Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами

Кучерук, Оксана Дмитриевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами"

4846628

Кучерук Оксана Дмитриевна

ВЛИЯНИЕ ГЛИКОПИНА НА ИММУНОГЕНЕЗ У ЖИВОТНЫХ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ПРИМЕНЕНИИ С ВАКЦИНАМИ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 9 МАЙ 2011

Москва-2011

4846628

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии)

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Устинова Галина Ивановна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Жидков Станислав Александрович

кандидат биологических наук Ермолова Елена Викторовна

Ведущая организация - Федеральное государственное учреждение Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ).

Защита состоится « д! » 2011 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко Россельхозакадемии по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, к.1, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан 1

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук "г-гу- Ездакова И.Ю.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ:

Гликопин (Гл.) - ветеринарный препарат, аналог ликопида. Действующим веществом является Ы-ацетилглкжозаминил-К-ацетилмурамил-Ь-аланил-О-изоглутамин (ГМДП);

Фоспрепил (Фп.) - ветеринарный препарат, 0,4%-ный раствор фосфорилированных полипренолов - ненасыщенных спиртов, относящихся к классу терпеноидов, выделяемых из хвои сосны обыкновенной; «Нековак» - инактивированная ассоциированная гидроокисьалюминиевая вакцина, представляет собой комплекс инактивированных антигенов и анатоксинов Fusobacterium necrophorum и микроорганизмов, усугубляющих патологический процесс при некробактериозе конечностей у крупного рогатого скота (Clostridium perfringens тип A, Staphylococcus aureus, Corynebacterium pyogenes);

«Комбовак-Р» - инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят;

Моновакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота - опытные серии экспериментальных инактивированных моновакцин против аденовирусной инфекции, вирусной диареи крупного рогатого скота, изготовленные на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина;

Бивалентная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи

крупного рогатого скота - экспериментальная ассоциированная

инактивированная культуральная вакцина против аденовирусной инфекции и

вирусной диареи крупного рогатого скота, изготовленная на кафедре

вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина;

РН - реакция нейтрализации;

РДП - реакция диффузионной преципитации;

РСК - реакция связывания комплемента.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Многолетний опыт борьбы с инфекционными болезнями показал, что наиболее эффективным способом защиты животных является иммунопрофилактика. Применение вакцин позволяет разорвать эпизоотическую цепь, воздействуя на организм животных, увеличивает их устойчивость к болезнетворному агенту.

К сожалению, не для всех инфекционных болезней созданы вакцинные препараты, обеспечивающие надежную защиту животных. Успех вакцинации во многом зависит от качества антигена и способа его применения: доза, кратность вакцинации, интервалы между прививками, метод аппликации антигена.

Не последнее значение при этом имеет состояние организма самого вакцинируемого животного. Критерием оценки вакцины является создание напряженного и продолжительного иммунитета путем максимального вовлечения в механизм иммуногенеза защитных сил организма животного. Известно, что иммунная реакция организма зависит от его филогенетических особенностей и физиологического состояния, а также от факторов внешней среды, влияющих на состояние организма животных.

Ю.Н.Федоров (2006) отмечал, что иммунная система является индикаторной системой экологического неблагополучия, она чутко реагирует на изменения условий окружающей среды. Современная система животноводства часто способствует возникновению иммунодефицитов у животных (Юсупов Р.Х., 2007), что в свою очередь, снижает эффективность проводимой иммунопрофилактики.

Повышение иммуногенности вакцин и создание стойкого и продолжительного иммунитета у животных при вакцинации против бактериальных и вирусных инфекций, а также поиск новых способов для усиления эффективности вакцинации при помощи стимулирующих веществ, способствующих повышению иммунной защиты животных, продолжает оставаться актуальной проблемой животноводства и ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы было изучение возможности стимуляции иммуногенеза у животных при применении гликопина в сочетании с бактериальными и вирусными вакцинами.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- определить оптимальную дозу гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак»;

- изучить динамику показателей клеточного и гуморального иммунитета коров при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

- изучить различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

- установить влияние гликопина на повышение эффективности иммунизации глубокостельных коров вакциной «Комбовак - Р» для повышения колострапьного иммунитета у их потомства при профилактике инфекционного ринотрахеита;

- выявить стимулирующее действие гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Научная новизна работы. Впервые была определена оптимальная доза гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак», разработаны и изучены различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином.

Впервые показана эффективность дополнительного введения гликопина при вакцинации глубокостельных коров против ИРТ.

Впервые показана эффективность применения иммуномодуляторов гликопина и фоспренила в сочетании с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Практическая значимость. Результаты исследований были использованы при разработке методических рекомендаций: «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма

животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов». Методические рекомендации рассмотрены, одобрены Ученым Советом ВИЭВ, секцией «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (протокол №3 от 14.10.2005), утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (28.12.2005).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г. Щелково, 2005); 3-й конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2006); международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», посвященной 80-летию кафедры биохимии ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2008); секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г. Щелково, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся:

- данные, полученные при применении гликопина с вакциной против некробактериоза крупного рогатого скота: определение оптимальной дозы гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак», динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета, различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

- результаты исследований по применению гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота;

- результаты исследований по применению гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК Российской Федерации.

Личный вклад соискателя заключается в проведении экспериментальных исследований по применению гликопина при вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза; в проведении исследований по применению гликопина с вакциной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и при сравнительном испытании иммуномодуляторов с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; обобщении и анализе результатов исследований.

Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи д.б.н., профессору В.Ф.Полякову.

В выполнении отдельных этапов, связанных с клиническим осмотром животных и диагностикой некробактериоза принимал участие д.в.н., профессор А.А.Сидорчук, проведении серологических исследований - д.в.н., профессор Р.В.Белоусова, к.б.н. Т.П.Лобова, к.в.н. Вазир Ясер, за что автор приносит им свою благодарность.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах, и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, их обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 258 источников, из них 186 отечественных и 72 зарубежных и приложений на 8 страницах. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 37 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

базе лаборатории молекулярной биологии и биохимии Всероссийского Научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ) им. Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН). Исследования выполнены в хозяйствах Московской области, неблагополучных по некробактериозу крупного рогатого скота (совхозе «Истринский», акционерном обществе закрытого типа (АОЗТ) «Фаустово», учебном хозяйстве Коломенского аграрного колледжа) и ринотрахеиту крупного рогатого скота (Государственном племенном заводе (ГПЗ) «Петровское»), на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек) и кафедре вирусологии Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (МГАВМиБ) им. К.И.Скрябина.

В качестве иммуномодуляторов применяли гликопин и фоспренил.

В исследованиях использовали следующие вакцинные препараты:

- инактивированная ассоциированная вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота «Нековак», разработанная учеными ВИЭВ (А.А.Сидорчук, С.Д.Панасюк, Г.И.Устинова, 1997);

- инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят «Комбовак-Р», изготовленная Научно-Производственным Объединением (НПО) «НАРВАК»;

- опытные серии экспериментальных инактивированных моновакцин против аденовирусной инфекции, вирусной диареи крупного рогатого скота, а также ассоциированной инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота, изготовленные на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.

Схемы проведения исследований.

Вакцину «Нековак», согласно наставлению, вводили животным двукратно с интервалом 30 суток подкожно в область надколенной кожной складки в дозе 5,0 мл.

В первом опыте определили оптимальную дозу гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак».

В исследованиях использовали 25 клинически здоровых коров, из которых по принципу аналогов были сформированы пять групп.

Животных первой, второй, третьей н четвертой подопытных групп иммунизировали вакциной «Нековак» совместно с гликопином в расчете 1; 2; 3; 4 мг на дозу вакцины соответственно.

Животные пятой группы были контрольными, им вводили вакцину «Нековак» без гликопина.

Гликопин вводили во флакон с вакциной.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 сутки после первой, а также второй вакцинации.

В последующем была изучена динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета и резистентности коров при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с оптимальной дозой гликопина (2 мг).

По принципу аналогов были отобраны четыре группы по пять голов клинически здоровых животных и три группы по пять животных с поражением конечностей.

Исследования проводили по схеме:

№ гр. Клиническое состояние животных Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Здоровые животные «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 Здоровые животные «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5 Животные с поражением конечностей Гл. 2 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

6 Здоровые животные Гл. 2 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

7 Здоровые животные Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 и 30 суток

после первой и второй вакцинации.

Изучение влияния различных схем введения гликопина с вакциной «Нековак» на иммунный ответ и показатели резистентности у крупного рогатого скота проводили в двух хозяйствах Московской области, неблагополучных по некробактериозу.

Первый опыт проводили на 25 коровах без клинических признаков некробактериоза. Было сформировано 5 групп по принципу аналогов.

Исследования проводили по следующей схеме:

№ гр Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5 Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Для исследований брали кровь перед первым введением препаратов, через 10,20 и 30 суток после 1 и 2-й вакцинаций.

Во втором опыте были использованы 20 коров, 15 из которых - с поражением конечностей и 5 - без проявления клинических признаков некробактериоза. Из больных были сформированы три подопытные группы по 5 голов. Группа здоровых животных служила контролем.

Исследования проводили по схеме, указанной ниже:

№ гр Клиническое состояние животных Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Животные с поражением конечностей Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед первой и второй

вакцинацией за 7 суток; «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 Здоровые животные Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Кровь для исследований у животных брали перед первым введением препаратов, через 21 и 30 суток после первой и второй вакцинаций.

В крови определяли содержание Т- и B-лимфоцитов и фагоцитарную активность лейкоцитов. В сыворотке крови изучали бактерицидную активность, активность лизоцима и содержание иммуноглобулинов М и G.

Вторым этапом работы являлось изучение влияния гликопина на повышение эффективности иммунизации коров 6,5 - 7,5 мес. стельности вакциной «Комбовак - Р» для повышения колострального иммунитета при профилактике инфекционного ринотрахеита(ИРТ) у потомства.

Животным вакцину вводили внутримышечно в дозе 3 мл за 50-55 суток до отела. Из вакцинированных коров отобрали 40 голов по принципу аналогов и 20-ти из них параллельно с повторной вакцинацией дополнительно внутримышечно ввели гликопин в дозе 3 мг в 2 мл физ. раствора. Повторную иммунизацию 40 коров проводили через 14 суток.

Из полученного от 40 коров потомства по принципу аналогов отобрали 10 телят от коров, иммунизированных вакциной в сочетании с гликопином (подопытная группа), и 10 телят от коров, иммунизированных одной вакциной (контрольная группа).

Взятие крови у коров для исследований проводили перед вакцинацией и через 2-3 суток после отела, у телят - на 2 и 10 сутки жизни.

(1§М и ^С), бактерицидная активность сыворотки крови и содержание лизоцима в сыворотке крови, относительное количество Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарная активность лейкоцитов в крови коров до и после отела.

Для оценки влияния иммунизации коров вакциной против ИРТ в сочетании с гликопином на колостральный иммунитет новорожденных телят проводили следующие исследования: определение уровня специфических антител к вирусу ИРТ в РН, общего белка, уровня ^М и ^О, бактерицидной активности и количеству лизоцима в сыворотке крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови, определение относительного содержания Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности лейкоцитов в крови новорожденных телят.

Эпизоотическую эффективность применения вакцины в сочетании с гликопином определяли по уровню заболеваемости и гибели телят.

Третьим этапом наших исследований являлось изучение действия гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи (ВД) крупного рогатого скота. С этой целью нами было поставлено два эксперимента на лабораторных животных.

В первом опыте использовали Гл. и Фп. с инактивированными моновакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на крысах.

Вакцины вводили крысам дважды через 14 суток, внутримышечно, в дозе 1,0 мл, а Гл. и Фп. - однократно с первой иммунизацией, внутримышечно, в дозах 0,03 мг в 0,5 мл физ. раствора и 0,05 мл соответственно. Животным контрольной группы внутримышечно вводили физ. раствор в объеме 1,0 мл. Кровь получали через 14 суток после второго введения вакцины. В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, в сыворотке крови - титры антител в РН, РДП, РСК.

Во втором опыте применяли Гл. и Фп. с ассоциированной инактивированной культуральной вакциной против аденовирусной инфекции и ВД крупного рогатого скота (бивалентной вакциной) на кроликах.

Опыт по испытанию бивалентной вакцины с Гл. и Фп. был поставлен на 42 кроликах на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек). Было сформировано 9 групп животных по принципу аналогов.

Исследования проводили по схеме:

№ гр п Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

2 6 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + Фп. 0,5 мл однократно внутримышечно.

3 3 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + Фп. 0,5 мл двукратно внутримышечно.

4 6 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ. раствора однократно внутримышечно.

5 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ раствора двукратно внутримышечно.

6 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + Гл. в дозе 0,5 мг в 0,5 мл физ. раствора однократно внутримышечно.

7 3 Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ. раствора двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

8 3 Фп. 0,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

9 6 Физ. раствор 1,0 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

Кровь брали от подопытных кроликов перед введением препаратов, перед ревакцинацией (через 14 суток) и через 30 суток после ревакцинации. В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, в сыворотке крови - титры антител в реакции нейтрализации.

Методики проведения исследований Гематологические исследования проводили, используя стандартные методики. Подсчет общего количества лейкоцитов крови осуществляли в

камере Горяева. Для дифференциального подсчета лейкоцитов готовили мазки и окрашивали их по Романовскому-Гимзе. Соотношение лимфоцитов к другим видам лейкоцитов крови выражали в процентах.

Определение общего белка • сыворотки крови проводили рефрактометрическим методом по Д.Ф.Преснякову (1963). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли методом фотонефелометрии по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой (1966). Фагоцитарную активность клеток крови определяли микрометодом (Кондрахин И.П., 1985). Определение активности лизоцима проводили нефелометрическим методом (Дорофейчук В.Г., 1968). Количественное определение лизоцима в сыворотке крови проводили методом диффузии в агар (Грант Х.Я., 1973). Выделение лимфоцитов из периферической крови проводили по методу, основанному на принципе различной скорости седиментации их в градиенте плотности. В качестве растворов с высокой молекулярной массой для выделения лимфоцитов использовали РкоП-Рацие, Ь^орацие - 1077 или Рюо11 400 в сочетании с верографином (Кондрахин И.П., 1985). Идентификацию Т- и В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования (Кондрахин И.П., 1985). Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов М и в (^М, ^й) в испытуемых сыворотках крови животных проводили методом радиальной иммунодиффузии по в. МапсЫ (1965). Моноспецифические антисыворотки были получены из лаборатории иммунологии ВИЭВ, за что автор выражает свою благодарность д.б.н., профессору Ю.Н.Федорову.

РН использовали для определения титров антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота, аденовирусу крупного рогатого скота и вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота по общепринятым методикам.

Титры преципитирующих и комплементсвязывающих антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота и аденовирусу крупного рогатого скота определяли в РДП и РСК по общепринятым методикам.

При проведении работы было использовано 145 коров и нетелей, 20 телят, 70 крыс и 42 кролика.

Взятие крови у животных проводили утром перед их кормлением.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с использованием компьютерной программы Biostat для Windows.

Вероятность различий считали достоверной при р <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Применение гликопина при вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза

Изучение действия гликопина в комплексе с вакциной против

некробактериоза крупного рогатого скота показало его участие в усилении иммунологической защиты животных против данной болезни, что важно, учитывая мнение ряда ученых о снижении общей резистентности организма, как основном условии возникновения данной болезни (Я.Р.Коваленко, 1948; A.A. Самоловов, 2001; Ю.Д. Караваев, 2003; A.A. Сидорчук, 2006).

Определение оптимальной дозы гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак»

Для оптимизации условий вакцинации против некробактериоза нами

был проведен опыт, целью которого являлось определение оптимальной дозы гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак». Исследования показали, что гликопин в дозах 1, 2, 3 и 4 мг на животное при совместном введении его с вакциной оказывал стимулирующее воздействие на парметры резистентности, клеточного и гуморального иммунитета крупного рогатого скота. Введение 4 мг гликопина в дозу вакцины способствовало увеличению бактерицидной активности сыворотки крови у коров до 5; активности лизоцима - до 38; фагоцитарной активности лейкоцитов крови - до 8; содержание Т-лимфоцитов в крови - в пределах 7; содержание В-лимфоцитов - в пределах 11; уровня IgM в сыворотке крови -в пределах 34 и IgG - в пределах 11% относительно исходных значений.

Количественные характеристики показателей резистентности, клеточного и гуморального иммунитета у коров, которым вводили вакцину с гликопином в дозе 2 и 3 мг на животное, были также высоки. Через 21 сутки после повторной вакцинации бактерицидная активность сыворотки крови была на 5,3 и 7; активность лизоцима - на 16,2 и 18; относительное содержание Т-лимфоцитов - на 6,3 и 4,7; В-лимфоцитов - на 10,6 и 11,4; уровень 1§М - на 17,6 и 20,3% соответственно больше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Нами установлено, что изменения данных показателей у коров, которым с вакциной вводили гликопин в дозе 2 и 3 мг на животное отличались незначительно, а некоторые были выше у животных, иммунизированных вакциной с гликопином в дозе 2 мг. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов у них в крови увеличилось на 6,1; В-лимфоцитов - на 9,7; уровень 1§М - на 33,9; - на 8,1% в сравнении с 5,8; 10; 32,8 и 8% соответственно у коров, получавших с вакциной гликопин в дозе 3 мг на животное. Исходя из этого, мы определили дозу 2 мг гликопина как оптимальную по гомеостатической емкости регуляторных систем организма животных для стимуляции иммунного ответа при применении с вакциной против некробактериоза. И это позволило использовать указанную дозу в наших дальнейших исследованиях при применении гликопина совместно с вакциной «Нековак».

Динамика показателей клеточного, гуморального иммунитета и резистентности животных при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином

В опыте по изучению динамики иммунологических показателей у

крупного рогатого скота при вакцинации его против некробактериоза в сочетании с гликопином нами выявлено стимулирующее влияние гликопина при иммунизации больных и здоровых животных. Количественные сдвиги в иммунологических показателях крови у больных и здоровых животных, иммунизированных вакциной совместно с гликопином, были больше, чем у коров, иммунизированных одной вакциной. Так, активность лизоцима была

выше соответственно на 10,1 и 16,8%, содержание Т-лимфоцитов - на 3 и 3,4%, содержание В-лимфоцитов - на 4,6 и 10,5%, уровень ^М - на 17,9 и 16% и - на 10 и 9,7%. Следует отметить, что при вакцинации больных животных в сочетании с гликопином, параметры содержания В-лимфоцитов, уровня 1цМ и фагоцитарной активности лимфоцитов и активности лизоцима сыворотки крови достигали уровня здоровых коров.

Влияние на иммуногенез крупного рогатого скота различных схем применения вакцины «Нековак» в сочетании с гликопином

При изучении различных схем применения вакцины против некробактериоза с гликопином нами было установлено, что у животных без клинических проявлений некробактериоза, как иммунизированных совместно с гликопином, так и у получавших гликопин перед вакцинацией, уровень показателей резистентности, клеточного и гуморального иммунитета был несколько выше, чем у крупного рогатого скота, иммунизированного против некробактериоза вакциной без гликопина. Наибольшие показатели иммунного ответа были получены у коров при двукратном введении гликопина перед началом вакцинации и дальнейшей иммунизации животных совместно с гликопином. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов крови у них было на 26,2; В-лимфоцитов - на 10,8; содержание 1§М - на 22,6; ^С - на 8,5% больше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной.

Нашими исследованиями по определению схем вакцинации больных животных против некробактериоза установлено, что наибольших значений иммунологические показатели достигли у коров, которым за 7 суток, как до первой, так и второй иммунизации внутримышечно вводили гликопин, а затем вакцинировали совместно с гликопином. Через 30 суток после повторной вакцинации содержание Т-лимфоцитов и у них сравнялось с показателями здоровых животных, а бактерицидная активность сыворотки крови была на 17, активность лизоцима сыворотки - на 51, фагоцитарная активность лейкоцитов крови - на 5, относительное содержание В-лимфоцитов - на 3, содержание 1§М - на 9% выше, чем у контрольных

животных. Предложенная схема применения препарата с вакциной позволила максимально повысить показатели резистентности больных животных: бактерицидную активность сыворотки крови - на 23; активность лизоцима сыворотки - на 23; фагоцитарную активность лейкоцитов крови - на 19% относительно стартовых данных, а также получить наилучший иммунный ответ на введение вакцины: относительное содержание Т- и В-лимфоцитов у них в крови через 30 суток после второй вакцинации составило соответственно 50,5 и 22,3 в сравнении с 49,3 и 21,0% у животных, вакцинированных одной вакциной. Количество 1§М и в сыворотке крови этих животных через 30 суток после повторной вакцинации было соответственно 3,2 и 19,9 в сравнении с 2,7 и 18,9 мг/мл у животных, иммунизированных одной вакциной.

У больных животных, вакцинированных с гликопином, сокращалась продолжительность болезни. На 20-25 сутки после второй вакцинации хромота исчезала, происходило заживление ран, в зависимости от тяжести патологического процесса. Оставались единичные случаи сильного поражения копыт, требующие дальнейшего лечения по индивидуальной схеме.

Таким образом, применение гликопина перед иммунизацией, и далее совместно с вакциной «Нековак» способствует усилению иммунологической защиты больных и здоровых животных против некробактериоза крупного рогатого скота.

Влияние гликопина в сочетании с вакциной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота на колостральный иммунитет

у телят

Нашими исследованиями установлено, что при дополнительном внутримышечном введении гликопина стельным коровам в сочетании с комбинированной вакциной, достоверно увеличивались титры антител к вирусу ИРТ: в сыворотке крови - до 9,8 и в молозиве - до 14,2 1о& в сравнении с 8,4 (в сыворотке крови) и 10,3 (в молозиве) - у животных

контрольной группы, что было на 17 и 38% соответственно больше. Концентрация иммуноглобулинов М и в в сыворотке крови коров подопытной группы после отела была выше, чем в контроле на 24 и 67% соответственно.

Результаты исследований крови и молозива вакцинированных коров представлены в табл. 1.

Таблица 1

Показатели иммунитета в крови и молозиве коров-матерей, вакцинированных против ИРТ (р < 0,05)

Наименование показателей Исследование за 50-55 суток до отела (п=20) Исследование после отела

контрольная группа(п=10) подопытная группа (п=10)

Титры антител к вирусу ИРТ, log2: в сыворотке крови в молозиве коров 7,2 ±0,12 8.4 ± 0.2 10,3 ±0,1 9,8 ±0,1 14,2 ±0,3

Иммуноглобулины в сыворотке крови, мг/мл: М G 4,4 ± 0,4 16,0 ± 0,5 3.4 ± 0,4 9,0 ± 0,7 4,2 ± 0,2 15,0 ±0,5

Фагоцитарная активность лейкоцитов крови, % ФЧ, м.к. 16,3 ± 0,5 7,5 ± 0,2 17,9 ±0,7 8,4 ± 0,9 22,0 ± 1,6 12,1 ± 1,5

Бактерицидная активность сыворотки крови, % 63,0 ± 1,4 64,6 ± 1,4 80,9 ± 1,2

Содержание лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл 18,2 ± 1,2 25,1 ± 1,7 32,8 ±2,1

Результаты исследований иммунного статуса новорожденных телят, полученных от коров-матерей, иммунизированных вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита в сочетании с гликопином и без него, представлены в табл.2.

Титры антител в сыворотке крови телят подопытной группы на 2 и 10-е сутки были выше на 19 и 18% (8,2 ± 0,5 log2 и 8,5 ± 0,8 log2), чем у контрольных животных (6,9 ± 0,1 log2 и 7,2 ± 0,1 1о&). Уровень IgM и IgG в сыворотке крови телят, получавших молозиво от матерей, вакцинированных в сочетании с гликопином, на вторые сутки жизни был на 21 и 12%

соответственно выше чем у контрольных животных, а на десятые - выше на 30 и 25% соответственно.

Таблица 2

Характеристика крови телят, получавших молозиво и молоко от коров-матерей, иммунизированных вакциной против ИРТ с гликопином (п=10; р <0,05)

Наименование показателей Новорожденные телята

2-е сутки жизни 10-е сутки жизни

контрольные подопытные контрольные подопытные

Титры антител к вирусу ИРГ в сыворотке крови, 10В2 6,9 ±0,1 8,2 ± 0.5 7,2 ±0,1 8,5 ± 0,82

Лейкоциты, 10у/л 7,0 ±0,1 7,7 ± 0,8 6,9 ± 0,5 8,7 ±0,4

Лимфоциты, % 30,2 ± 1,1 39,4 ± 1.8 32,7 ± 0,9 45,1 ±2,8

Т-лимфоциты, % 19,0 ±2,3 23,8 ± 1.5 20,8 ± 1,4 25,9 ± 1,1

В-лимфошлы, % 3.8 ±0,5 5,7 ± 0,5 5,2 ± 1,2 9,1 ± 1,4

Общий белок, г % 5,6 ±0,8 6,3 ± 0,8 5,9 ± 0,2 6,9 ± 0,4

Иммуноглобулины, мг/мл: М в 1,4 ±0,2 13,4 ±0,4 1,7 ± 0,1 15,0 ±0,4 1.0 ±0,01 10,9 ±0,1 1,3 ±0,1 13,6 ± ОД

Фагоцитарная активность лейкоцитов, % ФЧ, м.к. 19,0 ±0,8 4,5 ± 0,2 22,8 ±1.2 4,6 ± 0,3 20,8 ±1,9 4,8 ± 1,2 28,1 ± 1,0 5,5 ± 0,3

Бактерицидная активность сыворотки крови, % 29,5 ± 1,9 40,7 ± 1,8 30,0 ± 2,2 45,2 ± 2,5

Содержание лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл 18,0 ± 1,4 29,7 ± 2,2 21,2 ±1,7 34.1 ± 1,8

Данные, приведенные в таблицах, свидетельствуют о том, что титры антител к вирусу ИРТ в сыворотке крови и в молозиве коров подопытной группы после отела, а также в сыворотке крови телят подопытной группы на 2 и 10-е сутки жизни были выше, чем у контрольных животных. Концентрация иммуноглобулинов Мий, показатели резистентности в крови коров и телят подопытных групп также был значительнее, чем в контроле. Это обеспечило более эффективную защиту потомства в первые дни жизни -телята подопытной группы не болели, в то время как заболеваемость контрольных животных составила 20%.

Сравнительная оценка действия иммуномодуляторов гликопина и фоспренила в сочетании с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на лабораторных животных

При исследовании сыворотки крови крыс, вакцинированных аденовакциной в сочетании с Гл. или Фп., не отмечали изменений титров антител в РН в сравнении с животными, иммунизированными одной вакциной. Следует отметить, что уровень показателей клеточного иммунитета у подопытных крыс был выше, чем у животных, вакцинированных одной аденовакциной. Так, относительное количество Т-лимфоцитов в крови было на 8-9, В-лимфоцитов - на 35% больше.

У крыс, вакцинированных вакциной против вирусной диареи (ВД) в сочетании с Гл. или Фп., были установлены более высокие значения титров антител в РН в сравнении с животными, которым вводили только вакцину (6,4 и 7,2 в сравнении с 5,2 1о§2 соответственно). Показатели клеточного иммунитета у подопытных крыс были выше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов в крови - на 16 и 15% соответственно, а В-лимфоцитов - на 46% больше.

При иммунизации кроликов бивалентной вакциной против аденовирусной инфекции и ВД крупного рогатого скота в сочетании с Гл. или Фп. установлено, что через 30 суток после ревакцинации титры нейтрализующих антител в крови были выше, чем у иммунизированных одной вакциной (от 7 до 21% - к аденовирусу и от 2 до 10% - к вирусу ВД). Отмечено и увеличение показателей клеточного иммунитета у животных, вакцинированных в сочетании с Гл. и Фп. Так, относительное количество Т-лимфоцитов было больше от 6 до 16, а В-лимфоцитов - от 17 до 36%, чем у кроликов, которым вводили только вакцину. При этом следует отметить, что влияние Гл. на клеточный иммунитет было более выражено. Лучшие результаты были получены при вакцинации в сочетании с

двукратным введением Гл. в дозе 0,25; однократным - в дозе 0,5 мг и двукратным введением Фп.

Таким образом, нами было установлено, что гликопин в качестве иммуномодулятора стимулирует иммуногенез при применении с вакцинами против некробактериоза, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и вирусной диареи у крупного рогатого скота, крыс и кроликов.

ВЫВОДЫ

1. Гликопин в качестве иммуномодулятора усиливает иммуногенез у крупного рогатого скота, крыс и кроликов при вакцинации против некробактериоза, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и вирусной диареи.

2. Оптимальной дозой гликопина для совместного применения с вакциной «Нековак» против некробактериоза крупного рогатого скота является 2,0 мг на животное. Подкожное введение гликопина в этой дозе с вакциной обусловливает повышение количества Т- и В-лимфоцитов, а также содержание иммуноглобулинов ^М и в сыворотке крови животных.

3. Введение гликопина больному некробактериозом крупному рогатому скоту совместно с вакциной «Нековак» обусловливает стимуляцию процесса иммуногенеза, проявляющуюся повышением активности лизоцима сыворотки и фагоцитарной активности лейкоцитов крови, увеличением количества В-лимфоцитов и содержания иммуноглобулинов классов 1§М и 1§в в сыворотке крови животных.

4. Для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота целесообразно предварительное двукратное внутримышечное введение гликопина с последующей двукратной иммунизацией животных вакциной «Нековак» совместно с гликопином.

введение гликопина перед первой и второй иммунизацией и последующее совместное введение гликопина с вакциной «Нековак».

6. Применение гликопина с вакциной достоверно увеличивало титры антител к вирусу инфекционного ринотрахеита в сыворотке крови коров и в молозиве (9,8 и 14,2 1о£2 в сравнении с 8,4 и 10,3 1о§2 соответственно у животных контрольной группы); уровень 1цМ и в сыворотке крови телят, получавших молозиво от матерей, вакцинированных в сочетании с гликопином на вторые сутки жизни был на 21 и 12% соответственно выше чем у контрольных животных, а на 10-е - на 30 и 25% соответственно, что свидетельствует о стимулирующем влиянии препарата на процесс антителообразования при иммунизации глубокостельных животных вакциной «Комбовак - Р». Это обеспечило более эффективную защиту телят в первые дни жизни: телята подопытной группы не болели, в то время как в контроле заболеваемость животных составила 20%.

7. Иммуномодулятор гликопин превосходил фоспренил по своему действию на показатели клеточного иммунитета у кроликов при комплексном применении с инактивированной бивалентной вакциной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Методические рекомендации «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов» могут быть использованы ветеринарными специалистами при проведении вакцинаций у животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние иммуномодуляторов на антигенную активность моновалентных вакцин против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС / Я. Вазир, И.В. Третьякова, Г.И. Устинова, О.Д.Кучерук, Р.В.Белоусова

// Материалы 3-й конференции по научно-методической, воспитательной и научно-практической работе академии. - Москва: МВА, 2006. - С. 230 - 232.

2. Испытание бивалентной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на кроликах с использованием иммуномодуляторов / Я. Вазир, Р.В.Белоусова, Г.И. Устинова, О.Д.Кучерук // Ветеринарная патология. - 2007. - № 3. - С. 192 - 195.

3. Иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение вакцины против некробактериоза с иммуномодулятором Гликопином / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова, А.А.Сидорчук, С.Д.Панасюк // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2009. - № 2. - С. 25 - 26.

4. Кучерук О.Д. Применение иммуномодулятора гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита КРС / О.Д. Кучерук, Е.В.Жукова, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. - 2009. - Т.75. - С. 422 - 426.

5. Кучерук О.Д. Способы применения гликопина с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. - 2010. - Т.76. - С. 62 - 66.

6. Кучерук О.Д. Определение оптимальной дозы гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). - 2011. - № 1. - С.39 - 40.

7. Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов : методические рекомендации / Г.И.Устинова, Т.М.Андронова, О.Д.Кучерук [и др.] // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины. Часть IV. Лабораторные методы исследований инфекционной патологии животных. - Москва, 2008. - С. 159 -171.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 01.04.2011 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Кучерук, Оксана Дмитриевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Адъюванты, как стимуляторы процессов иммуногенеза у животных.

2.2. Иммуномодуляторы, их классификация и действие.

2.3. Комплексное применение иммунотропных препаратов с вакцинами.

2.4. Химическая и биологическая характеристика гликопина, механизм его действия на организм животных.

2.5. Использование гликопина в качестве иммуномодулятора в комплексе с применяемыми в ветеринарии вакцинами.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами"

В настоящее время инфекционные болезни представляют основную угрозу животноводству. На современных животноводческих комплексах возрастает и риск появления эпизоотий [9]. Инфекционные болезни требуют значительных материальных и физических затрат на их ликвидацию, как правило, связаны с потерей продуктивности животных, часто являются причиной их гибели и угрозой для жизни и здоровья человека.

Многолетний опыт борьбы с инфекционными болезнями животных показал, что наиболее эффективным способом защиты является иммунопрофилактика. Применение вакцин позволяет разорвать эпизоотическую цепь, воздействуя на организм животных, увеличивает их устойчивость к болезнетворному агенту.

Ю.Н.Федоров [168] отмечал, что иммунная система, в широком понятии, является индикаторной системой экологического неблагополучия, реагирующей на изменения условий окружающей среды. Следовательно, современная система животноводства часто способствует возникновению вторичных иммунодефицитов у животных [168, 186], что в свою очередь, снижает эффективность проводимой иммунопрофилактики.

Все вышеизложенное определило постановку цели и задач настоящей работы.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- определить оптимальную дозу гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак»;

- изучить динамику показателей клеточного и гуморального иммунитета коров при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином,

- изучить различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

- установить влияние гликопина на повышение эффективности иммунизации глубокостельных коров вакциной «Комбовак — Р» для повышения колострального иммунитета у их потомства при профилактике инфекционного ринотрахеита;

Практическая значимость. Материалы диссертации расширяют знания о свойствах ряда иммуномодуляторов при их практическом использовании в ветеринарной вакцинологии.

Результаты исследований были использованы при разработке Методических рекомендаций: «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов». Методические рекомендации рассмотрены, одобрены Ученым Советом ВИЭВ, секцией «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (протокол №3 от 14.10.2005), утверждены Отделением Ветеринарной медицины РАСХН (28.12.2005).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г.Щелково, протокол №3 от 14.10.2005); 3-й конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва,2006); международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», посвященной 80-летию кафедры биохимии ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2008); секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г.Щелково, протокол №2 от 26.09.2008).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК Российской Федерации.

Личный вклад соискателя заключается в проведении экспериментальных исследований по применению гликопина при вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза; в проведении исследований по применению гликопина с вакциной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и при сравнительном испытании иммуномодуляторов с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; обобщении, и анализе результатов исследований.

В выполнении отдельных этапов, связанных с клиническим осмотром животных и диагностикой некробактериоза принимал участие д.в.н., профессор А.А.Сидорчук, с проведением серологических исследований -д.в.н., профессор Р.В.Белоусова, к.б.н. Т.П.Лобова, к.в.н. Вазир Ясер, за что автор приносит им благодарность.

Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся: данные, полученные при применении гликопина с вакциной против некробактериоза крупного рогатого скота: определение оптимальной дозы гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак», динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета, различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином; результаты исследований по применению гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота; результаты исследований по применению гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Адъюванты как стимуляторы процессов иммуногенеза у животных

Основным средством иммунопрофилактики инфекционных болезней у сельскохозяйственных животных является вакцинация. Это целенаправленное введение в организм антигена в неагрессивной форме, но иммуногенных дозах. С этой целью используют живые и инактивированные вакцины, индуцирующие у животных специфический иммунитет.

Опасность живых аттенуированных вакцин заключается в следующем: вводя аттенуированного в лабораториях микроба в организм, мы не можем контролировать его дальнейшую эволюцию в сторону усиления патогенности, генетических рекомбинаций с другими микроорганизмами с образованием новых форм жизни [176] . Поэтому безопаснее применять инактивированные вакцины. Но иммуногенность инактивированных антигенов и их субъединиц ниже, чем иммуногенность живых вакцин, что мотивировало, ученых вводить инновации в биопрепараты прежнего типа. Их стремлением являлось повышение иммуногенности инактивированных антигенов с использованием адъюванта Фрейнда или гидроокиси алюминия, которые впоследствии были заменены новыми типами носителей, таких как липосомы [211, 49], жидкие наночастицы [182] или структуры типа КСОМ [232], соединенные с иммуностимуляторами, такими, как мурамилдипептид [156], липид А, авридин и другими веществами, стимулирующими активность иммунной системы животных [202, 215]. В последние годы в ветеринарной практике с положительной стороны зарекомендовали себя такие адъюванты, как эмульсиген, суспензия мелкокристаллической активированной целлюлозы и эмульсиген с прополисом [69].

Увеличенное формирование антител, которое следует за инъекцией антигена, адсорбированного на гидроокиси алюминия или антигена, включенного в водно-масляную эмульсию, связано с большей продолжительностью его действия in vivo. Этот эффект «депо» долго считался характеристикой адъювантного действия как средства продления периода антигенной стимуляции.

Но все масляные адъюванты вызывают прогнозируемые серьезные поствакцинальные реакции как местного, так и общего воздействия у вакцинированных особей [254, 224, 251].

Некоторые формы местных реакций были устранены при использовании эмульсий меньшей вязкости [223, 217] или метаболизирующих природных масел, таких как масло сои [241] или кунжута [223]. Исследования в этой области продолжаются и в настоящее время. Относительно низкую тканевую реактогенность наблюдали при применении нового липоидного адъюванта на основе изопропилпальмитата [198].

Хотя эффект «депо» важен, известно, что адъюванты индуцируют усложненные воздействия, связанные с клеточным взаимодействием [17, 237]. В.А.Сергеев [136] указывает, что вещества, способные непосредственно стимулировать антителообразующую систему, являются адъювантами прямого действия.

Множество веществ различной природы были использованы для усиления иммунного ответа при вакцинации. Помимо этого, часто сами бактерии и бактериальные вакцины являются модуляторами иммунологической реактивности [120].

Так липополисахарид из клеточной стенки Escherichia coli или Bordetella bronchiseptica может стимулировать В-лимфоциты непосредственно, вне связи с Т-клеточными популяциями лимфоцитов [248, 231,230].

Отмечено, что комплекс полиадениловой-полиуридиловой кислот (poly A:U) вызывает увеличение количества лимфоцитов в зонах Т-клеток селезенки [231, 214, 233, 199].

Инактивированные клетки B.Pertussis или компоненты бактерий производят адъювантный эффект на синтез IgE [216].

Инактивированная Corynebacterium parvum стимулирует клеточно-опосредованные иммунные реакции к антигенам, инъецированным вместе с ней [202].

Гликозид растительного происхождения сапонин функционирует как поверхностно-активный адъювант. Это обуславливает увеличение синтеза антител, однако проявляет слабую активность при стимуляции клеточно-опосредованного иммунитета [257].

Колхицин проявляет адъювантную активность, предотвращая образование антиген-специфических супрессорных клеток [240].

Бестатин - низкомолекулярный ингибитор ферментов, полученный из фильтратов культуры Streptomyces olivoreticuli. H.Umezawa [253] предположил, что активация макрофагов в присутствии бестатина стимулирует митогенность Т-лимфоцитов.

Было показано, что при совместном применении с антигеном в водно-масляной эмульсии нативный микобактериальный дисахарид тетрапептид [187], мономерные субъединицы других пептидогликанов и связанный с N-ацетил-мурамилом трипептид [209] являются активными в усилении синтеза антител.

Мурамилдипептид (МДП) увеличивает клеточно-опосредованный и гуморальный иммунные ответы, изменяя равновесие между Т-хелперами и Т-супрессорами, усиливая действия Т-хелперов [202]. МДП - в различных тест-системах активирует макрофаги и индуцирует производство цитокинов. Этот синтетический гликопептид активен и в водной среде.

Таким образом, для стимуляции процессов иммуногенеза у животных используются адъюванты различной природы и механизма действия, связанного как с продлением периода антигенного воздействия, так и с непосредственным действием на антителообразующую систему.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Кучерук, Оксана Дмитриевна

5.ВЫВОДЫ

3. Введение гликопина больному некробактериозом крупному рогатому скоту совместно с вакциной «Нековак» обусловливает стимуляцию процесса иммуногенеза, проявляющуюся повышением активности лизоцима сыворотки и фагоцитарной активности лейкоцитов крови, увеличением количества В-лимфоцитов и содержания иммуноглобулинов классов и в сыворотке крови животных.

5. Для оздоровления хозяйств от некробактериоза крупного рогатого скота, наряду с использованием комплекса симптоматических лечебных средств и ветеринарно-зоотехнических мероприятий, рекомендуется введение гликопина перед первой и второй иммунизацией и последующее совместное введение гликопина с вакциной «Нековак».

6. Применение гликопина с вакциной достоверно увеличивало титры антител к вирусу инфекционного ринотрахеита в сыворотке крови коров и в молозиве (9,8 и 14,2 ^2 в сравнении с 8,4 и 10,3 соответственно у животных контрольной группы); уровень ^М и в сыворотке крови телят, получавших молозиво от матерей, вакцинированных в сочетании с гликопином на вторые сутки жизни был на 21 и 12% соответственно выше чем у контрольных животных, а на 10-е - на 30 и 25% соответственно, что свидетельствует о стимулирующем влиянии препарата на процесс антителообразования при иммунизации глубокостельных животных вакциной «Комбовак — Р». Это обеспечило более эффективную защиту телят в первые дни жизни: телята подопытной группы не болели, в то время как в контроле заболеваемость животных составила 20%.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертации расширяют знания о свойствах ряда иммуномодуляторов при их практическом использовании в ветеринарной вакцинологии.

Результаты исследований вошли в Методические рекомендации «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов», одобренные Ученым Советом ВИЭВ, секцией «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (протокол №3 от 14.10.2005), утвержденные Отделением Ветеринарной медицины РАСХН (28.12.2005).

2.6. Заключение

Следовательно, введение гликопина животным в сочетании с некоторыми вакцинами, используемыми в ветеринарной практике, и при конструировании новых ветеринарных вакцинных препаратов показало целесообразность применения данного иммуномодулятора для повышения качества иммунизации и снижения антигенной нагрузки на организм животных. Однако, его комплексное использование для профилактики различных инфекционных болезней в ветеринарии, по-прежнему, остается недостаточным. Существует необходимость исследования действия гликопина с более широким кругом противовирусных и противобактериальных вакцин, а также отработки схем применения и дозировки данного препарата.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа проведена в 1997 - 2008 гг. в соответствии с Российской Научно-технической программой по фундаментальным и приоритетным прикладным исследованиям по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса (АПК), заданию 02.04.01 «Испытание нового иммуностимулятора гликопина в качестве адъюванта при конструировании вакцин против инфекционных болезней сельскохозяйственных животных» на базе лаборатории молекулярной биологии и биохимии Всероссийского Научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ) им. Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН). Исследования выполнены в хозяйствах Московской области, неблагополучных по некробактериозу крупного рогатого скота (совхозе «Истринский», акционерном обществе закрытого типа (АОЗТ) «Фаустово», учебном хозяйстве Коломенского аграрного колледжа) и ринотрахеиту крупного рогатого скота (Государственном племенном заводе (ГПЗ) «Петровское»), на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек) и кафедре вирусологии Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (МГАВМиБ) им. К.И.Скрябина.

3.1.1. Характеристика иммуномодуляторов, используемых при проведении работы

В качестве иммуномодуляторов применяли гликопин и фоспренил.

Гликопин - ветеринарный лекарственный препарат, аналог ликопида. Действующим веществом является 1Ч-ацетилглюкозаминил-М-ацетилмурамил-Ь-аланил-Б-изоглутамин (ГМДП), полученный по методике, которая включает прямую конденсацию синтетического дипептида (Ь-аланила-О-изоглютамина) с дисахаридом (Ы-ацетилглюкозамин-Н-ацетилмурамил), выделенным из клеточной стенки М. ^эосЫсйсш. Препарат синтезирован в Институте биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (РАН).

Фоспренил представляет собой 0,4%-ный раствор фосфорилированных полипренолов - ненасыщенных спиртов, относящихся к классу терпеноидов, выделяемых из хвои сосны обыкновенной. Данный ветеринарный препарат разработан фирмой «Микро плюс» при Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии (НИИЭМ) им. Н.Ф.Гамалеи Российской академии медицинских наук (РАМН).

3.1.2. Характеристика вакцинных препаратов, использованных в исследованиях. Дозы, методы и кратность введения

Нековак» — инактивированная ассоциированная гидроокисьалюминиевая вакцина, представляет собой комплекс инактивированных антигенов и анатоксинов Fusobacterium necrophorum и микроорганизмов, усугубляющих патологический процесс при некробактериозе конечностей у крупного рогатого скота (Clostridium perfringens тип A, Staphylococcus aureus, Corynebacterium pyogenes), разработанная учеными ВИЭВ (А.А.Сидорчук, С.Д.Панасюк, Г.И.Устинова, 1997). Вакцина изготовлена обществом с ограниченной ответственностью Научно-Производственной Фирмой (ООО НПФ) «Ветконт». Вакцину «Нековак», согласно наставлению, вводили животным двукратно с интервалом 30 суток подкожно в область надколенной кожной складки в дозе 5,0 мл.

Комбовак-Р» — инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят. Изготовлена Научно-Производственным Объединением (НПО) «НАРВАК» из штаммов трех вирусов: инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи, двух штаммов пастерелл. Согласно наставлению вакцину вводили коровам внутримышечно в дозе 3,0 мл.

В экспериментах на лабораторных животных (кролики и крысы) использовали опытные серии экспериментальных инактивированных моновакцин против аденовирусной инфекции, вирусной диареи крупного рогатого скота, а также ассоциированной инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота (бивалентной вакцины), изготовленные на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина. Моновакцины вводили крысам дважды внутримышечно через 14 суток в дозе 1,0 мл. Бивалентную вакцину вводили кроликам внутримышечно двукратно в дозе 2,5 мл (повторное введение через 14 суток).

3.1.3. Схемы проведения исследований

Первым этапом нашей работы являлось изучение влияния гликопина на показатели иммуногенеза и резистентности животных при вакцинации против некробактериоза крупного рогатого скота. Работа проведена в зимне-весенний стойловый период в неблагополучном по некробактериозу крупного рогатого скота совхозе «Истринский» Истринского района Московской области. Степень поражения животных данной болезнью в среднем составляла около 27%. В рацион животных входили: сенаж, силос, сено, комбикорм.

В частности, в первом опыте определили оптимальную дозу гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак».

В исследованиях использовали 25 клинически здоровых лактирующих коров черно-пестрой породы, из которых по принципу аналогов были сформированы пять групп.

Животных первой группы иммунизировали вакциной «Нековак» совместно с гликопином в расчете 1 мг на дозу вакцины.

Коровы второй группы были вакцинированы совместно с гликопином в дозе 2 мг на животное.

Животные третьей группы были иммунизированы вакциной «Нековак» совместно с гликопином в расчете 3 мг на дозу вакцины.

Крупный рогатый скот четвертой группы вакцинировали «Нековак» совместно с гликопином в расчете 4 мг на дозу вакцины.

Животные пятой группы были контрольными, им вводили вакцину «Нековак» без гликопина.

Гликопин вводили во флакон с вакциной.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 сутки после первой, а также второй вакцинации.

Исследования проводили по схеме: груп пы Клиническое состояние животных Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Здоровые животные «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 Здоровые животные «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5 Животные с поражением конечностей Гликопин 2 мг в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

6 Здоровые животные Гликопин 2 мг в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

7 Здоровые животные Физиологический раствор хлорида натрия 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 и 30 суток после первой и второй вакцинации.

Изучение иммунного ответа у крупного рогатого скота на различные схемы введения вакцины «Нековак» с гликопином проводили в АОЗТ «Фаустово» Воскресенского района Московской области и учебном хозяйстве Коломенского аграрного колледжа, неблагополучных по некробактериозу. Исследования проводили в зимне-весенний стойловый период.

В исследованиях в АОЗТ «Фаустово» использовали 25 лактирующих коров черно-пестрой породы без клинических признаков некробактериоза. Было сформировано 5 групп по принципу аналогов.

Исследования проводили по следующей схеме: груп пы Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Гликопин 5 мг в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Гликопин 5 мг в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5 Физиологический раствор хлорида натрия 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Для исследований брали кровь перед первым введением препаратов, через 10, 20 и 30 суток после 1 и 2-й вакцинаций.

В исследованиях, проведенных в учебном хозяйстве Коломенского аграрного колледжа Московской области, неблагополучном по некробактериозу крупного рогатого скота (степень поражения животных данной болезнью составляла около 10%), были использованы 20 коров черно-пестрой породы, 15 из которых - с поражением конечностей различной тяжести и 5 — без проявления клинических признаков некробактериоза. Из больных были сформированы три опытные группы по 5 голов. Группа здоровых животных служила контролем.

Всех больных животных подвергали комплексному симптоматическому лечению. Работы проводили ветеринарные специалисты учебного хозяйства при участии кандидата биологических наук Г.И.Устиновой.

Исследования проводили по схеме, указанной ниже: труп пы Клиническое состояние животных Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 Животные с поражением конечностей Гликопин 5 мг в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно перед первой и второй вакцинацией за 7 суток; «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл + гликопин 2 мг совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3 Животные с поражением конечностей «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4 Здоровые животные Физиологический раствор хлорида натрия 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарную активность лейкоцитов. В сыворотке крови изучали бактерицидную активность и активность лизоцима, содержание иммуноглобулинов классов М и О.

Вторым этапом нашей работы являлось изучение влияния гликопина на повышение эффективности иммунизации глубокостельных коров (6,5 -7,5 мес. стельности) вакциной «Комбовак — Р» для повышения колострального иммунитета у потомства при профилактике инфекционного ринотрахеита. Исследования проводили в ГПЗ «Петровское» Московской области, неблагополучном по инфекционному ринотрахеиту (ИРТ) во время плановой иммунизации инактивированной вакциной «Комбовак — Р» на глубокостельных коровах и полученном от них потомстве.

Вакцину вводили внутримышечно двукратно в дозе 3 мл, первый раз за 50-55 суток до отела. Из вакцинированных коров отобрали 40 голов по принципу аналогов (живая масса, возраст, молочная продуктивность) и 20-ти из них параллельно с повторной вакцинацией дополнительно ввели внутримышечно гликопин в дозе 3 мг в 2 мл физиологического раствора. Повторную иммунизацию 40 коров проводили через 14 суток.

Из полученного от 40 коров потомства по принципу аналогов (живой массе, возрасту) отобрали 10 телят от коров, иммунизированных вакциной в сочетании с гликопином (подопытная группа), и 10 телят от коров, иммунизированных одной вакциной (контрольная группа).

Взятие крови у коров для исследований проводили перед вакцинацией и через 2-3 суток после отела, у телят — на 2 и 10 сутки жизни.

Эффективность комплексного применения вакцины «Комбовак-Р» и гликопина оценивали по следующим показателям: уровень специфических антител к вирусу ИРТ в РН, количество иммуноглобулинов классов Мив, бактерицидная активность сыворотки крови и содержание лизоцима в сыворотке крови, относительное количество Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарная активность лейкоцитов в крови коров до и после отела.

Для оценки влияния иммунизации коров вакциной против ИРТ в сочетании с гликопином на колостральный иммунитет новорожденных телят проводили следующие исследования: определение уровня специфических антител к вирусу ИРТ в РН, общего белка, уровня иммуноглобулинов классов М и в, бактерицидной активности сыворотки крови и количеству лизоцима в сыворотке крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови, определение относительного содержания Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности лейкоцитов в крови новорожденных телят.

Эпизоотическую эффективность применения вакцины в сочетании с гликопином определяли по уровню заболеваемости и гибели телят. Наблюдение за телятами вели до 4-месячного возраста.

В первом опыте использовали гликопин и фоспренил с инактивированными моновакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на крысах, служивших опытной моделью.

В работе использовали моновакцины против аденовируса первого серотипа (Аденовакцина) и вируса вирусной диареи (ВД-вакцина), гликопин и фоспренил. Вакцины вводили крысам дважды через 14 суток, внутримышечно, в дозе 1,0 мл, а препараты гликопин и фоспренил -однократно с первой иммунизацией, внутримышечно, в дозах 0,03 мг в 0,5 мл физиологического раствора хлорида натрия и 0,05 мл соответственно. Животным контрольной группы внутримышечно вводили физиологический раствор хлорида натрия в объеме 1,0 мл. Кровь получали через 14 суток после второго введения вакцины (ревакцинации). В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, в сыворотке крови - титры антител в РН, РДП, РСК.

Во втором опыте применяли гликопин и фоспренил с ассоциированной инактивированной культуральной вакциной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота (бивалентной вакциной) на кроликах, служивших опытной моделью.

Опыт по испытанию бивалентной вакцины с гликопином и фоспренилом был поставлен на 42 кроликах на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек). Было сформировано 9 групп животных по принципу аналогов.

Исследования проводили по схеме: груп пы Количество животных в группе Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

2 6 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + фоспренил (ФП) 0,5 мл однократно внутримышечно.

3 3 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + фоспренил (ФП) 0,5 мл двукратно внутримышечно.

4 6 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + гликопин (Гл) в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физиологического раствора хлорида натрия однократно внутримышечно.

5 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + гликопин (Гл) в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно.

6 5 Бивакцина 2,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток; + гликопин (Гл) в дозе 0,5 мг в 0,5 мл физиологического раствора хлорида натрия однократно внутримышечно.

7 3 Гликопин (Гл) в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физиологического раствора хлорида натрия двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

8 3 Фоспренил (ФП) 0,5 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

9 6 Физиологический раствор хлорида натрия 1,0 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.

Кровь брали от подопытных кроликов перед введением препаратов, перед ревакцинацией (через 14 суток) и через 30 суток после ревакцинации. В крови определяли относительное содержание Т- и B-лимфоцитов, в сыворотке крови - титры антител в реакции нейтрализации.

3.1.4. Методики проведения исследований

Гематологические исследования проводили, используя стандартные методики [72]. Подсчет общего количества лейкоцитов крови осуществляли в камере Горяева. Для дифференциального подсчета лейкоцитов готовили мазки и окрашивали их по Романовскому-Гимзе. Соотношение лимфоцитов к другим видам лейкоцитов крови выражали в процентах.

Определение общего белка сыворотки крови проводили рефрактометрическим методом по Д.Ф.Преснякову [16]. Бактерицидную активность в сыворотке крови определяли методом фотонефелометрии по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой [151]. Метод основан на свойстве сыворотки крови, оказывать бактерицидное и бактериостатическое действие на микроорганизмы. Степень задержки прироста биомассы тест-микроба в жидкой питательной среде под влиянием исследуемой сыворотки крови, выраженная в процентах, характеризует уровень бактерицидной активности. В качестве тест-микроба использовали S-форму штамма Е. coli 0,4.

Фагоцитарную активность клеток крови определяли микрометодом [59]. Принцип метода основан на свойстве специализированных клеток крови (моноцитов, гранулоцитов) фагоцитировать и разрушать иммунологически чужеродные частицы внутриклеточными ферментами. В приготовленных на стекле и окрашенных гематологическими красителями препаратах под микроскопом подсчитывали результаты фагоцитоза (рис.2.).

Рис.2. Фагоцитирующие лейкоциты в мазке, окраска по Романовскому, х 1000: 1 - клетки Е. coli; 2 - фагоцитирующие нейтрофилы.

Определяли фагоцитарную активность (ФА) - процент фагоцитирующих лейкоцитов к общему числу подсчитанных (%) и фагоцитарное число (ФЧ) - количество поглощенных микробных клеток в пересчете на один активный (фагоцитирующий) лейкоцит (м.к.).

Определение активности лизоцима проводили нефелометрическим методом [28, 45]. Метод основан на изменении степени светопропускания микробной взвеси Micrococcus lisodeicticus под влиянием лизоцима исследуемой сыворотки по сравнению с данными исходной микробной взвеси.

Количественное определение лизоцима в сыворотке крови проводили методом диффузии в агар [238, 23]. Метод основан на способности лизоцима сыворотки крови, диффундируя из лунки, лизировать взвешенный в агаре тест-микроб Micrococcus lisodeicticus. Вокруг лунки образуется прозрачная зона, диаметр которой соответствует концентрации фермента.

Выделение лимфоцитов из периферической крови проводили по методу, основанному на принципе различной скорости седиментации их в градиенте плотности [59, 78]. В качестве растворов с высокой молекулярной массой для выделения лимфоцитов использовали РюоП-Рацие, ШзШрацие -1077 или Исо11 400 в сочетании с верографином (рис.3).

Рис.3. Кольцо лимфоцитов при центрифугировании на градиенте гавгорацие - 1077.

Идентификацию Т- и В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования [59, 78]. Метод основан на способности Т-лимфоцитов, образовывать розетки с гетерологичными эритроцитами (эритроцитами барана), а В-лимфоцитов - с комплементом, сорбированным на поверхности корпускулярных частиц (зимозана) (рис.4). В приготовленных на стекле и окрашенных двухкомпонентной окраской («Эозин БА» + «Азур II») препаратах под иммерсией светового микроскопа подсчитывали не менее 200 лимфоцитов. Выводили процентное соотношение Т- и В-лимфоцитов.

Рис.4. Реакция розеткообразования для идентификации Т- и В-лимфоцитов, окраска «Эозин Б А» + «Азур II», х 800: 1 - частицы зимозана, на поверхности которого сорбирован третий компонент комплемента (ЗСз -комплекс); 2 - эритроциты барана; 3 - лимфоциты; 4 - Т-лимфоциты.

Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов М и в (1§М, ^в) в испытуемых сыворотках крови животных проводили методом радиальной иммунодиффузии по в. МапЫт [228] с использованием моноспецифических антисывороток. Сущность метода состоит в том, что иммуноглобулины испытуемых проб радиально диффундируют в агар, содержащий моноспецифическую антисыворотку, образуя кольцо преципитации, диаметр которого прямо пропорционален концентрации иммуноглобулинов. Моноспецифические антисыворотки были получены из лаборатории иммунологии ВИЭВ, за что автор выражает свою благодарность д.б.н., профессору Ю.Н.Федорову.

Реакцию нейтрализации (РН) использовали для определения титров антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота [208], аденовирусу крупного рогатого скота [164] и вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота по общепринятым методикам [157].

Титры преципитирующих и комплементсвязывающих антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота и аденовирусу крупного рогатого скота определяли в реакции диффузионной преципитации (РДП) и реакции связывания комплемента (РСК) по общепринятым методикам [77].

При проведении работы было использовано 145 коров и нетелей, 20 телят, 70 крыс и 42 кролика.

Взятие крови у животных проводили утром перед их кормлением.

При выполнении работы проведено более 6,5 тысяч исследований крови животных.

Вероятность различий считали достоверной при р < 0,05.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Кучерук, Оксана Дмитриевна, Москва

1. Андронова Т.М. Синтетические иммуномодуляторы / Т.М. Андронова, В.Т. Иванов, И.М. Дозморов и др. / Ин-т биоорган, химии им. М.М. Шемякина. Москва : Наука, 1991. - 199 с.

2. Андронова Т.М. Иммуномодулятор ликопид: современный подход к лечению заболеваний инфекционной природы / Т.М. Андронова, Б.И. Пинегин // Медицинская картотека мира. 1999. - № 1 (21). - С. 23 - 25.

3. Баринский И.Ф. Эффективность иммуномодуляторов при экспериментальных вирусных инфекциях / И.Ф. Баринский, С.Л. Нестерчук // Вопросы вирусологии. 1989. - № 6. - С. 645 -650.

4. Бауманис Э.А. Химия и биология иммуномодуляторов / Э.А. Бауманис, В.З. Горкин, Г.И. Чипенс. Рига, 1985. - С. 222 - 237.

5. Белоусова Р.В. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота / Р.В. Белоусова, Р.Х.Нургазиев, В.С.Фролов и др. // Ветеринария. 1989. -№ 1.-С. 29-30.

6. Беляков И.М. Влияние тимоптина на микрофлору глубоких биоптатов ожоговых ран / И.М. Беляков, В.М. Земсков, В.Д. Зажирей // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1993. — № 6. — С. 89 -91.

7. Брицина М.В. Повышение иммуногенности бактериальных антигенов под влиянием одного из дериватов мурамилдипептида / М.В. Брицина, И.Б. Шепелева, А.П. Батуро и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1992. — № 5/6. - С. 43 — 45.

8. Бухвальдер Р. Иммунопрофилактика болезней животных / Р. Бухвальдер, X. Фукс, Г. Хайдер и др.; под ред. Ф. Хорш.; пер. с нем. Н. Б. Черных; под ред. Х.Г. Гизатуллина и Н.З. Хазипова. — Москва : Колос, 1981.- 415 с.

9. Валякина Т.И. Механизм противоопухолевой активности мурамилпептидов новый взгляд / Т.И. Валякина, P.JI. Комалёва, A.A. Малахов и др. // International Journal of Immunorehabilitation. - 1998. - № 8. -С. 34.

10. Валякина Т.И. Мурамилпептиды модулируют экспрессию опухолеассоциированных антигенов / Т.И. Валякина, Е.А. Макаров, A.A. Малахов и др. // Иммунология. 1993. - № 4. - С. 32 — 36.

11. Величко Г.Н. Противовирусное и иммуномодулирующее действие бетулина при вирусных респираторных инфекциях крупного рогатого скота :автореф. дис. . канд. биол. наук : 03.00.23 биотехнология / Галина Николаевна Величко. — Щелково, 2008. — 24 с.

12. Ветеринарная лабораторная практика. Том 2. — Москва : Издательство сельскохозяйственной литературы, журналов и плакатов, 1963. -С. 32-34.

13. Воробьев A.A. Адъюванты (неспецифические стимуляторы иммуногенеза) / A.A. Воробьев, H.H. Васильев. Москва : Медицина, 1969. -206 с.

14. Воробьев A.A. Принципы классификации и стратегия применения иммуномодуляторов в медицине / A.A. Воробьев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2002. № 4. - С. 93 -98.

15. Гендон Ю.З. Мукозальные вирусные вакцины: успехи и проблемы / Ю.З. Гендон // Вопросы вирусологии. 2003. - № 4. - С. 3 - 10.

16. Глотов А.Г. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота / А.Г. Глотов, О.Г.Петрова, Т.И. Глотова и др. // Ветеринария. 2002. - № 3. - С. 17 - 21.

17. Грант Х.Я. Сравнительная оценка некоторых методов количественного определения лизоцима в сыворотке крови / Х.Я. Грант, Л.И. Яворковский, И.А.Блумберга // Лабораторное дело. 1973. - № 5. - С. 300 -304.

18. Дамбаева C.B. Действие полиоксидоиия на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови человека / C.B. Дамбаева, Д.В. Мазуров и др. // Russian Jornal of Immunology. 2003. - Vol. 8, N 1. - P. 53 -.60.

19. Деева A.B. Применение фоспренила для профилактики и терапии при трансмиссивном гастроэнтерите свиней / A.B. Деева, Н.К. Мищенко, Т.П. Лобова и др. // Ветеринария. 2004. - № 2. - С. 12 - 15.

20. Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота : рекомендации / A.A. Сидорчук, Д.П. Аголори, С.Д. Панасюк и др.. изд. 3-е .- Москва, 2003. — 14 с.

21. Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лабораторное дело. 1968. -№ 1,-С. 28-30.

22. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты : справочник / Ф.И. Ершов. — Москва, 1998. 192 с.

23. Жаков М.С. Влияние В-активина на иммуногенез у вакцинированных против сальмонеллеза поросят / М.С. Жаков, А.И. Жуков // Ветеринария. 1991. - № 4. - С. 27 - 28.

24. Жалдыбин В.В. Показатели неспецифического иммунитета у свиней, вакцинированных против классической чумы в условиях примененияиммуностимулятора / В.В. Жалдыбин, B.C. Прудников // Ветеринарная патология. 2003. - № 2. - С. 69 - 70.

25. Жидков С.А. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят / С.А. Жидков, А.И.Лебедев, М.М. Гоголев и др. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1995.-№ З.-С. 50-53.

26. Захарова Н.С. Сравнительное изучение иммунологических свойств пептидогликанов различного происхождения / Н.С. Захарова, И.Б. Шепелева, Н.Г. Калина и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. - № 1. - С. 52 - 55.

27. Здродовский П.Ф. Проблемы инфекции и иммунитета / П.Ф. Здродовский. Москва : Медгиз, 1961. - 365 с.

28. Земсков A.M. Некоторые механизмы действия адъювантов / A.M. Земсков // Иммунология. 1982. — № 1. - С. 6-13.

29. Земсков В.М. Неспецифические иммуностимуляторы. / В.М. Земсков // Успехи современной биологии. 1991. - Том 111, вып. 3. — С. 444 -459.

30. Иванов В.Т. Иммуноактивные пептиды / В.Т. Иванов // Вопросы медицинской химии. -1984.- №3. — С. 23 31.

31. Иванов В.Т. Пептидные антигены и адъюванты в синтетических вакцинах / В.Т. Иванов, О.М. Вольпина, Т.М. Андронова // Журнал Всесоюзного Химического Общества им. Д.И. Менделеева. — 1988. — Т. XXXIII, №5.-с. 524-530.

32. Ильинская А.Н. Исследование иммуностимулирующей активности комплекса веществ мурамилпептидной природы в опытах in vivo и in vitro / А.Н. Ильинская, JI.B. Пичугина, В.В. Кулаков и др. // Иммунология. 2004. - № 5. - С. 271-274.

33. Каграманова К. А. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима / К.А. Каграманова, З.В. Ермольева // Антибиотики. 1966. - № 10. - С. 917 - 919.

34. Калина Н.Г. Адъювантное действие синтетических гликопептидов на гуморальный иммунный ответ на тимусзависимый антиген / Н.Г. Калина, С.И.Елкина, И.Я. Мошиашвили и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1983. № 6. — С. 97 - 100.

35. Калмыков В.В. Пути повышения иммуногенной активности адъювант-вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма Brucella abortus KB 17/100 / В.В. Калмыков // Сборник трудов ВГНКИ.2001.- Т. 62.-С. 149- 155.

36. Каплун А.П. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ / А.П. Каплун, Ле Банг Шон, Ю.М. Краснопольский и др. — Москва, 2005. — 174 с.

37. Караваев Ю.Д. Терапия и специфическая профилактика при некробактериозе / Ю.Д. Караваев, И.Н.Семенова, А.К.Мироненко и др. // Ветеринария. 1999. - № 8. - С. 11 -12.

38. Караваев Ю.Д. Опыт борьбы с некробактериозом животных / Ю.Д. Караваев, И.Н.Семенова, Н.В. Мельник и др. // Ветеринария. — 2003. С. 7 -9.

39. Караулов A.B. Иммунотропные препараты: принципы применения и клиническая эффективность / A.B. Караулов, О.В.Калюжин. Москва: МЦФЭР, 2007. - 144 с. - (Приложение к журналу «Новая Аптека», 1 - 2007. - Библиотека первостольника).

40. Карсонова М.И. Иммуностимулирующая активность мурамилдипептида и его производных / М.И. Карсонова, Т.М.Андронова, Б.В.Пинегин и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. - № 3. - С. 104 - 110.

41. Кетлинский С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. С.-Петербург : Гиппократ, 1992.-256 с.

42. Кирасиров К.В., Поиск современных иммуномодуляторов для использования в промышленном птицеводстве / К.В. Кирасиров, A.A. Кабалов // Ветеринарная патология. 2006. - № 1. - С. 60 — 63.

43. Кирпиченок В.А. Стимуляция иммуногенеза у свиней В-активином при вакцинации против лептоспироза / В.А. Кирпиченок // Современные аспекты профилактики инфекц. болезней молодняка. — Кишинев, 1989. — С. 16-18.

44. Климова P.P. Иммуностимулирующее действие ГМДГТ при ДНК-иммунизации против вируса простого герпеса / P.P. Климова, А.Ю.Козлов, Т.М.Андронова и др. // Ветеринарная патология. — 2003. — № 1. — С. 92 — 96.

45. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии : справочное издание / И.П. Кондрахин, Н.В.Курилов, А.Г.Малахов и др.. Москва : Агропромиздат, 1985. - 287 с.

46. Коваленко Я.Р. Некробациллез сельскохозяйственных животных / Я.Р.Коваленко. Москва: ОГИЗ - СЕЛЬХОЗГИЗ, 1948. - 272 с.

47. Козлов И.Г. Лекарственные воздействия через рецепторы врожденного иммунитета Электронный ресурс. Режим доступа:http://www.Hcopid.ru/publications/articles/kozlovlekvozd2005.html

48. Коготкова О.И., Сочетанное применение в эксперименте живой противосибиреязвенной вакцины СТИ с ликопидом / О.И. Коготкова, Н.П. Буравцева и др. // Иммунология. 2004. - Т. 25, № 2. - С. 109 - 111.

49. Конюхов Г.В. Применение лечебно-профилактического иммуноглобулина для коррекции иммунодефицитов животных / Г.В. Конюхов, Р.Н. Низамов, Н.Б.Тарасова и др. // Ветеринарный врач. — 2007. -спецвыпуск. С. 53 — 55.

50. Коромыслов Г.Ф. Иммуностимуляция: средства, методы, перспективы / Г.Ф. Коромыслов, П.Е. Игнатов // Сельскохозяйственная биология. 1983. - № 7. - С. 99 -107.

51. Коромыслов Г.Ф. Применение ликопида в качестве адъюванта при конструировании вакцин для профилактики инфекций / Г.Ф. Коромыслов, Г.И. Устинова, А.Н. Ульянов и др. // Современная вакцинология : тезисы докл. II междунар. конф. Пермь, 1998. - С. 106.

52. Красиков А.П. Изучение некоторых стимуляторов при бруцеллезе / А.П. Красиков, A.A. Новицкий // Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза и туберкулеза животных. — Новосибирск, 1988. -С. 33 -38.

53. Красиков А.П. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе / А.П. Красиков, О.Н. Иванова // Туберкулез и бруцеллез с-х животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995),-С. 32-36.

54. Красочко П.А. Бактериальный липополисахарид — стимулятор поствакцинального иммунитета при вирусных респираторных инфекциях телят / П.А. Красочко, В.А. Машеро // Учен. зап. Витеб. гос. акад. вет. медицины. Витебск, 1998. - Т. 3. - С. 144 - 146.

55. Кривошеева Н.К. Стимуляторы иммунитета и их использование в ветеринарии / Н.К. Кривошеева // Материалы учеб.-метод, и науч.-произв. конф. ин-та вет. медицины / ОмГАУ. Омск, 1998. — С. 71.

56. Кропотов B.C. Иммуностимулирующая активность ГМДП при вакцинации / B.C. Кропотов, Т.М. Андронова и др. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : тезисы докл. науч.-практ. конф. Щелково, 2000. - С. 281 - 282.

57. Кудрявцев A.A. Клиническая гематология животных / A.A. Кудрявцев, JT.A. Кудрявцева. Москва : Колос, 1974. - 399 с.

58. Кучерук О.Д. Иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение вакцины против некробактериоза с иммуномодулятором Гликопином / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова, А.А.Сидорчук и др. // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). 2009. - № 2. - С. 25 - 26.

59. Кучерук О.Д. Применение иммуномодулятора гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита КРС / О.Д. Кучерук, Е.В.Жукова, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. 2009. - Т.75. - С. 422 - 426.

60. Кучерук О.Д. Способы применения гликопина с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. 2010. — Т.76. — С. 62 - 66.

61. Кучерук О.Д. Определение оптимальной дозы гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). — 2011.— № 1.-С. 39 40.

62. Лабораторные исследования в ветеринарии : Вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни : справочник / под ред. Б.И.Антонова. Москва : Агропромиздат, 1987. - 240 е.: ил.

63. Лимфоциты. Методы / под. ред. Дж. Клауса. Москва : Мир, 1990. -С. 106-116.

64. Лисун Н.К. Применение кормовой добавки гумивал в схеме иммунизации цыплят-бройлеров / Н.К. Лисун // Ветеринарная патология. -2008.-№3.-С. 45 -47.

65. Лесков В.П. Иммуностимуляторы / В.П. Лесков // Аллергия, астма и клин, иммунол. 1999. - № 4. - С. 12-25.

66. Макаев Х.Н. Иммуномодулирующие средства при вакцинации животных против инфекционных болезней / Х.Н. Макаев, Д.А. Хузин, А.Г. Андреева и др. // Ветеринарный врач. 2007. - спецвыпуск. - С. 23 - 26.

67. Малайцев В.В. Мурамил-дипептид и его синтетический аналог как возможные индукторы продукции интерлейкина-2 / В.В. Малайцев, И.М. Богданова, Г.Т. Сухих и др. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. 1985. - № 8. - С. 221 -223.

68. Манько В.М. Экспериментальное изучение иммуномодулирующего действия глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП). Влияние ГМДП нагуморальный иммунный ответ / В.М. Манько, В.Ю. Скворцов, Т.Б. Мастернак и др. // Иммунология. 1988. — № 6. - С. 34 -37.

69. Манько В.М. Экспериментальное изучение иммуномодулирующего действия глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП). Влияние ГМДП на клеточный иммунитет / В.М. Манько, В.Ю. Скворцов, Т.Б. Мастернак и др. // Иммунология. 1989. - № 1. - С. 38 - 41.

70. Манько В.М. Иммуномодуляция: история, тенденция развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. - Т. 23, № 3. - С. 132 - 138.

71. Машковский М.Д. Препараты, корригирующие процессы иммунитета (иммуномодуляторы, иммунокорректоры) / М. Д. Машковский // Лекарственные средства : пособие для врачей. Москва, 1993. — Ч. 2. - С. 192-209.

72. Мельниченко В.И. Инактивированная эмульсин-вакцина с иммуностимулятором против инфекционного эпидидимита баранов / В.И. Мельниченко, В.А. Ромахов, Г.И. Устинова и др. // Ветеринария. 1998. -№3. - С. 15-20.

73. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных : справочник / В.Н.Сюрин, Р.В.Белоусова, Б.В.Соловьев и др.. Москва : Агропромиздат, 1986.-251 е.: ил.

74. Мещерякова Е.А. Структурно-функциональное исследование глюкозаминилмурамоилпептидов. Влияние химической модификации .\-ацетилглюкозаминил-К-ацетилмурамоилдипептида на его иммуномодулирующие свойства in vivo и in vitro / Е.А. Мещерякова, C.B.

75. Гурьянова, Е.А. Макаров и др. // Биоорганическая химия. — 1991. — Т. 17, № 9.-С. 1157- 1165.

76. Михайлова A.A. Пептидные медиаторы иммунной системы и их использование для иммунокоррекции / A.A. Михайлова, J1.A. Захарова // Журнал Всесоюзного Химического Общества им. Д.И.Менделеева. — 1988. — T. XXXIII, №5. С. 545 - 551.

77. Михайлова A.A. Индивидуальные миелопептиды — лекарства «нового поколения», используемые для иммунореабилитации / A.A. Михайлова // Int. Immunoreabil. 1996. - N 2. - P. 27 - 31.

78. Михайлова H.A. Опыт применения вакцины «Пиопол» при иммунизации доноров-добровольцев / H.A. Михайлова, Е.Е. Биткова, В.Б. Хватов и др. // Иммунология. 2006. - № 2. - С. 80 -83.

79. Мищенко В.А. Вакцинация новорожденных телят против ИРТ и ПГ-3 КРС / В.А. Мищенко, Ю.А.Костыркин, Н.А.Яременко и др. // Ветеринария. -2003. № 7. - С. 19 - 22.

80. Мищенко В.А. Ответ организма на инактивированную вакцину против ротавирусной инфекции КРС / В.А. Мищенко и др. // Ветеринарная патология. 2005. - № 2. - С. 66 - 68.

81. Муромцев С.Н. Копытная болезнь северных оленей / С.Н.Муромцев. Ленинград: Издательство Главсевморпути, 1935. - 48 с.

82. Мусаев А.Р. Некробактериоз крупного рогатого скота в Рязанской области / А.Р. Мусаев, И.Н. Семенова // Бюлл. ВИЭВ. 1991. - Вып. 77/78. -С. 58-59.

83. Несмеянов В.А. Влияние 1М-ацетилглюкозаминил-(Р1-4)-М-ацетилмурамоил-Ь-аланил-О-изоглутамина на экспрессию 1а-антигенов макрофагами мыши / В.А. Несмеянов, C.B. Хайдуков, Р.Л. Комалёва и др. // Биологические мембраны. 1989. — № 6. - С. 245 — 249.

84. Несмеянов В.А. Иммуномодуляторы группы мурамилпептидов: на пути к пониманию механизма биологической активности / В.А. Несмеянов //

85. Сб. трудов 1-й Национальной конференции РААКИ. — Москва, 1997. С. 153 -159.

86. Николаевский Л.Д. Причины эпизоотий некробациллеза в стадах северных оленей / Л*.Д.Николаевский // Ветеринария. 1944. - № 10. - С. 30 -33.

87. Николаевский Л.Д. Некробациллез северных оленей и борьба с ним / Л.Д. Николаевский. Москва, 1951. - 168 с.

88. Никольский В.В. Основы иммунитета сельскохозяйственных животных / В.В. Никольский. Москва : Колос, 1968. — 224 с.

89. Носков Ф.С. Иммуностимулирующая и антиинфекционная активность синтетических аналогов гликопептидов клеточной стенки бактерий / Ф.С. Носков, Л.Е. Никитина, K.JI. Масленникова и др. // Иммунология. 1984. - № 4. - С. 53 -55.

90. Нургазиев Р.З. Иммуногенная активность инактивированной вакцины против аденоинфекции крупного рогатого скота / Р.З. Нургазиев, Р.В.Белоусова // Ветеринария. 1989. - № 2. - С. 25 - 26.

91. Ожерелков C.B. Возможные механизмы противовирусного действия фоспренила / C.B. Ожерелков, О.Ю. Сосновская, Т.Н. Кожевникова и др. // Тезисы докл. вет. конф. — Екатеринбург, 2003. — С. 84-85.

92. Панасюк С.Д. Специфическая профилактика инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота и овец / С.Д. Панасюк и др.

93. Сб. науч. Тр. ВГНКИ / Всерос. гос. НИИ контроля, стандартизации и сертификации вет. препаратов. — Москва, 1996. — Т. 59. — С. 76 — 82.

94. Панасюк С.Д. Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей животных в Российской Федерации / С.Д. Панасюк, A.A. Сидорчук, Г.И. Устинова и др. // Ж. Ветеринарно медицинские новости. - София, 2003. - № 6. - С. 10 -13.

95. Петров P.B. Контроль и регуляция иммунного ответа / Р.В. Петров, В.М. Хаитов и др. Ленинград : Медицина, 1981. - 312 с.

96. Петров Р.В. Я или не я. Иммунологические мобили / Р.В. Петров. Москва : Молодая гвардия, 1983. - 272 с.

97. Петров Р.В. Полиоксидоний иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинического применения / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, A.B. Некрасов и др. // Аллергия, астма и клин, иммунол. - 1999. -№3.-С.3 -6.

98. Петров Р.В. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А. Кабанов, P.M. Хаитов и др. // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 324 - 328.

99. Пименов A.A. Активация клеточного иммунитета у мышей в норме и при опухолевом росте под действием глюкозаминилмурамилдипептида / A.A. Пименов, А.Л. Рахмилевич, В.В. Деев и др. // Вопросы медицинской химии. 1990. — Т. 36, № 1. — С. 58 — 60.

100. Пинегин Б.В. Препараты мурамилдипептидного ряда -иммунотропные лекарственные средства нового поколения /Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова, М.И. Карсонова // International Journal of Immunorehabilitation. 1997. - No 6. - P. 27 - 33.

101. Прилепин H.A. Бактерии и бактериальные вакцины как неспецифические модуляторы иммунологической реактивности / H.A. Прилепин, Б.Ф. Семенов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1980. —№11. — С. 5 — 11.

102. Пронин A.B. Роль цитокинов в иммуномодулирующих эффектах фосфатов полипренолов — противовирусных препаратов нового поколения / A.B. Пронин, C.B. Ожерелков, А.Н. Наровлянский и др. // Russian Jornal of Immunology. 2000. - Vol. 5, N 2. - P.155 - 164.

103. Пронин A.B. От естественной резистентности к протективному иммунитету: роль древних антигенных структур / A.B. Пронин // Медицинская иммунология. 2004. - Т. 6, № 3-5. - С. 190 — 103.

104. Пронин A.B. Иммуномодуляция и вакцинопрофилактика: опыт применения препарата фоспренил /A.B. Пронин // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2005. — № 1. - С. 42 - 44.

105. Прудников С.И. Иммуностимуляторы при профилактике болезней поросят / С.И. Прудников // Ветеринария. -1996. № 11.-С 13 — 17.

106. Рубченков П.Н. Влияние вилозена на эффективность иммунизации кур живой вакциной против пастереллеза птиц / П.Н. Рубченков // Ветеринария. 1992. - № 4. - С. 27 - 28.

107. Самоловов A.A. Некробактериоз крупного рогатого скота / A.A. Самоловов. Новосибирск, 1998. - 140 с.

108. Самоловов A.A. Некробактериоз крупного рогатого скота и пути решения проблемы / A.A. Самоловов, C.B. Лопатин // Аграрная Россия. — 2001. -№3.- С. 34-37.

109. Самоловов A.A. Изучение и состояние проблемы некробактериоза северных оленей / A.A. Самоловов, В.П.Кечин, К.А.Лайшев. Новосибирск, 2001.-178 с.

110. Санин A.B. Применение иммуномодуляторов при вирусных заболеваниях мелких домашних животных / A.B. Санин // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние животные. 2005. - № 1. — С. 38 — 42.

111. Свиридов Л.П. Изучение влияния иммуностимуляторов на устойчивость белых мышей к возбудителю брюшного тифа / Л.П. Свиридов, P.E. Степанов и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1990. — № 4. - С. 70-73.

112. Севастьянов С.И., Применение биогенных стимуляторов в животноводстве и ветеринарии Казахстана / С.И. Севастьянов, А.И. Исмагулов, М.М. Шахматов // Гуминовые удобрения: Теория и практика их применения. 1983. - Т. 9. - С. 134 - 138.

113. Сергеев В.А. Вирусные вакцины / В.А. Сергеев. Киев : Урожай, 1993.-369 с.

114. Сергеев В.А. Вирусы и вирусные вакцины / В.А. Сергеев, Е.А.Непоклонов, Т.И.Алипер. Москва : Библионика, 2007. - 524 с.

115. Сетдикова Н.Х. Влияние нового иммуностимулятора гликопина на состояние здоровья и некоторые показатели иммунного статуса здоровыхдобровольцев / Н.Х. Сетдикова, A.M. Борисова, А.Е. Шульженко и др. // Иммунология. 1995. - № 2. - С. 49 - 51.

116. Сидорчук A.A. Применение иммуностимуляторов при вакцинации овец против копытной гнили / A.A. Сидорчук, Ю.Н. Федоров, О.В. Жукова //" Бюл. ВИЭВ. 1989 - Т. 71. - С. 49 - 53.

117. Сидорчук A.A. Комплекс мероприятий при некробактериозе крупного рогатого скота / A.A. Сидорчук, С.Д. Панасюк, Г.И. Устинова // Ветеринария. 1994. - № 1. - С. 12 - 15.

118. Сидорчук A.A. Состояние изученности и проблемы борьбы с некробактериозом крупного рогатого скота / A.A. Сидорчук, Г.И. Устинова и др. // Материалы международн. симпозиума. Кишинев, 1998. — С. 75 — 77.

119. Сидорчук A.A. Система мероприятий по борьбе с некробактериозом крупного рогатого скота и копытной гнилью овец / A.A. Сидорчук, С.Д. Панасюк и др. // Ветеринария. 1999. — № 6. - С. 23 - 27.

120. Сидорчук A.A. Проблемы борьбы с некробактериозом: заблуждения и реальность / A.A. Сидорчук, JI.B. Кириллов, С.Д. Панасюк и др. // Ветеринария. 2006. - С. 5 — 6.

121. Симбирцев A.C. Клиническое применение препаратов цитокинов / A.C. Симбирцев // Иммунология. 2004. -№ 4. - С. 247 - 251.

122. Симбирцев A.C. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета / A.C. Симбирцев // Иммунология. — 2005. —№ 6.-С. 368- 377.

123. Сисягин П.Н. Влияние гликопина на эффективность вакцинации телят при вирусных респираторных болезнях / П.Н. Сисягин, Г.Р. Реджепова, C.B. Втюрин и др. // Ветеринарная патология. 2005. - № 4. -С. 116-118.

124. Смирнова О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1966.-№4. -С. 8- 11.

125. Соколов В. Д. Иммуномодулирующее действие препарата «Эвинтон» при иммунодефиците / В.Д. Соколов, Н.В. Уткина // Ветеринар. -2008.-№ 6.-С. 36-37.

126. Соломатин М.В. Влияние рибава на иммунитет цыплят протии болезни Марека / М.В. Соломатин, Н.Т. Татаринцев, М.М. Горячева // Ветеринария. 2006. - № 11. - С. 15 - 16.

127. Соломаха О.И. Некробактериоз комплексное решение проблемы / О.И. Соломаха, JT.B. Кириллов // Аграрная Россия. - 2001. - № 3. - С. 38 -41.

128. Степанова E.H. Сравнительное изучение иммуномодулирующих свойств ряда синтетических аналогов мурамоилдипептида / E.H. Степанова, К.П. Кашкин, М.Н. Китаева и др. // Иммунология. 1985. - № 3. - С. 37 -40.

129. Сюрин В.Н. Диагностика вирусных болезней животных : справочник / В.Н. Сюрин, Р.В.Белоусова, Н.В.Фомина. Москва : Агропромиздат, 1991. - 528 е.: ил.

130. Сюрин В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В.Соловьев и др.. Москва : ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

131. Татарчук О.П. Усовершенствованная схема борьбы с некробактериозом крупного рогатого скота / О.П. Татарчук // Ветеринария. -2005.-№5.-С. 13-16.

132. Терехов О.П. Изучение механизма активации Т-лимфоцитов мышей под действинем мурамоил-дипептида и его синтетического аналога в системе in vitro / О.П. Терехов, К.П. Кашкин, М.Н. Китаева и др. // Иммунология. 1985. - № 5. - С. 55 - 58.

133. Теш А.И. Влияние иммуностимуляторов на противосальмонеллезный иммунитет у телят / А.И. Теш, В.М. Чекишев // Ветеринария. 1989. - № 5. - С. 35 - 37.

134. Топтыгина А.П. Использование иммунокорректора полиоксидония при иммунизации детей вакциной «Приорикс» / А.П. Топтыгина, H.A. Солдатенкова, В.А. Алешкин // Иммунология. 2005. - № 5. - С. 308 —311.

135. Троценко Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии : учеб. пособие для студентов вузов по спец. 310800 "Ветеринария" / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская. 2. изд., перераб. и доп. - Москва : Колос, 2000. - 272 е., ил.

136. Тулева Н.П. Иммунопрофилактика респираторных вирусных болезней телят / Н.П. Тулева, Ю.В. Тулев // Ветеринария. 2004. - № 8. - С. 18-20.

137. Федоров Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. -2005.-№2.-С. 3-6.

138. Федоров Ю.Н. Иммунодефицита крупного рогатого скота / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. 2006. - № 1. — С.З - 6.

139. Фролов B.C. Динамика антител у коров и телят, вакцинированных против аденовирусной инфекции / B.C. Фролов, Р.В. Белоусова // Ветеринария. 1985. - № 5. - С.38 - 42.

140. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.М. Истамов. Москва : ВНИРО, 1995. - 219 с.

141. Хаитов P.M. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Клин. мед. — 1996. — Т. 74, №8. -С. 7- 12.

142. Хаитов P.M. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. -1996.-№ 6.-С. 4-9.

143. Хаитов P.M. Экспериментальное изучение иммунотропной активности фармакологических препаратов / P.M. Хаитов, И.С. Гущин, Б.В. Пинегин, А.И. Зебреа // Ведомости Фармакол. комитета. — 1999. № 1. - С. 31-36.

144. Хаитов P.M. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2000.-№ 5.-С. 4-7.

145. Хаитов P.M. Иммунология : учебник / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. Москва : Медицина, 2000. - 432 с.

146. Хаитов P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2003.-№4.-С. 196-203.

147. Хайдуков C.B. Макрофаги главная мишень дисахарид-содержащих мурамоилпептидов / C.B. Хайдуков, P.JI. Комалёва, В.А. Несмеянов // Иммунология. - 1995. - № 3. - С. 26 - 30.

148. Хитрова А.Е. Антигенная активность вакцин Комбовак-Р и Комбовак-К / А.Е. Хитрова, Г.Л. Соболева, В.А. Сергеев и др. // Ветеринария. 2004. - № 11. - С. 21 - 24.

149. Хитрова А.Е. Эффективность применения комбинированных вакцин серии Комбовак / А.Е. Хитрова, В.А. Сергеев, Т.И. Алипер и др. // Ветеринария. 2006. - № 9. - С. 17 - 20.

150. Шахов А.Г. Применение иммуномодуляторов при вакцинации животных против сальмонеллеза / А.Г. Шахов, Ю.Н. Масьянов, Ю.Н. Бригадиров и др. // Ветеринария. 2006. - № 6. - С. 21 — 26.

151. Шемельков Е.В. Антигенная активность вакцины против инфекционных болезней свиней при включении в ее состав адъювантов / Е.В. Шемельков, Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский // Сельскохозяйственная биология. 2008. - № 4. - С. 101 - 105.

152. Шемельков Е.В. Влияние разных адьювантов на эффективность вакцин ПЛАР и ПЛА / Е.В. Шемельков, О.А. Верховский, Б.Г.Орлянкин // Ветеринария. 2009. - № 11. - С. 23 - 28.

153. Юров К.П. Профилактика вирусных болезней молодняка крупного рогатого скота с использованием вакцин и природных иммуномодуляторов / К.П. Юров, А.Ф.Шуляк, Г.Н.Величко и др. // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. — 2010. Т.76. - С. 131 - 136.

154. Юсупов Р.Х. Иммунодефицита животных и их профилактика / Р.Х. Юсупов // Ветеринарный врач. 2007. - спецвыпуск. — С. 8 - 11.

155. Adam A. Adjuvant activity of monomeric bacterial cell peptidoglicans / A. Adam, R. Ciorbaru, F. Ellouz, J.-F. Petit, E. Lederer // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974. - Vol. 56. - P. 561.

156. Adam A. Muramil peptides chemical structure, biological activity and mechanism of action / A. Adam, J.F. Petit, P. Lefrancier, E. Lederer // Molecular Cell Biochemistry. 1981. - Vol. 41, N 4. - P. 27 - 47.

157. Adam A. Muramyl peptides: immunomodulators, sleep factors, and vitamins / A. Adam, E. Lederer // Med. Res. Rev. 1984. - N 4, H I. - P. 152.

158. Adam A. Synthetic adjuvants / A.Adam, Ed Bona // Modern concepts in immunology. 1985.-Vol. 134.-P. 365.

159. Andronova T. The structure and Immunological function of glucosaminylmuramyl peptides / T. Andronova, V.T. Ivanov // Sov. Medical Reviews. D. Immunology (Harwood Academic Publishers). 1991. - Vol. 4. - P. 1-63.

160. Archambault D. Influence of immunomodulatory agents on bovine humoral and cellular immune responses to parenteral inoculation with bovine rotavirus vaccines / D. Archambault, G. Morin , Y. Elazhary // Vet. Microbiology.- 1988-Vol. 17.-P. 323 -334.

161. Archambault D. Adjuvants et stimulants de "immunité: propriétés immunoregulatrices du muramyl-dipeptide, des corynebacteries anaerobies et du diethyldithiocarbamate de soL / D. Archambault, G. Morin // Canad. veter. J. — 1988.-T. 29, N1.-P. 123.

162. Azuma I. Review: Inducer of cytokines in vivo: overview of field and romurtide experience / I.Azuma // Int. J. Immunopharmacol. 1992. - Vol. 14, N 3.-P. 487-496.

163. Barr G.M. Immunopharmacological activities and clinical development of muramyl peptides with particular emphasis on murabutid / G.M. Barr, E. Darcissac, D. Bevec et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1995. - Vol. 17. - P. 117-131.

164. Bell R.J. Cell interaction in antibody formation / R.J. Bell // J. of the American Vet. Med. Assoc. 1982. - N 10. - P. 1011 - 1014.

165. Benisek Z. A new lipoid adjuvant: harmlessness and local reactogenicity / Z. Benisek, J. Suliova, S. Svrcek. et al. // Vet. Med. Chech. -1999 (4). - Vol. 44. - P. 101 - 108.

166. Bick P.H. Cytotoxic T-cell activation by polyribonucleotides: DNA syntesis is not required / P.H.Bick, G.Moller // J. Exp. Med. 1977. - Vol. 146. -P. 844 - 856.

167. Bizanov G. Enhancement of antibody response to Sendai virus in rabbits by use of various adjuvants / G. Bizanov, P. Petniunas, I. Jonauskiene // Bull. Vet. Inst. Pulawy.— 2004 (3). Vol. 48. - P. 191 - 194.

168. Bizanov G. Mucosal and humoral immunity in mice immunized intranasally with murine parainfluenza virus type 1 in combination with adjuvants / G. Bizanov, I. Jonauskiene // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 2004 (3). - Vol. 48. - P. 89 -92.

169. Chedid L.A. Biological activity of a new synthetic muramyl peptide adjuvant devoid of pyrogenicity / L.A. Chedid, M.A. Parant, F.M. Audibert et al. // Inf. Immun. 1982. - Vol. 35. - P. 417 - 424.

170. Clark B.L. Studies into immunization of Cattle against The role interdigital necrobacillosis / B.L. Clark, D.L. Emery, D.J. Stewart // Austral. Vet. J. 1986. - Vol. 63., N 4. - P. 107 - 110.

171. Creaven P.J. Initial clinical trial of macrophage activator MTP-PE encapsulated in liposomes in patients with advanced cancer / P.J. Creaven, J.W. Cowens, D.E. Brenner et al. // J. Biol. Resp. Modifier. 1990. - Vol. 9. - P. 492-498.

172. Cygan Z. Badania nad etiologia stanow zapalnych racie owiec / Z. Cygan, T. Jastzebski, S. Uchacz // Medicina Weter. 1974. - T. 30. - N 7. - P. 392.

173. Dinarello C.A. Induction of interleukin-1 by synthetic and naturally occurring muramyl peptides / C.A. Dinarello, J.M. Krueger // Fed. Proc. 1986. -Vol. 45.-P. 2545-2548.

174. Edwards S. The diagnosis of bovine diarrhea-mucosal disease in cattle / S. Edwards // Scientifical and Technical REVIEW. 1990. - Vol. 9, N 1. - P. 115- 150.

175. Ellouz F. Minimal structural requirements for adjuvant activity of bacterial peptidoglycan derivatives / F. Ellouz, A. Adam, R. Ciobraru, E. Lederer // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974. - Vol. 59. - P. 1317- 1325.

176. Girardin S.E. Peptidoglycan molecular requirements allowing detection by Nodi and Nod2 / S.E. Girardin, L.H. Travassos, M. Herve et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278 (43). - P. 41702 - 41708.

177. Gregoriadis G. Immunological adjuvants: a role for liposomes / G. Gregoriadis // Immunology Today. 1990. - Vol. 11, N 3. - P. 89 -97.

178. Hadden J.W. Immunostimutants / J.W. Hadden // Immunology Today.- 1993. Vol. 14. - P. 275 - 280.

179. Hampl J. Enhancement of antibody response to Bovine Herpesvirus 1with non-specific imunostimulants / J. Hampl, J. Franz, J. Stepanek, M. Toman // Vet. Med. Chech. - 1996 (5). - Vol. 41. - P. 143 - 147.

180. Han I.H. Regulation of the immune system by synthetic polynucleotides. VI. Amplification of the immune response in young and aging mice / I.H.Han,A.G Johnson // J. Immunol. 1976. - Vol. 117. - P. 423 - 427.

181. Heath A.W. Conjugation of interferon-gamma to antigen enhances its adjuvanticity / A.W. Heath, J.H.L. Playfair // Immunology. 1990 (3). - Vol. 71. -P. 454-456.

182. Hubik R. Vyzkum vysoce ücinnych vakcin a metod praktické imunoprofylaxe se zamërenim na ochranu velkochovu prasat pred slintavkou / R. Hubik, P. Flachsei, J. Svec et al.. Terezin : Bioveta, 1982. - 69 s.

183. Ishihara C. Effect of muramyl dipeptide and its stearoyl derivates on resistance to Sendai virus infection in mice / C. Ishihara, H. Hamada, K. Yamamoto et al. // Vaccine. 1985. - Vol. 3. - P. 370 - 374.

184. Ivanov V.T. Bacterial glykopeptides. Synthesis biological properties and application in synthetic vaccine. Synthetic immunomodulators and vaccines / V.T. Ivanov // Proc. Intern. Symp. 1985. - Czechoslovakia. - 1986. - P. 174.

185. Johannsen L. Biological properties of bacterial peptidoglycan / L. Johannsen // Acta pathologica, microbiologica et immunologica Scandinavica. -1993. Vol. 101. - P. 337 - 344.

186. Kaji M. Phase 1 clinical tests of influenza MPD-virosome vaccine (KD-5382) / M. Kaji, Y. Kaji, M. Kaji, K. Ohkuma et al. // Vaccine. 1992. - Vol. 10.-P. 663-667.

187. Khansari D.N. Effects of stress on the immune system / D.N. Khansari, A.J. Murgo, R.N. Faith // Immunology today. 1990. - Vol. 11, N 5. - P. 170 -175.

188. Krejci J. Dosazené poznatky o anafylaktoidnych reakcich scotu / J. Krejci, M. Toman, K. Pinka et al.. Brno, 1988. - 35 s.

189. Leclerc C. Synthetic immunomodulators and synthetic vaccines / C. Leclerc, F.R. Vogel // Th. Drug Carrier Syst. 1986. - V. 2. - P. 353.

190. Lederer E. Natural and synthetic immunomodulators derived from the mycobacterial cell wall / E. Lederer,Ed. B.Bizzini, E. Bonmassar // Advances in immunomodulation. -1988.-P. 9.

191. Leenaars P.P.A.M. Evaluation of several adjuvants as alternatives to the use of Freund's adjuvant in rabbits / P.P.A.M. Leenaars, C.F.M. Hendriksen, A.F. Angulo et al. // Vet. Immunology and Immunopathology. — 1994. Vol. 40. -P. 225-241.

192. Mancini G. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. Mancini, A.O. Carbonara, I.P. Heremans // Immunochemistry. 1965. - Vol. 2, 3. - P. 235-254.

193. Matsumoto K. Stimulation of non specific resistance to infection induced by 6-O-acylmuramyl dipeptide in mice / K. Matsumoto, H. Ogawa, T. Kusama et al. // Infect. Immun. 1981. - Vol. 32. - P. 748 - 758.

194. McGhee J.R. Cellular requirements for lipopolysaccharide adjuvanticity / J.R.McGhee, J.J. Farrar, S.M. Michalek et al. // J. Exp. Med. -1979.-Vol. 119.-P. 793 -807.

195. Moatamed F. Early cellular responses to mitogens and adjuvants in the mouse spleen / F. Moatamed, M.J.Karnovsky, E.R.Unanue // Lab. Invest. 1975. -Vol.32. - P. 303 -312.

196. Morein B. The ISCOM: an immunostimulating complex / B. Morein et al. // Immunology today. 1987. - Vol. 8. - N. 11. - P. 333 - 338.

197. Mota I. The effect of a synthetic double-stranded RNA on IgGl and IgE production by guiney-pig / I. Mota, A. Perini // Immunology. 1975. -Vol.29. - P. 319-326.

198. Murphy B.R. / B.R.Murphy, R.M. Chanock // Virology. 1985. - 349. Цит. В.А. Сергеев, Е.А.Непоклонов, Т.И.Алипер. - Москва : Библионика, 2007. - 524 с.

199. Murray J.L. Phase 1 trial of liposonial muramyl tripeptide phosphatidylethanolamire in cancer patients / J.L. Murray, E.S. Kleineiman, J.E. Cunningham et al. // Am. J. Clin. Oncol. 1989. - Vol. 7. - P. 1915 - 1925.

200. Nagaraja T.G. Fusobacterium necrophorum infections in animal: Pathogenesis and pathogenic mechanisms / T.G. Nagaraja, S.K. Narayanan, G.C. Stewart et al. // Anaerobe. 2005. - Vol. 11. - P. 239 - 246.

201. Osebold J.W. Mechanisms of action by immunologic adjuvants / J.W. Osebold // J. of the American Vet Med. Assoc. 1982. - N 10 - P. 983 - 987.

202. Osserman E. Serum and urinary lysozime (muramiolase) in monocytic and monomyelocytic leukemia / E. Osserman, D. Lawlor // J. Exp. Med. — 1966. -Vol. 124.-P. 921 -951.

203. Parant M. Biologic properties of a new synthetic adjuvant, Muramyl Dipeptide (MDP) / M. Parant, F. Parant, L. Chedid // Springer Seminar in Immunopathology. — Springer Berlin / Heideberg. 1979. - Vol. 2, N 1 (May). -P. 101 - 118.

204. Parks D.E. Induction and mode of action of suppressor cells generated against human gamma globulin. II. Effects of colchicine / D.E. Parks, D. A. Shaller, W.O. Weigle//J.Exp. Med. 1979. - Vol. 149.-P. 1168- 1182.

205. Reynolds J.A. Adjuvant activity of novel metabolisable lipid emulsion with inactivated viral vaccines / J.A. Reynolds, D.J. Harrington, C.L.Crabbs et al. // Infect. Immun. 1980. - Vol. 28. - P. 937 - 943.

206. Roberts D.C. The pathogenic synergy of Fusiformis necrophorus and Corynebacterium pyogenes. 1. Influence of the leucocidal exotoxin of F. necrophorus / D.C.Roberts // Brit. J. exp. Path. 1967. - Vol. 48. - P. 665 - 673.

207. Roberts D.C. The pathogenic synergy of Fusiformis necrophorus and Corynebacterium pyogenes. 2. The response of F. necrophorus to a filterable product of C. pyogenes / D.C.Roberts // Brit. J. exp. Path. 1967. - Vol. 48. - P. 674 - 679.

208. Roberts D.C. The aetiology and pathogenesis of ovine foot-rot. II The pathogenic association of Fusiformus nodosus and Fusiformis necrophorus / D.C.Roberts, J.R.Egerton // J. Comp. Path. 1969. - Vol. 79. - P. 217.

209. Rouse B.T. Liposomes as carriers of antigens as well as other molecules involved in immunity / B.T. Rouse // J. of the American Vet. Med. Assoc. 1982.-N 10.-P. 988-991.

210. Saiki I. Induction of tumoricidal macrophages and production cytokines by synthetic muramyl dipeptides analogues / I. Saiki, S. Saito, C. Fujia et al. // Vaccine. 1988. - Vol. 6. - P. 238 - 244.

211. Sanceau J. Secretion of interleukin-1 (IL-6) by human monocytes stimulated by muramyl dipeptide and tumor necrosis factor-alpha / J. Sanceau, R. Falcoff, F. Beranger et al. // Immunology. 1990. - Vol. 69. - P. 52 - 56.

212. Skidmore B.J. Immunologic properties of bacterial lipopolysaccharide (LPS): Correlation between the mitogenic, adjuvant, and immunogenic activities / B.J. Skidmore, J.M.Chiller,D.C. Morrison et al. // J. Immunol. . 1975. - Vol. 114.-P. 770-775.

213. Shimoda K. Production of interleukin-6 from macrophages by MDP-Lys (18)6 romurtide / K. Shimoda, S. Okamura, N. Harada et al. // Res. Commun. Chem. Path. Pharmac. 1990. - Vol. 70. - P. 289 - 296.

214. Siiliova J. A new lipoid adjuvant: preparation and observation of its1. V Veffectiveness / J. Siiliova, Z. Benisek, S. Svrcek. et al. // Vet. Med. — Chech. -1999 (4).-Vol. 44.-P. 93 -99.

215. Toman M. Priciny vzniku anafylaktoidnych reakci u scotu po aplicaci lipoidnich preparatu / M. Toman, J. Krejci, K. Pinka et al. // Vet. Med. Chech. - 1992. - Vol. 37. - P. 417 - 426.

216. Tsubura E. Restorative activity of muroctasin on leukopenia associated with, anticancer treatment / E. Tsubura, T. Nomura, H. Nitani et al. // Arzneim. Forsch. / Drug Res. 1988. - Vol. 38. - P. 983 - 986.

217. Umezawa H. Small Molecular Immunomodifiers of Microbial Origin / H. Umezawa. New York : Pergamon Press, 1981. - 147 p.

218. Vanselow B.A. The application of adjuvants to veterinary medicine / B.A.Vanselow // Vet. Bull. 1987. - Vol. 57. - P. 881 - 896.

219. Vermeulen M.W. Processing of Bacillus subtilis peptidoglycan by mouse macrophage cell line / M.W. Vermeulen, G.R. Gray // Infect. Immunol. -1984. Vol. 46. - P. 476 - 478.

220. Vosika G.J. Phase 1 trial of ImmTher, a new liposome-incorporated lipophilic disaccharide tripeptide / G.J. Vosika, D.A. Cornelius, C.W. Gilbert et al. // J. Immunother. 1991. - Vol. 10. - P. 256 - 266.

221. Wells P.W. Immunization of cattle with a variant-specific surface antigen of Trypanosoma brucei: Influence of different adjuvants / P.W. Wells, D.L. Emery, C.A.Hinson et al. // Infect. Immun. 1982. - Vol. 36. - P. 1 - 10.

222. Werner G. H. Immunostimulating agents: what next? A review of their present and potential medical applications / G. H. Werner, P. Jolles // Eur. J. Immunol. 1996. - Vol. 242. - P. 1-19.

Информация о работе

Кучерук, Оксана Дмитриевна
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы