Диссертации » Биологические науки » Физиология

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние биологической стимуляции на неспецифический иммунитет у коз
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние биологической стимуляции на неспецифический иммунитет у коз"

На правах рукописи

ТРУБНИКОВА Папина Владимировна

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ СТИМУЛЯЦИИ НА НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНИТЕТ У КОЗ

03.00.13 - физиология АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь - 2004

Работа выполнена в Ставропольском научно-исследовательском институте животноводства и кормопроизводства

Научный руководитель: доктрр биологических наук, профессор, академик РАЕН и МААО Мещеряков Федор Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Губарева Любовь Ивановна,

кандидат медицинских наук, доцент Трофимов Виктор Кузьмич

Ведущая организация: Астраханский государственный универси-

Защита диссертации состоится « 12 >> февраля 2004 года в « /4 » часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.256.04 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 2, аудитория 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 1.

Автореферат разослан «_» января 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Процессы индустриализации сопровождаются повышением степени загрязнения внешней среды веществами, обусловливающими нарушение естественного природного равновесия в экологических системах. Воздействие разнообразных вредных факторов среды приводит к возникновению иммунной недостаточности, связанной с различными нарушениями иммунологического равновесия (А.М. Петров, О.Н. Ма-курина, М.М. Серых и др., 2000, Ф.А. Мещеряков, 2003). Из всех продуктивных животных козы наиболее чувствительны к негативным воздействиям окружающей среды. Поэтому они могут служить моделью для установления -общебиологических закономерностей реактивности организма. Кроме того, значение молочного козоводства в последние годы неуклонно растет. В ряде стран при производстве молочных продуктов козье молоко играет решающую роль. Например, в Греции 85 % сыров и 65 % йогуртов производится с использованием молока коз (Б.С. Иолчиев, Н.С. Марзанов, Е.А. Чалых, 2000). В нашей стране востребованность в продуктах молочного козоводства, как в диетических легкоусвояемых и антиаллергических продуктах питания также высока. Поэтому изучение .особенностей физиологии коз и поиск путей, повышающих сохранность поголовья особенно актуальны. Учитывая многообразный патогенез развития иммунодефицита, возникает острая необходимость применения коррегирующих веществ, действующих на все звенья общей реактивности организма, каковыми являются биостимуляторы. Для повышения иммунитета в настоящее время имеется большое количество различных препаратов, однако, многие из них недоступны для хозяйственников ввиду сложности применения, либо ограниченности специфической направленностью действия. В связи с этим поиск и изучение действия новых биостимуляторов, простых в применении, высокоэффективных и экологически чистых является актуальным й практически обоснованным. Влияние биостимулятора из тканей мозга (БСМ) на прирост живой массы и продуктивность бройлеров, овец, и коров ранее исследовали Т.Р. Лотковская (1995); Г.А. Джаилиди, (1997), Р.А. Цыганский (2003). Однако до настоящего момента остаются неизученными вопросы о влиянии БСМ на иммунный статус животного, возможность применения препарата беременным самкам с целью повышения сохранности новорожденных, а также не определены дозы и способы введения препарата молочным козам.

Дели и задачи исследования. Основной целью наших исследований являлось изучение зависимости показателей неспецифического иммунитета у

з

коз от физиологического состояния их, репродуктивной системы у интактных животных и под воздействием БСМ. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- изучить динамику изменения показателей естественной резистентности у коз в различные периоды их воспроизводительной функции;

- разработать простой и объективный способ оценки биологической активности биостимуляторов;

- исследовать особенности действия БСМ на организм коз;

- установить влияние БСМ на иммунный статус беременных животных и их потомства.

Научная новизна. Впервые изучена динамика гематологических и иммунных показателей у коз при различных функциональных состояниях их репродуктивного тракта. Установлены тесные коррелятивные связи между показателями гемограммы, бактерицидной и лизоцимной активностями сыворотки крови, фагоцитарной активностью лейкоцитов, концентрацией Т- и В-лимфоцитов в крови. На основании исследований, выявивших циклический характер жизнедеятельности дрожжей 8ассИаготусе8 еШрв^ёев, разработан простой и объективный экспресс-метод определения биологической активности биостимуляторов. Подтверждена возможность применения БСМ для функциональной активации неспецифических факторов иммунной системы животных. Определены оптимальная доза и способ введения препарата козам. Выяснен характер морфологических изменений в селезенке, печени и почках белых мышей под влиянием препарата. Установлено положительное влияние биологической стимуляции матерей на неспецифическую резистентность их потомства.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Опыты по изучению иммунных показателей коз в различные периоды их воспроизводительной функции расширяют и углубляют познания об иммунитете животных. В связи с отсутствием нормативных данных по показателям естественной резистентности у коз, полученные показатели могут послужить ориентиром при оценке неспецифического звена иммунитета у поголовья. Для определения биологической активности биопрепаратов разработан экспресс-метод, основанный на способности дрожжей 8ассИаготусе$ еШрвйёев к быстрому размножению и газообразованию. Получены положительные результаты по эффективному применению препарата БСМ в качестве иммуномоду-лятора. Разработана схема применения БСМ беременным животным для повышения иммунного статуса потомства. Данные, полученные в эксперимен-

» Г : * 4

| ? : •

л к

I

тах, используются в учебном процессе на кафедре общей биологии Ставропольского государственного университета в курсе лекций по иммунологии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

- Свидетельством зависимости факторов неспецифического иммунитета от функционального состояния их репродуктивной системы является изменение бактерицидной и лизоцимной активностей сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, концентрации Т- и В-лимфоцитов и циркулирующих иммунных комплексов в крови у коз в различные стадии репродуктивной функции.

- Циклический характер процессов размножения и бродильной активности дрожжей позволил использовать культуру 8ассИаготусе8 еШрвс^ез для разработки метода определения биологической активности биостимуляторов.

- Применение БСМ оказало стимулирующее воздействие на неспецифическую резистентность коз и позволило получить от них потомство с высоким иммунным статусом.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на X международной конференции «Циклы природы и общества» (г. Ставрополь, 2002); международной научно-практической конференции «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России» (Ставрополь-Пятигорск, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает разделы: о б -зор литературы, материалы и методы исследования, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список литературы. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 21 рисунком. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 54 иностранных автора.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования по теме диссертации проводились в лаборатории воспроизводства сельскохозяйственных животных, лаборатории биохимии и иммуногенетики, лаборатории незаразных болезней Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства, опытной станции СНИИЖК, кафедре физиологии и хирургии, межфакультетской биохимической лаборатории Ставропольского государственного аг-. рарного университета, ФГУП «Ставропольская биофабрика» в 1998-2003 гт.

Производственный эксперимент был выполнен на опытной станции СНИИЖК. Объектами исследований были козы зааненской породы 19992000 годов рождения, с живой массой 50-55, среднесуточным удоем 2 кг, сходные по фенотипу и полученные от них козлята.

Козам синхронизировали охоту по методике А.-М.М.. Айбазова Л.С.Малаховой и др. (2001). Затем животные были искусственно осеменены свежеполученной спермой. Зависимость гематологических и иммунологических показателей от стадии репродуктивной функции изучалась на 30 животных (1 группа - контрольная). Исследования проводились: в отсутствие охоты (определяли с помощью баранов-пробников), во время охоты, через 24 часа после осеменения, на 1-5 месяцах беременности, сразу после родов, через 1,4, 10, 24, 48 часов и 10 суток после родов. Параллельно была сформирована 2 группа из 10 животных (опытная), которым вводили биостимулятор из тканей мозга (БСМ) на 1-4 месяцах беременности. Через 2 суток после введения у коз исследовали уровень гематологических и иммунологических показателей в сравнении с контролем. Подробное описание групп, сформированных для других экспериментов, дано в разделе «Собственные исследования». Во всех случаях при отборе животных в экспериментальные группы руководствовались принципом аналогов и лодобия.

Для определения уровня естественной резистентности изучали следующие показатели: содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов, уровень общего белка и белковых фракций сыворотки крови, бактерицидную и лизоцимную активности, фагоцитарную функцию лейкоцитов, количественное содержание Т- и В-лимфоцитов в крови, концентрацию циркулирующих иммунных комплексов.

Содержание гемоглобина и эритроцитов определяли по методике Сип-ко И.И. (1968) фотоэлектрическим эритрогемометром МРГУ-24-1443-61.

Количество лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева.

Уровень общего белка в сыворотке крови изучали рефрактометрическим методом в рефрактометре RL 140 по показателю преломления вещества.

Содержание белковых фракций устанавливали турбидиметрическим нефеломстрическим способом по И.П. Кондрахину и др. (1985).

Бактерицидную и лизоцимную активности определяли фотоэлектроко-лориметрическим способом по методикам, рекомендованным ВНИИОК (1987), при этом использовали стандартный порошок культуры Micrococcus Lisodeicticus, штамм 2665 и культуру Escherichia coli, серовариант 02.

Фагоцитарную функцию лейкоцитов.крови устанавливали способом, основанным на поглощении клетками крови мельчайших (D=l,5 мкм) поли-

стирольных частиц латекса (в изложении СВ. Криворучко, 2003). Определяли фагоцитарную активность крови и фагоцитарный индекс. Для стимуляции фагоцитоза и выявления резерва фагоцитарной функции ставили параллельный опыт с пирогеналом. Мазки окрашивали по Романовскому-Гимзе.

Определение общего содержания у-глобулинов в сыворотке крови проводили при помощи теста с сульфитом натрия по Ю.Н. Федорову и Г.Р. Реджеповой (1988).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) выявляли фотометрическим методом, по X. Тишнеру (1987).

Содержание Т- и В-лимфоцитов в периферической крови находили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК и ЕАС-РОК) в соответствии с рекомендациями КП-Кондрахина, Н.В. Курило-ва и др. (1985).

Кровь для исследований брали из яремной вены, перед их кормлением в утренние часы, исключая роды, которые происходили в разное время суток. Перед взятием крови у животных измеряли температуру, пульс, дыхание, наблюдали поведенческие реакции. Для получения цельной крови в пробирки предварительно вносили антикоагулянт-1% раствор гепарина.

Биопробу проводили по И.А. Калашнику (1990) на белых мышах.

Биологическую активность стимулятора устанавливали с помощью собственой методики с использованием дрожжей Saccharomyces ellipsoides.

В качестве питательной среды для культуры дрожжей использовали 10% раствор глюкозы. Для определения бродильной активности дрожжей углекислый газ собирали в резиновые баллончики. Количество микробных клеток подсчитывали в камере Горяева. Оптическую плотность микробной взвеси определяли на фотоэлектроколориметре при длине волны 590 нм.

При исследовании химического состава БСМ определяли содержание в нем белка, липидов, минеральных веществ. Общий азот находили по Кьель-далю, золу - сжиганием исследуемого вещества в муфельной печи (Методические указания ВНИИРиГ, 1974). Общие липиды выделяли методом Фолча, описанным Г.А. Соловьевой с соавт. (1989).

Патматериал фиксировали в забуференом водно-формалиновам растворе. Гистологические исследования проводили по технологии, описанной Р. Лилли (1969) с заливкой в парафин и последующей окраской срезов гематоксилин-эозином. Фотографировали микропрепараты с помощью компьютерного комплекса микроскопа «Микромед» и цифровой фотокамеры «Olympus 2000».

Материалы исследований анализировали, а числовые показатели обрабатывали методом критерия Стьюдента и линейной регрессии и корреляции в

программе BЮSTAT. Достоверными считали различия при Р<0,05.

Таблица 1.

Схема и объем проведенных исследований

Сущность исследова- Методы исследований Объем ис-

ний • следований

1 2 3

1. Изучение зависимо- - гематологические исследования; 1900

сти неспецифического - содержание общего белка и белко-

иммунитета от функ- вых фракций в сыворотке крови; 2330

ционального состоя- - лизоцимная и бактерицидная ак-

ния репродуктивного ■ тивности сыворотки крови; 780

тракта у коз; иссле- - фагоцитарная активность, фагоци-

дование качествен- тарный индекс; 760

ных ' характеристик - содержание Т- и В- лимфоцитов; 870

£СМ; разработка ме- - концентрация ЦИК в крови; 450

тода определения - внутрикожная проба; 30

биологической актив- - гистологические исследования; 36

ности биостимулято- - бактериологическое исследование; 6

ров; исследование - биопроба; 3

влияния БСМ на есте- - определение интенсивности газо-

ственную резистент- образования; 440

ность коз; определе- - оптической плотности; 300

ние изменений в па- - подсчет количества клеток; 260

ренхиматозных орга- - определение общего азота; 2

нах под воздействием - определение золы; 2

БСМ - выделение липидов. 2

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1, Динамика гематологических и иммунных показателей у коз в разные периоды воспроизводительной функции При анализе показателей, характеризующих резистентность коз в течение воспроизводительного периода, были отмечены следующие моменты.

Охота сопровождалась увеличением количества гемоглобина. Через 24 часа после осеменения уровень гемоглобина превышал уровень показателя в анэстральный период на 9,9 %. С развитием беременности его содержание снижалось. Наиболее высоким уровень хромопротеида был во время родов,

но уже через сутки снизился на 9,5 %. В последующие сутки послеродового периода происходило последовательное увеличение количества гемоглобина (табл. 2,3)

Таблица 3

Гематологические показатели у К03 после р_одов (п=30)_

Показатели Часы Сутки

1 4 10 1 2 10

М±ш М±ш М±ш М±т М±т М±т

Гемоглобин, г/л 89,31 ±2,3 82,42* ±2,12 81,55* ±1,72 81,57* ±2,19 82,07* ±2,03 82,25* ±2,22

Эритроциты, х10 / л 11,64 ±0,39 8,71 ** ±0,26** 8,35 ** ±0,13** 8,41 ** ±0,15** 8,56 ** ±0,11** 8,44 ** ±0,21**

Лейкоциты, х109/л 11,86 ±0,28 11,23 ±0,35 10,8 ** ±0,13** 10,71*** ±0,24 10,33* ±0,63 10,66 ±0,45

Примечание: р - уровень достоверности относительно первого часа после родов, • - р<0,05, " -1X0,01, .........................

Динамика изменения количества эритроцитов и лейкоцитов была сходна с динамикой гемоглобина.

Количество общего белка (ОБ) во время охоты снизилось на 9,7 %, а через 24 часа после осеменения - на 11,7 % по сравнению с периодом покоя. Снижение было обусловлено уменьшением а- и Р; глобулиновых фракций в 1,8 и в 7,4 раза соответственно. Содержание же альбуминов и у-глобулинов возросло в 1,5 раза. Было отмечено постепенное снижение количества общего белка с увеличением срока беременности. К концу пятого месяца уровень белка был ниже, чем на первом месяце беременности на 7,3 %. Во время родов уровень белка был минимальным - на 5,5 % меньше, чем перед родами и на 20,7 % меньше, чем в анэстральный период. После родов наблюдалось быстрое увеличение количества белка. За десять суток после родов количество альбуминов уменьшилось на 26,4 %. Количество же а-, |3- и у--глобулинов, наоборот, возросло на 13 %, 21,9 % и 4,5 % соответственно.

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) во время охоты была ниже, чем в период покоя на 15,18 %, но уже через 24 часа после осеменения возросла в 1,8 раз. В первую половину беременности бактерицидная активность была относительно низкой, во вторую половину - отмечалось нарастание показателя. Во время родов была зарегистрирована максимально высокая бактерицидная активность, она в 2,6 раза превышала средний

Таблица 2

Показатели резистентности у коз в разные периоды воспроизводительной функции (п=30)

Показатели Анэстраль-ный период Охота 24 часа после осеменения Беременность Роды

1мес. 2 мес. Змее. 4мес. за неделю до родов

М±ш М±т М±т М±ш М±ш М±т М±т М±т М±т

Гемоглобин, г/л 82^9 ±2,16 82,54 ±3,62 90,57** ±2,03 82,2 ±3,34 81,95 ±1,59 80,65 ±2,33 78,45 ±1,67 79,0 ±1,92 90,11* ±2,85

Эритроциты, х10'5/л 8,68 ±0,16 8,75 , ±0,25 8,79 ±0,26 8,39 ±0,32 8,37 ±0,18 8,30 ±0,26 8,14* ±0,22 8,14** ±0,12 11,6 ** ±0,35**

Лейкоциты, *109/л 10,12 ±0,17 11,6-±0,33 12,48** ±0,21** 11,18** ±0,07** 9,76 ** ±0,53** 10,17 ±0,09 10,44 ±0,15 11,22** ±0,17** 13,0** ±0,36**

БАСК, % 40,32 ±2,85 34,2 ±2,28 60,05** ±3,08** 28,27** ±1,16** 28,15** ±1,82** 35,2 ±1,95 36,0 ±1,21 49,78* ±2,49 88,0** ±3,14**

ЛАСК, % 22,44 ±1,16 31,5** ±2,6.» 37,15** ±2,24** 22,63 .±1,9 23,74 ±2,4 25,92* ±1,12 25,77 ±2,13 34,6 ** ±1,61** 43,08** ±4,16**

ФА, % 38,77 ±1,62 49,02** ±1,74** 56,38** ±2,66** 29,63** ±1,09** 32,13** ±0,78** 30,28** ±1,63** • 46,5 ** ±0,98** 49,48** ±1,48** 61,47** ±2,14**

ФИ 9,13 ±0,09 11,3** ±0,21** 14,81** ±0,15** 7,85** ±0,22** 8,92 ±0,34 8,41** ±0,17** 12,2** ±0,4** 14,08** ±0,25** 16,0** ±0,51**

Примечание р — уровень достоверности относительно анэстрального периода, * - р<0,05, - р<0,01, ••• - р<0,005, - р<0,001

уровень исследуемого показателя при беременности и в 2,2 раза — в анэст-ральный период.

Лизоцимная активность сыворотки крови (ЛАСК) во время охоты увеличилась по сравнению с анэстральным периодом в 1,2 раза. Во время беременности она составляла в среднем 24,5 %. За неделю до родов значение показателя увеличилось и было максимальным во время родов.

Фагоцитарная активность лейкоцитов крови (ФА) и фагоцитарный индекс (ФИ) изменялись синхронно. С началом охоты активность лейкоцитов возросла в 1,26 раз, а через 24 часа после осеменения - еще в 1,15 раза. Беременность была отмечена относительно низким уровнем фагоцитарной активности и фагоцитарного индекса. Наибольшими фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс были во время родов.

Общее количество Т-лимфоцитов увеличивалось с развитием беременности, и максимальным было за неделю до родов (табл.4).

Таблица 4

Содержание Т- и В- лимфоцитов в крови у коз (п=30)_

Показатели Беременность Послеродовый период

1 пол. 2 пол. за нед. до родов 10 часов 24 часа 10 суток

М±ш М±ш М±ш М±т М±т М±ш

Т-лимфоциты % 38,12 ±2,53 38,96 ±2,14 40,0 ±1,97 50,5 ** ±2,03** 51,1 ** ±1Л9** 51,5 ** ±2,24**

• Т-хелперы, % 31,2 ±2,07 30,5 • ±1,4 31,04 ±2,27 41,5 ** ±1,15** зол ±0,78 37,5* ±1,56

Т-супрессоры % 26,7 ±2,11 28,4 ±1,42 24,0 ±1,3 16,05** ±1,17** •20,4* ±1,81 . 19,5** ±1,37

В-лимфоциты % 14,7 ±0,56 14,91 ±0,77 15,45 ±0,32 11,2*** ±0,9 8,1 ** ±0,45** 8,0 ** ±0,5**

Примечание: р — уровень достоверности относительно первой половины беременности; * - р<0,05; •• - р<0,01; ••* - р<0,005; •*.•• - р<0,001.

Процент Т-хелперов был невысок, а Т-супрессоров, наоборот, увеличен, но за неделю до родов снизился на 15,5 %. После родов количество Т-лимфоцитов возросло и на десятые сутки восстановительного периода превышало значение показателя в конце беременности на 11,1 %. Количество В-лимфоцитов за этот период снизилось на 7,5 %.

Во время охоты было зарегистрировано снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) с 15,5±0,56 ЕД'в анэстральный период до 9,1 ±0,3 6 ЕД (р<0,001), а уже через 24 часа после осеменения его значение было максимально - 16,7±0,50 ЕД, что на 7,7 % превышало уровень показа-

теля в период покоя. Содержание ЦИК в крови беременных животных было относительно низким. С развитием беременности регистрировалось постепенное увеличение показателя (с 6,02±0,18 ЕД до 8,55±0,13 ЕД за 4 месяца). За неделю до родов произошел значительный скачок до 11,6±0,2 ЕД. Во время родов значение ЦИК резко упало и составило 5,5±0,26 ЕД. Снижение показателя продолжалось в течение часа после родов до 5,22±0,25 ЕД, затем его колебания были незначительны и имели тенденцию к восстановлению до исходного.

2. Связь иммунологических и гематологических показателей у коз

Для успешной профилактики болезней животных, своевременного выявления патологических форм, повышения эффективности лечебных мероприятий необходимо систематическое обследование иммунного статуса поголовья. В таблице 5 мы отразили коррелятивную зависимость параметров естественной резистентности между собой. С ее помощью, зная значение двух-трех наиболее легко определяемых показателей, мы могли бы четко представить себе общий уровень естественной резистентности организма животного, а также ее отдельных составляющих.

3. Получение биостимулятора из тканей мозга (БСМ) и оценка его

биологической активности

Проведенные • исследования выявили сниженный иммунологический статус у подопытных животных. Для того, чтобы поднять уровень естественной резистентности, мы предлагаем использовать биостимулятор из мозговой ткани - БСМ (патент РФ № 2071335 10/1-1997), разработанный на кафедре физиологии и хирургии под руководством профессора Ф.А. Мещерякова. БСМ - продукт комплексного воздействия на изолированные живые ткани головного мозга крупного и мелкого рогатого скота трех последовательных процессов: охлаждения, облучения УФЛ и лиофилизации. Химический состав биостимулятора следующий: общий азот - 33,2 %, общие липиды - 41,0 %, зола - 6,5 %.

Главным действующим фактором биостимулятора мы считаем имму-норегуляторное воздействие нейроактивных пептидных гормонов - нейро-пептидов, которые в качестве физиологических адаптогенов участвуют в обеспечении гомеостатических процессов организма. Их действие направлено на нормализацию и оптимизацию измененного состояния нейрохимиче ского баланса в клетке, приводящего к коррекции иммунного статуса в организме. Активными являются не только целые пептиды,. но и, даже в

Таблица 5

Взаимосвязь гематологических н иммунных показателей у коз

Эр. Лей. ФА ФЧ БА ЛА ОБ Ал. а-гл. Р-гл. у-гл. ■Т-л. Т-х. Т-с. В-л. ИРИ ЦИК

Гем. 0,79 0,78 0,60 0,55 0,35 0,08 -0,14 0,24 -0,03 0,46 -0,58 0,65 0,41 -0,59 -0,73 0,48 0,24

Эр. - 0,67 0,41 0,57 0,86 0,83 -0,33 0,52 -0,14 0,11 0,09 0,73 0,20 -0,56 -0,85 0,35 -0,34

Лей. - - 0,82 0,79 0,82 0,89 -0,38 0,38 -0,26 -0,47 0,52 0,22 0,31 -0,39 -0,52 0,33 0,02

ФА - - - 0,97 0,83 0,90 -0,41 -0,20 -0,09 0,03 0,43 0,91 -0,55 -0,29 0,82 0,16 0,27

ФИ - - - - 0,85 0,93 -0,57 -0,16 -0,23 0,06 0,33 0,98 -0,37 -0,48 0,92 0,36 0,23

БА - - - - - 0,93 -0,61 -0,86 -0,59 0,16 -0,37 0,99 -0,12 -0,73 0,99 0,63 0,09

ЛА - - - - - - -0,64 -0,56 -0,91 -0,38 0,18 0,99 -0,19 -0,68 0,99 0,58 0,13

ОБ - - - - - - -0,70 0,69 0,54 0,05 -0,16 -0,41 0,49 -0,13 -0,57 0,21

Примечание выделены достоверные значения, при р<0,05.

большей степени, их метаболиты (С- и ^концевые фрагменты, отдельные аминокислоты). Воздействия на мозговую ткань применяемые при изготовлении БСМ способствовали расщеплению отдельных пептидов на фрагмен-.ты, обладающие самостоятельным, отличным от гормона предшественника спектром действия. При изготовлении каждую новую серию препарата подвергали проверке на растворимость, стерильность, безвредность, биологическую активность и постоянство химического состава. Провеоку биостимулятора на биологическую активность проводили собственным методом, основанным на способности дрожжей Sacchaгomyces eШpsoides к быстрому увеличению популяции и высокой бродильной активности.

Чтобы выяснить, могут ли дрожжи послужить в качестве теста для определения эффективности биостимуляторов с культурой Sacchaгomyces eШp-soides, был проделан ряд опытов. В результате было выяснено, что бродильной активность дрожжей можно представить в виде синусоиды с постоянной амплитудой колебания в течение 24-48 ч., фазами подъема интенсивности в промежутках 0-6, 12-18, 24-30, 36-42 ч. и фазами снижения интенсивности соответственно - 6-12,18-24,30-36,42-48 ч. (рис. 1).

У(«»)

* I] II 24 30 3« «2 4Я

Рис.1. Динамика бродильной активности

Из графика можно вывести функцию активности газообразования:

С 3 до 5 ч. утра газообразование было минимальным или вовсе прекращалось.

Исследование скорости размножения дрожжей показало волнообразный характер этого процесса. Через каждые 1-2 часа наблюдались периоды отрицательного роста популяции клеток, продуктивность которых была все же меньше периодов положительного роста, в результате чего через 24 часа регистрировалось закономерное увеличение популяции.

В течение первого часа после засева микроорганизмов общий прирост биомассы был незначителен, или, даже, отрицателен, что можно объяснить явлением адаптации к новым условиям окружающий среды. Затем скорость роста популяции резко увеличивалась, и последующие фазы ускорения и замедления чередовались через каждые 1-2 часа.

Таким образом, процессы размножения и газообразования дрожжей Sacchaгomyces ellipsoides имеют выраженный циклический характер. С учетом их особенностей каждый из исследуемых процессов жизнедеятельности может был взят за основу при разработке теста для определения активности биостимуляторов.

Сущность метода. Первая пробирка - контрольная, в нее добавляли 18 мл 10 % раствора глюкозы, 1 мл взвеси дрожжей и 1 мл физраствора. Во вторую пробирку - опытную - вместо физраствора добавляли испытуемый. Пробирки помещали в термостат при 38°С на 24 часа.

О степени биологической активности исследуемого вещества можно судить по одному из трех показателей; количеству, выделившегося газа, оптической плотности раствора и по увеличению числа микробных клеток в сравнении с контролем. Наиболее простым и удобным нам представляется способ, основанный на определении оптической плотности.

Активность стимулятора вычисляли по формуле:

АС=(02-01)/ (Ок2-Ок 1 )* 10 [Ед],

где АС-активность стимулятора;

01-оптическая плотность микробной взвеси в среде до опыта;

02-оптическая плотность после опыта;

Ок1-оптическая плотность контроля до опыта;

Ок2-оптическая плотность контроля после опыта.

Исследуя БСМ таким образом мы установили, что его активность равна 20,4 Ед.

4. Определение оптимальных параметров применения БСМ для повышения резистентности коз

. Для того чтобы испытать безвредность исследуемого биостимулятора для коз было сформировано 6 групп животных (п=5). Козам вводили БСМ внутри кожно в область внутренней поверхности хвоста: 1-3 группам - в дозе 1 мг сухого вещества на 1 кг живой массы, растворенный в 0,9 % растворе натрия хлорида, 4 % растворе этакридина лактата и оливковом масле по группам соответственно; 4-6 группам - в дозе 100 мг/кг в тех же растворителях.

Сразу после введения на месте ииъекции образовалась припухлость величиной с чечевичное зерно, которая вскоре исчезла; через 3 часа - у 4 животных из 4-6 групп на месте введения появились ярко-розовые пятна размером с ноготь, затем пятна постепенно бледнели и через 5 суток следов введения препарата обнаружено не было. Введение препарата БСМ козам внутрикожно не вызывает активной местной и общей воспалительной реакции у коз, следовательно, биостимулятор возможно применять данному виду животных разведенным в любом из указанных растворителей

Для выяснения лучшего способа введения БСМ в организм были сформированы 4 группы коз (п=10). В 1 группе стимулятор давали перорально, тщательно смешивая его с кормом. Животным 2 группы БСМ наносили на слизистую ротовой полости орошением. Для этого был разработан специальный инструмент, состоящий из шприца «Рекорд» и распыляющей насадки. Козам 3 группы БСМ инъецировали подкожно, в области лопатки. БСМ применяли в дозе 1 мг/кг. Животные 4 группы служили контролем. Через 48 часов после введения определили содержание гемоглобина и количество эритроцитов в крови. Максимальное значение исследуемых показа!елей отмечалось у животных 3 группы. У них количество гемоглобина было на 20,1 %, эритроцитов - на 5,9 % больше, чем в контроле (р<0,001). Во 2 группе содержание гемоглобина и эритроцитов в крови было выше, чем в контроле на 10 % (р<0,01) и 3,5 % (р>0,05) соответственно. Изменения показателей крови у коз 1 группы были незначительны и недостоверны. Учитывая полученные результаты, для собственных исследований и рекомендации к применению мы выбрали 3-й способ введения препарата.

Для определения оптимальной дозы БСМ сформировали 5 групп животных (п=10), из которых четыре группы были опытными, пятая служила контролем. Козам первых четырех групп ввели БСМ в дозах: 0,1; 0,5; 1 и 2 мг/кг. Препарат вводили подкожно, в качестве разбавителя использовали 0,9% раствор натрия хлорида. Через 5 дней после инъекции у животных исследовали количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, уровень общего белка в сыворотке крови, бактерицидную и лизоцимную активности сыворотки крови, а также фагоцитарную активность нейтрофилов. У животных, которым вводили исследуемый препарат в дозах 0,1 и 0,5 мг/кг, изменения показателей были незначительны и недостоверны. Уровень гемоглобина у коз 3-й группы был выше, чем в контрольной на 7,1 % (р>0,05), содержание эритроцитов - на 13,5 % (р<0,001), фагоцитарная, бактерицидная и лизоцим-ная активности - на 9,1; 14,2 и 8,3 % (р<0,05) соответственно. Содержание общего белка уменьшилось на 1, 2,7 и 2,8 % в первых трех группах соответ-

1б'

ственно (р>0,05). Животные 4 группы по количеству гемоглобина в периферической крови на 8,2 % (р<0,05), а эритроцитов - на 41,5 % (р<0,001) превосходили животных, служивших контролем, однако фагоцитарная, бактерицидная и лизоцимная активности были не велики и всего лишь на 2,6 % и 1,6 % соответственно превышали контроль (р>0,05), общий белок же был меньше на 6 % (р>0,05), что вероятно, связано с тем, что использование стимулятора в завышенных дозах вызывает некоторый дисбаланс биологических реакций. Таким образом, для повышения иммунного статуса у коз лучше всего применять БСМ в дозе 1 мг/ кг.

Для изучения изменения гематологических показателей у коз под влиянием исследуемого препарата в динамике отобрали группу животных (п=10), и ввели им БСМ в дозе 1 мг/кг подкожно. У коз определяли содержание гемоглобина и эритроцитов в крови до введения препарата и каждые 24 часа после введения. Период повышения исследуемых показателей после инъекции биостимулятора составлял 7 суток. Содержание гемоглобина увеличивалось уже в первые сутки после введения биостимулятора, достигало максимума через 48 часов, затем постепенно снижалось до исходного Уровень эритроцитов повышался медленнее, достигал максимума через 3 суток, после чего также снижался.

Для определения влияния БСМ на внутренние органы животных из белых лабораторных мышей были сформированы 3 группы (п=4). Мышам 1 и 2 групп вводили БСМ подкожно в области спины в дозах 1 и 100 мг/ кг массы тела соответственно. Животные 3 группы служили контролем. На 3-й сутки после введения препарата мышей умерщвляли с помощью эфира и брали у них органы на исследование..

При введении препарата в дозе 1 мг/кг во внутренних органах произошли характерные пролиферативные и регенеративные изменения. Так, в селезенке наблюдалось увеличение общей площади белой пульпы по сравнению с контролем (с 24,6 % - в контроле до 59,9- в 1-й группе и до 63, 5 % -во 2-й). В красной пульпе было обнаружено большое количество макрофагов, плазматических и лимфоидных клеток, выявлена активная артериальная гиперемия. В печени отмечалось утолщение печеночных балок, периваскуляр-ные и межклеточные инфильтраты из лимфоцитов и плазматических клеток, неравномерное увеличение гепатоцитов. В цитоплазме гепатоцитов просматривалась мелкая зернистость. Ядра интенсивно окрашены, набухшие, четко видны глыбки хроматина. Имелись клетки в стадии деления. При микроскопии почек отметили увеличение клеток канальцев, ядра клеток набухшие,

глыбки хроматина крупные, ярко окрашенные. Капилляры клубочков крове-наполнены. Встречались эндотелиальные клетки в стадии деления.

Использование значительно завышенных доз препарата (в 100 раз) вызвало дегенеративные явления во внутренних органах. Гепатэциты значительно увеличились, в цитоплазме отдельных клеток присутствовали гранулы и вакуоли, свидетельствующие о зернистой и вакуольной дистрофии органа. Эндотелиальные клетки сосудов печени были набухшие, местами разрушены. В почках были выявлены обширные инфильтраты, значительное увеличение клубочков, утолщение эндотелия капилляров, в клетках канальцев - изменения характерные для зернистой дистрофии.

5. Влияние биологической стимуляции на иммунный статус беременных коз и их потомства

При постановке описываемого эксперимента мы преследовали цели: определить влияние БСМ на организм беременных животных, а также изучить зависимость резистентности потомства от иммунного статуса матерн.

Для этого мы сформировали 2 группы коз. Животным первой группы вводили БСМ в дозе 1 мг/кг в 1% разведении на 0,9 % растворе натрия хлорида с 1 по 4 месяцы беременности, подкожно, в область лопатки. Вторая группа была контрольной. На третий день после инъекции у коз брали кровь и проводили исследование гематологических и иммунологических параметров. У козлят, полученных от подопытных животных, также исследовали показатели, определяющие их иммунологическую реактивность.

Стимуляция БСМ оказала положительное влияние на гематологические показатели у коз во все месяцы беременности. Количество гемоглобина повышалось в пределах 8,22 %, эритроцитов — на 7-15,7 %, лейкоцитов — 4-9 %. Это говорит об улучшении газообмена, увеличении снабжения организма кислородом, что особенно важно во время беременности, так как полноценное клеточное дыхание зародыша является основным условием для развития нормального плода, а также об усилении клеточной защиты организма и повышении его устойчивости к заболеваниям. Что касается общего белка сыворотки крови, то применение препарата не только не увеличило, но даже несколько снизило уровень этого показателя (на 0,5-1 %), В первую половину беременности особей с выраженной гипогаммаглобинемией (содержание у-глобулинов в сыворотке крови менее 5 г/л) в опытной группе не было обнаружено, в контрольной они составляли 4,2 % от общего числа животных в группе. Животных с умеренной гипогаммаглобинемией (от 5 до 15 г/л) в опытной группе было 43,7 %, в контрольной - 45,8 %. Коз с нормальным

иммунным статусом (более 15 г/л) в опытной группе было зарегистрировано 56,3%, в контрольной -50 %. Во вторую половину беременности общее содержание гаммаглобулинов в обеих группах снизилось. Коз с выраженной гипогаммаглобинемией в опытной группе не было, в контрольной они составили 21 %. Животных с умеренной гипогаммаглобинемией в опытной группе было 50 %, в контрольной - 49 %. Животных с достаточным содержанием глобулинов - 50 и 30 % соответственно. Следовательно: первое, с развитием беременности количество иммунных белков у животных снижается; второе, применение БСМ позволяет улучшить КЗ» ^ну по этому показателю в стаде. Бактерицидная активность сыворотки крови при введении БСМ повышалась в среднем на 10 %, лизоцимная активность - на 9 %. Фагоцитарная активность лейкоцитов в опытной группе была выше, чем в контрольной на 8 % , а фагоцитарный индекс - на 7 %. За весь период эксперимента у коз в опытной группе не произошло ни одного аборта, беременность и роды протекали без патологий.

При анализе результатов исследования крови четырехмесячных козлят, полученных от подопытных животных, выяснили, что по многим параметрам они превосходили сверстников, рожденных от матерей контрольной группы (табл. 6).

Таблица 6

Показатели естественной резистентноетм у козлят(п=15)

Показатели Опытная группа М±ш Контрольная группа М±ш Р

Гемоглобин, г/л 102,6±1,24 95,84±1,97 <0,05

Эритроциты, 10 "/л 10,0±0,29 9,53±0,2 >0,05

Лейкоциты, 10 */л 8,7±0,23 8,16±0,52 >0,05

Общий белок, г/л 71,76±0,54 72,09±74 >0,05

ФА, % 66,15±1,16 62,5±2,48 >0,05

ФИ 7,98±0,52 4,26±0,72 <0,001

ФА с пирогеналом, % 85,01±3,16 70,8±2,4 =0,001

ФИ с пирогеналом 8,22±0,53 5,38±0,34 <0,001

БАСК, % 54,55±1,97 51,37±2,87 >0,05

ЛАСК, % 22,45±0,79 21,74±0,78 >0,05

Т- лимфоциты, % 38,1±1,23 31,01±0,88 <0,01

В-лимфоциты, % 27,45±1,08 24,14±0,68 <0,01

Содержание гемоглобина у таких животных было больше на 7,1 %, эритроцитов - на 5 %, лейкоцитов на 6,2 %, Т- и В- лимфоцитов - на 7,1 % и 3,3 % соответственно. Лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови* также были несколько выше - на 3,2 и 0,7 % соответственно. Фагоци-

тарная активность лейкоцитов у козлят опытной группы была выше на 3,7 %, а фагоцитарный резерв - на 10,5 %. По уровню общего белка в сыворотке крови между группами существенных различий не было обнаружено.

Результаты проведенных исследований доказывают, что применение БСМ козам во время беременности оказывает положительное влияние на состояние иммунной системы будущего потомства.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что во время половой охоты у коз увеличивается количество лейкоцитов на.14,6 %, альбуминов - на 16,0 %, у-глобулинов - на 52,0 %, лизоцимная активность сыворотки крови — 9,1 %, фагоцитарная активность лейкоцитов - на 10,3 %. Уровень общего белка в сыворотке крови снижается на 9,7 %, циркулирующих иммунных комплексов на 58,7 % относительно анэстрального периода.

2. Выявлено, что в период формирования зиготы и первых делений бласто-меров содержание гемоглобина возрастает на 9,9 %, лейкоцитов - на 23,3 %, бактерицидная и лизоцимная активности сыворотки крови на 19,7 % и 14,7 % соответственно, фагоцитарная активность - на 17,5 %, содержание циркулирующих иммунных комплексов - на 7,7 % по сравнению с анэст-ральным периодом. В целом беременность характеризуется снижением изучаемых показателей в среднем на 2-8 %. За неделю до родов содержание гемоглобина, лейкоцитов, у-глобулинов, бактерицидная, лизоцимная и фагоцитарная активности повышаются на 7,5-13,8 %.

3. Во время родов количество гемоглобина, эритроцитов, фагоцитарная, бактерицидная, лизоцимная активности максимальны, и на 9,4, 33,6, 22,7, 47,7, 20,6 % соответственно превышают период покоя. Концентрация общего белка и циркулирующих иммунных комплексов снижаются на 20,7 и 64,5 %.

4. Установлена функциональная положительная корреляция между содержанием гемоглобина и Т-лимфоцитов; количеством лейкоцитов и у-глобулинов; фагоцитарной, бактерицидной и лизоцимной активностями и количеством Т- и В-лимфоцитов в крови; а также тесная отрицательная корреляция между Количеством гемоглобина, эритроцитов, бактерицидной, лизоцимной активностями и. концентрацией Т-супрессорров; количеством Т-хелперов и фагоцитарной активностью; содержанием В-лимфоцитов и гематологическими показателями; лизоцимной, бактерицидной активностями и количеством а-глобулинов, альбуминов, общего белка сыворотки крови.

5. Процессы размножения и бродильной активности дрожжей Sacchaгomyces ellipsoides имеют волнообразный характер и могут быть взяты за основу для разработки экспресс-метода определения биологической активности биостимуляторов.

6. Введение биостимулятора в дозе 1 мг/ кг вызывает повышение уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, фагоцитарной активности нейтро-филов, интенсивности фагоцитоза, бактерицидной и лизоцимной активностей на 5-12 %; гиперплазию иммунокомпетентных органов, усиливает регенеративные процессы в печени и почках. Применение БСМ козам во время беременности способствует рождению потомства с высоким иммунным статусом.

7. На основании проделанной работы можно заключить, что препарат БСМ является мощным иммуномодулятором и может быть рекомендован к применению для повышения резистентности у животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для определения биологической активности биостимуляторов предлагается использовать экспресс-метод, с использованием культуры Sacchaгomy-

eШpsoides.

2. Для повышения защитных сил организма животных рекомендуется применять БСМ подкожно в дозе 1 мг /кг.

3. Для получения козлят с высоким иммунным статусом предлагается введение БСМ козам в дозе 1 мг /кг один раз в месяц в течение всей беременности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мещеряков, ФА. Трубникова, П.В. Применение циклических процессов в определении биологической активности биостимуляторов // Мат. X Международной конференции «Циклы природы и общества».- Ставрополь, 2002.-С. 138-140.

2. Трубникова, ПВ. Циклические процессы жизнедеятельности дрожжей Sacchaгomyces ellipsoides // Мат. X Международной конференции «Циклы природы и общества».- Ставрополь, 2002. - С. 156-158.

3. Мещеряков, Ф.А. Трубникова, П.В. Возможность применения животным биостимулятора из мозговой ткани // Вестник ветеринарии.- 2003.- № 26 — С. 31-32.

4. Трубникова, П.В. Изменение показателей естественной резистентности молочных коз при вакцинации // Вестник ветеринарии.-2003.- № 26 - С. 32-35.

5. Мещеряков, Ф.А. Трубникова, П.В. Проблемы применения биологически активных веществ в животноводстве // Мат. Международной научно-практической конференции «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России». - Ставрополь-Пятигорск, 2003. - С. 302-304

6. Трубникова, П.В. Роль биологически активных веществ в повышении естественной резистентности у молочных коз // Сб. науч. тр. /СНИИЖК. -Ставрополь, 2003. - С. 105-109.

7. Трубникова, П.В. Динамика содержания гемоглобина и эритроцитов у коз в разные периоды воспроизводительной функции // Экология. Культура. Образование. - 2003. -№ 13.- С. 51-53.

ТРУБНИКОВА ПОЛИНА ВЛАДИМИРОВНА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Заказ 003. Подписано в печать 12.01.2004 г. Формат 60x84. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл. печ. лист. 1.0. Тираж 100 экз. 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 15. Ротапринт ГНУ СНИИЖК

РНБ Русский фонд

2004-4 26462

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Трубникова, Полина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные факторы резистентности организма.

1.2. Связь иммуно-гематологических показателей с репродуктивной системой животных.

1.3. Иммунологическая недостаточность сельскохозяйственных животных.

1.4. Современные методы иммунокоррекции.

1.4.1. Многообразие и механизм действия биологически активных препаратов.

1.4.2. Применение биологически активных веществ для коррекции иммунного статуса животных.

1.4.3. Характеристика нейропептидов мозга и возможность их использования для повышения резистентности животных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Динамика гематологических и иммунных показателей у коз в разные периоды воспроизводительной функции.

3.2. Связь иммунологических и гематологических показателей у коз.

3.3. Характеристика биостимулятора из тканей мозга (БСМ).

3.3.1. Технология приготовления БСМ.

3.3.2. Определение активности БСМ.

3.4. Определение оптимальных параметров применения БСМ для повышения резистентности коз.

3.5. Влияние биологической стимуляции на иммунный статус беременных коз и их потомства.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние биологической стимуляции на неспецифический иммунитет у коз"

Актуальность исследования. Процессы индустриализации сопровождаются повышением степени загрязнения внешней среды веществами, обусловливающими нарушение естественного природного равновесия в экологических системах. Воздействие разнообразных вредных факторов среды приводит к возникновению иммунной недостаточности, связанной с различными нарушениями иммунологического равновесия (A.M. Петров, О.Н. Ма-курина, М.М. Серых и др., 2000, Ф.А. Мещеряков, 2003). Из всех продуктивных животных козы наиболее чувствительны к негативным воздействиям окружающей среды. Поэтому они могут служить моделью для установления общебиологических закономерностей реактивности организма. Кроме того, значение молочного козоводства в последние годы неуклонно растет. В ряде стран при производстве молочных продуктов козье молоко играет решающую роль. Например, в Греции 85 % сыров и 65 % йогуртов производится с использованием молока коз (Б.С. Иолчиев, Н.С. Марзанов, Е.А. Чалых, 2000). В нашей стране востребованность в продуктах молочного козоводства, как в диетических легкоусвояемых и антиаллергических продуктах питания также высока. Поэтому изучение особенностей физиологии коз и поиск путей, повышающих сохранность поголовья особенно актуальны. Учитывая многообразный патогенез развития иммунодефицита, возникает острая необходимость применения коррегирующих веществ, действующих на все звенья общей реактивности организма, каковыми являются биостимуляторы. Для повышения иммунитета в настоящее время имеется большое количество различных препаратов, однако, многие из них недоступны для хозяйственников ввиду сложности применения, либо ограниченности специфической направленностью действия. В связи с этим поиск и изучение действия новых биостимуляторов, простых в применении, высокоэффективных и экологически чистых является актуальным и практически обоснованным. Влияние биостимулятора из тканей мозга (БСМ) на прирост живой массы и продуктивность бройлеров, овец, и коров ранее исследовали Т.Р. Лотковская (1995); Г.А. Джаилиди, (1997), Р.А. Цыганский (2003). Однако до настоящего момента остаются неизученными вопросы о влиянии БСМ на иммунный статус животного, возможность применения препарата беременным самкам с целью повышения сохранности новорожденных, а также не определены дозы и способы введения препарата молочным козам.

Цели и задачи исследования. Основной целью наших исследований являлось изучение зависимости показателей неспецифического иммунитета у коз от физиологического состояния их репродуктивной системы у интактных животных и под воздействием БСМ. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- изучить динамику изменения показателей естественной резистентности у коз в различные периоды их воспроизводительной функции;

- разработать простой и объективный способ оценки биологической активности биостимуляторов;

- исследовать особенности действия БСМ на организм коз;

- установить влияние БСМ на иммунный статус беременных животных и их потомства.

Научная новизна. Впервые изучена динамика гематологических и иммунных показателей у коз при различных функциональных состояниях их репродуктивного тракта. Установлены тесные коррелятивные связи между показателями гемограммы, бактерицидной и лизоцимной активностями сыворотки крови, фагоцитарной активностью лейкоцитов, концентрацией Т- и В-лимфоцитов в крови. На основании исследований, выявивших циклический характер жизнедеятельности дрожжей Saccharomyces ellipsoides, разработан простой и объективный экспресс-метод определения биологической активности биостимуляторов. Подтверждена возможность применения БСМ для функциональной активации неспецифических факторов иммунной системы животных. Определены оптимальная доза и способ введения препарата козам. Выяснен характер морфологических изменений в селезенке, печени и почках белых мышей под влиянием препарата. Установлено положительное влияние биологической стимуляции матерей на неспецифическую резистентность их потомства.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Опыты по изучению иммунных показателей коз в различные периоды их воспроизводительной функции расширяют и углубляют познания об иммунитете животных. В связи с отсутствием нормативных данных по показателям естественной резистентности у коз, полученные показатели могут послужить ориентиром при оценке неспецифического звена иммунитета у поголовья. Для определения биологической активности биопрепаратов разработан экспресс-метод, основанный на способности дрожжей Saccharomyces ellipsoides к быстрому размножению и газообразованию. Получены положительные результаты по эффективному применению препарата БСМ в качестве иммуномоду-лятора. Разработана схема применения БСМ беременным животным для повышения иммунного статуса потомства. Данные, полученные в экспериментах, используются в учебном процессе на кафедре общей биологии Ставропольского государственного университета в курсе лекций по иммунологии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

- Свидетельством зависимости факторов неспецифического иммунитета от функционального состояния репродуктивной системы является изменение бактерицидной и лизоцимной активностей сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, концентрации Т- и В-лимфоцитов и циркулирующих иммунных комплексов в крови у коз в различные стадии репродуктивной функции.

- Циклический характер процессов размножения и бродильной активности дрожжей позволил использовать культуру Saccharomyces ellipsoides для разработки метода определения биологической активности биостимуляторов.

- Применение БСМ оказало стимулирующее воздействие на неспецифическую резистентность коз и позволило получить от них потомство с высоким иммунным статусом.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В обзоре литературы изложены выдержки из отечественных и зарубежных публикаций, кратко характеризующие факторы резистентности организма животных, причины возникновения иммунной недостаточности, а также различные способы иммунокоррекции, известные к настоящему, времени.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Трубникова, Полина Владимировна

выводы

1. Установлено, что во время половой охоты у коз увеличивается количество лейкоцитов на 14,6 %, альбуминов - на 16,0 %, у-глобулинов - на 52,0 %, лизоцимная активность сыворотки крови - 9,1 %, фагоцитарная активность лейкоцитов - на 10,3 %. Уровень общего белка в сыворотке крови снижается на 9,7 %, циркулирующих иммунных комплексов на 58,7 % относительно анэстрального периода.

2. Выявлено, что в период формирования зиготы и первых делений бластомеров содержание гемоглобина возрастает на 9,9 %, лейкоцитов -на 23,3 %, бактерицидная и лизоцимная активности сыворотки крови на 19,7 % и 14,7 % соответственно, фагоцитарная активность - на 17,5 %, содержание циркулирующих иммунных комплексов - на 7,7 % по сравнению с анэстральным периодом. В целом беременность характеризуется снижением изучаемых показателей в среднем на 2-8 %. За неделю до родов содержание гемоглобина, лейкоцитов, у-глобулинов, бактерицидная, лизоцимная и фагоцитарная активности повышаются на 7,5-13,8 %.

3. Во время родов количество гемоглобина, эритроцитов, фагоцитарная, бактерицидная, лизоцимная активности максимальны, и на 9,4, 33,6, 22,7, 47,7, 20,6 % соответственно превышают период покоя. Концентрация общего белка и циркулирующих иммунных комплексов снижаются на 20,7 и 64,5 %.

4. Установлена функциональная положительная корреляция между содержанием гемоглобина и Т-лимфоцитов; количеством лейкоцитов и у-глобулинов; фагоцитарной, бактерицидной и лизоцимной активностями и количеством Т- и В-лимфоцитов в крови; а также тесная отрицательная корреляция между количеством гемоглобина, эритроцитов, бактерицидной, лизоцимной активностями и концентрацией Т-супрессорров; количеством Т-хелперов и фагоцитарной активностью; содержанием В-лимфоцитов и гематологическими показателями; лизоцимной, бактерицидной активностями и количеством а-глобулинов, альбуминов, общего белка сыворотки крови.

5. Процессы размножения и бродильной активности дрожжей Saccharomyces ellipsoides имеют волнообразный характер и могут быть взяты за основу для разработки экспресс-метода определения биологической активности биостимуляторов.

6. Введение биостимулятора в дозе 1 мг/ кг вызывает повышение уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов, интенсивности фагоцитоза, бактерицидной и лизоцимной активностей на 5-12 %; гиперплазию иммунокомпетентных органов, усиливает регенеративные процессы в печени и почках. Применение БСМ козам во время беременности способствует рождению потомства с высоким иммунным статусом.

7. На основании проделанной работы можно заключить, что препарат БСМ является мощным иммуномодулятором и может быть рекомендован к применению для повышения резистентности у животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для определения биологической активности биостимуляторов предлагается использовать экспресс-метод, с использованием культуры Saccharomyces ellipsoides.

2. Для повышения защитных сил организма животных рекомендуется применять БСМ подкожно в дозе 1 мг /кг.

3. Для получения козлят с высоким иммунным статусом предлагается введение БСМ козам в дозе 1 мг /кг один раз в месяц в течение всей беременности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Трубникова, Полина Владимировна, Ставрополь

1. Александров, И.Д. Справочник по технологии приготовления лекарственных форм для ветеринарного врача и фермера / И.Д. Александров, В.М. Субботин./ Ростов-на-Дону: Феникс, 2001.-192 с.

2. Аликин, Ю.С. Биологически активные вещества в профилактике и лечении сельскохозяйственных животных / Ю.С. Аликин, Ю.Г. Юшков, В.Д. Чемитов // БИО.- № 3.-2002.-С. 4-8.

3. Апатенко, В.М. Иммунодефициты у животных / В.М. Апатенко // Ветеринария.-1992.-№ 5.-С.29-30.

4. Афанасьева, Г.А. Антигенная активность ангиотензина II и его фрагментов / Г.А. Афанасьева, Г.М. Залитис, Г.И. Чипенс // Биохимия.-1977.-Т.42, вып.9.-С. 1720-1725.

5. Бадмаев, Ю.Д. Влияние активированных препаратов крови на рост и естественную резистентность овец / Ю.Д.Бадмаев // Морфофункциональные показатели продуктивных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. Ставрополь, 1992. -С. 89-91.

6. Бадмаев, Ю.Д. Влияние активированных препаратов крови на клинические и гематологические показатели у овец / Ю.Д.Бадмаев // Морфофункциональные показатели продуктивных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. Ставрополь, 1992. - С. 7-9.

7. Бадмаев, Ю.Д. Влияние биостимулятора из крови на шерстную продуктивность и сохранность овец / Ю.Д.Бадмаев // Морфофункциональные показатели продуктивных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. Ставрополь, 1992. - С. 9-11.

8. Бакшеев, В.П. Метод УФО аутокрови у лошадей в условиях эксперимента и производства / В.П.Бакшеев, И.А.Калашник // Хирургическая патология животных: Сб. науч. тр. М., 1988. - С.87-90.

9. Бакшеев, В.П. Применение с лечебной целью у животных реинфузииоблученной УФЛ крови / В.П.Бакшеев // Хирургическая патология животных: Сб. науч. тр. Л., 1989. - С.98-103.

10. Ю.Барабаш, Д.И. Влияние БСМ на прирост живой массы у поросят / Д.И.Барабаш // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. ГСХА. -Ставрополь, 1998. С.107-109.

11. П.Барабаш, Д.И. Способы применения биостимулятора из мозговой ткани у свиней / Д.И. Барабаш // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. ГСХА. Ставрополь, 1998. - С. 106-107.

12. Бахирева, Л.А. Активность дегидрогеназ в клетках крови ремонтных свинок в первом эстральном цикле и ее взаимосвязь с физиологической скороспелостью и многоплодием / Л.А. Бахирева // Сельскохозяйственная биология.- 1996.-№ 2.-е. 72-79.

13. Беленький, Н.Г. Физиологическая стимуляция организма / Н.Г. Беленький. М.: МТИМ и МП, 1959. - 50 с.

14. Белугин, Н.В. Воспроизводитеьная функция и продуктивность потомства, полученного в результате осеменения ярок грозненской породы в возрасте 1,5 и 2,5 года: Автореф. дисс. . канд. вет. наук / Н.В. Белугин.- Ставрополь,-1987.- 21 с.

15. Бернет, Ф.М. Клеточная иммунология / Ф.М. Бернет.- М., 1971.- 352 с.

16. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Корвкин.-М.: медицина,1990.- 528 с.

17. Биологически активные вещества в профилактике и лечении незаразных болезней животных / Под ред. Самохина В.Т. //ВНИИ незаразных болезней животных.-Воронеж, 1988.- 108 с.

18. Бурков, И.А. Естественные клетки-киллеры у свиноматок в различные периоды полового цикла и в связи с осеменением и супоросностью /И.А.Бурков, Т.П. Трубицына, JI.B. Бабышева // Бюл. ВНИИ физиол., биохимии и питания с.-х. жив.- 1989.- № 1,- С. 62-66.

19. Бухарин, О.В. Окситоцин и вазопрессин регуляторы иммунного гомеостаза / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, Е.П.Володина // Мат. докл. III Всесоюз. симпоз. «Регуляция иммунного гомеостаза».- J1., 1982.- С. 129-130.

20. Буянов, А.А. О классификации иммунодефицитов // Мат. Всероссийской научно-метод. конф.: Сб. науч. тр.- Омск, 2000.- С. 5354.

21. Валуева, Т.К. Физиология иммунного гомеостаза / Т.К. Валуева.-Ростов на Дону, 1977.-117 с.

22. Влияние бруцеллезной искусственной вакцины на активность иммунной системы КРС / Г.М. Танеева, JI.A. Малышева, В.В. Сочнев и др.// Вестник ветеринарии. 2000.-№ 15.-С. 67-71.

23. Водолазский, М.Г. Причины нарушений обмена веществ у молочных коз / М.Г. Водолазский, К.Г. Бобырь // Вестник ветеринарии. 2001.-№ 21 .-С. 43-47.

24. Водолазский, М.Г. Сбалансированные рационы основа эффективности овцеводства / М.Г. Водолазский, Н.Н. Авдеева, B.C. Аванесов // Вестник ветеринарии. - 2000.-№ 6.- С. 77-81.

25. Волгин, В.И. Изучение состава крови, молока и кормов (методические указания) / В.И. Волгин, JI.C. Жебровский ВНИИРиГ.- Ленинград, 1974.- 173 с.

26. Воронин, Е.С. Влияние иммуномодуляторов на иммунологический статус телят при экспериментальном инфекционном ринотрахеите / Е.С. Воронин, Д.А. Дервишев, В.Н. Денисенко // Ветеринария. 1991. - № 8. - С. 25-26.

27. Вышвыркин, С.В. Изменение показателей естественной резистентности при механическом стрессе / С.В.Вышвыркин, В.Д. Соколов // Сб. науч. тр./ Ленингр. вет. ин-т, 1988.- № 97.- С. 19-21.

28. Гауровиц, Ф. Иммунохимия и биосинтез антител / Ф. Гауровиц.-М.,1969.- 250 с.

29. Гизатуллина, Ф.Г. иммунобиохимический статус коров в условиях биопатогенной зоны / Ф.Г. Гизатуллина // БИО.- № 5.-2002.-С. 27-28.

30. Гипотеза о функциональной связи между нейро- иммуно- и глюкомодуляторными пептидами / В.Е.Клуша, Н.А.Абиссова, Э.М. Кукайн и др.// Целенаправленный поиск новых нейротропныхпрепаратов.- Рига: Зинатне.-198Э.-С. 21-30.

31. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло.- М.: Медицина, 1987,- 304 с.

32. Гурвич, А.Е. Вирусология и иммунология /А.Е.Гурвич.- М., 1964.-206 с.

33. Даугалиева, Э.Х. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных / Э.Х. Даугалиева, В.В. Филиппов.-М.: Агропромиздат, 1991.-С. 14-22.

34. Деменко, JI.B. Диагностика иммунодефицитов поросят / JI.B. Деменко, Н.Н. Ткаченко, В.М. Апатенко // Матер. Всеросс. научно-метод. конф. патологоанатомов вет. медицины (20-22 сентября 2000 г.): Сб. научн. тр. / ОГМА. Омск, 2000. - С. 63-65.

35. Дмитриев, А.Ф. Профилактика болезней поросят технологическими методами / А.Ф. Дмитриев, Д.П. Шкляров // Вестник ветеринарии.-2000.-№ 18,-С. 30-34.

36. Дорогое, А.В. Применение препарата АСД в ветеринарной практике /А.В. Дорогое // Ветеринария,- 1952. № 11. -С. 9-10.

37. Емельяненко, П.А. Иммунология животных в период внутриутробного развития / П.А. Емельяненко.- М.: Агропромиздат, 1987.-215 с.

38. Ермольева, Е.В. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды / Е.В. Ермольева, Г.Е. Вейсберг. М., 1976.-С 186.

39. Зудин, Д.В. Автоматизация биотехнологических исследований / Д.В. Зудин, В.М. Кантерс, Г.А. Угодников,- М.: Высшая школа, 1987.- 198 с.

40. Иванова, Т.А. Влияние тималина на иммунобиологическую реактивность норок гипотрофиков / Т.А. Иванова // Сб. науч. тр./ Ленингр. вет. ин-т,- Л., 1988,- № 97, С. 42-46.

41. Ивановский, А.А. Влияние биоинфунзина на некоторые показатели иммунитета // А.А. Ивановский // Ветеринария.-2000.-№ 9.-С. 43-46.

42. Ильинский, Е.В. Профилактика бесплодия коров в условиях интенсификации молочного скотоводства / Е.В. Ильинский.

43. Краснодар: Кн. из-во, 1983.-172 с.

44. Иммунные дефициты / С. С. Абрамов. И. Г. Арестов. И.М. Карпуть. // Профилактика незаразных болезней молодняка. М.: Агропромиздат, 1990. -С.165-171.

45. Исмагулов, А.И. Влияние экстракта плаценты на морфологические и биохимические показатели крови у кроликов / А.И. Исмагулов // Вестник с.-х. науки Казахстана, 1989.- № 2.-С. 60-62.

46. Исследование крови мериносовых овец фотоэлектрическим эритрогемометром МРТУ-42-1443-61 / И.И. Сипко, К.Д. Сазаруков, Х.Х. Шаманов, И.В. Харченко // Труды СХИ, Ветеринария.-Ставрополь, 1968.-Вып. 29.- С.358-364.

47. Кавецкий, Р.Е. Иммунология опухолей / Р.Е. Кавецкий. Киев, 1975.-С. 105-106.

48. Калашник, И.А. Стимулирующая терапия в ветеринарии / И.А. Калашник. 2-е изд., перераб. и доп. - Киев.: Урожай, 1990. - 160 с.

49. Камимуллина, Р.Г. Влияние гумата натрия на неспецифические факторы естественной резистентности организма телят / Р.Г. Камимуллина // Мат. Всероссийской научно-метод. конф.: Сб. науч. тр.-Омск, 2000.- С. 92-93.

50. Квачев И.Г. Иммунодефицитные состояния и их коррекция у сельскохозяйственных животных / И.Г. Квачев, А.Ю. Кассич // Сельскохозяйственная биология. 1991. - № 2. - С. 105-114.

51. К вопросу о коррекции иммунодефицитного состояния телят впреднатальный период/ В.Н. Денисенко, ЕС. Воронин, Г.Н. Печникова и др.// Сельскохозяйственная биология. 1992. - № 6. - С. 122-127.

52. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных 1 A.M. Смирнов, П.Я. Конопелько, А.П. Пушкарев и др.-М.: ВО Агропромиздат, 1988.-511 с.

53. Клиническая иммунология: Руководство для врачей / Под ред. Е.И. Соколова. М.: Медицина, 1998. - 272 с.

54. Клиническая иммунология /Под ред. А.В. Караулова. М.: Мед. ин-форм. агентство, 1999. - 604 с.

55. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П.Кондратьев, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др.- М.: Агропромиздат, 1985,- 285 с.

56. Клуша, В.Е. Модель структурно-функциональной организации тканевого гормона ангиотензина / В.Е.Клуша, Г.И.Чипенс // Молекулярная генетика и биофизика.- Киев, 1976.-Вып. 1.- С.32-39.

57. Кожемякин, J1.A. Биохимические механизмы действия цитомединов / J1.A. Кожемякин, И.Н. Попов, В.Г. Антонов, Л.И. Андреева // Роль полипептидных биорегуляторов в регуляции гомеостаза: Тез. докл. научной конф. Л., 1987. - С. 50-51.

58. Комплексный метод профилактики и лечения диспепсии новорожденных телят / Л.А. Бубенина, В.Д. Родькин, В.Э. Бубенин, Н.Б. Климова // Незаразные болезни телят,- Харьков, 1988.- С. 11-16.

59. Колесников, В.И. Эпизоотический процесс при стронгилятозах овец в условиях Ставропольского края, меры борьбы и профилактики: Рекомендации / В.И. Колесников, Г.А. Башкатов, В.А.Оробец,-Ставрополь, 1990.- 13 с.

60. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, В.Б. Родионова, Д.И. Скородумов.- М.: Колос, 2001.-340 с.

61. Красота, В.Ф. Некоторые аспекты повышения естественной резистентности молочного скота, птицы и пушных зверей / В.Ф.Красота // Сельскохозяйственная биология 1985. № 5 - С. 58-63.

62. Красочко, П.А. Применение активина и протаргола для лечения респираторных заболеваний телят / П.А. Красочко, П.И. Помирко, Т.Н. Яровой // Ветеринария. 1990. -№11. -С. 22-23.

63. Краузе, Н.И. Химически денатурированные хлором ткани на службе травматической хирургии /Н.И. Краузе. // Труды Саратовского гос. мединститута, 1949. -Т. 22. С. 31-33.

64. Криворучко, С.В. К методике определения фагоцитарной реакции нейтрофилов / С.В. Криворучко, Л.Д. Тимченко // Экология. Культура. Образование,- 2003.- № 12.- С.45-46.

65. Кудрявцев, А.А. Исследования крови в ветеринарной диагностике, ч.1 / А.А.Кудрявцев.- М.: Госсельхозиздат, 1952. -375с.

66. Кукайн, Э.М. Влияние нейропептидов и нейромедиатров на гуморальную иммунную систему / Э.М. Кукайн // Тез. докл. 4 Всесоюз. симпоз. По целенаправленному изысканию физиологически активных веществ/ Ин-т орган. Синтеза АН ЛатвССР.- Рига, 1981.- С. 19.

67. Лилли, Р. Патологическая техника и практическая гистология / Р. Лилли,- М.: Мир, 1969,- 646 с.

68. Ломакин, М.С. Иммунобиологический надзор / М.С. Ломакин. М.: Медицина, 1990.- 256 с.

69. Лотковская, Т.Р. Исследование физиологической активности новых тканевых препаратов и сульфидно-иловых грязей и их применение в животноводстве: Дис. . канд. биол. наук / Т.Р.Лотковская. -Ставрополь, 1995. 110 с.

70. Лютинский, С.И. Коррекция пептидными биорегуляторами иммунодефицитных состояний у животных / С.И. Лютинский // Актуальн. проблемы ветеринарии: Мат. междунар. конф./ Алтайский агр. ун-т.-Барнаул, 1995.- С 70-71.

71. Максимов, Ю.Л. Половая иммунная избирательность коров в зависимости от их воспроизводительных функции состояния здоровья / Ю.Л. Максимов, А.К. Михайловская // Сельскохозяйственная биология,-№ 6.-1993.-С. 59-61.

72. Малахова, Л.С. Синхронизация половой охоты у молочных коз применением ПГФ-2 альфа / Л.С. Малахова, М.М. Айбазов, К.К. Ашурбегов // Сб. науч тр./ ВНИИОК.-Ставрополь, 2001.- Вып.46.-С.152-156.

73. Маннов, Г.М. Тканевые препараты и их значение в увеличение производства масс / Г.М. Маннов, Н.И. Серков. Рязань, 1959. - 120 с.

74. Маслянко, Р.П. Формирование В- системы иммунитета у животных:обзор / Р.П. Маслянко // С.-х. биология,- 1987.-№ 9.-С. 99-104.

75. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие по фармакотерапии для врачей. 1 ч. / М.Д. Машковский.- Вильнюс, 1994.543 с.

76. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие по фармакотерапии для врачей. 2 ч./ М.Д. Машковский,- Вильнюс, 1994.527 с.

77. Менькин, В.К. Кормление сельскохозяйственных животных / В.К. Менькин,- М.: Колос, 1997,- 303 с.

78. Методические рекомендации по определению естественной резистентности организма овец // ВНИИОК. Ставрополь, 1987. -С.45.

79. Медицинская микробиология / Гл. ред. В.И. Покровский, О. К. Поздеев.

80. М.: ГЭОТАР. Медицина, 1998. 1200 с.

81. Мещеряков, Ф.А. Основные направления и перспективы применения биостимуляторов в животноводстве / Ф.А.Мещеряков // Морфофункциональные показатели продуктивных животных: Сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. Ставрополь, 1992. - С. 4-7.

82. Мещеряков, Ф.А. Влияние биологически активного препарата из тканей мозга на физиологические показатели у ягнят / Ф.А. Мещеряков, Г.А. Джаилиди // Вестник ветеринарии. 1996.-№ 1.- С. 63-64.

83. Мещеряков, Ф.А. Применение циклических процессов в определении биологической активности биостимуляторов / Ф.А. Мещеряков, П.В. Трубникова // Мат. X Международной конференции «Циклы природыи общества».- Ставрополь, 2002. С. 138-140.

84. Мещеряков, Ф.А. Физиология систем крови, лимфы и иммунитет / Ф.А. Мещеряков.- Ставрополь: Изд-во СГАУ, 2003.-100 с.

85. Мещеряков, Ф.А. Возможность применения животным биостимулятора из мозговой ткани / Ф.А. Мещеряков, П.В. Трубникова // Вестник ветеринарии.- 2003.- № 26 С. 31-32.

86. Мовсум-Заде, К.К. Гидролизаты белка в ветеринарии // К.К. Мовсум-Заде, В.А. Берестов.- Петрозаводск.: Карелия, 1989.-158 с.

87. Модели активных центров тканевых гормонов / В.Е. Клуша, З.П. Ауна, Н.В. Мышлякова, Н.А. Макарова // Тез. докл. Всесоюз. съезда фармакологов «Фармакология здравоохранению». - JI., 1976.-С. 101.

88. Мозгов, И.Е. Фармакология: Руководство для ветеринарных врачей / И.Е. Мозгов. Изд. 3-е перераб. и доп. - М.: Сельхозгиз, 1961. - 581 с.

89. Морозов, В. Г. Новый класс биологических регуляторов межклеточных систем цитомидины / В. Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Успехи современной биологии. -1983. - Т. 96. - Вып. 3 (6). - С. 339-352.

90. Морозов, В.Г. Цитомидины (биорегуляторы клеточного метаболизма) / В.Г. Морозов, Г.А. Рыжак, В.В. Малинин. СПб.: ИКФ «Фолиант», 1999. - 120с.

91. Нгареджимти, Г.М. Влияние переливания аутокрови, облученной УФЛ, на заживление ран у крупного рогатого скота: Автореф. дис. канд вет. наук / Г.М.Нгареджимти.-Харьков, 1988.- 24с.

92. Никитенко, A.M. Биологическая активность гормонов тимуса (обзор) / A.M. Никитенко // Сельскохозяйственная биология. 1987. - № 3. - С. 79-83.

93. Никитин, А.В. Иммуномодуляторы природного происхождения / А.В. Никитин, С.М. Миканит // Антибиотики. 1983. - № 9. - С. 702716.

94. Никитин, И.Н. Организация и экономика ветеринарного дела: Учеб. для студ. вузов. / И.Н. Никитин, В.Ф. Воскобойник М.: ВЛАДОС,1999. 384 с.

95. Неспецифическая резистентность организма телят под воздействием фенозана / В.В.Семенютин, И.М. Шевченко, С.А.Семенютина, Е.В. Самофалова // Ветеринария- 1999. -№ 5.- С. 54-56.

96. Новикова, Т.Г. Опыт создания и использования культурных пастбищ для овец в опхозе «Темнолесский» /Т.Г.Новикова, Н.С. Дыба // Материалы научно-производственной конференции / ВНИИОК,-Ставрополь, 1971. Вып.З.-С. 312-316.

97. Новых, А.А. Тимус: ультраструктурная организация железы кур в норме и при вирусном онкогенезе / А.А.Новых.-Красноярск: Изд-во Красноярского ун-та, 1988.-240 с.

98. Общая и экологическая иммунология / М.М. Серых, О.Н. Макурина, A.M. Петров, Г.Л.Рытов, С.В.Симак,- Самара: Самарский университет.2000.- с. 174.

99. Ольховский, С.Ю. Результаты анализа падежа норок при алеутской болезни в государственном предприятии «Таунанский» // Мат. Всероссийской научно-метод. конф.: Сб. науч. тр.- Омск, 2000.- С. 368369.

100. Онищук, Ф.Д. Эффективность нового препарата лозеваля в птицеводстве / Ф.Д. Онищук, А.А. Таймасуков, А.Б. Макрушин // Вестник ветеринарии,- 2/2000.- № 16.- С. 89-90.

101. Орехов, К.В. Педиатрия / К.В. Орехов.-1963.

102. Оробец, В. А. Отрицательные последствия дегельминтизации сельскохозяйственных животных / В.А. Оробец // Вестникветеринарии,- 2000.-№ 15,- С. 88-90.

103. Оробец, В.А. Применение ивермека при псороптозе овец / В.А. Оробец, В.А. Сидоркин//Вестник ветеринарии.- 2001 .-№ 21.- С. 39-40.

104. Павлов, Г.В. Показатели естественной резистентности телят при применении иммуностимулятора / Г.В. Павлов, Г.Н. Печников, 0.0. Смоленская-Суворова // Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных. М, 1988. - С. 111-113.

105. Першин, С.Б. Стресс и иммунитет / С.Б. Перший, Т.В. Кончугова -М.: КРОН-ПРЕСС, 1996.- 160с.

106. Петров, A.M. Стимуляция иммунной системы у телят-трансплантантов / A.M. Петров, Е.С. Воронин //XXV Всемирный ветеринарный конгресс, 3-9 сентября 1995. -Иякогама. Т 1.З.1.- С.-102-106.

107. Петров, A.M. Методические рекомендации по изучению резистентности телят-трансплантантов и се коррекции / A.M. Петров, Е.С. Воронин, М.М. Серых -М.: РАСХН. 1995 -78с.

108. Петров, A.M. Динамика основных иммунологических параметров телят-трансплантантов / А.М.Петров, Е.С.Воронин, М.М.Серых. -М.: 1999.-184 с.

109. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В.Петров, А.А.Михайлова //Итоги науки и техники. / ВИНИТИ,- М., 1983. Т. 12. - С. 63.

110. Петров Р.В. Фактор, угнетающий миграцию лимфоцитов и фактор роста иммунекомпетентных клеток (ИЛ-1, ИЛ-2) / Р.В. Петров-М.,1984.-С. 18-19.

111. Петров, Р.В. В-лимфоциты регуляторы / Р.В. Петров, И.М. Дозиров // Иммунологические аспекты биологии развития.- М., 1984,-С. 5-15.

112. Петров, Р.В. Иммунная биотехнология / Р.В. Петров // Проблемы ветеринарной иммунологии 1985,- С. 9-13.

113. Плященко С.И. Повышение естественной резистентности организма животных основа профилактики болезней // Ветеринария. - 1991. -№6 -С. 49-52.

114. Практикум по биохимии / под ред. С.В. Северина, Г.А. Соловьевой.-Издательство Московского университета.-М., 1989.-509 с.

115. Практикум по кормлению сельскохозяйственных животных / Е.А. Петухова, Н.Т. Емелина, B.C. Крылова и др.- М.: ВО Агропромиздат, 1090.- 253 с.

116. Придыбайло, Н.Д. Иммунодефицита у сельскохозяйственных животных, профилактика и лечение их иммуномодуляторами / Н.Д. Придыбайло. М.: ВНИИТЭИагропром, 1991. -41 с.

117. Прикладная иммунология / Под ред. А.А. Сохина, Е.Ф. Чернушенко. Киев. 1984. - 320 с.

118. Полифункциональность некоторых анальгезирующих пептидов / В.Е.Клуша, Н.А.Абиссова, Ш.В.Свирскис и др. // Тез. докл. конф. «Синтез и изучение физиологически активных веществ» (30-31 октября 1980 г.)- Вильнюс, 1980.-С. 58

119. Расулов, Ж.Г. Влияние бализа и кумыса на лизоцимную активность и титр комплемента сыворотки крови у цыплят / Ж.Г.Расулов, А.Я. Шурыгин.//ВИНИТИ. -М., 1984. 84 с.

120. Рекомендации по диагностике и профилактике иммунных дефицитов и аутоиммунных заболеваний у животных / И.М. Карпуть, JI М. Пивовар, И.З. Севрюк и др. Витебск, 1992. - 74 с.

121. Бюллетень ВНИИФиБ с.-х. животных.- Боровск, 1969, №3.- С.44-47.

122. Румянцев, Г.Е. Тканевая терапия / Г.Е. Румянцев. Ростов-н/Д, 1950.- 120 с.

123. Сезонная и возрастная динамика причин падежа свиней и распространение иммунодефицитных состояний / А.А. Буянов, Е.А. Лаковников, А.Ф. Парфенов и др. // Мат. Всероссийской научн.-метод, конф.: Сб. научн. тр.- Омск, 2000,- С. 55-56

124. Соколов, В.Д. Фармакологическая коррекция стресс / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева // Ветеринария. -1989. № 5. - С. 61-64.

125. Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, А.В. Соколов // Ветеринария. 1992. - № 8. - С. 49-50.

126. Соколовская, И.И. Иммунология воспроизведения животных / И.И. Соколовская, В.К. Милованов.- М.: Колос, 1981.- 264 с.

127. Сопоставление противоопухолевой активности экстрактов эпифиза, гипоталамуса, мелатонина и сигетина у мышей перевивным раком молочной железы / В.Н. Анисимов, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон, В.М. Дильман // Вопросы онкологии. 1973. - № 10. -С. 99-101.

128. Специфическая и неспецифическая иммунокоррекция / A.M. Земсков, В.М. Земсков, В.И. Золоедов, Е. Бжозовский // Успехи совр. биологии,- 1997. -Т.117. В.З.- С. 261-268.

129. Справочник. Овцеводство и козоводство / У.Х. Архипов, В.М. Виноградова, П.А. Воробьев и др.- М.: Агропромиздат, 1990.- 334 с.

130. Сухих, Г.Т. Иммунитет и генитальный герпес / Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько, В.И. Кулаков. Н.Новгород: Изд-во НГМА, 1997. - 224 с.

131. Сысоев, А.А. Физиология размножения сельскохозяйственных животных / А.А.Сысоев.-М.: Колос, 1978.- 359 с.

132. Тезисы докл. II респ. Науч. Конф. по физиол. и биохимии животных.- Львов, 1963.- 63 с.

133. Тишнер, X. Фотометрическое определение иммунных реагентов / Х.Тишнер // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.-М.: Медицина, 1987.-С. 115-120.

134. Трубникова, П.В. Циклические процессы жизнедеятельности дрожжей Saccharomyces ellipsoides / П.В. Трубникова // Мат. X Международной конференции «Циклы природы и общества».-Ставрополь, 2002. С. 156-158.

135. Трубникова, П.В. Изменение показателей естественной резистентности молочных коз при вакцинации / П.В. Трубникова // Вестник ветеринарии.-2003.- № 26 С. 32-35.

136. Трубникова, П.В. Роль биологически активных веществ в повышении естественной резистентности у молочных коз / П.В. Трубникова// Сб. науч. тр. /СНИИЖК. Ставрополь, 2003. - С. 105-109.

137. Трубникова, П.В. Динамика содержания гемоглобина и эритроцитов у коз в разные периоды воспроизводительной функции / П.В. Трубникова // Экология. Культура. Образование. 2003. - № 13.- С. 5 153.

138. Тушнов, М.П., 1936. Цит. по Филатову, В.П. Тканевая терапия / В.П. Филатов. М.: Знание, 1955. - 180 с.

139. Уразаев, Н.А. Биогеоценология и патологии сельскохозяйственных животных / Н.А. Уразаев.- Казань: Каз. вет. инст., 1971.-107с.

140. Уразаев, Н.А. Основы биогеоценотиченской патологии сельскохозяйственных животных / Н.А. Уразаев.- Казань: Каз. вет. инст., 1977.-37с.

141. Уразаев, Н.А. Информационный экологический фактор и биогеоценотическая патология животных / Н.А.Уразаев, А.В. Никитин // Морфофункциональные показатели продуктивных животных: Сб. науч. тр./ Ставроп.СХИ.-Ставрополь, 1992.-С. 16-19.

142. Физиология животных и этология / В.Г. Скопичев, Т.А. Эйсымонт, Н.П. Алексеев и др.- М.: Колос, 2003.- 720 с.

143. Филатов, В.П. Некоторые вопросы тканевой терапии / В.П. Филатов // Офтальмологический журнал. -1946. № 3. - С. 3-6.

144. Филатов, В.П. Основные вопросы тканевой терапии (лечение биогенными стимуляторами) / В.П. Филатов // Хирургия. 1949. - № 7,-С. 3-11.

145. Фролов, И.Ю. Биологические проблемы нетрадиционных способов инкубации яиц и терапии цитомединами молодняка птиц и животных / И.Ю. Фролов. Волгоград.: ПО «Полиграфист» Волгогра-динформпечать, 1993. - С. 69.

146. Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В.Пинегин, Х.И.Истамов. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. - 219 с.

147. Цыганский, Р.А. Динамика свободнорадикального окисления у коров при различном функциональном состоянии: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Р.А. Цыганский,- Ставрополь, 2003.-20 с.

148. Чернушенко, Е.Ф. Иммунологические исследования в клинике / Е.Ф. Чернушенко, Л.С. Когосова. Киев: Здоров'я, 1978. -158 с.

149. Штельнер, А. Фагоцитоз / А. Штельнер // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина, 1987.- С. 378-388.

150. Шубик, В.М. Проблемы экологической иммунологии / В.М.

151. Шубик. Л.: Медицина, 1976. - 214 с.

152. Alterations in bovine lymphocyte function during the periparturient period /М.Е. Marcus, B.J. Nonnecke, J. A. Roth, // Amer. Vet. Res.- 1989.-50.-№2.-P. 215-220.

153. Badet M.T., Immunitary relations between mother and embryo during gestation / P. Chateaureynaud, C. Mayer // A comparative study in lower and higher vertebrates // Develop. Сотр. Immunol. 1983. - Vol. 7. - P. 731734.

154. Bellanti, J.A. Role of local gamma-A-immunoglobulins in immunity / J.A. Bellanti//"Am. J. Dis. Child.", 1968. -V. 115.-P.239.

155. Bennet, H.P.J. Peptide hormones and their analogues: distribution, clearance from the circulation, and inactivation in vivo / H.P.J. Bennet, C. McMartin //Pharmacol. Rev.- 1979.-Vol. 30.- P. 248-282.

156. Block, L.H. I25j-8-L-Arginin vasopressin binding to human mononuclear phagocytes / L.H. Block, R. Locher, W. Tenschest e.a.// J. Clin. Investig.-1981.-Vol. 68.- P. 374-381.

157. Chandra, R.K. Nutrition, immunity and infection / R.K. Chandra, P.M. Newberne // Plenum Press. New York - London, 1977. -120 p.

158. Clark, D.A. What do we know about spontaneous abortion mechanisms ? / D.A. Clark, J. Chaonat // Amer. J. Reprod. Immunol.- 1989,- P. 28-37.

159. Collins-Williams, C. e. a. Deficiency of Ig A serum and respiratory secretion / C. Collins-Williams // "Canad. Med. J.".- 1969. V. 99. - № 22. -P. 1069-1072.

160. Compound 48/50 inhibit neurotensin-indused hypotension in rats / R.

161. Quirion, F. Rioux, D. Regoli, S. St-Pierre //Life Sci.- 1980,- Vol. 27.- P.1887-1895.

162. Cone, R.E. The influence of synthetic homoribopolynucleotide complex on the immune response / R.E. Cone // Pharm. Ther.- 1979. V. 8. -P. 321337.

163. Cyclic GMP stimulates lymphocytes nucleic acid synthesis / Y. Weinstein, D. A. Chambers, H. R. Bouzne, K. L. Melmon // Nature.- 1974. -V. 251. P. 352-353.

164. Davies, S. Mitogen stimulation of chronic lymhpacytic leukemia lymphacytes: defective phytogemagglutinin stimulation independent of immunologic cell surface markers / S. Davies // Blood.- 1970.-V.56.-N.2.-P. 256-261.

165. Deakin, J.F.W. Influence of N-terminal acetylation and C-terminal proteolysis on the analgesik activity of (^-endorphin / J.F.W. Deakin, J.O. Dostrovsky, D.G. Smyth // Biochem. J.- 1980.-Vol. 189,- P. 501-506.

166. Effects of dietary leucine, a-ketoisocaproate and isovalerate on antibody prodaction and lymphocyte blastogenesis in growing lambs / G.Kuhman, J. A. Roth, P.J. Flakoll e.a.//J. Nutr.- 1988.-118,-№ 12,-P.1564-1569.

167. Escobar, M.R. Macrophages et lymphocytes: natura, functions and interactions / M.R. Escobar // Adv. Exper. Med. Biol. 121 A. and B.-New York and London: Plenum Press, 1980.

168. Flemming, K.B. A Comprehensive Treatise / K.B. Flemming. New York, 1985. - V. 8. - P. 247-284.

169. Fortagne, M. Hamatologische Parameter der Probstheidaer Kleinziege in Abhangigkeit Von Craviditat und Lactation / M. Fortagne, M. Schafer // Arch. Exp. Veterinarmed.- 1989.-43,- № 2.-P. 223-230.

170. Fuller, R. Probiotics in man and animals / R. Fuller // A Review. J. Appl. Bacteriol.- 1989. 66. - 5. - P. 365-378.

171. Floch F. Immunostimulators / F. Floch .-Progr. Pharm. Res. Oxford.,1982 P. 133-180.

172. Fuxe, К. Cholecyctokinin peptides produce marked reduction of dophamin turnover in discrete areas in the rat brain following intraventricular injection // K. Fuxe, K. Andersson, V. Locatelli e.a // Europ. J. Pharmacol.- I980.-Vol. 67.- P. 329-331.

173. Gabig, T. G. The killing of pathogens by phagocytes / T.G. Gabig, B.M. Babior // Ann. Rev. Med., 1981.- P. 32, 313-325.

174. Goldstein, G. Immunoregulation by thymopoetin / G. Goldstein, C. L l.an //J. Supramol Struct. -1980.-V. 14. N .3.-P. 397-403.

175. Jolles, P. Chemical and biological basis of adjuvants / P. Jolles, A. Paraf. -New York. -Heidelberg. Berlin: Springer-Verlag, 1973. - 150 p.

176. Joseph, A. Allergic diseases of the respiratory tract / A. Joseph, M.D.Bellanti // N.Y: Immunology. -1972. P. 356-362.

177. Kowalczuk-Bronisz, S.H. Рае gelow I. / S.H. Kowalczuk-Bronisz.// Allergy Immunological.- 1986,- Bd.32.-Nol.-P. 57-64.

178. Landau, C. Is there a role for the endogenous opioid peptides in the regulation of blood glucose? / C. Landau, R. Palmour, J.-K. Chang // Abstr. 9th Annu. Meet., Atlanta, Georgia, Nov. 2-6.-1979., Bethesda, Soc. Neurosci.-1980.-Vol.5.- P. 532.

179. Lin, T.M. Gastrointestinal actions of the C-terminal tripeptide of gastrin / T.M. Lin // Gastroenterology.- 1972.- Vol.63.- P. 922-923.

180. Nossal, G.J. Antibody prodaction // G.J. Nossal // Brit. J. Exp. Path.-1957,- N. 40.-P. 301-311.

181. Parker, R.B. Probiotics, the other half of the antibiotics story. / R.B. Parker // Anim. Nutrition and Healtf.- 1974. 29. - P. 4-8.

182. Peptides and central nervous system / A.J. Prange, Ch.B. Nemeroff, M.A. Pilton e.a./ Ed. By L.L. Iversen e.a. // Handbook of psychopharmacology.-New-York: Plenum Press.- 1978.-Vol. 13.- P. 1-107.

183. Pittman, l.A. Thyrotropin-releasing hormone / l.A. Pittman,-Adv. Internal Med.- 1974.- Vol 19.-P. 303-325.

184. Raff, M.E. Cantor-Progress Immunology / M.E. Raff.- 1971 .-V.1.-P.83.

185. Rose, N.R. Manual of clinical immunology / N.R. Rose, H. Friedman // Amer. Soc. Microbiol. Washington, 1980.- P. 465-469.

186. Rossie, S.S. Regulation of mast cell histamin release by neurotensin / S.S. Rossie, R.J. Miller//Life Sci.- 1982.- Vol. 31.- P. 509-51.

187. Sela, M. The challenge of the combined use of synthetic antigens and synthetic adjuvants / M. Sela, E. Mozes // Spring. Sem. Immunopath.- 1979,-V.2.-P. 119-132.

188. Sotirov, L. Comparative study on lysozyme and complement activity on hybrids obtained by crossing of modern and wild swine / L. Sotirov, S. Tanchev, V. Katzarov // Animal Genetics.- Interlaken, Switzerland.- 1992.-Vol. 23.-Sup. I.-P. 49.

189. Stereoselective muscarinic acetylcholin and opiate receptors of human phagocitic leucocytes / A. Lorker, L.G. Abbod, W. Hoss, F.J. Lionetti // Biochem. Pharmacol.- 1980.- Vol. 29.- P. 1361-1365.

190. Substance P new aspects to its modulatory function / P. Oehme, K. Hecht, L. Piesche e.a. - Acta Biol. Med. Germ., 1980.-Bd. 39.-P. 469-477.

191. Substance P Ausgewahlte Probleme der Chemie, Biochemie, Pharmakologie, Physiologie und Pathophysiologie / P. Oehme, V. Bienert, K. Hecht, J. Bergm.- Berlin, 1981.-185 p.

192. Theocharides, T.C. Somatostatin induses histamin secretion from ratperitoneal mast cells / T.C Theocharides, W.V. Douglas // Endokrinology.-1978,- Vol. 102.- P. 1637-1640.

193. Thymosin: effects of normal human blood T-cells / J. Wubran, H.S. Levin, H.H. Fudenberg, A.L. Coldstein // Ann. N.Y. Acad. Sci.-1975.-V.249.- P.300-306.

194. Van Furth, R. Mononuclear Phagocytes: functional aspects / R. Van Furth.-Hague, 1980.- 187 p.

195. Van Riezen, H. Critical appraisal of peptide pharmacology / H. Van Riezen, H. Righter, M. Griven // Neuropeptide influence on brain and behavior / Ed. by L. H. Miller e.a.- New-York, London: Raven Press.-1977.- P.ll-27.

196. Vanselow, B.A. The application of adjuvants to veterinary Medicine / B.A. Vanselow // Veter. Bull.- 1987. V. 57. - № 11. - P. 881 - 896.

197. Wagshal, A.B. Regulatory substances produced by lymphocytes. VII1. Cell cycle specificity of inhibitor of DNA synthesis action in lymphocytes /

198. A.B. Wagshal, B.N. Waksman // J. Immunology.- 1978. V. 121. - P. 966972.

199. Wagshal, A.B. Regulatory substances produced by lymphocytes. VI. Cell cycle specificity of inhibitor of DNA synthesis action in L cells / A.B. Wagshal, B.V. Jegasothy, B.N. Waksman // J. Exp. Med.- 1978. V. 147.-P. 171-181.

200. Waksman, B.N. Adjuvants and immuneregulation by lymphoid cells /

201. B.N. Waksman // Spring. Sem. Immunopath.- 1979. V. 2. - P. 5-33.

202. Wegmann, T. Maternal T-cell promote placental growth and prevent spontaneous abortion / T. Wegmann // Immunol. Lett.- 1988.- P. 297-302.

203. Weinstein, Y. Control of immune responses by cyclic AMP and lymphocytes that adhere to histamine columns / Y. Weinstein, K. L. Melmon // Immunology Commun.- 1976. V. 5. - P. 401-416.

204. Wood, С. B. S. Immune deficiency / С. B. S. Wood // Proc. Roy. Soc. Med.- 1977. 70. - 12. - P. 858-860.

Информация о работе
  • Трубникова, Полина Владимировна
  • кандидата биологических наук
  • Ставрополь, 2004
  • ВАК 03.00.13
Диссертация
Влияние биологической стимуляции на неспецифический иммунитет у коз - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Влияние биологической стимуляции на неспецифический иммунитет у коз - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации
Похожие работы