Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят

Спиридонов, Антон Геннадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят"

На правах рукописи

СПИРИДОНОВ АНТОН ГЕННАДЬЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ

АССОЦИИРОВАННОЙ ПРОТИВ АНАЭРОБНОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ И ЭШЕРИХИОЗНОЙ ДИАРЕИ ТЕЛЯТ

06.02.02 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005050380

Казань-2013

005050380

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФЦГРБ-ВНИВИ, г. Казань)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Макаев Харис Нуртдинович

Официальные оппоненты:

- зав. лаб. вирусологии ФГБУ «ФЦГРБ-ВНИВИ», доктор ветеринарных наук, профессор Гаффаров Харис Зарипович;

зав. кафедрой патофизиологии Казанской госакадемии ветеринарной медицины, доктор биологических наук, профессор Гильмутдинов Рустам Якубович

Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия».

Защита состоится «-23» 2013 г. в 1о_ часов на заседании

диссертационного совета Д-220.Ь 12.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, Научный городок-2, ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЛТРБ-ВНИВИ>> (г. Казань).

Автореферат разослан «9-3» 2012-г. и размещен на официальном

сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ)) .vnivi.ru и на официальном сайте ВАК РФ www.vak.ed.dov.ru

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Желудочно-кишечные болезни сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие высокой заболеваемости и падежа новорожденного молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебно-профилактические мероприятия.

В этиологии этих болезней в большинстве случаях регистрируется ассоциация бактерий Е. coli, сальмонелл, стрептококков, Cl. perfringens, протея и других (Малахов Ю.А. и соавт., 1995; Шахов А.Г., 2002; Субботин В.В. и соавт., 2004; Папуниди К.Х. и соавт., 2006; Иванов A.B. и соавт., 2011).

Анаэробную энтеротоксемию вызывают бактерии С/, perfringens, которых подразделяют на шесть типов: А, В, С, D, Е и F, отличающихся друг от друга антигенной структурой и вырабатываемыми токсинами. У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов А, С и D. Средства для специфической профилактики данной инфекции у телят в РФ не разработаны (Антонов Б .И", и соавт., 1986; Салимов В.А. и соавт, 2002; Куриленко А.Н. и соавт, 2006).

Эшерихиозную диарею вызывают энтеротоксигенные штаммы Е. coli, синтезирующие адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41, А20 и Att25. У телят в более 80% случаях болезнь вызывается бактериями Е. coli, продуцирующими адгезивные антигены А20 и К99 (Попов Е.А, и соавт., 1991; Светоч Э.А, 1994; Гаффаров Х.З., Иванов A.B., 2002; Зароза В.Г. и соавт., 2008; Пирожков М.К. и соавт., 2011). Для профилактики эшерихиоза в РФ выпускают: «Вакцину поливалентную гидроокисьалюминиевую против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят, ягнят», «Вакцину против эшерихиоза с.-х. животных «Коли-Вак», содержащую адгезивные антигены К99, К88, 987Р, F41, ТЛ-, ТС-анатоксины и соматические антигены серотипов 078, 0141.

Анализ литературных данных и результаты многолетних исследований сотрудников нашего центра свидетельствуют, что в хозяйствах, стационарно неблагополучных по желудочно-кишечным болезням, анаэробная энтеротоксемия у телят наиболее часто проявляется в виде смешанной инфекций с эшерихиозом (Хайруллин И.Н. и соавт., 1996; Казимир А.Н., 1997; Салимов В.А. и соавт, 2002; Куриленко А.Н. и соавт, 2006; Спиридонов Г.Н. и соавт., 2010)

В связи с вышеизложенным, изыскание эффективных средств специфической профилактики смешанной инфекции — анаэробной энтеротоксемни и эшерихиозной диареи у телят является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

1.2 Цель работы. Целью настоящей работы является разработка и изучение иммунологической эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. Для выполнения вышеуказанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить этиологическую структуру желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья;

2. Разработать технологию изготовления вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят;

3. Изучить иммунологическую эффективность ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях;

4. Разработать НД на биопрепарат и предложить его для внедрения в ветеринарную практику.

1.3 Научная новизна работы. Впервые разработана технология изготовления и способ контроля вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Определены оптимальные прививные дозы вакцины для глубокостельных коров, нетелей и телят для специфической профилактики анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи.

Установлена высокая антигенная и иммуногенная активность ассоциированной вакцины в лабораторных экспериментах и условиях хозяйств, неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

Новизна исследований подтверждена Патентом РФ на изобретение №2428202 от 10.09.2011 г. (удостоен диплома «Лучшее изобретение года»),

1.4 Практическая значимость работы. На основе проведенных исследований для внедрения в ветеринарную практику предложена «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят». Применение ее в стационарно неблагополучных по данным инфекциям пунктах позволяет значительно снизить заболеваемость и гибель молодняка крупного рогатого скота, тем самым повысить их сохранность.

Разработаны и утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и согласованы ГУВ КМ РТ нормативные документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата.

1.5 Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на: ежегодных заседаниях Ученого совета ФГБУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» при обсуждении отчетов о НИР за 2010-2012 гг.; Международных и Всероссийских научно-практических конференциях (Курск, 2010; Харьков, 2011; Казань, 2011, 2012; Владимир, 2012).

1.6 Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК России, получен Патент РФ №2428202: «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят».

1.7 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1; Этиологическая структура желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья;

2. Технология изготовления вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят;

3. Антигенная и иммуногенная активность ассоциированной вакцины на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

4. Оценка профилактической эффективности ассоциированной вакцииы в производственных условиях.

1:8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: общая характеристика . работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, 'результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы, состоящий из 268 источников, в том числе 131 иностранных авторов, и приложение. Диссертация содержит 17 таблиц и иллюстрирована 6 рисунками.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2009-2012 г.г. в лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в соответствии с гос. заданием по НИР №01200202602. Производственные испытания вакцины проведены в ряде сельскохозяйственных предприятиях Среднего Поволжья, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям телят.

В процессе; выполнения работы по разработке ассоциированной вакцины были использованы:

- бактерии С1. perfringens-. № 28 (тип А); № 392 (тип С); № 213 (тип Д), полученные из ФГБУ «ВГНКИ»;

- энтеротоксигенные штаммы Е. coli: KB-1 - синтезирующий адгезивный антиген К99; ПЗ-3 - синтезирующий адгезивный антиген А20.

У штаммов, предназначенных для целевого использования, изучали их морфологическую однородность, биохимические свойства, вирулентность и антигенность. Контролем при изучении свойств изолятов С/. perfringens и E.coli, выделенных из патологического материала, служили референтные штаммы возбудителей эшерихиоза и анаэробной энтеротоксемии, порученные из ВГНКИ.

Эксперименты проведены на 786 белых мышах массой 14-16 г, 78 морских свинках массой 250-300 г, 35 кроликах массой 2,5-3,0 кг и 6282 коровах и телятах разного возраста и физиологического состояния.

Клинико-эпизоотологическому обследованию подвергнуто поголовье крупного рогатого скота в 50 сельскохозяйственных предприятиях, расположенных в регионе Среднего Поволжья, из них в республиках Татарстан - 40, Марий Эл - 4, Чувашия - 2, а также в Самарской обл. - 2, Кировской - 1, Волгоградской - 1, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям.

Анализ эпизоотической ситуации в неблагополучных хозяйствах проводили согласно рекомендациям, разработанными Ба*суловым И.А. и соавт. (1975) и Джупиной С.И. (1991).

Бактериологическому исследованию подвергнуто 706 проб клинического и патологического материала, полученных от больных, павших и вынужденно убитых телят. Объектами исследований служили паренхиматозные органы (кусочки печени, селезенки, легкого, почки), участки желудка, тонкого и толстого отделов кишечника с содержимым, брыжеечные лимфатические узлы, а также пробы фекалий и сыворотки крови больных телят. Выделение и изучение биологических свойств культур ¿¿. со/г проводилось в соответствии с «Методическими указаниями по бактериальной диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденными ГУВ МСХ СССР 12.01.91. и «Временными наставлениями по применению агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий К88, К99, 987Р, И41 и А20», утвержденными ГУВ Госагропрома СССР 21.02.1989 г.

Диагностику анаэробной энтеротоксемии телят проводили согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят»,-утвержденным ГУВ МСХ СССР 15.02.1984 г.

Отобранные для производства ассоциированной вакцины штаммы С1.реф-^ет выращивали на мясо-печеночно-казеиновой среде, а Е.соН на мясо-пептонном агаре (штамм ПЗ-З) и среде Минка (штамм КВ-1).

Контроль готовой продукции проводили по физическим показателям, стерильности, безвредности, остаточной вирулентности и антигенной активности.

Определение стерильности вакцины проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности».

Определение безвредности препарата проводили по ГОСТу 938006700008064, путем парентерального введения его белым мышам.

Контроль антигенной и иммуногенной активности вакцины осуществляли на белых мышах и кроликах, которым препарат вводили внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней. Через 20 сут после второй инъекции в сыворотке крови каждого кролика определяли титр антитоксических антител в реакции нейтрализации токсина С1. регф-^ет на

белых мышах. Иммуногенную активность вакцины к эшерихиям проверяли на белых мышах массой 16-18 г внутрибрюшинным заражением патогенными штаммами Е. coli (К99 и А20), оттитрованными в : предварительном опыте на аналогичных животных.

С целью определения антигенной активности вакцины проводили исследование сывороток крови от вакцинированных животных на содержание специфических антител к антигенам бактерий Cl. perfringens в ИФА и E.coli в РА.

Уровень клеточного иммунитета у вакцинированных животных определяли по. процентному соотношению Т-, B-лимфоцитов и фагоцитарной , активности нейтрофилов периферической крови.

Идентификацию Т- и В- лимфоцитов проводили в одном препарате по образованию реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами СЕРОК) и розеткообразования лимфоцитов с зимозаном (ЗС3-РОК) (Блинов Н.И., 1985).

. Фагоцитарную активность клеток крови животных определяли по методике Кост С.А. и Стенко М.И. (Кондархин И.П. и соавт., 2004).

Производственное испытание экспериментальных серий вакцины проводили в хозяйствах, неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. Эффективность вакцины оценивали по количеству заболевших и павших телят от анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи, по титрам специфических антител и функционально-метаболической активности лейкоцитов, сравнивая эти показатели в контрольных и опытных группах или этими же показателями до и после начала применения вакцины.

. - Схемы, условия проведения экспериментов, вид и количество животных, использованных в каждом эксперименте, дозы и кратность введения вакцины приведены в соответствующих подразделах.

Отдельные этапы работы были выполнены с участием научного сотрудника, кандидата биологических наук Махмутова А.Ф., младшего научного сотрудника Хурамшиной М.Т., которым выражаю искреннюю признательность.

Статистическую обработку результатов исследований проводили методом вариационной статистики с применением критериев достоверности по Стьюденту с использованием программы «Microsoft Office Excel».

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение этиологической структуры и клинико- эпизоотологических аспектов желудочно-кишечных заболеваний телят в регионе Среднего Поволжья

Проведенными клинико-эпизоотологическими, бактериологическими и вирусологическими исследованиями 50 скотоводческих хозяйств Среднего Поволжья показано широкое распространение у молодняка крупного рогатого скота болезней желудочно-кишечного тракта, вызванных

возбудителями вирусной и бактериальной природы. Из бактериальных агентов в 86% случаях выделены энтеропатогенные штаммы E.coli, в '48% случаях — бактерии рода Streptococcus, в 46% случаях — бактерии С/. perfringens, в 28% случаях - Proteus vulgaris, в 12% случаях - Klebsiella, в 8% случаях - Pseudomonas aeruginosa. Кроме бактерий, в 26% случаях обнаружены коронавирусы, в 24% случаях - герпесвирусы и в 20% случаях — ротавирусы крупного рогатого скота.

Во всех обследованных хозяйствах наблюдалась смешанная инфекция, вызванная в одних случаях несколькими видами бактерий, в других случаях

- вирусами и бактериями. Смешанная бактериальная инфекция наблюдалась в 19 (38%) хозяйствах, а в остальных — смешанная вирусно-бактериальная инфекция. Анаэробная энтеротоксемия установлена в 23 хозяйствах, из них в 18 (78,2%) хозяйствах она протекала совместно с эшерихиозом, в 12 (52,1%)

- совместно с вирусной (рота-, корона-, герпесвирусная) инфекцией, в 4 (17,4% ) - совместно с псевдомонозом, в 3 (13,1%) - с протейной инфекцией. Возбудителем анаэробной энтеротоксемии в 15 (65,2%) случаях признаны бактерии С1. perfringens серотипа А, в 7 (30,4%) случаях - бактерии С/. perfringens серотипа Д и в 1 (4,3%) случае - бактерии С/, perfringens серотипа С. Серотип Д выявлен в хозяйствах, где долгое время занимались разведением овец.

Установлено, что желудочно-кишечные заболевания возникают во все сезоны года, особенно в зимне-весенний период со значительным отходом животных. Высокая заболеваемость новорожденных телят в обследованных хозяйствах обусловлена комплексом причин, в числе которых - нарушение ветеринарно-санитарных требований содержания и кормления животных, а также низкий естественный уровень специфической защиты новорожденных от воздействия не только патогенной, но и условно-патогенной микрофлоры. Несмотря на то, что во многих хозяйствах для повышения общей резистентности организма новорожденных телят применяют иммуностимулирующие препараты - миксоферон, фоспренил, гамовит и полиспецифическую гипериммунную сыворотку против пастереллеза, сальмонеллеза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, а также проводят вакцинацию глубокостельных коров и нетелей против вирусных инфекций ассоциированной вакциной «Комбовак», против эшерихиоза - вакциной «Коливак», заболеваемость новорожденных телят остается довольно высокой. В отдельных хозяйствах она достигает до 95%. Желудочно-кишечные заболевания с клиникой диареи и общей интоксикации у телят проявлялись уже на 1-2 день жизни. У заболевших телят наблюдалась лихорадка, угнетение, снижение аппетита, диарея, признаки интоксикации и обезвоживания организма. При этом смертность больных достигала 30-40%.

3.2 Разработка технологии изготовления, методов контроля и применения вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшеркхиозной диареи телят

3.2.1 Биологическая характеристика производственных штаммов бактерий СУ. perfringens и Е. coli

Для изготовления ассоциированной вакцины использовали 3 производственных штамма бактерий С1. perfringens - № 28 (тип А), № 392 (тип С), № 213 (тип Д), а также 2 энтеротоксигенных штамма Е. coli: «КВ-1» и «ПЗ-З», продуцирующие соответственно адгезивные антигены К99 и А20.

На все штаммы Cl. perfringens и Е. coli составлены паспорта и проведено! депонирование их в лаборатории музей штаммов микроорганизмов особо опасных болезней ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

3.2.2 Разработка режимов выращивания культур E.coli , получения бактериальной массы и анатоксинов

Для получения бактериальной массы E.coli использовали стерильные питательные среды - мясопептонный агар и среду Минка, которых разливали в 1,5-литровые матровые колбы по 300 см3. После застывания среды делали посевы указанных суточных агаровых культур по 3,0 см3 с концентрацией 10 млрд м.к. Через 24 ч экспозиции в термостате (37-38°С) выросшие колонии культур E.coli смывали 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия, готовили суспензию в концентрации 100-120 млрд микробных клеток в 1 см3 по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича или ВГНКИ. Инактивацию бактериальной массы осуществляли формалином, добавляя его до 0,5% концентрации в общем объеме суспензии и выдерживая 4-5 сут в термостате при температуре 37-38°С. Затем проверяли полноту инактивации путем посева на соответствующие питательные среды.

Для получения анатоксина каждый штамм E.coli засевали отдельно в реактор с бульоном Хоттингера, выращивали 5-7 сут при температуре 3738°С. Определяли концентрацию TJI-, ТС- токсинов в реакции диффузионной преципитации. При этом титры TJI-, ТС- токсинов в культуральной жидкости составляли не менее 1:4 - 1:8. После чего, к культуре добавляли формалин до 0,4-0,5% и выдерживали при температуре 37-38°С в течение 10-12 сут, затем добавляли 6%-ную гидроокись алюминия до 10%-ной концентрации, выдерживали 3 сут и удаляли 50% общего объема надосадочной жидкости, устанавливали pH 7,2-7,4.

3.2.3 Разработка режимов выращивания культур CL perfringens, получения бактериальной массы и анатоксинов

Для изготовления клостридиозных компонентов ассоциированной вакцины производственные штаммы Cl.perfringens №28, №392, №213 выращивали на мясо-печеночно-казеиновой среде в реакторе в течение 6-8 ч при температуре 37-38°С до накопления не менее 4 млрд/см3 микробных клеток. Токсичность выращенной культуры проверяли на белых мышах,

которые погибали в течение 24 ч после внутрибрюшинного введения 0,5 см3 культуры. Для изготовления вакцины использовали культуру, содержащую не менее 6000 ДЛМ/см3 для белых мышей.

В реактор с выращенной культурой добавляли формалин до 0,7%-ной концентрации, выдерживали 8 сут при температуре 37-38°С, затем добавляли 6%-ную гидроокись алюминия до 10%-ной концентрации, выдерживали 3-5 сут и удаляли 50% общего объема надосадочной жидкости.

3.3 Лабораторный регламент технологии изготовления ассоциированной вакцины

Всего изготовлено 8 экспериментальных серий (165 л) ассоциированной вакцины при следующем соотношении компонентов в 1л вакцины:

- суспензия клеток штамма №28 Cl. perfringens типа А в культуральной среде с концентрацией 3,5-1012 - 4,0-Ю12, см3 - 140,0 - 160,0

- суспензия клеток штамма №392 Cl. perfringens типа С в культуральной среде с концентрацией 3,5-1012 - 4,0-1012, см3 - 140,0 - 160,0

- суспензия клеток штамма №213 Cl. perfringens типа Д в культуральной среде с концентрацией 3,5-Ю12 - 4,0-Ю12, см3 - 140,0 - 160,0

- суспензия клеток штамма Е. coli КВ-1, содержащая адгезивный антиген К99 на физиологическом растворе с концентрацией 100-Ю12 - 120-Ю12, см3 - 25,030,0

- суспензия клеток штамма Е. coli ПЗ-З, содержащая адгезивный антиген А20 на физиологическом растворе с концентрацией 100-Ю12 — 120-Ю12, см3 - 25,0 -30,0

- гидроокись алюминия, 6%-ная, см3 — 200,0-250,0

- формалин, см3 - 4,0-5,0

- ТС- и ТЛ-анатоксины штаммов Е. coli КВ-1 и Е. coli ПЗ-З в соотношении 1:1 в культуральной среде с титром в РДП 1:8-1:16, л - До 1.

Все компоненты вакцины объединяли, тщательно перемешивали, доводили pH вакцины до 7,2-7,4, расфасовывали во флаконы, которые затем закрывали резиновыми пробками, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировали.

3.3.1 Оценка стерильности, безвредности, реактогенности ассоциированной вакцины на лабораторных животных

Определение стерильности вакцины проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности». Из каждой серии вакцины делали посевы на МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом и агар Сабуро по 2 пробирки на каждый флакон. Посевы со средами выдерживали в термостате при 37-38°С, а агар Сабуро - при температуре 22-23 С в течение 10 суток. При этом питательные среды оставались стерильными.

Определение безвредности препарата проводили по ГОСТу 938006700008064 путем парентерального введения его белым мышам и кроликам.

Для этого отбирали 10 белых мышей массой 16-18 г и 3 кроликов массой 2,53,0 кг на каждую серию вакцины. Вакцину вводили подкожно мышам в дозе 0,5 см, кроликам - 4 см3. Вакцину считали безвредной, если мыши и кролики в. течение 10 сут после введения вакцины оставались клинически здоровыми. Реактогенность вакцины оценивали по проявлению местной реакции на введение вакцины. По истечению срока наблюдения животных обескровливали и проводили оценку степени поражения тканей по критериям, предложенным Н. Stone (Stone Н. D., 1997).

В процессе наблюдения за клиническим состоянием вакцинированных животных существенного отклонения общего и местного характера не выявлено. У кроликов отмечалось незначительное местное повышение температуры тела и образование припухлости диаметром около 1 см на месте введения вакцины. Эти признаки полностью исчезли к концу срока наблюдения (14 сут). Следовательно, все серии испытуемой вакцины были безвредными и не обладали реактогенностью.

3-3.2 Изучение антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных

Антигенную активность каждой серии ассоциированной вакцины контролировали на трех кроликах массой 3,0-3,5 кг, которым подкожно, двукратно с интервалом 14 дней, вводили препарат в дозе по 4 см3. Кровь от животных для исследования брали до вакцинации, на 7 и 14 день после 1-ой вакцинации и в те же сроки после 2-ой вакцинации из ушной вены на наличие специфических антител к антигенам бактерий CI. perfringens в ИФА и E.coli. в РА. При этом установлено, что на 14 сут после первой вакцинации титры антител против С/, perfringens типов А, С и Д в ИФА составляли 10,84±0,42; 11,24±0,22 и 11,24±0,27 log2, а на 14 сут после второй иммунизации регистрировали значительное накопление специфических антител - 13,24±0,27; 13,84±0,22 и 13,64±0,35 log2 соответственно. Аналогичная картина наблюдалась при определении титров специфических антител к штаммам E.coli К99 и А20 в РА: на 14 сут после 1-ой вакцинации титры антител составили 7,92±0,27 и 8,52±0,22 log2, а на 14 сут после 2-ой вакцинации - 8,72±0,27 и 8,92±0,27 log2 соответственно.

Высокая иммуногенная активность вакцины установлена и при исследовании уровня антитоксических антител в реакции нейтрализации на белых мышах. Выявлено, что сыворотка крови вакцинированных кроликов предохраняет 80-90% белых мышей после заражения их оттитрованными смертельными дозами бактерий СУ. perfringens и E.coli.

Уровень клеточного иммунитета у вакцинированных кроликов определяли по фагоцитарной активности нейтрофилов и процентному соотношению Т- и B-лимфоцитов в периферической крови до вакцинации, через 7 и 14 дней после первой и в те же сроки после второй вакцинации.

Анализ результатов исследований показал, что наряду с повышением титров специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных регистрируется достоверное увеличение количества Т- и В-

лимфоцитов, а также повышение фагоцитарной активности лейкоцитов в периферической крови животных. В частности, фагоцитарная активность нейтрофилов повысилась с 63,6 ±0,83 до 83,0±1,58% на 14 сут после второй вакцинации при одновременном увеличении фагоцитарного индекса с 5,2±0,65 до 7,0±0,35. Количество Т-лимфоцитов увеличилось на 7,2%, В-лимфоцитов на 9,2% по сравнению с фоновыми данными (до вакцинации).

Полученные данные свидетельствуют о том, что при введении кроликам ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят наблюдается достоверная активизация как гуморальных, так и клеточных факторов иммунитета у животных.

3.33 Определение прививной дозы ассоциированной вакцины для глубокостельных коров и телят

!i Эксперименты по определению оптимальной иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят проводили на 20 глубокостельных коровах и 20 телятах' 18-20 дневного возраста, разделенных на 4 группы по 5 голов в каждой, в КФХ «СулёйМанов А.И.» Нурлатского района РТ

Коров 1-ой группы вакцинировали подкожно в области средней трети шеи двукратно с интервалом 14 дней в дозах 5 и 5 см3, П-ой группы - в дозах 7 и 7 см3, Ш-ей группы - в дозах 10 и 10 см3, IV-ой группы - в дозах 10 и 15 см3. Телят 1-ой группы вакцинировали подкожно в области средней трети шей двукратно с интервалом 14 дней в дозах 2 и 2 см3, П-ой группы - в дозах 2 и 3 см3, Ш-ей группы - в дозах 3 и 3 см3, IV-ой группы - в дозах 3 и 5 см . Через 21 день после вакцинации проводили взятие крови от животных и определение титров "специфических антител в сыворотке к антигенам С/. perfringens и Е. coli. За коровами вели наблюдение до отелов, а за телятами -в течение 45 сут после вакцинации.

Анализ полученных данных свидетельствует, что на 21 день после вакцинации у животных Ш-ей и IV-ой групп отмечалось достоверное (р<0,05) увеличение титров специфических антител: к С1. perfringens до 13,04±0,27 - 13,44±0,22 log2, к Е. coli - 8,92±0,27 - 9,12±0,22 log2 по сравнению алогичными показателями животных 1-ой и П-ой групп. В то же время титры антител к Е. coli и С1. perfringens серотипам А и С у животных Ш-ей группы были выше, чем у животных IV-ой группы, но эта разница была не достоверна. Следует отметить, что у 3 коров и 4 телят из IV-ой группы через 30-40 мин после второй вакцинации наблюдали учащенное дыхание, слюнотечение, дрожь, которые исчезли через 20-30 минут.

При дальнейшем наблюдении отмечали, что все вакцинированные коровы отелились благополучно и среди родившихся телят от коров Ш-ей и IV-ой групп заболевание с признаками нарушения функции желудочно-кишечного тракта не регистрировали. В то же время среди 10 телят, полученных от коров 1-ой и П-ой групп, 4 заболели с признаками диареи, однако летального исхода не наблюдали.

Среди телят, вакцинированных ассоциированной вакциной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи, у двух из 1-ой группы и у одного , из П-ой группы отмечали признаки нарушения функции желудочно-кишечного тракта (диарея). После проведения курса лечения антибактериальными препаратами все животные выздоровели.

Таким образом, данные клинических и серологических исследований дают основание констатировать, что оптимальной прививной дозой для двукратной вакцинации глубокостельных коров является 10 см3, для телят - 3 см3 с интервалом 14 суток.

3.3.4 Изучение антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на крупном рогатом скоте

Исследования проводили в стационарно неблагополучных хозяйствах по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на глубокостельных коровах. Животным вакцину вводили подкожно в дозе по 10 см двукратно за 50-60 дней до отела с интервалом 14 дней. Через 7 и 14 дней после 1-ой вакцинации и в те же сроки после 2-ой вакцинации от животных брали кровь и определяли фагоцитарную активность нейтрофилов, количество Т- и В-лимфоцитов, уровень титров специфических антител в сыворотке крови. Проводили также определение титров специфических антител в сыворотке первой порции молозива отелившихся коров и в крови новорожденных телят через 24 ч после приема молозива. Результаты серологических исследований сывороток крови и молозива представлены в таблицах 1 и 2. Данные, представленные в этих таблицах, указывают, что у коров после иммунизации происходит достоверное повышение титров специфических антител в крови и молозиве, а также у телят в крови после приема молозива от вакцинированных коров.

Таблица 1 - Содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных коров (M±m, п = 5, log2 )

Антитела к антигенам Сроки исследования

до вакцинации 7 сут после 1-ой вакцинации 14 сут после 1-ой вакцинации 7 сут после 2-ой вакцинации 14 сут после, 2-ой вакцинации

С/. perjringens тип А 9,64±0,35 9,44±0,42 11,24±0,27 12,44±0,42 13,4410,22 '

С1. perjringens тип С - 8,64±0,35 9,840±0,42 12,24±0,27 13,24±0,27

С/, perjringens тип Д - 8,44±0,42 10,04±0,27 12,04±0,27 13,04±0,27

К coli К 99 4,12±0,42 5,12±0,55 7,52±0,22 8,52±0,22 8,72±0,27

Е. coli А20 - 5,72±0,27 7,32±0,50 8,52±0,22 9,12±0,22

Таблица 2 - Содержание антител в сыворотках молозива коров и крови новорожденных телят (М+т, п=5)

Группы коров и телят Титры антител, 1о£з

к СІ. рефіщегя в ИФА кЕ.соїі в РА

тип А типС тип Д К99 А20

в сыворотке молозива коров

невакцинированные 12,24±0,27 - - 5Д2±0,42 -

вакцинированные 13,64±0,35 13,44±0,22 13,24±0,27 8,72±0,27 8,52±0,22

в сыворотке крови телят

от невакцинированных коров 10,84±0,42 - - 4,92±0,45

от вакцинированных коров 13,44±0,42 13,24±0,27 13,24±0,27 8,52±0,22 8,32±0,35

После иммунизации у животных наблюдается увеличение содержания в периферической крови Т-лимфоцитов от 51,4± 0,57 до.57,4± 0,44 и В-лимфоцитов от 17,4±0,67 до 25,2±0,63, повышение фагоцитарной активности нейтрофилов с 59,Ш,19 до 79,5±1,14% и фагоцитарного индекса с 5,0±0,5 до 7,5±0,25 (р<0,05). Следовательно, после вакцинации у животных наблюдается активизация как клеточных, так и гуморальных факторов иммунитета.

3.3.5 Оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят в производственных условиях

Производственное испытание экспериментальных серий ассоциированной вакцины проводили в ООО «Среднее Девятово» Лаишевского, ООО им. Тимирязева Балтасинского и КФХ «Сулейманов А.И.» Нурлатского районов РТ, стационарно неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

В ООО «Среднее Девятово» опыты проводили на 46 глубокостельных коровах и 60 телятах 18-20 дневного возраста. Коровам вакцину вводили подкожно в дозе по 10 см3 двукратно за 50-60 дней до отела с интервалом 14 дней. Телят иммунизировали также двукратно с интервалом 14 дней в дозе по 3 см3. В результате исследований установили, что вакцина безвредна для животных, не вызывает осложнений и создает у животных активный поствакцинальный иммунитет. Так, в группе новорожденных телят, полученных от вакцинированных. коров, заболеваемость составила 13,1%, сохранность - 89,9%, тогда как в группе телят, полученных от не вакцинированных коров, эти показатели составили 78,8 и 11,1%, соответственно. В группе телят старшего возраста, вакцинированных

ассоциированной вакциной, заболеваемость анаэробной энтеротоксемией и эшерихиозной диареей составила 8,3%, сохранность 91,6%, а в группе не вакцинированных телят эти показатели составили соответственно 21,9 и 73,9%.: Следовательно, применение вакцины с профилактической целью позволило. снизить заболеваемость новорожденных телят в ООО «Среднее Девятово» в 6,4 раза, телят старшего возраста — в 2,6 раза и тем самым повысить ^сохранность новорожденных телят на 12,2%, телят старшего возраста - на 17,7%.

Результаты испытания вакцины в ООО им. Тимирязева и КФХ «Сулейманов , А.И.» представлены в таблице 3. В этих хозяйствах специфическую/профилактику анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят начали с иммунизации стельных коров и нетелей, которым вакцину в дозе по 10 см3 вводили подкожно двукратно за 50-60 дней до отела с интервалом 14 дней. Телят, полученных от вакцинированных коров, иммунизировали двукратно в возрасте 18-20 дней в дозе по 3 см3 с интервалом 14 дней. При этом установили, что вакцина безвредна для животных, не вызывает поствакцинальных осложнений. Анализ полученных результатов показал, что вакцина обладает выраженными иммуногенными свойствами. Так, после начала применения ассоциированной вакцины заболеваемость новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями в стационарно-неблагополучных хозяйствах снизилась с 92,1% до 19,9%, т.е. в 4,6 раза, повысилась сохранность телят с 77,8% до 94,3%, т.е. на 16,4%.

Таблица 3 - Показатели эффективности применения ассоциированной вакцины в ООО им. Тимирязева и КФХ «Сулейманов А.И.»

Наименование хозяйства Получено телят Заболело Пало Сохранность, %

кол-во % кол-во %

. до применения ассоциированной вакцины

ООО им. Тимирязева 1041 887 85,2 197 18,92 81,08

КФХ «Сулейманов А И.» 1986 1901 95,72 473 23,81 76,19

Всего 3027 2788 92,1 670 22,13 77,87

после применения ассоциированной вакцины

ООО им. Тимирязева 1221 212 17,36 47 3,84 96,14

КФХ «Сулейманов А.И.» 1608 352 21,89 114 7,08 92,92

Всего 2829 564 19,93 161 5,69 94,31

3.3.6 Экономическая эффективность применения вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят

' Экономическую эффективность ассоциированной вакцины определяли опытным путем, сравнивая показатели сохранности новорожденных телят в контрольных и опытных группах, полученных соответственно от не вакцинированных и вакцинированных коров. С этой целью вначале расчетным путем была определена стоимость одного новорожденного теленка, стоимость одного теленка в тридцатидневном возрасте и количество дополнительно сохраненных телят. В наших опытах сохранность в контрольной группе составила 77,8%, в опытной - 94,3%, т.е. поголовье, предотвращенное от падежа при использовании ассоциированной вакцины, составило 16 голов в расчете на 100 голов.

Использование • ассоциированной вакцины в расчете на 100 голов позволило предотвратить потери продукции на сумму 93970,66 руб, при этом получить экономический эффект 90820,25 руб за счет предотвращения потерь от падежа животных. При этом экономический эффект составил 28,8 руб. на 1 руб затрат.

4 ВЫВОДЫ

1. На основании изучения этиологической структуры желудочно-кишечных заболеваний телят в регионе Среднего Поволжья научно обоснована целесообразность, перспективность разработки и внедрения в ветеринарную практику вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят для профилактики смешанного течения этих инфекций.

2. Разработана технология изготовления, контроля, инструкция по применению и предложена для внедрения в ветеринарную практику вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят (Патент РФ на изобретение №2428202 от 10.09.2011 г.).

3. В опытах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте установлено, что разработанная вакцина безвредна, ареактогенна и безопасна в экологическом отношении, обладает выраженной антигенной активностью и индуцирует выработку специфических антител у кроликов к антигенам Clostridium perfringens в титрах 13,24±0,27 - 13,84±0,22 log2, к E.coli 8.72±0,27 - 8,92±0,27 log2, у крупного рогатого скота соответственно 13.04±0,27 - 13,44±0,22 log2 и 8,72±0,27 - 9,12±0,22 log2.

4. Оптимальной прививной дозой вакцины, обеспечивающей высокую иммуногенную активность при двукратном ее введении с интервалом 14 сут, является для глубокостельных коров и нетелей по 10 см , для телят 18-20-дневного возраста — по 3 см3.

увеличивается относительное содержание Т- и В-лимфоцитов: у кроликов с 48,4±1,61 до 55,6±2,14% и с 17,2±1,18 до 26,4±2,56%, соответственно; у коров - с 51,4±0,57 до 57,4±0,44% и с 17,4±0,67 до 25,2±0,63%, соответственно. Следовательно, иммунизация ассоциированной вакциной у животных вызывает иммунобиологическую перестройку в их организме, активизируя как клеточные, так и гуморальные факторы иммунитета.

б. Заболеваемость новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями в стационарно неблагополучных хозяйствах после начала применения ассоциированной вакцины снизилась в 4,6 раза, сохранность телят повысилась на 16,4%.

7. Экономический эффект от применения ассоциированной вакцины в стационарно неблагополучных хозяйствах составляет 28,82 руб. на 1 руб. затрат.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (Патент РФ №2428202 от 10.09.2011 г.).

2. Разработаны нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

— Технические условия на «Вакцину ассоциированную против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят», ТУ 9384-00100492374-2012 (утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласованы с ГУВ КМ РТ);

— Инструкция по применению «Вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласована с ГУВ КМ РТ);

— Инструкция по изготовлению и контролю «Вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

6 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Спиридонов А.Г. Инфекционная энТеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья. / Г.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири. -Краснообск, 2010. - С. 134 - 139.

2. Спиридонов А.Г. Мониторинг анаэробной энтеротоксемии молодняка животных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья / А.Г. Спиридонов, Х.Н. Макаев, А.Ф. Махмутов // Обеспечение продовольственной безопасности России. Если не мы, то кто?! - Курск, 2010. - С. 270 - 272.

3. * Патент РФ №2428202. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Г.Н. Спиридонов, А.А.Иванов, Х.Н.Макаев, М.Т.Хурампшна, А.Г. Спиридонов, Э.Р.Галиуллина // Опубликовано 10.09.2011, Бюл. №25.

4. Спиридонов А.Г. Анаэробная энтеротоксемия телят в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / А.Г. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина // Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество): Матер. Междунар. науч. конф. -М.,2011.-С. 62 - 63.

5. Спиридонов А.Г. Этиология инфекционных диарей новорожденных поросят и телят / А.Г. Спиридонов, А.Ф. Махмутов // Ветеринарная медицина: Межведомственный темат. науч. сб. - Харьков, 2011. - Вып. 95. -С. 264-265.

6.* Спиридонов А.Г. Этиология желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят в хозяйствах Среднего Поволжья и Предуралья. / А.Г. Спиридонов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Казань, 2011. -Том206.-С. 200-204.

7* Спиридонов А.Г. Специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. / А.Г. Спиридонов, Х.Н. Макаев, Г.Н. Спиридонов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. -Казань, 2012. - Том 209. - С. 284 - 289.

8. * Иванов A.A. Результаты испытания вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на лабораторных животных. / A.A. Иванов, Г.Н. Спиридонов, Х.Н. Макаев, А.Г. Спиридонов // Ветеринарный врач. - 2012. - №2. - С. 10 - 12.

* - издания, рекомендованные ВАК РФ.

Подписало к печати 20. 12 JÍ. Формат 60x84/16

ЗаказЕЬ Тираж/ССэкз. Усл. печ.л. /і?

Бумага офсетная Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420029, Казань, Сибирский тракт, 35

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Спиридонов, Антон Геннадьевич

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Анаэробная энтеротоксемия телят. Возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, клинические признаки, патологоанатомические данные, диагноз, иммунитет и специфическая профилактика.

1.2 Эшерихиозная диарея телят. Возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, клинические признаки, патологоанатомические данные, диагноз, иммунитет и специфическая профилактика.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материалы исследований.

2.2 Методы исследований.7.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Изучение этиологической структуры и клинико-эпизоотологических аспектов анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят в регионе Среднего Поволжья.

3.2 Разработка технологии изготовления, методов контроля и применения вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят

3.2.1 Биологическая характеристика производственных штаммов бактерий С/. perfringens и E.coli, используемых для изготовления ассоциированной вакцины.

3.2.2 Разработка режимов выращивания культур E.coli, получения бактериальной массы и анатоксинов.

3.2.3 Разработка режимов выращивания культур С/, perfringens, получения бактериальной массы и анатоксинов

3.3 Лабораторный регламент технологии изготовления ассоциированной вакцины.

3.3.1 Оценка стерильности, безвредности, реактогенности ассоциированной вакцины на лабораторных животных.

3.3.2 Изучение антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных.

3.3.3 Определение прививной дозы ассоциированной вакцины для глубокостельных коров и телят.

3.3.4 Изучение антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на крупном рогатом скоте.

3.3.5 Оценка эффективности вакцины асоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят в производственных условиях.

3.3.6 Экономическая эффективность применения вакцины.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят"

сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие высокой заболеваемости и падежа новорожденного молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебно-профилактические мероприятия.

В этиологии этих болезней в большинстве случаях регистрируется ассоциация бактерий Е. coli, сальмонелл, стрептококков, С/, perfringens и других (Малахов Ю.А. и соавт., 1995; Салимов В.А. и соавт, 2002; Шахов А.Г., 2002; Субботин В.В. и соавт., 2004; Папуниди К.Х. и соавт., 2006; Иванов A.B. и соавт., 2011).

Анаэробную энтеротоксемию вызывают бактерии С/, perfringens, которых подразделяют на шесть типов: А, В, С, D, Е и F, отличающихся друг от друга антигенной структурой и вырабатываемыми токсинами. У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов А, С и D. Средство для специфической профилактики данной инфекции у телят в РФ не разработано (Антонов Б.И. и соавт., 1986; Салимов В.А. и соавт, 2002; Куриленко А.Н. и соавт, 2006).

Эшерихиозную диарею вызывают энтеротоксигенные штаммы Е. coli, синтезирующие адгезивные антигены К88, К99, 987Р, F41, А20 и Att25. У телят в более 80% случаях болезнь вызывается бактериями Е. coli, продуцирующими адгезивные антигены А20 и К99 (Попов Е.А. и соавт., 1991; Светоч Э.А., 1994; Гаффаров Х.З., Иванов A.B., 2002; Зароза В.Г. и соавт., 2008; Пирожков М.К. и соавт., 2011). Для профилактики эшерихиоза в РФ выпускают: «Вакцину поливалентную гидроокисьалюминиевую против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят, ягнят», «Вакцину против эшерихиоза с.-х. животных «Коли-Вак», содержащую адгезивные антигены

К99, К88, 987Р, ¥41, ТЛ-, ТС-анатоксины и соматические антигены серотипов 078, 0141.

Анализ литературных данных и результаты многолетних исследований сотрудников нашего центра свидетельствуют, что в хозяйствах, стационарно неблагополучных по желудочно-кишечным болезням, анаэробная энтеротоксемия у телят наиболее часто проявляется в виде смешанной инфекции с эшерихиозом (Хайруллин И.Н. и соавт., 1996; Казимир А.Н., 1997; Салимов В.А. и соавт, 2002; Куриленко А.Н. и соавт, 2006; Спиридонов Г.Н. и соавт., 2010).

Исходя из того, что в настоящее время вакцина против энтеротоксемии телят не разработана, изыскание эффективных средств специфической профилактики смешанной инфекции - анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи у телят является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Цель работы - на основании данных определения этиологической структуры желудочно-кишечных заболеваний телят разработать и изучить иммунологическую эффективность ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. Задачи исследований:

4. Разработать НД на биопрепарат и предложить его для внедрения в ветеринарную практику.

Научная новизна работы. Впервые разработана технология изготовления и способ контроля вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. б

Определены оптимальные прививные доза вакцины для глубокостельных коров, нетелей и телят для специфической профилактики анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи.

Новизна исследований подтверждена Патентом РФ на изобретение №2428202 от 10.09.2011 г. (удостоен диплома «Лучшее изобретение года»).

Практическая значимость работы. На основе проведенных исследований для внедрения в ветеринарную практику предложена «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят». Применение ее в стационарно неблагополучных по данным инфекциям пунктах позволяет значительно снизить заболеваемость и гибель молодняка крупного рогатого скота, тем самым повысить их сохранность.

Разработаны нормативные документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

- Технические условия на «Вакцину ассоциированную против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят», ТУ 9384-00100492374-2012 (утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласованы с ГУВ КМ РТ);

- Инструкция по применению «Вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласована с ГУВ КМ РТ);

- Инструкция по изготовлению и контролю «Вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- ежегодных заседаниях Ученого совета Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») при обсуждении отчетов о НИР за 2010-2012 гг.;

- Международной научно-практической конференции «Обеспечение продовольственной безопасности России. Если не мы, то кто?» (Курск, 2010);

- Международной научной конференции, посвященной 80-летию организации ВГНКИ «Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество)» (Москва, 2011);

- Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты разработки, приготовления, контроля качества и использования ветеринарных иммунобиологических препаратов на основе современных биотехнологий» (Харьков, 2011);

Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (Казань, 2011; 2012);

- Международной научно-практической конференции молодых ученых ФГБУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 2012).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК России, получен Патент РФ №2428202 «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Этиологическая структура желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья;

4. Оценка профилактической эффективности ассоциированной вакцины в производственных условиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы, состоящий из 268 источников, в том числе 131 иностранных авторов, и приложение. Диссертация содержит 17 таблиц и иллюстрирована 6 рисунками.

Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований и их научно-практическую ценность.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Спиридонов, Антон Геннадьевич

выводы

1. На основании изучения этиологической структуры желудочно-кишечных заболеваний телят в регионе Среднего Поволжья научно обоснована целесообразность и перспективность разработки и внедрения в ветеринарную практику вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят для профилактики смешанного течения этих инфекций.

3. В опытах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте установлено, что разработанная вакцина безвредна, ареактогенна и безопасна в экологическом отношении, обладает выраженной антигенной активностью и индуцирует выработку специфических антител у кроликов к антигенам Clostridium perfringens в титрах 13,24±0,27 - 13,84±0,22 log2, к E.coli 8.72±0,27 - 8,92±0,27 log2, у крупного рогатого скота, соответственно 13.04±0,27 - 13,44±0,22 log2 и 8,72±0,27 - 9,12±0,22 log2.

4. Оптимальной прививной дозой вакцины, обеспечивающей высокую иммуногенную активность при двукратном ее введении с интервалом 14 сут, является для глубокостельных коров и нетелей 10 см , для телят 18-20-дневного возраста-3 см3.

5. После двукратной вакцинации у животных активизируется фагоцитарная активность нейтрофилов в периферической крови: у кроликов с 63,6±0,83 до 83,0± 1,58%, у коров - с 59,0±0,79 до 79,5± 1,14%; достоверно увеличивается относительное содержание Т- и В-лимфоцитов: у кроликов с 48,4±1,61 до 55,6±2,14% и с 17,2±1,18 до 26,4±2,56% соответственно; у коров - с 51,4±0,57 до 57,4±0,44% и с 17,4±0,67 до 25,2±0,63%, соответственно. Следовательно, иммунизация ассоциированной вакциной у животных

97 вызывает иммунобиологическую перестройку в их организме, активизируя как клеточные, так и гуморальные факторы иммунитета.

6. Заболеваемость новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями в стационарно неблагополучных хозяйствах после начала применения ассоциированной вакцины снизилась в 4,6 раза, сохранность телят повысилась на 16,4%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Спиридонов, Антон Геннадьевич, Казань

1. Аавер Э.Я. Эпизоотология инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в Эстонской ССР / Э.Я. Аавер, Ю.В. Фомин, Ю.К. Кумар // Тез. докл. Всесоюз. межвуз. научн. конф по вет. вирусологии. М. -1973.-С. 41-43.

2. Алешкевич В.Н. Совершенствование специфической профилактики анаэробной энтеротоксемии телят/ В.Н. Алешкевич// Автореф. дис. канд. вет. наук. Витебск, 1992. -19с.

3. Алиев A.A. Справочник ветеринарного фельдшера / A.A. Алиев, Н.Л. Андреева, Н.Б. Баженова и др. СПб.: Изд-во «Лань», 2007. - 896 с.

4. Андреев Г.М. Справочник ветеринарного врача / Г.М. Андреев,

5. B.У. Давыдов, B.C. Злобин и др. СПб.: Изд-во «Лань», 2000. - 896 с.

6. Андросик H.H., Москалев К.В. Этиологическая роль энтеротоксигенных штаммов Clostridium perfringens типа А в заболевании телят энтеротоксемией. // Известия Академии аграрных наук Республики Беларусия №2. 1999. с. 73-76.

7. Антонов Б.И. Ветеринарные лаборатории на страже здоровья животных / Б.И. Антонов; O.A. Тугаринов; К.Ф. Киржаев; Л.Л. Погребняк;

8. C.B. Николаев; С.С. Яковлев; H.H. Осипов; Е.А. Хабарова; С.Г. Африкантов100

9. Специфич. профилактика и диагностика инфекц. болезней животных. -1986.-С. 87-90

10. Апатенко В.М. Смешанные инфекции сельскохозяйственных животных / В.М. Апатенко // Урожай. Киев, 1990. - С. 176.

11. Асонов Н.Р. Микробиология / Н.Р. Асонов // М.: Колос, 1997. -352 с.

12. Ахметсадыков H.H. Адгезивные антигены эшерихий и их морфологические особенности / H.H. Ахметсадыков, К.К. Муканов // Актуал. проб л. патологии животных и человека. Барнаул, 1996. - С. 16-18.

13. Бакулов И. А. Рекомендации по методике эпизоотического исследования / И.А. Бакулов, Г.Г. Юрков, А.П. Песковацков; под. ред. И.А.Бакулова. Покров. - 1975. - С. 75.

14. Беркли Р. Определитель бактерий Берджи / Р. Беркли, Э. Бок, Д. Бун и др. Т. 1: Пер. с англ. - М.: Мир, 1997. - 432 с.

15. Бессарабов Б.Ф. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, A.A. Ватутин, Е.С. Воронин и др. М.: КолосС, 2007. -С. 92- 99.

16. Бехтерев С.И. К вопоросу о заявке на изобретение, относящееся к штаммам микроорганизмов / С.И. Бехтерев, А .Я. Самуйленко // Метер. межд. науч.-прак. конф. Щелково. - 2005. - С. 405-407.

17. Блинов Н.И. Метод выделения и идентификации Т- и В-лимфоцитов / Н.И. Блинов // Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. -М.: Агропромиздат, 1985. С. 215-222.

18. Борисович Ю.Ф Ветеринарные препараты: Справочник / Ю.Ф.Борисович, Л.В.Кириллов, Д.Ф. Осидзе. М.: Колос, 1981. - С. 278283.

19. Брюсова М.Б. Идентификация и дифференциация энтерогеморрагических E.coli методом ПНР / М.Б. Брюсова, И.Л. Обухов, O.A. Тугаринов, М.К. Пирожков, А.Н. Панин // Ветеринария. 2008. - №12. -С. 45-48.

20. Бургасов П.Н. Эволюция клостридиозов / П.Н. Бургасов, С.Н. Румянцев М.: «Медицина», 1974. - С. 46-52.

21. Бурико Б.Ю. Этиологическое значение клостридий при инфекционных заболеваниях крупного рогатого скота / Б.Ю. Бурико, A.B. Капустин // Тезисы доклады международной научной конференции. -М, 2011.-С. 47-48.

22. Бычковский A.M. Биологические свойства эпизоотических вирусов трансмиссивного гастроэнтерита и ротавирусной болезни свиней, используемых для конструирования вакцин: автореф. дис.канд.вет.наук / A.M. Бычковский. Минск, 1996. - 19 с.

23. Васильев Д.А. Щербаков A.A., Карпунин JI.B., Золотухин С.Н. Методы частной бактериологии // Ульяновск. 2004. - С. 18-26.

24. Волков Г.К. Гигиена выращивания здорового молодняка / Г.К. Волков // Ветеринария. 2003. - №1. - С. 3-6.

25. Волков Г.К. Проблемы выращивания здорового молодняка / Г.К. Волков, В.Д. Баранников // Ветеринария. 1997. - №2. - С. 7-10.

26. Гаффаров Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, A.B. Иванов, Е.А. Непоклонов и др. Казань: Изд-во «Фэн», 2002. - 592 с.

27. Головко А.Н. Антигенная вариабельность фимбриальных адгезинов E.coli / А.Н. Головко, Е. Самофалова // Ветеринария. 1997. -№8.-С. 23-25.

28. Головко А.Н. Фимбриальные адгезины энтеротоксигенных эшерихий / А.Н. Головко // Ветеринария. 1993. - №9. - С. 31-32.

29. Горковенко Н.Е. Острые кишечные расстройства новорожденных телят бактериальной этиологии / Н.Е. Горковенко, Ю.А. Макаров, A.M. Кузьменко, В.А. Серебряков // Труды ВИЭВ. Т. 76. - М.: ВИЭВ, 2011. -С. 179-181.

30. Джупина С.И. Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотического процесса / С.И. Джупина. Новосибирск: Наука, 1991. 144 с.

31. Дереза А.Ф. Анаэробная энтеротоксемия телят, обусловленная энтеротоксином Кл. перфрингенс типа А / А.Ф. Дереза, В.А. Ленькова // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987.- С. 154-155.

32. Дереза А.Ф. Совершенствование лабораторной диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных / А.Ф. Дереза, В.А. Ленькова // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987. с. 154.

33. Дереза А.Ф. Этиопатогенная роль Closrtidium perfringens при желудочно-кишечных заболеваниях телят / А.Ф. Дереза, В.А. Ленькова // Микроорганизмы в сельском хозяйстве. Минск, 1983. - с. 80.

34. Дереза А.Ф. О развитии иммунитета у крупного рогатого скота к токсинам Кл. перфрингенс типов А,В,С,Д / А.Ф. Дереза, В.Н. Алешкевич, A.A. Солоненко // Вет. наука. Минск, 1992 Т.Вып.ЗО. С. 77-84.

35. Дереза А.Ф. Совершенствование лабораторной диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных / А.Ф. Дереза // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987.-С. 154.

36. Джупина С.И. Колитоксикобактериоз инфекция факторная / С.И. Джупина // Ветеринария Сибири. - 2001. - №5. - С. 14-17.

37. Джупина С.И. Этиология и профилактика желудочно-кишечных болезней телят / С.И. Джупина // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Воронеж, 2002. - С. 8-11.

38. Емельяненко П. А. Ентеротоксины кишечных бактерий / П.А. Емельяненко // Ветеринария. 2000. - № 2. - С. 25-27.

39. Жукова E.B. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных телят / Е.В. Жукова, Г.И. Устинова // Труды ВИЭВ. Т. 76. -М.: ВИЭВ, 2011.-С. 46-50.

40. Зароза В.Г. Возбудители колибактериоза животных и их лабораторная идентификация / В.Г. Зароза, Г.А. Бурова, В.Г. Буров // Ветеринария. 2008. - №3. - С. 29-32.

41. Зароза В.Г. Эшерихиоз телят. М.: "Агропромиздат". - 1991. -238 с.

42. Зароза В.Г. Энтеротоксемия крупного рогатого скота, вызываемая CI. perfringens / В.Г. Зароза // Сельское хозяйство за рубежом. -1984.- Т.8. С. 51-53.

43. Зелютков Ю.Г. Идентификация адгезивных антигенов у патогенных эшерихий / Ю.Г. Зелютков // Учен. зап. Витеб. гос. акад. вет. медицины, 1995. Т.32. - С. 108-110.

44. Зелютков Ю.Г. Эффективность одновременной иммунизации коров против ротавирусной инфекции и анаэробной энтеротоксемии / Ю.Г. Зелютков, В.Н. Алешкевич // Учен. зап. Витеб. гос. акад. вет. медицины, 1994.-Т. 31.-С. 116-117.

45. Земсков A.M. Некоторые механизмы действия адъювантов /A.M. Земсков // Иммунология. 1982. - №1. - С. 6-13.

46. Золотухин С.Н. Неспецифическая профилактика смешанной кишечной инфекции телят и поросят / С.Н. Золотухин, Л.П. Пульчеровская, Л.С. Каврук // Практик. 2006. - №6. - С. 72-76.

47. Иванов A.A. Результаты испытания вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на лабораторных животных. / A.A. Иванов, Г.Н. Спиридонов, Х.Н. Макаев, А.Г. Спиридонов // Ветеринарный врач. 2012. - №2. - С. 10 - 12.

48. Иванов A.B. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению желудочно-кишечных болезней новорожденных телят / A.B. Иванов, Папуниди К.Х., Тремасов М.Я., Макаев Х.Н., Закирова104

49. Г.Ш., Степанов В.И., Хазипов H.H., Чурин С.И., Камалов Б.В., Ахметова Ф.Г., Аглямов Р.Н. // Казань. - 2011. - 39 с.

50. Инамалиев М.И. Иммунопрофилактика колибактериоза телят / М.И. Инамалиев, Е.С. Самойленко, К. Абдыкеримов // Тр. Киргизского НИВИ.- 1987.- Т.1.-С. 60-64.

51. Исмаилов Э.И. Биохимические и патоморфологические изменения при гастроэнтеритах телят / Э.И. Исмаилов // Ветеринария. 2007. - №4.-С. 13-14.

52. Казимир А.Н. Эпизоотология, этиология, фаготерапия и специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии телят в хозяйствах Ульяновской области : автореф. дис.канд.вет.наук / А.Н. Казимир. -Казань, 1997.-22 с.

53. Кафтырева J1.A. Использование молекулярно-генетических методов для уточнения этиологической роли и серотипирования эшерихий / J1.A. Кафтырева, М.А. Макарова // Молекулярная диагностика: Сб. науч. трудов. Т.2. - М., 2010. - С. 345-347.

54. Кириллов JI.B. Инфекционная анаэробная энтеротоксемия животных / JI.B. Кириллов, З.Х. Межиева // Российский ветеринарный журнал. 2007 - №3. - с. 4-9.

55. Кириллов J1.B. Предуприеждение инфекционных болезней анаэробной этиологии / JI.B. Кириллов // Ветеринария, 2001. №1 - С. 16-19.

56. Кисленко В.Н. Возбудители инфекционной анаэробной энтеротоксемии / В.Н. Кисленко, Н.М. Колычев, О.С. Суворина // Ветеринарная микробиология и иммунология. М.: КолосС, 2007. - С. 6467.

57. Колычев Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: КолосС, 2003.-С. 289- 294

58. Коляков Я.Е. Колибактериоз телят / Я.Е. Коляков, С.С. Гительсон, Л.С. Каврук // М.: КолосС, 1970. 223 с.

59. Компанченко A.C. Некоторые аспекты эпизоотологии желудочно-кишечных болезней телят в Ростовской области / A.C. Компанченко // Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России. п. Персиановский, 2003. - С. 56-57.

60. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики / И.П. Кондрахин, A.B. Архипов, В.И. Левченко, Г.А. Таланов, Л.А. Фролова, В.Э. Новиков. М.: Колос, 2004. - С. 89-91.

61. Коновалова Т.А. Результаты применения методов амплификации нуклеиновых кислот для выявления диарогенных E.coli / Т.А. Коновалова,

62. A.B. Бондарева, А.Т. Подколзин, Е.М. Костенко, Т.В. Хорошилова, Н.М. Юдицкая // Молекулярная диагностика: Сб. науч. трудов. Т.2. - М., 2010.-С. 348-351.

63. Конопаткин A.A. Эпизоотология и инфекционные болезни / A.A. Конопаткин, Б.Т. Артемов, И.А. Бакулов и др. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: КолосС, 1993. - С. 553-564.

64. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник / А.П. Красильников, Т.Р. Романовская. 2-е изд., доп. и перераб. - Мн.: «Асар», 1999. - С. 169, 287, 388-389.

65. Козловский Г.А. Методика изготовления вакцины из лапинизированного вируса ящура типа О / Г.А. Козловский, И.И. Носов, М.Ф. Шанин // Тез. докл. науч.- произ. конф. ВГНКИ. 1972. - С 54-55.

66. Куликовский A.B. Токсигенные эшерихии актуальная проблема ветеринарии и медицины / A.B. Куликовский, А.Н. Панин,

67. B.В. Соснина // Ветеринария. 1997. - №3. - С. 25-27.

68. Куриленко А.Н. Бактериальные и вирусные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, B.JI. Крупальник, Н.В. Пименов. М.: КолосС, 2006. - 296 с.

69. Курлович Д.В. Разработка и апробация вакцины ассоциированной против колибактериоза и анаэробной энтеротоксемии телят / Д.В. Курлович, В.К. Карпович, Н.В. Москалева // Вет. наука. Минск, 2001 Т.Вып.35.-с. 108-113.

70. Лазарева Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. М.: Медицина, 1985. - 256 с.

71. Лосякина Н.В. Индикация энтеротоксигенных штаммов клостридиум перфрингенс методом встречного иммуноэлектрофореза / Н.В. Лосякина, А.Ф. Дереза // Вет. наука. Минск, 1992 Т.Вып.30. С. 84-88.

72. Макаров В.В. Сапронозы, факторные и оппортунистические инфекции (к истории этиологических воззрений в отечественной эпидемиологии и эпизоотологии) / В.В. Макаров // Ветеринарная патология. -2008.-№1.-с. 7-17.

73. Малахов Ю.А. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных / Ю.А. Малахов, Р.В. Душук // Ветеринария. 2001. - №1. - С. 35-38.

74. Малахов Ю.А. Специфическая профилактика эшерихиоза животных / Ю.А. Малахов, O.A. Тугаринов, М.К. Пирожков, Т.И. Исхаков // Ветеринария 1995. - №8. - 5 с.

75. Малахов Ю.А. Специфическая профилактика эшерихиоза животных / Ю.А. Малахов, O.A. Тугаринов, М.К. Пирожков и др. // Ветеринария. 1993. - №8. - С. 5-7

76. Манасян A.B. Активность ферментов пищеварительной системы у телят при диспепсии / A.B. Манасян, Г.Р. Петоян, A.M. Шахбазян // Ветеринария. 2003. - №7. - С. 39-40.

77. Мансурова Е.А. Изучение механизма действия токсина энтеробактерий // Е.А. Мансурова, Е.М. Ленченко // Ветеринария. 2008. -№8.-С. 60-64.

78. Мельников В.Н. Основы профилактики анаэробных инфекций. / В.Н. Мельников, Н.И. Мельников, У.С. Еникеева Уфа, 1971. - С. 57-70.

79. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных. Утверждены ГУВ МСХ СССР.- М.: 1981.- Юс.

80. Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии и анаэробной дизентерии ягнят. Утверждены ГУВ МСХ СССР.- М.: 1984. 4 с.

81. Мищенко В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят / В.А. Мищенко, H.A. Яременко, Д.К. Павлов, О.И. Гетманский, A.B. Савин // Ветеринария. 2002. - №4. - С. 16-19.

82. Мищенко В.А. Особенности диарейных болезней крупного рогатого скота / В.А. Мищенко, H.A. Яременко, О.И. Гетманский, Д.К. Павлов, A.B. Савин // Ветеринария. 2001. - №5. - С. 5-7.

83. Моторыгин A.B. Количественно-качественная характеристика энтеробактерий при желудочно-кишечных болезнях телят / A.B. Моторыгин, Е.М. Левченко // Ветеринария. 2010. - №8. - С. 29-33.

84. Моторыгин A.B. Определение качественного и количественного состава микроорганизмов при дисбактериозе кишечника у телят / A.B. Моторыгин, Е.М. Ленченко // Сельскохозяйственная биология. 2011. - №2. - С. 103-107.

85. Мусаева М.Н. Инфекционные диареи новорожденных телят в условиях Дагестана (эпизоотология, профилактика, лечение) / М.Н. Мусаева // Автореф. дис. .кандид.вет. наук. Краснодар. -2010.-24 с.

86. Нестеров И.А. Эмерджентная эволюция перфрингенза (инфекционной анаэробной энтеротоксемии) животных в зоне Северного Кавказа / И.А. Нестеров // Ветеринарная патология. 2005. - №2.-с. 35- 41.

87. Нестеров И.А. Эмерджентные преобразования перфрингеоза животных на Северном Кавказе / И.А. Нестеров // Актуал. проб, инфек. патолог, и иммун. животных. Москва, 2006. - С. 103-107.

88. Овод A.C. Профилактика диарей новорожденных телят пробиотиками /A.C. Овод, В.В. Мосейчук // Ветеринария. 2007. - №2. -С. 6-7.

89. Олейник A.B. Расстройство желудочно-кишечного тракта у телят раннего возраста / A.B. Олейник // Ветеринария. 2009. - №1. - С. 6-8.

90. Панин А.П. Основные требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов / А.П. Панин, Н.Т. Татаринцев // Ветеринария. 1993. - №4. - С. 28-29.

91. Папуниди К.Х. Болезни желудочно-кишечного тракта и печени у животных / К.Х. Папуниди, В.А. Игнаткина, В.А. Горшков // Учебное пособие. Чебоксары, 2003. - 54 с.

92. Папуниди К.Х. Влияние пробиотиков на микрофлору желудочно-кишечного тракта новорожденных телят / К.Х. Папуниди, Г.Ш. Закирова // Ветеринарный врач. 2006. - №4. - С. 29-30.

93. Паршин П. А. Клинико-морфологические изменения при гастроэнтеритах у молодняка / А.П. Паршин, С.М. Сулейманов // Ветеринария. 2004. - №2. - С. 42-45.

94. Патент РФ №2428202. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Г.Н. Спиридонов, A.A. Иванов, Х.Н. Макаев, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов, Э.Р. Галиуллина// Опубликовано 10.09.2011, Бюл. №25.

95. Петров A.M. Формирование колострального иммунитета у животных / A.M. Петров // Ветеринария, №8, 2006. С. 35-41.

96. Петрянкин Ф.П. Иммунобиология комплекса «мать-плод-новорожденный» у животных / Ф.П. Петрянкин. Чебоксары, 2008. - 72с.

97. Пирожков М.К. Вакцина против эшерихиоза сельскохозяйственных животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС-анатоксины) / М.К. Пирожков, Ю.А. Малахов, O.A. Тугаринов // Сб. науч. тр. Т. 62. - М.: ВГНКИ, 2001. - С. 75-82.

98. Пирожков М.К. Диагностика, специфическая профилактика и лечение и бактериальных болезнях животных / М.К. Пирожков, C.B. Ленев, Е.В. Викторова, С. А. Стрельченко, Л.И. Тихонов, О. Д. Скляров // Ветеринария. 2011. - №1. - С. 24-28.

99. Плитов И.С. Определение чувствительности энтеробактерий к антибиотикам и дезинфицирующим средствам / И.С. Плитов // Ветеринария. -2010.-№12.-С. 42-45.

100. Попов Е.М. Новый антиген адгезии эшерихий возбудителей колидиареи телят / Е.М. Попов, Е.А. Светоч // Совершенствование методов гос. контроля вет. преп.: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. - М., 1991. - С. 210211.

101. Радионова К.П. Клостридиозы сельскохозяйственных животных / К.П. Радионова, О.В. Карабанова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2010 - №9. - с. 12-14.

102. Сапего В.И. Биологически активные вещества и естественная резистентность телят / В.И. Сапего, Е.В. Берник // Ветеринария. 2002. -№5. - С. 44-45.

103. Светоч Э.А. Факторы патогенности возбудителей эшерихиозов сельскохозяйственных животных // Автореф. дис. на соискание уч. степени д.в.н., М. 1992. - С. 10-12.

104. Селиванов A.B. Требования к штаммам микроорганизмов для изготовления биопрепаратов / A.B. Селиванов, JI.B. Кириллов, Ю.Ф. Борисович // Ветеринария. 1980. - №4. - С. 33-35.

105. Сидоров М.А. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят /М.А. Сидоров, Ю.Н. Федоров, О.М. Савич // Ветеринария. 2006. - №11. - С. 3-5.

106. Сидоров М.А., Полякова О.И. О профилактике колибактериоза новорожденных телят // Ветеринария. 1974. - № 3. - С. 53-55.

107. Скородумов Д.И. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Скородумов Д.И. и др. // М.: ИзографЪ, 2005.-653 с.

108. Скулябина З.А. Профилактика желудочно-кишечных болезней телят / З.А. Скулябина, А.П. Горбунова // Труды ВИЭВ. Т. 76. - М.: ВИЭВ, 2011.-С. 585-687.

109. Соколова H.A. Адгезивные антигены и энтеротоксины эшерихий, патогенных для молодняка сельскохозяйственных животных / H.A. Соколова, Н.И. Евглевская, Т.К. Курашвили, Ю.С. Кабанков, Г.Л. Дворкин // Ветеринария. 1989. - №5. - С. 33-35.

110. Соколова H.JI. Перспективы диагностики и специфической профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных животных / Н.Л. Соколова // Труды ВИЭВ. Т. 75. - М.: ВИЭВ, 2010. - С. 112-114.

111. Спиридонов А.Г. Этиология желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят в хозяйствах Среднего Поволжья и Предуралья. / А.Г. Спиридонов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. Т.206. -Казань, 2011. - С. 200 - 2004.

112. Спиридонов Г.Н. Желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят в условиях промышленных комплексов и разработка лечебно-профилактических мероприятий / Г.Н.Спиридонов // Ветеринарный врач.-2007. -С. 26-29.

113. Спиридонов Г.Н. Инфекционная энтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Г.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина,

114. А.Г. Спиридонов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер, науч.-практ. конф. Краснообск, 2010. - С. 134-139.

115. Стрельченко С.А. Тест-системы для выявления веротоксинов E.coli и антител к ним в сыворотке крови животных / С.А. Стрельченко, М.К. Пирожков // Ветеринария. 2010. - №4. - С. 54-57.

116. Субботин В.В. Основные элементы профилактики желудочно-кишечной патологии новорожденных животных / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. 2004. - №1. - С. 3-6.

117. Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомами диареи / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. 2001. - №4. - С. 3-7.

118. Сюрин В.Н. Состояние и проблемы ветеринарной микробиологии и биотехнологии / В.Н. Сюрин, Э.А. Шегидевич // Мат. Научной конференции. Москва. - 1998. - №3. - С. 24.

119. Татаринцев Н.Т. Основные показатели качества оценки анатоксинов и инактивированных вакцин против бактериальных и вирусных болезней животных / Н.Т.Татаринцев, М.В. Нестифорова // Сб. науч. тр. ВГНКИ. 1996. - Т. 59. - С. 13-18.

120. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории // Методическое указание МУ 4.2.2039-05. М,-2006.- 12 с.

121. Тугаринов O.A. Колибактериоз (эшерихиоз) животных / O.A. Тугаринов, М.К. Пирожков, Ю.А. Малахов // Сб. науч. тр. Т. 62. - М.: ВГНКИ, 2001.-С. 68-75.

122. Тугаринов O.A. Колибактериоз телят и ягнят // Справочник: Инф. болезни животных М. «Агропромиздат», 1987. - С. 204-207.

123. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве / В.П. Урбан, И.Л. Наймонов // М.: КолосС, 1984. 184 с.

124. Урбан В.П. Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням с ветеринарной санитарией. / В.П. Урбан, М.А. Сафин, A.A. Сидорчук и др. М.: КолосС, 2002. - С. 175-178.

125. Ургуев K.P. Иммуногенез при вакцинации овец полианатоксином против клостридиозов / K.P. Ургуев // Пробл. ветеринарной иммунологии. -1987.-С. 98-101.

126. Шахов А.Г. Энтеротоксемия телят и поросят/ А.Г. Шахов, А.И Ануфриев, Ю.Н. Бригадиров, П. Ануфриев // Животноводство России. -2006.-С. 49-50.

127. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. Межд. научн.-практ. конф. Воронеж, 2002. - С. 3-8.

128. Шажко Л.Ф. Сравнительная оценка иммуногенности противояшурных формолвакцин, приготовленных с гидратом окисиалюминия и фосфатом кальция / Л.Ф. Шажко, М.Г. Удалых // Ящур: мат. науч. конф. Владимир. - 1970. - С 56-57.

129. Шуба Г.М. //Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии. Москва «Логос», 2003. С. 123-125.

130. Щербаков П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят / П.Н. Щербаков, А.Г. Гусев // Ветеринария. 2002. -№3. - С. 15-16.

131. Эль Ганам М.Л. Токсичность и патогенность эшерихий / М.Л. Эль Ганам, М.А. Сидоров // Ветеринария. 1986. - №2. - С. 66-67.

132. Abutarbush М.А. Jejunal hemorrhage syndrome in 2 Canadian beef cows / M.A. Abutarbush, L.J. Carmalt, G.D. Wilson, P.B. O'Connor, G.E. Clark, M.J. Naylor // Can. Vet. J. 2004. - 45 - P. 48-50.

133. Abutarbush S.M. Jejunal hemorrhage syndrome in dairy and beef cattle: 11 cases (2001 to 2003) / S.M. Abutarbush, O.M. Radostits // Can. Vet. J. -2005.-46-P. 711-715.

134. Acres S.D. Acute undifferentiated neonatal diarrhea in beef calves I. Occurrence and distribution of infectious agents / S.D. Acres, C.J. Laing, J.R. Saunders, O.M. Radostits // Can. J. сотр. med. 1975. - 39 - P. 116-132.

135. Acres S.D. The efficacy of a modified live Reo-like virus vaccine and an E.cole bacterin for prevention of acute undifferentiated neonatal diarrhea ofbeef calves / S.D. Acres, O.M. Radostits // Can. Vet. Journal. 1976. - 17 - 8 - P. 197-212.

136. Aidar L. Subtypes of intimin among non-toxigenic Escherichia coli from diarrheic calves in Brazil / L. Aidar, A.S. Penteado, L.R. Trabulsi, J.E. Blanco, M. Blanco, J. Blanco, A.F. Pestana de Castro // Can.J.Vet.Research. -2000.-64-P. 15-20.

137. All-Charrakh A. Prevalence of verotoxine-producing Escherichia coli (VTEC) in a survey of dairy cattle in Najaf, Iraq / A. All-Charrakh, A. All-Muhana // Iranian journal of Microbiology. 2010. - 2 - 3 - P. 130-136.

138. Antao Esther-Maria Adhesive threads of extraintestinal pathogenic Escherichia coli / Esther-Maria Antao, L.H. Wieler, C. Ewers // Gut Pathogens. -2009.- 1 22-P. 1-12.

139. Bannam T.L. Clostridium perfringens-Escherichia coli shuttle vectors that carry single antibiotic resistance determinants / T.L. Bannam, J.I. Rood // Plasmid. 1993. - 29 - P. 233-235.

140. Bardiau M. Putative adhesins of enteropathogenic and enterohemorrhagic Escherichia coli of serogroup 026 isolated from humans and cattle / M. Bardiau, S. Labrozzo, J.G. Mainil // Journal of Clinical Microbiology. -2009. 47 - 7 - P. 2090-2096.

141. Barth H. Binary bacterial toxins: Biochemistry, Biology, and applications of common Clostridium and Bacillus proteins / H. Barth, K. Aktories, M.R. Popoff, B.G. Stiles // Microbiol. & Mol. Biol. Rev. 2004. - 68 - 3 - P. 373402.

142. Bellamy J.E.C. A comparison of histopathological changes in calves associated with K99" and K99+ strains of enterotoxigenic Escherichia coli / J.E.C. Bellamy, S.D. Acres // Can J. comp. med. 1983. - 47- P. 143-149.116

143. Blocker D. Cellular uptake of the Clostridium perfringens binary iota-toxin / D. Blocker, J. Behlke, K. Aktories, H. Barth // Infect. Immun. 2001. -69-P. 2980-2987.

144. Canard B. Genomic diversity and organisation of virulence genes in the pathogenic anaerobe Clostridium perfringens / B. Canard, B. Saint-Joanis, S.T. Cole // Mol. Microbiol. 1992. - 6 - P. 1421-1429.

145. Ceci L. Haemorrhagic bowel syndrome in dairy cattle: possible role of Clostridium perfringens type A in the disease complex / L. Ceci, P. Paradies, M. Sasanelly, D. de Caprariis, F. Guarda // J. Vet. Med. 2006. - 53 - P. 518-523.

146. Chen J. Epsilon-Toxin production by Clostridium perfringens type D strain CN3718 is dependent upon the age operon but not the VirS/VirR two-component regulatory system / J. Chen, J.I. Rood, B.A. McClane // mBio. 2011. -2-6-P. 1-11.

147. Coddens A. Erythrocyte and Porcine Intestinal Glycosphingolipids Recognized by F4 Fimbriae of Enterotoxigenic Escherichia coli / A. Coddens, E. Valis, J. Benktander et al. // PLoS One. 2011. - 6(9). - P. 2330.

148. Dastmalchi S.H. Characterization of shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) in feces of healthy and diarrheic calves in Urmia region, Iran / S.H. Dastmalchi, N. Ayremlou // Iranian journal of microbiology. 2012. -4-2-P. 63-69.

149. Dennison A.C. Hemorrhagic bowel syndrome in dairy cattle: 22 cases (1997-2000) / A.C. Dennison, D.C. VanMetre, R.J. Callan, P. Dinsmore, G.L. Mason, R.P. Ellis // J. Am Vet. Med. Assoc. 2002. - 221 - P. 686-689.

150. Dupuy B. Clostridium perfringens urease genes are plasmid borne / B. Dupuy, G. Daube, M.R. Popoff, S.T. Cole // Infection and Immunity. 1997. -65-6-P. 2313-2320.

151. Ewoldt J.M. Determination of the effect of single abomasal or jejunal inoculation of Clostridium perfringens type A in dairy cows / J.M. Ewoldt, D.E. Anderson // Can. Vet. J. 2005. - 46 - P. 821-824.

152. Ferrarezi M.C. Genotyping of Clostridium perfringens isolated from calves with neonatal diarrhea / M.C. Ferrarezi, T.C. Cardoso, I.S. Dutra // Anaerob. -2008.- 14-P. 328-331.

153. Francis D.H. Effect of Sodium Acetate on expression of K99 pili by Escherichia coli / D.H. Francis, C.J. Ryan, J.D. Fritzemeier // Infection and Immunity. 1983. - 41 - 3 - P. 1368-1369.

154. Francis D.H. Production of K88, K99, and 987P antigens by Escherichia coli cultured on synthetic and complex media / D.H. Francis, G.A. Remmers, P.S. DeZeeuw // Journal of clinical microbiology. 1982. - 15 - 1 -P. 181-183.

155. Gaastra W. Host-specific fimbrial adhesins of noninvasive enterotoxigenic Escherichia coli strains / W. Gaastra, F.K. de Graaf // Microbiological Reviews. 1982. - 46 - 2 - P. 129-161.

156. Girard F. Interactions of typical and atypical enteropathogenic Escherichia coli strains with the calf intestinal Mucosa Ex vivo / F. Girard, F. Dziva, M.P. Strevens, G. Frankel // Applied and Environmental Microbiology. -2009. 75 - 18 - P. 5991-5995.

157. Glock D. Sudden death of feedlot cattle / D. Glock, D. DeGroot //J. Anim. Sei. 1998. - 76 - P. 315-319.

158. Gurjar A. Characterization of Toxin Plasmids in Clostridium perfringens type C isolates / A. Gurjar, J. Li, B.A. McClane // Infection and Immunity. 2010. - 78 - 11 - P. 4860-4869.

159. Gurjar A.A. Expression, crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of recombinant Clostridium perfringens ß2-toxin / A.A. Gurjar,

160. N.H. Yennawar, H.P. Yennawar, K.R. Rajashankar, N.V. Hegde, B.M. Jayarao // Acta Cryst. 2007. - 63 - P. 484-487.

161. Gurtner C. Rapid cytopathic effects of Clostridium perfringens Beta-Toxin on porcine endothelial cells / C. Gurtner, F. Popescu, M. Wyder, E. Sutter, F. Zeeh, J. Frey, C. von Schubert, H. Posthause // Infection and Immunity. 2010. -78-7-P. 2966-2973.

162. Hadad J.J. The role of K antigens of Enteropathogenic Escherichia coli in colonization of the small intestine of calves / J.J. Hadad, C.L. Gyles // Can.J.comp. Med. 1982. - 46 - P. 21-26.

163. Hariharan H. Antibiotic resistance among enterotoxigenic Escherichia coli from piglets and calves with diarrhea / H. Hariharan, M. Coles, D. Poole, R. Page // Can. vet. J. 2004. - 45 - P. 605-606.

164. Hariharan H. Resistance to trimethoprim-sulfamethoxazole of Escherichia coli isolated from pigs and calves with diarrhea / H. Hariharan, J.W. Bryenton, J.St. Onge, J.R. Long, M.O. Ojo // Can. Vet. J. 1989. - 30 -P. 348-349.

165. Hatheway C.L. Toxigenic Clostridia / C.L. Hatheway // Clin. Microb. Rev.- 1990.-3- 1 -P. 77-81.

166. Hatheway C.L. Toxigenic Clostridia / C.L. Hatheway // Clin. Microbiol. Rev. 1990. - 3 - P. 66-98.

167. Holland R.E. Some infectious causes of diarrhea in young farm animals / R.E. Holland // Clinical Microbiology Reviews. 1990. - 3 - 4 - P. 345375.

168. Hunter S.E. Cloning and nucleotide sequence analysis of the Clostridium perfringens epsilon-toxin gene and its expression in Escherichia coli120

169. S.E. Hunter, I.N. Clarke, D.C. Kelly, R.W. Titball // Infect. Immun. 1992. - 60 -P. 102-110.

170. Ivany J. Determination of the role of Clostridium perfringens type A in intraluminal intestinal hemorrhage syndrom in dairy cows / J. Ivany,

171. D.E. Anderson, M.D. Miesner // Can. Vet. J. 2001. - 14 - 3 - P. 2341-2348.

172. Jelinski M. The relationsgip between the presence of Helicobacter pylori, Clostridium perfringens type A, Campylobacter spp., or fungi and fatal abomasal ulcers in unweaned calves / M. Jelinski, R. Carl, M. Chirino-Trejo,

173. E. Janzen // Can. Vet. J. 1995. - 36 - P. 379-382.

174. Johnson A.M. Heat-Labile Enterotoxin Promotes Escherichia coli Adherence to Intestinal Epithelial Cells / A.M. Johnson, R.S. Kaushik, D.H. Francis et al. // J. Bacteriol. 2009. - 191(1). - P. 178-186.

175. Jordi B.J. Sensitivity of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) strains for colicins under different experimental conditions / B.J. Jordi, K. Boutaga, C.M.V. Heeswijk // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - 204. -P. 329-334.

176. Karmali M.A. Infection by Verocytotoxin-Producing Escherichia coli+ / M.A. Karmali // Clinical Microbiology Reviewes. 1989. - 2 - 1 - P. 1538.

177. Katayama S.B. Genome mapping of Clostridium perfringens strains with I-Ceul shows many virulence genes to be plasmid-borne / S.B. Katayama, B. Dupuy, T. Gamier, S.T. Cole // Mol. Gen. Genet. 1996. - 251 - P. 720-726.

178. Kirkpatrick M.A. Jejunal hemorrhage syndrome of dairy cattle / M.A. Kirkpatrick, L.L. Timms, K.W. Kersting, J.M. Kinyon // Bovine Pract. -2001.-35-P. 104-116.

179. Lebrun M. The expression of Clostridium perfringens consensus beta2-toxin is associated with bovine entrotoxaemia syndrome / M. Lebrun, P. Filee, B. Mousset, D. Desmecht, M. Galleni / Vet. Microbiol. 2007. - 120 -P. 151-157.

180. Leslie D. Phoshpolipase C and hemolytic activities os Clostridium perfringens alpha-toxin cloned in Escherichia coli sequence and homology with a Baccillus cereus phospholipase C / D. Leslie, N. Fairweather, D. Pickard,

181. G. Dougan, M. Kehoe // Mol. Microbiol. 1989. - 3 - P. 383-392.

182. Li J. Sialidases affect the host cell adherence and epsilon toxin-induced cytotoxicity of Clostridium perfringens type D strain CN3718 / J. Li, S. Sayeed, S. Robertson, J. Chen, B.A. McClane // Plos ONE. 2011. - 7 - 12 -P. 1-20.

183. Lindstrom M. Novel insights into the epidemiology of Clostridium perfringens type A food poisoning / M. Lindstrom, A. Heikinheimo, P. Lahti,

184. H. Korkeala // Food Microbiol. 2011. - 28 - P. 192-198.

185. Lorenz I. Calf health from birth to weaning. Management of diarrhoea in pre-weaned calves / I. Lorenz, J. Fagan, S.J. More // Irish Veterinary Journal. -2011.-64-9-P. 1-6.

186. MacLennan J.D. The histotoxic Clostridial infections of man / J.D. MacLennan // Infection and Immunity. 1962. - 26 - P. 177-184.

187. Manteca C. A role for the Clostridium perfringens beta-2 toxin in bovine enterotoxemia / C. Manteca, G. Daube, T. Jauniaux // Vet. Microbiol. -2002.-86-P. 191-202.

188. Montgomerie R.F. Clostridium perfringens (CI. Welchii) enterotoxaemia in the ruminant / R.F. Montgomerie // Can. Vet. Jour. — 1961. — 2 — 12-P. 439-450.

189. Morin M. Pathological and microbiological observations made on spontaneous cases of acute neonatal calf diarrhea / M. Morin, S. Lariviere, R. Lallier // Can. J. comp. Med. 1976. - 40 - P. 228-240.

190. Mouricout M.A. Pilus-mediated binding of bovine enterotoxigenic Escherichia coli to calf small intestinal mucins / M.A. Mouricout, R.A. Julien // Infection and Immunity. 1987. - 55 - 5 - P. 1216-1223.

191. Moxley R.A. Natural and experimental infection with an attaching and effacing strain of Escherichia coli in calves / R.A. Moxley, D.H. Francis // Infection and Immunity. 1986. - 53 - 2 - P. 339-346.

192. Murinda S.E. Evaluation of colicins for inhibitory activity against diarrheagenic Escherichia coli strains, including serotype 0157:H7 / S.E. Murinda, R.F. Roberts, R.A. Wilson // Appl. Environ. Microbiol. 1996. - 62. - P. 31963202.

193. Nagahama M. Binding component of Clostridium perfringens iota-toxin induces endocytosis in Vero cells / M. Nagahama, K. Nagayasu, K. Kobayashi, J. Sakurai // Infect. Immun. 2002. - 70 - P. 1909-1914.

194. Nagahama M. Biological activities and pore formation of Clostridium perfringens beta toxin in HL 60 cells / M. Nagahama, S. Hayashi, S. Morimitsu, J. Sakurai // J. Biol. Chem. 2003. - 278. - P. 36934-36941.

195. Nagahama M. Characterization of the enzymatic component of Clostridium perfringens Iota-Toxin / M. Nagahama, Y. Sakaguchi, K. Kobayashi, S. Ochi, J. Sakurai // Jour. Bacter. 2000. - 182 - 8 - P. 2096-2103.

196. Nagahama M. Clostridium perfringens Iota-Toxin b induces rapid cell necrosis / M. Nagahama, M. Umezaka, M. Oda, K. Kobayashi, S. Tone, T. Suda, K. Ishidoh, J. Sakuria //Infect. Immun. 2011. - 79 - 11 - P. 4353-4360.

197. Naylor J.M. Severity and nature of acidosis in diarrheic calves over and under one week of age / J.M. Naylor // Can Vet J.- 1987. 28 - 4 - P. 168173.

198. Nguyen T.D. Virulence factors in Escherichia coli isolated from calves with diarrhea in Vietnam / T.D. Nguyen, T.T. Vo, H. Vu-Khac // Journal of veterinary science. 2010. - 12 - 2 - P. 159-164.

199. Niilo L. Bovine Enterotoxemia. Experimental reproduction of the disease / L. Niilo, R.E. Moffatt, R.J. Avery // Can. Vet. Journal. 1963. — 4 - 11 — P. 288-298.

200. Niilo L. Bovine Enterotoxemia. Factors affecting the stability of the toxins of Clostridium perfringens type A, C and D / L. Niilo // Can. Vet. Journal. -1965.-6-2-P. 38-42.

201. Niilo L. Clinical and antibody responses to Clostridium perfringens type A enterotoxin in experemental sheep and calves / L. Niilo, H.J. Cho // Can. J. Comp. Med. 1985. - 49 - P. 145-148.

202. Niilo L. Clostridium perfringens in animal disease: A reveiew of current knowledge / L. Niilo // Can. Vet. J. 1980. - 21 - 5 - P. 141-148.

203. Niilo L. Clostridium perfringens type C enterotoxemia / L. Niilo // Can. Vet. Journal. 1988. - 29 - P. 658-664.

204. Niilo L. Enterotoxigenic Clostridium perfringens type A isolated from intestinal contents of cattle, sheep and chickens / L. Niilo // Can. J. comp. Med. 1978. - 42 - P. 357-363.

205. Niilo L. Measurement of biological activities of purified and crude enterotoxin of Clostridium perfringens / L. Niilo // Infect. Immunit. 1975. - 12 -2 - P. 440-442.

206. Niilo L. Toxigenic characteristics of Clostridium perfringens type C in enterotoxemia of domestic animals / L. Niilo // Can. J. Vet. Res. 1987. - 51 -P. 224-228.

207. Niilo L. Clostridium perfringens type C in hemorrhagic enterotoxemia of neonatal calves in Alberta / L. Niilo, W.N. Harries, G.A. Jones // Can. Vet. Jour. 1974. - 15 - 8 - P. 224-226.

208. OgilvieT.H. Laboratory diagnosis of enteropathogenic Escherichia coli in calves / T.H. Ogilvie, R.A. Curtis, D.G. Butler, G.K. Macleod // Can Vet J. 1982.-23-P. 307.

209. Percival D.A. Anti-Idiotypic antibody-induced protection against Clostridium perfringens type D / D.A. Percival, A.D. Shuttleworth, E.D. Williamson, D.C. Kelly // Infect. Immun. 1990. - 58 - 8 - P. 2487-2492.

210. Petit L. CI.perfringens toxinotype and genotype /L. Petit, M. Gibert, M.R. Popoff//Trends Microb.-1999.-7.-P. 104-110.

211. Petit L. Clostridium perfringens Epsilon-Toxin acts on MDCK cells by forming a large membrane complex / L. Petit, M. Gibert, D. Gillet, C. Laurent125

212. Winter, P. Boquet, M.R. Popoff// Journal of Bacteriology. 1997. - 179 - 20 -P. 6480-6487.

213. Pierard D. 0157:H7 and 0104:H4 vero/shiga toxin-producing Escherichia coli outbreaks: respective role of cattle and humans / D. Pierard, H.D. Greve, F. Heasebrouck, J. Mainil // Veterinary Research. 2012. - 43 - 13 -P. 1-12.

214. Pons J.L. Esterase electrophoretic polymorphism of human and animal strains of Clostridium perfringens / J.L. Pons, B. Picard, P. Niel, G. Leluan, P. Goullet // Applied and Enviromental Microb. 1993. - 59 - 2 - P. 496-501.

215. Rood J.I. Molecular genetics and pathogenesis of Clostridium perfringens / J.I. Rood, S.T. Cole // Microb. Rev. 1991. - 55 - 4 - P. 621-648.

216. Rood J.I. Virulence genes of Clostridium perfringens / J.I. Rood // Annu. Rev. Microbiology. 1998. - 52 - P. 333-360.

217. Sakurai J. Clostridium perfringens Iota-Toxin: structure and function / J. Sakurai, M. Nagahama, M. Oda, H. Tsuge, K. Kobayashi // MDPI. J. 2009. -1-P. 208-228.

218. Sakurai J. Purification of Beta-Toxin from Clostridium perfringens type C / J. Sakurai, C.L. Duncan // Infect. Immun. 1977. - 18 - 3 - P. 741-745.

219. Savic B. Enteritis associated with Clostridium perfringens type A in 9-month-old calves / B. Savic, R. Prodanovic, V. Ivetic, O. Radanovic, J. Bojkovski // Can. Vet. J. 2012. - 53 - P. 174-176.126

220. Sayeed S. Characterization of virulence plasmid diversity among Clostridium perfringens type B isolates / S. Sayeed, J. Li, B.A. McClane // Infection and Immunity. 2010. - 78 - 1 - P. 495-504.

221. Schumann F.J. Risk factors for mortality from diarrhea in beef calves in Alberta / F J. Schumann, H.G.G. Townsend, J.M. Naylor // Can. J. Vet. Rec. -1990.-54-P. 366-372.

222. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to intestinal secretion / C.L. Sears, J.B. Kaper // Microbiol. Rev. 1996. - 60. -P. 167-215.

223. Sengupta N. Comparative proteomic analysis of extracellular proteins of Clostridium perfringens type A and type C strains / N. Sengupta, S.I. Alam,

224. B. Kumar, R.B. Kumar, V. Gautam, S. Kumar, L. Singh // Infection and Immunity.- 2010. 78 - 9 - P. 3957-3968.

225. Shere J.A. Longitudinal study of Escherichia coli 0157:H7 dissemination on four dairy farms in Wisconsin / J.A. Shere, K.J. Bartlett,

226. C.W. Kaspar // Applied and environmental Microbiology. 1998. - 64 - 4 -P. 1390-1399.

227. Sivaswamy G. The prevalence of enterotoxigenic Escherichia coli in the feces of calves with diarrhea / G. Sivaswamy, C.L. Gyles // Can.J. comp.Med.- 1976.-40-P. 241-246.

228. Smedly J.G. The enteric toxins of Clostridium perfringens / J.G. Smedly, D.J. Fisher, S. Sayeed, G. Chakrabarti, B.A. McClane // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2004. - 152 - P. 183-204.

229. Songer J.G. Clostridial abomasitis in calves: Case report and review of the literature / J.G. Songer, D.W. Miskimins // Anaerob. 2005. - 11 - P. 290-294.

230. Songer J.G. Clostridial enteric diseases of domestic animals / J.G. Songer // Clin. Microbiol. Rev. 1996. - 9 - P. 216-234.

231. Songer J.G. Enteric Clostridia / J.G. Songer, C.L. Gyles, J.F. Prescott, C.O. Thoen // Pathogenesis of bacterial infection in animals. 2010. - 4. - P. 211218.

232. Songer J.G. Histotoxic Clostridia / J.G. Songer, C.L. Gyles, J.F. Prescott, C.O. Thoen // Pathogenesis of bacterial infection in animals. 2010. -4.-P. 203-204.

233. Stiles B.G. Purification and characterization of Clostridium perfringens Iota toxin: Dependence on two nonlinked proteins for biological activity / B.G. Stiles, T.D. Wilkins // Infect. Immun. 1986. - 54 - 3 - P. 683-688.

234. Thornton J.R. Studies on diarrhea in neonatal calves: The plasma proteins of normal and diarrheic calves during the first ten days of age / J.R. Thornton, R.A. Willoughby, B.J. McSherry // Can.J.comp. Med. 1972. - 36 -P. 17-25.

235. Titball R.W. Molecular cloning and nucleotide sequence of the Alpha-Toxin (Phospholipase C) of Clostridium perfringens / R.W. Titball,128

236. S.E.C. Hunter, K.L. Martin, B.C. Morris, A.D. Shuttleworth, T. Rubidge, D.W. Anderson, D.C. Kelly // Infect. Immun. 1989. - 57 - 2 - P. 367-376.

237. Titball R.W. The Clostridium perfringens alpha-toxin / R.W. Titball, C.E. Naylor, A.E. Basak // Anaerobe. 1999. - 5 - P. 51-64.

238. Uzal F.A. Recent progress in understending the pathogenesis of Clostridium perfringens type C infections / F.A. Uzal, B.A. McClane // Vet. Microbiol.-2011.- 153-P. 37-43.

239. Van Kruiningen H.J. Clostridial abomasal disease in Connecticut dairy calves / H.J. Van Kruiningen, C.A. Nyaoke, I.F. Sidor, J.J. Fabis, L.S. Hinckley, K.A. Lindell // CVJ. 2009. - 50 - P. 857-860.

240. Vance H.N. Clostridium perfringens as a pathogen of cattle: a literature review / H.N. Vance // Can. J. comp. Med. Vet. Sei. 1967. - 31 -P. 248-250.

241. Vidal J.E. Contact with enterocyte-like Caco-2 cells induces rapid upregulation of toxin production by Clostridium perfringens type C isolates / J.E. Vidal, K. Ohtani, T. Shimizu, B.A. McClane // NIP-PA Author Manuscript. -2009.- 11 P. 1306-1328.

242. Vidal J.E. Effects of Clostridium perfringens Beta-Toxin on the rabbit small intestine and colon / J.E. Vidal, B.A. McClane, J. Saputo, J. Parker, F.A. Uzal // Infection and Immunity. 2008. - 76 - 10 - P. 4396-4404.

243. Yoo H.S. Molecular typing and epidemological survay of prevalence of Clostridium perfringens types by multiplex PCR / H.S. Yoo, S.U. Lee, K.Y. Park, Y.H. Park // J. Clin Microbiol. 1997. - 35 - P. 228-232.

Информация о работе

Спиридонов, Антон Геннадьевич
кандидата биологических наук
Казань, 2013
ВАК 06.02.02

Диссертация

Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы