Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВИРУССПЕЦИФИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ РНК В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ГРИППОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "ВИРУССПЕЦИФИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ РНК В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ГРИППОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ"

ОРДШ ДНИ НА И ОГДЕНА ДРУДЫ НАРОДОВ А КАДМИЯ НАД УССР

' ОВДША 1Т7Д0В0Г0 ЮРАСЯОГО ШАГОМ ИНСИСТТ ЮЙРОБИОЛОПШ X ШУС0Л01Ш )W.A.]UatBOIOIHOrO

Be драв» рукааю!

ЧИЩОВА Ваяя Оаможиа

- Ш 578.255«444 î 616-092. 9

ШРУССПИЩИЧВСИЙ СИНТЕЗ PHI В 0РГАШ8И5 ЖВОШУХ НА рлааш: стАдаях гипосяноа *н«хда*

03,00.06 - мруо ожоги

m вммксм* учмав бяоюпчаввх мук

Ipoi - 19в7

\ „■ Работа выполнена в лаборатории обдай вирусологии Киевского яаучно-иоолвЕовательского института эпидемиологии в инфекционных болезней им Л .В .Громатевского 113 УССР;

Научный руководитель; доктор медицинеких наук, профессор V-А.Ф.Ородов ■ . ■ . ;

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Н.С.Дьяченко ■.' 1

. доктор медишноких наук

• Г.С.Скрипченко ■"/'■' ■

Ведущая организация: Институт вирусологии ям.ДЛ .Ивановского , ' > АМН СССР ■-■'■'■'

. Запита состоится г. s 930чаоов на

заседании слешалиэировакного совета Д 016.06,01 по защите; : , диссертаций на соискание.ученой степени доктора биологических наук при Институте микробиологии и вирусологии им .Д .К »Забплотного АН УССР /352143, Киев-143; ул.3айолотного,26/. ".

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института;...■ микробиологии, и вирусологии дм^.К.Забояотного АН УССР.. ;

'• АвтсгоеаЬеоат разослан 1ЭВ7 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат Оиалогичеоких ваук

Э.А .Коваленко

í

Дтагеа^ярсяр тррблэуц. , Ияогпе вирусы, шзывашие хороео . ввэеслшв осгрые яяфекпаи, прз определенкшс условиях способны к перехотевши в органа sue человека и зивотаых. В настоящее эреия яэкодлев доотаточкай фактический материал, подтверждающей зоамохаость для те лъв ого сохранения вирусе гриппа как в культуре «литох, ras ш оргазизие /В.Д.Твмаков с еоевт., ,1971; . Л.Ф. i-ролов, IS73; Д.Б.Годубев, 1976; В.А.Зуез с соавт., 1931;

' * s ■■ - . »

А.Ф.Фролоэ о соавт., 1981/. : -

а К оде ли р ose в it о я изучение хровачесвой вирусной инфекции в кдеточаюс кудьтурзх дает вогиогзость исследовать яепосрег.ст-веявый оме» клетки es воздействие вируса,;выяснить клеточные ыогавигии, вэочот которых уотэнэвгавэегся я поддерживаете я длительная персастеицня вирусе, позволяет понять аодекудярные осяова'вмянодаествзя вируса и ндетгэ, Cosдевы и изучены иодела хрсвичесгах ВБфекцзй клеточных культур, персвстеатво вв$а-цвроввнвшс представителями яракзаческз всех групп вирусов /О.Г.Ааджагарздэа о coaxx.,I9S4/* Что хе.касается возмогноот» фориаровваяя перекствнтвоЯ евфешна в организме животного вдз чеюважз, то эти даввыэ представлены ведостаточво. В полной серо ото отзосвтея я в карузу-гриппа. ;.

Еэезосгь сргиЗдецы определяется тол, что яерсвстенцвя вов-будитэяя похэт Сихь^прз навой хроничаоной формы инфекционного , зеСодевался, одяхч из фзхгоров хзмзвчэвостя я эволгвдл виру-■ сов / З.А.Зувв, X973¡ А.Ф.Срожов ocoaáT.,1978; IS3I; S.A.Sy-еэ о ооавт,, Х531{ 1,Ф.Фролов о созв*., ДОЗЗ/.

' В сзраод ствиовлэЕзя я поддзргэяая хрсаачесноА пвфвкцая йогу? ДЗИтвогзть рзздачяив иехаяяэмы. Вместе с тек тонкое «о-лекуекрш» иехавизны, позволяющие объяснить как хроначеска ян-

фасвровеквэя клетка продолжает осуществлять хзэневво аахяые функции, цока остаотоя неизвестными.

В соответствии с емепцимвся в литературе дапными

■ ■ * ■ ..

/Т.А.Стельмах, 193I; Т.А.Стелъмах о соэвт., 1981/ в персвствн-тдо лв£ацировэявоя вирусом гриппе культуре клеток ЦДСК происходит синтез взрусспепвфяческах.РЛЯ комдлемеятаряого я вз расового, типа, но этот синтез иахз уровдя, регистраруеыого прв продуктивной инфекции В'этойха системе. Одаэко, приведенные дэв-Eue ве могут поЕвосты) оОъясвгть ыодекудярзо-биохбгачеокяа особенности взаимодействия вируса гриппа с различными клеточками системами. в организме ивфооировэввих гавотньга. \

В последнее время появились'сообцеввя о говиогновтв сох- ' рэвева'я вируса гриппа.» организме.во только э тканях оргевов- -миваяей, во также г' тканях, которые счатэлись резастевтвьпш к данному возбудителю.. Ка зтот фэкт указывает результаты, подученные при ваделении вяруса гриппа из легкэх и селезевка мы- . аей через б и 7,5 месяцев после инфицироваввя «звотвых /А,Ф»вро-лов о соввт.,1981; А.И.Щербинекая, 19&*/. Тем ве менее, остается дискуссионны« волрос'о том,' где сохраняется вирус при перс летен див, в оз но таз ли репродукция его в клетках, вэпермиссвв-вых для дэнного.вирусе, я каково участие этих клегов в поддержании персистевциз. . ¡:

Все вышесказанное убеждает.в том, что проблема молекулярных механизмов персастенции вируса грапва s организме продол-', хает оставаться яеиэуадноа в требует, дальнейшего теоретическо- -... го обоснования и практических разработок. Определенную ясность в ранение этого вопросе кокет ввести установление факта присутствия функциовальвй активного гарусного геноме в организме -

хивотаого. Дваане, солучеввв в клеточных культурах» ее дзот

- " ■ ; - ■■ ■ t достаточеого лрэдстаглевпя о иоленулярвшСвзрусспецифическах

- процессах) ироисходя^зх в оргзвивмэ ¡тавотных, что обусловлено маогоМрагзен резкциь организма вв ьарусвуп инфекция» а также тем, 4TJL оостояаге клеток ^ вслеточншс кулыурэх ввачятель-ио (тлячается от ях состояв* я s условиях орган в smb. Крока тога, геветмчесгле осовеянооти организма могут контролировать оооСенаоста взакмодеСсишя вэруса я клеток я влиять вэ течение и въедливого процесса /Brinton, Kathaneoa, 1981/. Слв-

- дуе*тэкжв сгнетать, что дзя язучавиа вирусспвцифических син-

' теаов вачастув иоиодьэугтся культуры клеток, ве соответствующее типу клеток,. дорамюпяхоя вооледуеишхи вирусами в еотав-твеввнх усяовия.: ' . v..

, Цеяь росиааовеш^? изучать синтез вирус специфических РНК'в орган ива a wiisefl в вяиякяв гевагачэсквх ооойенвостай ■ кзвогных'ва течекиа гриппозной ЕНфексви, ввтевсиввость свв-. теза РШС м воаиохаосгь длательвого сохрэвеваа вируса в ткэвя раалвчяих органов.

.I.Изучение течении акгперакентэльной грэппозвоа явфек-ша у киаеа двух генетически; отгачяшс длвиЕ- вив/« в С|Д.

4 2. Иэучапге синтеза гз рус специфических ИШ в ткзви яагилх, пвчввз v свгюэвагпн виасневгв вляянвя гевотшха ки-boxsux из этот процеоо в' разычзые ором после зарагеввя ыц-ssfi* 1 ■'' ;..'..; л '.=■ . ■

3. Ивучевве оавтоза взрусскецафзчеокяэс РШС в орган вайе животвых в огдалеввые срогся вооле переяесеивой гршпоэаой явфеяцяв»- .■ - ,

■ Оояп**ы« полрхевия. выздсикае вд дататхи

Интенсивное« репродукции гарусе гриппа в ткав« легких, печени и еедезевкав содержав» в этих органах вирусояецифа- -чеогагх РНК одрвд&гяется генотипе« хивотпого: показатели репродукции вируса 9 содержание ввруоспецвфвчеокихРЯХ*М№е умышей линия вд1В/о в вехе у мышей яяввя СН* '-

В процесс» разгития гриппозной ивфвк^за у мыива а ткзгв дчгкях, печева в селезенка происходят вакопдевме вэруоспецифв-ческих РНК, определяемое нетодсм молекудярвой тябрадязвцяя. ■-.

Лооде завериевия репродукдил вирусе гриппа г органах *и-зотвых продолжается синтез вируссяо цяфзчес ках РН£, однако нв-' , хеысиввость этого процессе снивена по с равно в ип с острой ста- . . дней инфекция« ' - ' ■ г

В клетках селезевка иыией лика* вхьв/в : . чу^стввтеягвых,. к вирусу гриппа, спустя 7 месяцев после вяфвдарованвя вктоасив-коом-синтеза вврусспеявфвчесшгх РШ достигала показателей, ус-га вовлёкшее для этого органа.в острой стадзи грвлпозвоа.ввфек-мя* 1 ■ 'л'. - \ -"г

н8учя8я возизна воеЛЗЛОЕЧКУЯ..

Впервые методом молекулярной РНК-РНК гибридизации выявлены Бирусспецяфнческие РНК в оргаввзио животных.. Показано, что ввтеневваооть еявтева РНК определяется генотипоа экспервмея- ... тальвнх хаютных: у иьшей дввкв еахв/с вырахеваость синтеза выше, чем у мнЕЗй кяввв СВА. Усхавовдено, что синтез вирусепв-цдфичеоких РНК тклетках .всследОваявмх органов /легкие, печень в селезенка/ не одинаков: вострой периоде вв^екцяв содерхавве етвх РНК выше в ткави легких.'в отдаленные срока - селезенки в

печева* Похаэвва возможность присутствии в клетках селезенки иыкеВ лзваи BibB/e внрусспецифзчоскях РН2 опуотя 7 месяцев после внфивдгроваяхя ах вирусом грэппв. -

Тео-эетачео'ная 'аячппгеоть и практическая кевноетъ работе.

Рабата носит теоретический характер. Полученные данные ксгут эйьясяить некоторые w о леку лярао-бв о логически в особев-иоотн ^эаянодействиа вируса гриппа в различными ывтЕэии, рас кривая природу его сохранения в организме: постоянное присутствие, ввруоопецифкчеоквх РШС, т.е* фувкцяоналъно актива с о вя русного генома в клетках оедевенетг, объясняет механизм дероя-стенали вируса у »шкеа. - : ■■

Обнаруженное веиа яглеяие пост ода него присутствия вярув-опецифачвеких РНК иохет сдувать предпосылкой для разработка дополнительных критериев диагностики хронвчеоких заболеваний невыясненной апологии* ' -

, ^проСеедя работа, lia тара азы диссертация додоюны на Рес пубхяханехоа конференция по вирусологии /г.Одессе, 1966 г./, на ээоедавни вирусологического отдела Киевского НИИ эпндеино-логиии аафекщоввюс СолеэнеЗ /1985/ и заседании Экспертного совета Института микробиологии ж взрусоьогив им.Д.К.Заболот-вего АН УССР / 18 явая 1986 г./. V . ; *'

- • Птбтгам1т»и, По иэте раадэи дисс е г - э ср«я опубликовано 5*рв-бот, получено 2 удостоиерениааа раааовалзвг тонкое предюже-она /1986 г./ . . : ' ' ... .Л.

Обвеа » отрткттоа ояботй. Даосврташюниаа работа яадоке-ва на 147 страницах ыааавсоясного тстота, включая 8 табляц я 9 рисунков, состоит извведевяя, обаорв литературы /2_главн/,

собственных исследований /5 глава/» обсуждения результатов, выводов я списка литературы, включающего£06 ваточников отечественной и зарубеанЬЯ литературы» '

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ :

■ Материала я методы -. -, : В работе гспольэовали лэСорэтордьгй ятемм вируса гриппа А/Гонкон г/1/68/Н3Î 2/, адаптированный, к легкой мыяей. Вирус 1 провел 20 пассажей на животных, титр гемегглптвввва в оуо яевзйи ткави легких составлял 1024 ГАЗ/0,2 ил, овфекодонвзя активность - 7,5-3,0 ls 31)^/0,2 мл, 3,6-4,2 igb Д^д.

Экспериментальной моделью сдугида-мыии езняй еахв/сП ; СВА массой 12-14 г, получеввые. мэ питомника "Столбовое" А153 СССР. 2ивотвах под" легким эфирным наркозом ивтранавэльно гаража ли вирусом гриппа в дозе" ItD^-/0,05 мл. .В качестве «а-теряала для исследования использовали гквнь легких, печени в селезенка.' ■ ; " -."-. ;, -'.' Л'; *. :.Гг".—'

Инфекционную активность.вируса.определяли путем заражения логарифмическими •разведениями.15^ суспензий органов раз-гяваювдхся куриных эмбрионов. ■ " л: -,

. .эгопостйентауъяых таротрых.

РШ^выдёляли из легких, печени, я селезенки мызэй, икфзцирсвэв вше вирусом гриппа, а также животных контрольной группы. B on ределеНЕыеусдовиямизксЕЗримепгасровэ мызе Я забивали, готовили I5JS гомогенат иа ткани легких, Sí.- яа ткавв печени я - ткани селезенки и,выделяли. тотальную РНК февол-хаорсформ-. вым методом / Soherrer, uarnell, 1962/.

. ... Препараты РШС характеризовали спектрофотометр*чески при

длавах sosa 230, 260 в 280 bu на спектрофотометре СФ-26. Р»о-чат коацепгрвция РШ производила всходя вэ того, но I оцта-чезкея едаваца яра 260 вы соответствует концентрзкан 40 ыхг/ид, "1 lMtreim удо^я тртцщд. ÍJ*"JM( клеток ембряо- '

ss пачка -зобаст /5ШЖ/ промывали средой Игле без пготавива з ввосэил вирус триппэ Л/ГоанонгД/бЭ/ Н5Я2 / в концентрации 10100 SIJSjq ва клетку. После вдоорбдзя вирусе в течение 60 мая культур.» прсниваи! средой Игле я вносила ^Н-уридзв в конценг-.рвов 500 игДюрз/мл. Культуру ЗДС£ ввкубаровалп вра 37°С в те-' ченго 12 час, посла чего собирали культуральвуи жидкость в.во-пользовеяи для получения меченого вируса гриппа. .

Q^ff^Kn я ^ррд^хгз.гщд „ОД.Р.Уб.вЧ Культуральнув жидкость, о о- " ■ дерхачуя меченый гаруо гриппа, осветляли цевтряфугврованвем в концентрировала методом вдсорбдаш - элвдаа на нуривых эритроцитах* Полноту адсорбцзи ковтролвровэгп в РГА. После влецйи вируса о эрятр^цзтов, -ввруссодерхащу» тшдкооть вавланваяз на IQJS раствор сахарозы в проводила центрифугирование л течение 60 мин пра 25 ООО об/ива/ротор cw -41» центрифуга Beotoaaa ь-5-75/. Сфоравровавкайся в рзэуяьтате центрифугирования осадок вируоа суопездировади в вгз -буфере, рП 7,4 в ату суспензии использовала для ЕыдвЕэвяя- меченой эяраоннэЗ РЯХ,

.И^гчнид.ндчено*! n^tumoft РШГ. К ста ца в ой вируосодерха-дей оуспэяэгп добавляла преяаэудо копотной концентрации 200 акг/цл в додецилоульфзт натрия до ковцевтрацав После вн-кубэцав cueca пра комнатной температуре э течение 15. нвв добавляли 2-мерка моете вол до ковцевтреадш ISS в равный объем фе-' вола. Обработку фенолом 'про вода ли двеяды .по 20 шв* РНК осах- ' дала добавлеввеи этанола, осадок ресуопевдироваяи в втх-буфе-

ре, отОиради «сиввоти ахя подсчете удеивоа bktsbsoqxi полу-чеввого препарата» »

Постановка peanraw гобрятааапяя ГОС7РШС. Тоталмуп PB К, выделенную из ткавя легках, печени в "село зевка ввфацкроваввых вирусом гриппа иыаеЯ, -в такта животвых ковтродьасй груши, еле* шивали о постоянным количеством меченой ао 3Н-уридаву ввраон-вой РНК /S'IO* ямп/мяв/, После »того проводили отжиг по »моду Scholtlesek, Bott /1Э&Э/ в буфера 2 x 630 / 630 - 0,15 И наш., 0,015 If дохраг вагряя/pff 7,5/* Объем рвакцвояиоясме-' ои составляв 50 ива. После гвбрвдвээЕИИ гахдуя пробу делила пополам - опытный в кояхрольный образцы. X опытвьш обравцам * добавляли рибовукдвэзу А я янхубяроваля вое пробы в точен*« 30 мяв яря 37^С. Далее педсчвтывалз касдотоверастворвмув ра-■ дйоектвввость. . '.■■ ; V '" ■

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. ':-. • I. lapaгаериствна ввфекцвоввого процесса у кышаЯ дявяя ваьв/с я CSA при эараяевяя вирусом гриппа Д/Гоакояг/1/бЗ/н5в2 / -Первш этапом исследований явилось ввучевие течевия гриппозной явфекцня в органавие мышей двух генетически отличных ливий — виз/« м СВ4, которых относят в вязко- я васокореагв-рувлему винукодогическв типухивотвихсоотвотствевно/Р.В.Пет-ров, 1974; А.Ц.Сороюш, 1930/, а также ваясненве влиявиягено-тяпа животного на течевие яяфекциоввого щэоцесса.

Для модвяв^вавия гриппозной явфекцвя «vueta варежаля вя-руоои гриппа, адептировзвнымк ткавя легкях в дове Ххл^о * В рааочяыворокв лооле ивфвцяровамяя жияотнше аабявахя я одре-

деляги содержание вируса в тшви легких, лечена в селезенки* В peeyibiei« проведенных нее дедом вяй устеновлево, что начиная о I суток после вара мни я иипей хиная ЕИв/с , вирус гривке выявлялся го всех исследовавшее органах,' , я иа канальных татров дсстигел яэ 3 супя янфекцив. В ткани легких в era срока пв$ак4эозвЕя евтвваость его составила 8,75 is ЭДЦд» в сечаш в селезенка - 5,0 вЛЛЫг ЭЯД^д соответственно /расу

. pos i/. . ' -

В 'CÍC3B3 делах' вирус выявлялся so 10 суток в в дяльвей-сах патах иоодедовяввях выделить его us этого органа, об^эдрэ-нятад« вярусыюгячоскаиа'методам не удавалось. Накопление ва-pjrae в ткаив печени я селезенки ныией eaxb/<s происходило почга je ода вековых количествах. Определить его в указанных органах удавалось до 7 суток, посла чего вяруо вв был обваругэя ввив го во о доследугдвв срока, веследовзвиа*"

При изучении ввфекциоввого процесса j милел дивив СВА было установлено, что тавхе, как а у иищеалзитаа В ai>B/c, ьзрус грата в органах ивотных регистрировался вачивая о I оугок scene варакепия, Б »тот срок на бледен и я юарус аыековмельЕыкв яодазателяаи инфемшоввой актавностя был выделен ив селезенки в составил 3,7 le ЗЗД^, в то вреыя, как для вирусе, выдолеа-5ого яэ легких i сачэвв, ехя авачегвя шдо - 2,7 в 2,Sie ШД50 Затеи происходило свяжввие содержания вируса, гриппа в гкавя селевевки, а к 7 суткгы сорус ээтои «Гргвив во определится. В ткана печени инфекционная активность lapjcs дозтагалз хаксв-иадьиых псЕЭвателеа к З суткан /4t2 le ЕЗД^/, определялся он в eioit оргаав до 7дней от моиевтв аеревеввя /рвоувоа I/. '■'Теки cas и у иыкеН ланяи вжьв/а , лексикельвая ре про-

le

L

• i i

; - V

.....» I I I-Г"

i 3 ' s ;

Сутки -

-----1-1-

7 9

Pbc.I. Инфекционная активность вирусе гриппа А/Гоаконг/1/68 /ИЗК2 д выделенного на органа ваэ мышза i - itemt вняли bals/o i. .... , -

Б - шая давив СВА —» '. легкао

----; nr-tcai .

селезенка

дукция вируса граппв регистрировалась в легких л ого янфвкцн-онвяая вктяваость иа 3 суткз составляла 7,0 1s 3I%q. Iis'»того органа вирус изоазровала а первые 7 дней пооде иарагевяя.

Возникновение, особенности я «ход янфвкцяонвога заболевания, * коаечаои «тога, определяются ве только биологическими я фгаяко-хиыачеекиня овсСотваив возбудятеля, во в состоявшей аафякируеиоЗ свотеии. в чаотевоств, уставовлава генетическая дзгврааявровапаостьк ряду вирусных «вфекцая у человека ■ газетных, в том часяе в к вирусу гриппа / Huden»an et аЦ^бЗ, 1956; Brlntoa, Katbeaeon, 1981; Balaton, 1983/. Cyvimpja результаты проводеввых исследований полно ваюшчлть, что в данных эксперякевгзх выявлены определенные захоноыерностя течения острой стадии гриппезаоЯ явфекцая у иышей ealb/ои СВА. Отпечено более мягкое течение болезни у нашей линия СВА. Hoaj-ченвае наша данные свидетельствуют о том, что репродукция вируса гряшга различна по жнтенсввпоста в ткани геаетическа от. личных гэвотвых в активность инфекционного процесса в каждом конкретно» органе аавасит о» линейной грвяаддекноои яшией.

. Изучение синтеза варусспвциСических РНКв органах авспервыентвлъиых яЛо.твых

Далвеяшиы эталон наших веследоваваз явилось изучение синтеза ва рус с пе ц и фа чео етх РШС в екзня лепшх, печева я евлеэввш мышей живая бахс/о в СБА. Предварительно гзив было определено оптимальное когячество тотальной РШС, выделенной из легких» печена и евдезеянв яьшей, не обходи кое дляпроведеввя РНК-РНК габ-радвэацзв. Наин было уставов лево, что дчя ткан» легких содержание PKK в гибридязащюввой смеси должно составлять 250 икг, ткеви вечеви н селезенки - 350 ыкг.'В эдльвейием все исследо-

ванан'быхя проведена о этихя количествами РНК.

Отляг РШС проводи! о постоянным количеством каченоа "вя-ряоввоЯ piffi /SxIO3 вив/мян/. О содержании вирусс пе ки $а чес кя х РНК в тогалыип: препаратах РНХ, выдолеввкх от жавотных, судв-ля по ходачеству РШСаво-реввотеятных фора РШС, получениях пос-хе обработка обравовашшхоя в результате гвбрядвзацан PHK-ïHK . гибридов рвбовужлвевой А. Честь ясследованвй по молекулярной гвСрядааацаа была проведены совместно со ет.н.оотруднакоа, канд.Сиож.наук Барзч H.I. /лаборзторня субвируовых структур _ анстатута вирусологии им.Д.Я«Ив8вовокого/..

Сра о аре да лев еш вируссвецнфических рнк в ткани xerox Сило уставовлеяо,tчхо в I Сутка после ввфиаировавпя у ища а хн-вва ВА1£/е их количество составило 26,у СБА - £0,2$. 3 дольне ïboyi атя пока a ese ли повихехасъ в достигала и&кзинехьхих авачанвах 3 суткам. Уровевь вярусспеця^аческвх PES в этот период у мыяеК лвваа влхг/о Сил ревев 71%, в CEA - 52,9,5. К 5 сутках проаоходидо сввхенве синтеза ¿»х РНК, однако оодерхаяае tel ткаая легкях кыяей обеих линий вревигзло контрольные по* каавтвлл, уставозлевзыа для ткани легких ивхакхн« жавотвих /3,6$/, Эта вековоиврнооть соблюдалась us протяжевнв scsro перяода острой стадия ввфзкцви /с I со сутка после sapaxa-няя/. ' '..' .-',"ч ; -

Следуидям этапом исследовании яввлось изучение ситеаа мруоспеявфнчвскнх РШС в отдаленные ореха посла перенесенного заболевания /21-60 о утки/. Обнаружен» вхвх HIS могло опухать подтверждением величая' генетического махериоха вируса в клеххах * свидетельствовать о bosmoxhoom дхихевьяого сохранения вируса в оргенивке аявотвмх. На 21, 30 я 60 сутки после

% PHKeeo-pBíacTEHiHociH

30-

v а.

30 60

Pic. 5. Выявлеваэ sapjooceвдфз час ю«х РНК в препаратах ÏS2, выделенных la TKSB3 печев* ишпев ва .равных отедядх гритозво! явфвкцаи

заражения веки Свел выявлены вирусспецифическве РНК а дэгкжх мыкгей двух в а ученых хаялй. Следует отметать, -что содержа вив вх в этом органа превывало уровень РННаво-регистеитных форм,' которая бия определен для ткавя легких контрольной группы хявогвых. На цротягэвйо всего сроке вабдгдевая /1-60 оутка/ показатели, вяруоспецяфзчеоких РНК, устааовленвыс для гваня легких кишев виз/с ¿ада регистрируемых для'легких'мышей линии CBi

■ /рас.г/.*■ ' ■ ■ ■ ■■ '

Дс нестояща го времена нет. четких давних о вовмохности ре-продукцгв вирусе гриппа ne только'в легких, во и других органах. Для выяснения этого вопрооа нами были пров'вдевы воследо-запвя по определенно содержания вирусслецифачеоквх РКК в тка-t нв сечена в селезенки шеей, инфицированных вирусом гриппа. Полученные данные свидетельствуют о том, что в I сутки после заражения у магей линии вльв/е регистрируется 7,5% вирусспе-кафяческах РНК в гкзяв печени, в то время, как. у мышей СВА в ати сроки содерхавие втах структур составило 6,4?. Ras в для • ткзнл легких, максимальных показателей вврусспецвфяческие ЕНК достигала к 3 суткам, однако значена я hx'i&xs;' Чем в легких в составила 26,S^ у мышей еаъв/о л 20,7^ - у.СБА. Следует отметать, что в ткани печени начиная с 7 я до 60 суток содержание вврусспвци$аческлх.РН£ остается постоянным и снижается незначительно, не достигая контрольных показателей, установленных .для ткани печева внтактвых.хивотвых/рис. V. V:'

. ' ' При изучении синтеза взрусовецифических РйК,в ткана селезенки была выявлена та ' ¡те закономерность, что и для ткан* печени: содерхзнвеэтвх структур в указа в в ом органе была ви-ве, чем в легких я составило 15% для мышей влгв/е а П,6£ -для СМ . на 3 сутки гриппозной инфекции. ..."

ч

В дальнеаяем проясходвдоовалевяе содвргзвия асах структур, во овл оставалась выв» показателей контрольные* цяфр/3,83£/. Эта ааксяомервост» прослеха велась из протяжен!» всего срока ввбподепия /I-бО сутшг/. В свявя о тем, что ранее на сеяевев- . кя миява, лв^цяроваввых варусся гря псе,'била выделеву варувн ъ отдалаввне оро» пооле пвревасаявого заболаьэвая /А.и.Цер-баяокэя, 198*/» uozso предлолохзть, что в »той органе свите» варуссиепзфяческах Р£И ве дрекраязется после активной ревро-Дутаз» «ре«иг варусвых часип, т,е, воолегаввряеввя остров стзцз вяфокцловвого процессе, =':

; Обращает на себя вздмавяе факт ваманевия тропа sua вирусе s процессе пероастеввд» ■ обварухенае егоэ ткаииоргевов', во огязавяых с обычной локализацией воабуоттеля в остров стадия заболелавая /Э.Г.ЛядхзпарадБе с соэт», 1931; В»А.Зуев с ооэвт., I9SI; K»tuanaoQ. 1981/, В процесс«"- развитая персвс-теятвоЗ ввфекцва в оргавяамо происходят вамевеняв кзогвх свойств вирусе,'s тоа чзйле и оргавотропвссть. А^Ф.Фролозым с соавт. /1931/. А.и.Цербавской /1984/ из гкзви с еле вены» я легких мышей лвивя вид/в бил выделен вярус граива одустя 7 месяцев -после инфицирования. Было устеяовлево преимущество мышей лавки Едхв/с для моделирования персвстеатвоя гриппозной ввфек-цяв в^рргеияэме »вотвых /Д. U. Верба некая, 1934/. -- , . .■ ■

Это послухалс оововаваем для изучевия синтеза ввруссвц-ца$аческах PUS в организме мыаеи этой даг*ч. Было уотавовле-во, что спустя ? месяцев послезэрахеваялввотвыхуровень вв-русспец0$мческах РНК в ткана легких сотавял теавв се-

лезенки - я ткэвя печени - 13?. Этот факт'указывает на

то, что в отдаленные срок» после введеввя вируса гриппа ив-

*

■ -18 - - - . " V '' .

- V Таблица I

Выявление в1русовец»фичеовлх РШС в древэратахРШС, выделенных из оргававиа ныне а завив baib/c через 7 мегэдцев после гвракаввн их вирусом гриппа

Исследуемый оргев - : % РНКазо-резиотеитвоснг

* » 9 t -Опыт ■ ' Ï ' К # 0 Пр о I >

Л его в 6,54 ± 0,16 3,02 t 0,63

■ Печевь 13,0 t 0,9 3,S t 0,48

Селезенка 14,2 ± 0,64 3.83 ± 0,33 ;

тенсввясоть сшатеза ви руссвецвфзчэокзх РНК виге втхави селезенки в печени. , '".;'■ V

Установленный вайя факт длительного обнаруженая вируо-специфических РЕЕ в организме мывей обьвсвкат молекулярные:' < механизмы сохранения зврусвоЗ генетачеокой ввформавяа в клетках при парс потенции, lia освовашш подученных ранее дзезнх во выделения вируса грявлэ' ва селавеви экспериментальных «нвот-виг спустя 7 месяце» моле ав£ацаромциа( ' в таиа выав.лаизих . весями всследовавггада сввхезо$ вируоспецафэчевох. РН2,в этом органов укагзвнив вшиэ срока , поев о предположить, что оеде-■ зеяка' являема таи орган он, где происходя! ддательдоэ о охра- • невиа вирусе гриппа.;' . ; " .

■ шведа .■■

I. иетодоы молекулярная РШС-РШС гибридизации уставовлено,

что в процессе развитая гриппозной яяфекдия у мышей в : ткэв» легких, печевв в седэаевкз происходя* накопаете вмруоопецифзческих PAS, 2. Установлена корраяяяая между уровнен репродукцэи взруса

в оргвве в оодвржазвеав вея варуссоецэфячесюх РНК. 5. ИвтвБсзввость репродукции вируса гриппа в исследуешос органах /легка в, поч«въ и селезенка/ и оодарханно ъ яах вя-■ русспеиайячаоквх РНК определяется генотипе* животного; у шин лаяиа гльв/e свз виге. Чей у ишея вяняя СВА,

. - . • v ' ' ' '

4. Иесмдовевве даваивка синтеза варуо специфических РНК поа-

вохяет закгочзть, что после ззверпэнкя репродукции варуса

. ■ ■ - - -

в органах жавотвого определяется количество вирусепецнфг-ческих РНК, которое достоверно превыдает уровень контроля.

5," Впервые кет о доимо ле куляр вой РНК-Р НК-ги бра ди за дв и устаиов-лево присутствие в клетках селезенки мышей яяняя■ вирусспецафическнх РНК в отдаленные срока /7 месяцев/ после инфицирования: содержавие их составило в этот первод

опытной группы животных » 5,6? - у мышей контрольной-группы, Этот факт может обьясвить молекулярвые нехавиз-га длительного сохранения генетической ивфораацив вируса гриппа в оргавззме животных.

СПИСОК

; " работ, опубликованных по теме диссертации :.;...; -1. СвоДства вариантов вируса гриппа, выделенных при экспер»-' ментальной гриппозной внфевцпи.'-В сб.: Вирусы я вирусные заболевания,' Киев: Здоровье,-1961,.вып.9, с,78-83 /в соавторстве с А.Ц.Щербввской/. -; InTectioas ША recaveгей f гоа inf luem» vlrua infecte a celle

ч 20 —

ИЛЬ хаЪотдЫопа! Содзгвеа Т1го1о0у. вЬгввЬоага, Угадав, 1931, р.393. /ооавт, А,Ф.трогов, С.I.Рыбалко/. 3. Нвтодячесше рексиевдаяэи со уо ов а^ вевств озавша иетодаа -серологической и вирусологической дяагя остяке грзпда в ОРЕЦ. - Еиев, 1985, 26 с. / совят. А.Ф.Фролов, С.Л.Рыбалко, А.К.Щербйнсквя » ДР./.;

11 охекухярво-би одо;я ческа е аспэкгы порсиотевцан шзруса гришга дря э&зсвржиентэльной грипяогвоА вя$егада. - ' иатераалн Геопублаиевоко коп{еревзва во варусодогая ДОО-детве Одесского НИЗ взруоологяа я эпидемиолога» вм'.И,И.иечяяковэ/» Одесса, 29-30 мея, 1586, , / ооавт. А.Ф.С'ролоэ, А.и.Церблвокая, С.В.Автопввко, Н.И.Яэдгорнап/. 5* Выявление вврусспецафячеоклх РШС з организме иышеЯ пря экспериментальной грзвпозаоа явфекдзз. - КикроСзол.журя., • 1987, /ссэвх. А.Ф.Орояов, Н.Л.Верач/.

ПоДп.*п«ч./,.Й*.БФ/Й*/** ;'ФЬуначлГмлг. '-Пеиофс. Усл. пи. я, '/- Уч.*и1д. .1. £ /Л \ Тираж ;

За*. 7- • Б«1М»тн<1 1

Киевская книжки *и«агр»фяя научной книги, Киев, Реанн», ■