Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Лечебно-профилактические препараты на основе токсин-продуцирующих микроорганизмов для агропромышленного комплекса
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Лечебно-профилактические препараты на основе токсин-продуцирующих микроорганизмов для агропромышленного комплекса"
На правах рукописи
Евглевскнн Дмитрий Анатольевич
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ НА ОСНОВЕ ТОКСНН-ПРОДУЦИРУЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ АГРОПРОМЫШЛЕННОГО КОМПЛЕКСА
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук
1 Ш 2015
005570261
Щёлково- 2015
005570261
Работа выполнена в ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» в отделе противобактерийных препаратов
Научный консультант:
академик РАН, академик НЛАН Украины,
доктор ветеринарных наук, профессор,
лауреат Государственной и Правительственной премий РФ,
Заслуженный деятель науки РФ Анатолий Яковлевич Самуйленко
Официальные оппоненты:
Букова Наталия Константиновна-доктор биологических наук, профессор, учёный секретарь ФГБУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» Смирнова Ирина Робертовна-доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»
Светличкнн Вячеслав Владимирович - доктор биологических наук, профессор, заведующий отделом технического регулирования, стандартизации и сертификации ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии»
Ведущая организация:
ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина».
Защита состоится « ¿г сентября 2015 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание учёной степени доктора наук во «Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности» по адресу: 141142, Московская область, Щёлковский район, пос, Биокомбнната, д.17, ВНИИТИБП, e-mail: vnitihpfff'inail.ni
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке «Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности».
Автореферат разослан «/<^>> июня 2015 г. и размещён на сайте ФГБНУ ВНИТИБП ФАНО www.vnitibp.com и на официальном сайте ВАК http://www.vak.ed. цоули.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук Фролов Юрий Дмитриевич
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1.1. Актуальность темы. Одним из основных направлений развития агропромышленного комплекса Российской Федерации является обеспечение животноводства эффективными и качественными биопрепаратами. В последние годы учёными многих стран обнародованы многочисленные случаи инфекционных процессов, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, характеризующимися тяжёлым течением, трудно поддающимся лечению и отличающихся высокой летальностью. В этиологии этих заболеваний наряду со стафилококками, стрептококками ведущее место занимает грамотрицательная флора: кишечная палочка, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы. Селекцию штаммов бактерий с высокой резистентностью и пагогенностью обусловило: ухудшение экологической ситуации и иммунной реактивности организма; нерациональное и несбалансированное кормление, широкое бесконтрольное использование антибиотиков и гормональных препаратов для лечения больных животных, а также усиление вирулентности микроорганизмов в результате многократного пассирования через организм человека и животных. В частности, установлена передача при помощи плазмид способности синтезировать К-антиген и продуцировать энтеротоксин непатогенным кишечным палочкам от энтеропатогенных (Кисленко В.Н., 2012). Постоянно протекающие горизонтальные генетические обмены между животными и человеком, приводят к обогащению биологических видов и формированию новых животных патогенов, представители которых могут оказаться патогенными для человека. В развитых странах мира колибактериоз животных находится под пристальным вниманием ветеринарных и медицинских специалистов, так как важную роль в инфекционной патологии человека стали играть эшерихии, вырабатывающие шигаподобный токсин. (Брико Н.И., Ещина A.C., Рянис J1.A., Рэмси Я., Теннант Б. 2005). Основными направлениями в борьбе против наиболее распространённых возбудителей инфекций являются химио-, антибиотикотерапия и специфическая профилактика. Однако,
возникновение резистентных форм бактерий, обусловленных присутствием плазмид резистентности, а также острое течение болезни, заметно снижают лечебную эффективность известных антибактериальных препаратов. Поэтому необходим поиск новых подходов в получении природных и химических антибиотиков, преодолевающих ферментативную деструкцию антибиотикоустойчивых микроорганизмов. Несмотря на то, что ветеринарная практика имеет в своём распоряжении большой набор лечебно-профилактических биопрепаратов и антибиотиков, увеличение номенклатуры, совершенствование, улучшение их качества и эффективности по-прежнему остается актуальной задачей. В связи с этим возникает необходимость продолжения поиска и совершенствования современных средств специфической профилактики и лечения сельскохозяйственных животных, в том числе и на основе создания новых биопрепаратов из токсин-продуцирующих микроорганизмов, что имеет большое научное и практическое значение.
1.2. Степень разработанности проблемы. Разработке, производству, контролю и применению лечебно-профилактических биопрепаратов посвящено большое количество работ отечественных авторов (Вышелесский С.Н., Михин H.A., 1930, Коляков Я.Е.,1960, Квеситадце И.Ф., Шерстобаев К.Н., Сидоров М.А., 1980, Стрельцов А.Г., 1988, Малахов Ю.А.,1995; Соколова H.A., 1996; Тугаринов O.A., 1999; Пирожков М.К., 2007; Самуйленко А.Я.,2008; Сусский Е.В.,2014). Специфическая активная профилактика болезней, вызываемых токсин-образующими микроорганизмами, основана на применении биопрепаратов типа анатоксинов, изготовленных путём их обезвреживания. Анатоксины-аналоги инактивированных вакцин - препараты обезвреженного токсина, очищенного от балластных веществ, сконцентрированного и адсорбированного. Основной метод перевода токсина в анатоксин был впервые применён французским иммунологом Г. Рамоном (1923), который установил, что прибавление к токсину формалина и выдерживание при определённой температуре лишает его токсичности, но
сохраняет иммунизирующую активность. Существуют разработки по созданию вакцин с анатоксинами E.coli для получения иммуногенных препаратов с широким спектром действия. К ним относятся поливалентные ииактивированные вакцины, созданные американскими и бельгийскими учёными (Dobrescu, Descamps, Brown, 1984). Для профилактики и лечения гнойно-септических болезней в медицине известно применение различных моно- и поливакцин, содержащих антигены наиболее часто встречающихся условно-патогенных микроорганизмов, например, стафило-протейно-синегнойной вакцины (Медуницин Н.В.,1999; Сибагатуллин Н.Г., Михайлова H.A.,2000; Нуриддинова Н.Р., Иванова Л.Е., 2002). В США, запатентован способ получения иммуногенных коныогатов термостабильного энтеротоксина (ТС-энтеротокснна) эшерихий с помощью диальдегида, дикетона, карбодиимида, изоцианата, эпихалогидрина или дифлуорнда (Wijneadaele F.V.,1980). Получен синтетический полипептид термостабильного токсина, содержащего 14 аминокислот N-терминалыюго участка ТС-энтеротокина эшерихий (Houghten R.A.,1985). Предложен способ повышения нммуногенностп ТС-токсина эшерихий путём его полимеризации после предварительной частичной очистки (Van Wijnendaele F., Dodrescu L., Boon В. 1982). Все полученные синтетические и полусинтетические коныогаты ТС-энтеротоксина предлагались для разработки и создания вакцинных и диагностических препаратов. Gyles C.L. and Maas W.K. (1983) считали наиболее перспективными вакцины на основе обезвреженных энтеротоксинов и фимбрий. Испытание токсоидной вакцины, содержащей очищенный и подвергнутый полимеризации ТС-энтеротоксин эшерихий, провели AWAD-Nasalmen Н., и Willinger Н. (1987) на поросятах-отъёмышах при отёчной болезни. Положительные результаты испытания вакцин, содержащих ТС- и ТЛ-токсины получены рядом авторов и для животных, и для человека (Honghten R.A.,Engert R.F., Ostresh J.M.,1985, Klipstein F.А., Engeil R.F., Honghten R.A. 1986).B США и Нидерландах разработали против эшерихиозов животных вакцины, содержащие адгезивные антигены К88, К99, 987Р и термолабильный анатоксин (ТЛ-анатоксин). Согласно данным
авторов (Chirila F.,Vana V., 1994), препарат обладал двойным эффектом: предотвращал прикрепление эшерихий, продуцирующих адгезины К88, К99, 987Р к эпителиальным клеткам кишечника и нейтрализовал действие термолабильного токсина. Кроме того, установлено, что ассоциация антигена К88 и ТЛ-анатоксина в вакцине обеспечивала больший протективный эффект.
Анализ литературных данных показал, что для получения высокоэффективных препаратов специфической профилактики колибактериоза в вакцину необходимо вводить все антигены, ответственные за вирулентность и иммуногенность эшерихий. Однако, в отличие от научно-экспериментальных разработок, зарубежные коммерческие вакцины против эшерихиоза животных, зарегистрированные в РФ, имеют ограниченный набор протективных антигенов, в чём легко убедиться, анализируя их антигенный состав. Так, например, вакцина «Порцилис. СоН» (Нидерланды) изготовлена из анатоксина LT Escherichia coli: F4ab(K88ab), F4ac(K88ac), Fs(K99),F6 (987P), защищающего животных от энтеротоксикоза. Вакцина «Порцилис. Coli. Clos» содержит в своём составе фимбриальные адгезины и термолабильный токсин E.coli, а также антиген типа С клостридий.
В этой связи отечественные учёные конструировали колибактериозные вакцины на основе природных штаммов эшерихий, содержащих оптимальные количества адгезивных антигенов и анатоксинов. (Малахов Ю., 1995; Тугаринов О.А., 1999; Пирожков М.К., 2007).
Исследователями также было показано, что иммунитет при стафилококковых инфекциях преимущественно антитоксический, слабой напряжённости и непродолжительный, что обусловливает частые рецидивы. Тем не менее, высокие титры антитоксинов в крови животных повышали их устойчивость к повторным заражениям. Антитоксины не только нейтрализовали экзотоксины стафилококков, но и способствовали быстрой мобилизации фагоцитоза (Колычев Н.М., Госманов Р.Г., 2014).
В настоящее время проблему антибиотикорезистентности микроорганизмов фармакологические предприятия пытаются решать путём
высокодозных антибиотиков, комбинацией нескольких антибиотиков разных групп, разработкой и применением новых поколений, а также введением фтора, пиперазинового радикала, клавулоновой кислоты, которые на короткий период обеспечивают бактерицидный эффект на фоне высокой токсичности.
Поэтому вопросы токсичности антибиотиков, как и их эффективности, остаются актуальными, а появление и распространение приобретённой резистентности у бактерий создают проблему антибактериальной терапии больных животных.
1.3. Цель и задачи исследовании. Целью исследований явилась разработка и получение высокоэффективных лечебно-профилактических биопрепаратов путём создания препаратов нового поколения, изготовленных на основе анатоксинов возбудителя, обладающих высокой антигенной и иммуногенной активностью и широким спектром защитного действия.
Для достижения поставленной цели решились следующие задачи:
- изучить возможность конструирования универсального состава питательных синтетических сред с учётом метаболизма микроорганизмов;
- использовать новые средства и способы детоксикации, полимеризации бактериальных токсинов и антибиотиков;
- предложить для практики способ оценки полноты инактивации токсинов бактерий;
изготовить опытные серии анатоксин-вакцин, изучить их иммуногенность и безвредность для животных;
разработать технологии производства и изучить лечебно-профилактическую эффективность стафилококковой, стафило-стрептококковой, коли-стафило-протейио-сипегнойной, колибактериозной, сальмонеллёзной и колнсальмонеллёзной анатоксин - вакцин;
- апробировать способы получения модифицированных антибиотиков и изучить их эффективность и токсичность;
- разработать нормативную документацию.
1.4. Научная новизна. Для получения высокоэффективных колибактериозных, коли-сальмонеллёзных, стафилококковых анатоксин-вакцин впервые предложена универсальная синтетическая питательная среда, обеспечивающая стабильно высокое накопление микроорганизмов (Патент № 2439142 «Синтетическая питательная среда для выращивания микроорганизмов»).
Применение принципиально новых средств и способов детоксикации, полимеризации и инактивации бактериальных токсинов позволило получать лечебно-профилактические препараты с повышенными иммуногенными и протективными свойствами (Патент № 2377013 «Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины», Патент № 2392003 «Способ получения саль-монеллёзной анатоксин-вакцины», Патент № 2371197 «Способ получения коли-сальмонеллезной анатоксин-вакцины», Патент №2372937 «Способ получения коли-бактериозной анатоксин-вакцины», Патент № 2377014 «Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины», Патент № 2377016 «Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины»).
Против инфекций, обусловленных условно патогенными микроорганизмами, сконструирована новая ассоциированная коли-стафило-протейно-синегнойная вакцина, представляющая собой комплекс подвергнутых детоксикации, сорбции на гидроокиси алюминия и очищенных, концентрированных анатоксинов эшерихии, стафилококка, синегнойной палочки и протея (Патент № 2386448 «Способ получения ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней»).
Для контроля процесса полной инактивации, стандартизации стафилококковых анатоксинов, изучения аллергических реакций предложена биологическая модель аллергии (Патент № 2405146 «Способ создания биологической модели аллергии к стафилококковому аллергену»).
Предложен способ получения модифицированных антибиотиков, эффективных, в том числе и в борьбе со штаммами антибиотикоустойчивых микроорганизмов. Впервые повышение бактерицидной и лечебной эффективно-
сти модифицированных антибиотиков достигнуто путём детоксикации и полимеризации антибиотика альдегидом муравьиной кислоты - раствором формальдегида отдельно или раствором глутарового альдегида в сочетании с четвертичными аммониевыми соединениями, что обеспечивает устойчивость к деструктивному действию бактериальных ферментов при снижении токсических свойств препаратов (Патент №2400218 «Способ повышения эффективности антибиотиков», Патент №2405834 «Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении устойчивых к нему М. tuberculosis», Патент № 2425668 «Способ повышения эффективности антибиотиков», Патент № 2426790 «Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулеза», Патент № 2426789 «Способ повышения эффективности канамицина в отношении канамицино-устойчивых микобактерий туберкулеза»).
Сконструированы многокомпонентные нетоксичные лекарственные средства, с ускоренным выведением из организма животного для лечения трещин сосков вымени у коров, маститов, эндометритов, дерматитов (Патент № 2527330 «Способ повышения биоцидного и лечебного действия крема -суспензии с метронидазолом»).
Получен нативный аллерген для аллергической диагностики стафило-коккоза у животных с помошыо растворимых аллергеноактивных соединений без использования трихлоруксусной кислоты (Патент № 2378369 «Способ получения стафилококкового аллергена»).
Предложен новый безопасный и эффективный способ выделения чистой культуры микобактерий с помощью лимонной и янтарной кислот, перекиси водорода (Патент № 2455361 «Способ выделения чистой культуры микобактерий туберкулёза»),
1.5. Практическая значимость работы.
Экспериментально обосновано применение разработанных технологических решений при производстве высокоэффективных анатоксин-вакцин для профилактики и лечения заболеваний бактериальной этиологии сельскохозяйственных животных.
Разработан н апробирован состав универсальной синтетической питательной среды для оптимального накопления стафилококков, сальмонелл, кишечной, синегнойной палочки (Pseudomonas auroginosa), протея с целью получения энтеротоксинов и способ их детоксикации и полимеризации для получения биопрепаратов.
Проведённые испытания в животноводческих хозяйствах стафилококковой, коли-сальмоиеллёзной, стафило-стрептококковой, коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин, подтвердило их лечебно-профилактическую эффективность.
При производстве анатоксин-вакцин предложены способы и средства детоксикации, полимеризации бактериальных токсинов, позволяющие обеспечить устойчивость вакцинированных животных к воздействию бактерий, снизить токсичность, и повысить лечебно-профилактическую эффективность биопрепаратов.
Разработаны и утверждены в установленном порядке комплекты нормативных документов на производство, контроль и применение лечебно-профилактических препаратов, изготовленных на основе токсин-продуцирующих микроорганизмов.
1.6. Положения диссертации, выносимые на защиту:
отбор штаммов микроорганизмов, обладающих высокой способностью токсинообразования;
- результаты разработки и апробации универсальной жидкой и плотной синтетической питательной среды для выращивания бактерий при производстве вакцин;
- материалы создания и апробации эффективной биологической модели для определения полноты детоксикации стафилококкового токсина;
- результаты применения стафилококковой анатоксин-вакцины и апробации лечебно-профилактических свойств при стафилококкозе птиц, маститах, заживлении ожоговых и гнойно-некротических ран, дерматитах у плотоядных;
- материалы по получению и применению стафило-стрептококковой, коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин и изучению их протективных и иммуногенных свойств;
- способ получения колибактериозной, сальмонеллёзной и комплексной коли-сальмонеллёзной анатоксин-вакцины и результаты апробации при профилактике и лечении желудочно-кишечных болезней телят, поросят колпсальмонеллёзной этиологии.
1.7. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях: международной научно-практической конференции, г. Харьков (2003,2013), международных научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, г. Санкт-Петербург (2003, 2009, 2010); Всероссийской научно-практической конференции, г. Курск (2009); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 120-летию ветслужбы Курской области, г. Курск (2003); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса», г. Курск (2008), международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», г. Курск (2008), Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины», г. Курск (2009), международной научно-практической конференции - «Научное обеспечение агропромышленного производства», Курск, 2012, на агропромышленной выставке «Золотая осень» (2009-2014 гг.).
1.8. Публикация научных исследовании. По материалам диссертации опубликовано 117 научных статей, в том числе 39 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 6 монографий, получено 28 патентов и 6 дипломов Всероссийской агропромышленной выставки - «Золотая осень» -золотая, бронзовая и серебряные медали - 2009- 2014 гг.
1.9. Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 352 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 16 рисунками и 30 таблицами. Список литературы включает 359 источников, в том числе 136 - иностранных авторов. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость: патенты, акты испытаний, проекты Технологических регламентов, проекты СТО, инструкции по применению анатоксин - вакцин и модифицированных антибиотиков, дипломы Всероссийской агропромышленной выставки -«Золотая осень»-2009- 2014 гг.
1.10. Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно и является совокупностью его многолетних научных исследований. Автором лично сформулирована проблема, постановка цели, задач исследований и их реализация. Лично автором также подобраны штаммы, оптимизирована технология производства и показана эффективность применения анатоксин-вакцин и модифицированных антибиотиков. Материалы диссертации также проанализированы и обобщены лично автором. Вклад в работу других авторов отражён в публикациях по теме диссертации.
1.11. Достоверность результатов исследований подтверждается соответствием теоретических данных с полученными результатами экспериментов и опытно-производственных испытаний. Экспериментальные данные, выводы и рекомендации основаны на общепринятых теоретических закономерностях, не противоречат и с достаточной степенью точности согласуются с общеизвестными данными, апробированы и подтверждены эффективным применением в животноводческих хозяйствах.
1.12. Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту - директору ВНИТИБП, доктору ветеринарных наук,
профессору, академику РАН А.Я. Самуйлеико. В выполнении некоторых разделов диссертации принимали участие и оказывали практическую и консультативную помощь доктор медицинских наук В.М. Коломиец и другие коллеги, за что приношу им сердечную благодарность.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена в отделе противобактерийных препаратов ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» по программам РК 01.201169495 и РК 01.200201567 (ИК 02.2.00603501). Опытно - промышленные серии биопрепаратов испытывали в ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова», в Курском научно-исследовательском институте агропромышленного производства Россельхозакадемии, на кафедре туберкулёза Курского государственного медицинского университета, в Курской областной ветеринарной лаборатории, в «Жуковской ветеринарной лаборатории» Калужской области и в животноводческих хозяйствах Белгородской, Орловской, Курской областей.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Штаммы. В исследованиях использованы: 80 штаммов эшерихий, в том числе 21 производственный, 42 музейных и 17 изолятов; 40 штаммов стафилококков, 20 штаммов сальмонелл, 3 штамма стрептококков, селекционированных по способности продуцировать факторы патогенности (токсины), 30 штаммов и изолятов синегнойной палочки, 20 штаммов и изолятов протея. Музейные культуры бактерий получены из Курской областной ветеринарной лаборатории и с кафедры микробиологии и вирусологии Курского государственного медицинского университета.
Питательные среды, наборы и реактивы. Для проведения бактериологического исследования по стандартным методикам использовали мясопептонный агар (МПА), мясопептонный кровяной агар (МПКА) и агар Эндо. В отдельных опытах в качестве селективной среды использовали агар
Плоскирева и висмут-сульфат агар, а также RVS-бульон, тетратионатный бульон Мюллера-Кауфмана, XLD, XLT агар, Rambach Agar. Для выращивания сальмонелл в больших количествах применяли жидкую среду - мясопептонный бульон с 0,5% глюкозы. Биохимические свойства культур изучали с использованием пластин биохимических энтеробактерий (ПБДЭ), СИБ, API ID 32 Е, автоматического баканализатора VITEK 2 Сотрас1 производства «BioMerieux», Франция..
Методы. Для изучения антигенной структуры, определения серогрупповой и вариантной принадлежности выделенных культур сальмонелл использовали стандартные наборы биофабричного производства агглютинирующих комплексных или поливалентных О-сывороток и монорецепторных О и Н- сывороток. Для определения серогрупповой принадлежности эшерихий применяли 0-коли агглютинирующие сыворотки Армавирской биофабрики, для выявления и количественного определения энтеротоксинов - анти-ТЛ- и анти-ТС-сыворотки производства Государственного научного Центра (ГНЦ) прикладной микробиологии, адгезивных антигенов - набор антисывороток к адгезивным антигенам эшерихий К88, К99, 987Р, F41, А20 (коли-адгезин тест) производства НПФ "Диавак". Качественную характеристику токсигенности культур эшерихий проводили по эдематозному тесту Вартаняна Ю.П. (1978). Количественное определение адгезивных антигенов проводили методом двойной радиальной диффузии в агарозе по Ухтерлони (РДП). Количественное определение токсинообразования проводили у штаммов эшерихий в РДП с анти-ТЛ- и анти-ТС-сыворотками и в тесте изолированной петли кишечника поросенка по индексу дилятации, подробно описанному в работе Пирожкова М.К., 2007. Также продукцию термостабильного токсина (ТС-токсина) выявляли на мышах-сосунах при пероральном введении, на мышах массой 14-16 г. при интраплантарном введении и на кроликах при внутрибрюшинном введении по индексу увеличения веса кишечника, отёку лап мышей н некрозу кроликов соответственно (Тугаринов О.А.,1999). Оптимальная концентрация
адъюванта определялась по ИД50 при иммунизации лабораторных животных вакцинами с различным содержанием геля гидроокиси алюминия. Острую и хроническую токсичность вариантов ассоциированных вакцин изучали на двух видах животных (мыши и крысы) путём морфологического исследования внутренних органов и кожи на месте инъекции.
Изучение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков проводили в отношении свежевыделенных стафилококков, сальмонелл, кишечной палочки, протея, синегнойнон палочки от павших телят, поросят, птицы; канамицино- и стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулёза человеческого и бычьего видов, выделенных от больных туберкулезом животных и человека на кафедре туберкулеза Курского государственного медицинского университета и межрайонных ветеринарных лабораторий.
Определение чувствительности штаммов бактерий к антибиотикам проводили методом диффузии в агар (среда АГВ) при помощи стандартных дисков с антибиотиками. Культивирование стафилококков, сальмонелл, эшерихий, протея, синегнойной палочки, стрептококков осуществляли стационарным методом в стеклянных бутылях объёмом 0,5, 5,0 и 20 дм1, модернизированных реакторах объёмом 600 и 1000 дм3 и биореакторе «Торнадо» объёмом 200 дм3. Концентрацию микроорганизмов оценивали по стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича, морфологию - микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Изготовление и контроль посевных материалов микроорганизмов осуществлялись в соответствии с требованиями ГОСТ Р 52249-2009. Ростовой потенциал и физиологическую активность бактерий оценивали графическим методом по продолжительности фаз приспособления (t,iar) и логарифмического роста (t„„), максимальной удельной скорости роста (шах) бактерий и времени одной генерации (gM,m) в процессе периодического культивирования и уровню накопления микроорганизмов (Исаева З.А., 1980). Лечебную эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины проверяли при лечении коров, больных
маститами, ожоговых, рваных ран и дерматитов у собак, а также в качестве иммуномодулятора. Безвредность приготовленных вакцин проверяли на 100 белых мышах, 80 морских свинках, 300 поросятах и 102 телятах. Контролем эффективности иммунного ответа на активную иммунизацию служил рост титра специфических антител в сыворотке крови, определяемый реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с использованием специфических эритроцитарных диагностикумов: стафилококкового, протейного и синегнойного (Кунягина О.В. ,1996).
Результаты исследований подвергали статистической обработке с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m) и достоверности разницы (р) между средними величинами по методу Стьюдента-Фишера. Отличие сравниваемых показателей считали достоверными, если уровень вероятности не превышал р<0,05 (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962; Лакин Г.Ф.,1990; Венедягин Г.В., 1973).
Расчёты и построение технологических графиков осуществляли с помощью пакета MICROSOFT OFFICE EXCEL 2010, построение технологических и аппаратурных схем - с помощью программы Microsoft Office VISIO 2010.
Структурно-методологическая схема диссертационной работы представлена на рисунке 1.
Этапы разработки
Исследования
Форма завершения
Поисковые научные исследования
Анализ традиционных технологий получения лечебно-профилактических препаратов
Обеспечение
качества выпускаемых препаратов
Разработка технологической схемы получения лечебно-профилактических препаратов
Проектная документация и проект регламента производства
Разработка и усовершенствование технологических этапов получения лечебно-профилактических препаратов
I
3
Разработка модифицированных антибиотиков
Сальмонеллы
Эшерихии
Разработка и
совершенствование
анатоксин-вакцин
Стафилококки
Стрептококки
Протей
Синегнойная палочка
Изготовление и контроль посевного материала
Подбор оптимального состава питательных сред
Оптимизация режимов культивирования
Инактивация, детоксикацня, полимеризация и эффективный способ оценки полноты инактивации токсинов бактерий
Концентрирование
X
Изготовление опытно-промышленных серий препарата
Технологический регламент, проект СТО, временная инструкция
Испытание препаратов в хозяйствах Акты испытаний
ТУ, Методические положения, Инструкция по применению
Разработка и утверждение НД
Рис. 1. Структурно-методологическая схема диссертационной работы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Получение и изучение лечебно-профилактической эффективности анатоксин-анимикробных вакцин
Обобщённая технология получения лечебно-профилактических противобактерийных препаратов представлена на рисунке 2.
Дмвнтегратор
Рис.2. Технология получения лечебно-профилактических биопрепаратов против бактерийных инфекций
3.1.1. Разработка и характеристика универсальной синтетической питательной среды для выращивания микроорганизмов
Известно, что мясопептонный бульон (МПБ) с глицерином является пригодным для выращивания многих микроорганизмов, и имеет следующие недостатки: нестабильность состава, не равномерность роста микроорганизмов, наличие балластных веществ и возможные аллергические проявления у вакцинированных животных. Однако для получения стрептококкового, стафилококкового анатоксина, колибактериозных, сальмонеллёзных анатоксин-вакцин, синегнойной вакцины для ветеринарных и медицинских целей по-прежнему используются мясо-гидролизатные или казеино-гидролизатные бульоны.
Поэтому нами разработана универсальная синтетическая питательная среда, лишённая вышеуказанных недостатков. Введение в состав синтетической питательной среды лимонной и янтарной кислот (ди-, трикарбоновые кислоты никла Кребса) способствовало повышению обмена веществ у микроорганизмов, улучшению растворимости химических ингредиентов и образованию цитрата аммония при нейтрализации лимонной кислоты 5-10%-ным раствором аммиака. Образование цитрата аммония как азотистого соединения, необходимого для построения белковых молекул микроорганизмов, способствовало улучшению обмена веществ и росту микробной биомассы. Введение в состав питательной среды глицина в сочетании с аспарагином (амид аспарагиновой кислоты) улучшало биосинтез белковых структур микроорганизмов, а хлористый натрий и фосфорнокислый натрий двузамещённый повышали буферную ёмкость и препятствовали закислению рН среды при росте бактерий. В результате было показано, что выращенные на данной среде бактериальные клетки имели типичную морфологию, культуральные и биохимические показатели, обладали выраженными ростовыми свойствами и характеризовались высокой жизнеспособностью.
Результаты роста и накопления микроорганизмов на плотной синтетической среде представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Накопление бактериальной массы при выращивании микроорганизмов на синтетической среде
№п/п Наименование микроорганизмов Сроки выращивания стационарным способом, сутки Накопление бактерий стационарным способом , млрд/см
1 Стафилококки (Золотистый) 7 7,0±0,66
12 12,0±0,46
2 Сальмонеллы 2 70,0± 1,08
3 Кишечная палочка 2 70,6± 1,04
4 протей 2 78,4±1,03
5 Синегнойная палочка 2 64,6±1,14
Для вырашивання стафилококков в составе среды увеличивали содержание хлористого натрия до 5-6 г/л и рН до 7,5-7,6 в соответствии с физиологическими требованиями этого вида микроорганизмов.
Использование глубинного метода культивирования позволило сократить длительность накопления бактериальной массы сальмонелл и эшерихий, повысить её жизнеспособность, снизить затраты на производство стандартных антигенов. В дальнейшем была разработана, смонтирована и запущена в эксплуатацию технологическая линия, оснащенная биореактором, ёмкостями для изготовления растворов и антигенов, ультрафильтрационными установками для концентрирования и трубопроводами из нержавеющей стали для подачи и храпения растворов и антигенов.
Таблица 2
Характеристики роста протея, сальмонелл и эшерихий при периодическом культивировании микроорганизмов
Наименование бактерий Наименование показателей
Максимальная удельная скорость роста (Ц.шх), 1/чаС Минимальное время генерации (ё,тп), час Продолжительность логарифмической фазы роста (Ьи-), час Продолжительность фазы приспособления Опаг ), час
з.аигеиз. 0,33 1,87 3,4 0,18
8.1урЫтигшт 2,21 0,31 3,3 0,22
Е. соК 2,04 0,33 3,5 0,19
Результаты периодического культивирования микроорганизмов, предоставленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что предложенная технология периодического культивирования микроорганизмов достаточно эффективна: минимальны фазы приспособления (Ц„) и время одной генерации эффективные удельная скорость роста (р,шх) и длительность фазы экспоненциального роста (^ш) бактерий.
Таким образом, синтетическая питательная среда пригодна для выращивания многих патогенных микроорганизмов.
3.1.2. Получение анатоксин-вакцины против эшерихиоза сельскохозяйственных животных
Совершенствование существующих и разработка новых средств специфической профилактики и терапии колибактериоза в первую очередь вклю-
чала селекцию производственных штаммов эшерихий, входящих в состав препарата. Известно, что селекционировать штаммы можно по различным признакам: форме и структуре колоний, вирулентности, антигенной и имму-ногенной активности и т.д. В данном случае была проведена направленная селекция штаммов эшерихий по степени продукции ими энтеротоксинов -основных иммунологически важных факторов патогенности. Качественную характеристику токсигенности отобранных штаммов эшерихий осуществляли на белых мышах по эдематозному тесту, в котором наблюдалось синерги-ческое действие как ТЛ, так и ТС токсинов. С целью исключения действия эндотоксина, культуры штаммов предварительно центрифугировали для удаления бактериальных клеток и в опыте использовали только культуральную жидкость. Культуральная жидкость, лишённая бактериального компонента, служила материалом, содержащим экзотоксин E.coli. Исследования уровня продукции эшерихиями термолабильного токсина проводили в тесте изолированной петли кишечника у всех отобранных штаммов эшерихий независимо от результатов определения их токсигенности, полученных в эдематозном тесте. При исследовании культуральной жидкости выбирали в качестве производственных те штаммы, у которых титр продукции термолабильного и термостабильного токсинов с моноспецифическими сыворотками в РДП был не ниже 1:4 и 1:16 соответственно. Для определения иммуногенной активности вакцин из штаммов, отличающихся интенсивностью токсинообразования, были приготовлены разные вакцины: две содержали разное количество анаэ-кзотоксина, обработанного 0,2% -ным раствором формалина и 0,5±0,1%-ным этоннем, и одна вакцина, не содержащая ТС и ТЛ токсины. Полная и необратимая детоксикации и полимеризации энтеротоксинов пугём использования на первой стадии детоксикации 0,2% -ного раствора формалина вместо 0,8±0,2%-ного н во второй стадии 0,5±0,1% -ного этония, обладающего не только детоксицирующими, но консервирующими, бактерицидными и фун-гицидными свойствами, позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективной и безвредной колибактериозной анатоксин-вакцины без ртутьсодержащего консерванта - мертиолята. Полимеризация
анаэкзотоксина позволяла получить иммуногенный термостабильный энте-ротокхчш - гаптен по своей природе, так как он является одним из ведущих факторов в патогенезе колидиарей телят и ягнят. Моновакцина, содержащая анаэкзотоксин, обладала большей иммуногенной активностью, чем моновакцина, не содержащая анаэкзотоксин. В таблице 3 представлены результаты иммунизации мышей экспериментальными вакцинами, которые показали, что 50 % иммунизирующая доза для мышей у экспериментальных вакцин составила соответственно 0,039, 0, 169 и 0,112 см3.
Таблица 3
Иммуногенная активность вакцин в зависимости от содержания анаэкзотоксина
Состав Доза, Коли- Титр Средний Результат ИД 50,
вакцины см3 чество индекс дилята- заражения см3
мышей токсинов ции мышей
в (РДП) вирулентным
опыте, штаммом
штуки живы пали
ТЛ ТС
Штамм с 0,5 5 1:16 1:4 1,76±0,16 4 1 0,039
экзотоксином 0,1 4 1
0,025 3 2
0,05 1 4
Штамм с 0,5 5 1:4 1:2 0,82±0,07 4 1 0, 169
экзотоксином 0,1 2 3
0,025 2 3
0,05 1 4
Штамм без 0,5 5 нет нет 0,32±0,05 2 3 0,112
экзотоксина 0,1 2 3
0,025 1 4
0,05 0 5
КОНТРОЛЬ - 10 - - - 0 10
Эффективность вакцины против эшерихиоза животных была проверена в остром опыте на ягнятах, телятах и мышах. Результаты испытания эффективности вакцины в остром опыте представлены в таблице 4, которые показали высокую выживаемость животных, хотя незначительные случаи заболевания всё же отмечались.
Эффективность анатоксии-вакцины в производственном опыте __Таблица 4
Вид животного Количество Доза вакцины Заражение штаммом вирулентным Сохранность, %
голов подкожно интервал 7днен, смЗ Заболело Пало
телята 16 5,0 1 нет 100
ягнята 18 5,0 2 нет 100
мыши 10 0,3 1 2 80
Контроль
Мыши Телята 10 5 10 5 0 0
поросята 5 5 0
Испытание анатоксин-вакцины против эшерихиоза провели на 8 супоросных свиноматках и 10 стельных коровах. Супоросным свиноматкам вакцину вводили подкожно за два месяца до опороса двукратно с интервалом 7 суток, а стельным коровам трехкратно по 7,0 см3 с интервалом 7-9 суток. У привитых животных не было абортов, в местах введения вакцины некротических поражений не отмечено. У народившегося молодняка не отмечалось симптомов характерных для развития колибактериоза.
Анализ протективной активности колибактериозной вакцины в зависимости от способа вакцинации поросят представлен в таблице 5.
Из данных, представленных в таблице 5, следует, что колибактериозная анатоксин-вакцина обеспечивала защиту поросят при энтеральиой и подкожной вакцинации. Однако, при энтеральиой вакцинации защитный эффект составил свыше 90%, а при подкожной - в пределах 82%.
Таблица 5
Протективная активность колибактериозной вакцины в зависимости от способа вакцинации
способ вакцинации поросят Кол-во голов Способ заражения Заболело пало
Подкожно 15X104. Е. соН Энтерально с водой 15X104. Е. сой
Подкожно двукратно в объеме 10 мл 79 + 12 2
контроль И + - 11 4
Энтерально с водой в течение 7 суток в объеме 30-40мл 172 + 13 3
контроль 9 - + 9 3
Таким образом, возможность полной и необратимой детоксикации, полимеризации энтеротоксинов эшерихий путём использования на первой стадии детоксикации 0,2% -ного раствора формалина вместо 0,8±0,2%-ного и во второй стадии 0,5±0,1%-ного этония, обадающего одновременно консервирующими, бактерицидными и фунгицидными свойствами, позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективной и безвредной колибактериозной анатоксин-вакцины без ртутьсодержащего консерванта - мертиолята.
При изучении протективной активности инактивированной колисальмонеллезной анатоксин-вакцины установлена устойчивость вакцинированных 47 телят и 58 поросят к подкожному заражению 1,0 мл суспензии патогенных сальмонелл и кишечной палочки, содержащих по 5,0 х105 - 1,0x106 микроорганизмов и при однократной выпойке с водой вакцинированным 42 телятам и 75 поросятам 2,0 мл суспензии сальмонелл и 2,0 мл кишечной палочки, содержание микроорганизмов в которых составляло 1,0х109/мл.
3.1.3. Получение и изучение лечебно-профилактической эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины (САВ)
Сравнительная оценка существующих способов получения анатоксинов и инактивированных анатоксин-вакцин и изыскание новых средств детокси-кации и полимеризации выявил эффективность глутарового альдегида отдельно и в сочетании с бесчетвертичными аммонийными соединениями, в частности этония, биопага - Д, алкилдиметилбензиламмония и т.д., которые были взяты для получения эффективной стафилококковой анатоксин-вакцины. Повышение протективной, лечебной эффективности и безвредности анатоксин-вакцины достигается путём замены канцерогенного и недостаточно эффективного в отношении стафилококковых энтеротоксинов формальдегида на безвредный глутаровый альдегид в 0,2-0,3%-ной концентрации с последующей обработкой 0,2%-ным раствором этония или 0,2%-ньш раствором алкилдиметилбензиламмония для детоксикации и полимеризации комплекса стафилококковых токсинов, сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 3-5 мг/мл.
Лечение птицы при стафшюкоккозе
У больных 15-30 дневного возраста бройлеров отмечено поражение суставов, падёж, от больной птицы выделены плазмокоагулпрующие и токсигенные золотистые стафилококки. Аэрозольное распыление вакцины в пяти цехах с 40 тысячами цыплят проводили из расчёта 1,5 литра на птичник обьёмом 5000 м3 двукратно с интервалом 7-9 дней.
После вакцинации заболевания и надежа птицы не отмечено.
Контрольное подкожное заражение вирулентными стафилококками ЮОвакцинированных бройлеров после аэрозольного распыления вакцины не вызвало заболевания и падежа птицы.
Лечение ожоговых, рваных ран у свинеи и собак
Изучение эффективности комплексной анатоксин-вакцины при лечении
гнойно-некротических и ожоговых ран проводили в сравнении с наиболее
распространенными традиционными методами и средствами лечения гнойно-некротических ран у свиней и плотоядных.
Гнойно-некротические и ожоговые раны у свиней и плотоядных вызывали приложением на 2-3 минуты в выбритые поверхности тазовых конечностей нескольких слоев марли, смоченной 2-3%-ным раствором едкого натрия и 2-3%-ным раствором карболовой кислоты.
Результаты лечения представлены в таблице 6, из которых следует, что стафилококковая анатоксин-вакцина при лечении ожоговых ран более эффективна по сравнению с барсучим жиром и кубатолом.
Таблица 6
Сравнительная эффективность лечения гнойно-некротических, ожоговых ран у свиней и плотоядных с помощью CAB, барсучьего жира с антибиотиками и
кубатолом
№ п/п Способ и средство лечения Характер и сроки заживления ожоговых ран диаметром 5-7 см
1 CAB в виде примочек 2 раза в день Грануляционная ткань появлялась на 7-8 день лечения и покрывала всю раневую поверхность к 20 дню
2 Барсучий жир с антибиотиками и стрептоцидом через день Грануляционная ткань появлялась на 10-12 день лечения н покрывала всю раневую поверхность к 25 дню
3 CAB в смеси с диметилсульфоксидом в соотношении 1:1 - ежедневно Грануляционная ткань появлялась на 7-9 день лечения и покрывала всю раневую поверхность к 20 дню
4 Аэрозоль кубатола через 24 часа ежедневно Грануляционная ткань появлялась на 10-11 день лечения н покрывала всю раневую поверхность к 20-23 дню
5 CAB в смеси со стрептококковой анатоксин-вакциной в соотношении 1:1 ежедневно в виде примочек Грануляционная ткань появлялась на 6-7 день лечения и покрывала всю раневую поверхность к 20 дню
Из полученных результатов следует, что предложенный метод изготовления стафилококковой анатоксин-вакцииы позволил получить эффективный лечебно-профилактический биопрепарат.
Таким образом, стафилококковая анатоксин-вакцина, изготовленная путём выращивания стафилококков на синтетической среде, детоксикации, инактивации энтеротоксинов вначале 0,2-0,3 %-ным раствором формальдегида или 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида, а затем
0,2-0,3% раствором этония, обладала высокими лечебно-профилактическими свойствами и может быть рекомендована в ветеринарной практике.
3.1.4. Изучение эффективности применения стафило-стрептококковой, коли-стафило-нротейио-сннегнонной анатоксин-вакцин
Учитывая, что большинство инфекционных болезней протекает на фоне ассоциации бактерий, были изготовлены и с успехом апробированы стафило-стрептококковая, коли-стафило-протейно-синегнойная анатоксин-вакцины не только для лечения коров, больных маститами, поросят-бропхопневмонией, но и при гнойно-некротических поражениях кожи, трофических язвах, трещинах сосков вымени и дерматитах плотоядных.
Таблица 7
Сравнительная оценка эффективности анатоксин-вакцины при лечении коров, больных
маститом
№ п/п Количество животных Название препарата и способ лечения Продолжительность лечения(дней) Количество выздоровевших животных
1 30 Стафилококковая анатоксин-вакцина (CAB) интрацпстернально в сосок по 4-5 мл ежедневно 7-8 28
2 30 CAB с 10 мг/л коллоидными нонами серебра 5-6 27
3 30 Мастисан - А ежедневно по 15 мл 9-11 22
4 30 Стафпло-стрептококковая анатоксин-вакцина 6-7 28
5 30 коли-стафнло-протенно-спнегноиная анатоксин-вакцина 5-6 29
Из данных, представленных в таблице 7, следует, что CAB при лечении коров, больных катаральным и гнойно-катаральным маститом превосходит терапевтическую эффективность мастисана-А на 25-30%. При этом следует учитывать, что мастисан - А содержит антибиотики, которые выделяются с
молоком в течение нескольких дней. В то же время при применении САВ молоко можно использовать без ограничения.
Более эффективным оказалось применение стафилококковой анатоксин-вакцины (САВ) в смеси с диметилсульфоксидом в соотношении 1:1, стафило-стрептококковой и коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин. Повышение лечебно-профилактической эффективости коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцины при её изготовлении было достигнуто заменой формальдегида на раствор глутарового альдегида, применением раствора этония или Биопага-Д или алкилдиметилбензиламмония.
Характерным показателем качества молока является уровень соматических клеток. Количество соматических клеток в молоке, выдоенном из вымени коров, вылеченных от мастита разработанными нами вакцинами, колебалось между 104 и Ш5 в 1 см3. В тоже время в молоке больных маститом коров выявляли не менее 6,0х105 соматических клеток в 1 см3, что является недостаточным для технологии получения качественных молочных продуктов (РЬПро! N. в 2005).
Специфическую профилактику бронхопневмонии и бронхита телят проводили стафило-стрептококковой (39 голов) и ассоциированной колн-стафило-протейно-синегнойиой анатоксин-вакцинами (40 голов) в объёме 5,0 мл путём двукратного подкожного введения с интервалом 13-15 суток с одновременным индивидуальным аэрозольным распылением биопрепаратов в объёме 7-10 мл теленку. При подозрении на заболевание телят парагриппом и инфекционным ринотрахеитом с лабораторным подтверждением диагноза проводили дополнительно вакцинацию телят соответствующими противовирусными моновакцинами. Наблюдение за телятами осуществляли в течение 3-х месяцев. При этом установлено, что среди больных телят (40 гол.) бронхопневмонией после вакцинации анатоксин-вакцинами падежа и рецидивов заболевания не выявлено, клинических симптомов пневмонии не отмечено.
3.2. ПРИМЕНЕНИЕ НОВОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ АЛЛЕРГИИ
В настоящее время общепринятых схем и способов сенсибилизации животных нет. В то же время, предложенный авторами (Бырдаров,1965, Беклемишев Н.Д.,1985; Фрадкин В.А., 1990 и др.) метод сенсибилизации морских свинок при стафилококкозе с использованием неполного адъюванта Фрейнда, ланолина, парафина не получил практического применения, так как он неизбежно приводил к образованию гнойных абсцессов п гибели животных.
Для устранения указанного недостатка для сенсибилизации морских свинок была взята 5,0*106/мл взвесь инактивированиых нагреванием стафилококков, сорбированных на гидроксиде алюминия (3-5мг/мл) без компонентов адъюванта Фрейнда.
Установлено, что в течение 4-5 месяцев у сенсибилизированных морских свшюк сохраняется чувствительность кожи на введение стафилококкового аллергена, что позволяло оценить аллергенную активность биопрепарата, контролировать полноту детоксикации и инактивации стафилококковых токсинов. Внутрикожное введение стафилококкового аллергена в объёме 0,1 мл в разведении 1:10, 1:20, 1:40 вызывало у сенсибилизированных морских свинок гиперемию кожи в диаметре 11±0,5, 9,0±0,5 ; 8,0±0,5 и 7,0±0,5 мм соответственно.
Из данных, представленных в таблице 8, следует, что детокснкация и инактивация стафилококковых токсино-аллергенов 0,3%-ным раствором формальдегида или 0,2-0,3 %-ным раствором глутарового альдегида, а затем раствором 0,2-0,3 %-ного этония приводило к полной инактивации исходной аллергенной активности на внутрикожное введение 0,1 мл анатоксина у сенсибилизированных морских свинок.
Таблица 8
Оценка полноты детоксикацни и инактивации стафилококковых _токсино-аплергенов с помощью биологической модели_
№ п/п Наименование препарата Величина диаметра воспалительных реакций у морских свинок на внутрнкожное введение стафилококковых токсино-аллергенов (мм )
Раствор без разведения 1:10 1:20 1:40
1 Стафилококковый токсино-аллерген до детоксикацни 11 ±0,5 9,0±0,5 8,0±0,5 7,0±0,5
2 Стафилококковый токсино-аллерген после детоксикацни 0,3% раствором формальдегида 9,0±0,5 7,0±0,5 Реакция отсутствует Реакция отсутствует
3 Стафилококковый токсино-аллерген после детоксикацни 0,3% раствором формальдегида ( или глугарового альдегида )с 0,2% раствором этония Реакция отсутствует Реакция отсутствует Реакция отсутствует Реакция отсутствует
Сорбированный на гндроксиде алюминия, токсин стафилококков у
сенсибилизированных морских свинок не вызывал образование гнойных
абсцессов на месте введения, а состояние чувствительности к
стафилококковому аллергену по величине диаметра воспалительной реакций
(гиперемии кожи) позволяло определить аллергенную активность
биопрепарата и изучить полноту детоксикацни и инактивации
стафилококковых анатоксинов для получения безопасной стафилококковой
анатоксин-вакцины.
3.3. ПОЛУЧЕНИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИБИОТИКОВ И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ЛЕЧЕБНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ
Известно несколько механизмов приобретённой резистентности бактерий к антибактериальным средствам, среди которых наиболее важными являются: изменение проницаемости клеточной стенки бактерий (модификация пориновых каналов) для антибактериальных препаратов;
модификация клеточных мишеней действия антибиотиков (пенициллины, макролиды), например, 50 S-субъединнцы рибосом (И.А. Гучев, H.A. Гришина, 2006); продукция бактериями ферментов - бега-лактамаз, разрушающих бета-лактамное кольцо пенициллинов, цефалоспоринов, карбапенемов; активное выведение антибиотика (efflux) из бактериальной клетки (Л.С. Стручанский, Ю.Б. Белоусов, С.Н. Козлов, 2000; Л.С. Стручанский, 2000).
В целом антибиотики - это токсические вещества, продуцируемые микроорганизмами, в основном плесневыми грибами и актиномицетами. В процессе их применения у патогенных микроорганизмов, в том числе и у кишечной палочки, появились ферменты, расщепляющие антибиотики. Снижение токсичности антибиотиков, их устойчивость к действию бактериальных ферментов проводили по принципу получения анатоксинов, то есть путём обработки ряда антибиотиков 0,1-0,2%-ным раствором формальдегида или 0,1-0,2%-ным глутарового альдегида отдельно, а в последующем для полноты детоксикации и полимеризации, повышения эффективности дополнительно использовали второй детоксикатор — этоний или другое подобное бисчетвертичное аммониевое соединение.
Приготовленные детоксикацией и полимеризацией линкоспектин, байтрил, энрофлоксацин, эритромицин, тетрациклин, гентамицин, стрептомицин, канамицин, амоксициллин, левомицетин, нистатин и другие сохраняли прозрачность, не изменяли цвет, не вызывали некротических изменений на месте введения у морских свинок, кроликов, телят и поросят и клинически выраженных токсических признаков у животных.
Полученные таким образом антибиотики назвали модифицированными, положительные результаты применения таких модифицированных антибиотиков позволили апробировать целый ряд подобных, о чём подробно описано в материалах диссертации (см. таблицу 9).
Изучение бактериостатического и бактерицидного действия экспериментальных (модифицированных) антибиотиков проводили в отношении свежевыделенных стафилококков, сальмонелл, кишечной
палочки, протея, синегнойной палочки, выделенных от павших телят, поросят, птицы; канамицино- и стрептомицино-устойчивым микобактериям туберкулеза человеческого и бычьего видов, выделенных от больных туберкулёзом животных на кафедре изучения туберкулеза Курского государственного медицинского университета и межрайонных ветеринарных лабораторий.
Результаты исследований представлены в таблице 9, из которых следует, что под воздействием модифицированных антибиотиков величины диаметров подавления роста (в мм) бактерий вдвое превышали подобные характеристики, полученные при воздействии обычных антибиотиков.
Таблица 9
Сравнительная оценка эффективности коммерческих и модифицированных антибиотиков по величине диаметра подавления роста микроорганизмов на
мясопептонном агаре
№ п/п Наименование антибиотика Содержание в бумажном диске, мкг Диаметры подавления роста (в мм)
8. аигеиэ Е. соП Б. (1иЫш
1 Пенициллин 10 15 18 20
2 М*-пенициллин 10 35 35 38
3 Метицнллин 10 20 25 20
4 м*-метнцнлл1ш 10 38 48 39
5 Эритромицин 15 20 25 18
6 М*- эритромицин 15 37 40 36
7 Амокснциллнн 5 20 25 18
8 М*- амокснциллнн 5 38 48 38
9 Амоксициллнн/ клавуланат 5 30 27 25
10 М*-амоксицнллнн/ клавуланат 5 56 49 47
11 Стрептомицин 10 15 22 20
12 М*- стрептомицин 10 35 39 40
13 Тетрациклин 30 20 27 25
14 М*- тетрациклин 30 39 53 48
М*-моднфнцированнып с помощью 0,2% формальдегида
В среднем на указанные коммерческие антибиотики величина диаметра задержки роста микроорганизмов вокруг бумажных дисков составляла 15-
20мм, а на аналогичные концентрации модифицированных антибиотиков -30-40 мм, т.е. вдвое больше.
Исследованиями установлено увеличение зоны задержки роста мультирезистентных E.coli к модифицированным детоксикацией и полимеризацией антибиотиков: зона задержки роста составила 0,74±0,04-0,99±0,06 см к 104 II 105 микроорганизмам в мл соответственно. Однако на коммерческие антибиотики зона задержки роста составляла 0,2±0,04 см.
В результате опытов было обнаружено отсутствие роста лекарственно-устойчивых микобактернй бычьего вида в присутствии модифицированных канамицина и стрептомицина в концентрации 10-15 мкг/мл. В гоже время на плотных и жидких питательных средах обнаруживали рост лекарственно-устойчивых микобактернй в присутствии обычных коммерческих канамицина и стрептомицина (в концентрации 10-15 мкг/мл и значительно выше 45-60, 100, 150 мкг/мл). Подкожное ежедневное введение модифицированного стрептомицина в течение 30 суток купировало гнойно-кавернозные поражения печени, селезёнки и лёгких у морских свинок, после заражения 0,1-1,0 мг микобактериями туберкулеза бычьего вида в течение 90 суток (срок наблюдения).
Сравнительная оценка спектра биоцидного действия коммерческого и модифицированного левомицетина, представлена в таблице 10.
Из данных, представленных в таблице 10, следует, что модифицированный левомицетин подавлял рост бактерий, оказывал вирулицидное действие к поксвирусам, парвовирусу собак, панлейкемнп кошек и фунгицидное действие по отношению к плесневым грибам в минимальных концентрациях.
Исследовали биоцидное действие водного раствора, содержащего 0,1%-ный глутаровый альдегид, 0,1%-ный алкилдиметилбензиламмоний хлорид, 2%-ный этоннн, 0,2%-ный метронидазол в отношении микроорганизмов: свежевыделенных и лабораторных культур стафилококков, кишечной палочки, сальмонелл, Asp. niger, Asp. Flavus,
возбудителей фнброматоза и миксоматоза кроликов, вирусов чумы и энтерита собак, панлейкемии кошек и инфекционного рииотрахеита крупного рогатого скота, содержащих 103-105 инфекционных доз в 1 мл.
Таблица 10
Бпоцидное действие коммерческого и модифицированного левомицетииа
Активность в отношении возбудителей Количество микроорганизмов, микробных тел/мл или 106ИД5о/мл Левомнцетин модифицированный, мкг/мл Коммерческий левомицетпн, мг/мл
S.aureus 105 250-500 1-1,5
E.coli ш5 200-300 1,0-1,2
S.enteriditis 103 250-350 1,2-1,3
Парвовирус собак Ю6ИД50/МЛ 250-300 Не действует
Поксвирус миксоматоз Ю6ИД50/МЛ 200-250 I le действует
Asp.niger Сплошной рост 10-25 Не действует
Asp.flavus Сплошной рост 10-25 Не действует
Примечание: ИДзо-содержание инфекционных доз в мл культуральнон жидкости
В результате было установлено, что биоцидное действие такого многокомпонентного препарата проявляется в отношении указанных микроорганизмов при экспозиции in vitro в течение 20-30 минут. В дальнейшем были сконструированы нетоксичные многокомпонентные лекарственные средства, содержащие этоний, глутаровый альдегид, хлоргексидин, алкилдиметилбензиламмоний хлорид, метронидазол, Биопаг-Д, диметилсульфокспд для лечения трещин сосков вымени у коров, маститов, эндометритов, дерматитов, гнойно-некротическтгх и ожоговых поражений кожи. Лекарственные средства обеспечивали биоцидное действие на вирусы, аэробные и анаэробные микроорганизмы, споры, плесневые грибы, одновременно ускоряли регенерацию тканей, и имели
сокращённый период полувыведения из организма животного, что позволило предложить для практики новую лекарственную форму - крем-суспензию.
Таким образом, используемый способ и средства детоксикацни, полимеризации антибиотиков позволили обеспечить устойчивость модифицированных антибиотиков к бактериальным ферментам, снизить токсичность, повысить их бактерицидную, фунгицидную, вирулицидиую активность и соответственно лечебную эффективность.
3.4. Результаты разработки и апробации лекарственных препаратов без антибиотиков для лечения коров, больных маститом, рваных и ожоговых ран, дерматитов и экзем
Недостатком существующих линиментов, кремов-суспензий, мазей и т.д. является наличие в их составе гормонов или антибиотиков, которые негативно влияют на качество молока и молочных продуктов. В процессе исследований установлено, что прогревание 1-2% -ного этоиия с 0,1%-ным глу-таровым альдегидом не снижали их биоцидных свойств в отношении стафилококков, кишечной палочки, сальмонелл и плесневых грибов. Исходя из полученных результатов, были приготовлены мази и крема-эмульсии, содержащие 1-2 % этония, 0,1% глутарового альдегида, 80% расплавленного вазелина и 10% растительного масла или 90 мл геля. После расфасовки мази в баночки, шприцы, тубы препараты не прорастали посторонней микрофлорой, сохраняли внешний вид при хранении от 5°С до 25°С в течение 3-х лет. Мази с 0,3-0,2% -ным этонием и 0,1% -ным раствором глутарового альдегида ускоряли заживление ожоговых и рваных ран, дерматитов, экзем и лечение коров, больных маститом. Полученные результаты и апробация мазей и кремов-суспензий при лечении коров, больных маститом, а также рваных и ожоговых ран, дерматитов, экзем обнадёжили перспективу создания лекарственного средства без антибиотиков. В последующем были изготовлены и успешно апробированы кремы-эмульсии с диметилсульфоксидом и 5-10 мг/л коллоидными ионами серебра. Применение геля с коллоидными ионами серебра 10
мг на 1 л 0,1%-ного глутарового альдегида и 2%-ного этония позволяло в два раза ускорить процессы заживления рваных и ожоговых ран, дерматитов, экзем у плотоядных, а также способствовало быстрому лечению коров, больных разными формами мастита.
4. ВЫВОДЫ
1. Разработана универсальная синтетическая питательная среда, рациональный состав которой обеспечивал стабильное накопление микроорганизмов: стафилококков и стрептококков - 11-12х109/мл, сальмонелл и кишечной палочки - до 70±10 ><109/мл, сенной палочки - В. БиЫШз и лактобактерий до 90-100 хю9/мл, протея до 78,4±1,03 хЮ'/ш и синегнойной палочки до 64,б±1,14 х109/мл микробных клеток.
2. Проведённая сравнительная оценка известных детоксикаторов бактериальных токсинов и испытание новых выявила высокую эффективность этония (1,2-этилен-бис-(М-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид), Биопага-Д и алкнлдиметилбензиламмопия хлорида. Предложена рациональная технология изготовления эффективных и безвредных анатокснн-вакцин без ртутьсодержащего консерванта -мертиолята, включающая использование на первой стадии детоксикации 0,2% -ного глутарового альдегида вместо 0,8±0,2%-ного раствора формалина и во второй стадии- 0,5±0,1% -ного этония, обладающего одновременно консервирующими, бактерицидными и фунгицидными свойствами.
3. Стафилококковая анатоксин-вакцина, полученная вышеуказанным методом, способствовала ускоренному заживлению ран, обеспечивала лечение маститов у коров при ежедневном интрацистернальном введении в каждый сосок вымени в объёме 3-5мл в течение 4-5 суток и профилактику птицы от стафилоккоза путём 2-х кратного аэрозольного распыления в течение 40-50 минут с интервалом 7-9 суток в объёме 1,5 л на птичник площадью 5000м2 с 40 тысячами цыплят 15-30 дневного возраста.
4. Стафило-стрептококковая н коли-стафило-протейно-синегнойная анатоксин-вакцины обеспечивали ускоренное заживление гнойно-некротических и трофических поражений кожи, дерматитов и проявляли лечебно-профилактическую эффективность у коров, больных маститом. Вакцины помимо лечебно-профилактического действия оказывали существенное влияние на качество молока, уменьшая в нём количество соматических клеток благодаря повышению устойчивости к условно-патогенным и специфическим возбудителям мастита. Поэтому в комплекс мер, применяемых для профилактики маститов, наряду с технологическими приёмами необходимо включать метод иммунопрофилактики, который обеспечивает получение качественного молока благодаря не только повышению уровня защищающих специфических антител, но и способствует эффективному фагоцитозу и нейтрализации бактериальных токсинов.
5. Полимеризация энгеротоксинов позволяла придать иммуногенность термостабильному энтеротоксину - гаптену по своей природе и одному из ведущих факторов в патогенезе колидиарей телят и яг нят. Колибактериозная и сальмонеллёзная анатоксин-вакцина отдельно и колисальмонеллёзная вакцина обеспечивали защиту животных от экспериментального подкожного и орального заражения энтеропатогенными культурами Е.соП и сальмонеллами в дозе 0,5-1,0 х10л/мл микроорганизмов на одно животное.
6. Для контроля процесса полной инактивации, стандартизации стафилококковых анатоксинов, изучения аллергических реакций предложена биологическая модель аллергии. Она рекомендована для внугрикожной аллергической диагностики стафилококкоза у животных, в том числе у плотоядных и птиц. Сенсибилизация морских свинок 5,0 * 10'7мл взвесью инактивированпых стафилококков, сорбированных на гидроксиде алюминия (3-5мг/мл), путём подкожного введения обеспечивала чувствительность животных на внутрнкожное введение 0,1мл стафилококкового анатоксина цельного, в разведении 1:10 или 1:20 с образованием гиперемии кожи в диаметре 11,0±0,5, 9,0±0,5; 8,0±0,5 мм соответственно. Указанная
чувствительность у морских свинок сохранялась до 5 месяцев. Способ, исключал образование гнойных абсцессов и гибель животного на внутрикожное введение стафилококкового аллергена из-за отсутствия в его составе адъюванта Фрейнда, жидкого парафина и ланолина. Стафилококковый аллерген может использоваться в цельном виде и в разведении 1:10 для внутрикожной аллергической диагностики стафилококкоза у животных.
7. Повышение эффективности антибиотиков, снижение их токсичности, приобретение устойчивости к расщепляющему действию бактериальных ферментов, создание стабильной структуры антибиотиков достигались полимеризацией и детоксикацией ряда антибиотиков с помощью 0,15±0,05%-ного раствора формалина при 40±2,0°С в течение 5-7 суток или 0,2%-ным раствором гпутарового альдегида при 40,0±2,0°С в течение 2-3 суток, а затем 0,2%-ным раствором этония. Модифицированные антибиотики благодаря полимеризации и детоксикации обладали повышенной биоцидной и лечебной эффективностью, сниженной токсичностью и аллергенностью, сохраняли прозрачность растворов в течение 3-х лет и характеризовались дополнительной вирулицидной и фунгицидной активностью.
8. Детоксикация и полимеризация стрептомицина и канамицина 0,2%-ным раствором формальдегида или 0,2%-ным раствором глутарового альдегида при 40,0±2,0ПС в течение 2-3 суток, а затем 0,2%-ным раствором этония задерживала рост стрептомицино- и канамицино-устойчивьгх микобактерий туберкулеза бычьего вида. Подкожное ежедневное введение модифицированного стрептомицина в течение 30 суток купировало гнойно-кавернозные поражения печени, селезёнки и лёгких у морских свинок, после заражения их 0,1-1,0 мг микобактериями туберкулеза бычьего вида в течение 90 суток (срок наблюдения).
9. Мази, крема-эмульсии, гели с рядом модифицированных антибиотиков (левомицетином, энрофлоксацином, тетрациклином, линко-спектином, гентамицином, метромидазолом) показали высокую эффективность при лечении ран, экзем, кератитов, трофических язв, дерматитов, гнойно-
некротических поражений кожи, маститов, эндометритов при применении в животноводческих хозяйствах.
10. Сконструированы нетоксичные многокомпонентные лекарственные средства, содержащие этоний, глутаровый альдегид, хлоргексиднн, алкилдиметилбензиламмоний хлорид, Биопаг-Д, метронидазол, диметилсульфоксид, коллоидные ионы серебра для лечения трещин сосков вымени у коров, маститов, эндометритов, дерматитов, ожоговых поражений кожи и экзем. Лекарственные средства обеспечивали биоцидное действие на вирусы, аэробные и анаэробные микроорганизмы, споры, плесневые грибы, ускоряли регенерацию тканей и имели сокращённый период полувыведения из организма животного.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
На базе ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова» создано опытно-промышленное производство лечебно-профилактических препаратов.
Разработанный и апробированный состав универсальной синтетической питательной среды рекомендован для оптимального накопления стафилококков, сальмонелл, стрептококков, протея, кишечной, синегнойной палочки с целью получения эффективных лечебно-профилактических биопрепаратов.
Предложенная биологическая модель аллергии может быть использована для оценки аллергенной активности биологических препаратов.
Проведённые испытания стафилококковой, колисальмонеллёзной, стафилострептококковой, коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин, подтвердили их лечебно-профилактическую эффективность.
Для профилактики и лечения гнойно-септических болезней, маститов предложены ассоциированные вакцины, включающие анатоксины эшерихий, стрептококков, стафилококков, протея и синегнойной палочки.
Для повышения эффективности антибиотиков, снижения их токсичности и аллергизации организма, приобретения устойчивости к расщепляющему действию бактериальных ферментов, созданию стабильной структуры предложен новый подход: полимеризация и детоксикация антибиотиков. Апробированные мази и суспензии с модифицированными антибиотиками показали высокую лечебную активность и безвредность.
Представленные технологии получения новых эффективных лечебно-профилактических препаратов, в том числе многокомпонентных, включающих коллоидные ионы серебра, предлагаются для практического использования в ветеринарии.
Для практического использования разработаны и утверждены в установленном порядке следующие нормативные документы: «Проект опытно-промышленного регламента на производство
левомицетиноэтониевого крема-эмульсии и раствора модифицированного левомицетина»; «Проект опытно-промышленного регламента на производство модифицированного линко-спектина с этонием и диметилсульфоксидом на мазевой основе»; «Проект опытно-промышленного регламента на производство глутароэтониевого крема-эмульсии»; «Проект опытно-промышленного регламента на производство модифицированного стрептомицина и канамицина»; «Проект опытно-промышленного регламента на производство универсальной синтетической питательной среды для выращивания микроорганизмов»; Проект Стандарта организации «Стафилококковая анатоксин-вакцина», Проект Стандарта «Колибактериозная анатоксин-вакцина для оральной и подкожной вакцинации», Проект Стандарта «Универсальная синтетическая питательная среда для выращивания микроорганизмов»; Проект Стандарта «Глутароэтониевый крем-эмульсия»; «Проект Опытно-промышленного регламента на производство ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней животных»; Проект Стандарта «Ассоциированная анатоксин-вакцина для профилактики и
лечения гнойно-септических болезней животных»; «Временное наставление по применению колибактернозной анатоксин-вакцины для оральной и подкожной вакцинации поросят», «Инструкция по применению стафилококковой анатоксин-вакцины», «Инструкция по применению стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины», «Временное наставление по применению экспериментального энрофлоксацина и амоксициллина»; «Инструкция по применению модифицированного линко-спектина с этонием и диметилсульфоксидом на мазевой основе», «Наставление по применению левомицетино-этониевого крема-эмульсии и раствора левомицетина».
6. СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
6Л. Список научных публикации в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК
1. Евглевскин, Д.А. Особенности повышения эффективности средств специфической профилактики и терапии колибактериозов и сальмонеллезов/ Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова//Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2009. - №1-2. - С.97-99.
2. Евглевскин, Д.А. Совершенствование средств диагностики, специфической профилактики и терапии больных колибактериозом животных/ Д.А. Евглев-ский, М.А. Смирнов, Е.А. Стрекалова, В.А. Кузьмин//Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2009. - №1-2. - С.99-103.
3. Евглевскнй, Д.А. Совершенствование средств специфической профилактики лейкоза крупного рогатого скота/ A.A. Евглевскнй, В.А. Кузьмин, Д.А. Евглевскнй// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -
2009. - №4.-С. 100-102.
4. Евглевскнй, Д.А. Новые подходы к лечению репродуктивных органов и молочной железы/ A.M. Коваленко, Д.А. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА - 2010. - №5. - С.75-76.
5. Евглевскин, Д.А. Современные аспекты повышения эффективности антибиотиков/ Д.А. Евглевскин, A.A. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА -
2010. - №6. - С.64-65.
6. Евглевскнй Д.А. Повышение эффективности канамицина к мнкобактериям туберкулеза/ Д.А. Евглевскин, A.A. Евглевскин, Смирнов И.И.// Вестник Курской ГСХА - 2011. - №1. - С.63-64.
7. Евглевский, Д.А. Научно-биотехнологическое обоснование повышения эффективности и снижение токсичности антибиотиков/ Д.А. Евглевский,
A.A. Евглевский// Вестник Курской ГСХА - 2011. - №2. - С.69-71.
8. Евглевский, Д.А. Иммуногенные и протективные свойства вакцины для профилактики лейкоза крупного рогатого скота/ A.A. Евглевский, Д.А. Евглевский, Сычев М.Д., Коваленко A.M.// Вестник Курской ГСХА - 2011. -№3. - С.68-69.
9. Евглевский, Д.А. Иммунологические сдвиги при сальмонеллёзе /A.M. Коваленко, Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев//Вестник Курской ГСХА- 2011. - №4. - С.61-62.
10.Евглевский, Д.А. Универсальная синтетическая среда для выращивания патогенных и пробиотических микроорганизмов при получении биопрепаратов/ Д.А. Евглевский, A.A. Евглевский, В.В. Семенютин, И.И. Смир-нов//Вестник Курской ГСХА- 2011. - №4. - С.63-64.
11.Евглевский, Д.А. Создание биологической модели аллергии к стафилококковому аллергену/Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев//Вестник Курской ГСХА-2011 .-№5. -С.71-73.
12.Евглевский, Д.А. Разработка и апробация средства и способов аллергической диагностики, специфической профилактики и терапии стафилококкозов у животных./Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев// Вестник Курской ГСХА-2011.-№5. —С.75-77.
13.Евглевский, Д.А. Повышение бактерицидного, вирусоцидного и фунгицид-ного действия антибиотиков с помощью глутарового альдегида и этония/ Д.А. Евглевский /Вестннк Курской ГСХА-2011.-№6. -С.72-74.
14.Евглевский, Д.А. Физиологические свойства стафилококков, сальмонелл и кишечной палочки, подвергнутых магнитному воздействию/Д.А.Евглевский, С.И. Худяков, А.Г. Беляев// Вестник Курской ГСХА-2011.-№6. -С.72-74.
15.Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности средств и способов профилактики и лечения инфекционных болезней животных/Г.И. Горшков, Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА-2012.-№1. -С. 100-102.
16.Евглевский, Д.А. Биотехнологическая закономерность, редуцирование токсичностей и потенцирование биоцидного действия антибиотиков/Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА-2012.-№1. -С.103-105.
17.Евглевский, Д.А. Достижения и перспективы диагностики, профилактики и терапии туберкулёза/Д.А. Евглевский, A.A. Евглевский, A.M. Коваленко,
B.А. Дёмин// Вестник Курской ГСХА-2012.-№2. -С. 105-107.
18.Евглевский Д.А. Потенцирование биоцидного и лечебного действия линко-спектина /Д.А. Евглевский, A.B. Позреев, А.Ч:Ли, Л.В. Резниченко// Вестник Курской ГСХА-2012.-№2. -С. 114-116.
19.Евглевский Д.Л. Повышение эффективности средств и способов диагностики, профилактики, терапии стафило-стрептококкозов у животных/Д.А. Ев-глевскнй// Вестник Курской ГСХА-2012.-№3. -С. 114-116.
20.Евглевскии, Д.А. Совершенствование средств и способов диагностики и профилактики и терапии гнойно-септических болезнен у животных/Д.А. Ев-глевский//Международный Вестник ветеренарии.С-Петербург-2012.- №2, -С.10-14.
21.Евглевский, Д.А. Основы повышения эффективности стафилококковых биопрепаратов/Д.А. Евглевский, A.B. Поздеев, Б.М. Тагирмнрзоев// Вестник Курской ГСХА-№4.-2012-С. 109-112.
22.Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности диагностики, профилактики и терапии бактериальных болезней животных/Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХ А-№4.-2012-С. 11223. Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности редуцирование токсичн-
сти антибиотиков полимеризацией /Д. А. Евглевский// Вестник Курской ГСХ А -2012.-№5-С. 66-67
24.Евглевский, Д.А. Биотехнологическое обоснование потенцирования био-цидной и лечебной эффективности стрептомицина и каномицина/ Д.А. Евглевский, А. А. Евглевский, И.В. Ермилов// Вестник Курской ГСХА -2012,-№5.-С. 75-76
25. Евглевский, Д.А. Повышение эффективности средств и способов диагностики, профилактики и лечения стафилострептококкозов плотоядных/ Д.А. Евглевский, И.В. Ермилов, Д.И. Шахов, С.Ю. Стебловская// Вестник Курской ГСХА -2012.-№6-С. 77-78
26. Евглевский, Д.А. Стратегия успеха применения пробиотических препаратов при антибиотикотерапии колибактериоза поросят и телят/ Д.А. Евглевский, К.В. Татарников, И.В. Ермилов, В.Е. Чернов, С. А. Федосова, Е. А. Стебловский// Вестник Курской ГСХА -2012-№6.-С. 83-84
27.Евглевский, Д.А. Иммуногенные свойства туберкулёзных токсино-аллергенов, подвергнутых детоксикации и инактивации/Д.А.Евглевский, A.A. Евглевский, С.Ю. Стебловская//Международный вестник ветеринарии .Санкт-Петербург. -2012.-№3-С.6-8.
28. Евглевский, Д.А. Потенцирование лечебного действия модифицированных энрофлоксацина и линкоспектина при колисальмонеллезе телят/ Д.А. Евглевский, JI.B. Коваленко, С.Н. Кретова, К.В.Татарннков// Вестник Курской ГСХА- 2013 .- № 1. - С. - 70-71.
29.Евглевский, Д.А., Биоцидное и лечебное действие модифицированных энрофлоксашнюв, линкоспектнна и гентамицина при колибактериозе и саль-монеллезе поросят/Д.А. Евглевский., Стебловская С.Ю., Татарников К.В., О.Г. Косикова.// Вестник Курской ГСХА- 2013.-№1.- С. 71 -72.
30.Евглевский Д.Л. Выращивание свинопоголовья с минимальным использованием антибиотиков/ А.М.Коваленко, Д.А. Евглевскин Д.А., Л.А. Шывер-талова, Н.П. Акобджанян, А.О. Павленко // Вестник Курской ГСХА- 2013. №2. -С. -71-72.
31.Евглевскин, Д.А. Оценка и биотехнологическая стратегия повышения эффективности анатоксин-вакцин, антибиотиков и эубиотиков // Вестник Курской ГСХА- 2013,- №2. -С. - 72-73.
32.Евглевскин, Д.А. Биоцидные и лечебные свойства стафилококковой анатоксин-вакцины с коллоидными ионами серебра// Вестник Курской ГСХА-2014,-№5. -С.-69-70.
33.Евглевскнй, Д.А. Материалы повышения биоцидного и лечебного действия левомицетина коллоидными ионами серебра// Вестник Курской ГСХА-2014,- №6. -С.-79-80.
34. Евглевскин, Д.А. Иммуногенные и протективные свойства экспериментальной колибактериозной анатоксин-вакцины при оральной и подкожной иммунизации./ Д.А. Евглевскнй, Н.В. Ванина/ЛЗестник Курской ГСХА- 2014.-№7. - с. 69-70.
35.Евглевскин, Д.А. Повышение биоцидных и лечебных свойств экспериментальных метронидазола с глутаровым альдегидом, этонием и коллоидными ионами серебра./ Д.А. Евглевскин, О.В. Леванова// Вестник Курской ГСХА 2014. №7.-с. 70-72
36.Евглевский, Д.А. Терапевтическая эффективность экспериментальных лечебных препаратов с этоиием и коллоидными серебра при инфицированных ранах плотоядных./ А.Я. Самуйленко, Д.А. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА,- 2014. №8. - с. 54-55
37.Евглевскнй, Д.А. Биоцидная и терапевтическая активность наноструктури-рованного линкоспектина коллоидными ионами серебра. А.Я. Самуйленко, Д.А. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА,- 2014,- №8 - с. 70-72
38.Евглевскнй, Д.А. Нанобиотехнологическое обоснование повышения эффективности лекарственных средств и биопрепаратов коллоидными ионами серебра, глутаровым альдегидом и этонисм./А.Я. Самуйленко, А.Ю. Айдиев, Д.А. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА,- 2014,- №9. - с. 69-70
39.Евглевскнй, Д.А. Стратегия перспективных нанобиотехнологических разработок получения эффективных анатоксин-вакцины, экспериментальных антибиотиков и лекарственных препаратов коллоидными ионами серебра./А.Я. Самуйленко, Д.А. Евглевскнй// Вестник Курской ГСХА,- 2015.- №1. - с. 7273.
Патенты РФ
1. Евглевский Д.А., Евглевскин A.A., Майстренко Л.А. Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины// Патент №2377013. Приоритет
16.04.2008. - Регистрация в Госреестре изобретений 27.12.2009. Бюл. №36.
2. Евглевскин Д.А., Евглевскнй A.A., Коломиец В.М. Способ получения туберкулезного анатоксина// Патент №2360697. Заявка № 2008115050/13. Приоритет 15.04.2008. - Регистрация в Госреестре изобретений 10.07.2009. Бюл. №19.
3. Евглевскнй Д.А., Евглевский A.A., Разинькова И.А. Способ получения сальмонеллезной анатоксин-вакцины// Патент №2392003. Заявка № 2008112803/13. Приоритет 02.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2010. Бюл. №17.
4. Евглевскнй Д.А., Евглевский A.A., Воробьева Н.В. Способ профилактики мастита// Патент №2239422. Заявка № 2003108277/13. Приоритет 25.03.2003. Регистрация в Госреестре изобретений 10.11.04. Бюл. №31.
5. Евглевский Д.А. , Евглевский A.A., Смирнов М.А., Разинькова И.А., Стри-калова Е.А. Способ получения колисальмонеллезной анатоксин-вакцины// Патент РФ №2371197.3аявка №2008114785/13. Приоритет 15.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 27.10. 2009. Бюл. №30.
6. Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Смирнов М.А. Способ получения коли-бактериозной анатоксин-вакцины // Патент РФ № 2372937. Заявка №: 2008112751/13. Приоритет 02.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений
20.11.2009. Бюл. №32.
7. Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Майстренко Л.А. Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины//Патент №2377014. Приоритет
29.04.2008. Заявка №2008117242/13. Регистрация в Госреестре изобретений
27.12.2009. Бюл. №36.
8. Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Майстренко Л.А. Способ получения стафило-стрептококковой анатокснн-вакцнны // Патент №2377016. Заявка №2008115049/13. Приоритет 27.12.2009. Регистрация в Госреестре изобретений 27.12.2009. Бюл. №36.
9. Евглевский, Д.А., Евглевский A.A., Майстренко Л.А. Способ получения стафилококкового аллергена// Патент №2378369. Заявка №2008117241/13. Приоритет 29.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 10.01.2011. Бюл. № 1.
10.Евглевский Д.А., Евглевский A.A. Способ создания биологической модели аллергии к стафилококковому аллергену// Патент №2405146. Заявка №2009117366.Приоритет 6.05.2009.Регистрация в Госреестре изобретений
27.11.2010. Бюл. №33.
11 .Евглевский Д.Л., Евглевский A.A., JI.A. Майстренко Способ получения ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней// Патент №2386448. Заявка № 2008117240/13. Приоритет 29.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 20.04.2010. Бюл. №11.
12.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Коломиец В.М. Способ получения туберкулезного анатоксина// Патент №2392002. Заявка № 2008112753/13. Приоритет 2.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2010. Бюл. №17.
13.Евглевскин Д.А., Евглевский A.A., Коломиец В.М. Способ создания биологической модели аллергии к туберкулезным аллергенам// Патент №2377660. Приоритет 27.12.2009. Регистрация в Госреестре изобретений 27.12.2009. Бюл. №36.
14.Евглевский Д.А., Коломиец В.М., Коваленко A.M., Бусол В.А. //Патент № Способ получения туберкулезного анатоксина/ В.М. Коломиец, A.M. Коваленко, В.А. Бусол// Патент №2230569. Заявка №2001116680/13. Приоритет 27.05.2003. - Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2004.
15.Евглевский Д.А., Евглевский A.A. Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота// Патент №2396978. Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2010. Бюл. №23.
16.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Коломиец В.М., Тимкова Е.А. Способ повышения эффективности антибиотиков // Патент №2400218. Заявка № 2009112900/10. Регистрация в Госреестре изобретений 27.09.2010. Бюл. №27.
П.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Коломиец В.М., Коломиец И.В. Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении устойчивых к нему М. tuberculosis // Патент №2405834. Заявка № 2009118972/10. Регистрация в Госреестре изобретений 10.12.2010. Бюл. №34.
18.Евглевский, Д.А., Коломиец В.М. Способ профилактики туберкулеза крупного рогатого скота // Патент №2230505. Приоритет 27.05.2003. Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2004. Бюл. №36.
19.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Тимкова Е.А. Способ повышения эффективности канамицина в отношении канамнциноустойчивых микобактерий туберкулеза// Патент № 2426789.3аявка 2010115910/10. Приоритет 21.04.2010.Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2011. Бюл. № 23.
20.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Тимкова Е.А. Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулеза// Патент № 2426790. Заявка № 2010115912/10, Приоритет 21.04.20Ю.Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2011. Бюл. №23.
21. Евглевский Д.А. Способ получения стафилококковой анатоксин - вакцины / Д.А. Евглевский, С.И. Худяков, A.B. Поздеев, Б.Т. Тагирмирзоев.
22.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Тимкова Е.А., Худяков С. И. Способ получения бактерицидной активности и обеспечения вирулицидного и фун-гицидного действия антибиотиков//Патент №2477124. Заявка № 2011125699/10. Приоритет 33.06.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 10.03.2013.
23.Евглевский Д.А., Стариков В. А., Леонов А. В. Способ выделения чистой культуры стафилококков // Патент № 2458990. Заявка №2011120633/10. Приоритет 20.05.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2012. Бюл. №23.
24.Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Коломиец В.М., Коваленко A.M., Смирнов И.И., Абрамов A.B. Способ выделения чистой культуры микобактерий туберкулеза // Патент № 2455361. Заявка № 2011112282/10. Приоритет 30.03.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 10.07.2012. Бюл. №.19.
25. Евглевский Д.А., Евглевский A.A., Тимкова Е.А., Худяков С.И., Татарников К.В. Способ повышения эффективности антибиотиков к резистентным Е. coli //Патент РФ № 2476210. Заявка №2011141638/10. Приоритет 13.10.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 27.02.2013. Бюл. №.6.
26.Евглевский Д.А. Способ повышения биоцидного лечебного действия крем-эмульсии линкоспектина//Патент № 2505285. Заявка № 2012121738/15. Приоритет 25.05.2012. Регистрация в Госреестре изобретений 27.01.2014. Бюл.№3.
27.Евглевский Д.А. Способ повышения биоцидного и лечебного действия крема - суспензии с метронндазолом //Патент № 2527330. Заявка № 2012128603/15.Приоритет 05.07.2012. Регистрация в Госреестре изобретений 27. 08.2014. Бюл. №.24.
28.Евглевский, Д.А. Способ получения левомициновой мази с глутаровым альдегидом и этонием//Патент № 2495659. Заявка № 2011131125/15. Приоритет 25.07.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 20.10.2013. Бюл. №29.
Монографии
1. Евглевский, Д.А. Современные основы вирусологии и иммунопрофилактики/ A.A. Евглевский, С.Ю. Стебловская, Д.А. Евглевский// Монография рекомендована УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 14.02.2007 №06-193.-Курск.-2010,- 148с.
2. Евглевский, Д.А. Инфекционные болезни свиней (диагностика, иммунопрофилактика, терапия)/ A.A. Евглевский, Д.А. Евглевский// Монография рекомендована решением ДП ветеринарии от 04.06.2010 и УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 03.07.2010 №63-93. - Курск. - КГСХА. - 2011. -146с.
3. Евглевскнй, Д.А. Общая эпизоотология и иммунопрофилактика (классификационные критерии)/ A.M. Коваленко, Д.А. Евглевскнй// Монография рекомендована УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 16.12.2010 №60-31. - Белгород-Курск. - 2011. - 144с.
4. Евглевскнй, Д.А. Иммунопрофилактика и терапия болезней свиней/ A.M. Коваленко, Д.А. Евглевскнй// Монография рекомендована ДП ветеринарии от 04.06.2010 и УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 03.07.2010 №6394. - Белгород-Курск. - 2011. - 148с.
5. Евглевскнй Д.А. Основы общей и частной ветеринарной эпидемиологии с иммунопрофилактикой/ A.A. Евглевскнй, А.М.Коваленко и Д.А.Евглевскнй // Монография рекомендована ДП ветеринарии МСХ Ф от 04.0.2010 г и УМО (Гриф УМО от 16.12.2010 № 60-31: Курск - 2012 г. )- 358 с. Отпечатано «Деловая полиграфия».
6. Евглевскнй Д.А. Основы общей и частной ветеринарной вирусологии и иммунопрофилактики/ А.А.Евглевский, С.Ю. Стебловская, Д.А. Евглевскнй// Монография рекомендована УМО (Гриф УМО от 23 октября 2012 г.) №61-33. Курск, «Деловая полиграфия» 174 с.
Дипломы Российской агропромышленной выставкн-«Золотая осень»
1. 9-я Российская агропромышленная выставка-12-16 октября 2009г. «Диплом награждения золотой медалью»-Разработка биопрепаратов для с/х жи-вотных-Курская ГСХА и Курский НИИ АПП за подписью министра МСХ РФ- Гордеева A.B. и мэра Москвы- Лужкова Ю.М.
2. Диплом награждения серебряной медалыо «За разработку комплекса по диагностики и профилактики инфекционных болезней с/х животных»- за подписью министра с/х РФ- Гордеева A.B. 1-11 октября 2010г. Курская ГСХА и Курский НИИ АПП.
3. Диплом за «Разработку биотехнологий повышения эффективности антибиотиков»^-16 октября 2011г. - Курская ГСХА и Курский НИИ АПП. За подписью министра с/х РФ-Скрынник Е. и мэра Москвы- Собяннна С.
4. Диплом 1 степени, награждение золотой медалыо 14-й Агропромышленной выставки «Золотая осень» «Биотехнологичесое обоснование потенцирования иммуногенной и протективной эффективности анатоксин-вакцин и биоцидного и лечебного действия антибиотиков»-«Золотая осень» Российской агропромышленной выставки-2012г.
Список научных публикаций в других изданиях
1. Евглевскнй, Д.А. Актуальные аспекты этиологии, патогенеза, классификации и терапии пневмонии у животных/ Д.А. Евглевскнй, И.Г. Швакова,
A.B. Поздеев// Материалы 15-ой международной научно-практической конференции, посвященной 300-летию С-Петербурга. - 2003. - С.65-66.
2. Евглевский, Д.А. Новые подходы в лечении и профилактике послеродовых эндометритов и маститов коров в сухостойный период/ В.В. Галкин, Н.В. Воробьева, Д.А. Евглевский// Материалы 15-ой международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященной 300-летию С-Петербурга. - 2003. - С. 12-13.
3. Евглевский, Д.А. Научно-практические подходы получения иммуноак-тивных препаратов при стафило-стрептококкозе плотоядных/ Д.А. Евглевский, И.Г. Швакова, A.B. Поздеев// Ветеринарная медицина. Международный межведомственный тематический сборник. - Харьков. - 2003. - С.225-227.
4. Евглевский, Д.А. Влияние состояния иммунной системы животных на формирование полирезистентных штаммов микроорганизмов/ Д.А. Евглевский, П.В. Калуцкий, A.B. Поздеев// Сборник научных трудов Курских вузов «Актуальные проблемы образования и медицины», издательский центр «ЮМЭКС». - Курск - 2003. - С.25-26.
5. Евглевский, Д.А. Современные подходы к отбору иммуннопротектив-ных штаммов стафилококков при изготовлении анатоксин-вакцины/ Д.А. Евглевский, Е.А. Тимкова, И.Г. Швакова// Сборник научных трудов Курских вузов «Актуальные проблемы образования и медицины», издательский центр «ЮМЭКС». - Курск - 2003. - С.23-25.
6. Евглевский, Д.А. Результаты изучения факторов внешней среды на биологические свойства микроорганизмов/ АЛО. Айдиев, Д.А. Евглевский // Сб. научн. тр. КГСХА «Современные проблемы ветеринарной медицины и животноводства», издательство Курской ГСХА. - 2006. - С.6-8.
7. Евглевский, Д.А. Оптимизация, детоксикация и инактивация токсино-аллергенов/ Д.А. Евглевский, С.Н. Норец, О.Д. Печенин, Е.А. Тимкова// Сб. научн. тр. КГСХА «Передовые технологии науки и образования», издательство Курской ГСХА.-2004.-С. 10-12.
11. Евглевский, Д.А. Получение и применение стафилококковых анатоксин-вакцин/ A.A. Евглевский, Д.А. Евглевский, В.В. Иванов// Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 120-летию ветеринарной службы Курской области. - Курск. - 2005. - С. 130-132.
12. Евглевский, Д.А. Научно-практические аспекты лечения и профилактики стафило-стрептококкозов у плотоядных/ A.A. Евглевский, Д.А. Евглевский,
B.В. Иванов//Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 120-летию ветеринарной службы Курской области. - Курск. -2005. - С.122-123.
13. Евглевскнй, Д.А. Иммунопротективная активность анатоксинов/ Д.А. Евглевскнй, В.М. Коломиец, Е.А. Тимкова// Сборник научных трудов Курских вузов «Актуальные проблемы образования и медицины», издательский центр «ЮМЭКС». - Курск - 2003. - С.26-27.
14. Евглевскнй, Д.А. Жидкая синтетическая питательная среда для выделения и выращивания эшерихий/ Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса». Курск. -23-25 января 2008, ч.З. - С.124-126.
15. Евглевскнй, Д.А. Плотная синтетическая питательная среда для выделения и выращивания эшерихий/ Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса». Курск. -23-25 января 2008, ч.З.-С.126-128.
16. Евглевскин, Д.А. Пробиотики в комплексной терапии колибактериоза у поросят/ А.А. Евглевскнй, Д.А. Евглевскин, М.А. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 125- летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». Курск. 22-23 мая 2008. - С. 104-107.
17. Евглевскин, Д.А. Пробиотики в комплексной терапии сальмонеллеза у поросят/ А.А. Евглевскнй, Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова, С.Ю. Стебловская// Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». Курск. 22-23 мая 2008. - С.434-437.
18. Евглевскнй, Д.А. Влияние лазерного облучения и магнитных полей на биологические свойства Escherichia Coli и Salmonella Tiphimurium/ Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова//Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. -С.61-66.
19. Евглевскин, Д.А. Синтетическая среда для выделения и выращивания эшерихий/ Д.А. Евглевскин, М.А. Смирнов, Е.А. Стрекалова //Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. -2009. - С.67-69.
20. Евглевскнй, Д.А. Разработка элективной синтетической питательной среды для совершенствования колибактериозных анатоксин-вакцин/ Д.А. Евглевскнй, М.А. Смирнов, В.А. Кузьмин// Материалы международной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины. Санкт-Петербург. - 2010. - С.27-29.
21. Евглевскнй, Д.А. Состояние и перспективы создания туберкулезных биопрепаратов/ A.A. Евглевскнй, A.M. Коваленко, Д.А. Евглевскнй, И.И. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. - С.47-49.
22. Евглевскнй, Д.А. Десенсебилизирующие свойства и аллергизирующая активность туберкулезного анатоксина/ Д.А. Евглевскнй, A.M. Коваленко, И.И. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. - С.49-50.
23. Евглевскнй, Д.А. Повышение эффективности специфической профилактики и лечения дерматитов у собак/ Д.А. Евглевскнй, С.Н. Кретова, Е.А. Стрека-лова// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. - С.50-54.
24. Евглевскнй, Д.А. Элективная среда и щадящие средства подавления посторонней микрофлоры при выделении сальмонелл из патологического материала/ Д.А. Евглевскнй, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. -2009. - С.54-57.
25. Евглевскнй, Д.А. Протективная активность туберкулезного анатоксина/ Д.А. Евглевскнй, И.И. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. - С.57-59.
26. Евглевскнй, Д.А. Иммуногениые свойства туберкулезного анатоксина/ Д.А. Евглевскнй, И.И. Смирнов/7 Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и ас-
пирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. - С.59-61.
27. Евглевскнй, Д.А. Изучение иммуногенной активности туберкулезного анатоксина/ Д.А. Евглевскнй, И.И. Смирнов, В.А. Кузьмин// Сб. научн. тр. С-Петербургской ГАВМ «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». -2010. - С.19-21.
28. Евглевскнй, Д.А. Способ подавления посторонней микрофлоры при выделении сальмонелл/ Д.А. Евглевскнй, И.А. Разинькова// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса». Курск. - 23-25 января 2008, ч.З. - С. 167-169.
29. Евглевскнй, Д.А. Синтетические питательные среды для выделения и выращивания сальмонелл/ Д.А. Евглевскнй, И.А. Разинькова// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса». Курск. -23-25 января 2008, ч.З.-С.171-173.
30. Евглевскнй, Д.А. Повышение эффективности специфической профилактики лейкоза крупного рогатого скота/ Д.А. Евглевскнй, A.A. Евглевскнй// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. - 2011, ч.З. - С.183-185.
31. Евглевскнй, Д.А. Универсальная синтетическая среда для выращивания микобактерий туберкулеза, стафилококков, сальмонелл, кишечной палочки и пробиотиков/ Д.А. Евглевскнй, С.Н. Кретова, И.И. Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. - 2011, ч.З. - С.200-202.
32. Евглевскнй, Д.А. Научно-практические подходы повышения эффективности и снижения токсичности антибиотиков/ Д.А. Евглевскнй, A.A. Евглевскнй// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. - 2011, ч.З. -С.193 -195.
33. Евглевскнй, Д.А. Иммунологические сдвиги при сальмонеллезе/ A.M. Коваленко, Д.А. Евглевскнй, A.A. Евглевскнй// Материалы международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. - 2011, ч.З. - С.207 -211.
34. Евглевский, Д.А. Индикация микобактерни секреннрованием/ A.M. Коваленко, Д.А. Евглевский// Сб. научн. тр. Курской ГСХА, Курск. - 2008. - С.6-8.
35. Евглевский, Д.А. Бактерицидные, вирусоцндные и фунгицидные свойства антибиотиков с помощью глутарового альдегида и этония/ Д.А. Евглевский //Материалы международной научно-практической конференцпи-«Научное обеспечения агропромышленного производства», Курск ,часть 3-2012.-С. ПОПЕ
36. Евглевский, Д.А. Повышение протекгивной и имуногенной активности колисальмонеллёзной анатоксин-вакцины. / Д.А. Евглевский, Петрова Ж.Е., Татарников К.В. //Материалы международной научно-практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного производства», Курск .часть 3-2012.-С.178-179.
37. Евглевский, Д.А. Редуцирование таксичности и потенцирование эффективности антибиотиков./ Д.А Евглевский //Материалы международной научно-практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного производства», Курск , часть 3-2012.-С. 183-185.
38. Евглевский, Д.А. Ассоциированная анатоксин-вакцина для профилактики лечения гнойно-септических болезней./ Д.А. Евглевский //Материалы международной научно-практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного производства», Курск, часть 3-2012.-С.189-190.
39. Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности и редуциррование ток-сичностей антибиотиков глутаровым альдегидом и этонием/ Д.А. Евглев-ский//Матерналы международной научно-практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного производства»,Курск ,часть 3-2012.-С.192-193.
40. Евглевский, Д.А. Получение и применение стафилококкового аллергена / Д.А. Евглевский , Б.М. Тагирмнрзоев //Материалы международной научно-практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного про-изводства».-Курск .-2012. часть 3-С.201-202.
41. Евглевский, Д.А. Эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины и модифицированных полимеризацией антибиотиков при лечении коров, больных маститом./ Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмнрзоев // //Материалы международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства», Курск, -2012. -часть 3-С.231-232.
42. Евглевский, Д.А. Способ получения и применения колибактериозной анатоксин-вакцины с повышенным нммуногенными и протективными свойствами./ Д.А. Евглевскнй//Агропромышленный комплекс - контуры будущего. -Материалы международной научно-практической конференции студентов, аспирантов, молодых ученых. -Курск, 12-14 ноября 2014. - ч.З,- с. 202-205.
43. Евглевскин, Д.А. Повышение протективных и биоцидных свойств колибак-териозной анатоксин-вакцины коллоидными ионами серебра при оральной вакцинации поросят./ Д.Л. Евглевский//Агропромышленный комплекс -контуры будущего. - Материалы международной научно-практической конференции студентов, аспирантов, молодых ученых. Курск, 12-14 ноября 2014 г. ч.З.с. 205-206.
44. Евглевскин, Д.А. Влияние коллоидных ионов серебра на биоцидную и лечебную эффективность линкоспектина/ Д.А. Евглев-ский//Агропромышленный комплекс - контуры будущего. - Материалы международной научно-практической конференции студентов, аспирантов, молодых ученых. Курск,- 2014. -ч.1. -.с. 141-143.
Подписано в пема1ь 16.06.2015г.
Усл.п.л. - 2.5 Заказ № 28042 Тираж: 110 экз.
Коппцентр «ЧЕРТЕЖ.ру» ИНН 7701723201 107023, Москва, ул.Б.Семеновская 11, стр.12 (495)542-7389 www.cliertez.rii
-
Евглевский, Дмитрий Анатольевич
-
доктора ветеринарных наук
-
Щёлково, 2015
-
ВАК 06.02.02
- Инновационные биопроизводства для повышения эффективности развития агропромышленного комплекса России
- Физиологические реакции организма цыплят-бройлеров на введение целлобактерина, целлобактерина-А(Т), провитола и микс-ойла
- Биологическое обоснование создания биопрепаратов, эффективных в отношении фузариозных заболеваний сельскохозяйственных культур
- Разработка биологических препаратов для снижения техногенной и микробиологической нагрузки на организм животных и окружающую среду
- Влияние сроков некорневых подкормок биопрепаратами на продуктивность картофеля в Центральном Черноземье
