Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РОЛЬ ГОНАДОТРОПИНОВ В ФОРМИРОВАНИИ ПОЛОВОГО ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ЕГО РЕГУЛИРОВАНИЯ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "РОЛЬ ГОНАДОТРОПИНОВ В ФОРМИРОВАНИИ ПОЛОВОГО ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ЕГО РЕГУЛИРОВАНИЯ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ"

Научно-исследовательский ордена Трудового Красного Знамени институт животноводства Лесостепи и Полесья Украинской ССР

На правах рукописи

ПРОКОФЬЕВ Михаил Иванович

РОЛЬ ГОНАДОТРОПИНОВ В ФОРМИРОВАНИИ ПОЛОВОГО ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ЕГО РЕГУЛИРОВАНИЯ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

ЖИВОТНЫХ

03.00.13 — физиология человека и животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Харьков — 1979

¿jau¿ соОЛЯ ПЛА^ 7: LtOf^U

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте- животноводства МСХ УзССР н Всесоюзном научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ю. Д. Клинский, доктор биологических наук, профессор Ф, И. Осташко, доктор медицинских наук, профессор Г, С. Степанов.

ведущее предприятие — Украинский НИИ физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных.

Защита диссертации состоится « СИСЛГЛjgyg г

в часов на заседании специализированного Совета

(шифр Д.020.10.01) при Научно-исследовательском институте животноводства Лесостепи и Полесья УССР, 312120 г. Харьков, п/о Кулиничи.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ жнвотноводства^еайстепн и Полесья УССР.

тэрь специализированного Совета 1улимов Анатолий Григорьевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность, цель и задачи исследований. Интенсификация ведения животноводства и перевод его на промышленную основу выдвигают все большие требования к повышению продуктивных качеств и обеспечению высокой воспроизводительной способности жнвотных одновременно с организацией четкой ритмичности в получении приплода. В этой связи перед биологической наукой особенно остро встает задача разработки методов активного регулирования функции воспроизведения у сельскохозяйственных животных.

Разработанный И. И. Ивановым и развитый далее отечественными и зарубежными исследователями метод искусственного осеменения сельскохозяйственных животных позволяет уже сравнительно легко регулировать участие производителя в процессе воспроизводства (В. К- Милованов, В. А, Морозов, И. И. Родин, А. В. Бесхлебнов, И. В. Смирнов, Ф. И. Осташко, П. И. Пакенас, С. Polge, N. Van Demark н др.). Определенные успехи достигнуты в понимании закономерностей нейроэндокринной регуляции и управления репродуктивной функцией у самок сельскохозяйственных животных {АЛ. М. Завадовский, А. И. Лопырин, Н. В. Логинова, А. В. Квасницкий, А. П. Студеицов, И. И. Соколовская, Г. В. Паршутин, Г, В. Зверева, А, Л, Падучева, В. С. Ши-пилов, П. И. Шаталов, Н. И, Полянцев, Ю. Д. Клиискнй, Д. Д. Логвинов, С. И. Сердюк, Г,А . Кононов, Г. С. Степанов, L. Casida, A. Nalbandqv, W. Hansel и др.). В последние годы предложены многочисленные гормональные препараты н способы их применения для стимуляции функции яичников и синхронизации охоты, то есть контроля ее проявления в точно регламентированные сроки. Однако для многих из них не дано глубокого физиологического обоснования и три широкой производственной проверке otra оказались недостаточно эффективными. Это выдвигает на первый план необходимость дальнейшего накопления фучламентальных знаний о зако-

Цгл;. С;;5д"8т Ша. {-;д. сшгз.-

а;;ад. ¡j. (?, д. Ганздеззза

номерностях нейроэндокрннной ' регуляции функции воспроизведения.

Сведения о динамике уровня гонадотропных гормонов в крови животных в течение полового цикла до настоящего времени остаются недостаточными, чтобы составить полное представление о роли гипоталамо-гипофиза.рного комплекса в регуляции функции яичников в разные фазы цикла. Поэтому изучение закономерностей гонадотропной секреции в течение полового цикла у разных видов сельскохозяйственных жнвотных является одной из актуальных задач эндокринологии репродуктивной функции.

Секреция гонадотропных гормонов гипофиза контролируется по принципу обратной связи половыми стероидами, продуцируемыми янчннкамн самки. Это положение, выдан-нутое впервые М. М. Завадовским, является по существу научной базой для разрабатываемых ныне способов синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных. Отсюда совершенствование приемов регулирования функции воспроизведения у животных должно базироваться на дальнейшем развитии и углублении наших представлений о механизмах взаимодействия гормонов в организме животного. Огромные успехи современной химии создали широкие возможности в использовании фармакологических средств для торможения и стимуляции гПпоталамо-гнпофизариого комплекса у животных. Одной из важных задач биологической наукн является создание в содружестве с химиками эффективных гормональных препаратов, веществ, оказывающих влияние на медпаторные процессы в центральной нервной системе, и разработка теоретических основ их применения в животноводстве.

В целях разработки более эффективных способов регулирования воспроизводительной функции у самок сельскохозяйственных животных большой интерес представляют половые стероиды пролонгированного действия. В опытах на лабораторных животных выявлены соединения этого типа с пролонгацией дейстгу1я близкой к продолжительности полового цикла (К. .ТипЬтап, 1954; М. И. Прокофьев и др., 1975), что позволяет ограничиться однократным их введением для обеспечения необходимой продолжительности торможения охоты и овуляции. Изучение физиологических аспектов действия этих соединений открывает возможности разработки новых малотрудоемких методов синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных.

В связи с интенсификацией ведения животноводства особую значимость приобретает проблема эффективного использования воспроизводительной способности самок с высоким 2

генетическим потенциалом путем многократного получения от них эмбрионов на ранних стадиях развития и пересадки их менее ценным в генетическом отношении самкам. Эта проблема привлекла в последнее время большое внимание исследователей и животноводов-практиков (L. Rowson et а]., 1969, Л. К. Эрнст и др., 1977; М. И. Прокофьев и др., 1977; 1978). К настоящему времени решены основные этапы технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Однако, судя по числ^беременных реципиентов на одного донора, эффективность метода сравнительно низкая (Е. Graham, 1974), В этой связи особую актуальность представляет изыскание путей повышения выхода полноценных эмбрионов и совершенствование техники их пехирургической трансплантации.

Задачами настоящей работы было решение следующих вопросов.

— Совершенствование методов получения и определения пшофшарных гонадотроппнов в биологических жидкостях (кровь, моча) и изучение на этой основе особенностей го-надотропной регуляции полового цикла у самок разных видов сельскохозяйственных животных.

— Изучение роли плацентарных гонадотроппнов и половых стероидов в регуляции гипофизарно-яичииковых взаимоотношений у самок сельскохозяйственных животных в условиях проявления нормальной репродуктивной функции.

— Изучение взаимоотношений между структурой и функцией производных прогестерона и разработка теоретических основ применения прогестагенов пролонгированного действия, для регуляции функции воспроизведения у самок сельскохозяйственных животных.

— Разработка новых способов синхронизации охоты у спмок основных видов сельскохозяйственных животных с использованием стероидных производных пролонгированного действия.

— Изучение эндокринных механизмов вызывания суперовуляции у крупного рогатого скота с целью разработки способа повышения выхода полноценных зародышей и ускоренного размножения потомства от высокоценных особей методом трансплантации эмбрионов.

Материалы и методика исследований. Экспериментальные исследования проводили в период 196^—1978 гг. на коровах и половозрелых телках в 29 сериях лабораторных и 13 научно-производственных опытов в ОПХ «Красный Водопад» научно-исследовательского института животноводства МСХ

УзССР, в пл ем совхозе-техникуме «Чиназ» и колхозе «Политотдел» Ташкентской области, в .„ племсовхозе «Малек» Сырдарьинской области, в совхозе 50-летия образования СССР Бухарской области, в совхозе им. Ильича КК АССР, а также в хозяйствах Калужской и Московской областей; на овцах каракульской породы в случной сезон в колхозах «Коммунизм* и им. Свердлова Бухарской области; на свиньях 8—10-месячного возраста крупной белой породы и их помесях в ОПХ «Красный Водопад» ^ в совхозах Галля-Кудук Ташкентской области и им. Тельмана КК АССР; на индейках в ОПХ «Красный Водопад» и совхозе «Химик»' Ташкентской области.

Группы животных формировали по принципу аналогов с учетом массы тела, возраста и породы. Во всех опытах животные получали рационы, общепринятые по набору кормов и сбалансированные по питательности.

В лабораторных и научно-производственных опытах 17«-оксипрогестерона капронат (17-КОП) инъецировали в смеси растительного масла (7 частей) и бензпл-бензоата (3 части) в 5%-ной концентрации (овцам) или 10%-ной (крупному рогатому скоту, свиньям).

Кровь для исследования динамики уровня гормонов брали у крупного рогатого скота из яремной вены, у свиней из кавернозного синуса по усовершенствованной нами' методике (М. И. Прокофьев, Ю. Л. Селиверстов, 1965) и у индеек из ггодкрыловой вены.

В сыворотке крови исследовали радноиммунологнческим методом прогестерон с использованием наборов реактивов PPOGK и эстрадиол-17р при помощи набора реактивов ESTRK; фолликулостнмуллрующий гормон (ФСГ) определяли в крови методом S. Steeiman a. F. Pohley (1953), а лю-теинизирующий гормон (ЛГ) методом A, Parlow (1961) и радноиммунологнческим методом G. Niswender (1969) в нашей модификации (М. И. Прокофьев и др.; 1975). Концентрирование гонадотроиинов в сыворотке крови для биологического тестирования проводили по разработанной нами методике (М. И. Прокофьев, Ю. А. Селиверстов, 1965; М. И. Прокофьев н др., 1977), а в моче каолин-ацетоновым методом A. Albert (1956) в модификации Г. С. Степанова (1961) и В, М. Дильмана (1965). В качестве стандартов использовали гоиадотроиные препараты Национального института здоровья США (NIH) и препараты, полученные нами из ла-боратори М. Jutisz (Франция), также отстандартизированные по NIH: 1 мг LH—М2 (Франция) эквивалентен 2,5 мг NIH — LH—Sa-

Гестагенную активность испытуемых стероидных производных определяли в модифицированном тесте G. Clauberg (1930) в индексах по Макфанлу-Юнкману.

В цервнкалъном секрете коров определял» хлориды методом А. Vogel (1966), обгний и остаточный белок методом Н. Lowry (1951); электрическое сопротивление слизистой влагалища коров с помощью «Эстрометр-2»; индекс арборн-зацни секретов оценивали по 6-балльной шкале (С. Allis« ton et al.( 1958).

Макрометрнческие исследования яичников проводили по> методике Н. Ф. Поликарповой (1957) с помощью пластинчатого аппарата. Массу всей фолликулярной жидкости ir наибольшего фолликула устанавливали путем определения различия в массе цельного яичннка и после удаления из него жидкости, соответственно из всех везикулярных фолликулов «ли из наибольшего. Гистоморфологические исследования яичников и матки проводили по общепринятой методике ( Г. А. Меркулов,' 1969). Оценку нормальных и атрети-ческих фолликулов проводили по -классификации G. Marion et al., (1968).

Статистическую обработку полученных данных проводил» по Стьюденту (Е. К. Меркурьева,, 1970) и с использованием непараметрнческой статистики (S. Siege!, 1956).

Научная новизна. Разработан способ повышения чувствительности биологических методов-определения ФСГ и ЛГ в сыворотке крови животных, использование которого позволило впервые изучить количественные изменения уровня го-нлдотропных гормонов гипофиза в крови у самок крупного рогатого скота, свиней и индеек. На основании полученных данных выявлена общефизиологическая закономерность ритмичного выделения гипофизом гонадотропных гормонов в течение полового цикла у млекопитающих и овуля-торного цикла у птицы, В яичниках коров в течение полового цикла выявлены три, а не две, как это предполагалось раньше, волны роста и развития фолликулов, что хорошо> коррелирует по времени с периодами повышенной секреции гнлофизарных гонадотропинов. Установлено, что в дискретности секреции гонадотропинов гипофизом н развитии фолликулов в яичниках коров проявляется одна из закономерно-стен, присущая саморегулирующей системе, которая обеспечивает устойчивое равновесие функционирования гипотала-мо-гнпофизарного комплекса н половых желез. Это положение развивает теорию М. М. Завадовского «плюс—мннус

S

\

взаимодействия» н обосновывает перспективу новых поисков регулирования функции воспроизведения у животных.

Определена положительная корреляция между уровнем ЛГ в крови в предовуляторный период и оплодотворяемостью коров, что открывает возможности повышения воспроизводительной функции коров путем усиления ЛГ-актлвности во время охоты,

В комплексных исследованиях с ВНИХФИ Минздрава СССР установлена зависимость биологической активности ряда производных прогестерона от «защиты» метаболических центров стероидной молекулы и пролонгации действия от превращения 3-оксистероидов в эфиры жирных кислот. На основе выявленных взаимосвязей между биологической активностью и структурой молекулы производных прогестерона определены пути создания новых прогестагенов с заданными биологическими свойствами. Среди исследованных стероидных соединений выявлены прогестагены с высокой биологической активностью и удовлетворительной пролонгацией действия, которые рекомендуются для разработки новых малотрудоемких методов синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных.

Разработано теоретическое обоснование и предложены новые способы синхронизации охоты у самок сельскохозяйственных животных путем однократного парентерального применения прогестагенов пролонгированного действия (авторское свидетельство № 367866; получены положительные решения о выдаче авторских свидетельств по заявкам № 1904192/15 и № 2149961/30—15),

Определены особенности секреции гонадотроппых и половых гормонов у коров при вызывании суперовуляцин, которые могут быть причиной низкого выхода полноценных эмбрионов; разработан новый способ вызывания суперовуляцин у коров, основанный на сочетанием применении гона-дотропинов и прогестерона (получено решение о выдаче авторского свидетельства по заявке № 2615974/30—15).

На основе дифференцированного растворения белковых фракций в растворах нейтральных солей, в частности сернокислого аммония, разработан новый способ получения препаратов ФСГ -из гипофизов животных (авторское свидетельство № 413947; патенты: в США № 3, 973, 004, во Франции № 215914 н в Швеции № 7215903).

Практическая значимость работы. Разработанный способ синхронизации охоты у ремонтных телок, овец и свиней путем однократного парентерального введения прогестагенов пролонгированного действия в сочетании с эстрогенами и ХГ позволяет до минимума сократить трудоемкость обработки

животных. Применение этого способа сокращает сроки плодотворного осеменения телок на 20—25 дней н' сервис-период у коров на 17—35 дней.

Использование предложенного способа вызывания супер-овуляцнн у коров, включающего введение животным прогестерона одновременно с сывороточным гонадотропином (ГСЖК) в фолликулярную фазу полового цикла, повышает примерно на 30% число животных, реагирующих супер-овуляцней, и значительно сокращает вариабельность реакции яичников коров по числу овуляций.

Усовершенствованные инструменты и способы трансплан-танин эмбрионов крупного рогатого скота повышают эффективность нх извлечения и пересадки и приближают технику исполнения нехирургическои трансплантации к методу искусственного осеменения, что расширяет возможности внедрения его в практику животноводства.

Предложенный способ концентрирования гонадотропи-нов в крови животных повышает чувствительность известных биологических методов определения ФСГ в 5—6 раз, а ЛГ в 2 раза. Применение этого способа дает возможность исследовать концентрацию гонадотропииов в.!фови животных биологическими тестами.

Способ получения ФСГ из гипофизов животных путем дифференцированного растворения этого гормона в растворах сернокислого аммония отличается простотой исполнения, дешевизной н высоким выходом продукта из гнпофизарного сырья. Отработана технология получения ФСГ из гипофизов разных видов животных, которая может быть применена на заводах по производству эндокринных препаратов нз гнпофизарного сырья.

Гормональный метод торможения инстинкта насиживания у индеек, предложенный нами, вызывает прекращение насиживания более чем у 90% клохчущих индеек через одни сутки после обработки н способствует значительному повышению яйценоскости (на 18%).

Структура и объем работы. Диссертация построена по принципу изложения и обсуждения литературных и собственных исследований в каждой главе работы, В заключение проведено обсуждение объединенных материалов диссертации, сформулированы основные научные положения и выводы.

Диссертация содержит 347 страниц машинописного текста с 71 таблицами, 27 рисунками и 4 фотографиями. Приложение состоит из 36 таблиц и других материалов. Список используемой литературы включает 863 наименования работ, в том числе 645 работ иностранных авторов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ.

И РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОНАДОТРОПНЫХ ГОРМОНОВ

ГИПОФИЗА

В целях повышения чувствительности биологических методов определения ЛГ и ФСГ нами был разработан способ их концентрирования в крови животных. При этом мы исходили из особенностей физико-химических свойств ЛГ и ФСГ выпадать в осадок при различной степени насыщения раствора сернокислым аммонием (В. Chow et al„ 1942).

ФСГ-активность не обнаруживалась в осадке при насыщении сыворотки крови коров сернокислым аммонием до 1,3 М, Дальнейшее- увеличение концентрации сернокислого аммония в сыворотке крови до 2,5 и 2,7 М способствовало выпадению в осадок лишь незначительного количества ФСГ. Эта фракция включала 17,8% белков от общего их содержания в образце сыворотки крови. Выделение се позволило в 5—6 раз увеличить содержание ФСГ в испытуемом образце и почти во столько же раз повысить чувствительность метода определения гормона по S. Steelman a. F. РоЫеу (1953). Основное количество ЛГ (80,4% от его общего содержания) выпадало в осадок при насыщении сыворотки крови сернокислым аммонием до 1,3 М, Эта фракция включала около 50% белков от исходного их количества в исследуемом образце сыворотки крови. Выделение ее позволило вдвое увеличить чувствительность метода определения ЛГ по A. Parlow (1961).

На основе проведенных исследований содержания ЛГ -it ФСГ в разных фракциях сыворотки крови нами предложена и применена в последующих исследованиях методика раздельного концентрирования и определения концентрации го-иадотропннов в крови животных (М. И. Прокофьев н др., 1965, 1967, 1972).

В конце 60-х годов был разработан радноиммунологиче-скнй метод определения гонадотропннов, который позволяет определять эти гормоны в цельной плазме крови, не прибегая к ее концентрированию. Однако применение радиоиммунологического метода определения ЛГ и ФСГ в крови животных пока ограничено, ввиду отсутствия коммерческих наборов реактивов, необходимых для определения этих гормонов у домашних животных.

Известные трудности применения рздиоиммунологиче-ского метода определения ЛГ мы преодолели путем использования «динамического» способа получения моноспецифи-8

ческой ант псы воротки к ЛГ. Это позволило нам впервые в нашей стране полностью воспроизвести радноиммунологи-ческнй метод определения ЛГ в крови у крупного рогатого скота на основе гомологичной моноспецнфической аитнсы-вороткн.

Проведенные нами разработки по совершенствованию биологических, а затем и радиоиммунологическнх методов оп: ределения гонадотропных гормонов гипофиза послужили в нашей стране определенным стимулом в расширении исследований гонадотропной регуляции воспроизводительной функции у сельскохозяйственных животных (Е. Ф. Дьяконов, 1967, 1971; Г. А, Кононов, В. Н. Давыдов, 1974; А.-Ш. М. Амарбаев, 1974; А. А. Сысоев, Р. Г. Богачевл, 1974; Б. В. Лнпинскпй, 1975 и др.)> Однако в дальнейшем поиски еще более совершенных биологических, радиоиммунологическнх н других методов определения ФСГ и ЛГ в биологических жидкостях животных являются актуальной задачей эндокринологов, биохимиков и биофизиков.

2. СЕКРЕЦИЯ ГОНАДОТРОПННОВ В ТЕЧЕНИЕ ПОЛОВОГО ЦИКЛА У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

И В ПЕРИОД ОВУЛЯТОРНОГО ЦИКЛА У птицы *

Исследования концентрации обоих гонадотропннов в крови сельскохозяйственных животных были начаты намн в 1964 году, когда в отечественной и зарубежной литературе сообщалось лишь о факте обнаружения этих гормонов в крови коров и овец, но совершенно отсутствовали данные о динамике чгх уровня в течение полового цикла. Создавшиеся в то время предпосылки для изучения гонадотропннов в крови животных, а именно, (разработка специфических и высокочувствительных биологических тестов для определения ЛГ (A. Parlow., 1961) >н ФСГ (S. Steeiman a. F. Pohley, 1953) и техники взятия крови из кавернозного синуса, а также предложенный нами простой метод концентрирования гонадотропннов в крови (М. И. Прокофьев, Ю. А. Селиверстов, 1965) позволили проследить за изменением концентрации ЛГ и ФСГ в крови у коров и свиней в течение полового цикла, а также у индеек в течение овуляториого цикла.

.2.1. Изменения концентрации ЛГ и ФСГ в крови и моче у крупного рогатого скота в течение полового цикла

Судя по изменению концентрации аскорбиновой' кислоты в яичниках ложнобеременных юрыс после введения им

исследуемых образцов сыворотки крови коров, на фоне низкого . базального выделения ЛГ из гипофиза наблюдались значительные его выбросы в первый день охоты, на 10— И дни чг в фолликулярную фазу полового цикла (М. И. Прокофьев и др., 1966). Аналогичная закономерность в секреции ЛГ прослеживалась и 1Прн исследовании этого гормона в моче коров (табл. I).

Таблица I

Содержанке ЛГ в моче коров и телок в различные периоды полового цикла (в эквивалентах к [_Н—

Дин половою пик з а

Коиеитраиия ЛГ в коче, мкг/л

Р по отношению к —í-wy дню цикла

Р п ) отношению (С З-Ю-му jh.ím цнклз

4 1,14 + 0,16 >0,05

1 4 0,56 ±0,31 >0,05 >0,05

2—1 4 0,39±0,17 <0,05 >0,05

5—7 5 0,44±0,15 <0.05 >0,05

а—¡о 7 0,88±0,20 >0,05

ÍÍ-13 7 0,38±0Л0 <0,01 <0,05

М—16 5 0,30 + 0,07 <0,01 <0,01

17—19 2 0,22 ±0,07 <0,01 <0,05

При этом .предовул я торные пики ЛГ были обнаружены у всех обследованных животных, чего не удавалось достигнуть при определении гормона в сыворотке крови один раз в сутки, вследствие короткой продолжительности периода повышенного предовудяторного уровня ЛГ в крови коров. Второе существенное увеличение содержания ЛГ в моче у коров н телок наблюдалось на 8—10-й дни полового цикла.

Установленная нами закономерность в секреции ЛГ у коров в течение полового цикла (М, И. Прокофьев и др., 1966; М. И. Прокофьев, А. С. Биккулов, 1974) была подтверждена последующими исследованиями многих авторов как - путем биологического тестирования гонадотропина (Н. Karg et al„ 1967; N. Varían et al., 1968; А. А. Сысоев, 1974), так и путем радиоиммунологического его определения (D. Schams а. Н. Karg, 1969; R. Snook et al., 1971).

Аналогичная закономерность установлена нами и в изменении концентрации ФСГ в крови коров в течение полового цикла (табл. 2).

Судя по изменению массы яичников крыс после введения им сыворотки крови корон по сравнению с этим показателем

ю

Изменение массы яичников крыс после введения им сыворотки крови, взятой от коров в разные дни полового цикла

Дни поло вот о цикла

Масса яичников крыс, в процентах к контролю

1. 8 134,5+11,3 >0,05

2 4 115,1 ±4,9 <0,01

3-4 8 120,2 ±5,6 <0,05-

5—6 5 120,6 ±6,7 <0,05

7—8 6 117,9 ±5,2 <0,01

9—10 9 128,8 ±6,5 >0,05

И —12 6 139,6 ±8,1 >0,05

13—14 6 131,9 ±5,0 >0,05

15—16 9 113,8 ±4,7 <0,05

17—18 4 137,8 ±9,7 <0,01

19—21 11 147,9 ±8,5

у крыс, которым вводили физиологический раствор, подъем уровня ФСГ в крови коров происходил в середине полового цикла, — на 9—12-й дни, в фолликулярную фазу цикла, — на 17—21-й дни и в день охоты. Наиболее заметный подъем уровня ФСГ в крови коров наблюдался в дни, предшествующие охоте.

Ввиду ннекой чувствительности биологических методов определения ФСГ и некоторых трудностей в осуществлении радноиммунологического исследования этого гормона имеющиеся в литературе сведения об изменении концентрации его в крови в течение полового цикла очень скудны. Поэтому полученные нами данные можно сравнить лишь с исследованиями Н. Hacket a. H. Hafs (1969) и С. Desjardîns а. H. Hafs (1968), изучавших изменение концентрации ФСГ в гипофизе телок в течение полового цикла. Эти авторы отмечали снижение концентрации ФСГ в гипофизах телок между 18-м днем полового цикла и началом охоты, а также в середине цикла. Как показано выше, именно в эти периоды полового цикла нами обнаружено повышение уровня ФСГ в крови коров.

Таким образом, этими исследованиями впервые было продемонстрировано, что у коров, наряду с предовуляторным, наблюдаются дополнительные подъемы уровня обоих гонадотропииов в крови в другие фазы полового цикла

(М-; И. Прокофьев и др., 1966). Эти наблюдения позволили лам выдвинуть положение о ритмичном выделении ЛГ и ФСГ гипофизом коров на протяжении полового цикла.

В крови труднооплодотворяющихся коров были отмечены заметные отклонения от нормы в динамике уровня ЛГ в предовуляторный период. Это послужило основанием для проведения специальных исследований содержания Л Г в крови коров в этот период полового цикла (М. И. Прокофьев и др., 1971).

Судя по изменению концентрации аскорбиновой кислоты в яичниках крыс после введения им сыворотки крови коров, концентрация ЛГ в крови животных, оплодотворившихся в исследуемую охоту, была значительно выше, чем этот показатель у коров, оплодотворившихся после многократных осеменений (Р<0,01), Таким образом, нами была установлена прямая зависимость между уровнем ЛГ в крови коров в предовуляторный период и их оплодотворяемостью. Наличие такой зависимости было в последующем подтверждено К. АУеИетап а. Н. НаГз (1972). Это создает предпосылки для разработки способа повышения оплодотворяемостп коров путем усиления ЛГ-активиости в период охоты введением, например, хорпонического гопадотропина (ХГ) для создания оптимальных условий, обеспечивающих проявление овуляции и формирование полноценного желтого тела. В этой связи необходимы дальнейшие исследования для уточнения сроков ц доз введения ХГ пли других препаратов, содержащих ЛГ-актнвность пли стимулирующих секрецию эндогенного ЛГ.

2. 2. Изменение концентрации ЛГ в крови свиней в течение полового цикла

Циклические изменения ЛГ у свиней исследовали в крови, взятой из кавернозного синуса, где, как показали наши исследования, концентрация этого гормона значительно выше, чем в периферической крови: во всех образцах сыворотки крови, взятой из кавернозного синуса (гнпофизарная кровь), был обнаружен ЛГ биологическим методом, тогда как только в трех из четырнадцати образцов крови, взятой из кровеносных сосудов хвоста (периферическая кровь) удалось определить гормон этим методом.

Максимальный подъем ЛГ в нрови свиней наблюдался через 12 часов после начала охоты (табл. 3), Повышенная предовул я торная секреция ЛГ у большинства свиней продолжалась не менее 36 часов. V (2

Содержание ЛГ в сыворотке крови, взятой из кавернозного синуса свиней в течение периода охоты (в эквивалентах к NIH—LU—В)) (п=5)

Показатели Время после начала охоты (э часах)

0 6 | 12 j 24 36

Коипентрацня ЛГ - "*'=—■ ~ . ^

в сыворотке крови,

мкг/100 мл 8,4± 1,1 19,1 ±5,2 26,0±5,2 13,1 ±2,5 10.0.

Р по сравнению С уровней Л Г через 12 часов после начала охоты <0,05 >0,05 >0,05 <0,05

В последующих экспериментах была прослежена динамика уровня ЛГ в крови, взятой из кавернозного синуса свиноматок до и после охоты. Концентрация ЛГ в гипофнзар-ной крови свиней в период охоты повышалась в 3—4 раза в сравнении с уровнем его в течение 2—3-х дней, предшествующих охоте и после нее (14,1±2,5 — 19,4±2,8 против 4,6±1,5 — 5,2±1,1 мкг/100 мл). В другие дни полового цикла концентрация ЛГ в сыворотке крови свиней, взятой из кавернозного синуса, колебалась от неопределяемого уровня до 3—5 мкг/100 мл. На фоне пониженной секреции ЛГ вне периода охоты обнаруживались небольшие подъемы его уровня в крови свиней, особенно во второй половине полевого цикла (М. И. Прокофьев, Ю, А, Селиверстов, 1965).

Исследования содержания иммунореактивности ЛГ в крови свиней с короткими интервалами времени позволили

\Vilfinfer е^ а1. (1973) обнаружить помимо нредовулятор-ного подъема концентрации ЛГ, от 5 до 14 пиков этого гормона в другие стадии полового цикла, что подтверждает наши данные о пульсирующем характере его секреции у;свн-ией. - ■

2.3. Секреция гонадотропинов в период овуляторного цикла у индеек

Исследования обоих гонадотропинов у индеек проводили в цельной (нефракционированной) сыворотке крови, так как концентрация в ней ЛГ и ФСГ значительно выше, чем у домашних животных. Кроме того, благодаря крупному раз-

/

меру индейки, по сравнению с другими видами птиц, от нее можно брать достаточное количество крови. Поэтому нам впервые удалось проследить изменение уровня не только ЛГ, но и ФСГ в крови птиц в течение овуляторного цикла с помощью биологического метода тестирования этого гормона (М, И. Прокофьев, К. И. Бахитов, 1970).

Анализ динамики уровня обоих гонадотропннов в крови индеек в течение овуляторного цикла показывает, что пики этих двух гормонов не всегда совпадают. Синхронный подъем уровня ФСГ «и ЛГ в крови индеек хорошо обозначился за 14,5 часов до овуляцнн. Однако в течение 10 часов, предшествующих овуляции, обнаружился только один подъем уровня ЛГ и два подъема уровня ФСГ в крови индеек, один из которых предшествовал, а другой следовал за последним предовуляторным пиком ЛГ. При этом за 0,5 часов до овуляции подъем уровня ЛГ совпал с ¡резким снижением концентрации ФСГ в крови индеек. Непосредственно перед овуляцией концентрация обоих гормонов в их крови упала до низкого уровня.

* *

Подводя итоги этому разделу исследований, можно заключить, что у крупного рогатого скота и св'иней, а также у индеек обнаруживается общая характерная закономерность в динамике секреции ЛГ, заключающаяся в значительном подъеме уровня этого гормона в крови в предовуляторный период и проявлении вторичных подъемов в другие фазы полового цикла. Вместе с тем, отчетливо определяются и видовые отличия в динамике выделения ЛГ по срокам, продолжительности и интенсивности секреции как в предовуляторный, так и в другие периоды полового цикла.

Как у крупного рогатого скота в течение полового цикла, так и у птицы (индеек) в течение овуляторного цикла выявлены синхронные к асинхронные подъемы уровня ФСГ в крови относительно подъемов уровня ЛГ. Можно предполагать, что разные сроки проявления повышенной секреции; ФСГ и ЛГ, а следовательно, и соотношение их уровней в гкрови животных и птицы обусловливают циклические зако-•номерности развития фолликулов и их овуляцию. Однако ■сущность этих явлений окончательно не выяснена. Необходимы дальнейшие исследования динамики секреции обоих 1гонздотропинов с короткими промежутками времени в со-шоставлении с анализом функционального состояния струк-' турныхэлементов яичника, ,

3. ВЛИЯНИЕ ЭКЗОГЕННЫХ ПРОГЕСТАГЕНОВ

И ПЛАЦЕНТАРНЫХ ГОРМОНОВ НА СЕКРЕЦИЮ ГИПОФИЗАРНЫХ ГОНАДОТРОПИНОВ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Накопленные нами н другими исследователями сведения об изменении уровня гонадотропных гормонов гипофиза в крови у разных видов животных позволили глубже понять роль центральной эндокринной железы — гипофиза в регуляции функции половых желез у самок в разные периоды полового цикла. Между тем, в целостном организме существуют и обратные влияния со стороны органов-мишеней, в частности половых желез, на гипоталамо-гнпофизарный комплекс, а также так называемая короткая обратная связь между гипофизом и гипоталамусом. Не познав закономерностей этого взаимодействия, 'невозможно успешно решать проблему управления функцией размножения животных.

Аналитический обзор литературы показывает, что к настоящему времени накоплено достаточно много сведений о месте приложения регуляторного действия основных гормонов яичника, но влияние этих гормонов на гонадотропную функцию гипофиза остается недостаточно выясненным. Еще менее изучено влияние синтетических половых стероидов и особенно гестагенов пролонгированного действия на гипо-таламо-гипофизарный комплекс, что особенно важно знать в связи с широким использованием их для регуляции половой функции у сельскохозяйственных животных. Недостаточно накоплено в литературе данных о влиянии плацентарных гормонов (СЖК и ХГ) на секрецию гипофизариых гопадотропинов, а к началу проведения настоящей работы эти сведения по сельскохозяйственным животным совершенно отсутствовали.

3.1. Гестагенная активность и длительность действия различных стероидных производных

В качестве препаратов гестагенного действие нами использовались производные 17а-оксипрогестерона, ранее мало исследованные. Почти все исследуемые стероидные производные б'ылчг синтезированы во Всесоюзном на5учно-ис-следовательском химико-фармацевтическом институте имени С. Орджоникидзе в порядке творческого сотрудничества с нашим институтом. При этом мы надеялись, что некоторые из полученных спиртов и их эфиров будут обладать повышенным сродством к прогестинным рецепторам в органах-

мншенях. Кроме того, мы полагали, что полученные соединения будут обладать более длительной «жизнеспособностью» как гестзгены, вследствие продления их метаболического пути в связи с внесением еще 1—2 стадий ферментных превращений. Исходя из этих предпосылок, представлялось возможным выявление оригинальных, более активных препаратов с заданной длительностью действия,

В процессе сравнительного изучения гестагенной активности 17 различных стероидных производных выявлены соединения, активность которых многократно превышает этот показатель у исходных препаратов. Анализ структурно-функ-цнональных взаимосвязей исследуемых стероидов позволил установить, что биологическая активность производных прогестерона при однократном парентеральном введении зависит от «защиты» определенных функциональных центров стероидной молекулы. Так, введение метильной группы в 6-е положение стероидной молекулы Д6-дегндро 17 я-ацето-ксипрогестерона н образование таким образом ацетата ме-гестрола увеличивает активность препарата более чем в 5 раз. Или введение Д6-двойиой связи в стероидную молекулу 17-КОП и образование' в результате этого превращения Де-дегидро-17 а-капронил-оксипрогестерона увеличивает активность препарата в 40 раз. Заметное увеличение активности препарата отмечено также при введении метиленовой группы в 16-е положение стероидной молекулы.

Как показал функционально-структурный анализ, пролонгация действия стероидных производных определяется превращением (ацилпрованием) 3-оксистероидов в эфиры жирных кислот (уксусной и особенно капроновой). Препараты этого типа проявляют прогестагенное действие в течение 10—15 суток после однократного парентерального введения. К ним относятся: 17-КОП, диацетат прегиендиолона, 3-ацетат 17-капронат прегнепдиолона, мегестрола капронат, ацетат хлорсуперлютина, ацетат меленгестрола, ацетат меп-регенола и диацетат мепрегенола. Эти прогестагены представляют интерес для разработки новых приемов синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных.

Таким образом, ■ анализ структуры, и биологического действия исследуемых препаратов позволил получить новые данные, раскрывающие биологнческую роль отдельных структурных элементов испытуемых стероидных соединений. Эти данные создают предпосылки для создания совместно с химиками новых гестагенов с заданными биологическими свойствами. С учетом выявленной нами удовлетворительной пролонгации действия-(10—15 суток) и доступности для практического использования в связи е- промышленным произ-16.

родством препарата в нашей стране, широкому испытанию па сельскохозяйственных животных был подвергнут 17-КОП.

3.2. Влияние 17-КОП на экскрецию Л Г с мочой у половозрелых телок и оварнэктомнрованных коров

В опыте на половозрелых телках черно-пестрой породы 17-КОП вводили однократно лодкожно в дозе 1500 мг на 9—13-й дни полового цикла. Как видно из таблицы Ч, в первые 7 дней после введения 17-КОП экскреция ЛГ с мочой у большинства телок заметно повышалась, а затем-снижалась до исходного уровня.

Таблица 4

Экскреция ЛГ с мочой у телок после обработки их 17-КОП

Период исследования мочи

Концентрация Л Г, м кг /л

До обработки 17-КОП 0,47 ±0,14

С 1-го до 7-го дня после обработки 1 Й0±0,47

С 8-го до 33-го дня а осле обработки 0,31 ± 0,04

С 14-го до 18-го дня после обработки 0,76±0,12

С 19-го до 32-го дня после обработки 0А5±0,10

В день охоты 0,94±0,12

Примечание. ЛГ — выражен в эквивалентах к LH— M^l1 мг LU— М2=2,55 мг МШ—LH—S3).

Ввиду того, что первые 7 дней после введения 17-КОП совпадали с фолликулярной фазой полового цикла, можно предположить, что повышенное выделение ЛГ в указанный период после обработки совпадало с циклическим выбросом этого гонадотропина. Вместе с тем полученные данные позволяют заключить, что введение телкам 17-КОП во второй половине полового цикла не тормозит циклическое выделение ЛГ. Второй подъем уровня ЛГ в моче телок наблюдали на И-—18 дни после указанной обработки, то есть после окончания прогестагениого действия 17-КОП, Вслед за этим концентрация ЛГ в моче падала до исходной величины н на этом уровне сохранялась до проявления второй синхронизированной охоты, В период проявления второй синхронизированной охоты, а у двух из четырех телок и за 4—5 дней до нее, экскреция ЛГ с мочой повышалась почти вдвое по сравнению с предшествующим периодом.

После обработки о в ар иэ кто м и ррва вн ых коров 17-КОП в дозах 1500—2000 мг в первые 7—8 дней не наблюдалось 2—6688 17

заметного снижения) повышенной экскреции Л Г, вызванной удалением яичников. Однако в период с 8 до 18-го дня концентрация этого гормона в моче снижалась в 3—5 раз. На 18-й день после обработки у овариэктомированных коров было отмечено заметное повышение экскреции ЛГ с мочой, а к 20-му дню новое его снижение.

Анализ полученных данных о влиянии прогестагена пролонгированного действия на гонадотропную функцию гипофиза у ннтактных телок и овариэктомированных коров позволяет отметить общие характерные закономерности, заключающиеся в отсутствии ингибирующего влияния 17-КОП на секрецию ЛГ в момент появления экзогенного прогестагена в крови (в первые дни после обработки), в торможении выделения этого гонадотропипа в последующие дни и в стимуляции гонадотропной функции гипофиза при его исчезновении {через 14—18 дней после обработки).

3.3. Влияние прогестерона на секрецию гонадотропинов у индеек

Введение прогестерона за 36—38 часов до овуляции вызывает атрезкю фолликулов в яичниках кур у. а. И. Ргарв , 1949), а за 2—24 часа до ожидаемой овуляции — ускоряет ее осуществление (К. Игарэ, 1955). Эти наблюдения дали авторам основание предположить, что воздействие прогестерона на гонадотропную функцию гипофиза у птиц имеет двуфазный характер: вначале стимулирующий, а затем тормозящий ее.

Результаты этих экспериментов позволяют лишь косвенно судить о влиянии прогестерона на секрецию гонадотроп-ных гормонов из гипофиза птицы и только в течение короткого периода времени после обработки. Поэтому представляло интерес проследить непосредственно за характером изменения ЛГ и ФСГ в крови индеек под влиянием экзогенного прогестерона в течение длительного периода.

Исследования проводили на узбекских бронзовых индейках в период насиживания, когда гонадотропная функция гипофиза понижена и не имеет заметных изменений в отличие от несущихся птиц.

Проведенные нами (М. И. Прокофьев, К. И. Бахитов, 1970) наблюдения позволили заключить, что через, двое и более суток после введения прогестерона, концентрация гонадотропинов в крови индеек находится на минимальном тоническом уровне, наблюдаемом обычно в периоды их спада в течение овуляторного цикла и в период проявления индейками инстинкта насиживания. Эти наблюдения дают нам основание уточнить предположение указанных выше авторов 18

в том отношении, что тормозящий эффект прогестерона на гонадотропную функцию птиц распространяется только на предовуляторные подъемы гоиадотропннов, но не снижает их тоническую секрецию.

Длительное исследование уровня гоиадотропннов в крови индеек после введения прогестерона позволило нам обнаружить у птиц, как и у млекопитающих повышение уровня гонадотропинов в крови после прекращения действия прогестерона, то есть проявление «rebound» эффекта. При этом начало повышенной секреции ФСГ предшествовало увеличению секреции ЛГ. В отличие от млекопитающих повышенная секреция обоих гоиадотропннов у индеек после прекращения действия прогестерона сохранялась в теченне более длительного периода (несколько суток). Несомненно,* что это /сопровождалось и усиленным синтезом гонадотропинов, так как длительная секреция их на повышенном уровне не может быть обеспечена только накоплением гонадотропинов в гипофизе нндеек.

Поскольку установлено, что насиживание у птицы вызывается пролактнном (F. Cherms et al., 1962; Y. Yamashida, 1958), то прекращение насиживания под действием прогестерона обусловлено, по-видимому, также и торможением секреции пролактина; Это явление было принято в основу разработанного нами метода торможения инстинкта насиживания у индеек. Метод заключается в хздно-двукратной внутримышечной инъекции клохчущим индейкам прогестерона в дозе 30 мг. Через один день после инъекции прогестерона индейки прекращают насиживание и через 14—18 дней возобновляют яйцекладку. Предложенный метод позволяет повысить яйценоскость у этого вида птнцы примерно на 18%.

3.4. Влияние плацентарных гонадотропинов на содержание ЛГ-активности в крови животных

Исследование влияния плацентарных гонадотропинов на содержание ЛГ в гипофнзарной и периферической крови проводили на свиньях крупной белой породы 10—12-месячного возраста. Обработку свиней проводили подкожно в лютеи-цовую фазу полового цикла препаратом ХГ в дозе 5 и. е., а СЖК в дозе 7 МЕД на 1 кг живой массы.

Через 3 часа после введения ХГ уровень ЛГ в гипофизарной крови, взятой из кавернозного рипуса и в периферической крови, взятой из сосудов хвоста, достигал максимального значения (>32 мкг/100 мл). Этот уровень ЛГ сохранялся в течение 6—12 часов после введения ХГ. Однако в 2*

периферической крови уже через б часов и особенно отчет-диво через 12 часов после инъекции ХГ, уровень ЛГ-актив-пости резко снижался.

Одинаково высокий уровень ЛГ-актявности как в крови из кавернозного синуса, так н в периферической крови, взятой через 3 часа после введения ХГ, можно рассматривать не только как показатель уровня эндогенного ЛГ, а, по-видимому, главным образом, как величину. ЛГ-акгнв-ностн введенного ХГ. Вследствие "быстрого распада и выведения ХГ из кровяного русла его ЛГ-активиость в периферической крови падала вдвое уже через 6 часов после введения; Полученные данные о длительности полураспада ХГ в циркулирующей крови хорошо; совпадают с данными Л. Parlow (1961), который установил, что при внутривенном введении этого гонадотропина крысе период его полураспада составляет около 5 часов.

Ввиду того, что через 6 и даже через 12 часов после введения ХГ, уровень ЛГ в крови свиней, взятой из кавернозного синуса, сохраняется таким же, как и в первые 3 часа после обработки ХГ, можно предполагать, что повышенный уровень ЛГ в эти сроки после обработки ХГ является результатом стимулирующего влияния экзогенного гормона на выделение ЛГ из гипофиза.

Повышенная ЛГ-активность в гипофизарной крови свиней, обработанных СЖК, сохранялась значительно дольше, чем после обработки ХГ (4 суток против 12—24 часов). Это объясняется, по-видимому, как более длительным периодом полураспада СЖК, продолжительность которого при внутривенном введении крысе составляет 26 часов (A. Parlow а. D. Ward, 1961) против 5 часов для ХГ, так и более медленным рассасыванием белкового субстрата СЖК из места его введения.

Выявленное нами повышение ЛГ-активности в крови свиней и коров после введения им плацентарных гонадотро-пинов, и особенно результаты экспериментов одновременного определения ЛГ в гипофизарной и периферической крови свиней, дают основание полагать о существовании трансги-пофизэрного механизма воздействия указанных гонадотро-линов на яичники самок. Однако ввиду того, что опыты проводили на ннтактных, а не на овариэктомированных животных, нельзя исключить воздействия плацентарных гонадо-тропнпов на гипофиз через половые гормоны яичника.

Полученные данные о продолжительности повышенного уровня ЛГ в крови животных после введения ХГ и СЖК могут быть использованы для уточнения сроков и кратности применения плацентарных гонадотропинов при стиму-20

ляции функции яичкнков, точного контроля сроков овуляции и для совершенствования методов вызывания суперовуляции.

4. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ЯИЧНИКАХ И ЭНДОМЕТРИИ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ, ВЫЗВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫМИ ПОЛОВЫХ ГОРМОНОВ И ГОНАДОТРОПИНАМИ

4.1. Количественные изменения основных структурных элементов в яичниках и эндометрии коров в течение, полового цикла

Для оценки влияния экзогенных гормонов на яичники и матку коров и телок необходимы сведения об изменении структурных элементов репродуктивных органов? у самок этого вида животных в течение естественного полового цикла. Учитывая наличие недостаточной информации о количественных изменениях структурных элементов яичника н эндометрия коров в течение полового цикла нами проведены такие 'Исследования на 52 коровах, помесях черно-пестрой породы. В яичниках коров в середине полового цикла, на 9—12-й дни, выявлено существенное увеличение массы всей фолликулярной жидкости (3,50±0,56 г против 2,16± ±0,34 — 2,82±0,25 г в другие дни цикла) и наибольшего фолликула (1,32^0,33 г против 0,51 ±0,10 — 0,94¿0,13 г в другие дни цикла), что совпадает с первой волной роста фолликулов, отмеченной Е. 1^а]акозЫ (1960). Вместе с тем, в отличие от мнения указанного автора, нам (М. И. Прокофьев и др., 1975) впервые удалось показать, что у этого вида животных происходит по меньшей мере три, а ие две волны роста фолликулов в течение полового цикла. Об этом свидетельствуют полученные нами данные о ритмичном изменении числа фолликулов диаметром 5,1 мм и более в течение полового цикла. Число их увеличивается на 5—6, 12— 14 и 18— 19-й дни полового цикла примерно вдвое по сравнению с предыдущим периодом.

Циклические изменения в яичниках у коров вызывали характерные изменения основных структурных компонентов эндометрия. Нами обнаружено заметное утолщение эндометрия в фазу расцвета желтого тела, с 7 до 12-го дня, увеличение высоты покровного эпителия в период с 5 до 14 дня после овуляции, отмечена также тенденция к.увеличению высоты железистого эпителия в лютеиновуго фазу полового цикла. . .....',"

4.2. Действие 17-КОП и эстрадиола валерманата (ЭВ) на яичники и эндометрий коров

После введения н ел а ктнр у to щи м коровам или телкам 17-КОП а дозе 1500 мг на 4—8-й дн>и полового цикла и убоя в сроки предполагаемой овуляции только у одной трети из числа животных в яичниках были обнаружены желтые тела, тогда как после аналогичной обработки во второй половине цикла (на 9—15-й дни) функционирующие желтые тела были обнаружены у всех обработанных животных. Отсюда можно заключить, что обработка коров 17-КОП в указанной дозе в первой половине полового цикла тормозит циклическую овуляцию примерно у 70% животных, тогда как аналогичная обработка их во второй половине цикла не задерживает проявления овуляции. Однако образовавшиеся в результате овуляции желтые тела, по-видимому, быстро регрессируют. Так, при убое животных на 14—20-й дни после обработки мы не обнаруживали функционирующих желтых тел независимо от того, в какую стадию полового цикла проводили обработку.

Таким образом, в этих опытах было установлено лити-ческое влияние 17-КОП на желтое тело коровы, образовавшееся в период действия указанного прогестагена. Природа этого эффекта может быть объяснена на основе локального м а точ н о - я ич и и ков о г о цикла, заключающегося в выделении эндометрием литического фактора, если прогестагенное воздействие продолжается дольше времени функционирования циклического желтого тела (R. Short, 1972).

Определение массы всей фолликулярной жидкости н наибольшего фолликула в яичниках обработанных коров позволило установить, что при наличии желтых тел эти показатели не отличаются от данных, полученных при обследовании циклирующих животных. Однако, если функционирующие желтые тела в яичниках отсутствуют, то масса фолликулярной жидкости под действием 17-КОП увеличивается в 1,5—2,0 раза.

На основании полученных данных мы пришли к заключению о необходимости затормозить процесс переразвития фолликулов путем одновременного введения прогестагена и эстрогена пролонгированного действия, который, как известно, тормозит синтез ФСГ (J. Shelton a; .L. Casida, 1970) а развитие фолликулов (N. Greenstein et а!., 1958; С. Kallenbach cí af„ 1964).

Опыт по изучению одновременного влияния 17-КОП в дозе 1500 мг и ЭВ в дозе 5 мг па состояние яичников проводили на 44 нелактирующих коровах 5—6-летнего 22

возраста с живой массой 400—500 кг. Установлено, что на 10—15-й дни после обработки коров одним прогестагеном у 75% животных в яичниках имеются крупные фолликулы диаметром 16 мм и более, тогда как после обработки двумя препаратами в яичниках коров обнаруживаются фолликулы диаметром не более 10 мм. Эти наблюдения подтвердили наше предположение о торможении процесса переразвития фолликулов в яичниках коров путем одновременной их обработки эстрогеном и прогестагеном.

Результаты более детального исследования фолликулов показали, что отличительной особенностью фолликулярной системы в яичниках коров, обработанных прогестагеном совместно с эстрогеном, было образование вдвое большего числа фолликулов диаметром до 5 мм к 18-му дню после введения препаратов по сравнению с яичниками коров, получивших один прогестаген {табл. 5). Это явление мы объясняем тем, что в яичниках коров, обработанных одним прогестагеном, имелись переразвитые фолликулы, которые тормозили развитие мелких.

Таблица 5

Изменения в фолликулярном аппарате яичников коров под действием 17-КОП и ЭВ

Обработка

Сроки Число

убоя Число фолли-

после кулов

обра- коров на пару

ботки яични-

(дней) ков

В том числе со размерам, мм

до 5.0

5, (-9.0

9,1 и более

17-КОП в дозе 18 4 27,8 25,2 1.4 1,0

1500 мг 23 3 14,3 13,1 0.9 0,3

> 28 4 23,3 19,4 3,1 0,8

> 33 4 24,0 20,8 2,4 0,5

» 38 4 55,4 54,2 0,6 0,3

То же плюс 5 мг ЗВ 18 4 47,8 46,0 1,3 0,5

23 3 29,3 28,7 0,3 0,3

> 28 4 21,8 19,6 1,0 1,2

> 33 4 31,1 28,4 1,8 0,9

» 38 4 30,9 28,3 2,0 ' 0.3

При сравнении толщины эндометрия, высоты покровного эпителия, числа маточных желез и высоты железистого эпителия у подопытных коров в период с 18 до 38-го дня после обработки и у контрольных животных в течение естественного полового цикла не обнаружено значительных различий.

Таким образом, проведенные исследования действия 17-КОП и ЭВ на репродуктивные органы коров дают основание заключить, что после окончания действия испытуемых

стероидов в фолликулярной системе яичников и в морфологическом строении матки коров не наблюдается значительных отклонений от нормы, что могло бы препятствовать оплодотворению.

4.3. Разработка схемы гормональной

обработки коров и телок для точного контроля времени

овуляции

Морфологические исследования янчннков у коров и телок в разные сроки после обработки 17-КОП показали, что на 14—20-й дни после введения эффективной дозы препарата в яичниках более чем у 90% животных имелись крупные фолликулы, но не было функционирующих желтых тел, то есть функциональное состояние яичников было аналогичным фолликулярной фазе естественного полового цикла. Именно в эти сроки после обработки коров 17-КОП нами было обнаружено повышение экскреции ЛГ с мочой. Однако овуляция наступила лишь у 50% обработанных коров. Это могло быть-обусловлено либо недостаточным выбросом овуляториого гормона, либо пониженной чувствительностью к нему яичников.

С целью провоцирования овуляции у каждого животного были проведены опыты на 147 коровах и телках, которым на 14—18-й дни после введения 17-КОП, то есть в период, когда в яичниках почти всех животных отсутствовали желтые тела, по имелись крупные фолликулы, дополнительно вводили разные дозы прогестерона, эстрадиола бензоата, ХГ, а также ХГ в сочетании с СЖК или эстрадиола бензоата в сочетании с ХГ.

По данным W. Hansel a. G. Trimberger (1955), прогестерон, введенный в начале охоты в малых дозах (5—10 мг), ускоряет овуляцию у коров. В наших экспериментах применение этой схемы обработки повысило число овулнрующих животных по сравнению с контролем на 25—33,3%. Высокая доза прогестерона (100—200 мг) вызывала торможение овуляции в первые пять дней после его введения, а в последую- 1 щем оказывала стимулирующее влияние на овуляцию (число коров, проявивших овуляцию, увеличилось на 16,7—25% по сравнению с контролем), что свидетельствует о проявлении : «rebound» эффекта.

Принимая во внимание роль эстрогенов, как стимуляторов выделения овуляториого гормона, эстрадиол-бензоат был ис--пытанв двух дозах — 5 и 10 мг на коровах, получивших 17-КОП. Низкая доза эстрогена не оказала действия, а высокая увеличила число овулировавших животных на 25%. 24

Для более эффективного вызывания овуляции вводил» XГ, который как было показано выше, действует непосредственно на яичники и трансгипофнзарно, вызывая выделение эндогенного ЛГ. Применение ХГ в дозе 2,0 тыс. и. ед.. на коровах, получивших 17-КОП, вызывало овуляцию у 100% животных при внутривенном введении и у 66,7% при внутримышечном .Увеличение дозы ХГ до 3,0 тыс, и. ед. обеспечивало-проявление овуляции у 100% животных и при внутримышечном введении. Введение СЖК совместно с ХГ снизило стимулирующий овуляторный эффект последнего, по-видимому, в. связи с нарушением в организме оптимального соотношения ФСГ : ЛГ.

В целях снижения дозы ХГ, а также для обеспечения проявления признаков охоты было применено совместное введение ХГ и эстрадиола бензоата. Применение такой комплексной обработки ХГ в дозе 1—2 тыс. и. ед. и эстрадиола бен-зоата в дозе 5—10 мг обеспечило сннхронное проявление овуляции у всех подопытных животных .

Отсюда можно заключить, что введение коровам овуля-торных гормонов (ХГ или ХГ плюс эстрадиол бензоат) на фоне предварительной обработки 17-КОП обеспечивает наступление овуляции в точно регламентированные сроки, что открывает возможности осеменения коров без выявления у них охоты.

4.4. Действие 17-КОП на яичники н эндометрий овец

Первый опыт был проведен на 66 каракульских овцах в. случной сезон (октябрь-ноябрь). 17-КОП в дозе 150—200 мг вводили однократно подкожно в лютеиновую фазу полового-| цикла. При убое овец на 13 и 18-й дни после введения препа-

рата в дозе 200 мг в яичниках не обнаружили свежих желтых тел, что свидетельствовало об отсутствии овуляции в эти дни i и в предшествующие им сроки. На 23—27-й дни после обра-

ботки у 42,9—66,7% овец были найдены свежие и сформированные желтые тела. Следовательно, первая волна овуляции наступала в период между 18 и 23 днями после введения 17-КОП. Судя по наличию свежих желтых тел, следующая волна овуляции наступала между 28 и 33 днями у овец, обработанных 17-КОП в дозе 150 мг, а у овец, обработанных 200 мг 17-КОП, ближе к 33-му дню и проявлялась более синхронно, чем у овец, обработанных 150 мг 17-КОП. Выявлена четкая зависимость между состоянием желтых тел. и числом и размером фолликулов в яичниках овец после обработки их 17-КОП. С появлением свежих жел-

тых тел в яичниках овец на 24-Й день после инъекции 17-КОП совершенно не обнаруживались фолликулы среднего и крупного размера (4,1 мм и более). На 28-й день после обработки в яичниках овец находили одновременно сформированные желтые тела и фолликулы среднего и крупного диаметра. И, наконец, на 33-й день после обработки и наступления второй волны овуляции в яичниках овец не находили фолликулов диаметром более 6,0 мм. Соотношение числа нормальных и а трети ческах фолликулов в яичниках обработанных овец колебалось от 1,0:1,1 до 1,0:1,3 и практически не отличалось от этого показателя у контрольных животных {1,1:1,4 — 1,0: 1,7). Одновременно наблюдали некоторое уменьшение толщины эндометрия и высоты покровного и железистого эпителия в матке овец в период с 13 до 28-го дня после обработки по сравнению с этими показателями у необработанных овец.

Второй опыт был проведен также в случной сезон на 37 овцах каракульской породы, 20 овцам 17-КОП был введен в дозе 200 мг в первой половине, а 17 овцам в той же дозе во второй половине полового цикла. Состояние яичников у подопытных овец исследовали путем двух- и трехкратной лапаро-томии (М. И. Прокофьев, Р. Б. Вахранов, 1975). В результате этих наблюдений не было обнаружено различий в характере реакции яичников у овец в зависимости от сроков обработки их 17-КОП в период полового цикла. Установлено, что первая волна овуляции наступает у 33,3—50,0% овец между 18—20 днями, а вторая у 66,7—75,0% овец около 30-го дня после обработки их 17-КОП. При повторной лапаротомин по меченым отдельным фолликулам и желтым телам установили, что крупные фолликулы в яичниках овей, подвергнутых гормональной обработке, могут функционировать более длительное время (до 16—17 суток), чем предполагалось ранее, и что зли фолликулы способны овулировать.

Третий опыт был проведен на 16 каракульских овцах также в случной сезон. 17-КОП вводили подкожно в дозе 200 мг овцам I группы на 6-й день и овцам II группы на 10-й день полового цикла. Животным контрольной группы в те же сроки вводили растворитель в тех же объемах. , На 14-й день полового цикла при лапаротомин у всех овец вылущивали желтые тела « определяли их массу. Установлено, что к этому времени средняя масса желтых тел в яичниках овец I пруппы (506,0+38,1 мг) уменьшилась статистически достоверно (Р<0,05), а у овец II группы это уменьшение было незначительным (622,5±31,7 мг) по сравнению с массой желтых тел овец контрольной группы (648, ±42,5 мг). Таким образом, в этом опыте отчетливо

проявилось литическое действие 17-КОП на циклическое желтое тело овцы, если обработка проводилась на 6-й, но не на 10-й день полового цикла. Это явление не может быть объяснено на основе существующих представлений о взаимосвязях между яичниками и" маткой (R. Short, 1972). По-видимому, требуются дополнительные исследова-, ния для выяснения механизма этого феномена. Выявлено 'также ингибнрующее влияние 17-КОП на проявление охоты у овец. Об этом свидетельствует торможение охоты в первые 10 дней после энуклеации желтого тела у обработанных овец и ее проявление через 2—3 дня после такой же операции у контрольных животных.

4.5. Влияние 17-КОП и ЭВ на яичники свиней

Исследования проводили на свиньях крупной белой породы 8—10-месячного возраста с массой тела 90—110 кг. 17-КОП -инъецировал» однократно в дозах от 200 до 500 мг, отдельно пли в сочетании с ЭВ в соотношении 50; 1. Сроки овуляции устанавливали путем убоя свиней на 17, 22 н 27-й дни после обработки.

При введении свиньям 200 мг 17-КОП отдельно или в сочетании с ЭВ овуляция наступила у 66,7% животных до 17 -го дня после обработки, У остальных животных овуляция была обнаружена в более поздние сроки: между 22 и 27 днями после обработки.

При увеличении дозы 17-КОП до 300 мг к 17-му дню после обработки овуляция установлена лишь у 33,3% свиней, а при сочетанном введении этой дозы 17-КОП и ЭВ к этому сроку после обработки овуляция была заторможена у всех обработанных животных. Это обеспечило высокую точность контроля овуляшги в яичниках всех свиней в более поздние сроки после обработки: к 22-му дню свежие желтые тела были обнаружены в яичниках всех свиней, обработанных одним 17-КОП, а на 22—27-й дин после введения 17-КОП и ЭВ свежие или сформированные желтые тела были также найдены в яичниках всех свиней этой группы. ♦

Введение 350 мг 17-КОП в сочетании с ЭВ также обеспечило удовлетворительный контроль сроков овуляции. Однако дальнейшее увеличение дозы 17-КОП до 400—500 мг как путем введения одного прогесгагена, так и в сочетании с эстрогеном не обеспечило синхронного наступления овуляции у большинства обработанных свиней.

В этом эксперименте было установлено, что как низкие дозы 17-КОП (200 мг), так и высокие (400—500 мг) вызывали образование переразвитых фолликулов у 11,1—58,3% свиней, тогда как введение 17-КОП в оптимальных дозах

(300—350 мг) не вызывало образование кистозиых фолликулов в яичниках свиней. На основании этих наблюдений мы пришли к заключению, что яичники свиней проявляют повышенную предраспсцлсцжекность к образованию кнстоз-ных фолликулов на введение как пониженных, так и особенно повышенных, по сравнению с оптимальной, доз прогестагена. По-видимому, этим можно объяснить неудачи многих исследователей синхронизировать охоту у свиней путем группового скармливания прогестагенов, так как этот способ их введения не обеспечивает точного дозирования препарата. Поэтому разработка способов синхронизации охоты и овуляции у свиней путем использования прогестагенов должна базироваться на использовании препаратов продленного действия, которые позволяют ограничиться одно-двукратной инъекцией определенной дозы, либо на основе изыскания приемов точного дозирования высокоактивных синтетических стероидов при оральном их применении. ■ ■ , ■

5. СИНХРОНИЗАЦИЯ ОХОТЫ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ ПУТЕМ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОГЕСТАГЕНА ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ

Критический анализ существующих приемов синхронизации охоты у животных приводит к заключению о целесообразности использования в этих целях прогестагенов пролонгированного действия. Проведенные нами исследования по изучению влияния одного из препаратов этого типа — 17-КОП — на гонадотропиую функцию гипофиза, состояние яичников и эндометрия у коров, овец и свиней значительно углубили наши представления о механизме действия испытуемой группы прогестагенов и послужили теоретической основой для разработки новых приемов регулирования вос-, производительней функции у самок сельскохозяйственных животных.

5.1. Синхронизация охоты у телок и сокращение сервис-периода у коров

Первый опыт был проведен на 61 телке осенью 1968 го-да^с целью выявления эффективной дозы 17-КОП для синхронизации охоты. Введение .препарата однократно в дозах 800 или 1000 мг в первой половине полового цикла не нарушало его продолжительности. Двукратная инъекция 17-КОП 28

по 600 мг с интервалом в 7 дней вызывала заметное торможение охоты у большинства обработанных телок, не обеспечивая синхронного ее проявления. Увеличите дозы 17-КОП до 1600 мг также путем двукратной инъекции по 800 мг с. интервалом в 7 дней вызвало удлинение полового цикла до 32—44 дней и синхронизацию охоты. Однократное введение-1300 мг 17-КОП в первой половине полового цикла вызвало заметный тормозящий эффект, однако сроки проявления охоты были растянуты между И и 30 днями после обработки. Дальнейшее увеличение дозы 17-КОП до 1500 мг при однократном введении затормаживало проявление охоты не менее, чем на 18—19 дней и обеспечивало синхронное ее проявление у всех телок на 18—21-й дни после обработки независимо от того, в какой период полового цикла вводили прогестаген.

Таким образом, было выяснено, что оптимальная доза 17-КОП при однократном введении для синхронизации охоты у телок близка к 1500 мг на животное (М. И. Прокофьев и ДР-, 1973).

В следующем эксперименте на 125 половозрелых телках, проведенном в разные сезоны года в условиях Узбекистана, было показано, что при однокрзтном парентеральном введении оптимальной дозы 17-КОП охота наступает начиная С 16—19 -го дня после обработки в течение б—9 суток в среднем у 70% телок (с колебаниями по сезонам года от 35,3% до 100%). Оплодотворяемость телок в первую синхронизированную охоту была значительно ниже нормы (43,8%). Это обусловл ено, с одной стороны, проявлением ановулятор-ной охоты у некоторых животных, как зго было показано в предыдущем разделе, а с другой стороны, нарушением баланса половых гормонов в крови, что было установлено нами косвенным путем по изменению физико-химических свойств цервнкального секрета (М. И. Прокофьев, С. С. Сейдаметов, 1975), Как показали наши исследования, индекс

_хлориды _ н

* остаточный белок в цервнкальной слизи телок в первую охоту после обработки 17-КОП был в 2,3 раза ниже, чем у необработанных ((2,5±2,9 против 29,8±6,1), а со вторую охоту не отличался от этого показателя у последних (25,6±6,2).

Телки, не пришедшие в охоту в указанные выше сроки после обработки 17-КОП или не оплодотворившиеся, проявляли ее синхронно в течение 8—10 дней па 35—43-й дни после обработки и нормально оплодотворялись (66,6%),- На основании этих данных мы пришли к заключению о целесообразности пропуска первой охоты и осеменении с 30-го дня

после введения 17-КОЛ. Экспериментальная проверка показала, что 83,3% животных проявляют, охоту в течение 10 дней на 30—39-й дни после обработки и 61,1% "3 них оплодотворяются после первого осеменения.

Наряду с этим для синхронизации охоты у телок была испытана та же схема гормональной обработки, что и для вызывания овуг1/Ш1ш) ц тсцчно регламентированные сроки. В опытах на 217 телках было установлено, что в результате инъекции 1500 мг 17-КОП и через 17—18 дней 1000— 1600 и. ед. ХГ плюс 5—10 мг эстрадиола бензоата синхронное героя в лен не охоты в течение двух суток наступает у 98— 100% животных, Оплодотворяемость телок в первую синхронизированную охоту была на 15—27% ниже, чем в спонтанную, но за два смежных осеменения она составила 85— 90%; В конечном итоге у обработанных телок оплодотворение наступило на 10—20 дней раньше, чем у контрольных. Ввиду того, что во вторую охоту после обработки сохранялся удовлетворительный эффект синхронизации и значительно повышалась оплодотворяемость было проведено выявление в охоте и осеменение телок начиная с 13-го дня после последней гормональной обработки, т. е. после введения ХГ и эстрадиола бензоата. В (результате проведения этого эксперимента было установлено, что такая организация осеменения телок после обработки позволяет примерно на 25 дней сократить сроки их плодотворного спаривания по сравнению с необработанными. Поэтому в целях снижения трудовых и материальных затрат на осеменение телок для практики животноводства целесообразно 'рекомендовать следующую технологию осеменения телок; за один месяц до начала осеменения ввести им 17-КОП, через 17—18 дней — ХГ и эстрадиола бензоат в указанных выше дозах, и через 13 дней после последней гормональной обработки выявить охоту и осеменять.

Разработанный нами метод синхронизации охоты у телок в точно регламентированные сроки был применен для сокращения сервис-периода у коров при обработке их в первый месяц после отела. Экспериментальная проверка метода в трех хозяйствах на 180 коровах показала, что применение указанной схемы гормональной обработки обеспечивает сокращение сервис-периода в среднем на 31 день. На основании данных продолжительности сервис-периода или межотельного периода у обработанных и контрольных животных по предложенной нами формуле был проведен расчет выхода телят на 100 коров, В результате сокращения сервис-периода выход телят на 100 коров в опытной группе увеличился в среднем на 9,8 теленка по сравнению с контролем.

5.2. Синхронизация охоты у овец

Исследования проводили на овцах каракульской породы в случной сезон, 17-КОП вводили однократно подкожно & дозах от 50 до 300 мг. В результате установлена четкая зависимость продолжительности торможения охоты у овец ог дозы 17-КОП. Обнаруженная нами зависимость была подвергнута регрессионному анализу на деск-компьютере Оли-вети (Италия), Апрокснмзция по формуле Т = аЦ-ву, где Т — продолжительность торможения охоты у овец, у — 1£До-, зы 17-КОП, — позволила математически получить регрессию с коэффициентами; а =—2,123; в= 14,7955. Выявленная зависимость оказалась высокодостоверной:

И*/ Т ч = 0,56 Г Р <0,001 1 Ме дозы 17. коп) *

Эта зависимость графически изображена на рис. 1.

Г

Таким образом, на примере овец продемонстрирована ■возможность математического предсказания вероятного , ответа продолжительности торможения сроков проявлений'охоты у животных от дозы прогестагена пролонгированного действия.

Лучший эффект синхронизации у овец был получен после введения 150—250 мг 17-КОП: у 69,2—77,7% овец охота проявлялась в течение 5—7 суток, начиная с 26—30-то дня после обработки. Оплодотворяемость обработанных овец по первому осеменению была примерно такой же, как? й в контрольной группе (62,5—83,8% в опытных и 73,0% в * контрольной). ...

5.3. Синхронизация охоты у свиней

Исследования проводили на ремонтных свиньях крупной *белой породы. Выявленные в лабораторных опытах эффективные варианты гормональной обработки свиней для вызывания овуляции были проверены (М. И. Прокофьев, Е. С, Прокофьева, 1975) в научно-производственных опытах с целью синхронизации охоты (табл. 6).

Более высокий эффект синхронизации проявился после введения Двух меньших доз препаратов — 300—350: мг 17-КОП и 6—7 мг ЭВ, — в сравнении с более высокими: их дозами — 400 мг и 8 мг соответственно (Р<0,01).

Г1о результатам первого осеменения оплодотворяемость свиней, получивших средние дозы препаратов, не отличалась от контрольных, а у свиней, получавших наименьшую дозу, была несколько ниже, чем в контроле, но разница между группами была статистически недостоверна (Р>0,05).

Применение высоких доз препаратов (400 мг 17-КОП^ и 8 мг ЭВ) значительно снизило оплодотворяемость свиней в сравнении с группой свиней, получивших среднюю дозу препаратов, и контрольной группой (Р<0,05). Это, по-видимому, было обусловлено кистозным перерождением фолликулов, о чем свидетельствуют результаты морфологических -исследований яичников свиней, обработанных указанными дозами испытуемых препаратов,

*

* *

Таким образом, разработанные нами приемы синхронизации охоты у крупного рогатого скота, овец, и свиней путем однократного введения прогестагена пролонгированного действия в сочетании с эстрогенами и ХГ выгодно отли-32

Таблица 6

Синхронность проявления охоты н оплодотворяемость свиней, обработанных гормональными препаратами

Доза, мг Обработано свиней Из них пришли в ох01 у в течение 6 дней Осеменено свиней Из них опоросились после осеменения Остались холостые

■ 17-КОП ЭВ первого второго и более

п % »1 % п % п %

300 6 66 58 87,8 62 36 58 Д 22 35,4 4 6,6

350 7 53 44 83,0 52 38 73,0 12 23,0 2 4,0

400 8 ■И 31 70,0 30 17 ■16,1 1 10,4

Контроль 41 17 41,4 39 27 69,2 0 15,1 6 15,4

даются от известных в литературе по доступности гормональной обработки животных н дают достаточно высокий экономический эффект. Вместе с тем следует подчеркнуть, что перспективы использования прогестагенов пролонгированного действия для регулирования воспроизводительной функции самок сельскохозяйственных животных далеко не исчерпаны. Дальнейшие исследования должны быть направлены на изыскание новых, более активных и менее дорогостоящих гормональных препаратов подобного действия и на совершенствование методов контроля охоты и овуляции у -самок, что позволило бы осеменять животных без выявления охоты,

6. ИЗУЧЕНИЕ ЭНДОКРИННЫХ МЕХАНИЗМОВ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ

Одним из важных этапов трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота является максимальное получение их путем вызывания суперовуляции у коров-доноров. Можно полагать, что индуцирование множественной овуляции у коров сопровождается проявленном комплекса физиологических явлений, которые отличаются от таковых при спонтанной овуляции. Отклонения в уровне половых гормонов в крови коров при вызывании суперовуляцни могут быть одной из причин нарушения транспорта яйцеклеток в половых путях самки (М. Harper а. М. Chang., 1971) и дегенерации зародышей, вследствие изменения условий среды в матке (Z. Dickman, 1959). Изучение особенностей эндокринной регуляции у коров позволяет выявить причины низкого выхода полноценных эмбрионов if создает предпосылки для разработки более эффективной технологии их трансплантации.

6. 1., Гипофизарно-яичниковые взаимоотношения у коров при суперовуляции

О взаимоотношениях между гипофизом и яичниками у коров при индуцировании суперовуляцни мы судили по содержанию гонадотропного (ЛГ) и половых гормонов (прогестерон, эстрадиол-17р) в крови. В первом опыте суперовуляцию вызывали введением 8 тыс. МЕД ГСЖК в фолликулярную фазу полового цикла и 2 тыс. и. е. ХГ в начале охоты. Т|ри из шести обработанных коров проявили охоту через 2—3 дня после введения ГСЖК и были объединены в г 34

I группу. Коровам И группы на 4-й день после обработки ГСЖК вводили дополнительно по 20 мг эстрадиола бензоа-та, В яичниках коров I и II групп было в среднем по 1,3± ±0,3 и 16,5±1,5 желтых тел, соответственно. Коровы I группы имели значительно меньший уровень прогестерона в сыворотке крови по сравнению с этим показателем у коров И группы в период, предшествующий охоте (0,56±0,09 нг/мл против 1,86±0,74 иг/мл) и особенно в первые пять дней после охоты (1,22±0,24 нг/мл против 3,67± 1,04 нг/мл, Р<0,05). Эту разницу между животными по концентрации прогестерона в крови в период, предшествующий охоте, мы объясняем более продолжительным половым циклом у коров II группы. Можно полагать, что введение коровам этой группы ГСЖК на фоне функционирующего желтого тела стимулировало функцию последнего, тогда как к моменту введения ГСЖК коровам I группы желтые тела находились в стадии регрессии и не реагировал« на обработку гонадотролином. Быстрый подъем уровня прогестерона в крови коров II группы в послеовуляторный период объясняется наличием у животных этой группы значительно большего числа вновь сфор-» мнрованных желтый тел, чем у коров I опытной группы.

Во втором опыте была применена другая схема вызывания суперовулящш: ГСЖК в дозе 8 тыс. МЕД вводили на 10-й день полового цикла и через 2 дня инъецировали 25 мг про-стагландила Фга «Дннопрост». Концентрация ЛГ в сыворотке крови коров, определяемая раднонммунологическим методом, через 24, 48 и 72 часа после обработки ГСЖК увеличилась в 2,2; 3,7 и 1,0 раза по сравнению с его базальным уровнем (табл. 7).

Таблгвда 7

Изменение концентрации Л Г и прогестерона в сыворотке крови коров после обработки ГСЖК и л роста г лаканном (п = 5)

Время определения горчоиа Концентрация (нг/мл1

ЛГ ! прогестерона

До обработки (базальнын уровень) После начала обработки: через 24 часа » 48 часов » 60 часов » 72 часа » 84 часа > 96 часов 3,2 ± 1,3 ■ 7,2 ±.1,2 11,8±2,2 6,2 ±2,6 5,0 ±0,01 3,03 ±0,29 2,16±0.64 ],76±0,51 ],83±0,61

Во гремя предовулятор-ного пика ЛГ 24,6 ±4,6 1,73 ±0,38

3* 35

Концентрация прогестерона в сыворотке крови, коров, подвергнутых обработке ГСЖК, а затем простаглзнднном,. снижалась на 40% через 12 часов после введения последнего или через 60 часов после начала обработки ГСЖК. В дальнейшем, через 24, 36 и 48 часов после введения простаг-ландина концентрация прогестерона в сыворотке крови коров составила 35—43% от базалыюго уровня. Однако, несмотря на резкое понижение концентрации прогестерона в крови коров .под действием простагландина, его уровень во время предовуляторного пика ЛГ оставался достаточно высоким, — около 2,0 нг/мл. Этот показатель был значительно выше того, который мы наблюдали во время охоты в сыворотке крови коров, не подвергнутых обработке ГСЖК, — около 0,5 нг/мл. Примерно в 4 раза меньший уровень прогестерона в крови коров наблюдал Н. НаТь (1976) после обработки их простагландином во время естественного полового цикла. Эта разница в действии простагландина на секрецию прогестерона у коров с естественным половым циклом: в отличие от животных, подвергнутых обработке ГСЖК, по-*в'идимому, обусловлена лютеотропным влиянием выявленной нами повышенной ЛГ-активности в крови коров после-введения им гонадотропина.

Радиоиммунологическое определение эстраднола-1в-сыворотке «рови коров, подвергнутых гормональной обработке с целью вызывания суперовуляции, позволило выявит^, более длительное по сравнению с естественным половым-циклом сохранение повышенного уровня эстрогенов в крови этих животных после овуляции. Одним из источников повышенной секреции эстрогенов у суперовулировавшнх коров, по-видимому, являются крупные неовулировавшие фолликулы. Другим источником могут быть быстро растущие фолликулы средней величины, стимулируемые ГСЖК, так как известно, чго его действие сохраняется несколько диен.

Таким образом, в результате проведенных исследований' установлены значительные отклонения в уровне пшофизар-ных н яичниковых гормонов в крови коров при индуцировании суперовуляции по сравнению с уровнем этих гормонов, в период проявления спонтанной'овуляции. Выявленные нами отклонения в уровне ЛГ и половых гормонов в крови коров при провоцировании суперовуляции позволяют понять некоторые причины низкого выхода полноценных эмбрионов у коров и наметить пути повышения эффективности методов вызывания суперовуляции. 36

2, Совершенствование способов вызывания суперовуляции у крупного рогатого скота и техники трансплантации эмбрионов

Известны два подхода к вызыванию суперовуляцни у коров: путем введения гонадотронинов в фолликулярную фазу полового цикла или путей введения гон'адотропина в сочетании с простаглапдпном Ф2ос или его аналогом в лютен-новуго фазу цикла.

На первом этапе наши разработки были основаны на совершенствовании метода суперовуляцни у коров в фолликулярную фазу цикла. Нами были определены оптимальные дезы ГСЖК отечественного производства для вызывания в среднем около 8 овуляций на одну корову (М, И. Прокофьев и др., 1977). Установлено, что 17—33% коров проявляют охоту в первые три дня после обработки ГСЖК, тогка как лучший эффект в проявлении суперовуляцин достигается в том случае, если охота наступает через 4—5 дней после введения гонадотропина. Было сделано предположение, что преждевременная охота проявляется у коров с укороченным естественным половым циклом, »следствие более ранней регрессии циклического желтого тела. Поэтому мы решили имитировать продление функции желтого тела у коров путем введения им 100 мг прогестерона одновременно с ГСЖК на 16-й день полового цикла. Такая обработка исключала проявление охоты у коров н телок ранее четвертого дня после введения ГСЖК и повышала число животных, пришедших в охоту в оптимальные сроки, на 4—7 дин после обработки, с 44,4—64,3% до 90,8—100%, а число животных, реагирующих суперовуляцней — с 55—67% до 85,7—91,7%, Наряду с этим предложенная схема гормональной обработки коров ограничила вариабельность индивидуальных колебаний по числу овуляций на одну и ту же дозу ГСЖК- К примеру, при введении только ГСЖК в дозе 8 тыс, МЕД число желтых тел колебалось от 1 до 18 па каждое животное, тогда как после обработки той же дозой ГСЖК одновременно с прогестероном число желтых тел на пару яичников у 6 из 7 обработанных коров колебалось в узком диапазоне, от 5 до 9. Таким образом, внесенное нами дополнение в известную схему гормональной обработки коров с целью вызывания суперовуляции в фолликулярную фазу полового цикла приблизило эффективность этого метода к разработанному в последнее время методу вызывания суперовуляции в лютеиновую фазу цикла путем введения СЖК в сочетании с простагланднном.

Следующий опыт был проведен по выявлению наиболее эффективной схемы обработки коров в лютеиновую фазу полового цикла (М. И. Прокофьев и др., 1978). Подопытные животные были разделены по принципу аналогов на 3 группы. Животным I группы вводили па 10-й день полового цикла по 7 тыс. МЕД. СЖК, а через два дня — 25 мг простаг-ландина Ф2а «Дннопрост». Животным II н III групп на 10-й день полового цикла вводили 8 тыс. МЕД. ГСЖК и через 2 дня по 25;мг (И группа) и 35 мг (III группа) простаглан-дина. Извлечение и пересадку зародышей проводили пехн-рургическим методом с использованием техники, разработанной при участии автора и под его руководством. Установлено, что все три используемых схемы гормональной обработки животных обеспечили проявление охоты у 88,2—100% животных в среднем через 2,00—2,56 дней после введения простагландина. Однако наиболее точный контроль времени проявления охоты был достигнут после применения большей дозы простагландина (35 мг) при двукратном его введении. В результате вызывания охоты в оптимальные сроки пооле обработки ГСЖК (через 4—5 дней) 82,3—95% животных реагировали суперовуляцией. Реакция суперовуляцией была умеренной и примерно одинаковой у животных всех опытных групп (6,5—7,0 желтых тел на одно животное).

Вызывание суперовуляции — это лишь первый этап в получении высокого выхода эмбрионов. Не менее важным этапом является извлечение эмбрионов, В настоящем эксперименте' шейка матки была пройдена катетером у 79 (83,2%) пз 95 коров и телок и извлечено от 32,3 до 47,3% яйцеклеток к числу овуляций. Выявлено заметное различие по выходу эмбрионов на корову-донора в зависимости от применяемого препарата: этот показатель у животных II и ИГ групп был в два-три раза выше, чем в I группе. Причина заметного снижения числа извлеченных эмбрионов у животных, обработанных нативной СЖК, в отличие от обработанных ГСЖК, нами окончательно не выявлена. Можно предполагать, что эта разница обусловлена неблагоприятным воздействием более значительного отклонения в соотношении половых гормонов в крови коров I группы, выз' ванного большим количеством неовулирсхванных фолликулов и возможно более продолжительным действием натив-ного СЖК по сравнению с очищенным, 38

. Резюмируя результаты разработок по вызыванию суперовуляции у коров, можно заключить, что усовершенствованный нами метод индуцирования суперовуляции у них в фолликулярную фазу полового цикла путем введения прогестерона одновременно с ГСЖК приблизил эффективность схемы обработки к разработанному в последнее время методу вызывания суперовуляции у коров в лютеишвун> фазу цикла путем введения ГСЖК в сочетании с простаг-ландином.

В процессе изучения эндокринной регуляции суперовуляции у коров нами разработан новый способ хирургического-получения зародышей, предложено специальное устройство для их пересадки и получены первые в нашей стране телята методом трансплантации эмбрионов, В целях снижения трудоемкости метода и многократного использования доноров отработан нехирургический способ получения эмбрионов у коров и телок и проведены успешные пересадки зародышей нехирургическим методом.

ВЫВОДЫ

1, Гипофизарные механизмы регуляции воспроизводительной функции у самок сельскохозяйственных животных характеризуются общими закономерностями, заключающимися в значительном увеличении секреции фолликулостиму-лирующего и лютей визирующего гормонов в предовуляторный период и волнообразном повышении их выделения в другие фазы полового цикла. Вместе с тем, в секреции гонадо-тропинов имеются видовые особенности, которые проявляются в различном приросте ЛГ-актнвностн в крови в предовуляторный период, в различной продолжительности повышенной секреции гонадотропннов и в сроках проявления предовуляторного пика ЛГ по отношению к моменту овуляции и подъему ФСГ-активностп.

2. В яичниках коров в течение полового цикла выявлены три волны роста фолликулов, хорошо коррелирующие повремени с периодами повышенного выделения гипофизар-ных гонадотропннов. В дискретности выделения гипофизар-ных гонадотропннов и развитии фолликулов яичников коров проявляется общефизиологическая закономерность, присущая саморегулирующей системе, которая обеспечивает устойчивое равновесие в функционировании гнпоталамо-гн-пофизарно-гонадного комплекса,

3. Оплодотворяемость коров находится в прямой функциональной зависимости от уровня ЛГ-активности в крови в предовуляторный период.

4. Введение плацентарных гонадотропинов (ХГ и СЖК) коровам и свиньям сопровождается повышением ЛГ-актив-ностн в циркулирующей крови, которая сохраняется 12— "24 часа после введения ХГ и не менее четырех суток после введения СЖК- Это обстоятел ......."ает на возмож-

цию ЛГ, механизм которого реализуется непосредственно через воздействие на гипофиз или опосредованно через гормоны яичника.

5. В механизме действия экзогенного прогестерона установлены видовые различия," проявляющиеся в длительном сохранении повышенного уровня гонадотропной активности в крови у птиц (5—10 суток) и кратковременного у млекопитающих (до 8 часов) после прекращения введения препарата,

6. Биологическая активность производных прогестерона при парентеральном введении зависит от «защиты» метаболических центров стероидной молекулы введением Д6-двой-ной связи, 6-метильной и 16-метиленовой прупп, а пролонгация действия достигается превращением (ацилпрованием) 3-оксистероидов в эфиры жирных кислот (уксусной и в особенности капроновой) при получении этих соединений.

7. Введение прогестагена пролонгированного действия, — 17а-оксипрогестеропа-капроната (17-КОП) в первой половине полового цикла пнгибирует выделение ЛГ из гипофиза и проявление овуляции у крупного рогатого скота и оказывает лнтнчёское действие на желтое тело овцы. 17-КОП не тормозит выделение ЛГ из гипофиза и не задерживает овуляцию у крупного рогатого скота при введении его во второй половине полового цикла, но вызывает регрессию желтого -тела, образовавшегося в период действия препарата.

8. Ответная морфо-функипональная .реакция яичников животных на применение 17-КОП характеризуется значительными видовыми особенностями. Введение 17-КОП способствует гипертрофии одного из фолликулов в яичниках крупного рогатого скота, но не оказывает аналогичного влияния на яичники овец. Дополнительная обработка коров эстрадно лом валернанатом затормаживает гипертрофию фолликулов, вызванную введением 17-КОП.

Фолликулярная система яичЦиков свиней характеризуется повышенной чувствительностью по сравнению с овцами 1Г крупным рогатым скотом на введение неадекватных доз прогестагена, что проявляется образованием фолликуляр-

ность активирующего действия

синтез и секре-

пых кист. Полученные данные позволяют заключить, что низкая эффективность известных способов синхронизации, охоты у свиней путем группового скармливания прогестагс-нов обусловлена значительными трудностями в точном дозировании препарата,

9,. Продолжительность торможения сроков проявления охоты у овец находится в высокодостоверной липейнолога-рифмнческой зависимости от дозы лрогестагепа пролонгированного действия при его однократном парентеральном введении. Установленная и математически описанная памп зависимость позволяет моделировать циклический процесс различной продолжительности н прогнозировать сроки проявления охоты у животных,

10. Разработай новый способ еннхроинзанпп охоты у крупного рогатого скота и овец путем однократного подкожного введения 17-КОП и у ремонтных свинок путем введения 17-КОП в сочетании с эстрадиолом валерианатом. Дополнительная обработка половозрелых телок ХГ и эстрадио-ла бензоатом па 17—18-й дни после введения 17-КОП вызывает проявление охоты в точно регламентированные сроки (в течение 1—2 суток) у 80—100% животных. Ввиду того,, что оплодотвориемость телок в первую синхронизированную охоту значительно понижена рекомендуется осеменять их во вторую охоту после обработки. Предложенный способ гормональной обработки позволяет вдвое сократить сроки пло* дотворного осеменения,

11. В условиях управляемого процесса множественного-созревания фолликулов и суперовуляцин, янчиики крупного рогатого скота проявляют повышенную гормональную деятельность, которая характеризуется более высокой, по сравнению с нормой, концентрацией прогестерона в крови коров во время предовуляториого инка ЛГ и более ранним подъемом его в послеовуляториый период, а также длительным сохранением высокой концентрации эстрогенов в крови после индукции суперовуляции. Это приводит к существенному изменению соотношения половых стероидов в крови после-вызывания суперовуляции по сравнению с этим показателем у коров в период естественного полового цикла, что, возможно, является причиной пониженного оплодотворения яйцеклеток,

12. Разработан способ вызывания суперовуляции у коров,, заключающийся в парентеральном введении животным в фолликулярную фазу полового цикла прогестерона одновременно с сывороточным гонадотропином. Применение этого метода обеспечивает проявление охоты в оптимальные сро-

кн (на 4—7 дни после обработки) у 91 — 100% животных, примерно на 30%' увеличивает число животных, реагирующих суперовуляцией, и в конечном счете повышает выход эмбрионов от коров-доноров для целей трансплантации.

13. Усовершенствованы некоторые элементы техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Предложенный способ нехирургического извлечения эмбрионов позволяет получать в среднем 50% яйцеклеток и эмбрионов к числу овуляций, не нарушая последующей воспроизводительной способности коров-доноров. Сконструировано и испытано в широком эксперименте устройство, позволяющее с высокой точностью вводить эмбрионы в любой участок рога матки, не извлекая ее из тазовой полости животного. Получены первые в нашей стране телята при хирургическом методе трансплантации, а также потомство при использовании нехнрургической техники пересадки эмбрионов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для синхронизации охоты и сокращения сроков оплодотворения телок за один месяц до начала осеменения вводить им 17-КОП, через 17—18 дней — ХГ и эстрадиола бен-зоат к через 13 дней после последней обработки выявлять в охоте и осеменять (наставление по применению этого способа синхронизации охоты у телок одобрено Фармсоветом Главветуправления МСХ СССР 1 марта 1979 года).

Для синхронизации охоты у овец вводить им однократно под кожу 17-КОП (авторское свидетельство № 367866), а ремонтным свиньям — 17-КОП в сочетании с эстрадиола валернонатом (получено решение «ВНИИГПЭ» о выдаче авторского свидетельства по заявке № 1904192/15).

2. Для повышения выхода эмбрионов в целях трансплантации их и снижения вариабельности реакции яичников коров на одну и ту же дозу ГСЖК вводить парентерально коровам на 16-й день 'полового цикла 100 мг прогестерона одновременно с 8,0 тыс. МЕД ГСЖК (¡получено! решение «ВНИИГПЭ» о выдаче авторского свидетельства по заявке № 2615974/30—15).

3. Извлечение эмбрионов крупного рогатого скота хирургическим методом проводить путем лапаротомии в области подвздоха, так как этот прием, в отличие от лапаротомии по белой линии, не вызывает смещения репродуктивного тракта и в значительной степени ограничивает образование спаек органов и заращнвание их каналов. Для обеспечения многократного использования коров в качестве доноров приме-

пять нехирургнческнй способ извлечения эмбрионов. Пересадку эмбрионов следует проводить с помощью сконструированного с участием автора плантатор а,

4. В нелях повышения чувствительности бяологических методов определения гонадотропинов в крови животных проводить их концентрирование путем насыщения сыворотки или плазмы крови сернокислым аммонием до 1,3 М для выделения в осадок ЛГ и от 2,5 до 3,0 М — для выделения ФСГ. Благодаря применению этого способа чувствителыюст!! биологических методов определения ЛГ в крови животных повышается в 2 раза, а ФСГ — в 5—0 раз, п оба гормона могут быть определены в одной и той же пробе крови объемом 50 мл.

5. В технологию получения гормональных препаратов нз гнпофизарного сырья мясокомбинатов включить способ выделения и очистки фоллнкулостнмулнрующего гормона, основанный на фракционировании белков путем их дифференцированного растворения в градиенте сульфата аммония (Авторское свидетельство А1« 413947).

6. Торможение инстинкта насиживания у индеек проводить путем одно-двухкратной инъекции 30 мг прогестерона. При этом более 90% клохчущих индеек прекращают насиживание через одни сутки и возобновляют яйцекладку через 17—18 суток после обработки (рекомендация НИИЖ МСХ УзССР «Гормональный метод борьбы с клохтанием индеек», Ташкент, «Фан», 1970).

Список статей, в которых изложены основные .. положения диссертации

1. Содержание л ют е и н и зпру го щег о гормона в плазме крови из кавернозного синуса свиноматки в период, полового цикла. В кн.: Методы племенной работы в животноводстве, Ленинград, 1965, с. 209—217.

2. Нервно-гормональный контроль воспроизводительных функций у самок сельскохозяйственных животных и методы их искусственной регуляции. — «Сельское хозяйство за рубежом», 1966, № 1, с. 23—30, № 2, с. 20—28.

3. Содержание лютеинизирующего гормона в крови свиноматок и коров в течение полового цикла. — «Материалы IV Всесоюзной конференции по физиологическим и биохимическим основам повышения продуктивности сельскохозяйственных животных». Боровск, 1966, кн. 2-я, с. 226—227.

4. Динамика фолликулостимулирующего гормона в крови коров в течение полового цикла. Москва, ВИНИТИ, 1967, 11 с.

5. Динамика лютеишширующего гормона в крови свиноматок в течение полового цикла, В кн.: Работы молодых ученых. М., «Колос», 1968, с. 107—112.

6. Luteinizing hormone levels in blood of cows and pigs, during estrous cycle. — Illrd Intern. Congr. Endocrinol., Mexico, D. F. Ecepta Med., 1968, № 157, p. 164.

7. Повышение продуктивности индеек, — «Сельское хозяйство Узбекистана», 1969, № 1, с, 56—57.

8. Торможение инстинкта насиживания у индеек прогестероном. — «Птицеводство», 1969, № 4, с, 25—27.

9. Роль фолликулостимулирующего гормона в регуляции половых функций у коров. В 'Кн.; Итоги исследований по кормопроизводству, разведению, кормлению и физиологии сельскохозяйственных животных (1940—1966 гг.), Ташкент, 1970, с, 287—292.

10. Гормональный метод борьбы с клохтанием индеек. Рекомендации, Ташкент, «Фан», 1970, 8 с.

11. Гонадотропная (регуляция воспроизводительной функции индеек. — «Вестник сельскохозяйственной науки», 1970, № 12, с. 66—71.

12. Гонадотропная активность в крови коров, оплодотворяющихся после первого и повторного осеменений. Тезисы докладов Всесоюзного совещания по эндокринной регуляции обмена веществ и применению гормональных препаратов в животноводстве. Боровск, 1971, с. 98—99.

13. Концентрирование гонадотропннов в сыворотке крови коров. — Труды н.-и. института животноводства. Ташкент, «Фан». 1972, вып. 17, с. 102—110.

14. Синхронизация охоты, — «Сельское хозяйство Узбекистана», 1972, № 9, с, 52—53.

15. Влияние 17а-окснпрогестерона-капроната на сроки проявления охоты и оплодотворяемость телок. Тезисы VHI Республиканской научной конференции ученых, и аспирантов по животноводству, Ташкент, 1972, с. 21—22.

16. Влияние 17а-окоипрогестерона-капроната на сроки проявления охоты и оплодотворяем ость овцематок в период, случного сезона. Там же, с. 22—23.

17. Способ синхронизации половой охоты у домашних животных. Авторское свидетельство Кв 367866. Открытия, изобретения, промышленные образцы, товарные знаки, 1973, Ns 9.

18. Некоторые особенности выделения и контроля фолликулостимулирующего гормона. Тезисы докладов Всесоюзной конференции Министерства медицинской промышленности, Минск, 25—28 апреля 1972 г.

19. Способ получения фолликулостимулирующего .гор* ■

мола. — Авторское свидетельство № 413947. Открытия, изобретения, промышленные образцы, товарные знаки, 1974,

5. Патент США № 3, 973, 004. Патент Франции № 2-175914. Патент Швеции № 7215903.

20. Синхронизация охоты у овен, н телок путем однократной инъекции прогестагена, — «Животноводство», 1973, № 2, с. 77—80.

21. Функциональное состояние яичников у коров, обработанных 17«-оксн прогестерон ом-капр он а том. Тезисы IX Республиканской научно-производственной конференции ученых, аспирантов л производственников по животноводству, Ташкент, 1973, с. 61—62.

22. Изменение экскреции лютеиннзнрующего гормона у циклирующнх и оваризктомированных коров и тело« под действием прогестагена. Тезисы докладов симпозиума (Ташкент, 25—27 нюня 1974 г.) «Гормоны и гормональные препараты в животноводстве», М„ 1974, с. 71—72.

23. Морфологические изменения в яичниках коров под воздействием стероидных гормонов пролонгированного действия. Там же, с. 73—75.

24. Сравнительное исследование фолликулярной системы яичников у овец в течение полового цикла и после обработки их 17а-океилрогествроном-капронатом. Там же, с. 91—93.

25. Один из подходов к полуироизводствеиному получению ф о ллп к у л ости м у л и р у ю щег о гормона из гипофизов овец. Там же, с. 138—139.

26. Гнпоталамо-гнпофизарпая регуляция полового цикла у животных. — «Вестник сельскохозяйственной наукн», 1974, № 13, с. 71—79.

27. Влияние 17а-окснпрогестерона-капроната на экскрецию лготеииизирующего гормона с мочой у крупного рогатого скота. — «Сельскохозяйственная биология», 1974, т. IX, № 5, с. 736—742.

28. Гормональный контроль сроков овуляции у коров. Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Проблемы эндокринологии сельскохозяйственных животных и применение гормональных препаратов в животноводстве», Ленинград— Пушкин. 1975, с. 19—20.

29. Длительность прогестагенной активности стероидных производных при однократном подкожном введении кроликам. Там же, с. 107—108.

30. Получение фолликулостимулирующего гормона из свиных гипофизов. Там же, с. 219—220.

31. Влияние половых стероидов пролонгированного действия на гонадотропную функцию гипофиза и морфологию репродуктивных органов самок сельскохозяйственных живот-

45

ных. Тезисы научных сообщений на XII съезде Всесоюзного физиологического общества им. И. П. Павлова, Боровск,

I, 1975,* с. 58—59.

32. Получение антител на микродозы лютепнизнрующего гормона. Тезисы докладов Третьего Между ¡та родя ого симпозиума по иммунологии размножения, Варна, Болгария, 1975, с. 239.

33. Морфологические изменения в яичниках У циклируЮ-щих овец под влиянием прогестагена пролонгированного действия Тезисы X Республиканской научно-производственной конференция ученых и производственников по животноводству, Ташкент, 1975, с. 86—87.

34. Синхронизация охоты у ремонтных свинок однократным введением прогестагена и эстрогена. — «Вестник сельскохозяйственной науки», 1976, № 8, с. 61—64.

35 Изменение морфологии яичников коров под воздействием стероидных половых гормонов пролонгированного действия — «Труды Узбекского научно-исследов ателье кого института животноводства»: Разведение и кормление сельскохозяйственных животных » птицы. Ташкент, 197Ь, вып. 22, с. 32—42.

36 Советско-американский семинар по физиологии воспроизведения сельскохозяйственных животных. — «Сельскохозяйственная биология», 1977, т, XII, № 1, с. 143-145.

37 Влияние стероидов ' пролонгированного действия н<1 репродуктивную функцию сельскохозяйственных животных. Б кн.: Гормоны в животноводстве, Москва, «Колос», 19//, с. 125—146,

38. Трансплантация зигот у крупного рогатого скота — «Вестник сельскохозяйственной науки», 1977, ^э ь, с. »о 94.

39. Применение отероидов пролонгированного действия для синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных. В кн.: Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных (Материалы советско-американского семинара), Харьков, 1977, с. 103—108.

40 Способ синхронизации половой охоты у циклирующих свиноматок. — Решение «ВНИИГПЭ» о выдаче авторского свидетельства 27 января 1976 г, по заявке № 1904192/15.

41. Специфичность аитнсыаороток к ЛГ крупного рогатого скота при различных способах иммунизации. Тезисы докладов четвертого международного симпозиума по иммунологии рёпродукшш, София, 1978, с, 198.

42 Способ синхронизации половой охоты у самок домашних животных. Решение «ВНИИГПЭ» о выдаче автор-

ского свидетельства 6 сентября 1978 г, по заявке № 2149961/30-15.

43. Получение и пересадка эмбрионов крупного рогатого скота нехнрургнческнм методом, — «Вестник сельскохозяйственной науки», 1978, № 11, с. 64—72.

44. Способ вызывания суперовуляции у коров и телок. Решение «ВНИИГПЭ» о выдаче авторского свидетельства 27 октября 1978 г. по заявке К? 2615974/30-15,

Материалы диссертации доложены на;

1. Конференции молодых ученых, проведенной Министерством сельского хозяйства СССР, БАСХНИЛ и ЦК ВЛКСМ,. Москва, 1965.

2. IV Всесоюзной конференции по физиологическим и биохимическим основам повышения продуктивности сельскохозяйственных животных, Боровск, 1966.

3. Всесоюзном совещании по эндокринной регуляции обмена веществ и применению гормональных препаратов п. животноводстве. Боровск, 1971.

4. Всесоюзной конференции Министерства медицинской промышленности. Минск, 1972,

5. VIII (1972), IX (1973), X (1975) республиканских научно-производственных конференциях ученых и производственников по животноводству, Ташкент,

6. Всесоюзном симпозиуме «Гормоны и гормональные препараты в животноводстве». Ташкент, 1974.

7. Всесоюзной конференции «Проблемы эндокринологии сельскохозяйственных животных и применение гормональных препаратов в животноводстве». Ленинград—Пушкин, 1975.

8. XII съезде Всесоюзного физиологического общества имени И. П. Павлова. Тбилиси, 1975.

9. Советско-американском семинаре по вопросам физиологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, Москва, 1976.

10. Всесоюзном симпозиума «Применение эндокринных препаратов в животноводстве». Львов, 1978.

11. Ветеринарном фармакологическом Совете Главного управления ветеринарии МСХ СССР, Москва, 24 ноября 1976 г. н I марта 1979 г.

12. Заседании Ученого Совета иаучно-исследовцтель-ского института животноводства МСХ УзССР. Ташкент* 1976.

13. Заседании Ученого Совета Всесоюзного научно-исследовательского института физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных, Боровск, 1979.

Материалы диссертации были представлены па третьем международном конгресе! эндокринологов (Мехико^ 1968), На третьем и четвертом международных симпозиумах по иммунологии размножения (Варна, 1975, 1978).

Заказ 6688

ТБ 01629

Тираж 100 экз.

Малояросл аиенка и городская типография управления издатель ста, полиграфии н книжной торговли Калужского облисполкома