Морфофункциональные изменения молочной железы крольчих под влиянием препаратов селена

Анипко, Вадим Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Морфофункциональные изменения молочной железы крольчих под влиянием препаратов селена
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные изменения молочной железы крольчих под влиянием препаратов селена"

На правах рукописи

005002127

АНИПКО Вадим Владимирович

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРОЛЬЧИХ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

1 7 НОЯ 2011

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2011

005002127

Работа выполнена на кафедре морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Абрамова Людмила Леонидовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент РАМН Банин Виктор Васильевич

Ведущая организация (предприятие) - ГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится декабря 2011 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.02 в ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « »/<¿¿^7^2011 г. и размещен на сайтах: référât vak@mon.gov.ru и http://mgavm.ru/

Ученый секретарь

доктор биологических наук, профессор Поляков Виктор Филиппович

Диссертационного совета

Л.Ф. Сотникова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Для Российской Федерации насущной проблемой является обеспечение продовольственной независимости и безопасности, разрешить которую можно лишь за счет значительной интенсификации сельского хозяйства, в том числе животноводства. В результате аграрной политики последних лет значительно сократилось поголовье и продуктивность сельскохозяйственных животных, изменилось качество продукции. Это связано, в том числе, с недостаточным поступлением в организм животных селена, выполняющего важнейшие биологические функции (Блинов В.А., 2010).

В настоящее время кролиководство как отрасль мясного животноводства является перспективной, поскольку кролики - это источник ценного диетического мяса, а также пуха и мехового сырья. Благодаря их скороспелости и высокой интенсивности размножения значительный объем этой продукции можно получить в сравнительно короткий срок. Рентабельное выращивание кроликов в производственных условиях требует знаний морфологических основ их воспроизводства и вскармливания потомства (Кролики и нутрии, 2000).

Молочная железа - уникальный орган, вырабатывающий молозиво—»молоко, содержащее в себе необходимые новорожденному, особенно в первые часы его жизни, пластический материал и факторы неспецифической защиты (Грачев И.И., 1973; Ануфриев А.И., 2007). Раскрытие особенностей морфофизиологии железы в периоды маммогенеза, лакгогенеза и лактопоэза, особенно для перворожавших самок, имеет большое значение в совершенствовании технологии выращивания молодняка.

Изучению морфологии молочной железы млекопитающих посвящены работы Г.Б. Тверского (1993), Л. Л. Абрамовой (1998-2008), Л.П. Соловьевой (2004-2005), M.R. Warner (2005), в которых накоплен значительный материал о видовых, возрастных и других особенностях строения и функциях этого органа.

Информация о морфологии молочной железы крольчих в разные периоды репродуктивного цикла, включая этапы сукрольности, родов и лактации, - весьма ограничена, за исключением работ Л.В. Курбатовой (1972-1977), Н.М. Грезиной, H.A. Зиновьевой (2005).

Несмотря на то, что роль эссенциальных микронутриенгов в поддержании нормального течения физиологических процессов в организме животных существенна (Баскакова A.A., 2005; Трошина Т.А., Вакилов Р.Ф., 2008), до сих пор отсутствуют данные об их влиянии на морфогенез органа.

Особая роль в этом принадлежит селену - мощному антиоксиданту, создающему благоприятные условия для нормального осуществления ферментативных процессов, участвующему в окислительно-восстановительных реакциях организма, усиливающему действие витаминов А, Е и D) (Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И., 2001; Крапивина Е.В., Ващенин Е.П., Иванов В.П., 2002; Shargorodsky М, Debby О., Matas Z., Zimlichman R., 2010). В то же время на территории Российской Федерации практически повсеместно отмечаются зоны, эндемичные по селену (Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005), причем последние два десятилетия их площади увеличиваются (Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко O.A., 2009). Оренбургская область также входит в этот неблагополучный список (Боев В.М., 2005; Т.И. Бурцева, H.A. Голубкина, С.А. Мирошников, А.К. Скальный, и др., 2008).

Раскрытие особенностей морфогенеза молочной железы крольчих в периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии селенсодержащих препаратов на сегодняшний день является актуальным.

Цель работы: выявить закономерности гистофизиологии молочной железы и хронодинамику структур ее лактогематического барьера у крольчих породы советская шиншилла в разные периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии препаратов «Е - селен» и «Селенолин®».

Задачи исследования:

1. Выявить закономерности роста и развития паренхиматозного и стромального компонентов молочной железы крольчих при влиянии препаратов селена, их взаимосвязь с динамикой половых гормонов при смене функциональной напряженности органа.

2. Изучить особенности морфогенеза и динамику отделов выводной системы молочной железы, проследить их корреляцию с массой органа в норме и при влиянии препаратов селена.

3. Оценить адаптационную пластичность и взаимосвязь структур паренхиматозного компонента и интегрирующих систем (сосуды, нервы) альвеолярного отдела молочной железы крольчих в норме и при влиянии препаратов селена, в периоды репродуктивного цикла самки (интактность, беременность, роды, лактация, отъем и постлактационная инволюция).

. 4. Проследить временную динамику проницаемости лактогематического барьера молочной железы крольчих для иммуноглобулина О и селена под влиянием препаратов селена и изменением концентраций половых гормонов, определить разницу состава молозива и молока в начале и середине лактации, изучить влияние препаратов селена на морфологические, биохимические показатели крови .крольчих в различные периоды репродуктивного цикла.

Научная новизна:

• впервые получены сведения о росте и развитии паренхиматозного и стромального компонентов молочной железы крольчих при воздействии препаратов селена, их взаимосвязи с динамикой половых гормонов в периоды репродуктивного цикла самки;

• изучены закономерности морфогенеза железы, динамика и корреляция морфометрических показателей отделов выводной системы с массой органа в норме и при влиянии препаратов селена;

• в молочной железе крольчих контрольных и опытных групп впервые выявлена взаимосвязь структур альвеолярного отдела с информационно-обеспечивающими системами (нервы, сосуды), с изменением концентраций половых гормонов и их адаптационная пластичность при разной функциональной напряженности органа;

• приоритетны сведения о хронодинамике структур лактогематического барьера, обеспечивающих его проницаемость для иммуноглобулина в и селена на фоне изменения концентраций половых гормонов, о биохимическом составе молозива и молока крольчих в начале и середине лактации при воздействии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®».

Полученные новые результаты позволили дать практические рекомендации в технологию промышленного кролиководства.

Теоретическая и практическая значимость работы

Диссертационное исследование посвящено актуальным вопросам биологии: изучению гистофизиологии молочной железы крольчих в разные периоды

■ репродуктивного цикла на фоне влияния препаратов «Е селен» и «Селенолин®», а также вопросам функциональной и клинической морфологии, микроэлементологии. Выполнение задач, поставленных в работе, существенно дополнило имеющиеся представления о морфофункциональных изменениях множественной молочной

■ железы. Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных и других факультетах, на курсах повышения квалификации, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий. Кроме того, материалы диссертации могут быть полезны научным сотрудникам НИИ,. занимающимся проблемами экспериментальной и функциональной морфологии желез.

Клиницистам предложены морфологические критерии для цито - и гистологической . оценки витальных биоптатов органа с целью ■ диагностики . заболеваний молочной железы.

■•.'. Разработанная, апробированная и внедренная «Технология -/стимулирования. молочной продуктивности крольчих парентеральным введением препаратов селена» позволила.увеличить секрецию и объем выделяемого молозива—»молока,' улучшить их . качественные показатели, в том числе по повысить жизнеспособность и'

сохранность крольчат. :■. ■» '■ . •■ . ■

. . Результаты; исследования внедрены в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 г). . . •

Положения, выносимые на защиту:

• выявленные закономерности роста и развития молочной железы крольчих и взаимосвязь ее структур с динамикой половых гормонов под воздействием препаратов селена при разной функциональной напряженности органа;

• особенности морфогенеза железы, динамика и корреляция отделов выводной системы с массой органа в норме и при парентеральном введении селенсодержащих препаратов - источников биотического эссенциального элемента;

• взаимосвязь структур альвеолярного отдела органа с информационно-обеспечивающими системами (нервы, сосуды), изменением концентраций половых гормонов, их адаптационная пластичность в разные периоды репродуктивного цикла самки в норме и при влиянии препаратов селена;

• временная динамика структур лактогематического барьера молочной железы, регулируемая половыми гормонами и влияющая на интенсивность выхода в молозиво—»молоко иммуноглобулина G и селена, а также особенность секреторного цикла лактоцита, определяющая биохимический состав молозива и молока крольчих под воздействием препаратов селена в начале и середине лактации и объемы их выработки.

Реализация результатов исследований. Внедрение материалов диссертационной работы в научные исследования и учебный процесс осуществлялось в лабораториях ГНУ Дальневосточного зонального НИВИ Россельхозакадемии, на морфологических кафедрах Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева, Кубанского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, Ставропольского ГАУ, Омского ГАУ, Алтайского ГАУ, Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки, Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана, Уральской ГАВМ, Самарской ГСХА, Нижегородской ГСХА, Белгородской ГСХА, Ульяновской ГСХА и Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова в форме выпуска карт обратной связи.

В процессе исследования разработаны: «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов» (решение о выдаче патента на изобретение № 2010123251/10(033072 от 04 октября 2011г.) и «Способ определения концентрации селена в крови» (приоритетная справка Патентного ведомства № 2011120673/15 (030563) от 20.05.2011г.).

Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедры анатомии, патанатомии и гистологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Регистрационный номер темы: 01201161504.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009), VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009), конференции молодых ученых и специалистов Оренбургской области (Оренбург, 2010), молодежном инновационном форуме ПФО (Ульяновск, 2010), международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве», посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины Бурятской ГСХА (Улан-Удэ, 2010), III international simposium «Topic problem of biophotonics» (St-Peterburg - Nizhniy Novgorod, Russia, 2011).

Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта «Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», удостоенного диплома лауреата областной выставки научно-технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Оренбург, 2010), гранта и диплома победителя конкурса «Оренбуржью - достойные кадры», проводимым Оренбургским региональным отделением общероссийской общественной организации «Российское аграрное движение - РАД» (Оренбург, 2010), диплома лауреата Молодежного инновационного форума Приволжского федерального округа (Ульяновск, 2010), Президентского гранта для поддержки талантливой молодежи на Всероссийской выставке научно-технического

творчества молодежи «НТТМ-2010» (Москва, 2010), бронзовой медали и диплома III степени VI Саратовского салона изобретений, инноваций и инвестиций (Саратов, 2011).

Публикации результатов исследований. По материалам собственных научных исследований опубликовано восемь печатных работ, из них пять - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Личный вклад соискателя. Представленная работа является результатом исследований автора в период с 2008 по 2011 годы.

Экспериментальную часть, работу по систематизации и анализу полученных результатов автор провел лично. Часть научных трудов опубликована в соавторстве с Калякиной Р.Г., Маряхиной B.C., Гончаровой В.М, Душкиной Е.А. Представленные в диссертационный совет справки подтверждают, что в диссертации их данные не использованы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 211 страницах компьютерного набора и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, используемых в диссертации, введения, обзора литературы, материала и методов исследования, семи глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, рекомендаций к использованию научных положений, выводов, библиографического списка и приложения к диссертации в объеме 65 страниц. Библиографический список включает 303 наименования работ, из них 116 - зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 70 рисунками и 40 таблицами.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 2.1. Материал и методы исследования

Работа выполнена в период с 2008 по 2011 годы на базе кролиководческого комплекса КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области, а также в условиях кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Материал получали в КФХ «Раздолье» при убое самок кроликов с хозяйственной целью (акты прилагаются). Гистологические пробы брали поствитально, не позднее одного часа и способом биопсии (Абрамова Л.Л., 2000). Перед убоем у животных в одно и то же время измеряли температуру, пульс, дыхание, из краевой ушной вены брали, пробы крови для ее биохимического исследования, определения в сыворотке крови концентрации селена, половых гормонов (пролактина, прогестерона, фолликулостимулирующего, лютеинизирующего и эстрадиола), иммуноглобулина G.

Объектом исследований служили молочные железы клинически здоровых крольчих породы советская шиншилла в возрасте от трех до девяти месяцев, разных функциональных ■ состояний: эструс полового созревания, эструс физиологической зрелости, 15-ти суток сукрольности, одного, девяти, 18, 27, 36, 45, 54 часов, трех и 15-ти суток после родов, 15-ти суток лактации, вторых суток после отъема и постлактационной инволюции. Материал в каждой группе брали не менее чем от 3-х голов. Всего в опыте использовано 111 животных.

КФХ «Раздолье» находится в благополучной зоне по инфекционным и инвазионным заболеваниям. В течение всего экспериментального периода животные содержались в одинаковых условиях и обслуживались одним кролиководом.

При формировании групп аналогов (в соответствии с периодизацией Rommers J.M., Kemp В., Meijerhof R., 1999) животных отбирали по возрасту, живой массе, телосложению, упитанности, клиническому (ТПД), физиологическому состоянию, численности молочных холмов и размерам сосков. Возраст крольчих определяли по данным регистрационных записей журналов учета зооветслужбы хозяйства, по скелету и зубам (Шевченко Б.П., Дегтярев B.B.-, : Абрамова Л.Л., Маховых М.Ю., 2010). Кормление • животных осуществляли согласно нормам ВИЖа. .

Для проведения экспериментальной части по влиянию селенсодержащих препаратов на морфофизиологию молочной железы крольчих использовали препараты «Е-селен» и «Селенолин®».

Первый - воднодисперсный комплекс витамина Е и селенита натрия. Второй препарат представляет собой инъекционную форму стерильного 2% масляного раствора диацетофенонилселенида (ДАФС-25) в растительном масле, разработан в ЗАО «Биоамид» (г. Саратов). В отличие от первого препарата, селен в нем присутствует в форме органического соединения.

В связи с тем, что в наставлениях по применению препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» и в доступной научной литературе отсутствует информация о дозах, не оказывающих токсического воздействия на организм испытуемых животных, нами был проведен опыт по отработке оптимальных доз. Для этого по принципу пар-аналогов было сформировано семь групп шестимесячных половозрелых интактных крольчих, по три головы в каждой (п=21).

Первая фуппа служила контролем, крольчихам второй группы (опытной) однократно внутримышечно, во внутреннюю сторону бедра, вводили препараты: «Е-селен» в дозах 0,04мл/кг, 0,06мл/кг и 0,08мл/кг, а крольчихам третьей группы (опытной) однократно, внутримышечно вводили препарат «Селенолин®» в дозах 0,008 мл/кг, 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела. Перед введением препаратов, согласно наставлениям по применению, содержимое флаконов подогревали до 38-40°С, «Е-селен» разводили водой для инъекций, а «Селенолин®» - стерильным маслом. В дальнейшем на всех этапах эксперимента нами использовалась именно эта технология парентерального введения селенсодержащих препаратов. Через десять дней производили убой животных и взятие гистопроб органов (сердца, печени, почки и молочной железы) для выявления степени токсичности доз препаратов.

В результате эксперимента нами установлено, что оптимальными дозами для организма кроликов являются соответственно 0,04 мл/кг для «Е-селена» и 0,008 мл/кг массы тела животного - для «Селенолина®». Согласно наставлениям по применению препаратов, в одном см3 «Е-селена» содержится 0,5 мг селена в виде селенита натрия, а «Селенолин » представляет собой 2% раствор диацетофенонилселенида в растительном масле, в одном см препарата содержится 5 мг активного селена. При перерасчете на активный селен, получаемый животным с рекомендуемыми дозами препаратов на единицу массы тела (кг), выяснили, что с дозой препарата «Е-селен» - животное получает 0,02 мг, а с дозой препарата «Селенолин®» - 0,04 мг активного селена.

Далее эксперимент проводили поэтапно. На первом этапе изучали влияние препаратов селена на маммогенез у интакгных крольчих в период полового созревания (3 мес.) и в период физиологической зрелости (6 мес.). Для этого были сформированы три группы трехмесячных и столько же шестимесячных крольчих - аналогов, по три головы в каждой (п=18). Первые две группы обоих возрастов служили контролем, крольчихам четырех опытных групп в начале течки (фаза эструс полового цикла) согласно технологии вводили препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в приработанных дозах.

На втором этапе изучали влияние селенсодержащих препаратов на морфофизиологию и адаптационную пластичность молочной железы в периоды лактогенеза и лактопоэза, а так же молочную продуктивность и состав молозива крольчих. Для этого формировали 3 группы животных - аналогов, в возрасте шести месяцев, по 24 головы в каждой (п=72).

Первая группа служила контролем, крольчихам двух опытных групп в начале течки (фаза эструс полового цикла), согласно технологии, вводили препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в оптимальных дозах, после чего через 6-7 дней в раннее утреннее время проводили покрытие крольчих в соответствии с графиком эксперимента. Готовность самок к случке определяли по поведению (Плотников В.Г., 2001) и состоянию наружных половых органов (Нигматуллин P.M., 2007).

Согласно рекомендациям В.Г. Плотникова (2001), Н.И. Тинаева (2007), во избежание прохолоста, через неделю проводили контрольную подсадку к самцу, а на 12-ый, 15-ый день после случки осторожно прощупывали крольчих, поместив их на ровной поверхности головой к себе, держа правой рукой за холку, левой пальпировали живот по ходу рогов

матки. В том случае, если эмбрионы прощупывались, самку считали сукрольной, холостых случали повторно.

Изучение влияния препаратов селена на морфофизиологию молочной железы крольчих в периоды беременности (п=9) и родов (п=9) проведено на втором этапе эксперимента.

На третьем этапе, исследования по влиянию препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» на морфофизиологию молочной железы крольчих в период лактации проводились в двух, направлениях: изучение хронодинамики проницаемости структур лактогематического. ■ барьера по часам (один, девять, 18, 27, 45, 54 часа) после окрола (п=9) и влияния препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» на объем выделяемого секрета и состав молока.

На четвертом и пятом этапах эксперимента изучали морфофизиологию молочной железы крольчих на фоне влияния препаратов селена в период отъема крольчат от самки (п=9) и постлактационной инволюции (п=9).

Экспериментальная часть включала в себя следующий комплекс исследований:

анатомическое исследование начинали с определения массы тела и молочной железы крольчих, диаметра и длины сосков. При изучении отделов выводной системы железы использовали макро-микроскопический метод селективной окраски железистой ткани метиленовой синью по Романовскому - Гимза.

Материалом для гистологического исследования служили гистологические пробы и биоптаты молочной железы (1см3) от половозрелых- самок всех исследуемых групп. Гистологический материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, проводили через батарею спиртов возрастающей крепости и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином Майера-эозином, углеводсодержащие биополимеры выявляли по Хочкису, РНК ядрышек и цитоплазмы выявляли по методу Браше. Световую микроскопию осуществляли при помощи микроскопа Micros MSD 500 (Австрия), оснащенного цифровой камерой.

При проведении гистохимических реакций нами проведена следующая методика: на предметные стекла наклеивали серию парафин-целлоидиновых срезов образцов ткани железы, взятых от животных разных функциональных состояний и одномоментно, в соответствии с методикой, стёкла погружали в растворы.

Цитологическое исследование проб железы (0,025 см3 - для изготовления ультратонких срезов), начинали с фиксации в охлажденном 2,5% растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН 7,4). После общепринятой подготовки и дегидратации материал заключали в смесь эпон-аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) изготавливали срезы толщиной 0,07-0,08 мкм, которые окрашивали 1% раствором толуидинового синего, приготовленного на 2,5% безводной соде. Электронную микроскопию производили на микроскопе JEM - 7А (Япония).

Морфометрическое исследование цито- и гистоструктур молочной железы, количественную информацию об объемах и других параметрах клеточных структур, их ядер, наружных диаметрах сосудов ГМЦР, а также о соотношении площадей, эпителиальных и соединительнотканных компонентов получали при использовании винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ 15150-69) и лицензионной программы «ТестМорфо - 4.0». В отдельном образце ткани измерение каждого показателя осуществляли не менее чем в 16 полях зрения каждого объекта.

-Физиологическое исследование молочной продуктивности самок в первые трое суток после окрола проводили путем взвешивания крольчат до и после сосания. Для этого потомство содержали изолированно, матерей подпускали один раз в сутки в определенное время. Чтобы избежать погрешности в учете, взвешивание производили сразу же после кормления. Поскольку численность новорожденных крольчат в.помете самок контрольной и опытных групп была различной, учитывали данные, полученные от восьми крольчат.

Иммунологическое исследование концентрации иммуноглобулина Q (IgG) в пробах сыворотки крови -. и молозива—»молока проводили , методом • твердофазного, :. тшмуноферментного анализа с использованием набора реагентов - «Иммуноскрин - G.-ИФА-БЕСТ» на спектрофотометре Multiscan Labsystems {Финляндия).

Сыворотку молозива—»молока готовили методом осаждения казеина 5% уксусной кислотой:по методике B.C. Антоновой, С.А. Соловьева, М.А. Сечиной (2007). .

Биохимическое исследование крови проводили по следующим показателям и методикам: количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов определялось гематологическим анализатором Medonic СА 620. Прибор использует для подсчета клеток и измерения их размеров кондуктометрический метод, а для измерения гемоглобина -колориметрический метод (Кондрахин И.П., 1985).

Общий белок сыворотки крови исследовали по биуретовой реакции, ACT и АЛТ -кинетическим спектрофотометрическим методом, кальций - унифицированным калориметрическим методом, фосфор - UV методом без депротеинизации (Камышников B.C., 2000; Тиц Н.У., 2003; Клиническое руководство, 2004). Коэффициент де Ритиса вычисляли исходя из соотношения: ACT/AJ1T (Медведева М.А., 2008).

Взятие проб молозива—»молока производили путем ручного доения крольчих. Массовую долю белка в молозиве и молоке определяли рефрактометром ИРФ-464, содержание жира, сухого обезжиренного молочного остатка (COMO), определение плотности проводили с помощью анализатора молока «Лактан 1-4 мини».

Концентрацию половых гормонов (пролактина, прогестерона, фолликулостимули-рующего, лютеинизирующего, эстрадиола) в сыворотке крови осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Multiscan Labsystems» (Финляндия) с использованием стандартных наборов реагентов: «DRG- diagnostics» (США), «Гонадотропин ИФА-ЛГ», «Гонадотропин ИФА-ФСГ», «ИФА-пролактин - 01», «Стероид ИФА-прогестерон - 01» (Санкт-Петербург).

Химико-аналитическое исследование количественного содержания селена в сыворотке крови, молозива—»молока осуществляли усовершенствованным нами флуориметрическим методом (Anipko V.V., Maryakhina V.S., Abramova L.L., 2011), на спектрофлуориметре SOLAR СМ-2203. Сыворотку крови получали путем отделения клеточных элементов крови на центрифуге EU Imtex СМ-50 при 8000 об/мин, в течение 10 минут.

Взятие биоптатов органа. С целью изучения временной динамики проницаемости лактогематического барьера органа в первые сутки после окрола с помощью гисто- и цитологического исследований от девяти крольчих всех трех групп производили взятие биоптатов молочной железы. Для соблюдения чистоты эксперимента мы разработали и предложили схему (рис.1) и методику взятия биопсий молочной железы у крольчих.

Проведя анестезию животного внутримышечным введением 2,5% раствора аминозина, из расчета - 0,1 мл на килограмм массы тела животного, фиксировали крольчиху на столике Виноградова. Подготовив поле по Пирогову, по периферии молочного холма скальпелем рассекали кожный покров, фасции. Увеличивая ранорасширителем площадь разреза, от железы отсекали биоптат объемом 1 см3 для гистологического исследования, от которого отбирали пробу 0,025 см3 для цитологического исследования. После взятия биоптата рану присыпали трициллином, края раны сшивали прерывисто-узловатым швом, затем обрабатывали поверхность вокруг раны 5% спиртовым раствором йода.

Рис. 1. Схема и временные интервалы взятия биопсийного материала

Учитывая специфичность иммунологических исследований, мы производили забор проб крови и биоптатов железы через равные промежутки времени (9 часов).

Статистическая обработка данных результатов исследований заключалась в построении вариационных рядов, определении средних величин показателей вариации и проверке нормальности распределений полученных данных при использовании программы «Microsoft Excel» (Базаров MX, 2008). Для оценки различий двух групп показателей применяли критерий достоверности Стьюдента. Взаимовлияние морфометрических показателей гистоструктур выражали через коэффициенты парной корреляции, построение регрессионных уравнений (Автандилов Г.Г., 1990, 2002).

. Приготовление гистопрепаратов, исследование гистоструктуры молочной железы, морфометрию ее структур, статистическую обработку полученных данных и их корреляционный анализ проводили в условиях кафедры морфологии, физиологии и . патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский ГАУ». Получение ультратонких срезов и их электронную микроскопию осуществляли на базе лаборатории электронной микроскопии ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Росздрава» (г. Уфа). Исследование концентрации половых гормонов в сыворотке крови крольчих проводили на базе проблемной лаборатории по изучению механизмов естественного иммунитета Оренбургской ГМА. Биохимический анализ крови проводили в гематологической лаборатории ВНИИМС РАСХН. Исследование концентрации селена в сыворотке крови проводили в институте Микро- и нанотехнологий при содействии заведующего лабораторией B.C. Маряхиной, профессора С.Н. Летуты, а биохимический анализ молозива—»молока - в условиях лаборатории кафедры технологии переработки молока и мяса Оренбургского ГУ при содействии профессора О.В. Богатовой, доцента Н.Г. Догаревой. Концентрации иммуноглобулинов определяли на базе лаборатории института клеточного и внеклеточного симбиоза Уральского отделения РАН.

Названия анатомических, гистологических и эмбриологических структур и образований приведены в соответствии с Международной (Парижской) анатомической и гистологической номенклатурой (N.A.V., N.H., N.E.V., 1994), уточненной на международных конгрессах, а русские эквиваленты - по 4-ой редакции Международной ветеринарной анатомической номенклатуры (Зеленевский Н.В., 2003).

2.2. Гистология паренхиматозных органов крольчих при воздействии разных доз препаратов «Е-селен» и «Селенолин®»

Исследования по степени воздействия на ткани печени, почек и миокарда сердца крольчих препаратов «Е-селен» в дозах 0,04мл/кг, 0,06мл/кг и 0,08мл/кг и «Селенолин"» в дозах 0,008 мл/кг, 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела животного позволили получить следующие результаты: вводимая парентерально избыточная доза неорганического селена, входящая в состав препарата «Е-селен», оказывает токсичное воздействие на ткани печени, почек, миокарда крольчих.

Воздействие высокой дозы органического селена в составе препарата «Селенолин®» оказывает высокотоксичный эффект на гистофизиологию органов.

Для кроликов оптимальными (не токсичными) дозами препаратов «Е-селен» являются

0,04 мл/кг, а «Селенолин®» - 0,008 мл/кг массы тела животного. :

2.3. Морфогенез отделов выводной системы молочной железы крольчих в норме и при влиянии препаратов селена.

У крольчихи четыре - пять пар молочных желез (долей), располагающихся вдоль , белой линии живота. Каждая доля отдельной молочной железы, в свою очередь, состоит из расположенных радиально вокруг соска шести - восьми долек, открывающихся в сосок, молочными, ходами (от одного до 14). В сосках молочных желез крольчих отсутствуют молочные синусы (цистерны), вследствие чего выделение секрета идет напрямую.--. л В три • месяца маммогенеза у крольчих контрольной группы начало гормональной регуляции инициировало увеличение массы молочной железы, что происходило сдержанно . (число отрицательных связей - 56). В шесть месяцев; несмотря на установившуюся -

цикличность влияния гормонов, также отмечали сдерживание роста массы органа и протоков всех уровней (число отрицательных связей - 72).

У самок первой опытной группы в три месяца механизм действия селена в комплексе с витамином Е способствовал повышению выработки Прл, сдерживанию артериального притока в органе. В шесть месяцев при увеличении выработки Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг инициировался рост протоков, активизировались каналикуляция эпителия и рост паренхимы органа (число отрицательных связей в три месяца - 39, в шесть месяцев - 0). Воздействие препарата «Е-селен», в сравнении с контрольной группой, десинхронизировало маммогенез и способствовало более раннему формированию структур выводной системы и достижению органом полной морфофункциональной зрелости.

У крольчих второй опытной группы в возрасте трех месяцев механизм воздействия органического селена стимулировал продукцию ЛГ и Е-2, при этом снижалась выработка ФСГ и ПРг. Интенсифицировалось артериальное кровоснабжение, масса молочной железы изменялась незначительно. В шесть месяцев отмечали увеличение продукции ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2, снижение выработки Прл. Происходил интенсивный рост массы железы, длины соска (число отрицательных связей в три месяца - 24, в шесть месяцев - 36). В сравнении с контрольной и первой опытной группами воздействие препарата «Селенолин®» в три месяца оказывало еще более выраженное десинхронизирующее действие на маммогенез и способствовало его завершению к шести месяцам.

В период беременности у крольчих контрольной группы на фоне высокой взаимосвязи плацентарного ПРг с Прл и умеренной выработки ФСГ и ЛГ отмечался интенсивный рост длины соска (число отрицательных связей - 40). На фоне влияния «Е-селена» выработка ФСГ увеличивалась, усиливался артериальный приток в молочной железе. В этот период на маммогенез совместно влияли плацентарный ПРг с Прл (число отрицательных связей - 32). Под влиянием препарата «Селенолин®» активизация артериального притока инициировала существенный рост диаметра протоков (число отрицательных связей - 54).

В роды у самок контрольной группы отмечали интенсификацию артериального притока, увеличение диаметров протоков и соска, регуляция чего осуществлялась гуморальной и нервной системами (число отрицательных связей - 48).

В первой опытной группе увеличение массы органа и диаметра протоков происходило за счет интенсивного секретообразования, а уменьшение - при опорожнении системы, регулируемые, главным образом, автономной нервной системой. Механизм действия неорганического селена в комплексе с витамином Е обусловливал низкое содержание ЛГ и Е-2 в сыворотке крови самки, а влияние «Селенолина®» инициировало повышенное содержание Прл в сыворотке крови, на фоне чего отмечали увеличение массы органа.

В середине лактации в контрольной группе ритмичная выработка и выведение компонентов секрета, регулируемые высокой концентрацией Прл, влияли на динамику массы железы крольчих и интенсивность притока крови. Увеличение численности отрицательных связей (п=47) характеризовало появление первых признаков инволюции железы.

В первой опытной группе уравновешивание артериального притока и оттока стабилизировало уровень секреции молока. Несмотря на достаточно высокое содержание Прл и высокий уровень ФСГ и ПРг в сыворотке крови, создавало тенденцию к снижению секреции компонентов молока и началу инволюторных процессов в молочной железе. В сравнении с контролем, на фоне «Е-селена» обнаруживалась тенденция к увеличению длительности процесса лактации (число отрицательных связей - 64).

У крольчих второй опытной группы действие органического селена обусловило вялотекущие дегенеративные изменения в паренхиматозном компоненте железы на фоне интенсивного артериального притока, увеличения уровня концентрации Прл в сыворотке крови и подтверждало тенденцию к увеличению продолжительности процесса лактации (число отрицательных связей - 72).

В период отъема крольчат и последующей инволюции между структурами молочной железы крольчих контрольной группы значительное уменьшение концентрации ПРг, ЛГ в сыворотке крови обусловило нахождение органа в фазе относительного покоя (число отрицательных связей-72).

Поскольку у самок первой опытной группы длительность процесса лактации увеличивалась, снижение активности притока крови, а затем - умеренность, вели к замедлению темпов роста жировой ткани и снижению объема железистой паренхимы в пользу стромального компонента (число отрицательных связей: в отбивку - 48, в инволюцию - 28).

У крольчих второй опытной группы к отбивке с последующей инволюцией появление положительной взаимосвязи массы органа с диаметром миоцитов протоков, диаметрами самих протоков и концентрацией Прл свидетельствовало о большей степени воздействия органического селена на продолжительность секреторного цикла лактоцитов, чем при применении препарата «E-селен» (число отрицательных связей в отбивку - 64, в инволюцию - 50).

В сравнении с контролем, препараты селена увеличивали продолжительность процесса лактации, особенно при использовании «Селенолина®», они проявляли стимулирующее воздействие на процессы маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза. Несмотря на то, что «E-селен» уступал по эффективности «Селенолину®», его воздействие на гистофизиологию железы было равномерным и щадящим.

2.4. Особенности гистофизиологии железы на фоне применения препаратов селена в периоды половой и физиологической зрелости самки

В три месяца в период эструс первого полового цикла у животных контрольной группы в сыворотке крови на фоне недостатка селена увеличивается содержание Прл, ФСГ и J1F, в то время как ПРг и Е-2 - снижается. Это сдерживает ангиогенез, интенсивный рост массы молочной железы, но способствует увеличению объема жировых долек и диаметра протока (Рис. 2 А). В контрольной группе мы наблюдали синхронность в секреции Прг и Е-2, что не согласуется с данными JI.H. Колодиной и В.В. Корхова (1985), отмечавших асинхронность процесса выработки Е-2 и ПРГ в период полового созревания.

В первой опытной группе на фоне применения «E-селена» в крови повышается концентрация селена, механизм влияния которого способствует увеличению выработки Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг и снижению Е-2, что приводит к изменению взаимосвязи структур, к сдерживанию ангиогенеза и притока артериальной крови, уменьшению объема жировых долек (Рис. 2 Б).

« S л У*. \ А у - В

г Ж /г ** * * wíi*/ г ' '-U

■ ' v>v. í'W

\ « rí-J^ i r * ■

V - • . V-

РИО* Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной (А), первой (Б) и второй опытных групп в возрасте трех месяцев. Гематоксилин и эозин. 06.40.0кЛ5. 1 - протоки; 2 - стромальный компонент; 3 - пролиферирующая часть протока; 4 - скопления адипоцитов; 5 - сосуд ГМЦР

Во второй опытной группе препарат «Селенолин®» способствует снижению концентрации ФСГ и Прг, повышению Е-2 и ЛГ, стимулирует ангиогенез, приток артериальной крови, рост и численность нервных волокон й их окончаний,' а сдерживает интенсивный рост паренхимы (Рис. 2 В).

По сравнению с контролем, препараты селена способствовали изменению морфологических и биохимических показателей крови в сторону их увеличения в пределах физиологической нормы, что согласуется с данными К.А. Сидоровой, К.С. Есенбаевой,

H.A. Петровой и др. (2007), Т.А. Трошиной (2008), A. Sandukji, Н. Al-Sawaf, A. Mohamadin, et all. (2010).

В шесть месяцев в период эструс полового цикла у животных контрольной группы на фоне низкого содержания селена в крови существенно увеличивается концентрация ЛГ и ПРг, незначительно - концентрация Прл и ФСГ, снижается концентрация Е-2. Сдерживается увеличение массы молочной железы, рост протоков, но при этом происходит активный ангиогенез, артериальный приток, дифференцировка миоэпителиоцитов, ядра и цитоплазмы эпителиоцитов концевых отделов протоков (Рис. 3 А).

Изменение селенового статуса организма крольчих первой опытной группы незначительно увеличивает выработку половых гормонов (Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг). Результаты наших исследований согласуются с данными М.Г. Халипаева (2003), сообщающего о характере колебания половых гормонов в периоды репродуктивного цикла самки. При снижении Е-2 поддерживается рост терминальных отделов протоков и нервов. Вместе с тем, на этом этапе маммогенеза происходит увеличение диаметра сосудов, усиление артериального притока, дифференцировка миоэпителиоцитов, задержка дифференцировки эпителиоцитов и роста альвеол. В концевых участках протоков отмечается активная пролиферация эпителиоцитов (Рис. 3 Б).

На фоне влияния «Селенолина®» повышается концентрация ЛГ, ПРг, Е-2 и ФСГ, следовательно, стимулируется рост массы железы, ангиогенез и артериальный приток. Отмечается активное образование альвеол и стимулирование дифференцировки эпителиоцитов (ядерный белковый синтез в малодифференцированных клетках) альвеол. Сдерживается рост протоков за счет снижения концентрации Прл и повышения присутствия в крови ПРг (Рис. 3 В).

В этот период в обеих опытных группах препараты селена повышали уровень гематологических показателей.

2.5. Особенности морфофизиологии молочной железы беременных крольчих

Лактогенез - важный период становления морфологии молочной железы с целью реализации основной функции - лактации. В это время на фоне специфической динамики гормонов завершается рост и дифференцировка железистого компонента органа, максимально развивается выводная система и дольки.

В контрольной группе на фоне высокой взаимосвязи Прл с ПРг инициировался рост протоков, численность и объем альвеол, рост объема лактоцитов и дифференцировка миоэпителиоцитов, что согласуется с данными A.A. Токмакова, Я. Фуками, (2009). Умеренная концентрация ФСГ и ЛГ, их высокая взаимосвязь между собой обуславливала возникновение тенденции к активизации артериального притока, росту железистой дольки и массы молочной железы. В период беременности синхронности в нарастании концентраций половых гормонов не наблюдали, что

Рис. 3. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной (5Гпервой~(Б) и второй (В) опытных групп в возрасте шести месяцев. Гематоксилин и эозин. ОбЛОО.Ок.15, 1 - протоки; 2 - концевые сферические участки протока; 3 - сосуды ГМЦР; 4 - формирующаяся альвеола; 5 - терминаль нервного волокна

позволяет оспорить мнение G. Castoria, M.V. Barone, М. Di Domenico, A. Bilancio et all. (1999) об отсутствии их прямого влияния на секрецию друг друга.

Низкая концентрация фона селена в крови крольчих определяла уровень дифференциации эпителиоцитов альвеол и переход их в лактоциты. Активизация артериального притока инициировала увеличение объема железистых долек и альвеол и дифференцировку миоэпителиоцитов, последняя определялась степенью зрелости лактоцитов, при этом масса железы изменялась незначительно. Динамика паренхиматозно-стромального отношения, взаимосвязь структур железы проявляли тенденцию к реализации на заключительном этапе сукрольности (Рис. 4 А).

При воздействии «Е-селена» влияние высокого фонового значения микроэлемента на отделы ЦНС и гипоталамуса приводило к снижению выработки Прл и увеличению концентрации ФСГ, инициирующих рост сосудов гемомикроциркуляторного русла (артериальный приток), протоков, увеличение численности и объема альвеол и сдерживающих цитодифференцировку миоэпителиальных клеток. За счет интенсивной пролиферации эпителия терминальных отделов протоков незначительно увеличивалась доля железистой паренхимы органа, несущественно увеличивался объем железистых долек и масса железы (Рис. 4 Б).

. _______ ________

Гистоструктура молочной железы беременных крольчих контрольной (А), первой (Б) и второй (В) опытных групп. Гематоксилин и эозин (А); Толуидиновый синий (Б, В), Об.ЮО.Ок.15. 1 - ядра эпителиоцитов протока; 2 - сосуды ГМЦР; 3 - альвеола; 4 - терминаль нервного волокна; 5 - нервное волокно

Таким образом, нейрогуморальное взаимодействие и специфическая сочетанность гормонов в середине беременности активизировали пролиферацию малодифференцированных эпителиальных элементов органа.

Механизм влияния органического селена в составе препарата «Селенолин®» вызывал снижение концентрации половых гормонов в сыворотке крови самки, (кроме Е-2), инициировал в молочной железе ангиогенез и приток артериальной крови, за счет пролиферации эпителия - рост железистых долек, цитодифференцировку миоэпителиоцитов, сдерживал дифференцировку эпителиоцитов альвеол и рост протоков (Рис. 4 В).

Анализируя показатели морфологии и биохимии крови, на фоне применения препаратов селена отмечали повышение в пределах нормы количественного содержания эритроцитов и лейкоцитов, концентрации гемоглобина, альбуминов, у- глобулинов, а также снижение концентрации а- и |3- глобулинов, содержания кальция и фосфора.

2.6. Особенности гистофизиологии железы и ее секреции при воздействии препаратов селена в период родов и лактации

В период родов у самок контрольной группы на фоне низкой концентрации селена в сыворотке крови отмечали интенсификацию артериального притока (обменное звено), цитодифференцировку и начало функционирования миоэпителиоцитов с одновременным включением ядерного белкового синтеза в лактоцитах и миоэпителиоцитах, что свидетельствует о готовности системы к

выделению секрета. Увеличение массы молочной железы, объема лактоцитов, диаметра протоков явилось следствием стаза молозива и проталкивания его миоэпителиальными клетками из концевых отделов. Хотя изменение объема железистых долек было не существенным, проявлялась тенденция к их увеличению (Рис. 5 А).

В первой опытной группе механизм воздействия селена с витамином Е в период родов обусловливал существенное увеличение концентрации ФСГ и эстрогенов, что свидетельствовало об активизации фолликулогенеза в яичнике и снижение Прл и ПРг. Снижение индекса концентрации Прл/ФСГ, специфичное для этого периода, запускало ядерно-белковый синтез в лактоцитах (секреторный цикл), но ингибировало функционирование миоэпителиоцитов. Цитоплазма лактоцитов альвеол насыщалась секретируемыми компонентами, готовыми к секреции. Незначительное изменение объемов альвеол и железистых долек происходило за счет накопления секрета. Вокруг концевых секретирующих отделов отмечали активизацию нейрогенеза, рост нервных волокон и формирование их терминалей (Рис. 5 Б).

Отсутствие давления миоэпителиальных клеток в секреторных отделах способствовало расширению альвеол и заполнению протоков молозивом. Следовательно, ввиду стаза молозива в концевых отделах и отсутствия интенсивного притока крови лактоциты не включались в новый секреторный цикл.

1 истоструктура молочной железы крольчих контрольной опытных групп в период родов. Гематоксилин и эозин. 06.100.0k.i5. Г - альвеола; 2'- ядра альвеол; 3 - сосуды ГМЦР; 4 - терминаль нервного волокна; 5 - скопление нервов

Во второй опытной группе оптимальное количество органического селена, поступившего с «Селенолином®», в сыворотке крови повышало содержание Прл и снижало выработку эстрогенов, что согласуется с данными В.А. Берестова. На фоне этого отмечали увеличение объемов железистых долек и альвеол за счет ингибирования ретракции миоэпителиоцитов в концевых отделах и стаза молозива, препятствующих вхождению лактоцита в новый секреторный цикл, а также относительно первой опытной группы, в дольках выявляли меньшую степень влияния на нейрогенез (Рис. 5 В).

В первые часы лактации хронодинамику лактогематического барьера и регуляцию лактогенеза в репродуктивном цикле обеспечивают половые гормоны, выполняя важную роль в развитии физиологической адаптации организма самки к вскармливанию детенышей и переходе молочной железы от секреции молозива к выработке молока, участвуют в синтезе его компонентов. Нами изучена взаимосвязь клеточных и тканевых структур лактогематического барьера молочной железы крольчих с динамикой (и индексами) концентраций половых гормонов и в . сыворотке крови в течение первых 54 часов после родов в норме и при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®».

Временной анализ динамики морфологических показателей (характеристик) структур органа1 в течение первых 54 часов после окрола показал, что механизм влияния препаратов селена на лактопоэз выражается в снижении уровня индексов Прл/ФСГ и Прл/ЛГ. Это может быть обусловлено обратной взаимосвязью структур яичника с нейросекреторными клетками ядер гипоталамуса и аденотропоцитами гипофиза. Специфическое соотношение половых гормонов, факторов паракринной

регуляции, особенно в первый час лактации, инициировало увеличение проницаемости лактогематического барьера железы и высокую лабильность его структур (Табл. 1).

Таблица 1. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через один час после окрола_

Группы животных Контрольная

I опытная

II опытная

Прл, ммЕ/л 77,93±5,30 54,47±0,73** 76,15±1,36*

ФСГ, ммЕ/мл 1,12±0,1ь 1,27±0,02** 1,14±0,01**

ЛГ, ммЕ/мл 0,60±0,05 2,29±0,01 ** 1,44±0,01**

ПРг, Нмоль/л 2,89±0,31 1,12±0,05** 4,45*0,10*

Е-2, Пг/мл 8,72±0,30 19,93±0,04** 12,76±0,40*

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,001

Так, в контрольной группе в первый час после окрола при низкой концентрации селена в сыворотке крови и повышении содержания Прл и ПРг отмечали усиление притока артериальной крови, способствующее активизации работы гематотканевого барьера.

На протяжении первых 27 часов постепенно увеличивалось содержание ^О в сыворотке крови, по истечении которых, регистрировали равномерное его снижение (Рис. 6). Именно в 27 часов лактации регистрировали переход лактоцитов с выработки компонентов молозива на секрецию молока.

Рис. 6. Доля 1§0 (100% - их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лакто-гематический барьер в молозиво, спустя 27 часов после окрола в контрольной (А - зеленый), первой (Б - оранжевый) и второй (В - лиловый) опытных группах

При применении препарата «Е-селен», уровень содержания Прл в первый час после окрола был ниже, относительно контроля. Содержание ПРг, ЛГ и Е-2 повышалось. Пусковым механизмом ядерно-белкового синтеза в лактоцитах являлся снижающийся индекс концентрации Прл/ФСГ. Относительно контроля отмечали увеличение параметров структур лактогематического барьера, что было особенно выражено в первые 18 часов, поскольку в это время отмечалась максимально сочетанная работа структур барьера. На фоне комплексного воздействия селена и витамина Е тенденция к перестройке лактоцитов с выработки молозива на молоко наблюдалась после 36 часов после окрола, а процент выхода 1^0 имел тенденцию к увеличению до 54 часов.

Во второй опытной группе в первый час после окрола при повышении концентрации Прл, ЛГ, Е-2 в сыворотке крови отмечалась динамика увеличения диаметра капилляра, объема ядра и самого лактоцита, увеличение числа нервных волокон и их окончаний. Органическая форма селена пролонгирует молозивный период, тенденция к перестройке лактоцитов с выработки молозива на молоко реализуется после 36 часов, подтверждением чему явилось усиление ядерного белкового синтеза в лактоцитах к 54 часам. При влиянии препарата «Селенолин®», снижение концентрации ^О в секрете наступало после 36 часов, но поскольку относительно первой опытной группы его концентрация была выше, снижение было равномерным, не скачкообразным.

Выявление особенности хронодинамики структур лактогематического барьера железы крольчих контрольной и опытных групп обнаружило самый высокий уровень

его проницаемости в первый, девятый и 18 часы после окрола. С девяти часов регистрировалась ведущая роль гуморальной регуляции морфофункциональных параметров структур барьера и повышения его проницаемости, в том числе и для IgG, поступающих из плазмы крови. В 18 часов - высокая взаимосвязь лактоцита, капилляра, миоэпителиоцита и альвеолы определяла специфику цитофизиологии лактогематического барьера, инициировала эффективный выход IgG в молозиво. Изменение индексов концентраций половых гормонов с высокой амплитудой колебаний было более выражено до 27 часов лактации у самок контрольной группы, в то время как влияние препаратов селена уменьшало амплитуду колебаний и периодичность этого процесса.

Во всех трех группах с 18 до 27 часов отмечали стабильный характер проницаемости гематотканевого барьера, определяющий долю выхода IgG из крови в секрет и связанный с генетически обусловленным процессом перестройки секреторного цикла лактоцита с выработки компонентов молозива на молоко, реализуемым после 27 часов после окрола.

В середине лактации при низкой концентрации селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы создается специфическое соотношение концентраций половых гормонов при повышении индекса Прл/ФСГ и снижения - Прл/ЛГ. Недостаток селена не препятствует массовой овуляции и образованию циклических желтых тел, что способствует повышению концентрации ПРг в сыворотке крови, что, по объяснению В.В. Рожнова, Св.В. Найденко, C.B. Найденко (2007) связано с возможностью спонтанной овуляции.

В молочной железе отмечали активный приток крови, ритмичный характер секреторных циклов лактоцитов, изменение объема альвеол, выявляли зависимость интенсивности функционирования миоэпителиоцитов от концентрации селена в сыворотке крови, интенсивное сокращение протоков, обеспечивающее опорожнение системы (Рис. 7).

молочной железы крольчихи контрольной группы в середину лактации. Ув. х 7200. 1 - ади-поцит, 2 - ядра эпителиоцитов протоков, 3 - ядро темного лактоцита, 4 - цитоплазма темного лактоцита

В первой опытной группе механизм влияния концентрации селена и витамина Е инициировал повышение индексов концентраций Прл/ФСГ и Прл/ЛГ. При этом в 15 суток лактации в сыворотке крови самок регистрировалось высокое значение концентрации ПРг (увеличение в 6,48 раз) и снижение в два раза концентрации эстрогенов. По сравнению с контролем, кровеносные сосуды в дольках в меньшей степени были подвержены регуляции, отмечалось снижение интенсивности кровотока.

При этом активизировались секреторные циклы лактоцита и функция

миоэпителия, а объем лактоцита, диаметр протока и масса железы, в отличие от объема альвеол и долек, не проявляли взаимосвязи с концентрациями гормонов и другими структурами системы (Рис. 8).

Во второй опытной группе на фоне влияния органического селена увеличивался индекс концентраций Прл/ФСГ и снижался индекс Прл/ЛГ, при этом в сыворотке крови сохранялось высокое значение концентрации Прг и эстрогенов. Механизм воздействия органического селена на функционирование гипоталамо-гипофизарной системы проявлялся в изменении: секреции л половых гормонов, гормонально-паракринных взаимосвязей, диаметра протоков, что, в целом, характеризовало процессы: «включения» секреторного цикла, выведения лактоцитами синтезируемого секрета (ретракция миоэпителия) и наполнения альвеол, увеличения массы железы и запуск ретракции миоцитов протоков как регулируемые, чего не наблюдали при действии «Е-селена» (Рис. 9).

Так же, как и в случае с «Е-селеном», интенсивность притока крови и степень наполнения кровеносных сосудов в дольках не были регулируемыми (за исключением влияния концентрации ФСГ).

кис. е. ^лектронограмма ультратонкого среза

молочной железы крольчихи первой опытной группы в середину лактации. Ув. х 10000. 1 - гращады казеина, 2 - транспорт гранул казеина, 3 - ядро темного лактоцита, 4 - ядро светлого лактоцита

2.7. Молочная продуктивность и сравнительный состав молозива и молока крольчих при влиянии препаратов «Е - селен» и «Селенолин®»

Материнский инстинкт самки - генетически запрограммированный процесс, определяющийся необходимостью выкармливания воспроизведенного ею на свет потомства. Но молочная железа не каждой самки продуцирует необходимый объем и состав молозива—>молока для полноценного развития потомства. Особо существенна эта проблема в многоплодных пометах.

На молочную продуктивность самки влияют уровень кормления и условия содержания, а также степень секреторной активности ее молочной железы.

Относительно контроля в первой опытной группе влияние препарата «Е-селен» способствовало повышению содержания селена в сыворотке крови, молозива и молока, увеличению живой массы новорожденных крольчат; повышению молочной продуктивности самки, в чем согласны с А. Никитенковым, А. Яхиным, В.Крохиным (2001), И.А. Яппаровым, Т.Н. Родионовой (2006), A.M. Васильевым, Ю.Н. Прытковым (2007), Г.А. Дубравной (2009), получившими подобные результаты при применении

молочной железы крольчихи второй опытной группы в середину лактации. Ув. х 7200.

1 - трансмембранный транспорт веществ,

2 - гранулы казеина, 3 - микроворсинка на поверхности светлого лактоцита, 4 - гранулы триглицеридов, 5 - цитоплазма темного лактоцита, 6 - ядро темного лактоцита, 7 - ядро светлого лактоцита

различных препаратов селена на других видах животных. Вследствие увеличения активности транспорта компонентов секрета в молозиве и молоке повысилось содержание жира, белка, COMO, увеличилась плотность секрета. В сыворотке крови, а также в молозиве—»молоке увеличилось содержание IgG.

На фоне применения препарата «Селенолин®» концентрация селена в сыворотке крови, молозива и молока была выше, чем в первой опытной группе, в результате чего отмечали большую массу новорожденных крольчат, более высокие показатели молочной продуктивности крольчих. Молозиво и молоко крольчих второй опытной группы по содержанию жира, белка, COMO, плотности, концентрации IgG имели превосходство над таковыми секрета крольчих первой опытной группы. Результаты наших исследований подтверждают большую эффективность «Селенолина*», что согласуется с данными А.П. Гуменюка, С.П. Воронина, В.М. Скорлякова (2009), В.А. Блинова, С.Н. Буршиной, Е.А. Шапулина (2010).

2.8. Особенности гистофизиологии железы при действии препаратов селена в период отъема и в постлактационную инволюцию

В период отъема крольчат у самок контрольной группы механизм действия низкого содержания селена в сыворотке крови активизировал выработку Е-2, существенное снижение концентрации ЛГ, ФСГ и ПРг и незначительное - Прл. Это способствовало уменьшению артериального притока к органу, реорганизации секреторного цикла в лактоците, направленной на реабсорбцию компонентов молока, ингибированию нейрогенеза и функции миоэпителиоцитов, уменьшению объема альвеол и массы молочной железы, причем наибольшее влияние на эти процессы оказывало снижение концентраций ПРг и ЛГ (Рис. 10 А).

Рис: 10. Электронограмма ультратонких срезов молочной железы крольчих в период отъема. (А) Контрольная группа, Ув. х 4800; (Б) Первая опытная группа, Ув. х 7200; (В) Вторая опытная группа Ув. х 7200. 1 - апоптозные тела лактоцитов, 2 - вакуоль с триглицеридами, 3 -вакуолизация цитоплазмы, 4 - ядро лактоцита

В первой опытной группе на фоне значительного присутствия в сыворотке крови неорганического селена и витамина Е отмечали увеличение продукции ЛГ и снижение концентраций ФСГ и ПРг, что обусловливало снижение активности притока крови, «торможение» ядерного белкового синтеза лактоцитов (выключение секреторного цикла), повышение синтетической активности их цитоплазмы с одновременным снижением ее объема, при этом миоэпителиоциты находились в состоянии инактивации. Так же происходило умеренное уменьшение объема альвеол, приостановка нейрогенеза. На фоне «Е-селена» отмечалась задержка старта инволюторных процессов (Рис. 10 Б).

Во второй опытной группе на фоне применения препарата «Селенолин®» в сыворотке крови изменялось соотношение гормонов, выражающееся в снижении концентрации Прл, ЛГ, ПРг и повышении - ФСГ и Е-2. Масса молочной железы, объем альвеол, диаметр протока имели тенденцию к уменьшению, на фоне возрастания интенсивности кровоснабжения как со стороны артериальных, так и венозных звеньев микроциркуляторного русла и стимулирования нейрогенеза. При этом в лактоцитах альвеол отмечали активно протекающий секреторный цикл,

характеризующийся продукцией компонентов секрета, и активность миоэпителиоцитов, осуществляющих изгнание секрета в протоковую систему. Влияние препарата «Селенолин » в молочной железе способствовало пролонгированию процесса лактации (Рис. 10 В).

В период инволюции низкая концентрация селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы способствовала увеличению массы молочной железы за счет нарастания численности адипоцитов и формированию жировых долек. Вокруг жировых долек в мелкопетлистой сети микроциркуляторного русла отмечали интенсивную васкуляризацию.

Паренхиматозно-стромальное отношение изменялось в пользу соединительной и жировой ткани. Замещение железистой ткани жировой происходило следующим образом: по периферии альвеол адвентициальные клетки трабекул дифференцировались в адипоциты. По мере накопления в последних триглицеридов они формировали вокруг альвеол «жировое кольцо».

В результате внутренней реорганизации лактоцитов альвеол малочисленных, мелких железистых долек происходило «выключение» их секреторного цикла. Деградация и апоптоз большей их части приводили к сохранению небольшого числа эпителиоцитов и малодифференцированных миоэпителиальных элементов. По мере разрастания в органе жировой ткани и активной деградации лактоцитов шло замещение альвеол железистой ткани жировыми дольками. Протоки находились в спавшемся состоянии, циклический характер выработки половых гормонов способствовал их росту (Рис. 11 А). Подобное в молочной железе крольчих наблюдали Н.М. Грезина, H.A. Зиновьева (2005); Р.Г. Калякина (2006).

% Л Ъ

1>ис. 11.1 истоструктура молочной железы крольчих контрольной (А) первой (Б) и второй (В) опытных групп в период инволюции. Гематоксилин и эозин. 0б.100.0к.15. 1 - сосуды ГМЦР; 2 - ядра миоэпителиальных клеток; 3 - деградирующие лактоциты; 4 - нервная терминаль с волокном; 5 - ядро миоэпителиальной клетки

Во второй опытной группе механизм воздействия органического селена в период инволюции подавлял выработку всех половых гормонов, и только поддерживающийся высокий уровень концентрации эстрогенов подтверждает активный фолликулогенез в яичнике самки. Отмечали активное участие лактоцитов в процессе реабсорбции, а миоэпителиоцитов в ретракции и некоторое запаздывание процесса замещения железистых долек жировыми. Размеры альвеол были значительны, как и объем железистых долек (Рис. 11 В).

ВЫВОДЫ

1. Вводимые парентерально крольчихам неорганический селен («E-селен») в дозах 0,06мл/кг и 0,08мл/кг и органический селен («Селенолин®») в дозах 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела животного оказывали, соответственно, токсический и высокотоксический эффекты на гистофизиологию тканей печени, почек, миокарда.

В эксперименте использованы оптимальные дозы препаратов: «Е-селен» - 0,04 мл/кг и «Селенолин » - 0,008 мл/кг массы тела животного.

2. У крольчих контрольной группы в три месяца (эструс первого полового цикла) на фоне недостатка селена и специфической гормональной регуляции маммогенез выражается сдерживанием ангиагенеза, увеличением протоков и объема стромалыюго компонента (жировых долек). В шесть месяцев активизация ангиогенеза обеспечивает рост массы органа, протоков и дифференцировку миоэпителиоцитов, при этом сдерживается рост и созревание эпителиоцитов концевых отделов. Воздействие «Е-селена» и «Селенолина » десинхронизирует маммогенез, что проявляется в интенсивном ангио- и нейрогенезе, более раннем формировании выводной системы, образовании альвеол и дифференцировки их эпителиоцитов и достижении органом полной морфофункциональной зрелости к шести месяцам.

3. В периоды беременности и родов, нейрогуморальные взаимодействия и специфическое соотношение гормонов (ПРл/ФСГ = 35) определяют протекающие гетерохронно, увеличения массы молочной железы, диаметра соска, протоков, численности и объема железистых долек, альвеол на фоне пролиферации малодифференцированных эпителиоцитов и активизации нейрогенеза, а также увеличение лактоцитов, миоэпителиоцитов и начало их функционирования в роды. Механизм инициирующего воздействия селена снижает индекс концентрации пролактина к фолликулостимулирующему гормону (34), «запускает» в лактоцитах секреторный цикл, но ингибирует ретракцию миоэпителиоцитов, в результате чего в концевых отделах отмечается временный стаз молозива.

4. Хронобиологический анализ динамики структур лактогематического барьера позволил обнаружить самый высокий уровень его проницаемости, в том числе и для ■иммуноглобулина в, в первый, девятый и 18 часы после окрола. При относительном постоянстве концентрации иммуноглобулина в в крови в молозиве она возрастает к 9 и 18 часу, соответственно, в 1,1 и 1,45 раза. На фоне воздействия неорганического селена к 9 и .18 часам после окрола проницаемость лактогематического барьера увеличивается, соответственно, в 1,3 и 1,6 раза, а при использовании органического селена, соответственно в 1,38 и 1,86 раз. К 27 часам лактации вырабатывается молозиво с достоверно высоким

. присутствием иммуноглобулина О, после чего отмечается тенденция к перестройке секреторного цикла лактоцитов с выработки молозива на молоко. Органическая форма селена пролонгирует молозивный период.

■ .5. В середине лактации индексы концентраций пролактина к фолликулостимулирующему гормону (209) и пролактина к лютеинизирующему гормону (102) определяют интенсивность секретообразования, регулируют динамику массы железы и венозный отток. Механизм действия селена создает тенденции к пролонгированию лактации при некотором снижении уровня секреции. Несмотря на то, что «Е-селен» уступает по эффективности «Селенолину®»,- его воздействие на гистофизиологию железы было равномерным и щадящим.

6. Препарат «Е-селен» в крови, молозиве—»молоке повышает содержание селена (в 2,6 раза) и иммуноглобулина в (на 16%), активизирует выведение секрета, увеличивает молочную продуктивность самки (на 12%). В молозиве—»молоке повышает содержание жира (на 8,3%), белка (на 6%), сухого обезжиренного молочного остатка (на 5%), их плотность (на 4%), что в целом обеспечивает прирост живой массы новорожденных крольчат. При воздействии органического селена все показатели выше в 1,2 раза.

7. -В период отъема в крови самки контрольной группы низкие концентрации селена и половых гормонов инициируют реализацию гистотипических потенций тканей железы, что выражается реорганизацией секреторного цикла лактоцита в направлении реабсорбции компонентов молока, ингибированием нейрогенеза и функции миоэпителиоцита, ..уменьшением объема альвеол и массы железы. Механизм действия селена, поддерживая слабую... синтетическую активность лактоцитов, одновременно способствует снижению объема клеток, сдерживанию инволюторных процессов в железистой паренхиме и

увеличению присутствия в органе жировой ткани. В постлактационную инволюцию неорганическая и органическая формы селена пролонгируют процессы реабсорбции в лактоцитах, активную ретракцию миоэпителиоцитов и процесс замещения объема железистой паренхимы жировой тканью.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Полученные результаты используются в учебном и научном процессах морфологических кафедр 14 вузов и одного НИИ РФ.

В процессе исследования был предложен «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов» (решение о выдаче патента на изобретение № 2010123251/10(033072 от 04 октября 2011 г.) и разработан «Способ определения концентрации селена в крови», (приоритетная справка Патентного ведомства № 2011120673/15 (030563) от 20.05.2011 г.).

Результаты исследования внедрены в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 г).

РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Выявленные особенности морфофизиологии молочной железы крольчих при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» могут быть использованы:

- на ветеринарных, биологических, биотехнологических факультетах высших учебных заведений для подготовки специалистов;

- при написании соответствующих разделов руководств, учебников, монографий по морфологии множественной молочной железы и влиянию на нее селенсодержащих препаратов;

- в лабораториях, НИИ, занимающихся разработкой теории органогенеза, проблемами экспериментальной и функциональной морфологии желез, влияния микроэлементов на развитие молочной железы;

- клиницистам в качестве морфологических критериев при цито- и гистологической оценке биоптатов органа с целью диагностики заболеваний молочной железы. ■

Рекомендуем в промышленное кролиководство:

- использование специалистами кролиководческих комплексов разработанной и внедренной нами в технологию производства схемы парентерального введения препаратов селена крольчихам для стимуляции функций молочной железы, что позволит решить проблему их гипогалактии, повысить сохранность молодняка;

- в связи с этим, рекомендуем за 6 - 7 дней до случки (в первые сутки течки) самкам однократно внутримышечно вводить препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в дозах, соответственно, 0,04мл/кг и 0,008 мл/кг массы тела животного.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Гончарова В.М., Абрамова Л.Л., Кал яки на Р.Г., Анипко В.В. Особенности цитофизиологии лактогематического барьера молочной железы свиней и крольчих в первые сутки после родов // Морфология. 2009. Т. 136. № 4. С. 41.

2. Гончарова В.М., Анипко В.В., Абрамова ЛЛ. Модель проницаемости лактогематического барьера, как способ временного прогнозирования интенсивности транспорта ^ в в молозиво // Вестник Оренбургского государственного университета. 2009. № 10. С. 553-554.

3. Душкина Е.А., Анипко В.В., Абрамова Л.Л. Гистофизиология яичника, молочной железы и других паренхиматозных органов крольчих на фоне влияния разных доз селенсодержащих препаратов // Вестник Оренбургского государственного университета. 2009. № 10. С. 559-560.

4. Калякина Р.Г., Анипко В.В. Ультраструктурные особенности эпителия молочной железы крольчих в период лактации // Вестник Оренбургского государственного университета. 2010. № 4. С. 91.

5. Анипко В.В., Абрамова JI.JI. Корреляция структур молочной железы под влиянием половых гормонов у лактирующих крольчих ! «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве»: матер, междунар. науч.-практич. конф., 24—25 июня 2010 г. Улан-Удэ: БГСХА им. В.Р. Филиппова, 2010. С. 68-69.

6. Анипко В.В, Душкина Е.А., Абрамова Л.Л. Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов / Молодежный инновационный форум Приволжского федерального округа: сб. аннотаций проектов, 12-14 мая 2010 г. Ульяновск: УлГТУ, 2010. С. 338-339.

7. Anipko V.V., Maryakhina V.S., Abramova L.L. Définition of sélénium concentrations change in a blood after application of sélénium préparations by fluorometric technique // «Topic problem of biophotonics» III international symposium, 16-22 July, 2011., St-Peterburg - Nizhnîy Novgorod, Russia, 2011. P. 77-78.

8. Анипко B.B. Сравнительные показатели молочной продуктивности, состава молока и их корреляты с цитофизиологней молочной железы крольчих при использовании препаратов селена // Кролиководство и звероводство. 2011. № 4. С. 23-26.

Перечень условных обозначений

Прл пролактин

ПРг прогестерон

ФСГ фолликулостимулирующий гормон

лг лютеинизирующий гормон

Е-2 эстрадиол

IgG иммуноглобулин в

СОМО сухой обезжиренный молочный остаток

АСТ аспартатовая трансаминаза

АЛТ аланиновая трансаминаза

АНИПКО Вадим Владимирович

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРОЛЬЧИХ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 28.10.11 г. Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 1. Заказ № 58. Тираж 100 экз.

Издательство «Офисная полиграфия» 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 48.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Анипко, Вадим Владимирович

Перечень условных обозначений, использованных в диссертации

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологические особенности размножения и лактации зайцеобразных

1.2. Морфогенез множественной молочной железы при смене функциональных состояний самки

1.3. Морфофункциональные особенности молочных желез зайцеобразных

1.4. Состав и объем секретируемого молока крольчих

1.5. Нейрогуморальная регуляция маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза

1.6. Биологическая роль, механизм действия и применение селена в животноводстве

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Морфофункциональные изменения молочной железы крольчих под влиянием препаратов селена"

Наука никогда не решает вопроса, не поставив при этом десятка новых.»

Б. Шоу

Актуальность проблемы. Для Российской Федерации насущной проблемой является обеспечение продовольственной независимости и безопасности, разрешить которую можно лишь за счет значительной интенсификации сельского хозяйства, в том числе животноводства. В результате аграрной политики последних лет значительно сократились поголовье и продуктивность сельскохозяйственных животных, изменилось качество продукции. Это- связано, в том числе, с недостаточным поступлением в организм животных селена, выполняющего важнейшие биологические функции (Блинов В.А., 2010).'

В настоящее время кролиководство как отрасль мясного животноводства является перспективной; поскольку кролики - это источник ценного диетического мяса, а так же1 пуха и мехового сырья. Благодаря их скороспелости и высокой интенсивности размножения значительный объем этой продукции можно получить. в сравнительно короткий срок. Рентабельное выращивание кроликов в производственных условиях требует знаний морфологических основ их воспроизводства и вскармливания потомства (Кролики и нутрии, 2000).

Молочная железа - уникальный орган, вырабатывающий молозиво—»молоко, содержащее в себе необходимые новорожденному, особенно в первые часы его жизни, пластический материал и факторы неспецифической защиты (Грачев И.И., 1973; Ануфриев А.И., 2007). Раскрытие особенностей морфофизиологии железы в периоды маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза, особенно для перворожавших самок, имеет большое значение в совершенствовании технологии выращивания молодняка.

Изучению морфологии молочной железы млекопитающих посвящены работы С.Г. Сайко (1990), П.А. Чумаченко, И.П. Шлыкова (1991),

Г.Б. Тверского (1993), Л.Л. Абрамовой (1998-2008), О.Г. Гуляевой (2001), A.B. Рыбакова (2003), Б.П. Шевченко (2003), Л.П. Соловьевой (2004), Л.П. Соловьевой, A.B. Бородулиной, O.A. Голубевой (2005), Е.П. Смирновой, Л.П. Соловьевой (2005), В.Ф. Коколиной, М.А. Фоминой (2006), Р:Г. Калякиной (2006), F.F. Черепанова, З.Н. Макар (2007), C.B. Волкова, H.A. Татарниковой (2008), М.В. Щипакина (2009), В.М: Гончаровой' (2010), ММ. Richert, K.L. Schwertfeger, J.W. Ryder (2000), T.S. La Ganga (2001), M.R. Warner (2005), в которых накоплен значительный материал о видовых, возрастных и других особенностях строения и функциях этого органа.

Информация о морфологии молочной железы крольчих в разные периоды репродуктивного цикла, включая? этапы сукрольности, родов и лактации — весьма ограничена, за исключением работ Л.В. Курбатовой (1972-1977), I LM. Грезиной, 11:А. Зиновьевой (2005).

Не смотря на то, что роль эссенциальных микронутриентов в поддержании нормального течения; физиологических процессов в оранизме животных существенна (Георгиевский В .И., Анненков? Б.Н., Самохин В.Т., 1979; Авцын А.Н., 1990; Соколов. А.В:,. Замана^С.Ш:, 2001; Баскакова A.A., 2005; Лебедев- C.B., Рахматуллин Ш.Г., Сизова Е.А., 2008; Трошина Т.А., Вакилов Р Ф:, 2008), до> сих пор отсутствуют данные об их влиянии на морфогенез органа.

Особая: роль в этом принадлежит селену — мощному антиоксиданту, создающему благоприятные условия для нормального осуществления ферментативных процессов, участвующему в> окислительно-вoccтäнoвитeльныx реакциях организма,, усиливающее действие витаминов А, Е и D3 (Чугай Б.Л., Краснослободцева A.C., Крысин М1П., Фролов А.И., 2009; Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И., 2001; Крапивина Е.В., Ващенин Е.П., Иванов В.П., 2002; Кокорев В.А., Прытков Ю.Н., Кистина A.A., Пугачев М.Ф., 2001; Shargorodsky M., Debby О., Matas Z., Zimlichman R., 2010; Camargo E.V., Dos Anjos Lopes S.T., Costa M.M., Paim F., et all., 2010). В то же время, на территории Российской Федерации практически повсеместно отмечаются зоны, эндемичные по селену (Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005), причем последние два десятелетия их площади увеличиваются (Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко O.A., 2009). Оренбургская область также входит в этот неблагополучный список (Боев В.М., 2005, Бурцева Т.И., Голубкина H.A., Мирошников С.А., Скальный А.К. и др., 2008).

Цель исследования: выявить закономерности гистофизиологии молочной железы и хронодинамику структур ее лактогематического барьера у крольчих породы советская шиншилла в разные периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии препаратов «Е — селен» и «Селенолин®».

Для реализации данной цели поставлены следующие задачи:

4. Проследить временную динамику проницаемости лактогематического барьера молочной железы крольчих для иммуноглобулина G и селена под влиянием препаратов селена и изменением концентрации половых гормонов, определить разницу состава молозива и молока в начале и середине лактации, изучить влияние препаратов селена на морфологические, биохимические показатели крови крольчих в различные периоды репродуктивного цикла.

Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в том, что:

• изучены закономерности морфогенеза железы, динамика и корреляция морфометрических показателей1 отделов выводной системы с массой органа в норме и при влиянии препаратов селена;

• приоритетны сведения о хронодинамике структур лактогематического барьера, обеспечивающих его проницаемость для иммуноглобулина О и селена на фоне изменения концентраций половых гормонов, о биохимическом составе молозива и молока крольчих в начале и середине лактации-при воздействии препаратов «Е - селен» и «Селенолин®».

Теоретическая и практическая значимость работы:

Диссертационное исследование посвящено актуальным вопросам биологии: изучению гистофизиологии молочной железы крольчих в разные периоды репродуктивного цикла на фоне влияния препаратов «Е - селен» и «Селенолин®», а также вопросам функциональной и клинической морфологии, микроэлементологии. Выполнение задач, поставленных в работе, существенно дополнило имеющиеся представления о морфофункциональных изменениях множественной молочной железы. Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных, и других факультетах, на курсах повышения квалификации, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий. Кроме того, материалы диссертации могут быть полезны научным сотрудникам НИИ, занимающимся проблемами экспериментальной и функциональной морфологии желез.

Клиницистам предложены морфологические критерии для цито- и гистологической оценки биоптатов органа с целью диагностики заболеваний молочной железы.

Разработанная, апробированная и внедренная «Технология стимулирования молочной продуктивности^ крольчих парентеральным введением препаратов селена» позволила увеличить секрецию и объем выделяемого молозива—»молока, улучшить их качественные показатели, в том числе по повысить жизнеспособность и сохранность крольчат.

Результаты исследования'внедрены в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 г).

Реализация результатов исследований. Внедрение материалов диссертационной работы в научные исследования и учебный процесс осуществлялось в, лабораториях ГНУ Дальневосточного зонального НИВИ Россельхозакадемии, на морфологических кафедрах Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева, Кубанского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, Ставропольского ГАУ, Омского ГАУ, Алтайского ГАУ, Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки, Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана, Уральской ГАВМ, Самарской ГСХА, Нижегородской ГСХА, Белгородской ГСХА, Ульяновской ГСХА, Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова в форме выпуска карт обратной связи.

В процессе исследования разработаны: «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов» (решение о выдаче патента на изобретение № 2010123251/10(033072 от 04. октября 2011 г.) и «Способ определения концентрации селена в крови», (приоритетная справка Патентного ведомства № 2011120673/15 (030563) от 20.05.2011г).

Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Регистрационный номер темы: 01201161504.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009), VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов» (Саратов, 2009), конференции молодых ученых и специалистов. Оренбургской области (Оренбург, 2010), молодежном инновационном форуме ПФО (Ульяновск, 2010), международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития, ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины-Бурятской ГСХА (.Улан-Удэ, 2010), ПГ international simposium «Topic problem of biophotonics» (St- Peterburg - Nizhniy Novgorod, Russia, 2011).

Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта «Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», удостоенного диплома лауреата областной выставки научно-технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Оренбург, 2010), гранта и диплома победителя конкурса «Оренбуржью — достойные кадры», проводимым Оренбургским региональным отделением общероссийской общественной организации «Российское аграрное движение — РАД» (Оренбург, 2010), диплома лауреата Молодежного инновационного форума

Приволжского федерального округа (Ульяновск, 2010), Президентского гранта для поддержки талантливой молодежи на Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Москва, 2010), бронзовой медали и диплома III степени VI Саратовского салона изобретений, инноваций и инвестиций (Саратов, 2011).

Основные положения, выносимые на защиту: ■ • выявленные закономерности роста и развития- молочной; железы крольчих и взаимосвязь ее: структур с динамикой! половых: гормонов под воздействием препаратов селена при разной функциональной напряженности органа;

• особенности морфогенеза железы, динамика- и корреляция отделов? выводной« системы с массой органа в норме и при парентеральном введении^ селенсодержащих препаратов - источников биотического эссенциального элемента; взаимосвязь структур альвеолярного отдела; органа! с информационно-обеспечивающими системами5 (нервы,, сосуды); изменением-концентраций; половых гормонов^ их адаптационная пластичность, в. разные периоды-репродуктивного цикла самки в норме; и при влиянии; препаратов, селена;: .• : .■'".■■' • временная динамика структур лактогематического барьера молочной железы, регулируемая половыми гормонами и влияющая; на интенсивность выхода в молозиво—»молоко иммуноглобулина G и: селена; а также особенность секреторного цикла лактоцита, определяющая биохимический состав молозива и молока? крольчих под воздействием препаратов селена в начале и середине лактации и объемы их выработки.

Публикации результатов исследований; Но материалам собственных научных исследований опубликовано восемь печатных работ, из них пять — в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Экспериментальную часть, работу по систематизации и анализу полученных результатов автор провел лично. Часть научных трудов опубликована в соавторстве с Калякиной Р.Г., Маряхиной B.C., Гончаровой В.М., Душкиной Е.А. Представленные в диссертационный совет справки подтверждают, что в диссертации их данные не использованы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 210 страницах компьютерного набора и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, используемых в диссертации, введения, обзора литературы, материала и методов исследования, семи глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, рекомендаций к использованию научных выводов, выводов, библиографического списка и приложения к диссертации в объеме 67 страниц. Библиографический список включает 303 наименования работ, из них 116 — зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 70 рисунками и 41 таблицей.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Кролиководство является перспективной отраслью животноводства. В связи с непродолжительным периодом беременности, многоплодием и высокой скороспелостью, за год от одной крольчихи можно получить количество мяса, в 30 раз превышающее её собственную массу (Приступа В.Н., 2000). Крольчатина нежная, вкусная, легко усвояемая организмом, по химическому составу является диетическим продуктом и необходима при заболеваниях печени, гастритах, малокровии, ожирении, полезна детям и пожилым людям. По сравнению с другими животными жирами, ценность кроличьего жира выше: в нем очень высокое отношение ненасыщенных жирных кислот к насыщенным (Энциклопедия, 2003).

Шкурковое сырье кроликов используют в меховой промышленности, из кожи изготавливают обувь и кожгалантерейные изделия, пух идет на производство дорогих сортов фетра, велюра и трикотажа (Седов Ю.Д., 2008).

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Анипко, Вадим Владимирович

выводы

1. Вводимые парентерально крольчихам неорганический селен («Е-селен») в дозах 0,06 мл/кг и 0,08 мл/кг и органический селен («Селенолин®») в дозах 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела животного оказывали, соответственно, токсический и высокотоксический эффекты на гистофизиологию тканей печени, почек, миокарда.

В эксперименте использованы опитимальные дозы препаратов: «Е-селен» - 0,04 мл/кг и «Селенолин®» - 0,008 мл/кг массы тела животного.

2. У крольчих контрольной группы в три месяца (эструс первого полового цикла) на фоне недостатка селена и специфической гормональной регуляции маммогенез выражается ^сдерживанием ангиогенеза, увеличением протоков и объема стромального компонента (жировых долек). В шесть месяцев активизация ангиогенеза* обеспечивает рост массы органа, протоков и дифференцировку миоэпителиоцитов, при этом сдерживается рост и созревание эпителиоцитов концевых отделов. Воздействие «Е-селена» и «Селенолина®» десинхронизирует маммогенез, что проявляется в интенсивном ангио- и нейрогенезе, более раннем формировании, выводной^ системы, образовании альвеол и дифференцировки их эпителиоцитов и достижении органом полной морфофункциональной зрелости к шести месяцам.

3. В периоды беременности и родов, нейрогуморальные взаимодействия и специфическое соотношение гормонов (ПРл/ФСГ = 35) определяют протекающие гетерохронно, увеличения массы молочной железы, диаметра соска, протоков, численности и объема железистых долек, альвеол на фоне пролиферации малодифференцированных эпителиоцитов и активизации нейрогенеза, а также увеличение лактоцитов, миоэпителиоцитов, и начало их функционирования в роды. Механизм инициирующего воздействия селена снижает индекс концентрации пролактина к фолликулостимулирующему гормону (34), «запускает» в лактоцитах секреторный цикл, но ингибирует ретракцию миоэпителиоцитов, в результате чего в концевых отделах отмечается временный стаз молозива.

4. Хронобиологический анализ динамики структур лактогематического барьера позволил обнаружить самый высокий уровень его проницаемости, в том числе и> для иммуноглобулина О, в первый, девятый и 18 часы после окрола. При относительном постоянстве концентрации иммуноглобулина О в сыворотке крови в молозиве она возрастает к 9 и 18 часу, соответственно, в 1,1 и 1,45 раза. На фоне воздействия неорганического селена к 9 и 18 часам после окрола проницаемость лактогематического барьера увеличивается, соответственно, в 1,3 и 1,6 раза, а при использовании органического селена, соответственно, в 1,38 и 1,86 раз. К 27 часам лактации вырабатывается молозиво с достоверно высоким присутствием иммуноглобулина О, после чего отмечается тенденция к перестройке секреторного цикла лактоцитов с выработки молозива на молоко. Органическая форма селена пролонгирует молозивный период.

5. В середине лактации индексы концентрации пролактина к фолликулостимулирующему гормону (209) и пролактина к лютеинизирующему гормону (102) определяют интенсивность секретообразования, регулируют динамику массы железы и венозный отток. Механизм действия селена создает тенденции к пролонгированию лактации при некотором снижении уровня секреции. Несмотря на то, что «Е-селен» уступает по эффективности «Селенолину®», его воздействие на гистофизиологию железы было равномерным и щадящим.

В молозиве—>молоке повышает содержание жира (на 8,3%), белка (на 6%), сухого обезжиренного молочного остатка (на 5%), их плотность (на 4%), что в целом обеспечивает прирост живой массы новорожденных крольчат. При воздействии органического селена все показатели выше в 1,2 раза.

7. В период отъема в крови самки контрольной группы низкие концентрации селена и половых гормонов инициируют реализацию гистотипических потенций тканей железы, что выражается реорганизацией секреторного цикла лактоцита в направлении реабсорбции компонентов молока, ингибированием нейрогенеза и функции миоэпителиоцита, уменьшением объема альвеол и массы железы. Механизм действия селена, поддерживая слабую синтетическую активность лактоцитов, одновременно способствует снижению объема клеток, сдерживанию инволюторных процессов в железистой паренхиме и увеличению присутствия в органе жировой ткани. В постлактационную инволюцию неорганическая и органическая формы селена пролонгируют процессы реабсорбции в лактоцитах, активную ретракцию миоэпителиоцитов и процесс замещения объема железистой паренхимы жировой тканью.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное нами комплексное исследование и системный анализ морфофизиологии молочной железы крольчих как уникального органа, вырабатывающего молозиво—>-мо л око, содержащего в себе необходимые новорожденному (особенно в первые часы его жизни), пластический материал и факторы неспецифической защиты, в- периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии препаратов селена позволили проследить динамику и адаптационную пластичность ее структур, проницаемость лактогематического барьера на фоне нейрогуморальной регуляции.

В ходе исследований выявлено, что механизм действия селена, включенного в ферментативные системы обмена веществ самки, направлен на ускорение маммо-, лактогенеза и пролонгирование лактопоэза, улучшение состава секрета, в том числе по иммуноглобулинуО. Все это позволило нам разработать схему применения препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» в кролиководстве.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Выявленные особенности'морфофизиологии молочной железы крольчих при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» могут быть использованы:

- клиницистам в качестве морфологических критериев при цито- и гистологической оценке биоптатов органа с целью диагностики заболеваний молочной железы.

Рекомендуем в промышленное кролиководство: использование специалистами кролиководческих комплексов разработанной и внедренной нами в технологию призводства схемы парентерального введения препаратов селена крольчихам для стимуляции функций молочной железы, что позволит решить проблему их гипогалактии, повысить сохранность молодняка;

- в связи с этим рекомендуем за 6 - 7 дней до случки (в первые сутки течки) самкам однократно внутримышечно вводить препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в дозах, соответственно; 0,04мл/кг и 0,008 мл/кг массы тела животного.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Анипко, Вадим Владимирович, Москва

1. Абельсон Ю.О. Роль гипоталамических нонапептидов в регуляции вегетативных функций; под ред. член-корр. РАН А.Л. Поленова. В 2-х ч. Ч. 2. // Нейроэндокринология. СПб.: Наука, 1994. С. 259-283.

2. Абрамова Л.Л. Способ витальной, биопсии молочной железы коз и оценки её морфофункционального состояния // Рационализаторское предложение. 2000. № 1.

3. Абрамова Л.Л., Меерзон Т.И. Функциональная морфология молочной железы собак // Оренбург: Изд. ОГПУ. 2008. 203 с.

4. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Издательство «Медицина», 1990. 382 с.

5. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. М.: Издательство «Медицина», 2002. 240 с.

6. Авцын А.П. Недостаточность эссенциальных микроэлементов и ее проявление в патологии // Архив патологии. 1990. Т. 52. № 3. С. 3-8.

7. Алиев М.Г., Исмаилов Ю;Б. Стимуляция секреции пролактина одновременной ингибицией дофаминэргической и активацией серотонической систем гипоталамуса // Физиологический журнал СССР им: И-.М. Сеченова. 1990: Т. 76. № 6. С; 795-800?

8. Антонова B.C., Соловьев; С.А., Сечина М.А. Методические указания- для лабораторноепрактических занятий? по курсу «Технология переработки молока» Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2007. 87 с.

9. Ануфриев« А.И., Волкова С.В;, Ануфриев П.А. Этиология незаразных факторных заболеваний органов размножения и молочной железы у свиней»/ Современные наукоемкие технологии: 2007.' №12. С.29—31.

10. Баграмян Э;Р., Бурдина Л.М., Волобуев А.И. Гормоны и« маммогенез // Акушерство и гинекология. 19901Т. 1. № 12. С. 3-6; .

11. Базаров М.К. Статистическая обработка результатов наблюдений средствами Microsoft Excel: пособие для; аспирантов: Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2008. 44 е.

12. Барабой В.А. Биологические функции, метаболизм и механизмы действия селена // Успехи современной биологии/ 2004. Т. 124. № 2. С. 157-168.

13. Баскакова А.А. Влияние витаминов и микроэлементов на репродуктивную систему собак // Практик. 2005. № 1—2. С. 100-103.

14. Беляев В.И:, Балым Ю.П. Влияние селенита натрия и селеданта на супоросных свиноматок и потомство//Ветеринария. 2007. № 11. С. 33—35.

15. Берестов В.А. Очерки по физиологии пушных зверей. Л;: Издательство «Наука», 1987. 239 с.

16. Блинов В. А., Буршина С.Н., Шапулина Е.А. Селенолин (биохимические и патофизиологические аспекты): монография. Саратов: ИЦ «Наука», 2010. 126 с.

17. Боев В.М. Микроэлементы и доказательная медицина. М.: Медицина, 2005. 208 с.

18. Болиева JI.3., Сергеев A.B., Чочиева А.Р. Изучение иммуномодулирующей активности витаминов Е, С, бета каротина и селена // Фундаментальные исследования. 2008. № 6. С. 139 — 140.

19. Булатов А.П., С.Ф. Суханова Повышение продуктивных качеств маточного стада гусей применением селенсодержащих препаратов // Зоотехния. 2005. № 5. С. 11-13.

20. Бондаренко С.П. Энциклопедия травоядных пушных животных. М.: ООО «Издательство ACT»; Донецк: Сталкер, 2003. 416 с.

21. Бурцева Т.И., Голубкина H.A., Мирошников С.А. и др. К вопросу об обеспеченности селеном жителей Оренбургского региона // Микроэлементы в медицине. 2008. Т. 9. Вып. 1-2. С. 88-89.

22. Вакуленко И.С. Молочная продуктивность крольчих и рост молодняка// Кролиководство и звероводство. 19841. № 5. С. 11—13.

23. Вапиров? В.В., Шубина М.Э., Вапирова Н.В. и др. Селен. Некоторые аспекты химии, экологии и участия в развитии патологии (обзор). Петрозаводск: ПетрГУ, 2000. 68 с.

24. Васильев A.M., Прытков Ю.Н. Влияние ДАФС-25 на продуктивность растущих свиней // Достижения науки и техники АПК. 2007. № 4. С. 50.

25. Волков C.B., Татарникова H.A. Рак молочной железы у кошек // Пермский аграрный вестник. В 2-х ч. Ч. 1. Пермь, 2008. С. 204-206.

26. Волкотруб Л.П., Андронова Т.В. Роль селена в развитии и предупреждении заболеваний // Гигиена и санитария. 2001. № 3. С. 57-61.

27. Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т. Минеральное питание животных. М.: Издательство «Колос», 1979. 470 с.

28. Георгиевский В.И., Медведев И.К., Булачев В.Н. Регуляция роста и развития молочной железы у жвачных животных // Известия ТСХА. 1988. № 1. С. 141-151.

29. Георгиевский В.Н. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Издательство «Агропромиздат», 1990. 511 с.

30. Гистология / под ред. Ю.И. Афанасьеа. Изд. 5-е, перераб. и доп. М.: Издательство «Медицина», 2002. 744 с.

31. Гмошинский И.В., Мазо В.К. Минеральные вещества в питании человека. Селен: всасывание и биодоступность // Вопросы питания. 2006. Т. 75. №5. С. 15-21.

32. Голубкина H.A., Манкуева С.Д., Широков Д.В. Пресноводные виды рыб России как источник диетического селена // Хранение и переработка сельхозсырья. 2003. № 8. С. 74-77.

33. Голубкина H.A., Беляев В.И. Некоторые особенности аккумулирования селена тканями и органами животных // Свободные радикалы. Антиоксиданты и здоровье животных: мат. междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2004. С. 52-55.

34. Горлов И.Ф., Храмова В.Н., Сивков А.И. Влияние селенсодержащих препаратов на молоко коров // Вестник РАСХН. 2006. № 4. С. 94-96.

35. Горлов И.Ф., Варакин А.Т., Варакина Е.А. Использование кормовых добавок при производстве козьего молока // Хранение и переработка с.-х. сырья. 2006. № 5. С. 42-45.

36. Горлов И.Ф., Храмова В.Н. Повышение пищевой ценности молока за счет обогащения рациона коров органическим селеном // Хранение и переработка с.-х. сырья. 2006. № 4. С. 49—52.

37. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих/ под ред. К. Остина, Р. Шорта; пер. с англ. М.: Издательство «Мир», 1987. 305 с.

38. Грачев И.И., Галанцев В.П. Физиология лактации, общая и сравнительная. М.: Издательство «Наука», 1973. 590 с.

39. Грачев И.И., Попов С.М., Скопичев В.Г. Цитофизиология секреции молока Л., 1976. 242 с.

40. Грачев И.И., Алексеев Н.П. Роль рецепторов в регуляции лактации. Л.: Наука, 1980. 220 с.

41. Грезина Н.М., Зиновьева^ H.A. Развитие молочной железы крольчих // Цитология. 2005. Т. 47. № 1. С. 49-56.

42. Гуляева О.Г., Дроздова Л.И., Тулакина Л.Г. Гистологическое* и ультраструктурное строение молочной железы морской свинки // Морфофизиология и ультраструктура организма животных и птиц при патогенном воздействии. 1998. С. 26-33.

43. Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М. Новый селенсодержащий» ветеринарный препарат «Селенолин®». Применение и перспективы // Аграрный вестник Юго-Востока. 2009. № 1. С. 45-47.

44. Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А. Применение препаратов селена при выращивании телят до шести месяцев // Зоотехния. 2005. № 6. С. 12—15.

45. Джакупов И.Т., Кабаков В.В. Влияние Е-селена на воспроизводительную функцию и продуктивность коров // Ветеринария. 2004. № 12. С. 37-39.

46. Дженбаев Б.М., Мурсалиев A.M., Ермаков В.В. и др. Биогенность химических элементов и селеновый статус. Бишкек: HAH PK, 1999. 89 с.

47. Дубравная Г.А., Абакин С.С. Влияние препарата «Селенолин» на организм свиноматок крупной белой породы // Проблемы и перспективы современной науки: сб. науч. тр. Вып 1. Томск, 2008. С. 87.

48. Дубравная Г.А. Оценка качественных показателей потомства свиноматок крупной белой породы при воздействии препарата «Селенолин» // Свиноводство. 2009. № 6. С. 60-62.

49. Дунин И.М., Лебенгарц ЯЗ. Экологические аспекты использования селена в молочном скотоводстве // С.-х. биология. 1997. № 6. С. 71-81.

50. Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Зорин С.И. Изучение биодоступности различных пищевых- форм микроэлемента селена в эксперименте // Вопросы питания. 2006. Т. 75. № 3. С. 45-49.

51. Ермаков В.В. Ковальский В.В. Биологическое значение селена М.: Издательство «Наука», 1974. 300 с.

52. Ермаков В.В. Биогеохимия селена и его значение в профилактике эндемических заболеваний человека // Вестник отделения наук о Земле РАН. 2004. № 1. С. 1-17.

53. Жеденов В.Н., Бигдан С.С., Лукьянова В.П. и др. Анатомия кроликаМ.: «Медицина», 1957. 311 с.

54. Жеребцов H.A. Цитология, гистология и эмбриология. -Ульяновск, 2000. 144 с.

55. Закс М.Г. Молочная железа. Нервная и гормональная регуляция ее развития и функции. М.: «Литература», 1964. 275 с.

56. Зеленевский H.B. Международная ветеринарная анатомическая номенклатура. Четвертая редакция. М.: «Колос», 2003. 351 с.

57. Иванов В.Н., Кабишев A.A., Городецкий С.И. Активизация трансдействующего фактора транскрипции NF 1 в лактирующей молочной железе //Молекулярная биология. 1990. № 4. С. 1605-1615.

58. Иванов В.Н., Никитина Л:П., Аникина ЛЛЗ. Биоселен -эффективное средство в лечении сердечнососудистых заболеваний // Морской медицинский журнал. 1997. № 1. С. 9—43.

59. Кактурский Л.В., Строчкова Л.С., Истомин A.A. Гипоселенозы // Архив патологии. 1990. Т. 52. № 12. С. 3.

60. Калугин Ю.А. Сукрольность крольчих // Кролиководство и звероводство. 2007. № 3. С. 29-31.

61. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Т 2. Минск: Беларусь, 2000:495 с.

62. Карпов В.А. Акушерство и гинекология мелких домашних животных. М.: Издательство «Росагропромиздат», 1990. 288 с.

63. Картекенова Р.В., Галлиев Б.Х., Картекенов К.Ш. Гематологические и биохимические показатели крови при скармливании селена бычкам мясного направления // Вестник Оренбургского государственного университета. 2008. № 82. С. 206-207.

64. Касумов С.Н. Основы применения селена в кормлении сельскохозяйственной птицы. М.: Издательство «ВНИИТЭИСХ», 1981. 61 с.

65. Кистина A.A., Прытков Ю.Н., Гурьянов А.М. Эффективность применения селенсодержащих препаратов в молочном, скотоводстве // Достижения науки и техники в АПК. 2010. № 3. С. 50-52.

66. Клиническое руководство по лабораторным тестам / под ред. Н. Тица; пер. с англ. М.: Юнимед ПРЕСС, 2004. 960 с.

67. Ключникова Н., Ключников М. Применение селенита натрия на фермах Дальневосточного региона // Молочное и мясное скотоводство. 2006. № 5. С. 26-27.

68. Кобылкин К.А., Давыдов В.Н. Домашние кролики // Вестник БГУ. 2001. В. 4. № 6. С. 51-54.

69. Коколина В.Ф. Фомина М.А. Развитие молочных желез в процессе созревания репродуктивной системы // Российский вестник акушера-гинеколога. 2006. № 3. С. 26-32.

70. Кокорев В.А., Кистина A.A., Прытков Ю.Н. и др. Влияние селена на продуктивность бычков // Зоотехния. 1997. № 1. С. 15-95.

71. Кокорев В.А., Прытков Ю.Н., Кистина A.A. Биологическое обоснование потребности ремонтных телок в селене при травяном типе кормления // Сельскохозяйственная биология. 2001. № 6. С. 85-17.

72. Колодина JI.H., Корхов В.В. Нейрогормональная регуляция лактации // Акушерство и гинекология. 1985. № 5. С. 5-8.

73. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики. М.: Издательство «Колос», 1985. 520 с.

74. Котенкова Е.В., Федосов Е.В., Ушакова H.A. Влияние матери на рост и развитие кроликов на разных стадиях онтогенеза: теоретические и прикладные аспекты // Успехи современной биологии. 2010. Т. 130. №5. С. 497-513.

75. Крапивина Е.В., Ващенин Е.П., Иванов В.П. и др. О влиянии селекопирана и витаминов А, Д, Е на иммунный статус молодняка крупного рогатого скота черно-пестрой породы // Сельскохозяйственная биология. 2002. №6. С. 107-112.

76. Кролики и нутрии. Разведение и- выращивание. Ростов н/Д: Издательство «Проф-Пресс», 2000. 192 с.

77. Кудрин A.B., Скальный A.B. Микроэлементы в онкологии // Микроэлементы в медицине. 2001. № 2. С. 31-39.

78. Кудрявцев A.A. Селен в кормлении животных и предупреждение его недостаточности // Сельское хозяйство за рубежом. 1974. № 1. С. 14-17.

79. Кузнецов JI.B. Чарльз Дарвин о кроликах // Кролиководство и звероводство. 2002. № 3. С. 22.

80. Кулько К.С. Биологические особенности кроликов // Кролиководство и звероводство. 2004. № 5. С. 24.

81. Курбатова JI.B. Особенности развития секреторных отделов молочных желез при первой сукрольности у кроликов пород шиншилла и белый великан // Возрастные и типовые особенности строения органов сельскохозяйственных животных. Т. 43. Пермь, 1977. С. 37-44.

82. Курбатова JI.B. Развитие протоковой и емкостных систем молочных желез у крольчих // Возрастные и типовые особенности строения органов сельскохозяйственных животных. Т. 43. Пермь, 1977. С. 45-49.

83. Лаврова Э.Н. Взаимосвязи тканевых компонентов молочной железы // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1974. Т. XVII. № 8. С. 82-87.

84. Лапина Т.И., Иванова Л.В. Эффективность применения селенсодержащих препаратов в звероводстве // Методические рекомендации. Ставрополь: Сильная реклама, 2008. 20 с.

85. Лебедев Н.И. Использование микродобавок для повышения продуктивности жвачных животных: Издательство «Агропромиздат», 1990. 96 с.

86. Лебедев C.B., Рахматуллин Ш.Г., Сизова Е.А. и др. Элементный статус организма цыплят-бройлеров на фоне различной нутриентной обеспеченности // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2008. № 4. С. 103-105.

87. Литвинова Л.Ф. Половой цикл у рефлекторно овулирующих кроликов // Физиология животных. 1993. Т. 79. № 3. С. 103-108.

88. Маринченко Г.В. Лизосомальный путь деградации пролактина в молочной железе: кенетика гидролиза пролактина катепсином D и образующиеся фрагменты // Биохимия. 1989. Т. 54. № 4. С. 629-638.

89. Медведева М.А. Клиническая ветеринарная лабораторная диагностика // Справочник для ветеринарных врачей. М.: ООО «Аквариум-Принт», 2008. 416 с.

90. Минина И.С., Майоров А.И. Все о кроликах // Агропромиздат, 1988. 181 с.

91. Минина И.С. Выращивание крольчат дело не простое // Кролиководство и звероводство. 2002. № 4. С. 28—30.

92. Мишанин Ю.Ф. Мишанин М.Ю., Кочерга A.B. и др. Содержание витаминов в яйцах кур-несушек в зависимости от доли селена в кормовом рационе // Известия вузов, пищевая технология. 2007. № 1. С. 14—15.

93. Мнихович М.В. Экстрацеллюлярный матрикс молочной железы и варианты клеточных взаимодействий в молочной железе при введении половых гормонов // Морфология. 2009. Т. 136. № 4. С. 100.

94. Назаренко И.Иi, И.Н. Ермаков Аналитическая* химия селена и теллура // М.: Наука, 1971. 254 с.

95. Нигматуллин P.M. Эффективный метод определения половой активности крольчих / Кролиководство и звероводство. 2007. № 2. С. 30-31.

96. Никитченко В.В., Андрущак JI.A., Хаевская В.И. и др. Эволюция молочных желез крыс после прерывания« беременности, прекращения лактации и воздействия витамина- А // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии JL, 1987. Вып. 93. № 11. С. 98-104.

97. Новиков B.C., Цыган В.Н. Физиологические аспекты апоптоза // Российский физиологический журнал. 1997. Т. 83. № 4. С. 13-23.

98. Нурушев М.Ж., Шевченко Б.П., Сеитов М.С. Возрастная биология органов внутренней секреции и гемоцитопоэза // Кокшетау: АО «Кокше-Полиграфия», 2011. 140 с.

99. Овчинникова P.E. Молочная железа интактных свиней крупной белой породы, // Анатомия молочной железы сельскохозяйственных животных в состоянии нормы и при патологии: межвуз. сб. науч. тр. Пермь, 1985: G. 71-76.

100. Панфилова М.Н., Родионова Т.Н., Воронин С.П; Применение селенолина для. коров в сухостойный период / Сб. матер. Всероссийской научно-ирактической конф. Пенза. 2004. 223. с.

101. Папазян Т.Т. Голубкина H.A. Селен в кормах сельскохозяйственных животных, птицы, рыбы // Вестник РАСХН. 2004. № 5. С. 64-66.

102. Печенникова E.B. Вашкова В.В., Можаев Е.А. О биологическом значении микроэлементов (обзор зарубежной литературы) // Гигиена и санитария. 1997. № 4. С.41-43.

103. Племяшов К.В. Соколов В .И., Конопатов Ю.В. Молочная железа морфология, физиология и биохимические аспекты лактогенеза// СПбГАВМ, Санкт-Петербург, 2007. 30 с.

104. Плотников В.Г. Беременность самок и подготовка к окролам // Кролиководство и звероводство. 1992. № 1. С. 26-27.

105. Плотников В.Г. Планирование окролов // Кролиководство и звероводство. 2001. № 2. С. 28-29.

106. Попов С.М. Клеточные механизмы регуляции секреторного процесса в молочной железе. JI., 1989. 200 с.

107. Приступа В.Н. Энциклопедия животноводства: справочное пособие // Ростов н/Д: Феникс, 2000. 640 с.

108. Пронин В.В., Плешаков Н.Ф., Наумова В.В. Профилактика и лечение микроэлементной недостаточности у овец романовской' породы в Ивановской области: рекомендации // Иваново, 2005. 19 с.

109. Родионова Т.Н. Динамика белков и белковых фракций сыворотки крови у кур-несушек при включении в рацион различных доз селена // Диагностика и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: сборник научных трудов. Саратов, 1992. С. 121—128.

110. Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И. Селенорганический препарат «ДАФС-25» в кормлении кроликов // Зоотехния. 2001. № 3, С. 19-20.

111. Рожнов В.В., Найденко Св.В., Найденко C.B. Изменение уровня стероидных гормонов в плазме крови у трех видов куньих (Mammalia, Carnivora: Mustelidae) в течение годового цикла // Доклады Академии наук, 2007. Т. 413. № 1, С. 138-141.

112. Рыбаков A.B., Ложкин Э.Ф. Влияние продуктивности и качества лактаций на развитие артериальной сети вымени крупного рогатого скота // Актуальные проблемы науки в АПК. Материалы между нар. науч.-практич. конф. Кострома. 2003. Т. 2. С. 158.

113. Сайко С.Г. Особенности макромикроскопического строения молочной железы американской норки в зависимости от возраста и морфофункционального состояния половой системы // Тр. Свердл. СХИ. Свердловск, 1988. Т. 54. С. 86-93.

114. Сайко С.Г. Морфологические особенности молочных желез у половозрелых самок американской норки // Макро- и микроморфология сельскохозяйственных животных и пушных зверей: межвуз: сб. науч. тр. Омск, 1990. С. 35-38.

115. Саломатин В., Ряднов А., Шперов А. Селенсодержащие препараты в кормлении свиней // Комбикорма. 2008. № 8. С. 76-77.

116. Седов Ю.Д. Кролики. Разведение, содержание, уход. // Изд. 2-е. Ростов н/Д: Феникс, 2008. 173 с.

117. Сеитов М.С., Клёнов В.А., Сорокин В.И. Некоторые аспекты эндокринной регуляции репродуктивной функции коз оренбургской пуховой породы // Юбилейный сборник трудов ученых Оренбургского ГАУ. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2000. С. 17-20.

118. Шабунин C.B., Беляев В.И., Дубовской И.И. и др. Селен (биологические свойства и применение в животноводстве и ветеринарии) // Воронеж, 2007. 96 с.

119. Сергеева Н.И., JI.K. Дзеранова, Е.В. Меских, и др. Участие пролактина в маммогенезе и канцерогенезе молочной железы // Акушерство и гинекология. 2005. № 3, С 13—17.

120. Сидоркин В.А., Улизко М.А., Якунин К.А. и др. Лечение* и профилактика селенодефицитных состояний животных // Ветеринария. 2008. № 3. С. 8-9.

121. Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко O.A. БеломышечнаяIболезнь крупного рогатого скота в зоне селенодефицита // Кролиководство и звероводство. 2009. № 1. С. 50-51.

122. Сидорова К.А., Есенбаева К.С., Петрова H.A. и др. Влияние пробиотиков на показатели крови- кроликов // Вестник Тюменской^ FCXA. Вып. 1. Тюмень, 2007. С. 162-163.

123. Сидорова К.А., Череменина H.A. Изучение влияния селена на обменные процессы кроликов // Фундаментальные исследования. 2009: № 3. С. 73.

124. Скопичев В'Г., Балакина Г.Б., Турбаева О.И. Морфофункциональная организация межклеточного взаимодействия в альвеолах молочной железы // Вопросы нейроэндокринологии. Л.: ЛГУ, 1983. С. 59-65.

125. Скопичев В.Г., Камардина Т.А. Изменение ядер железистых клеток молочной железы в секреторном цикле // Цитология. 1988. №2. С. 183-187.

126. Смирнов М.И., Воробьев В.И., Загреков A.A. Влияние «ДАФС-25» на антиоксидантную систему и продуктивность овец/ М.И. Смирнов, // 3-я международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве»: тезисы докладов. Боровск, 2000. С. 342—343.

127. Смирнова Е.П., Соловьева Л.П. Строение молочной железы лосих // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сибирского международного ветеринарного конгресса. Новосибирск, 2005. С. 334.

128. Соколов A.B., Замана С.П. Дефицит эссенциальных элементов в кормах как следствие низкого уровня минерального питания кормовых угодий // Аграрная>наука. 2001. № 2. С. 22-23.

129. Соловьева Л.П., Бородулина A.B., Голубева O.A. Морфология молочной железы кобыл орловской породы // Актуальные проблемы науки в АПК: мат. 56-й междунар. науч.-практич. конф. Кострома, 2005. Т. 2. С. 152— 153.

130. Сотников О.С. Динамика структуры^ живого нейрона. Л.: Наука, 1986. 159 с.

131. Стадников A.A. Гипоталамические факторы регуляции процессов роста, пролиферации и цитодифференцировки эпителия аденогипофиза. Екатеринбург: Уро РАН, 1999. 140 с.

132. Стрейн Дж. Последствия превышения рекомендуемой суточной дозы микронутриентов: фолиевой кислоты и селена // Вопросы питания. 2000. С. 50-53.

133. Тараненко A.F. Пролактин и лактация // М.: Агропромиздат, 1987.237 с.

134. Тверской Г.Б. Макар З .Н., Мещеряков В:1Ъ Влияние денервации половины вымени на его. кровоснабжение // Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных. 1993. Вып. 1 (105). С. 26-30:

135. Теняев А. Важность витамина Е в кормах5 для животных- // Комбикорма: производство и использование. 2001. № 2. С. 52—54.160: Гинаев Н.И. Случка кроликов //Кролиководство и,звероводство. 2007. № 5. С. 23-24.

136. Тиц Н.У Клиническое руководство но лабораторным тестам // М.: Юнимед-пресс,.2003. 178 с.1621 Токмаков A.A., Фуками Я. Внегеномные механизмы действия, прогестерона // Цитология: 2009 Т. 51. № 5: С. 403-416.

137. Третьяк JI.H., Гёрасимов Е.М. Специфика влияния селена на организм человека и животных, (применительно к проблеме: создания селеносодержащих продуктов! питания)' // Вестник Оренбургского государственного университета. 2007. № 12. С. 136-144.

138. Трифонов Г., Перунова Е. Влияние препаратов микроэлемента селена Hai воспроизводительные: качества свиней // Свиноводство. 2001. № 1.С. 18-20.

139. Трошина Т.А. Биохимические показатели крови пушных зверей // Естествознание и гуманизм: сб. науч. трудов «Современный мир; природа и человек». Томск, 2008. Т. 5. № 1. С. 39.

140. Трошина Т.А., Вакилов Р.Ф. К вопросу баланса микронутриентов у животных // Научный потенциал-аграрному производству: мат. Всерос. науч.-произв. конф., 2008 г. Ижевск, 2008. Т. 3. С. 169-171.

141. Тузова Р.В. Эволюция домашних животных. // М.: Изд-во «Знание», 1989. 140 с.

142. Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А. и др. Селен в организме человека: метаболизм, антиоксидантные свойства, роль в канцерогенезе. М.: Изд-во РАМН, 2002. 224 с.

143. Фисинин В.И., Папазян Т.Т. Повышение продуктивности птицы, качества яиц и мяса: роль селена // Птицеводство. 2003. № 6. С. 2-5.

144. Халипаев M:F. Содержание гормонов в сыворотке крови маток в зависимости от сезона- года // Овцы, козы, шерстяное дело. 2003. № 1.-С. 12-14.

145. Черепанов Г.Г., Макар-З.Н. Сопряженная регуляция органного кровотока и метаболизма секреторных клеток молочной железы: анализ проблемы // Успехи физиологических наук. 2007. Т. 38. № 1. С. 74-84.

146. Чернуха И.М. Бабурина М.И., Кирилов М.П. и др. Прижизненное обогащение мяса кроликов селеном // Кролиководством звероводство. 2006. № 2. С. 12-14.

147. Чугай Б.Л., Краснослободцева A.C., Крысин М.П. и др. Селеноорганические препараты «ДАФС-25» и «Селенолин®» в животноводстве // Вестник ТГУ. 2009. Т. 14. Вып. Г С. 156-157.

148. Чумаченко П.А., Хмельницкий O.K., Шлыков И.П. Молочная железа и эндокринный гомеостаз. Воронеж: ВГУ, 1987. С. 132.

149. Чумаченко П.А., Шлыков И.П. Молочная железа: морфометрический анализ. Воронеж: Издательство ВГУ, 1991. 160 с.

150. Шевченко Б.П. Анатомия бурого медведя. Оренбург, 2003. 452 с.

151. Шевченко Б.П., Дегтярев В.В., Абрамова JI.JI. Клиническая и экспертная анатомия (в схемах, рисунках и таблицах). Изд. 2-е, испр. и доп. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2010. 111 с.

152. Шишкина Г.Н., Дэгало Н:Н: Молекулярная физиология адренергических рецепторов // Успехи физиологических наук, 1997. Т. 28. № 1.С. 61-74.

153. Шманенкова H.A. Физиология сельскохозяйственных животных. Л.: Наука, 1978. 223 с.

154. Шпаков А.О. Структурно-функциональная организация рецепторов полипептидных гормонов, .содержащих LRR-повторы, и их взаимодействие с гетеротримерными G-белками // Цитология. 2009. Т. 51. № 8. С. 637-649.

155. Шульга H.H., Сокольникова Т.А., Шульга В.Н. Динамика иммуноглобулинов^в крови стельных коров // Вестник РАСХН, 2006. № 2. С. 48-49.

156. Щипакин М.В. Строение молочной железы, новорожденных коз зааненской породы // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных», 21 мая 2009 г. Троицк, 2009. С. 127-129.

157. Энциклопедия травоядных пушных животных / авт.-сост. С.П. Бондаренко. М.: ООО «Издательство ACT»; Донецк: Сталкер, 2003'. 416 с.

158. Яппаров И.А., Родионова Т.Н. Испытание «Селебена» на растущих кроликах // Кролиководство и звероводство« 2006. № 6. С. 11.

159. Alexander С.М., Selvarajan S., Mudgett J. et all. Stromelysin-1 regulates adipogenesis during mammary gland involution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2001. Vol. 14. № 2. P. 42-51.

160. Alfthan G., Aro A., Arvilommi H. et all. Deposition of selenium in toenails is dependent on the form of dietary selenium // Biomarkers of Dietary Exposure: Proc. 3 rdMeet. Nat. Epidem. Rotterdam, Jan., 23-25 1991. P. 110.

161. Anderson E., Clarke R.B. Steroid receptors and cell cycle in normal mammary epithelium // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2004. Vol. 9. № l.P. 3-13.

162. Atwood C.S., Ikeda M., Vonderhaar B.K. Involution of mouse mammary glands in whole organ culture: a model for studying programmed cell death // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. Vol. 207. № 2. P. 860-867.

163. Bala L.S., Bhoopendra S., Kavita- G. et all. Role of nutrition in toxic injury // Indian J. Exp. Biol. 1999. Vol. 37. № 2. P. 109-116.

164. Behne D., Weiss-Nowak Ch., Kalcklosch M. Studies on the distribution and characteristics of new mammalian* selenoproteins // J. Environ. Sci. 2007. № 1. P. 2-23.

165. Belozertsev Y.A. Yuntsev S.V., Voshchenko A.V. Action of honey and selenium supplements on cognitive status // VIII Rus.-Jap. Int. Med. Symp. Sept. 21-22. Blagoveshensk. 2000. P. 409-410.

166. Bernstein G., Gruber G. Dietary selenium, vitamin E and ultraviolet light on the skin of chicks and hairless mice // The J. of Clinical Endocrinology & Metabolism. 2002. Vol. 86, № 3. P. 1136-1141.

167. Beyer C., Hoffman* K.L., Gonzalez O. Flores Neuroedocrine regulation of estrous behavior in the rabbit: Similarities and differences with the rat // J. Hormones and Behavior. 2007. Vol. 52\ № 1. P. 2-14.

168. Brisken C. Hormonal control of alveolar development and its implications for breast carcinogenesis // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № l.P. 39-48.

169. Burgoyne R., Duncan J. Secretion of Milk Proteins // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 3. № 3. P. 275-286.

170. Carrington C.A., Hosick H.L., Forsyth I.A. et all. Novel multialveolar epithelial structures from rabbit mammary gland that synthesize milk specific fatty acids in response to prolactin // J. In Vitro. 1981. Vol. 17. № 5. P: 364-368.

171. Castoria G., Barone M.V., Di Domenico M. et all. Non-transcriptional action of oestradiol and progestin triggers DNA synthesis // EMBO J. 1999. № 18. PI 2500-2510.

172. Castoria G., Megliaccio A., D'Amato L. Integrating signals between cAMP and MAPK pathways in breast cancer // J. Front. Biosci. 2008. № 13. P. 1318-1327.

173. Cemek M., Buyukokuroglu M.E., Hazman O. et all. The Roles of melatonin and vitamin E plus selenium in prevention of oxidative stress induced by naloxone-precipitated withdrawal in heroin-addicted rats // J. Biol. Trace Elem. Res. 2010. №6. P. 197-201.

174. Chun E.Y., Belair L., Jolivet G. Transduction pathways of GH in ovine mammary acini involving regulated and functional growth hormone receptors // J. Growth Factors. 2005. Vol. 23. № 1. P. 55-66.

175. Chatzicharalampous C., Rizos D., Pliatsika P. et all. Reproductive hormones and postpartum mood disturbances in Greek women // J. Gynecol. Endocrinol. 2010. № 11. P. 98-101.

176. Chrenek P., A.V. Makarevich, J. Pivko, et all.Characteristics of rabbit transgenic mammary gland expressing recombinant human factor VTII // J. Anat. Histol. Embryol. 2009. Vol. 38. № i. p.: 85-88.

177. Crandall D.L., Hausmann G.J., Krai J.G. A review of the microcirculation of adipose tissue: anatomical, metabolic and angiogenic perspectives // J. Microcirculation. 1997. № 4. P. 211-232.

178. Cunha G.R., Horn Y.K. Role of mesenchymal epithelial interactions in mammary gland development // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1996. № 1. P. 21-35.

179. Debski B., Finley D.A., Picanto M.F. Selenium content and glutathione peroxidase activity of milk from vegetarian and nonvegetarian women // J. Nutr. 2002. № 2. P. 215-220.

180. Dechamma P.A., Kamath S.S., Shetty P.S. Histomorphology, adipocyte size and total fat cell namber in the interscapular brown adipose tissue of pregnant and lactating rats // Proc. Indian Acad. Sci., Anina Sci. 1986. V. 95. № 1. P. 45-50:

181. Derejczuk J., Drozdz M., Chwistek M. Dynamiczna ocena narzadowego rozmieszczemia selenu u krolikow // Bromatol. J. Chem. Toxicol. 1988. №3. P. 244-250.

182. Diaz P., Rodriguez J.M. Cyclic ovarian activity in post partum rabbits // J. Appl. Rabbit Res. 1987. № 3. P. 122-125.

183. Dijkstra J., France J., Dhanoa M.S. A model to describe growth patterns of the mammary gland during pregnancy and lactation // J. Dairy Sci. 1997. Vol. 80. № 6. P. 2340-2354.

184. Dragin S., Pivko J., Massanyi P. Ultrastructural morphometry of mammary gland in transgenic and non-transgenic rabbits // J. Anat. Histol. Embryol. 2006. Vol. 35. № 6. P. 351-356.

185. Elia A.C., Prearo M., Pacini N. et all. Effects of selenium diets on growth, accumulation and- antioxidant response in juvenile carp // J. Ecotoxicol. Environ Saf. 2010. № 6. P. 79-82.

186. Eriksson M. Lindh B., Uvnas-Moberg K. et all. Distribution and origin of peptide containing nerve fibres in the rat and rabbit mammary gland // J. Neuroscience. 1996. Vol: 70. № 1. P. 227-245:

187. Fairbrother A'., Towles J: Subchronic effects of sodium selenite and selenomethionine on several immune functions in mallards // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. 1990. Vol. 19. № 6. P: 836-8441

188. Farr V.C., Prosser C.G:, Davis S.R. Effects of mammary engorgement and feed withdrawal on* microvascular function- in lactating rabbits mammary glands //J. Cell. Biol. 2000. V. 279": P. 1813-1818.

189. Flook A.C. Progesterone and Cortisol in the hamster: their role in parturition, as well as the growth and lactogenesis of the mammary glands // J. Veterinary Research Communications. 2003. Vol. 27. P. 811-814.

190. Forsyth' I.A., Wallis M. Growth hormone and prolactin molecular and functional evolution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № 3. P. 291-312.

191. Furth P.A. Mammary gland involution and apoptosis of mammary epithelial cells // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. № 4. P. 123-127.

192. Gass S., Harris J., Ormandy C. et all. Using gene expression arrays to elucidate transcriptional profiles underlying prolactin function // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2003. Vol. 8. № 3. P. 269-285.

193. Ginsburg E., Vonderhaar B.K. Prolactin: an autocrine growth factor in the mammary gland // Biological signaling and the mammary gland. Ayr, UK: Hannah Res. Inst. 1997. P. 47-58.

194. Glaser V., Nazari E.M., Miiller Y.M. et all. Effects of inorganic selenium administration in methylmercury-induced neurotoxicity in mouse cerebral cortex // Int. J. Dev. Neurosci. 2010. № 7. P. 1154-1162.

195. Gonzalez-Mariscal G. Melo A.I., Chirino R. et all. Importance of mother/young contact at parturition and across lactation for the expression of maternal behavior in rabbits // J. Dev. Psychobiology. 1998. Vol. 32 № 2. P 101-111.

196. Grober U. Selenium in complementary oncology. A critical comments on the select trial // J. Med. Monatsschr. Pharm. 2010. № 4. P. 140-142.

197. Han Z.S., Li Q.W., Zhang Z.Y. et all. Adenoviral vector mediates high expression levels of lactoferrin in the milk of rabbits // J. Microbiol. Biotechnol. 2008: Vol. 18. № 1 P. 153-159.

198. Hebbard L.W., Garlatti M., Oshima R.G. et all. T-cadherin supports angiogenesis and adiponectin association with the vasculature in a rabbit mammary tumor model // Ji Cancer Research. 2008. Vol. 68. № 5. P. 1407-1416.

199. Hennighausen L., Robinsont G.W., Wagner K.U. Developing a mammary gland is a stat affair // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1997. № 2. P. 365-372.

200. Horseman N.D. Prolactin and Mammary Gland- Development // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. Vol. 4. № 1. P. 79-88.

201. Jagoda- C.A. Prolactin stimulation of lactose biosynthesis in mouse mammary gland // Isr. Med. Assoc. J. 2000. Vol. 2. № 4. P. 287-291.

202. Karen P., Kermit L.C. Preface: evolution and comparative biology of the mammary gland / J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 7. № 3. P. 223-224.

203. Kim Y.Y. Selenium metabolism and toxicity of inorganic and organic selenium sources and levels on growth, reproduction and other mineral nutrients in swine // J: Ann. Rev. Nutr. 1999. № 12. P. 64-68.

204. Kliinsten T.S. Laws of growth of mammary gland tissues in in vivo culture // Am. J. of Veterinary Research. 2008. Vol. 69. № 10. P. 1323-1328.

205. Knight'C.H. Overview of prolactin's role in farm animal lactation // J. Livestock Production Science. 2000. Vol. 70. № 1-2. P. 87-93.

206. Kohrle J., Brigelius-Flohe R., Meyer O. Selenium in biology. Facts and medical perspectives // J. Biol. Chem. 2000. V. 381. № 4. P. 849-864.

207. La Ganga T.S. Mammary gland growth during early lactation in the hooded Norway rat'// J: Cell and Tissue Research. 2001. Vol. 303. № 1. P. 69-80.

208. Leal M.L., de Camargo E.V., RossD.H. et all. Effect of selenium and vitamin E on oxidative stress in lambs experimentally infected with haemonchus contortus // J. Vet. Res. Commun. 2010. № 7. P: 143-147.

209. Lefevre C.M., Sharp J.A., Nicholas K.R. Evolution of lactation: ancient origin and extreme adaptations of the lactation system // Annual Review of Genomics and Human*Genetics. 2010. № 11. P: 219-238.

210. Lopez R.E., Knable A.L. Jr., Burruss J.B. Ingestion of a dietary supplement resulting in selenium-toxicity.// Am. J: Acad: Dermatol.* 2010. № 1. P. 168-169.

211. Lund L.R., Bjorn S.F., Sternlicht M.D., et all. Lactational development and involution of the mammary gland requires plasminogen // J. Development. 2000. Vol. 127. № 3. P. 4481-4492.

212. Maertens L., Coudert P. Recent advances in rabbit sciences. «ILVO» 2006. 300 p.

213. Malewski T., Gajewska M., Zebrowska T.Differential induction of transcription factors and expression of milk protein genes by prolactin and growth hormone in the mammary gland of // J. Growth Hormone & IGF Research. 2002. Vol: 12. № l.P. 41-53.

214. Mather I.H., Keenan T.W. The cell biology of milk secretion: historical notes // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 3. № 3. P. 227-232.

215. McClellan H.L., Miller S J., Hartmann P.E. Evolution of lactation: nutrition protection with special reference to- five mammalian species // J. Nutr. Res. Rev. 2008. Vol. 21. № 2. P. 97-116:,

216. Michiels C., Raes M., Toussaint O. Importance of Se-glutathione peroxidase, catalase, and Cu/Zn-SOD for cell survival against oxidative stress // Free Radic. Biol. Med. 1994. № 3. P.235-248.

217. Mikkola M:L., Millar S.E. The mammary bud as a skin appendage: unique and shared aspects of development // J-. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2006. Vol. 11. № 3-4. P. 187-203.

218. Mizutani T., Kishimoto E., Yamada K. Trase selenium and vitamin E in regulation of immunity, and infection of rabbits // Int. J. Epidem. 2009. № 4, P. 918-922.

219. Mu C., Ni D., Zhao J. et all. cDNA cloning and mRNA expression of a selenium-dependent glutathione peroxidase from Zhikong scallop Chlamys farreri // J. Comp. Biochem., Physiol., Biochem. and Moll Biol. 2010. № 6. P. 259-268.

220. N.A.V. 4th ed. -N.H. rev. 2nd ed. -N.E.V. New-York, 1994. 316 p.

221. Naccarato A.G., Viacava P., Bocci G. et all. Definition of the microvascular pattern of the normal rabbit mammary gland / J1 of Anatomy. 2003. Vol. 203. № 6. P. 599-603.

222. Neville M.C., Medina D., Monks J. The mammary fat pad // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. № 3. P. 109-115.

223. Neville M.C. Mc.Fadden T.B., Forsyth I. Hormonal regulation of mammary differentiation and milk sekretion // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № l.P. 49-66.

224. Oftedal O.T. The mammary gland and its origin during synapsid evolution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 3. № 7. P. 225-252.

225. Oka T., Yoshima M., Lavandero S. Control of growth and differentiation of the mammary gland by growth factors // J. Dairy Sci., 1991. V. 74. № 8. P. 2788-2800.

226. Ollivier-Bousquet M. Early effects of prolactin on lactating rabbit mammary gland // J. Cell. Tiss. Res. 1978. Vol. 187. № 1. P. 25-43:

227. Oram L.L., Strawn D.G., Morra M.J. et all. Selenium1 biogeochemical cycling and fluxes in the hyporheic zone of a mining-impacted stream // J. Environ. Sci. Technol. 2010. №11. P. 4176-4183.

228. Osterin V., Batueva S., Shvalcenson A. Natural micronutrient deficiency as a cause of the disease digestive characteristics in Chuvashia // J. Eksp: Klin. Gastroenterol. 2010: №4. P. 93-99.

229. Pang Q., Hou H., Zhang Ch. Et all'. The influence of subcutaneous injection of VE and Se to the pregnant sows on the serum immunoglobulins of the suckle piglets // Trace Elem. and Food*Chain: 2nd Int. Symp. Nov. 12-15 Wuhan (China). 1998. P. 77.

230. Pedram A. A., Razandi1 M., Sainson R.C. et all. A conserved mechanism for steroid receptor translocation to > the plasma membrane // J. Biol. Chem.2007. № 282. P: 22278-22288.

231. Pitelka D:, Taggat B., Hamamoto S. Effect of extracellular calciums depletionon membrane topography and occluding junctions mammary epithelium cells in culture // J. Cell. Biol. 1983. Vol. 96. № 7. P. 613-624.

232. Plaut K.I. Endocrine regulation of lactation: Prolactin, somatotropin, insulin-like growth factor L// J. Endocrinology. 1990. Vol. 4. № 5. P. 218-232.

233. Politis I., Bloock E., Turner J.D.' Effect of somatotropin on the plasminogen and plasmin system in the mammary gland: proposed mechanism of action for somatotropin on the mammary gland // J. Dairy Sci. 1990. V. 73. № 6. P. 1494-1499.

234. Politis I., Gorewit R.C., Muller T. et all. Mammary-derived growth inhibitor in lactation and involution // J. Domest. Anim. Endocrinol. 1992. № 9. P. 89.

235. Richert M.M., Schwertfeger K.L., Ryder J.W. Development of mouse mammary gland // J: Mammary Gland- Biol. Neoplasia. 2000: Vol: 5: № 2. P. 227-241.'

236. Rommers J.M., Kemp B;, Meijerhof R. Rearing management-of rabbit does: arevieu // World Rabbits Sei. 1999: № 7. P. 125-138.

237. Rousel A.M., Anderson R.A.,T'avier A.E. Trace Elements in Man and Animals // Plenum Publishers, New York. 2000: 358 p.

238. Shen Q., Zhang B., Xu R. et all. Antioxidant activity in vitro of the selenium-contained protein from the Se-enriched Bifidobacterium animalis // J. Anaerobe. 2010. № 6. P: 96- 111.

239. Sinkevicius K.W. Characterization of estrogen non-responsive estrogen receptor alpha knock-in mice // J. Endocrinology. 2008. Vol. 2. №2. P. 362-381.

240. Smas C.M., Sul H.S. Control of adipocyte differentiation // J.Biochem. 1995. Vol. 309. № 11. P. 697-710.

241. Smith JJ. Variation in mammary and liver prolactin receptor expression among ruminants and rodents // J. Clin. Endocrinol. Metab: 1991. Vol. 56, № 6. P. 347-352.

242. Smith G.H., Chepko G. Mammary epithelial stem cells // Microsc. Res. Tech. 2001. Vol. 52. № 8. P. 190-203.

243. Surai P. Selenium // Natural antioxidant in avian nutrition and reproduction. Nottingham. 2002. P. 233-304.

244. Surai K.P., Surai P.F., Speake B:K. Antioxidant prooxidant balance in the intestine // Food for thought. Prooxidants nutritional genomics and functional Foods. 2003. V. 1. № 1. P: 51-70.

245. Svechnikova A.A., Golubkina N.A., Meliakina E.I. The human selenium status in Astrakhan region // J. Vopr. Pitan. 2010. № 2. P. 78-80.

246. Talhouk R.S., Bissell MJ., Werb Z. Coordinated expression of extracellular matrix-degrading proteinases and their inhibitors regulates mammary epithelial function during involution // J. Cell. Biol. 1992. Vol. 118. № 6. P. 1271-1282.

247. Tennekoon K.N., Arulambalam P.D., Karunanayake E.H. et all. Prolactin response to suckling in a group of fully breast feeding women during the early postpartum period // J. Ceylon Med. 2001. Vol. 46. № 1. P. 6-10.

248. Thomas P. Characteristics of membrane progestin receptor alpha (m P Ralpha), and progesterone membrane receptor component I (PGMRCI) and their roles in mediating rapid progestin actions // J. Front. Neuroendocrinol. 2008. №29. P. 292-312.

249. Tran-Thanh D., Arneson N.C., Pintilie M. Amplification of the prolactin receptor gene in mammary lobular neoplasia // Breast Cancer Res.Treat. 2010. №7. P. 127.

250. Vijay I.K. Developmental and hormonal regulation of protein N-glycosylation in the mammary gland // J. Mammary Gland Biol'. Neoplasia. 1998. Vol. 3:№3. P. 325-336.

251. Wang S. The role of mammary epithelial-stromal cell interactions in relation to growth regulation by estrogen and progestin // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1995. Vol. 3. № 2. P. 103-109.

252. Warner M.R. Mammary gland morphology offemale beagle dogs. Studies in vivo and in vitro // J. of Dairy Research. 2005. T. 72. № 1. C. 90-97.

253. Watanabe Y.G. An immunohistochemical study on the mouse adenohypophysis with reference to the spatial relationship between GH cells and other types of hormone-producing cells // J. Anat. and Embriol. 1985. V. 172. № 3. P. 277-280.

254. Weaver V.M., Bissell M.J. Functional culture models to study mechanisms governing apoptosis in normal and malignant mammary epithelial cells // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. № 4. P. 193-201.

255. Wiesen J.F., Werb Z. Proteinases, cell cycle regulation and apoptosis during development and involution of the mammary gland //J. Mol. Reprod. 2000. Vol. 56. № 2. P. 534-540.

256. Yan L., Frenkel G.D. Selenite inhibits cell attachement to extracellular matrix //Selenium in Biol, and Med.: 5th Int Symp. July, 20-23, 1992. Vanderbilt Univ. School. Of Med., Nashville, Tennessee (USA). P. 116.

257. Zbikowska H.M. Selen w organizmach zywych. Toksycznosc selenu I dzialanie antynowotworowe // Acta UL. Folia Biochim. Et Biophys. 1997. № 12. P. 29-37.

258. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО «ОРЕНБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»042.01 1 6 635^1. АНИПКО Вадим Владимирович

259. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ

260. МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРОЛЬЧИХ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

Информация о работе

Анипко, Вадим Владимирович
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.01

Диссертация

Морфофункциональные изменения молочной железы крольчих под влиянием препаратов селена - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы