Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Визуализация комплексов белок-белок в цитохром Р-450-содержащих системах

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кузнецов, Вадим Юрьевич

Часть 1. Введение Часть 2. Обзор литературы.

Глава 2.1. Молекулярная организация систем цитохромов Р450.

2.1.1. Система цитохрома Р450 cam.

2.1.2. Система цитохрома Р450 2В

2.1.3. Система цитохрома Р450 see

2.1.4. Цитохром Р450 52АЗ

Глава 2.2. Метод сканирующей зондовой микроскопии. Приложение к биообъектам.

2.2.1. Общие принципы.

2.2.2. Сканирующая туннельная микроскопия.

2.2.3. Атомно-силовая микроскопия. Контактный режим АСМ Полуконтактный режим АСМ

2.2.4. Иглы-зонды для СЗМ

2.2.5. Применение методов СЗМ для визуализации биообъектов Часть 3. Экспериментальная часть.

Глава 3.1. Материалы и методы.

Глава 3.2. Результаты и их обсуждение.

3.2.1. Визуализация молекул методом сканирующей туннельной микроскопии.

3.2.2. Визуализация молекул и их комплексов методом атомно-силовой микроскопии.

Система цитохрома Р450 cam Система цитохрома Р450 2В4 Система цитохрома Р450 see Цитохром Р450 52АЗ Часть 4. Выводы Часть 5. Список литературы Благодарности

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

Р450 - цитохром Р d-2B4 - полноразмерный цитохром Р450 2В4 t-2B4 - трункированный цитохром Р450 2В d-Fp - полноразмерная NADPH-зависимая цитохром Р450-редуктаза t-Fp - трункированная NADPH-зависимая цитохром Р450-редуктаза d-b5 - полноразмерный цитохром Ь t-b5-трункированный цитохром Ь

P450scc -цитохром P450scc

Ad - адренодоксин

AdR - адренодоксин-редуктаза

P450cam -цитохром P450cam

Pd - путидаредоксин

PdR - путидаредоксин-редуктаза

52АЗ - цитохром Р450 52АЗ d-52A3 - полноразмерный цитохром Р450 52АЗ t-52A3 - трункированный цитохром Р450 52АЗ

FAD - флавинадениндинуклеотид

FMN - флавинмононуклеотид

NADPH - никотинамиддинуклеотидфосфат восстановленный

NADH - никотинамиддинуклеотид восстановленный

АСМ - атомно-силовая микроскопия

ВОПГ-высокоориентированный пиролитический графит

РСА - рентгено-структурный анализ

СЗМ - сканирующая зондовая микроскопия

СТМ - сканирующая туннельная микроскопия

ТРИС - трис(гидроксиметил)аминометан

ЯМР - ядерно-магнитный резонанс

ЧАСТЬ 1.ВВЕДЕНИЕ

Актуальность

Введение Диссертация по биологии, на тему "Визуализация комплексов белок-белок в цитохром Р-450-содержащих системах"

По своей локализации относительно цитоплазматической мембраны монооксигеназные системы цитохрома Р450 делятся на три типа. К первому типу относятся монооксигеназные системы, целиком состоящие из водорастворимых цитозольных белков. Типичным представителем данной группы является цитохром Р450 101 (Р-450сат) из бактерий Pseudomonas putida. Этот фермент взаимодействует с путидаредоксином (Pd), а тот, в свою очередь, с путидаредоксин-редуктазой (PdR) (Gunzalus, 1969, Gunzalus etal, 1971).

Другим типом организации белков редокс-партнёров в системе Р-450 является микросомальная монооксигеназная система. В этом случае все три белка, участвующие в переносе электрона, локализованы в мембране и имеют соответствующие участки связывания в своей структуре. Цитохром Р-450 2В4 - типичный представитель такого типа систем. Вместе с ним в систему входят NADPH-специфический флавопротеин (Fp) и цитохром Ь5 (Ь5) (Archakov et al., 1973, Archakov et al„ 1979).

Промежуточный тип организации системы представлен митохондриальной гидроксилазной системой. Два белка этой системы -адренодоксин редуктаза (AdR) и адренодоксин (Ad) находятся в матриксе митохондрий, третий белок системы - цитохром Р450 11А1 (P450scc) встроен в мембрану (Sato and Omura, 1978).

При функционировании систем всех трёх типов происходит взаимодействие белков друг с другом, приводящее к образованию комплексов; при этом происходит межбелковый перенос электронов. Поэтому ключевым вопросом в описании этого процесса является характеристика межбелковых взаимодействий. В настоящее время процесс взаимодействия описывается двумя моделями. Согласно одной из них, перенос электрона происходит так называемым «шаттл»-механизмом (Vickery, 1997, Schwarz, 1999). По другим представлениям, между белками цитохром Р450-содержащих систем происходит образование двойных и тройных комплексов (Archakov et al., 1973, Archakov et al., 1974, Archakov et al., 1975). Формирование двойных комплексов между молекулами системы цитохрома Р450 показано методом ЯМР (Mueller, et al., 2001), аналитической гель-фильтрации (Nickerson and Wong, 1997), изотермической титрационной колориметрии (Aoki et al., 1998), методом тушения флуоресценции (Silgar et al., 1974), сдвига спинового равновесия (Sligar, 1975, Davies, 1990) и атомно-силовой микроскопии (Kiselyova et al., 1999) (здесь и далее под двойными и тройными комплексами подразумеваются такие, что состоят из двух и трёх различных молекул, соответственно). Кроме этого, подобные комплексы проявляют себя при использовании метода оптического биосенсора (Ivanov et al., 1997, Ivanov et al., 1999a, Ivanov et al., 19996, Ivanov et al., 2000, Ivanov et al., 2001a, Ivanov et al., 20016).

Однако большинство методов, с помощью которых исследовалось комплексообразование этих белков, можно считать в той или иной степени косвенными. Так, измерение сдвига спинового равновесия железа гемовой группы может не зарегистрировать комплекс, если этого сдвига не произойдёт (Иванов, 2000, Радюк и др., 1983). Методы модификации белка, как химические, так и генно-инженерные, также могут предоставлять неточные данные из-за сопутствующих модификации изменений характеристик комплексообразования белков. Метод оптического биосенсора выделяется в этом ряду, так как позволяет в реальном времени регистрировать комплексообразование немодифицированных биообъектов. Однако сам по себе, не подкреплённый данными, полученными альтернативными методиками, он не может претендовать на абсолютную достоверность. Особенно остро этот вопрос стоит в том случае, когда необходимо обнаружить в системе цитохрома Р450 многобелковые комплексы, в частности, тройные. Поэтому методика, позволяющая визуализировать комплексы между белками без модификации последних, является ценным вкладом в разработку механизма действия этой системы.

К сожалению, не удаётся получить достаточно данных о структуре комплексов методами ядерного магнитного резонанса и рентгено-структурного анализа. Это связано как со сложностью получения кристаллов комплексов, особенно для молекул, имеющих гидрофобные трансмембранные домены, так и с их большими размерами, что затрудняет анализ методом ЯМР.

В 80-х годах был разработан новый метод получения изображения поверхностей с высоким разрешением - сканирующая зондовая микроскопия (Binnig and Rohrer, 1982а, Binnig and Rohrer, 19826). Его физической основой является регистрация взаимодействия между исследуемым объектом и острием сканирующей его иглы. Регистрируемое взаимодействие может носить различный характер: электростатическое, магнитное и т.д. Важной особенностью метода является отсутствие какой-либо обработки образца перед измерением, как то: замораживание, напыление плёнок и т.д., что сделало возможным визуализировать молекулы, находящиеся в растворе. Оказались успешными попытки получить методом зондовой микроскопии изображения комплексов различных биомолекул (Muller, 1997, Мои, 1996, Scheuring, 2002).

В представленной работе использовались различные методы зондовой микроскопии: туннельная микроскопия - для визуализации отдельных молекул, а атомно-силовая микроскопия - для визуализации как индивидуальных молекул, так и их комплексов, образующихся в различных цитохром Р450-содержащих системах, включающих в себя как мембранные, так и водорастворимые белки.

Цель работы

Визуализировать и определить размеры молекул редокс-партнёров и их комплексов в растворимой (Р450сат), мембранной (Р450 2В4) и смешанной (Р450всс) цитохром Р450- содержащих монооксигеназных системах.

Задачи работы

1. Провести экспериментальный подбор необходимых условий для иммобилизации молекул растворимой Р450сат-, мембранной Р450 2В4- и смешанной Р450зсс -содержащих монооксигеназных систем цитохрома Р450 на твёрдых поверхностях подложек сканирующих зондовых микроскопов.

2. Визуализировать и определить в выбранных условиях размеры изолированных молекул, входящих в состав Р450-содержащих монооксигеназных систем методами сканирующей зондовой микроскопии.

3. Визуализировать, определить размер и оценить состав комплексов, образуемых молекулами Р450-содержащих монооксигеназных систем с помощью метода сканирующей зондовой микроскопии.

Научная новизна

В ходе выполнения работы получены изображения и измерены типичные размеры молекул, входящих в состав следующих цитохром Р450-содержащих систем: в Р450сат-содержащей системе - Р450сат, Pd, PdR; в Р4502В4-содержащей - d-2B4, d-Fp, d-b5, в P450scc-содержащей - P450scc, Ad, AdR, а также изображения d-52A3 и t-52A3.

Получены изображения двойных комплексов между редокс-партнёрами в этих системах. В водорастворимой системе цитохрома Р450сат получены изображения P450cam/Pd, Pd/PdR и P450cam/PdR комплексов, в мембранной системе цитохрома Р450 2В4 визуализированы комплексы d-2B4/d-Fp и d-2B4/d-b5, в смешанной системе цитохрома P450scc визуализированы комплексы Ad/AdR, Ad/scc и AdR/scc.

Получены изображения тройных комплексов состава PdR/Pd/P450cam с водорастворимой системе и d-Fp/d-2B4/d-b5 в мембранной системе.

Научно-практическая ценность работы

Разработана методика визуализации двойных и тройных комплексов белков в водорастворимой, мембранной и смешанной системах цитохрома Р450 на примерах систем P450cam, Р4502В4, P450scc. Данная методика может быть использована для визуализации многобелковых комплексов в других системах.

Получены изображения тройных комплексов между белками цитохром Р450-содержащих систем (в водорастворимой Р450сат-содержащей и в мембранной Р450 2В4-содержащей). Показана согласованность данных по образованию комплексов, полученных методами атомно-силовой микроскопии и оптического биосенсора, что повышает достоверность как каждого из этих методов в отдельности, так и позволяет использовать их комплексно, в том числе для решения задач функциональной протеомики, диагностики заболеваний, мониторинга состояния окружающей среды и т.п.

Предложена модель для оценки состава комплексов между молекулами на основании измерений методом АСМ.

Полученные в работе результаты важны для понимания механизма функционирования Р450 2В4-, Р450сат- и P450scc-содержащих систем.

Разработанные белковые микрополя для АСМ позволяют создать систему визуализации нескольких типов комплексов на одной поверхности малой площади. Это создает основы для создания диагностикума, позволяющего детектировать спектр маркеров заболеваний с высокой специфичностью, чувствительностью (на уровне нескольких молекул на образец), при этом требуется малое количество образца (микролитры) и время измерения (минуты).

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены на 11-ой международной конференции по цитохрому Р450 (Сендай, 1999), на международной конференции «От последовательности к функции: исследования суперсемейства Р450» (Москва, 2000), на 13-ом международном симпозиуме «Микросомы и окисление лекарств» (Стреза, Италия, 2000), на 12-ой международной конференции по цитохрому Р450 (Франция, 2001), на симпозиуме «Nano and Giga Challenges in Microelectronics Research and opportunities in Russia» (Москва, 2002).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы две статьи:

AFM study of membrane proteins, cytochrome P450 2B4, and NADPH-cytochrome P450 reductase and their complex formation". Olga I. Kiselyova, Igor V. Yaminsky, Yuri D. Ivanov, Irina P. Kanaeva, Vadim Yu. Kuznetsov, and Alexander I. Archakov Archives of Biochemistry and Biophysics, 1999, Vol. 371, No. 1, November 1, pp. 1-7,

Atomic force microscopy detection of molecular complexes in multiprotein P450cam-containing monooxygenase system", Vadim Yu. Kuznetsov, Yuri D. Ivanov, Victor A. Bykov, Sergey A. Saunin, Igor A. Fedorov, Sergey V. Lemeshko, Hui Bon Hoa, and Alexander I. Archakov, Proteomics, 2002, issue 12, vol. 2, pp. 1510-1517.

ЧАСТЬ 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 2.1. Молекулярная организация систем цитохромов Р450.

Монооксигеназная система цитохрома Р-450, как сейчас известно, широко распространена в природе. Этот фермент, являясь монооксигеназой внешнего типа, участвует в гидроксилировании большого числа различных соединений. Среди последних есть как экзогенные, так и эндогенные субстраты. В первом случае роль монооксигеназной системы заключается в придании ксенобиотикам большей гидрофильности для облегчения их вывода из организма. Во втором своём качестве цитохром Р-450 выступает, например, при синтезе стероидов (Archakov, Bachmanova, 1990).

В общем случае монооксигеназная система цитохрома Р-450 состоит из трех белков. Это гем-содержащий цитохром Р-450, передающий на него электрон железосодержащий белок и FAD-содержащая редуктаза, участвующая в окислении NADH (NADPH) (т.н. тип I). В случае микросомальных систем (тип II) система состоит из двух белков, редуктаза содержит FAD и FMN и передает электрон непосредственно на Р450. Выделен также (из Bacillus megaterium) уникальный цитохром Р-450вм-з> в котором два участка одной полипептидной цепи являются гемовым и флавиновым доменами (Ruetting et al., 1989, Gunsalus and Sligar 1978) (тип III).

Несмотря на огромное число известных изоформ, ферменты суперсемейства цитохрома Р-450 проявляют сходство во многих своих свойствах, что позволяет их классифицировать на основании общих мотивов в аминокислотной последовательности (Lisitsa, 2001). Известно три типа устройства монооксигеназных систем. Одной из древних в эволюционном отношении считается система цитохрома Р-450сат, выделенная из бактерий Pseudomonas putida. Её образуют три белка -сам Р-450сат, путидаредоксин (Pd) и NADH-путидаредоксин-редуктаза (PdR). Все три молекулы являются цитозольными белками и потому растворимы в воде.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Кузнецов, Вадим Юрьевич

Выводы

1. Выбраны условия иммобилизации белков водорастворимой Р450сапл-содержащей, мембранной Р450 2В4-содержащей и смешанной цитохром Р450БСС-Содержащей систем.

2. Показано, что метод АСМ позволяет различать изображения мономеров и агрегатов белковых молекул. Определены размеры молекул водорастворимых и мембранных цитохром Р450-содержащих систем: P450cam-, Р450 2В4- и Р450зсс-содержащих.

3. Показано, что метод АСМ позволяет различать двойные комплексы молекул редокс-партнеров от мономеров и тройные комплексы от двойных. Методом АСМ визуализированы двойные комплексы состава Pd/PdR, P450cam/PdR и P450cam/Pd, двойные комплексы d-2B4/d-Fp и d-2B4/d-b5, двойные комплексы AdR/Scc, Ad/Scc и Ad/AdR. Визуализированы тройные комплексы PdR/Pd/P450cam водорастворимой Р450сат-системы и d-Fp/d-2B4/d-b5 мембранной Р4502В4-системы цитохрома Р450.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кузнецов, Вадим Юрьевич, Москва

1. Андропов A.A., Электрохимия, 1976, Москва, Наука.

2. Ахрем A.A., Шкуматов В.М., Чащин В.П., Выделение основных компонентов стероидгидроксилирующей системы из митохондрий коры надпочечника быка. Биоорганическая химия 1977, т.З, с. 780-786.

3. Ахрем A.A., Лапко А.Г., Лапко В.Н., Морозова Л.А, Репин В.А., Тищенко И.В., и Чащин В.Л., Аминокислотная последовательность адренодоксина из митохондрий надпочечника свиньи, Биоорганическая химия, 1978, т.4., с. 462-475.

4. Быков Виктор Александрович, диссертация на соискание ученой степени доктора технических наук, НИИ физических проблем им. Лукина, Москва, 2000.

5. Галлямов Марат Олегович, Сканирующая зондовая микроскопия нуклеиновых кислот и тонких органических пленок, диссертация на соискание ученой степени кандидата физ-мат наук, МГУ, 1999

6. Гоголинский К.В., Кудрявцева В.И., Новиков C.B., Решетов В.Н, «Применение атомно-силовой микроскопии для исследования микроструктуры твердых сплавов на основе карбида вольфрама», Москва, МИФИ, 1996

7. Данилов А.И,, "Сканирующая туннельная и атомно-силовая микроскопия в электрохимии поверхности", Успехи химии, стр. 818, т. 64, 1995.

8. Дерягин Б.В., Чураев Н.В., Муллер В.М., Поверхностные силы, М., Наука, 1985, глава 4.

9. Иванов Ю.Д., Мониторинг образования и распада комплексов водорастворимого и мембранных цитохромов Р450 с их редокс-партнерами в реальном времени, диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук, 2000.

10. Канаева И.П., Скоцеляс Е.Д., Кузнецова Г.П., Антонова Г.И., Бачманова Г.И., Арчаков А.И. Реконструкция мембранной монооксигеназной содержащей цитохром Р450 системы печени с помощью детергента в растворе // Биохимия,- 1985.-Т. 50,- С. 1382-1387.

11. Карузина И.И., Бачманова Г.И., Ментгазетдинов Д.Э. Выделение и свойства цитохрома Р450 из микросом печени кроликов // Биохимия. -1979.-Т. 44.-С. 1044-1057.

12. Радюк В.Г., Шкуматов В.М., Чащин В.Л., Ахрем A.A. Анализ белок-белковых взаимодействий в полной по ферментному составу Холестерингидроксилирующей системе. // Биохимия.-1982- Т. 47.-С. 1792-1800.

13. Степанова Н.В., роль цитохрома Ь5 в микросомальной монооксигеназной системе печени, реконструированной в растворе, диссертация канд. биол. наук, Москва, 1996.

14. Усанов С.А., Пикулева И.А., Чащин В.Л., и Ахрем A.A. Селективная химическая модификация холестерин-гидроксилирующего цитохрома Р450 из митохондрий коры надпочечников тетранитрометаном// Биорганическая химия,- 1984.-Т. 10.-С. 32-45.

15. Усанов С.А., Чащин В.Л., и Ахрем A.A. Взаимодействие холестерингидроксилирующего цитохрома Р450 с цитохромом Ь5// Биохимия,-1989 Т. 54,- С. 472-486.

16. Усанов С.А., Турко И.В., Чащин В.Л.,Ахрем A.A. Ковалентно сшитый, функционально активный комплекс холестерингидроксилирующего цитохрома Р450 с адренодоксином // Доклады АН СССР. -1985.-Т.280.-С.-1487-1492

17. Усанов С.А., Турко И.В., Чащин В.Л.,Ахрем A.A. Молекулярная организация редуктазного комплекса митохондрий коры надпочечников. Исследование с помощью бифункциональных реагентов.// Биоорг.химия.-1986.-Т.12.-С. 185-194

18. Фёдоров Е.А., Панов В.И., Лукашев Е.П., Кононенко A.A., Савинов С.В Чернавский Д.С., Кислов В.В., Сканирующая туннельнаямикроскопия монослойных ленгмюровских плёнок пупрурных мембран галобактерий, Биологические мембраны, 1994, т. 11,2, 189-208

19. Цупрун В.П., Мясоедова К.Н., Берндт П, Зограф 0., Черняк В.Я. Арчаков А.И., Скулачев В.П. Гексамерная организация цитохрома Р450, изолированного из микросом печени./ Докл. АН СССР.-1985,- Т. 285.-С. 1496-1499А

20. Allison DP, Thompson JR, Jacobson KB, Warmack RJ, Ferrell TL Scanning tunneling microscopy and spectroscopy of plasmid DNA Scanning Mi erase 1990 Sep;4(3):517-22

21. Aoki M., Ishimuri K., Morishima I. NMR studies of Putidaredoxin: associations of Putidaredoxin with NADPH -Putidaredoxin Reductase cytochrome P450 cam.// Biochem. Biophys Acta.-1998.-Vol. 1386,N l.-P. 168178 (6)

22. Aoki M., Ishimuri K., Fykada M., Takahashi K., Mori Shimo I. Isotermal Titration Colometric Stadies on the association at Putidaredoxin to NADPH Putidaredoxin Reductase and P450 cam.// Biochem. Biophys Acta.-1998 -Vol. 1384, N1,- P. 180-188 (в).

23. Archakov A.I. and Bachmanova G.P., Cytochrome P450 and active oxygen. 1990, Taylor and Francis, NY.

24. Archakov A.L, Bachmanova G.I., Karuzina 1.1., Mengazetdinov D.E. The properties of cytochrome P450 and hydroxylase activity of reconstituted proteoliposomal membranes. II Acta Biol. Med. Germ.-1979 Vol. 38 .- P. 299-306.

25. Archakov A.I., Karyakin A.V., Skulachev V.P, Intermembrane electron transfer in mitochondrial and microsomal systems, FEBS Lett., 1974, v.39, 239-242.

26. Archakov A.I., Karyakin A.V., Skulachev VP. , Intermembrane electron transfer in absence of added water-soluble carriers, Biochem. Biophys. Acta, 1974, 408, 93-100

27. Archakov A.I., Karyakin A.V., Skulachev VP. A hypothesis on membranous proteins specialized in lateral transport. // FEBS Lett,-1975.- Vol. 60,- P. 244-246.(b)

28. Backstrom D., Ingelman-Sundberg M., Ehrenberg A. Oxidation -reduction potential of soluble and membrane bound rabbit liver microsomal cytochrome P450LM2//Acta Chem. Scand.-1983 Ser.B, Vol. 37.-P. 891-894.

29. Bayburt, T.H., Carlson, J.W., and Sligar, S.G. (1998) Journal of Structural Biology 123, 37-44

30. Bayburt T., Sligar S., 2002, Single-molecule height measurements of microsomal cytochrome P450 in nanometer-scale phospholipid bilayer disks PNAS, v.99, no. 10, 6725-6730

31. Bayburt T., Carlson G., Sligar S., Reconstitution and imaging of a membrane protein in a nanometer-size phospholipid bilayer, J. Struct. Biol., 1998, 123, 37-44

32. Bemhard R., KrafL R., Ruckpaul K. A simple determination of the sideness of the NH-terminus in the membrane bound cytochrome P450 LM2// Biochem. lntemat-1988.-Vol. 17,-P. 1143-1150.

33. Berhhardt, R. 1996, Cytochrome P450: structure, function and generation of active oxygen species. Rev. Phys. Biochem. Pharmacol. 127, 137-221

34. Binnig G., Rohrer H., Gerber C. and Wiebel E., Surface studies by scanning tunnel microscopy. Phys. Rev. Lett., 1982, 49, 57-63.

35. Binnig G., Rohrer H., Scanning tunneling microscopy, Helv. Phys. Acta, 1982, v. 55,pp.726-735.

36. Binnig G., Quate C., Gerber Ch., Atomic force microscpoe, Phys. Rev. Lett., 56 (9), 930-933, 1986

37. Bolshakova A.V., Kiselyova O.I., FilonovA.S., Frolova O.Yu., Lyubchenko Y.L., Yaminsky I.V. Comparative Studies of Bacteria with Atomic Force Microscopy Operating in Different Modes. Ultramicroscopy, 2001, v.68, p. 121.

38. Black S.D., Coon MJ. Structural features of liver microsomal NADPH-cytochrome P450 reductase. Hydrophobic domain and connection region, J.Biol. Chem.-1982,- Vol 257.-P. 5929-5936

39. Black S., Coon MJ. Studies on the identity of the heme-binding cysteinyl residue in rabbit liver microsomal cytochrome P450 isozyme Biochem. Biophys. Res. Commun.-1985.-Vol. 128.- P. 82-89.

40. Bloomfield A., Condensation of DNA by multivalent cations: Consideration on mechanism // Biopolymers, -1991, v. 31, - pp. 1471-1481.

41. Bradshaw W.H., H. E. Conrad, E. J. Corey, and I. C. Gunsalus, J. Am. Chem. Soc, 1959, 81, 5507.

42. Brown GM, Allison DP, Warmack RJ, Jacobson KB, Larimer FW, Woychik RP, Carder WL Electrochemically induced adsorption of radiolabeled DNA on gold and HOPG substrates for STM investigations Ultramicroscopy 1991 Dec;38(3-4):253

43. Budashov I.A., Kurochkin I.N., Tsibezov V.V., Kalnov S.L., Denisov A.K., Kiselyova O.I., Yaminsky I.V. Structural and Functional Properties of Langmuir Films from Antibodies based on Amphiphilic Polyelectrolytes // in press

44. Butt H.T, Guckenberger R., Rabe I.P. Quantitative scanning tunneling microscopy and scanning force microscopy of organic materials. Ultramicroscopy -1992.- Vol. 46 P. 375-393.

45. Chashchin V.L., Adamovich t.b. Lapko V.N., Kuprina N.S., and Akhrem A.A., Primary structure of cholesterol-hydrolylating cytochrome P450 from bovine adrenocortical mitochondria, Doklady AN SSSR, 283, 1510-1512

46. Clement F., Lapra A., Bokobza L,, Monnerie L., Menez P., Atomic force microscopy investigation of filled elastomers and comparison with transmission electron microscopy application to silica-filled silicone elastomers, Polymer, 2001, 42, 5259-6270

47. Coon M.I, Chiang Y.L., French J.S. Chemical characterization of enzymes involved in drug metabolism. //The induction of drug metabolism / edited by R.W. Estabrook, E. Lindenlaub,- Stuttgart, New York: F.K. SchatlanerVerlag, 1979.-P. 201-211.

48. Cushman D.W., Tsai R.L. and Gunsalus I.C., The ferroprotein component of a methylene hydroxylase, Biochem, Biophys. Res. Commun., 1964, 26,577-583

49. Chiang Y., Coon M., Comparative study of two highly purified forms of liver microsomal cytochrome P450: Circular dichroism and other properties. // Arch. Biochem.Biophys.-1979.-Vol. 195.-P. 178-187.

50. Chu, T-W., Kimura T. Studies on adrenal steroid hydroxylases//J.Biol. Chem.-1973.-Vol. 248.- P. 5183-5189.(a)

51. Chu W, Kimura T. Studies on adrenal steroid hydroxylases. Molecular and catalytic properties of adrenodoxin reductase J. Biol. Chem -1973.-Vol. 248 P. 2089-2094.(6)

52. Chudaev M.V., Gilep A.A., Usanov S.A., Site-Directed Mutagenesis of Cytochrome b5 for studies of its interaction with Cytochrome P450., Biokhimia, v. 66, 2001D

53. Davies M.D., Qin L., Beck L., Suslik KS., Koda H., Horiuchi T., Sligar S.G. Putidaredoxin reduction of cytochrome P450cam dependence electron transfer on the identity ofputidaredoxin's C-terminal ammoid.//J. Am. Chem. Soc.-1990.-Vol. 112,- P. 7396-7398.

54. Davydov D.R., Knyushko T V., Kanaeva I.P., Koen Y.M., Samenkova N.F., Archakov A.I., G.Hui Bon Hoa, Inteactions of cytochrome P450 2B4 with NADPH-cytochrome P450 reductase studied by fluorescent probe, Biochimie, 1996, 78, 734-743

55. Degtyarenko KN. and Kulikova T.A., Biochem. Soc. Trans (2001) 29, 139-147 (Printed in Great Britain) Evolution of bioinorganic motifs in P450-containing systems.

56. Dignam I.D., Strobel.W. NADPH-cytochrome reductase from rat liver: purification by affinity chromatografy and characterization // Biochem,-1977 Vol. 26- P. 1116-1123.

57. Djuricic D., Hill H.A.O., Kenneth K.-W., L.-L. Wong, A scanning tunneling microscopy (STM) investigation of complex formation between cytochrome P450cam and putidaredoxin, J.lnorg.Biochem., 2002, v.88, 362367

58. Drygin Yu.F., Bordunova O.A., Gallyamov M.O., Yaminsky I V. Atomic Force Microscopy Examination of Tobacco Mosaic Virus and Virion RNA. FEBS Lett., 1998, v.425, p.217E

59. Edstrom R.D., Meinke M.H., Yang X., Yang R, Elings V., Evans D.F., Direct visualisation of phosphorilase-phosphorilase kinase complexes by scanning tunneling microscopy. Biophys. J., 1990, v. 58, pp. 1437-1448

60. Elkady A.S., Alexeev A., Sebyakin Y., Gallyamov M., Moskovotsov A., Bischoff G., Zhdanov R. and Khokhlov A., DNA Supramolecular complexes. SPM-2002 Proceedings, p. 181

61. Estabrook R.W., Werringloer J., The microsomal enzyme system responsible for the oxidative metabolism of many drugs. The induction of drug metabolism., Estabrook R.W., Lindenlaub E., eds. Stuttgart - N.Y., Schattauer F.K. Verlag, 1979, pp. 187-199F

62. Galazka, M., Keil L.B., Kohles, J.D., Li J., Kelty S.P., Petersheim M., and DeBari V.A., 1998, A stable, multi subunit complex of beta2glycoprotein J. Thromb. Res., 90 (3), 131-137

63. Gunsalus I.C. and Sligar S.G., Oxygen reduction by the P-450 monooxygenase systems, Adv, Enzymol., 1978, 47, 1-44

64. Garcia R., Garcia N. Electron conductance in organic chains: why are STM experiments possible on bare biological samples?// Chem. Phys. Lett.-1990,-Vol. 173. P. 44-50.

65. Garcia R., Saenz 11, SolertM., Garcia N. Tunneling current through localized surface states// Sur. Sci.-1987,-Vol. 181- P. 69-77.

66. Garcia R., Tamayo T., Soler M., Bustamante C. Physical parameters that control imaging of purple membranes with scanning tunneling microscope //Langmuir.-1995.-Vol. 11 ,N6. P. 2109-2114.

67. Givargizov E.I., Stepanova A.N., Mashkova E.S., MolchanovA., F.Shi, P.Hudec, and I.W. Rangelow, Ultrasharp diamond-coated silicon tips for scanning probe devices, Microelectronic Engineering, 1998, 41\42, 499502

68. Geren K., Tula I., O'Brien P., Millett F., Peterson Y.A. The involvment of carboxylate groups of putidaredoxin reductase// J. Biol. Chem-1986.-Vol. 261,- P. 15491-15495.

69. Gibson G.G., Tamburini P.P. Spin equilibrium of purified cytochrome P450. Effect of substrate and histidine modification // Biochemistry, Biophysics and Regulation of cytochrome P450,-Amsterdam,1980,- P. 133-136.(6)

70. Gum R., Strobe! H.W. Purified NADPH-cytochrome P450 reductase. Interaction with hepatic microsomes and phospholipid vesicles. //J. Biol. Chem. 1979,-Vol. 254 P. 4177^185.

71. Gum R., Strobel H.W. Isolation of the membrane-binding peptide of NADPH -cytochrome P450 reductase. //J. Biol. Chem.-1981.-Vol. 256.-p. 7478-7486.

72. Gunsalus I.C. A soluble methylene hydrolase system: structure and role of cytochrome P450 iron suitor protein components. // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.-1969.-Vol. 349 P. 1610-1613.

73. Gunsalus I.C, Tyson C.A., Tsai R., Lipscomb S.D. P450cam hydroxylase: substrate-effector and electron transport reactions // Chcm.-Biol. lnteract.-1971.-Vol. 4 P. 75-78.

74. Gunsalus I.C. and Sligar S.G., Oxygen reduction by the P-450 monooxygenase systems, Adv, Enzymol., 1978, 47, 1-44

75. Gunsalus I.C., and Wagner G.C., Bacterial P-450cam methylene monooxygenaze components: cytochrome m, putidaredoxin and putidaredoxin reductase. Methods Enzymology, 1978, 52, 166-188.

76. Gunsalus I.C., J.R. Meeks, J.D. Lipscomb, p. Debrunner, and E. Munck, in "Molecular Mechanisms of Oxygen Activation" (O. Hayaishi, ed.), Academic Press, New York, 1974

77. Guckenberger R, Heim M., Cevc G., Knapp H.F. Wiegrabe W., Hllebrand A, Scanning tunneling microscopy of insulators and biological specimens based on lateral conductivity of ultrathin water films, Science 1994, v. 266, 1538-1541

78. Guryev O.L., Dubrovsky T.B., Chemogolov A.A., Dubrovskaya S B., Nicolini C., Usanov S.A., Langmuir-Blodgett films of cytochrome P450scc and its complex with adrenodoxin, Biochemistry, Moscow, 1997, 6, 641-647H

79. Hamaker H.C., Physica, 1937, v.4, 1058

80. Hansma, P.K., V.B. Elings, O. Marti and C.E. Bracker. 1988 Scanning tunneling microscopy and atomic force microscopy: some applications to biology and technology, "Science", 242, 209-216

81. Hansma H.G., Revenko I., Kim K., and Laney D.E., Atomic force microscopy of long and short double-stranded, single-stranded and triple-stranded nucleic acids // Nucleic Acids Research, -1996, v. 24, - No 4, - pp. 713-720

82. Haniu M., Armes L.G., Yasunobi K.T., Shastry B.A. and Gunsalus I.C., Amino acid sequence of the Pseudomonas putida cytochrome P-450, parts I and II, J. Biol. Chem., 1982, 257, 12657-12667

83. Hanukoglu, I., 1992, Steroidogenic enzymes structure, function and role in regulation of steroid hormone biosynthesis. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 43, 779-804,

84. Haussling, L., Michel, B., Ringsdorf, H. And Rohrer, H. A new class of thiolipods for the attachment of lipid bilayers on gold surfaces. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 569-572.

85. Hara T., Koba C., Takeshima M., and Sagara Y., Evidence for the cluster model of mitochondrial steroid hydroxylase system derived from dissotiation constants of the complex between adrenodoxin reductase and adrenodoxin, BBRC, 2000, 276, 210-215

86. Hara T., Kimura T., Active complex between Adrenodoxin Reducatse and Adrenodoxin in the Cytochrome P450scc Recuction reaction, J.Biochem., 1989, 105, 601-605

87. Hara T., Takeshima M., Conclusive evidence of a quaternary cluster model for cholesterol side chain cleavage reaction catlized by cytochrome P450scc, Cytochrome P450 8th international conference, 1994, pp.417-420

88. Harting M., Chi L.F., Liu X.D., Fuchs H., Dependence of the measured monolayer height on applied forces in scanning probe microscopy, Thin Solid Films, 1998, 262-267

89. Hedegaard J. and I.C. Gunsalus, J. Biol. Chem, 1965, 240, 4038 Heinemann F.S., Ozols J. The complete amino acid sequence of fenobarbital induced liver microsomal cytochrome P450II J. Biol. Chem.-1983.-Vol. 258,- P. 4195-4201.

90. Heinzelmann, H., Grutter, P., Meyer, E., Hidber. H., Rosenthaler R., Rinnger M., Guntherdot H.-J., Design of an atomic force microscope and first results, Surface Sciencr, 189-190, 29-35, 1987

91. Henger, M., Wagner, P. and Semenza, G. Ultralarge atomically flat template-stripped Au surfaces for scanning probe microscopy. Serf. Sci. 1993, 291, 39-46

92. Hegner, M., Wagner, P. And Semenza G. Immobilizing DNA on gold via Thiol modification for atomic force microscopy imaging in buffer solutions. FEBS Lett., 1993, 336, 452-456

93. Higo M, Kamata S Inelastic electron tunneling spectroscopic study of biological compounds in human sweat adsorbed on alumina Anal Chem 1994 Mar 15;66(6):818-23

94. Hiavica P. On the function of cytochrome P450-dependent oxygenase system II Arch. Biochem. Biophys- 1984.- Vol. 22, N 2,- P. 600-608.

95. Jansson I., Schenkman IB. Studies on three microsomal transfer enzyms systems. //Arch. Biochem. Biophys -1977.-Vol. 178.- P. 89-107.K

96. Karrash S., Dolder. M., Hoh. J., Schabert. F., Ramsden J., and Engel A, Biophys J., 1993, 65, 2437-2446

97. Kawato S., J.Gut, R.J. Cherry, K.H. Winterhalter, and C.Richard, Rotation of cytochrome P-450, J.Biological Chemistry, 1982, v.257, no.12, 7023-7029

98. Kido T and Kimura T The formation of binary and ternary complexes of cytochrome P450scc with adrenodoxin and adrenodoxin reducatse-adrenodoxin complex, J. Biological Chemistry, 1979, v. 254, no 23, 11806118150

99. Kiselyova O.I., I.V.Yaminsky, E.M.Karger, O.Yu.Frolova, Y.L.Dorokhov, and J.G.Atabekov, Visualization by atomic force microscopy of tobacco mosaic virus mouvement protein-RNA complexes formed in vitro, J.General Virology, 2001, 82, 1503-1508

100. Kiselyova O.I., Yaminsky I.V. Scanning Probe Microscopy of Proteins and Protein Membrane Complexes. Coll. J., 1999, v.61, p.1

101. Kolesanova EF, Kozin SA, Rumyantsev AB, Jung C, Hoa GH, Archakov Al Epitope mapping of cytochrome P450cam (CYP101) Arch Biochem Biophys 1997 May 15;341(2):229-37A

102. Kondo K, Tajima S., Sato R., Narita K. Primary structure of the membrane-binding segment of rabbit cytochrome b5. //J Biochem (Tokyo). -1979,-Vol. 86:-P. 1119-1128

103. Koga, H., Rauchfoss, B., and Gunsalus, I.C. P-450cam gene cloning znd expression in Pseudomonas putida and E. Coli, Biochem. Biophys. Res. Commen., 1985,130,412-417

104. A.Y., Levin W., Kuntzman R. Reconstituted liver microsomal enzym system that hydroxylates of drugs, other foreign compounds and endogenous substrates. Effect of detergents. Biochem. Biophys. Res. Commun.-1974.-Vol. 60.-P. 266-272.(a)

105. A.Y., West S.B., Vore D., Levin W. Role of cytochrome b5 in hydroxylation by a reconstituted cytochrome P450-containing system. // J.Biol. Chem.-1974.-Vol. 249.-P. 6701-6709.(b)M

106. Masai J, Shibata T, Kagawa Y, Kondo S Imaging of subunit complexes of thermophilic bacterium H(+)-ATPase with scanning tunneling microscopy Ultramicroscopy 1992 Jul;42-44 (Pt B): 1194-9.

107. McCellend G.M., Erlandsson R., Chiang S., Atomic force microscopy: general principles and new implementation, In Rev. Prog.in Quant Non-Destrc.Eval., 6, 1307, 1987

108. Medalia O., Englander J., Guckenberger R., Sperling J., AFM imaging in solution of protein-DNA complexes formed on DNA anchored to a golg surface, Ultramicroscopy, 2001, 90, 103-112

109. Meyer T., U.Matthey, F.Henzen, P.Dimroth, D.J.Muller, The central plug in the reconstitued undecameric c cylinder of a bacterial ATP syntase consists of phospholipids, FEBS, 2001, 505, 353-356

110. Michel B., Travaglini G., Rohrer H., Soachim C., Amrein M. Images of cristalline alkanes obtained with scanning tunneling microscopy// Zeitschrift fur Physic B.-1989.- Vol. 76,- P. 99-105.

111. MicicM., I.Benitez, M.Ruano, M.Mavers, M.Jeremic, K.Radotic, V.Moy, R.M.Leblanc, Probing the lignin nanomechanical properties and lignin-lignin interactions using the atomic force microscopy, Chem.Phys.Lett., 2001, 347, 41-45

112. Miwa G.T., West S.B., Huang M.T., and Lu AY., 1979, J. Biol. Chem., 254, 5695-5700, French J.S., Guengerich F.P., and Coon M.J., 1980, J. Biol. Chem, 255, 4112-4119

113. Moller C., M.Allen, V.EIings, A.Engel, D.Muller, Tapping mode atomic force microscopy produces faithful high-resolution images of protein surfaces, Biophys.J., 1999, v.77, pp. 1150-1158

114. Mou, J., Sheng, S.(J.), Ho, R., and Shao, Z. (1996) Biophysical J. 71, 2213-2221

115. Mou J., D.M.Czajkowsky, S.(J.)Sheng, R.Ho, Z.Shao, High resolution surface structure of E.coli GroES oligomer by atomic force microscopy, FEBS Lett., 1996, 381, 161-164 6.

116. Mueller, J. J., Lapko, A., Bourenkov, G., Ruckpaul, K., Heinemann, U.: Adrenodoxin Reductase-Adrenodoxin Complex Structure Suggests Electron Transfer Path in Steroid Biosynthesis. J.Biol.Chem.276 pp .2786 (2001)

117. Mueller, E.J., Loida, P.J., and Sligar, S.G. (1995) In Ortiz de Montellano.P.R. (ed.), "Cytochrome P-450: Structure, Mechanism and Biochemistry. Plenum Press, New York, pp. 83-124.

118. Muller, A, Muller, J. J., Muller, Y. A, Uhlmann, H., Bernhardt, R., Heinemann, U.: New aspects of electron transfer revealed by the crystal structure of a truncated bovine adrenodoxin, Adx(4-108). Structure 6 pp. 269 (1998)

119. Muller D.J., A.Engel, J.L.Carascosa, M.Velez, The bacteriophage cp29 head-tail connector imaged at highresolution with the atomic force microscope in buffer solution The EMBO J., 1997, v. 16., no 10, pp.2547-2553

120. Muller D.J., D.Fotiadis, S.Scheuring, S.A.Muller, and A.Engel, Electrostatically balanced subnanometer imaging of biological specimens by atomic force microscopy, Biophys J., 1999, v.76, 1101-1111

121. Murray R.L, Gunsalus I.C. and Dus K.M., Active site studies of cytochrome P-450cam. I. Specific cysteine labeling -with the affinity reagent isobronyl bromacetate as a model for substrate binding, J. Biol. Chem., 1982, 257, 12513-12525.N

122. Nakamura K., Hoirinchi, Yasukochi T., Sekimi K., Heta T., Significant contribution ofarginine-112 and its positive charge Pseudomonas putida cytochrome P-450cam in the electron transport from putidaredoxin. // Biophys.Biochem. Acta.-1994.- p. 40-48.

123. Nadler, S.G., and Strobel, H.W., 1991, ABB, 290, 277-284, Shimizu, T., Tateishi T., HatanoM., and Fujii-Kuriyama Y., 1991, J. Biol. Chem., 266, 3372-3375

124. Nanci A., Wuest D., Peru L., Brunet P., Sharma V., Zalzaz S., McKeem A. Chemical modification of titanium surfaces for covalent attachment of biological molecules. J Biomed Mater Res, 1998 May, 40:2, 324-35

125. Neubauer, G., Cohen., S.R., McClelland., G.M., Measurement of micromechanical properties using a bidirectional atomic force microscope with capacitative detection, Math.res.Soc.Symp.Prot., 153, 307-316 (1989)

126. Nickerson D.-P. and L.-L.Wong, The dimerization of Pseudomonas putidia cytochrome P450cam: practical consequences and engineering of monomeric enzyme. Protein Engineering, 1997, vol. 10, no. 12, pp. 13571361.

127. Nicolini C., M.Adami, T.Dubrovsky, V.Erokhin, P.Facci, P.Paschkevitsch, M.Sartore, High-sesitivity biosensor based on LB technology and nanogravimetry, Sensors and Acuators B, 24-25, 1995, 121128

128. Nisimoto Y., Otsuka-Murakami. Cytochrome b5, cytochrome c, and cytochrome P-450 interactions with NADPH-cytochrome P-450 reductase in phospholipid vesicles. // Biochemistry-1988-Vol.27, N 16.-P.5869-5876.O

129. Omura T., Takesue S. A new method for simultaneous purification of cytochrome b5 and NADH-cytochrome b5 reductase from rat liver microsomes //J. Biochem, Vol. 67,249-257.

130. Omura T., Sato R. The carbon monoxide binding pigment of liver microsomes. 1.Evidence for its hemoprotein nature. 2.Solubilization, purification and properties // J.Biol.Chem.-1964.- Vol. 239.- P. 2370-2385.

131. Orme Johnson NR., Light D.R., White-Stevens R.W., Orme-Johnson W.H. Steroid binding properties of beef adrenal cortical cytochrome P450. Which catalyses the conversion of cholesterol into pregnenolone// J. Biol. Chem.-1979.-Vol. 254.- P. 2103-2111

132. Ozols, Stritmatter P. The amino acid sequence of cytochrome b5.//J. Biol. Chem.-1968.- Vol. 243,- P. 3367-3375.P

133. Pernecky S.J., Larson J R., Philpot R.M., and Coon M.J., 1993, PNAS, 90, 2651-2655

134. Peterson J Camphor binding by Pseudomonas Putida cytochrome P450 Archives of Biochemistry and Biophysics, 1971, 144, 678-687

135. Petratos S, Hirst JJ, Mendis S, Anikijenko P, Walker DW. Localization of p450scc and 5alpha-reductase type-2 in the cerebellum of fetal and newborn sheep Brain Res Dev Brain Res 2000 Sep 30;123(1):81-6

136. Philippsen A., A.Engel, T.Schirmer, B.Roux, D.J.Muller, Imaging the electrostatic potential of transmembrane channels, atomic probe microscopy of OmpF-porin, Biophys J., 2002, v.82, 1667-1676

137. Pochapsky T.C., Lyons T.A., Kazanis S., Arakaki T., Ratnaswamy. A structure-bassed model for cytochrome P450cam-putidaredoxin interactions.//Biochemie-1996.-Vol. 78.-P 723-733 .

138. Poulos T.L., Perez M. and Wagner G.G., Preliminary crystallographic data on cytochrome P-450cam, J. Biol. Chem., 1982, 257, 10427-10429

139. Poulos T.L., Finzel B.C., Gunsalus I.C, Wagner G.G. and Kraut G., The 2.6-A crystal structure of Pseudomonas putida cytochrome P-450, J. Biol. Chem., 1985, 260,16122-16130

140. Poulos TL., Finzel B.C., Howard A.J., Crystal structure of substratefree Pseudomonas putida cytochrome P-450. Biochemistry, 1986, 25, 53145322

141. Poulos T.L., Finzel B.C., Howard A.J., High-resolution crystal structure of cytochrome P-450cam. J. Mol. Biol., 1987, 195, 687-700R

142. Rabke-Clemmer, C.E., Leavitt, A.J. and Beebe, T.P., Jr. Analysis of functionalized DNA adsorption on Au(111) using electron spectroscopy. Langmuir 10, 1994, 1796-1800.

143. Raiteri R., M. Grattarola, H.-J. Butt, P. Skladal, Micromechanical cantilever-based biosensors, Sensors and Actuators B, 2001, 115-126

144. Rekesh D, Lyubchenko Y, Shiyakhtenko LS, Lindsay SM Scanning tunneling microscopy of mercapto-hexyl-oligonucleotides attached to gold Biophys J 1996 Aug;71(2): 1079-86.

145. Roome P.W., Peterson tA. The oxidation of reduced putidaredoxin reductase by oxydized putidaredoxin // Arch. Biochem. Biophys.-1988.- Vol. 266, P. 41-50.

146. Ruetting R., Wen L.-P. and Fulco A.J., Coding nucleotide, 5'regulatory and deducted ammo acid sequences of P-450bm3, a single peptide cytochrome P-450 NADPH-P 4 50 reductase from Bacillus megaterium, J. Biol. Chem., 1989, v. 264, pp. 10987-10995.

147. Rheinwald J.G., A. M. Chakrabarty, and I. C. Gunsalus, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S., 885, (1973).

148. Roome P.V., Philley J.C. and Peterson J.A., Purification and properties of Putidaredoxin-reductase, J. Biol. Chem., 1983, 258, 2593-2598.S

149. Sato R. Distribution and physiological function.// Cytochrome P450, edited by R. Sato and T. Omura (Kodansha L.T.D.- Acad. Press, N.Y.Tokyo),-! 978.-P.23-35.

150. Sato R., Imai Y., Taniguchi H. Reaction mechanism of liver microsomal cytochrome P450 as studied by reconstituted techniques. The J induction of drug metabolism./ eds Estabrook R.W. Stuttgart, N.Y., 1979,-P.213-224.

151. Serizawa N. and Matsuoka T., A two component-type cytochrome P-450 monooxygenase system in a procaryote that catalizes hydroxilation of ML-236B to pravastatin. Biochemistry and Biophysics Acta, 1991, v. 1084, pp. 35-40

152. Sevrioukova IF, Peterson JA Biochimie 1995; 77 (7-8): 562-72 NADPH-P-450 reductase: structural and functional comparisons of the eukaryotic and prokaryotic isoforms.

153. Scheller U, Kraft R, Schroder KL, Schunck WH Generation of the soluble and functional cytosolic domain of microsomal cytochrome P450 52A3. J Biol Chem 1994 Apr 29;269(17): 12779-83

154. Scheller U., T.Zimmer, D.Becher, F.Schauer, W.-H.Schunck, oxygenation Cascade in conversion of n-alkanes to a,a-dioic acids catalyzed by cytochrome P450 52A3, J. Biological Chemistry, 1998, v. 273, n. 49, 32528-534

155. Schenkman J.B., Jasson I., Lvov Y., Rusling J.F., Boussaad S., Tao N.J., Charge-dependent sidedness of cytochrome P450 forms studied by quarz crystal microbalance and atomic force microscopy, ABB, 2001, 385(1), 78-87

156. Scheuring S., F.Reiss-Husson, A.Engel., J.-L. Rigaud, J.-L.Ranck, High-resolution AFM topographs of Rubrivivax gelatinosus light-harvesting complex LH2, The EMBO J., 2002, v.20„ 3029-3035

157. Schneider S.W., J.Larmer, R.M.henderson, H.Oberleithner, Molecular weights of individual proteins correlate with molecular volumes measured by atomic force microscopy Pflugers arch, 1998, 435, 362-267

158. Shank-Retzalaff ML., Raner G.M., Coon M.J., Sligar S.G., Membrane topology of cutochrome P450 2B4 in Langmuir-Blodgett monolayers, Arch. Biochem Biophys., 1998, 359 (1), 82-88

159. Shimizu T., Nazawa T., Hatano M., Satake H., Imai Y., Hashimoto S., Sato R., Circular dichroism spectra of purified cytochromes P-450 from rabbit liver microsomes. // Biochim. Biophys. Acta. 1979.-Vol.579. -P. 122-133.

160. Skvortsov V.S., Belkina N.V., Ivanov AS. Cytochrome P450 52A3: modeling of 3D structure and surface mutations // Molecular Simulations.-2000 V.24 - P.369-378

161. Sligar, S.G., Derbrunner, P.G., lipskomb, I.D., Namtvett, M.j., Gunsalus, i.C., Role of the putidaredoxin COOhH-terminus in P450cam hydroxilation, PNAS, 1974, v.71, 3906-3910 (a)

162. Sligar S.G., Debrunner P.G., Lipscomb ID., Gunsalus I.C. Superoxide anion production by the autooxidation of cytochrome P-450cam.// Biochem. Biophys. Res. Commun., -1974-, Vol.61, P.290-296 (b).

163. Spatz L., Strittmatter P. A 6)rm of cytochrome b5 that contain on additional hydrophobic sequence of 40 amino acid residues // Proc. Natl. Acad. Sci. (USA).-1971.- Vol. 68.- P. 1042-1046.

164. Spong, K., Mizes H.A., LaComb Jr. L.T, Dovek M.M., Frommer E., Foster IS. Contrast mechanism for resolving organic molecules with tunneling microscopy.// Nature (Lond.)-1989 Vol. 338. - P. 137-139.

165. Stayton P.S., Sligar S.G. The cytochrome P-450cam binding surface as defined by site-directed mutagenesis and electrostatic modeling. II Biochemistry -1990. Vol. 29 .- P. 7381-7386.T

166. Takagi M., Ohkuma M., Kobayashi N., Watanabe M., Yano K.; "Purification of cytochrome P-450alk from n-alkane-grown cells of Candida maltosa, and cloning and nucleotide sequencing of the encoding gene.";RL Agric. Biol. Chem. 53:2217-2226(1989)

167. Takeyasu K., H.Omote, S.Nittekadan, F.Tokumasu, A.lwamoto-Kihara, M.Futai, Molecular imaging of Escherichia coli F0F1-ATPase in reconstituted membranes using atomic force misroscopy, FEBS Lett., 1996, 392, 110-113

168. Tamburini P.P., Schenkman J.B. Differences in the mechanism of functional interaction between NADPH-cytochrome P450 reductase and its redox partners II Molecular Pharmacology -1986 Vol. 30 P. 178-185.

169. Tamburini, P.P. and Schenkman, J.B. Purification of homogenity and enzymological characterization of a functional covalent complex composed of cytochromes P450 isozyme 2 and b5 from rabbit liver.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1987-VOI.84, PI 1-15.

170. Tanaka M., Haniu M., Yasunobu K.T., Dus K. and Gunsalus I.C., The amino acid sequence of Putidaredoxin and iron-sulfur protein from pseudomonas putida, J. Biol. Chem., 1974, 249, 3689-3701

171. Tang S.L., McGhie A.G., Suna A. Molecular-resolution imaging of insulating macromolecules with the scanning tunneling microscope via a nontunneling, electric-field-induced mechanism//Phys. Rev. B,-1993,-Vol. 47.-P. 3850-3856

172. Taylor R.F., 1991, Protein immobilization, Marcal dekker, NY Thomson NH, Miles MJ, Tatham AS, Shewry PR Molecular images of cereal proteins by STM Ultramicroscopy 1992 Jul;42-44 ( Pt B): 1204-13

173. Tsai R.L., Gunsalus I.C. and Dus K., Composition and structure of camphor hydroxylase components and homology between putidaredoxin and adrenodoxin, Bioche. Biophys. Res. Commun., 1971, 45, 1300-1306

174. Tsuprun, V.L., Myasoedova K.N., Berndt P., Sograf O.N., Orlova E.V., Chernyak V.Ya., Archakov A.I., Skulachev V.P., (1985) Dokl Akad Nauk, 285, 1496-1499

175. Tsiprun V.L., K.N. Myasoedova, P.Berndt, O.N.Sograf, E.V.Orlova, V.Ya Chernyak, A.I. Archakov and V.P. Skulachev, Quaternary stucture of the liver microsomal cytochrome P450, FEBS, 1986, v.205, 35-40U

176. Uvarov VYu, YuDlvanov, AN Romanov, MOGallyamov, OIKiselyova, IVYaminsky, Scanning tunneling microscopy study of cytochrome P-450 2B4 incorporated in proteoliposomes, Biochimie, 1996, 78, 780-784

177. Uvarov V.Yu., Leshenko A.V., Rukavishnikov I.G., Dzhuzenova Ch.S., Archakov A.I. Effect of microenvironment and intermolecular cross-linking on the tertiary structure of cytochrome P450LM2 // Biokhimiya. -1988,-Vol. 53.-P. 1433-1438.(a).

178. Usanov S.A., Turko I.V., Chashchin V.L., Akhrem A.A. Cross-linking studies of steroidogenic electron transfer: Covalent complex of adrenodoxin reductase with adrenodoxin// Biochim. Biophys. Acta -1985.-Vol. 832,- P. 288-296.(6)

179. Uvarov V.Yu, Tretiakov V.E., Leshenko A.V., Rukavishnikov I.G., Dzhuzenova Ch.S., Tretiakova L.Z., Archakov A.I. Effect of microenviroment on the tertiary structure of cytochrome P450LM2; Eur. J. Biochem.-1990,-Vol. 181.-P. 391-396.V

180. Valle F., Derosc J.A., Dietier G., Kawe M., Pluckthun A., Semenza G., Imaging the native structure of the chaperone GroEL without fixation using atomic force microscopy,J.Misrosc., 2001, 203(2) 195-198

181. Vatsis K.P., Theoharides A.D., Kupfer D., Coon MJ. Hvdroxylation of prostaglandins in inducible isozymes of rabbit liver & microsomal cytochrome P450 : Participation of cytochrome b5 //J.Biol. Chem.-1982.-Vol.257. P. 1221-11229.

182. Vatsis K.P., Theoharides A.D., Kupfer D., Coon MJ. Hvdroxylation of prostaglandins in inducible isozymes of rabbit liver & microsomal cytochrome P450 : Participation of cytochrome b5 //J Biol. Chem.-1982.-Vol.257. P. 11221-11229.

183. Vermilion L., Ballon D.P., Massey V., Coon M.I Separate roles for FMN and FAD in catalysis by liver microsomal NADPH -cytochrome P450 reductase// J. Biol. Chem.-1981.- Vol.256,N 1.- P. 266-277.

184. Vijayakumar S., J.C. Salerno, Molecular modeling of 3-D structure of cytochrome P450scc, BBA, v. 1160, 281, 1992

185. Vermillion L. Coon MJ. Highly purified detergent-solubilized NADPH-cytochrome P450 reductase from phenobarbital induced rat liver microsomes.//Biochem. Biophys. Res. Commun.-1974.- Vol. 60.-P. 13151322.

186. Vickery L.E. Molecular recognition and electron transfer in mitochondrial steroid hydroxylase systems. // Steroids-1997- Vol.62.-P. 124127.

187. Voznesensky A.I., Schenkman IB. Quantitative analyses of electrostatic interactions between NADPH-cytochrome P450 reductase and cytochrome P450 reductase and cytochrome P450 enzymes //J. Boil. Chem.-1994.-Vol. 269,- P. 15724-15731.W

188. Wagner P., Immobilization strategies for biological scanning probe microscopy, FEBS Lett., 1998, 430, 112-115

189. Wang M, Roberts DL, Paschke R, Shea TM, Masters BS, Kim JJ. Three-dimensional structure of NADPH-cytochrome P450 reductase: prototype for FMN- and FAD-containing enzymes. Proc Natl Acad Sci U S A 1997 Aug 5;94(16):8411-6

190. Wagner P. , Kemen P., Hegner. M, Ungewickel E., Semenza G., Covalent anchoring of proteins onto gold-directed NHS-termmated self-assembled monolayers in aqueous buffers: SFM images of clathrin cages and triskelia.FEBS letters, 1994, v. 356, pp. 267-271

191. Wagner P, Hegner M, Kemen P, Zaugg F, Semenza G Covalent immobilization of native biomolecules onto Au(111) via N-hydroxysuccinimide ester functionalized self-assembled monolayers for scanning probe microscopy Biophys J 1996 May;70(5):2052-66.

192. Wong S.S., 1991, Chemistry of protein conjugation and Crosslinking, CRC Press, FL

193. Woodward J.T., Zasadzinski J.A.N., and Hansma P.K., Precision height measurements of freeze fracture radicals using the scanning tunneling microscope, J.Vac.Sci.Technol.B, 1991, v.9, #2, pp. 1231-1235Y

194. Yang J., ShaoZ., Ultramicroscopy, 1993, 50, 157-170

195. Yang t, Mom t, Shao Z. Structure and stability of pertussis toxin studied by in situ atomic force microscopy// FEBS Lett.-1994.- Vol. 338 -P. 8992.

196. Yasukochi, Y. And Masters, B.S.S. Some properties of a & detergent-solubilized NADPH-cytochrome c (cytochrome P450) reductase: Purified by biospecific affinity chromatography // J. Biol. Chem.-1976,- Vol. 251.-P. 5337-5344

197. Yasukochi Okada O., Hata T., Sagara Y., Sekimura., K., Hotiuchi., T, Putative punctions of phenilalanine-350 of Pseudomonas Putida cytochrome P450cam, Biochem. Biophys, Acta, 1994 , v.1204, n.1, 84-90.

198. Yaminsky I.V., Elensky V.G. Scanning probe microscopy: 1981-1997 Bibliography.Moscow, Scientific World, 1997

199. Yaminsky V.V.and Ninham B.W., The hydrophobic forces the lateral enhancement of subcritical fluctuations, Langmuir, 1993, v.9, p. 3618

200. You HX, Disley DM, Cullen DC, Lowe CR Physical adsorption of immunoglobulin G on gold studied by scanning tunnelling microscopy. Int J Biol Macromol 1994 Apr; 16(2): 87-91

201. You HX, Lin S, Lowe CR A Scanning tunnelling microscopic study of site-specifically immobilized immunoglobulin G on gold. Micron 1995; 26(4): 311-5.Z

202. Zareie MH, Borucu A, Ozden MY, Hasirci V, Imaging of liposomes by scanning tunneling microscopy Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol 1996 Sep;24(5):525-31.

203. Ziegler, G.A., Vonrhein, C., Hanukoglu, I., and Schulz, G.E., The structure of Adrenodoxin Reductase of Mitochondrial P450 Systems: Electron Transfer for Steroid Biosynthesis, JMB, 1999, 289, 981-990

204. Zimmer T., Ohkuma M., Ohta A., Takagi M., Schunck W.H.; "The CYP52 multigene family of Candida maltosa encodes functionally diverse n-alkane-inducible cytochromes P450."; Biochem. Biophys. Res. Commun. 224:784-789(1996).

205. Zhang B. and E.Wang, In situ STM study of cytochrome c adsorbed on HOPG electrode surface. Probe Microscopy, 1997, v. 1, pp. 57-641. Благодарности.

206. Выражаю благодарность сотрудникам физического факультета МГУ Ольге Игоревне Киселевой и Игорю Владимировичу Яминскому за предоставление оборудования для совместной работы и ценные советы.

207. Благодарю сотрудников ЗАО «НТ-МДТ» В.А. Быкова, С.А.Шикина, И.Шикину, С.Нестерова за предоставленное оборудование и помощь в совместной работе.

208. Благодарю сотрудников кафедры электрохимии химического факультета МГУ Олега Александровича Петрия и Галину Александровну Цирлину за любезно предоставленные оборудование и материалы, благодаря которым стало возможным выполнение работы на СТМ.

209. Благодарю фирму «Силикон-МДТ» в лице О.Савченко за предоставленные расходные материалы для работы на АСМ.

210. Выражаю глубокую признательность сотрудникам Института Физической Химии РАН Алексею Ивановичу Данилову и Елене Борисовне Молодкиной за полезные советы и предоставленное оборудование.