Влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость эмбрионов

Родольфо Рамирес Родригес

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость эмбрионов
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость эмбрионов"

На правах рукописи

РГБ ОД

Родольфо Рамирес Родрнгес

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ, КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ

03.00.13 - физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискания учёной степени кандидата биологических наук

Дубровины Московская область - 2000

Диссертационная работа выполнена в Российском университете дружбы народов и в отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИЖ)

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Н. И. СЕРГЕЕВ доктор биологических наук, профессор Н. А. ПОРФИРЬЕВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, А. М. ЧОМАЕВ

кандидат биологических наук, А. И. НОВГОРОДОВ

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт

племенного дела

Защига диссертации состоится , ^ 2000г

в ] 0.00 часов, на заседании диссертационного совета Д.020.16.02 во Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства Адрес: 142012. п. Дубровицы, Подольского района, Московской области

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института животноводства

Автореферат разослан " " Л-С&уЬ?*) 2000г

О I

^ Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук _ , В.П.ГУБАНОВА

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современные экономические условия диктуют неотложную необходимость повышения шггенсивностн селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных, а также создамия современных высокопродуктивных пород, линий и гибридов скота, отвечающих требованиям постоянно меняющейся конюктуры рынка. Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов.

Олнако у крупного рогатого скота основным лимитирующим фактором успешного развития и применения метода трансплантации является высокая степень нарушений репродуктивной функции коров (около 40 %).

Существенным ограничением возможностей трансплантации зародышей является также низкая оплодотворяемосгь яйцеклеток и отклонения в их развитии после их оплодотворения с высоким процентом гибели эмбрионов.

Проявление фенотипических признаков имеет генетические и внешние компоненты, которые можно представлять соответственно как присущие и неприсущие организму. Если жизнеспособность или выживаемость эмбрионов рассматривать, как фенотипический признак, то гибель эмбрионов может происходить в результате дефектов в одном или обоих из этих компонентов или от взаимодействия между ними. Наблюдается три общие тенденции. Во-первых, независимо от метода оплодотворения, процент гибели эмбрионов всегда имеет место. Во-вторых, чем большему воздействию подвергается эмбрион, тем выше эмбриональная смертность. В третьих, результативность пересадки повышается по мере совершенствования метода, это предполагает, что некоторые негативные внешние факторы могут быть устранены.

Однако существо причин эмбриональной смертности изучены недостаточно и вполне очевидно, насколько это важны для внедрения трансплантации в производство.

Эффективность применения трансплантации эмбрионов в практике селекции молочного скотоводства во многом зависит от правильного отбора коров-доноров по способности выделять достаточное число качественных эмбрионов после гормональной обработки и искусственного осеменения Разработка возможных объективных тестов прогнозирования эмбриопродуктивности доноров имеет важное теоретическое и практическое значение для улучшения воспроизводства высокопродуктивных коров.

■t ,

(19,5%). Удой на фуражную корову уменьшился на 536 кг. В нынешней экономической ситуации при отсутствии государственной, поддержки появились серьезные симптомы разрушения племенного животноводства.

Пересадка эмбрионов в частности важна в развивающихся странах, в том числе в Латинской Америке. На результаты трансплантации эмбрионов влияют и физиологические особенности доноров и реципиентов, а также квалификационная способность специалиста, осушесвляюшего процедуры. Известны исследования по Изучению этих факторов в странах умеренного климата на животных европейского происхождения (Эрнст Л К., Сергеев Н И 1989, Куанышбеков Б М. 1990, Самоделкин А Г., Гавриков AM, Сергеев Н И. 1996) Однако мало известны научно-обоснованные исследования этих факторов в тропических условиях

Зарубежные авторы отмечают, что несколько стран центральной и южной америки имеют значительное количество скота и, что развитие животноводства способствует значительным образом улучшению в потребностях питания населения и экономики страны. Однако усилия па созданию государственных программ по трансплантации эмбрионов в большинстве этих стран не дали заметные результаты, и почта невозможно получить достоверную информацию.

Популяция скота в Гватемале насчитывается у734 млн. Работа по пересадкам эмбрионо! началась в 1976 г. С 1976 по 1978 гг. трансплантация эмбрионов проводилась на фермах используя Gyr, Nelore и индо-бразильские породы скота и было получено 400 стельносгей. Межа; 1979 и 1980 гг. пересадки проводились на коровах брахманой, гоЛштиной и бурой шведско; пород. С 1983 по 1986 гг. сообщалось о 70 стельносгей в результате трансплантации эмбрионоЕ Некоторые попытки проводились по пересадке замороженно-оттаянных эмбрионов

Относительно трансплантации эмбрионов у других сельскохозяйственных животных, Латинской Америке были сделаны только отдельные попытки. Было сообщение о рождении ягнят козлят и жеребят, но число их незначительно К сожалению исследования, не проводились н аборигенных видах, таких как южно-американские мозоленогие (лама, альпака, викунья), которы имеют большое значение в Перу, Боливии и Чили.

Несмотря на то, что некоторые страны имеют основные нормы контроля ввоза заболевал i путем ввозимых эмбрионов, нет четхих, хорошо разработанных правил для эмбрионов пересадок, что затрудняет международную коммерцию эмбрионов.

О продаже замороженных эмбрионов зарубежного или отечественного происхождеш были сообщения только в газетах. К сожалению, невозможно узнать с уверенностью ypoeei коммерциализации замороженных эмбрионов.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлось ловыси эффективность синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов до 95% гормональное индуцирование суперовуляции на 25% Определить эффективность применен

фолликулостимулнрующего гормона и сурфагоиа для повышения оплодотворяемости яйцеклеток и выхода эмбрионов, пригодных для трансплантации у доноров при сулеровуляции.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи1.

1 изучить эффективность комбинированного применения биологически активных препаратов при синхронизации охоты у коров доноров и телок реципиентов,

2 определить эффективности гипофизарных препаратов фолликулостимулнрующего гормона в сочетании с рилизииг-гормонами при стимуляции овуляции у коров-доноров эмбрионов;

3 изучить влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов,

4 изучить влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции;

б изучить влияние различных факторов на приживляемость эмбрионов при их пересадке

телкам-реципиентам

Научная новизна. Усовершенствованы методы синхронизации охоты у коров и телок на основе применения современных гормональных препаратов. Повышена эффективность индуцирования охоты до 86,6-90,0 %. Определены факторы, влияющие на показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту и при суперовуляции. Разработаны методы овариостимуляции с целью ускоренного завершения послеродового периода и периода восстановления после использования коров в качестве доноров эмбрионов. Изучены эндокринные факторы, лежащие в основе биотехнических методов управления половым циклом коров.

Практическая значимость работы

Усовершенствованные методы синхронизации охоты у коров и телок позволяют эффективно планировать и проводить индуцирование суперовуляции у доноров и экономически эффективно проводить эмбриопересадки реципиентам.

Ускоренное восстановление репродуктивной функции лактирующих коров доноров после извлечения, а также корректирование послеотельной воспроизводительной активности позволяет получать эмбрионы за период времени не превышающий экономически обоснованный сервис-период.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на ежегодных научно-практических конференциях Российского университета дружбы народов (1998-1999)

Публикации. По материалам диссертации опубликована 1 печатная работа в центральном журнале России " Племенное дело".

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 113 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практическое предложение. Цифровой материал представлен в 12 таблицах, иллюстрирован 1 рисунок. Список литературы включает 120 источников отечественных и зарубежных авторов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

В качестве доноров эмбрионов были использованы высокопродуктивные племенные коровы и телки черно-пестрой породы опытного хозяйства «Щапово», фермы «Кузенево» и фермы «Лукошкино» экспериментального хозяйства «Кленово-Чегодаево» ВИЖа Московской области. Реципиентами служили 417 телок случного возраста черно-пестрой породы живой массой 350-380 кг.

Для синхронизации охоты доноров и реципиентов и стимуляции овариальной активности были использованы простагландины - Pg F2a, эстрофан, а также в сочетании с гипофнзарнымл гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК, гонадолнберины - диригистран и сурфагон

Доноры были обработаны на 10-12-й день или на 7-9-й день и 13-15-й день полового цикла, в зависимости от поставленного опыта, гипофнзарными гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК. Перед обработкой инъецировали 2-х кратно тетравит в дозе по 10 мл по общепринятой схеме. Первая инъекция в день обработки и вторая - через 48 часов после первой. Гонадолиберины и лютеинизирующий гормон вводили 48 часов после применения простагландина, перед осеменением.

На 7-ой день от первого осеменения - извлечение эмбрионов по методике ВИЖа Первый день охоты принимается за «О» день полового цикла.

Обнаружение, оценка качества, кратковременное хранение эмбрионов, подготовка их к пересадке осуществились по методикам ВИЖа.

Группа Число животных Препарат Доза День введения препарата

1 30 Эстрофан 500 мкг 10-12

и 30 Эстрофан + СГЖК 500 мкг 15 мкг 7-9,13-15

III 30 СГЖК + Эстрофан + Сурфагон 1000 ИЕ 500 мкг 15 мкг 7-9, 13-15

2.2. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИИ ПО СТИМУЛЯЦИИ ПОСЛЕРОДОВОЙ ОВАРИАЛЬНОИ

АКТИВНОСТИ У КОРОВ

Группа Число животных Препарат Доза День введения препарата

после отела

I 50 - - -

II 30 Фоллитропин 500 ИН 5

+ Сурфагон 15 мкг 12

III 50 ГСЖК 1000 ИЕ 5

+ Сурфагон 15 мкг 12

IV 30 Фоллитропин 1000 ИЕ 12

+ Pg F2a + 500 мкг 12

+ Сурфагон 15 мкг 14

V SO ГСЖК 1000 ИЕ 11

+ Pg F2a + 500 мкг 13

+ Сурфагон 15 мкг 15

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

__Изучение эффективности комбинированного применения биологически активных препаратов

при синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов. Целью синхронизации охоты коров является получение качественного индуцированного цикла Сурфагон - препарат способный, по имеющимся экспериментальным данным, в определенной степени корректировать гормональный фон, а также наряду с этим ослаблять или устранять последствия его нарушения.

Провели сравнительные исследования эффективности комбинированного применения простаг1ландина в сочетании с гонадотропином и гонадолиберином на трех группах животных (схема 1)

Результаты опыта представлены в таблице 1, В группе 1, в которой при синхронизации охоты проводили только эстрофаном, и получили наилучшие результаты при обработке коров с 10 по 12-й день полового цикла, служила контролем. Животных опытных групп обрабатывали в период с 7-9 и 13-15-й день полового цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников. Группы И и III обработали простагландином эстрофаном в дозе 500 мкг в сочетании с ГСЖК в дозе 500 И.Е. Животным группы III, перед первым осеменением дополнительно вводили синтетический гонадолиберин (сурфагон) в дозе 15 мкг.

Анализ результатов опыта показал, что введение гонадотропинов положительно корректирует недостатки, связанные с неблагоприятными исходными факторами, на момент начала обработок. В группе II общее количество животных пришедших в охоту было 86,6 %; это близко к показателю в контрольной группе: 90,0 %. Количество животных, проявивших признаки охоты в оптимальный 48-часовой интервал после применения простагландииа - 66,7 %, оказалось также близко к показателю в контрольной группе - 70,0 %. Введение в комплекс синтетического гонадолибернна (сурфагона) увеличивало процент прихода в охоту до уровня в контрольной группе При этом необходимо отметить, что большинство коров в группе 111 (83.4 %) пришло в охоту через оптимальные 48 часов после обработки против 70,0 % в контроле. ,

Таким образом, введение в режим обработок с простагландинами. гонадотропинов улучшает результаты синхронизации охоты. Синтетический гонадолиберин корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно возрастает.

I ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО МЕТОДА ОБРАБОТКИ КОРОВ-ДОНОРОВ НА . . РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ_

Показатель Группа

1 (контроль) Эстрофан И Эстрофан + ГСЖК 111 Эстрофан + Г'СЖК + Сурфагон

Число животных, П - % 30 - ¡00,0 30 - 100,0 30-100,0

Пришло в охоту, П - % 27 - 90,0 26 - 86,6 27 - 90,0

В том числе через, П-% 24 часов 3 - 10,0 2-6.7 2-6,6

48 часов 21-70,0 20 - 66,7 25 - 83,4

72 часов 3 - 10.0 4-13,2 -

Не проявили признаков охоты, П-% 3 - 10,0 4- 13,3 3 - 10,0

Пригодные к индуцированию суперовуляции, П-% 27 - 90,0 24 - 80,0 27 - 90,0

3.2. Определение эффективности гипофизарных препаратов фолдикулостимудирующего гормона в сочетании с рилизнкг-гормонами при стимуляции овуляции У коров-доноров

Восстановление в послеродовой период воспроизводительной функции у коров является одной из серьезных задач зооветеринарной службы. Чаще всего нарушения этой функции возникают на почве задержания последа, атонии матки или заболевания яичников (персистентное желтое тело, гипофункция, киста и другие) и для их устранения используют различные лекарственные и гормональные препараты. При этом удается профилактировать послеродовые осложнения, но надежно гарантировать в короткое время восстановление воспроизводительной функции не удается, так как все применяемые препараты не моделируют тот гормональный фон, который характерен для стадии возбуждения полового цикла

Испытали действие гонадотропинов в сочетании с гонадолиберинами, а также их сочетание с синтетическими простаглндинами при стимуляции овуляции у коров доноров после отела (схема 2).

При клинических исследованиях контролировали наличие желтого тела беременности и развития фолликула.

Влияние введения препаратов на развитие овариальной активности после отела приведено в таблице 2. У опытных животных, в сравнении с контрольной группой, достигнуто более раннее наступление овуляции. Первая овуляция после отела у животных экспериментальных групп наступила в среднем на 3,7-2,0 дня раньше, чем в контроле При анализе стимулирующего овуляцию действия обработок констатировали более выраженное действие в группах IV и V: число животных с овуляцией до 15 дней после отела возросло до 36,7-40,0 %; число животных с овуляцией после 15 дней после отела соответственно понизился до 63,3-60,0 %.

Для более детального анализа степени воспроизводительного статуса животных посл< проведения осеменения вывели показатели индексов осеменения (таблица 3). Окончательны«

результаты наиболее благоприятные в группах IV и V. У 62.00-63,33 % жнвотных достигла оплодотворяемость после 1-го осеменения, общая оплодотворяемость доведена до 93,33-96,00 % и индекс осеменения до 1,65 При этом сервис-период сокращен яо 72,3-67,5 дней.

Таким образом, это дает основание предполагать возможным вызывать суперовуляцию в индуцированный после отела цикл или последующий спонтанный, то есть более раннее после отела использование коровы в качестве донора.

2 ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЕ ГИПОФИЗАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА В СОЧЕТАНИИ С РИЛИЗИНГ-ГОРМОПАМИ _ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ОВУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ______

Группа Препарат Число живот ных Число животных с наличием в яичниках на день обработки Срок первой овуляции

Желтое тело беременности, П Желтое тело и фолликула или только фолликула, П Интервал после отела, дней Число животных с овуляцией до 15 дней после отела, П-% Число животных с овуляцией после 15 дней после отела, П-%

I Контроль 50 27 23 20,1 ±3,4 10-20,0 40 - 80,0

II Фоллитропин + Сурфагон 30 12 18 18,1 ±4,0 6 - 20,0 24 - 80,0

III ГСЖК + Сурфагон 50 27 23 17,4 ±3,4 19-38,0 31-62,0

IV Фоллитропин + Р$ Р2а + Сурфагон 30 16 14 16,4 ±2,1 11 - 36,7 19 - 63,3

V ГСЖК + Ря И2а + Сурфагон 50 26 24 16,4 ±3,1 20 - 40,0 30 - 60,0

3. ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ПОСЛЕ ОТЕЛА НА

Группа Препарат Число Животных Оплодотворяемость после 1-го осеменения, П-% Общая оплодотворяе мость, П-% Индекс осеменения Сервис-период, сутки

I Контроль 50 26 - 52,00 48 - 96,00 1,95 85,05 ± 44,05

11 Фоллитропин + Сурфагон 30 17-56,67 29 - 96,67 1,70 75,6 ± 29,00

III ГСЖК + Сурфагон 50 28 - 58,00 49 - 98,00 1,75 74,6 ± 42,65

IV Фоллитропин + Pg F2a + Сурфагон 30 19-63,33 28 - 93,33 1,65 72,3 ± 21,75

V ГСЖК + Pg F2a +■ Сурфагон 50 31-62,00 48 - 96,00 1,65 67,5 ± 21,75

3.3. Влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

?.3.1 Изучение влияния продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их качество

Процесс овуляции индуцированных к росту фолликулов затягивается во временн Это подтверждается тем, что на 7-8 день индуцированного цикла после осеменения находят эмбрионы на разной стадии развития

Проведены исследования иа 51 корове (таблица 4) после индуцирования суперовуляиии фоллитролином в синхронизированный (группе I) и спонтанный циклы (группе II). Выяснили, что у части коров-доноров охота продолжалась на второй и третьи сутки Этих животных осеменяли, соответственно, 3 и 4 раза с интервалом 12 часов на всем протяжении охоты Увеличению продолжительности охоты и кратности осеменения соответствовало увеличение числа овуляций на положительного донора, с 7,5 до 8,7 в группе 1 и с 6,9 до 8,4 в группе II Однако наилучшая оплодотворяемость установлена при трехкратном осеменении - 93,9 и 93,6 % Увеличение продолжительности охоты до 36 часов и числа осеменении до 4 приводило к снижению оплодотворяемости яйцеклеток до 72 и 84,6 %, соответственно.

Таким образом, оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3.

Дальше, было изучено влияние продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их качество По результатам проведенного опыта (таблица 5) установлено, что отклонение продолжительности охоты от среднего показателя, то есть до 12 часов и ее увеличение до 36 часов, не влияет на показатели среднего числа клеточных структур на донора, но отмечается уменьшение числа эмбрионов пригодных для трансплантации Причем число эмбрионов на близких стадиях развития (поздние морулы и ранние бластоцисты) колебалось в пределах 49,151,9 %. При наличии эмбрионов на стадии ранней и поздней морулы и поздней бластоцисты число эмбрионов пригодных для трансплантации, снизилось до 11,1-23,1 %. Лучшие результаты были получены от доноров, у которых охота длилась 12-24 часов Большинство эмбрионов находились на стадии поздней морулы и ранней бластоцисты. При этом пригодных для трансплантации эмбрионов было почта в два раза больше, чем в других случаях (86,7 против 49,1 и 51,9%).

Таким образом, количество эмбрионов пригодных для трансплантации и стадия их развития у суперовулировавших коров-доноров в определенной степени зависят от продолжительности охоты.

4. ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ И КРАТНОСТИ ОСЕМЕНЕНИЯ НА УРОВЕНЬ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ ЯЙЦЕКЛЕТОК У КОРОВ-ДОНОРОВ

П ро дол ж 1 ггел ьность Кратность Число Среднее Оплодотворя-

охоты,часов осеменения Группа коров % число емость

овуляции яйцеклеток, %

Синхронизированный половой цикл

12 2 > 4 20 7,5 85,0

24 3 10 50 3,0 93,2

36 4 6 30 8,7 72,7

Спонтанный половой цикл

12 2 И 8 25,8 6.9 85,0

24 3 16 51,6 7,3 93,6

36 4 7 22,6 8,4 84,6

5. ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ НА СТАДИЮ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ И

ИХ КАЧЕСТВО _

Общее число

клеточных структур Число Число

Продол- Стадия Число в том числе, клеточных Эмбрионов

житель- развития доноров, эмбрионов струетур пригодных для

ность охоты, извлеченных эмбрионов П П пригодных для трансплантации на донора, П трансплантации на донора,

Часов П % П

Поздние

морулы и 11 57 28 49,1 5,2 ± 1,3 2,6 ± 0,6

ранние бластоцисты

< 12 Ранние и

поздние 3 26 6 23,1 8,7+1,1 2,0 ± 0,5

морулы и бластоцисты

Поздние

морулы и 23 128 111 86,7 5,6 ± 1,4 4,8 + 0,6

ранние бластоцисты

12-24 Ранние и

поздние 5 43 10 23,3 8,6+ 1,6 2,0 ± 0,3

морулы и бластоцисты

Поздние

морулы и 11 52 27 51,9 4,7 ± 0,9 2,5 + 0,4

ранние бластоцисты

>24 Ранние и

поздние 10 72 8 11,1 7,2 + 1,2 0,8 ± 0,2

морулы и бластоцисты

3 3.2 Изучение влияния морфо-функцнонального состояния яичников. которое_приходится на момент начала обработок на результаты синхронизации охоты

Изучали влияния"морфо-функционального состояния яичников, которое приходится на момент начала обработок на результаты синхронизации охоты

У 90 коров трех групп охоту синхронизировали простагландином эстрофаном в дозе 500 мкг (таблица 6) Группы подбирали с учетом стадий полового цикла 1 группу сформировали из животных, находившихся на 7-9-й день полового цикла; II группу из животных, находившихся на 10-12-й день полового цикла, и III группу из животных, находившихся на 13-15-й день полового цикла. В одном из яичников всех животных было диагностировано типичное желтое тело Перед обработкой брали пробы крови для определения концентраций прогестерона и эстрадиола.

Лучшие результаты показали животные И группы. Большинство из них пришло в охоту, причем через равный интервал времени - 48 часов после инъекции эстрофана До 24 и после 48 часов пришли в охоту лишь по 3 особи. Признаки охоты не проявили лишь 10 % коров У 90 % обработанных животных, то есть у всех пришедших в охоту, на 8-10-й день индуцированного цикла диагностировали желтое тело при отсутствии пальпируемого фолликула. Это служило основным показателем для вызывания суперовуляции

Результаты, полученные от животных других групп, оказались низкие Сроки прихода в охоту коров в группах I и III значительно варьировали. Не проявивших признаков охоты животных в группах I и III было 26,7 % Пригодных же для использования в качестве доноров было меньше: 16,7 % и 36,1 %, то есть в S и 2,5 раза меньше.

Анализ показателей гормональных профилей показывает, что уровень прогестерона в крови животных групп I и Ш перед обработкой - 0,5-0,7 нг/мл - был низок и характеризовал отсутствие возможности быстрого лизиса под действием экзогенного простагландина. Тем не менее, такое функциональное состояние характерно для соответствующих периодов цикла, так ках всего лишь 13,4 и 29,5 % коров в этих группах имели приемлемые концентрации прогестерона - в 1,8 и 2,0 нг/мл соответственно. Это в определенной степени обусловило 48-часовой интервал прихода этих животных в охоту, и следовательно, физиологическое состояние их яичников, позволяющее стимулировать суперовуляцию.

Сопоставление соотношений концентрации прогестерона и эстрадиола с результатами синхронизации показывает, что характерное для середины лютеальной фазы цикла (группа (!) сочетание высоких концентраций прогестерона и средних концентрации эстрадиола соответствовало оптимальному интервалу прихода коров в охоту - 48 часов. Сочетание более высокого значения эстрадиола с более низким значением прогестерона соответствовало сокращению аналогичного интервала до 24 часов, а сочетания более низких концентраций к:.х эстрадиола, так и прогестерона - увеличению интервала до 72 часов

Приемлемые результаты, 48-часовой интервал прихода животных в охоту и наибольший процент пригодных для последующего использования из них в группах 1 и II! получены при соотношениях близких к средним показателям концентрации эстрадиола, типичных для соответствующих стадий цикла и удовлетворительных показательных прогестерона, подтверждающих секреторную активность желтого тела. Отклонения в сторону увеличения либо уменьшения от такой концентрации эстрадиола при низких показателях прогестерона приводят либо к рассеиванию срока прихода в охоту животных в группах I и Ш, либо к ее отсутствию во всех трех группах

Таким образом, общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день полового цикла. При этом необходимо отметить, что подавляющее большинство коров, пригодных для индуцированной суперовуляции, оказались в числе пришедших в охоту через 48 часов после обработки. Применение простагландина Fj„ вызывает лизис желтого тела в течение нескольких часов, затем овуляцию фолликула. При этом большинство особей приходит в охоту через 48 часов после инъекции препарата. Простагландин Fja оказывает лютелитическое действие с 5-6-го по 15-16-й день спонтанного полового цикла. Однако обработка до 10-го и после 12-го дня цикла даже при наличии типичного желтого тела в яичниках не всегда обеспечивает полноценный.и синхронный его лизис у части коров, что приводит к разбросу сроков прихода в охоту или ее отсутствию.

Данные по гормональному профилю перед проведением синхронизации половых циклов коров-доноров только простагландином служат ценным диагностическим тестом. Оптимальными

{онцентрации прогестерона можно считать 3,1 иг/мл и эстрадиола 28,9 пг/мл.

6. ВЛИЯНИЯ СТАДИИ ПОЛОВОГО ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ НА _______ РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ__

Группа Интервал от обработки до начала охоты, в часах Число животных пришедших на охоту Гормональный профиль перед обработкой Число при инду супе животных, годных к дированига эовулящт

п % Прогестерон, нг/мл Эстрадиол, пг/мл П В % к числу ЖИВОТНЫХ, пришедших в охоту

j п=зо 24 4 13,3 0,5 ± 0,3 18,0 ± 1,4 - -

48 5 16,7 1,8 ±0,2 19,6+0,1 4 13,4

72 10 33,4 0,8 ±0,1 20,6 ±0,1 1 3,3

ВСЕГО 19 63,3 - - 5 16,7

II П=30 24 3 10,0 1,9 ±0,2 31,9 + 2,0 3 10,0

48 21 70,0 3,1 ±0,3 28,9+ 1,7 21 70,0

72 3 10,0 1,5 ±0,3 26,0 ± 2,0 3 10,0

Продолжение таблицы 6:

Группа Интервал от обработки до начала охоты, в часах Число животных пришедших на охоту Гормональный профиль перед обработкой Число лр| инду супе животных, годных к днрованию зовуляции

п % Прогестерон, нг/мл Эстрадиол, пг/мл П В % к числу животных, пришедших в охоту

ВСЕГО 27 90,0 - - 27 90,0

III п=30 24 11 36,7 0,7 ± 0,3 30,1 ±3,0 2 6,6

48 4 13,3 2,0 ± 0,2 27,0 + 2,1 9 29,5

72 4 13,3 0,7+0,] 21,6 ±2,3 - -

ВСЕГО 19 63,3 - - 11 36,1

ВСЕГО ПО 3 ГРУППАМ 63 70,0 - - 38 42,2

3.3.3. Изучение влияния исходного гормонального профиля на еуперовуляторяую реакцию

яичников и качество эмбрионов. Проведен опыт с целью изучение влияния исходного гормонального профиля на суперавуляторную реакцию яичников и качество эмбрионов

В опыт брали животных, находящихся в состоянии спонтанного и индуцированного цикла и не менее чем через два месяца после отела, в группу I отобрали животных по наличию спонтанной охоты, в группу II - синхронизированной охоты Р2а/СЖК Животных обрабатывали фоллитропином^ ¥2а. начнкая с 10-го дня цикла по 4-дневной схеме. Через 48 часов после инъекции простагландина проводили осеменения ректо-цервикальным методом на протяжении охоты с интервалом 12 часов двойными дозами замороженно-оттаянной спермы одного и того же производителя. Перед началом обработок брали пробы крови для определения концентрации прогестерона и эстрадиола

На основании клинических данных состояния яичников выделили 4 уровня реакции суперовуляции: 1 -й уровень - 12 и более желтых тел, 2-й уровень - 8-11 желтых тел; 3-й уровень -4-7 желтых тел; 4-й уровень - 3 и меньше желтого тела Аналогично, по результатам извлечения пригодных для пересадки эмбрионов, выделили также четыре уровня: 1-й уровень - 9 и больше эмбрионов; 2-й уровень - 5-8 эмбрионов, 3-й уровень - 1-4 эмбрионов; 4-й уровень - отсутствие пригодных для пересадки эмбрионов (таблице 7)

Затем сопоставили средние значения концентраций прогестерона и эстрадиола в к рог: доноров с уровнем их реакции.

Полученные данные показывают, чгго в группе коров, обработанных в нндуцированньп цикл (группа И), каждому уровню реакции, как по количеству овуляции, так и по получении пригодных для пересадки эмбрионов соответствует определенный исходный гормональный фон Наиболее отчетливо это находит выражение в отношении концентраций прогестерона ( повышением концентрации прогестерона, увеличивается число овуляций (от 3 при 1,2 нг/мл до 1

нг/мл) Также увеличивается выход числа нормальных эмбрионов (от 0 при 1,3 нг/мл до 9 при 4,0 нг/мл). Аналогичная корреляция наблюдается, и в группе 1.

Необходимо отметить, что средние значения исходных концентраций прогестерона в группе II (с нндуцнрованным циклом) выше аналогичных значений в группе 1, обработанной в спонтанный цикл. Это по видиму, связано с увеличением обшей массы лютеальиой ткани, образованной вследствие примененной схемы синхронизации.

Из проведенных данных следует, что оптимальная активность желтого тела, предполагающая результативность гормонального индуцирования суперовуляции, обусловливает концентрацию прогестерона в крови доноров от 2,9 до 4,0 нг/мл. При всем этом возможны отступления от выявленной тенденции, связанные, вероятно, с индивидуальными особенностями обработанных животных и с тем, что число клеточных структур не взаимосвязано с исходной концентрацией прогестерона при минимальных ее значениях. В то же время корреляция числа овуляций и неовулировавшых фолликулов даже с минимальными значениями прогестерона имеет место. Взаимосвязь между исходными концентрациями эсградиола и числом клеточных структур выявлена не была.

Таким образом, определение исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров

позволяет в определенной мере предсказывать об эмбриопродукгивности отбираемых животных.

7. ВЛИЯНИЕ ИСХОДНОГО ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ У КОРОВ-ДОНОРОВ НА СУПЕРОВУЛЯТОРНУЮ РЕАКЦИЮ ЯИЧНИКОВ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ

Показатель Уровень реакций суперовуляции Группа 1 спонтанный цикл Синхр Группа II онизированный цикл ^ Г2а-ГСЖК)

Число животных, п Прогестерон, нг/мл Эстрадиол, пг/мл Число Животных, П Прогестерон, нг/мл Эстрадиол, пг/мл

Число овуляции (желтых тел) > 12 15 3,1 + 1,2 29,7 ± 2,6 26 4,0 ± 1,7 23,5 + 1,6

8-11 25 2,9 ± 0,3 24,7 + 2,8 40 3,2+1,7 19,8 ± 1,4

4-7 30 2,6 ± 0,3 29,0 + 2,0 30 2,9 + 0,7 18,3 ± 1,2

<3 12 1,2 + 0,3 26,7 ±2,3 16 1,2+0,8 19,] + 1,2

Число >мбрионов, пригодных для грансплан-тации >9 8 3,4 ± 0,2 33,6 ± 5,0 12 4,0+ 1,9 21,5 ±5,7

5-8 15 2,9 ± 0,4 23,8 ±2,3 23 3,4 ± 0,7 20,6 + 1,5

1-4 15 2,5 ± 0,4 26,0 ± 2,4 17 2,8 ±0,3 17,3 ±1,2

Отсутствие 6 1,2 ±0,3 29,0 + 2,8 16 1,3 ±0,4 17,3 ± 1,0

3 4. Влияние включения в схему обработок коров-доноров синтетических гонадолиберинов

или лютеинизирующего гормона на продолжительность охоты и качество эмбрионов С учетом того, что колебания продолжительности охоты при гормональном индуцировании перовуляции коррелируют с ее показателями, а также литературных данных о том, что введение югенного гонадолиберина или лютеинизирующего гормона оптимизирует продолжительность

охоты и компенсирует возможный дефицит ЛГ, изучали влияния экзогенного гонадолнберина или лютеинизируюшего гормона на продолжительность охоты и результаты суперовуляции.

При вызывании суперовуляции фолликулостимулнрующим ropMOHOM/Pg-F2a по четырехдневной схеме на четырех 1"руппах коров, через 48 часов после введения простагландина, перед первым осеменением животных опытных групп вводили синтетические гонадолиберины или ЛГ (таблица К)

Животным группы 1 не вводили синтетические гонадолиберины, и она служила контролем, группе 1! ввели 0,5 г дигнетрана (Чехия), группе III 15 мкт сурфагона, группе IV 1000 ИЕ овогон-ТИО. В опмтных группах (И - IV) осеменение проводили двукратно с интервалом 12 часов Осеменение коров в контрольной группе проводили спустя 48 часов после введения простагландина,.на протяжении охоты с интервалом 12 часов.

Средняя продолжительность охоты коров групп II, III и IV составила соответственно 20,7, 18,0 и 19,0 против 28,8 часов в контроле. В среднем, клеточных структур на донора было больше в группе I. Однако, эмбрионы пригодных для трансплантации на донора были в пользу опытных групп. При этом следует отметить снижение числа дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. Процент эмбрионов, пригодных для трансплантации, в опытных группах составил по группам: 74,6, 74,6 и 81,1 %, соответственно. В то же время как в контроле этот показатель был лишь 47,-3 %, Количество дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток в контрольной группе (28,0 и 24,7 %), более чем в два раза превышало аналогичные показатели в опытных группах: 11,9 и 13,5 % - И, 13,4 и 11,9 % - 111, 9,5 и 9,5 %-IV соответственно.

Таким образом, включение синтетических гонадолибериноэ или ЛГ в схеме индуцирования суперовуляции корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях При снижении числа извлеченных клеточных структур возрастает процент эмбрионов, пригодных для трансплантации Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.

Проведен опыт по использованию определения концентрации ЛГ для выбора оптимального времени осеменения коров-доноров при суперовуляторном процессе (таблица 9) Исследования проводили на 19 коровах-донорах

Параллельно с определением гормональных параметров регулярно использовали метод ректальной пальпации яичников, начиная с момента инъекции простагландина и во время всей продолжительности эетруса.

Как видно по данным таблицы 9, в интервале до 41,0-42,0 часа после инъекции Pg F2C наступает течка, а через 48,0 часов предовуляторный пик ЛГ.

Применение ректальной пальпации показало, что после пика ЛГ интервал до начал; овуляций составляет 20-24 часа. Поэтому время осеменения необходимо определить таки».

образом, чтобы сперма, »веденная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитации к моменту овуляторного процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 48 часов после инъекции простагландина

8 ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК КОРОВ ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ

ГОНАДОЛИВЕРИНОВ ИЛИ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА НА ___ПРОДОЛЖИТЕЛНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ_

Гр. >ппы

Показатель I КОНТРОЛЬ и 5,0 Г ДИРИГЕС-ТРАНА III 15 МКГ СУРФАГОНА IV 1000 ИЕ овогон-ТИО

Число обработанных коров, п - % 13 - 100 11-100 20 - 100 13 - 100

Число положительных доноров, п-% 13 - 100 II - 100 20-100 13- 100

Средняя продолжительность охоты,часов 28,8 ±2,3 20,7 ± 2,2 18,0 + 2,4 19,0 ±2,4

Получено Всего, 93-100 67- 100 134-100 74-100

клеточных структур, п - % В среднем 7,1+0,6 6,1 + 1,0 6,7 + 0,7 5,7 ± 0,8

Получено Всего, 44 - 47,3 50 - 74,6 100-74,6 60-81,1

пригодных для трансплантации эмбрионов, п - % В среднем, 3,4 + 0,8 4,5+0,6 5,0 + 0,7 4,6 ± 0,5

Получено дегенерированных эмбрионов, п - % Всего, 26-28,0 8-11,9 18-13,4 7-9,5

В среднем 2,0 ± 0,8 0,7 ±0,2 0,9+1,4 0,5 ±0,5

Получено не Всего, 23 - 24,7 9-13,5 16-11,9 7-9,5

оплодотворенных яйцеклеток, п - % В среднем 1,8 ±0,7 0,8 ± 0,3 0,9 + 0,3 0,5 ±0,1

9. ИНТЕРВАЛ МЕЖДУ ИНЪЕКЦИЕИ ПРОСТАГЛАНДИНА, НАЧАЛОМ ЭСТРУСА И ПИКОМ _ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА_

Препараты Число животных, П Интервал времени от введения простагландина до начала эструса, часов Интервал времени от введения простагландина до пика ЛГ, часов

ФСГ - Рк Ига 9 41,3 ±2,3 48,5 ±3,0

Фоллитропин - Рй Ь2а 10 42,0 ± 5,5 48,1 ±3,9

3.4 Влияние рилизянг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции

Большое значение для прогнозирования, понимания сущности и создания, приемлемых в условиях практики методов корректировки процесса суперовуляции, в случае его нарушения, имеет изученность гормональных профилей суперовулирующих коров в ответ на действие гонадотропных препаратов.

Были произведены исследования с целью анализа эндокринного аспекта, лежащего в основе стимулирования воспроизводительной активности Для этого соответствие объединенных показателей суперовуляции, вызванной фоллитропиномЛ^ Р2а у коров в послеотельный период при наиболее типичных проявлениях спонтанных половых циклов гормональным профилям

отразили графически (рисунок 1).

Гормональные исследования проиллюстрировали причину неудовлетворительных показателей суперовуляции, индуцированной в первый половой цикл после родов это низкая концентрация прогестерона перед обработкой (рисунок 1А) Однако гормональное индуцирование активности функциональной деятельности яичников в послеотельный период дало возможность получить удовлетворительные показатели суперовуляции (3-5 эмбрионов на донора) в индуцированный половой цикл и позитивные показатели (<5 эмбрионов) в последовавший спонтанный половой цикл (рисунки 1Б и 1В).

Общепризнанно считать, что вызывание суперовуляции в первый после отела цикл оказывается безуспешным. В то же время наши исследования показали возможность вызывать положительные показатели суперовуляторной реакции.

Большой интерес представляет выяснение роли эндокринных факторов, лежащих в основе воспроизводительной активности на протяжении послеотельного периода Наиболее показательна в этом отношении низкая концентрация прогестерона. Эю происходит вследствие функциональной неполноценности желтого тела, что в свою очередь, вызвано отсутствием завершения инволюции матки и общей послеотельной перестройки (рисунок 1А) Однако направленная стимуляция активности функциональной деятельности яичников ведет к активизации восстановления репродуктивной функции в целом. Значения концентрации прогестерона, аналогичным среднестатическим показателям, которые являются нормой для соответствующего периода спонтанных циклов, сформировавшихся после окончательного завершения послеотельного периода, свидетельствуют о наступлении полной нормализации половой функции (рисунки 1Б и 1В).

Исследования показали, что пригодность коров для индуцирования суперовуляции определяется градацией концентрации прогестерона в крови животного. Причем, показанием к началу обработки будет неуклонное повышение концентрации от базального значения в нулевой день цикла до наивысшего значения, характерного для середины цикла

Непосредственной причиной нарушений процесса суперовуляции являются преждевременная или поздняя овуляции, отсутствие овуляции большого или меньшего числа фолликулов и сочетание этих нарушений Они в свою очередь, обуславливают послеовуляторные сдвиги в гормональном балансе, ответственном за регуляцию нормального оплодотворения и развития эмбрионов. Своевременно зафиксированный гормональный дисбаланс позволяет нормализировать процесс путем введения препаратов гонадолиберина или ЛГ.

Таким образом, исследования указывают на состоятельность корректирования овариальной функции в ранний период после отела. Показатели суперовуляции вызванной в спонтанный цикл, последовавшей за индуцированным указывают на тенденцию к последовательному улучшению

показателей ^)то говорит о более медленном процессе восстановления и стабилизации морфофункционального состояния эндометрия и внутриматочной среды относительно срока стабилизации циклических процессов в яичниках, С другой стороны, очевидно, что, достигаемая за счет послеродовой овариостимуляции, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке.

\ -Л.гХтрЛЧ'Уй В 1-Й ;

снчгткнмйюоа | | (ш-лтняные I | реп7п>гаты)

¡1 30 40 Дни дате отела

- * ,

8-е 5

—Б ОСработ * хпдуинрпмккиА имп (уюья«гм»пв4иые роуо.-г»ти)

Джо*.* отел«

10 20 М

— в ссуйэогв ■ сткетшм'й ижл п н»иу1ц*»анипт> (пшшжние

Рисунок 1. Изменения концентрагцш прогестерона в крови у коров-доноров при индуцировании суперовуляции в послеродовой период.

3.5. Пересадка эмбрионов телкам-реципиентам. Факторы, влияющие на их приживляемость

Изучали влияния различных уровней суперовуляторного ответа коров-доноров и качества вымываемых эмбрионов на уровень приживляемое™ при пересадке телкам-реципиентам. Для этого были проанализированы результаты 274-х пересадок свежеполученных эмбрионов (таблица 10).

Пересаживаемые эмбрионы были извлечены за 2-3 часа до пересадок у 38 коров-доноров черно-пестрой породы. Для вызывания суперовуляции использовали ФСГ в дозе 45 мг, который инъецировали в течение 4-х дней убывающнмися дозами.

Приживляемость установили путем ректальных исследований на стельность через три месяца после пересадки.

Процент эмбрионов хорошего и отличного качества при увеличении уровня суперовуляции достоверно снижался. При среднем уровне реакции (5-8 овуляции) он составил 33,0 и 29,0 %, при очень высокой реакции (от 13 до 16 овуляции) было получено лишь 10,0 и 28,0 % эмбрионов отличного и хорошего качества соответственно.

Эмбрионы получены при высохом уровне суперовуляции, приживлялись хуже, чем при низком и среднем: при очень высокой реакции - 28,0 % против 43,0 и 42,0 % при низкой и средней реакции.

Анализ приживляемости замороженно-оттаянных эмбрионов (таблица 11) также показал, что при высоком уровне суперовуляции, приживлялись хуже, чем при низком и среднем: эмбриопродуктизности донора 1-4 эмбрионов приживляемость составила 48,3 %, тогда как при эмбриопродуктивносги от 9 и более только 30,4 %.

Важным фактором, влияющим на результаты эмбриопересадок у крупного рогатого скота, является физиологическое состояние желтого тела яичника, которое обеспечивает соответствующий для данного периода полового цикла уровень прогестерона в крови Доказано, что существует связь уровня приживляемости эмбрионов и концентрацией прогестерона в крови телок-реципиентов.

В таблице 12 приведены данные о влиянии качества желтого тела яичников на приживлияемость замороженно-оттаянных эмбрионов

При использовании реципиентов, у которых диагностировали отличное желтое тело яичника, приживляемость составляла 48,2 %, хорошее - 36,2 %, удовлетворительное - 28,8 %.

Из приведенного следует, что средний уровень эмбриопродуктивносги (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы полученные от коров-доноров с низкой и средней

эмбриопродуктивностью. При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на

день пересадки

10 ВЛИЯНИЕ УРОВНЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ НА __ИХ ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ

Показатели Число овуляции

от 0 до 4-х от 5 до 8 от 9 до 12 От 13 до 16

Число коров-доноров 6 .7 13 12

Получено эмбрионов 17 52 86 119

На донора 2.8 7.4 6,6 9,9

Процент эмбрионов от числа овуляций 70,0+ 11,1 93,0 ±3,5 55,0 ±5,4 62,0 ± 4,5

Извлеченные клеточные структуры, % Эмбрионы Отличные - 33,0 + 4,3 23,0 ±2,7 . 10,0+ 1,4

Хорошие 57,0 ± 10,8 29,0 ± 4,3 27,0 ±2,6 28,0+1,5

Удовлетворительные 35,0 ± 10,8 15,0 + 3,1 30,0 ± 2,8 36,0 + 1,7

Дегенери-ро ванные 8,0 ± 4.2 6.0 + 3,8 13,0+1.8 9,0 + 0,8

Неоплодотво ре н иые яйцеклетки - 17,0 ± 1,3 7,0+ 1,4 17,0 ± 1,2

Приживляемость после пересадки, % 43,0 ± 12,0 42,0 + 6,8 34,0 ±5,1 28,0 + 4,1

11. ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕННО-ОТТАШШЫХ ЭМБРИОНОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭМБРИОПРОДУКТИВНОСТИ ДОНОРА

Разовая эмбриопродукгивность

От 1 до 4 эмбрионов Ог 5 до 8 эмбрионов От 9 и больше эмбрионов

Оттаяно эмбрионов 33 75 48

Нежизнеспособные 4 7 ■ 2

Процент от числа оттаянных 12,1 9,3 4,2

Пересажено эмбрионов 29 68 46

Стельные реципиенты 14 24 14

Процент приживляемости 48,3 35,3 30,4

12 ВЛИЯНИЕ КАЧЕСТВА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ЯИЧНИКА НА ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ______ ЭМБРИОНОВ ПОСЛЕ ПЕРЕСАДКИ___

Показатели Качество желтого тела

Отличное Хорошее Удовлетворительное

Пересажено эмбрионов 33 58 52

Стельные реципиенты 16 21 15 :

Процент стельности 48,2 36,2 28,8

4. ВЫВОДЫ.

1. При индуцировании охоты с целью получения синхронного течения индуцированного цикла у доноров и реципиентов, гонадотропины, вводимые в сочетании с простагландином, унифицируют овариальные процессы в период с 7-го по 15-й день цикла, что улучшает результаты синхронизации охоты Синтетический гонадопиберик корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно возрастает

2. Введение в схемы овариостимуляции препаратов гонадолнберина на 14-15 день после отела стимулирует первую овуляцию и становление регулярности половых циклов Вследствие этого на более ранний срок можно передвигать одноразовое получение эмбрионов от высокопродуктивных лактирующих коров. Это позволяет максимально приблизить межотельный интервал у лактирующих коров-доноров к экономически обоснованному для •условий молочно-товарного производства межотельному интервалу. А при возможных отклонениях функциональной деятельности яичников и эндометрия служит как лечебно-профилактическое мероприятие Возможно ускорение восстановления репродуктивной функции коров после индуцирования суперовуляции.

3. Рассеянность овуляций, оплодотворяемость яйцеклеток, количество эмбрионов пригодных для трансплантации и стадия их развития у суперовулировавших коров-доноров в определенной степени зависят от продолжительности охоты. Оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3.

4. Данные по гормональному профилю перед проведением синхронизации половых циклов коров-доноров только просгагландином служат ценным диагностическим тестом. Общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичникое происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день полового цикла Оптимальными концентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 29,9 пг/мл

5 Определением исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров позволяет правильно оценить овариальную активность после отела и уточнять данные клиническогс контроля перед синхронизацией охоты и индуцированием суперовуляции и в определенно! мере предсказывать эмбриопродуктивности отбираемых животных.

6. Включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схему индуцирования суперовуляции корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях. При снижении чнсл извлеченных клеточных структур возрастает процент эмбрионов пригодных дл трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.

7. Время осеменения необходимо определить таким образом, чтобы сперма, введенная проводящую систему самки, завершила процесс капацитации к моменту овуляторног процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 48 часов после инъекци простагландина.

8 Показатели суперовуляции, вызванной в спонтанный цикл, последовавший : индуцированным, указывают на тенденцию к последовательному улучшению. С друге

стороны, очевидно, что достигаемая за счет послеродовой овариостимуляции, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке >, Средний уровень эмбриопродуктивности (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемое™. При трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы, полученные от коров-доноров с низкой и средней эмбриопродуктивностью При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересадки

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ

С целью профилактики лослеотелных расстройств и улучшения показателен

уперовуляции коровам донорам следует проводить раннее стимулирование активности яичников эмбинированным применением гонадогропина, простагландина и гонадолиберина на И-й, !3-й и 5-й день после отела соответственно.

6. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОПУБЛИКОВАНЫ В СТАТЬИ

Р. Рамирес, И. Порфирьев, Н Сергеев / ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК КОРОВ-ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИБЕРИНОВ И ОВОГОН-ТИО НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИНОВ I! Племенное Дело - 2000г -

№ 1

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Родольфо Рамирес Родригес

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Отбор и подготовка доноров и реципиентов

2.2. Синхронизация охоты у доноров и реципиентов.

2.3.Способы индуцирования суперовуляции у коров.

2.4. Факторы, влияющие на эффективность стимуляции суперовуляции у коров.

2.5. Извлечение, поиск эмбрионов и их морфологическая оценка.

2.6. Пересадка эмбрионов. Факторы, влияющие на качество и их приживляемость.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы и методы исследований

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Изучение эффективности комбинированного применения биологически активных препаратов при синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов

4.2. Определение эффективности гипофизарных препаратов фолликулостимулирующего гормона в сочетании с рилизинг-гормонами при стимуляции овуляции у коров-доноров эмбрионов.

4.3. Влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов.

4.3.1 Изучение влияния продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их качество

4.3.2. Изучение влияния морфо-функционального состояния яичников, которое приходится на момент начала обработок на результаты синхронизации охоты.

4.3.3. Изучение влияния исходного гормонального профиля на суперовуляторную реакцию яичников и качество эмбрионов.

4.3.4. Влияние включения в схему обработок коров-доноров синтетических гонадолиберинов или лютеинизирующего гормона на продолжительности охоты и качество эмбрионов.

4.4. Влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции

4.5. Пересадка эмбрионов телкам-реципиентам. Факторы влияющие на их приживляемость.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.„.

7 .ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость эмбрионов"

Современные экономические условия диктуют неотложную необходимость повышения интенсивности селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных, а также создания современных высокопродуктивных пород, линий и гибридов скота, отвечающих требованиям постоянно меняющейся конюктуры рынка[5, 42]. Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов.

Однако у крупного рогатого скота основным лимитирующим фактором успешного развития и применения метода трансплантации является высокая степень нарушений репродуктивной функции коров (около 40 %)[3, 38, 45, 46].

Существенным ограничением возможностей трансплантации эмбрионов является также низкая оплодотворяемость яйцеклеток и отклонения в их развитии после их оплодотворения с высоким процентом гибели эмбрионов.

Эффективность применения трансплантации эмбрионов в практике селекции молочного скотоводства во многом зависит от правильного отбора коров-доноров по способности выделять достаточное число качественных эмбрионов после гормональной обработки и искусственного осеменения. Разработка возможных объективных тестов прогнозирования эмбриопродуктивности доноров имеет важное теоретическое и практическое значение для улучшения воспроизводства высокопродуктивных коров.

В России, с 1991 года, происходит устойчивое сокращение поголовья скота, сопровождающееся повышением доли коров в стаде и одновременном снижением их продуктивности. Это уменьшает возможности увеличения производства молока[19]. По данным ФАО популяция крупного рогатого скота в России к 1997 году составляла 39,696 млн.[72]. За 3 года, с 1994 года по 1997 году, численность крупного рогатого скота сократилось на 9,3 млн. голов (19,5 %). Удой на фуражную корову уменьшился на 536 кг. В нынешней экономической ситуации при отсутствии государственной поддержки появились серьезные симптомы разрушения племенного животноводства[35].

Пересадка эмбрионов в частности важна в развивающихся странах, в том числе в Латинской Америке[63]. На результаты трансплантации эмбрионов влияют и физиологические особенности доноров и реципиентов, а также квалификационная способность специалиста, осушесвляющего процедуры. Известны исследования по изучению этих факторов в странах умеренного климата на животных европейского происхождения[17, 36, 49]. Однако мало известны научно-обоснованные исследования этих факторов в тропических условиях[51].

Зарубежные авторы отмечают, что несколько стран центральной и южной америки имеют значительное количество скота и, что развитие животноводства способствует значительным образом улучшению в потребностях питания населения и экономики страны. Однако усилия по созданию государственных программ по трансплантации эмбрионов в большинстве этих стран не дали заметные результаты, и почти невозможно получить достоверную информацию[63].

Популяция скота в Гватемале насчитывается 1734 млн.[72]. Работа по пересадкам эмбрионов началась в 1976 г. С 1976 по 1978 гг. трансплантация эмбрионов проводилась на фермах, используя Суг, Иекиге и индо-бразильские породы скота и было получено 400 стельностей[63]. Между 1979 и 1980 гг. пересадки проводились на коровах брахманой, голштиной и бурой шведской пород. С 1983 по 1986 гг. сообщалось о 70 стелъностей в результате трансплантации эмбрионов[108]. Некоторые попытки проводились по пересадке замороженно-оттаянных эмбрионов[62].

Относительно трансплантации эмбрионов у других сельскохозяйственных животных, в Латинской Америке были сделаны только отдельные попытки. Было сообщение о рождении ягнят, козлят и жеребят, но число их незначительно[63]. К сожалению исследования, не проводились на аборигенных видах, таких как южно-американские мозоленогие (лама, альпака, викунья), которые имеют большое значение в Перу, Боливии и Чили.

Несмотря на то, что некоторые страны имеют основные нормы контроля ввоза заболеваний путем ввозимых эмбрионов, нет четких, хорошо разработанных правил для эмбрионов и пересадок, что затрудняет международную коммерцию эмбрионов.

О продаже замороженных эмбрионов зарубежного или отечественного происхождения были сообщения только в газетах. К сожалению, невозможно узнать с уверенностью уровень коммерциализации замороженных эмбрионов.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ:

Целью настоящих исследований являлось повысить эффективность синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов до 95% и гормональное индуцирование суперовуляции на 25%. Определить эффективность применения фолликулостимулирующего гормона и сурфагона для повышения оплодотворяемости яйцеклеток и выхода эмбрионов, пригодных для трансплантации у доноров при суперовуляции.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1 изучить эффективность комбинированного применения биологически активных препаратов при синхронизации охоты у коров-доноров и телок реципиентов;

2 определить эффективности гипофизарных препаратов фолликулостимулирующего гормона в сочетании с рилизинг-гормонами при стимуляции овуляции у коров-доноров эмбрионов;

3 изучить влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов;

4 изучить влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции;

5 изучить влияние различных факторов на приживляемость эмбрионов при их пересадке телкам-реципиентам.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Усовершенствованы методы синхронизации охоты у коров и телок на основе применения современных гормональных препаратов. Повышена эффективность индуцирования охоты до 86,6-90,0 %. Определены факторы, влияющие на показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту и при суперовуляции. Разработаны методы овариостимуляции с целью ускоренного завершения послеродового периода и периода восстановления после использования коров в качестве доноров эмбрионов. Изучены эндокринные факторы, лежащие в основе биотехнических методов управления половым циклом коров.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Родольфо Рамирес Родригес

6. ВЫВОДЫ

1. При индуцировании охоты с целью получения синхронного течения индуцированного цикла у доноров и реципиентов, гонадотропины, вводимые в сочетании с простагландином, унифицируют овариальные процессы в период с 7-го по 15-й день цикла, что улучшает результаты синхронизации охоты. Синтетический гонадолиберин корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно возрастает.

2. Введение в схемы овариостимуляции препаратов гонадолиберина на 1415 день после отела стимулирует первую овуляцию и становление регулярности половых циклов. Вследствие этого на более ранний срок можно передвигать одноразовое получение эмбрионов от высокопродуктивных лактирующих коров. Это позволяет максимально приблизить межотельный интервал у лактирующих коров-доноров к экономически обоснованному для условий молочно-товарного производства межотельному интервалу. А при возможных отклонениях функциональной деятельности яичников и эндометрия служит как лечебно-профилактическое мероприятие. Возможно ускорение восстановления репродуктивной функции коров после индуцирования суперовуляции.

3. Рассеянность овуляций, оплодотворяемоеть яйцеклеток, количество эмбрионов пригодных для трансплантации и стадия их развития у суперовулировавших коров-доноров в определенной степени зависят от продолжительности охоты. Оплодотворяемоеть яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3.

4. Данные по гормональному профилю перед проведением синхронизации половых циклов коров-доноров только простагландином служат ценным диагностическим тестом. Общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день полового цикла. Оптимальными концентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 29,9 пг/мл.

5. Определением исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров позволяет правильно оценить овариальную активность после отела и уточнять данные клинического контроля перед синхронизацией охоты и индуцированием суперовуляции и в определенной мере предсказывать эмбриопродуктивности отбираемых животных.

6. Включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схему индуцирования суперовуляции, корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях. При снижении числа извлеченных клеточных структур возрастает процент эмбрионов пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.

7. Время осеменения необходимо определить таким образом, чтобы сперма, введенная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитации к моменту овуляторного процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 4В часов после инъекции простагландина.

8. Показатели суперовуляции, вызванной в спонтанный цикл, последовавший за индуцированным, указывают на тенденцию к последовательному улучшению. С другой стороны, очевидно, что достигаемая за счет послеродовой овариостимуляции, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке.

9. Средний уровень эмбриопродуктивности (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов более высокую приживляемостъ показали эмбрионы, полученные от коров-доноров с низкой и средней эмбриопродуктивностью. При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересадки.

100

7. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ

С целью профилактики послеотелных расстройств и улучшения показателей суперовуляции коровам-донорам следует проводить раннее стимулирование активности яичников комбинированным применением гонадотропина, простагландина и гонадолиберина на 11-й, 13-й и 15-й день после отела соответственно.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Родольфо Рамирес Родригес, п. Дубровицы, Московской обл.

1. АГАЛАКОВА Т.В. Применение гормональных препаратов для стимулирования полиовуляции у коров доноров // Теория и практика использования Б AB в животноводстве. Тезисы докладов научной конференции 6-7 окт. 1998 НИИСХ Северо-востока. Г. Киров. 1998,-с. 5-6.

2. БАЖОВОЙ И.И., ИНОЗЕМЦЕВ В.П., ХРИСТОФОРОВ В.Н. и др. Мил терапия мастита у коров // Ветеринария. 1997.- № 3.- С.46-47.

3. БУК АРОВ Н., ЕРЕМИНА М. Молочная корова начала третьего тысячелетия // Молочное и мясное скотоводство 1994,- № 4.- С.24-25.

4. ГОРБУНОВ Ю.А. Использование эстуфалана и эстрофана с целью синхронизации охоты у телок-реципиентов // Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота. Жодино: Госагропром БССР, 1989,- С. 59-60.

5. ДЕДОВ Ю. ЧОМАЕВ А. Сравнительное действие простагландинов Е и Ф2а на синхронизацию охоты у коров // Молочное и мясное скотоводство. 1988,- № 3.- С.27-28.

6. ДИМОВ В. Метаболизм на простагландин F2a при овце // Идентифициране на основните метаболити // Животновъд. Науки. -1987,-№6,- С. 79-84.

7. ЗАВАДОВСКИИ М.М. Зоотехническая эндокринология в СССР // Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии. -1934,-Т. 1,-С. 21-24.

8. ЗАВАДОВСКИЙ М.М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1963.

9. ЗАВАДОВСКИЙ М.М., ЭСКИН H.A., ОВСЯННИКОВ Г.Ф. Регулирование женского полового цикла у коров / Тр. по динамике развития. 1936,- Т. 9 С.95-98.

10. ЗАВЕРТЯЕВ Б. П. Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота. Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ие, 1989.-С. 76.

11. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. -М., 1987,- 92 С.

12. КЛИНСКИЙ Ю.Д. ЧОМАЕВ A.M. Применение проетагландина Pg F2a и смеси изомеров проетагландина Pg F2a + 2 отечественного производства для синхронизации и овуляции у телок // Синтез и исследование простагландинов: Тез. докл. / ВИЖ, 1986.- С. 193.

13. КОБЫЛЕНКОВ Н.М., КЛИНСКИЙ Ю.Д. Стимуляция и синхронизация охоты у телок // Ветеринария. 1986.- № 8.- С. 59-60.

14. КУАНЫШБЕКОВ Б. М., КУСАИНОВ А. К. и др. Опыт и перспективы трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в Казахстане //

15. Вестник сельскохозяйственных наук Казахстана № 6. Г. Алма-Ата 1990,- С. 52-55.

16. ЛЕВАНТИН Д.Л. Развитие животноводства в странах мира // Зоотехния 1990,- № 10,- С. 66-69.

17. ЛЕБЕДЕВ В.И. ПЕТРЯКОВ Ю.Н. МАЛЬЦЕВА И.В. Эффективность пересадки замороженно-оттаянных эмбрионов у телок с синхронизированной охотой // Бюл. науч. работ. Вып. 89,- Дубровицы. 1988,- С. 44-66.

18. МАДИСОН В.В., МАДИСОН В.Л., КРЫЛОВ С.И. Совершенствование технологических приемов применительно к условиям практической трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота // Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. 1988.- С. 51-66.

19. МАДИСОН В., МАДИСОН Л., ОСТАПЕНКО С. Высококачественные гонадотропины Успех полиовуляции 11 Молочное и мясное скотоводство № 7,1997,- С. 24-25.

20. МАДИСОН В., МАДИСОН Л., ОСТАПЕНКО С. Гонадотропин как фактор успеха суперовуляции // Молочное и мясное скотоводство № 1, 1998,- С. 24-25.

21. МЕДВЕДЕВ Г.Ф. САМБА Д. Повышение эффективности применения простагландинов телкам с целью синхронизации полового цикла и оплодотворения // Пути увеличения производства молока и говядины. -1987.- С. 33-36.

22. МЕДВЕДЕВ Г.Ф. Факторы, Влияющие на стельности коров и телок в синхронизированный цикл // Животноводство. 1985- № 6. С.57-58.

23. МЕДВЕДЕВ Г.Ф., МЕДВЕДЕВА H.B. Эффективность применения простагландинов телкам в зависимости от их экстерьерных и интерьерных признаков // Биологически активные вещества в животноводстве. 1988,- С. 73-77.

24. НАЗАРОВ Е. А., СМИСЛОВА Н. И. Применение метода трансплантации в программе разведения высокопродуктивных животных в племзаводе «Петровское» //Бюлл. науч. работ. Вып. 89,-Дубровицы, 1988,- С. 11-23.

25. НЕЖДАНОВ А.Г., СОЛОВЬЕВ H.A. Стероидопродуцирующая функция яичников коров при воздействии гормональных препаратов // Сельскохозяйственная биология. 1990,- № 4,- С. 75-84.

26. ПОЛЯНЦЕВ Н.И. Применение биорегуляторов половой функции коров II Зоотехния. -1999,- № 6.- С. 29-30.

27. ПРОКОФЬЕВ М.И. Организация воспроизводства скота в новых хозяйственных условиях // Зоотехния. 1991.- № 2,- С. 46-48.

28. ПРОКОФЬЕВ М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных/Л.: Наука, 1983.- С.98-99.

29. ПРОКОФЬЕВ М.И. Синхронизация охоты у коров // Животноводство. № 5,- М.- 1999,- С. 22-23.

30. РАССАДИКОВ С.А. Клинические проявления эструса у коров и телок на введение эструфана // Современные пробл. профилак. и терапии незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Л.: Наука, 1984,- С. 66-68.

31. РЕШЕНТНИКОВА Н. Чтобы коровы пришла в охоту // Животноводство. № 7,- М.-1999,- С. 14-15.

32. САМОДЕЛКИН А.Г., ГАВРИКОВ А. М., СЕРГЕЕВ Н. И. -Трансплантация эмбрионов в мясном скотоводстве. // М.: АОЗТ «Зоосалон».- 1996.- 96 С.

33. СЕРГЕЕВ Н.И., МАЛЬЦЕВА И.В., ИБРАГИМОВ Ю. Результаты трансплантации эмбрионов в практике скотоводства // Достижения науки и техники АПК,-1989.- №11.- С. 21-24.

34. СЕРГЕЕВ Н.И., ОВЧИННИКОВ A.B., СМЫСЛОВА Н.И. Взаимодействие между донором, эмбрионом и реципиентом при нехирургической трансплантации // Животноводство 6/87. М. 1987,- С. 52-54.

35. СЕРГЕЕВ, Н.И., МАДИСОН В.Л., СМИРНОВ O.K. Инструкции по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота // М., 1984,- 136 С.

36. ТЯПУГИН Е.А., АГАЛАКОВА Т.В., ПЕРМИНОВА Л.В. Качество зародышей у коров-доноров разных пород, возраста и состояния эндометрия // Зоотехния. № 6,- 1998,- С. 26-28.

37. ХИЛЬКЕВИЧ С.И., АЛИБАЕВ P.M. Восстановление воспроизводительной функции коров-доноров эмбрионов // Животноводство. № 9-10,- 1992.- С. 32-34.

38. ХИЛКЕВИЧ С., ТЯПУГИН Е. Экономические аспекты трансплантации эмбрионов в молочном скотоводстве // Молочное и мясное скотоводство. 1992,- № 5-6 С. 16-17.

39. ХИЛЬКЕВИЧ С.Н., ТЯПУГИН Е.А., САМОДЕЛКИН А.Г. -Синхронизация половых циклов коров в программе трансплантации эмбрионов // Зоотехния. 1993.- № 4.- С. 24-25.

40. ЧОХАТАРИДИ Г. Н. Репродуктивные качества коров в зависимости от кормления в сухостойный период // Зоотехния № 11/97, М. 1997. С. 1516.

41. ШИПИЛОВ B.C. Состояние и перспективы развития ветеринарного акушерства и гинекологии // Ветеринария. 1991,- № 7,- С. 3-6.

42. ШИПИЛОВ B.C., ДОЛЬГЕР Г.П. Восстановление плодовитости коров при кистах яичников // Ветеринария. 1991.- № 2,- С. 50.

43. ЩЕГЛОВА Н.Н. ДЬЯКОНОВ Е.Ф. Синхронизация половой охоты у коров // Воспроизводства сельскохозяйственных животных и криоконсервация гамет и эмбрионов. Л.,1986.- С. 20-21.

44. ЭРНСТ Л. К., СЕРГЕЕВ Н.И. Результаты применения простагландина для синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов // Молочное и мясное скотоводство. 1984.- № 3,- С. 29-32.

45. ЭРНСТ Л. К., СЕРГЕЕВ Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. -М.: Агропромиздат, 1989.- С. 117.

46. ЭРНСТ Л.К., ПРОКОФЬЕВ М.И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1995,-192 С.

47. BERGSTOM S. The isolation of prostaglandin// Acta Chem. Scand.- 1957,-V. 11, P. 1086.

48. BETTS J. FORREST D. HUMPHREY. W. Cloprostenol induced luteal regression in the cow. 2. Historical valuation of corpora lutea and correlation with luteal progesterone // Theriogenology.- 1985,- V. 23, N. 3.- P. 523-524.

49. BIERSCHWAL C., ELMORE R, GARVERICK H. et. al. Effect of days postpartum and endogenous reproductive hormones on Gn-Rh-induced LH response in dairy cows // J. Anim. Sci.- 1977,- V. 45,- P. 797-803.

50. BURFERING R. Synchronization of estrus with Pg F2a in beef cattle I i Anim. Sci.- 1978,- V. 47 N. 10.-P. 999-1003.

51. BUSCH W., EULENBERGER K., BACH S., MULLER H. Die Anwendung von Prostaglandin F2a zur Brunssynchronisation bei farsen // Mh. Vet.-Med.- 1980,-# 11 S. 411-414.

52. CARLI S. RUDELLIG. Le Prostaglandine in medicina veterinaria // Rivosta di Zootechnia e Veterinaria.- 1978.- N. 2,- P. 77-106.

53. CARRILLO F.J., CARRER H.F., SAWYER Ch. H. Modulation of the proestrous surge of LH by electromechanical stimulation of the amygdola in the unanesthetizedrat.// Brain. Res.- 1972.- V. 128,- P. 81-92.

54. CRITSER J., ROWE R., DEL CAMPO M., GUNTHER J. Embryotransfer in cattle: Factors affecting superovulatory response, number of transferable embryos // Theriogenology.- 1980,- V. 13.- P. 397.

55. DAVIS A., FLEET I., MAULE W. Pulmonary metabolism of prostaglandin Pg F2a in the couscious nonpregnaut cow // J. Physiol. (Gr. Brit.).- 1985,- V. 358, N. 2 P. 275-282.

56. DAVIS M., TURUER T., FORY J. Synchronization of estrus in beef cows and heifers with prostaglandin F2a and estradiol benzoate // Theriogenology.- 1987.- V. 28.- N. 3,- P. 275-282.

57. DEL CAMPO M.R. Congelación de embriones bovinos. Resultados preliminares. Arch Med Vet 1983; 15:51-52.

58. DIOP P., BOUSQUET D., KING W. Artificial insemination and fertilization in superovulated heifers 11 Theriogenology.- 1987,- V. 27,- P. 223.

59. DÖBELI M., RISI J, ZEROBIN K. Die luteolytische Wirkung von Estrumate bei Rindern in Abhängigkeit vom Zuklusstand und seine Eignung zur Zuklusregulierrung // Schw. Arch. Tirheilk.- 1981,- V.123, # 6.- S. 587.

60. DOBSON H. Plasma gonadotropins and oestradiol in the cow // J. Reprod. Fert.- 1978,- V. 52,- P. 51.

61. DÖCKE F. Zur Bedentung des Gn-Rh fur die Regulation des Ovarialzyklus // Mh. Vet.- Med.- 1984,- V. 39, # 5,- P. 150152.

62. DÖCKE F. Veterinärmedizinische Endokrinologie // Jena, 1981.- S. 330. 72

63. DONALDSON L. LH and FSH profiles at superovulation and embryoproduction in the cow // Theriogenology.- 1985.- V. 23, # 3.- P. 441447.

64. ELLIASON R. Studies on prostaglandin: Oceurence, formation and biological actions // Acta Physiol. Scand.- 1959,- V. 46, suppl. 158.- P. 1-73.

65. EULER VON U. Zur Kenntnis der pharmakologischen Wirkungen von nativsekreten männlicher accessorischer Geschlechtedruren // Arch. Exp. Path. Pharmach. 1935,- V. 17,- P. 5-78.

66. FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS -FAO-. Production yearbook, Rome, Italy: Food and Agriculture Organization, 1997.

67. GOBEL D., KOPPITZ G., LANGE W. Untersuchungen üden Einfluß einer PVSG-Gn-Rh-aapplickation im PräÖstrus auf die Superovulation bei Mastfarsen II Wiss. WPU Rostock, Math-Nat. R. 1990.- V. 189,- S. 283.

68. GOFF A., GREVE T„ BOUSQUET D., KING W. Progesterone and luteinizing hormone profiles in heifers used as oocyte donors // Theriogenology.- 1986,- V. 26,-P. 557.

69. GREVE T., CALLESEN H., HYTTEL P. Characterization of plasma LH profiles in superovulated dairy cows // Theriogenology.- 1984.- V. 21,- P. 237.

70. GRUNERT E. SCHWARZ R. Injection of ovulation with synthetic gonadotropin releasing hormone in dicturbances of ovaria function in cattle // 8. Internat. Congr on Animal Reprod. and Artif. Insem.- CracowProc, 1976.- P. 575.

71. GYAY P., BEDOYA M. Effects of GN-RH on blood serum hormone concentration, ovulation rates and embryo production in lactating cows treated with PMSG // Can. J. Comp. Med.-1981.- V. 45. P. 352-356.

72. HAHN J., HAHN R., GÖRLACH A. Über die Entwicklung und Beurteilung den Embrioen bei Suerovulationes Rind //Deutsche tierärztl. Wochenschrift.- 1983.- V. 90, # 10.- S. 423-424.

73. HANSEL W. HIXON J. SHEMECH V. Concentration and activities of prostaglandins of the F-series in bovine tis sue, blond and milk // J. Dairy Sei.- 1976,- V. 59, N. 12,- P. 1354-1365.

74. HARRIS G.W. Neural control of the pituitary gland // Phys. Rev. 1948.- V. 25,-P. 139.

75. HERZOG H. Vermehrte Renntnisse üden Brunstzyklus II Schweip. Braunvich.- 1989,- V. 1. S. 14-17.

76. KANITZ E„ KANITZ W., DELZER W. ET. AL. Die Nutzung der LH-Analitik zur Bestimmung des optimalen Besamungszeitraumes nach Superovulationsbehandlungen //Mh. Vet.- Med.- 1990.- # 5.- S. 123-125.

77. KELTON D., WHITE M., HODGES R. The relationships among palpator esperience, milk progesterone concentration and estrous and fertility in cows with palpable corpora lutea treated with cloprostenol // Cornell. Veter.-1988,- V. 78, N. l.-P. 105-112.

78. KNUTSON R., ALLRICH R. Influence of nutrition on serum concentrations of progesterone, luteinizing hormone and estrous behavior in dairy heifers // J. Anim. Sei.- 1988.- V. 66, N. 1.- S. 90-97.

79. KRZYMOWSKI T., STEFANZYK-KRZYMOWSKA S., KOZINOWSKI M. Counter current transfer of Pg F2a in the mesometrial vessles mechanism for prevention of luteal regression in early pregnancy II Proc.

80. Satellite Symp. Endocrinol. Reprod. Process. Female Olstyn. 23-26 June, 1987 // Acta physiol. Pol.- 1989,- V. 40, N. 1.- P.23-24.

81. KURZROK A. LIEB C. Biochemical studies on human semen // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1930.- V. 26.- P. 268.

82. LANGE W., KOPPITZ G„ WINKLER L. Untersuchungen zum Einfluß von Gn-Rh auf Superovulatioseffekt nach PMSG-Behfhdlung bei Masthybridfarsen // Mh. Yet.- Med.- 1989,- # 12.- P. 414-417.

83. LAUMANDE J., CHUPIN J., ORTAVANT M., AULEON P. Factors affecting the variality of ovulation rates after PBSG stimulation // Streenan J. (Ed.): Control of reproduction in the cow. Martimes Nijhof The Hague/Boston/London. 1978. The Commission of the EEC.

84. LEAVER I.D. GLENCROSS R.G. POPE C.S. Fertility of Friesian heifers after luteolysis with a prostaglandin analogue // Vet. Ree.- 1975,- V. 96, N. 17, P. 383-384.

85. LINDER H., AMSTERDAM A., SALOMON J. Et. al. Inotrovarian factors in ovulation: determinants of follicular response to gonadotrophins // J. Reprod. Fértil.- 1977,- V. 51,- P. 215-235.

86. LITCH S., CONDON W. // Mol. and Cell. Endocrinol.- 1988,- V. 57, N. 1-2.-P. 81-85.

87. MAPTINEZ BORJAS, S. y coaut. Valoración de dos hormonas foliculoestimulantes comerciales usadas en la superovulación de vacas en lactación y vaquillas en ganado lechero // Técnica Pecuaria Mexicana volumen 33, número 1. México 1995, PP 34-38.

88. MICHEL G. Kompedium der Embryoen der Haustiere // G. Fischer Verlag.-Stuttgart, 1985,- S. 260.

89. MOMONT H., SEQUIN B., SINGH G., STASINKYNAS E. Does intrauterine site of insemination in cattle really mater i I Theriogenology.-1989.- V. 32 #1.-P. 19-26.

90. MOOR R., WARNES G. Regulation of oocyte maturation in mammals // Control of ovulation / D. Chrighton, G. Foxcroft, N. Haynes, G. Lammings (Eds.).- Butterworths, 1978,- P. 159-176.

91. MORI I., ENDO T., TAKAMASHI T., MASAKY J. Release of LH after administration of an analog of synthetic Lh-Rh in cattle // Theriogenology.-1974,- V. l.-P. 177.

92. NEWCOMB R. Investigation of factors affecting superovulation and minsugical embryo recovery from lactating British Frisian cow // Veter. Record.- 1980,- V. 106.- P. 48.

93. NIB ART M. Biotechnologie et manipulations embryonnarires dans l'espice bovine // Chfmbes Agr.- 1987.- V. 28, # 4,- P. 451-465.

94. ODDE K. A review of synchronization of estrous in postpartum cattle // J. Anim. Sc.- 1990.- V. 68, N. 3,- P. 817830.

95. OKUDA K., GAONA W.A., SATO R. Effect of Gn PH and Pg F2a on the reproductive performance in p-p cows // Theriogenology.- 1989,- V. 29,-P. 831.

96. PACCARD P. Maîtriser la reproduction. Maîtriser la santé des bovines, 1987,-P. 21-31.

97. PATTERSON H.D., KIRACOFE G., STEVENSON S., CORAH L. Control of the bovine estrous circle with melengest rol acetate (MGA): A review. // J. Anim. Sc.- 1989,- V. 67, N. 8,- P. 1895-1906.

98. PHILIPPO M., ROWSON L.E. Prostaglandin and superovulation in the bovine //An. Biol. Biophys.- 1975,- V. 15, P. 233-240.

99. RAHE C., OWENS R., FLEEGER et. al. Pattern of plasma luteinizing hormone in cyclic cow: dependence upon the period of the cycle 11 Endocrinology.- 1980.- V. 107.-P. 438-503.

100. ROBERTS S. Veterinary obstetrics and genital diseases.- Ithaca: New-York. 1956. P. 386.

101. ROWSON L., TERWIT R., BRAND A. The use of 297 prostaglandins for synchronization of estrous in cattle // J. Reprod. Fert. .- 1972,- V. 29, N. l.-P. 145-150.

102. SANDOVAL I. Structure of the embryo transfer industry in Guatemala. Proc Owners and Managers Workshop, 8th Ann Meet Int. Embr Trans Soc., Denver, CO, 1882: 24-25.

103. SAUMANDE J. Concentrations of luteinizing hormone, oestradiol-IIß and progesterone in the plasma of heifers treated to induce superovulation // J. Endocr.- 1980.- V. 84,- P. 425-437.

104. SCHAMS D., MENZER C., SCHALLENBERGER E. et. al. Superovulation in Cattle: Hormonal profiles during suerpovulation with PMSG or pituitary FSH // Zuchthyg.- 1979.- V. 14, # 1.- P. 11-25.

105. SCHNEEBELI J., DÖBELIM. Die Bedeutung der Interostrusfollikel bei der Zyklussteuerung mittels Prostaglandin beim Rind // Zuchthygiene. -1987.- V.22, # 3,- S. 128.

106. SCHNEEBELI J., DÖBELI M. Untersuchungen über die Bedeutung der Interöstrusfollokel im Verlauf Künstlich eingekeiteter Zyklusunterbrechungen beim Rind // Schw. Arch. Tirheilk.- 1985.- V.127, # 8 S. 777.

107. SHALLY A., ARIMURA A. The hypothalamus and reproduction // Am. J. Obstet. Gyn.- 1972.- V. 114,-P. 423-442.

108. STEVENSON J. SCHMIDT V. CALL E. Sage of estrous cycle, time of insemination and seasonal effects on estrous and fertility of Holstein heifers after prostaglandin Pg F2a // J. Dairy Sei.- 1984.- V. 67, N. 8.- P. 17981805.113

109. TURGEON J. BARRACLOUGH patterns of LH C. Temporal release following graded preoptic electrochemical stimulation in proestrous rate // Endocr.- 1973.- V. 92.- P. 755-761.

110. VOSS J., ALLEN S., AQUADRO F., FOOTE R. Incorporation of GNRH analog into a superovulatory regimen for dry Holstein cows // Theriogenology.- 1986,- V. 25,- # 2,- P. 210.

111. WANG H., WU V., VURPHY D., MAPLETOFT R. Superovulation in beef heifers with PMSG: Effect of dose and monoclonal antibodies to PMSG it Theriogenology (Los Altos).- 1988.- V. 29.- P. 332.

112. WANG H., XU K., WU M., MAPLETOFT R. The effect of estradiol with Synchro-Mate-B in superovulation of beef heifers with FSH-P // Theriogenology (Los Altos).-1988,- V. 29,- P. 333.

113. WATERS R., BALL R. Commercial ovulation control and fixed time artificial insemination in cattle // Vet. Ree.- 1978,- V. 3,- P. 56-58.

114. YOUNGS C., KIM H., RORIE R. The use of anti-PMSG antibodies with PMSG for superovulation beef cattle // Theriogenology (Los Altos).- 1987.-V. 27,-P. 243.

Информация о работе

Родольфо Рамирес Родригес
кандидата биологических наук
п. Дубровицы, Московской обл., 2000
ВАК 03.00.13

Диссертация

Влияние различных факторов на результаты суперовуляции коров доноров, качество и приживляемость эмбрионов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы