Влияние пептидов тимуса на иммунный статус грызунов в норме и при воспалениях, индуцированных бактериальным токсином

Лунин, Сергей Михайлович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние пептидов тимуса на иммунный статус грызунов в норме и при воспалениях, индуцированных бактериальным токсином
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Влияние пептидов тимуса на иммунный статус грызунов в норме и при воспалениях, индуцированных бактериальным токсином"

На правах рукописи

Лунин Сергей Михайлович

ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДОВ ТИМУСА НА ИММУННЫЙ СТАТУС ГРЫЗУНОВ В НОРМЕ И ПРИ ВОСПАЛЕНИЯХ, ИНДУЦИРОВАННЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫМ

ТОКСИНОМ

Биофизика 03 00 02

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

ООЗ164192

ПУЩИНО 2008

003164192

Работа выполнена в Институте биофизики клетки РАН

Научные руководители доктор биологических наук,

профессор Е.Г. Новоселова

член-корр. РАН, доктор биологических наук, профессор Б.Е. Фесенко

Официальные оппоненты доктор биологических наук,

профессор О.В. Годухин

кандидат биологических наук О.В. Накипова

Ведущая организация - Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Защита диссертации состоится « 2%. » 2008 года в

На заседании Диссертационного совета Д 002 038 01 в Институте биофизики клетки РАН

по адресу 142290, г Пущино Московская область, ул Институтская 3

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке Пущинского научного центра РАН

Автореферат разослан » 2008 года

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

■'Ъь^

"" Т И Смолихина

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы Тимус, являющийся центральным органом иммунной системы, функционально связан с нейроэндокринной системой и иногда рассматривается как компонент гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси Основой концепции о тесной связи между нейроэндокринной и иммунной системами является способность иммунных клеток формировать отпет на гормоны или на медиаторы, секретируемые, например, нервными клетками (Акмаев, 1996) Несмотря на важную роль тимуса, у большинства млекопитающих с возрастом происходит инволюция этого органа (Bodey et al, 1997) Биологическое значение возрастной инволюции тимуса пока остается неизвестным, но, кажется логичным, что, не в последнюю очередь, именно с инволюцией тимуса связаны возрастные изменения, проявляющиеся в виде недостаточной активности иммунных клеток В связи с этим, актуальным представляется вопрос о возможности замедления возрастной инволюции тимуса, например, путем трансплантации тканей и органов иммунной системы

В этой области уже имеются некоторые достижения Например, трансплантация ткани эп лфяза молодых крыс в тимус старых животных приводит к восстановлению структуры тимуса, свойственной молодьм животным и к значительному увеличению продолжительности жизни (Waestrom et al, 1988, Pierpaoh, Regelson, 1994)

В животном мире есть несколько видов млекопитающих, для которых характерна ежегодная сеюнная инволюция и регенерация тимуса Сезонные структурные изменения в тимусе были описаны у двух видов сусликов Cit erythrogenys, Cit citellus и сурка Marmota топах (Galletti, Cavallen, 1972, Shivatcheva, Alexandrov, 1986, Shivatcheva, Hadjioloff, 1987) Тимус всех этих животных перед вхождением в спячку претерпевает почти полную инволюцию, а весной полностью восстанавливается Интересно, что признаки возрастной инволюции тимуса у сусликов пока обнаружить не удалось

Изучение коррелятивной связи между состоянием тимуса и активностью клеток периферической иммунной системы кажется перспективным в плане выяснения роли этого центрального органа иммунной системы в регуляции активности врожденного и адаптивного иммунитета В этом смысле зимнеспящие животные с их ежегодным циклом т волюция/регенерация тимуса являются интересной природной моделью Полагаем, что изучение возможности компенсации возрастной инволюции тимуса путем трансплантации стареющим животным ткани тимуса суслика, находящегося на стадии ежегодной регенерации этой железы, является перспективным направлением

быть весьма перспективным Принимая во внимание высокую биологическую активность тимусных гормонов, целесообразно исследовать их влияние на иммунный статус организма не только в нормальных условиях, но и при патологиях, сопряженных с весьма стойкими формами иммунодефицита, таких, например, как острые и хронические воспаления

Цель и основные задачи Целью данной работы является изучение механизмов регуляции иммунных функций факторами тимусной природы и поиск способов компенсации патологий, связанных с нарушениями работы иммунной системы В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи

1 Изучение возможности торможения возрастной инволюции тимуса у крыс методом трансплантации тимусной ткани в иммунопривелигированную область (переднюю камеру глаза) и сравнение эффективности использования в данной модели аллотрансплантатов, полученных от молодых животных (крыс), и ксенотрансплантатов, полученных от зимнеспящих сусликов на стадии сезонной регенерации тимуса

2 Изучение состояния иммунной системы зимнеспящих (по исследованию секреции фактора некроза опухолей лимфоцитами и макрофагами, а также уровня пролиферации Т лимфоцитов) в разные периоды их жизненного цикла, характеризующиеся разным состоянием регуляторных систем и, в частности, тимуса Кроме оценки иммунного статуса зимнеспящих сусликов в течение годового цикла ставится задача исследования роли периферических клеток иммунной системы сусликов в физиологических процессах, сопровождающих кратковременные пробуждения животных в течение глубокой зимней спячки

3 Изучение влияния двух гормонов тимуса - тимулина и тимопентина - на секреторную активность иммунокомпетентных клеток (лимфоцитов и макрофагов) и на количество клеток в тимусе мышей Исследование молекулярно-клеточных механизмов регуляторной роли тимусных гормонов путем оценки продукции цитокинов, оксида азота, защитных белков - БТШ70 и БТШ90, а также белков сигнального каскада ОТ-кВ в иммунных клетках

4 Изучение защитных свойств тимусных гормонов на моделях острого и хронического воспалений, индуцированных бактериальным токсином

Научная новизна С использованием нескольких животных моделей впервые показана роль веществ, вырабатываемых тимусом, в регуляции активности клеток периферической иммунной системы Установлена возможность компенсации возрастной инволюции тимуса методом трансплантации тимусной ткани от зимнеспящих животных, находящихся на стадии сезонной регенерации тимуса Впервые изучены сезонные изменения активности периферических иммунных клеток зимнеспящих сусликов путем оценки продукции фактора некроза опухолей в макрофагах и Т-лимфоцитах, а также уровня иммунного ответа Т-чимфоцитов Впервые показано влияние двух тимусных пептидов, тимулина и тимопентина, на продукцию цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а, ИФН-у), оксида азота, белков теплового шока (БТШ70 и БТШ90) в клетках периферический иммунной системы в норме и при

boi палениях Установлено участие белков сигнального каскада NF-кВ в регуляторном влиянии тимусных пептидов

Научно-практическая ценность Представленные данные имеют важное значение для боке глубокого понимания роли, которую играют гормоны тимуса в организме Результаты представляют несомненный практический интерес, поскольку могут послужить основой для выработки новых подходов к терапии состояний, связанных с дасрегуляцией иммунной системы Апробация работы Материалы диссертации представлены на международной школе-ко чференции 8th John Humphrey advanced summer programme in îmmunology, (Moscow, 2007), симпозиуме «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», (2007, Судак, Крым), на 11 Путинской конференции молодых ученых (Пущино, 2007)

Публикации По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 6 статей и еще одна статья принята в печать

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования и нх обсуждения, заключения, вь водов и списка литературы Работа изложена на 129 листах машинописного текста и содержит 17 рисунков Библиографический указатель содержит 267 источников литературы

Список сокращений ИЛ - интерлейкин, ФИО - фактор некроза опухолей, ИФН-у -интерферон-гамма, БТШ - белок теплового шока, Л ПС - липополисахарид, NO - оксид азота (II), ИФА - иммуноферментный анализ

Содержание работы

Материалы и методы

В экспериментах по трансплантации использовали 168 животных Крыс реципиентов - 144, крыс доноров - 21, длиннохвостых якутских сусликов Citellus Undulatus - 7 Трансплантируемую ткань тимуса выделяли из молодых крыс-самцов линии Wistar массой 120г, либо длиннохвостых якутских сусликов массой 300-450г Реципиентами служили крысы-самцы линии Wistar в возрасте 7 месяцев В качестве контроля специфичности использовали легочную ткань суслика Эффективность трансплантации оценивали по изменению клеточности тимуса Эксперименты по трансплантации проведены в сотрудничестве с А В Куликовым (ИТЭБ РАН)

Оценку активности иммунных клеток сусликов производили на 30 зимнеспящих якутских длиннохвостых сусликах Citellus Undulatus, весом 300-450 г, обоего пола Животных ш пользовали в предгибернантный период (октябрь), в период глубокой зимней спячки (январь-февраль), и в весенне-летний период (март-июнь) Зимние суслики, находящиеся в состоянии спячки, были разделены на 3 группы спящие животные, которые были декапитированы в сбредине баута при температуре тела 4-5°С, спящие животные с температурой тела 27°С, шггивные зимние суслики с температурой тела 35°С

В серии экспериментов с токсическим стрессом использовали 110 (для модели острого стресса) или 60 (для модели хронического стресса) мышей-самцов аутбредного стока NMRI Все

измерения проведены индивидуально для каждой мыши в 6-9 повторах Острый токсический стресс вызывали однократным введением внутрибрюшинно 250 мкг ЛПС из Escherichia coli на 100 г массы тела Хроническое токсическое воздействие проводили путем ежедневных инъекций ЛПС в течение 11 дней, увеличивая дозу ЛПС каждые 2 дня, при этом первая доза составляла 25 мкг/100 г веса, последняя - 250 мкг/100 г веса

В этих экспериментах мыши получали внутрибрюшинную инъекцию тимулина или тимопентина (15 мкг/100 г массы тела) за полчаса до введения ЛПС или физиологического раствора В хронических экспериментах животные получали гормоны, как и ЛПС, в течение 11 дней, за полчаса до введения токсина И при остром, и при хроническом введении ЛПС декапитацию животных производили через 6 часов после последней инъекции

Содержание цитокинов в сыворотке крови, а также продукцию щггокинов макрофагами и цитокинов спленоцитами измеряли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) Продукцию N0 измеряли методом Грисса. Продукцию белков теплового шока и сигнальных белков каскада NF-KB измеряли с помощью иммуноблоттинга Количество белков оценивали с помощью программы Qapa Статистический анализ проводили с использованием критерия Стьюдента

Результаты и их обсуждение

Торможение возрастной инволюции тимуса путем использования алло- и ксенотрансплантации

На Рисунке 1 показаны данные по влиянию трансплантации на возрастную инволюцию тимуса стареющих крыс Аллотрансплантация тимуса от молодых крыс в переднюю камеру глаза стареющих животных через месяц после трансплантации приводила к существенному торможению процесса опустошения тимуса Трансплантация ткани тимуса сусликов крысам также вызывала достоверное торможение возрастной инволюции тимуса, причем даже в большей степени, чем при аллотрансплантации Важно отметить, что трансплантация ткани легкого от сусликов (контроль на специфичность ткани) не влияла на количество тимоцитов Эффект трансплантации проявлялся в течение 2-х месяцев, через 3 месяца клеточность тимуса была одинакова в опытных и контрольных группах

количество

клеток в тимусе х 107

V »у"' тимус суслика -■'*' тимус крысы легкое суслика

контроль

возраст (мес)

Рис. 1 Влияние трансплантации на динамику инволюции тимуса стареющих крыс. Каждое значение - среднее от 6-7 животных. Происхождение трансплантантов указано на оси абсцисс.

Таким образом, доказано, что трансплантация ткани активного суслика вызывает торможение возрастной инволюции тимуса стареющих крыс в течение 2-х месяцев. Исходя из того, что трансплантат в иммунопривилегированной области окружен барьерами, не пропускающими клеточные элементы и большинство высокомолекулярных веществ, можно предположить, что регуляторный эффект трансплантата опосредуется через секрецию низкомолекулярных веществ, вырабатываемых трансплантатом.

Сезонные изменения активности имму некомпетентных клеток у зимнеспящих сусликов

В первой части работы было показано, что трансплантат тимуса, вероятнее всего, через секрецию низкомолекулярных веществ, способен оказывать иммунорегуляторное действие на тимусную ткань реципиента. Это позволяет предположить, что факторы тимусной природы могут быть регуляторами и в отношении периферических компонентов иммунной системы.

Как уже отмечалось ранее, тимус зимнеспящих млекопитающих ежегодно претерпевает сезонную инволюцию и регенерацию. Вместе с тем, в литературе почти нет данных об изменении состояния периферических иммунных клеток зимнеспящих сусликов по сезонам.

В связи с этим была поставлена задача: изучить сезонные изменения активности иммунных клеток сусликов. Измеряли уровень продукции фактора некроза опухолей (ФИО) в перитонеальных макрофагах и лимфоцитах селезенки зимнеспящих якутских длиннохвостых сусликов СпеНив ипсМаШэ, находящихся на разных стадиях сезонного цикла. Параллельно с измерением продукции ФИО тестировали сезонные изменения уровня пролиферативного ответа в Т-клетках селезенки животных. Обнаружили, что продукция ФНО-Р в лимфоцитах селезенки сусликов не изменяется в течение сезонного цикла (Рис. 2). Достаточно устойчивой оказалась и г.ролиферативная активность Т-клеток (Рис. 3): значительное ее снижение наблюдали только в

октябре, до погружения сусликов в спячку. В остальные периоды (включая и глубокую спячку) пролиферативная активность Т-лимфоцитов не претерпевала сезонных колебаний.

Напротив, активность макрофагов оказалась весьма зависимой от состояния сусликов. Так, в активный период (с марта по сентябрь) продукция ФНО-а в макрофагах гибернантов была весьма высока. Если сравнивать показатели продукции ФНО-а в макрофагах нормотермных грызунов с таковыми у суслика, то у активных сусликов продукция ФНО-а была примерно в четыре раза

¿1

□ макрофаги 0 лимфоциты

март апрель май июнь октябрь

(т=4° 1т=27° 1т=35°

Рис. 2. Продукция ФНО-а (пг/мл) в перитонеальных макрофагах и ФНО-р в лимфоцитах селезенки сусликов. Каждое значение - среднее из трех экспериментов, в каждом эксперименте использовали 3-4 животных.

В октябре, еще до вхождения в спячку, продукция ФНО-а резко снижалась, и была такой же, как у спящих сусликов (Рис. 2). В зимний период продукция ФНО в макрофагах сусликов, находящихся в глубокой спячке, была существенно ниже, чем летом. В условиях искусственного пробуждения животных продукция ФНО в макрофагах резко повышалась еще до пробуждения, когда температура тела достигала 27°С, причем дальнейший переход животных в активное состояние не вызывал дополнительного стимулирования активности клеток. Изменение иролиферативной активности лимфоцитов при изменении температуры было незначительным.

Таким образом, активность иммунных клеток зимнеспящих подвергается в ходе сезонного цикла заметным колебаниям, причем между двумя популяциями клеток (макрофагами и лимфоцитами) существуют значительные различия. Фагоцитарные клетки обладают более высоким уровнем ответов на изменение внешних условий в сравнении с Т-лимфоцитами, которые отличаются стабильностью реакций, но для обеих популяций клеток характерно снижение активности в период, предшествующий наступлению спячки.

зооо

2500 2000 1 500 1 ООО

500

О -I—

зима зима зима март-июнь октябрь

^=27° 1Т=35°

Рис. 3. Пролиферативная активность клеток сусликов в разные периоды сезонного цикла Каждое значение представляет собой среднее значение включения |3Н]-тимидина, имп/мин/ 5*105 клеток для грех экспериментов, в каждом эксперименте использовали 3-4 животных. Для значений, соответствующих зимним месяцам, указывается температура тела животных. * - достоверное отличие от уровня пролиферации в период весна-лето, р<0.05

Ответ клеток иммунной системы на введение тимусных пептидов в нормальных условиях и при остром токсическом стрессе

Результаты показали, что активность иммунокомпетентных клеток зимнеспящих подвергается в ходе сезонного цикла заметным колебаниям. Хотя эти данные и не позволяют точно сказать, обусловлены ли эти изменения влиянием сезонной инволюции тимуса, они дают основания для того, чтобы подробно изучить влияние веществ, вырабатываемых тимусом, на активность клеток периферической иммунной системы.

В связи с этим следующим этапом данной работы стало изучение регуляторного влияния двух низкомолекулярных гормонов тимуса - тимулина и тимопенгина, на количество клеток в тимусе и на активность периферических иммунных клеток. В качестве основного показателя этой активности рассматривалась секреция цигокинов и оксида азота. Кроме этого, исследовалось влияние этих двух гормонов на белки теплового шока БТШ70 и БТШ90 - часть внутриклеточной системы защиты структурных белков, а также на белки сигнального каскада ОТ-кВ.

На Рисунке 5 показано количество тимоцитов в тимусе мышей, получивших за 6 часов до измерения инъекцию тимулина или тимопентина. Тимулин не оказывал значимого влияния на количество тимоцитов. Тимопентин, напротив, вызвал существенное увеличение количества клеток в тимусе. Последний эффект интересен тем, что накопление клеток в тимусе происходило в весьма короткие сроки (6 часов). Поскольку известно, что клетки-предшественники Т-лпмфоцитов попадают в тимус из крови, а в тимусе происходит лишь их созревание, можно сделать вывод о том, что тимопентин ускоряет миграцию клеток-предшественников в ткань тимуса.

250 -

н 200

контроль тимулин тимопентин

Рис. 5. Влияние тимулина и тимопентина на количество клеток в тимусе через шесть часов после введения гормонов. Значение по оси ординат выражено в 10б клеток. * - достоверное отличие от контроля (р<0.05)

На Рис. 6 показана концентрация ряда цитокинов в плазме крови мышей, получивших за 6 ч до проведения измерений инъекцию тимопентина или тимулина (15 мкг/100 г массы тела). Введение тимулина, в основном, не оказывало заметного влияния на уровень цитокинов в крови в сравнении с контролем, хотя была заметна некоторая тенденция к снижению уровня провоспалителыяых цитокинов (ИЛ1-а, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а и ИФН-у). Влияние гормона на уровень анти-воспалительного цитокина ИЛ-10 оказалось противоположным: концентрация этого цитокина под действием тимулина была заметно повышена.

Введение тимопентина приводило к достоверному увеличению концентрации в плазме периферической крови всех исследованных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а и ИФН-у) примерно в 1.5 раза. Накопление цитокинов в крови указывает на возможные изменения цитокин-продуцирующей активности клеток под влиянием тимопентина. В связи с этим исследовали продукцию ряда цитокинов в макрофагах и лимфоцитах мышей, получавших тимусные гормоны. Кроме того, в макрофагах измеряли продукцию оксида азота, уровень которого, как известно, во многом определяет функциональную активность клеток. Продукцию цитокинов измеряли в двух популяциях клеток - в макрофагах перитонеального экссудата и в лимфоцитах селезенки.

Перитонеальные макрофаги: Была измерена продукция ИЛ-10, ФНО-а и оксида азота (Рис 7). Результаты показали, что введение тимулина здоровым животным достоверно стимулировало продукцию ФНО-а и ИЛ-10. Введение тимопентина вызывало некоторое увеличение продукции ИЛ-10, но изменений продукции ФНО-а в макрофагах мышей, получавших тимопентин обнаружено не было.

о контроль о тммулин и тимопентмн

Рис. 6. Влияние тимусных гормонов на содержание цитокинов в плазме крови. Значения приводятся в % от контроля. * - достоверное отличие от контроля, р<0.05

ИЛ-10 ФНОа N0

Рис. 7. Влияние тимусных гормонов на продукцию цитокинов и оксида азота щритонеальными макрофагами. Значения приводятся в % от контроля. *- достоверное отличие от контроля, р<0.05.

Было показано, что тимулин не оказывал заметного влияния на продукцию оксида азота перитонеальными макрофагами, а при введении тимопентина наблюдали небольшое, но статистически достоверное увеличение продукции оксида азота в сравнении с контрольными животными.

Лимфоциты селезенки: Измеряли продукцию ИФН-у - специфичного для Т-клеток провоспалительного цитокина, и ИЛ-2 - активатора пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов. Показано увеличение продукции ИЛ-2 под действием тимулина и отсутствие

□ контроль G тамулин и тимопентин

заметного влияния этого гормона на продукцию ИФН-у. Тимопентин оказывал стимулирующее действие на продукцию ИФН-у и ИЛ-2 в лимфоцитах мышей (Рис. 8).

250 -

ифну

200

g, 1SO

а о

Н 100 о

ил-2

Рис. 8. Влияние тимусных гормонов на продукцию цитокинов лимфоцитами селезенки. Значения приводятся в % от контроля. *- достоверное отличие от контроля, р<0.05.

Таким образом, тимусные гормоны способны влиять на активность клеток периферической иммунной системы, регулируя продукцию цитокинов. Оказалось, что в большей степени это относится к тимопентину, оказывающему заметное иммуностимулирующее действие практически на все компоненты иммунного ответа, а также на количество клеток в тимусе. При этом существенно, что не возрастала продукция ФНО-а в перитонеальных макрофагах, а увеличение продукции N0 в этих клетках было невелико. Можно сделать вывод о том, что тимопентин не оказывает токсического эффекта при его введении животным in vivo. Интересно заметить, что, несмотря на отсутствие изменений продукции ФНО-а в макрофагах, в крови концентрация этого цитокина несколько увеличивалась. Можно полагать, что это происходило за счет вклада других клеточных популяций, секретирующих ФНО-а, таких как цитотоксические Т-лимфоциты, естественные киллерные клетки и др.

Тимулин, в отличие от тимопентина, не оказывал заметного эффекта на содержание цитокинов в крови и на число клеток в тимусе. Если говорить о тенденциях, то можно отметить небольшое снижение содержания провоспаяительных цитокинов в крови с некоторым повышением содержания анти-воспалительного цитокина ИЛ-10 (согласующееся с повышением продукции этого цитокина макрофагами). Вместе с тем, под действием этого пептида повышалась продукция ФНО-а макрофагами, но это повышение не отразилось на содержании этого цитокина в крови.

Известно, что белки теплового шока играют ключевую роль в индукции иммунного ответа организма на вирусные, микробные и опухолевые антигены. По этой причине было целесообразно выяснить эффекты тимусных гормонов на продукцию двух мажорных индуцибельных белков теплового шока из разных семейств - БТЩ70 и БТШ90. Эксперименты

по.сазали, что через 6 ч после инъекции тимулина не наблюдается заметного изменения продукции обоих белков теплового шока. Напротив, введение тимопентина вызывало повышенную экспрессию индуцибельных форм как БТШ70, так и БТШ90 в лимфоцитах селезенки мышей (Рис. 9).

БТШ 70 БТШ 90

авоаы шва ша ивиц. д ошщ.

контроль тим/лин контроль тимолентин контроль гимупин контроль тиммешк

Рис. 9. Продукция БТШ70 и БТШ90 лимфоцитами селезенки под действием тимулина и тимопентина. Верхние панели - фотографии мембран после иммуноблотинга, нижние панели -результат денситометрии пятен, в условных единицах.

Судя по увеличению экспрессии белков теплового шока, тимопентин, не вызывая токсической провоспалительной реакции, оказывает, тем не менее, стрессовое или регуляторное воздействие. Действительно, индуцибельная форма белка БТШ70, белок 72 кДа, экспрессируется только при стрессе.

В отличие от БТШ70, индуцибельная форма БТШ90 всегда присутствует в клетке, но активнее экспрессируется в стрессовых условиях. Мы обнаружили, что введение гимусного гормона тимопентина вызывало существенную стимуляцию продукции БТШ90. В свою очередь, поскольку клиентами БТШ90 является ряд сигнальных белков, можно было ожидать изменений белков сигнального каскада активации ОТ-кВ, которые были исследованы в данной работе.

Было проведено измерение уровня трех белков, включенных в активацию сигнального каскада ИР-кВ: самого гетеродимера №-кВ, его фосфорилированной формы рЫЧР-кВ и белка -супрессора 1кВ-а, препятствующего переносу этого транскрипционного фактора в клеточное ядро. Было показано, что введение тимулина вызывало лишь небольшое увеличение экспрессии фосфорилированной формы ОТ-кВ и белка-супрессора 1кВ-а, но почти не оказывало влияния на общий уровень ИР-кВ. После введения тимопентина наблюдали возрастание экспрессии всех

исследованных сигнальных белков (Рис 10) При этом наиболее заметно ускорялся процесс фосфорилирования КТ-кВ, в меньшей степени возрастало количество белка - супрессора 1кВ-а, а общее содержание ОТ-кВ в клетке изменялось незначительно Весьма интересным представляется эффект тимопентина, связанный с активацией сигнального пути ОТ-кВ, причем наиболее заметный эффект гормона был выявлен на стадии фосфорилирования №-кВ Известно, что именно фосфорилирование этого бежа является одним из пусковых этапов ОТ-кВ сигнализации, поскольку в результате от гетеродимерной структуры, обычной для ОТ-кВ в нормальных условиях, отделяется белок 1кВ-а, препятствующий транслокации ОТ-кВ в ядро клетки Таким образом, тимопентин, действуя как активатор переноса транскрипционного фактора в ядерные структуры, способен, по-видимому, вызвать активацию ряда генов, ответственных за продукцию цитокинов, белков теплового шока и других факторов

Следует отметить, что активация сигнального каскада ОТ-кВ, также как активация синтеза провоспалительных цитокинов, оксида азота и индуцибельных форм белков теплового шока, может быть вызвана многими факторами, которые относятся к повреждающим травмы, соли тяжелых металлов, вирусы, бактериальные токсины, активные формы кислорода и др Однако анализ результатов настоящей работы приводит к выводу, что введение тимулина вызывает скорее стрессовые, но не повреждающие эффекты В пользу такого вывода свидетельствует то обстоятельство, что тимулин не вызывает окислительного стресса и усиленной продукции ФНО-а, а продукция других цитокинов и их накопление в организме животных много ниже, чем это отмечено при действии повреждающих факторов

Влияние тимусных гормонов на активность иммунокомпетентных клеток животных с острой интоксикацией, вызванной введением эндотоксина

Проведенные на предыдущем этапе исследования показали, что гормоны тимуса (тимулин и тимопентин) оказывают модулирующее воздействие на активность периферических иммунокомпетентных клеток, причем тимопентин оказывал выраженное стимулирующее влияние на иммунные клетки, а тимулин - небольшое антивоспалительное воздействие Представляло интерес исследовать влияние гормонов при патологии, сопровождающейся дисбалансом иммунного статуса Учитывая вышеизложенное, изучали влияние тимусных гормонов на активность иммунных клеток, используя модель острого токсического стресса, вызванного введением липополисахарида (ЛПС) из грам-отрицательных бактерий

№-кВ

РИ^-кВ

контроль тамулин контроль тимолен-шн контроль тамупкн контроль тамопеитин

1кВ-сс

контроль тимупин контроль тимопентин

Рис. 10. Продукция сигнальных белков лимфоцитами селезенки под действием тимулина и тимопентина. Верхние панели - фотографии мембран после иммуноблогтинга, нижние панели -результат денситометрии пятен, в условных единицах.

На Рисунке 11 показано влияние гормонов тимуса на количество меток в тимусе мышей в условиях острого токсического стресса, вызванного Л ПС. Введение только ЛПС приводило к уменьшению числа клеток в тимусе примерно в два раза. Предварительное введение тимулина не окгзало заметного влияния па динамику снижения количества клеток. Тимопентин, напротив, восстанавливал количество клеток до контрольного уровня.

Рис. 1!. Влияние тимулина и тимопентина на количество клеток в тимусе в условиях острого токсического стресса, вызванного ЛПС. Значение по оси ординат выражено в 106 клеток. * - достоверное отличие от контроля (р<0.05);л - достоверное отличие от группы «ЛПС» (р<0.05).

Таким образом, как и в опытах с использованием тимусных гормонов в нормальных условиях, в условиях токсического стресса выявили разное действие тимулина и тимопентина. Тимопентин и в данном случае оказал потенцирующее воздействие на количество клеток в тимусе. В качестве одного из возможных объяснений этому факту можно предположить, что за счет увеличения миграции клеток-предшественников была компенсирована потеря клеточности тимуса, вызванная действием эндотоксина.

Для оценки влияния тимусных гормонов на иммунную систему в условиях острого токсического стресса в крови мышей, которым был введен ЛПС, и мышей, которым за полчаса до ЛПС была проведена инъекция тимулина или тимопентина, было измерено содержание таких цитокинов, как ИЛ-1а, ИЛ-2, ИЛ-б, ИЛ-10, ФНО-а и ИФН-у (Рис. 12). Инъекция бактериального токсина, как и ожидалось, вызывала увеличение концентрации в крови всех исследуемых цитокинов. Предварительное введение тимулина приводило к тому, что содержание почти всех цитокинов снижалось до нормального уровня и даже ниже нормы. Исключение относится к антивоспалительному цитокину ИЛ-10, уровень которого оставался достоверно более высоким в сравнении с контролем, хотя и ниже, чем при введении одного ЛПС.

Введение тимопентина на фоне острого стресса приводило к увеличеншо содержания в крови всех исследованных цитокинов, причем величина этого повышения была равной той, которая наблюдалась у животных, получавших только ЛПС. Небольшое снижение по сравнению с введением одного ЛПС наблюдалось только для ИЛ-10 и ФНО-а, хотя в обоих случаях значения оставались, тем не менее, достоверно выше, чем в контрольной группе.

550 -1 500 -450 -400 -

ИЛ-1 а ИЛ-2 ИЛ-6 ИЛ-10 ФНОа ИФНу

Рис. 12. Влияние тимусных гормонов на содержание цитокинов в плазме крови в условиях острого токсического стресса, вызванного введением ЛПС. Значения приводятся в % от контроля * - достоверное отличие от контроля, р<0.05.

Итак, мы обнаружили достоверный анти-воспалительный эффект тимулина. Следует отметить, что при введении в сочетании с ЛПС тимопентина (который в нормальных условиях оказывал стимулирующее воздействие) не наблюдалось заметного аддитивного эффекта -уровень провоспалительного ответа был примерно тем же, что и в случае одного ЛПС.

Чтобы оценить влияние тимусных гормонов на цитокинпродуцирующую активность, мы измерили продукцию ряда цитокинов перитонеальными макрофагами и лимфоцитами селезенки мышей, получавших только инъекцию ЛПС или инъекцию тимулина или тимопентина за полчаса до введения ЛПС.

Перитонеальные макрофаги: Введение ЛПС существенно увеличило продукцию N0. ФНО-а и ИЛ-10 перитонеальными макрофагами в сравнении с контролем. Предварительное введение как тимулина, так и тимопентина не оказало заметного влияния на рост продукции оксида азота под действием ЛПС. Что касается цитокинов, то введение тимулина до интоксикации снижало продукцию цитокинов до контрольных значений (ФНО-а) и даже ниже (ИЛ-10), а предварительное введение тимопентина вызывало существенное повышение продукции некоторых цитокинов (ФНО-а и ИЛ-10). Таким образом, при действии тимопентина наблюдался аддитивный эффект - более высокий уровень продукции ФНО-а и ИЛ-10 в группе животных, получавших тимопентин и ЛПС, в сравнении с животными, получавшими только ЛПС (Рис. 13).

500 475

450

425

400

375

150

к 125

О а ¡00

Е £ !75

О а 150

Ь !25

¡00

5- 75

150

125

100

ИЛИ О

ФНО.

! □ контроль ■ ЛПС

IИ тамулин+ЛПС I в тамопентин+Л ПС

Рис. 13. Влияние тимусных гормонов на продукцию цитокинов и оксида азота, перитонеальными макрофагами в условиях острого токсического стресса, вызванного введением ЛПС. Значения приводятся в % от контроля. * - достоверное отличие от контроля, р<0.05.

Таким образом, накопление провоспалительных цитокинов в крови при действии эндотоксина коррелирует с повышением продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками. При этом антивоспалительный эффект тимулина очевиден и в этом случае: продукция ФНО-а при действии тимулина в сочетании с ЛПС снижается до контрольных значений. Весьма существенным оказалось и падение продукции антивоспалительного цитокина ИЛ-10, которое совпадает по направлению с изменением содержания этого цитокина в крови. Что касается тимопентина, то в данном случае можно говорить об аддитивном эффекте в сравнении с действием одного ЛПС.

Лимфоциты селезенки: В этих клетках измеряли продукцию ИЛ-2 и ИФН-у. Введение ЛПС приводило к увеличению продукции обоих цитокинов. Предварительное введение тимулина снижало уровень ИФН-у до контрольных значений и не влияло на повышенный уровень ИЛ-2. При совместном введении тимопентина и ЛПС продукция обоих цитокинов (ИЛ-2 и ИФН-у) оставалась на том же уровне, что и при введении ЛПС (Рис. 14).

250 -

□ контроль Ш ЛПС

В тимулин+ЛПС Ш тимолентмн+ППС

ИЛ-2

ИФН

Рис. 14. Влияние тимусных гормонов на продукцию цитокинов лимфоцитами селезенки в условиях острого токсического стресса, вызванного введением ЛПС. Значения приводятся в % от кошроля. * - достоверное отличие от контроля, р<0.05.

Таким образом, если эндотоксин стимулирует выработку цитокинов лимфоцитами селезенки, то гимулин оказывает анти-воспалительное действие, по крайней мере, в отношении интсрферона-у, который является основным активатором макрофагов. В отношении продукции ИЛ-2 лимфоцитами антивоспалительный эффект тимулина не проявился, хотя в крови уровень этого цятокина, повышенный при введении ЛПС, под влиянием тимулина снижался. Поскольку основными продуцентами данного цитокина являются лимфоциты, наблюдаемые эффекты можно объяснить влиянием тимулина на регуляцию катаболизма ИЛ-2.

¡Продукция ФНО-а макрофагами при введении ЛПС и тимулина in vitro

Чтобы выяснить, является ли действие тимусных гормонов на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками прямым или опосредованным, мы исследовали влияние тимулина, проявившего отчетливо выраженный эффект в виде снижения ЛПС-индуцированного увеличения продукции ФНО-а макрофагами (Рис. 13), добавляя гормон, а также гормон в сочетании с ЛПС в культуральную среду, в которой инкубировались нормальные перитонеальные макрофаги. Результаты показывали, что эффект тимулина в условиях in vitro в значительной степени совпадает с наблюдаемым in vivo: примерно одинаковое увеличение продукции ФНО-а под действием тимулина и ЛПС и существенное снижение продукции ФНО-а при совместном введении тимулина и ЛПС (Рис. 15). Аналогичное исследование для тимопентина не проводилось, поскольку при исследовании in vivo этот гормон не оказал существенного влияния на продукцию ФНО-а, a сочетание тимопентин+ЛПС в значительной мерс воспроизводило эффект ЛПС.

200

Рис. 15. Влияние тимулина на продукцию цитокинов и оксида азота, перитонеальными макрофагами при инкубации с ЛПС in vitro. Значения приводятся в % от контроля. * -достоверное отличие от контроля, р<0.05. А - достоверное отличие от группы «ЛПС»

Таким образом, можно сделать вывод, что, тимулин оказывает прямое, а не опосредованное через другие типы клеток влияние на продукцию ФНО-а перитонеальными макрофагами.

Экспрессия индуцибельной формы белков теплового шока является важной защитной реакцией клетки на стрессовое воздействие. Изучение влияния тимусных гормонов на экспрессию белков теплового шока при стрессе позволяет оценить роль этих гормонов в регуляции защиты от токсических повреждений на клеточном уровне. Нами была изучена экспрессия индуцибельных форм белков теплового шока БТШ70 и БТШ90 в лимфоцитах селезенки (Рис. 16).

Введение ЛПС вызвало ожидаемое увеличение продукции и БТШ70, и БТШ90. Введение тимулина в сочегаиии с ЛПС приводило к тому, что содержание БТШ70 в спленоцитах опускалось несколько ниже контрольного уровня, а продукция БТШ90 резко повышалась, как в сравнении с таковой при введении ЛПС, так и в сравнении с контролем (Рис 16, верхняя панель). Введение тимопентина в сочетании с ЛПС увеличивало содержание БТШ70 и БТШ90 до значений, примерно соответствующих тем, которые наблюдали при введении только ЛПС. (Рис. 16, нижняя панель). Другой гормон, тимопентин, повышая уровень экспрессии БТШ70 и БТШ90. как можно было ожидать, стимулирует экспрессию этих белков и на фоне действия ЛПС. Белки семейства БТШ70 функционируют как молекулярные шапероны, участвуя в свертывании белков, их транспортировке и деградации. Белки семейства БТШ90, в отличие от БТШ70, в обычных условиях не участвуют в свертывании de novo образующихся белков, и их основными субстратами являются белки сигнальной трансдукции. Опи участвуют в регуляции путей внутриклеточной сигнализации, в том числе, в проведении сигналов от кортикостероидных гормонов, хотя в условиях стресса также принимают участие в ренатурировании белков.

Представленные результаты свидетельствуют о том, что тимусные гормоны способны влиять на продукцию БТШ обоих этих семейств в условиях токсического стресса. Токсический стресс, вызывая активацию иммунокомпетентных клеток, стимулирует и накопление в них белков

теплового шока, защищающих внутриклеточные белки от повреждения Снижение содержания БТШ70 в лимфоцитах под действием тимулина можно было бы объяснить падением общего уровня активации клеток, коррелирующего со снижением продукции цитокинов, но этому противоречит высокий уровень БТШ90 в лимфоцитах мышей данной группы Уменьшение продукции БТШ70 под действием тимулина может указывать на непосредственное блокирование тимулином ЛПС-индуцированного повышения экспрессии БТШ70, хотя аналогичного блокирования экспрессии БТШ90 при этом не происходит Объяснить такое различие сложно, поскольку механизмы внешней регуляции экспрессии белков теплового шока практически не изучены Тем не менее, вполне вероятно, что в этом случае регуляторные функции может выполнять нейроэндокринная система

Для изучения возможных механизмов действия тимусных гормонов на сигнальные пути ответа иммунных клеток на токсический стресс, мы проанализировали продукцию в лимфоцитах селезенки ряда белков сигнального каскада ЬТ-кВ, которые, как мы выяснили, участвуют в ответе клетки на ЛПС (Рис 10) Результаты показали, что введение бактериального токсина не оказывает существенного влияния на общий уровень ОТ-кВ в клетках, но в значительной степени увеличивает уровень фосфорилированной формы МБ-кВ Кроме того в клетках наблюдается небольшой рост синтеза белка-супрессора 1кВ-а (Рис 17)

Введение тимулина перед инъекцией ЛПС вызывало некоторое увеличение общего содержания ОТ-кВ в лимфоцитах селезенки Уровень фосфорилированной формы МБ-кВ оказался существенно сниженным, и в значительной степени (вдвое, по сравнению с группой, получавшей только ЛПС) возрастал синтез белка-супрессора 1кВ-а Предварительное введение тимопентина перед эндотоксином вызывало значительное снижение как общего уровня ОТ-кВ, так и фосфорилированной формы ОТ-кВ, как в сравнении с группой, получавшей ЛПС, так и с контролем Уровень белка-супрессора 1кВ-а оказался существенно повышенным

Таким образом, показано, что оба тимусных пептида влияют на каскад ОТ-кВ в условиях острого стресса Однако тимулин, не оказывая заметного влияния на сигнальные каскады в норме, при остром стрессе снижал степень активации данного каскада через повышение содержания в клетке белка-супрессора (1кВ-а) и снижение содержания фосфорилированной формы ОТ-кВ, и это может служить одним из механизмов торможения данным гормоном выработки провоспалительных цитокинов Что касается тимопентина, то, несмотря на его описанное выше стимулирующее действие как на каскад ОТ-кВ (см Рис 10), так и на продукцию цитокинов, в условиях острого стресса мы также наблюдали снижение содержания активированной формы ЫБ-кВ в сравнении с введением одного ЛПС и повышение продукции белка-супрессора (1кВ-а) Такое изменение направления действия гормона в зависимости от состояния активации клетки может объясняться включением компенсаторных механизмов, что согласуется с отсутствием ад дитивного эффекта ЛПС и тимопентина на продукцию цитокинов

Введение тимулина

РИЫР-кВ

Введение тимопентина

МР-кВ

контроль лпс тимопентин

+ЛПС

Рис. 17. Продукция сигнальных белков лимфоцитами селезенки под действием тимулина и тимопентина в условиях острого токсического стресса, вызванного ЛПС. Верхние панели всех рисунков - фотографии мембран после иммуноблотинга, нижние панели - результат денситометрии пятен, в условных единицах.

Таким образом, продукция белков теплового шока при введении тимусных гормонов т vivo может регулироваться на уровне метаболизма короткоживущих белков сигнального каскада Молекулярные взаимодействия между белками теплового шока и сигнальными белками являются чрезвычайно важными для нормального функционирования клетки

Заключение

Исследование влияния тимуса на состояние иммунной системы у грызунов потребовало применения нескольких подходов во-первых, введения синтетических аналогов гормонов тимуса мышам т vivo, во-вторых, использование природного материала (ткани тимуса молодых крыс и ткани тимуса зимнеспящих сусликов в активный период) для трансплантации его в иммунопривелигированную область - переднюю камеру глаза крыс Использование тимуса зимнеспящих сусликов в качестве материала для трансплантации было обосновано тем, что, в отличие от большинства млекопитающих, тимус у этих уникальных животных ежегодно подвергается циклам инволюции-реинволюции Мы полагали, что циклическое "возрождение" тимусной ткани зимнеспящих животных должно сопровождаться высокой активностью тимусных клеток, секретирующих гормоны и другие биологические вещества Действительно, трансплантация ткани тимуса активных сусликов в переднюю камеру глаза стареющих крыс вызывала более эффективное торможение возрастной инволюции тимуса, чем трансплантация ткани тимуса молодых крыс

Установлено, что у зимнеспящих сусликов фагоцитарные клетки более лабильны при формировании ответов на изменение внешних условий в сравнении с лимфоцитами, которые отличаются стабильностью в отношении продукции ФИО Изменение пролиферативной активности лимфоцитов наблюдали только при подготовке к спячке, в октябре, и в этот период пролиферативная активность лимфоцитов была ниже, чем в период глубокой спячки Полученные результаты указали на необходимость изучения влияния факторов, секретируемых тимусом, на активность иммунокомпетентных клеток Для этого провели анализ влияния двух гормонов тимуса - тимулина и тимопентина, на содержание цитокинов в крови, на их продукцию иммунокомпетентными клетками и белки теплового шока, входящие в систему защиты клеток от повреждений Показали, что тимусные гормоны влияют на активность клеток периферической иммунной системы, модулируя в них продукцию цитокинов Тимопентин вызывал стимуляцию практически всех компонентов иммунного ответа, включая продукцию ряда цитокинов, белков теплового шока и клеточность тимуса Тимулин в нормальных условиях оказывал менее выраженное действие, с общей тенденцией к торможению продукции провоспалительных цитокинов и стимуляции анти-воспалительного цитокина ИЛ-10 В условиях острой интоксикации был обнаружен антивоспалительный эффект тимулина предварительное введение этого гормона значительно снижало уровень воспалительных ответов клетки на эндотоксин

Изучение возможных механизмов влияния гормонов на продукцию цитокинов и белков теплового шока позволило установить, что эти процессы регулируются белками, входящими в

сигнальный каскад №-кВ Установлено, что тимопентин активирует каскад ОТ-кВ, повышая содержание фосфорилированной формы !ЧТ-кВ Таким образом, тимопентин, действуя как активатор переноса транскрипционного фактора в ядро, способен, по-видимому, вызвать активацию генов, ответственных за продукцию цитокинов, белков теплового шока и других фазаоров Напротив, тимулин в условиях интоксикации вызывает угнетение фосфорилирования №-*В, снижая уровень активации клеток

Таким образом, получены доказательства роли факторов, секретируемых тимусом, в регу тяции активности клеток периферической иммунной системы Один из двух исследованных гормонов - тимопентин, активируя сигнальный каскад ОТ-кВ, оказывал ботее значительное иммуностимулирующее действие в сравнении с тимулином

Выводы

1 Показано торможение возрастной инволюции тимуса у стареющих крыс путем трансгпантации тимусной ткани, при этом наиболее эффективными были трасплантанты тимуса зимнеспящих сусликов, находящихся на стадии сезонной регенерации тимусной ткани

2 Показаны сезонные изменения активности макрофагов и лимфоцитов у зимнеспящих сусликов Секреторная активность макрофагов подвергалась заметным сезонным колебаниям, в то время как активность лимфоцитов почти не зависела от сезона

3 Введение тимусного гормона тимопентина в нормальных условиях оказывало иммуностимулирующее действие увеличивалась продукция цитокинов, БТШ70 и оксида аюта в клетках мышей Вероятным механизмом действия гормона является обнаруженная астивация сигнального пути ОТ-кВ, наиболее заметная на стадии фосфорилирования этого транскрипционного фактора

4 Введение тимулина вызывало в нормальных условиях некоторое угнетение продукции провоспалительных цитокинов и стимуляцию продукции антивоспалительного цитокина ИЛ-10

5 В условиях острого токсического стресса тимулин существенно снижал провоспалительный цитокиновый ответ, а также продукцию белка теплового шока БТШ70 Это коррелировало с уменьшением активности каскада ЬТ-кВ, выразившемся в уменьшении фосфорилирования э того белка и увеличении продукции белка-супрессора 1кВ-а

6 Получены доказательства роли факторов, секретируемых тимусом, в регуляции активности клеток периферической иммунной системы Один из двух исследованных гормонов -тимопентин, активируя сигнальный каскад №-кВ, оказывал более значительное иммуностимулирующее действие в сравнении с тимулином

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи

1) Новоселова ЕГ, OB Глушкова, ДА Черенков, СБ Парфенюк, ТВ Новоселова, С.М Лунин, М О Хренов, И В Гужова, Б А Маргулис, Е Е Фесенко Продукция белков теплового шока, цитокинов и оксида азота при токсическом стрессе Биохимия, 2006,71, вып 4,471-480

2) Новоселова Е Г , OB Глушкова, С.М. Лунин, ТВ Новоселова, МО Хренов, Д А Черенков, Е Е Фесенко Ангиоксиданты и токсический стресс участие белков теплового шока, цитокинов и оксида азота Открытое образование, 2006, № 3,408-410

3) Лунин С М., Роль тимусного гормона тимопентина в регуляции активности иммунокомпетентных клеток и компенсации иммунодепрессивных состояний, В Сб «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», 2007, Судак, стр 7374

4) Новоселова ЕГ, OB Глушкова, МО Хренов, ТВ Новоселова, СМ. Лунин, ДА Черенков, Е Е Фесенко Гелданамицин снижает уровень стрессового ответа, индуцированного низкоинтенсивным лазерным излучением Доклады Академии наук, 2007, том 413, № 4, 564-567

5) Новоселова ЕГ, OB Глушкова, МО Хренов, ДА Черенков, С.М. Лунин, ТВ Новоселова, В М Чудновский, В И Юсупов, Е Е Фесенко Защитный эффект низкоинтенсивного лазерного излучения в условиях острого токсического стресса Биофизика, 2007, 52, вып 1,137-140

6) Глушкова О В, Новоселова Е Г. Черенков Д В, Новоселова Т В, Лунин С.М, Хренов М О, Парфенюк С Б, Фесенко Е Е Влияние электромагнитных излучений сверхвысоких частот на состояние иммунной системы мышей при эндотоксическом шоке Биофизика, 2007, 52, 5,938-946

7) Новоселова ЕГ, Лунин СМ, Хренов МО, Черенков ДА, Новоселова ТВ, Лысенко ЕА Фесенко ЕЕ Влияние тимопентина на продукцию цитокинов, белков теплового шока и сигнальных белков каскада NF-кВ Известия Академии наук Серия биологическая (Принято в печать)

Тезисы

8) Novoselova Т V, Chrenov М О, Lunin S М, Cherenkov D А, Glushkova О V, Novoselova Е G Comparative study of immune cell function in acute and chronic models of toxic stress VIII World Congress, Intern Society for adaptive medicine (ISAM), Moscow, 2006, p 121-122

9) Куликов А В, E Г Новоселова, Л В Архипова, Г Н Смирнова, О В Глушкова, Д А Черенков, С.М. Лунин, К А Клечкин, П А Куликова, Г Т Сухих Способы торможения возрастной инволюции тимуса у стареющих животных VII Международный симпозиум «Биологические механизмы старения» Харьков, Украина, 2006,48-49

10) Novoselova Т V, Chrenov М О, Lunin S.M., Cherenkov D А, Glushkova О V, Novoselova Е G Comparative study of immune cell function m acute and chronic models of toxic stress VIII World Congress, Intern Society for adaptive medicine (ISAM), Moscow, 2006, p 121-122

11) Новоселова T В, Глушкова О В , Черенков Д А, Лунин С.М , Хренов М О , Новоселова Е Г Роль цитокинов и оксида азота в развитии стресса, индуцированного эндотоксином Окисление, окислительный стресс, и антиоксиданты Всероссийская конференция молодых ученых и 2 школа им Академика Н М Эммануэля М Изд-во РУДН, 2006 С 182-184

12) Lunin S.M., Novoselova Т V, Khrenov М О, Novoselova Е G Endocrine regulation of inflammation thymic hormone influence on cytokine profile 8th John Humphrey advanced summer programme m immunology, Moscow, 2007, p 34

13) Лунин С M. Влияние пептидов тимуса на регуляцию острого воспалительного процесса у животных 11 -я Пущинская международная конференция молодых ученых, 2007, стр 73-74

14) Новоселова ЕГ, С.М. Лунин, ТВ Новоселова, МО Хренов, ДМ Черенков Исследование молекулярных механизмов функционирования защитных систем клетки при системном воспалительном синдроме и сепсисе у мышей Поиск новых направлений лечения Тезисы конференции «Фундаментальные науки - медицине», Москва, 2007,28-29

Подписано в печать 14 01 2008 г Печать трафаретная

Заказ № 4 Тираж 75 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56, (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лунин, Сергей Михайлович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Тимус.

1.1.2 Внутритимусная дифференцировка Т-лимфоцитов.

1.1.3 Взаимодействие тимоцитов с окружением.

1.1.4 Эндокринная функция тимуса. Тимусные гормоны.

1.1.4.1 Функции основных тимусных гормонов.

1.1.4.2 Интеграция тимуса в нейроэндокринную систему организма.

1.1.4.3 Влияние тимусных гормонов на клетки периферической иммунной системы.

1.1.4.4 Некоторые сведения о механизмах действия тимусных гормонов.

1.1.5 Инволюция тимуса и возрастные изменения состояния иммунной системы.

1.1.5.1 Трансплантация как способ компенсации инволюции тимуса.!

1.2 Особенности функционирования иммунной и нейроэндокринной систем у зимнеспящих грызунов.

1.2.1 Иммунная система при гибернации.

1.2.1.1 Сезонная инволюция тимуса у гибернантов.

1.2.1.2 Гормональный контроль инволюции тимуса.

1.2.1.3 Состояние иммунокомпетентных клеток при гибернации

1.3 Роль иммунной системы и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси в регуляции воспалительного процесса.

1.3.1 Феномен активации иммунокомпетентных клеток.

1.3.2 Гипоталамо-гипофизарно-адреналовая ось и ее роль в регуляции воспалительного ответа.

1.3.2.1 Участие иммунной системы в формировании стрессового ответа.

1.3.3 Молекулярные механизмы активации клеток. Сигнальные пути

1.3.3.1 Сигнальный каскад ЫБ-кВ.

1.3.3.2 Сигнальный каскад 8АРК/ЖК.

1.3.3.3 Биологическое значение и связь каскадов ИР-кВ и ЗАРКЛЖ.

1.3.3.4 Влияние гормонов на сигнальные каскады.

1.3.4'БТШ - защитная система клеток.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1 Животные и модели.

2.2. Культура клеток и измерение их функциональной активности.

2.3. Статистический анализ.

Глава 3. Результаты и их обсуждение.

3.1 Торможение возрастной инволюции тимуса путем использования алло- и ксенотрансплантации.

3.2 Сезонные изменения активности иммунокомпетентных клеток у зимнеспящих.

3.3 Ответ клеток иммунной системы на введение тимусных пептидов в нормальных условиях и при остром токсическом стрессе.

3.4 Исследование защитных свойств тимулина и тимопентина в условиях хронической интоксикации.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние пептидов тимуса на иммунный статус грызунов в норме и при воспалениях, индуцированных бактериальным токсином"

Актуальность проблемы. Тимус, являющийся центральным органом иммунной системы, функционально связан с нейроэндокринной системой и иногда рассматривается как компонент гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси. Основой концепции о тесной связи между нейроэндокринной и иммунной системами является способность иммунных клеток формировать ответ на гормоны или на медиаторы, секретируемые, например, нервными клетками (Акмаев, 1996). Несмотря на важную роль тимуса, у большинства млекопитающих с возрастом происходит инволюция этого органа (Bodey et al, 1997). Биологическое значение возрастной инволюции тимуса пока остается неизвестным, но, кажется логичным, что, не в последнюю очередь, именно с инволюцией тимуса связаны возрастные изменения, проявляющиеся в виде недостаточной активности иммунных клеток. В связи с этим, актуальным представляется вопрос о возможности- замедления возрастной инволюции тимуса, например, путем трансплантации тканей и органов иммунной системы.

В этой области уже имеются некоторые достижения. Например, трансплантация ткани эпифиза молодых крыс в тимус старых животных приводит к восстановлению структуры тимуса, свойственной молодым животным и к значительному увеличению продолжительности жизни (Maestroni et al., 1988; Pierpaoli, Regelson, 1994).

В животном мире есть несколько видов млекопитающих, для которых характерна ежегодная сезонная инволюция и регенерация тимуса. Сезонные структурные изменения в тимусе были описаны у двух видов сусликов Cit.erythrogenys, Cit.citellus и сурка Marmota топах (Galletti, Cavalleri, 1972; Shivatcheva, Alexandrov, 1986; Shivatcheva, Hadjioloff, 1987). Тимус всех этих животных перед вхождением в спячку претерпевает почти полную инволюцию, а весной полностью восстанавливается. Интересно, что признаки возрастной инволюции тимуса у сусликов пока обнаружить не удалось.

Изучение коррелятивной связи между состоянием тимуса и активностью клеток периферической иммунной системы кажется перспективным в плане выяснения роли этого центрального органа иммунной системы в регуляции активности врожденного и адаптивного иммунитета. В этом смысле зимнеспящие животные с их ежегодным циклом инволюция/регенерация тимуса являются интересной природной моделью. Полагаем, что изучение возможности компенсации возрастной инволюции тимуса путем трансплантации стареющим животным ткани тимуса суслика, находящегося на стадии ежегодной регенерации этой железы, является перспективным направлением.

В качестве регуляторов активности периферических клеток иммунной системы целесообразно рассматривать не только тимусную ткань, но и продукты, вырабатываемые эпителиальными клетками тимуса, известные как тимусные гормоны. Влияния гормонов тимуса-на периферические иммунные клетки-' изучены недостаточно, а их исследование, учитывая очень тесные связи тимуса с системой стрессового ответа и другими' гормональными( системами, может быть весьма перспективным. Принимая во внимание высокую биологическую активность тимусных гормонов, целесообразно исследовать их влияние на иммунный статус организма не только в нормальных условиях, но и при патологиях, сопряженных с весьма стойкими формами иммунодефицита, таких, например, как острые и хронические воспаления.

Цель и основные задачи: Целью данной работы является.- изучение механизмов регуляции иммунных функций факторами тимусной природы и поиск способов компенсации' патологий, связанных с нарушениями работы иммунной системы. В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:

2 Изучение состояния иммунной системы зимнеспящих (по исследованию секреции фактора некроза опухолей лимфоцитами и макрофагами, а также уровня пролиферации Т лимфоцитов) в разные периоды их жизненного цикла, характеризующиеся разным состоянием регуляторных систем и, в частности, тимуса. Кроме оценки иммунного статуса зимнеспящих сусликов в течение годового цикла ставится задача исследования роли периферических клеток иммунной системы сусликов в физиологических процессах, сопровождающих кратковременные пробуждения животных в течение глубокой зимней спячки.

3 Изучение влияния двух гормонов тимуса - тимулина и тимопентина — на секреторную активность иммунокомпетентных клеток (лимфоцитов и макрофагов) и на количество клеток в тимусе мышей. Исследование молекулярно-клеточных механизмов регуляторной роли тимусных гормонов путем оценки продукции цитокинов, оксида азота, защитных белков - БТШ70 и БТШ90, а также белков сигнального каскада М^кВ в иммунных клетках.

4 Изучение защитных свойств тимусных гормонов на моделях острого и хронического воспалений, индуцированных бактериальным токсином.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Лунин, Сергей Михайлович

Выводы

1 Показано торможение возрастной инволюции тимуса у стареющих крыс путем трансплантации тимусной ткани, при этом наиболее эффективными были трасплантанты тимуса зимнеспящих сусликов, находящихся на стадии сезонной регенерации тимусной ткани.

2 Показаны сезонные изменения активности макрофагов и лимфоцитов у зимнеспящих сусликов. Секреторная активность макрофагов подвергалась заметным сезонным колебаниям, в то время как активность! лимфоцитов почти не зависела от сезона.

3 Введение тимусного гормона тимопентина в нормальных условиях оказывало иммуностимулирующее действие: увеличивалась продукция цитокинов, БТШ70 и оксида азота в клетках мышей. Вероятным механизмом действия гормона является обнаруженная активация сигнального пути ЫБ-кВ, наиболее заметная на стадии фосфорилирования этого транскрипционного фактора.

4 Введение тимулина вызывало в нормальных условиях некоторое угнетение продукции провоспалительных цитокинов и стимуляцию продукции антивоспалительного цитокина ИЛ-10.

5 В условиях острого токсического стресса тимулин существенно снижал провоспалительный цитокиновый ответ, а также продукцию белка теплового шока БТШ70. Это коррелировало с уменьшением активности каскада ЫР-кВ, выразившемся в уменьшении фосфорилирования этого белка и увеличении продукции белка-супрессора 1кВ-а.

6 Получены доказательства роли факторов, секретируемых тимусом, в регуляции активности клеток периферической иммунной системы. Один из двух исследованных гормонов - тимопентин, активируя сигнальный каскад МР-кВ, оказывал более значительное иммуностимулирующее действие в сравнении с тимулином.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лунин, Сергей Михайлович, Пущино

1. Алексеева Г.В., Юнкер В.М. Сезонные гистоструктурные изменения в тимусе краснощеких сусликов, Известия СО АН СССР 1977. 2:125-28.

2. Анисимова В.П., Роль морфофункциональных перестроек тимуса в обменно-эндокринных нарушениях организма, Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 1994. 39, 1. с.35.

3. Бибиков Д.И. Горные сурки Средней Азии и Казахстана. 1967, М., Наука, с. 198

4. Гриневич В.В., Поскребышева У.Ф., Савелов H.A. и др. Усп. физиол. наук, 1999, 30, 50-66.

5. Кемилева 3. Вилочковая железа. М. Медгиз 1984. 253 с

6. Колаева С.Г. 1979. Сезонные ритмы функционирования эндокринной системы, в кн.: Экологическая физиология животных, ч.1. JL,Наука 225-237. 439 с

7. Колпаков М.Г., Колаева С.Г., Шабурова Г.С. 1973. Сезонные ритмы функционирования эндокринной системы у зимоспящих. Успехи физиологических наук. 4: 52-68.

8. Ляшенко В. А., Дроженников В. А., Молотковская И. М. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток. -М., Медицина, 1988, с. 239.

9. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Белки стресса в эукариотической клетке., Цитология 2000. Т. 42. 4. С. 323-339.

10. Ресненко А.Б., Абрамова H.A., Мишарин A.B. Вест. мол. уч., 2002, 4, 16-22.

11. Тазулахова Э.Б., Паршина О.В., Ершов Ф.И. Иммунология 1994;3:28-31.

12. Хавинсон В.Х., Жуков В.В. Успехи соврем биол 1992, 112:4: 554-570

13. Чередеев А. Н. Характеристика и функциональные свойства субпопуляций лимфоцитов человека. -В кн. Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. М., 1984, т. 13, с. 108-133.

14. Чипенс Г.И., Полевая JI.K., Веретенникова Н.М. и др. Структура и функции низкомолекулярных пептидов. Рига 1980; 218

15. Adcock IM, Brown CR, Gelder CM, Shirasaki H, Peters MJ & Barnes PJ 1995 Effects of glucocorticoids on transcription factor activation in human peripheral blood mononuclear cells, American Journal of Physiology, 268 СЗЗ1-C338.

16. Adeghate E, Donath T, Transplantation of tissue grafts into the anterior eye chamber: a method to study intrinsic neurons, Brain Res Brain Res Protoc., 2000 Nov;6(l-2):33-9.

17. Adeghate E. Host-graft circulation and vascular morphology in pancreatic tissue transplants in rats. Anat Rec., 1998 Aug;251(4):448-59.

18. Adelstein S. J., Lyman C. P., O'Brien. Variations in the incorporation of thymidine into the DNA of some rodent species. Сотр. Biochem. Physiol., 1964, 12, 223-231.

19. Adler V, Polotskaya A, Wagner F, Kraft AS. Affinity-purified c-Jun amino-terminal protein kinase requires serine/threonine phosphorylation for activity. J Biol Chem. 1992 Aug 25;267(24): 17001-5.

20. Ahern Т., Kay J. E. Protein synthesis and ribosome activation during the early stages of phytohemaglutinin lymphocyte stimulation. -Exp. Cell. Res., 1975, v. 92, p. 513-515.

21. Aliprantis AO, Yang RB, Mark MR, Suggett S, Devaux B, Radolf JD, Klimpel GR, Godowski P, Zychlinsky A. Cell activation and apoptosis by bacterial lipoproteins through toll-like receptor-2. Science. 1999 Jul 30;285(5428):736-9

22. Aliprantis AO, Yang RB, Weiss DS, Godowski P, Zychlinsky A. The apoptotic signaling pathway activated by Toll-like receptor-2.EMBO J. 2000 Jul 3;19(13):3325-36.

23. Anderson G, Moore NC, Owen JJ, Jenkinson EJ Cellular interactions in thymocyte development. Annu Rev Immunol, 1996 14:73-99

24. Angioni S, Iori G, Cellini M, Sardelli S, Massolo F, Petraglia F, Genazzani AR Acute b-interferon or thymopentin administration increases plasma growth hormone and Cortisol levels in children. Acta Endocrinol (Copenh), 1992, 127:237-241

25. Arzt E The gpl30 cytokine family signaling in the pituitary gland: a paradigm for cytokine-neuroendocrine pathways. J Clin Invest, 2001, 108:1729-1733

26. Audhya T., Yoldstein Y. Methods in enzymology, ptH./Ed. by Y. Disabato, et al. Orlando 1985; 116: 5: 279-291.

27. Auernhammer CJ, Melmed S Leukemia-inhibitory factor-neuroimmune modulator of endocrine function. Endocr Rev 2000, 21:313-345

28. Azem A., Oppliger W., Lustig A. et al. The mitochondrial hsp70chaperone system, effect of adenine nucleotides, peptide substrate, and mGrpE on the oligomeric state of mhsp70., J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 20901-20906.

29. Bach JF, Dardenne M, Pleau JM, Bach MA Isolation biochemical characteristics and biological activity of a circulating thymic hormone in the mouse and in the human. Ann NY Acad Sci, 1975, 249:186-210

30. Baeuerle PA, Baltimore D. I kappa B: a specific inhibitor of the NF-kappa B transcription factor, Science, 1988 Oct 28;242(4878):540-6.

31. Bardos P, Bach JF Modulation of mouse natural killer cell activity by the serum thymic factor (FTS), 1982 Scand J Immunol 16: 321-325

32. Baxter M. A. The stimulation of superoxide anion in quinea-pig peritoneal macrophages and neytrophils by phorbol myristat acetate, opsonized symosan and IgG2-containing soluble immune complex. -Immunolog., 1983, v. 48, No 4, p. 657-667.

33. Beg AA, Baldwin AS Jr. The I kappa B proteins: multifunctional regulators of Rel/NF-kappa B transcription factors. Genes Dev., 1993, Nov;7(l l):2064-70.

34. Bellgrau D., Gold D., Selawry H.P., Moore J., Franzusoff A., Duke R. c. A role for CD95 ligand in preventing graft rejection, Nature, 1995, V.377 P.630-632.

35. Bene MC, Faure G, Bordigoni P, Olive D, Duheille J In vitro induction of monoclonal antibody-defined T cell markers in lymphocytes from immunodeficient children by synthetic serum thymic factor (FTS). Clin Exp Immunol, 1982, 48:423-428

36. Berke G. The binding and lysis of target cells by cytotoxic lymphocytes: molecular and cellular aspects. -Annu. Rev. Immunol., 1994, v. 12, p. 735-773.

37. Berke G. The CTL's kiss of death. -Cell, 1995, v. 81, p. 9-12.

38. Bernardini, R., A. Calogero, G. Mauceri & G. P. Chrousos. Rat hypothalamic corticotropin releasing hormone secretion in vitro is stimulated by interleukin-1 in an eicosanoid-dependent manner. Life Sci., 1990, 47: 1601-1607.

39. Bernardini, R., A. Chiarenza, A. E. Calogero, P. W. Gold & G. P. Chrousos. Arachidonic acid metabolites modulate rat hypothalamic corticotropin releasing hormone secretion in vitro. Neuroendocrinology, 1989, 50: 708-715.

40. Bjorklund A, Stenevi U. Reconstruction of the nigrostriatal dopamine pathway by intracerebral nigral transplants. Brain Res. 1979 Nov 30;177(3):555-60.

41. Bodey B, Bodey B Jr, Siegel SE, Kaiser HE. Involution of the mammalian thymus, one of the leading regulators of aging. In Vivo. 1997 Sep-0ct;ll(5):421-40.

42. Bodey B, Bodey B Jr, Siegel SE, Kaiser HE. The role of the reticulo-epithelial (RE) cell network in the immuno-neuroendocrine regulation of intrathymic lymphopoiesis, Anticancer Res. 2000 May-Jun;20 (3A): 1871-88.

43. Boumpas, D. T., G. P. Chrousos, R. L. Wilder, T. R. Cupps & J. E. Balow. Glucocorticoid therapy of immune-related diseases: Basic and clinical correlates. Ann. Inter. Med. 1993, 119: 1198-1208

44. Braga M, Gianotti L, Gentilini O, Fortis C, Consogno G, Di Carlo V. Thymopentin modulates Thl and Th2 cytokine response and host survival in experimental injury. J Surg Res. 1996 May;62(2):197-200

45. Bromberg Y., Pick E. Activation of macrophage adenylate cyclase by stimylants of the oxidative burst and by arachidonic acid -two distinct mechanisms. -Cell Immunol., 1981, v. 61, No 1, p. 90-103.

46. Brown C.R., Martin R.L., Hansen W.J., Beckman R.P., Welch W.J. The constitutive and stress-inducible forms of hsp70 exhibit functional similarities and interact with one another in an ATP-dependent facion., J. Cell. Biol. 1993. V. 120 P. 1101-1112.

47. Burrnett. M. Aging and immunologikal surveillance. Triangle, 1973, 12(4):159-162

48. Chandratilleke D., Marsh J.A., The effect of thymulin on avian IL-2 receptor expression, Int J Immunopharmacol. 2000, 22(11), 88796.

49. Chelvarajan RL, Collins SM, Van Willigen JM, Bondada S, The unresponsiveness of aged mice to polysaccharide antigens is a result of a defect in macrophage function. J Leukoc Biol., 2005 Apr;77(4):503-12.

50. Chen S., Smith D.F., Hop as an adaptor protein in the Hsp70 and Hsp90 mashinery., J. Biol. Chem. 1998. V.273. P. 35194-35200.

51. Chen ZJ, Parent L, Maniatis T. Site-specific phosphorylation of IkappaBalpha by a novel ubiquitination-dependent protein kinase activity. Cell. 1996 Mar 22;84(6):853-62

52. Chesnokova V, Melmed S Minireview: neuro-immuno-endocrine modulation of the HPA axis by gpl30 signaling molecules. Endocrinology, 2002, 143: 1571-1574

53. Chikanza IC, Petrou P, ChrousosG Perturbations of arginine vasopressin secretion during inflammatory stress. Pathophysiologic implications. Ann NY Acad Sci., 2000, 917:825-834

54. Choi C., Benveniste E.N. Fas ligand/Fas system in the brain: regulator of immune and apoptotic responses, Brain Res. Rev., 2004, V.44. N1. P.65-81.

55. Chrousos G. P., Stressors, Stress, and Neuroendocrine Integration of the Adaptive Response: The 1997 Hans Selye Memorial Lecture, Annals of the New York Academy of Sciences 1998, 851:311-335

56. Chrousos, G. P. & P. W. Gold. The concepts of stress and stress system disorders: Overview of physical and behavioral homeostasis. JAMA, 1992, 267: 1244-1252.

57. Chrousos, G. P. The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-mediated inflammation. N. Engl. J. Med. 1995, 332: 13511362.

58. Craig EA, Weissman JS, Horwich AL. Heat shock proteins and molecular chaperones: mediators of protein conformation and turnover in the cell. Cell., 1994, Aug 12;78(3):365-72.

59. Cronin L., Cook D.J., Carlet J. et al. Corticosteroid treatment for sepsis: a critical appraisal and meta-analysis of the literature. Grit Care Med, 1995,23:1430-9.

60. Daneva T, Spinedi E, Hadid R, Gaillard RC Impaired hypothalamo-pituitary-adrenal axis function in Swiss nude athymic mice. Neuroendocrinology, 1995, 62:79-86

61. Dardenne M., Nabarra B., Lefrancier P., Pleau M., Bach J.F., Contribution of zinc and other metals to the biological activity of serum thymic factor (FTS), Proc Natl Acad Sci USA, 1982, 79 5370-5375

62. De Bosscher K, Leinhard-Schmitz M, Vanden Berghe W, Plaisance S & Fiers W Glucocorticoid-mediated repression of nuclearfactor-B-dependent transcription involves direct interference with transactivation. PNAS, 1997, 94 13504-13509.

63. De Smaele E, Zazzeroni F, Papa S, Nguyen DU, Jin R, Jones J, Cong R, Franzoso G. Induction of gadd45beta by NF-kappaB downregulates pro-apoptotic JNK signalling. Nature, 2001, Nov 15;414(6861):308-13.

64. Deavers D. R., Musacchia X. Y.,. Water metabolism and renal function during hibernation and hypothermia. Fed. Proc., 1980, 39, 2969-2973

65. Dérijard B, Hibi M, Wu IH, Barrett T, Su B, Deng T, Karin M, Davis RJ. JNK1 : a protein kinase stimulated by UV light and Ha-Ras that binds and phosphorylates the c-Jun activation domain. Cell., 1994 Mar 25;76(6): 1025-37.

66. Drysdale B-E., Zacharchuk C. M., Shin H. S. Mechanism of macrophage mediated cytotoxity: production of a soluble cytotoxic factor. -J. Immunol., 1983, v. 131, No 5, p. 2362-2367.

67. Duncan D. D., Lawrence D. A. T cells and cloned and transformed T cells lines to assess immune function . -Methods in Immunotoxicology., 1995, v. 1, p. 483-505

68. Edelman DA, Jiang Y, Tyburski JG, Wilson RF, Steffes CP. Lipopolysaccharide up-regulates heat shock protein expression in rat lung pericytes, J Surg Res. 2007, Jun 15;140(2):171-6.

69. Elenkov, I. J., D.A. Papanicolaou, R. L. Wilder & G. P. Chrousos. Modulatory effects of glucocorticoid and catecholamines on human interleukin-12 and interleukin-10 production: Clinical implications. Proc. Assn. Am. Phys., 1996,108 374-381

70. Fabien N, Auger C, Monier JC Immunolocalization of thymosin a 1, thymopoietin and thymulin in mouse thymic epithelial cells at different stages of culture: a light and electron microscopic study. Immunology, 1988, 63:721-727

71. Fabris N, Mocchegiani E Endocrine control of thymic serum factor production in young adult and old mice. Cell Immunol, 1985, 91:325-335

72. Fabris N, Mocchegiani E, Mariotti S, Pacini F, Pinchera A Thyroid function modulates thymic endocrine activity., J Clin Endocrinol Metab. 1986 Mar; 62(3):474-8.

73. Faure G, Bene MC, Tamisier JN, Gaucher A, Duheille J Thymulin (FTS-Zn) induced in vitro modulation of T cell subsetsmarkers on lymphocytes from rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus patients. Int J Immunopharmacol, 1984, 6:381-388

74. Feder M.E., Hofmann G.E. Evolutionary and ecological physiology of heat shock proteins and heat shock response: a comprehensive bibliography, http://www.annurev.org/sup/material.htm

75. Ferotti M., Toddei F., Mirabelli F., Vairetti M., Belomo G., McConkey D. and Orrenius S. Calcium-dependent DNA fragmentation in human synovial cells exposed to cold shock, FEBS Lett., 1990, V.259. P. 331-334.

76. Fiers W. Tumor necrosis factors, Humoral factors / Eds Sim E. Oxford New York Tokyo. IRL Press, 1993. P. 66-119.

77. Fiers W., Bayaret P., Brouckaert E. et al. TNF-mediated cytotoxity: mechanism and regulation. -Cell, 1992, v. 74, p. 845-848.

78. Finco TS, Beg AA, Baldwin AS Jr. Inducible phosphorylation of I kappa B alpha is not sufficient for its dissociation from NF-kappa B and is inhibited by protease inhibitors.Proc Natl Acad Sci USA, 1994, Dec 6;91(25): 11884-8.

79. Fink A.L. Chaperone-mediated protein folding., Physiol. Rev. 1999. V. 79. P. 425-449.

80. Flaherty K.M., Deluca-Flaherty C., McKay D.B. Three-dimentional structure of the ATP-ase fragment of a 70 K heat-shock cognate protein., Nature, 1990, 346: 623-628.

81. Freedman M. H. Early biochemical events in lymphocyte activation . I Investigations on the nature and significance of early calcium fluxes observed in mitogen-induced T and B lymphocytes. -Cell Immunol., 1979, v. 44, p. 290-313.

82. Frink R., Young R.A., Krupp P.P. Seasonal changes in ultrastructure of the thyrotroph in the woodchuck (Marmota monax) adenohypophysis. J.Anat. 1980, 130: 499-505.

83. Gabai VL, Kabakov AE. Rise in heat-shock protein level confers tolerance to energy deprivation, FEBS Lett. 1993, Aug 2;327(3):247-50

84. Galletti G., Cavalleri A. The thymus of Marmots:Spontaneous natural seasonal thymectomy? Acta.Anat., 1972, 83: 593-605.

85. Gastinel LN, Pleau JM, Goldstein G, Bach JF, Interaction of thymopoietin peptides with the specific receptor of facteur thymique serique (FTS), Thymus, 1983, Mar;5(2):78-87

86. Gause W.C., Lu Pin. Cellular sources and regulation of cytokine production. In: Cytokine regulation of humoral immunity. Cliford M. Snapper ed. p. 6-7. John Willey and SonS. N.-Y, 1996.

87. Ghosh S., Karin M Missing pieces in the NF-kappaB puzzle., Cell, 2002, 109, Suppl., S81-S96

88. Giovambattista A, Chisari AN, Gaillard RC, Spinedi E 2000 Modulatory role of the epinergic system in the neuroendocrine-immune system function. Neuroimmunomodulation 8:98-106

89. Goldstein A.L., Low T.L.K.Proc Natl Acad Sci USA 1977; 74: 2: 725-729.

90. Goldstein A.L., White A. Contemp Topics Immunobiol. New York, London 1973; 2: 399-450.

91. Goldstein A.L., Yuha A., Proc Natl Acad Sci 1972; 69: 1800.

92. Goldstein Y., Lau C.Y., J Supramol Struct 1980; 14: 3: 397-403.

93. Goldstein Y., Manarano A., Ann NY Acad Sci 1971; 183: 2: 230.

94. Goldstein, G., Scheid, M. P., Boyse, E. A., Schlesinger, D. H., and Van Wauwe, J. A synthetic pentapeptide with biological activity characteristic of the thymic hormone thymopoietin. Science, 1979, 204, 1309-1310

95. Gonser S, Weber E, Folkers, Peptides and polypeptides as modulators of the immune response: thymopentin--an example with unknown mode of action, Pharm Acta Helv., 1999 Jun;73(6):265-73.

96. Goodman M. G., Chenaveth D. E., Weigle W. O. Induction of interleukin 1 secretion and enhancement of humoral immunity by binding- of human C5a to macrophage surface C5a receptors. J. Exp. Med., 1982, v. 156, No 3, p. 912-917.

97. Goya RG, Sosa YE, Brown OA, Dardenne M In vitro studies on the thymus-pituitary axis in young and old rats. Ann NY Acad Sci, 1994, 741:108-114

98. Grenert J. P., Sullivan W.P., Fadden P., et al. The amino-terminal domain of heat shock protein 90 (HSP90) that binds geldanamycin is an ATP/ADP switch domain that regulates HSP90 conformation., J: Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 23843-23850.

99. Griffit T.S, Brunner T., Fletcher S.M., Green .R., Fergusson T.A. Fas ligand induced apoptosis as a mechanism of immune privilege, Science. 1995. V.270. P.l 189-1192.

100. Grinevich V, Ma XM, Herman JP, Jezova D, Akmayev I, Aguilera G. Effect of repeated lipopolysaccharide administration- on tissue cytokine expression and hypothalamic-pituitary-adrenal axis activity in rats, J Neuroendocrinol. 2001 Aug; 13(8):711-23.

101. Guerin,S., Maci,B., Belhacene, N.,Rossi, B.,Peyron, J.-F., Auberger,P. CD 10 (Endopeptidase24.11) is a thymic peptide-degrading enzyme possibly involved in the regulation of thymocyte function. Cell. Immunol. 1997, 175, 85-91

102. Gupta S, Barrett T, Whitmarsh AJ, Cavanagh J, Sluss HK, Derijard B, Davis RJ. Selective interaction of JNK protein kinase isoforms with transcription factors. EMBO J. 1996, Jun 3;15(11):2760-70

103. Gupta S, Campbell D, Derijard B, Davis RJ. Transcription factor ATF2 regulation by the JNK signal transduction pathway. Science. 1995 Jan 20;267(5196):389-93.

104. Hadley AJ, Rantle CM, Buckinham JC Thymulin stimulates corticotropin release and cyclic nucleotide formation in the rat anterior pituitary gland. Neuroimmunomodulation, 1997, 4:62-69

105. Han L., Lin H., Head M., et al. Application of magnetic fild induced heat shock protein 70 for presurgical cytoprotection., J. Cell. Biochem. 1998. V. 71. P. 577-583.

106. Hannibal J, Jessop DS, Fahrenkrug J, Harbuz MS, Larsen PJ PACAP gene expression in neurons of the rat hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis is induced by endotoxin and interleukin-1. Neuroendocrinology, 1999, 70: 73-82

107. Haritos H.A., Yoodal Y.J., Horecker B.L. Proc Natl Acad Sci USA, 1984; 81: 4: 1008-1011.

108. Hartl F.U., Hayer-Hartl M. Molecular chaperones in the cytosol: from nascet chain to folded protein., Science. 2002. V. 295. P. 18521858.

109. Hibi M, Lin A, Smeal T, Minden A, Karin M. Identification of an oncoprotein- and UV-responsive protein kinase that binds andpotentiates the c-Jun activation domain. Genes Dev. 19931. Nov;7(l l):2135-48

110. Higley H.R., Rowden Y. Thymic hormones and lymphokines: basic chemistry and clinical applications. New York; London 1984; 135.

111. Hinshaw L.B., Beller-Todd B.K., Archer L.T. Current management of the septic shock patient: experimental basis for treatment. Circ Shock 1982, 9:543-53.

112. Hoffer B, Seiger A, Ljungberg T, Olson L. Electrophysiological and cytological studies of brain homograñs in the anterior chamber of the eye: maturation of cerebellar cortex in oculo. Brain Res. 1974 Oct 18;79(2): 165-84

113. Hoffmann JA, Reichhart JM. Drosophila innate immunity: an evolutionary perspective. Nat Immunol, 2002, Feb;3(2): 121-6.

114. Hoos A., Levey D.L. Vaccination with heat shock protein-peptide complexes: from basic science to clinical applications., Expert Rev Vaccines. 2003. V. 2(3). P. 369-379.

115. House R. V., Thomas P. T. In vitro induction of cytotoxic T lymphocytes. Methods in Immnol., 1995, v. 1, p. 159-171.

116. Jaattela M, Wissing D, Bauer PA, Li GC. Major heat shock protein hsp70 protects tumor cells from tumor necrosis factor cytotoxicity, EMBO J. 1992 Oct;l 1(10):3507-12

117. Jaattela M, Wissing D. Heat-shock proteins protect cells from monocyte cytotoxicity: possible mechanism of self-protection. J Exp Med. 1993 Jan 1 ; 177(1):231-6

118. Jaattela M. Heat shock proteins as sellular lifeguards., Ann. Med. 1999. V. 31. P. 261-271.

119. Janeway CA Jr. Approaching the asymptote? Evolution and revolution in immunology.Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1989;54 Pt 1:1-13.

120. Javelaud D, Besancon F. NF-kappa B activation results in rapid inactivation of JNK in TNF alpha-treated Ewing sarcoma cells: a mechanism for the anti-apoptotic effect of NF-kappa B. Oncogene. 2001 Jul 19;20(32):4365-72.

121. Kaiserlian D, Bardos P, Bach JF In vitro modulation of mouse natural killer (NK) cell activity by the serum thymic factor (FTS). Cell Immunol, 1983, 76:232-242

122. Kanda, H., Miura, M., Regulatory roles of JNK in programmed cell death., 2004, J.Biochem., 136, 1-6

123. Kato K., Hasegawa K., Goto S., Inaguma Y. Dissociation as a result of phoshporylation of an aggregated form of the small stress protein, hsp27., J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 11274-11278.

124. Kim CH, Pelus LM, White JR, Broxmeyer HE Differential chemotactic behavior of development T cells in response to thymic chemokines. Blood, 1998, 91:4434-4443"

125. Kolaeva S. O., Kramarova L. I., Iljasova E. N., Iljasov F. E. The kinetics and metabolism of the cells of hibernating animals during hibernation. Int. Rev. Cytol., 1980, 66, 147-170

126. Krutzik SR, Sieling PA, Modlin RL. The role of Toll-like receptors in host defense against microbial infection. Curr Opin Immunol. 2001 Feb;13(l):104-8.

127. Kumaraguru U., Gierynska M, Norman S., Bruce B.D., and Rouse B.T., J. Virol. 2002 V. 76. 136-141.

128. Kyriakis JM, Banerjee P, Nikolakaki E, Dai T, Rubie EA, Ahmad MF, Avruch J, Woodgett JR. The stress-activated protein kinase subfamily of c-Jun kinases .Nature. 1994 May 12;369(6476):156-60.

129. Lannes Vieira J, Chammas R, Villa Verde DMS, Vannier dos Santos MA, de Mello-Coelho V, Souza SJ, Brentani RR, Savino W Thymic epithelial cells express laminin receptors that may modulate interactions with thymocytes. Int Immunol, 1993, 5:1421-1430

130. Laster S. M., Wood J. C., Gooding L. R. Tumor necrosis factor can induce both apoptotic and necrotic forms of cell lysis. -J. Immunol., 1988, v. 141. p. 2629-3634.

131. Le PT, Singer KH Human thymic epithelial cells: adhesion molecules and cytokine production. Int J Clin Lab Res, 1993, 23:56-60

132. Le PT, Tuck DT, Dinarello CA, Haynes BF, Singer KH Human thymic epithelial cells produce HJI-1. J Immunol, 1987, 138:2520-2526

133. Lindquist S. Craig E.A. The heat shock proteins. Annu. Rev. Genet. 1988. V. 22. P. 631-677.

134. Lindquist S. Craig E.A. The heat shock proteins. Annu. Rev. Genet. 1988. V. 22. P. 631-677

135. Lindvall O. Cell transplantation: a future therapy for Parkinson's disease? Neurologia. 1994 Mar;9(3): 101-7.

136. Liu R.H., Hotchkiss J.H. Potential genotoxicity of chronically elevated nitric oxide: a review, Mutat. Res. 1995. V. 339. P. 73-89.

137. Malyshev IYu, Malugin AV, Golubeva LYu, Zenina TA, Manukhina EB, Mikoyan VD, Vanin AF. Nitric oxide donor inducesV

138. HSP70 accumulation in the heart and in cultured cells. FEBS Lett. 1996 Aug 5;391(l-2):21-3.

139. Maniero GD, Ground squirrel splenic macrophages bind lipopolysaccharide over a wide range of temperatures at all phases of their annual hibernation cycle. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 2005 Sep 21

140. Mastorakos, G., G. P. Chrousos & J. Weber. Recombinant • interleukin-6 activates the hypothalamic-pituitary-adrenal axis inhumans. J. Clin. Endocrinol. Metab., 1993, 27: 1690-1694.

141. Matsumoto T, Nakano M Non-specific stimulation of antibacterial resistance by a synthetic thymic factor (FTS) in mice. Microbiol Immunol, 1980, 24:1185-1197

142. Matsumoto T, Shibata M Activation of polyclonal antibody responses by a synthetic serum thymic factor (FTS) in CBA/N mice. Immunology, 1982, 45:293-301

143. Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Janeway CA Jr. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature, 1997, Jul 24;388(6640):394-7

144. Menzaghi F, Heinrichs SC, Vargas-Cortes M, Goldstein G, Koob GF IRI-514, a synthetic peptide analogue of thymopentin, reduces the behavioral response to social stress in rats. Physiol Behav, 1996, 60:397-^401

145. Milani V., Noessner E., Ghose S., Kuppner M., Ahrens B., Schamer A., Gastpar R., Issels R.D. Heat shock protein 70: role in antigen presentation and immune stimulation., Int. J. Hyperthermia. 2002. V. 18(6). P. 563-575.

146. Mizutani M, El-Fotoh M, Mori M, Ono K, Doi K, Awaya A, Matsumoto Y, Matsumoto Y, Onodera T In vivo administration of serum thymic factor (FTS) prevents EMC-D virus induced diabetes and myocarditis in BALB/cAJcl mice. Arch Virol, 1996, 141:73-83

147. Mocchegiani E, Amadio L, FabrisN Neuroendocrine-thymus interactions. I. In vitro modulation of thymic factor secretion by thyroid hormones. J Endocrinol Invest, 1990, 13:139-147

148. Mocchegiani E, Paolucci P, Balsamo A, Cacciari E, Fabris N Influence of growth hormone on thymic endocrine activity in humans. HormRes, 1990, 33:248-255

149. Mogensen TH, Paludan SR. Virus-cell interactions: impact on cytokine production, immune evasion and tumor growth. Eur Cytokine Netw. 2001 Jul-Sep;12(3):382-90.

150. Morimoto R.I. Tissieres A., Georgopoulos C. (Eds). The biology of heat shock proteins and molecular chaperones. Cold Spring Harbor Lab. Press. 1994. 610 p.

151. Muchlinski A., Ho F.J., Chew R., Yamada T. The concentration of four neuropeptides in various brain areas of sammer active and hibernating spermophilus lateralis. Comp. Biochem Physiol, 1983, 74(1): 185-189.

152. Muegge K, Vila MP, Durum SD Interleukin-7: a cofactor for V (D) J rearrangement of the T cell receptor b gene. Science, 1993, 261: 93-95

153. Muzio M, Ni J, Feng P, Dixit VM. IRAK (Pelle) family member IRAK-2 and MyD88 as proximal mediators of IL-1 signaling.Science. 1997 Nov 28;278(5343): 1612-5.

154. Muzzioli M, Mocchegiani E, Bressani N, Bevilacqua P, Fabris N In vitro restoration by thymulin of NK activity of cells from old mice. Int J Immunopharmacol, 1992, 14:57-61

155. Nelson R.A. Protein and fat metabolism in hibernating bears. Fed. Proc, 1980, 39, 2955-2958.

156. Nonoyama S, Nakayama M, Shiohara T, Yata J Only dull CD31 thymocytes bind to thymic epithelial cells. The binding is elicited by both CD2/LFA-3 and LFA-l/ICAM-1 interactions. Eur J Immunol 1989, 19:1631-1635

157. Nossal GJ Negative selection of lymphocytes. Cell, 1994, 76:229-239

158. Obermann W.M., Sondermann H., Russo A.A. et al. In vivo function of Hsp90 is dependent of ATP binding and ATP hydrolysis., J. Cell. Biol. 1998. V. 143. P. 901-910.

159. Okamoto M, Morishita M, Setoguchi C, Nakata K Restorative effect of short term administration of thymulin on thymus dependent antibody production in restraint-stressed mice. Int J Immunopharmacol 1993, 15:757-762

160. Olanow CW, Freeman TB, Kordower JH. Neural transplantation as a therapy for Parkinson's disease. Adv Neurol. 1997;74:249-69.

161. Papa S., Zazzeroni, F., Pham, C.G., Bubici, C., Franzoso, G., Linking JNK signaling to NF-kB: a key to survival, J. of Cell Science 2004, 117,5197-5208

162. Papanicolaou, D. A., R. L. Wilder, S. C. Manolagas & Chrousos G. P. The patho-physiologic roles of interleukin-6 in humans. Ann. Intern. Med. 1998, 128: 127-137

163. Pariante CM, Pearce BD, Pisell TL, Sanchez CI, Po C, Su C, Miller AH The proinflammatory cytokine; interleukin-1, reduces glucocorticoid receptor translocation and function. Endocrinology, 1999,140:4359-4366

164. Patel DD, Haynes BF Cell adhesion molecules involved in intrathymic T cell development. Semin Immunol, 1993, 5:282-292

165. Pelham H.R.B.Speculations on the function of major heat shock and glucose-regulated proteins., Cell., 1986, V. 46. P. 959-961.

166. Perlow MJ, Freed WJ, Hoffer BJ, Seiger A, Olson L, Wyatt RJ. Brain grafts reduce motor abnormalities produced by destruction of nigrostriatal dopamine system. Science. 1979 May ll;204(4393):643-7.

167. Pierpaoli W., Regelson. W. Pineal control of aging:Effect of melatonin and pineal grafting on aging mice. Proc. Natl. Acad. Sei. USA., 1994,91:787-791.

168. Pierpaoli W., Yi Ch. The involvement of pineal gland and melatonin in immunity and aging.Thymus -mediated, immunoreconstituting and antiviral activity of thyrotropin-releasing hormone. J. ofNeuroimmunology, 1990, 27: 99-109.

169. Pierpaoli W.,.Dall'Ara An., Pedrinis E., Regelson Wi. The Pineal Control of Aging. The Effects of Melatonin and Pineal Grafing'on the Survival of Older Mice.Ann.N.J.Acad.Sci. 1991, 621:291-313.

170. Pleau JM, Fuentes V, Morgat JM, Bach JF Specific receptors for the serum thymic factor (FTS) in lymphoblastoid cultured cell lines. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77:2861-2865

171. Poulin JF, Viswanathan MN, Harris JM, Komanduri KV, Wieder E, Ringuette N, Jenkins M, McCure JM, Sekaly RP Direct evidence for thymic function in adult humans. J Exp Med, 1999, 190: 479-486

172. Prepin J Fetal thymus and thymulin stimulate the in vitro proliferation of oogonia in the fetal rat ovary. C R Acad Sci III, 1991, 313:407-411

173. Prepin J Fetal thymus and thymulin stimulate1 in vitro proliferation of gonocytes in the fetal testis in rats. C R Acad Sci III, 1993,316:451-454

174. Prepin J, Le Vigouroux P, Dadoune JP Effects of thymulin on in vitro incorporation of 3H-thymidine into gonocytes of newborn rat testes. Reprod Nutr Dev, 1994, 34:289-294

175. Przepiorka D, Srivastava PK. Heat shock protein—peptide complexes as immunotherapy for human cancer Mol Med Today. 1998 Nov;4(l l):478-84.

176. Pugin J. Immunostimulation is a rational therapeutic strategy in sepsis., Novartis Found Symp. 2007;280:21-7; discussion 27-36, 160-4.

177. Qian H., Atherton S. Apoptosis and increased expression of Fas ligand after uniocular anterior chamber (AC) inoculation of HSV-1, Curr. Eye Res. 2003. V.26. N 3-4. P. 195-203.

178. Ran R, Lu A, Zhang L, Tang Y, Zhu H, Xu H, Feng Y, Han C, Zhou G, Rigby AC, Sharp FR. Hsp70 promotes TNF-mediated apoptosis by binding IKK gamma and impairing NF-kappa B survival signaling. Genes Dev. 2004 Jun 15;18(12):1466-81.

179. Ranges, G. E., Goldstein, G., Boyse, E. A., and Scheild, M. P. T cell development in normal and thymopentmn-treated nude mice, j Exp. Med., 1982, 156, 1057-1064

180. Rebar RW, Miyake A, Low TL, Goldstein AL Thymosin stimulates secretion of luteinizing hormone-releasing factor. Science, 1981,214:669-671

181. Ritossa F. A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in Drosophila, Experientia. 1962. V. 18. P. 571-573.

182. Ritter MA, Palmer DB The human thymic microenvironment: new approaches to functional analysis. Semin Immunol, 1999, 11:13— 21

183. Rozencwaig R., Grad B.R., Ochoa J. The role of Melatonin and Serotonin in aging.Medical Hypotheses, 1987, 23: 337-352.

184. Ruitenberg EJ, Berkvens JM The morphology of the endocrine system in congenitally athymic (nude) mice. J Pathol, 1977, 121:225— 231

185. Safieh-Garabedian B, Jalakhian RH, Saade NE, Haddad JJ, Jabbur SJ, Kanaan AS Thymulin reduces hyperalgesia induced by peripheral endotoxin injection in rats and mice. Brain Res, 1996, 717:179-183

186. Sandor M., Bagyinka C., Horvath L. I., Medgyesi G. A., Micolos K. Immune complex binding induces lateral lipid re-orderin in ratordering macrophages plasma membrane. -Mol. Immunol., 1981, v. 18, No 3, p. 173-175.

187. Savino W, Bartoccioni E, Homo-Delarche F, Gagnerault MC, Itoh T, DardenneM Thymic hormone containing cells. IX. Steroids in vitro modulate thymulin secretion by human and murine thymic epithelial cells. J Steroid Biochem 1988, 30:479-484

188. Savino W, Dardenne M, Carnaud C The conveyor belt hypothesis for intrathymic cell migration. Immunol Today, 1996, 17:97-98

189. Savino W, Dardenne M, Papiernik M, Bach JF Thymic hormone containing cells. Characterization and localization of serum thymic factor in young mouse thymus studied by monoclonal antibodies. J Exp Med, 1982, 156:628-633

190. Savino W, DardenneM Thymic hormone containing cells. VI. Immunohistologic evidence for the simultaneous presence of thymulin, thymopoietin and thymosin-1 in normal and pathological human thymuses. Clin Exp Immunol, 1984, 14:987-991

191. Savino W, Gagnerault MC, Bach JF, Dardenne M Neuroendocrine control of thymic hormonal production. II. Stimulatory effects of endogenous opioids on thymulin production by cultured human and murine thymic epithelial cells. Life Sci, 1990, 46:16871697

192. Savino W, Villa-Verde DMS, Lannes-Vieira J Extracellular matrix proteins in intrathymic T cell migration and differentiation? Immunol Today, 1993, 14:158-161

193. Savino W., Dardenne M., Neuroendocrine Control of Thymus Physiology, Endocrine Reviews 2000, 21(4): 412-443

194. Scherer DC, Brockman JA, Chen Z, Maniatis T, Ballard DW. Signal-induced degradation of I kappa B alpha requires site-specific ubiquitination.Proc Natl Acad Sei USA. 1995 Nov 21;92(24):11259-63.

195. Schluns KS, Grutkoski PS, Cook JE, Engelmann GL, Le PT Human thymic epithelial cells produce TGF-b and express TGF-b receptors. Int Immunol 1995, 7:1681-1690

196. Sharp F.R., Massa S.M., Swasnson R.A. Heat-shock protein protection., Trends Neurosci. 1999. V. 22. P. 97-99.

197. Shin D.H., Lee E., Kim H.J., Kim S., Cho S.S., Chang- K.Y., Lee WJ. Fas ligand mRNA expression in the mouse central nervous system, J. Neuroimmunol. 2002. - V. 123. - N 1-2. - P.50-57.

198. Shivacheva TM, Khadzhiolov AI, Seasonal involution of the lymphoid tissue of the spleen of the European suslik (Citellus citellus L.) Arkh Anat Gistol Embriol. 1987 May;92(5):48-53.

199. Shivacheva. T.M. Seasonal rhythms of lymphocyte subpopulations in european ground squirrel (Citellus Citellus L.) Comptes rendus de I'Academie bulgare des Sciences, 1984, 35(1): 1419-1422.

200. Shivatcheva T.M. Ultrastructural aspects of the seasonal regeneration of the thymus in the european ground squirrel (Citellus Citellus L.) Comptes rendus de I'Academie bulgare des Sciences. 1985, 38(6):775-778.

201. Shivatcheva T.M., Alexandrov I.I. Seasonal decrease in natural cytotoxic activity of ground squirrel spleen lymphocytes.Comptes rendus de TAcademie bulgare des Sciences. 1986, 39(1): 121-124.

202. Shivatcheva T.M., Boyadjieva-Michailova, A. Goranov I.T. Ultrastructyral aspects of the seasonal involution of the thymus in the european ground squirrel.( Citellus Citellus L.) Comptes rendus de I'Academie bulgare des Sciences. 1984, 37(1): 125-128.

203. Shivatcheva TM, Hadjioloff AI., Seasonal involution of gut-associated lymphoid tissue of the European ground squirrel. Dev Comp Immunol. 1987 Fall; 11(4):791-9.

204. Shivatcheva T.M., Hadjioloff A.I. Adaptive seasonal involution of the ground squirrel thymus. Thymus 1987(2), 10:251-255

205. Solana R, Mariani E. NK and NR/T cells in human senescence Vaccine. 2000 Feb 25;18(16):1613-20

206. Sriram M., Osipiuk J., Freeman B., Morimoto R., Jochimiak A. Human Hsp70 moilecular chaperone binds two calcium ions withing the ATP-ase domain., Structure. 1997. V. 5. P. 403-414.

207. Srivastava P.K., Nat. Rev. Immunol. 2002. V. 2. 185-194.

208. Stanton T.L., Winokur An. Beckman. Al.L. Reversal of natural CNS depression by TRH action in the hippocampus. Brain Research. 1980, 181:470-475.

209. Stanton T.L.,.Caine S.Ba., Winokur An. Seasonal and State-Dependent Changes in Brain TRH Receptors in Hibernating Ground Squirrels. Brain Research Bulletin. 1992, 28: 877-886.

210. Sunshine GH, Basch RS, Coffey RG, Cohen KW, Goldstein G, Hadden JW, Thymopoietin enhances the allogeneic response and cyclic GMP levels of mouse peripheral, thymus-derived lymphocytes. J Immunol. 1978 May; 120(5): 1594-9

211. Thompson JE, Phillips RJ, Erdjument-Bromage H, Tempst P, Ghosh S. I kappa B-beta regulates the persistent response in a biphasic activation of NF-kappa B. Cell. 1995 Feb 24;80(4):573-82.

212. Fabris N, Mocchegiani E, Mariotti S, Pacini F, Pinchera A. Thyroid function modulates thymic endocrine activity. J Clin Endocrinol Metab 62:474-478

213. Timsit J, Savino W, Safieh B, Chanson P, Gagnerault MC, Bach JF, Dardenne M Growth hormone and insulin-like growth factor-I stimulate hormonal function and proliferation of thymic epithelial cells. J Clin Endocrinol Metabol, 1992, 75:183-188

214. Tomasi T.E. Stribling A.M. Thyroid function in the 13-lined ground squirrel. Adaptations to the Cold: Tenth International125

215. Hibernation Simposium. 1996, University of New England Press, Armidale, 263-269.

216. Tomasovic SP, Klostergaard J., Bacterial endotoxin lipopolysaccharide modulates synthesis of the 70 kDa heat stress protein family. Int J Hyperthermia. 1991 Jul-Aug;7(4):643-51.

217. Tsigos, C., D. A. Papanicolaou, R. Defensor, C. S. Mitsiades, I. Kyrou & G. P. Chrousos. Dose effects of recombinant, human interleukin-6 on pituitary hormone secretion and energy expenditure. Neuroendocrinology, 1997, 66: 54-62.

218. Turabull AV, Rivier CL Regulation of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis by cytokines:actions and mechanisms of action. PhysiolRev, 1999, 79:1-71

219. Udey M. G., Parker C. W. Membrane protein synthesis in mitogen-stimulated human T -lymphocytes. -J. Immunol., 1981, v. 126, p.1106-1113.

220. Uzumcu M, Akira S, Lin YC Stimulatory effect of thymic factor(s) on steroidogenesis in cultured rat granulosa cells. Life Sci 1992,51:1217-1228

221. Vega VL, De Cabo R, De Maio A., Age and caloric restriction diets are confounding factors that modify the response to lipopolysaccharide by peritoneal macrophages in C57BL/6 mice. Shock. 2004 Sep;22(3):248-53

222. Vigh L., Literati P.N., Nolwerda D.A. et al. Bimoclomol: a nontoxic hydroxylamine derivative with stress protein-inducing activity and cytoprotective effects., Nat. Med. 1997. V. 3. P. 1150-1154.

223. Villa-Verde DMS, de Mello-Coelho V, Farias-de-Oliveira DA, Dardenne M, Savino W Pleiotropic influence of triiodothyronine on thymus physiology. Endocrinology, 1993, 133:867-875

224. Vollger LW, Tuck DT, Springer TA, Haynes BF, Singer KH Thymocyte binding to human thymic epithelial cells is inhibited by monoclonal antibodies to CD2 and LFA-3 antigens. J Immunol, 1987 138:358-363

225. Vries J. E., Punnonen J. Interleukin-4 and interleukin-13. -In: Cytokine regulation of humoral immunity, 1996, p. 8-9. Clifford M. Snapper ed., N.-Y.

226. Walford, RL Immunologic aspects of aging, Klin Wochenschr. 1969 Jun 1;47(11):599-605

227. Wang L. C. H., Energetic and field aspects of mammalian torpor. In: Strategies in Cold-Natural Torpidity and Termogenesis. 1978 Eds L.C. H. Wang and I. W. Hadson, 109-145, N 9, Academic Press.

228. Wang L. C. H., Energetic and field aspects of mammalian torpor. In: Strategies in Cold-Natural Torpidity and Termogenesis. 1978. Eds L.C. H. Wang and I. W. Hadson, 109-145, N 9, Academic Press.

229. Wang L. C. H., The effect of low temperatures on Biological systems. 1987. eds Grout B. W. W. Morris G. J., Edward Arnold Ltd., p.p.349-386.

230. Wang L.C.H., Lee T.F. Temperature Regulation. In: Psychoendocrinology, chapter 9, 1989. 473-538.

231. Wearsh P.A., Voglino L., Nicchitta C.V. Structural transitions accompanyingthe activation of peptide binding to the endoplasmic reticulum Hsp90 chaperone GRP94., Biochemistry. 1994. V. 37. P. 5709-5719.

232. Webster, E. L., I. J. Elenkov & G. P. Chrousos. The role of corticotropin-releasing hormone in neuroendocrine-immune interactions. Mol. Psychiatry, 1997, 2: 368-372.

233. Whiteside ST, Epinat JC, Rice NR, Israel A. I kappa B epsilon, a novel member of the I kappa B family, controls RelA and cRel NF-kappa B activity. EMBO J. 1997 Mar 17;16(6):1413-26.

234. Whitmarsh AJ, Davis RJ. Transcription factor AP-1 regulation by mitogen-activated protein kinase signal transduction pathways. J Mol Med. 1996 0ct;74(10):589-607.

235. Yamauchi N., Watanabe N., Kuriyama H., Neda H., Maeda M., Himeno T., Tsuji Y. Suppressive effects of intracellular glutatione on hydroxyl radical production induced by tumor necrosis factor. -Int. J. Cancer, 1990, v. 46, p. 884-888

236. Yenari MA, Giffard RG, Sapolsky RM, Steinberg GK. The neuroprotective potential of heat shock protein 70 (HSP70) Mol Med Today. 1999 Dec; 5(12):525-31.

237. Yoon P, Keylock KT, Hartman ME, Freund GG, Woods JA. Macrophage hypo-responsiveness to interferon-gamma in aged mice is associated with impaired signaling through Jak-STAT. Mech Ageing Dev. 2004 Feb;125(2):137-43

238. Young J.C., Shneider C., Harti F.U. In vitro evidence that hsp90 contains two independent chaperone sites. FEBS Lett. 1997. V. 418. P. 139-143.

239. Young JC, Moarefi I, Hartl FU. Hsp90: a specialized but essential protein-folding tool. J Cell Biol. 2001 Jul 23;154(2):267-73

240. Zaidi SA, Kendall MD, Gillham B, Jones MT The release of luteinizing hormone from pituitaries perifused with thymic extracts. Thymus, 1988, 12:253-264

241. Zatz MM, Goldstein AL Thymosins, lymphokines, and the immunology of aging. Gerontology. 1985;31(4):263-77

242. Zbytek B, Pfeffer LM, Slominski AT, CRH inhibits NF-kappaB signaling in human melanocytes Peptides. 2006 Dec;27(12):3276-83.

243. Zhang G, Ghosh S. Toll-like receptor-mediated NF-kappaB activation: a phylogenetically conserved paradigm in innate immunity. J Clin Invest. 2001 Jan; 107(1): 13-9.

Информация о работе

Лунин, Сергей Михайлович
кандидата биологических наук
Пущино, 2008
ВАК 03.00.02

Диссертация

Влияние пептидов тимуса на иммунный статус грызунов в норме и при воспалениях, индуцированных бактериальным токсином - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы