Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на гомеостаз холестерина у потомства

Савельева, Инна Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на гомеостаз холестерина у потомства
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на гомеостаз холестерина у потомства"

- '(. .'•'>-•""•'• 1; - ^ На правах рукописи

САВЕЛЬЕВА Ш1НА НИКОЛАЕВНА

ВЛИЯНИЕ УМЕРЕННОЙ АЛИМЕНТАРНОЙ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ У КРОЛЬЧИХ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ И ЛАКТАЦИИ НА ГОМЕОСТАЗ ХОЛЕСТЕРИНА У ПОТОМСТВА

Специальность: 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1998

Работа выполнена в отделе биохимии Научно-исследовательского института экспериментальной медицины РАМН (директор института -академик РАМН Б.И.Ткаченко).

Научный руководитель: доктор медицинских наук А.Д. Денисенко

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Т.Б. Казакова кандидат биологических наук Г.П. Соколова

Ведущее учреждение: Военно-медицинская академия МО РФ

Защита диссертации состоится " ЪСНЖЛ- 1998 г. в часов на заседании Диссертационного Совета К 001.23.01 при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. академика Павлова, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМ РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. академика Павлова, 12.

Автореферат разослан СссуСмЯ 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета К 001.23.01 доктор биологических наук

О.Г. Куликова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Общепризнано, что гиперхолестеринемия (ГХС) является одним из ведущих факторов риска развития атеросклероза и ишемической болезни сердца. Концентрация холестерина (ХС) в крови, как известно, определяется как генетическими, так и средовыми факторами, среди которых важное место отводится диете, и в первую очередь, потреблению экзогенного ХС. К настоящему времени накопилось значительное количество данных, указывающих на отрицательное влияние повышенного количества ХС в диете на его гомеостаз у взрослых. Менее изученным остается вопрос о том, какое влияние оказывает избыточное поступление ХС в ранние периоды развития, в частности ненаследственная ГХС у матери во время беременности и лактации, на обмен ХС у потомства.

Из предыдущих исследований известно, что чем выше уровень ХС в крови матери, тем больше его переносится через плаценту к плоду (Волынский В.М., Микушкин М.К., 1964; Friedman М„ Byers S.O., 1961; Hassan A.S. et al., 1981). Содержание ХС в молоке лактирующих самок (крыс, крольчих) также увеличивается при ГХС, хотя степень нарастания концентрации ХС в молоке, как правило, значительно меньше, чем в плазме крови самки (Kris-Etherton P.M. et al., 1979; Whatley J.B. et al., 1981).

Внимание исследователей к проблеме влияния ГХС у матери на метаболизм ХС у потомства привлекло сообщение Reizer R. и Sidelman Z. (1972) о развитии устойчивости к развитию алиментарной ГХС у взрослого потомства крыс-самок, имевших повышенный уровень ХС в крови во время лактации. Впоследствии было установлено, что повышенное поступление ХС через плаценту (Nassem S. М. et al., 1980) или с молоком (Kris-Etherton P.M. et al., 1979; Whatley J.B. et al., 1981) при ГХС у матери приводит к повышению концентрации ХС в крови плодов, новорожденных или сосунков, что сопровождается изменением активности ряда ферментов липидного обмена. Однако эти изменения сглаживаются со временем (Fomon S.J. et al., 1984; Mize C.E., Vavy R., 1991; Whatley J.B. et al., 1981), что авторы связывают с переходом на гетерогенное питание после периода грудного вскармливания.

Что же касается влияния поступления избыточного количества экзогенного ХС в пре- и раннем постнатальном периодах развития на устойчивость к холестериновым нагрузкам взрослых особей, то имеющиеся к настоящему времени результаты неоднозначны и противоречивы. В противоречие с упоминавшимися выше данными Reizer R. и Sidelman Z. (1972) в ряде работ не было найдено никаких изменений в реакции на холестериновую нагрузку у животных разных видов (крыс, морских свинок, тушканчиков),

получавших повышенное количество ХС в ранние периоды жизни (Kris-Etherton P.M. ct al., 1979; Li J.R. et al., 1980; Temmerman A.M. et al., 1989). В то же время в крупном ретроспективном исследовании было обнаружено негативное влияние высокого потребления ХС в раннем постнатальном периоде жизни на обмен ХС и смертность от ишемической болезни сердца (Fall C.H.D. et al, 1992). Механизмы такого влияния остаются неясными. Вместе с тем, ситуации, когда мать во время беременности и грудного вскармливания имеет ГХС различной степени выраженности, встречаются довольно часто. Поэтому изучение влияния ГХС у матери на метаболизм ХС у их детей представляется необходимым и актуальным.

Таким образом, несмотря на важность проблемы влияния поступления избыточного количества ХС в развивающийся организм на гомеостаз этого липида во взрослом состоянии, она далека от своего разрешения. Расхождение точек зрения по этому вопросу обусловлено, по-видимому, рядом причин и прежде всего различиями в способах воздействия на плод и сосунков; кроме того лишь в немногих работах изучалось влияние повторных жировых нагрузок на обмен липидов у потомства самок с ненаследственной ГХС, которые позволяют выявлять и более детально изучать скрытые нарушения в метаболизме липидов.

Цели и задачи исследования. Цель работы состояла в выяснении характера влияния умеренной алиментарной ГХС крольчих во время беременности и лактации на метаболизм ХС и триглицеридов (ТГ) у потомства в процессе развития до взрослого состояния и выяснение возможных механизмов этого влияния.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи;

1. Изучить влияние умеренной алиментарной ГХС у крольчих во время беременности и лактации на:

а) возрастную динамику массы тела и уровня липидов у их потомства;

б) реакцию со стороны липидного обмена на острую жировую нагрузку у потомства;

в) скорость катаболизма (удаления из крови) липопротеидов низкой плотности у их потомства.

2. Выяснить степень взаимосвязи мезвду концентрацией липидов в крови матерей с параметрами липидного обмена у их потомства.

Научная новизна работы. В настоящей работе впервые изучена возрастная динамика (от прекращения вскармливания до взрослого состояния) массы тела и содержания ХС и ТГ в крови потомства крольчих с ГХС во время беременности и лактации. Установлено, что умеренная ГХС у самок не оказывала значительного влияния на концентрацию ХС в крови их потомства на

протяжении всего периода наблюдения и приводила к снижению массы тела у крольчат.

Обнаружено наличие скрытых нарушений в регуляции гомеостаза ХС у взрослого потомства самок с алиментарной ГХС, проявившихся в виде гиперреакции на острую жировую нагрузку. При этом выраженность обнаруженных изменений в обмене ХС у кроликов зависела от его содержания в плазме крови их матерей.

Более высокая гиперлипидемия после жировой нагрузки у потомства самок с алиментарной ГХС по сравнению с потомством самок с нормолипидемией не является результатом замедления катаболизма богатых ХС ano В-содержащих липопротеидов, а связана, скорее всего, с повышенным их образованием.

Научно-практическая значимость работы. Полученные в работе данные расширяют существующие представления о долговременном влиянии повышенного поступления в организм экзогенного ХС в пре- и раннем постнатальном периодах развития млекопитающих (кроликов) на механизмы регуляции холестеринового обмена. В частности, это влияние проявилось в повышении поступления в кровь липопротеидов при жировой нагрузке без адекватного изменения функционирования системы их катаболизма. Таким образом, выявилась сниженная способность взрослого организма справляться с избытком экзогенного ХС.

Негативное влияние умеренной ГХС у беременных или лактирующих матерей как на обмен липидов, так и общее развитие (отставание в весе) у их детенышей необходимо учитывать при подборе диеты для беременных женщин и при составлении молочных смесей для детского питания.

Основные положепия, выносимые на защиту.

1. Концентрация ХС и ТГ в сыворотке крови крольчат после прекращения грудного вскармливания выше, чем у взрослых животных.

2. Наличие умеренной ГХС у крольчих во время беременности и лактации не оказывает существенного влияния на содержание ХС в крови у взрослого потомства.

3. Острая жировая нагрузка приводит к более высокой и длительной гиперлипидемии у потомства самок, получавших ХС с кормом во время беременности и лактации. Содержание ХС в крови и кинетические параметры его обмена у кроликов после жировой нагрузки зависят от концентрации ХС в крови их матерей.

4. Гиперреакция на жировую нагрузку у потомства самок с алиментарной ГХС не является результатом замедленного удаления аполипопротеин (ano) В-

содержащих липопротеидов (ЛП) из крови, а связана, скорее всего, с повышенным их поступлением в кровь.

H.Н.Аничкова (Санкт-Петербург, 1995); на Конференции молодых физиологов и биохимиков (Санкт-Петербург, 1995); на заседаниях отдела биохимии НИИЭМ РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано пять работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 147 машинописных страницах; состоит из разделов: Введение, Обзор литературы, Материалы и методы исследования, Результаты и обсуждение, Заключение, Выводы и Список литературы. Работа содержит 9 таблиц, 5 схем, 12 рисунков. Список литературы включает 183 источника (14 отечественных и 169 иностранных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Экспериментальные животные: схема получения потомства от самок с умеренной алиментарной гиперхолестерннемией.

Все опыты проведены на кроликах породы шиншилла, являющихся общепризнанной экспериментальной моделью атеросклероза. Для получения потомства брали молодых крольчих весом 2,7 - 3,2 кг.

Получено потомство 3-х групп: 1-ая - от 4 самок, находившихся на обычном лабораторном рационе (контроль; 26 животных); 2-ая - от 5 самок, которые получали ХС с кормом в количестве 0,5 г/сутки во второй половине беременности (с 16 дня) в течение одной недели и затем по 0,25 г/сутки до конца беременности и в период лактации, исключая субботы и воскресенья (беременность и лактация; 20 животных); 3-ья - от 2 самок, получавших ХС с кормом в количестве 1,0 г/сутки в течение всего периода лактации, исключая субботы и воскресенья (лактация; 15 животных).

О степени алиментарной ГХС у самок судили по содержанию ХС в сыворотке крови, полученной в конце периода кормления их ХС (через 30 дней периода лактации).

У крольчат первое определение содержания липидов (ХС и ТГ) в сыворотке крови производили в 6-ти недельном возрасте. В дальнейшем для изучения возрастной динамики уровня липидов кровь у потомства брали в возрасте: 15-20 недель (в период полового созревания) и 35 - 40 недель (во

взрослом состоянии). На этих же сроках взвешивали животных. Все измерения и забор крови из краевой вены уха производили утром натощак до приёма корма.

2. Изучение влияния острой жировой нагрузки на уровень липидов у крольчат.

Острую жировую нагрузку у крольчат проводили через 14 - 18 и 30 - 32 недели после рождения. Отсутствие существенных различий в результатах двух серий позволили нам объединить данные этих экспериментов. В опытах использовано: 13 контрольных крольчат, 10 животных 2-ой группы и 8 - 3-ей.

В качестве жировой нагрузки использовали 10% раствор ХС в подсолнечном масле в обшей дозе 600 мг/кг веса тела, разделённой на три равные части и введённой в течение суток для обеспечения более полного всасывания. Постановка опыта осуществлялась следующим образом: в 1-ый день утром до кормления брали кровь (исходная проба) и вслед за этим с помощью специального шприца вводили per os 10% раствор ХС. Вечером этого же дня делали повторное введение такого же количества раствора ХС. На следующий день утром вновь брали кровь (24 ч.) и вводили ту же дозу ХС третий раз. После этого кровь брали через 48, 72, 96 и 168 ч. от начала опыта. Кровь для определения ХС, ТГ и ano В брали из краевой вены уха утром, натощак.

Для количественной характеристики динамики изменений уровня ХС сыворотки крови в ответ на жировую нагрузку были рассчитаны скорости нарастания его содержания в сыворотке крови и скорости его элиминации из кровотока:

В - А ВЕС КРОЛИКА (г)

С= V------- (мг/ч); V=--------------- (мл)

t 0,13x 1,022 (г/мл)

А - исходная концентрация ХС в сыворотке крови для данного промежутка времени, мг/мл; В - конечная концентрация ХС в сыворотке крови для данного промежутка времени, мг/мл; t - время в часах; V - объём плазмы крови кролика, мл; 1,022 - плотность сыворотки кролика, г/мл; 0,13 - доля сыворотки крови от общей массы тела кролика.

3. Изучение скорости катаболизма ЛПНП у кроликов.

Для изучения скорости элиминации из крови ЛП низкой плотности (ЛПНП) у крольчат контрольной и опытных групп использовали ЛПНП человека. Постановку эксперимента осуществляли следующим образом: утром натощак брали кровь из краевой вены уха (исходная проба), затем внутривенно в другое ухо вводили раствор ЛПНП человека из расчёта по белку 15 мг на 1 кг массы тела. Кровь брали через 10,15, 30,60, 120, 180,240 и 300 минут.

О скорости элиминации ЛПНП из крови судили 1) по динамике изменения содержания ano В человека, которое определяли методом ракетного иммуно-

электрофореза с помощью моноспецифической антисыворотки, полученной нами, как описано ниже; 2) по изменению содержания ХС в сыворотке крови.

В этих опытах рассчитывалась также скорость удаления из крови ano В человека. Формулы для расчёта использовались те же, что и в опытах с острой жировой нагрузкой (см. предыдущий раздел), только в данном случае: А -исходная концентрация ano В в сыворотке крови для данного промежутка времени, мг/мл; В - конечная концентрация ano В в сыворотке крови для данного промежутка времени, мг/мл. Выбранные периоды времени отражают линейные изменения в уровне ano В человека в крови кроликов.

4. Определение содержания лнпндов в крови.

ХС и ТГ определяли с помощью автоанализатора АА-П фирмы "Technicon" (США) по методу, описанному Трюфановым В.Ф. и Сучковой С.И. (1980).

5. Препаративное выделение ЛПНП.

ЛПНП выделяли методом последовательного препаративного ультрацентрифугирования (Havel R.J., 1955) в диапазоне плотности 1,030 - 1,050 г/мл. Белок в ЛП определяли по методу Lowry О.Н. et al. (1951).

6. Получение иммунных сывороток к аполипопротеину В.

Иммунные сыворотки против ano В человека получали иммунизацией кроликов по методу Curry M.D. et al. (1976) 1 мл смеси раствора ЛПНП человека с полным адьювантом Фрейнда (1:1), вводимой внутрибрюшинно. Количество инъецируемых ЛПНП составляло по белку 2 - 2,5 мг на животное. Смесь вводили 3 раза с интервалами 14 дней. Забор крови производили из краевой вены уха через 10-14 дней после последней иммунизации.

Моноспецифическую антисыворотку к ano В кролика получали иммунизацией морских свинок по описанной выше схеме из расчёта 50 мкг белка на животное. Кровь брали путём сердечной пункции.

Специфичность иммунных сывороток проверяли методом двойной иммунодифузии (Ouchterlony О., 1967) и иммуноэлектрофореза.

7. Определение аполипопротеина В методом ракетного иммуноэлектрофореза.

Электрофорез проводился в агарозном геле, содержащем кроличью антисыворотку к человеческому ano В или антисыворотку морской свинки к ano В кролика (Харбоу Н., Ингильд А., 1977; Alaupovic Р. et al., 1978).

Гель готовили из смеси 1,5%-ой агарозы и 5%-ого декстрана 15000-20000, расплавленной в 0,025 М вероналовом буфере (pH 8,6). 40 мкл иммунной сыворотки добавляли к 20 мл жидкого геля. Условия электрофореза: общее напряжение 70 В, напряжение поля 8 В/см, время 20 ч. при включённой системе охлаждения. Преципитаты окрашивали Кумасси бриллиантовым голубым.

В качестве стандарта при построении калибровочной кривой использовали фракцию ЛПНП с гидратированной плотностью 1,030 - 1,050 г/мл, количество ano В в которой определяли по методу, описанному Капе I.P. (1973). Разведение стандартных растворов ЛПНП, с известным содержанием ano В, для построения калибровочной кривой осуществляли свободной от ЛП плазмой крови (Rosseneu М., 1981).

8. Статистическая обработка экспериментальных данных.

Все расчеты выполнялись на персональном компьютере IBM AT - 286/287 в рамках пакета прикладных статистических программ Statgrafics (версия 5,0). Результаты ракетного иммуноэлектрофореза обрабатывали методами регрессионного анализа. Статистическая обработка данных и расчёт достоверности проводили по критериям Стьюдента. В таблице № 1 из-за значительного разброса данных для оценки значимости различий между выборками использовали непараметрическую статистику (тест знаков, Wilcox тест). Корреляционный анализ проводился по методу Спирмена. Данные выражались в средних и ошибке средних (М±т).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Уровень липидов в сыворотке крови самок.

Как указывалось, исследования проведены на потомстве крольчих, находившихся в периоды беременности и лактации на различных пищевых режимах (с ХС и без него). Содержание ХС и ТГ в сыворотке крови самок отражено в табл. 1.

Таблица 1. Содержание ХС и ТГ в сыворотке крови самок (М±т).

Серия опыта Холестерин, мг/дл Триглицериды, мг/дл

до беременности в конце периода лактации до беременности в конце периода лактации

Контроль(п=4) 60,2± 11,2 54,5±4,9 67,0+16,3 52,2±9,5

Холестериновый рацион в период беременности и лактации (п=5) 59,2±4,9 172,2+86,0 * 110,7+24,7 61,8+10,6

Холестериновый рацион в период лактации (п=2) 75,0±4,0 187,0±37,0 * 86,0±24,0 57,0±11,0

Примечание: * - достоверность различий с контрольной группой (р<0,01).

Из представленных данных видно, что у крольчих экспериментальных групп концентрация ХС к моменту прекращения кормления их ХС более, чем в

2,5 раза превысила его исходный уровень, в то время как у контрольных самок уровень ХС практически не изменился. Основываясь на данных литературы (Roberts D.C., West С.Е., 1974; Kandeh М.М. et al., 1993; Nielsen M.O., Jakobsen K., 1994 и др.) можно предположить, что развившаяся алиментарная ГХС у животных 2-ой и 3-ей групп привела к избыточному поступлению ХС к детенышам через плаценту и с молоком матери.

В отличие от ХС, содержание ТГ в сыворотке крови самок к концу периода лактации не превысило исходный уровень, скорее наметилась тенденция к снижению (различия по отношению к первоначальному уровню не были статистически значимы).

Таким образом, содержание самок в периоды беременности и лактации на рационе, богатом ХС, привело к развитию у них ГХС, не сочетающейся с триглицеридемией (ГТГ), что, до некоторой степени, облегчало трактовку получаемых результатов.

2. Возрастная динамика уровня лнпидов сыворотки крови и массы тела у крольчат, родившихся у самок с алиментарной гиперхолестеринемией

Прежде всего представлялось важным изучить динамику изменений уровня липидов и массы тела детенышей самок, кормленных ХС, в процессе их развития от рождения до взрослого состояния. Необходимость подобного рода исследования подчеркивалась неоднозначностью имеющихся в литературе сведений по наблюдениям за развитием потомства различных животных и отсутствием подобных данных, касающихся крольчат, родившихся у самок с алиментарной ГХС.

2.1 Возрастная динамика концентрации холестерина в крови.

Во всех группах содержание ХС у крольчат, определённое в возрасте 6-ти недель, колебалось в широких пределах (от 46 до 249 мг/дл) и нередко на этом сроке оно было выше, чем у взрослых животных. Динамика изменений концентрации ХС в процессе роста детенышей представлена на рис. 1.

Как видно, в контрольной группе самое высокое содержание ХС было зарегистрировано в 6-недельном возрасте крольчат. К 15 - 20 неделям его концентрация снизилась почти в 2 раза, и в 35 - 40 недель она сохранилась на этом же уровне.

Динамика уровня ХС у крольчат 2-ой группы (беременность и лактация) напоминала таковую в контроле. При этом на протяжении всего периода наблюдения абсолютная концентрация ХС в крови в опытной группе была несколько выше, чем в контроле, хотя различия были недостоверны.

У крольчат 3-ей группы (лактация) зарегистрировано при первом анализе самое низкое содержание ХС. К 35 - 40 недельному возрасту концентрация ХС

хотя и сохранилась на том же уровне, но оказалась несколько выше, чем в контроле.

Таким образом, можно сказать, что в целом наличие алиментарной ГХС у крольчих не оказало значительного влияния на содержание ХС в крови их потомства вплоть до взрослого состояния.

1го

100

= 0 0

х1 10

1 хЗ

1 г з

1 г

1^3

в 15 - 20 35

Возраст ( недели)

Рис 1. Влияние алиментарной гиперхолестеринемии у самок в период беременности и лактации на возрастную динамику содержания холестерина в сыворотке крови у их потомства:

1 - потомство самок с нормолипидемией (контроль);

2 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

беременности и лактации;

3 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

лактации.

* - достоверность различий с контрольной группой (р<0,05); ** - достоверность различий с контрольной группой (0,05<р<0,1); а - достоверность различий между опытными сериями (р<0,05).

2.2 Возрастная динамика концентрации триглицеридов в крови.

Содержание ТГ в сыворотке крови у 6-недельных крольчат, также как и содержание ХС, было заметно выше, чем у взрослых животных, хотя характер изменений в уровне ТГ с возрастом у развивающегося потомства несколько отличался от такового в уровне ХС. В этом возрасте концентрация ТГ составила по группам: 175,1±12,4 (контроль), 180,3+40,6 (беременность и лактация) и 221,4+25,7 мг/дл (лактация).

В период полового созревания (15-20 недель) содержание ТГ у кроликов контрольной группы осталось практически на том же уровне (173,9±16,0 мг/дл), а у крольчат 2-ой группы (беременность и лактация) оно упало настолько, что стало достоверно ниже, чем в контроле (114,7±11,2 мг/дл; р<0,05).

В конце периода наблюдений (35 - 40 недель) во всех группах содержание ТГ снизилось. На этой стадии самая высокая концентрация ТГ зарегистрирована во 2-ой группе (76,8±5,7 мг/дл), в которой она достоверно превысила уровень как в контроле (60,4+5,8 мг/дл; р<0,05), так и в другой опытной группе (53,6±8,8 мг/дл; р<0,05).

Следовательно, ГТГ, обнаруженная у животных всех трех групп в 6-недельном возрасте, в дальнейшем снижалась, и к концу периода наблюдений она практически исчезла. В целом, имело место более резкое снижение содержание ТГ в сыворотке крови кроликов всех трех групп к концу наблюдения по сравнению с таковым ХС.

Таким образом, повышенное содержание липидов, наблюдаемое у крольчат сразу после прекращения их вскармливания матерью, снижается с возрастом, что, в основном, совпадает с результатами других авторов (Friedman M., Byers S.O., 1961; Roberts D.C.K, et al., 1979; Gaines D.W. et al., 1994; Pullmann R. et al., 1994 и др.).

2.3 Возрастная динамика массы тела

Изучение изменений массы тела с возрастом у потомства нормальных и гиперхолестеринемических крольчих представляло несомненный интерес с точки зрения характеристики общего развития детенышей этих самок.

Во всех группах отмечался естественный рост массы тела животных с возрастом. О наличии определенных различий в общем развитии между детенышами контрольной (1-ая группа) и опытных групп (2-ая и 3-ья группы) в раннем постнатальном периоде свидетельствовала выраженная разница в весе в 6-недельном возрасте. У крольчат, чьи матери получали ХС с кормом во время беременности и лактации, наметилось явное отставание (в среднем приблизительно на 25%) в наращивании веса тела к этому сроку (1-ая группа -

0,680 ± 0,029; 2-ая - 0,518 ± 0,030; 3-я - 0,521 ±0,016 кг; р<0,01 по отношению к контролю для обеих групп).

В дальнейшем задержка в приросте массы тела сохранилась у детенышей самок, получавших ХС в период лактации (в возрасте 35 - 40 недель: 1-ая группа - 2,73 ± 0,12; 2-ая - 2,76 ± 0,12; 3-я - 2,27 ± 0,09 кг; р<0,05). 2.4 Корреляционный анализ

Для того, чтобы выяснить в какой степени найденные у потомства изменения в уровне липидов крови и веса зависят от содержания липидов в крови их матерей, был проведен корреляционный анализ с использованием объединенного цифрового материала по всем группам.

Наиболее существенное влияние на уровни липидов крови и массу тела у потомства оказывает ХС крови матери. Нами выявлено наличие как временных, так и длительных его связей с изучаемыми параметрами у крольчат. Впервые в наших опытах установлен чрезвычайно важный в биологическом отношении факт - наличие отрицательной корреляции между ХС крови самок и массой тела крольчат, которая наблюдалась как в раннем (6 недель), так и в позднем (35-40 недель) периодах постнатального развития (г=-0,351 и г=-0,520, р<0,01, в обоих случаях). Выявлено также наличие обратной взаимосвязи между содержанием ХС в крови матери и крольчат в 6-недельном возрасте г=-0,300; р<0,02), но с возрастом эта зависимость исчезала.

Таким образом, результаты данного раздела работы свидетельствуют о не ярко выраженном влиянии алиментарной ГХС у крольчих в периоды беременности и лактации на уровень ХС и ТГ в крови у потомства в течение всего периода наблюдения и о более заметном влиянии ГХС у самок на массу тела крольчат.

3. Реакция на острую жировую иагрузку кроликов, родившихся от крольчих с алиментарной гнперхолестеринемией

Данные литературы позволяют предполагать наличие возможных скрытых изменений в регуляции гомеостаза ХС у детенышей, которые могли проявиться лишь в особых условиях, в частности, под влиянием острой жировой нагрузки. 3.1 Изменение содержания холестерина в сыворотке крови после жировой нагрузки

Как указывалось, жировая нагрузка проводилась 3 раза в течение одних суток и затем велось наблюдение в течение 7 дней.

Характер изменений в уровне ХС в первые двое суток от начала опыта у крольчат всех трёх групп был сходен (рис.2). Максимальный подъем уровня ХС у большинства животных отмечался через 48 ч.

Вместе с тем, степень ГХС, развивающейся после жировой нагрузки, в опытных группах была значительно выше, чем в контрольной. Это различие по

отношению к контролю проявилось уже через сутки от начала эксперимента и сохранилось к 48 ч., после чего отмечался спад уровня ХС. В первых двух группах наблюдалось постепенное умеренное понижение концентрации ХС с сохранением значительно более высоких величин во 2-ой группе (беременность и лактация). У кроликов 3-ей группы (лактация) уровень ХС снижался быстрее, и к 96 ч. он не отличался от контроля.

В конце опыта (к 168 ч.) полного возврата содержания ХС в крови к исходным величинам не отмечалось ни в одной из групп, при этом у опытных животных оно было несколько выше, чем в контроле.

Время (часы)

Рис 2. Динамика содержания холестерина в сыворотке крови крольчат после жировой нагрузки:

1 - потомство самок с нормолипидемией (контроль)(п=13);

2 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

беременности и лактации (п=10);

3 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

лактации (п=8). * - достоверность различий с контрольной группой (р<0,05); ** - достоверность различий с контрольной группой (0,05<р<0,1); " - достоверность различий между опытными сериями (р<0,05).

3.2 Изменения содержания триглгщеридов в сыворотке крови после жировой нагрузки

Характер ГТГ, развивающейся после жировой нагрузки, заметно отличался от характера ГХС. Так, к 24 ч. содержание ТГ не изменилось ни в одной из групп. К 48 ч. оно повысилось только во 2-ой группе (беременность и лактация). Достоверные различия между опытными группами, с одной стороны, и контрольной, с другой, обнаружились лишь через 96 ч. Обращает на себя внимание, что за период от 96 ч. до 168 ч. ГТГ продолжала нарастать у всех животных. Однако, самый выраженный её подъём обнаружен у крольчат 2-ой группы.

Время (час)

Рис 3. Динамика содержания триглицеридов в сыворотке крови крольчат после жировой нагрузки:

1 - потомство самок с нормолипидемией (контроль) (п=13);

2 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

беременности и лактации (п=10);

3 - потомство самок, находившихся на холестериновом рационе во время

лактации (п=8). * - достоверность различий с контрольной группой (р<0,05); " - достоверность различий между опытными сериями (р<0,05).

Следовательно, повышение уровня ТГ в крови происходило в те сроки, когда содержание ХС уже снижалось, т.е. реакция со стороны обмена ТГ на жировую нагрузку у крольчат проявилась в более поздние сроки по сравнению с реакцией со стороны обмена ХС, что может указывать на возможную независимость изменений в обмене этих двух липидов в данных условиях.

3.3 Изменение содержания апопипопротеина В в сыворотке крови после жировой нагрузки

Динамика содержания ano В в сыворотке крови отражала в целом изменения концентраций ХС и ТГ. У крольчат всех серий наблюдался подъем уровня этого апобелка уже на ранних сроках эксперимента. К 48 ч. его содержание достигло максимального значения в 1-ой (контроль) и 3-ей (лактация) группах, превысив исходные значения в 1,8 и 2,2 раза, соответственно. Во 2-ой группе (беременность и лактация) концентрация ano В продолжала нарастать и пик её был достигнут только к 96 ч, когда она превосходила исходное значение более, чем в 2 раза. Начиная с 96 ч. и до конца эксперимента содержание ano В во всех группах довольно плавно снижалось. Однако, у кроликов 2-ой группы оно оставалось более высоким (на 40%), чем у детёнышей двух других групп.

Исходя из полученных нами данных о динамике изменений липидов и ano В, можно предположить, что на ранних стадиях жировой нагрузки происходит формирование и усиленная секреция в кровь липопротеидных частиц, обогащенных ХС, но обедненных ТГ, и лишь на более поздних стадиях в кровотоке появляются частицы с повышенным содержанием в них ТГ. При этом, у потомства крольчих, получавших холестериновый рацион в период беременности и лактации, гиперлипидемическая реакция на острую жировую нагрузку была более выраженной, чем у потомства контрольных самок.

3.4 Скорости поступления холестерина в кровь и его элиминации из кровотока после жировой нагрузки

Дтя более детальной характеристики сбалансированности процессов поступления ХС в кровь и его выведения из кровотока при приеме жира были рассчитаны коэффициенты, характеризующие скорости нарастания ХС в крови и удаления его из кровотока после жировой нагрузки, величины которых приведены в табл. 2.

Установлено, что в опытных группах скорость нарастания ХС в крови за период от начала опыта до 24 ч. и от начала опыта до 48 ч. была более высокой, чем в контроле.

В то же время скорости удаления ХС за период 48 - 96 ч. у животных всех групп были близки (табл.2). Подобная картина наблюдалась и при расчете относительных скоростей изменения концентраций ХС в крови животных.

Обращает на себя внимание отсутствие сопряженности в изменениях скоростей, характеризующих нарастание ХС в крови и элиминации его из кровотока, что свидетельствует об определенной автономности этих процессов, что особенно ярко проявилось во 2-ой группе.

Таблица 2. Скорости нарастания и удаления холестерина в/из сыворотки крови у крольчат после жировой нагрузки (М±т).

Серия опытов Скорость нарастания, мг/ч Скорость удаления, мг/ч

период от начала опыта до 24 ч период от начала опыта до 48 ч период от 48 ч до 96 ч

1 - контрольная (п=13) 2,032±0,423 2,382+0,478 1,057±0,332

2 -беременность и лактация (п=11) * 4,119±0,359 * 4,011±0,346 1,17010,444

3 - лактация (п=8) 3,699±0,423 * 3,249±0,470 1,624+0,233

Примечание: * - достоверность различий с контрольной группой (р<0,05).

Таким образом, на основании этих данных можно предполагать, что отмеченное в наших опытах усиление гиперхолестеринемической реакции на жировую нагрузку у потомства самок с алиментарной ГХС обусловлено, прежде всего, более интенсивным поступлением ХС в кровь, а не замедлением процессов его выведения из кровотока. 3.5 Корреляционный анализ

Результаты корреляционного анализа показали, что выраженность гиперхолестеринемической реакции у потомства зависит от уровня липидов, в первую очередь ХС, у матери. Это подтверждается положительными

Таблица 3. Коэффициенты корреляции между концентрациями липидов сыворотки крови самок и их детенышей после жировой нагрузки

ХС сыворотки крови крольчат ТГ сыворотки крови крольчат

исходи. 48 ч 72 ч 96 ч исходи. 48 ч 72 ч 96 ч

ХС сыворотки крови самки -0,027 * 0,599 * 0,461 0,081 0,078 0,254 ** 0,351 *** 0,377

ТГ сыворотки крови самки -0,274 0,328 0,142 -0,083 -0,058 -0,057 ** 0,396 0,102

Примечание: * - р<0,001; ** - р<0,05; *** - 0,1>р>0,05.

Таблица 4. Коэффициенты корреляции между содержанием липидов в крови самок и скоростями нарастания и удаления ХС в/из крови их детенышей после

жировой нагрузки

Скорость нарастания ХС исходи, сод. - 48 ч Скорость удаления ХС 48 ч - 96 ч

ХС сыворотки крови матери 0,524 * 0,526 **

ТГ сыворотки крови матери 0,314*** 0,457 **

Примечание: *-р<0,001; **-р<0,05; *** -0,1>р>0,05

корреляциями между содержанием ХС у крольчих, с одной стороны, и концентрациями ХС и ТГ на пике их повышения (табл.3), а также со скоростями нарастания и снижения ХС в крови (табл.4) у потомства, с другой стороны. Эти же корреляции с уровнем ТГ у самок были менее выраженными.

Таким образом, применение острой жировой нагрузки позволило выявить скрытые изменения в регуляции гомеостаза ХС у крольчат, матери которых имели алиментарную ГХС в период беременности и лактации. Эти изменения проявились в ускорении и усилении поступления липидов (в частности ХС) в составе ano В-содержащих ЛП в кровь после жировой нагрузки, что и привело к более выраженной гиперлипидемии. Важно отметить, что степень обнаруженных изменений в обмене ХС у крольчат зависела от его содержания в плазме крови их матерей.

4. Изучение скорости удаления ЛПЕШ из плазмы крови кроликов.

Приведенные выше экспериментальные данные указывают на несбалансированность процессов нарастания ХС в крови и выведения его из кровотока и на большую роль поступления повышенных количеств богатых ХС ЛП в кровоток. Для проверки роли процессов удаления богатых ХС частиц из кровотока в гиперреакции опытных животных на жировую нагрузку были проведены эксперименты с внутривенным введением кроликам больших доз ЛПНП человека, моделирующим последствия острой жировой нагрузки. О скорости удаления ЛПНП судили по динамике изменения концентрации ХС и ano В человека.

Из результатов, представленных в табл.5, видно, что содержание ХС снижалось довольно медленно, и в целом за период от 15 до 300 мин. оно уменьшилось на 36 - 40 %. При этом отчетливых различий между группами по темпам выведения ХС не выявлено.

Вторым критерием, использованным для оценки скорости выведения ЛПНП из крови кроликов, служили скорости удаления ano В человека и,

следовательно, содержащих их ЛПНП. Оказалась, что скорость элиминации ЛПНП из крови не отличалась достоверно у животных всех групп (табл.6).

Таблица 5. Содержание холестерина в сыворотке крови кроликов после внутривенного введения ЛПНП человека

Серия Холестерин, в % к 10 мин.

опытов 15 30 60 120 180 240 300

мин мин мин мин мин мин мин

1-контрольная М 100,2 97,2 93,6 80,5 71,1 66,4 60,3

(п=4) ш 1,5 1,6 0,9 3,8 4,4 2,2 4,2

2-беременность М 98,2 93,9 91,1 83,9 76,6 70,8 67,1

и лактация (п=3) m 2,0 1,7 2,8 2,2 4,9 3,5 4,6

3-лактация М 101,2 94,5 91,5 79,8 71,8 65,8 63,7

(п=6) ш 1,6 3,0 2,9 3,4 3,8 4,2 3,7

Таблица 6. Скорости удаления введенных внутривенно ЛПНП человека (по ano В) из крови кроликов (М+т)

Серия опытов Период от 30 до 180 мин Период от 30 до 240 мин

1-контрольная (п=4) 9,09+1,88 10,64±3,09

2-беременность и лактация (п=3) 10,80+3,60 8,45+2,58

3-лактация (п=6) 12,50+4,49 11,72+3,30

Таким образом, при внутривенном введении ЛПНП, как и в условиях жировой нагрузки, мы не наблюдали существенных различий в скорости удаления из крови опытных кроликов ни ХС, ни ano В, что подтверждает высказанное ранее предположение о том, что у потомства самок с алиментарной ГХС не замедляется процесс выведения ХС из кровотока.

Аналогичный вывод вытекает из корреляционного анализа, который не обнаружил зависимости скорости удаления ano В из кровотока у потомства от содержания ХС в сыворотке крови матери.

Эти данные свидетельствуют о том, что гиперреакция кроликов, родившихся у самок с алиментарной ГХС, на жировую нагрузку связана, главным образом, с увеличением скорости образования ЛП, а не с замедлением их катаболизма.

Суммируя полученные результаты, следует отметить, что умеренная алиментарная ГХС у крольчих мало влияла на уровень липидов в плазме крови их потомства, однако приводила к существенному усилению гиперхолестсринемического (гипсрлипидемического) ответа на жировую нагрузку. Причем выраженность этой реакции у кроликов во взрослом состоянии положительно коррелировала с уровнем ХС в крови их матерей, что позволяет с большей долей вероятности предполагать, что именно ГХС матери является причиной этой гиперреакции.

Показательно, что более выраженная ГХС после жировой нагрузки у кроликов была связана, главным образом, с ускоренным поступлением ХС в кровь, т.е. с повышенной продукцией ЛП. В то же время, удаление последних из крови (катаболизм) практически не изменялось под влиянием повышенного поступления экзогенного ХС в ранних периодах развития животных. Можно полагать, что повышение уровня ХС в клетках печени и кишечника во второй половине внутриутробного развития и в раннем постнатальном периоде приводит к активации секреции ЛП и эта способность к повышенной продукции ЛП в ответ на жировую нагрузку сохраняется у животных длительное время (вплоть до взрослого состояния).

Следует отметить, что у кроликов, родившихся у нормальных крольчих, грудное вскармливание также сопровождалось повышением уровня липидов в крови. Однако после перевода их на растительный корм концентрации липидов снижались. Тем не менее, даже на этом фоне обогащение материнского молока ХС, или появление в молоке неких компонентов в ответ на ГХС у самок, вызывало у крольчат существенные перестройки обмена липидов, коррелирующие со степенью ГХС у их матерей.

Вызывает интерес довольно неожиданная находка о задержке в развитии животных, родившихся или вскармливавшихся самками с ГХС, о чем свидетельствует наличие отрицательной корреляции веса крольчат с уровнем ХС у их матерей на протяжении всего периода исследования.

В целом, полученные в работе результаты позволяют сделать вывод о долговременном отчётливом негативном влиянии потребления повышенных количеств ХС самками-крольчихами в периоды беременности и лактации на регуляцию гомеостаза ХС у потомства, что наиболее ярко проявляется в условиях метаболических сдвигов, вызванных острой жировой нагрузкой. Таким образом, наряду с наследственными факторами нарушения в гомеостазе ХС и ТГ могут обуславливаться наличием гиперлипидемии у матери в период беременности и лактации. Не менее значимо отрицательное влияние даже умеренной ГХС самок на общее развитие их потомства.

ВЫВОДЫ

1. Содержание холестерина и триглицеридов в плазме крови кроликов в возрасте 6 недель (вскоре после окончания грудного вскармливания) было значительно выше, чем у этих же животных во взрослом состоянии.

2. Алиментарная гиперхолестеринемия у крольчих в период беременности и лактации не оказала выраженного влияния на содержание холестерина в крови их потомства на протяжении всего периода наблюдения (6 - 40 недель жизни).

3. Потомство крольчих с умеренной алиментарной гиперхолестеринемией в период беременности и лактации имело меньшую массу тела в возрасте 6 недель, чем крольчата, родившиеся от самок с нормолипидемией. Сниженная масса тела сохранялась у потомства крольчих, получавших холестерин во время лактации, на протяжении всего периода наблюдения. Масса тела крольчат в возрасте 6 недель отрицательно коррелировала с содержанием холестерина в крови их матерей. С возрастом эта зависимость не исчезала.

4. Острая жировая нагрузка у взрослых кроликов вызывала более выраженную гиперлипидемию (гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию) у животных, родившихся или вскармливавшихся самками с алиментарной гиперхолестеринемией. Максимальное повышение концентрации холестерина в крови наблюдалось у животных через 48 часов после начала жировой нагрузки, тогда как уровень триглицеридов достигал своего максимума значительно позже. Содержание холестерина в крови кроликов после жировой нагрузки положительно коррелировало с уровнем холестерина в крови их матерей.

5. Абсолютная и относительная скорость нарастания концентрации холестерина в крови кроликов после жировой нагрузки была значительно выше у животных, родившихся или вскармливавшихся самками с алиментарной гиперхолестеринемией, тогда как скорость элиминации холестерина из крови была близкой во всех исследованных группах. Кинетические параметры обмена холестерина в крови кроликов после жировой нагрузки прямо зависели от концентрации холестерина в крови их матерей.

6. Скорость элиминации из крови кроликов введенных внутривенно липопротеидов низкой плотности человека была близкой у животных всех исследованных групп и не зависела от содержания холестерина в крови их матерей.

7. Изменения в метаболизме холестерина у потомства самок, получавших холестерин с кормом в период беременности и/или лактации, проявляются

наиболее ярко при жировых нагрузках в виде значительно более выраженной гиперлипидемии, связанной, главным образом, с повышением продукции липопротеидов, а не замедлением их катаболизма.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Никульчева Н.Г., Денисенко А.Д., Савельева И.Н., Трюфанов В.Ф., Олейникова Т.Н. Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих в период беременности и/или лактации на липиды крови у потомства.// Тез. докл. IV симпозиума по биохимии липидов. - Москва, 1995. -С. 72-73.

2. Савельева И.Н. Динамика изменений липидов крови у потомства крольчих с алиментарной гиперхолестеринемией.// Тез. докл. конференции молодых физиологов и биохимиков России. - Санкт-Петербург, 1995. - С. 161.

3. Савельева И.Н., Никульчева Н.Г., Олейникова Т.Н., Денисенко А.Д. Реакция на острую жировую нагрузку самцов и самок, родившихся у крольчих с алиментарной гиперхолестеринемией.// Тез. докл. симпозиума, посвященного 110-летию Н.Н.Аничкова. - Санкт-Петербург, 1995. - С. 95.

4. Денисенко А.Д., Савельева И.Н., Никульчева Н.Г., Плавинский СЛ., Трюфанов В.Ф., Олейникова Г.Н. Состояние липидного обмена у кроликов, родившихся от самок с умеренной алиментарной гиперхолестеринемией.// Биохимия. - 1996.-Т.61.-Вып.9.-С. 1648-1657.

5. Савельева И.Н., Никульчева Н.Г., Денисенко А.Д. Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих на уровень липидов в крови у их потомства.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1998.-Т.125. - №4.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Савельева, Инна Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.6

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Обмен холестерина в организме.12

1.1 Поступление холестерина в организм и его биосинтез.14

1.2 Катаболизм и выведение холестерина из организма.17

1.3 Транспорт холестерина в крови.21

1.3.1 Транспорт экзогенного холестерина.23

1.3.2 Транспорт эндогенного холестерина.25

1.3.3 Обратный транспорт холестерина.28

1.3.4 Влияние жировых нагрузок на обмен холестерина.31

2. Обмен липидов у животных и человека в онтогенезе

2.1 Особенности обмена липидов в пренатальный период развития

2.1.1 Проницаемость плаценты для липидов. 33

2.1.2 Уровень липидов в крови и активность ключевых ферментативных систем у плодов.36

2.1.3 Влияние холестериновых нагрузок на гомеостаз холестерина.38

2.2 Особенности обмена липидов в ранний постнатальный период развития и у взрослых особей

2.2.1 Уровень липидов в крови и активность ферментативных систем, контролирующих обмен холестерина, у сосунков 42

2.2.2 Влияние холестериновых нагрузок на гомеостаз холестерина во время вскармливания.46

2.2.3 Модуляция гомеостаза холестерина у взрослых особей диетой в ранние периоды развития. 48

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на гомеостаз холестерина у потомства"

Актуальность темы. Общепризнано, что гиперхолестеринемия является одним из ведущих факторов риска развития атеросклероза и ишемической болезни сердца. Концентрация холестерина в крови, как известно, определяется как генетическими, так и средовыми факторами, среди которых важное место отводится диете, и в первую очередь, потреблению экзогенного холестерина. К настоящему времени накопилось значительное количество данных, указывающих на отрицательное влияние повышенного количества холестерина в диете на его гомеостаз у взрослых. Менее изученным остается вопрос о том, какое влияние оказывает избыточное поступление холестерина в ранние периоды развития, в частности ненаследственная гиперхолестеринемия у матери во время беременности и лактации, на обмен холестерина у потомства.

Из предыдущих исследований известно, что чем выше уровень холестерина в крови матери, тем больше его переносится через плаценту к плоду (Волынский В.М., Микушкин М.К., 1964; Friedman М., Byers S.O., 1961; Hassan A.S. et al., 1981). Содержание холестерина в молоке лактирующих самок (крыс, крольчих) также увеличивается при гиперхолестеринемии, хотя степень нарастания концентрации холестерина в молоке, как правило, значительно меньше, чем в плазме крови самки (Kris-Etherton P.M. et al., 1979; Whatley J.B. et al., 1981).

Внимание исследователей к проблеме влияния гиперхолестеринемии у матери на метаболизм холестерина у потомства привлекло сообщение Reizer R. и Sidelman Z. (1972) о развитии устойчивости к развитию алиментарной гиперхолестеринемии у взрослого потомства крыс-самок, имевших повышенный уровень холестерина в крови во время лактации. Впоследствии было установлено, что повышенное поступление холестерина через плаценту (Nassem S. М. et al., 1980) или с молоком (Kris-Etherton P.M. et al., 1979; Whatley

J.B. et al., 1981) при гиперхолестеринемии у матери приводит к повышению концентрации холестерина в крови плодов, новорожденных или сосунков, что сопровождается изменением активности ряда ферментов липидного обмена. Однако эти изменения сглаживаются со временем (Whatley J.B. et al., 1981; Fomon S.J. et al., 1984; Mize C.E., Vavy R., 1991), что авторы связывают с переходом на гетерогенное питание после периода грудного вскармливания.

Что же касается влияния поступления избыточного количества экзогенного холестерина в пре- и раннем постнатальном периодах развития на устойчивость к холестериновым нагрузкам взрослых особей, то имеющиеся к настоящему времени результаты неоднозначны и противоречивы. В противоречие с упоминавшимися выше данными Reizer R. и Sidelman Z. (1972) в ряде работ не было найдено никаких изменений в реакции на холестериновую нагрузку у животных разных видов (крыс, морских свинок, тушканчиков), получавших повышенное количество холестерина в ранние периоды жизни (Rris-Etherton P.M. et al., 1979; Li J.R. et al., 1980; Temmerman A.M. et al., 1989). В то же время в крупном ретроспективном исследовании было обнаружено негативное влияние высокого потребления холестерина в раннем постнатальном периоде жизни на обмен холестерина и смертность от ишемической болезни сердца (Fall C.H.D. et al, 1992). Механизмы такого влияния остаются неясными. Вместе с тем, ситуации, когда мать во время беременности и грудного вскармливания имеет гиперхолестеринемию различной степени выраженности, встречаются довольно часто. Поэтому изучение влияния гиперхолестеринемии у матери на метаболизм холестерина у их детей представляется необходимым и актуальным.

Таким образом, несмотря на важность проблемы влияния поступления избыточного количества холестерина в развивающийся организм на гомеостаз этого липида во взрослом состоянии, она далека от своего разрешения. Расхождение точек зрения по этому вопросу обусловлено, по-видимому, рядом причин и прежде всего различиями в способах воздействия на плод и сосунков; кроме того лишь в немногих работах изучалось влияние повторных жировых нагрузок на обмен липидов у потомства самок с ненаследственной гиперхолестеринемией, которые позволяют выявлять и более детально изучать скрытые нарушения в метаболизме липидов.

Цели и задачи исследования. Цель работы состояла в выяснении характера влияния умеренной алиментарной гиперхолестеринемии крольчих во время беременности и лактации на метаболизм холестерина и триглицеридов у потомства в процессе развития до взрослого состояния и выяснение возможных механизмов этого влияния.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние наличия умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на: а) возрастную динамику массы тела и уровня липидов у их потомства; б) реакцию со стороны липидного обмена на острую жировую нагрузку у потомства; в) скорость катаболизма (удаления из крови) липопротеидов низкой плотности у их потомства.

2. Выяснить степень взаимосвязи между концентрацией липидов в крови матерей с параметрами липидного обмена у их потомства.

Научная новизна работы. В настоящей работе впервые изучена возрастная динамика (от прекращения вскармливания до взрослого состояния) массы тела и содержания холестерина и триглицеридов в крови потомства крольчих с гиперхолестеринемией во время беременности и лактации. Установлено, что умеренная гиперхолестеринемия у самок не оказывала значительного влияния на концентрацию холестерина в крови их потомства на протяжении всего периода наблюдения и приводила к снижению массы тела у крольчат.

Обнаружено наличие скрытых нарушений в регуляции гомеостаза холестерина у взрослого потомства самок с алиментарной гиперхолестеринемией, проявившихся в виде гиперреакции на острую жировую нагрузку. При этом выраженность обнаруженных изменений в обмене холестерина у кроликов зависела от его содержания в плазме крови их матерей.

Более высокая гиперлипидемия после жировой нагрузки у потомства самок с алиментарной гиперхолестеринемией по сравнению с потомством самок с нормолипидемией не является результатом замедления катаболизма богатых холестерином аполипопротеин (ano) В-содержащих липопротеидов, а связана, скорее всего, с повышенным их образованием.

Научно-практическая значимость работы. Полученные в работе данные расширяют существующие представления о долговременном влиянии повышенного поступления в организм экзогенного холестерина в пре- и раннем постнатальном периодах развития млекопитающих (кроликов) на механизмы регуляции холестеринового обмена. В частности, это влияние проявилось в повышении поступления в кровь липопротеидов при жировой нагрузке без адекватного изменения функционирования системы их катаболизма. Таким образом, выявилась сниженная способность взрослого организма справляться с избытком экзогенного ХС.

Негативное влияние умеренной гиперхолестеринемии у беременных или лактирующих матерей как на обмен липидов, так и общее развитие (отставание в весе) у их детенышей необходимо учитывать при подборе диеты для беременных женщин и при составлении молочных смесей для детского питания.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Концентрация холестерина и триглицеридов в сыворотке крови крольчат после прекращения грудного вскармливания выше, чем у взрослых животных.

2. Наличие умеренной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации не оказывает существенного влияния на содержание холестерина в крови у взрослого потомства.

3. Острая жировая нагрузка приводит к более высокой и длительной гиперлипидемии у потомства самок, получавших холестерин с кормом во время беременности и лактации. Содержание холестерина в крови и кинетические параметры его обмена у кроликов после жировой нагрузки зависят от концентрации холестерина в крови их матерей.

4. Гиперреакция на жировую нагрузку у потомства самок с алиментарной гиперхолестеринемией не является результатом замедленного удаления ano B-содержащих липопротеидов из крови, а связана, скорее всего, с повышенным их поступлением в кровь.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на VI Симпозиуме по биохимии липидов (Санкт-Петербург, 1994); на Симпозиуме "Липиды и атеросклероз", посвященном 110-летию со дня рождения академика Н.Н.Аничкова (Санкт-Петербург, 1995); на Конференции молодых физиологов и биохимиков (Санкт-Петербург, 1995); на заседаниях отдела биохимии НИИЭМ РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано пять работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 машинописных страницах; состоит из разделов: Введение, Обзор литературы,

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Хорошо известно, что каждая клетка в организме млекопитающих содержит холестерин. Он является компонентом плазматических мембран и мембран клеточных органелл, играя большую роль в их физико-химическом состоянии, а также в регуляции активности связанных с мембранами ферментов. Холестерин является источником образования стероидных гормонов и желчных кислот. Все это свидетельствует о важном физиологическом значении холестерина. Вместе с тем, в настоящее время можно считать доказанным участие холестерина в развитии такого опасного заболевания, как атеросклероз, одним из факторов риска возникновения которого является наличие гиперхолестеринемии. Все это объясняет тот огромный интерес, который проявляется к проблеме регуляции обмена холестерина в норме и к выяснению тех факторов, действие которых может приводить к нарушению физиологической регуляции гомеостаза этого липида и развитию гиперхолестеринемии.

В последние десятилетия достигнуты большие успехи в изучении генетических основ развития гиперхолестеринемии и атеросклероза. Вместе с тем, основную массу пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями составляют лица с ненаследственными формами нарушений обмена липидов, обусловленные воздействием факторов внешней среды. Среди последних важное место отводится диете.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Савельева, Инна Николаевна

ВЫВОДЫ

5. Абсолютная и относительная скорость нарастания концентрации холестерина в крови кроликов после жировой нагрузки была значительно

120 выше у животных, родившихся или вскармливавшихся самками с алиментарной гиперхолестеринемией, тогда как скорость элиминации холестерина из крови была близкой во всех исследованных группах. Кинетические параметры обмена холестерина в крови кроликов после жировой нагрузки прямо зависели от концентрации холестерина в крови их матерей.

7. Изменения в метаболизме холестерина у потомства самок, получавших холестерин с кормом в период беременности и/или лактации, проявляются наиболее ярко при жировых нагрузках в виде значительно более выраженной гиперлипидемии, связанной, главным образом, с повышением продукции липопротеидов, а не замедлением их катаболизма.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что развитие атеросклероза тесно связано с гиперхолестеринемией, поэтому особое внимание уделяется факторам, влияющим на уровень холестерина в крови. Их можно подразделить на генетические и средовые, среди которых важное место отводится диете. К настоящему моменту менее изученными являются особенности влияния липидного состава пре- и ранней постнатальных диет как на формирование гомеостаза холестерина, так и на общее развитие потомства.

В многочисленных исследованиях, проведенных на животных и людях, установлено, что значительная доля холестерина сыворотки и печени плодов поступает из организма матери (Connor W.E., Lin D.S., 1967; Calandra S. et al., 1975; Lin D.S. et al., 1977 и др.). Повышенный уровень холестерина у беременной самки приводит к активизации плацентарного транспорта холестерина, что оказывает влияние на уровни липидов в крови плода, а также на активность ряда ферментов, участвующих в их регуляции (Hassan A.S. et al., 1981; Yount N.Y., McNamara D.J., 1991 ; Llirbat В. et al., 1997 и др.). Из данных литературы известно, что большая часть холестерина в молоке вскармливающей самки имеет плазменное происхождение (Conor W.E., Lin D.S., 1967; Kandeh M.M. et al., 1993; Neilsen M.O., Jakobsen К., 1994). При этом введение холестерина в рацион самки приводит к повышению его содержания в молоке, но степень увеличения концентрации этого липида в молоке значительно ниже таковой в плазме (Kris-Etherton P.M. et al., 1979; Whatley J.B. et al., 1981). Тем не менее, можно полагать, что добавление холестерина в рацион беременной и/или лактирующей самки может приводить не только к количественным, но и к качественным изменениям в составе молока, которые могут оказать влияние на обмен липидов у потомства. Однако, имеющиеся в литературе сообщения о влиянии повышенного содержания холестерина у матерей на липидный обмен плодов и сосунков малочисленны и противоречивы, что в определенной степени связано с использованием различных методических подходов при постановке опытов и различными видами животных. Вплоть до настоящего времени остается невыясненным вопрос о роли наличия алиментарной гиперхолестеринемии у самки в периоды беременности и лактации на становление регуляции гомеостаза холестерина у потомства во взрослом состоянии. На первый взгляд об этом можно было судить по динамике содержания в сыворотке крови холестерина, что и явилось непосредственным предметом нашего исследования на детенышах крольчих с алиментарной гиперхолестеринемией в процессе их роста от прекращения вскармливания до взрослого состояния. Параллельно регистрировалось нарастание массы тела, как показателя общего развития крольчат.

Кормление самок-крольчих богатым холестерином кормом в периоды беременности и/или лактации в наших экспериментах привело к тому, что в конце лактации уровень холестерина у них в крови превышал контрольный более, чем в 2,5 раза. При этом различий в содержании сывороточных триглицеридов не наблюдалось.

Данные исследования показали также, что в 6-ти недельном возрасте (при первом определении липидов) содержание холестерина и, особенно, триглицеридов в сыворотке большинства крольчат заметно выше, чем у взрослых животных. Через 15-20 недель наблюдался спад до значений, характерных для взрослых особей. Это совпадает с результатами многочисленных исследований, выполненных на различных видах животных (Friedman М., Byers S.O., 1961; Hamilton K.M.G., Carroll K.K., 1977; Pullmann R. et al., 1994 и др.). Повышенное содержание липидов в плазме крови у детенышей в раннем постнатальном периоде объясняется высоким содержанием жиров и холестерина в молоке матери.

При сравнении результатов по группам оказалось, что выраженность сдвигов, отмеченных у потомства после вскармливания, в значительной степени зависит от того, в какой период самка получала добавку холестерина к обычному рациону. Так, крольчата, чьи матери получали дополнительно к корму холестерин во время беременности и лактации (2-ая группа), имели тенденцию к более высокому уровню этого стероида в 6-ти недельном возрасте по сравнению с контролем и другой опытной группой. Эти данные совпадают с результатами исследований Whathley B.J. с соавт. (1981), согласно которым потомства крольчих, получавших холестерин в конце беременности и во время лактации и имевших повышенное содержание его в крови и молоке, после прекращения вскармливания обнаружили более высокий уровень холестерина плазмы крови, чем у контрольных животных. С другой стороны, в наших экспериментах у крольчат, вскармливаемых самками, получавшими холестерин с кормом только во время лактации (3-ья группа), в 6 недельном возрасте отмечалось более низкое содержание этого липида в крови по сравнению с животными двух других групп. В то же время, в ряде исследований (Jones P. J.H. et al., 1990; Fuches G.J. et al., 1994) установлено повышенное содержание холестерина у детей и поросят после вскармливания, получавших большее количество этого липида только в период вскармливания с молочными смесями.

Как следует из результатов нашей работы, во взрослом состоянии животные, чьи матери получали холестериновый рацион во время беременности и/или лактации (2-ая и 3-ья группы), имели несколько более высокие значения уровня холестерина в крови, чем контрольные. Превышение в содержании сывороточных триглицеридов в позднем постнатальном возрасте (35-40 недель) наблюдалось лишь у потомства самок, получавших холестериновый рацион во время беременности и лактации (2-ая группа).

Особый интерес представляют данные литературы по долговременному влиянию диеты в ранние периоды жизни на обмен липидов взрослых особей; они немногочислены и противоречивы. В работах Whathley B.J. с соавт. (1981) на кроликах, Farris R.P. и др. (1982) на детях, Temmerman A.N. с соавт. (1989) на тушканчиках установлено, что повышенное содержание сывороточного холестерина у этих животных, возникшее вследствие потребления больших его количеств в период вскармливания, нивелируется в дальнейшем. Авторы связывают это с гетерогенностью потребляемой пищи (дети) или переходом на корм с низким содержанием жиров (кролики). Burr M.L. и др. (1984) не нашли связи между длительностью грудного вскармливания детей и, следовательно, большим потреблением холестерина, и поражением коронарных артерий у них в возрасте от 2 до 30 лет. В другом длительном наблюдении на людях (Hodgson P.A. et al., 1976) показано, что низкое потребление холестерина в неонатальный период определяет более низкое содержание его в плазме у детей в возрасте 7-12 лет. В опытах на бабуинах показано, что вскармливание грудью и смесями с различным содержанием холестерина не влияло на концентрацию сывороточного холестерина к 7- 8 годам, но изменяло скорость обращения холестерина и объём быстрообмениваемого пула этого липида к указанному возрасту (Mott G.E. et al., 1990). Последнее свидетельствует о наличии определенных сдвигов в гомеостазе холестерина у этих животных, которые могли бы проявиться более четко в условиях дополнительных жировых нагрузок. Гиперхолестеринемия у крыс во время беременности и лактации приводит к повышению уровня холестерина в крови у взрослого потомства, несмотря на снижение синтеза холестерина и активацию его катаболизма (Naseem S.M., 1980).

В нашей работе избыточное поступление холестерина в организм на ранних сроках развития отразилось как на обмене липидов, так и на общем развитии кроликов, а именно, детеныши самок с алиментарной гиперхолестеринемией в наших опытах отставали в весе после прекращения вскармливания от детенышей самок с нормолипидемией. Во взрослом состоянии задержку в приросте массы тела мы наблюдали только у крольчат, чьи матери получали холестерин с кормом во время лактации. На других видах животных (тушканчики, свиньи) такой закономерности не выявлено (Temmerman A.N. et al., 1989; Young L.D. et al., 1993).

Таким образом, по нашим данным наличие умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих в период беременности и лактации влияет на липидный обмен и общее развитие у потомства, о чем свидетельствуют приведённые выше данные, полученные на животных в процессе их роста на обычном лабораторном рационе.

На значение уровня холестерина в крови самок в становлении регуляции обмена холестерина и общего развития у потомства указывают результаты проведенного нами корреляционного анализа, который позволил выявить наличие как временных, так и длительных связей между изучаемыми параметрами у самок и их детенышей. Наиболее существенной представляется достоверная отрицательная корреляция между холестерином сыворотки матери и массой тела потомства, обнаруженная в 6-недельном возрасте крольчат и сохранившаяся вплоть до их взрослого состояния. Было также установлено, что на ранних этапах развития детенышей содержание липидов в сыворотке крови у них зависит от уровня липидов в сыворотке крови самки. Во взрослом состоянии эта зависимость исчезает. Однако, это не означает, что особые условия пре- и постнатального развития не участвуют в дальнейшем в формировании патологической регуляции гомеостаза холестерина у потомства самок с алиментарной гиперхолестеринемией, что могло проявиться лишь при применении специальных тестов. Для выявления возможных скрытых нарушений в регуляции обмена липидов в наших исследованиях была использована острая жировая нагрузка.

Обнаружено, что у опытных крольчат ответная реакция на жировую нагрузку была более выраженной и продолжительной, чем у животных, родившихся у самок с нормолипидемией. В большей степени это относится к холестеринемической реакции и в меньшей степени касается гипертриглицеридемического ответа, который проявился к тому же в более поздние сроки. Отмечены различия и в отношении уровня ano В в сыворотке у опытных и контрольных животных: изменения в содержании этого апобелка были более значительными у первых, чем у вторых.

Наши данные о гиперреакции кроликов, получавших избыточное количество холестерина на стадиях раннего развития, в ответ на повторную холестериновую нагрузку во взрослом состоянии аналогичны результатами экспериментов на особых линиях (гипо- и гиперчувствительных к холестерину) этого же вида животных (Roberts D.C.K., West С.Е., 1974). Не найдено никаких изменений в сходных опытах на тушканчиках (Temmennan A.M. et al., 1989) и морских свинках (Li J.R. et al., 1980), совершенно противоположные данные получены Raiser R., Sidelman Z. (1972) на крысах-самцах. В последнем случае, обнаружена обратная взаимосвязь между количеством холестерина в молоке матери и его уровнем в крови у взрослого потомства во время холестериновой нагрузки.

Для более детальной характеристики влияния жировой нагрузки на обмен холестерина нами были изучены скорости нарастания и удаления холестерина в/из кровотока после нагрузки. Показано, что усиление гиперлипидемической реакции на нагрузку у кроликов, родившихся у самок с алиментарной гиперхолестеринемией, было, скорее всего, обусловлено более интенсивным поступлением холестерина в кровь, а не замедлением процессов его выведения из кровотока.

Всё это указывает на серьёзные нарушения в регуляции метаболизма холестерина у потомства гиперхолестеринемических самок, что было подтверждено и результатами корреляционного анализа. Как нами установлено, холестерин сыворотки крови самок, прежде всего, и в меньшей степени триглицериды имеют прямую взаимосвязь с уровнями липидов у потомства после жировой нагрузки. На важную роль содержания холестерина в крови матери указывает его положительная корреляция с коэффициентами нарастания и удаления холестерина из крови крольчат после нагрузки.

Поскольку увеличение скоростей нарастания холестерина в крови при жировой нагрузке не сопровождалось адекватным увеличением скорости удаления его из кровотока, можно говорить о несбалансированности этих процессов. Для проверки роли процессов удаления богатых холестерином частиц из кровотока в гиперреакции опытных животных на жировую нагрузку нами были проведены прямые эксперименты по изучению удаления из крови введённых внутривенно кроликам ЛПНП человека.

Оказалось, что скорость элиминации ЛПНП из крови, определённая по изменению концентрации ano В человека, не отличалась достоверно у животных всех групп и не зависела от уровня холестерина и триглицеридов в крови крольчих-родительниц. Также не обнаружено различий в динамике содержания холестерина после введения ЛПНП человека во всех группах потомства.

Полученные данные позволяют более определенно говорить о том, что гиперреакция кроликов, родившихся у самок с алиментарной гиперхолестеринемией, на жировую нагрузку связана, главным образом, с увеличением скорости образования и секреции ano В-содержащих липопротеидов, а не с замедлением их катаболизма.

Полученные в данной работе результаты позволяют сделать вывод о долговременном отчётливом влиянии наличия умеренной гиперхолестеринемии алиментарного происхождения у самок-крольчих в периоды беременности и/или лактации на регуляцию гомеостаза холестерина у потомства, что ярко

118 проявляется в условиях метаболических сдвигов, вызванных острой жировой нагрузкой. Таким образом, нарушения в обмене холестерина и триглицеридов у потомства могут обуславливаться, наряду с наследственными (генетическими) факторами, наличием у матери нарушений липидного обмена в период беременности и лактации, вызванных контактом с избыточным количеством экзогенного холестерина на этих чрезвычайно важных для формирования потомства стадиях развития.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Савельева, Инна Николаевна, Санкт-Петербург

1. Волынский З.М., Микушкин М.К. Внутриутробное нарушение холестеринового обмена и развитие липидоза у плода.// Кардиология. -1964. -Т.4. -№6. С. 21-24.

2. Климов А.Н. Холестерин и клетка.// Актовая речь на заседании ученого совета ИЭМ АМН СССР 29 декабря 1983 г. Л.: Наука. - 1983. - 19 с.

3. Климов А.Н., Васильева Л.Е., Климова Т.А. и др. Участвует ли малонат в синтезе стеринов?//Биохимия. 1990. - Т.55. - №2. - С. 549-553.

4. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. -СПб: Питер Пресс. 1995. - 304 с.

5. Репин В.С., Смирнов В.Н. Фундаментальные науки против атеросклероза. -М.- 1989.-71 с.

6. Солитернова И.Б., Никульчева Н.Г. Липолитические ферменты плазмы крови при экспериментальной гиперлипидемии и атеросклероз у кроликов.// Кардиология. 1980. - Т.ХХ. - №8. - С. 34-38.

7. Солитернова И.Б., Никульчева Н.Г. Липопротеидлипаза ипеченочная триглицеридлипаза в плазме крови кролика и крысы после введения гепарина.//Вопр. мед. химии 1982. - Т.28. - №1. - С. 87-92.

8. Трюфанов В.Ф., Сучкова С.Н. Стандартизация методов определения липидов при популяционных исследованиях.// Дислипопротеидемии иишемическая болезнь сердца./ Под ред. Е.И. Чазова, А.Н. Климова. М.: Медицина. - 1980. - С. 151-167.

9. Фенагин JI.K. Обмен холестерина и его регуляция. Киев. - 1980. - 168 с.

10. Харбоу Н., Ингильд А. Иммунизация, выделение иммуноглобулинов,, определение антител.// Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу./ Под ред. Аксельсен Н., Крелль И., Вике Б. М.: Мир. - 1977. - С. 200-205.

11. Хечинашвили Г.Г., Никульчева Н.Г. Липопротеидлипаза, печеночная триглицеридлипаза и некоторые другие липолитические ферменты животного организма.// Успехи биол. химии. 1980. - №.21. - С. 163-184.

12. Холодова Ю.Д., Чаяло П.П. Липопротеины крови. Киев: Наукова думка. -1990.-208 с.

13. Янович В.Г., Лагодюк П.З. Обмен липидов у животных в онтогенезе. М.: Агропромиздат. - 1991.-317 с.

14. Янович В.Г., Лагодюк П.З. Онтогенетические особенности синтеза липидов в тканях свиней.// Докл. ВАСХНИЛ. 1979. - №.4. - С. 35-36.

15. Agostoni С., Riva Е., Bellu R. et al. Effects of diets on the lipid and fatty acid status of full-term infant at 4 months.// J. Am. Coll. Nutr. 1994. - V. 13. - №6. -P. 658-664.

16. Alsat E., Bouali Y., Goldstein S. et al. Low-density lipoprotein binding sites in the microvillus membranes of human placenta at different stages of gestation.// Mol. Cell. Endocrinol. 1984. - V.38. - P. 197-203.

17. Alaupovic P., Curry M., McConathy W. Quantitative determination of human plasma apolipoproteins by electroimmunoassays.// International Conference of Atherosclerosis./ Ed. Z.A. Carlson. New York: Raven Press. - 1978. - P. 109115.

18. Atkinson D., Small D.M. Recombinant lipoproteins:implication for structure and assembly of native lipoproteins.// Ann. Rev. Biophys. Chem. 1986. - V.15. - P. 403-456.

19. Averna M.R., Barbagallo C.M., Di Paola G. et al. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins Ai, An, B, Cn, On and E in newborns.// Biol. Neonate 1991. -V.60. - P. 187-192.

20. Belknap W.M., Dietschy J.M. Sterol synthesis and low density lipoprotein clearence in vivo in the pregnant rat, placenta, and fetus.// J. Clin. Invest. 1988.- V.82. №6. - P. 2077-2085.

21. Bell-Quint J., Forte T., Graham P. Synthesis of two forms of apolipoprotein B by cultured rat hepatocytes.// Biochem. Biophis. Res. Comm. 1981. - V.99. - P. 700-706.

22. Bergstrom E., Hernell O., Persson L.A. Serum lipid values in adolescents are related to family hystory, infant feeding, and physical growth.// Atherosclerosis. -1995. V.117. - №1. - P. 1-13.

23. Bjorkengren J., Hamsten A., Milne R.W. et al. Alterations of VLDL composition during alimentary lipemia.// J. Lipid Res. 1997. - V.38. - №2. - P. 301-314.

24. Bolimer T., Havel R.G., Long J.A. Phisiological fatty liver and hyperlipemia in the fetal guinea pig: chemical and ultrastructured characterization.// J. Lipid Res.- 1972. -V.13.-№3.-P. 371-382.

25. Bongiovanni A.M. Bille acid content of gallbladder of infants, children and adults.// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1965. - V.25. - P. 678-685.

26. Brown M.S., Goldstein J.L. A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis.// Science. 1986. - V.232. - P. 34-47.

27. Brown M.S., Herz J., Cowal R.C. et al. The LDL receptor-related protein (LRP): double agent or decoy.11 Curr. Opin. Lipidol. -1991. V.2. - P. 65-72.

28. Brunnzell J.D. Familial lipoprotein lipase deficiency and other courses of chylomicronemia syndrome.// In: The metabolic basis of inherited disease./ Ed. C.R. Scriver et al. New York. - 1989. - P. 1165-1180.

29. Burr M.L., Beasley W.H., Fisher C.B. Breast feeding, maternal smoking and early atheroma.// Eur. Heart J. 1984. - V.5. - №7. - P. 588-591.

30. Camejo G., Bosch V., Arreceza C. et al. Early changes in plasma lipoprotein structure and biosynthesis in cholesterol-fed rabbits.// J. Lipid Res. 1973. -V.14.-№1.-P. 61-68.

31. Carlson S.E. Plasma cholesterol and lipoprotein levels during fetal development and infancy.// Annals N.Y. Acad. Sciences. -1991. V.623. - P. 81-89.

32. Carr B.R., Simpson E.R. Synthesis of cholesterol in the human fetus: 3-hydroxy-3-metylglutaryl coenzymes A reductase activity of liver microsomes.// J. Clin. Endocrinol. Metab. -1981. V.53. - P. 810-812.

33. Carr B.R., Simpson E.R. Synthesis of cholesterol in the human fetal tissues.// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1982. - V.55. - P. 447-451.

34. Carroll K.K. Acetate incorporation into cholesterol and fatty acids by livers of fetal, suckling, and weaned rats.11 Canad. J. Biochem. 1964. - V.42. - №1. - P. 79-86.

35. Carroll K.K., Hamilton R.M.G. Plasma cholesterol levels in suckling and weaned calves, lambs, pigs, and colts.// Lipids. 1973. - V.8. - P. 635-640.

36. Cheema S.K., Cikaluk D., Adellon L.B. Dietary fats modulate the regulatory potential of dietary cholesterol on cholesterol 7a hydroxylase gene expression.// J. Lipid Res. 1997. - V.38. -№2. - P. 315-323.

37. Chandler P.T., Kesler E.M., McCarthy R.D. et al. Effects of dietary lipid and protein on growth and nutrient utilization by dairy calves and age 8 to 18 weeks.// J. Nutr. 1968. - V.95. - №3. - P. 452-460.

38. Chervallier F. Transferts et syntese du cholesterol cher le rat au cours de sa croisance.// Biochimica et Biophisica Acta. 1964. - V.84. - P. 316-339.

39. Chiang J.Y., Stroup D. Identification and characterization of a putative bile acid-responsive element in cholesterol 7a-hydroxylase gene promoter.// J. Biol. Chem.- 1994. V.269. - P. 17502-17507.

40. Clarenburg R., Chaikoffl.L. Origin of milk cholesterol in the rat: dietary versus endogenous sources.11 J. Lipid Res. -1966. V.7. - №7. - P. 27-37.

41. Coleman R.A. Placental metabolism and transport of lipid.// Federration Proc. -1986. V.45. - №10. - P. 2519-2523.

42. Connor W.E., Lin D.S. Placental transfer of cholesterol-14C into rabbit and guinea pig fetus.// J. Lipid Res. 1967. - V.8. - P. 558-564.

43. Connor W.E., Lin D.S. Oridin of milk cholesterol in the rabbit and guinea pig.// Am. J. Physiol. 1967. - V.213. - №6. - P. 1353-1358.

44. Cruz M.L., Wong W.W., Mimouni F. et al. Effects of infant nutrition on cholesterol synthesis rates.// Pediatr. Res. 1994. - V.35. - №2. - P. 135-140.

45. Curry M.D., McConathy W.J., Alaupovic P. et al. Determination of human apolipoprotein E by electroimmunoassay.// Biochem. Biophys. Acta. 1976. -V.436. -P. 413-425.

46. Danielson H., Sjoval J. Bile acid metabolism.// Ann. Biochem. 1975. - V.44. -P.233-253.

47. Dannady J.M., Fosbrooke A.S., Lloyd J.K. Prospective study of serum cholesterol levels during first year of life.// B.M.J. 1972. - V.2. - P. 685-688.

48. DeBelle R.C., Blacklow N.R., Baylan M. et al. Bile acid conjugation in fetal hepatic organ culture.// Gastroenterology. 1975. - V.69. - P. 815.

49. Decklbaum R.J. Structure and composition of human plasma lipoproteins.// In: Atherosclerosis. Biology and clinical science./ Ed. Olsson A.G. 1987. - P. 251255.

50. Diaz M., Lial C., Cajal J.R. et al. Cord blood lipoprotein-cholesterol: relationship birth weight and gestational age of newborns.// Metabolism. 1989. - V.38. -№5.- P. 435-438.

51. Decsi T., Fekete M., Koletzko B. Plasma lipid and lipoprotein concentrations in full term infants fed formula supplemented with long-chain polyunsaturated fatty acids and cholesterol.// Eur. J. Pediatrics. 1997. - Y.156. - №5. - P. 397-400.

52. Drevon C.A., Norum K.P. Cholesterol esterification and lipid in plasma and liver from newborn and young guinea pigs raised on milk and non-milk diet.// Nutr. Metab. 1975. - V.18. -№5. - P. 137-151.

53. Ebenbichler C.F., Kirchmair R., Egger C et al. Postprandial state and atherosclerosis.// Curr. Opin. Lipidol. 1995. - V.6. - P. 286-290.

54. Ellsworth J.L., Erickson S.K., Cooper A.D. Very low density lipoprotein synthesis and secretion by human hepatoma cell line Hep-G-2: effect of free fatty acids.// J. Lipid. Res. 1986. - V.27. - P. 858-874.

55. Fall C.H., Barker D.J.P., Osmond C. et al. Relation infant feeding to adult serum cholesterol concentranion and death from ischaemmic heart disease.// B.M.J. -1992. V.304. - P. 801-805.

56. Fall C.H., Osmond C., Barker D.J. et al. Fetal and infant growth and cardiovascular risk factors in women.// B.M.J. 1995. - V.310. - №6977. - P. 428-432.

57. Farese R.V., Cases S., Ruland S.L. et al. A novel function for apolipoprotein B: lipoprotein synthesis in yolk sac is critical for maternal-fetal lipid transport in mace.// J. Lipid Res. 1996. - V.37. - P. 347-360.

58. Farris R.P., Hyg M.S., Frank G.C. et al. Influence of milk source on serum lipids and lipoproteins during the first year of life, Bogalusa Heart Study.// Am. J. Clin. Nutr. 1982. - V.35. - №1. - p. 42-49.

59. Fernandez J.I., Haranjo J.A., Yalverde A. et al. Post-natal changes in biliary lipids in suckling goat kids.11 Br. Veterinary J. 1996. - V.152. - №6. - P. 673682.

60. Fielding P.E., Jackson E.M., Fielding C.J. Chronic dietary fat and cholesterol inhibit the nonnal postprandial stimulation of plasma cholesterol metabolism.// J. Lipid. Res. 1989. - V.30. - P. 1211-1217.

61. Fomon S.J., Rogers R.R., Ziengler E.E. et al. Indices of fatness and serum cholesterol at age eight years in relation to feeding and growth during early infancy.//Pediatr. Res. 1984. - V.18. - №12. - P. 1233-1238.

62. Friedman M., Byers S.O. Effects of diets on serum lipids of fetal, neonatal, and pregnant rabbits.// Am. J. Physiol. 1961. - V.201. - №4. - P. 611-616.

63. Fuchs G.J., Farris R.P., DeWier M. et al. Effect of dietary fat on cardiovascular risk factors in infancy.// Pediatrics. 1994. - V.93. - №5. - P. 756-763.

64. Gaines D.W., Friedman L., Newell R.F. et al. Ornithine decarboxylase, fatty acid syntetase, and lipid levels in selected organs of the postnatal developing male miniature pig.// Lab. Anim. 1994. - V.28. - №4. - P. 380-386.

65. Gibbons G.F., Mitropoulos K.A., Myant N.B. Biochemistry of cholesterol. -Amsterdam, New York, Oxford: Elsevier Biomedical Press. 1982. - 369 p.

66. Gotto A.M., DPhil M.D. Interrelationship of triglycerides with lipoproteins and high-density lipoproteins.// Am. J. Cardiol. 1990. - V.66. - P. 20A-23A.

67. Gould R.G. Lipid metabolism and atherosclerosis.// Am. J. Med. -1951. V. 11. -P. 209-227.

68. Haave N.C., Innis S.M. Perinatal development of hepatic cholesterol synthesis in the rat II Biochim. Biophis. Acta. 1991. - V.1085. - №1. - P. 35-44.

69. Hahn P. Development of lipid metabolism.// Ann. Rev. Nutr. 1982. - V.2. - P. 91-111.

70. Hahn P., Srubiski L. Development of cholesterol metabolism: the effect of diet composition at weaning.11 Biol. Neonate. 1990. - V.58. - №1. - P. 1-7.

71. Hamilton R.M., Carrol K.K. Plasma cholesterol levels in suckling and weaned kittens, puppies, and guinea pigs.//Lipids. 1977. - V.12. - P. 145-148.

72. Hardy S.C., Kleinman R.E. Fat and cholesterol in the diet of infant and young children: implication for growth, development, and long-term health.// J. Pediatr. -1994. V.125. - №5.(Pt 2) - P. S69-77.

73. Hassan A.S., Yunker R.L., Subbiah M.T.R. Decreased bile acid pool in neonates of guinea pigs fed cholesterol during pregnancy.// J. Nutr. 1981. - V.111. - P. 2030-2033.

74. Hassan A.S., Gallon L.S., Yunker R.L. et al. Effect of enhancement of cholesterol catabolism in guinea pigs after weaning on subsequent response to dietary cholesterol.// Am. J. Clin. Nutr. 1982. - V.35. - №3. - P. 546-550.

75. Hatch F.T., Lees R.S. Practical methods for plasma lipoprotein analysis. II Adv. Lipid Res. 1968. - V.6. - P. 1-68.

76. Havel R.J. The formation of LDL: mechanism and regulation. II J. Lipid Res. -1984.-V.25.-P. 1570-1576.

77. Havel R.J. Biology of cholesterol, lipoprotein and atherosclerosis.// Clin, and Exper. Hyper. Theory and Practice. - 1989, All(5&6). - P. 887-900.

78. Havel R.J., Eder H., Bragdon J. The distribution and chemical composition of ultracentrifugally separated lipoproteins in human serum.// J. Clin. Invest. 1955. -V.34.-P. 1345-1353.

79. Hobbs H.H., Russell D.W., Brown M.S. et al. The LDL receptor locus in familial hypercholesterolemia: mutational analysis of membrane protein.// Ann. Rev. Genet. 1990. - V.24. - P. 133-170.

80. Hodgson P.A., Ellefson R.D., Elveback L.R. et al. Comparison of serum cholesterol in children fed high, moderate or low cholesterol milk diets during neonatal period.// Metabolism. 1976. - V.25. - P. 739-746.

81. Van't Hooft F.M., van Gent T., van Tol A. Turnover and uptake by organs of radioactive serum high density lipoprotein cholesteryl esters and phospholipids in rat in vivo.11 Biochem. J. 1981. - V.196. - P. 877-885.

82. Hull D., Elphick M.C. Transfer of fatty acids.11 Placental transfer./ Ed. by G.V.D. Chamberlain, A.W. Wilkinson. New York: Pittman Medical. - 1979. - P. 159165.

83. Hummel L., Schirrmeister W, Zimmerman T. Transfer of maternal plasma fatty acids into the rat fetus.// Acta Biol.Med. Ger. 1975. - V.34. - P. 603-605.

84. Hylemon P.B., Gurley E.C., Stravitz R.T. et al. Hormonal regulation of cholesterol 7a-hydroxylase mRNA levels and transcriptional activity in primary rathepatocyte cultures.11 J. Biol. Chem. 1992. - V.267. - P. 16866-16871.

85. Innis S.M. The role of diet during development on the regulation of adult cholesterol homeostasis.// Can. J. Physiol. Pharmacol. 1985. - V.63. - №5. - P. 557-564.

86. Innis S.M., Akrabawi S.S., Diersen-Schade D.A. et al. Visual acuity and blood lipids in term infants fed human milk or formulae.// Lipids. 1997. - V.32. - №1. -P. 63-72.

87. Innis S.M., Hahn P. Influence of litter size on the development of 7a-hydroxylase (7HL).// Proc. Can. Fed. Biol. Sei. 1982. - V.67. - P. 260A.

88. Jackson E.M., Lewis D.S., McMahan C.A. Preweaning diet affects bile kinetic in infant baboons.// J. Nutr. 1993. - V.123. - P. 1471-1479.

89. Jain S.K., Diaz J.J. Plasma lecitliitin-cholesterol acyltransferase activity and cholesterol and phospholipid levels in premature newborn infants.// Biochim. Biophis. Acta. -1991. V.1086. - P. 225-229.

90. Jones P.J.H., Hrboticky N., Hahn P. et al. Comparison of brest feeding and formula feeding on intestinal and hepatic cholesterol metabolism in neonatal pigs II Am. J. Clin. Nutr. 1990. - V.51. - №6. - P. 979-984.

91. Jones L.A., Teramoto T., Juhn D.J. et al. Charactirization of lipoprotein produced by perfused rhesus monkey liver.// J. Lipid. Res. 1984. - V.25. - P. 319-325.

92. Joung L.D., Pond W.G., Mersmann H.J. Direct and correlated responces to divergent selection for serum cholesterol concentration on day 56 in swine.// J. Anim. Sci. 1993. - V.71. - №7. - P. 1742-1753.

93. Jurevies H.A., Kidwai F.Z., Morell P. Sources of cholesterol during development of the rat fetus and fetal organs.11 J. Lipid. Res. 1997. - V.38. - №4. - P. 723733.

94. Kandeh M.M., Park Y.W., Pond W.G. et al. Milk cholesterol concentration in sows selected for free generation for high or low serum cholesterol.// J. Anim. Sci. 1993. - V.71. - №5. - P. 1100-1103.

95. Kane J.P. A rapid electrophoretic for identification of subunit species of apoproteins in serum lipoproteins.// Anal. Biochem. 1973. - V.53. - P. 350-364.

96. Kark J.D., Troya G., Friedlander J. et al. Validity of maternal reporting of breast feeding history and the associaton with blood lipids in 17 year olds in Jeurusalem.// J. Epidemiol. Community Health. 1980. - V.34. - P. 164-167.

97. Katan M.B. Meijer G.W., Beynen A.C. Inbbred rabbit strains as model for human hypo- and hyperresponders to dietary cholesterol.// Atherosclerosis-III (Proc. of the 8th Intern. Symp. on Atherosclerosis, Rome, 9-13 October). 1988. -V.63.-P.

98. Katoku Y., Yamada M., Yonekubo A. et al. Effect of cholesterol content of a formula on the lipid compositions of plasma lipoproteins and red blood cell membranes in early infancy.// Am. J. Clin. Nutr. 1996. - V.64. - №6. - P. 871877.

99. Khasmi F., Merkatz J., Solomon S. The conversion of acetate to cholesterol in the fetus of the baboon and the transfer of cholesterol from mother to fetus.// Endocrinology. 1972. - V.91. - №1. - P. 6-12.

100. Klimov A.N., Denisenko A.D., Magracheva E.Ya. Preparation of tissue fluid of the vessel wall and determination of its lipoproteins.// Atherosclerosis. 1974. -Y.19. - P. 243-251.

101. Kris-Etherton P.M., Layman D.K., York P.V. et al. The influence of early nutrition on the serum cholesterol of the adult rat.11 J. Nutr. 1979. - V.109. -№7. - P. 1244-1257.

102. Levin M.S, Pitt A.J.A., Schwartz A.L. et al. Development changes in the expression of genes involved in cholesterol biosynthesis and lipid transport in human and rat fetal and neonatal livers.// Biochim. Biophys. Acta. 1989. -V.1003.-P. 293-300.

103. Li J.R., Bale L.K., Kottke B.A. Effect of neonatal modulation of cholesterol homeostasis on subsequent responce to dietary cholesterol challenge in adult guinea pig II J. Clin. Invest. 1980. - V.65. - №5. - P. 1060-1068.

104. Li J.R., Dinli D.M., Ellefson R.D. et al. Sterol and bile acid metabolism during development. 3. Occurrence of neonatal hypercholesterolemia in guinea pig and its possible to bile acid pool.11 Metabolism. 1979. - V.28. - №2. - P. 151-156.

105. Lin D.S., Pitkin R.M., Connor W.E. Placental transfer of cholesterol into the human fetus.// Am. J. Obstet. Gynecol. 1977. - V.128. - №7. - P. 735-739.

106. Llirbat B., Wolf C., Chevy F. et al. Normal and inhibit cholesterol on synthesis in the cultured rat embryo.// J. Lipid Res. 1997. - V.38. - №1. - P. 22-34.

107. Lonford R.E., Bronson D.L., Estlack L.E. et al. Plasma protein and apolipoprotein synthesis by human yolk sac carcoma cells in vitro.// In Vitro Cell. Dev. Biol. 1991. - V.27A. - P. 205-210.

108. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent.// J. Biol. Chem.-1951. V.193. - №1. - p. 265-275.

109. Mackinnon A.M., Drevon C.A., Sand T.M. et al. Regulation of bile acid synthesis in cultufed rat hepatocytes: stimulation by ano-E-rich high density lipoproteins.// J. Lipid Res. 1987. - V.28. - P. 847-855.

110. Mahley R.W., Hussain M.M. Chylomicron and chylomicron remnant catabolism.// Curr. Opin. Lipidol. -1991. V.2. - P. 170-176.

111. Markwell M.A.K., Haas S.M., Bieber L.L. et al. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determinaton in membrane and lipoprotein samples.//Anal. Biochem. 1978. - V.87. - P. 206-210.

112. Mellies M.J., Ishikawa T.T., Gartside P. et al. Effects of vaiying maternal dietary cholesterol and phytosterol in lactating women their infants.// Am. J. Clin. Nutr. -1978. V.31.-P. 1347-1354.

113. Miller J.P., Goto D.M. The plasma lipiproteins. Their formation and metabolism.// Compr. Biochem. 1982. - V.19B, pt.2. - P. 419-506.

114. Mize C.E., Vary R. Effect of infancy dietary lipid composition on plasma lipoprotein cholesterol and low-density lipoprotein receptor activity.// Am. N.Y. Acad. Sei. -1991. V.623. - P. 455-456.

115. Mott G.E., DeLallo L., Driscoll D.M. et al. Influence of brest and formula feeding on hepatic concentrations of apolipiprotein and low-density lipoprotein receptor mRNAs.// Biochim. Biophys. Acta. 1993. - V.1169. - №1. - P. 59-65.

116. Mott G.E., Jackson E.M., DeLallo L. et al. Differences in cholesterol metabolism in juvenile baboons are programmed by brest-versus formula-feeding.// J. Lipid. Res. 1995. - V.36. - №2. - P. 299-307.

117. Mott G.E., Jackson E.M., McMahan C.A. et al. Cholesterol metabolism in adult baboons is influenced by infant diet.// J. Nutr. 1990. - V.120. - №3. - P. 243251.

118. Mott G.E., Lewis D.S., McMahan C.A. Infant diet affects serum lipoprotein concentration and cholesterol esterifying enzymes in baboons. II J. Nutr. 1993. -V.123. - №2. - P. 155-163.

119. Naseem S.M., Khan M.Q., Heald F.P. et al. The influence of cholesterol and fat in maternal diet of rats on the development of hepatic cholesterol metabolism in the offspring.// Atherosclerosis. 1980. - V.36. - P. 1-8.

120. Naoum H.G., de-Chazal R.C., Eaton B.M. et al. Characterization and specificity of lipoprotein binding to term human placental membranes.// Biochim. Biophys. Acta. 1987. - V.902. - P. 193-199.

121. Ness G.C., Miller J.P., Moffler M.H. et al. Perinatal development of 3-hydroxy-3-methylglutaril coenzyme A reductase activity in rat lung, liver and brain.// Lipids. 1979. - V.14. - P. 447-450.

122. Nielsen M.O., Jakobsen K. Changes in mammary uptake of free fatty acid, triglyceride, cholesterol and phospholipid in regulation to milk synthesis during lactation in goats.// Comp. Biochem. Physiol. Physiol. 1994. - V.109. - №4. - P. 857-867.

123. Olivecrona T., Bentsson- Olivecrona G. Lipoprotein lipase: an attempt to correlate its molecular propeties to its functions.// Inter. J. Obesity. 1985. - №.9. -P. 201-208.

124. Olivecrona T., Bentsson G., Marklund S.E. et al. Heparin-lipoprotein lipase interaction.//Fed. Proc. 1977. - V.36. - P. 60-65.

125. Ouchterlony O. Immunodiffusion and immunoelectroforesis.// Handbook of experimental immunolody./ Ed. D.M. Wien. Oxford, Edindurgh: Blackwell Sci. Publ. - 1967. - P. 655-706.

126. Pandak W.M., Vlahcevic Z.R., Chiang J.Y. et al. Bile acid synthesis. VI Regulation of cholesterol 7a-hydroxylase by taurocholate and mevalonate.// J. Lipid Res. 1992. - V.33. - P. 658-659.

127. Panini S.R., Everson G.T., Spencer T.A. Effects of specific inhibition of sterol biosynthesis on the uptake and utilization of low density lipoprotein cholesterol by HepG2 cells.//J. Lipid Res. -1991. V.31. - P. 1657-1665.

128. Perin N., Keelan M., Jaroca-Cyrta E. et al. Ontogeny of intestinal adaptation in rats in response to isocalaric changes in dietary lipids.// Am. J. Physiol. 1997. -V.273. - P. 713-720.

129. Pitkin P.M., Connor W.E., Lin D.S. Cholesterol metabolism and placenta.// J. Clin. Invest. 1972. - V.51. - №10. - P. 2584-2592.

130. Plonne D., Winkler L., Franke H. et al. The visceral yolk sac an important site of synthesis and secretion of apolipoprotein B-containing lipoproteins in the fetoplacental unit of the rat.11 Biochim. Biophys. Acta. - 1992. - V. 1127. - P. 174185.

131. Plotz E.J., Kabara J.J., Davis M.E. et al. Studies jn the synthesis of cholesterol in brain of the human fetus.11 Am. J. Obstet. Gynecol. 1968. - V.101. - P. 534-538.

132. Pond W.G., Mersmann H.J., Klein P.D. et al. Body weight gain is correlated with serum cholesterol at 8 weeks of age in pigs selected for four generations for low or high serum cholesterol.// J. Anim. Sci. 1993. - V.7. - №9. - P. 2406-2411.

133. Popjack G., Beeckmans M.L. Synthesis of cholesterol and fatty acids in foetuses and in mammary glands of pregnant rabbits.// Biochem. J. 1950. - V.46. - P. 547-558.

134. Pullmann R., Samel M., Lazar J. et al. Changes in cholesterol and triacylglycerol serum levels in rats during postnatal ontogenesis.// Bratisl. Lek. Listy. 1994. -V.95. - №10. - P. 465-468.

135. Rafii Z.S., al Nasser A.A., Budair A. et al. Establishing reference total serum cholesterol values for Saudi children.// Ann. Clin. Biochem. 1994. - V.31.(Pt 4) -P. 347-350.

136. Rafstedt S., Swahn B. Studies on lipids, proteins and lipoproteins in serum from newborn infants.// Acta Paediatr. 1954. - V.43 - P. 221-234.

137. Reiser R., Sidelman Z. Control of serum cholesterol homeostasis by cholesterol in milk of the suckling rat.// J. Nutr. 1972. - V.102. - №8. - P. 1002-1016.

138. Reiser R. The role of cholesterol in normal metabolism.// Nutr. News. 1972. -V.35. - №4. - P. 13-14.

139. Rioux F.M., Innis S.M. Cholesterol and fatty acid metabolism in piglets fed sow milk or formula with or without addition of cholesterol.// Metabolism. 1993. -V.42. - №12. - P. 1552-1559.

140. Roberts D.C.K., Huff M.W., Carroll K.K. Influence of diet on plasma cholesterol concentrations in suckling and weaning rabbits.// Nutr. Metab. 1979. - V.23. -№6. - P. 476-486.

141. Roberts D.C.K., Huff M.W., Carroll K.K. Lipoprotein changes in suckling and weanling rabbits fed semipurified diets.// Lipids. 1979. - V.14. - №6. - P. 566571.

142. Roberts D.C., West C.E. Influence of rabbit milk upon cholesterolaemic responce of offspring of rabbits.//Lipids. 1974. - V.9. - №8. - P. 495-497.

143. Roberts D.C., West C.E., Redgrave T.G. et al. Plasma cholesterol concentration in normal and cholesterol-fed rabbits.// Atherosclerosis. 1974. - V.19. - №3. - P. 369-380.

144. Roitelman J., Simoni R.D. Distinct sterol and nonsterol signals for the regulation degradation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme A reductase.// J. Biol Chem. 1992. - V.267. - P. 25264-25273.

145. Rosseneu M., Vinaimont N., Vercaemst P. et al. Standartization of immunoassays for the quantitation of plasma apo B protein.// Anal. Biochem. 1981. - V. 116. -P. 204-210.

146. Roux J.F. Lipid metabolism in the fetal and neonatal rabbit.// Metabolism. 1966. - V.15. - P. 856-864.

147. Rudel L., Deckelman C., Wilson M. et al. Dietary cholesterol and downregulation of cholesterol 7a hydroxylase and cholesterol absorption in African green monkeys.// J. Clin. Invest. 1994. - V.93. - P. 2463-2472.

148. Rudney H., Panini R. Cholesterol biosynthesis.// Curr. Opin. Lipidol. 1993. -V.4.-P. 230-237.

149. Russell D.W. Cholesterol biosynthesis and metabolism.// Cardiovasc. Drugs. Ther. 1992. - V.6. - P. 103-110.

150. Russell D.W., Setchell K.D.R. Bile acid biosynthesis.// Biochemistry. 1992. -V.31.-P. 4737-4749.

151. Schwiegert F.J. Effects of energy mobilization during fasting lactation on plasma metabolism in the grey seal (Halichoerus grypus).// Comp. Biochem. Physiol. Comp. Physiol. 1993. - V.105. - №2. - P. 347-352.

152. Shefer S., Nguyen L.B., Salen G. et al. Differing effects of cholesterol and taurocholate on steady state hepatic HMG CoA reductase and cholesterol 7a hydroxylase activities and mRNA levels in the rats.11 J. Lipid Res. 1992. - V.33. -P. 1193-1200.

153. Shepherd J., Packard C.J. High density lipoprotein metabolism.// Atherosclerosis Rev. 1993. - V.24. - P. 17-42.

154. Shi W.K., Hopkins B., Thompson S. et al. Synthesis of apolipoproteins, alfafoetoprotein, albumin, and transferrin by the foetal yolk sac and other foetal organs.//J. Embriol. Exp. Morphol. 1985. - V.85. - P. 191-206.

155. Smith E.B., Slater B.S. The chemical and immunological assay of low density lipoproteins extracted from human aortic intima.11 Atherosclerosis. 1970. - V.ll. -№3. - P. 417-438.

156. Stang E.F., Sheibner J., Ditschuneit H. Role of primary and secondary bile acid as feed-back inhibitors of bile acid synthesis in the rat in vivo.11 J. Clin. Invest. -1989. V.84. - P. 173-180.

157. Subbiah M.T.R., Sprinkl J.D., Rymaszewski Z. et al. Sort-term exposure to high dietary cholesterol in early life: arterial chandes and respons after normalization of plasma cholesterol.// Am. J. Clin. Nutr. 1989. - V.50. - P. 68-72.

158. Temmerman A.M., Vonk R.J., Neizen-Koning K. et al. Dietary cholesterol and fats at a young age: do they influence cholesterol metabolism in adult life?// Ann. Nutr. Metab. 1989. - V.33. - P. 170-180.

159. Torchia E.C., Cheema S.K., Agellon L.B. Coordinate regulation of bile acid biosynthetic and recovery pathways.11 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V.255.-P. 128-133.

160. Tsuchiya N., Harada Y., Taki M. et al. Ade-related changes and sex differencea on the serum chemistry values in Sprague-Dawley rats.// Jikken. Dobutsu. -1995. V.43. - №3. - P.671-678.

161. Tunstall-Pedoe H., Smith W.C.B. Cholesterol as a risk factor coronary heart disease.// Brit. Med. Bull. 1990. - V.40. - №4. - P. 1078-1087.

162. Wang X., Sato R., Brown M.S. et al. SREBP-1, a membrane-bound trans-cription factor released by sterol-regulated proteolyses.// Cell. 1994. - V.77. - P. 53-62.

163. Warnir R.A., Stiel L. Fetal glycerol metabolism in experimental maternal lipimia.//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1985. - V.178. - P. 546-550.

164. Weisgraber K.H., Maley R.W. Subfractionating of human high density lipoproteins by heparin-sepharose affinity chromatografy.// J. Lipid Res. 1980. -V.21. - P. 316-325.

165. Whatley B.J., Green J.B., Green M.H. Effect of dietary fat and cholesterol on milk composition, milk intake and cholesterol metabolism in the rabbit.// J. Nutr. -1981.-V.111.-P. 432-441.

166. Willnow T.E., Sheng Z., Ishibashi S. et al. Inhibition of hepatic chilimicron remnant uptake by gene transfer of of a receptor antogonist.// Science. 1994. -V.264. - P. 1471-1474.

167. Winkel C.A., Snyder J.M., MacDonald P.C. et al. Regulation of cholesterol and progesteron synthesis in human placental cells in culture by serum lipoproteins.// Endocrinology. 1980. - V.106. - P. 1054-1060.

168. Winkler L., Goetze E. Einflubp einer Rontgen-Ganzkorperbestrahlung mit 800R auf die foetalen und mutterlichen Plasmalipid bei der Ratte.// Acta Biol. Med. Germ. 1968. - V.20. - №6. - P. 883-885.

169. Wong W.W., Hachey D.L., Insull W. Effect of dietary cholesterol on synthesis in brest-fed and formula-fed infants.// J. Lipid Res. 1993. - V.34. - №8. - P. 14031411.

170. Wood P.D.S., Stern M.P., Silver A. et al. Prevence of plasma lipoprotein abnormalities in a free-living population on the Central alley, California.// Circulation. 1972. - V.45. - P. 114-126.

171. Woollett L.A. Oridgin of cholesterol in the fetal golden Syrian hamster: contribution of de novo sterol synthesis and maternal-derived lipoprotein cholesterol.// J. Lipid Res. 1996. - V.37. - P. 1246-1257.

172. Yount N.J., McNamara D.J. Dietary regulation of maternal and fetal cholesterol metabolism in the guinea pig.11 Biochim. Biophis. Acta. -1991. V.1085. - №1. -P. 82-90.

173. Zilversmit D.B. Atherosclerosis: a postprandial phenomenon.// Circulation. -1979.-V.60.-P. 473-485.

174. Искренне благодарю научного руководителя Александра Дорофеевича Денисенко за постоянное внимание, оказанную поддержку и руководство в работе.

175. Глубоко признательна вед. н.с., д.м.н. Нине Гавриловне Никульчевой за всестороннюю, неоценимую и активную помощь на всех этапах работы над диссертацией.

176. Большое спасибо Всем сотрудникам отдела биохимии НИИЭМ РАМН за посильную помощь и доброе отношение.

Информация о работе

Савельева, Инна Николаевна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 1998
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние умеренной алиментарной гиперхолестеринемии у крольчих во время беременности и лактации на гомеостаз холестерина у потомства - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы