Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина

Тищенко, Александр Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина"

на правах рукописи

С^/ -

ТИЩЕНКО АЛЕКСАНДР СЕРГЕЕВИЧ

ВЛИЯНИЕ АДЪЮВАНТОВ НА ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ЭШЕРИХИОЗНОГО АНАТОКСИНА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой с тепени кандидата ветеринарных наук

- 1 Ш 2011

Краснодар 2011

005003015

Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Терехов Владимир Иванович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Басова Наталья Юрьевна

доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Людмила Александровна

Ведущая организация: ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт»

Защита диссертации состоится «Л у> 20 Н г. в 1200 часов на

заседании диссертационного совета Д 220.tt38.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина,13).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru «¿/» и-оЛ^)^ 20 К г. и официальном сайте ВАК РФ - http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан » ис^^е 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

И.А. Родин

1. Общая характеристика работы

Актуальность работы. Совершенствование средств специфической профилактики и иммунотерапии эшерихиоза все еще остается актуальной проблемой, для решения которой требуется комплексный подход в изучении биологически иммуногенных свойств возбудителя, факторов его пато-генности, разработке технологии получения из бактериальных клеток про-тективных антигенов и определение их оптимального соотношения и концентрации в готовом препарате. Актуальность вопроса подкрепляется ещё и тем, что выпускаемые биофабриками вакцины и сыворотки в антигенном отношении не совершенны в системе противоэпизоотических мероприятий, направленных на профилактику эшерихиоза и не обеспечивают стойкого благополучия (Бондаренко В.М. и др., 1998, Головко А.Н. и др., 1998, Ануфриев А.И. и др., 2000, Пирожков М.К., 2002, Волкова МБ. и др., 2005).

По данным ряда авторов (Табачник A.JI., 1977, Зароза В.Г., 1991, Емельяненко П.А., 2000) ведущую роль в этиопатогенезе колиинфекции играют токсигенные варианты Escherichia coli, продуцирующие термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, поэтому считается, что использование инактивированных токсинов Е. coli в качестве антигенного материала для создания вакцин является наиболее перспективным направлением в ветеринарной вакцинологии.

За последние 10-15 лет разработан целый ряд отечественных, так и зарубежных вакцин на основе токсинов Е. coli, в которых в качестве антигенного компонента преимущественно используются термолабильный и термостабильный токсины. Данные препараты, по сообщениям авторов, достаточно иммуногенны и обеспечивают выраженный гуморальный ответ у иммунизированных животных (Масанская В.В. др., 2003, Козловский Ю.Е. и др., 2004, Панькова С.Ю., 2005, Караев Я. М., 2008).

Между тем, исследованиями Караева Я.М. (2008) установлено, что эшерихиозный анатоксин (ЭА), состоящий из инактивированных TL, TS, STX токсинов, хотя и стимулирует клеточное и гуморальное звенья иммунитета, но эта стимуляция непродолжительна и не сопровождается образованием высокого уровня специфических антител. В связи с чем автором делается вывод о целесообразности усиления иммуногенности ЭА. Одним из методов усиления иммуногенности различных антигенов заключается в использовании адъювантор (Покровский В.И. и др., 1994, Петров Р.В., 1998, Медуницин Н. В., 1999, Хаитов P.M., 1999).

В связи с этим изучение влияния различных адъювантов на иммуно-генные свойства ЭА, с целью создания эффективного биологического препарата, направленного на профилактику эшерихиоза животных, представляется актуальным и целесообразным.

Цель и задачи исследований. Основной целью работы было изучение влияния различных адъювантов на иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить влияние эшерихиозного анатоксина в сочетании с различными адьювантами на иммунобиологическую реактивность лабораторных животных;

- изучить влияние адъювантов на иммуногенные свойства анатоксина для лабораторных животных;

- изучить влияние адъювантов на протективные свойства эшерихиозного анатоксина;

- изучить влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина для сельскохозяйственных животных;

- определить профилактическую эффективность анатоксина при эше-рихиозе поросят и телят.

Научная новизна. Впервые установлено влияние пирогенала, гидроокиси алюминия, полиакриловой кислоты и масляного адъюванта на им-мунногенные свойства эшерихиозного анатоксина. Определены особенности изменения гематологических показателей, функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и образования специфических антител в ответ на введение животным эшерихиозного анатоксина в сочетании с адьювантами. Установлено влияние адъювантов на протективную активность эшерихиозного анатоксина при экспериментальном заражении. Определено влияние адъювантов на иммуногенность эшерихиозного анатоксина при использовании супоросным свиноматкам и стельным коровам, а также продолжительность колострального иммунитета у потомства, полученного от иммунизированных матерей.

Научная новизна работы подтверждена двумя патентами РФ на изобретение №2429012 от 20.09.2011 и №2432174 от 27.10.2011.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили выявить особенности иммуногенной активности эшерихиозного анатоксина, при введении в его состав различных типов адъювантов. Экспериментально установлены оптимальные схемы применения препаратов, показана их эффективность и возможность оценки на лабораторных и естественно-восприимчивых животных. Показана высокая иммуно-генная активность эшерихиозного анатоксина с адьювантами для супоросных свиноматок и стельных коров и возможность его использования для формирования колострального иммунитета у поросят и телят. По результатам проведенных экспериментов из четырех адъювантных веществ был выбран пирогенал (липополисахарид грамотрицательных бактерий), обладающий лучшими адъювантными свойствами для эшерихиозного анатоксина. Установлено, что в производственных условиях иммунизация эшерихиозным анатоксином с пирогеналом обеспечивает наиболее выраженный профилактический эффект, заключающийся в снижении заболеваемости и гибели поросят и телят в 2,8-4,3 и 2,7-5 раз соответственно.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на научных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2009, 2010, 2011); 3-ой и 4-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар,

2009, 2010), международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2009), международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц» (Екатеринбург, 2010), П-й международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» (Краснодар, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 5 в рецензируемых журналах рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 124 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов исследования, выводов, предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа включает 23 таблицы и 10 рисунков. Список литературы содержит 201 источник, из числа которых 53 иностранных.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Особенности влияния анатоксина с различными адъювантами на гематологические показатели и функциональную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов в динамике;

2. Особенность антителообразования в ответ на введение эшерихиоз-ного анатоксина с адъювантами и его протективная активность для лабораторных животных;

3. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина для сельскохозяйственных животных и профилактическая эффективность при эшерихиозе поросят и телят.

2. Материалы и методы исследований

Исследования проводили на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ с 2008 по 2011 гг. Отдельные этапы исследований осуществлялись на молочном комплексе ЗАО «Путиловец-Юг» Павловского района и свинотоварной ферме ООО АПФ «Рубин» Горячеключевского района.

В ходе выполнения работы было проведено 240 гематологических, 240 иммунологических, 119 токсикологических и 1378 серологических исследований. В опытах использовано 140 белых крыс, 152 белых мышей, 50 коров, 50 телят, 30 свиноматок и 90 поросят.

В работе использовали токсигенные штаммы Е. coli №44 (0157:Н7, STX 1 и 2), №533 (0141 :К99, ST+), № 546 (0111:F41, LT+), выделенные из патологического материала от телят и поросят.

Принадлежность данных изолятов к Е. coli подтверждали культураль-ными, морфологическими, тинкториальными и биохимическими (с использованием «ENTEROtest 24» фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika, Чехия исследованиями.

Серологический профиль выделенных Е. coli устанавливали с помощью типоспецифических О-агглютинирующих колисывороток (Армавирская биофабрика) и адгезивных колисывороток (ВНИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск).

Наличие генов токсигенности эшерихий определяли с помощью ПЦР-диагностики в Центральном НИИ эпидемиологии (Москва). Для выявления специфических участков ДНК генов шигатоксина I типа (STX1), шиготокси-на II типа (STX2) энтерогеморрагических Е. coli, термостабильного (ST) и термолабильного (LT) энтеротоксинов энтеротоксигенных Е. coli были использованы тест-системы «АмплиСенс Е. Coli-tox» ЦНИИ Эпидемиологии МЗРФ.

Для получения эшерихиозного анатоксина токсигенные штаммы Escherichia coli по отдельности засевали в пробирки с 10-ю мл питательной средой для накопления токсинов кишечной палочки (Терехов В.И., 2007), после чего их помещали в термостат, где культивировали при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносили в колбы с 200-300 мл питательной среды и инкубировали при 37°С в течение 7 суток. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивали. Перед окончанием инкубирования из каждой колбы отобрали по 10 мл культуральной жидкости и использовали ее после центрифугирования при 10 тыс. об/мин в течение 30 мин для определения наличия токсинов. Оценку токсинообразования Е. coli проводили методом биотестирования с использованием инфузорий рода стилонихиа (Терехов В.И., 2003).

При наличии токсинов в оставшиеся культуры добавляли формалин до концентрации 0,3-0,4%. Инактивацию культур проводили в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием.

После завершения инактивации равные объемы культур объединяли, получив, таким образом, комплексный препарат, содержащий вида 3 антигенов. С помощью стерилизующей фильтрации отделяли микробную массу от среды культивирования. Готовый препарат в асептических условиях фасовали в стерильные флаконы, укупоривали и использовали в дальнейших исследованиях.

В качестве адьювантов для ЭА использовали пирогенал (ГУ НИИЭМ им Н.Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва) в дозе 100 мкг/мл, алюминия гидрат окиси коллоидный (ФГУП «Армавирской биофабрики») в 20% концентрации, полиакриловую кислоту (ПАК) в дозе Змг/мл и минеральное масло марки «Маркол-52» с эмульгатором маннида монаалеата - Монтанид (90:10) (МА) в 50% концентрации.

Изучение влияния ЭА с адъювантами на картину крови и фагоцитарное звено иммунитета осуществляли на белых крысах массой 180±10 г. Для этого было сформировано 6 групп по 10 животных в каждой: 1 группа - интакт-ные животные (отрицательный контроль); 2 группа - животным внутримышечно инъецировали 0,15 мл ЭА (положительный контроль); 3 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ЛПС; 4 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ГОА; 5 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ПАК;

6 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с добавлением МА. Отбор крови проводили через 24, 48, 72 и 120 часов, отсекая кончик хвоста. В крови, используя автоматический гематологический анализатор MEDONIC CA 400, определяли количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина. Отдельно выводили лейкоформулу, по которой для установления оценки выраженности степени эндотоксикоза и уровня воспалительной реакции рассчитывали лейкоинтоксикационный индекс (Караулов A.B., 1999).

Фагоцитарное звено иммунитета оценивали по показателям фагоцитарной активности нейтрофилов (ФА), фагоцитарному числу (ФЧ). Оценку завершенности фагоцитарной реакции и процесса переваривания оценивали по проценту переваривания (% перевар.). Состояние мобилизационной способности и микробицидной активности нейтрофильных гранулоцитов определяли, используя НСТ-тест (Нестерова И.В. с соавт., 1993). В качестве объекта фагоцитоза использовали S. aureus 209Р.

Определение в сыворотке крови животных специфических антитоксических антител осуществляли в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) с разработанным нами эритроцитарным диагностикумом. При этом эритроциты барана получали общепринятым методом путем дефибринирования свежеполученной крови с последующим отмыванием забуференным физраствором (pH 7,2). Часть отмытых эритроцитов хранили в ЗФР при температуре 2-6 С, а остальные формалинизировали по Weinbach (Каральник Б.В., 1973).

Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума включал в себя 2 этапа: 1) получение антигенов; 2) сенсибилизация эритроцитов смесью антигенов.

Для постановки реакции, отмытые сенсибилизированные эритроциты разводили до 1%-й концентрации, полученную взвесь в объеме 0,25 мл добавляли к исследуемой иммунной сыворотке, разведенной изотоническим раствором хлорида натрия от 1:2 до 1:1024 и разлитой по 0,25 мл в луночки планшета. Результаты учитывали по 4-х плюсовой системе после 2 ч инкубации в термостате при 37°С.

Изучение иммуногенных свойств анатоксина с адъювантами проводили на белых крысах массой 180±10 г.

На первом этапе определяли уровень специфических антител в сыворотке крови белых крыс после однократного введения анатоксина с адъювантами. Дня этого было сформировано 6 групп животных по 10 голов. 1 группа - интактные животные (отрицательный контроль); 2 группа - животным внутримышечно инъецировали 0,15 мл ЭА (положительный контроль); 3 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ЛПС; 4 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ГОА; 5 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с ПАК; 6 группа - животным инъецировали 0,15 мл ЭА с МА. Через 1, 2,3, 5, 7 и 21 сутки отбирали кровь, в сыворотке которой в РИГА определяли уровень титров антител к токсинам Е. coli.

На втором этапе исследований провели изучение иммуногенных свойств ЭА с адъювантами при двукратном введении препаратов. Для этого сформировали 5 групп по 10 животных в каждой. Крыс иммунизировали

внутримышечно двукратно с интервалом 7 дней. Животным 1-й группы инъецировали 0,15 мл ЭА (положительный контроль); 2-й группы - 0,15 мл ЭА с ЛПС; 3-й группы - 0,15 мл ЭА с ГОА; 4-й группы - 0,15 мл ЭА с ПАК; 5-й группы- 0,15 мл ЭА с МА. Кровь для определения наличия антитоксических антител отбирали на 7, 14, 21, 28 и 35 сутки после последней инъекции препаратов.

Определение среднелетальной дозы смеси токсинов Е. coli проводили в опыте на белых мышах массой 18-20 г. Для чего было сформировано 7 групп по 6 животных в каждой, которым внутрибрюшинно инъецировали 0,9-0,6-0,3-0,1-0,05-0,025-0,0125 мл смеси токсинсодержащей безмикробной культуры Е. coli штаммов №44, 533 и 546 соответственно. Определение ЛД50 токсинов проводили по методу Кербера (Ашмарин Н.П. с соавт., 1974).

Протективные свойства анатоксина изучали на белых мышах. На первом этапе применяли схему однократной иммунизации ЭА. С этой целью было сформировано 7 групп по 10 животных в каждой. Первым двум группам животных подкожно инъецировали анатоксин с ЛПС, в 1-й группе иммунизирующая доза составляла 0,1 мл, во 2-й - 0,2 мл. Животных 3-й и 4-й групп иммунизировали анатоксином с ПАК, доза в 3-й группе составляла 0,1 мл, в 4-й - 0,2 мл. Животным 5-й и 6-й групп инъецировали ЭА в дозах 0,1 и 0,2 мл соответственно. Седьмая группа являлась контрольной, животных не иммунизировали.

На втором этапе изучали протективные свойства ЭА при двукратной иммунизации белых мышей. Для постановки данного опыта было сформировано 4 группы по 10 животных. Крыс 1-й группы иммунизировали ЭА с ЛПС в дозе 0,1 мл; 2-й группы - ЭА с ПАК в дозе 0,1 мл; 3-й группы - ЭА без адъювантов в дозе 0,1 мл. Четвертая группа являлась контрольной, животных не иммунизировали.

Через 7 дней после последнего введения препаратов произвели отбор крови для определения титров антител, для этих целей было отобрано по 3 животных из каадой опытной группы. Затем провели заражение оставшихся животных смесью токсинсодержащей безмикробной культуры Е. coli штаммов №44, 533 и 546 в раннее установленной 3 ЛД50 равной 0,12 мл путем внутрибрюшинного введения. За животными наблюдали в течение 10 дней, учитывая количество павших и выживших в каждой группе.

Для определения оптимальной схемы иммунизации с целью обеспечения колострального иммунитета у новорожденных поросят и телят к токсинам Е. coli провели 2 серии опытов. В первой серии исследования проводили на свиньях. Для этого было сформировано 10 групп, в каждой из которых было по 3 супоросных свиноматки. 9 групп были опьтгными и 1 контрольная.

Свиноматок 1-ой опытной группы иммунизировали ЭА с ЛПС в дозах 3 и 3 мл; 2-й группы - ЭА с ЛПС в дозах 5 и 5 мл; 3-ей группы - ЭА с ЛПС в дозах 3 и 5 мл; 4-ой группы - ЭА с ПАК в дозах 3 и 3 мл; 5-й группы - ЭА с ПАК в дозах 5 и 5 мл; 6-й группы - ЭА с ПАК в дозах 3 и 5 мл.

Опытные группы 7-9 вакцинировали анатоксином без добавления адь-ювантов. Свиноматок 7-ой группы иммунизировали ЭА в дозах 3 и 3 мл; 8-й группы - в дозах 5 и 5 мл; 9-й группы - в дозах 3 и 5 мл.

Животных опытных групп иммунизировали внутримышечно двукратно с интервалом 7 дней. Животные контрольной группы не вакцинировались.

За опытными животными вели клиническое наблюдение, при этом учитывали общую и местную реакцию на введение препаратов.

У свиноматок через 7 дней после первой и 7 дней после второй вакцинации исследовали сыворотку крови на наличие специфических антитоксических антител.

Сразу после опороса отбирали пробы молозива, в которых определяли уровень антитоксических антител. Для получения сыворотки молозиво нагревали до 38°С в водяной бане и добавляли равный объем 0,1 Н раствора соляной кислоты и 1 каплю насыщенного раствора пепсина на 5 мл смеси. После центрифугирования в сыворотке молозива определяли содержание антител.

У поросят (по 3 поросенка от каждой свиноматки) на 2, 5, 7 сутки жизни отбирали кровь для исследования уровня колостральных антатоксиче-ских антител в РИГА.

Во второй серии опытов исследования проводили на стельных коровах голштинской породы. Для этого было сформировано 9 опытных и 1 контрольная группа по 5 животных в каждой. Все коровы содержались в одинаковых условиях.

Животных опытных групп за 30 дней до предполагаемого отела иммунизировали подкожно двукратно с интервалом 10 дней. Животные контрольной группы не вакцинировались.

Коров 1-ой опытной группы иммунизировали ЭА сЛПС в дозах Зи 5 мл; 2-ой группы - ЭА с ЛПС в дозах 5 и 5 мл; 3-ей группы - ЭА с ЛПС в дозах 5 и 10 мл; 4-ой группы - ЭА с ПАК в дозах 3 и 5 мл; 5-й группы ЭА с ПАК в дозах 5 и 5 мл; 6-й группы - ЭА с ПАК в дозах 5 и 10 мл. Коров 7-ой группы иммунизировали ЭА в дозах 3 и 5 мл; 8-й группы - в дозах 5 и 5 мл; 9-й группы - в дозах 5 и 10 мл.

За опытными животными вели клинические наблюдения до отела и после, учитывая общую и местную реакцию на введение препаратов, течение стельности и состояние молочной железы.

У коров через 10 дней после первой и 10 дней после второй вакцинации (за 10-7 дней до отела) исследовали сыворотку крови на наличие специфических антитоксических антител. Сразу после отела отбирали пробы молозива, в которых также определяли уровень антитоксических антител.

У телят, родившихся от иммунизированных коров, на 2, 7 и 14-е сутки жизни отбирали кровь для исследования уровня колостральных антитоксических антител. Контролем служили телята аналогичного возраста, полученные от не вакцинированных коров.

Математическую и биометрическую обработку полученных результатов с определением степени достоверности по распределению Стьюдента

осуществляли с помощью компьютерной программы Microsoft Excel 2003 (Гельман В Я., 2001).

3. Результаты собственных исследований

3.1. Картина крови животных после введения эшерихиозного анатоксина в сочетании с различными адъюваитами

После введения крысам, как чистого анатоксина, так и в сочетании с различными адьювантами во все временные отрезки исследования картина красной крови оставалась стабильной. Иную картину наблюдали со стороны клеток белой крови.

Через 24 ч у животных из групп 3 и 4 достоверно на 11,6-15,1% увеличилось количество лейкоцитов, из групп 2, 5 и 6 оно было таким же, как у крыс из контрольной группы. Между тем в лейкоформуле у крыс из 2-й, 3-й, 4-й и 6-й групп установили достоверное по отношению к контрольной группе, уменьшение относительного количества лимфоцитов, и напротив, увеличение сегментоядерных нейтрофилов.

Через 48 ч у крыс из 2-й группы произошло увеличение в крови количества лейкоцитов, в пуле которых увеличилось количественное присутствие лимфоцитов, но уменьшилось, относительно первоначального значения, количество нейтрофилов. У животных из групп 3, 4 и 6, напротив, количество лейкоцитов снизилось, в составе которых изменилось соотношение лимфоцитов и нейтрофилов. У крыс из 3-й и 4-й групп первых стало на 6% больше, а вторых на 7% меньше. У крыс из 6-й группы, напротив, количество лимфоцитов уменьшилось на 2%, а количество нейтрофилов увеличилось на 1%. У животных из 5-й группы на фоне стабильного количественного содержания в крови лейкоцитов (8,5±1,5% через 24 ч и 8,3±1,15% через 48 ч) отметили уменьшение относительного содержания в их составе лимфоцитов (с 83,6±2,6% через 24 ч до 75,8±4,02% через 48 ч) и увеличение нейтрофиль-ных гранулоцитов (с 15,1% до 20,6%). У животных всех опытных групп содержание эозинофилов оставалось достоверно более высоким, чем у интакт-ных животных.

Спустя 72 ч у крыс из 2-й группы общее количество лейкоцитов увеличилось на 16,6% относительно предыдущего исследованиям. Данное изменение произошло за счет стимуляции лимфопоэза, поскольку в лейкоформуле количество данных клеток увеличилось (с 77,1±3,2% до 83,6±4,4%), а количество нейтрофильных гранулоцитов, напротив, уменьшилось.

У животных в группах 3-5 общее количество белых клеток крови снизилось на 0,4хЮ9/л, а в 6-й группе осталось прежним (7,5±0,7><109/л), при этом отметили тенденцию к увеличению относительного количества лимфоцитов на фоне снижения нейтрофильных гранулоцитов. Это может свидетельствовать о завершении стадии индукции и начале стадии иммунорегуля-ции, которая характеризуется пролиферацией и дифференцировкой лимфоцитов и действием иммунорегуляторных медиаторов клеточного взаимодей-

ствия. У животных из 6-й группы на фоне стабильного количественного содержания в крови лейкоцитов в их популяционном составе отметили рост количества нейтрофильных клеток (с 18,7±1,7% через 24 ч до 21,3±1,2% через 72 ч после введения ЭА).

Через 120 ч в картине крови крыс из групп 2, 3 и 5 как общее количество лейкоцитов, так и соотношение популяционного состава этих клеток достоверно не отличалось от соответствующих показателей у интактных животных, что может свидетельствовать о прекращении антигенного раздражения и развитии эффекторной стадии иммунного ответа. Однако у крыс из 4-й и 6-й групп отметили относительную лейкоцитопению. В лейкоформуле крыс из 4-й и 6-й групп объем лимфоидных клеток был на 5,7-12,7% меньшим, чем у интактных животных, но уровень нейтрофилов и эозинофилов был достоверно выше, что может свидетельствовать о продолжающемся антигенном раздражении, а следовательно о развитии эффекторной стадии иммунного ответа, для которой характерно повышенное содержание в крови клеток осуществляющих фагоцитоз.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать, что в результате введения, как чистого ЭА, так и ЭА с адьювантами у животных происходят существенные изменения в количественном составе белых клеток крови. Наиболее выраженными эти изменения были в течение первых 72 ч, и характеризовались снижением количественного присутствия лимфоцитов, и, напротив, повышением количества нейтрофильных гранулоцитов, по сравнению с интактными животными. Данный эффект во временном отношении был не одинаков. У животных, которым вводили ЭА без адъювантов и ЭА с ЛПС он был более выраженным спустя 24 ч, ЭА с ПАК - 72 ч, ЭА с ГОА и МА - 120 ч.

3.2. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов

в ответ на введение эшерихиозного анатоксина с адьювантами

Проведенными исследованиями установлено, что ЭА существенно стимулирует поглотительную способность НГ. Спустя 24 ч после его введения ФА нейтрофилов с 8,8% у интактных животных повысилась до 65,0% у подопытных. Активизация НГ произошла и у животных в группах 3-6, которым ЭА вводили вместе с адьювантами, у них показатель ФА увеличился в 2 раза по сравнению с животными из контрольной группы. У животных из опытных групп увеличилось не только количество активных нейтрофилов, но и их захватывающая способность. Так количество бактерий захваченных одним нейтрофилом у крыс из 2 группы было в 4,75 раза большим, чем у интактных животных, а у крыс, которым ЭА вводили вместе с различными адьювантами, показатель ФЧ был в 2,3-3,7 раза выше, чем у животных из контрольной группы. Между тем, увеличение поглотительной активности неадекватно сказалось на переваривающей способности НГ. Значительное увеличение количества поглощенных НГ бактерий у животных из 2-й группы не обусловило увеличения у них активности переваривания. В тоже время у

животных, которым ЭА вводили вместе с адъювантами, наряду с поглотительной способностью повысилась и переваривающая активность НГ. Наиболее высоким процент переваривания поглощенных стафилококков был у крыс из 3,4 и 5 групп, которым ЭА вводили вместе с ЛПС, ГОА и ПАК.

Под действием как чистого ЭА, так и его комбинаций с адъювантами у НГ значительно (в 10-20 раз) активизировалась кислородзависимая мик-робицидная система. Причем это не привело к истощению фагоцитов, поскольку у них сохранились резервные возможности, о нем свидетельствовал коэффициент мобилизации, равный во всех опытных группах больше единицы.

Через 48 ч установили снижение количества активных НГ у животных из 2-й группы, а у животных 3-6 групп, напротив, наблюдали увеличение данного показателя. Наиболее выраженным данное увеличение произошло у крыс из 5-й группы (до 29,6±1,5).

Показатель захваченных бактерий и средний цитохимический индекс остался практически на том же уровне, что был зафиксирован через 24 ч после введения анатоксина, что говорит о сохраняющейся высокой активности стимулированных НГ и продолжающемся действии анатоксина на эти клетки.

Спустя 72 ч после инъекции, количество активных нейтрофилов у подопытных животных уменьшилось по сравнению с предыдущими исследованиями, но все же оставалось достоверно большим, чем у интактных крыс.

В 6-й опытной группе, наоборот, показатель фагоцитарной активности увеличился с 18,0±0,4 до 19,3±1,7%. Количество захваченных фагоцитами бактерий у крыс групп № 2-6 находилось в диапазоне от 2,5±0,22 до 4,45±0,17, и было достоверно выше, чем в 1-й группе (1,9±0,09). Между тем, у животных из 2-й группы этот показатель уменьшился до 2,5±0,22, в то время как у крыс из 3-6 групп он находился в пределах от 3,51±0,18 (5 группа) до 4,45±0,17 (6 группа).

Переваривающая способность нейтрофилов у животных в опытных группах существенно не изменилась по сравнению со значением предыдущего исследования, но была достоверно более высокой, чем аналогичный показатель в группе контроля. Средний цитохимический индекс НГ был так же более высоким, чем у животных из контрольной группы, что свидетельствует о значительной интенсивности метаболических процессов, связанных с деградацией захваченного антигенного материала.

Спустя 120 ч у животных из опытных групп, за исключением 6-й группы, количество активных нейтрофилов уменьшилось по сравнению с предыдущими данными. У животных из 6-й группы, которым вводился ЭА с масляным адьювантом, количество фагоцитирующих нейтрофилов увеличилось до 25,6±1,9%. Данное обстоятельство, по всей видимости, свидетельствует о депонирующем действии анатоксина с масляным адъювантом.

У крыс, которым ввели чистый ЭА, через 120 ч практически все показатели фагоцитоза сравнялись с таковыми у животных из контрольной груп-

пы, а это значит, что антигенное действие ЭА на НГ к этому времени закончилось. У животных, которым ЭА вводили вместе с ЛПС, ГОА, ПАК и МА, по-прежнему функциональная (особенно переваривающая) активность оставалась высокой.

Таким образом, результаты проведенного опыта показали, что ЭА оказывает выраженное стимулирующее влияние на функциональную активность НГ, однако это действие продолжается в течении первых 48 ч после чего снижается и через 120 ч практически прекращается. В тоже время стимулирующее влияние ЭА с адъювантами на поглотительную и микробицидную активность НГ продолжает действовать даже спустя 120 ч. Более низкие, но стабильные показатели захватывающей способности НГ после введения животным ЭА с адъювантами, может свидетельствовать о изменении адъюван-тами физико-х#шического состояния антигена, создании «депо» антигена и замедлении его всасывания.

3 Л. Влияние адъюваитов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина

Данные исследования включали в себя две серии опытов, которые проводили на белых крысах. Первая серия заключалась в исследовании иммуно-генной активности ЭА при однократном введении, по результатам которой мы смогли бы ответить на такие вопросы как, время появления специфических антител и время максимального увеличения концентрации антитоксических антител. Вторая серия опытов должна была дать ответ о возможности и эффективности бустерного (повторного) введения ЭА.

У животных после введения ЭА уже через 24 ч в сыворотке крови появились антитела к токсинам Е. coli (табл. 1). Однако уровень их был неодинаков. У тех крыс, которым ввели ЭА без адъювантов, татр антител находился в пределах 2,6±0,5 log2, в то время как у животных, которым ЭА вводили с адъювантами, он был в 1,2-1,4 раза выше. У иктактных животных вообще на протяжении всего срока наблюдения специфических антител выявлено не было.

Через 2 суток после введения ЭА установили повышение концентрации антитоксических антител. Причем у крыс 2-й группы она увеличилась в 1,1 раза, 3-й - в 1,3 раза, 4-й - в 1,4 раза, 5-й - 1,6 раза, 6-й - в 1,5 раза, то есть у крыс, которым ЭА ввели вместе с адъювантами, продукция антител была наиболее интенсивной.

В последующие дни уровень специфических антител продолжал расти. Однако время окончания роста титра антител и их величина у животных из разных групп была неодинаковой. У крыс, которым ЭА ввели без адъювантов, максимальное значение титра антител было установлено на 5-й день и составило 4,0±0,6 1о&. После этого отметили постепенное снижение концентрации антител, и через 21 день она сравнялась по значению с первым днем. У крыс, которым ввели ЭА с ЛПС и ПАК, пик накопления антитоксических антител произошел на 7 сутки после введения. К этому времени у животных

из 3-й группы в сыворотке крови антитоксические антитела достигли концентрации 6,2±0,7 а у животных из 5-й группы - 6,0±0,6 1о§2. После этого титр антител у этих животных стал снижаться и к концу срока наблюдения (21 сутки) составил 5,4±0,5 log2 у крыс из 3-й группы и 5,2±0,4 1о§2 у крыс из 5-й группы.

Таблица 1 - Титр специфических антител в сыворотке крови крыс после однократного введения ЭА в сочетании с адъюв антами

Группа Титр антител по дням после введения препаратов, log2

1 2 3 5 7 14 21

1 (интакт.) - - - - - - -

2 (ЭА) 2,6±0,5 2,8±0,4 3,6±0,5 4,0±0,6 3,8±0,5 3,2±0,7 2,2±0,7

3 (ЭА+ЛПС) 3,6±0,8 4,6±0,7* 4,8±0,9 5,8±0,4* 6,2±0,7* 6,0±0,6* 5,4±0,5*

4 (ЭА+ГОА) 3,4±0,5 4,6±0,5* 4,6±0,8 5,2±0,7 5,2±0,5 5,6±0,4* 4,8±0,7*

5 (ЭА+ПАК) 3,2±0,7 5,2±0,7* 5,4±0,5* 5,6±0,5 6,0±0,6* 5,8±0,7* 5,2±0,4*

6 (ЭА+ МА) 3,2±0,4 4,8±0,4* 4,8±0,9 5,4±0,5 5,6±0,5* 5,6±0,4* 5,8±0,7*

Примечание: * - статистическая достоверность различий по отношению к 2-й группе, Р < 0,05.

У животных, которым ЭА ввели вместе с ГОА, максимальный уровень антитоксических антител зарегистрирован через 14 дней после введения, когда он составил 5,6±1,0 logz. К 21 дню у крыс из этой группы также установили понижение титра антител в 1,2 раза.

У крыс из б-й группы, которым ЭА вводили с МА, накопление специфических антител происходило в течение всего срока наблюдения. После резкого повышения (на 50%) концентрации антител, отмеченное нами на 2 сутки, в последующие дни он увеличивался умеренно и не превышал 12-16% от каждого предыдущего значения. Через 21 день у животных из этой группы он достиг максимума и составил 5,8±0,7 Iog2.

Следовательно, результаты этого опыта показали, что после введения ЭА, у животных специфические антитела к токсинам Е. coli появляются уже через 24 ч, при этом пик накопления антител после введения ЭА без адъ-ювантов произошел на 5-е сутки, с ЛПС и ПАК - на 7-й день, с ГОА - на 14-й день, с МА - на 21-й день.

После бустерной обработки животных ЭА с интервалом 7 дней было установлено, что у крыс, которым ввели ЭА без адъювантов, через 7 дней после повторного введения титр антител увеличился в 2 раза и составил 5,2±0,4 log2 (табл. 2). После этого отметили снижение концентрации антител, уро-

вень которых спустя 28-35 дней достиг минимальных значений и составил 3,0±0,6 - 2,2±0,7 1о£2 соответственно.

Таблица 2 - Титр специфических антител в сыворотке крови крыс после двукратного введения ЭА в сочетании с адъювантами

Группа Титр антител по дням после последнего введения препаратов, loe?

7 14 21 28 35

1 (ЭА) 5,2±0,4 4,4±0,5 3,4±0,5 3,0±0,6 2,2±0,7

2 (ЭА+ЛПС) 7,2±0,7* 7,4±0,8* 7,2±0,4* 6,8±0,7* 5,8±0,7*

3 (ЭА+ГОА) 5,4±0,5 6,2±0,5* 6,0±0,6* 5,2±0,7 4,0±0,6

4 (ЭА+ПАК) 6,6±0,5 7,6±0,5* 7,4±0,5* 6,4±0,5* 5,6±0,5*

5 (ЭА+МА) 5,4±1,02 5,6±0,8 6,4±0,5* 6,6±0,5* 6,0±0,9*

Примечание: * - статистическая достоверность различий по отношению к 1-й группе, Р < 0,05.

После повторного введения ЭА с адъювантами установили следующее. У крыс, которым ввели ЭА с ЛПС и ПАК, через 7 дней после повторного инъецирования уровень сывороточных антител увеличился на 10-16% по сравнению со значениями титра, установленного в период максимального подъема (7 сутки). Через 14 дней у крыс из этих групп вновь зафиксировали увеличение титра специфических антител, который достиг максимума и составил 7,4±0,8 и 7,6±0,5 log2 соответственно. После этого уровень антител стал снижаться и спустя 35 дней после введения он находился в пределах 5,6±0,5 - 5,8±0,7 log2.

У животных, которым инъецировали ЭА с ГОА, первоначально наблюдали обратный эффект. Через 7 дней после повторного введения уровень антител у них стал ниже, чем был установлен спустя 7 дней после первого введения. Однако, через 14 дней после повторной их инъекции уровень антитоксических антител вырос и составил 6,2±0,7 log2. В последующем концентрация антитоксических антител у животных этой группы стала снижаться, достигнув величины 4,0±0,6 log2 к 35 дню.

Интересными оказались данные, полученные по группе животных, которых дважды иммунизировали ЭА с МА. Оказалось, что, несмотря на то, что этим животным препарат повторно вводился не на пике роста титра антител, тем не менее, торможения их продуцирования, как это было в случае с ГОА, мы не отметили. Количество антител в течение первых 14 дней после повторного введения ЭА увеличивалось медленно, но в последующие 2 недели было более интенсивным, и к 28 дню титр антитоксических антител у животных этой группы достиг максимума - 6,6±0,5 1о&. В последующие дни

произошло его снижение. К 35 дню после повторного введения ЭА с МА в сыворотке крови крыс титр специфических антител составил 6,0±0,9 log2.

Таким образом, результаты проведенного опыта показали, что при любых обстоятельствах бустерная обработка дает позитивный результат. Однако все же лучше её осуществлять на пике роста концентрации антител. Использование в качестве адъювантов ЛПС и ПАК в случае создания невосприимчивости к токсинам Е. coli считаем более предпочтительным, так как при введении ЭА с данньми адъювантами наиболее высокий уровень антител создаётся уже через 7 дней, а при повторном введении их уровень спустя 14 дней увеличивается ещё на 19,3-26,6%.

3.4. Влияние адъювантов на протективные свойства эшерихиозного анатоксина

Исследования показали, что объем токсинов обуславливающий минимальную гибель мышей при внутрибрюшинном введении составляет 0,0125 мл. Доза в объеме 0,1 мл обуславливает гибель 100% животных. На основании полученных данных, установлено, что летальная доза токсинов, приводящая к гибели 50% животных (LD50), составляет 0,043 мл.

Результаты опыта показали, что однократная иммунизация белых мышей ЭА без адъювантов и с адъювантами не обеспечивала защиту при экспериментальном заражении в дозе 3 LDS0. При исследовании сыворотки крови иммунизированных мышей было установлено, что максимальный уровень специфических антител достигал 2,0±0,8 - 3,0±0,8 1о&.

После двукратной иммунизации с интервалом 7 дней в 1-й группе, где животные иммунизировались ЭА с ЛПС, после заражения сохранность животных составила 100% (табл. 3), во 2-й группе, где иммунизацию проводили ЭА с ПАК, сохранность составила 85,7%, в 3-й группе, где использовали ЭА без адъювантов, сохранность составила 42,8%.

Таблица 3 - Протекгивный эффект ЭА при экспериментальном заражении белых мышей токсинами Е. coli

Группы Иммунизирующая доза, мл Количество животных Заражающая доза, мл Результаты

Пало Протективный эффект, %■

1 (ЭА+ЛПС) 0,1+0,1 7 0,12 0 100

2 (ЭА+ПАК) 0,1+0,1 7 1 85,7

3 (ЭА) 0,1+0,1 7 4 42,8

4 (интакт-ные) - 7 7 -

При исследовании сыворотки крови двукратно иммунизированных мышей было установлено, что у животных из групп № 1, 2 и 3 их титр антитоксических антител достиг значений 5,0±0,4, 4,0±0,3 и 3,6±0,4 log2 соответственно.

Таким образом, результаты опыта показали, что протективный эффект анатоксина зависит от адъюванта, дозы и кратности иммунизации. Установлено, что однократная иммунизация не обеспечивает защиту животных. При этом повышение иммунизирующей дозы ведет к иммунобиологической толерантности.

Следовательно данный опыт показал, что для того чтобы животные были защищены от токсинов Е. coli у них в сыворотке крови должны быть антитоксические антитела в концентрации не менее чем 4,0 - 5,01о&.

3.5. Иммуногенность ЭА с адъювантами для сельскохозяйственных животных

3.5.1. Гуморальный иммунный ответ у супоросных свиноматок,

иммунизированных эшерихнозным анатоксином с адъювантами

Наблюдения показали, что после иммунизации супоросных свиноматок ЭА заметных изменений их общего состояния не было. Температура тела оставалась в пределах физиологической нормы. На месте инъекции припухлостей, уплотнений, болезненности и повышения местной температуры не установлено.

Результаты исследований сыворотки крови показали (табл. 4), что через 7 дней после 1-й вакцинации у свиноматок во всех опытных группах идет активная выработка антитоксических антител, однако интенсивность их накопления различна.

Более высокие титры антител были выявлены у животных иммунизированных ЭА с адъювантами. Так если у свиноматок иммунизированных только ЭА титр антитоксических антител находился в пределах 3,0±0,8 -4,6±0,5 1о§2, то у свиноматок иммунизированных ЭА с адъювантами он составил 6,0±0,8 - 7,6±0,5 log2. При этом было установлено, что не только доза ЭА, но и вид адъюванта влияет на интенсивность антителообразования. Наибольший титр антител был установлен у животных 2-й группы, которых иммунизировали ЭА с ЛПС в дозе 5 мл.

После 2-й вакцинации у животных всех опытных групп отметили дальнейшее увеличение антителообразования. В опытных группах, где животных иммунизировали ЭА с адъювантами, наиболее высокий титр антител был установлен у свиноматок 2-й и 5-й опытной группы - 8,3±0,5 и 8,0±0,8 1о& соответственно, а наименьший в 1-й - 6,6±0,5 1о&.

В группах, где анатоксин применялся без адъювантов, наиболее высокий титр антител выявили у свиноматок 8 группы (5,6±0,5 Iog2), которым ЭА вводили дважды в дозе 5 мл, а наименьший (4,0±0,8 log2) в седьмой группе, которым ЭА вводили дважды в дозе 3 мл. Характерно, что более выражен-

ный иммунный ответ наблюдался у всех свиноматок, вакцинированных двукратно ЭА, как с ЛПС, так и ПАК, при этом у них титр антител был в 1,5-1,7 раз выше, чем у животных иммунизированных ЭА без адъювантов. Наиболее эффективной оказалась схема вакцинации, предусматривающая двукратное введение анатоксина в дозе 5 мл.

Таблица 4- Титр специфических антитоксических антител в сыворотке крови и молозиве свиноматок после иммунизации ЭА с адъювантами

Титр антитоксических антител, log2

Группа жи- Доза пре- Через 7 дней Через 7 дней В молозиве на

вотных и парата, мл после 1-й после 2-й 1-й день после

адъювант вакцинации вакцинации опороса

1 (ЭА+ЛПС) 3+3 6,0+0,8* 6,6±0,5* 7,6+0,5*

2 (ЭА+ЛПС) 5+5 7,6+0,5* 8,3±0,5* 9,0+0,8*

3 (ЭА+ЛПС) 3+5 6,3+0,5* 7,6+0,5* 8,3+0,5*

4 (ЭА+ПАК) 3+3 6,6+0,5* 7,6+0,5* 8,3+0,5*

5 (ЭА+ПАК) 5+5 7,3+0,5* 8,0+0,8* 8,6+0,5*

6 (ЭА+ПАК) 3+5 6,6+0,5* 7,3+0,5* 8,0+0,8*

7 РА) 3+3 3,0+0,8 4,0+0,8 5,0+0,8

8 (ЭА) 5+5 4,6±0,5 5,6+0,5 6,3+0,5

9 РА) 3+5 3,6+0,5 4,3+0,5 5,3+0,5

Ю(контроль) - 1,3+0,5 1,3+0,5 2,6+0,5

Примечание: * - статистическая достоверность различий по отношению к группам 7-9, Р < 0,05.

На 1-й день в молозиве свиноматок антитела обнаруживали как у животных опытных, так и контрольной групп, количество которых в 1,1-2 раза больше, чем в сыворотке крови. Однако у иммунизированных свиноматок уровень антитоксических антител в молозиве в 1,9-3,5 раз выше, чем у не иммунизированных. Вместе с тем самая высокая концентрация антител против TL, TS, STX токсинов Е. coli зафиксирована у свиноматок иммунизированных двукратно в дозе 5 мл ЭА с ЛПС и ЭА с ПАК.

Таким образом, нами было установлено, что ЭА в сочетании с ЛПС и ПАК значительно стимулирует образование антитоксических антител. При этом оптимальной для свиноматок можно считать схему иммунизации, включающую двукратное введение ЭА в дозе 5 мл.

Исследованиями установлено, что максимальный титр колостральных антитоксических антител регистрируется у новорожденных на 2-й день после рождения. При этом наиболее высокое его значение отметили у поросят тех опытных групп, где анатоксин применялся в сочетании с адъювантами.

Титры антител в сыворотке крови поросят, получивших молозиво от свиноматок, иммунизированных ЭА с адъювантами, были в 1,8 раз выше, чем у поросят опытных групп, где свиноматок иммунизировали только ЭА, и в 3,3-4,3 раз, чем у не иммунизированных животных.

Максимальное значение уровня колостральных антител наблюдали у поросят из 2-й и 5-й групп - 5,6±0,5 и 5,3±0,5 log2 соответственно, а минимальное значение из 1-й группы - 4,3±0,5 log2.

В группах, где анатоксин применялся без адъювантов, наибольший титр антител составил у поросят из 8-й группы - 3,0±0,8 log2.

На 5-й день после роаадения у поросят из всех опытных групп наблюдали снижение титра антител в сыворотке крови. Количество антитоксических антител у них уменьшилось примерно в 1,5 раза по сравнению с предыдущим исследованием, но было всё же существенно большим, чем у животных из контрольной группы и 7-9 опытных групп. Так у поросят из групп, где свиноматок иммунизировали анатоксином с адъювантами, титр колостральных антител был в пределах 4,3±0,9 - 3,3±0,5 log2, а у поросят, полученных от свиноматок, которых иммунизировали чистым ЭА - 1,3±0,5 -1,6±0,5 log2.

На 7-й день после рождения титры антител у всех новорожденных поросят из опытных групп практически сравнялись с таковыми в контроле, что свидетельствует о прекращении циркуляции колостральных антитоксических антител в организме новорожденных животных.

Следовательно, полученные данные указывают на то, что у поросят, полученных от свиноматок иммунизированных ЭА с адъювантами, в течение первых 2-3 суток после рождения формируется выраженный колостральный иммунитет, обеспечивающий их защиту от токсинов Е. coli. Однако к 5-му дню достаточный для защиты уровень антитоксических антител выявлен только у поросят, матери которых иммунизировались ЭА с ЛПС и ПАК дважды в дозе 5 мл. Однако и у этих животных практически полное истощение колострального иммунитета происходит к 7-м суткам.

3.5.2. Гуморальный иммунный ответ у стельных коров, иммунизированных эшерихиозным анатоксином с адъювантами .

Наблюдения показали, что у коров, иммунизированных ЭА и ЭА с адъювантами, изменений общего состояния не было. Температура тела оставалась в пределах физиологической нормы. На месте инъекции припухлостей, уплотнений, болезненности и повышения местной температуры не установлено. Абортов и заболеваний молочной железы также не установлено.

Результаты исследований показали (табл. 5), что через 10 дней после первого введения ЭА у коров из всех опытных групп титр антитоксических антител в сыворотке крови значительно повысился по сравнению с исходным уровнем, однако интенсивность их выработки была различной.

Более высокие титры антител установлены у животных иммунизированных ЭА с адъювантами. Так если у коров иммунизированных только ЭА титр антитоксических антител находился в пределах 5,2±0,4 - 6,2±0,4 log2, то у коров иммунизированных ЭА с адъювантами он составил 6,2±0,7 - 7,2±0,4 log2. Наибольший титр антител был зафиксирован у коров, иммунизирован-

ных ЭА с ЛПС, у которых титр антител находился в пределах 6,4±0,5 -7,2±0,4 1о£2, тогда как при иммунизации ЭА с ПАК в аналогичных дозах -6,2±0,7-6,8±0,4 1о&.

После второго введения ЭА у животных всех опытных групп отметили дальнейшее нарастание титра антител. Наиболее высокий титр антител был установлен у коров из 3-й и 6-й опытных групп - 8,0±0,6 и 7,8±0,4 1о& соответственно, а наименьший из 1-й и 4-й - 7,2±0,7 и 7,2±0,4

Таблица 5 - Титр специфических антитоксических антител в сыворотке крови и молозиве коров после иммунизации ЭА с адьювантами

Группа животных и адъювант Доза препарата, мл Титр антитоксических антител,

Через 10 дней после 1-й иммунизации Через 10 дней после 2-й иммунизации Молозиво на 1-й день после отела

1 (ЭА+ЛПС) 3+5 6,4±0,5 7,2±0,7 8,2±0,4*

2 (ЭА+ЛПС) 5+5 7,0±0,б 7,6±0,5 8,4±0,5*

3 (ЭА+ЛПС) 5+10 7,2±0,4 8,0±0,6 8,8±0,4*

4 (ЭА+ПАК) 3+5 6,2±0,7 7,2±0,4 7,8±0,4

5 (ЭА+ПАК) 5+5 6,6±0,8 7,4±0,5 8,2±0,4*

6 (ЭА+ПАК)^ 5+10 6,8±0,4 7,8±0,4 8,6±0,4*

7 РА) 3+5 5,2±0,4 6Д±0,4 6,4±0,5

8 (ЭА) 5+5 6,0±0,6 6,6±0,5 6,8±0,4

9 РА) 5+10 6,2±0,4 6,8±0,4 7,2±0,4

10 (контроль) - 3,4±0,5 ЗД±0,4 4,2±0,4

Примечание: * - статистическая достоверность различий по отношению к группам 7-9, Р < 0,05.

В группах, где анатоксин применялся без адъювантов, более высокое значение титра антител выявили у коров из 9-й группы (6,8±0,4 а наименьшее из 7-й группы (6,4±0,5 1о&). Характерно, что у стельных коров, иммунизированных двукратно ЭА, как с ЛПС, так и с ПАК, титр сывороточных антитоксических антител был в 1,2 раза выше, чем у животных иммунизированных ЭА без адъювантов. Наиболее эффективной оказалась схема иммунизации, предусматривающая двукратное введение анатоксина в дозе 5 и 10 мл. В этом случае титр антител в сыворотке крови коров был на 5,3-8,3% выше, чем при иммунизации животных по схеме 3+5 мл и 5+5 мл. Использование ЭА в сочетании с ЛПС способствовало выработке специфических антитоксических антител в большей степени, чем при использовании ЭА с ПАК.

На 1-й день после отела в молозиве всех коров содержались антитоксические антитела, количество которых в 1,1-1,3 раза было большим, чем в сыворотке крови. Вместе с тем, у коров, иммунизированных ЭА с ЛПС и ПАК уровень антитоксических антител в молозиве в 1,2 раза выше, чем у

иммунизированных ЭА без адъювантов и 1,8-2,1 раза выше, чем у животных из контрольной группы. При этом самая высокая концентрация молозивных антител против TL, TS, STX токсинов Е. coli зафиксирована у коров из 3-й (8,8±0,4 log2) и 6-й (8,4±0,8 log2) опытных групп, которых иммунизировали полианатоксином с ЛПС и ПАК двукратно в дозе 5 и 10 мл.

Таким образом, нами установлено, что ЭА в сочетании с адъювантами в должной мере стимулирует образование антитоксических антител. Оптимальной для стельных коров можно считать схему, при которой осуществлялась двукратная иммунизация животных в дозах 5 и 10 мл.

Все телята из опытных и контрольных групп своевременно в течение первых двух часов после рождения получили молозиво от своих матерей и содержались в одинаковых условиях.

Сравнительный анализ уровня колостральных антител в сыворотке крови у новорожденных телят, родившихся от иммунизированных (опыт) и не иммунизированных коров (контроль), показал, что титры антител в сыворотке крови телят, получивших молозиво от коров, иммунизированных ЭА с адъювантами, были в 1,4-1,5 раза выше, чем у животных из опытных групп, матери которых иммунизировались ЭА без адъювантов и в 1,4-1,8 раза выше, чем у телят, полученных от не иммунизированных коров.

Максимальное значение уровня колостральных антител наблюдали у телят из 3-й и 6-й групп - 6,£±0,4 и 6,6±0,5 log2 соответственно, а минимальное значение у телят из 4-й группы - 5,2±0,4 log2.

В группах, где анатоксин применялся без адъювантов, наибольший титр антител был у телят из 9-й группы, где он составил - 4,4±0,5 log2.

На 7-й день после рождения у телят во всех опытных группах количество антител уменьшилось примерно на 15,8-22,6% по сравнению с предыдущими исследованиями, но было все же большим, чем у животных в контроле. Так в группах, где анатоксин применялся с адъювантами, титр колостральных антител у телят был в пределах 4,4±0,5 - 6,0±0,6 Iog2. В группах, где анатоксин применяли без адъювантов, титры специфических антител были в пределах 3,2±0,4 - 3,8±0,4 log2.

На 14-й день исследований титры антител у новорожденных телят в группах, где анатоксин применяли с адъювантами, снизились еще в 1,3-2 раза по сравнению со значениями 7-го дня. При этом максимальный уровень колостральных антител был у телят из 3-й и 6-й групп - 4,2±0,4 и 4,6±0,5 !og2 соответственно. В группах 7, 8 и 9 значения титров антител находились в пределах 1,6±0,8 - 2,6±0,5 log2, что свидетельствует об их расходовании.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что при иммунизации стельных коров ЭА, происходит более активная стимуляция гуморального звена иммунитета, чем у свиноматок. Введение в анатоксин адъювантов способствует значительному усилению иммунного ответа, однако полученные значения были уже сопоставимы со значениями титра антител у свиноматок. Двукратное введение коровам ЭА с ЛПС и ПАК способствовало увеличению на 9,7-19,2% титра антитоксических антител в сыворотке крови по сравнению с однократным введением. При этом наиболее

продуктивной оказалась схема иммунизации, предусматривающая двукратное введение анатоксина в дозе 5 и 10 мл, в этом случае титр антител повышался на 5,3-8,3% по сравнению с использованием ЭА в других дозах. Лучшие адъювантные свойства в случае применения с ЭА были отмечены у ЛПС. Иммунизация стельных коров ЭА с адъювантами приводит к формированию у потомства более выраженного колострального иммунитета, чем у телят, полученных от коров, иммунизированных ЭА без адъювантов. Двукратное введение глубокостельным коровам ЭА с ЛПС и ПАК в дозах 5 и 10 мл обеспечивает достаточно высокий уровень колостральных антител у телят и может обеспечить их защиту от токсинов Е. coli в течение 14 дней.

3.6. Профилактическая эффективность ЭА при эшерихиозе поросят и телят

Для изучения профилактической эффективности ЭА было сформировано 4 группы супоросных свиноматок (за 2 недели до предполагаемого опороса) и 4 группы стельных коров за 30 дней до отела. Иммунизацию свиноматок осуществляли внутримышечно двукратно с интервалом 7 дней. Свиноматок 1-ой опытной группы иммунизировали ЭА с ЛПС в дозе 5 мл; 2-ой группы - ЭА с ПАК в дозе 5 мл; 3-й группы - иммунизировали двукратно вакциной «Коли-Вак» (Армавирская биофабрика) согласно наставлению в дозе 5 мл (положительный контроль); 4-й группы - не вакцинировали (отрицательный контроль).

Иммунизацию коров осуществляли подкожно дважды с интервалом 10 дней. Животных 1-ой опытной группы иммунизировали ЭА с ЛПС в дозе 5 и 10 мл; 2-ой группы - ЭА с ПАК в дозе 5 и 10 мл; 3-й группы - иммунизировали дважды вакциной «Коли-Вак» (Армавирская биофабрика) согласно наставлению в дозе 10 и 15 мл (положительный контроль); 4-й группы - не вакцинировали (отрицательный контроль).

Результаты опыта на свиньях показали, что применение ЭА с адъ-ювантами было наиболее эффективным. Количество заболевших поросят в 1-й опытной группе составило 28,6%, а во 2-й - 32,9 %, что соответственно на 1,9-2,8 и 1,6-2,5 раза было меньшим, чем в контрольных группах. Сохранность поросят в течение первых 30 дней жизни в опытных группах оказалась равной 94,7-96,1%, а контрольных - 83,2-89,4%.

Исследование профилактической эффективности ЭА с адъювантами на крупном рогатом скоте показали, что количество заболевших колидиареей телят в 1-й опытной группе составило 26,6%, а во 2-й - 33,3 %, что соответственно на 2-2,7 и 1,6-2,2 раза было меньшим, чем в контрольных группах. Сохранность телят в опытных группах оказалась равной 86,7-93,4%, а контрольных - 66,7-80,0%.

Таким образом, результаты опыта показали, что ЭА с адъювантами (ЛПС и ПАК) обладает выраженной профилактической эффективностью при эшерихиозе. Он способствует сокращению не только заболеваемости новорожденных поросят и телят эшерихиозом, но и смертности. Данное обстоя-

тельство свидетельствует о том, что новорожденный молодняк в опытных группах при заболевании эшерихиозом переболевал в более легкой форме, чем их сверстники в контрольных группах. Опыт также показал, что ЭА с адьювантами может успешно конкурировать с коммерческой вакциной «Ко-ли-Вак».

Выводы

1. После введения эшерихиозного анатоксина с адьювантами у животных повышается пул нейтрофильных гранулоцитов и снижается количественное присутствие лимфоцитов. Причем данный эффект во временном отношении не одинаков. У животных, которым вводили ЭА без адъювантов и ЭА с ЛПС он был более высоким спустя 24 ч, ЭА с ПАК - через 72 ч, ЭА с ГОА и МА - через 120 ч.

2. Эшерихиозный анатоксин с адьювантами стимулирует поглотительную и микробицидную активность нейтрофильных гранулоцитов в течение 120 ч. При этом мобилизационные способности у нейтрофильных гранулоцитов не истощаются.

3. После введения ЭА, антитела к токсинам Е. coli появляются у животных уже через 24 ч, а пик их накопления происходит на 5-е сутки. Адъ-юванты не только активизируют гуморальный иммунный ответ на введение ЭА, но и увеличивают продолжительность продуцирования антител. Максимальный подъем уровня специфических антител при введении ЭА с ЛПС и ПАК происходит через 7 дней, при введении ЭА с ГОА - через 14 дней, а при введении ЭА с МА - через 21 день. При повторном введении анатоксина с адьювантами наиболее быстрое и высокое накопление антитоксических антител установили при использовании ЭА с ЛПС и ПАК.

4. Двукратная иммунизация белых мышей ЭА с ЛПС и ЭА с ПАК в оптимальных дозах при экспериментальной токсинемии обеспечивает защиту 85,7-100% животных, тогда как иммунизация ЭА без адъювантов только 42,8% животных.

5. Максимальный уровень специфических антител у иммунизированных свиноматок был установлен после двукратного применения ЭА с ЛПС и ПАК в дозе 5 мл (8,3±0,5 и 8,0±0,8 соответственно). При этом в молозиве у иммунизированных свиноматок уровень антител к токсинам Е. coli , был в 1,9-3,5 раз выше, чем у не иммунизированных.

6. Наиболее эффективной схемой иммунизации коров анатоксином с ЛПС и ПАК была та, которая предусматривает двукратное введение в дозе 5 и 10 мл. При этом уровень антитоксических антител в молозиве этих животных в 1,2 раза выше, чем при иммунизации ЭА без адъювантов и 1,8-2,1 раза выше, чем у не иммунизированных коров.

7. Иммунизация супоросных свиноматок и стельных коров ЭА с адьювантами обеспечивает формирование колострального иммунитета у потомства, что выражается наличием и сохранением в защитных титрах антитоксических антител у поросят в течение 5 дней, а у телят в течение 14

дней после рождения.

8. Двукратная иммунизация супоросных свиноматок за 14 и 7 дней до опороса и стельных коров за 30 и 20 дней до отела ЭА с ЛПС и ПАК в оптимальных дозах обеспечивает снижение заболеваемости поросят и телят эшерихиозом на 53,2-48,9% и 46,7-40% и повышение сохранности на 12,911,5% и 26,7-20% соответственно. Лучшие адьювантные свойства для ЭА были установлены у ЛПС.

Практические предложения

1. Для повышения иммуногенной активности эшерихиозного анатоксина целесообразно использовать липополисахарид грамотрицательных бактерий.

2. Для обеспечения выраженного колострального иммунитета у но-ворояеденных поросят и телят рекомендуется иммунизировать супоросных свиноматок ЭА с ЛПС за 14 и 7 дней до опороса дважды в дозе 5 мл, а сухостойных коров за 30 и 20 дней до отела в дозе 5 и 10 мл.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Терехов, В.И. Видовой состав и антигенная структура микроорганизмов, обуславливающих смешанные кишечные инфекции у новорожденных телят / В.И. Терехов, Я.М. Караев, A.B. Иванов, A.C. Тищенко, Е.А. Ба-бенко // Тр. / КубГАУ. - 2009. - Вып. №1 (ч.1) Серия: Ветеринарные науки. - С. 98-99.

2. Терехов, В.И. Влияние различных адъювангов на иммуноген-ные свойства эшерихиозного анатоксина / В.И. Терехов, Я.М. Караев, A.C. Тищенко, A.B. Иванов // Тр. / КубГАУ. - 2009. - Вып. №1 (ч.1) Серия: Ветеринарные науки. - С. 100-102.

3. Тищенко, A.C. Изменение картины крови у крыс под влиянием эшерихиозного анатоксина в сочетании с различными адъювантами / A.C. Тищенко, В.И. Терехов // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: материалы III Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. / КубГАУ. - Краснодар, 2009. - С. 320-321.

4. Тищенко, A.C. Влияние различных адъювантов на свойства эшерихиозного анатоксина, изменяющие функциональную активность нейтро-фильных гранулоцитов / A.C. Тищенко, В.И. Терехов // Ветеринария Кубани. -2010,-№6.-С. 11-13.

5. Терехов, В.И, Влияние эшерихиозного анатоксина в сочетании с адъювантами на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов /

B.И. Терехов, A.C. Тищенко // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: Сб. науч. трудов ведущих ученых России и Зарубежья. Вып. 3. - Екатеринбург: Уральское изд-во, 2010. -

C. 231-236.

6. Тищенко, A.C. Влияние адьювантов на протективные свойства эшерихиозного анатоксина / A.C. Тищенко, В.И. Терехов // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: материалы 4-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. / КубГАУ. - Краснодар,

2010.-С. 380-381.

7. Тищенко, A.C. Оценка гуморального иммунного ответа у супоросных свиноматок, иммунизированных эшерихиозным анатоксином в сочетании с адъювантами / A.C. Тищенко, В.И. Терехов // Тр. / КубГАУ. -

2011. - Вып. №2 (29). - С. 144-147.

8. Терехов, В.И. Влияние адьювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина при вакцинации стельных коров / В.И. Терехов, A.C. Тищенко // Ветеринария Кубани. - 2011. - №3. - С. 19-21.

9. Пат. 2429012, Российская Федерация, МПК А61К 39/116. Способ приготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрепто-коккоза и энтерококковой инфекции телят и поросят / В.И. Терехов, A.B. Скориков, A.B. Иванов, A.C. Тищенко, П.В. Крамарь; заявитель и патентообладатель ФГУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет. -№2010131633/15; заявл. 27.07.2010; опубл. 20.09.2011, бюл. №26.-6 с.

10. Тищенко, A.C. Профилактическая эффективность эшерихиозного анатоксина при эшерихиозе поросят и телят / A.C. Тищенко, В.И. Терехов // Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения: материалы Н-й Междунар. науч.-практ. конф. / КубГАУ. - Краснодар, 2010. - С. 380-381.

11. Пат. 2432174, Российская Федерация, МПК А61К 39/108. Способ получение эшерихиозного анатоксина / В.И. Терехов, Я.М. Караев, A.C. Тищенко, A.B. Иванов, П.В. Крамарь; заявитель и патентообладатель ФГУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет. - №2010131645/15; заявл. 27.07.2010; опубл. 27.10.2011, бюл. №30. - 5 с.

Подписано в печать 11.11.2011 г. Бумага офсетная Печ. л. 1 Тираж 100 экз.

Формат 60x84 1/16 Офсетная печать Заказ №798

Отпечатано в типографии Куб ГАУ 350044,г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Тищенко, Александр Сергеевич

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Факторы патогенности Е. coli.

1.1.1. Энтеротоксигенные свойства Е. coli.

1.1.2. Адгезивные свойства Е. coli.

1.1.3. Гемолитические и колициногенные свойства Е. coli.

1.2. Вакцинопрофилактика колибактериоза.

1.3. Адъюванты.

1.3.1. Механизм действия адъювантов.

1.3.2. Краткая характеристика адъювантов наиболее часто используемых в вакцинологии.

2. Материалы и методы исследований.

3. Результаты исследований.

3.1. Картина крови у крыс после введения эшерихиозного анатоксина в сочетании с различными адъювантами.50(

3.2. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов в ответ на введение эшерихиозного анатоксина с адъювантами.

3.3. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина.

3.4. Влияние адъювантов на протективные свойства эшерихиозного анатоксина.

3.5. Иммуногенность ЭА с адъювантами для сельскохозяйственных животных.

3.5.1. Гуморальный иммунный ответ у супоросных свиноматок, иммунизированных эшерихиозным анатоксином с адъювантами.

3.5.2. Гуморальный иммунный ответ у стельных коров, иммунизированных эшерихиозным анатоксином с адъювантами.

3.6. Профилактическая эффективность ЭА при эшерихиозе поросят и телят.

4. Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина"

По данным ряда авторов [34, 38, 62, 119, 151, 201], ведущую роль в этиопатогенезе колиинфекции играют токсигенные варианты Escherichia coli, продуцирующие TL, TS, STX и другие токсины, поэтому считается, что использование инактивированных токсинов Е. coli в качестве антигенного материала для создания вакцин является наиболее перспективным направлеj ' , * *' t нием в ветеринарной вакцинологии.

Между тем, исследованиями Караева Я.М. [46] установлено, что эше-рихиозный анатоксин (ЭА), состоящий из инактивированных TL, TS, STX токсинов, хотя и стимулирует клеточное и гуморальное звенья иммунитета, но эта стимуляция непродолжительна и не сопровождается образованием высокого уровня специфических антител. В связи с чем автором делается вывод о целесообразности усиления иммуногенности ЭА. Одним из методов усиления иммуногенности различных антигенов заключается в использовании адъювантов [12, 75, 86, 90,153].

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить влияние эшерихиозного анатоксина в сочетании с различными адъювантами на иммунобиологическую реактивность лабораторных животных;

- изучить влияние адъювантов на иммуногенные свойства анатоксина для лабораторных животных;

- изучить влияние адъювантов на протективные свойства эшерихиозно К' <( {1 I' 1 го анатоксина; '

7 » > , '

- определить профилактическую эффективность анатоксина при эше-рихиозе поросят и телят.

Научная новизна. Впервые установлено влияние пирогенала, гидроокиси алюминия, полиакриловой кислоты и масляного адъюванта на им-мунногенные свойства эшерихиозного анатоксина. Определены особенности изменения гематологических показателей, функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и образования специфических антител в ответ на введение животным эшерихиозного анатоксина в сочетании с адъювантами. Установлено влияние адъювантов на протективную активность эшерихиозного анатоксина при экспериментальном заражении. Определено влияние адъювантов на иммуногенность эшерихиозного анатоксина при использовании супоросным свиноматкам и стельным коровам и продолжительность колострального иммунитета у потомства, полученного от иммунизированных матерей.

Научная новизна работы подтверждена двумя патентами РФ на изобретение № 2429012 от 20.09.2011 и № 2432174 от 27.10.2011.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили выявить особенности иммуногенной активности эшерихиозного анатоксина, при введении в его состав различных типов адъювантов. Экспериментально установлены оптимальные схемы применения препаратов, показана их эффективность и возможность оценки на лабораторных и естественно-восприимчивых животных. Показана высокая иммуно-генная активность эшерихиозного анатоксина с адъювантами для супоросных свиноматок и стельных коров и возможность его использования для формирования колострального иммунитета у поросят и телят. По результатам проведенных экспериментов из четырех адъювантных веществ был выбран пирогенал (липополисахарид грамотрицательных бактерий), обладаюл. щий лучшими адъювантными свойствами для эшерихиозного анатоксина. Установлено, что в производственных условиях иммунизация эшерихиозным анатоксином с пирогеналом обеспечивает наиболее выраженный профилактический эффект, заключающийся в снижении заболеваемости и гибели поросят и телят в 2,8-4,3 и 2,7-5 раз.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на науч- , ных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2009, 2010, 2011); 3-ой и 4-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар, 2009, 2010), международной научно-практической конференции посвященной 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2009), международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц» (Екатеринбург, 2010), П-й международной научно-практической конференции "Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения" (Краснодар, 2011).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Особенности влияния анатоксина с различными адъювантами на гематологические показатели и функциональную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов в динамике;

- Особенность антителообразования в ответ на введение эшерихиоз-ного анатоксина с адъювантами и его протективная активность для лабораторных животных;

- Определение влияния адъювантов на иммуногенные свойства эше-рихиозного анатоксина для сельскохозяйственных животных и профилактическая эффективность при эшерихиозе поросят и телят.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Тищенко, Александр Сергеевич

Выводы

1. После введения эшерихиозного анатоксина с адъювантами у животных повышается пул нейтрофильных гранулоцитов и снижается количественное присутствие лимфоцитов. Причем данный эффект во временном отношении не одинаков. У животных, которым вводили ЭА без адъювантов и ЭА с ЛПС он был более высоким спустя 24 ч, ЭА с ПАК - через 72 ч, ЭА с ГОА и МА - через 120 ч.

2. Эшерихиозный анатоксин с адъювантами стимулирует поглотительную и микробицидную активность нейтрофильных гранулоцитов в течение 120 ч. При этом мобилизационные способности у нейтрофильных гранулоцитов не истощаются.

3. После введения ЭА, антитела к токсинам Е. coli появляются у животных уже через 24 ч, а пик их накопления происходит на 5-е сутки. Адъ-юванты не только активизируют гуморальный иммунный ответ на введение ЭА, но и увеличивают продолжительность продуцирования антител. Максимальный подъем уровня специфических антител при введении ЭА с ЛПС и ПАК происходит через 7 дней, при введении ЭА с ГОА - через 14 дней, а при {)( введении ЭА с МА - через 21 день. При повторном введении анатоксина с ' адъювантами наиболее быстрое и высокое накопление антитоксических антител установили при использовании ЭА с ЛПС и ПАК.

7. Иммунизация супоросных свиноматок и стельных коров ЭА с адъ-ювантами обеспечивает формирование колострального иммунитета у потомства, что выражается наличием и сохранением в защитных титрах антитоксических антител у поросят в течение 5 дней, а у телят в течение 14 дней после рождения.

8. Двукратная иммунизация супоросных свиноматок за 14 и 7 дней до опороса и стельных коров за 30 и 20 дней до отела ЭА с ЛПС и ПАК в оптимальных дозах обеспечивает снижение заболеваемости поросят и телят эшерихиозом на 53,2-48,9% и 46,7-40% и повышение сохранности на 12,911,5% и 26,7-20% соответственно. Лучшие адъювантные свойства для ЭА были установлены у ЛПС.

Практические предложения

2. Для обеспечения выраженного колострального иммунитета у новорожденных поросят и телят рекомендуется иммунизировать супоросных свиноматок ЭА с ЛПС за 14 и 7 дней до опороса дважды в дозе 5 мл, а сухостойных коров за 30 и 20 дней до отела в дозе 5 и 10 мл.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Тищенко, Александр Сергеевич, Краснодар

1. Адъюваиты для ветеринарных вакцин / F. Bertrand, G. Ionkoff, S. Deville, L. Dupuis, J. Aueouturier // Проблемы биотехнологии, стандартизации и обеспечения контроля препаратов, кормов и кормовых добавок. Киев: Дорадо, 2008. - 95с.

2. Ахметсадыков, H.H. Безвредность адгезивного вакцинного штамма Е. coli на лабораторных животных / H.H. Ахметсадыков, К.Б. Бияшев, Н.В. Чулков // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных. Новосибирск, 1997.-С. 173-174.

3. Ашмарин, Н.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов / Н.П. Ашмарин, И.П. Васильев, В.А. Амбросов. — JL: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. 76с.

4. Биотехнология / под ред. Е.С. Воронина. Спб., 2005. - 474с.

5. Бондаренко, В.М. Гемолизины энтеробактерий и их связь с вирулентностью возбудителя / В.М. Бондаренко, A.B. Голубев // Микробиол., эпи-демиол. и иммунол.- 1988.-№11.-С. 102-109.

6. Бондаренко, В.М. «Острова» и «Островки» патогенности бактерий / В.М. Бондаренко // Аграрная Россия. 2002. - №2. - С. 33-36.

7. Бондаренко, В.М. Термостабильные энтеротоксины условно патогенных представителей Enterobacteriaceae / В.М. Бондаренко, А.Р. Мавзютов, З.Г. Га-бибулин // Микробиол., эпидемиол. и иммунол. 1998. - №3. - С. 104-107.

8. Бондаренко, В.М. Токсические биомолекулы патогенных энтеробактерий /

9. B.М. Бондаренко // Аграрная Россия. 2002. - №2. - С. 29-32.

10. Боровой, В.Н. Генодиагностика патогенных эшерихий в Краснодарском крае/ В.Н. Боровой, В.И. Терехов, Ю.Б. Шпонько // Генодиагностика инфекционных заболеваний: Сб. тезисов 4-й Всероссийской науч.- практич. конф. Москва, 2002.-С. 323-324.

11. Васильев, H.H. Адъюванты (неспецифические стимуляторы иммуногенеза) / В.А. Воробьев, H.H. Васильев. М.: Медицина, 1969. 206с.

12. Веревкин, В.В. Поиск и характеристика бактериофагов, специфически ли-зирующих Escherichia coli серогруппы 0157 / В.В. Веревкин, В.А. Баннов, Э.А. Светоч // Пробл. биол. и экол. безопасности. Оболенск, 2000. - С. 168-170.

13. Верховская, А. Е. Разработка и оценка эффективности вакцин КОМБО-ВАК-Р и КОМБОВАК-К: автореф. дис. . канд. вет. наук / А. Е. Верховская; Федер. центр охраны здоровья животных. Владимир, 2008. - 25 с.

14. Волкова, М.В. Методы лечения и профилактики колибактериоза свиней / М.В. Волкова, Е.И. Гембицкая, В.Н. Ласкавый // Аграр. наука. 2005. - № 12.1. C. 23-25.

15. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Девришов. М.: Колос-пресс, 2002. - 408с.

16. Гельман, ВЛ. Медицинская информатика / В Л. Гельман. СПб.: Пи-тер,2001.-480 с.

17. Головко, А.Н. Антигенная вариабельность фимбриальных адгезинов Е. coli /А.Н. Головко // Ветеринария. -1997. -№8. С. 23-25.

18. Головко, А.Н. Проблема инфекционных заболеваний новорожденных телят и разработка методов диагностики, лечения и профилактики / А.Н. Головко,

19. В.А. У шкапов // Ветеринарная медицина Украины. —1998. -№ 10. С. 6-7.

20. Гутковекий, A.A. Об исследованиях по колибактериозу поросят в Республике Беларусь / A.A. Гутковекий, Г.М. Кучинская, Л.Д. Андросик, Л.С. Герман // Вет. медицина Беларусии. 2004. - №6/1. - С.8-11.

21. Дворкин, Г.Л. Колибактериоз телят и поросят: Факторы вирулентности возбудителя, эпизоотология, диагностика, меры борьбы / Г.Л. Дворкин, A.A. Гутковекий. Минск, 1989. - 70с.

22. Девришов, Д.А. Экспериментальное испытание ассоциированной инакти-вированной вакцины ОКЗ / Д.А. Девришов, Е.С. Воронин, З.М. Бедоева, В.В. Шведов // Ветеринария. 1998. -№12. - С. 12-14.

23. Джупина, С.И. Факторные инфекционные болезни животных. / С.И. Джу-пина // Ветеринария. 2001. - №3. - С. 6-9.I

24. Дмитриев, Б.А. Проблемы и перспективы создания синтетических вакцин Б.А. Дмитриев // Иммунология. -1986. №1. - С. 24-29.

25. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, П. Бухарин. — Екатеринбург: Уро РАН, 2001.-278 с.

26. Евглевский, А. А. Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины / A.A. Евглевский, Д. А. Евглевский, М. А. Смирнов // Патент РФ на изобретение № 2372937. 2008.

27. Евглевский, A.A. Способ получения стафилококкового анатоксина / A.A. Евглевский, Е.П. Евглевская, Т.И. Ефимова, З.И. Федорова, Д.С. Лапиков // Патент РФ на изобретение № 2179860. 2000.

28. Евглевский, A.A. Способ получения стрептококкового анатоксина / A.A. Евглевский, Е.П. Евглевская, Т.И. Ефимова, З.И. Федорова, Д.С. Лапиков // Патент РФ на изобретение № 2189252. 2000.

29. Езепчук, Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий / Ю.В. Езепчук. -М., 1977.

30. Езепчук, Ю.В. Патогенность как функции биомолекул / Ю.В. Езепчук. -М.: Медицина. 1985. -158 с.

31. Емельяненко, П.А. Энтеротоксины кишечных бактерий / П.А. Емельянен-ко // Ветеринария. 2000. - №2. - С. 25-27.

32. Еремеев, М.Н. Гемолитическая активность энтеропатогенных кишечных палочек // Ветеринария. -1975. № 2. - С. 46-47.

33. Ермольева, З.В. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды / З.В. Ермольева, Г.Е. Вайсберг. — М.: Медицина, 1976.- 184 с.

34. Зайчик, А.Ш. Механизмы развития болезней и синдромов / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. Спб.: ЭЛБИ-СПБ, 2002. - 507 с.

35. Зароза, В.Г. Энтеротоксигенные неинвазивные кишечные палочки, их характеристика и идентификация / В.Г. Зароза // Животноводство и ветеринария. — 1984.- №1.-С. 17-20.

36. Зароза, В.Г. Эшерихиоз телят / В.Г. Зароза. М.: Агропромиздат, 1991. —tл J *">239 с. , ■ V,

37. Земсков, В.М. Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты / В.М. Земсков // Успехи современной биологии. 1984. - Т. 98. - Вып. 2. - С. 219234.

38. Иванов, А.И. Эпизоотология и этиология колибактериоза телят в Зауралье / А.И. Иванов, И.Б. Баймурзин // Вестн. Рос. акад. с.-х. наук. 2007. - № 6. - С. 69-70.

39. Иманалиев, М. Колибактериоз телят и разработка средств специфической профилактики: автореф. дис. . докт. вет. наук / М. Иманалиев; Фрунзе, 1990. — 48 с.

40. Исхакова, Т.И. Колициногенные свойства производственных штаммов эшерихий / Т.И. Исхакова, O.A. Тугаринов // Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов. — Москва, 1981. — С.17.

41. Караев, Я. М. Иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. канд. вет. наук /Я. М. Караев; КубГАУ. Краснодар, 2009. -132 с.

42. Каральник, Б.В. Сравнительная оценка стабилизации эритроцитов для реакций пассивной гемагглютинации формальдегидом и ацетальдегидом / Б.В. Каральник, В.А. Шамардин, М.Ф. Шмутер // М.: Вакцины и сыворотки, 1973. -№20.-С. 122.

43. Караулов, A.B. Клиническая иммунология / A.B. Караулов. — М.: Медицинское информационное агентство, 1999. 604 с. ' '«

44. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. СПб.: «Гиппократ», 1992. - 256 с.

45. Клечанов, В. К. Применение стационарно выращенных бульонных культур для получения энтеротоксинов эшерихий / В. К. Клечанов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1982. -№ 3. С. 45-48.

46. Клиническая интерпретация лабораторных исследований / под ред. А. Б. Белевитина, С. Г. Щербаков. СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2006. - 384 с.

47. Клиническая цитохимия / под ред. A.B. Ягоды, H.A. Локтевой. Ставрополь; Изд. СтГМА, 2005. - 485 с.

48. Клюкина, Н.Д. Полиакриловая кислота как адъювант в противоящурной вакцине: автореф. дис. .канд. вет. наук / Н.Д. Клюкина. — Владимир, 2007. — 24 с.

49. Ковальчук, Н.М. Проблемы диагностики, лечения и профилактики коли-бактериоза сельскохозяйственных животных / Н.М. Ковальчук, Т.Н. Борсук, В.П. Нефедов // Реконструкция гомеостаза: материалы 9 международного симпозиума. -Красноярск, 1998. С. 34-37.

50. Ковальчук, Н.М. Эколого-микробиологический мониторинг эшерихиоза новорожденных телят в современных условиях Восточной Сибири / Н.М. Ковальчук // Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехнол. Москва, 2004. - 40 с.

51. Колотова, Е.В. Эпизоотология, диагностика, методы лечения й профилактика отечной болезни поросят / Е.В. Колотова, JI.A. Малышева // Вет. патол. — 2008.-№1.-С. 163-166.

52. Кольчак, В.В. Предупреждение колибактериоза телят. Амурская область./ В .В. Кольчак // Ветеринария. 1986. - №3. - С. 15-16.

53. Коляков, Я.Е. Колибактериоз телят / Я.Е. Коляков, С.С. Гительсон, JI.C. Каврук. М.: Колос, 1970. - 224 с.

54. Коткова, Н.В. Экспериментальная колиэнтеротоксемия, обусловленная ншгаподобным токсином Escherichia coli: дис. канд. вет. наук / Н.В. Коткова; КубГАУ. Краснодар, 2007.

55. Куликовский, А.В. Токсигенные эшерихии актуальная проблема ветеринарии и медицины / А.В. Куликовский, А.Н. Панин, В.В. Соснина // Ветеринария. - 1997. -№3. - С.25-27.

56. Лабораторные тесты. Микробиологическая и вирусологическая диагностика. Справочник в 3-х частях / под ред. М.Х. Турьянова. Выпуск №9. — М.; КАППА, 1995.

57. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. — М.: Медицина, 1985.-256 с.

58. Логинов, И.Л. Изучение колициногенности производственных штаммов энтеропатогенных эшерихий / ИЛ. Логинов, А.Г. Малявин, А.Н. Панин // Труды ВГНКИ. -1977. Т. 23. - С. 89-94.

59. Малахов, Ю.А. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных / Ю.А. Малахов, Р. В. Душук // Ветеринария. 2001. — №1.-С. 35-38.

60. Малахов, Ю.А. Специфическая профилактика эшерихиоза животных / Ю.А. Малахов, О.Л. Тугаринов, М.К. Пирожков, Т.И. Исхакова // Ветеринария. — 1993.-№8.-С.5.

61. Масанская, В.В. Эшерихиозный анатоксин, способ его получения и способ активной профилактики отёчной болезни поросят-отьемышей / В.В. Масанская , В.Н. Макарова // Патент РФ №2213575, МПК А61К39/108. Заявлено 06.09.2001. -Опуб. 10.10.2003.

62. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань: Магариф, 1993. -192 с.

63. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 92 с.

64. Маянский, А.Н. Проблема управления фагоцитарными механизмами / А.Н. Маянский, H.A. Невмятуллин, H.A. Маянский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1995. -№ 3. С. 21-26.

65. Медицинская микробиология / под. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев. —

66. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. 1200 с.

67. Медуницын, Н.В. Аллергия и вакцинация / Н.В. Медуницын // Журн. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2009. - № 1.- С. 5-8.

68. Медуницин, Н. В. Вакцинология / Н.В. Медуницын. М.: «Трида-Х», 1999.-272 с.

69. Методы оценки функциональной активности гранулоцитов. Методические рекомендации / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова, Г.А. Чудилова. Краснодар, 1993.-20 с.

70. Михалишин, Д.В. Роль адъювантов в противоящурной вакцине для экстренной защиты / Д.В. Михалишин, Н.Д. Клюкина, H.H. Ходакова, Т.Н. Лезова // Вет. патология. 2006. - № 4. - С. 46-48.

71. Моргунова, В.И. Возможность и динамика адгезии эшерихий в эксперименте на поросятах / В.И. Моргунова, Н.М. Алтухов // Актуал. пробл. ветеринарии. Барнаул, 1995. - С. 79.

72. Моргунова, В.И. Профилактика колибактериоза у новорождённых поросят / В.И. Моргунова, Н.М. Алтухов, В.И. Моргунов, О.Н. Мистюкова // Ветеринария.-2003.-№ 1.-С. 18-20.

73. Определитель бактерий Берджи в 2 т. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крита, П. Снита и др.; пер. с англ. М.: Мир, 1997. - 800 с.

74. Панькова, С.Ю. Изучение биологических свойств эшерихий, выделенных при диарее и колибактериозе телят / С.Ю. Панькова, Е.П. Евглевская // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. Курск, 2005. - Ч. 1. — С. 129-131.

75. Паутова, И.Г. Изучение условий культивирования штамма HI 9 Е. coli для получения шигеллоподобного токсина / И.Г. Паутова, Ю.В. Вертиев, И.С. Николаева // Сборник научных трудов НИИЭиМ им Н.Ф. Гамалеи «Бактериальные токсины». Москва, 1987.-С. 103-108.

76. Петров, Р.В. Вакцины нового поколения на основе синтетических полио-нов: история создания, феноменология и механизмы действия, внедрение в практику / Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Intern. J. Immunorehabilitation. 1999. -№11.— С. 13-25.

77. Петров, Р.В. Искусственные антигены и вакцины / Р.В. Петров, P.M. Хаитов. М.: Медицина, 1988. - 304 с.

78. Петровская, В.Г. Генетические основы вирулентности патогенных и условно патогенных бактерий/ В.Г. Петровская // Микробиол., эпидемиол. и иммунология. -1984. №7. - С. 77-85.

79. Пигаревский, В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства / В.Е. Пигаревский. -М.: Медицина, 1978. -128 с.

80. Пирожков, М.К. Биологические препараты для специфической' профилактики и терапии эшерихиоза животных: дис. . док. вет. наук / М.К. Пирожков. Москва, 2002. - 298 с.

81. Покровский, В.И. Иммунология инфекционного процесса / В.И. Покровский, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинова. М.: Медицина, 1994. - 304 с.

82. Полякова, O.A. Адгезивный антиген К99 и термостабильный энтеротоксин у патогенных эшерихий — возбудителей колибактериоза телят/ О.А.Полякова, Н.И. Евглевская, Н.А.Соколова, А.Б. Бессарабов // Ветеринария. 1986. - №3. — С.37-40.

83. Полякова, O.A. Колибактериоз одна из причин заболевания новорожденных телят / O.A. Полякова // Ветеринария. -1976. - №7. - С. 59-61.

84. Ратинер, Ю.А. Энтерогеморрагические кишечные палочки и вызываемые ими заболевания / Ю.А. Ратинер, В.М. Бондаренко, A. Sitonen // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. -1998. №5. - С. 87-96.

85. Розанов, Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных / Н.И. Розанов. — М.: Гос. изд-во с.-х. литературы. -1952.-С. 88-91.

86. Ройт, А. Иммунология // А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. -592 с.

87. Романов, Е.А. Эффективность ассоциированной вакцины против диареи телят смешанной этиологии / Е.А. Романов, Х.З. Гаффаров, Е.Л. Матвеева, Г.Н. Спиридонов, И.Н. Залялов // Ветеринария. 2000. - №12. - С. 18-20.

88. Русалеев, B.C. Бактериальные вакцины в свиноводстве / B.C. Русалеев, В.М. Гневашев, О.В. Прунтова // Ветеринария. 2001. - № 6. - С. 18-21.

89. Сергеев, В.А. Вирусы и вирусные вакцины / В.А. Сергеев, Е.А. Непоклонов, Т.И. Алипер. -М.: Библионика, 2007. —186с.

90. Светоч, Э.А. Факторы патогенности возбудителей эшерихиозов сельскохозяйственных животных: автореф. дис. . док. вет. наук / Э.А. Светоч. — Москва, 1992.-41 с.

91. Светоч, Э.А. Фено- и генотипические свойства штаммов Е. coli, продуцирующих антиген К88 / Э.А. Светоч, Е.И. Попов, В.В. Гусев // Ветеринария. — 1997.-№11.-С.19-23.

92. Светоч, Э.А. Этиология постотъемной колидиареи свиней / Э.А. Светоч, В.В. Гусев // Ветеринария. 2005. - №12. - С. 23-26.

93. Селиванов, A.B. Перспективные методы иммунизации животных / A.B. Селиванов // Ветеринария. -1977. № 2. - С. 7-11.

94. Семенов Л.В. Ассоциированная вакцина против анаэробной энтеротоксе-мии и эшерихиоза поросят: автореф. дис. канд. биол. наук / Л.В. Семенов; Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации. —1. Москва, 1999.-22 с.

95. Сибиряк, C.B. Иммунотропные свойства липополисахаридов грамотри-цательных бактерий / C.B. Сибиряк, Е.К. Алехин // Антибиот. и химиотер.1988. Т. 33. -№1. - С. 871-877.

96. Сидорчук, A.A. Оценка иммунологической эффективности различных адъювантов при изготовлении бактериальных вакцин / A.A. Сидорчук, С.Д. Панасюк, Ю.Н. Федоров // Тр. / ВИЭВ. 1989 - Т. 67. - С. 3-10.

97. Скориков, A.B. Распространение и этиологическая структура эшерихиоза в Краснодарском крае / A.B. Скориков, В.Н. Шевкопляс, В.И. Терехов, А.Ф. Дмитриев // Вестник ветеринарии. 2004. - №29.- С. 14-17.

98. Соколова, H.A. Адгезивные антигены и энтеротоксины эшерихий, патогенные для молодняка сельскохозяйственных животных / H.A. Соколова, Н.И. Евглевская, Т.К. Курашвили, Ю.С. Кабанков, Г.Л. Дворкин // Ветеринария. —1989.-№5.-С. 33-35.

99. Соколова, H.A. Иммуногенные свойства вакцины против колибактериоза / H.A. Соколова, Э.А. Шегидевич, Г.В. Гнатенко, А.Н. Головко, Т.К. Курашвили, Ю.Н. Фёдоров, Н.И. Евглевская, Ю.В. Сухарев, О.Ш. Лондаридзе // Ветеринария. —1993.—№8 -С.7. 1 ' ' , ■■ '

100. Соколова, H.A. Полиадгезивные штаммы Е. coli, выделенные от новорождённых поросят / H.A. Соколова, Т.К. Курашвили // Ветеринария. 1992.—№ 1. — С. 29-31.

101. Староселов, М.А. Оценка сравнительной эффективности иммунокорректо-ров для повышения резистентности крупного рогатого скота: дис. . канд. вет. наук / М.А. Староселов. Краснодар, 2008.

102. Степанова, М.В. Изучение продукции термостабильного энтеротоксина штаммами кишечной палочки / М.В. Степанова, Ю.В. Езепчук // Сборник научных трудов НИИЭиМ им Н.Ф. Гамалеи «Бактериальные токсины» Москва, 1987.-С. 157-162.

103. ИЗ. Степаншин, Ю.Г. Бактерионосительство энтерогемморагических эшерихий серовара 0157:Н7 у животных / Ю.Г. Степаншин, Э.А. Светоч, Б.В. Ерусланов и др. // Ветеринария. 2005. - №7. - С. 17-23.

104. Субботин, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. 2001. - №4. - С. 3-8.

105. Супотницкий, М.В. ДНК иммунизация в профилактике инфекционныхi' i iболезней сельскохозяйственных животных / М.В. Супотницкий // Ветеринария. 1998.-№5.- С. 18-24.

106. Табачник, А.Л. Энтеротоксигенные Е. coli / А.Л. Табачник, Е.С. Гиршович, P.M. Темпер // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 1977. - № 3.- С. 31-38.

107. Тельнов, С. Н. Профилактика колидиареи у поросят-отъемышей / С. Н. Тельнов, А. Шипицын, А. Скориков, Е. Кузьмина, А. Марков // Гл. зоотехн. — 2008.-№1.-С. 44-46.

108. Терехов, В.И. Влияние эшерихиозного анатоксина на нейтрофильные гра-нулоциты / В.И. Терехов, Я.М. Караев, М.В. Уманская // Тр. / КубГАУ. 2008. -Вып.№4(12).

109. Терехов, В.И. Способ биотестирования токсигенности кишечной палочки / В.И. Терехов, Ю.Б. Шпонько, В.Н. Боровой, С.Н. Тельнов // Патент РФ на изобретение № 2262529. 2003.

110. Терехов, В.И. Способ приготовления питательной среды для накопления токсинов кишечной палочки / В.И. Терехов, Я.М. Караев, Н.Ю. Русак, О.Б. Терехова, Н.В. Коткова // Патент РФ на изобретение № 2342425. 2007.

111. Терехов, В.И. Эшерихиоз поросят и его профилактика / В.И. Терехов, Н.В. Колесникова, Я.М. Караев // Ветеринария Кубани. 2006. - №1. - С. 12-13.

112. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы. Нейтрофилы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 2000. - 231 с.

113. Турдиев, Ш.А. Клинико-эпизоотологическое проявление колибактериоза телят и их лечение в условиях республики Таджикистан : автореф. дис. . . канд.;'у*'1. Ч (1 ,вет. наук / Ш. А. Турдиев. Душанбе, 1997. - 24 с.

114. Урбан, В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве / В.П. Урбан, И.Л. Найманов. М.: Колос, 1984. - 207 с.

115. Ургуев, K.P. Иммуногенез при вакцинации овец полианатоксином против клостридиозов / K.P. Ургуев // Проблемы ветеринарной иммунологии. — М.: Аг-ропромиздат. -1985. С. 98-101.

116. Ушкалов, В.А. Факторы патогенности Е. coli выделенных от телят / В.А. Ушкалов, А.Н. Головко // Ветеринария. 1992. - №4. - С. 23-24.

117. Федоров, Ю.Н. Иммунопрофилактика болезней новорожденных телят / Ю.Н. Федоров //Ветеринария.-1996.- №11.- С. 3-6.

118. Федотова, Г.Г. Морфофункциональное исследование нейтрофилов в условиях эндотоксикоза : дис. . док. биол. наук / Г.Г. Федотова. Саранск, 2007. -292 с.

119. Фокин, A.A. Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей: дис. канд. вет. наук / A.A. Фокин. — Казань, 2005.-178 с.

120. Хитрова, А.Е. Антигенная активность вакцин Комбовак-Р и Комбовак-К / А.Е. Хитрова, Г.Л. Соболева, В.А. Сергеев, Т.И. Апипер, И.В. Непоклонова // Ветеринария. 2004. - № 11. - С. 21-24.

121. Хитрова, А.Е. Оценка антигенной активности вирусных компонентов опытной серии вакцины «Комбовак-К» на лабораторных животных / А.Е. Хитрова // Актуал. пробл. инфекц. патологии животных. Владимир, 2003. - С. 438— 441.

122. Хитрова, А.Е. Эффективность применения комбинированных вакцин серии Комбовак / А.Е. Хитрова, В.А. Сергеева, Т.И. Алипер, O.A. Верховский,// Ветеринария. 2006. - №9. - С. 17-20.

123. Хмелевская, Д.В. Факторы патогенности некоторых условно патогенных бактерий, вызывающих диареи / Д.В. Хмелевская, Л.В. Девтерова, Э.А. Яговкин и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. -1990. -№4. С. 97-102.

124. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований / под ред. A.C. Лабинской, Л.П. Блинковой, A.C. Ещиной. — М.: Медицина, 2005. С. 480.

125. Шиффман, Ф.Дж. Патофизиология крови / Ф.Дж. Шиффман; пер. с англ.

126. М. СПб.: «Издательство БИНОМ» «Невский диалект», 2000. - с. 123-149.

127. Шемельков, Е.В. Влияние различных типов адъювантов на эффективность вакцин против инфекционных болезней свиней: автореф. дис. канд. вет. наук / Е.В. Шемельков. Москва, 2010. - 25 с.

128. Шульга, Н.Н. Разработка и изучение эффективности препаратов из крови животных для повышения резистентности новорожденных телят и поросят: автореф. дис— док. вет. наук / Н.Н. Шульга. Екатеринбург, 2009. - 39 с.

129. Щербаков, П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят / П.Н. Щербаков, А.Г. Гусев // Ветеринария. 2002. -№3. - С. 15-16.

130. Щипков, В.П. Плазмиды и патогенность бактерий / В.П. Щипков, А.П. Пе-хов // Аграрная Россия. 2002. - №2. - С. 36-42.

131. Энтеробактерии: Руководство для врачей / под ред. В.И. Покровского. -М.: Медицина, 1985. С. 57-87. "; * ' \ '/f

132. Alexa, P. Differentiation of verotoxigenic strains of Escherichia coli isolated from piglets and calves in the Czech Republic / P. Alexa, E. Salajka, J. Hamrik // Veter. Med. 2000. - R 45. - C. 2. - P. 39-43.

133. Alexa, P. Oedema disease of swine: formation of antibodies neutralizing Shiga-like toxin Hv piglets immunized with the toxoid SLTII / P. Alexa, E. Salajka, J. Hamrik // Veter. Med. -1998. -R.43. C.l. - P. 11-16.

134. Allison, A.C. and Byars, N.E. Adjuvants for a new generation of vaccines. In: New Generation Vaccines (Eds Woodrow, G.C. and Levine, M.M.). Marcel Dekker, Inc. New York, 1990. P. 129-140

135. Awad-Masalmch, M. Pilus production, hemagglutination and adhesion by porcine strains of enterotoxigenic E. coli lacking K88, K99 and 987P antigens / M. Awad-Masalmch, H.W. Moon, P.L. Runnels, R.A. Schneider // Infect. Immun. 1982. - V.35.-P. 305-333

136. Aucouturier, J. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines / J. Aucouturier, L. Dupuis, V. Ganne // Vaccine. 2001. - № 19. - P. 2666-2672.

137. Baker, D.R. Distribution of K88 Escherichia coli-adhesive and nonadhesive phe-notypes among pigs of four breeds / D.R. Baker, L.O. Billey, D.H. Francis // Veter. Microbiol.- 1997.-Vol.54, N2.-P. 123-132.

138. Belardelli, F. Adjuvants, cytokines and vaccine development / F. Belardelli, E. Proietti, M. Ferrantini, I. Capone // Congr. ISHSAN. 2004. -№ 1. - P. 21.

139. Bessler Wolfgang, G. Lipopeptide adjuvants / G. Wolfgang Bessler // Arzneim.-Forsch. 2007. - N 1. - P. 60.

140. Booher, S.L. Persistence of Escherichia coli 0157:H7 in experimentally infected swine / S.L. Booher, N.A. Cornick, H.W. Moon // Veter. Microbiol. 2002. - Vol. 89, X1.-P. 69-81.i!v 1 r ' v if i /

141. Brewer James, M. How do aluminium adjuvants work? / M. James Brewer // • 1 Immunol. Lett. 2006. - N 1. - P. 10-15.

142. Call, D. Adjuvant activity of polyelectrolytes / D. Call, P.A. Knight, F. Hampson // J. Immunol. 1972. - № 23. - P. 569-575.

143. Cox, J.C. and Coulter A.R. Advances in adjuvant technology and application, In: Animal Parasite Control Utilizing Biotechnology (Ed. Yong, W.K.). CRC Press, Boca Raton, 1992. P. 49-112.

144. Cox, J.C, Coulter A.R. Adjuvants a classification and review of their modes of action. Vaccine. 1997. - №15. - P. 248-256.

145. Cox, J.C., Sparks R.E., Jacobs I.C. and Mason N.S. Patent. Vaccine preparations. -1994. — PCT/AU93/00677.

146. Ewald, P.W. Evolution of infectious disease / P.W. Ewald // Oxford: Oxford University Press, 1994.

147. Gaastra, W. Host specific fimbrial adhesins of non-invasive enterotoxigenic E. coli strains / W. Gaastra, F. de Graaf // Microbiological Reviews. -1982. V. 46, № 2. -P. 129-161.

148. Garsia, P. Endotoxin effects of vaccines in the pig / P. Garsia, H. Hakt, U. Mag-nusson, H. Kindahl // Acta vet. Scand. 1998. - V.39, № 1. - P. 135-140.

149. Guler L. Virulence factors and antimicrobial susceptibility of Escherichia coli isolated from calves in Turkey / L. Guler, K. Giindiiz // Zoonoses and Public Health. -2008. V.55. - № 5. - P. 249-257.

150. Harnett, N.M. Linkage of genes for heat-stable enterotoxin drug resistance K99 antigen and colicin in bovine and porcine strains of enterotoxigenic E. coli / N.M. Harnett, C.L. Gyles // Am. J. Veter. Res. 1985. - V. 46, № 2. - P. 428-433.

151. Harold, F. Adjuvants and antibody production: Dispelling the Myths Associated with Freund's Complete and Other Adjuvants / F. Harold, Jr. Stills // J. Bio- technol. 1993. - № 9. - P. 153-162. V'" ^s

152. Hoffman, M. A. Bovine immune response to Shiga-toxigenic Escherichia coli 0157:H7 / M.A. Hoffinan, C. Menge, T. A. Casey, W. Leagreid, B.T. Bosworth // Clin, and Vaccine Immunol. 2006. - № 12. - P. 1322-1327.

153. Husband, A. Vaccination of piglets against Esherichia coli enteritis / A. Husband, J. Seaman // Austral. Veter. J. -1979. P. 435-436.

154. Irino, K. Serotypes and virulence markers of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolated from dairy cattle in Sao Paulo State, Brazil. / K. Irino, M.A.M.F. Kato, T.M.I. Vaz //Veterinary Microbiology. 2005. - Vol. 105, Issue 1. - P. 29-36.

155. Kang, S.J., Occurrence and characteristics of enterohemorrhagic Escherichia coli 0157 in calves associated with diarrhoea / Kang S.J., Ryu S.J., Ko S.K., Woo G.J., Lee J.H. // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 98, N 3/4. - P. 321-328.

156. Kensil, C.R. Saponins as vaccine adjuvants. In: Critical Previews In: Therapeutic Drug Carrier Systems. -1996. №13. - P. 1-55.

157. Kurstak, E. Modern vaccinology / E. Kurstak // Plenum Medical book company. -New York and London. 1993. - 397 p.

158. Leclerc, B. Evaluation of the adhesive capacity of Escherichia coli isolates associated with avian cellulitis / B. Leclerc, J.M. Fairbrother, M. Boulianne, S. Messier // Avian Dis. 2003. - Vol. 47, № 1. p. 121-131.

159. Lindblad, E.B. Aluminium adjuvants — in retrospect and prospect. / E.B. Lindblad // Vaccine. 2004. - V. 22. - P. 3658-3668.

160. Mainil, J.G. Comparison of necrotoxigenic Escherichia coli isolates from farm animals and from humans / J.G. Mainil, E. Jacquemin, P. Pohl, J.M. Fairbrother, A. Ansuini // Veterinary Microbiol. 1999. - V. 70. - P. 123-135.

161. Mainil, J.G. Virulence plasmids of enterotoxigenic Escherichia coli isolates from piglets / J.G. Mainil, G. Daube, E. Jacquemin, P. Pohl, A. Kaeckenbeeck // Veter. Microbiol. -1998.-V. 62,№ 4.-P. 291-301.

162. Matise, I. Vascular ultrastructure and DNA fragmentation in swine infected with shiga toxin-producing Escherichia coli / I. Matise, T. Sirinarumitr, B.T. Bosworth, H.W. Moon // Veter. Pathol. 2000. - Vol: 37. - № 4. - P. 318-327. *> 't

163. Maurer, C. Characterization of inducible stx2-positive Escherichia coli « 0157:H7/H7-strains isolated from cattle in France / C. Maurer, C. Lazizzera, J. Madec //

164. J. Appl. Microbiol.-2008.-Vol. 104.-№6.-P. 1569-1576.

165. Moon, H.W. Prevalences of some virulence genes among Escherichia coli isolates from swine presented to a diagnostic laboratory in Iowa / H.W. Moon, L.J. Hoffman, N. A Cornick // J. veter. diagnostic investig. -1999. Vol. 11, N 6. - P. 557-560.

166. Moon, H.W. Prevalence of virulence factors among hemolytic Escherichia coli /

167. H.W. Moon, N.A. Comtek, LJ. Hoffman // AS publ. Iowa State Univ. Coop. Extens. Serv- Ames(Iowa). -1998 -N 638 P. 148-149.

168. Mutwiri, G. Innate immunity and new adjuvants / G. Mutwiri, V. Gerdts, M. Lopez, L.A. Babiuk // Rev. Sc. ET techn. 2007. - Vol. 26. - № 1. - P. 147-156.

169. Nagy, B. A piles- (fimbria-) vaccine human- es allatorvosi jelentosege / B. Nagy // Magyar allatorv. Lapja. -1984 T. 39. - N 3. - P. 131-136.

170. Osek, J. Molecular characterisation of shiga toxin-producing Escherichia coli 0157 strains isolated in Poland / J. Osek // Res. in veter. Sc. 2001. - Vol. 70, X 2. - P. 175-177.

171. Osek, J. Detection of cytolethal distending toxin genes in shiga toxin-producing Escherichia coli isolated from different sources / J. Osek // Bull. Veter. Inst. 2005. — Vol. 49,N2.-P. 153-156.

172. Padola, N.L Serotypes and virulence genes of bovine Shigatoxigenic Esche' rrichia coli (STEC) isolated from a feedlot in Argentina / N.L. Padola, M.E. Sanz,J.E.!> * '' ;f

173. Blanco, M. Blanco, J. Blanco, A.I. Etcheverria, G.H. Arroyo, M.A. Usera, A.E. Parma // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 100, N 1/2. - P. 3-9.

174. Penteado, A.S. Serobiotypes and virulence genes of Escherichia coli strains isolated from diarrheic and healthy rabbits in Brazil / A.S. Penteado, L.A. Ugrinovich, J. Blanco et al. // Veter. Microbiology. 2002. - Vol. 89, N 1. - P. 41 -51.

175. Rippinger, P. Designations F18ab and F18ac for the related fimbrial types F107, 2134p and 8813 of Escherichia coli isolated from porcine postwean-ing diarrhea and from oedema disease / P. Rippinger // Vet. Microbiol. 1995. - Vol. 45. - P. 281-295.

176. Runnels, P.L. Capsule reduces adherence of enterotoxigenic Es-cherichia coli to isolated intestinal epithelial ceels of pigs / P.L. Runnels, H. W. Moon // Infect. Immun. — 1984 T. 45. - N 3. - P. 737-740.

177. Said, A.M. Factours et marguens de virulence de souche Escherichia coli isolesde diarrhees chez des veaux ages de 4 a 45 jons en Algerie / A.M. Said, M. Contrepois, V.M. Per // Rev. evel. et med. vet. pays. troh. 1994. - Vol. 47. - № 2. - P. 169-175.

178. Stephan, R. Prevalence and characteristics of shigatoxin-producing E. coli (STEC) in fecal samples from farm animals at slaughter in Switzerland a review / R. Stephan // Mitt. Lebensm. - Untersuch, und Hyg. - 2006. - № 1. - P. 30-40.

179. Stewart-Tull, D.E. (Ed.) The Theory and Practical Applicationof Adjuvants. John Wiley and Sons Ltd., Chichester, 1994.

180. Suna, H.X. Advances in saponin-based adjuvants / H.X. Suna, , Y. Xiea, Y.P. Ye // Vaccine. 2009. - №27. - P. 1787-1796.

181. To, S.C. Type 1 pili (Fl) of porcine enterotoxigenic Escherichia coli: Vaccine trial and tests for production in the small intestine during disease / S.C. To, H.W. Moon, P.L. Runnels // Infect. Immun. -1984. T. 43. - N 1. - P. 1-5.

182. Tzipori, S. The etiology and diagnosis of calf diarrhea / S. Tzipori // Veter. Ree. -1981.-Vol. 108.-№13.-P. 510-514.

Информация о работе

Тищенко, Александр Сергеевич
кандидата ветеринарных наук
Краснодар, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы