Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние модуляторов сосудисто-тканевой проницаемости на липидный состав липопротеидов лимфы и плазмы крови у кроликов в условиях нормо- и гиперхолестеринемии

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние модуляторов сосудисто-тканевой проницаемости на липидный состав липопротеидов лимфы и плазмы крови у кроликов в условиях нормо- и гиперхолестеринемии"

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕПЕ/ЯШКИ КАЗАХСТАН ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ ЧЕЛОВИСА И й!ВОТ1Ш

., -ч л

¡Г5 0 На права« рукописи

УДК [612.397.81+012.421+612.015.61:636.92

БОНДАРЕВА ТАМАРА ГРИГОРЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ МОДУЛЯТОРОВ СОСУДИСТО- ТКАНЕВОЙ ПРОНИЦАВОСТИ НЛ МПИЛНЫЙ СОСТАВ ЛИНОПРОТЕЗЩОВ лши И ПЛАЗШ КРОВИ У КРОЛИКОВ В УСЛОВИЯХ 1ЮП«0- И ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНШСК

03.00.13 - Физиология человека и яшютиых

Л ВТ ОРЕФЕРАТ диссертации на соиасаниэ ученой степени кандидата биологических наук

Алматы. 1095

Работа ниполнена в лаборатории биохимии института физиологии человека ¡5 йивотшх ПАИ Республики Казахстан

Научные руководители:

Ведусь организация

Официадыше оппоненты:

- доктор биологических наук, профессор Б. II. Никитин

- кандидат ыедшцшекнк наук А.В. Косухии

- институт питания НЛП ПК, г. Ллыати

- доктор биологический наук, «рс«1>ессор Р.А. Гараон доктор медицинских наук, профессор А.Л- Сокодоа

Защита состоится 10Э5 г. в__чао,

на ¡заседании специалишнйршпюго/Саьета Л 53.25.ОТ при Институте физиологии ИДИ Щ по адресу: 480032, г. Алиати, А1садеи городок

С диссертацией четно ознакомиться ь библиотека Иисш-тута физиологии 11АН РК

Автореферат разослан "_" _ 1005 г.

Учений секретарь специаяийиравалног'о Сонета, доктор биологических НауК

Р. О. АШШ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛБОТН

Актуальность проблемы. Липопротеиды (JH1)' физиологических жидкостей являются разнофункционалышми переносчшкмн липидов: одни из них осуществляют транспорт холестерина (ХС) к классам, другие - иавлекаят КС из гаеточних мембран с последущен транспортировкой его it основному месту трансформации и выведении из организма - печени. Взаимодействие циркудирущих ЛП с мембранами luexoic происходит в непосредственной питательней среде (слеток - иитерсгициалыгой жидкости. Проникновение Л1 из плазмы крови в интерстиций во многом зависит от сосудисто-тканевой проницаемости (Лмброзас,1974; Бобршев,1981; Нагорнев и др. ,1933). Из межклеточного пространства ЛП возвращается вновь в кровоток посредством лимфатической системы (Lassen е.а. ,1974; Потапов,1977; Ткаченко и др.,1981).

Основная часть ЛП в организме происходит из печени и слизистой оболочки тонких кишок. МП разного генеза различается по составу своих лнпндных н белковых компонентов (Bai ,'örundy, 1900; Lipiello е.а. ,1983; Денисенко и др. ,1984; Черднпева и др,1987). Кишечные ЛП секретирувтся в интерстициальнуп жидкость и далее в лимфу, гаторая по лимфатическому руслу доставляет их в кровоток. Лимфатическая система служит не просто транспортник звеном в миграции кишечных Л1Шидов; в ней происходят метаболические и стру-

i

ктурные трансформации ЛП (Lindela е.а. ,1903; Никитин и Косухип, 1988). Одним из видов тралсформации липид-белкових частиц в лимфе является свободный обмен менду кишечными ЛП и ЛП плазмы 1фови липидами, от которых зависят свойства липопротеидных частиц (Nilson-Efilc е.а. ,1987; Герасимова и др. ,1908; Jackson е.а., 1993; Ebert е.а.,1993). Следовательно, на меллипопротеидные взаимоотношения в лимфе должна влиять проницаемость гемато-лимфатического барьера (ГЛВ).

- г -

Актуальность исследований ЛИ обусловлена их роль» в возникновении атеросклероза, остающегося важнейшей причиной смертности в большинстве стран. Известная связь атеросклероза и ги-перхолестеринемии (ГХС), определяет необходимость изучения влияния модуляции проницаемости ГЛВ на формирование ЛЛ кишечной лимфы в условиях экспериментальной ГХС.

В настоящее время в медицине широкое применение наши гиалуронидаза (ГД), повышающая (Росин,1984; Португалова,198б; Мурзаыадиева,1987), а также аскорбиновая кислота и рутин, понижающие (Коровин и др.,1979; Шараев и др.,1983; Владимирова и др.,1989) сосудисто-тканевую проницаемость. Единичные данные свидетельствуют о той, что ГД и рутин являются лимфогонньшн. средствами (Трофимова и др. ,1979; 12аикемелова, 1985). Применение подобных средств ускоряло у экспериментальных яивотиых рассасывание холестериноаиых бляшек (Ержалов,1982; Левин,1986), липиды на которых выводились через лимфу. Однако, сведений о влиянии этих препаратов на формирование липидиого состава ЛП лимфы liait в условиях нормохолестерннеыии (I1XC), так и ГХС в доступной паи литературе не найдено. Учитывая ванную роль ЛП плазмы крови и лиы-фи в поддержании гоыеостаза липщов, изучение данного вопроса представляет определенный теоретический и практический интерес.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение влияния модуляторов сосудисто-тканевой нроишцшыости -гиалуронидазы и комплекса аскорбиновой кислоты с рутиной - на липидный состав липопротеидов различных функций лимфы кишечного ствола и плазмы крови у кроликов в условиях нормо- и гиперхолес-теринемии с одновременной оценкой степени липидной инфильтрации аорты у последних. Для выполнения работы били поставлены следующие задачи:

1. Последовать влияние гиалуронидагы и комплекса аскорбиновой кк&врти с рутннсм на состав классов липидов, их кирноккс-дотпый спектр, состав индивидуальных классов фосфолипидов липо-протекдов раакш функций лкыЗы галечного ствола и плазмы кропи у крсышкоп о порыохолестеринемлем.

2. Изучить влияние пгалурогащазы к комплекса аскорбиновой кислоты с руттгш па состав' гслаооов липидов, их клрнокнслотиыЛ спектр к состав тадтидуалымх классов фосфолипидов липопротен-Лов различных функций лкифы килечного ствола и плазмы крови у кроликов с птеряолестеринеикей.

3. Изучить влияние гиалуропвдаац и комплекса аскорбиновой 1шслоти с руткнс!! на уровень холестерина в плазме >фовн и степень инфильтрации стенки порты ятндами у кроликов в условиях гиперхолестеринеши.

Научная новизна. Вперсые ¡гееяедовано влияние ГД и комплекса аскорбиновой юголоты с рутиной (АКР) на состав липидов ЛП различных фушЬдай лимфы гаяечвого ствола у кроликов с НХС и ГХС. Установлено, что при хроническом введении ГД кроликам с НХС и ГХС изменения, происходящие в составе классов липидов и их спектре кпрных lotcaor лгпопротевдоэ высокой плотности (ЛПВП - анти-атерогенных) и суммарной фракция алолипопротеины В и Е содеряа-вдл'ЛП (ano В,Е-ЛИ - атерогешшх) akmíh кгаечиого ствола нал раз-ле:Ri на нивелирование различий с составами классов липидоэ и m Ш'рных »oîcjot аналогичных Фрагашй ЛП плазиы. При этом, состав липидов ЛП люф« приближался к таковому ЛП плаамн крови как у нормо-, так h гиперхолестерииенических животных.

Впервые noKiwano. что при хроническом введении комплекса АКР кроликам с НХС и ГХС изменения, происходящие в составе классов липидов и их жиршжнелотнем спектре п Л11ВП лимф»! кишечного

ствола направлены на нивелирование различий, а в ало В.Е-ЛП -на увеличение различий о составом классов липидов, их жирных кислот в идентичных ЛП плазмы.

Впервые обнарудено, что хроническое введение кроликам ГД и комплекса АКР ускоряло регрессии ГКО. В то же время ГД усиливала, а гсэцплекс АКР уменьшал степень инфильтрации липидами стешод брюшной аорты.

Впервые выявлено, что при введении кроликам АКР как с 1ЕХС, так и ГХС, происходит возрастание индекса фоаЬатвдилхсшш/сфин-гоыиелин (ФХ/Ш) в ЛПБП лш{и, что предполагает повышение ХС-акцепторпих свойств этих частиц.

Научно-практичеасая ценность рс-зул^татов исследования. Полученные данные позволяют судить о механизмах формирования пулов ЛП лнм:1и кшечного ствола под влиянием ГД и ютмплекса АКР у кроликов с 11ХС и ГХС. Установленное сшшшие уровня ХС в плазме крови под воздействием комплекса АКР позволяет рекомендовать его в качестве гипохолесгеринеиичеасого средства. Обнаруженное увеличение индекса ФХ/СМ в ЛПВП лшлфы под влиянием комплекса АКР может быть применено для коррекции состава фосфоиоипвдов (ФЛ) этих частиц. Сведения об усилении липидной инфильтраций стеики брюшной аорты лри хронической введении ГД в условиях ГХС должны быть учтены в практике назначения фармакологических препаратов ГД ( лндазы, роиидазы).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: 1. В условиях экспериментальной гиперхолестеринемии гиаау-ронвдаза, введенная в организм кроликам, способствует сближению состава классов липидов и спектра их жирных кислот атерогенных и антиатерогенных ЛП лим]и и плагш крови.

2. Комплекс аскорбиновой кислоты с рутипом в условиях акс-

яерииеиталмгаи гиперхолестеринешт у кролшсоп обуславливает сближение состава классов лнпидов, их cneicrpa жирных кислот ан-тиатерогенних (холестерин-акцепторных) Ш лимфы и плазш кропи; в атерогеппых (холестерин-донорши) ЛП лимфы, наменения в липид-ноы составе паправдет! п сторону большего различия о таковым в идентичных ЛП плазмы крови.

3. Гиалуроивдааа и комплекс аскорбиновой кислоты с рутиной ускоряют регрессию гшерходестеринеиин.

4. Гиалуронидааа в условиях гиперходестерннешш усиливает, а коиплеко аскорбиновой кислот с рутиной - уменьшает степень инфильтрации липидами стенки бршиой аорты.

Апробации работы. Основные научные реаультати доложены и обсуздеш: на V конференции молодых ученых института физиологии All Каэ.ССР (р.Ахыа-Ата, 1988), на 1 съезде физиологов Казахстана (г.Алиа-Ата, 1S88)', на V и VI конференциях профессорско-преподавательского состава» научных сотрудников, студентов и работников народного образования (г.Усть-Каыеногорск, ВКГУ, 1991, 1992), на иехлабораториом заседании института физиологии IIAII РК (г. Алиати, 1994).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и объеи диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания на-териалов и методик, материалов собственных исследований и их обсуждения, аакдпчення, выводов и указателя литературы, включающего 201 научных работы. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и П рисунками.

Материал и методы исследования. Поставлено две серии хронических экспериментов на 46 кроликах-самцах массой тела 2,6-3,5 кг в возрасте 8-10 месяцев.

- с -

Б первой серии экспершелтоп 24 кролика Сила разделены на 3 группы, однородные по содераашм общего холестерина (ОХС) и ХС-ЛПВП в плазце крови. Крашкаи I группы (п * 8) «а фоне стандартной диеты вводили ГД внутримышечно, в виде фарыакологичесюто препарата "Лид'аза" в дозе 1 Ед/кг ыасси тела. Кролики П группы (п » 8) на (]оие стандартного рациона получали per os через зонд в виде водного раствора аскорбиновую ююлоту и взвеси в воде -рутин в дозах 40 иг/кг и 5 иг/кг ыасси тела соответсвенно.Конт-ролеи для этой серки экспериментов олу&илн кролики Ш группы (п = 8), содержался на стандартном писанном рационе в течение тех у.е сроков, что и кролик» оттшх групп.

Во второй серии эксперимента) кроликов содержал» на стандартной рационе и моделировали у mix I'XC дополнительным стзршш-ваниеи БО.% взвеси ХС в подсолнечной падле на расчета 350 мг/ш' массы тела ежедневно в течение 6 недель. По истечении этого срока животных разделяли на 3 группы, однородные ко содержанию ОХС и ХС ЛПВП в плазые крови. Животный первой, экслершеиталыюй группы (IV группа, п = 7) па фоне стандартной диети вводили ГД, второй - аскорбиновую inicuiory и ' рутин (Y группа, п = 0). Введение зтих препаратов проводили в тех же доаах, теин ке способа».!» и в течение того срока, что и кроликам с IIXG- Контролен во второй серии экспериментов бши кролшси (п » 7), содержался на стандартной юивариои рационе 4 недели после моделировании у них экспериментальной ГХС (V] группа, спонтанная регрессия ГХС).

Под гассеналосш парковом в остром эксперименте у животных забирали пробы ¡сроки из краевой вены уха и лимфи килечного ствола через 6-8 часов после коршения, т.е. на пике адсорбции трн-гдицеридос (ТГ) и ХС (Денисешю а др., 1984). Кроликов забивали

путем введения токсических доз гексеиала и выделяли для гистоло-пгческого исследования участок брюшной аорт».

Разделепио ЛП в плазме крови и лиьфо проводили методом маг-шш-фоа1юровольфрама1'11ой преципитации на Л1Ш и суммарную фракцию ало В,Е-ЛП по Durringlcn (1982). Чистоту разделения Фракции ЛПВП гастролировали с помощью электрофореза я лояиакркламцдном геле (Грачева и др., 1903). ílpn определении содержания ХС в пробах для полного его выделения сначала осуществляли гидролиз липвдов и их зкетршодт по методу Abel 1 е. а. (1957). Реакция на ХС после упаривания растворителя, ставили по феррохлоридному методу (Zak е.а. 1954). При выполнении работы осуществляли внутрн-лабораторньш контроль (сачбства анализов ОХС и ХС ЛПВП.

Лшшды из фракций Ш экстрагировали хлороформ-метанодовон смесью (2:1 по объему) в присутствии антиассидгнта бутилгидро-кситолуола (0.0U). Классы лииндов разделяли методом восходящей одномерной. хроматограф™: по («tanners е.а. (1969) на пластинах "Silufol" (15x15 см, Чехия). Затем, после соскабливания соответствующих зон с!шпсагеля с пластин, онределплн количественно свободный холестерин (СХС), эфиры холестерина (ЭХС) (Zak е. а., 1954), ТГ (Wolsch е.а., 1955 в модификации Косухина » Ахметовон, , 1986) и ФЛ (Svanborg o.a., 1962). ЭХС, ТГ, Ш гндролизовали н метилировал», лелешэуя Ъ7. раствор хлористого водорода в абсолютном метаноле в присутствии бензола (Stoffel е.а., 1959). Метиловые эфиры высших жирных. (См; о. Ciß:o, Cig:í, Сю:о» Clß:l» Ci8:2> Ci8:3. C20:4) кислот анализировали * на газовом хро-' матографе "Chrom-5" с пламенно-ионизационным детесторда. Колонки из иерлшвеюцей стали диаметром 3 мм длиной 2,6 и содержали наполнитель: хромотой НАШ IMDS зернения 0,16-0,20 им (твердый носитель), дпэтиленсуюдинат (дндглл фаза) а соотношении 9:1. Газ

о

- носитель - азот. Температура термостата - 180 С, испарительной о

камеры - 220 С. Пшси на хроматографах идентифицировали по удерживаемым объемам метровых эфиров стандартных жирных кислот.

Разделение ФЛ в тонком слое силшсагеля нластшюк "Silufol" (15x15 см) осуществляли в системе растворителей хлороформ:метанол: иода (55:25:4). Количественный анализ индивидуальных классов ФЛ проводили по методу Vaskovski е.а (1975). Гнстоморфолопш О репной аорты |£{юликоп научалась на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, ллпзды выявляли в препаратах, о!фашешшх Суданом Ш и Суданом IV (Меркулов,19G9).

Полученные данные обрабатывались методом вариационной ста-тисти1ш с использованием критерии t Стьвденга.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАЮЙ И IiX ОБСУДЩЗШЕ

Исследование липидного состава ЛП различных функций в плазме крови и лимфе кишечного ствола у кроликов с ПХС, получавших в виде инъекции ГД, показало его изменения только в диифе. При этом иабдэдалось повышение концентрации ХС ЛПВП (табл.1) и лим-фо-плаамеииого отношения ХС ЛПВП (рис.1.). Одновременно о ЛПВП лимфы сшкались величина стиошеши <Ж/СИ на 34,7 X (р<0,05) и процентные содержания динодевой кислоты в ФЛ, олеиновой loicaom в ЭХС (р<0,05).

Полученные данные по уровню ХС ЛПВП в димфе и величине дш-фо-плазменного отношения ХС ЛПВП свидетельствуют об увеличении'в лимфе частиц ЛПВП, что могло произойти вследствие усилившегося их перехода из плазмы в лимфу благодаря повышению проницаемости ГЛВ ГД. Изменения, произошедшие в яирндкисдотион составе ФЛ ЛПВП лнмфи приведи к штелнровашго различий с составом жирных кислот ФЛ ЛПВП плазмы. Наряду с этим исчезали _различия в процентном содержании ТГ и холестероллинолеата между ЛПВП

Таблица 1. Содержание ОХС, ХС ЛПЕП и ХС ало В,Е-ЛП в лимфе (числитель) и плазме крови (знаменатель) V кроликов с нормохолесте-ринеиией, получавших гиалуроиидазу (I), комплекс аскорбиновой кислоты с рутшюм (П) и иптактних (Ы) (ш*/дл)

Холестерин 1 (п=8) П (п-0) Ш (п=8)

23,8+2,4 22,7+2,0 б 30,2+3,2 б

ОХС 35,9+3,9 30,4+2,0 а '44,5+5,2

5,1+0,5 а,б** 4,3.1.0,3 б** .3,610,3 б**

ХС ЛПВП 12,2+1,1 11,310,9 13,6+0,8

23,4+2,9 10,4+2,3 а 26,6+2,В

ХС ало В.Е-ЛП 23,7+2,7 39,1+2,9 а 30,912,3

Примечание: а - достоверные различил (р<0,05) по сравнению с контролем; достоверние (б - р<0,0!5, б** - р<0,001) различия по сравнению с плазмой крови.

отн.ед.

отн.ед.

-I-

-I-

л.

0,5 • 0 4 0,3 • 0,2 0,1 О

I П Ш I п ш

Рис. 1. Лш4>о-плазменное отношение ХС ЛЛВЛ (а) и ХС ало В.Е-ЛП (0) у получавших гиалуроиидазу (1), комплекс аскорбиновой кислоти с рутнном (!1) и интактинх кроликов (Ш).

1,0 0,0 0,6 0,4 0,2

лимфи ч плазми крови, обнаруживаемые у ннтактпих кроликов. Все это указывает на возросший вклад плазмогешшх ЛПВП в пул ЛПВП

Очевидно, переход ЛПВП плазмы через ГЛБ сопровождался изменениями в поверхностной оболочке ЛИ, включающей ФЛ. Уменьшение индекса ФХ/СМ в ЛПВП лимфы, по-видимому, происходило вследствие

активного использования С>Х в лецитшиколестерин-ацилтрансфераа-цой реакции (ЛХАТ-реакции) (llaraoch е.а. ,1981; Творогова и др., 1986) при акцепции ХС с клеточных иеыбран в интерстиции. Поскольку фермент ЛХЛТ обуславливает превращение СХС в ЭХС преимущественно аа счет ненасыщенной »ирной кислоты ФЛ, то обнаруженное снижение доля лмполевой кислоты в ФЛ ЛПВЯ л;в,к*и подтверждает тшспритдешюе утверждение. В пользу этого говорят и данные по уменьшению в ЛПВП jiiuk¡ij процентного содержания холестерололе-киата - основного продукта тканевой системы зстерификации ХС (Лопухин и др. ,1933).

В ano В.Е-ЛП д'.шфи кроликоп, получавших ГД, изменения обнаружены только п хнрн01СПСЛ0т/(01.( составе ЙЛ; возрастало отношение насыщенных и ненаапцонных кириошюлотпйл остатков на 55,221 (р<0,05) и приближалось к Taiionoi.fi' в ФЛ ano В,Е-ЛП п.-.азыы. В »гонтрозе индекс насыщенности (ÍJ! л»»4и Сил выше, чей в плззие крови (р<0,05). Параду с этим исчезали раадичия в шраокислотноц составе липидов, в величине нидеюза ФХ/СМ ыеаду ano В,Е-Л1, а таюне и уровне ОХС j¡m\u и плазму крови, характерные для иптактн.чх кроликов (та5л.1).

Очевидно, поверхностное расположение ФЛ в липопротеидних частмщя спосоЗствовало 1« обмену ыеаду ЛПВП (в юторых выявлялся, icaic отмечено виие, неписошм индекс ФХ/СМ) и ало В.Е-Л11 лии-что и привело к некоторому уменьшению индекса ФХ/СМ в последней <jршщии ЛП. Однако, учитывая невысокую дола чадтиц ЛПВП п ■tit-.*i¿ (всего 17,0 X), нальаи искличить, что под ьоздейстсиеи ГД ¡ioaíBítaacb иропицаекость VHD и удп ano В.Е-ЛП нлазш, нмеюшдх ко оравн^шаэ с ало В,Б-ЛП ;¡iu*]u иишш» индекс &X/CU и высокую насы-цантсть гшрлокислотник оаттюй Ш! (р<0,05). Надо полагать, что оба ovM процесса обусловили перестройки в липидном составе ano

В.Е-ЛП лкнфы.

У кролшсов с НХС, лолучзлшос комплекс АКР отпечены изменэ-шгя d лнпидном составе ЛП гак в лим|>е, так к в плазме icpomi. Примечательно, что у пик, как к у «сролтсоз, палучашзих ГД, наблюдалось повшеиие велнчшш лт^фо-плагненпого отношения КС ЛПВП (рис. 1). В ЛПВП лиф» к плазш кропи увеличивалась доля ЗХС (р<0,05) преимущественно за счет холестероллшюлеата (р<0,05). Мс.тду ЛПВП .iío.í'Í'j и плааш кропи исчезали различия в процентпг» содержании ЗХС, лниодезон шхслопj в ФЛ и ЭХС , вштлпе»г::> у ¡штшстш« кроликов. Обняругешп/э кгнекення пеличют/ лт.г{о-плазменного отнсиения ХС ЛПВП, а такие однонаправленные изменения • в липидном составе ЛПЕП физиологических жидкостей, приведшие г: шгаелиропаига различий с составам дипидоп ЛПВП плазь« itponit н „пимТи, свидетельствует о повипешт перехода через ГЛБ указанных частиц плазменного гснеза.

Под влиянием витаминов наблюдалось снижение уровня ХС ало В, Е-Jill ¡сак d 'плазме крови, та;: и в лимфе (табл. 1); различий п лш4о-плазменном отношении ХС ano В.Е-ЛП не обнаруживалось (рпс.1). В то -с? время нгмгнегшл в уровне ХС ало В,Е-ЛП )хсзэ!5-по свидетельствует об умсггьпгсг.чгя в физиологических жидкостях ЛП

з

, d< 1,053 г/см . Сшцсенке количества частиц ало В, Е-ЛП в плаз«о кропя, очевидно, приводит te ыекьпему их поступления в кнтерста-ц»!й ¡i Тогда а силу сут,естсопаигл оккоткчесгаго градиента

мелду плазмой и тканесой лвдегтьи в последняя, а затеи n п лгл-фу усиленно псступетг частицу ЛИСП.

Наряду с 3TIKI, при введеики кроликам витаминов в ТГ ало В,Е -ЛП Л1шфи (ccHOBHHS лкпцдг«. трлнеяерткруемк этой фракцией га-печиш ЛП), возрастала доля олеиновой гогслоти при одновременном снихенни доли стеариновой, что привело к ешкегнеэ их пи-

- -

декса насыщенности на 38,77. (р<0,05). ЭХС этой фракции ЛП линфи обогащались олеиновой, а ФЛ - линолевой кислотами (р<0,05). Иаме-нешш, произошедшие п хирнокислотном составе линвдоа лимфы кроликов, получавших АКР привели к тому, что кииечше ТГ по сраане-- июо с ТГ плазмы становились обедненными стеаратом, обогащенными олеинатом и млели низкий индекс насыщенности жирнокислотпых остатков (р<С,05), тогда liait у интактных кроликов не выявлены различия в составе лирных кислот ТГ и их индексе насыщенности между лимфой и плазмой. Ка;с и в ¡сонтроле, ФЛ лимфи оставались по сравнению с ФЛ плазмы. обогащенными линолевой кислотой, по в болызсй степени (р<0,02). К тому ке ЭХС кишечной лимфы содержали больше, чем плазменные олеиновой (ненасыщенной), а не пальмитиновой (насыщенной, что обнаруживалось в юштроле) кислоты. Приведенные данные указывают на увеличение п пуле aira В.Е-ЛП лимфы частиц шшечиого генеаа и уменьшение вклада в него частиц плазменного происхождения.

Заслуживает особого внимания тог фага:, что у 1ф0лик03 с ПХС,

i

получавших комплекс АКР, происходило повышение величины индекса ФХ/СМ (на 34,27. ;р<0,05) и ие обнаруживалось снижения доли линолевой кислоты в ФЛ ЛПБ11 лнм$ы. Очевидно, выявленное обогащение кшпечиых ФЛ линолевой кислотой приводит к снижению жесткости их фосфолипидион оболочки (Алмазов и др.,1992), Это облегчает обмен ФЛ между JÏÏI кишечного генеза (имеющими высокий индекс ФХ/СМ) й переходящими через ГЛБ ЛПВП плазмы, обедненными ФХ вследствни прогасаиня и интерстиции ЛХАТ-реакции. В результате - ЛПВП вновь превращаются в более адекватный субстрат для фермента ЛХАТ (Герасимова и др.,1938), обеспечивающего ХС-акцепторнне свойства этих частиц. Установленное нами повышение процентного содержания холестероллинолеата --основного продукта ЛХАТ - реакции свидо-

тельствует в пользу этого.

Введение |фоликам ГД «а фоне регрессии ГХС по сравнению со спонтанной регрессией ГХС привело it повыпешго в лимфе уровня ХС ЛПВП, лимфо-плазменного отношения ХС ЛПВП и ХС ало В, Б-ЛИ (табл. 2, рис.2.); о ФЛ Л11ВП, ФЛ и ТГ ano В,Е-ЛП люф» снижалась доля лииолевой кислоты (рис.3,4). К току до ало В,Е-ЛП лимфы обогащались ЭХС (р<0,05), а их ФЛ - нальмнтатом (рис. 4). Обогащенными нальмкг . вон кислотой становились и ФЛ ало В, Е-ЛИ плазш. В то же время, icarc и при спонтанной регрессии ГХС состав классов-ли-пидов, их жирнокнелотный спектр, состав lutaccon i-Л ЛПВП лимфы и плазмы крови бил идентичен. Вероятно, в условиях ГХС повышался ■ переход ЛПВП плазмы через ГЛВ, что и проявлялось нивелированием различии в липидном составе ЛПВП дпм-Iu и плазмы крови. Однако, обнаруженные более высокие величины лимфо-гиазменпого отношения ХС ЛПВП и ¡концентрации ХС ЛПВП в лимфе у крашгав, получавших ГЛ в услопих ГХС, указывают . на большее просеивание ЛПВП плазш в лимфу.

Очевидно, под влиянием ГД в условиях ГХС уашшадся переход через ГЛВ в плазменных' ало В,Е-ЛП. Обнаруженные достоверные различия величины лимфа-плазменного отношения ХС ano В.Е-ЛП, воз, росшее процентное содерлапне ЭХС в ano B.E-JHI лимфы, а таске нз-менешш. в составе жирных кислот ФЛ и ТГ ало В, Е-ЛИ jihwíií, ирн-' ведшие к нивелировании различий с таковым в идентичных лнпидах ano В,Е-ЛП плазмы крови (рис.4), свидетельствуют в пользу этого.

Выявленное снижение процентного содержания лннолепой кислоты 'в ФЛ ЛПВП, аналогичное таковому при введении ГД кролшеам о ПХС, предполагает и аналогичное объяснение этому факту. Однако, как у кроликов, получавших ГД на фоне регрессии ГХС, так и при спонтанной регрессии ГХС в ЛПВП физиологических жидкостей отме-

Таблица 2. Содержание (Ж, ХС ЛЛВП, ХС aro D.E-JüI в лимфе (числитель) и плазме крови (знаменатель) у кроликов, получавших гиалу-роиидазу (IV), комплекс аскорбиновом кислоты с рутином на (¡сие регрессии ГХС (V) к при спонтанной регрессии ГХС (VI) (мг/дл).

Холестерин IV (п-7) V (П'в) VI •(п-7)

ОХС 73,9+10,5 б* 158,7+20,2 В 45,6+0,7 в,б* 125,3+24,4 ВА 66,2+13,9 6*4. 239,3+30, Б

ХС ЛПШ1 8,ЗИ,1 В, б** 7,9+1,0 В,б** 5,2jO,5

22,2+1,3 в 22,7+1,4 в 18,4+1.1

ХСзло В.Е-ЛП 03,749,7 б* 37,7+7,2 в,б 73,9+10.5

134,0+19,0 в 101,3*23,7 В* 220,7+32,3

Примечание: достоверные (в - р<0,051 в* - р< 0,02) различия по сравнению со спонтанной регрессиен ГХС; достоверные (б - р< 0,05; б* - р<0,01; б** - р< С,001) различия по сравнении с плазмой крови.

от».сл. 0,5 •0 40,3 -0,2 0,1

а

гь

стн. ед. 0,5 0,4 ■• 0.3 •• 0.2 0.1

-f

гь

IV V VI IV V VI

Рис. 2. Лимфо-плазменное отношение ХС ЛГОП (а) и ХС ало В,Е-ЛП (б) у кроликов, получавЕИх гиалуроиидаэу (IV), комплекс аскорбиновой кислоты с рутнном на фоне регрессии ГХС (V) и при ' спонтанной регрессии ГХС (VI).

чается Солее низкая, чем у кроликов с 1!ХС, величина индекса ФХ/СМ , что не будет благоприятствовать работе фермента ЛХАТ (Герасимова и др., 1988). Из этого следует, что ХС-акцепторша свойства ЛПВП плазмы при переходе через ГЛБ будут невысокиэ и обнаруженное уменьвение доли лкиолевой кислоты в ФЛ ЛПВП л«шфы

40 30 20 10 ФЛ о 40 SO 20 10 SXC О 40 £0 £0 ÎO TT о

PiîOe Г

IV

- 15 -Л П D П V

Vi

О.

IV

VI

1

IV

VI

il

ql

m

12 3 4

3 4

12 3 1

акршшслотшй состав классов ливцдой ЛШ xm¡a и пла-»01 крови у крадшгоо, получавших птзурснидазу (IV), ; рг'пяекс гскорбичовон кислота с рупит.п (V) na »'сие rvsr РОССИИ ГХС !1 s УСЛОШШ CUOllTñmiüil Р?ГП?ССИ!» ГХС (VI).

3 лгззиа кропи, О Лшг|а; 1,2 3,-1

ClO:0. Ci0:0i

Cjo-i, 0(0-2 соответственно; в - досювернче различия (p<Ö,05) со спонтанной регрессией ГХС.

V

в

V

40 30 20 • 10 ФЛ 0 40 -f 30 20 10 ЭХС О 40 • 30 -20 10 •

ТГ О

в в

IV

- 16 -ano В, Е-ЛП V

VI

б

в .

IV

VI

01

ol

IV

VI

ж

о

ü

[ql

1

Рис. 4. Жирноклслотиий состав классов липидов ano В,Е-ЛП линфи к плазмы крови у кроликов, получавших гиалуронидазу (IV), комплекс аскорбиновой кислоты с рутиной (V) на фоне регрессии ГХС и при спонтанной регрессии ГХС (VI).

плазма крови,

□

лиифа; 1,2 3,4 - Ci6:0. Cía: о,

С18:1. CiQ;2 соответственно; в - достоверные различия (р<0,05) со спонтанной регрессией ГХС; б - достоверные различия (р<0,05) о плазмой крови.

б

б

V

в

V

б

- 1? - •

объясняется не использованием ненасыщенных ФЛ в ЛХАТ-реакции, а возможно, активацией в условиях ГХС nepemicitoro окисления липн-лов (ПОЛ) (Подорожный и др.,1990; Воскресенский и др.,1992), основным субстратом которого являются полиненасыщенные жирные кислоты (Ferries е.а.,1992). Обнаруженное одновременно снижение доли лннолевой кислоты в ТГ и ФЛ ало В.Е-ЛП лимфы, очевидно, Tajóse обусловленно интенсификацией процесса ПОЛ.

При введении кроликам с ГХС ГД, набладалось ускорение регрессии ГХС за счет снижения в плазме крови тольга уровня ХС ano В,Е-ЛП, тогда как уровень ХС ЛПВП повышался (табл.2).

У кроликов, получавших комплекс АКР па фоне регрессии ГХС, как и у получавших ГД, отмечалось уменьшение уровня ХС ало В,Е-ЛП и возрастание уровня ХС ЛПВП в плазме !фови (табл. 2). В отличие от последней "группы, однонаправленные изменения в уровне ХС ЛП различных функций происходили и в лимфе- При этом повышалось лимфо-плазменное отношение ХС ЛПВП и снижалось - ХС ало В.Е-ЛП (рис.2), что указывает на возможность селективного усиления перехода через ГЛБ только ЛПВП плазмы ítponn.

При введении кроликам комплекса АКР на фоне регрессии ГХС в ano В.Е-ЛП лимфы повышалась доля линолевой кислоты в ФЛ и сии, жалась доля стеариновой гаюлоты в ТГ (рис.4). Наряду с зим в ало В.Е-ЛП плазш возрастало процентное содержание лннолевой ют-слоты о ЗХС (рис.4). По окончании эксперимента ало В,Е-ЛП лимфы отличались от ало В,Е-ЛП плазш не только повьшенпым процентным содержанием лшшевой кислоты в ФЛ к ТГ (чтсГ наблюдалось при спонтанной регрессии ГХС), но и более низким процентным содержанием стеариновой. Обнаруженная высокая доля ненасыщенных липидов в пуле ало В.Е-ЛП лимфи указывает па преобладание в нем частиц . кишечного генеза. Являясь хорошими ингибиторами ПОЛ (Воскресеи-

скин и др. ,1992; Оопгх1хоо е.а., 1993) аскорбиновая кислота и рутин, к то»лу же, дсшиш способствовать сохранению высокой доли ненасш,ешшх лирных глслот и ЛИ лнмфи. Это н отмечено в наших опытах. Данные но швшешш доли лшюлевой 1Шслоты в ЭХО ало В,Е -Л11 плазмы, указывают на возможность меньшей активности ПОЛ и в плазме крови.

При идентичности состава классов липндов, спектра их жирных кислот (рис.3) и состава классов ФЛ ЛПВП физиологических жнд-1с0стей у кроликов, получавших комплекс АКР, обнаруживалось повышение величины индекса ФХ/СМ (в лимфе - на 46,2.7., в плазме - на 41,7 а; р<0,05) и доли холестероллшюлеата (рис.3). Очевидно, как и у (фолигав с НХС, в условиях ГХС переходящие через ГЛБ ЛПВП плазмы обогащались в лим!« Ш при обмене ФЛ с кишечными ЛП, что способствовало повышению их ХС-акцеиториой функции. В пользу последнего свидетельствует большая загруженность ЛПВП физиологических жидкостей ходестероллинолеатом, который, как углзы-в ал ось выше, является продуктом ЛХЛТ-реакции. Обмен ФЛ между ЛП различных функций в лимфе значительно мог быть облегчен в результате снижения жндкостности фосфсшшидной оболочш гашечных ЛП ва счет повышения в пей доли ненасыщенных жирных кислот.

Следует отметить, что перестройки, произошедшие в составе лигоадов ЛП обеих фракций лн»4и и плазмы у кроликов, получавших АКР в условиях ГХС, направлены в сторону нормализации. Об этой-наглядно говорят данные го снижению уровня ХС ало В,Е-ЛП, повышении доли ненасыщенных и снижении доли насыщенных жирных кислот в лилидах, а также возрастания индекса ФХ/СМ в ЛПВП физкологг ческих жидкостей до величин, одинаковых с ннтактными кроликами.

Проведенные гистологические исследования показали, что у кроликов, получавинх РД па фоле регрессии отмечалось усиление.

инфильтрации липидаш ннтнш брюшной стенки порти. О то те гремя введение кролгасаи па фоне регрессии ГХС АКР способствовапо уме-ньшешю липидиой инфильтрации аорты. Полученные нами данные ука-вивают на возросшую проницаемость п направлении сосуди-'лшнь для богатых ХС ало В.Е-ЛП п' первом случае н ее снижении во второй. Очевидно, разрушение основного вещества соединительной ткани, происходящее под воздействием ГД (Португалона, 1986), в конечном итоге разобщает координации процессов эндоцптопа клетками аорты ало В,Е-ЛП плазмы и их звшсуацни с тотем линфи. Это сбуславлива-ет усиление инфильтрации лппнда>л1 стеики порти. В то же время надо полагать, что комплекс АКР пренптсвуег инфильтрации липида— ми стенки аорты у кролшсов с ГХС не толы со сипжая прошщаемосчъ сосудистой стенки для атсрогепиих ЛП плазмы, но и позитивно изменяя в лнмфе ХС-акцепториыэ свойства селективно переходящих через ГЛВ ЛПВП плазмы.

в и в о л и

1. Показана возможность направленной трансформации липндно-

»

го состава ЛП различных функции лпыфи кишечного ствола модуляторами сосудисто-тканевой проницаемости - гиалуронидазой и комплекса.! аскорбиновой кислоты с рутнном - у кроликов с нормо- и гн-перхолестерипемией.

2. Гиалуронидаза, введенная кроликам с норма- и гиперхолес-терннемней способствует изменению состава классов лппидов и спектра их жирных кислот п ЛПВП и ало В.Е-ЛЛ лик*]» в направлении нивелирования различий с составом липвдов ЛИ плазмы, что указывает на возможность увеличении перехода как антиатерогешшх, так и атерогенных плазмогепных ЛП через гемато-лнмфатический барьер.

3. Компле1сс аскорбиновой кислоты с рутнном при введении

кродипаи с нормо- и гиперхолестерииешей наменяет состав классов лилидов и их лирных кислот в ЛПВП лимфи в сторону нивелирования, а в ало В,Е-ЛП - увеличения различий о составом липидов индентичиык фракций ЛП плазмы, что свидетельствует о. пользу повышения перехода антиатерогеиных и снижения - атерогенпых плаз-могенных ЛП через геыато-диифатический барьер.

4. Пошлете аскорбиновой кислоты с рутиной у кроликов о иормо- и гиперхолестерииеиией повышает отпадение фосфатидклхо-дин/сфиигомиелин в ЛПВП лпифи, что указывает «а возможность превращения ЛПВП в более адекватный субстрат для лецитин:халесте-рин-ацилтраноферазной реакции, обеспечивающей холестерин-акцепторные свойства этих частиц.

б. Гиалуронидаза и комплекс аскорбиновой кислоты о рутилом ускоряют регрессию гиперхолестеринемии, снижая уровень холестерина плазма крови только за счет холестерина ало В.Е-ЛП, тогда как уровень холестерина ЛПЗП повивается.

6. Гкалуронидаэа, введешшая кроликам с гиперходестерине-ыией усиливает, а комплекс аскорбиновой кислоты с рутилом -уменьшает степень липидной инфильтрации стенки брюшной аорты.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАШШХ РАБОТ

1. Фосфолипидный состав дипопротеидов кишечной лимфы и плазмы крови у кроликов в условиях измененной проницаемости гемаго-лимфатического барьера (соавг.Лхметова B.C., Кусебаева Ф.Я., Нн-лова Н.Е.) // Тез. докл. 1-го съезда физологов Казахстана. -Алма-Ата. - 1988.- ч.1. - с. 35.

2. Влияние витаминов Р и С на содержание холестерина в ли-попротеидах плазмы крови и функциональное состояние тромбоцитов. (соавт.Пак Г.Д., Никитин Б.Н.) //Тез. докл. 1-го съезда физиологов Казахстана - Алма-Ата. - 1988. - 4.1. - с. 54.

" £t -

3. Аяшдтранспортирущая функция липопротеидов килечной jumiiju и плазш крови при действии гиалуронидази (соавт. Кусеба-еваФ.Я., Никитин Б.Н., Нидова U.E.. Ахиетопа B.C.) // Те п. дои. IV Всесоюзного симпозиума "Венозное кровообращение и лимфообращение". - Алма-Ата. - 198Q. - о. 47-40.

4. Влияние вигашпгоп Р,С н гиалуронидази на холестериптрало-портирувщую функции липопротеидов высокой плотности илаэии крозн и Л1шфи // Тез. доо. 1-го съезда фтаалогоп Средней Аэкн a Казахстана. - Дуианбе, 1901. - ч.1. - о.02.

5. ."иш1д1шй состав липопротеидов. плагш кроаи и juswIu в норме, при гнлерхолестеринетш и регрессии птерходестерикешш в сочетшпш с гиалуроиидазои (соавт. Ахиетова B.C., Косухии £.13., Никитин Б.11.) // Сб. Актуальные проблеии физиологии. - тез.докл. П съезда физиологов Казахстана. - Караганда, 1092.- ч.П. - с Еб.

6. Влияние гиалуронидази и ltoimjeitca витаминов Р.С на aim-перкментальную рёгрессиию гиперхшесгериаеигш у кралянов (соапт. Никитин Б.П., Стрелюхина H.A., Сиэдыкова Р.Т.). (Ден. Каз.Гос. ИНТИ 17.08.04 г., 11 5244 - Ка - 94).

7. Влияние модуляции проницаемости геыато-лим^атнчесюто барьера витаминами Р и С на лтиднш состав липопротеидов лим}и у кроликов. (Деп. Каз.Гос.ИИТИ, 17.00.34 Г.. И 5245 - Ка - 04).

8. Жирнокмслотний состав классов лкпидоч липопротеидов ояаз-uu крови и лим!ы у кроликов при экспериментальной гиперхолестери-lieumi и спонтанной регрессии пгаерхолестеринеиии (соавт. Косу um A.B., Никитин Б.Н.) // Сб. Зоологические «факторы и их влияние на организм человека. - 1'сть-Каченогорсгс: ВКГУ. - 1994. - с. 70-62.

9. Влияние гиалуронидази и витаминов С.Р на хирнокислоткий состав липопротеидов лы]« в условиях регрессии гинерхолестери-неиии (соавт. Никитин Б.Н., Косухии A.B.) ft Тез. дока. Ill его-■ зда физиологов Казахстана. - Алцаты. - 1995. - с. 43.

БОНДАРЕВА ТАМАРА ГРИГОРЬЕВНА KAll-TAMHFMÍ ТКАНД1К вТК1ЭГ1ШТ 1Н МОДУЛЯТОРЛАРЫНЫЕ КОЯНДАРДЩ ЛИМФАСШЕН КЛ1 ПЛАЗМАСЫНДАГЫ ЛИПОПГОТЕИД-ТЕГД1Ц ЛИПИДТЕГ K,YPAMUHA К^ЛУПШ ВЭЯЕ ГИПЕРХОЛЕСТЕ-РИНЕМИЯ Ж АГДАПШЩАГН eCEPI

Лнпидтер кдаосыныц ю рамын (1), олардмц майкышкнлдш; cneKTipm (П), фопфолипидторд!н яекелеген кластарын жога-ри тыгырды липопротеидтерди1 (ЙТЛП) дэне дипопротеидтердщ косынды фракциясыиыц В хеке Е аполипопротеиндерше (ano В, Е-ЛП) imerc баганасн лимфасы мен кан плаэмасына гиадуронн-дага (ГД) жзн? яекорбин кывк.ылын рутннмеи комлплексш (ДКР) коса <(i цояндарына калыпты иэне гиперхолестеринемйй (ГХС) егу нэтежес! жагдайнда сокгысынын к*рсак аорта кабыргала-рындагы липндтщ слирму денгей>и есепке ала отырып салыс-тирмалы тгрде рерттеу жумнстары жтрг4Г»лг<гн.

Препараттын екеу1де ГХС-tík регрессиясын дцддамдатып кзн плаэмасыядагы холестериннт декгеШц темеидеткеш соны-мен катар ГД-ныц к* рсзк аортасыныц кабыргасында липидтердщ cínipi лу!н ктшейтш, ад АКР комплекс!, кер1сише оиы ааайтцаны анык,талган. ГХС жэие налыитнхолестеринемия «агдай-дагы I жене II алынган деректер АКР всер1яен гематолимфа тоскауы аркылы плагманыч ЖТЛП (квтер1лу1) ano. В,Е-ЛП (томе ндрп) селект»пт1 ету4и керсегедц ал ГД ecepihe« плагмалык липопротеиденж гематолимфа тоск;аулы аркылы KerepiHk» анык-талган. Зерттеу нэтиж<;с1нде гематолимфа Тоскаулы аркылы оте-tíh АКР комплекс ni алган гй кояндары лимфасыидагн плаэмалнк Aorafн тыгчвды липопротепдтердт холестерин-акцепторлнк ка-жетт?р)н калнпка жылдам келт1ред| дег<?л Роллам чАтуга м»м: к i хд i к б«?ред1.

BONDAREVA TAMARA GRIGOKEJEVNA INFLUENCE OF VASCULAR TISSUE PERMIABIL1TY MODULATORS ON LIPID C0MP05ITI0II OF THE LYMPH AND SERUM LIPOPROTEIDS OF THE RABBITS IN THE CONDITIONS OF NORMO-HYPERCHOLES'f ERINEM1A

A comparative study of the composition of lipids, ttuer lipo-acidic spectrum, individual classes of phospholipids in high-dersity lipoprotein (HDL) and summary fraction of apo-lipoproteins B and E containing (apo B.E-LP) of the intestines lymph and serum affer the infusion of gyaluronidase (QD) and ascorbic acid with rutin (AAR) to recipient rabbits with normo-hypercholesterinemia was made. Simultaneously lipid infiltration of the abdominal aorta wall was estimated.

It was found out , that both preparations increased regression of hypercholesteremia, thus reducing- cholesterol in serum. Howerer, GD increased while AAR reduced lipid infiltration of the abdominal aorta wall. Facts obtained in the conditions of normo-hypercholesterinemia indicate the selectivity of HDL (increased) and apo B.E-LP (reducing) serum transit ion thrcug haemo-lymphatic barrier (GLB). Under the influence of GD increase in transition of serum LP through GLB was discovered. The results of the reseach have aroused speculations of the possibility of quick restoration of cholesterol-accepting prepertie^ of HDL plasma in the lymph of recipient AAR rabbits.