Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей

Фокин, Александр Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей"

На правах рукописи

ФОКИН АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА, ОТЕЧНОЙ БОЛЕЗНИ И ЭШЕРИХИОЗА ПОРОСЯТ-ОТЪЕМЫШЕЙ

03.00.07 - микробиология 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2005

Работа выполнена в Федеральном государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт» (г.

Казань).

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор ветеринарных наук, профессор Гаффаров Х.З.

доктор ветеринарных наук, профессор Алимов А.М. доктор ветеринарных наук, профессор Госманов Р. Г.

ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир)

Защита состоится << » Шт©И<5| 2005 г. в )/Ц часов на заседании диссертационного совета Д - 220.012.01 при ФГНУ Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок -2, ФГНУ ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГНУ ВНИВИ (г. Казань) Автореферат разослан « 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

В. И. Степанов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение благополучия свиноводства в отношении инфекционных болезней является одной из наиболее ответственных задач ветеринарной службы страны. Инфекционные заболевания свиней сдерживают развитие свиноводства и наносят отрасли значительный экономический ущерб, который складывается из потерь нарождающего молодняка, снижения привесов, значительных затрат на лечебные и профилактические мероприятия. Наиболее часто у поросят различных возрастных групп наблюдаются желудочно-кишечные и респираторные заболевания, причина которых обусловлена снижением иммунитета в этот период их жизни и воздействием неблагоприятных факторов (Серегин И. с соавт., 1982; Коромыслов Г.Ф. с соавт., 1988; Волков Г.К. с соавт., 1997; Субботин В.В. с соавт., 2001; Молоканов Д.П. с соавт., 2002; Гаффаров Х.З. с соавт., 2003; Школьников Е.Э. с соавт., 2003).

Наиболее остро стоит проблема сохранения поросят послеотьемного возраста, особенно в условиях крупных свиноводческих комплексов промышленного типа (Цымбол ГЛ. с соавт., 1986; Павлов Е.Г., 1989; Карева Э.П. с соавт., 2002; Спиридонов Г.Н. С соавт., 2002). У поросят-отъемышей, одним из основных предрасполагающих факторов является отъем от матерей в раннем возрасте, у которых к этому времени снижается напряженность колострального иммунитета (Шесточенко М.А. с соавт., 1983; Сидоров М.А., 1987; Орлянкин Б.Г. с соавт., 2001; Тельнов С.Н., 2002).

На сегодняшний день установлено важное значение в этиологии инфекционных заболеваний поросят-отъемышей вируса трансмиссивного гастроэнтерита, возбудителей гемофилезного полисерозита, гемофилезной плевропневмонии, пастереллеза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также ß-гемолитических и энтеротоксигенных серотипов Е. coli, способных потенциально обуславливать отечную болезнь и эшерихиоз. Следует отметить, что за последние 5 лет средняя летальность поросят этого периода жизни в России составляет более 28,5% (Прунтова О.В. с соавт., 1995; Карева Э.П. с соавт., 2002; Рахманов A.M. с соавт., 2002; Спиридонов Г.Н. с соавт., 2002; Тельнов С.Н., 2002; Шахов А.Г., 2002; Школьников Е.Э. с соавт., 2003). Очень часто в промышленном свиноводстве эти болезни протекают в виде смешанной инфекции, что в значительной мере затрудняет их диагностику, специфическую профилактику, осложняет течение болезни и чаще всего инфекционный процесс завершается летальным исходом (Гараев И.М., 1996; Ковалев М.М., 2002; Терехов В.И., 2002; Гаффаров Х.З., Романов Е.А., 2004).В этой связи вакцинация поросят-отъемышей является самой важной профилактической мерой, поскольку она способствует образованию активного иммунитета на фоне исчезновения пассивного (Сидоров М.А., 1987; Орлянкин Б.Г. с соавт., 2001).

Следует отметить, что в настоящее время вопрос о специфической профилактики инфекционных заболеваний поросят-отъемышей смешанной этиологии имеет первостепенное значение для свиноводства, требует глубокого изучения и изыскания новых, более эффективных поливалентных биологических препаратов (Михайлюк А.П. с соавт., 1982; Коромыслов Г.Ф. с соавт., 1988; Равилов А.З., 1996; Русалев B.C. с соавт., 2001).

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлось осуществление клинико-эпизоотологического мониторинга инфекционных заболеваний поросят в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, определение этиологической структуры их и на основе этого разработка средства и метода их специфической профилактики.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

-изучить клинико-эпизоотологические особенности проявления наиболее часто регистрируемых инфекционных заболеваний поросят в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья;

-выделить возбудителей этих заболеваний и отобрать наиболее перспективные штаммы бактерий, отличающиеся высокой иммуногенной активностью и пригодные для изготовления вакцины;

-установить оптимальное соотношение инактивированных бактериальных клеток каждого штамма в составе вакцины;

-определить- оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины, исключающую ее реактогенность;

-изучить влияние некоторых адъювантов на иммуногенную активность ассоциированной вакцины;

-изучить эффективность применения ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях;

-подготовить нормативно-техническую документацию,

регламентирующую изготовление, контроль и применение ассоциированной вакцины.

Научная новизна. Впервые на основе результатов клинико-эпизоотологичского мониторинга инфекционных заболеваний поросят в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья показаны преимущественное распространение и циркуляция среди поголовья свиней возбудителя гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза, проявляющиеся чаще всего в ассоциации.

Получены и изучены биологические свойства штаммов бактерий Н. parasuis, р-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli, обладающие выраженными антигенными свойствами и признаны пригодными для изготовления ассоциированной вакцины.

На лабораторных и естественно восприимчивых животных установлены оптимальные концентрация и соотношение инактивированных антигенов бактериальных клеток каждого штамма в вакцинном препарате, определена зависимость между прививными дозами, титрами антител и защитным эффектом биопрепарата.

Получены экспериментальные данные указывающие на высокую антигенную и иммуногенную активность ассоциированной вакцины.

Подтверждена иммуногенная активность ассоциированной вакцины при испытании в лабораторно-производственных условиях.

Практическая значимость. На основе проведенных исследований нами предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная вакцина против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированная гидроокисьалюминиевая».

Разработаны нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарат, в частности:

-«Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой» (утверждена директором ВНИВИ 19.07.04 г);

-«Технические условия на ассоциированную вакцину против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей,

инактивированную гидроокисьалюминиевую» (утверждены директором ВНИВИ 30.06.04 г, согласованы с ГУВ КМ Республики Татарстан 5.07.04 г);

-«Временное наставление по применению ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой (в порядке производственного опыта)» (согласовано с директором ВНИВИ 23.01.04 г, утверждено ГУВ КМ Республики Татарстан 26.01.04 г).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

Международной научно-практической конференции (Воронеж, 2002);

Международной научно-производственной конференции, посвященной 130-летию КГАВМ (Казань, 2003);

Международной научной конференции молодых ученых (Владимир, 2004);

Всероссийской научно-практической конференции (Казань, 2004).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:

-этиологическая структура инфекционных заболеваний поросят послеотъемного возраста в регионах Среднего Поволжья и Предуралья;

-биологические свойства выделенных возбудителей инфекционных болезней поросят, полученных от биоматериала больных животных и критерии отбора штаммов микроорганизмов, пригодных для изготовления ассоциированной вакцины;

-лабораторный регламент технологии изготовления ассоциированной вакцины;

-установление иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных и поросятах-отъемышах;

-показатели профилактической эффективности ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы, состоящий из 281 источников, в том числе 54 иностранных. Диссертация иллюстрирована 24 таблицами и 5 рисунками.

Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований и их научно-практическую ценность.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2001-04 гг. в лаборатории контроля и индикации возбудителей болезней молодняка сельскохозяйственных животных ФГНУ ВНИВИ (г. Казань) и в свиноводческих комплексах регионов Среднего Поволжья и Предуралья. В проведении исследований по отдельным этапам диссертационной работы принимали участие кандидаты ветеринарных наук, старшие научные сотрудники лаборатории Спиридонов Г.Н. и Ефимова М.А., которым выражаю искреннюю признательность.

Эпизоотологическому обследованию были подвергнуты 22 сельскохозяйственных предприятия, расположенных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, из них 15 - в Республике Татарстан, 4 - в Республике Башкортостан, 3 - в Марий Эл, неблагополучных по инфекционным заболеваниям поросят-отьемышей. Анализ эпизоотической ситуации проводили согласно рекомендациям, разработанным Бакуловым И.А с соавт. (1975) и Джупиной СИ. (1991).

Клинический осмотр больных поросят, патологоанатомическое вскрытие павших и вынужденно обескровленных животных, бактериологические и серологические исследования осуществляли общепринятыми методами.

В ходе выполнения работы было происследовано 332 пробы клинического и патологического материала, полученные от - больных, павших и вынужденно обескровленных поросят. Объектами исследований служили паренхиматозные органы, экссудат перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, пораженные серозные оболочки, отрезок тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы павших животных, пробы фекалий, носовые истечения и сыворотки крови больных поросят 8-12-недельного возраста.

В процессе выполнения работы были использованы: 2 штамма бактерий Haemophilus parasuis - серовары «ДВ-30», синтезирующий капсульный антиген типа А и «ДВ-28», синтезирующий капсульный антиген типа D, полученные из музея НИИМ МО РФ (г. Киров); 2 штамма В-гемолитических Е. coli - сероварианты 0111 и 0149, синтезирующий адгезивный антиген К88, выделенные в свинокомплексах «Новая жизнь» и «Шинник»; 2 штамма энтеротоксигенных Е. coli - сероварианты 020, синтезирующий адгезивный антиген К99 и 0119, синтезирующий адгезивный антиген 987Р, выделенные в свинокомплексах «Нефтехимагропром» и «Газовик».

При проведении экспериментов использовали лабораторных и естественно восприимчивых животных: 6091 поросят-отъмышей, 45 кроликов, 105 морских свинок, 62 белые крысы, 230 белых мышей.

Выделение и изучение биологических свойств Р-гемолитических и энтеротоксигенных культур Е. coli из биоматериала от больных, вынужденно убитых и павших животных проводили в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденными ГУВ МСХ и П СССР 12.01.91 г. и «Временными наставлениями по применению агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий К88, К99, 987Р, F41 и А20», утвержденными ГУВ Госагропрома СССР 21.02.89 г. и штаммов бактерий Н. parasuis - согласно «Временным методическим указаниям по лабораторной диагностике гемофилезного полисерозита свиней», утвержденными ГУВ Минсельхоза СССР 17.10.78 г.

Идентификацию выделенных микроорганизмов осуществляли по результатам изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных, антигенных и патогенных свойств.

Определение ID50 каждого компонента ассоциированной вакцины устанавливали на белых мышах и морских свинках путем подкожного введения им последовательных двукратных разведений моновакцин с дальнейшим заражением по методу Кербера.

С учетом каждого компонента проводили компоновку ассоциированной вакцины.

Вакцину готовили из антигенов штаммов Н. parasuis, В-гемолитических и энтеротоксигенных штаммов Е. coli и их анатоксинов. К ним добавляли 6%-ный гель гидроокиси алюминия (ГОА), полученный из ФГУП «Щелковский биокомбинат» из расчета 10 см3 на 100 см3 вакцины, доводили рН до 7,2-7,4 и

расфасовывали во флаконы, которые закрывали резиновыми пробками, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировали.

В представленной работе для сравнительного изучения эффективности биопрепарата использовали вакцину, приготовленную с использованием масляного адъюванта (МА), на основе минерального масла Донковского химкомбината.

Для проверки на стерильность из каждой серии вакцины делали посевы на МПА, МПБ, МППБ и агар Сабуро. Для проверки на безвредность вакцины вводили белым мышам и морским свинкам.

Антигенную и иммуногенную активность вакцин оценивали на кроликах и поросятах отъемного возраста. Вакцину вводили внутримышечно, двукратно с интервалом 14 дней, в объеме 1,5 см3 для первой и 2 см3 для второй иммунизации. Кровь для исследований брали у поросят из хвостовой и краевой ушной вены, у кроликов - из краевой ушной вены.

Бактерицидную активность сыворотки крови определяли фотоэлектрокалориметрическим методом по Мишелю Греффену в модификации О.В. Смирнова и Г.А. Кузьмина. Т- и В-лимфоциты выделяли на градиенте плотности методом центрифугирования, их идентификацию осуществляли в одном препарате методом Е-РОК и ЗС3-РОК. Антигенную активность вакцин определяли путем изучения динамики нарастания титров специфических антител в индивидуальных сыворотках крови иммунизированных животных к антигенам штаммов Н. parasuis - в ИФА, к антигенам ß-гемолитических и энтеротоксигенных штаммов Е. coli - в РА.

Превентивные свойства сывороток крови вакцинированных и интактных поросят изучали на белых мышах, которым вводили сыворотку подкожно в область спины в объеме 0,5 см3. Через 24 часа мышей заражали смесью 6-и часовых культур Н. parasuis, суточных культур В-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli,. содержащих 1 млрд.м.к. в 1 см , внутрибрюшинно, в дозе 0,5 см3.

О степени эффективности и протективной активности вакцинных препаратов судили по результатам экспериментального заражения привитых животных.

Оценку эффективности ассоциированной вакцины в экспериментальных условиях проводили комиссионно, на клинически здоровых поросятах 37-40 дневного возраста с контрольным их заражением. Для этого поросята были разделены на 3 группы по 3 животных в каждой. Поросятам первой группы вводили вакцину с МА, поросятам второй группы - вакцину, депонированную на ГОА, поросят третьей контрольной группы не иммунизировали. Содержание, уход и кормление животных всех трех групп осуществляли в идентичных условиях.

Контрольное заражение вакцинированных и интактных поросят проводили через 14 суток после второй иммунизации. С этой целью поросятам вводили перорально суспензии суточных культур В-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli по 50 млрд.м.к. каждой и внутрибрюшинно - суспензии 6-и часовых культур Н. parasuis по 50 млрд.м.к. каждой.

В ходе эксперимента за животными было установлено клиническое наблюдение с ежедневной термометрией. В сыворотках крови поросят определяли титры специфических антител. Проводили патологоанатомическое вскрытие павших и обескровленных животных из контрольной и опытных групп. Реизоляцию исходных штаммов бактерий Н. parasuis, В-гемолитических и энтеротоксигенных штаммов Е. coli проводили от поросят всех трех групп.

Оценку эффективности ассоциированной вакцины в производственных условиях осуществляли в 12-тысячном свинокомплексе ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района РТ, в учебном хозяйстве КГАВМ Высокогорского района РТ

и в свинокомплексе ООО «Новая жизнь» Кукморского района РТ на основании сравнения фактических данных по заболеваемости и падежу поросят-отъемышей за осенний период 2003 года, до применения вакцины, и за весенний период 2004 года, после применения вакцины.

Экономическую эффективность профилактического действия «Ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой" оценивали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», предложенной Никитиным И.Н. с соавт. (1999).

Статистическую обработку цифровых данных проводили на ЭВМ с использованием программного обеспечения, разработанного в секторе метрологии и вычислительной техники ФГНУ ВНИВИ под руководством профессора Р.Х. Тукшаитова.

2.2. Результаты собственных исследований 2.2.1. Этиологическая структура и клинико-эпизоотологические аспекты инфекционных болезней поросят послеотъемного возраста в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья

За 2001-2004 гг. нами проведено клинико-эпизоотологическое обследование 22-х свиноводческих комплексов в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, неблагополучных по инфекционным заболеваниям поросят-отъемышей. Анализ полученных данных показал, что основная роль в патологии этого периода жизни поросят принадлежит вирусу трансмиссивного гастроэнтерита, пастереллам, сальмонеллам, гемофильным бактериям (гемофилезный полисерозит, гемофилезная плевропневмония), гемолитическим и энтеротоксигенным серотипам Е. coli (отечная болезнь, эшерихиозная диарея), стрептококкам и трепонемам (дизентерия). Заболевания возникают во все сезоны года, особенно в весенне-осенний период со значительным отходом животных. В первые две недели после отъема заболевали от 35% до 70% поросят. При этом смертность больных достигала 30-60%.

Так, в свинокомплексе ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района РТ в сентябре - декабре месяце 2003 года отмечалось массовое заболевание среди поросят вскоре после отъема и перевода их в цеха доращивания. Причем возникновение и развитие болезни регистрировали через 6-10 дней после прививки живой вакциной против КЧС и на 20-й день после проведения иммунизации живыми вакцинами против болезни Ауески и рожи свиней.

В начале, заболевали слабые поросята с пониженной устойчивостью. По мере нарастания количества больных, заболевание стало регистрироваться среди хорошо развитых и даже упитанных поросят. В дальнейшем заболевание принимало массовый характер.

Заболевание у поросят отъемного возраста клинически проявлялось в виде отказа от корма, угнетенного состояния; они становились малоподвижными, вялыми, появлялось покраснение кожи около ушей, бедер, нижней части живота и конечностей. Значительное количество переболевших, слабых и плохорастущих поросят систематически подвергались вынужденному убою, и в конечном итоге отход среди этой возрастной группы поросят достигал 50%.

В большинстве обследованных нами хозяйствах из биоматериала, полученного от больных и павших поросят отъемного возраста, выделяли гемолитические и энтеротоксигенные штаммы Е. coli. В ряде случаев из одного и того же патологического материала одновременно выделялись эти и другие

серотипы. Заболевание при этом чаще всего протекало с клиникой отечной болезни в одних и характерными признаками эшерихиозной диареи — в других хозяйствах, либо в одном хозяйстве, но на разных свинофермах. Так, например, в свинокомплексе «Новая жизнь» Кукморского района при вскрытии павших поросят в 40% случаев наблюдали гастроэнтероколиты, а в 60% - гастроэнтериты, студенистые отеки подкожной клетчатки, стенки желудка и брыжейки.

Изучая этиологическую структуру заболеваний поросят-отьмышей с клиникой отечной болезни в АКХ «Урожай» Кайбицкого района и совхозе «Победа» Лаишевского района РТ, помимо гемолитических штаммов Е. coli, в большинстве случаев были изолированы сальмонеллы и стафилококки.

В совхозах «Агидель» Ишимбаевского района Республики Башкортостан (РБ), «Звениговский» Звениговского района Республики Марий ЭЛ (РМ) в фекалиях и кишечнике больных диареей поросят наряду с энтеротоксигенными штаммами Е. coli были обнаружены Clostridium perfringens и стрептококки.

В колхозе им. Фрунзе Стерлитамакского района РБ среди желудочно-кишечных болезней поросят наиболее часто диагностировали вирусный трансмиссивный гастроэнтерит, который в свинокомплексах «Рощинский» Стерлитамакского района РБ и «Пугачевский» Бугульминского района РТ нередко проявлялся в ассоциации не только с энтеротоксигенными, но и с гемолитическими штаммами Е. coli, по типу вирус-бактерия.

В дальнейшем, проведенные нами исследования показали, что в последние годы существенно возрос удельный вес болезней поросят, вызываемых возбудителями гемофилезной плевропневмонии, гемофилезного полисерозита в сочетании с некоторыми другими микроорганизмами. Так, например, в свинокомплексе «Шинник» Нижнекамского района РТ ассоциация пневмококков, сальмонелл и культур Actinobacillus pleuropneumoniae поражала поросят 2-4 месячного возраста. При вскрытии трупов павших животных в основном обнаруживали серозно-катаральные, катарально-геморрагические и некротизирующие пневмонии.

В свинокомплексах «Рощинский» Стерлитамакского района РБ, «Нефтехимагропром» Нижнекамского района РТ путем бактериологического исследования из патологоанатомического материала от поросят-отъемышей были выделены гемолитические, энтеротоксигенные штаммы Е. coli и культуры бактерий Haemophilus parasuis. При вскрытии павших животных в первом хозяйстве в 75% случаев отмечали гастроэнтериты, студенистые отеки подкожной клетчатки, стенки желудка и брыжейки, а в оставшихся 25% случаев, в основном, регистрировали серозно-фибринозные слипчивые плевриты, перикардиты, полисерозиты, во втором хозяйстве - преимущественно гастроэнтероколиты.

В последние годы в регионах Среднего Поволжья и Предуралья доля заболеваний инфекционной природы среди поросят послеотьемного периода имеет тенденцию к увеличению. Основной причиной этого является то, что на крупных свиноводческих комплексах и специализированных фермах создаются благоприятные условия (несовершенство технологии содержания, неполноценное, несбалансированное кормление свиноматок, одномоментный отъем поросят, перегруппировки, содержание в группах свиней разного возраста), предрасполагающие к возникновению и распространению смешанных инфекций.

2.2.2. Степень распространения возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей

Клинико-эпизоотологические данные и лабораторные исследования патологического материала 22-х свиноводческих комплексов, расположенных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, позволили установить, что в 17 из них регистрировали заболевания поросят послеотъемного периода, вызываемые преимущественно возбудителями гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиозной диареи. Более детальное изучение указанных форм патологий позволило раскрыть особенности возникновения, развития и проявления инфекционного процесса, а также степень их распространения.

Выделяемость возбудителей отечной болезни и эшерихиоза поросят была выше в острый период заболевания. При этом каждое исследование сопровождалось выделением одного или нескольких культур В-гемолитических и энтеротоксигенных Е. соП. В силу особенностей иммунобиологических свойств бактерий Haemophilias parasuis процент обнаружения и выделения этого агента был значительно ниже. В результате исследований в 12 хозяйствах был выявлен возбудитель отечной болезни, в 14 - эшерихиозной диареи поросят, в 7 - гемофилезного полисерозита. Причем в 9 хозяйствах были выделены одновременно 6-гемолитические и энтеротоксигенные серотипы Е coli: в свинокомплексе «Пугачевский» Бугульминского района, в свинокомплексе «Сосновоборский» Тукаевского района, в совхозе «Шинник» Нижнекамского района, в ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района, в ООО «Новая жизнь» Кукморского района, в КП «Авангард» Арского района, в учебном хозяйстве КГАВМ Высокогорского района РТ, в свинокомплексе «Рощинский» Стерлитамакского района РБ, в колхозе им. К., Маркса Звениговского района РМ. В 2-х хозяйствах наряду с энтеротоксигенными Е. coli были изолированы культуры бактерий Н. parasuis: в ООО «Газовик» Пестречинского района РТ, в совхозе «Агидель» Ишимбаевского района РБ. Смешанные формы заболеваний поросят-отьемышей, обусловленные В-гемолитическими, энтеротоксигенными серотипами Е. coli и культурами бактерий Н. parasuis, были установлены в 5 хозяйствах: в свинокомплексе «Пугачевский» Бугульминского района, в ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района, в КП «Авангард» Арского района РТ, в свинокомплексе «Рощинский» Стерлитамакского района РБ, в колхозе им. К. Маркса Звениговского района РМ. В 6 случаях отечная болезнь и эшерихиоз поросят были диагностированы как моноинфекции: в совхозе «Победа» Лаишевского района, в АКХ «Урожай» Кайбицкого района, в КП «Мурали» Арского района РТ, в колхозе им. Ильича Аургазинского района РБ, в колхозе им. Ленина Парангинского района, в совхозе «Звениговский» Звениговского района РМ.

Установлено, что данные заболевания в ассоциации возникают в хозяйствах с различными условиями кормления и содержания, преимущественно в весенне-осенний период. При этом клинические проявления не характеризовались суммой симптомов, специфичных для каждого из составляющих их заболеваний, а чаще сопровождались активизацией патологического процесса одного из заболеваний. Заслуживает внимание тот факт, что, начиная с единичных случаев, заболеваемость становилась затем массовой и незатухающей. Как правило, в начале у отдельных животных, чаще с ослабленной резистентностью, болезнь протекала в легкой форме. В этот период летальность была не столь высокой, поросята еще поддавались симптоматическому лечению. В дальнейшем, в результате многократного пассирования возбудителей через организм восприимчивых животных, их вирулентность усиливалась и они, по-видимому, накапливаются в окружающей

среде в значительных количествах. По нашим наблюдениям, такое развитие энзоотии оказалось типичным. Если не принимались меры по купированию инфекции, то она принимала все более тяжелое течение, нарастала летальность. В первые две недели после отъема заболевали от 20 до 50% поросят. При этом смертность больных достигала 25-50%. Установленная нами этиологическая структура заболеваний поросят-отъемышей в целом соответствует таковой и в других хозяйствах России (Дудников С.А. с соавт., 1995; Матюшко В.К. с соавт., 1995; Рахманов A.M. с соавт., 2002; Байбиков Т.З. с соавт., 2003).

2.23. Выделение, изучение биологических свойств и идентификация полученных культур возбудителей

Бактериологическому исследованию подвергались 332 пробы клинического и патологического материала, полученные от больных, павших и обескровленных животных из 22-х неблагополучных по инфекционным заболеваниям поросят-отъмышей хозяйств Республик Татарстана, Башкортостана и Марий Эл.

Объектами исследования служили паренхиматозные органы, экссудат перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, пораженные серозные оболочки, отрезок тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы павших животных, пробы фекалий, носовые истечения и сыворотки крови больных поросят 8-12 недельного возраста. При бактериологическом исследовании биоматериала было выделено 119 культур микроорганизмов, из них 84 идентифицированы как Е. coli, среди которых 56 ß-гемолитических и 7 - как бактерии Н. parasuis. При этом в ряде хозяйств в патологическом материале обнаруживали условно-патогенные микроорганизмы: Pasteurella multocida, Salmonella choleraesuis, Treponema hyodisenteria, Streptococcus faecalis и Proteus vulgaris.

Одной из основных стадий технологического цикла изготовления ассоциированной вакцины является приготовление высококачественного антигенного сырья. Для достижения этой цели, нами были изучены основные биологические свойства полевых культур и штаммов бактерий Н. parasuis «ДВ-28» и «ДВ-30», полученные из музея НИИМ МО РФ, выделенных гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli и отобраны наиболее часто выявляемые патогенные и антигенноактивные штаммы, обладающие способностью индуцировать наибольший синтез антител в организме.

В результате сравнительного изучения морфологических, тинкториальных, культуральных и ферментативных свойств, выделенных культур Н. parasuis с использованием дифференциально-диагноститечских сред было показано, что они идентичны и соответствуют штаммам «ДВ-28» и «ДВ-30». При этом 4 изолята давали очень слабый рост при культивировании на универсальных питательных средах, что послужило основанием для прекращения дальнейшего их изучение.

Способность инактивированных взвесей штаммов бактерий Н. parasuis индуцировать синтез антител в организме устанавливали путем их введения белым крысам в дозе 1 смЗ, содержащей 1 млрд.м.к. В результате проведения исследований было показано, что штаммы бактерий Н. parasuis «ДВ-28» и «ДВ-30» являются более активными в антигенном отношении. На основании этого нами для изготовления вакцины были отобраны данные штаммы микроорганизмов. Далее, путем внутрибрюшинного заражения морских свинок, была определена LD50, которая для штаммов «ДВ-28» и «ДВ-30» соответственно составила 1,682 и 2 млрд.м.к.

Серологическую принадлежность культур Е. coli устанавливали в РА с диагностическими сыворотками, приготовленными Армавирской биофабрикой, что

позволило типировать 19 (67,9%) из 28 культур, не обладающих гемолитическими свойствами, которые по О-антигену были отнесены к серогруппам 0139, 020, 0119, 0142, 0138, 0141, 09; 34 (61%) из 56 гемолитических культур принадлежали к серогруппам 0149, 0138, 0101, 0139, 0111, 0140, 0137, 08, 078. При изучении их выяснилось, что 16 культур Е. coli обладают высокой степенью гемолитической активности.

С моноспецифическими сыворотками к адгезивным антигенам агглютинировала большая часть негемолитических культур Е. coli с известными 0-антигенными свойствами - 89,5%,: с анти-К88 сывороткой - 31,5%, с анти-К99 сывороткой - 21,1%, с анти-987Р сывороткой - 15,8%. Кроме того, были обнаружены культуры Е. coli, содержащие одновременно два и даже три адгезивных антигена. Подобные результаты были получены Романенковой Н.И. с соавт. (1986) и Соколовой Н.А. с соавт. (1989). Более детальное изучение 16 культур, обладающих 0-антигенными свойствами и высокой степенью гемолитической активностью, показало, что из них 9 (56,3%) - положительно реагировали с анти-К88 сывороткой. Полученные результаты отмечали Борисович Ю.Ф. с соавт. (1987) и Awad-Masalmeh М.(1983).

В последнее время, как отечественные, так и зарубежные ученые в своих публикациях указывают, что существенным фактором вирулентности Е. coli является энтеротоксигенность - продукция энтеротоксинов, повреждающих кишечный эпителий (Сухарев Ю.С., 1994; Куликовский А.В. с соавт., 1997; Blanco J. et al., 1988). Для оценки активности термолабильных и термостабильных энтеротоксинов культур Е. coli, типированных по 0-антигену, использовали чувствительный и легко воспроизводимый тест отека лап белых мышей (Вартанян Ю.П. с соавт. 1997). В результате исследований из 17 не гемолитических культур, синтезирующих адгезивные антигены К88, К99, 987Р, у 7 - были выявлены энтеротоксигенные свойства, в то же время из 16 культур, обладающих высокой степенью гемолитической активностью, этот фактор патогенности Е. coli был обнаружен лишь у 6 изолятов.

Антигенные свойства указанных культур Е. coli устанавливали путем введения белым крысам их инактивированных взвесей, содержащих 1 млрд. м. к., в

л 3

дозе 1 см .

В результате детального изучения биологических свойств выделенных культур Е. coli для изготовления вакцины были отобраны два наиболее активных в антигенном отношении ß-гемолитических штамма Е. coli, выделенных от поросят при отечной болезни в свинокомплексах «Шинник» и «Новая жизнь», один из которых синтезирует адгезивный антиген К88 и по серологической принадлежности относится к сероварианту 0149, другой - к сероварианту 0111 и также два наиболее активных в антигенном отношении энтеротоксигенных штамма Е. coli, выделенных при эшерихиозе поросят в свинокомплексах «Нефтехимагропром» и «Газовик» -серовариант 020, продуцирующий адгезивный антиген К99 и серовариант 0119, продуцирующий адгезивный антиген 987Р. Все отобранные штаммы вызывали гибель белых мышей в течение суток при внутрибрюшинном заражении в дозе 500 млн.м.к., LD50 для серовариантов 0149, 0111, 020 и 0119 соответственно составила 148,7; 176,8; 210,2 и 250 млн.м.к.

2.2.4. Разработка технологии изготовления ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемы шей

Технология изготовления инактивированной ассоциированной вакцины включает получение и инактивацию биомассы с максимально возможным сохранением антигенных, иммуногенных и протективных свойств отобранных штаммов, установление оптимального соотношения бактериальных клеток каждого компонента в составе вакцины, связывание антигенов с адъювантом в иммуногенно эффективном соотношении и определение оптимальной иммунизирующей дозы вакцины, исключающей ее реактогенность. Поэтому, указанные этапы технологии изготовления ассоциированной вакцины проводились последовательно.

Штаммы бактерий Н. parasuis культивировали на среде Хоттингера, содержащей ростовые факторы: дрожжевой экстракт и сыворотку крови крупного рогатого скота. Ампулы со штаммами бактерий Н. parasuis вскрывали, суспензировали питательной средой и засевали их отдельно на шоколадный агар, культивировали при 37°С 24 часа. Культуру смывали 0,85%-ным раствором хлорида натрия, проверяли однородность популяции микроскопией мазков. Биомассу культур Н. parasuis получали в матровых колбах на указанной выше среде Хоттингера. Для этого их высевали по 2 см3 (100 млн.м.к.) на 100 см3 среды и инкубировали в горизонтальном положении 24 часа при температуре 37°С. Затем проверяли «чистоту» микроскопией мазков и определяли концентрацию бакмассы по методу Коха, которая составляла 2 млрд.м.к. Инактивацию бактериальных взвесей проводили 24 часа 40%-ным формалином, из расчета 0,3 см3 на 100 см3 суспензии. Полноту инактивации их контролировали посевом на соответствующие питательные среды.

Для получения бакмассы fi-гемолитических штаммов Е. coli и энтеротоксигенного штамма Е. coli., синтезирующего адгезивный антиген 987Р, использовали МПА. Для энтеротоксигенного штамма Е. coli, синтезирующего адгезивный антиген К99 - среду Минка. культуры выращивали отдельно в течение 24 часов при 37°С, после этого выросшие колонии исследовали в РА на стекле с моновалентными агглютинирующими сыворотками для уточнения серогрупп и факторов адгезии. Биомассу культур Е. coli получали в матровых колбах, для этого их высевали по 1 см3 (1 млрд.м.к.) и выдерживали при температуре 37°С в течение 24 часов. Затем колонии смывали 0,85%-ным раствором хлорида натрия и готовили суспензии в концентрации 10 млрд.м.к. по оптическому стандарту мутности, проверяли на «чистоту», морфологическую и серологическую типичность. Инактивацию бактериальных взвесей проводили в течение 3-х суток 40%-ным формалином, из расчета 0,5 см3 на 100 см3 суспензии. Полноту инактивации контролировали посевом на соответствующие питательные среды.

С целью получения анатоксина ß-гемолитические и энтеротоксигенные штаммы Е. coli отдельно засевали в 2-х литровые колбы со средой Хоттингера и культивировали 5-7 суток при 37°С. Затем к культурам добавляли 40%-ный формалин до 0,5% и выдерживали в термостате при 37°С 10-12 суток. Полученный анатоксин осаждали 10%-ным раствором алюмокалиевых квасцов, добавляя его из расчета 1% на весь объем. После осаждения анатоксина в течение 2-3 суток, надосадочную жидкость удаляли и 0,85%-ным раствором хлорида натрия готовили суспензии в концентрации 10 млрд.м.к. по оптическому стандарту мутности.

Определение IDjo каждого компонента ассоциированной вакцины устанавливали путем подкожного введения моновакцин. Для моновакцин из штаммов ß-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli использовали белых

мышей, для моновакцин из штаммов бактерий Н. parasuis - морских свинок. Иммунизировали по 4 лабораторных животных следующими дозами: 500 млн., 1, 2, 4 млрд.м.к. Контролем служила группа не вакцинированных животных. Через 14 суток после иммунизации, животных внутрибрюшинно заражали 2 LD50. За состоянием животных наблюдали в течение 10 суток, отмечая количество живых в каждой группе, расчет Ю50 проводили по методу Кербера.

Результаты ID50 для моновакцин из штаммов ß-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli, отнесенных к серогруппам 0111, 0149, 020, 0119 соответственно составили 1,682; 1,682; 2; 2 млрд.м.к., для моновакцин из штаммов бактерий Н. parasuis «ДВ-28», «ДВ-30» - 1,682; 2 млрд.м.к. При этом, как в первом, так и во втором случае, ID50 равнялась 2 млрд.м.к. или числу близкому к этому показателю. Следовательно, соотношение бактериальных клеток каждого штамма, входящего в состав ассоциированной вакцины, должно быть одинаковым.

Сравнительную оценку антигенной активности моно- и ассоциированной вакцин проводили на белых крысах, разделенных на 3 группы. Крысам первой группы вводили моновакцину из |3-гемолитических и энтеротоксигенных штаммов Е. coli (по 2 млрд.м.к.), крысам второй группы — моновакцину из штаммов бактерий Н. parasuis (по 2 млрд.м.к.), крысам третьей группы - ассоциированную вакцину (по 2 млрд.м.к.). Вакцинацию проводили подкожно, однократно. Взятие крови осуществляли тотальным обескровливанием через 14 дней после иммунизации.

Результаты исследований сывороток крови, полученных от вакцинированных крыс, представлены в таблице 1.

Таблица 1

Содержание специфических антител в сыворотке крови белых крыс

Груп- №№ Титры антител (log2)

пы жив-х к Н. parasuis к ß-гем -м Е.соН к энт-м Е. coli

жив-х ДВ-30 ДВ-28 0149 0111 020 0119

0(88) (К99) (987Р)

1 1 8 8 7 7

2 8 7 8 7

3 7 7 7 8

4 8 8 7 7

5 7 7 7 7

М±ш 7,6±0,27 7,4±0,27 7,2±0,22 7,2±0,22

2 1 7,322 7,322

2 7,322 8,322

3 8,322 7,322

4 8,322 7,322

5 7,322 7,322

М±т 7,7±0,27 7,5±0,22

3 1 7,322 7,322 7 7 7 7

2 7,322 6,322 7 6 6 7

3 6,322 6,322 7 6 7 6

4 7,322 7,322 6 7 7 6

5 6,322 6,322 7 7 6 6

М±т 6,9±0,27 6,7±0,27 6,8±0,22 6,6±0,27 6,6±0,27 6,4±0,27

Сравнительный анализ результатов испытания двух моновакцин и ассоциированной вакцины при их раздельном применении, представленных в таблице 1, показал, что различия антигенной активности у животных первой и второй групп по отношению к третьей статистически не достоверны (Р>0,05). При этом установленное оптимальное соотношение бактериальных клеток каждого компонента ассоциированной вакцины, обеспечивающее в среднем равное накопление титров специфических антител.

Анализ литературных данных свидетельствует о том, что иммунобиологическая эффективность инактивированных вакцин зависит не только от качества антигена, но и от дозы введения препарата, а также от правильности выбора и использования в их составе неспецифических стимуляторов иммуногенеза - адъювантов (Воробьев А.А., 1975; Земсков А.М., 1982; Лазарева Д.И. с соавт., 1985).

В связи с этим, нами были изготовлены опытные образцы ассоциированной инактивированной вакцины, один из которых изготовлен с использованием масляного адъюванта (МА), другой - депонированный на гидрате окиси алюминия (ГОА).

Вакцину, сорбированную на ГОА, готовили из 2-х штаммов бактерий Н. parasuis с концентрацией 2 млрд.м.к., взятых по 25 см3 каждого на 100 см3, к ним добавляли 10-милиардные суспензии 2-х ß-гемолитических и 2-х энтеротоксигенных штаммов Е. coli, содержащие адгезивные антигены и взвеси их термостабильных и термолабильных анатоксинов, взятых в равных соотношениях по 5 см3 на 100 см3 вакцинного препарата, а также 6%-ный гель гидроокиси алюминия из расчета 10 см3 на 100 см3. Все тщательно перемешивали, доводили рН вакцины до 7,2-7,4, расфасовывали во флаконы, которые затем закрывали резиновыми пробками, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировали.

Для приготовления эмульгированной вакцины бакмассу с большей в два раза концентрацией м.к. в равных соотношениях объединяли с МА. Все тщательно перемешивали в размельчителе тканей РТ-1 при 4000 об/мин в течение 3 минут, затем при 8000 об/мин в течение 6 минут. Препарат расфасовывали во флаконы, закрывали резиновыми пробками, обкатывали алюминиевыми колпачками и этикетировали.

Для проверки на стерильность из каждой серии вакцины делали посевы в пробирки на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и агар Сабуро. Посевы со всеми средами выдерживали в термостате при 37°С, а с агаром Сабуро - при температуре 21±1°С в течение 10 суток. В результате проверки установлено, что изготовленные нами образцы ассоциированной вакцины являлись стерильными.

Для проверки на безвредность вакцины вводили подкожно белым мышам и морским свинкам в дозе 0,5 см3 и 2 см3 соответственно. За состоянием животных осуществляли ежедневное наблюдение и в течение 10 суток после введения вакцин белые мыши и морские свинки оставались живыми и клинически здоровыми.

Проведенный контроль каждой серии вакцины на стерильность и безвредность показал, что биопрепараты соответствуют требованиям, предъявляемым к инактивированным вакцинам.

Наиболее оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированных вакцин устанавливали в условиях учебного хозяйства КГАВМ Высокогорского района РТ на поросятах-отьемышах путем введения препаратов в объеме 1 см3, 1,5 см3 и 2 см3.

Результаты исследований сывороток крови, полученных от вакцинированных поросят, представлены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных поросят (М±т, п=4)

Группы Доза Антитела к Титры антител (Iog2)

ЖИВОТНЫХ вакцины антигенам «А» Использована вакцина с МА «Б» Использована вакцина с ГОА

1 1см3 Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) E.coliOlll Е. coli 020 (К99) Е. coli 0119 С987Р) 6,08+0,29 6,83±0,29 6,50+0,33 6,50+0,33 6,25+0,29 5,75+0,29 5,58+0,29 6,08+0,29 5,75+0,29 5,50+0,33 5,75+0,29 5,25+0,29

2 1,5 см3 Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) E.coliOlll Е. coli 020 (К99) Е. coli 0119 (987Р) 8,08+0,29 8,08+0,29 8,25+0,29 8,25+0,29 7,75+0,29 7,75+0,29 6,83+0,33 7,08+0,29 6,75+0,29 6,75+0,29 6,75+0,29 6,50+0,33

3 2см3 Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) Е. coli 0111 Е. coli 020 (К99) E.coli0119(987P) 8,58+0,29 8,83+0,33 8,75+0,29 8,75+0,29 8,50+0,33 8,25+0,29 7,58+0,29 7,58+0,29 7,50+0,33 7,50+0,33 7.25+0,29 7,25+0,29

Представленный в таблице 2 сравнительный анализ результатов испытания вакцинных препаратов в разных дозах показал, что во второй группе у поросят подгрупп «А» и «Б» соответственно устанавливали достоверно (р<0,05) более высокие титры антител, чем у животных первой группы. В то же время выяснилось, что разность между результатами титров антител третьей и второй групп у поросят подгрупп «А» и «Б», соответственно, статистически недостоверна. Кроме того, у животных третьей группы обеих подгрупп на протяжении 18-36 часов наблюдалось угнетение общего состояния, снижение пищевой возбудимости и повышение температуры тела до 40,5-40,7°С.

Таким образом, определена наиболее оптимальная прививная доза как в отношении вакцины с МА, так и для препарата, депонированного на ГО А, которая составила для обоих типов вакцин 1,5 см3 для первой и 2 смЗ для второй иммунизации.

2.2.5. Оценка антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных

Сравнительную оценку антигенной активности ассоциированной вакцины, депонированной на ГОА и приготовленной с МА, проводили на кроликах,

разделенных на 3 группы. Кроликам первой группы вводили вакцину с МА, кроликам второй группы - ГОА вакцину, кроликов третьей контрольной группы не иммунизировали.

Результаты серологических исследований показали, что у кроликов обеих опытных групп до иммунизации, а также у животных контрольной группы антитела к антигенным компонентам вакцины не обнаружены. При этом установлено, что максимальный уровень специфических антител в сыворотке крови обнаруживается через 14 дней после второй вакцинации. Так титры антител (М±т, п=5) у кроликов первой и второй групп, соответственно, составили: к Н. parasuis штамм «ДВЗО» 10,72+0,24 и 9,72+0,24; к Н. parasuis штамм «ДВ-28» 1О,52±0,37 и 9,52±0,20; к Е. coli (0149) 10,2+0,37 и 9,2+0,20; к Е. coli (0111) 9,8+0,37 и 8,8+0,20; к Е. coli (020) 10,О±0,35 и 8,8+0,20; к Е. coli (0119) 9,8+0,37 и 8,6+0,27.

Сравнение результатов иммунизации кроликов вакциной, депонированной на ГОА и приготовленной с МА, показало, что по каждому из составляющих компонентов вакцина с МА достоверно (р<0,05) обладает более высокой антигенной активностью.

Изучение относительного содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови и бактерицидной активности сыворотки крови кроликов, иммунизированных вакцинным препаратом, депонированным на ГОА и приготовленным с МА, показало, что разница результатов между этими группами недостоверна. Однако, по отношению к контрольной группе, у животных опытных групп после каждой вакцинации отмечалось достоверное увеличение (р<0,001) В-клеток в крови и повышение бактерицидной активности сыворотки крови (р<0,01-0,001). Достоверное увеличение (р<0,01) процента Т-клеток регистрировалось после второй вакцинации.

Таким образом, исследования на лабораторных животных показали, что вакцина с добавлением МА обладала более высокой антигенной активностью, чем депонированная на ГОА. На высокую активность препаратов с МА указывают и другие исследователи (Дудников А.И., с соавт., 1985; Романов Е.А., 1999; Most К. et al., 1988).

2.2.6. Изучение антигенной активности ассоциированной вакцины на поросятах-отъемышах

Испытание антигенной активности ассоциированной вакцины, депонированной на ГОА и приготовленной с МА на поросятах отъемного возраста, проводили в условиях учебного хозяйства КГАВМ Высокогорского района РТ. Предварительный контроль вакцин показал, что препараты по стерильности и безвредности соответствуют предъявляемым требованиям.

Результаты исследования сывороток крови, полученных от поросят до вакцинации, через 14 дней после первой и второй вакцинации, представлены в таблице 3.

Результаты, представленные в таблице 3, показывают, что после первой и второй вакцинации в обеих опытных группах отмечается достоверное увеличение титров антител (во всех случаях р<0,001) по отношению к контрольной группе. При сравнительном анализе результатов иммунизации поросят вакциной, депонированной на ГОА и приготовленной с МА, установлено, что по каждому из составляющих компонентов вакцина с МА достоверно (р<0,05) обладает более высокой антигенной активностью.

Исследования по определению относительного содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови и бактерицидной активности сыворотки крови

поросят, иммунизированных вакцинным препаратом, депонированным на ГО А и приготовленным с МА, показали, что разница результатов между этими группами недостоверна. По отношению к контрольной группе, у животных опытных групп уже после первой вакцинации отмечалось достоверное увеличение (р<0,01) процента Т- и В-клеток в крови и повышение бактерицидной активности сыворотки крови (р<0,01-0,001).

Таблица 3

Содержание специфических антител в сыворотке крови поросят, привитых двумя типами вакцин (М±т, п=5)

№№ группы Антитела к антигенам штаммов бактерий Титры антител (1о ?2>

До вакцинации После первой вакцинации После второй вакцинации

I Использована вакцина с МА Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) Е. coli 0111 Е. coli 020 (К88) Е. coli 0119(987Р) 1,4±0,67 1Д±0,82 2,0±0,94 1,8±0,89 7,93±0,27 8,13±0,22 7,6±0,27 7,8±0,22 7,6±0,27 7,4±0,27 10,73±0,27 10,53±0,22 10.6±0,27 10,4*0,27 10,4±0,27 10,2±0,22

2 Использована вакцина с ГОА Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) Е. coli 0111 Е. coli 020 (К88) Е. coli 0119(987Р) 1,2±0,89 1,4±0,67 1,8±0,82 2,2±1,02 6,93±0,27 7,13±0,22 6,6±0,27 6,8±0,22 6,6±0,27 6,4±0,27 9,73±0,27 9,53±0,22 9,6±0,27 9,4±0,27 9,2±0,22 9,2±0,22

3 Контрольная Н. parasuis ДВ-30 Н. parasuis ДВ-28 Е. coli 0149 (К88) Е. coli 0111 Е. coli 020 (К88) Е. coli 0119 (987Р) 1,2±0,89 1,4±0,67 1,6±0,75 1,0±0,71 1,8±0,89 2,0±0,94 1,6±0,84 2,2±0,74 2,8±0,82 3,4±0,45 2,6±0,84 3,2±0,42

В целом, результаты антигенной активности ассоциированной вакцины, полученные на поросятах в условиях свиноводческого комплекса, соответствуют таковым в опытах на кроликах. Это дает основание рекомендовать кроликов в качестве биологической модели для оценки и контроля антигенной активности ассоциированной вакцины при ее промышленном производстве.

2.2.7. Оценка эффективности ассоциированной вакцины в экспериментальных условиях

Изучение эффективности ассоциированной вакцины, депонированной на ГОА и приготовленной с МА, осуществляли комиссионно в остром опыте на иммунизированных и интактных поросятах-отьемышах. Проведенный контроль, использованных в опыте вакцин, показал, что препараты соответствуют всем предъявляемым требованиям.

В ходе опыта было установлено, что у вакцинированных поросят обеих опытных групп в течение первых суток после контрольного заражения вирулентными культурами бактерий Н. parasuis, 6-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli отмечается некоторое угнетение общего состояния и снижение аппетита. В последующие дни среди них признаков заболевания отмечено не было. В то время как у интактных поросят контрольной

группы развивалась тяжелая форма инфекционного процесса с некоторыми признаками отечной болезни и гемофилезного полисерозита. В результате этого на 5-е и 6-е сутки два поросенка пали.

Проведенные серологические исследования показали, что после первой и второй вакцинации в обеих опытных группах отмечается достоверное увеличение титров антител (во всех случаях р<0,05) по отношению к контрольной группе. Следует отметить, что эти результаты соответствуют данным, полученным в условиях учебного хозяйства КГАВМ на поросятах отъемного возраста. На основании полученных результатов можно утверждать о достаточно высокой антигенной активности каждого из составляющих компонентов ассоциированных вакцин, что указывает на совместимость их антигенного состава.

Изучением превентивных свойств установлено, что сыворотка крови поросят, иммунизированных вакциной, приготовленной с МА, и сыворотка крови поросят, иммунизированных ГОА вакциной, введенная белым мышам, предохраняла их от гибели после заражения смесью культур Н. parasuis, 6-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli, соответственно, в 90 и 80% случаев, тогда как сыворотка крови интактных поросят защищала только в 10% случаев.

При патологоанатомическом вскрытии двух павших и одного обескровленного с экспериментальной целью поросят контрольной группы обнаруживали студенистые отеки подкожной клетчатки, стенки желудка, брыжейки, кровоизлияния слизистой толстого отдела кишечника, катаральное воспаление желудка, тонкого отдела кишечника и густую серо-белого цвета тягучую массу в нем. При этом у двух павших поросят отмечали спайки перикарда с эпикардом, костальной и легочной плевры, а также их серозно-фибринозное воспаление. При вскрытии двух экспериментально обескровленных поросят опытных групп патологических изменений в органах и тканях обнаружено не было.

Исследования по реизоляции бактерий Н. parasuis, гемолитических и энтеротоксигенных культур Е. coli из биоматериала павших поросят контрольной группы завершились положительными результатами. В то же время из органов вынуждено убитых поросят первой и второй опытных групп исходные культуры возбудителей не выделялись.

Таким образом, оба типа ассоциированной вакцины после двукратного введения поросятам отъемного возраста оказались способными защитить их от экспериментального заражения вирулентными культурами бактерий Н. parasuis, В-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli, продуцирующих адгезивные антигены К88, К99, 987Р, термолабильные и термостабильные энтеротоксины, что свидетельствует о высоких протективных свойствах испытанных биопрепаратов.

Использование эмульсионной вакцины, изготовленной нами на основе минерального масла и ланолина, хотя и обеспечивает более высокий синтез антител, однако, обладая высокой кинетической вязкостью, она быстро застывает при низкой температуре, и в связи с этим возникают некоторые трудности при массовой вакцинации животных. Учитывая эти обстоятельства, для дальнейшего исследования использовали вакцину, сорбированную ГОА.

2.2.8. Изучение эффективности применения ассоциированной вакцины в производственных условиях

Эффективность ассоциированной вакцины была подтверждена в эпизоотологически контролируемых опытах на базе трех хозяйств Республики Татарстан, где предварительно были выявлены культуры бактерий Н. parasuis, В-

гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli в различных сочетаниях, обуславливающие их неблагополучие.

Всего за период проведения испытания было иммунизировано 6058 поросят, из них в 12-тысячном свинокомплексе ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района - 5024, в учебном хозяйстве КГАВМ Высокогорского района - 334 и в ООО «Новая жизнь» Кукморского района - 700 животных. Параллельно в этих хозяйствах проводились мероприятия по улучшению кормления, условий содержания супоросных свиноматок и поросят. Установлено, что введение вакцины не оказывало существенного влияния на общее состояние привитых животных. На месте введения препарата иногда наблюдали незначительную припухлость, которая исчезала в течение 12-14 суток.

Данные по эффективности применения ассоциированной вакцины обобщены в таблице 4.

Таблица 4

Показатели эффективности ассоциированной вакцины в неблагополучных хозяйствах

Наименование хозяйства В среднем за осенний период 2003 года до применения вакцины В среднем за весенний период 2004 года после применения вакцины

Заболело Пало Заболело Пало

к-во % к-во % к-во % к-во %

Свинокомплекс ООО «Нефтехимагропром» 632 43,3 340 23,3 179 10,7 64 3,8

Учебное хозяйство КГАВМ 134 41,2 71 21,8 36 10,8 13 3,9

Свинокомплекс ООО «Новая жизнь» 196 41,1 103 21,6 38 10,9 14 3,9

Результаты производственного испытания показали, что после применения ассоциированной вакцины количество случаев заболеваемости и падежа по трем неблагополучным хозяйствам, соответственно, снизилось с 41,9% до 10,8% и с 22,2% до 3,9%, то есть в 3,9 и 5,7 раза. Это позволило предотвратить потери на одно животное в сумме 150,59 рубля и обеспечить экономическую эффективность на 1 рубль затрат равную 6,96 рубля.

3. ВЫВОДЫ

1. Анализ литературных источников и результатов клинико-эпизоотологического обследования свиноводческих комплексов в регионах Среднего Поволжья и Предуралья показал, что среди различных возрастных групп поросят наибольший процент их заболеваемости (35-70%) и гибели (30-60%) от инфекционных заболеваний, проявляющихся преимущественно в смешанной форме, приходится на послеотъемный период жизни.

возбудителям пастереллеза и гемофилезного полисерозита, которые чаще всего проявляются на фоне стрессовых ситуаций или при вводе в хозяйство свиней-бектерионосителей.

3. От больных и павших поросят, проявлявших при жизни характерные признаки отечной болезни, выделено 56 В-гемолитических культур Е. coli, из которых 34 отнесены к 9 различным серовариантам (0149, 0138, 0101, 0139, 0111, 0140, 0137, 08 и 078). Тестированием этих культур с помощью диагностических агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий был выявлен в 56,3% случаев адгезивный антиген К88. Результатами серологического типирования 28 культур Е. coli, выделенных. при эшерихиозе поросят отъемного возраста, показано, что 19 из них также представлены 7 различными серотипами (0139, 020, 0119, 0142, 0138, 0141, 09), обладающими в 89,5% случаев факторами адгезии. При этом выявляемость среди них адгезинов К88 составила 31,5%, К99 - 21,1% и 987Р -15,8%.

4. Обобщением результатов исследований обоснована перспективность и целесообразность создания нового биопрепарата - ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей на основе наиболее часто выявляемых патогенных и антигенно-активных штаммов бактерий Haemophilias parasuis, В-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Escherichia coli, обладающих способностью индуцировать синтез антител в организме вакцинированных животных.

5. Определено оптимальное соотношение бактериальных клеток каждого штамма (в объеме 1 млрд.м.к.), входящего в состав ассоциированной вакцины, и установлена прививная доза, исключающая реактогенность препарата, как с МА, так и депонированного на ГОА. Испытания изготовленных вакцин на лабораторных животных показали их ареактогенность и высокую антигенную активность.

6. Уровень специфических антител у поросят, вакцинированных препаратом, изготовленным на основе МА, к антигенам бактерий Н. parasuis, В-гемолитических и энтеротоксигенных серотипов Е. coli составляет соответственно 10,53+0,22 log2, 10,4±0,27 Iog2 и 10,2+0,22 Iog2, у животных, привитых вакциной, сорбированной ГОА, эти показатели, соответственно, были несколько ниже - 9,53+0,22 log2 9,4+0,27 log2 и 9,2+0,22 log2. Следовательно, в результате проведенных экспериментов нами установлено, что оба типа вакцин, содержащие в своем составе указанные выше инактивированные бактериальные клетки, обладают выраженной антигенной активностью.

7. У поросят после однократного введения им вакцинного препарата как с МА, так и депонированного ГОА, увеличивается относительное содержание в периферической крови Т- и В-лимфоцитов, в первом случае - от 33,1% до 41,1% и от 13,1% до 21,4% соответственно, во втором случае - от 33,2% до 40,3% и от 12,9% до 20,6% соответственно. При этом снижается оптическая плотность сыворотки крови, в первом случае - от 81,45% до 65,07%, во втором случае - от 81,61% до 65,36%, что указывает на повышение ее бактерицидной активности. Оба типа вакцин при иммунизации животных повышают их гуморальный статус и стимулируют у них клеточные факторы иммунитета.

8. В опытах по испытанию иммуногенной активности двух типов ассоциированной вакцины с контрольным заражением клинически здоровых поросят отъемного возраста вирулентными культурами бактерий Н. parasuis, 6-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli показано, что после двукратного вакцинирования у подопытных животных формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий защиту их от экспериментального инфицирования.

9. Испытанием ассоциированной сорбированной на ГОА вакцины в условиях производства установлено, что двукратная иммунизация поросят послеотъемного возраста, с интервалом 15-21 сутки, в дозах 1,5 см3 и 2 см3, соответственно, обеспечивает снижение их заболеваемости с 41,9% до 10,8% и гибели с 22,2% до 3,9%. Применение биопрепарата позволяет предотвратить потери на одно животное в сумме 150,59 рубля. Экономическая эффективность его использования на 1 рубль затрат составляет 6,96 рубля. Эти данные свидетельствуют о высокой профилактической эффективности предложенной ассоциированной вакцины.

4 . ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная вакцина против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъехмышей, инактивированная гидроокисьалюминиевая». Подготовлены нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

1. «Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой» (утверждена директором ВНИВИ 19.07.04 г);

2. «Технические условия на ассоциированную вакцину против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированную гидроокисьалюминиевую» (утверждены директором ВНИВИ 30.06.04 г, согласованы с ГУВ КМ Республики Татарстан 5.07.04 г);

3. «Временное наставление по применению ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой (в порядке производственного опыта)» (согласовано с директором ВНИВИ 23.01.04 г, утверждено ГУВ КМ Республики Татарстан 26.01.04 г).

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ефимова М.А., Спиридонов Г.Н., Гаффаров Х.З., Фокин А.А. Получение и оценка специфической активности антигенов гемофилеза для ИФА // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Материалы международной научно-практической конференции. - Воронеж, 2002. - С. 245-255.

2. Гаффаров Х.З., Ефимова М.А., Фокин А. А. Оценка антигенной активности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, трансмиссивного

гастроэнтерита и отечной болезни поросят-отъемышей // Актуальные проблемы агропромышленного комплекса: Материалы международной научно-производственной конференции. - Казань, 2003. - С. 31-33.

3. Гаффаров Х.З., Ефимова М.А., Спиридонов Г.Н., Фокин А.А. Антигенная активность ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, трансмиссивного гастроэнтерита и отечной болезни поросят-отъемышей на лабораторных животных // Ветеринарный врач. - 2003. - № 3 (15). - С. 41-43.

4. Фокин А.А., Гаффаров Х.З., Ефимова М.А., Спиридонов Г.Н. Антигенная активность ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей на лабораторных животных // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: Материалы международной научной конференции молодых ученых. - Владимир, 2004. - С. 4850.

5. Фокин А.А., Гаффаров Х.З., Спиридонов Г.Н. Оценка иммунологической эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей // Материалы Всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. - Казань, 2004. - С. 62-64.

6. Гаффаров Х.З., Фокин А. .А., Спиридонов Г.Н., Салахутдинов Р.А. Вакцина ассоциированная против гемофилезного полисерозита, отечной - болезни, эшерихиоза поросят и оценка ее эффективности - в печати.

• * - \ 15 НЮЯ 2005 V

Подписано в печать 27.05.05. Заказ Формат 60x84 1/160 Тираж 100 экз. Отпечатано на офсетном участке ФГНУ ВНИВИ (г. Квзбн Адрес: 420075, г. Казань, Научный городок-2"

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Фокин, Александр Александрович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Этиологическая структура и эпизоотологические особенности проявления инфекционных болезней поросят-отъемышей в свиноводческих комплексах.

2.2. Гемофилезный полисерозит.

2.3. Отечная болезнь поросят-отъемышей.

2.4. Эшерихиоз поросят.

2.5. Роль ассоциации возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза в формировании заболевании поросят-отъемышей смешанной этиологии.

2.6. Современное состояние и перспективы иммунной профилактики инфекционных болезней поросят послеотъемного возраста в свиноводческих комплексах.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы.

Ф 3.1.1. Оборудования и используемые материалы.

3.1.2. Технология изготовления и контроль ассоциированной вакцины.

3.1.3. Методы испытания ассоциированной вакцины.

3.2. Статистическая обработка результатов исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Этиологическая структура и клинико-эпизоотологические аспекты инфекционных болезней поросят послеотъемного возраста в ряде свиноводческих комплексах регионов Среднего Поволжья и Предуралья.

4.2. Степень распространения возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей.

4.3. Выделение, изучение биологических свойств и идентификация полученных культур возбудителей.

4.3.1.Сравнительное изучение полевых культур и штаммов бактерий Haemophilus parasuis.

4.3.2.0тбор производственных гемолитических штаммов возбудителей отечной болезни поросят-отъемышей.

4.3.3.0тбор перспективных энтеротоксигенных штаммов возбудителей эшерихиоза поросят.

4.4. Разработка технологии изготовления ассоциированной инактивированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей.

4.4.1. Получение бактериальной массы производственных вакцинных штаммов.

4.4.2. Определение иммунизирующей дозы по каждому из составляющих компонентов ассоциированной вакцины.

4.4.3. Сравнительное изучение антигенной активности моно- и ассоциированной вакцин.

4.4.4. Изготовление ассоциированной вакцины.

4.4.5. Определение физических показателей ассоциированной вакцины.

4.4.6. Определение стерильности ассоциированной вакцины.

4.4.7. Оценка реактогенности ассоциированной вакцины с использованием лабораторных животных.

4.4.8. Проверка безвредности ассоциированной вакцины.

4.4.9. Определение прививной дозы ассоциированной вакцины на поросятах отъемного возраста.

4.5. Оценка антигенной и нммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных. д 4.5.1. Изучение антигенной активности ассоциированной вакцины на кроликах.

4.5.2. Показатели уровня клеточного иммунитета кроликов, иммунизированных ассоциированной вакциной.

4.6. Изучение антигенной активности ассоциированной вакцины на поросятах-отъемышах.

4.7. Оценка эффективности ассоциированной вакцины в экспериментальных условиях.

4.8. Изучение эффективности применения ассоциированной вакцины в производственных условиях.124 4.9. Экономическая эффективность профилактического действия ассоциированной вакцины.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей"

Актуальность темы. Обеспечение благополучия свиноводства в отношении инфекционных болезней является одной из наиболее ответственных задач ветеринарной службы страны. Инфекционные заболевания свиней сдерживают развитие свиноводства и наносят отрасли значительный экономический ущерб, который складывается из потерь нарождающего молодняка, снижения привесов, значительных затрат на лечебные и профилактические мероприятия. Наиболее часто у поросят различных возрастных групп наблюдаются желудочно-кишечные и респираторные заболевания, причина которых обусловлена снижением иммунитета в этот период их жизни и воздействием неблагоприятных факторов (Серегин И. с соавт., 1982; Коромыслов Г. Ф. с соавт., 1988; Волков Г. К. с соавт., 1997; Субботин В. В. с соавт., 2001; Молоканов Д. П. с соавт., 2002; Гаффаров X. 3. с соавт., 2003; Школьников Е. Э. с соавт., 2003).

Наиболее остро стоит проблема сохранения поросят послеотъемного возраста, особенно в условиях крупных свиноводческих комплексов промышленного типа (Цымбол Г. JI. с соавт., 1986; Павлов Е. Г., 1989; Карева Э. П. с соавт., 2002; Спиридонов Г. Н. С соавт., 2002). У поросят-отъемышей, одним из основных предрасполагающих факторов является отъем от матерей в раннем возрасте, у которых к этому времени снижается напряженность колострального иммунитета (Шесточенко М. А. с соавт., 1983; Сидоров М. А., 1987; Орлянкин Б. Г. с соавт., 2001; Тельнов С. Н., 2002).

На сегодняшний день установлено важное значение в этиологии инфекционных заболеваний поросят-отъемышей вируса трансмиссивного гастроэнтерита, возбудителей гемофилезного полисерозита, гемофилезной плевропневмонии, пастереллеза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также ß-гемолитических и энтеротоксигенных серотипов Е. coli, способных потенциально обуславливать отечную болезнь и эшерихиоз. Следует отметить, что за последние 5 лет средняя летальность поросят этого периода жизни в России составляет более 28,5% (Прунтова О. В. с соавт., 1995; Карева Э. П. с соавт., 2002; Рахманов А. М. с соавт., 2002; Спиридонов Г. Н. с соавт., 2002; Тельнов С. Н., 2002; Шахов А. Г., 2002; Школьников Е. Э. с соавт., 2003; Коломыцев А. А. с соавт., 2005). Очень часто в промышленном свиноводстве эти болезни протекают в виде смешанной инфекции, что в значительной мере затрудняет их диагностику, специфическую профилактику, осложняет течение болезни и чаще всего инфекционный процесс завершается летальным исходом (Гараев И. М., 1996; Ковалев М. М., 2002; Терехов В. И., 2002; Гаффаров X. 3., Романов Е. А., 2004).В этой связи вакцинация поросят-отъемышей является самой важной профилактической мерой, поскольку она способствует образованию активного иммунитета на фоне исчезновения пассивного (Сидоров М. А., 1987; Орлянкин Б. Г. с соавт., 2001).

Следует отметить, что в настоящее время вопрос о специфической профилактики инфекционных заболеваний поросят-отъемышей смешанной этиологии имеет первостепенное значение для свиноводства, требует глубокого изучения и изыскания новых, более эффективных поливалентных биологических препаратов (Михайлюк А. П. с соавт., 1982; Коромыслов Г. Ф. с соавт., 1988; Равилов А. 3., 1996; Русалев В. С. с соавт., 2001).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

-определить оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины, исключающую ее реактогенность;

-изучить влияние некоторых адъювантов на иммуногенную активность ассоциированной вакцины;

-изучить эффективность применения ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях;

-подготовить нормативно-техническую документацию, регламентирующую изготовление, контроль и применение ассоциированной вакцины.

Получены и изучены биологические свойства штаммов бактерий Н. parasuis, ß-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli, обладающие выраженными антигенными свойствами и признаны пригодными для изготовления ассоциированной вакцины.

На лабораторных и естественно восприимчивых животных установлены оптимальные концентрации и соотношение инактивированных антигенов бактериальных клеток каждого штамма в вакцинном препарате, определена зависимость между прививными дозами, титрами антител и защитным эффектом биопрепарата.

Разработаны нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

-«Технические условия на ассоциированную вакцину против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированную гидроокисьалюминиевую» (утверждены директором ВНИВИ 30.06.04 г, согласованы с ГУВ КМ Республики Татарстан 5.07.04 г);

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

Международной научно-практической конференции (Воронеж, 2002);

Международной научно-производственной конференции, посвященной 130-летию КГАВМ (Казань, 2003);

Международной научной конференции молодых ученых (Владимир, 2004);

Всероссийской научно-практической конференции (Казань, 2004).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, кроме того, одна работа находится в печати.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:

-лабораторный регламент технологии изготовления ассоциированной вакцины;

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Фокин, Александр Александрович

6. выводы

2. Изучением этиологической структуры инфекционных заболеваний поросят-отъемышей в свиноводческих комплексах, обследованных нами регионов, установлено, что в возникновении ассоциированной формы патологии основная роль принадлежит ß-гемолитическим и энтеротоксигенным штаммам Е. coli, возбудителям пастереллеза и гемофилезного полисерозита, которые чаще всего проявляются на фоне стрессовых ситуаций или при вводе в хозяйство свиней-бактерионосителей.

3. От больных и павших поросят, проявлявших при жизни характерные признаки отечной болезни, выделено 56 ß-гемолитических культур Е. coli, из которых 34 отнесены к 9 различным серовариантам (0149, 0138, 0101, 0139, 0111, 0140, 0137, 08 и 078). Тестированием этих культур с помощью диагностических агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий был выявлен в 56,3% случаев адгезивный антиген К88. Результатами серологического типирования 28 культур Е. coli, выделенных при эшерихиозе поросят отъемного возраста, показано, что 19 из них также представлены 7 различными серотипами (0139, 020, 0119, 0142, 0138, 0141, 09), обладающими в 89,5% случаев факторами адгезии. При этом выявляемость среди них адгезинов К88 составила 31,5%, К99 - 21,1% и 987Р -15,8%.

4. Обобщением результатов исследований обоснована перспективность и целесообразность создания нового биопрепарата - ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей на основе наиболее часто выявляемых патогенных и антиген но-активных штаммов бактерий Haemophilus parasuis, ß-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Escherichia coli, обладающих способностью индуцировать синтез антител в организме вакцинированных животных.

6. Уровень специфических антител у поросят, вакцинированных препаратом, изготовленным на основе МА, к антигенам бактерий Н. parasuis, ß-гемолитических и энтеротоксигенных серотипов Е. coli составляет соответственно 10,53±0,22 log2, 10,4±0,27 log2 и 10,2±0,22 log2, у животных, привитых вакциной, сорбированной ГОА, эти показатели, соответственно, были несколько ниже - 9,53±0,22 log2 9,4±0,27 log2 и 9,2±0,22 log2. Следовательно, в результате проведенных экспериментов нами установлено, что оба типа вакцин, содержащие в своем составе указанные выше инактивированные бактериальные клетки, обладают выраженной антигенной активностью.

7. У поросят после однократного введения им вакцинного препарата как с МА, так и депонированного ГОА, увеличивается относительное содержание в периферической крови Т- и B-лимфоцитов, в первом случае - от 33,1% до 41,1% и от 13,1% до 21,4% соответственно, во втором случае - от 33,2% до 40,3% и от 12,9% до 20,6% соответственно. При этом снижается оптическая плотность сыворотки крови, в первом случае — от 81,45% до 65,07%, во втором случае - от 81,61% до 65,36%, что указывает на повышение ее бактерицидной активности. Оба типа вакцин при иммунизации животных повышают их гуморальный статус и стимулируют у них клеточные факторы иммунитета.

8. В опытах по испытанию иммуногенной активности двух типов ассоциированной вакцины с контрольным заражением клинически здоровых поросят отъемного возраста вирулентными культурами бактерий Н. parasuis, ß-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli показано, что после двукратного вакцинирования у подопытных животных формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий защиту их от экспериментального инфицирования.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе проведенных исследований разработана и предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная вакцина против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированная гидроокисьалюминиевая». Подготовлены нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой» (утверждена директором ВНИВИ 19.07.04 г);

- «Технические условия на ассоциированную вакцину против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированную гидроокисьалюминиевую» (утверждены директором ВНИВИ 30.06.04 г, согласованы с ГУ В КМ Республики Татарстан 5.07.04 г);

- «Временное наставление по применению ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой (в порядке производственного опыта)» (согласовано с директором ВНИВИ 23.01.04 г, утверждено ГУВ КМ Республики Татарстан 26.01.04 г).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Фокин, Александр Александрович, Казань

1. Абрамов А., Пороло Л. Етюлопчне значения асощацп пастерел, сальмонелл, синьогншно1 палички в шфекцшш патологи свиней // Вет. медицина Украши. 1996. — № 7. — С. 30-31.

2. Авакян А. А., Кац Л. Н., Павлова И. Б. Атлас анатомии бактерий патогенных для человека и животных. — М.: Медицина, 1972. — С. 47-59.

3. Алтухов Н. М., Моргунова В. И., Середа Н. Г. Патоморфология экспериментального эшерихиоза у новорожденных поросят // Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. 1990. — Ч. 2. - С. 92-94.

4. Андросик Н. Н., Толяронок Г. Е., Бутовский Н. В. Этиология и профилактика полисерозитов свиней на комплексах Белорусии // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж-ных: Тез. докл. республ. науч.-произ. конф. — Минск, 1990. — С. 98-99.

5. Андрышин Ю. Т., Тарасенок Н. И. Гемофилезный полисерозит у свиней // Ветеринария. 1979. - № 11. - С. 39-40.

6. Анисим И. А., Вантеев В. В., Воль Л. П. Патологоанатомическая диагностика инфекционных болезней свиней / Под ред. М. С. Жакова. — Минск: Ураджай, 1980. — 135 с.

7. Апатенко В. М. Смешанные инфекции сельскохозяйственных животных. — Киев: Урожай, 1990. — 76 с.

8. Асонов Н. Р. Микробиология. М.: Агропромиздат, -1989. - 351с.

9. Асонов Н. Р. Микробиология. — М.: Колос, 1997. 352 с.

10. Леонов Н. Р. Практикум по микробиология. — М.: Колос, 1975. —160 с.

11. Байбиков Т. 3., Рахманов А. М., Яременко Н. А. Основные инфекционные болезни свиней и их специфическая профилактика в современных условиях // Актуал. пробл. инфекц. патологии ж-ных: Мат. межд. науч. конф. Владимир, 2003. - С. 87-90.

12. Бакулов И. А., Буткин Е. И., Ведерникова В. А. Эпизоотология с микробиологией / Под ред. И. А. Бакулова. М.: Агропромиздат, 1987. - 415 с.

13. Бакулов И. А.', Юрков Г. Г., Песковацков А. П. Рекомендации по методике эпизоотического исследования. — Покров. 1975. — 75 с.

14. Бахтин А. Г. Желудочно-кишечные болезни свиней. Библиотека практ. вет. врача / Под ред. проф. П. И. Притулина. М.: Колос, 1967. - 199 с.

15. Бедоева 3. М. Идентификация энтеротоксигенных эшерихий с адгезивным антигеном К99 в РНГА и непрямом варианте РИФ // МВА № 524 ВС-89 Деп. М., 1989. - 11 с.

16. Бияшев Б. К. Вакцинопрофилактика отечной болезни поросят // Актуальные проблемы патологии ж-ных и ч-ка: Мат. науч.-прак. конф. — Барнаул, 1996. С. 89-90.

17. Блинов Н. И. Методы выделения и идентификации Т- и В-лимфоцитов // Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание. М.: Агропромиздат, 1985. - С. 215-222.

18. Борисович Ю. Ф., Кирилов Л. В. Инфекционные болезни животных / Под ред. Д. Ф. Осидзе. М.: Агропромиздат, 1987. - 288 с.

19. Брем А. К. Эпизоотология и специфическая профилактика колиэнтеротоксимии поросят // Эпизоотология и меры борьбы с инфекц. болезнями ж-ных: Сбор. науч. трудов. Новосибирск, 1985. - С. 92-99.

20. Бургицкий И. Д., Туракулов Б. Т., Ахмедвалиев А. Н. Иммунопрофилактика инфекционных болезней с.-х. ж-ных // Труды Узбек. НИВИ. 1986. - № 38. - С. 24-27.

21. Быковский А. Ф. Смешанные инфекции // Актуальные вопросы смешанной инфекции: Сбор. науч. трудов ИЭМ. М., 1986. - С. 3-7.

22. Бычевой И. Ф. Этиология отечной болезни поросят. — Ветеринария. 1979. - № 5. - С. 42-43.

23. Войтенко А. С., Ливанова Л. Ф., Ерошенко Г. А., Щербаков А. А., Смирнова Н. И. Конструирование штаммов Е. coli // Ветеринария. — 2000. № 9.-С. 27-31.

24. Волков Г. К., Баранников В. Д. Проблемы выращивания здорового молодняка // Ветеринария. 1997. - № 2. - С. 7-10.

25. Волынец Л. К., Балицкий Ю. Г. Колибактериоз в свиноводческих хозяйствах // Ветеринария. 1991. - № 1. - С. 41-43.

26. Воробьев А. А. Проблема адъювантов в вакцинно-сывороточном деле: Тез. докл. М., 1975. - С. 19-22.

27. Воробьев А. А., Васильев Н. Н. Адъюванты. М.: Медицина, 1969.-206 с.

28. Воронов А. Н. Острые желудочно-кишечные заболевания у поросят раннего возраста в свинокомплексе: Автореф. дис. . канд. вет. наук. — Ленинград, 1989.

29. Гайзатуллин Р. Р., Харматуллин Т. Н., Закирьянова Ш. X., Хамзин К. А. Повышение интенсивности свиноводства — основа рентабельности отрасли. — Казань, 1999. 37 с.

30. Гараев И. М. Ассоциированные инфекции у свиней в промышленных комплексах: Сбор. науч. трудов ВГНКИ. Москва, 1996. — Т. 59.-С. 113-116.

31. Гараев И. М. Изоляция возбудителей и воспроизведение трансмиссивного гастроэнтерита и полисерозита на поросятах: Сбор. науч. трудов ВГНКИ.-Москва, 1996.-Т. 59.-С. 116-117.

32. Гаффаров X. 3., Иванов А. В., Непоклонов Е. А., Равилов А. 3. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят. Казань: Фэн, 2002. - 592 с.

33. Гаффаров X. 3., Романов Е. А. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними. Москва: «Аквариум», 2004. - 200 с.

34. Гнатенко Г. В., Сухарев Ю. С. Иммунные свойства препарата из коньюгированных энтеротоксинов Е. coli // Ветеринария. — 1992. № 2. — С. 27-29.

35. Головко А. Н. Антигенная вариабельность фимбриальных адгезинов Е. coli // Ветеринария. 1997. - № 8. — С. 23-25.

36. Головко А. Н. Приготовление вакцинного компонента на основе энтеротоксинов Е. coli // Общая эпизоотология: иммунологические, эколог, иметодолог, проблемы: Мат. межд. науч. конф. Харьков, 1995. - С. 329-330.

37. Головко А. Н. Фимбриальные адгезины энтеротоксигенных эшерихий // Ветеринария. 1993. - № 9. - С. 31-32.

38. Головко А. Н., Гнатенко Г. В., Красников Г. А. Выявление специфических антител против адгезивного антигена Е. coli К99 // Ветеринария. 1988. - № 9. - С.32-34.

39. Головко А. Н., Гнатенко Г. В., Красников Г. А. Реакция агглютинации в латексе для обнаружения адгезивного антигена у Е. coli // Ветеринария. 1990. - № 2. - С. 35-37.

40. Горская Е. М., Ленцинер X. П., Ленцинер А. А. и др. Адгезивные свойства бактерий кишечного происхождения // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1991. - № 10. - С. 508.

41. Госманов Р. Г., Колычев Н. М., Барсков А. А. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии: Учебное пособие. — Омск: Ом ГАУ, 2000.-396 с.

42. Гумбатов Ю. К. Биохимические свойства гемофильных бактерий, выделенных от поросят больных полисерозитом: Доклады ВАСХНИЛ. — 1977.-№5.-С. 42-43.

43. Гумбатов Ю. К. Изучение биологических свойств гемофильных бактерий // Ветеринария. 1978. - № 3. — С. 47-49.

44. Далин Н. В., Фиш Н. Г. Адгезины микроорганизмов // Итоги науки и техники. -М., 1985. — 16 с.

45. Джупина С. И. Методы эпизоотического исследования и теория эпизоотического процесса. — Новосибирск: Наука. — 1991. — 144 с.

46. Дудников А. И., Коронов В. Н., Ашуров С. А. и др. Иммуногенность у крупного рогатого скота и свиней противоящурной вакцины с масляным адъювантом // Проблемы вет. иммунологии. — М., 1985. -С. 138-139.

47. Евглевская Н. И., Курашвили Т. К. и др. Адгезивные антигены и энтеротоксины эшерихий патогенных для молодняка сельскохозяйственных животных // Ветеринария. 1985. - № 5. - С. 33-35.

48. Егорова А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. Теория и практика ИФА. — М., 1991.

49. Жаков М. С., Вантеев В. В., Толкач Н. Г. Иммунная реактивность поросят раннего возраста // Вет. наука производству. — 1985. № 23. — С. 2528.

50. Жаров А. В., Иванов И. В., Кунаков А. А. и др. Вскрытие и патологоанатомическая диагностика болезней сельскохозяйственных животных / Под ред. В. П. Шишкова, А. В. Жарова, Н. А. Налетова. — М.: Колос, 1981.-271 с.

51. Жаров А. В., Иванов И. В., Стрельницкова А. П. Вскрытие и патоморфологическая диагностика болезней животных / Под ред. А. В. Жарова. М.: Колос, 2000. - 400 с.

52. Зелютков Ю. Г. Идентификация адгезивных антигенов у патогенных эшерихий: Учен. зап. Витебской гос. акад. вет. медицины. — 1995. -Т. 32.-С. 108-110.

53. Земсков А. М. Некоторые механизмы действия адъювантов // Иммунология. 1982. - № 1. - С. 6-13.

54. Земсков А. М., Караулов А. В., Земсков В. М. Комбинированная иммуннокорекция. М.: Наука, 1994. - 260 с.

55. Игнатьева С. В. Гемофилезный полисерозит свиней // Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. Москва, 1991. - С. 199-200.

56. Игнатьева С. В. Испытание иммуногенности опытного образца масляной формолвакцины против гемофилезного полисерозита свиней:

57. Сборник науч. трудов ВГНКИ Всеросс. гос. НИИ контроля, стандартизации и сертификации вет. препаратов. 1994. - Т. 55. - С. 210-213.

58. Иоханзе У. Исследования по патологии и патогенезу колиэнтеротоксемии свиней // Патологическая анатомия животных: Мат. VI Всесоюз. науч. конф. Тарту, 1977. - С. 198-201.

59. Кабанков Ю. С. Характеристика эшерихий, выделенных от поросят // Ветеринария. 1981. - № 10. - С. 28-30.

60. Карева Э. П., Ирский А. Г., Солдатенко Н. А., Зимина В. Н. Этиологическая структура желудочно-кишечных болезней поросят // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. Воронеж, 2002. - С. 296-298.

61. Карева Э. П., Солдатенко Н. А., Мандрыко В. А., Зимина В. Н. Сальмонеллез поросят в современных условиях // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. — Воронеж, 2002. С. 298-300.

62. Каримов М. Ш., Матюгина Н. И. Антигенная активность препаратов, изготовленных из рото- и короновирусов, на крысах: Бюл. ВИЭВ. 1988. - В. 66. - С. 19-20.

63. Ковалев В. Ф., Волков И. Б., Нечаева Л. А., Убашев А. У. И др. Резистентность эшерихий и сальмонелл к применяемым антибиотикам // Ветеринария. 1989. - № 7. - С. 30-31.

64. Ковалев М. М. Иммунопрофилактика и терапия болезней молодняка // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. Воронеж, 2002. — С. 321-324.

65. Козловский Г. А., Носов И. И., Шанин М. Ф., Ибрагимов А. И. Методика изготовления вакцины из лапинизированного вируса ящура типа О: Тез. докл. науч.-произ. конф. ВГНКИ. -М., 1972. С. 54-55.

66. Коломыцев А. А., Стрижаков А. А., Лукьянов С. Б., Пантюшенко В. Г. Отечная болезнь поросят // Ветеринария. 2005. - № 1. - С. 23-27.

67. Коломыцев А. А., Стрижаков А. А., Лукьянов С. Б. Развитие отечной болезни в ассоциации с классической чумой на свинокомплексах // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. Воронеж, 2002. - С. 15-19.

68. Кондауров Б. И. Роль Т- и В-лимфоцитов в иммунной защите молодняка // Профилактика болезней молодняка сельскохозяйственных животных Сибири и Дальнего Востока: Сбор. науч. трудов. — 1982. — С.29-32.

69. Конопаткин А. А., Артемов Б. Т., Бакулов И. А. и др. Эпизоотология и инфекционные болезни / Под ред. А. А. Конопаткина. М.: Колос, 1993.-688 с.

70. Коромыслов Г. Ф., Федоров Ю. Н. Иммунологические основы сохранения молодняка: Бюл. ВНИИЭВ. — 1988. В. 66. - С. 3-7.

71. Кору ков Г. Влияние на стрес-факторите върху условнопатогенните микроорганизми в промышленого свиневъдство: Вет. Сбор. 1985. - Т. 83. - № 1. - С. 26-28.

72. Костенко Т. С., Скариевская Е. И., Гительсон С. С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. М.: Агропромиздат, 1989. — 282 с.

73. Костыркин Ю. А. Усовершенствование средств и методов специфической профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота: Дис. канд. вет. наук. — Владимир, 2003. 164 с.

74. Кудряшов А. А. Патоморфологические изменения в кишечнике у новорожденных поросят при колибактериозе, анаэробной энтеротоксемии и ВТГС // Ветеринария. 1990. - № 6. - С. 36-39.

75. Куликовский А. В., Панин А. Н., Соснина В. В. Токсигенные эшерихии — актуальная проблема ветеринарии и медицины // Ветеринария. — 1997.-№3.-С. 25-27.

76. Курашвили Т. К., Соколов Н. А., Михайлова И. Ф. и др. О серогрупповой принадлежности эшерихий , выделенных в Грузинской ССР // Ветеринария. 1989. - № 3. - С. 38-39.

77. Курашвили Т. К., Соколова Н. А. Адгезивный антиген К88 ad Е. coli // Ветеринария. 1991. - № 3. - С. 26-27.

78. Курашвили Т. К., Соколова Н. А. Обнаружение адгезивного антигена F41 у выделенного от поросят штаммов Е coli // Ветеринария. — 1991.-№ 10.-С. 31-33.

79. Куриленко А. Н., Крупальник В. JI. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 2001. - 144 с.

80. Лаврентьев Н. И. Обзор иностранной литературы. Гемофилезная плевропневмония // Ветеринария. — 1986. № 10. — С. 68-73.

81. Лазарева Д. Н., Алехин Е. К. Стимуляторы иммунитета. — М.: Медицина, 1985.-256 с.

82. Лаптенок В. Н. Резистентность поросят в послеотъемный период // Актуальные вопросы иммунологии, ветеринарии и животноводства: Витебский ветеринарный институт. — 1989. С. 30-31.

83. Ласковый В. Н. Иммунологическое состояние организма свиней при трансмиссивном гастроэнтерите // Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии и бактериологии: Труды ВИЭВ. Москва, 1987. — Т. 64. — С. 4445.

84. Лозовой Д. А. Усовершенствование технологии изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против снижения яйценоскости-76: Дис. . канд. вет. наук. — Владимир, 2001. 147 с.

85. Лосева Т. В. Индикация гемофильных бактерий непрямой реакцией иммунофлуоресценции: Доклады ВАСХНИЛ. — 1979. № 5. - С. 41-43.

86. Лях Ю. Г. Пастереллез свиней в Белорисии. — Минск: Хата, 2002. -201 с.

87. Малахов Ю. А., Душук Р. В. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных // Ветеринария. — 2001. № 1.-С. 35-38.

88. Мамков Н. С. Масляные адъюванты для противоящурных вакцин: Дис. . д-ра вет. наук. Владимир, 1999. - 323 с.

89. Матюшев Ю. Н. К этиопатогенезу отечной болезни свиней // Ветеринария. 1982. - № 1. - С. 28-30.

90. Матюшко В. К., Дозорец Е. Г. Опыт профилактики колибактериоза свиней на крупных промышленных комплексах // Ветеринария. 1995. -№ 6.-С. 15-17.

91. Медуницин Н. В. Вакцинология. М.: Трида-Х, 1999. - 272 с.

92. Метелева Р. И. Вирусный трансмиссивный гастроэнтерит свиней // Ветеринария. 1980. - № 10. - С. 74-75.

93. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др. — М.: Мир, 1983.-Т. 1.-536 с.

94. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др. М.: Мир, 1984.-Т. 3.-264 с.

95. Мизур Т. Випадки пастерельозной пневмонп свиней у господарствах Полюся // Вет. Медицина Украши. — 1998. № 10. - С. 28-31.

96. Митрофанов П. Н. Патологоанатомическая диагностика малоизвестных инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. — Саранск, 1997.-108 с.

97. Михайлюк А. П., Барсегян Б. С., Пронин И. А. и др. Ассоциированная и комплексная вакцинация животных // Ветеринария. -1982.-№ 12.-С. 51-52.

98. Михалишина 3. Я., Дудников А. И. Иммуногенность и реактогенность эмульсионной вакцины против ящура типа О1 в зависимости от используемых масел для ее изготовления // Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. — Владимир, 1986. С. 79-80.

99. Молоканов Д. П., Федюк В. И. Комплексная система диагностики, лечения и профилактики гастроэнтеритов у поросят // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. Воронеж, 2002. - С. 431-433.

100. Никитин И. Н., Воскобойник В. Ф. Организация и экономика ветеринарного дела. М.: ВЛАДОС, 1999. - 384 с.

101. Николаев В. А., Киндрас Т. М. Роль условно патогенных микроорганизмов и их ассоциаций в развитии острых желудочно-кишечных заболеваний поросят // Ленинградский ветеринарный институт: Сбор. науч. работ. 1984. - Т. 80. - С. 50-53.

102. Новгородов В. П. Профилактическая эффективность препарата терфумен при желудочно-кишечных болезнях поросят: Сбор. науч. трудов ВГНКИ.-Москва, 1995.-Т. 58.-С. 109-113.

103. Новиков Б. В., Дмитренко В. В. Основные параметры иммунного статуса клинически здоровых свиней // Ветеринария. — 1993. № 2. — С. 2225.

104. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997. — Т. 1. — С. 200203.

105. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий. М.: Мир, 1999. - С. 498-500.

106. Орлов Ф. М. Болезни свиней. М.: Сельхозгиз, 1958. — 463 с.

107. Орлянкин Б. Г., Алипер Т. И. Особенности функционирования иммунной системы слизистых оболочек и стратегия специфической профилактики вирусных гастроэнтеритов поросят // Сельскохозяйственная биология животных. 2001. - № 2. — С. 10-19.

108. Павлов В. Г., Рахманов А. М., Смирнов В. И. Особенности строения олеогранулем у свиней при испытании противоящурной эмульсионной вакцины с разными маслами // Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1978. - С. 65-67.

109. Павлов Е. Г. Технология производства свиней и борьба с инфекционными гастроэнтеритами поросят // Ветеринария. 1989. - № 4. — С. 38-40.

110. Панин А. Н. Стрептококкозы свиней // Ветеринария. 1986. - № 5. С. 42-44.

111. Панин А. Н., Душук Р. В. Краткая характеристика возбудителей гемофилезов животных // Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов: Тез. докл. Всеросс. науч. конф. Москва, 2001. — С. 47-49.

112. Панин А. Н., Малик Е. В. Стрептококковый менингоэнцефалит свиней // Ветеринария. 1991. - № 7. — С. 35-39.

113. Петрачев Д. А. Бактерицидная активность сыворотки крови поросят // Ветеринария. 1981. - № 9. — С. 71-72.

114. Петровская В. Г., Бондаренко В. М. Адгезины энтеротоксигенных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1990. - № 5. - С. 110-117.

115. Пирожков М. К. Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных: Автореф. дис. . докт. вет. наук. — Москва, 2002. 48 с.

116. Пирожков М. К., Тугаринов О. А. Способ получения вакцины против колибактериоза поросят // Патент РФ № 202 25 63. 1994.

117. Поляков О. А., Евглевская Н. И. Изыскание ускоренного метода идентификации эшерихий // Ветеринария. 1983. - № 6. - С. 71-72.

118. Попов В. И. Иммунизация новорожденных поросят // Ветеринария. 1984. - № 6. - С. 26-30.

119. Порохов Ф. Ф. Отечная болезнь поросят // Ветеринария. — 1984. -№8.-С. 36-38.

120. Притулин П. И., Зорников В. М. Эпизоотология вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней // Ветеринария. 1981. - № 8. - С. 40-42.

121. Прудников С. И. Иммуностимуляторы при профилактике болезней поросят // Ветеринария. 1996. - № 11. — С. 13-17.

122. Прудников С. И. Эпизоотология заболеваний, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами в свиноводческих хозяйствах промышленного типа // Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных. 1987. - С. 142-147.

123. Прудников С. И., Брем А. К. Колиэнтеротоксемия поросят // Диагностика болезней животных и профилактика их на фермах и комплексах. 1984. - С. 140-146.

124. Прунтова О. В., Русалев В. С., Гневашев В. М. и др. Биохимические и антигенные свойства изолятов рода Haemophilus // Актуальные проблемы инфекционной патологии животных: Мат. межд. науч. конф. Владимир, 2003. - С. 233-235.

125. Прусак-Глотов В. Э. Морфофункциональная характеристика гемофклезного полисерозита // Ветеринария. 1992. - № 6. - С. 31-32.

126. Равилов А. 3. Разработка и внедрение эффективных биопрепаратов для диагностики и профилактики инфекционных болезней // 100 лет Курской биофабрике и агробиологической промышленности России. Курск, 1996. - С. 237-242.

127. Рахманов А. М., Яременко Н. А. Инфекционные болезни поросят и их иммунопрофилактика в современных условиях // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. конф. Воронеж, 2002.-С. 31-33.

128. Романенко В. Ф. Инфекционные желудочно-кишечные болезни свиней. -М.: Колос, 1984. 158 с.

129. Романенкова Н. И., Ефремов В. Е., Клеганов В. К., Авдеева Т. А. Способ определения энтеротоксичности кишечных палочек на мышах сосунах // Микробиология. 1986. — № 2. - С. 38-41.

130. Романов Е. А. Усовершенствование технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против рото-, короно-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят: Дис. . канд. вет. наук. Казань, 1999. - 187 с.

131. Рубинский И. А. Иммунопрофилактика гемофилезной плевропневмонии свиней // Ветеринария. 1995. - № 1. - С. 21-26.

132. Русалеев В. С., Гневашев В. М., Прунтова О. В. Бактерийные вакцины в свиноводстве // Ветеринария. 2001. - № 6. - С.18-21.

133. Сафиуллин Р. Г., Тюрин И. Е. Экономическая эффективность субалина и абикнина при желудочно-кишечных болезнях поросят // Ветеринария. 2003. - № 8. - С. 7-10.

134. Светоч Э. А., Попов Е. И. Временное наставление по применению агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенамэшерихий К88, К99, 987Р, F41 и А20, утвержденное ГУВ Госагропрома СССР 21.02.-1989.

135. Сергеев В. А. Вирусные вакцины. Киев: Урожай, 1993. - С. 159183.

136. Серегин И., Логинов И., Малявин А., Цириди Г. Профилактика инфекционных болезней у новорожденных животных // Ветеринария. — 1982. -№ 1.-С. 32-34.

137. Сетдеков Р. А. Эпизоотология и лечебно-профилактические меры при отечной болезни (колиэнтеротоксемия) поросят в Нижегородской области: Дис. . канд. вет. наук. Казань, 2003. — 119 с.

138. Сидоров М. А. Основы профилактики болезней новорожденных телят и поросят // Ветеринария. 1987. - № 2. - С. 10-12.

139. Сидоров М. А., Голиков А. В., Тарасенок Н. И. и др. Колостральный иммунитет против гемофилезного полисерозита у поросят: Докл. ВАСХНИЛ. 1981. - № 3. - С. 35-37.

140. Сидоров М. А., Курашвили Т. К. Пероральная иммунизация новорожденных телят и поросят против колибактериоза // Ветеринария. — 1981.-№ 10. С.24-25.

141. Сидоров М. А., Скородумов Д. И. Гемофилезы животных. М.: Агропромиздат, 1986. - 176 с.

142. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Гумбатов Ю. К. Патогенность возбудителя гемофилезного полисерозита свиней для лабораторных животных и поросят // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных: Труды ВИЭВ. Москва, 1977. - Т. 45. - С. 50-54.

143. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Гумбатов Ю. К. Роль бактерий рода Haemophilus в инфекционной патологии животных // Ветеринария. — 1978.-№5.-С. 102-107.

144. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Гумбатов Ю, К., Тарасенок Н. И. Серологические варианты гемофильных бактерий, выделенных от свиней // Ветеринария. 1980. - № 1980. - № 4. - С. 66-67.

145. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Тарасенок Н. И., Гумбатов Ю. К. Иммуногенность вакцины против гемофилезного полисерозита: Докл. ВАСХНИЛ. 1980. - № 8. - С. 30.

146. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Тарасенок Н. И., Шубин В. А. Способы изготовления вакцины против гемофилезного полисерозита поросят // Описание изобретения к авторскому свидетельству Б и 957472 А. — 1980.

147. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Федотов В. Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / Под ред. М. А. Сидорова. — М.: Колос, 1995.-319 с.

148. Сидоров М. А., Соколова Н. А. Плазмиды колициногенности и патогенности эшерихий // Ветеринария. — 1982. № 2. - С. 32-35.

149. Сипотницкий М. В. Преобразующие белки — иммуногенные компоненты ветеринарных вакцин // Ветеринария. 1996. - № 4. — С. 19-24.

150. Сиротинина Н. Д. Факторы, предрасполагающие к возникновению желудочно-кишечных заболеваний поросят: Бюлл. ВНИИ эксперим. ветеринарии. 1982. - № 46. - С. 67-69.

151. Скородумов Д. И. Критерии дифференциации гемофильных бактерий, патогенных для свиней // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных. М., 1995. - С. 106-109.

152. Скородумов Д. И., Костенко Т. С. Методы хранения культур Н. рагаБШБ и А. р1еигорпеитошае в лабораторных условиях // Современные аспекты диагностики, профилактики и лечения инфекционных и инвазионных болезней животных. М., 1998. - С. 6-8.

153. Слинько В. Г. Борьба с сальмонеллезом свиней в специализированном хозяйстве // Ветеринария. 1981- - № 7. - С. 35-36.

154. Собко А. И., Гладенко И. Н. Справочник по болезням свиней. -Киев: Урожай, 1981.-232 с.

155. Соболев Н. М. Эпизоотология, этиология и диагностика колиэнгеротоксемии свиней // Ветеринария. 1987. - № 12. - С. 28-30.

156. Соколова Н. А., Евглевская Н. И., Курашвили Т. К. и др. Адгезивные антигены и энтеротоксины эшерихий, патогенных для молодняка сельскохозяйственных животных // Ветеринария. — 1989. № 5 . -С. 33-35.

157. Соколова Н. А., Курашвили Т. К. Полиадгезивные штаммы Е. coli, выделенные от новорожденных поросят // Ветеринария. — 1992. № 1. — С. 29-31.

158. Студенцов К. П. Заразные болезни сельскохозяйственных животных. Алма-Ата: Кайнар, 1972. - 172 с.

159. Ступак М. К. Гастроэнтерит и отечная болезнь поросят // Ветеринария. 1985. - № 9. - С. 33-35.

160. Субботин В. В., Сидоров М. А. Профилактика желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных с симптомокомплексом диарей // Ветеринария. 2001. - № 4. - С. 3-7.

161. Сурнев Д. С. Усовершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур: Автореф. дис. . канд. вет. наук. — Владимир, 2000. — 29 с.

162. Сухарев Ю. С. Гипериммунная сыворотка к энтеротоксинам Е. coli // Ветеринария. 1994. - № 8. - С. 32-36.

163. Тарасенок Н. И. Гемофилезный полисерозит поросят // Свиноводство. 1983. - № 3. - С. 28.

164. Тарасенок Н. И. Длительность сохранения возбудителя гемофилезного полисерозита поросят в патологическом материале // Ветеринария. 1986. - № 8. - С. 71.

165. Тарасенок Н. И. Изучение возбудителя гемофилезного полисерозита поросят // Ветеринария. 1989. - № 11. — С. 36-39.

166. Тарасенок Н. И. Носительство возбудителя гемофилезного полисерозита у свиней // Ветеринария. 1982. - № 6. - С. 67-68.

167. Тарасенок Н. И. Питательная среда для бактерий рода Haemophilus // Ветеринария. 1982. - № 10. - С. 62-63.

168. Тарасенок Н. И., Голиков А. В. Антибиотики при гемофилезном полисерозите поросят // Ветеринария. — 1983. № 6. — С. 35-36.

169. Тарасенок Н. И., Сидоров М. А., Голиков А. В. Выявление капсулы у Haemophilus parasuis // Ветеринария. 1981. - № 10. - С. 62.

170. Тарасенок Н. И., Сидоров М. А., Голиков А. В., Чернецкий В. М. Сывороточный иммунитет против гемофилезного полисерозита поросят: Докл. ВАСХНИЛ. 1982. - № 1. - С. 32-33.

171. Тельнов С. Н. Состояние кишечного микробиоценоза и резистентности организма поросят-отъемышей при колиэнтеротоксемии и методы их коррекции: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Краснодар, 2002. — 18 с.

172. Терехов В. И. Проблемы острых кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных и пути их решения // Актуальные проблемыболезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. — Воронеж, 2002. С. 48-51.

173. Тетерев И. И. Изучение резистентности эшерихий к иммунным сывороткам // Ветеринария. 1988. - № 12. - С. 33-35.

174. Толкач Н. Г. Иммуноморфогенез у поросят, вакцинированных против колибактериоза // Актуальные вопросы патологоанатомической диагностике болезней животных: Мат. VIII Всесоюз. конф. Львов, 1982. — С. 195-196.

175. Толкач Н. Г. Иммуноморфологические реакции у 5- и 15-дневных поросят при вакцинации их против колибактериоза // Актуальные вопросы патологоанатомической диагностике болезней животных: Мат. VIII Всесоюз. конф. Львов, 1982. - С. 249-252.

176. Томилов А. В., Расколов В. П. Влияние санитарно-гигиенических условий на сохранность и продуктивность свиней // Ветеринария. — 1990. № 6.-С. 16-17.

177. Тришкина Е. Т. Выделение эшерихий от мертво рожденных поросят // Ветеринария. 1982. - № 4. - С. 66-68.

178. Тугаринов О. А. Колибактериоз телят и ягнят // Инфекционные болезни животных: Справочник. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 204-207.

179. Тугаринов О. А. Средства и методы специфической профилактики, лечения и диагностики эшерихиоза животных: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Москва, 1999. - 45 с.

180. Тугаринов О. А., Малахов Ю. А., Исхакова Т. И. Иммунизация поросят против колибактериоза // Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов: Тез. докл. Всеросс. науч. конф. Москва, 1991. - С. 195-197.

181. Тукшаитов Р. X. Математическая обработка экспериментального материала на программируемых микрокалькуляторах типа «Электроника» — МК-56 // Методические рекомендации. М., 1984. — 28 с.

182. Тукшаитов Р. X., Недзвецкая Э. А. Контроль погрешности методов лабораторного анализа // Ветеринария. 1993. - № 7. - С. 26-27.

183. Тукшаитов Р. X., Недзвецкая Э. А., Зайнашева Г. Н. Способ обеспечения достоверности показателей крови // Ветеринария. — 1999. № 10.- С. 37-40.1

184. Улендеев А. И., Хайруллин И. Н. Вакцинопрофилактика отечной болезни поросят // Новое в краевой патологии сельскохозяйственных животных и птиц: Сбор. науч. трудов. — Ульяновск, 1986. — С. 9-13.

185. Урбан В. П., Кавенькин Н. А., Ефремов М. П. Эпизоотическая вспышка гемофилезного полисерозита свиней в комплексе // Ленинградский ветеринарных институт: Сбор. науч. трудов. 1988. - Т. 95. — С. 99-103.

186. Урбан В. П., Наймалов И. Л. Болезни молодняка в промышленном животноводстве. — Москва: Колос, 1984. 207 с.

187. Урбан В. П., Шнур В. И. Инфекционные болезни в промышленном свиноводстве и система профилактических мероприятий // Ветеринарные проблемы промышленного животноводства: Тез. докл. республ. науч.-прак. конф. 1985. - Ч. 1. - С. 81-82.

188. Хабаров А. К. Оптимизация состава питательных сред для культивирования гемофильных бактерий // Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее: Мат. межд. науч.-прак. конф Щелково, 2004. — С. 6970.

189. Хмелевская Г. В., Девтерева Л. В., Яговнин Э. А. и др. Факторы патогенности некоторых условно-патогенных бактерий, вызывающих диареи // Микробиология, эпидемиология и иммунология. — 1990. № 4. — С. 97-102.

190. Цымбол Г. Л., Кабанков Ю. С., Драгомир А. В. Профилактика гастроэнтерита поросят-сосунов и отъемышей // Ветеринария. 1986. - № 6. -С. 33-34.

191. Чернов А. В. Научно-практическая конференция по вопросам профилактики болезней и лечения молодняка // Ветеринария. 1985. - № 7. -С. 79.

192. Шапошникова Е. К. Пастереллез в свиноводческом хозяйстве промышленного типа // Ветеринария. 1989. - № 9. - С. 41.

193. Шапошникова Е. К. Этиология, вакцинопрофилактика пастереллеза свиней // Совершенствование методов государственногоконтроля ветеринарных препаратов: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. — Москва, 1991.-С. 158-159.

194. Шахов А. Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-прак. конф. — Воронеж, 2002. С. 3-8.

195. Шесточенко М. А., Таранова Л. А., Костенко В. И. и др. Профилактика инфекционных болезней молодняка. — М: Колос, 1983. 207 с.

196. Школьников Е. Э., Коломнина Г. Ф., Скородумов Д. И. и др. Получение сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней // Научные основы ветеринарных биологических препаратов: Мат. межд. науч.-прак. конф. Щелково, 2003. - С. 129-132.

197. Эльц К., Мейер X., Штейнбах Г. В. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных. — М.: Колос, 1977. — 288 с.

198. Ястребов А. С., Бычковский А. А., Бычковский А. М. Об иммуногенной активности инактивированной вакцины против вирусных гастроэнтеритов и колибактериоза поросят // Ветеринарная наука производству. Минск, 1993. - № 31. - С. 22-23.

199. Ястребов А. С., Мирская Т. А., Белянко Л. В., Бычковский А. М. Изучение эпизоотической ситуации по вирусным гастроэнтеритам свиней в хозяйствах республики // Ветеринарная наука производству. — Минск, 1989. -№27.-С. 3-6.

200. Abaracon D., Mesqita I. A., Sallua S., Perez Rama R. Emulsificante montanide 888 para la preparación de vacuna antiaflosa con adjuvante oleoso // Bol. Centro Panamer. Fiebre Añosa. 1982. - № 45-46. - P. 51-53.

201. Ahrens Т. A., Panuchkiangkrai W. Effects of Escherichia coli heat-stable enterotoxin, atropine, Clonidine, and morphine on choride efflux from isolated enterocytes // Am. J. veter. Res. 1985. - V. 46. - № 10. - P. 2067-2071.

202. Anon. New approaches to an old problem // Pig Farmg. — 1984. — V. 14.-№6.-P. 26-32.

203. Awad-Masalmeh M. Zur Vorcommen des K-88 antigens bei enteropathogenen E. coli // Wein. tier. Mschr. 1983 - Bd. 70. - № 4. - S. 122128.

204. Awad-Masalmeh M., Willinger H. Untersuchungen zur Prophylaxe der Odemkankheit des Absetzferkels // Wein. tier. Mschr. 1987. - Bd. 74. - № 12.-S. 422-426.

205. Awad-Masalmeh M., Willinger H., Sameister H., Krispel F. Zur Immunoprophilaxe der durch enyeropathogene E. coli bedinten Krankheiten der Absetzferkel // Wein. tier. Mschr. 11985. - Bd. 72. - № 10. - S. 290-296.

206. Bagowsky W. Die Odemkankheit ihre Ursacke, Vorbeugung und Behandlung // Schwerneproduzent. - 1985. - Bd. 16. - № 4. - S. 71-73.

207. Ballarini G. Alimentazion e patologia da svezzamento nol maiale // Rev. Suinc.-1987.-V. 28.-№5.-P. 41-46.

208. Berlin B. S. Chemical and biological properties of Arlacel A // Ann. Allg. 1963. - V. 21. - P. 82-90.

209. Bertschinger H., Jucker H., Pfirter H. Orale Vakzination von Ferkeln gegen Colienterotoxamia mit einer Streptomycin Deoendenz — Revertante von Escherichia coli // Schweiz. Arch. Tierheilk. - 1984. - Bd. 126. - № 10. - S. 497509.

210. Blask L., Francis M. J., Nicholls M. J. Protecting young domesticated animals from infectious disease // Veter. Am. Bristol. 1985. - № 25. - P. 46-61.

211. Bollwahn W. Bestandskrankheiten in Ferelzeugerbetrieben // Dt. Veter. Ges. Kongr. 1987. - № 17. - S. 152-165.

212. Branq B., de Lafaire P. Nouveaux adjuvants pour vaccines huileux. — Paris: SEPPIC, 1986.-7 p.

213. Cieslicki M. Einsatz von Porcimune / coli zur Kontrolle der E. coli -Diarrhoe in Ferkelerzeugerbetrieben // Prakt. Tierarzt. 1989. - Bd. 70. - № 8. - S. 29-34.

214. Ciosek D., Osek J. Ocena lekoopornosci szezepow Escherichia coli izolowanych z roznych from kolibakteriozy swin // Med. weter. 1984 - V. 40. -№ 6.-P. 335-338.

215. De Mello P. A. The use of oil-adjuvanted foot and mouth disease vaccine in edemic areas // Bol. Centro Panamer. Fiebre Aftosa. 1982. - № 45-46. -P. 33-42.

216. Djonne B. K. Colicin resistance in relation to pathogenicity factors in strains of Escherichia coli isolated from the intestinal tract of piglets // Act. veter. scand.- 1986.-V. 27.-№ l.-P. 115-123.

217. Dobrescu L. New biological effect of edema disease principle (Escherichia coli neurotoxin) and its use as an in vitro assay for this toxin // Am. J. veter. Res. - 1983. - V. 44. - № 1. - P. 31-34.

218. Dougan G., Morrisey P. Moleccular analysis of the virulence determinants of Enterotoxigenic E. coli isolated from domestic animals. Applications from vaccine development // Vet. Microbial. 1985. - V. 10. - № 3. -P. 241-257.

219. Dziaba K., Szunkiewiez Z. et al. Proba doustnego uodporniania swin przeciwko kolibakteriozie w warunkach terenowch // Med. weter. — 1984. Bd. 40. - № 8. - S. 455-457.

220. Eich K. O., Schmidt U. Handbuch Schweihekrankheiten. — Frankfurt (Mein): Verlags Union Agrar, 1998. 272 s.

221. Frost P., Lance E. M. The relation of lymphocyte trapping to the mode of action of adjuvants // Ciba Found. Symp. 1973. - V. 18. - P. 24-45.

222. Garabal J.I., Gonzalez E. A., Vazquez F., Blanco J., Blanco M. Toxigenic Escherichia coli in spanish piggeries from 1986 to 1991 // Veter. microbiol. 1995. -№ 47 (1-2). - P. 17-35.

223. Guizzardi F., Sandri G., Quintavalla F. La polisierosite infective del suine // Riv. Suinic. 1982. -V. 23. - № 6. - P. 31-34.

224. Hardegree M. C., Pittman M. Influence of antigens on release of free fatty acids from Arlacel A (mannide monooleate) // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. — 1967.-V. 123.-P. 179-182.

225. Hilton Girao Nogueira Raimundo, Reis Ronaldo, Eustaquio Coelho Humberto et al. Diagnostica Clinico e Anatomo-Patologico da Doenca Edematosa do Svino em Minas Gérais, Brazil // Arg. Esc. vet. Univ. fed. Minas Gérais. — 1981. V. 33. - № 2-P. 217-221.

226. Hoblet K. H., Kohler E. M., Saif L. J. Study of porcine post-weaning diarrhea involving K88 (-) hemolytic Escherichia coli // Am. J. veter. Res. 1986. -V. 47.-№9.-P. 1910-1912.

227. Hoffman W. Prophylaxe infektiöser Diarrhoen bei der Kalbermast und aufzucht // Bericht / Dt. Vet. Ges. Kong. - 1987. - № 17. - S. 137-150.

228. Holm A. Zinkoxid tilsat doderet til forebyggelse af E. coli-betinget fravaenningsdiarre // Hyol. Tidsskr. Svinet. 1989. - V. 11. - № 1. - P. 42-48.

229. Huller E., Gottschaidt J., Drexler S. Anwendung des Immunoblots zur Differenzierung von Heamophilus parasuis // Tierarztl. Umsch. 1999. — Bd. 54. -№ 6.-S. 331-335.

230. Imberechts H., Bertschinger H. U., Stamm M., Sydler T., Pohl P. et al. Prevalence of Fl07 fimbria on Escherichia coli isolated from pigs with oedema disease or post-weaning diarrhoea // Veter. microbiol. 1994. - № 40 (3-4). - P. 219-230.

231. Jorsal S. E., Johansen M., Ahrens F., Baekbo P. Odemsyde i danske svinebesaetninder 1994-1998 // Dansk. Veter. tidsskrift. 2000. - V. 83. - № 2. -P. 6-11.

232. Kielstein P., Methling W., Seyfarth D., Keller A. Zur Bedeutung der Glasserscheu Krankheit in Schweinebe-sstanden // Arch, exper. Veter. Med. -1986. Bd. 40. - № 2. - S. 170-182.

233. Leman A. D. et al. Diseases of swine. Ames, Jowa, 1992. - 1021 p.

234. Marr G. Postweaning scours // Pig Fermer. 1987. — V. 21. - № 7. -P. 22-23.

235. Matejic Milanka, Knezevic Milijana, Valter D. Angiopatije i patomorfoloske manifestacije u CNS- u kod edemske bolesti svinja // Vet. glas. — 1980. V. 34. - № 4. - P. 393-398.

236. Nabuurs M. J. A., Zijderveld F. G., Roelofs A. Clinical and microbiological field studies on digestive tract disorders of piglets around the time of weaning. — Beretaing fra Statens husdyrbrugsfersog, 1985. — P. 304-310.

237. Nielsen J. N., Armstrong C. H., Turek J. J., Nielsen N. C. Etiologic studies on late-term swine abortion // J. Vet. Diagn. Invest. 1989. - V. 1. — P. 160-164.

238. Pedrosa M., Talavera A. Immunofluorescencia directa para el diagnotico de E. coli cepas K88 + y K99 + en cerdos diarreicos // Rev. Salud. Anim. 1983. - V. 5. - № 3. p. 503-508.

239. Prohaszka L. Antibacterial mechanism of volatile fatty acids in the intestinal tract of pigs against Escherichia coli // Zbl. Veter. Med. B. 1986. - V. 33.-№3.-P. 166-173.

240. Rautianinen E. Odeemataudin yleisyys Vaasan laanissa. The distribution of edema disease in the western part of Finland // Suomen Elainlaakarilehti. 1993. - V. 99. - № 3. p. 227-231.

241. Riising H. Prevention of Glassers disease though immunity to Haemophilus parasuis // Zbl. Feterinarmed. 1981. - V. 28. - № 8. - P. 630-638.

242. Rubies X., Kielstein P., Riera P., Artigas C., Espuna E., Costa L. Prevalence of Haemophilus parasuis serovars isolated in Spain from 1993 to 1997 // Veter. Microbiol. 1999. - V. 66. - № 3. - P. 245-248.

243. Saif L. J., Wesley R. D. Transmissible gastroenteritis and porcine respiratory Coronavirus //Diseases of swine. Ames, Jowa,1999. — P. 295-325.

244. Sheffield F. Use of animals in the quality control of vaccines // Roy. Soc. Med. 1978. -V. 71. - № 9. - P. 677-681.

245. Smart N. L., Miniats O. P., Mac Jnnes J. I. Analysis of Haemophilus parasuis isolates from southern Ontario swine by restriction endonuclease fingerprinting // Canad. J. veter. Res. 1988. - V. 52. - № 3. - P. 319-324.

246. Solano-Aguilar G., Pijoan C., Rapp-Gabrielson V. et al. Protective role of maternal antibodies against Haemophilus parasuis infection // Vet. Res. -1999.-V. 60. -№ 1.-P. 81-87.

247. Stone H. D. Hescastle disease oil emulsion vaccines prepared with animal, vegetable, and synthetic iols // Avian Dis. 1997. - V. 41. - P. 591-597.

248. Turk J., Turk M., Fales W. et al. Summary of porcine respiratory disease diagnoses at the Missouri Veterinary Medical Diagnostic Laboratory for the year 1984-1986 // Vet. Diagn. Invest. 1989. - V. 1. - P. 183-184.

249. Wust A. R. Diarrhea de los lechones por colibacilosis // Gac. Veter. — 1983. -V. 45. -№ 381.-P. 601-613.

250. Zijderveid F. G., van Nabuurs M. J. A., Ham L. P. et al. The ELISA as a diagnostic tool for the detection of enterotoxigenic strain of E. coli (etec) in pig faces. Proceedings, 1984. - P. 80.

Информация о работе

Фокин, Александр Александрович
кандидата ветеринарных наук
Казань, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы