Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Морфофункциональная характеристика надпочечников кроликов в условиях стресса и его коррекции

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика надпочечников кроликов в условиях стресса и его коррекции"

На правахфукописи

МУХАМЕТОВ Аскар Илнукеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАДПОЧЕЧНИКОВ КРОЛИКОВ В УСЛОВИЯХ СТРЕССА И ЕГО КОРРЕКЦИИ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

11АВГ2015

Саранск-2015

005571378

Работа выполнена на кафедре морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Абрамова Людмила Леонидовна,

Научный руководитель: _ .

доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты: Баймишев Хамидулла Балтуханович,

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии, акушерства и хирургии ФГБОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия»

Белогуров Алексей Николаевич

доктор биологических наук, профессор кафедры анатомии и хирургии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Дагестанский государственный аграрный университет имени М. М. Джамбулатова», г. Махачкала.

Защита состоится « 14 » «сентября» 2015 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д.212.117.15 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Объявление о защите и автореферат диссертации размещены на официальных сайтах ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» www.mrsu.ru и Высшей Аттестационной комиссии Минобрнауки РФ http://vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан «¿7_» ЦЦХ)е,и/ 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.А. Романова

1 Введение

1.1 Актуальность темы исследования

Современные условия развития промышленного и фермерского кролиководства позволяют получить значительный объем мясной продукции в сравнительно короткий срок. Транспортировка животных из отдалённых регионов России неизбежно приводит к возникновению у них стрессовых реакций, что усугубляется нарушениями норм плотности посадки, гипертермическими воздействиями, вследствие чего у неполовозрелых самок может развиться бесплодие, патология беременности и другие болезни.

Стресс - необходимое звено адаптации организма к многообразным факторам среды - был назван Г. Селье «общим адаптационным синдромом». Концепция стресса получила значительное развитие во множестве работ отечественных и зарубежных авторов (Азарных Т.Д., 2012; Нестеров Ю.В. и др., 2012; Macho L. et al., 2008; Liang Z. et al., 2011; Walker C.-D., Anand K.J.S., Plotsky P.M., 2011; Kondo Y. et al., 2013). Однако недостаточно изученными остаются механизмы, лежащие в основе тканевого адаптогенеза в процессе развития стресс-реакции.

Главной эффекторной железой внутренней секреции при развитии стресс-реакции является надпочечник, клетки кортикального слоя которого секретируют ■ гормон кортизол, отвечающий за адаптацию, резистентность и стрессустойчивость организма животного. Актуально изучение морфофункционального состояния клеточно-тканевого ансамбля адреналовых желёз (Рунов Г.П., Зиновьева О.В., 2006; Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В., 2007; Фадеев В.В., 2008).

Надпочечники - уникальные органы системы эндокринной регуляции жизненно важных процессов в организме млекопитающих (Дедов И.И., Фадеев В.В., Мельниченко Г.А., 2002; Милюков В.Е., Богданов A.B., 2011; Милюков В.Е. и др., 2012).

1.2 Степень изученности темы

Исследованию вопросов морфофункциональной организации надпочечников у животных в норме посвящено много работ (Зеленевский Н.В., 1997; Шевченко Б.П., 2003; Пашинин Н.С., 2006; Кузнецов A.B., 2006; Алексеев В.В., Арестова И.Ю., 2012; Llabres-Diaz F.J., Dennis R., 2003; Bragulla H. et al., 2004; Baiberet V. et al., 2010; Jelinek F., Konecny R.P., 2011; Walid A. Farhat, Bryce A. Weber, 2012; de Chalus T. et al., 2013; Erdogan S., Pérez W., 2013).

Широко изучены механизмы нейрогуморальной регуляции продукции и секреции гормонов эндокриноцитами коры надпочечника с участием системы гемомикроциркуляции (Акмаев И.Г., 2001; Gallo-Payet N., Payet M.D., 2003; е Diego A.M.G., Gandía L„ Garcia A.G., 2008; Matsuoka H., 2008; Henderson I.W., 2011; Sandow J., 2011; Young J.B., Landsberg L., 2011; Séguin В., Brownlee L„ Walsh P.J., 2013).

Однако многие вопросы, касающиеся морфофункциональных основ адаптационной пластичности тканей эпителиального, стромального компонентов и

з

структур системы обеспечения надпочечников при воздействии экзогенных факторов и понимания механизмов реализации гистотипических потенций тканей органа при коррекции стресс-реакций у крольчих требуют дальнейшего изучения, что соответствует запросам современной фундаментальной биологической науки и ветеринарной медицины, имеет большое значение для разработки программ совершенствования технологии выращивания первокролок.

Опыты по изучению морфофизиологии надпочечников крольчих при коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол» проводились впервые.

1.3 Цель исследования - выявить закономерности морфофизиологии надпочечников неполовозрелых крольчих на основе топографо-анатомических особенностей, источников васкуляризации, гистоархитектоники в норме, и их адаптационной пластичности в условиях экспериментально индуцированной стресс-реакции и коррегирующем воздействии препарата «Лигфол».

Для реализации цели перед нами поставлен ряд конкретных задач.

1. Изучить анатомо-топографические особенности, синтопию, источники экстраорганной васкуляризации надпочечников неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.

2. Исследовать абсолютную массу тела, массу и линейные показатели, соотношение зон коры и медулы надпочечников, их цитофизиологические характеристики во взаимосвязи с гематологическим и гормональным профилями крольчих в норме.

3. Экспериментально смоделировать стресс-реакцию у неполовозрелых крольчих и разработать способ её коррекции. Выявить закономерности структурно-функциональных изменений паренхиматозного и стромального компонентов надпочечников во взаимосвязи с показателями системы крови, динамикой гормонов крольчих при воздействии стресс-факторов.

4. Обосновать морфофункциональную адаптационную пластичность гормон-секретирующего комплекса, сосудов ГМЦР коркового и мозгового вещества надпочечников, их взаимосвязь с гематобиохимическим профилем крольчих в условиях коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол».

1.4 Научная новизна работы

Получены новые сведения об анатомо-топографических особенностях, синтопии, источниках васкуляризации, хода и ветвления экстра- и интраорганных сосудов артериального и венозного звеньев и гистоархитектоники надпочечников неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.

Выявлены закономерности реактивных изменений паренхиматозного, стромального компонентов и гемомикрососудов надпочечников крольчих при индуцированной стресс-реакции, их взаимосвязь с динамикой гормонов, морфологическими и биохимическими показателями крови.

Приоритетно обоснование адаптационной пластичности структур гормон-секретирующего комплекса коркового и мозгового вещества надпочечников, сосудов гемомикроциркуляторного русла, уровень их взаимосвязи с показателями 4

системы крови, динамикой гормонов при коррегирующем влиянии препарата «Лигфол» в условиях стресс-реакции у крольчих.

Полученные результаты позволили разработать практические рекомендации для промышленного кролиководства.

1.5 Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные результаты раскрывают закономерности реактивных изменений, адаптационной пластичности, степени реализации гистотипических потенций гормон-секретирующего комплекса надпочечников неполовозрелых крольчих в условиях индуцированной стресс-реакции и её коррекции препаратом «Лигфол». Исследования дополняют имеющиеся представления о топографии, синтопии, экстра- и интраорганной васкуляризации, гистоархитектоники надпочечников, расширяют знания о механизме адаптивного ремоделирования структур паренхиматозного компонента органа крольчих во взаимосвязи с гематобиохимическим профилем в условиях стресс-реакции и её коррекции.

Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных и других биологических факультетах, на курсах повышения квалификации, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий. Материалы диссертации могут быть полезны научным сотрудникам НИИ, занимающимся проблемами экспериментальной и функциональной морфологии эндокринных органов. Предложены в качестве топографических и синтопических ориентиров надпочечников, хода и ветвления их экстра- и интраорганных кровеносных сосудов. Разработаны рекомендации использования препарата «Лигфол» кроликам при стресс-реакциях разной этиологии. Результаты исследования внедрены в крестьянско-фермерском хозяйстве «Зобнин» Кваркенского района Оренбургской области (акт внедрения от 28 августа 2013г.).

1.6 Связь исследований с научной программой

Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Государственный регистрационный номер темы: 01201161504

1.7 Положения, выносимые на защиту

1. Анатомо-топографические особенности, синтопия, источники экстраорганной васкуляризации, ангио- и гистоархитектоника надпочечников неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.

2. Гистофизиология кортикальной и медуллярной зон надпочечников в связи с количественными морфологическими, биохимическими и гормональными характеристиками крови крольчих контрольной группы.

3. Закономерности гистотипических потенций гормон-секретирующего клеточно-тканевого ансамбля коры, медулы надпочечников и системы их обеспечения во взаимосвязи с гематобиохимическим и гормональным профилями неполовозрелых крольчих реализуются в условиях индуцированной стресс-реакции.

4. Адаптационная пластичность эндокриноцитов и микрососудов надпочечников и их корреляция при коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол».

1.8 Методология и методы исследования

При исследовании применён комплексный методический подход, включающий: морфометрию, синтопию, световую микроскопию гистологических и трансмиссионную микроскопию ультратонких срезов, гистохимию, цитометрию, гематологические, биохимические исследования, статистическую обработку цифровых данных и системный морфофункциональный анализ.

1.9 Степень достоверности и апробация результатов исследования

В основу работы положен анализ результатов комплексных исследований, выполненных на 45 неполовозрелых трёхмесячных самках кроликов породы советская шиншилла Достоверность представленных в диссертационной работе результатов подтверждается соответствием теоретических заключений статистическим расчетам комплекса проведенных исследований.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы незаразной патологии и терапии» (Оренбург, 2013), на Международной научно-практической конференции «Наука и образование в жизни современного общества» (Тамбов, 2013), на Всероссийской научно практической конференции «Фундаментальные основы научно-технической и технологической модернизации АПК» (Уфа, 2013) на III Международной научно-практической интернет-конференции «Актуальные проблемы современной биологии, морфологии и экологии животных» (Брянск,

2013), на Объединенном ХП Конгрессе МАМ и VII Съезде ВНО АГЭ (Тюмень,

2014).

Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий и научной работе на кафедрах: морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ивановской ГСХА; анатомии и хирургии Воронежского государственного аграрного университета; диагностики, терапии, морфологии й фармакологии Вятской ГСХА; биологии животных и ветеринарии Пензенской ГСХА; анатомии, акушерства и хирургии Самарской ГСХА; морфологии и физиологии животных Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева.

1.10 Публикации по теме диссертации. По материалам научных исследований опубликовано шесть печатных работ, из них четыре - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.11 Личный вклад соискателя. Экспериментальную часть, работу по систематизации и анализу полученных результатов автор провел лично. Один научный труд опубликован в соавторстве с A.M. Юсуповым. В диссертационный совет представлена справка подтверждающая, что в диссертации его данные не использованы.

1.12 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 168 страницах компьютерного набора и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, используемых в диссертации, введения, обзора литературы, материала и методов исследования, четырёх глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, практических предложений, заключения, библиографического списка и приложения. Библиографический список включает 351 наименование работ, из них 135 - зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 31 рисунком и 21 таблицей.

2 Материал и методы исследования

Работа выполнена в период с 2011 по 2013 годы на кафедре морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет», экспериментальная часть проводилась на базе кролиководческой фермы крестьянско-фермерского хозяйства «Зобнин» Кваркенского района Оренбургской области. Были сформированы контрольная и две опытных группы животных. Для комплектации групп (в соответствии с периодизацией Rommers J.M., Kemp В., Meijerhof R., 1999) использовали клинически здоровых (t°C, ЧСС, ЧДД) неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла в возрасте трех месяцев, аналогов по массе, телосложению, упитанности, содержавшихся в одних условиях и получавших одинаковый внутрихозяйственный рацион. Возраст крольчих определяли по данным регистрационных записей журналов учета зооветслужбы хозяйства.

Контрольная группа животных не подвергалась какому-либо воздействию. Животных первой опытной группы экспериментально подвергали воздействию стресс-факторов: уплотненная посадка - 0,05 м2 на голову, в сочетании с высокой внешней температурой (33,0±2,5°С) в течение 14 суток. Крольчихам второй опытной группы внутримышечно вводили препарат «Лигфол», в дозе 0,1 мл/кг, двукратно (за трое суток до начала воздействия стресс-факторов и в первые сутки развития стресс-реакции).

Объектом исследования служили надпочечники крольчих. Забор материала для исследований осуществляли у самок всех исследуемых групп, поствитально при убое с хозяйственной целью (гистологические пробы - не позднее одного часа). Материал в каждой группе брали не менее чем от 3-х голов. Всего в опыте, с учётом повторного исследования, использовано 45 животных.

Перед убоем у животных в одно и то же время измеряли температуру, пульс, дыхание. Из краевой ушной вены брали пробы крови для ее биохимических исследований, определения в сыворотке крови концентрации гормонов: кортизола, дегидроэпиандростерон-сульфата (ДГЭА-с) и прогестерона-0,1.

Проведение экспериментальной части исследования предусматривало изучение развития стресс-реакции и коррегирующего эффекта от воздействия препарата «Лигфол» на морфофункциональную адаптационную пластичность

7

тканей надпочечников крольчих. «Лигфол» - водно-дисперсный комплекс гуминового вещества, полученного при гидролизе древесного лигнина, натрия пирофосфата десятиводного, натрия хлорида и деминерализованной воды, обладающего адаптогенной и стресс-корректорной активностью. В основе валеопозитивных эффектов препарата «Лигфол» лежат иммуно-антиоксидантные механизмы (антирадикальная активность, мобилизация фагоцитов, активизация антиоксидантной защиты и иммунокомпетентных органов). В связи с тем, что в наставлении по применению препарата «Лигфол» присутствует информация о дозах, рекомендуемых к применению на домашних животных (кошках, собаках), нами впервые проведен опыт по использованию препарата в этой же дозе на трёхмесячных крольчихах.

Экспериментальная часть включала в себя комплекс методов исследования.

2.1 Анатомические исследования. Изучение морфологии надпочечников трёхмесячных крольчих складывалось из описания топографии, синтопии, выявления анатомо-топографических особенностей органа и источников его экстраорганной васкуляризации.

Сегментарную синтопию средней трети тела кроликов проводили методом классических распилов замороженных трупов по Пирогову в соответствии с анатомо-топографическими ориентирами.

Массу правого и левого надпочечников кроликов определяли путём взвешивания на аналитических весах ВЛР-200, объём - по количеству вытесненной жидкости из мерного цилиндра. Линейные размеры: ширину, длину и высоту надпочечников измеряли штангенциркулем с ценой деления 0,05 мм.

При исследовании ангиоархитектоники надпочечников крольчих использовали нативный трупный материал. После предварительного лаважа сосудистого русла изотоническим раствором, хлорида натрия (30 - 40°С), в mix осуществляли инъекцию латексной массы (Parade W100). Далее препарат фиксировали пять суток в 3%-ном растворе формалина, а затем в течение 15 суток его концентрацию постепенно доводили до 15%. Перед исследованием препараты вымачивали 24 часа в холодной проточной воде. Сосудистое русло органов и тканей почечной области изучали под бинокулярным стереоскопическим микроскопом МБС-9.

2.2 Материалом для гистологического исследования служили гистологические пробы надпочечников от неполовозрелых самок всех исследуемых групп. Гистологический материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, проводили через батарею спиртов возрастающей крепости и заливали в парафин. Гистосрезы толщиной 4-5 мкм подвергали тривиальному методу окрашивания гематоксилином Майера и эозином. Гистохимически выявляли: РНК (по Браше), липиды (окраской Суданом III по Key W.), углеводсодержащие биополимеры (PAS-реакцией по Хочкису). Световую микроскопию осуществляли при помощи микроскопа Micros MSD 500 (Австрия), оснащенного цифровой камерой.

23 Цитологическое исследование проб надпочечников (0,025 см3 - для изготовления ультратонких срезов) начинали с фиксации в охлажденном 2,5%-ном растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН 7,4). После общепринятой подготовки и дегидратации материал заключали в смесь эпон-аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) изготавливали полутонкие срезы толщиной 0,07-0,08 мкм, которые окрашивали 1%-ным раствором толуидинового синего, приготовленного на 2,5%-ной безводной соде. Электронную микроскопию ультратонких срезов производили на микроскопе JEM - 7А (Япония).

2.4 Морфометрическое исследование цито- и гистоструктур надпочечников, количественную информацию об объемах и других параметрах клеточных структур, их ядер, наружных диаметрах сосудов гемомикроциркуляторного русла (ГМЦР), а также о соотношении площадей эпителиальных и соединительнотканных компонентов получали при помощи винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ 15150-69) и лицензионной программы «ТестМорфо-4.0». В отдельном образце ткани измерение каждого показателя осуществляли не менее чем в 16 полях зрения каждого объекта (Автандилов Г.Г., 2002).

2.5 Морфологическое и биохимическое исследование крови проводили на гематологическом (Medonic СА 620) и биохимическом (ERBA XL-200) анализаторах. Определяли количество: гемоглобина; эритроцитов; лейкоцитов; общего белка; альбуминов; аспартаттрансаминазы (Ас AT); аланинтрансаминазы (АлАТ). Коэффициент де Ритиса вычисляли исходя из соотношения АСТ/АЛТ (Медведева М.А., 2008).

Концентрацию гормонов кортизола, ДГЭА-С и прогестерона-0,1 в сыворотке крови осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Multiscan Labsystems» (Финляндия), с использованием стандартных наборов реагентов: «Кортизол ИФА-БЕСТ» («Вектор ВЕСТ»), «Стероид ИФА-ДГЭА-сульфат» (ООО «Алкор БИО», Москва), «Стероид ИФА-прогестерон-01» (Санкт-Петербург).

2.6 Статистическая обработка данных результатов исследований заключалась в построении вариационных рядов, определении средних величин показателей вариации и проверке нормальности распределений полученных данных при использовании программы «Microsoft Excel» (Базаров М.К., 2008). Для оценки различий двух групп показателей применяли критерий достоверности Стьюдента. Взаимовлияние морфометрических показателей гистоструктур выражали через коэффициенты парной корреляции (Автандилов Г.Г., 2002).

Названия анатомических, гистологических и эмбриологических структур и образований приведены в соответствии с Международной (Парижской) анатомической и гистологической номенклатурой (N.A.V., N.H., N.E.V.,1994), уточненной на Международных конгрессах, а русские эквиваленты - по 4-ой редакции Международной ветеринарной анатомической номенклатуры (Зеленевский Н.В., 2003).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Анатомо-топографические особенности, источники экстраорганной васкуляризации надпочечников крольчих

Надпочечники неполовозрелых крольчих в возрасте трёх месяцев представляют собой парные органы: правый — уплощённо-овальной, а левый — округлой формы, бело-жёлтого цвета, расположены в почечной области краниального отдела забрюшинного пространства. В нормальном положении надпочечники удерживает окружающая жировая и соединительнотканная капсулы.

Правый надпочечник расположен кранио-медиально на расстоянии 10 мм от почки, между брюшной аортой и каудальной полой веной, левый - лежит медиально на расстоянии 5-8 мм от переднего полюса почки в почечном жировом депо, ближе к брюшной аорте и рядом с почечной артерией. На туловище правый надпочечник проецируется на каудальный край последнего ребра.

На поперечном распиле тела кролика между грудными позвонками ТЫ 2 и ТЫЗ анатомическим ориентиром служила правая почка. Её каудальный конец лежит на почечном вдавлении хвостатой доли печени, которая в свою очередь граничит со слепой кишкой. Правый надпочечник на поперечном разрезе имеет уплощённо-овальную форму, располагается медиально от правой почки, граничит с нисходящим коленом 12-перстной кишки, а вентральной своей поверхностью прилежит к начальным петлям тощей кишки.

Сегментарный срез между поясничными позвонками Ы и Ь2 позволил охарактеризовать синтопию левой почки следующим образом. Её латеральная поверхность граничит с брюшной стенкой, дорсальная - с мышцами поясничного отдела позвоночного столба. Вентральная и часть медиальной поверхности граничат с петлями тощей кишки. Левый надпочечник на срезе имеет округлую форму, прилежит латеральной поверхностью непосредственно к капсуле левой почки, а с медиальной стороны граничит с петлями тощей кишки.

Васкуляризация надпочечников осуществляется артериями, в 60% случаев, отходящими от почечных, в 30-35% - от краниальной брюшной артерии и в 5-8% - от первой или второй поясничных артерий. Каждая почечная артерия отходит от брюшной аорты, делится по магистральному типу на три — пять ветвей, которые лежат в воротах почек между мочеточником и лежащей кпереди от него почечной веной. У крольчих правый надпочечник расположен на большем расстоянии от брюшной аорты, чем левый, и кровоснабжается собственной надпочечной артерией, отдающей вторичные (краниальные, средние и каудальные) надпочечные и добавочные артерии, обеспечивающие васкуляризацию жирового депо и лимфатического узла.

В капсулу правого надпочечника проникают от трёх до семи ветвей надпочечной артерии, формирующих субкапсулярную сеть, состоящую из артериол (019,О±О,34 мкм) и прекапилляров (013,О±О,28 мкм). Сосуды первого

уровня деления отходят от артериальных стволов под прямым углом преимущественно по дихотомическому типу, а меньшие - по магистральному.

Левая надпочечная артерия, отходящая от почечной, кровоснабжает вторичными ветвями мочеточник, жировое депо и надпочечник. Её капсулярные артерии отдают субкапсулярные ветви, которые по диаметру и по численности превышают таковые правой железы, имеющие чаще магистральный тип деления.

Принцип васкуляризации коркового и мозгового вещества, а также строение венозного компонента в правосторонних и левосторонних железах аналогичны. Отток крови от надпочечников осуществляется по ветвям меньшего диаметра и больших порядков, собирающих кровь из окружающих тканей и частично из капсулы почки.

Надпочечные артерии в составе гемомикроциркуляторного русла железы образуют капсулярную и кортикальную сети, их концевые ветви (прекапилляры) через внутреннюю капсулу проходят в составе трабекул в мозговую зону надпочечника, где образуют сеть капилляров и посткапиллярных венул, последние, сливаясь, образуют надпочечную вену. Выявленная капсулярная венозная сеть в 98% случаев имела сток именно в надпочечную вену, которая открывалась в краниальную брюшную вену.

Количество венозных ветвей, выходящих из капсулы надпочечника, варьирует от одной до трех, при этом ветви имеют значительные диаметры, что компенсирует приток по существенно большему количеству артериальных ветвей и регулирует осмотическое давление внутри органа. Особенность топографии правого надпочечника и его близкое расположение к аорте делает отток венозной крови более эффективным. Выявленные анатомо-топографические особенности надпочечников крольчих и источников их экстраорганной васкуляризации частично согласуются с данными В.Н. Жеденова, С.С. Бигдан, В.П. Лукьянова и др. (1957) и А.Д. Ноздрачева, ЕЛ. Полякова, А.Н. Фединой (2009).

Исследование анатомо-топографических особенностей, синтопии, источников васкуляризации, хода и ветвления экстра- и интраорганных сосудов артериального и венозного звеньев и гистоархитектоники надпочечников не позволяет раскрыть механизмы гистотипических потенций органа в условиях экзогенных воздействий, что послужило основанием к началу разработки экспериментальной модели стресс-реакции и её коррекции препаратом «Лигфол» на неполовозрелых трёхмесячных самках кроликов как биологическом объекте с целью получения сведений о реактивных изменениях гормон-секретирующего компонента и систем обеспечения надпочечников во взаимосвязи с показателями системы крови с целью обоснования морфофункциональной адаптационной пластичности органа.

3.2 Морфофизиология надпочечников неполовозрелых крольчих

Масса трёхмесячных крольчих контрольной группы за 14 суток эксперимента возросла на 5,3%. В показателях морфометрии надпочечников выявляли

правостороннюю асимметрию: так масса на 4,7%, объем на 9,1%, длина на 10,9%, ширина на 12,9%, высота на 30,0 % (р<0,05), у правого надпочечника достоверно больше, чем левого.

Клиническое состояние животных характеризовалось стабильностью показателей жизнедеятельности. Гематологические и биохимические характеристики были в диапазоне референсных значений нормы. Сывороточные концентрации исследуемых гормонов кортизола, дегидроэпиандростерон-сульфата и прогестерона у крольчих относительно стабильны и согласуются с данными D.O. Norris (2010).

Надпочечники крольчих покрыты тонкой капсулой (43,16±0,74 мкм), в соединительной ткани которой большое количество пучков коллагеновых и эластичных волокон и клеток фибробластического ряда. Непосредственно под капсулой находится тонкий слой мелких малодифференцированных эпителиальных слабобазофильных субкапсулярных клеток, что согласуется с данными Е.И. Тараканова (1960), А. А. Артишевского (2000), С. Zimmer, A. Horauf, С. Reusch (2000). В воротах железы капсула утолщена, хорошо коллагенизирована, визуализируются одиночные адипоциты, артерии (ветви надпочечных) магистрального и рассыпного типов ветвления и вены во внутреннем слое капсулы и трабекулах дихотомически делятся, формируя капсулярную и кортикальную сети, кровоснабжающие разные зоны коркового и паренхиму мозгового вещества, тем самым обеспечивая общность всего органа, что согласуется с результатами исследований А.П. Шишкина (1996), И.И. Дедова, Е.И. Маровой, В.В. Вакса, (2000), О .А. Медведевой (2001), В.В. Фадеева, Г.А. Мельниченко (2003), Г.П. Рунова, О.В. Зиновьевой (2006), В.В. Фадеева (2008), I.W. Henderson (2011).

По периферии надпочечника расположено корковое, а в центре - мозговое вещество, разделённые тонкой прослойкой соединительной ткани, что согласуется с данными ряда авторов (Артишевский А.А., 1972; Майстренко Н.А., 2000; Schwarz Т., Saunders J., 2013). Корковое вещество составляет 80% площади всей железы, состоит из трёх зон: клубочковой, пучковой и сетчатой. Корковые эндокриноциты клубочковой зоны образуют аркады и клубочки округлой или полигональной формы. Эндокриноциты в основном кубической формы с выраженной вакуолизацией слабобазофильно окрашенной цитоплазмы. Цитоплазма 40% клеток содержит мелкие зёрна базофильных включений, ядра округло-овальной, реже уплощенной формы, насыщены эухроматином.

По всему объему коркового вещества пучковая зона однородна, состоит из крупных светлых и мелких темных эндокриноцитов кубической и низкопризматической формы, формирующих хорошо различимые и упорядоченные тяжи, направленные перпендикулярно к поверхности надпочечников. Тёмные эндокриноциты с умеренно базофильными ядрами овальной формы и выраженной пылевидной зернистостью цитоплазмы. Эпителиальные тяжи по мере продвижения к центру надпочечников постепенно утрачивают свою характерную архитектонику и формируют рыхлую сеть. 12

Хаотически расположенные эпителиальные тяжи в составе сетчатой зоны включают более мелкие, чем в пучковой зоне, эндокриноциты неправильной формы с относительно крупными ядрами и темной цитоплазмой, насыщенной пылевидными гранулами и редко - мелкими вакуолями. Местами встречаются крупные светлые эндокриноциты, в цитоплазме которых визуализируются диктиосомы, митохондрии и множественные эктазии агранулярного ЭПР. Соединительнотканная перегородка, прерывисто обособляющая сетчатую зону коры от мозгового вещества, слабо коллагенизирована, микрососуды расширены.

В тяжах хромаффинных клеток мозгового вещества надпочечника визуализируются светлые эндокриноциты, соединённые межклеточными контактами, в ядрах которых преобладает эухроматин, в цитоплазме крупные, округлой формы митохондрии, структуры крист четко выражены, значительная площадь заполнена агранулярным ЭПР, с участками эктазий, а также крупными вакуолями со слабо- и умеренно электронноплотным содержимым. В цитоплазме светлого эндокриноцита вблизи плазмалеммы часто выявляются скопления мелких везикул с содержимым, которые мигрируют в направлении синусоидных гемокапилляров через гистогематический барьер, что свидетельствует о высокой степени его проницаемости.

Системный анализ цифрового массива данных позволил выявить вазомоцию интроорганного русла надпочечников, обусловливающую чередование фаз секреторных циклов эндОкриноцитов разных зон коркового вещества, а также инициацию секреторного цикла и его блокирования. Приток артериальной крови с веществами-предшественниками (релизинг-факторами) инициирует поочерёдное «включение» ядерного белкового синтеза в эндокриноцитах клубочковой и сетчатой зон, а затем пучковой зоны и мозгового вещества. Кроме того, эндокриноцитами сетчатой зоны и мозгового вещества одновременно осуществляется экструзия андрогенов и катехоламинов, и гетерохронно -экструзия минерало- и глюкокортикоидов эпителиоцитами клубочковой и пучковой зон.

3.3 Адаптационная пластичность надпочечников во взаимосвязи с динамикой показателен крови крольчих при индуцированной стресс-реакции

Для клинического состояния крольчих первой опытной группы на 14 сутки стресс-реакции характерно: угнетение, апатия, понижение аппетита, взъерошенность шерстного покрова, повышение температуры тела на 0,3-0,5°С. За 14 суток эксперимента масса крольчих уменьшилась на 2,4%, тогда как у. самок контрольной группы за этот период она увеличилась на 5,3%. Массы левого и правого надпочечников увеличились на 7,1 и 4,4%, а объемы возросли (р<0,05) на 18,2 и 16,7%. Существенно в стрессе изменяются и линейные показатели органа, так, длина левого и правого надпочечников возрастает на 11,1% (р<0,05) и 4,9% (р<0,05), ширина - на 29% (р<0,05) и 22,9% (р<0,05), а высота - на 16,7% (р<0,05) и 5,13% (р<0,05) соответственно.

Уровень кортизола в сыворотке крови крольчих первой опытной группы превышал контрольные показатели в 5,5 раза (р<0,05), что являлось главным клиническим показателем стресс-реакции, полученной в результате эксперимента. При этом снижались концентрации дегидроэпиандростерон-сульфата в 1,8 раза (р<0,05), прогестерона - в 1,45 раза (р<0,05) относительно контрольных значений. Это характеризовало состояние гормонального фона самки при развитии стресс-реакции, что согласуется с данными ряда авторов (Азарных Т.Д., 2012; Нестеров Ю.В. и др., 2012; Kondo Y. et al., 2013).

Анализ гематологических характеристик крольчих показал понижение количества эритроцитов на 23,9% (р<0,05), лейкоцитов на 23,4% (р<0,05), гемоглобина на 21,7% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой. Концентрация общего белка понижалась на 20,2% (р<0,05), а альбумина увеличивалось на 7,1% (р<0,05) относительно контрольных значений. Уровень глюкозы в сыворотке крови возрастал на 34,5% (р<0,05), концентрация внутриклеточного фермента аспартаттрансаминазы повышалась на 3,0%, тогда как аланшпрансаминазы увеличивалась на 27,8%, что привело к уменьшению коэффициента Де Ритиса в 1,2 раза по сравнению с контролем и свидетельствовало о повреждении клеток печени, согласовываясь с данными Л.В. Карпуниной (2010), A.B. Севрюкова (2014).

На 14 сутки воздействия стресс-факторов уменьшаются: ширина капсулы - в 1,15 раза (р<0,05), ширина коркового вещества - в 1,58 раза (р<0,05), а мозгового -увеличивается в 3,03 раза (р<0,05) относительно контроля. Соединительнотканная капсула снаружи покрыта мезотелием, местами утолщена за счет расширенных микрососудов, трабекулы с признаками разволокнения и периваскулярного отёка, что подтверждает данные, полученные Е.И.Кирилловым (1994) и Ю.В. Нестеровым (2012). Под капсулой визуализируются слои гиперплазированных субкапсулярных клеток с выражение базофильными ядрами, насыщенными гетерохроматином, местами выявляются двухядерные эндокриноциты с увеличением численности органелл и гипертрофией цитоплазмы.

Ширина клубочковой зоны коркового вещества увеличилась в 1,24 раза (р<0,05) в сравнении с контролем. Большинство клубочков имеют форму кольцевидно закрученных эпителиальных тяжей. Диаметр эпителиоцитов достоверно увеличился в 1,07 раза, в то время как диаметр его ядра превысил контрольные значения в 1,43 раза (р<0,05). Это, к сожалению, противоречит данным М.В. Каргиной, C.B. Котельниковой, A.B. Котельникова (2013).

Две трети площади клубочковой зоны имеют морфологические признаки деструкции клубочков с фрагментами деградирующих клеток. Цитоплазма большинства эндокриноцитов вакуолизирована, что является одним из морфологических проявлений аппоптоза, гранулы внутриклеточного гликогена не выявляются. Крупные эндокриноциты клубочков со слабо базофильными ядрами, оксифильной цитоплазмой с мелкодисперсной зернистостью, напротив, мелкие

эндокриноциты, с базофильной цитоплазмой и ядрами, насыщенными эухроматином.

Деградация эндокриноцитов сопровождается кариорексисом, аутолизом органелл и фрагментацией мембран. Длительное стрессирующее воздействие инициирует апоптоз кортикоцитов с последующей их безнекротической элиминацией мононуклеарными клетками, способствуя образованию обширных полостей. В соединительнотканной строме этой зоны существенное расширение фенестр эндотелиоцитов микрососудов (на фоне значительного притока крови) инициирует образование периваскулярных отёков, что ранее было отмечено целым рядом авторов (Vinson G.P. et al., 2007; Ehrhart-Bornstein M., Bornstein S.R., 2008).

Ширина пучковой зоны существенно уменьшена (в сравнении с контролем) в 1,72 раза (р<0,05), нарушена архитектоника утолщенных эпителиальных тяжей, границы между ними сглажены. Диаметр эндокриноцитов уменьшается в 1,1 раза, а их ядер - увеличивается в 1,37 раза (р<0,05). Светлые эндокриноциты преобладают над темными, в них заметна вакуолизация цитоплазмы и появление признаков деградации, проявляющихся лизисом или кариорексисом ядра, аутолизом органелл, что согласуется с данными ряда авторов (Бузуева И.И. и др., 2010; Корочкина Е.А., 2013; Walker C.-D., Anand K.J.S., Plotsky P.M., 2011). Для участков эпителиальных тяжей с преобладанием вакуолизированных кортикоцитов, окружённых мелкопетлистой сетью гемокапилляров с морфологическими признаками нарушений гемодинамики (эритроцитарные стазы, периваскулярные отёки), характерна однотипность строения. В эндокриноцитах этой зоны максимально выражены ультраструктурные проявления стрессирующих воздействий: фрагментация мембранных комплексов органелл, деструкция митохондрий, насыщение кариоплазмы ядра гетерохроматином.

Ширина сетчатой зоны уменьшена в 1,49 раза (р<0,05), в сравнении с контролем, располагается участками, сферической или полигональной формы, окруженными мощными соединительнотканными трабекулами с микрососудами. Диаметр эпителиоцитов увеличивается в 1,17 раза (р<0,05), а их ядер - в 1,74 раза (р<0,05). Меньшая часть эндокриноцитов - тёмные, крупные, с умеренно базофильным ядром, другие - мелкие, с выраженно базофильным ядром. Среди нормальных эпителиоцитов выявляются гипертрофированные формы со слабо выраженным синтетическим аппаратом, делипидизацией цитоплазмы, трансформацией ядрышек, деструкцией органелл, что характеризует регенераторно-пластическую недостаточность эпителиоцитов при индуцированной стресс-реакции.

На границе сетчатой и мозговой зон надпочечника участками заметно разрастание соединительной ткани с расширенными микрососудами и признаками гемостазов них, что противоречит данным ряда авторов (Наумова Л.И., Родзаевская Е.Б., Полина Ю.В., 2007; Бузуева И.И. и др., 2010; Vinson G.P. et al., 2007; Sabban E.L., 2009).

Ширина мозгового вещества надпочечника (в сравнении с контролем) увеличивается в 3,03 раза (р<0,05), что связано с выраженным расширением синусоидальных микрососудов, периваскулярным отёком и утолщением стенок артерий и вен. Отмечаются признаки деструктивных изменений эпителиального компонента. Вместе с тем диаметр эпителиоцитов увеличивается в 1,13 (р<0,05), а их ядер - в 1,6 раза (р<0,05).

В этой зоне хромаффинные клетки двух типов: численно преобладающие -крупные, светлые, имеющие ядро, насыщенное эухроматином и слабо базофильную цитоплазму со множеством крупных митохондрий и хорошо развитым белоксинтезирующим аппаратом. Мелкие адреналоциты располагаются небольшими группами по периферии мозгового вещества, характеризуются выраженной базофилией ядра, малым объемом цитоплазмы и немногочисленными органеллами. Хромаффинные клетки с морфологическими признаками «истощения» имеют небольшие объемы цитоплазмы с фрагментами малочисленных разрушенных органелл и слабо базофильные ядра. В хромаффинных эндокриноцитах выражена вакуолизация цитоплазмы как морфологическое проявление аппоптоза.

Соединительнотканные трабекулы направляются от капсулы надпочечника к мозговому веществу, в их составе артериальные и венозные кровеносные сосуды с признаками ангиогенеза. Выявлены прорастающие в зону коркового вещества тяжи хромаффинных клеток, окружающие участки сетчатой и поднимающиеся до пучковой зоны. Местами заметно проникновение в мозговое вещество эпителиальных тяжей сетчатой зоны.

Парным корреляционным анализом выявлены признаки десинхроноза в цитофизиологии гормон-секретирующего комплекса и системы обеспечения надпочечников в условиях продолжительного воздействия стрессирующих факторов, проявляющегося ангиогенными дисциркуляторными нарушениями, ингибирующими ядерно-белковый синтез в эпителиоцитах мозгового вещества и сетчатой зоны коры, синхронизирующими цитоплазматические синтезы и экструзию катехоламинов и андрогенов, а также гетерохронно - в эндокриноцитах клубочковой и пучковой зон синтезы и экструзию минерало- и глюкокортикоидов (кортизола), что характеризует их как клетки с морфологическими признаками существенного «истощения» и деструкции, находящимися на пределе реализации адаптационной пластичности.

Выявлен механизм адаптивного ремоделирования (пластичности) паренхиматозно-стромального компонента коры и медулы надпочечников неполовозрелых крольчих, выразившийся дегенеративными (апоптоз), количественными (гиперплазия), качественными (гипертрофия) репаративно-пластическими изменениями, а также дисциркуляторными нарушениями и ангиогенезом, инициирующим дистопию тканевых элементов зон, нарастанием гетерогенности и делипидизации цитоплазмы кортикоцитов, фиброзированием соединительнотканной стромы особенно в сетчатой зоне. 16

Стрессогенно обусловленный регенераторный потенциал коры надпочечников проявляется гиперплазией базофильных субкапсулярных клеток и появлением двухядерных эндокриноцитов. Особенности ремоделирования коры надпочечников крольчих при развитии стресс-реакции обусловлены генетически детерминированными изменениями метаболизма.

3.4 Морфофизиология надпочечников, динамика гормонального и гематобиохимического профиля крольчих при коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол»

У крольчих второй опытной группы за 14 суток развития стресс-реакции на фоне воздействия препарата «Лигфол» масса тела повысилась на 3,4%, тогда как при стресс-реакции (первая опытная группа) она снизилась на 2,4%. Масса левого надпочечника у крольчих на фоне воздействия препарата «Лигфол» увеличилась на 1,2%, а правого надпочечника - уменьшилась на 0,4% (тогда как в стрессе она увеличилась на 4,4%). Объемы левого и правого надпочечника крольчих в состоянии стресс-реакции на фоне препарата «Лигфол» возрастают на 9,0 и 8,3%, что в 2 раза меньше, чем при стрессе.

Длина левого и правого надпочечников в стрессе возрастает на 11,1% и 4,9%, а в стрессе на фоне воздействия препарата «Лигфол» - уменьшается на 1,4 и 2,5% соответственно. Ширина левого и правого надпочечников крольчих в состоянии стресс-реакции на фоне препарата «Лигфол» возрастает на 3,2 и 2,9%, соответственно, что в среднем в 8,5 раза меньше, чем при стрессе. Высота левого надпочечника в стрессе на фоне воздействия препарата «Лигфол» возрастает на 6,7%, что в 2,5 раза меньше, чем в стрессе. Высота правого надпочечника в стрессе увеличивается на 5,13%, тогда как на фоне «Лигфола» уменьшается на 2,6%.

По результатам иммуноферментного анализа уровень кортизола в сыворотке крови крольчих понижался на 80,1% (р<0,05) относительно стресса, а в сравнении с уровнем контрольного опыта — выше на 9,0%. Концентрация прогестерона возрастала на 31,6% (в 1,3 раза) (р<0,05) относительно стресса, а сравнительно с контрольными значениями была ниже на 18,3% (р<0,05). Концентрация дегидроэпиандростерон-сульфата в сыворотке крови крольчих повышалась на 72,7% (в 1,7 раза) (р<0,05) относительно стресса, но была ниже на 5,0% контрольных значений. .

Гематологические и биохимические показатели неполовозрелых трёхмесячных крольчих на 14 сутки стресса при воздействии препарата «Лигфол» приближались к референсным значениям нормы. Исследование гематологических показателей крови крольчих показало, что при воздействии препарата «Лигфол» повышались: численности эритроцитов на 30,3% (р<0,05), лейкоцитов - на 21,7% (р<0,05), уровень гемоглобина - на 25,1% р<0,05) относительно стресса и максимально приближался к нормативным значениям. Анализ биохимических характеристик сыворотки крови показал: увеличение концентрации общего белка сыворотки крови на 14,3 (р<0,05), понижение уровня белков альбуминовой

фракции на 4,9% (р<0,05) по отношению к стрессу. Содержание сывороточного содержания глюкозы значимо понижалось на 9,62% (р<0,05), по отношению к стрессу, но было достоверно выше контрольных значений на 9,0% (р<0,05).

Уровень внутриклеточных ферментов аспартаттрансаминазы (АсАТ) был ниже на 7,04%, аланинтрансаминазы (АлАТ) - на 26,1%, показатель коэффициента Де Ритиса увеличился в 1,3 раза относительно стресса, что свидетельствует о нормализации процессов метаболизма в печени и согласуется с данными B.C. Бузламы (2005), Л.В. Карпуниной (2010); A.B. Севрюкова (2014).

Соединительнотканная капсула надпочечника кроликов второй опытной группы в зоне расположения экстраорганных артерий, сосудистого и нервного сплетений коллагенизирована, утолщена в 1,14 раза (р<0,05) относительно стресса, местами заметна гиперплазия субкапсулярных клеток, что согласуется с данными Л.Л. Ибрагимовой, Э.Р. Исмагиловой (2013). Соединительнотканные трабекулы, проникающие от капсулы в толщу коркового вещества надпочечника, утолщены, микрососуды в них расширены, без признаков гемостаза.

Клубочковая зона коркового вещества хорошо выражена, в 1,46 раза толще, чем таковая при стрессе (р<0,05). Диаметр кортикоцитов достоверно уменьшается в 1,08 раза, в то время как диаметр их ядер в 1,1 раза относительно стресса. Целостность клубочков на 80% этой зоны надпочечника сохранена. Большинство гландулоцитов - крупные, со слабо базофильной цитоплазмой, без признаков вакуолизации, насыщенной гранулами включений, в том числе гликогена, со множеством митохондрий, структурами белоксинтезирующего аппарата, и светлым ядром с преобладанием эухроматина, что в целом является морфологическими признаками синтетической активности ядра и секреторной функции цитоплазмы.

Местами ширина клубочковой зоны компенсаторно увеличена, клубочки хорошо выражены, микрососуды существенно расширены, без признаков гемостаза. На периферии таких участков выявлены малодифференцированные эпителиоциты с фигурами митоза. Встречаются гландулоциты со слабовыраженной вакуолизацией цитоплазмы, мелкие и крупные вакуоли единичны.

Субмикроскопически в стромальном компоненте выявлена пролиферация фибробластов, в ядрах которых видна кольцевидная трансформация ядрышек, коллагенизацией межклеточных участков.

По всему объему коркового вещества пучковая зона неоднородна, её ширина в 1,13 раза больше, чем при стрессе (р<0,05). Диаметры кортикоцита и ядра достоверно увеличиваются в 1,12 раза относительно стресса. На 50% ее площади структура сохранена, эпителиальные тяжи имеют характерную архитектонику, в них хорошо выражена дифференциация на светлые и преобладающие тёмные гландулоциты. В тёмных гландулоцитах отмечено разрастание секреторного аппарата и образование большого числа вакуолей, заполненных электронноплотным содержимым.

Местами пучковая зона вытесняет клубочковую и разрастается до капсулы. В этой гипертрофированной части зоны преобладают эпителиоциты с чётко 18

выраженной плазмалеммой, умеренно базофильными ядрами, с цитоплазмой, насыщенной пылевидной зернистостью. За счет существенного расширения микрососудов, редко с признаками гемостазов и периваскулярных отёков, отмечается уплотнение пучков, часть эпителиоцитов в них оказываются деформированными.

В участках, где деградация не выявляется, преобладают гландулоциты с умеренно базофильными ядрами и светлой цитоплазмой без признаков вакуолизации, но выражена деструкция части органелл, уменьшение количества липидных капель, как ультраструктурные проявления стрессирующего воздействия. На незначительной площади пучковой зоны заметны признаки «истощения» гормон-секретирующего компонента, выражающиеся фрагментацией большинства органелл, деградацией эндокриноцитов и образованием детрита. В участках, прилежащих к последним, отмечается скопление большого числа малодифференцированных мелких клеток, с ядрами, насыщенными гетерохроматином.

Ширина сетчатой зоны в среднем в 1,76 раза больше, чем при стрессе, лишь местами визуализируется её четкое обособление соединительно-тканной перегородкой от мозгового вещества. Диаметр кортикоцита достоверно уменьшается в 1,18 раза, в то время как диаметр ядра остаётся без изменений относительно стресса. Гистоархитектоника сетчатой зоны и мозгового вещества изменена таким образом, что часть эпителиальных тяжей сетчатой зоны заполняет центральную часть надпочечника, при этом тяжи хромаффинных клеток вытеснены в корковое вещество и местами доходят до его клубочковой зоны.

Воздействие препарата «Лигфол» на фоне стресс-реакции опосредовано инициирует ангиогенез, изменяющий архитектонику микрососудистого русла дистальных участков . коркового вещества и создает условия для взаимопроникновения эндокриноцитов одной зоны в другую.

В хаотически расположенных эпителиальных тяжах преобладают средних размеров тёмные клетки с цитоплазмой, насыщенной мелкодисперсными гранулами, также встречаются группы малодифференцированных мелких клеток, с выраженно базофильными ядрами, двухядерные тёмные гландулоциты. Крупные эндокриноциты со слабобазофильной цитоплазмой содержат большое число митохондрий, ядра умеренно базофильные.

Граница сетчатой зоны и мозгового вещества деформирована, местами не визуализируется, сосуды гемомикроциркуляторного русла, особенно венулы, существенно расширены, периваскулярные отёки не выявляются, редко-встречаются гемостазы.

Ширина мозговой зоны в среднем в 0,94 раза меньше, чем при стресс-реакции. Площадь её вещества в правом надпочечнике,, во всех исследованных случаях существенно больше таковой в левом, что характеризует правостороннюю асимметрию. Диаметр адреноцитов достоверно увеличивается в 1,03 раза, в то время как диаметр его ядра в 1,1 раза относительно стресса.

По периферии мозгового вещества встречаются скопления мелких темных эндокриноцитов с умеренно базофильными ядрами, насыщенными гетерохроматином, ядрышковый организатор плохо выражен, в цитоплазме преобладают гранулы с низкой электронной плотностью, отмечена активизация транспорта микропузырьков по направлению к эндотелию микрососудов.

Местами мозговое вещество представлено небольшими разрозненными группами гландулоцитов, несколько тяжей хромаффинных клеток визуализируются в сетчатой зоне, часть оттеснены в пучковую зону коры и максимально приближены к капсуле органа. На границе с сетчатой зоной заметна деструкция адреналоцитов. В других участках мозгового вещества визуализируются многочисленные группы мелких клеток с выраженно базофильными ядрами.

Парньм корреляционным анализом выявлено, что при длительном стрессировании крольчих асинхронность перфузии кортикального и медуллярного слоев надпочечника предопределяет цитофизиологию его гормон-секретирующего комплекса, ритмичный характер функционирования которого во взаимосвязи с системой обеспечения железы у крольчих на фоне воздействия препарата «Лигфол» обеспечивает более раннюю экструзию в сосудистое русло глюкокортикоидов (кортизола) эндокриноцитами пучковой зоны, затем экструзию катехоламинов эндокриноцитами мозгового вещества и только потом - экструзию минералокортикоидов и андрогенов эндокриноцитами клубочковой и сетчатой зон.

С помощью проведённого системного клинико-морфологического анализа выявлен адаптогенный эффект препарата «Лигфол» при развитии стресс-реакции, выразившийся купированием большинства стрессогенных изменений в надпочечниках крольчих, что обусловлено достаточным уровнем пластического материала, сохранением функциональных взаимосвязей между структурами тканевого гормон-секретирующего комплекса и системой обеспечения, позволяющим реализовать адаптационно-компенсаторный потенциал.

Выводы

1. Надпочечники трёхмесячных крольчих - парные, уплощённо-овальной (правая) и округлой формы (левая), бело-желтого цвета. Правая железа располагается в пределах 12-13 грудных позвонков, краниомедиально на расстоянии 10 мм от почки, а левая - в пределах 1-2 поясничных позвонков, медиально на расстоянии 5-8 мм от переднего полюса почки в почечном жировом депо, вблизи левой стенки брюшной аорты и рядом с почечной артерией.

2. Ангиоархитектоника надпочечников осуществляется артериями, в 60% случаев, отходящими от почечных, в 30-35% - от краниальной брюшной артерии и в 5-8% - от первой или второй поясничных артерий. Надпочечные артерии правой и левой желёз образуют капсулярную и кортикальную сети, их концевые ветви (прекапилляры) через внутреннюю капсулу проходят в составе трабекул в мозговую зону надпочечника, где образуют сеть капилляров и посткапиллярных 20

венул, последние, сливаясь, образуют надпочечную вену, которая открывается в краниальную брюшную вену.

3. У крольчих выражена правосторонняя асимметрия надпочечников. Гематологические, биохимические показатели, гормональный фон, а также гистофизиология паренхимы, системы обеспечения желёз обусловлены секреторной ритмикой эндокриноцитов и поочерёдной экструзией гормонов эпителиоцитами клубочковой и сетчатой зон, а затем пучковой и мозговой, что характерно для надпочечников в норме.

4. На 14-е сутки развития стресс-реакции проявляются увеличение массы и линейных показателей желёз относительно контроля, левосторонняя асимметрия органа. Закономерности ремоделирования коркового вещества и адреналовой зоны надпочечников выразились изменением ширины структурно-функциональных зон коры, процентного соотношения клубочковой, пучковой и сетчатой зон. Существенно возрастают сывороточные концентрации кортизола - в 5,5 раза (р<0,05), но достоверно снижались концентрации дегидроэпиандростерон-сульфата -в 1,8 (р<0,05), прогестерона - в 1,45 раза (р<0,05). Гематобиохимический профиль характеризуется гипохромной эритропенией, лейкоцитопенией, гипопротеинемии, гипергликемией, повышением уровней клеточных трансаминаз.

5. Адаптационная пластичность паренхиматозно-стромального компонента надпочечников при стресс-реакции проявилась: гиперплазией субкапсулярных клеток (стрессогенного регенераторного потенциала), локальным ангиогенезом, обусловливающим дистопию тканевых элементов зон, дистрофией стромы вследствие нарушений гемомикроциркуляции, дегенерацией, аппоптозом эндокриноцитов коркового и мозгового вещества.

6. При воздействии стресс-факторов асинхронность перфузии коркового и мозгового вещества надпочечников предопределяет вариативность цитофизиологии их гормон-секретирующих комплексов. Завершение секреторных циклов в мозговой и сетчатой зонах, гетерохронное их течение в эндокриноцитах клубочковой и пучковой зон, активизирует инкрецию гормонов.

7. На 14 сутки воздействия препарата «Лигфол» при развитии стресс-реакции у крольчих динамике массы и линейных показателей надпочечников присуща левосторонняя асимметрия. Морфофункциональное изменение тканей надпочечников выразилось характерным соотношением структурно-функциональных зон коры. При снижении сывороточной концентрации кортизола на 80,1% (р<0,05) повышалось содержание прогестерона на 31,6% (р<0,05), дегидроэпиандростерон-сульфата - на 72,7% (р<0,05) относительно стресса. Гематологические и биохимические показатели крольчих приближались к референсным значениям нормы. ' Адаптогенный эффект препарата «Лигфол» выражается купированием стрессогенных изменений в кортикоцитах' и мозговых эндокриноцитах надпочечников, что позволяет реализовать адаптационно-компенсаторный потенциал организма.

Практические предложения

1. Полученные данные восполняют сведения в области функциональной и клинической морфологии эндокринных желёз. Их целесообразно использовать в учебном процессе на биологических, зооветеринарных факультетах высших учебных заведений; при написании соответствующих разделов руководств, учебников, монографий по морфологии желёз внутренней секреций животных.

2. Результаты исследований могут являться базовыми для экспериментальной и функциональной морфологии органов внутренней секреции в вопросах оценки структурно-функционального состояния адреналовых желёз в норме и механизме адаптивного ремоделирования их структур в условиях воздействия экзогенных факторов.

Полученные результаты используются в учебном и научном процессах морфологических кафедр шести вузов РФ.

Результаты исследования внедрены в КФХ «Зобнин» Кваркенского района Оренбургской области (акт внедрения от 28 августа 2013 г).

Выявленные морфофункциональные изменения надпочечников кроликов при стрессе и в условиях его коррекции препаратом «Лигфол» могут быть использованы:

- на ветеринарных, биологических, биотехнологических факультетах высших учебных заведений для подготовки специалистов;

- при написании соответствующих разделов руководств, учебников, монографий по морфофизиологии адреналовых желёз кроликов и их пластичности в условиях стресса и его коррекции;

- в лабораториях, НИИ, занимающихся разработкой теории органогенеза, проблемами экспериментальной и функциональной морфологии эндокринных желез, влияния адаптогенов и стресс-корректоров на морфофизиологию надпочечников.

Предложены морфологические критерии топографии, синтопии, источников экстраорганной васкуляризации, цито- и гистологической оценки надпочечников с целью диагностики заболеваний органа.

Рекомендуются для промышленного кролиководства: «Морфологические основы динамики реактивных свойств адреналовой железы в условиях стресса и его коррекции препаратом «Лигфол», позволяющие увеличить выживаемость, адаптационные характеристики неполовозрелых крольчих, в условиях их транспортировки в летний период с нарушениями плотности посадки.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Публикации в научных журналах, рекомендуемых перечнем ВАК РФ

1 .Мухаметов, А.И. Реактивность структур надпочечниковой железы крольчих при коррекции хронического стресса препаратом «Лигфол» / Л.Л. Абрамова, А.И. Мухаметов, A.M. Юсупов // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. - 2013,-№ 4,-С. 29-33. 22

2. Мухаметов, А.И. Морфофизиология адреналовой железы при комплексном воздействии термического и иммобилизационного стрессов /JI.JI. Абрамова, А.И. Мухаметов // Известия Оренбургского государственного аграрного университета.-2013. —№ 4.-С. 212-214.

3. Мухаметов, А.И. Гистофизиология коры и мозговой зоны надпочечника кролика при стрессе и на фоне его коррекции Лигфолом / Л.Л. Абрамова, А.И. Мухаметов // Материалы Объединённого XII Конгресса МАМ и VII Съезда ВНОАГЭ (28-31 мая 2014 г.). Морфология. - Тюмень, 2014.-Т. 145.-№3.-С. 135.

4. Мухаметов, А.И. Ультраструктурная реорганизация эндокриноцитов коры и медулы надпочечников крольчих при индуцированной стресс-реакции /А.И. Мухаметов // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. -2015.-№ 4.-Вып. (53). -С. 215-218.

В других изданиях

5.Мухаметов, А.И. Особенности морфологии эндокриноцитов надпочечника и их взаимосвязи с гемомикрососудами в аспекте асимметрии / Л.Л. Абрамова, А.И. Мухаметов // Материалы международной научно-практической конференции «Наука и образование в жизни современного общества»: сб. науч. тр. - Тамбов, 2013.-С. 123-126.

6.Мухаметов, А.И. Гистофизиология и взаимосвязь структур адреналовой железы кролика / Л.Л. Абрамова, А.И. Мухаметов // Материалы третьей международной научно-практической интернет-конференции: «Актуальные проблемы современной биологии, морфологии и экологии животных». - Брянск: «Курсив», 2013.- С. 14-17.

Условные обозначения, использованные в автореферате и диссертации

АКТГ адренокортикотропный гормон гипофиза

ПРг прогестерон-0,1

ДГЭА-с дигидроэпиандростерон-сульфат гормон

КЗ кортизол

АсАТ аспартатовая трансаминаза

АлАТ аланиновая трансаминаза

ГМЦР гемомикроциркуляторное русло

Th 12-13 порядковые номера грудных позвонков

L 1-2 порядковые номера поясничных позвонков

МУХАМЕТОВ Аскар Илнукеевич

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАДПОЧЕЧНИКОВ КРОЛИКОВ В УСЛОВИЯХ СТРЕССА И ЕГО КОРРЕКЦИИ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 15.07.2015. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,0. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman. Заказ № 7850. Тираж 100 экз.

Издательский центр ОГАУ 460014, г. Оренбург, ул. Челюскинцев, 18. Тел.: (3532) 77-61-43

Отпечатано в Издательском центре ОГАУ