) 84,2 94,4 100,0 Получено нормальных эмбрионов на донора 4,7+0,6 5/1+0,8 6,2+0,7

Таблица 4

Овуляторная реакция яичников и качество эмбрионов v коров

ГРУППЫ'

Показатель ФСГ, 1-я США гр. ФСГ, ЛИТВА 2-я гр. ®СГг 3- РОССИЯ I гр.

Число овуляции, всего' Получено зародышей, всего Процент от числа овуляции,% На одного донора Нормальных эмбрионов, всего Процент от числа зародышей На одного донора Дегенерированных эмбрионов п-%

Неоплодотворенных яйцеклеток п-% Качество эмбрионов: отличные хорошие удовлетворительные

169

•118

69,8

7,4+1,1'

75

63,5

4,7+0,6

202

151

74.7

8,9+0,6

87

57,6 5,1+0,8

20-16,9

30-40,0

31-41,3 14-1867

21-13,9 42-48,3 29-33,3 16-18.4

216 186 86,1 9,3+0,9 124 66,7 6,2+0,7

29-24,6 43-28,5 40-21,5

22-11,8 72-58,1 40-32,2 12-9,7

Максимальное число интактных эмбрионов (6,2) было получено при использовании супер-ФСГ и минимальное в первой группе (4,7) на донора. Почти равное количество эмбрионов с 1-й группой было во второй (5,1). По числу дегенерированных эмбрионов существенной разницы не установлено. Несколько больше 23,5%) их было во 2-й группе и меньше в 3-й (21,5%). Неоплодотворенных яйцеклеток за-

-"- ю -

меню было больше в 1-й группе (16,9 против 13,9 и 11,07. соответственно).

Ив приведенных данных следует, что наиболее эффективным для вызывания суперовуляции является препарат супер-ЗСГ.

Ео второй' серии опыта была изучена эффективность супер-ССГ и фоллитропина при использовании стандартной схемы вызывания су- ' перовуляции у коров и схемы в убывающей дозировке.

Установлено, что применение фолликулостимулирущего гормона по убывающей концентрации не улучшало результатов суперовудяции.

Все ото вместе взятое вызывает необходимость изыскания новых средств для вызывания суперовуляции и технологии его осуществления.

В исследованиях была сделана попытка постовуляториого введения вСГ, который мог бы увеличить число ачтральных фолликулов в яичниках к моменту гормональной обработки путем однократной инъекции ФСГ в начале зстралького вдш (.3 или Б дней) после предыдущей охоты в дозе 4 мг. Основную обработку сделали препаратом 2СГ (США) в дозе 40 мг; начинали с 10-го дня зстргиансго цикла (табл. 5).

Данные таблицы 5 показывают, что при стимуляции шгашков препаратом на 3-й и 5-й день астрального цикла обеспечивало суперовуляцию у Ю0£ животных, в контроле у 91'.. Среднее число овуляции возрастало с- 10,5 до 13,5 и 13,2 соответственно. Нормальных эмбрионов было достоверно (Р<0,05) больше б 2-й группе (7,7) чем в 1-й (4,9) и 2-й (5,1).

Из приведенного следует, что стимуляции яичников лучке осуществлять за 5 дней до начала основной обработка, которая позволяет увеличить число овуляции до 13 и снизить количество кеепдо-дотворенны;-; яйцеклеток до 11, К. /

3.3. Влияние различных факторов на уровень суперовуакции и качество эмбрионов

В исследованиях было изучено влияние возраста коров-доноров на уровень суперовуляции и качество эмбрионов.

Из 41 животного на гонадотропин-фоллитропин в дозе 1200 ЕД, реагировало суперовуляцией 87,81. В группе телок и выбракованных коров пслучеко минимальное число свуллцпп и зарсдышей (2,2 и 6,4; 9,5 и 5,С соответственно) по сравнении со 2-й я 3-й группа-

Результаты суперовуляции и качество эмбрионов у коров с использованием стимуляции препарат ФСГ в начале цикла

1-, i группа 2-я группа 3-я группа

Пасазатель День обработки

10 -й, к-ль 3 и 10-й 5 и 10-й

Обработано коров 11 11 11

Реагировало суперовуляцией, п-% Ю-90,9 11-100,0 11-100,0

Общее число овуляции 105 149 159 -

Овуляций на донора 10,5+1,47 13,5+2,1 13,2+1,1

Получено зародышей, всего 74 120 124

Процент от числа овуляций 70,5 80,5 77,9

Нормальных эмбрионов, всего 49 56 92

Процент от числа зародышей 56,2 46,2 74,2

Нормальных эмбрионов. на донора 4,9±1,23 5,1±0,8 7,7±0,4*

Неоплодотворенных яйцеклеток . 20 18 14

Процент от числа зародышей, % 27,0 15,0 11,3

Дегенерированных эмбрионов 5- 46 18

Процент от числа зародышей, % 6,7 33,3 14,5

* Р<0,05

ми. Процент полноценных змбрионов по группам от числа полученных зародышей составил 41,2 (телки), 41,8 (первотелки), 64,8 (коровы 3-4 лактации) и 35,9 (выбракованные).. Из приведенных данных следует, что реакцию яичников на гонадотропин можно получить у донора любого Еозраста и физиологического состояния, одна!сс последние оказывают значительное Елияние на показатель суперовуляции и качество эмбрионов. Так по числу дегенерированных и неоп-лодотЕоренных яйцеклеток на донора существенных различий не наблюдалось, но большое число интактных эмбрионов было в 3-й группе (5,1+0,5), самое низкое в 4-й группе (2,0+0,7) и в 1-й -(2,6+0,9).

Наибольший процент стельности (45-6071) был от пересадки эмбрионов от доноров 2 и 3-й групп, Что на 5 и 20% больше, чем в четвертой группе. Включение в схему гормонального вызывания суперовуляции у коров препарата ЛГ (лютеозиман) в дозе 1500 НЕ за 12 часов до. предполагаемой охоты и (диригестран) в дозе 5 мл перед первым осеменением, способствует сокращению продолжитель- ' ность охоты, повышению числа нормальных эмбрионов, снижению дегенерированных зародышей и неоплодотворенных яйцеклеток (табл.

Результаты суперовулящш к чколо знбрнопоз у коров-доноров разного возраста

1 1 ■ -...........- | 1-я группа "Г~—.....-......—; ! 2-я группа | 1 3-я группа I 4-я группа

Показатель | Телки ! Первотелки ! Коровы 3-4 ! Коровы

1 1 1 1 _!_ __| ! яакз?ацш"1 ! ...................1 | > 6 лет

Обработанных ютров 10 10 10 11

Реагировало суперовуля1щей 10 8 10 8

Процент от числа обработанных 103.0 £0,0 100,0 72,7

Положительных доноров по

иавлеченкэ зародынэй 8 6 0 7

Процент от числа реагировавши:

суперовуляцией 80,0 '75,0 СОД) 87. Б

Количесво овуляции, всего 82 8-1 08 76

- иа одного донора 8,2x1,3 10,510,8 9,841.1 9.510,9

Получено аародыкей. всего 51 43 71 39

Процент от числа овуляции 62,1 51,1 72,4 51,3

- вародышей на донора 6,4±1,2 7,2±0,7 7,911,3 5,6±1,4

Получено нормальных вибрионов,

всего 21 18 46 14

Процент от числа зародызей 41,2 41,8 64,8 25,9

Нормальных змОрконов ка донора 2.6Ю.9 3,0±1,1 Б.110.6 2,010,7

Влияние препаратов, диригестрана и лютеозимана на результаты суперовуляции и качество эмбрионов-

1-я группа 2-я группз 3-я группа

Показатель ФСГ+дйри- 'ЮГ + ли- ФСГ

гестран теогиман контроль

Обработано коров 12 12 12

Реагировало суперовуляцией 12 11 11

Процент от числа обработан-

ных 100.0 91,7 91,7

Продолжительность охоты, ч 21,4+2,1 24,0+2,3 26.3+2,2

Общее число овуляции 149 158 156

на одного донора 8.3±0.9 14,4+1,4 96 14,2+1,2

Число зародышем, всего 87 92

Процент от числа овуляции 58,4 60,7 58,9

на одного донора " 7,2±0,6 3,7±0,8 8,4+0,5

Нормальных эмбрионов 63 61 44

Процент ог числа зародыией 72,4 63,5 47,8

на одного донора' 5/4±0,7 5,5±0,6 4,0+0,8

Дегенерированных эмбрионов,

п-% 16-18.4 24-25,0 28-30,4

неоплодотЕоренных яйцекле-

ток, п-% 8-9,2 11-11,4 ■ 20-21,7

При изучении факторов влияющих на эффективность трансплан-

тации эмбрионов был проведен анализ вызывания множественной овуляции у коров доноров в разные сезоны года. Установлено, что независимо от типа гонздотропина, схем обработки, результаты суперовуляции различны. Так при обработке коров доноров летом и осенью суперовуляцией реагировало »лвотных бс.-.те (84,0 и 91,5%), чем весной (77,7%) и зимой (79,3%).

Аналогичные результаты были получены по числу нормальных и качеству эмбрионов (табл. 8). Вариабельность по числу неовулиро-вавЕих фолликулов была высокий во всех сезонах года и колебалась от 26 до 482, что свидетельствует о большом проявлении индивидуальной особенности животных.

Для проф!1лактической цели перед гормональной обработкой проводили санацию матки препаратами иодинола и ГАМП, что способствовало увеличению числа нормальных эмбрионов с 46,1% (¡контроль) до 79,87. (ГАШ) и 71,7% (йодинол) при снижении числа дегенерированиях эмбрионов (30,8% протиЕ 13,5 и 118,2%) и неоп-лодотворенных яйцеклеток (табл. 9). При этом наиболее эффективны).! препаратом оказался ГАМП.

Качество эмбрионов по сезонам года

Показатель Сез'он года

Весна Лето Осень Зша

Получено зародышей 729 761 754 635 на одного донора ' 6,2+0,48 6,1+0,39 5,9+0,44 5,3+0,30 Нормальных эмбрионов, п-% 347-47,6 433-56,9 490-64,0 289-45,5 на одного донора 3,4+0,22 3,9+0,11 4,3+0,87 2,7+0,21 ДегенерироЕанных

эмбрионов, п-% 184-25,2 155-20,4 117-15,5 203-32,0 НеоплодотЕоренг.ых

яйцеклеток, п-% 198-27,2 173-22,7 147-19,5 143-22,5 Качество эмбрионов,

п-7, отличные 120-34,6 165-38,1 183-37,3 103-35,6

хорошие 101-29,1 146-33,7 164-33,5 90-31,1

удовлетворительные 126 36,3 122-28,2 143-29,2 96-33,2

Таблица 9

Влияние профилактической санации матки коров на уровень суперовуляции, оплодотЕоряемость яйцеклеток и качество эмбрионов, (п-%)

Показатель Контроль Препараты

ГАШ Йодинол

1 2 о 4

Обработано коров 12 13 12

Реагировало суперовуляцией 10-83,3 12-92,3 ю-вз,з

Положительных доноров по

извлечению зародыаей 9-90,0 11-91,7 10-100,0

Нормальных эмбрионов 8-88,9 11-100,0 10-100,0

Число овуляций, всего 93 103 112

на одного донора 9.8+0,83 9,0+0,74 11.2+0.67

Получено зародышей,всего 78-79,6 104-96,3 99-88.4

на одного донора 8,7+0.38 9,4+0,67 9.3+0,82

Нормальных эмбрионов 36-46,1 ' 83-79,8 71-71,7

Дегенерированных эмбрионов 24-30,8 14-13,5 18-18,2

Неоплодотворенных яйцеклеток 18-23,1 7-6,7 10-10,1

Качество эмбрионов: отличные 7-19,4 31-37,4 23-39,4

хорошие 16-44,4 43-51,8 37-52,1

удовлетворительные 13-36,2 9-10,8 6-8,5

- 1С- -

3.4. Ёлиание гормонального вызывания суперовуллции и нехирургни.'-ского извлечения на воспроизводительную способность К"'рои доноров при одноразовом их использовании

Еы?ы1'.' ¡нне множественной овуляции обуславливает в организме проц-"ссп резко отличающихся от физиологических в норме. В связи о этим представляется важным, изучение взаимосвязи ме.жду гсна-детрошшами, технологии вызывания суперовуляции, извлечения эмбрионов н пр-одоллительностъю восстановление воспроизводительной функции у доноров разного возраста (табл. 10).

Таблица 10

Зллянне гормонального вызывания сулеровулящш и нехирургического извлечения эмбрионов на Еоссгзноаление половой функции доноров разного возраста

1-я группа 2-я гр-, ттла 3-л группа

телки первотелки Ксров.ы>3 лет

Показатель П р е п а р а т и 'ГСГ

Золли-пин Оупер- ССГ ®гг(аил)

■Н'?ло животных

Бремя наступления 1-й охоты

;;сол° извлечения эмбрионов

( день ) Время плодотворного осеменения ( день ) Число донсроз осемененных

п-л

до 20 дня 21-60 51-90

10

12,8±0.7

43,414,8

1-10,0 б-ео.о з-зо.о

14,410,6 63,514.8*

3-37,55-62,5

10

12,010,7 40,413,9

3-30,0

4-40,0 3-30,0

* Р с 0,05

Ив 28 доноров, промг.чутеи от извлечения до плодотворного осеменения составил 47,013,3 дня при изменчивости показателя 441.. Не было ьыявлен существенной разница меяду груплами животных по числу дней от извлечения -до наступления нервен охоты (12.8; 14,4 и 12,0 дней), соответственно. У торов-первотелок, период от извлечения до плодотворного осеменения составил 63,5 дня. что достоверно больше чем з других группах (Р<0,05).

2.5. Зависимость уровня суперовуляции и приливляемости эмбрионов ст концентрации прогестерона и эстрадиола в креви ксров-дснороз и телок-реципиентов

Отмечено, что определением в крогп концентрации половых

гормонов можно более объективно оценить состояние репродуктивной системы.. В наших исследованиях проведено сопоставление концентрации прогестерона и эстрадиола с показателями суперовуляции (табл 11).

Таблица 11

Зависимость числа овуляций в зависимости от концентрации прогестерона и зстрадиола в крови коров-доноров

Число коров Число овуляций Прогестерон Эстрадиол

нг/мл пг/мл

о отсутствие 0,9+0,20 31,0+6,20

8 2-6 1,9+0,38* 25,9+5,72

12 .7-10 4.2+0,63* 28,6+3,50

S > 11 4,3±0,26** 30,8+3,39

* Р<0,05 ** Р<0,001 Анализ данных таблицы 11 показывает, что с повышением концентрации прогестерона от 1,9 до 4,8 нг/мл увеличилось число овуляции от 3 до 11 и более. Число овуляций коррелировало с концентрацией прогестерона (г-0,63) и не было связи этого показателя с концентрацией эстрадиола.

3.6. Влияние ГнРг на гормональный"фон крови и функцию яичников коров при суперовуляции

Эксперименты по изучению действия ГнРг (сурфагон) в дозе 200ыкг на уровень стельности был проведен на трех группах поров по 10 животных в казвдой. Первой группе инъекцмровали 2СГ (сол-литропин) - контроль, второй группе ФСГ и в ганце охоты ГнРГ при осеменении в начале охоты, третьей группе ФСГ и в начале ■ охоты при осеменении . в конце охоты. Определение ЛЕ и гонадотропинов проводили рздиоиммулогическнм методом в лаборатории Е№1РГК^

Исследования показали, что средний интервал от введения прсстагландина до наступления пика ЛГ был практически одинаковым и составил 64,1+3,9 (контроль) 63,8+4,6 (опытная 1-я) и 74,2+6,2 часа (опытная 2-я). Пик ЛГ наблюдайся у 4-х коров контрольной группы, 7 - второй и у 8 - третьей, что оказала существенное влияние на число овуляции и зародышей у коров (табл. 12).

Не было выявлено достоверной разницы по числу зародышей между группами коров с наличием пика ЛГ. Отмечено тенденция увеличения числа овуляции у коров с диком ЛГ. Значения пика ЛГ у

Число овуляции и зародышей у коров при наличии и отсутствии пика ЛГ

Группы Число овуляций Число зародышей

Присутствие пика ЛГ Отсутствие пика ЛГ Присутствие пика ЛГ Отсутствие пика ЛГ

ССГ(1-я контроль) В,вн.87 ЗСГ+ГнРГ в конце охоты (2-я опытная) 9,б±2,1 ФСГ+ГнРГ в начале охоты (3-я опытная) 12,ЗЮ,7 5,810,25 7,6±3,6 9,710,76 6,710,59 8.411,72 10,910.17 4,710,19 5,513,5 8,910,18

коров были сравнительно одинаковыми и составили в первой группе в среднем 37,8±13,5 нг/мл, второй - 39,619,8 нг/мл и третьей -

(время мин)

Рис. 2. Среднее значение пика ЛГ по группам коров

На рисунке 2 показано, что применение ГнРг не меняет профиль предовуляторного пика ЛГ и независимо от времени его применения и осеменения, не выявлено Еырахенностн его пика.

Концентрация прогестерона )соррелнрсвала с числом овуляций (г-0,91) и зародышей (г-0,88) при достоверности (Р<0,01). При введении ГнРг в начале охоты наблюдалась высокая концентрация ЛГ, по сравнению с коровами, которым вводили ГнРг в конце охоты. Средняя концентрация ЛГ составила 7,82±0,8 и 2,610,78 нг/мл соответственно, что почти в 3 раза меньше (Р<0,001). Разные величины концентрации ЛГ, вероятно связаны с разными временем введения ГнРГ, что заметно отразилось на результатах стельности после первого осеменения. При введении ГнРг и осеменении в начале охоты стельность составила 352. Аналогичные результаты были получены при осеменении в начале охоты и введении ГнРГ в конце охоты.

- а в -

При осеменении в конце охоты и инъекции ГлРг в начало охоти, стельность составили 50%. Осеменение коров и введение ГнРГ I1. конце охоты обеспечило' стельность у 25Х жиеотных.

3.7. Результаты пересадки эмбрионов телкам реципиентам

После морфологической оценки, часть свежеполучошшх змйрио-нов пересаживали реципиентам, часть подвергали криоконеервнрова--шв, оттаивашю и пересадке. Эмбрионы пере-садиваш толкай на 7-й день астрального цикла по одному зыбриону в рог матки, на стороне которого нмслось ХОрОИЁЭ яй-лтос тсло В ШГчННКе ('¿'¿Г/, 13) .

Таблица 13

Результаты пересадки свежеполучешшх и аачороживашга оттаянных эмбрионов телкам-реципиентам

Эмбрионы

Показатель • Свежеполученние Заморожено-

оттаянные

Число реципиентов 137 37

Пересажено эмбрионов 137 37

Стельных реципиентов 56 12

Процент стельности, (%) 40,9 32,4

Из таблицы 13 видно, что призшвляемость эмбрионов от свеже-полученных эмбрионов на 8,5Х бша выше, чем при пересадке замо; роженно-оттаянных. Причиной относительно не высокой прдашвляе-ыости эмбрионов возможно была связана со стадией развития ц их качеством, а также разнокачествешостью реципиентов. Так, прл-жпвляемость от пересадки морул (п-32), стельность составила 37,6%, от блаотоцйст (п-105) - 46,1?1. При пересадке поздних ло-рул отличного качества (п-6), пр!шшляемость составила 50%, • блаотоцйст (п-12) 66,63. Не наблюдалось существенных различий в прижнвляемостп морул н блаотоцйст (п-23) хорошего качества -45,7,и 43,ЪУ. соответственно.

ЕШ0£Ы

1. Пршенение простоглаадиксш в сочетании с гонадотропинаш не оказывает существенного влияния на общий процент прихода яи- • еотных в охоту, но обеспечивает проявление ее признаков в более равном промежутке времени у максимального числа обработанных ли-

вотных. Еключение в схему синхронизации охоти гонадотропинов способствует компактному по времени наступлению охоты и обеспечивает увеличение числа потенциальных доноров и реципиентов.

2. Наиболее эффективным для вызывания суперовуляции у коров доноров является гипофизарный гормон супер-ССГ. Препарат ЭСГ-фоллитропин по эффективностью несколько уступает супер-ФСГ и заметно превосходит по всем показателями препарат ХСГ производства США. Применение ФСГ по убывающей концентрации не улучшает результаты суперовуляции. Однако показатель качества эмбрионов был в пользу понижающей концентрации.

3. Реакция яичников на гонздотропин, можно получить у донора любого возраста и физиологического состояния, однако последние оказывают значительное влияние на пока?1^ель суперовуляции и качество эмбрионов. Продолжительность охоты до 12 и более 24 часов не имеет связи с числом зародышей на донора, но сопровождается снижением числа нормальных эмбрионов до 42% и стадии их развития.

4. Включение в схему гормонального вызывания суперовуляции у коров препаратов диригестрача в дозе 5 мл за 12 ч предполагаемой охоты или лютеозимана в дозе 1500 ИЕ перед первым осеменением сокращает продолжительность охоты, повышает число нормальных эмбрионов, снижает количество дегенерированных и неоплодотьорен-кых зародышей.

5. Оздоровление полости матки коров предп- латаемых доноров перед обработкой оказывает позитивное влияние на результаты суперовуляции. При этом наиболее эффективным препаратом является ГА1.Ш. Йодинол оказывает некоторое негативнее влияние.

5. Гормонзльное вызывание суперовуляции и нехирургическое извлечение эмбрионов не оказывает отрицательного влияния на последующую воспроизводительную способность коров доноров при одноразовом их использовании.

7. Применение небольшой дозы <ЕСГ (4 мг) за 5 дней до начала основной обработки достоверно увеличивает число нормальных эмбрионов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДШШСШ

Для синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов рекомендуется использовать простатландин и сочеташш с гонадот-

роликами. За 5 дней до обработки применять небольшую дозу СССГ в день обработки о препаратами ЛГ. Для санации матки у коров-доно-■ ров перед гормональной обработкой применять препарат ГАМП.

Основное содержание диссертации опубликовано в статье Мас-соыа Лембе Дьедонне "Влияние ГнРг на гормональный фон крови и функцию яичников коров при суперовуляции "Зоотехния", 1995, с.::