Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Морфофункциональные особенности яичника крольчих при влиянии препаратов селена

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные особенности яичника крольчих при влиянии препаратов селена"

На правах рукописи

ДУШКИНА Екатерина Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЯИЧНИКА КРОЛЬЧИХ ПРИ ВЛИЯНИИ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01. - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 5 т 2014

Уфа-2014

005548324

На правах рукописи

ДУШКИНА Екатерина Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЯИЧНИКА КРОЛЬЧИХ ПРИ ВЛИЯНИИ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01. - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2014

Работа выполнена на кафедре морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Абрамова Людмила Леонидовна

Официальные оппоненты: Баймишев Хамидулла Балтуханович

доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой анатомии, акушерства и хирургии ФГБОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия»

Гребенькова Наталья Васильевна

доктор биологических наук, старший преподаватель кафедры морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней, ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Ведущая организация - ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Защита состоится «06» июня 2014 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.003.02 при ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» по адресу: 450001, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул. 50-летия Октября, 34.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» и на сайте www.bsau.ru.

Автореферат разослан «¿£ » о^Ад^а^ОН г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Каримов Фоат Ахметович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Сегодня, в эпоху урбанизации и развития сырьедобывающей индустрии, проблема обеспечения населения Российской Федерации экологически чистой продукцией наиболее актуальна. Промышленное кролиководство благодаря высокому репродуктивному потенциалу кроликов дает возможность получить ценное диетическое мясо. Кроме того, они являются важным источником меховых шкурок и пуха (Костомахин Н.М., 2006; Андреев С., Игнатенко Я., 2007; Семенов И., 2008; Rommers J.M., Kemp В., Meijerhof R., 1999).

Повышение рентабельности производства возможно лишь при улучшении воспроизводительных качеств животных и полной сохранности молодняка, что требует знаний о критических фазах развития и структурно-функциональной дифференциации органов репродукции, особенно яичника (Дубравная Г.А., Абакин С .С., 2008; Carmona F., Balasch J., González-Merlo J., 1993).

Изучению морфологии яичника млекопитающих, в том числе крольчих, посвящено множество работ (Лебедев С.В., Каюмов Ф.Г., Абрамова JI.JL, 2002; Коробенко Е.Н., Малакшинова JI.M., 2004; Баймишев Х.Б., Сеитов М.С., Шевченко Б .П., 2010; Gosden R.G., Hang Y., Bodine R.J., Morris G.J., 2010 и другие). Однако данного материала недостаточно для выявления закономерностей гистофизиологии органа в периоды репродуктивного цикла.

Для поддержания деятельности систем жизнеобеспечения и органов репродукции животные должны получать достаточное количество минеральных веществ, среди которых ведущее место отводят селену (Джакупов И.Т., Кабаков В.В., 2004; Аполихин О.И., Сивков А.В., Малышев А.В., 2008; Иванова JI.В., 2008; Дубравная Г.А., 2009). Этот жизненно необходимый элемент является обязательным компонентом антиоксидантной защиты организма, участвует в обмене веществ, обладает противовирусным и антитоксическим действием (Папазян Т.Т., Голубкина Н.А., 2006; Brzeziñska-Slebodziñska Е., 2001). Большинство регионов России, в число которых входит Оренбургская область, являются селенодефицитными (Нотова С.В., 2005; Бурцева Т.И., Голубкина Н.А., Мирошников С.А., 2008).

Степень разработанности проблемы. Ранее был накоплен материал о структуре и деятельности различных органов животных на фоне введения селенсодержащих препаратов в качестве добавок к общему рациону и в виде инъекций (Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И., 2001; Шабунин C.B., Беляев В.И., Балым Ю.П., 2007; Levandeor А., 1986; Manati W. et al., 2009 и другие). Вместе с тем сведения о морфофункциональных изменениях яичника крольчих при воздействии разных форм селена в научной литературе отсутствовали, что и определило направленность нашего исследования.

Цель исследования - выявить закономерности морфофизиологии яичника крольчих породы советская шиншилла в разные периоды репродуктивного цикла в норме и при воздействии препаратов «E-селен» (неорганическая форма) и «Селенолин®» (органическая форма селена).

Для реализации цели мы поставили перед собой следующие задачи:

1. Изучить динамику массы и объема органа в норме и при влиянии неорганического и органического селена в периоды репродуктивного цикла самки (эструс полового созревания и физиологической зрелости, беременность, роды, молочное вскармливание, отъем и интактность).

2. Выявить закономерности роста и развития эпителиального и стромального компонентов яичника крольчих в норме и при воздействии разных форм селена, их взаимосвязь между собой, с динамикой концентраций половых гормонов и селена, показателями крови, при смене функциональной напряженности органа.

3. Проследить изменения генеративной функции яичников и выразить их через уравнение регрессии, оценить репродуктивную способность крольчих, качественных показателей их потомства в норме и при воздействии селенсодержащих препаратов.

Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в теоретическом обобщении комплексных морфофизиологических исследований по влиянию разных форм селена на яичник крольчих и разработке практических предложений для промышленного кролиководства.

Получены новые сведения о динамике массы и объема яичника крольчих, выявлены закономерности роста и развития коркового и мозгового вещества органа

в норме и при влиянии селенсодержащих препаратов, их взаимосвязь между собой, с динамикой концентраций половых гормонов и селена, показателями крови в разные периоды цикла репродукции самки.

Обоснованно представлены данные по влиянию разных форм селена на генеративную функцию яичников, репродуктивную способность крольчих, показатели прироста массы и сохранности их потомства.

Теоретическая и практическая значимость работы. Научные положения диссертационной работы относят к фундаментальным. Они дополняют представления о морфофизиологии яичника крольчих, что важно для развития различных направлений морфологии, акушерства и гинекологии животных, а также микроэлементологии. Материалы используются в учебном процессе и научных исследованиях ГНУ Дальневосточного ЗНИВИ Россельхозакадемии, Санкт-Петербургской, Уральской ГАВМ, Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана, Алтайского, Ставропольского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, Воронежского ГАУ им. Императора Петра 1, Омского ГАУ им. П.А.Столыпина, Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева, Белгородской, Нижегородской, Самарской, Уральской ГСХА, Бурятской ГСХА им. В.Р.Филиппова и Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина в форме выпуска карт обратной связи.

Разработана и апробирована «Технология стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», которая внедрена и успешно применяется в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 года).

Полученные результаты позволили разработать «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов» (патент на изобретение № 2445772 от 27.03.2012 г.).

Методология и методы исследования. Методологической основой эксперимента по влиянию разных форм селена на морфофизиологию яичника крольчих является комплексный подход, включающий ряд анатомических, гистологических, цитологических, морфометрических, физиологических, биохимических, химико-аналитических исследований и статистическую обработку результатов.

Положения, выносимые на защиту:

• сравнительный анализ массы и объема яичника крольчих в репродуктивном цикле в норме и при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®»;

• параметры морфометрии яичника во взаимосвязи с динамикой концентрации селена, половых гормонов, показателями крови крольчих в периоды репродуктивного цикла при воздействии разных форм селена;

• генеративная функция яичников, выраженная уравнением регрессии, улучшение репродуктивной способности крольчих как результат влияния селенсодержащих препаратов.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность представленных в диссертационной работе результатов подтверждается соответствием теоретических заключений статистическим расчетам комплекса проведенных исследований.

Доклады по основным результатам НИР обсуждались и были одобрены на Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения - 2009» (Саратов, 2009), IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009), Международной научно-практической конференции «Основные направления развития: состояние, опыт, пути дальнейшего совершенствования для реализации проекта в АПК» (Оренбург,2010), Конференции молодых ученых и специалистов Оренбургской области (Оренбург, 2010), Всероссийской научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России» (Пенза, 2010).

Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта «Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», отмеченного дипломом лауреата на областной выставке научно-технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Оренбург, 2010), дипломом лауреата Молодёжного инновационного форума Приволжского федерального округа (Ульяновск, 2010), бронзовой медалью и дипломом III степени VI Саратовского салона изобретений, инноваций и инвестиций (Саратов, 2011).

Связь исследований с научной программой. Работа выполнена в соответствии с планом-методикой диссертационных исследований и планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Публикации. Основные научные положения диссертации изложены в семи научных работах, четыре из которых опубликованы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 142 страницах компьютерного набора и включает оглавление, введение, обзор литературы, материал и методы исследования, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, заключение, рекомендации к использованию научных положений, выводы, перечень условных обозначений, библиографический список, который содержит 197 отечественных и 101 зарубежных наименований работ, и приложение к диссертации. Материалы диссертации иллюстрированы 40 рисунками и 18 таблицами.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на базе кролиководческого комплекса КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области, а также в условиях кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет» в период с 2008 по 2011 годы.

Хозяйство находится в благополучной по инфекционным и инвазионным заболеваниям зоне. Параметры микроклимата соответствуют зоотехническим нормам. Кормление животных осуществляют по нормам ВИЖа.

Для проведения научно-хозяйственного опыта были отобраны клинически здоровые крольчихи породы советская шиншилла и сформированы группы аналогов (по периодизации Rommers J.M., Kemp В., Meijerhof R., 1999).

Материал для исследований получали при убое крольчих с хозяйственной целью (имеются акты). Перед этим в одно и то же время у самок измеряли пульс, температуру, дыхание. Для определения концентрации селена и половых гормонов

(ФСГ, ЛГ, ПРг, Прл и Е-2) в сыворотке крови, а также для гематологических и биохимических исследований из краевой ушной вены брали пробы крови. Гистологический материал брали не позднее одного часа после убоя.

Объектом исследований служили яичники крольчих в возрасте от трех до девяти месяцев на разных этапах цикла репродукции: фаза эструс периодов полового созревания и физиологической зрелости, 15 суток беременности, одних и 15 суток после родов, двух и 30 суток после отъема крольчат. Материал брали от трех голов каждой группы. Всего в опыте использовано 126 самок.

Для проведения экспериментальной части опыта по влиянию селенсодержащих препаратов на морфофизиологию яичника крольчих использованы препараты «Е-селен» - воднодисперсный комплекс витамина Е и селенита натрия и «Селенолин®» - стерильный 2%-ный масляный раствор диацетофенонилселенида (ДАФС-25), разработанный в ЗАО «Биоамид» (г.Саратов). Их действие на яичник крольчих изучалось нами впервые.

В связи с отсутствием информации в наставлениях и в доступной научной литературе об оптимальных дозах препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» для кроликов нами был проведен опыт по воздействию разных доз неорганического и органического селена на испытуемых животных.

По принципу пар-аналогов с учетом возраста, живой массы и состояния здоровья сформировали семь групп половозрелых интактных крольчих в возрасте шести месяцев по три головы в каждой группе (п=21). Первая группа крольчих служила контролем, остальным (опытным) группам за десять дней до убоя однократно внутримышечно, во внутреннюю сторону бедра, вводили препараты в разных дозах для каждой группы соответственно: крольчихам второй - четвертой групп - «Е-селен» в дозах 0,04, 0,06 и 0,08мл/кг, и крольчихам пятой - седьмой групп - препарат «Селенолин®» в дозах 0,008, 0,018 и 0,028мл/кг массы тела животного.

Для выявления степени воздействия разных доз препаратов брали гистопробы органов: яичников, молочных желез, сердца, печени и почек животных. Результаты наших исследований показали, что препараты «Е-селен» и «Селенолин®»

целесообразно использовать соответственно в дозах 0,04 и 0,008 мл/кг массы тела животного.

Далее эксперимент проводился поэтапно.

На первом этапе с целью изучения влияния разных форм селена на морфогенез яичника и процесс полового созревания самок сформировали шесть групп крольчих в возрасте трех (1-3 группы) и шести месяцев (4-6 группы) по три головы в каждой группе (п=18). Первая и четвертая группы служили контролем, крольчихам второй и пятой групп применяли препарат «Е-селен», самкам третьей и шестой групп - препарат «Селенолин®».

На втором этапе с целью изучения воздействия неорганического и органического селена на структурно-функциональные особенности яичника и репродуктивные качества крольчих сформировали три группы крольчих-аналогов в возрасте шести месяцев по 15 голов в каждой группе (п=45). Первая группа служила контролем, второй и третьей опытным группам крольчих в начале течки (фаза эструс полового цикла) вводились препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в отработанных дозах. Препараты вводили однократно. Случку производили в раннее утро через 6-7 дней в соответствии с графиком эксперимента. Готовность к случке определяли по поведению самок (Плотников В.Г., 2001) и состоянию наружных половых органов (Нигматуллин P.M., 2007).

Чтобы избежать прохолоста, через неделю проводили контрольную подсадку к самцу, а на 12, 15 дни после случки крольчих, поместив на ровной поверхности головой к себе, держа правой рукой за холку, левой осторожно пальпировали живот по ходу рогов матки. Если эмбрионы прощупывались, самку считали сукрольной, если нет - случали повторно (Тинаев Н.И., 2007).

На данном этапе эксперимента изучали морфофизиологические особенности яичника крольчих в период беременности (п=9) и родов (п=9). После окрола животных рассчитывали среднее количество крольчат, полученных на одну самку, и оценивали их сохранность до достижения ими трехмесячного возраста (90 дней).

Изучение влияния селенсодержащих препаратов на гистофизиологию яичника крольчих в период вскармливания (п=9), отъема крольчат от самки (п=9) и

интактности (п=9) проходило на третьем этапе эксперимента. Для уточнения полученных результатов был произведен повтор опыта.

Экспериментальная часть представляет собой комплексное исследование.

Анатомические исследования включали в себя определение массы тела крольчих и крольчат, объема, абсолютной и относительной массы яичника.

Материалом гистологического и цитологического исследования служили яичники крольчих в разных функциональных состояниях: эструс полового созревания и физиологической зрелости, беременность, роды, молочное вскармливание, отъем, интактность. Полученные пробы делили на две части.

Гистологические пробы (первую часть материала) фиксировали в 10%-ном водном нейтральном формалине, после общепринятой гистологической обработки заливали в целлоидин-парафин и изготавливали срезы толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином по Майеру и эозином, углеводсодержащие биополимеры выявляли по Хочкису. Световую микроскопию производили с использованием микроскопа Micros MSD 500 (Австрия), оснащенного цифровой фотокамерой.

Для цитологических исследований материал (вторую часть) фиксировали в охлажденном 2,5%-ном растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН=7,4). После стандартной подготовки и обезвоживания материал заключали в смесь эпон - аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) приготавливали срезы толщиной 0,7-1,0 мкм. Полученные срезы окрашивали 1%-ным раствором толуидинового синего, который приготавливали на 2,5%-ной безводной соде (Гольдин Л.С., 1963). Электронную микроскопию осуществляли на электронном микроскопе JEM - 7А (Япония).

Морфометрическая обработка цифровых фотографий гистоструктур яичника для получения количественной информации о параметрах эпителиального и стромального компонентов исследуемого органа проводилась при помощи винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ 15150-69) и лицензионной программы «Test-morfo-4». Измерение каждого показателя в отдельно взятом препарате яичника проводили в 16 и более полях зрения каждого объекта.

Физиологические исследования включали в себя анализ гематологических, биохимических показателей и содержания половых гормонов (ФСГ, ЛГ, ПРг, Прл и Е-2) в крови крольчих.

Химико-аналитическое исследование количественного содержания селена в сыворотке крови производили на спектрофлуориметре SOLAR СМ-2203 усовершенствованным флуориметрическим методом (Anipko V.V., Maryakhina V.S., Abramova L.L., 2011). Сыворотку крови получали на центрифуге EU Imtex СМ-50 путем отделения клеточных элементов крови при 8000 об/мин в течение 10 минут.

При статистической обработке цифрового материала руководствовались указаниями, изложенными М.К.. Базаровым и П.И. Огородниковым (2008). Взаимовлияние и зависимость морфометрических показателей гистоструктур яичника выражали с помощью коэффициентов парной корреляции, построение регрессионных уравнений (Автандилов Г.Г., 1990, 2002; Гланц С., 1999).

Гистологические, морфометрические исследования, статистическую обработку и анализ данных осуществляли в условиях кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский ГАУ». Электронную микроскопию ультратонких срезов проводили на базе лаборатории электронной микроскопии ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Росздрава» (г. Уфа). Совместно с В.В. Анипко проводили определение концентрации селена в сыворотке крови на базе института Микро - и нанотехнологий ОГУ, определяли концентрацию половых гормонов в сыворотке крови крольчих в проблемной лаборатории по изучению механизмов естественного иммунитета Оренбургской ГМА, производили исследования биохимии и морфологии крови в гематологической лаборатории ВНИИМС РАСХН.

Терминология анатомических, гистологических и цитологических структур соответствуют Международной (Парижской) номенклатуре (N.A.V., N.H., N.E.V., 1994), которая была уточнена на международных конгрессах. Русские эквиваленты названий приведены по 4-й редакции Международной ветеринарной анатомической номенклатуры (Зеленевский Н.В., 2003).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Морфологические особенности яичника крольчих в норме и при влиянии препаратов селена

На фоне недостатка селена в разные периоды репродуктивного цикла у крольчих контрольной группы сдерживается увеличение массы и объема (рис.1) яичника.

0,6 .............................................................................................. $50

А 1 2 3 4 5 6 7 е ' 12 3 15 6 7

Рисунок 1. Динамика массы (А, г) и объема (Б, мм3) яичника крольчих контрольной (черный) первой (белый) и второй (серый) опытных групп в разные периоды репродуктивного цикла: 1 - три месяца, 2 - шесть месяцев, 3 - беременность, 4 -роды, 5 - молочное вскармливание, 6 - отъем, 7 - интактность

При действии неорганической формы селена в комплексе с витамином Е масса и объем яичника крольчих в разные периоды репродуктивного цикла, в среднем, выше на 2,35 и 5,12%, а органической формы - на 6,28 и 10,14% соответственно.

Аналогичная закономерность выявлена Г.А. Дубравной, С.С. Абакиным (2008) в опытах на ремонтных свинках крупной белой породы и Л.В. Ивановой (2008) на норках.

3.2 Гистофизиология яичников крольчих в фазу эструс периода полового созревания и физиологической зрелости

В три месяца (фаза эструс периода полового созревания) яичник крольчих имеет общее для всех млекопитающих (кроме лошадей) гистологическое строение (рис. 2).

Основную массу фолликулов яичника трехмесячных крольчих составляют первичные (Ф-1) и вторичные (Ф-П), в органе самок опытных групп единично

12

встречаются третичные фолликулы (Ф-111). Часть из них деградирует, образуя первичную интерстициальную железу (ИЖ) и атретические тела, которые в яичниках крольчих опытных групп, в сравнении с контрольной группой, обнаруживаются реже.

У крольчих контрольной группы при недостаточности селена в сыворотке крови и отрицательной взаимосвязи уровня селена и ФСГ с диаметром посткапилляра теки Ф-П отмечается их массовая атрезия.

Рисунок 2. Гистоструктура яичника крольчих контрольной (А), первой (Б) и второй (В) опытных групп в возрасте трех месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.Ю.Ок. 15. 1 - покровный эпителий; 2 - белочная оболочка; 3 - ПФ; 4 - Ф-1; 5 - Ф-П; 6 - Ф-Ш; 7 - атрезия фолликула; 8 - клетки ИЖ

У самок первой опытной группы на фоне повышения концентрация селена в сыворотке крови регистрируется увеличение уровня Е-2 и его положительная корреляция с диаметром ядра овоцита ПФ и Ф-I, что способствует увеличению, в сравнении с контрольной группой, объема ПФ и Ф-П на 6,4 и 4,1% соответственно.

Во второй опытной группе оптимизация селенового статуса органической его формой и механизм действия половых гормонов способствуют увеличению объема ПФ, Ф-I и Ф-П относительно контроля на 13,2, 3,8 и 4,8% соответственно. Однако снижение концентрации ФСГ приводит к атрезии некоторых Ф-П, а повышение уровня Е-2 и ЛГ способствует увеличению объема Ф-Ш и их смещению в поверхностную зону коркового вещества. Полученные данные согласуются с мнением Т.М. Чекаловой, (2003), В.А. Середина (2007), R. Duggavathi et al. (2005), R. Muelas et al. (2008) в том, что такое сочетание гормонов создает условия для активного роста фолликулов.

В шесть месяцев (фазу эструс периода физиологической зрелости) в органе самок контрольной группы визуализируются Ф-П на этапе трансформации в Ф-Ш.

13

Однако при отрицательной взаимосвязи уровня Е-2 с объемом овоцита Ф-1 отмечается деградация большинства из них, что приводит к образованию атретических тел и ИЖ.

В первой опытной группе за счет введения неорганической формы селена инициируется активная дифференцировка фолликулярного эпителия Ф-Ш и увеличение его объема относительно контроля в 1,43 раза. Эпителиоциты ИЖ крупнее контроля, более обособлены друг от друга, тесно контактируют с сосудами ГМЦР, что, по мнению E.H. Коробенко и Л.М.Малакшиновой (2004), указывает на их эндокринную функцию. У крольчих второй опытной группы регистрируется увеличение численности Ф-П, часть из которых деградирует, образуя ИЖ. Ф-Ш преобразуется в ГП.

При электронно-микроскопическом исследовании выявили, что в шесть месяцев в яичнике крольчих контрольной группы большая часть Ф-И преобразуется в атретические тела в связи с деградацией овоцита. В исследуемом органе самок опытных групп визуализируются Ф-Ш с четко оформленной соединительнотканной текой, в цитоплазме фибробластов которой содержится зернистая цитоплазматическая сеть, встречаются секреторные включения. В их ядрах преобладает эухроматин, гетерохроматин виден отдельными глыбками, что указывает на повышенную секреторную активность.

3.3 Морфофункциональные изменения яичника крольчих в период беременности, родов и молочного вскармливания

В период беременности в яичнике крольчих контрольной группы 1 регистрируется 10,7±0,88 ЖТ. Ядра лютеиноцитов слабобазофильные, что свидетельствует о протекающем ядерном синтезе, однако границы железы размыты, клетки мелкие. Высокая положительная взаимосвязь ФСГ и ЛГ стимулирует рост фолликулов, представленных в основном Ф-1 и, реже, Ф-11. Объем клеток ИЖ по сравнению с предыдущим периодом увеличивается в 9,16 раза.

На фоне воздействия неорганической формы селена в яичнике визуализируется П,6±0,81 ЖТ, органической - 12,7±79 ЖТ, лютеиноциты более крупные (табл.1), ядра четко оформленные. Объем клеток ИЖ меньше контроля в

1,07 и 1,44 раза, однако по сравнению с предыдущим периодом этот параметр выше в 7,88 и 5,32 раза соответственно.

Таблица 1 - Объемы лютеиноцитов ЖТ, клеток ИЖ и их ядер в яичнике беременных крольчих, мкм3

ника^атели Контрольная Первая опытная Вторая опытная

1 Объем лютеиноцита ЖТ 7645,02±2034,58 9208,88±1853,53 11450,37±2427,78

Объем ядра лютеиноцита ЖТ 1324,14±135,6 1671,28±96,99* 1277,25±161,87*

Объем клетки ИЖ 5191,37±812,74 4818,84±913,86 3600,16±629,13*

Объем ядра клетки ИЖ 1139,21±93,88 1150,29±89,35* 1213,32±67,11**

Примечание: *- Р<0,05; **- Р<0,01

Несмотря на повышение уровня Прл в крови, что, по словам R. Muelas et al. (2008), должно сдерживать фолликулогенез, на фоне влияния препаратов регистрируется отрицательная взаимосвязь концентраций Прл и ФСГ и большое количество положительных корреляций половых гормонов с параметрами яичника, что закономерно инициирует трансформацию Ф-Н в Ф-111.

В роды у крольчих с селеновой недостаточностью большинство Ф-Н деградирует. Объем эндокриноцитов ИЖ по сравнению с периодом беременности уменьшается на 34,4%.

У самок первой и второй опытных групп благоприятный селеновый фон и специфическая сочетанность показателей гормонов способствуют созреванию Ф-Ш, а при действии органического селена, кроме того, образованию ГП и увеличению объема соответствующего ему овоцита. Клетки ИЖ уменьшаются в объеме на 43,3 и 23,6% соответственно.

i

В период молочного вскармливания у крольчих контрольной группы отмечается множественная деградация Ф-Н, регистрируются единичные Ф-111 и ГП.

У крольчих первой опытной группы концентрация селена выше, чем в контрольной группе, на 57,7% (рис. 3). На этом фоне визуализируются фолликулы разных этапов развития, в том числе Ф-Ш и ГП с четко оформленным зернистым слоем овоцита, наружным и внутренним соединительнотканными слоями теки, пронизанными капиллярами ГМЦР.

Я" X о

—*-Вторая опытная -•-Первая опытная —♦—Контрольная

1 2 3 4 5 6 7 Рисунок 3. Динамика концентрации селена в крови крольчих в разные периоды цикла репродукции: I - три месяца, 2 - шесть месяцев, 3 - беременность, 4 - роды, 5- молочное вскармливание, 6 - отъем, 7 - интактность

У крольчих второй опытной группы при оптимальном содержании микроэлемента в сыворотке крови, уровень которого выше, чем в контрольной группе на 66,7%, отмечается увеличение объема Ф-Ш на 23,78% и образование ГП. Капилляры теки последних сужены, вблизи сосудов ГМЦР визуализируются тучные клетки, что, по представлению О.В. Волковой (1980), Р.Г. Калякиной (2007), характеризует механизм местной регуляции процесса овуляции.

3.4 Особенности гистофнзиологии яичника крольчих в период отъема и интактности

В период отъема у крольчих с фоном селеновой недостаточности отмечается трансформация и пролиферации эпителия растущих фолликулов, способствующая повышению выработки Е-2. ГП визуализируются лишь единично. Деградация ЖТ так же, как и в органе крольчих опытных групп, завершается. На плазмолемме клеток белых тел и на стенке артериол и прекапилляров обнаруживается множество пуговчатых и булавовидных терминалий. Степень атрезии Ф-1 значительно возрастает, часть из которых преобразуется в ИЖ.

При воздействии препарата «Е-селен» объем растущих фолликулов, в том числе Ф-Ш и ГП, возрастает на 32,07 и 4,58% соответственно. Явления атрезии встречаются реже. Регистрируется отрицательная взаимосвязь диаметра посткапилляра теки ГП и его объема, что способствует сдерживанию овуляции до момента случки.

На фоне влияния «Селенолина®» в яичниках испытуемых самок отмечали множество фолликулов всех типов с хорошо дифференцированными клетками эпителия. Атретические фолликулы регистрируются реже, а объем Ф- III и ГП больше, чем в контроле, на 43,98 и 1,39%. Сдерживание овуляции характеризует отрицательная корреляция концентрации в крови ЛГ и объема ядра овоцита ГП.

Полученные данные подтверждают результаты исследований К.С. Кулько (2004), Ю.А. Калугина (2007), P.M. Нигматуллина (2007) по способности крольчих совмещать сукрольность с лактацией и выводы А. Bachelot et al. (2009) о влиянии Прл на процессы фолликулогенеза.

В период интактности у крольчих контрольной группы при пониженном содержании селена в сыворотке крови в сравнении с периодом отъема регистрируется положительная взаимосвязь концентрации Е-2 с диаметром посткапилляра теки ГП, что характеризует готовность фолликула к овуляции. Отмечается деградация некоторых Ф-Н, реже Ф-Ш, часть из которых преобразуется в ИЖ, остальные замещаются рубцовой соединительной тканью.

В сыворотке крови крольчих первой опытной группы относительно предыдущего периода репродуктивного цикла отмечается понижение концентрации селена, однако в сравнении с контрольной группой данный параметр выше более чем в 1,5 раза. Усиливается васкуляризация соединительнотканных оболочек Ф-Ш (наружной и внутренней тек). Объем Ф-I, Ф-Н,Ф-Ш и ГП увеличивается по сравнению с контролем на 18,6; 15,4; 29,8 и 11,7% соответственно (табл. 2). Некоторые Ф-I и Ф-П подвергаются атрезии или частично преобразуются в клетки ИЖ, что в отношении Ф-Ш мы не наблюдали.

Таблица 2 - Объемы фолликулов яичника крольчих в период интактности, мкм3

ПОКАЗАТЕЛИ ГРУППА

Контрольная Первая опытная Вторая опытная

Объем ПФ*10' 63,79±5,72 61,59±9,27 70,75±9,03

Объем Ф-1*10' 390,58±42,32 480,04±3 6,82 571,31±15,91**

Объем Ф-Н*10' 994,31 ±26,72 1174,81±45,17** 1753,09±121,04*

Объем Ф-Ш*10' 4273,09±154,15 6083,76±239,41 6967,21±280,12*

| Объем ГП*104 9738,25±667,37 9976,53±157,31 11033,63±450,2**

Примечание: *- Р<0,05; **- Р<0,01

Во второй опытной группе на фоне влияния органического селена его уровень в крови, в отличие от первой опытной группы, не изменяется относительно предыдущего периода и выше контроля в 1,7 раза. При этом в органе самок испытуемой группы в этот период визуализируются ПФ, Ф-1, Ф-П,Ф-1П и ГП, объем которых выше контроля на 9,8; 31,6; 43,3; 38,7 и 2,39% соответственно. ГП окружены хорошо оформленной соединительнотканной текой с гемокапиллярами и терминалями нервных волокон. При инактивации фолликулярного эпителия нескольких Ф-1 и Ф-И в процессе атрезии образуется ИЖ.

3.5 Влияние препаратов селена на генеративную функцию яичников, репродуктивную способность крольчих и качественные показатели их потомства

Особенности генеративной функции яичника крольчих в норме и при влиянии препаратов селена оценивали по количеству овулировавших фолликулов и выражали с помощью уравнения регрессии. Полученное уравнение у=х+9,666 (Я2=0,996) показывает, что повышение концентрации селена в пределах нормы благоприятно сказывается на созревании фолликулов и овуляции, а значит, способствует улучшению генеративной функции яичника.

Результаты оценки влияния препаратов селена на репродуктивные качества крольчих показывают, что их введение значительно повышает потенциал воспроизводства крольчих, увеличивая рождаемость первой опытной группы самок на 15,38%, а второй - на 21,37% относительно контрольной.

Применение препаратов селена также влияет на сохранность потомства: во второй опытной группе за весь период исследований она составляет 95%, что на 2% больше, чем в первой опытной группе и на 13% больше, чем в контрольной группе. Кроме того, качественные показатели (масса) крольчат исследуемых групп животных повышаются на 6,39 и 8,68% соответственно.

Анализируя полученные данные, можно отметить тенденцию к улучшению генеративной функции яичника крольчих, увеличению жизнеспособности потомства, повышению качественных показателей крольчат за счет парентерального введения препаратов селена, особенно его органической формы.

выводы

1. Недостаток селена в крови крольчихи в разные периоды репродуктивного цикла сдерживает рост и развитие яичника. Масса и объем органа при воздействии неорганической формы селена достоверно выше в 1,02 и 1,05 раза, а органической -в 1,06 и 1,1 раза соответственно.

2. В эструсе полового созревания недостаточная концентрация селена в крови крольчих приводит к асинхронности выработки ЛГ и ФСГ, что инициирует образование первичной ИЖ и массовую атрезию Ф-Н. При воздействии разных форм селена концентрации Е-2 и ЛГ повышаются, способствуя закладке дефинитивной ИЖ, единичной атрезии Ф-П и увеличению численности Ф-Ш, что свидетельствует о более раннем морфофункциональном созревании овариальной железы и половой зрелости самки.

3. В эструсе физиологической зрелости при недостатке селена характерное сочетание концентраций ФСГ и ЛГ инициирует трансформацию Ф-Н в Ф-Ш, нарастание численности клеток ИЖ. На фоне влияния препаратов селена объем Ф-Ш увеличивается, регистрируется несколько ГП, что характеризует подготовку органа к гиперовуляции, более выраженную при действии его органической формы. Сдерживание овуляции до момента спаривания самки происходит за счет низкой концентрации ФСГ и ЛГ. Объем клеток ИЖ (относительно контроля) увеличивается достоверно на 20,39 и 28,06% соответственно.

4. В беременность на фоне селеновой недостаточности в яичнике крольчих регистрируется разрастание ИЖ при увеличении объема ее клеток, образуется большое количество ЖТ, что определяет значимое снижение уровня концентраций ФСГ в 1,08 раза и ЛГ в 1,6 раза (относительно шести месяцев), ингибирование фолликулогенеза на этапе Ф-1 и Ф-П. Влияние неорганической формы селена и витамина Е способствует существенному увеличению концентрации ФСГ в 1,1 Зраза (относительно контроля), что активизирует переход Ф-И в Ф-Ш, а воздействие органического селена повышает уровни ФСГ, Л Г в 1,07 и 1,18 раза соответственно, улучшает трофику и наращивает объем Ф-Ш. При этом клетки ИЖ незначительно

увеличиваются в объеме, количество ЖТ достоверно выше - соответственно на 7,8 и 15,7%, уровень ПРг сдерживает фолликулогенез на этапе Ф-Ш.

5. В период родов при недостатке в крови содержания селена, ЛГ и Е-2 в яичнике крольчихи отмечаются первые признаки деградации ЖТ, активная васкуляризация в области теки Ф-Ш, значительное уменьшение объема клеток ИЖ. Воздействие неорганической формы селена и специфическое соотношение гормонов ЛГ и Е-2 инициируют массовую деградацию ЖТ, увеличение объема Ф-Ш, снижение объема клеток ИЖ, а влияние органического селена и характерное соотношение ФСГ и ЛГ способствуют развитию ГП.

6. В период молочного вскармливания в яичнике самок всех трех групп завершается деградация ЖТ. Недостаточность селена приводит к снижению концентрации ФСГ, но повышению Прл в крови, что способствует атрезии большинства Ф-И и единичной трансформации Ф-Ш в ГП. При воздействии препаратов селена специфическая сочетанность ФСГ и ЛГ сокращает степень атрезии растущих фолликулов и увеличивает численность и объем ГП. Существенное сужение диаметра капилляров теки ГП на 7,5% (относительно контроля) отражает механизм сдерживания овуляции до момента случки.

7. В период отъема при недостатке селена и низком содержании ФСГ и ЛГ регистрируются единичные ГП, высокая степень атрезии Ф-1 и отдельных Ф-Ш. Применение селенсодержащих препаратов способствует возрастанию уровня концентраций ФСГ и ЛГ, увеличению численности ГП и повышению вероятности овуляции, механизм сдерживания которой при действии органического селена обеспечивается специфической взаимосвязью уровня концентрации ЛГ и объема ГП.

8. В период интактности на фоне недостатка селена отмечается атрезия множества Ф-1, Ф-Н и некоторых Ф-Ш. Повышение концентрации ФСГ и Е-2 инициирует цитодифференцировку фолликулярного эпителия Ф-Ш и образование ГП. Действие неорганической и органической форм микронутриента и высокая взаимосвязь параметров яичника с концентрациями ФСГ и Е-2 снижают степень атрезии Ф-1 и Ф-П, способствуют значимому возрастанию численности Ф-Ш и объема ГП, что обусловливает высокую вероятность овуляции при случке.

Оптимизация селенового статуса самки значительно повышает ядерную синтетическую активность и пролиферацию фолликулярного эпителия Ф-Ш и ИЖ.

9. Влияние препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» при парентеральном введении крольчихам создает пролонгированный эффект стимуляции генеративной функции яичника и выражается уравнением регрессии у=х+9,666 (Я2=0,996), а также позволяет существенно увеличить количество крольчат в помете - на 15,38 и 21,37%, снизить отход молодняка в 2,3 и 3,5 раза, повысить массу крольчат в 1,07 и 1,1 раза соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные могут быть использованы на биологических, ветеринарных и биотехнологических факультетах высших учебных заведений для подготовки специалистов, в лабораториях, НИИ, при написании руководств, учебников, монографий.

Рекомендуем в промышленное кролиководство:

• специалистам кролиководческих комплексов парентеральное введение селенсодержащих препаратов крольчихам с целью улучшения их адаптивных свойств, ускорения морфофизиологического созревания, стимуляции генеративной функции яичника, повышения репродуктивной способности первокролок по схеме:

• крольчихам в возрасте трех месяцев, а также половозрелым крольчихам за 6-7 дней до случки (в первые сутки течки) однократно внутримышечно во внутреннюю сторону бедра вводить препараты «Е-селен» и (или) «Селенолин®».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в научных журналах, рекомендуемых перечнем ВАК РФ

1. Удовик, Е.А. Гистоструктура яичника крольчих в первые сутки лактации в норме и при использовании селенсодержащих препаратов / Е.А. Удовик, Р.Г. Калякина, Л.Л. Абрамова// Известия ОГАУ. - 2009. - №4 (24). - С. 171-172.

2. Душкина, Е.А. Гистофизиология яичника, молочной железы и других паренхиматозных органов крольчих на фоне влияния разных доз селенсодержащих

21

препаратов / Е.А. Душкина, В.В. Анипко, Л.Л.Абрамова // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2009. - № 10. - С. 559-560.

3. Душкина, Е.А. Гистофизиология яичника крольчих в первую половину беременности в норме и при использовании селенсодержащих препаратов / Е.А.Душкина // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2010. -№4.-С. 41-42.

4. Душкина, Е.А. Динамика гистоструктур яичника крольчих на фоне однократного парентерального введения препаратов селена /Е.А. Душкина// Известия ОГАУ. - 2011. - №4 (32). - С. 128-129.

В других изданиях:

1. Душкина, Е.А. Особенности яичника крольчих в первые сутки лактации / Е.А. Душкина, Р.Г. Калякина // Вавиловские чтения - 2009: материалы международной научно - практической конференции, 25-26 ноября 2009 г.Часть З.Саратов, 2009. - С. 54-55.

2. Анипко, В.В. Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов / В.В. Анипко, Е.А. Душкина // Молодежный инновационный форум Приволжского федерального округа: сб. аннотаций проектов, 12-14 мая 2010 г. -Ульяновск: УлГТУ, 2010. - С. 338-339.

3. Душкина, Е.А. Влияние парентерального введения селенсодержащих препаратов на гистофизиологию яичника крольчих породы советская шиншилла в разные периоды репродуктивного цикла / Е.А. Душкина // Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России: сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции. - Пенза: РИО ПГСХА, 2010. - С.219-220.

Патент на изобретение № 2445772 от 27.03.2012 г. Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов / Душкина Е.А., Анипко В.В., Абрамова Л.Л., Маряхина B.C.

Перечень условных обозначений

|ПФ примордиальный фолликул

ф-1 первичный фолликул

Ф-И вторичный фолликул

Ф-Ш третичный фолликул

гп граафов пузырек

иж интерстициапьная железа

жт желтое тело

ГМЦР гемомикроциркуляторное русло

ФСГ фолликулостимулирующий гормон

лг лютеинизирующий гормон

Е-2 эстрадиол

ПРг прогестерон

Прл пролактин

ДУШКИНА Екатерина Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЯИЧНИКА КРОЛЬЧИХ ПРИ ВЛИЯНИИ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01. - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 03.04.2014. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,5. Печать офсетная. Бумага офсетная. Заказ № 307. Тираж 100 экз.

Автономная некоммерческая организация «Бузулукский центр содействия СМИ». 461040, Оренбургская область, г. Бузулук, ул. О. Яроша, 65. Тел./факс: (35342) 2-47-69,2-49-24.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Душкина, Екатерина Анатольевна, Уфа

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО «ОРЕНБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

04201458900 На правах рукописи

ДУШКИНА Екатерина Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЯИЧНИКА КРОЛЬЧИХ ПРИ ВЛИЯНИИ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА

06.02.01. - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Л.Л. Абрамова

Уфа-2014

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9 1Л. Биологические особенности репродукции крольчих 9

1.2. Яичник млекопитающих в периоды репродуктивного цикла 11

1.3. Морфофункциональные особенности фолликулов яичника на разных стадиях развития 14

1.4. Гормональная регуляция половой функции самок 19

1.5. Роль селена в функционировании систем жизнеобеспечения и органов репродукции животных 23

1.6. Заключение 26

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 28

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 35

3.1. Гистологические изменения паренхиматозных органов крольчих при воздействии разных доз препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» 35

3.2. Морфологические особенности яичника крольчих в норме и при влиянии препаратов селена 39

3.3. Гистофизиология яичников крольчих в фазу эструс периода полового созревания и физиологической зрелости 50

3.3.1. Яичник крольчих в фазу эструс периода полового созревания 50

3.2.2. Гистофизиология яичников крольчих в фазу эструс периода физиологической зрелости 56

3.4. Морфофункциональные изменения яичника крольчих в период беременности и родов 63

3.4.1. Особенности яичника крольчих в период беременности 63

3.4.2. Гистофизиология яичника крольчих в роды 69

3.5. Особенности гистофизиологии яичника крольчих в период молочного вскармливания и отъема 75 3.5.1. Яичник крольчих в период молочного вскармливания 75

3.5.2. Гистофизиология яичника крольчих в период отъема 80

3.6. Морфофизиологические изменеия яичника крольчих в период интактности 87

3.7. Влияние препаратов селена на генеративную функцию яичников, репродуктивную способность крольчих и качественные показатели их потомства 93

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 96

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 106

6. РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ПОЛОЖЕНИЙ 107 ВЫВОДЫ 108 Перечень условных обозначений, использованных в тексте 111 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 112 ПРИЛОЖЕНИЕ 143

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Сегодня, в эпоху урбанизации и развития сырьедобывающей индустрии, проблема обеспечения населения Российской Федерации экологически чистой продукцией наиболее актуальна. Промышленное кролиководство благодаря высокому репродуктивному потенциалу кроликов дает возможность получить ценное диетическое мясо. Кроме того, они являются важным источником меховых шкурок и пуха [13,100, 149, 283].

Повышение рентабельности производства возможно лишь при улучшении воспроизводительных качеств животных и полной сохранности молодняка, что требует знаний о критических фазах развития и структурно-функциональной дифференциации органов репродукции, особенно яичника [68,207].

Изучению морфологии яичника млекопитающих, в том числе крольчих, посвящено множество работ [21, 98, 106, 228 и другие]. Однако данного материала недостаточно для выявления закономерностей гистофизиологии органа в периоды репродуктивного цикла.

Для поддержания деятельности систем жизнеобеспечения и органов репродукции животные должны получать достаточное количество минеральных веществ, среди которых ведущее место отводят селену [17, 64, 70, 85]. Этот жизненно необходимый элемент является обязательным компонентом антиоксидантной защиты организма, участвует в обмене веществ, обладает противовирусным и антитоксическим действием [128, 205]. Большинство регионов России, в число которых входит Оренбургская область, являются селенодефицитными [35, 122].

Степень разработанности проблемы. Ранее был накоплен материал о структуре и деятельности различных органов животных на фоне введения селенсодержащих препаратов в качестве добавок к общему рациону и в виде инъекций [140, 183, 253, 259 и другие]. Вместе с тем сведения о

морфофункциональных изменениях яичника крольчих при воздействии разных форм селена в научной литературе отсутствовали, что и определило направленность нашего исследования.

Цель исследования - выявить закономерности морфофизиологии яичника крольчих породы советская шиншилла в периоды репродуктивного цикла в норме и при воздействии препаратов «Е-селен» (неорганическая форма) и «Селенолин®» (органическая форма селена).

Для реализации цели мы поставили перед собой следующие задачи:

1. Изучить динамику массы и объема органа в норме и при влиянии неорганического и органического селена в периоды репродуктивного цикла самки (эструс полового созревания и физиологической зрелости, беременность, роды, молочное вскармливание, отъем и интактность).

2. Выявить закономерности роста и развития эпителиального и стромального компонентов яичника крольчих в норме и при воздействии разных форм селена, их взаимосвязь между собой, с динамикой концентраций половых гормонов и селена, показателями крови, при смене функциональной напряженности органа.

3. Проследить изменения генеративной функции яичников и выразить их через уравнение регрессии, оценить репродуктивную способность крольчих, качественных показателей их потомства в норме и при воздействии селенсодержащих препаратов.

Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в теоретическом обобщении комплексных морфофизиологических исследований по влиянию разных форм селена на яичник крольчих и разработке практических предложений для промышленного кролиководства.

Получены новые сведения о динамике массы и объема яичника крольчих, выявлены закономерности роста и развития коркового и мозгового вещества органа в норме и при влиянии селенсодержащих препаратов, их взаимосвязь между собой, с динамикой концентраций половых гормонов и селена, показателями крови в разные периоды цикла репродукции самки.

Обоснованно представлены данные по влиянию разных форм селена на генеративную функцию яичников, репродуктивную способность крольчих, показатели прироста массы и сохранности их потомства.

Теоретическая и практическая значимость работы. Научные положения диссертационной работы относят к фундаментальным. Они дополняют представления о морфофизиологии яичника крольчих, что важно для развития различных направлений морфологии, акушерства и гинекологии животных, а также микроэлементологии. Материалы используются в учебном процессе и научных исследованиях ГНУ Дальневосточного ЗНИВИ Россельхозакадемии, Санкт-Петербургской, Уральской ГАВМ, Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана, Алтайского, Ставропольского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, Воронежского ГАУ им. Императора Петра I, Омского ГАУ им. П.А.Столыпина, Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева, Белгородской, Нижегородской, Самарской, Уральской ГСХА, Бурятской ГСХА им. В.Р.Филиппова и Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина в форме выпуска карт обратной связи.

Разработана и апробирована «Технология стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», которая внедрена и успешно применяется в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 года).

Полученные результаты позволили разработать «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов» (патент на изобретение № 2445772 от 27.03.2012 г.).

Методология и методы исследования. Методологической основой эксперимента по влиянию разных форм селена на морфофизиологию яичника крольчих является комплексный подход, включающий ряд анатомических, гистологических, цитологических, морфометрических, физиологических,

биохимических, химико-аналитических исследований и статистическую обработку результатов.

Положения, выносимые на защиту:

• сравнительный анализ массы и объема яичника крольчих в репродуктивном цикле в норме и при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®»;

• параметры морфометрии яичника во взаимосвязи с динамикой концентрации селена, половых гормонов, показателями крови крольчих в периоды репродуктивного цикла при воздействии разных форм селена;

• генеративная функция яичников, выраженная уравнением регрессии, репродуктивная способность крольчих как результат влияния селенсодержащих препаратов.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность представленных в диссертационной работе результатов подтверждается соответствием теоретических заключений статистическим расчетам комплекса проведенных исследований.

Доклады по основным результатам НИР обсуждались и были одобрены на Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения -2009» (Саратов, 2009), IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009), Международной научно-практической конференции «Основные направления развития: состояние, опыт, пути дальнейшего совершенствования для реализации проекта в АПК» (Оренбург,2010), Конференции молодых ученых и специалистов Оренбургской области (Оренбург, 2010), Всероссийской научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России» (Пенза, 2010).

Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта «Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», отмеченного дипломом лауреата на областной выставке научно-

технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Оренбург, 2010), дипломом лауреата Молодёжного инновационного форума Приволжского федерального округа (Ульяновск, 2010), бронзовой медалью и дипломом III степени VI Саратовского салона изобретений, инноваций и инвестиций (Саратов, 2011).

Связь исследований с научной программой. Работа выполнена в соответствии с планом-методикой диссертационных исследований и планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Публикации. Основные научные положения диссертации изложены в семи научных работах, четыре из которых опубликованы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 142 страницах компьютерного набора и включает оглавление, введение, обзор литературы, материал и методы исследования, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, заключение, рекомендации к использованию научных положений, выводы, перечень условных обозначений, библиографический список, который содержит 197 отечественных и 101 зарубежных наименований работ, и приложение к диссертации. Материалы диссертации иллюстрированы 40 рисунками и 18 таблицами.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологические особенности репродукции крольчих

Изучаемый нами вид животных по современной систематике относится к роду кроликов, семейству зайцев, подсемейству удвоеннорезцовых, отряду зайцеобразных, классу млекопитающих. Кролики имеют большое внешнее сходство с зайцами, но сильно отличаются от них по многим биологическим показателям. Срок беременности у кроликов 28-30 дней, у зайцев - 50-52 дня; зайчата рождаются зрячими, обросшими шерстью, а крольчата - слепыми, беспомощными и голыми. Подсосный период у кроликов продолжается 30-45 дней, у зайцев - несколько дней. В природе кролики обычно живут большими группами в норах, зайцы же нор не устраивают. Кроме того, на сегодня известно, что зайцы не являются предками кроликов. Родоначальником домашних кроликов являются дикие кролики, распространенные и сейчас в некоторых странах Азии, Европы и Африки. Родиной кроликов считают Испанию. В Россию диких кроликов завезли в конце XIX столетия [79, 103, 138 и другие].

Кролики отличаются высокой скороспелостью и интенсивностью размножения. В возрасте 3-3,5 месяца крольчихи небольших пород достигают половой зрелости, крупные самки - в 4-4,5 месяца. Однако в промышленных условиях случать крольчих начинают при достижении ими физиологической зрелости, которая наступает в 5-7 месяцев в зависимости от размеров и массы животного. За год одна самка может окролиться 4-6 раз, или принести 25-^0 крольчат. Репродуктивная активность у крольчих сохраняется в течение всего года, но в осенние месяцы активность снижается. Половая охота у неоплодотворенных крольчих проявляется каждые 5-6 суток летом, 8-9 суток зимой и продолжается 3-5 дней. Во время охоты самка возбуждена, плохо ест, наружные половые органы приобретают ярко-розовую окраску, припухают. У крольчихи половая охота может начаться уже на второй - третий день после

окрола, и её можно случать. Эта особенность используется кролиководами при уплотненных окролах и даёт возможность совмещать период лактации и беременности [36, 57, 101, 121,].

В отличие от самок лисиц и песцов [26, 126, 178, 189], у крольчих, как у норок, соболей и нутрий [85, 116, 177] овуляция провоцируется актом спаривания [157]. Во время случки возникает нервный импульс и передается гипофизу, стимулируя тем самым выработку гонадотропных гормонов. Фолликулы ускоренно дозревают, а через 10-12 ч происходит их разрыв, и выходят от трех до 15 овоцитов первого порядка. На месте разрыва граафова пузырька формируются временные железы внутренней секреции - желтые тела, клетки которых в основном вырабатывают прогестерон. Иногда желтые тела образуются и при неудавшемся оплодотворении и препятствуют развитию и созреванию новых фолликулов. Иными словами наблюдается ложная беременность, которая продолжается 17-19 дней. Нередки случаи, когда после покрытия самки овуляция может не наступить. Если самки много раз принимают самца, но остаются неоплод отворенными, их выбраковывают [37, 86, 122].

Через 10-12 часов после оплодотворения яйцеклетки зигота начинает дробиться. Вначале зародыш интенсивно развивается в полости матки и только на восьмой день прикрепляется к ее стенке. Через две недели зародыши достигают размера 2-2,5 см и представляют собой эластичные эмбрионы величиной с лесной орех, сгруппированные в цепочку. Они легко прощупываются через брюшную стенку, чем пользуются кролиководы для раннего определения сукрольности самок [134; 161].

Эмбриональное развитие у кроликов протекает интенсивно, плод заканчивает свое формирование на 28-32-й день, достигая массы 40-90 г. К этому времени завершается и подготовка родовых путей к выведению плода. Считается, что период сукрольности равен, в среднем, 30 дням. Окрол происходит преимущественно ночью. Роды протекают легко, в течение 10-20 минут, порой до одного часа. Отмечены случаи, когда окрол проходил в два

этапа с интервалом до одних суток. После окрола крольчихи облизывают крольчат, кормят их молоком, укрывают пухом [103, 121].

У крольчих обычно четыре, иногда три - шесть пар молочных желез, в сутки она может выделять 50-200 г молока. Во второй и третьей декадах после окрола у кроликоматок советская шиншилла наблюдается самое обильное выделение молока. Кроме того, они обладают не только высокой молочностью, но и хорошими материнскими качествами. Средняя разовая плодовитость крольчих - 7-8 крольчат. Бывают случаи, когда в помете оказывается 10-12, иногда до 19 крольчат. Скороспелость и энергия роста молодняка - отличные [15, 16, 32, 74, 117].

1.2 Яичник млекопитающих в периоды репродуктивного цикла

Яичник млекопитающего - ovarium, парная половая железа, выполняющая эндокринную (выработка эстрогена и прогестерона) и оогенную (образование яйцеклеток) функции [9, 258].

Форма, величина и расположение яичников у самок разных видов животных имеют некоторые особенности. Яичник у свиней расположен в брюшной полости, по форме овально-бугристый, гроздевидный, длиной - до 7см, шириной - 2-4 см, толщиной - до 4 см, масса зависит от количества образовавшихся желтых тел и созревших фолликулов, варьируя от 15 до 25 г. У коров овально-удлиненный яичник расположен в тазовой полости, массой 1015 г, длиной до 4 см, шириной и толщиной - 1-2 см и 1,5-2 см соответственно. Известно, что для первотелок характерно преобладание размеров правого яичника над левым. У коров, рожавших несколько раз, яичники иногда опускаются в брюшную полость. Овариальная железа коз и овец овальной формы, длиной 0,5-1 см, шириной и толщиной - 0,3-0,5 см и массой 3-5 г. У небеременных маток яичники расположены в тазовой полости. У всех продуктивных животных (кроме лошадей) яичник не имеет серозной оболочки. От яичников отходят яйцепроводы в виде узких извилистых трубок

(фаллопиевы трубы), которые переходят в рога матки [8, 21, 28, 70, 80, 83, 93, 148, 248].

Яичники пушных зверей находятся в брюшной полости, в период гона они увеличиваются и, наприме�