Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РЕГУЛИРОВАНИЕ ОВУЛЯЦИИ И СООТНОШЕНИЯ ПОЛОВ ПОТОМСТВА У МЛЕКОПИТАЮЩХ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "РЕГУЛИРОВАНИЕ ОВУЛЯЦИИ И СООТНОШЕНИЯ ПОЛОВ ПОТОМСТВА У МЛЕКОПИТАЮЩХ"



МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

всесоюзная ордена ленина а ордена трудового красного знамени акадзшя сШскохозяйствшых наук ш.в. и. лени на

всесоюзный ордена трудфого красного знамени научно исследшатшскии институт животноводства

На правах рукописи

ЕРОХИН Анатолий Сергеевич

регулирование овуляции и соотношения полов . потомства у млешшитаювдх

05.00.13 - физиология человека и хжвогных

(физиология сельскохозяйственных животных).

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дуйровицы, Московской области 1982 г.

А

КОНТРОЛЬНЫХ] листок СРОКОВ ВОЗВРАТА _

КНИГА ДОЛЖНА БЫТЬ ... " ' ВОЗВРАЩЕНА пг: позжп

„ „ - УКАЗАН! !01 О ЗДЕСЬ_а>£НуА_

Работа выполнена в отделе риоло; ------

Килич. я и а а н. --

отаенного осеменения свпьскоюзяйотв!

ордене Трудового Красного Знамени на; института животноводства.

Научный руководитель - академик

Официальные оппоненты: доктор & БВЗХЛЕБНОЕ А.В.; кандидат Сиологичео!

Ведущее учреждение - Всесоюаный институт разведения и генетики сельсн

Зацнта диссертации состоится на заседании специализированного Сове диссертаций на соискание ученой степе союзном ордена Трудового Красного Зна скои институте животноводства.

3 Т.\Ю т. 3.600.0Г 3, 4660—

Адрес: 1420X2, Дубровицы, Подольского района, Московской области.

Автореферат разослан /У» Л

1982 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат биологических наук

и.и.вишгин

ОБЩАЯ ХАРАКЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Важнейшая задачей, стоящей перед биологической и зоотехнической наукаин, является изыскание новых путей интенсификации животноводства. Одной из возможностей повышения рентабельности животноводства моает стать успешное решение задачи деленакравленного регулирования овуляции и соотношения иолов потомства млекопитающих. Успешное решение задачи рационализации методов вызывания овулявди позволит повысить результативность искус-отаенного осеменения, благодаря введению семени в оптимальное для оплодотворения .время л иоклвчит необходимость его повторения.

Особенно актуальна данная проблема для кролиководства, т.к. в этой области метод искусственного осеменения до сих пор не находит вирокого применения ввиду сложностей с вызыванием овуляции* Л/'УИзвестны гормональные методы вызывания овуляции. Но введение экзогенных гормонов может приводить к нарушению нервно-ryморальной регуляции функции яичников и вызывать нежелательные иммунные реакция у самок.

Для предотвращения этих явлений был разработан метод вызывания овуляции у крольчих с-помощь» внутривенного введения глюкона-та меди (И.И.Соколовская, Л.Ф.Бондареве»ая, 1578). Это вещество еффективно стимулирует овуляции и не нарушает воспроизводительные функции самок. Вместе с тем, глдаонат меди возможно вводить только внутривенно, т.к. при внутримышечном или подкожном введении происходит некроз тканей, а. это затрудняет .введение препарата

.Проблема регулирования соотношения полов потомства животных имеет большое народнохозяйственное значение. Но до настоящего времени отсутствует аффективный метод регулирования пола потоке т-

при массовых обработках самс

ва у млекапита»

ГЦ]н::. ^ о-' а 'Шаг. с:д. Í г^з t ..:г

|"Пмг. с;д. Í г^з

! . ........ р- А '

Больше надежды исследователей связаны с иммунологическими подходами к данной проблеме, что обусловлено интенсивным развитием иммунологии и иммуногенетики.

Цель и задачи исследований. Б настоящей работе были поставлены следующие задачи:

1. Усовершеас пола ть метод вызывания овуляции у крольчщс

ад тем изыскания возможности замены внутривенного введения препарата внутримышечный.

2. Выяснить возможность вызывания овуляции у крольчих путем введения медного препарата в составе разбавителя для семени кролика*

3* Изучить*некоторые физиологические процессы при действии мед» ва овуляцию у крольчих.

Выяснить возможность повышения эффективности искусственного осеменения овец путей внутримышечные инъекций комплексоната меди.

Изучить влияние комплексоната меди на воспроизведение

свиней.

6. Изучить влияние инкубации живчиков кролика с акрихином на соотношение полов потомства.

■ 7. Определить возможные иммунологические подходы к проблеме регулирования соотношения полов потомства млекопитающих.

Научная новизна работы. Усовершенствован метод вызывания овуляцки у крольчих путем внутримышечного введения ко »¿ллекс оката меди. Сконструирована новая среда - имплементор для семени кроликов, способная вызывать овуляцию у крольчих, ионаружено, что в ответ на коитус у крольчих происходит рефлекторное повышение-содержания меди в крови.^/становлЁйо, что «едь является синергнетом миотролных факторов в организме. Изучено влияние комплексоната

цеди на воспроизвеленив ; овец и евшей* Проведены некоторые инмунологические приемы обработки семени кроликов с целью воздействия на соотношение полов потомства.

Практическая значимость. Предлагаемый метод вызывания овуляции у крольчих дает возможность широкого внедрения искусе таенного осеменения в практику кролиководства. Стимулирование овуляции комплексоватом меди позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец и свиней с одновременной рационализацией технологии и снижением затрат семени и груда на плодотворное осеменение.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены:

- на научной конференции молодых учение и аспирантов ЫШ <1380 г.);

- на Второй Всесоюзной симпозиуме по иммунологии воспроизведения. Москва (1980 г.);

- на научной конференции отдала биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных,ВИ1а (1961 г.).

Объем работы. Диссертация сост.оит иг следующих частей: введение, обзор литературы, материал и методики исследований* результаты экспериментов, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы, который включает 253 наименования, из них 158 на иностранной языке. Материал изложен на 133 страницах машинописного текста, содержит 31 таблицу и 3 рисунка, 3 гЬл^ика ■

ЭЮ ЛЕЕЙ МЕН ТАдЬНЛ Я ЧАСТЬ Материал и методы исследований

Опыту по изучению с та ыули роге ния овуляции у крольчих были проведены в виварии отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных ашзотньк всесоюзного научно-исследовательского института животноводства. Разработка и внедренческая работа по стимулировании овуляции у крольчих были проведены в ОПХ "Родники" Иау чно-исс я ед ова т ел ьско го института пушного звероводства и кролиководства. Таи же были проведены опыты по.регулированию соотношения полов потомства у крольчих.

Возможность стимуляции воспроизводительной функции овец изучали на овцах романовской породы в ОПХ "Тутаево" Ярославского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. Опыты по стимулированию овуляции у свиней проведены на репродукторной ферме свиноводческого комплекса колхоза имени М.и. Фрунзе Белгородской области.

дяя вызывания овуляции использовали медный комплексов? натриевой соли этилевдиэмин тетрауксусной кислоты (СэдН-^ИдД^/^Од).

Непосредственно перед применением готовили р-р коыплек-соната меди. С помощью лимонной кислоты доводили рК раствора до 7«5. Б одно« миллилитре такого раствора содержится 25 мг элементарной меди.

Доя выяснения эффективной дозы, вызывающей овуляцию у крольчих и вместе с тем не токсичной для организма, были проведены опыты с разными дозировками меди. Посредством лапаротошзи и вскрытия самок выясняли их действие« учитывая наличие либо отсутствие эмуляции.

Санов осеменяли свежевзнтым семенем, разбавленным в 10 раз гликокон-цитратно-желгочной средой (по И.И.Соколовской, .

Семя ос самцов брали при помощи искусственного влагалища для кроликов, конструкции и.К.Кардымович и В.К.11иловзнова (1933).

Для вызывания овуляции у крольчих, им эа 5 часов до осеменения внутримышечно вводили кошлексонат меди в виде 20% р-ра. Глю-конаг меди готовили по методу, описанному Л.Ф.Бондаревской (1978)

Семя в половые пути самки вводили специально изготовленным шприцем. Выбор самок для осеменения проводили по внешним признакам.

Дня изучения возможности вызывания овуляции у крольчих путем применения меднокомплексоновой среды, были разработаны две среды на основе комплехсоната меди.

Для создания сред были взяты изотонические концентрация следующих компонентов: глюкоза - цитрат натрия - 3%, ЭДТА меди -

Изучение наилучших сочетаний данных веществ проводили по методу треугольных систем (В.К.11ияованов, 1962).

Содержание меди в образцах крови определяли атомно-абсорбционным методом на приборе АА.? - 1У в лаборатории химического анализа кормов ВИХа.

Кимографию матки инфантильных крыс проводили с помоцьо при-бора'ШМ.

Для уточнения оптимальной дозы меди для овец были отобраны 3 опытные и контрольная группы. Содержание и кормление овец всех групп было одинаковым. Наличие охоты определяли бараном-пробником Осеменяли маток свежеразбавленным семенем дважды в охоту. За I час до первого осеменения овцам опытных групп вводили однократно

внутримышечно комдлексонат меди, растворённый в дистиллированной воде, в виде раствора. С помощью лимонной кислоты доводили рН раствора до 7,5. Было испытано Ъ дозы t., учитывая,

что I tir меди содержится в 8 мг комплексоната. Овцам контрольной группу га I час до осеменения вводили внутримышечно. р-р Уе/zè

Чвозможность практического использования, стимулирующего овуляцию действия комплексоната меди, изучалась в опытах на свиньях. £ опытной группе, после выявления рефлекса неподвижности,, свиньям ваутриш точно вводили 40 мл % р-ра. ЭДТА меди, нейтрализованного до рН s 7,5. Спустя 12 часов, свиноматок однократно осеменяли, вводя обычную дозу свежеразбавленного семени. Результаты осеменения экспериментальных животных сопоставляли с результативностью в контрольной группе, где осеменение проводили в соответствии с "Инструкцией" двукратно, через 12 а й часа после выявления рефлекса неподвижности, не применяя обработок медью.

Физиологически нетоксичные концентрации акрихина определяли методом встречных арифметических, рядов (В.К.Маловаиов, 1%2).

После добавления нетоксичной дозы акрихина в состав разбавленного семени, семя видервивали при комнатной температуре в течение 30 минут и, затем, проводили осеменений крольчих.

' Иммунную сыворотку к живчикам петуха вырабатывали у крольчих вводя антиген в нонъштиву глазного веха, мц приготовления антигена, эякулят петухов отминали от плазмы. Осадок, состоящий из живчиков, заливали 4-мя объемами раствора хлористого натрия и экстрагировали в*течение 48 часов при +4°С. После центрифугирования, надосадочную жидкость удаляли и использовали в качестве анти гена. Через 7-8 дней после окончания иммунизации у животных брали кровь и готовили сыворотку. Наличие иммунных тел в антисыворотке проверяли реакцией преципитации в агаровом геле по Оухтерлони.

Путем титрования устанавливали, дозу сыворотки, вызывающую агглютинации приблизительно 50?> «ивчиков. После инкубации кивчиков ан-

О '

тисывороясой при +37 С в течение часа, проводили осеменение крольчих. Определение шла проводили у оугочаых крольчат и, затеи, проверяли на 20-й дань, У мертворожденных крольчат пол определяли путем их вскрытия и изучения гениталий.

Антиоыворотху к тканям самцов вырабатывали путем 8-кратной подкожной иммунизации самок морских свинок экстрактом селезенок самцов-кроликов. Иммунную сыворотку абсорбировала измельченными тканями самок-кроликов.

Ыышиную антисыворотку к Н-У антигену получали путем в-кратшз| иммунизации санок-ыыяей экстрактом селезенок самцов. Использовали мышей линии С-57 ВЬ /б.

Для иммунизации крольчих самцовым:? Н-У антигеном, использовали антиген, приготовленный из селезенок самцов-кроликов. На 7-10-й-денв после окончания 8-кразной иммунизации, самок случали с-самцом. На протяжении всей сукрольностн самкам .еженедельно вводили антиген.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Вызывание овуляции у крольчих внутримыаечным введением комплексоната меди

В комллеясонате меди, ионы меди пробно удерживаются ковалент-нвми и координационными связями, что обуславливав« очень низкую токсичность препарата и позволяет вводить «го в организм внутри« мышечным путем.

На основании предварительных исследовании была определена активная доаа препарата, равная 1,5 мг меди на I кг массы тела. Увеличение дозы до Z «г/кг приводило к формированию геморрагичес-

них фолликулов, а доза 4 иг/кг вызывала гибель санок. Дутем вскрытия самок через определенные промежутки времени после введения препарата« установлено« что овуляция наступает через 15-17 часов после внутримышечного введения компдексоната меди, т.е. задерживается на 3-5 часов по сравнение с овуляцией» вызванной внутривенным введением глшоната меди или естественной случкой.. Это обусловлено« по-видимому« замедленным поступлением меди в кровяное русло.

После установления оптимально« дозы меди был проведен производственный опыт по изучению эффективности искусственного осеменения крольчих с применением данного способа вызывания овуляции, а качестве контроля сравнивали результативность окролов после стимулирования овуляции внутривенным введением глшоната меди и естественного спарикйния. Результаты опыта представлены в таблица I.

. Таблица I

Результативность искусственного осеменения крольчих после вызывания овуляции комплексонатом меди

Способ вызывания :Осеме-: Окролилось овуляции :нено

¡самок :число :

Родилось крольчат

всего : на самку

Внутримышечное введение комплексоната

меди (1,5 иг/кг) 85 67 78,9 610 9,1±р«1

Внутривенное введение глшоната меди, * I мг/кг (контроль) 42 1А 8Х±б,8 306 9,0дР«1

Естественное спаривание (контроль) 47 39 83±6«0 333 8,7±0,2

Из таблицы 1 видно, что в результате стимулирования овуляции предложенным методой, окролилось такое же количество самок, как и в контрольных группах: 78,8$ самок в опыте против 81 и 83^ в контролях при статистически недостоверной разнице.

Влияние стимулирования овуляции вошлексонатом меди на рост приплода изучали путем взвешивания.крольчат при рождении, а затеи, в 20 и 30 дней (табл. 2).

Таблица 2

Масса тела- крольчат при стимулировании овуляции комплексонатой меди

Овуляция вызвана Масса тела крольчат (г)

при рождении 20 дней 30 дней í среднесу-: точный : привес

Внутримышечным введением комплексоната

меди в дозе 1,5 иг/кг 58 375 560 16,7±0,35

Контроль (естественное одаривание) 59 367 558 16,6±0,78

Результаты опыта показали, |что рост крольчат после искусственной стимуляции овуляции не отличался от контрольной группы.]

Следовательно, внутримышечное введение комплексоната меди в дозе 1,5 мг/кг эффективно стимулиру.ет овуляцию, не оказывает отрицательного влияния на организм самки и позволяет получать высо кие результаты окролов, как и после естественной случки.

Экономическая эффективность применения кошлекооната меди заключается в дешевизнепрепарата, например, потребная доза препарата на самку стоит в 8 раз дешевле, дозыгонадотропика. Помимо прямого акономического эффекта, разработанный метод позволит значительно улучшить генетический потенциал разводимых пород кроликов, путем использования семени лучших производителей.

"i

Вызывание овуляции у крольчих путей применения меднококплексоновой среды и эффективность искусственного осеменения самок

Известны среды, повышающие результативность искусственного осеменения (В.К.Милованов, Н.Ц.Сергеев, 1961), вляямщие на соотношение полов потомства (Е-И.Владимирская, 1966). Но пока отсутствуют среды, способные стимулировать овуляцию.

иы сочли целесообразным попытаться создать среду-имплементор, способную стимулировать овуляцию у крольчих, в качестве биологически активного вещества среды избрали тот же комплексонат меди.

. . На основании предварительных исследований было установлено, что введение ЭДТА меда в состав разбавителя для семени кролика не оказывает отрицательного влияния на подвиддость и переливаемос гь живчиков.

Нзми было сконструировано две меднокомплексоновые среды. Б лабораторных опытах установили, что лучше результаты окролов получены при использовании среды следующего состава (на ТОО мл воды): ЭДГА (Си) - 4,1.г, лимонная кислота - 0,016 г. На данную среду, в соавторстве с Л.С.Яильцовой, имеется положительное решение Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и оЯкрыхий на выдачу авторского свидетельства по заявке te ЗЙ-7777/ 3015 от 17 февраля 1У81 г.

В результате осеменения крольчих семенем, разбавленным медно-комплексоновой средой, была установлена принципиальная возможность наступления овуляции и оплодотворения ововдтов после введения препарата совместно с семенем, ¿ведение меди в дозе I мг/кг позволило получить лучшие результаты окролов.

Для изучения возможности практического применения разработанного способа вызывании овуляции, был проведен производственный

onus no искусственному ос еме не ни ю,крольчих. Результаты опыта представлены в таблице 3.

Таблица 5

Эффективность искусственного ос вменения крольчих в связи со .стимулированием овуляции меднокомпдек-соновоа средой

Способ вызывания ¿Осеменено: Окролнлось ¡Родилось крольчат

овуляции : самок :--------:—--------

: :число : % :всего :на сапку

Осеменение о использованием иеднокомплексо-

новой среды 60 36 ьо±8,1 327

ьс тес зге иное спаривание (контроль) 47 39 83±б,0 339 8,7^0,1

Из таблицы 3 видно, что в результате применения медновомплек-ооновой среды, окропилось самок против в контроле при статистически достоверной разнице.

Снижение результативности осеменения, по-видимому, объясняется тем, что. поступление меди в кровь из влагалища происходит медленнее, по сравнению с внутримышечным введением препарата. А это приводит к запаздыванию овуляции и биологическому старению живчиков в половых путях самки, что обуславливает снижение опдодохво-ряемости и эмбриональной выживаемости.

. В связи с этим, данный метод пока не может быть рекомендован для широкого практического использования в кролиководства. Но в перспективе, это наиболее многообещающий способ вызывания овуляции.

Изучение овуляторного механизма действия меди у крольчих

Известно, что при возбуждении симпатической нервной системы, в крови животных повышается содержание меди (и.Р.Сорока, ГЭТО).

На этом основании мы предположили, что и ответ на коитус, при которим происходит общее нервное возбувдение, в крови крольчих должно повышаться содержание меди. Для проверки данного предположения была изучена динамика содержания меди в крови крольчих до и после коитуса с саццом. Результаты опыта показаны на рисунке I.

Рисунок I

Динамика сод&раанин меди в крош крольчих после коитуса

Время после коитуса (мин.)

Из рисунка I видно, что сразу же после коитуса повышается содержание меди в крови и достигает максимума уже через 15 минут. Следовательно, в ответ на коитус происходит рефлекторный выброс меди в кровь из депонирующих органов (вероятно, печени). А через 30 минут содержание меди становится ниже, чем было до коитуса.

На основании полученных результатов иожно заключить, что повышенная концентрация меди в крови, очевидно, активирует &ермент-

ныв системы гипоталамуса, который выделяет ЛГ-либерин, что приводит к освобождению из гипофиза пика ЛГ. И через 10-12 часов после коитуса наступает овуляция. Коитус о самцом можно успешно заменить однократным внутривенным введениеи меди (а.И .С околовеная, Л.Ф.Бондаревская, 1978), то есть введение меди крольчихам в схоте запускает те же биологические механизмы, вызывающе овуляцию, которые активируются после естественной случки.

Кроме того, нами совместно с Б.П.Кононовым установлено, что 'ионы меди значительно повышают силу сокращений матки, вызванных введением оке и тоци на^Следова тел ьн о, медь является синергистом миотропных факторов в организме. ^

Стимулирование процессов воспроизведения у овец путем внутримышечных инъекциь комп-лексоаата меди

В исследованиях на кроликах мы установили, что вомплексонат меди активно стимулирует овуляцию и не оказывает отрицательного влияния на организм самки при внутримышечном введении.

Это побудило нас испытать влияние однократных внутримышечных инъекций данного препарата на результативность осеменения овец. Опыты проведены совместно с в.л.кувшновыы.

В предварительном опыте изучили влияние различных доз меди на воспроизведение овец (табл. 4).

Из таблицы 4 видно, что при дозе меди 0.5 мг/кг число объягнившихся маток было на больше ( и * 1,9) по сравнению с контролем.-

Повышение результативности осеменения после введения препарата, вероятно, явилось следствием ускорения овуляции, что повысило шансы* оплодотворения яйцеклетки биологически полноценными »ивчикаш.,^

Таблица 4

Результативность искусственного осеменения овец при введении различных доз меди

:Осеме-:Из них объягаилооь: Подучено ягнят

доза меди (мг/кг) :неао :------------:---------

:маток : число : % ; всего : на катку

0,5 25 18 58 3,^0,2

I » 12 50±9,1 35' 2,8±0,2

1,5 25 В- 56±9,0 38 2,7±0, 21 Контроль

(1$ мае- ) зо к 53*8,9 51 з,г^,17

Для проверки эффективности применения комплексоната меди в оптимальной дозе, детой 1981 г. был проведен производственный опыт (табл. 5).

Таблица 5

Результативность искусственного осеменения овец после внутримышечного введения меди

:0семе-:Из них объягнилось: Родилось ягнят

Группа опыта :нено :-----------:------------

шаток : число : : всего : на матку

Введение комплек-соната меди

(0,5 мг/кг) 80 55 6%5,9 ПО 3,1*9,12 Контроль

(356 мюе ) 100 70 70±5,6 210 3,0*0,11

Из таблицы 5 видно, что введение препарата не повысило результативность осеменения. Возможно, это объясняется тем, что в летнее время при подкормке бобовыми травами, в организм животных может поступать достаточное количество меди. Поэтому, дополнительное введение меди не оказывает положительного влияния.

Изучение влияния комплекс оната мели на воспроизведение свиней

решили испытать в качестве стимулятора овуляции у свиней комплексонат меди с целью замены двукратного осеменения на однократное. Опыты проведены совместно с. В.П.Кононовым и Л.Г.Нарижным. Результаты слита представлены в таблице 6.

Таблица б

Эффективность однократного осеменения свиней в связи со стимулированием овуляции компдексоната меди

Способ осеменения

Осеые-: Опоросилось : Получено яорсят нено

маток : число : % ишзнеопо-: много-: :соСных : плодие

Однократно в окоту, с предварительным внутриыаточным введением ЭЛТА (Си) » 62 66±б,0 721 11,6+0,1

Двукратно в одну

охоту (контроль) 50 У* 68±8,0 3» II,б±0,1

Из таблицы 6 видно, что^примене^ие предварительной обработки маток препаратом меди позволило йт однократного введения семени получить такие л» результаты, как от двукратного, хотя известно, что в обычных условиях, исключение повторного ¿ведения семени понижает супоросность на 15-20^.

Следовательно, такая обработка позволяет компенсировать устранение повторного введения семени, йероятно, стимулируя выход ЛГ из гипофиза, ладная обработка устраняет случаи слишком позднего наступления овуляции, что позволяет получать удовлетворительные результаты при однократном осеменении^.

ежинойоческая эффективность приведенной выше схемы осеменения

выражается в двукратном снижении затрат семени на плодотворное осеменение и соответственным снижением числа потребных хряков-производителей и затрат на их содержание. Кроме того, предлагаемый прием позволит обеспечить значительный генетический эффект путем использования семени выдающихся производителей.

Влияние обработки живчиков акрихином на соотношение полов потомства крольчих

Известно, что акрихин обладает большим сродством к У-хромо-соме, о чем можно судить по более яркому свечению этой хромосомы в ультрафиолетовых лучах после окраски препаратов акрихином. Ь1ы предположили, что если акрихин обладает большим сродством' к 7-хро-мосоме, то при его добавлении к семени он должен в большей степени накапливаться в живчиках с У-хромосомой* А это может отрицательно отразиться на их жизнеспособности. Мы предположили, что-при осеменении санок предварительно обработанными живчиками, в их потомстве удастся получить большее количество самок.

Для проверки этой гипотезы были проведены опыты на кроликах.

- После инкубирования семени с акрихином было осеменено 26 самок. Но в результате такой обработки семени не удалось изменить соотношение полов потомства крольчих.

Влияние инкубации живчиков кролика с иммунной. ^ сывороткой к живчикам петуха на соотношение полов потомства крольчих

иммунологические подход к проблеме регулирования соотношения полов потомства, используя разницу между млекопитающими, у которых гетерозиготны самцы, и птицами, у которых самцы гомозиготны, и все живчики содержат однородную половую ( £ ) хромосому, был предло-

жен а.А.Бурковым (1968). Путем иммунизации крольчих экстрактом живчиков петуха и дальнейшего их осеменения, ему удалось подучить в потомстве на % Сольве самок.

Ыы решили продолжить и углубить вти исследования. Мынсходи-ли из того, что если £ -хромосома птиц, аналогична У-хромосоме млекопитающих, то предварительная инкубация живчиков кролика о антисыворохяой к живчикам петуха приведет к инактивации /-содержащих живчиков и позволит получить больше самок в пришгоде.

Результаты данного опыта представлены в таблице 7. .

Таблица 7

Соотношение полов потомства крольчих, осемененных живчиками, обработанными иммунной сывороткой, к живчикам петуха

Схема :исеме-:Родилось: Иэ них

осеменения жено :крольчат: (число

:самок : :—-----

.¿ивчшси обработанные иммунной сывороткой

Живчики без обработки сывороткой (контроль)

Из таблицы 7 видно, что половой состав приплода как в опыт*-ной, так и в контрольной группе практически не отличается от нормы.

'Инкубация живчиков кролика с антисывороткой к ¿ивчикам петуха не изменила половой состав приплода, но'привела*к снижении оплодотворяв мости овоцятови эмбриональной выживаемости, что отрицательно отразилось на результатах осеменения.

27 103 Кб 57 45*7 Л 55±6,6 18 125 61 т 4-9*бА 5Г±6,Х

Обработка живчиков кролика иммунной сывороткой к Н-У антигену П соотношение полов потомства

После обнаружения специфического антигена сашов (Н-У антигена ), возникла заманчивая идея избирательной инактивации живчиков сКУ-хромосомой» основанная на предполагаемы: различиях в антигенной структуре кивчиков с X и У-хроыосомой.

В данном разделе диссертации изучена возможность регулирования пола, путец обработки живчиков антисывороткой к селезенке самцов .

Учитывая, что Н-У антиген ьидово не специфичен, в первом опыте антисыворотку к тканям самца готовили путем иммунизации самок морских свинок селезенкой самцов-кроликов.

Для изучения влияния инкубации живчиков в данной снворотке на соотновение полов потомства, было осеменено 30 крольчих, выяснилось, что в условиях зтого опыта соотношение полов потомства мало отличалось от контроля.

Предполагая, что причина была в недостаточной специфичности антасыворотки к Н-У антигену, в следующем опыте ее готовила, ис-дользуя динейкых мышей (С-57 ЪЬ /б).

После инкубирования живчиков в данной сыворотке. проводили осеменение крольчих. Результаты представлены в таблице б.

Таблица 8

Соотношение полов приплода крольчих в связи с инкубацией живчиков перед осеменением с мышиной Н-У антисывороткой

Группа опыта

Осеме-:Окро- :РодилооьСоотношение полов :Отноше-нено :лилооь;крольчат:в потомстве 05) :ние самок : (5$) ;на самку:-

____|__\

Живчики обработанные Н-У антисывороткой 17 70±П,3 40±7,3 60±5,0 1,5

Ливчики без обрч-. ботви

?кон1род£3~ 18 83±Э,6 8,3 5Г±б,3 1,0

Из таблицы 8 видно, что в опытной группе получено больше самок по сравнению с контролем (при -¿Л * 1,7).

Инкубация семени с антисивороткой не отразилась существенно на оплодотворявмости и многоплодии крольчих и несколько сместила соотношение полов в потомстве в пользу самок.

В виду того, что на живчиках с Х-хромосомой также может присутствовать Н-У антиген, хотя предположительно и в меньшем количестве; чем на живчиках о У-хромосомой, можно думать, что повышение специфичности иммунной сыворотки в сочетании с оптимизацией режима инкубации, может способствовать относительному увеличению числа самок в большей степени, чем в предыдущем опыте.

Соотношение полов в потомстве крольчих, иммунизированных Н-У антигеном

С целью оптимизации режима инкубации живчиков с Н-ОГ антителами, бил проведен опыт по иммунизации крольчих антигеном, приготовленным из селезенок самц^-кроликов с ^еы, чтобы живчики, введенные в половые пути при осеменении, попали непосредственно в среду, в которой они подверглись бы обработке фактором, способным инактивировать живчиков с У-хрошосоноЯ, На 7-10 день после окончания иммунизации самок случали с саццом. Результаты опыта представлены в таблице 9.

Таблица 9

Соотношение полов приплода крольчих, иммунизированных Н-У антигеном •

Осеме-:Родилось:Соотношение полов: нено :крольчат: {%) : о/сг самок :(всего) :----------------: +

______:_______:___Л __

30 120 34+7,4 66*5,2 1,9 13 67 49*8,7 51±8,6 1,0

Группа опыта

Саши, иммунизирование а^шгеком

Не иммунизированные (контроль)

Из таблицы 9 видно, что под влиянием активной иммунизации самок аллоаитигенами селезенки самцов, число самок в потомстве увеличилось в 2 раза по сравнена» с контролем (при 6<4 = 2,1).

Есть основания полагать, что это существенное смещение соотношения подов представляет собою результат избирательного повреждения живчиков с У-хромосомоа или эмбрионов-самцов иммунной сывороткой к Н-У антигену. В отличие от опыта зарубежных исследователей (Пекан, Траси, 1980), где все сащы родились мертвыми и морфологически дефектными, в нашем опыте крольчат-сашов было меньше, чем самок, но они родились живыми.

Представленные результаты показывают реальную перспективу увеличения числа самок в потомстве, применяя иммунологические методы, как способ тонкого и точного влияния даже на отдельные микроструктуры. Необходимы дальнейшие углубленные исследования с использованием новейших методов иммунологии.

ВЫВОДЫ.

1. Доказано, что внутримышечное введение комплексоната меди в дозе 1,5 хг меди на I кг массы тела крольчихи вызывает полноценную овуляцию, при наличии у животных признаков охоты. Искусственное осеменение самок, после стимулирования овуляции компленсо-натом меди, дает такие же результаты, как и в контроле. Вызывание овуляции данным способом не оказывало отрицательного-влияния на массу тела крольчат при рождении и па их дальнейшее развитие.

2. Введение комплексоната меди совместно с семенем, в составе разбавляющей среды, вызывало полноценную овуляцию у. крольчих

и не оказывало отрицательного влияния на оплодотворяющую способность живчиков. Искусственное осеменение крольчих, при стимулировании овуляции внутривлагаливдым введением комплексоната меди сов-

место о сеьленем оказалось немного менее эффективным.

3. ь ответ на коитус. у крольчих происходит реу,шекторное выделение меди в кровь из депонирует*. „рганов. Ионы меди являются синергиотами шотройных факторов в организме, а. цинк - антагонистом.

4. При однократном внутримышечном введении овцам перед осеменением коыплексоната меди в дозе и,5 ыг меди на I кг массы тела,

в осенний период наблюдалась тенденция к ловдаению результативности осеменения обьнгнившихся овец в опыте против 53^ в .контроле) и сокращению продолжительности охоты. Использование препарата в летний'период не повлияло на результативность осеменения.

5. Однократное осеменение свиноиаток, с предварительным внут-риматочным введением комплексоната меди в дозе I мг меди на I кг пассы тела, позволило получить такой же результат, как от двукратного в контроле. Не было отмечено различий в группах по живой массе поросят при рождении и многоплодию маток.

6. введение акрихина (вещества специфически связывающегося о У-хромосомой) в состав раьбзьденаиго семени кролика в дозе 0,03 иг/мл, не изменило соотношения полов потомства, крольчих.

7. Инкубация живчиков кролика с иммунной сывороткой к живчикам петуха (содержащим гомологичную половую ? -хромосому), не повлияла на половой состав приплода, по значительно снизила опло-дотворнемость овоцитов и повысила эмбриональную смертность. Обработка живчиков кролика антисывороткой к самцовому антигену'(Н-У антигену) не привела к достоверному увеличению самок в приплоде крольчих.

5. После иммунизации крольчих Н-/ антигеном, в их потомстве получено в 2 раза больше самок (66% самок против самцов).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДОИНКЯ

1. При искусствешюм осецеиеаии в кролиководстве использовать с целью вызывания овуляции внутримышечное введение комплексоната -кеди в дозе 1,5 кг меди на I кг пассы тела крольчихи (вместо применения гонадотропина). осеменять самок через 5 часов после введения препарата, т.е. в оптимальное время по отношению к овуляции.

2. С цель» замены двукратного осеменения свиней на однократное, ввести в технологию искусственного осеменения предварительное внутриматочное введение изотонического раствора комплексоната меди в дозе I иг меди на I кг массы тела сразу после установления рефлекса неподвижности. Через 12 часов производить однократное осеменение.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ Ш ТШЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Действие специфической иммунной сыворотки на аллогенные и-коеногенные живчики. Первый симпозиум молодых научных работников по иммунологии размножения. Тезисы докладов. Со^ия, Болгария,

с. 7.

2. Направления и перспективы искусственного регулирования соотношения полов в потомстве (обзор). Сельское хозяйство за рубежом, 1980, *2 I, с. 43-47 (» соавторстве).

3. Усовершенствование метода вызывания овуляции веществом, не дающим иммунного ответа. 2-й шее. оимпоа. ишлун. воспроизведения. Тезисы докладов, Москва, 1280, с. 145.

4. Среда для разбавления семени с/х животных . Решение о выдаче авторского свидетельства по ваявке № 3247777/3015 от 17 февраля 1981 г. (в соавторстве).

Л - 100793 Подписано к печати -2I.0I.S2 г. Формат бумаги 60 х 84/16 Объём 1,5 п.л. Тира» 100 экз. Заказ 318

Ротопршт типография НИИШШ1 г. ЩЕРБИНКА