Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Вирусиндуцированная антигеннеспецифическая иммуномодуляция и ее значение в патогенезе Флави- и Буньявирусной инфекций (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Вирусиндуцированная антигеннеспецифическая иммуномодуляция и ее значение в патогенезе Флави- и Буньявирусной инфекций (экспериментальное исследование)"

V) Ь 3 *

. РОКИЙСШ АКАДЕМИЯ МЁУЩШСИИХ НАУК ИНСТИТУТ ПОЛИОШЕШТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ

На правах рукописи

Уда 616.98:578.8-0.76. (0.48,8 )

ВАРГИ!] ВИКТОР РИКТОРОШЧ

ВИШЩДЩРОВАННАЯ АНШГЕННЕСПЕЩдаЕСКАЯ ШИУБОМОДШЦИЯ И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ В ПАТОГЕНЕЗЕ ШЕИ - И БУНЬЯШРУСНОЙ ИНШЩИй' ( экспериментальное исследование )

03,00.06 - вирусология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Работа выполнена в Институте полиомиелита и вирусных

чнцефадктов Российской АМН.

Научный консультант - академик РАМН, профессор Семенов Б. Ф.

Официальные оппоненты - доктор медицинских кале

М. С. Воробьева доктор биологических наук А. а Пронин ' доктор медицинских наук Эльберт Л Б.

Ведущая организация - ШШ им Е Ф. Гамалеи Российской АМН

Защита диссертации состоится Ю & 1992 г.

в " (О' часов' на заседании Специализированного совета Д 001. 27.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АМН по адресу : . 142782, Московская область,п/о Института полиомиелита. •

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АМН.

Автореферат разослан '^У" 1992 г.

УченкИ секретарь еаикалмзи&овзнкого есьута канцкаах бшлогиче.:г.5С. катгс р. ь. Уютеедяша

rTfüSü.

v.-.sS ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

где л ^ссертгций

Актуальность проблемы. Анализируя вирусное заболевание как результат сложных взаимодействий этиологического агента и хозяина, в последние годы стало очевидно,что гак качественные, так н количественные проявления инфекции связаны не . только с биологическими особенностями возбудителя,-на'во. многом определяются функционированием многокомпонентной иммунной системы организма. В ходе вирусного инфекционного процесса кроме, "ви-русспецифического иммунного ответа" хозяина и связанного с ним выздоровления, либо развития иммунопатологических реакций, выделяют "вирусиндуцировашую аптигеннеспецифическую иммуномоду-ляцию" - попятив,широко йспольаующееся в иммунологии вирусных инфекций для обозначения иммунологических событий, характеризующих неспецифические по отношению к антигенам инфекционного агента изменения иммунологической реактивности хозяина. '

Вирусспецифические иммунные механизмы регуляции инфекционного процесса давно и интенсивно исследуются и относительно хорошо изучены. Менее изучены проявления вирусиндуцированной иммуномодуляции И' механизмы ее развития в коде вирусной инсЕбк-ции. Несмотря на то, что факты, свидетельствующие об изменени-?х иммунологической реактивности организма хозяина при вирусной инфекции, начали накапливаться с начала 20-го столетия von Pirquet О. Е, 1903) и в последующие годы дифференцировано шачение вируса кори.цитомегаловируса,вируса гриппа,вируса Эп-¡ейна-Барр в индукции иммуномодуляции у человека, внимание к !ашюй проблеме особенно возросло в последнее десятилетий в вязи с открытием вируса иммунодефицита человека и мировым аспространением этой имЬзкции. однако шло исследована, а в яде случаев не ясна,роль вирусиндуцированной антигеннеспеци-

фической иммуномодуляции в патогенезе вирусного инфекционного процесса, в том числе при микст-инфекции в ассоциации с гете-рологичными инфекционными агентами.

. Вирусиндуцированная иммуномодуляция, как показывает анализ литературы, часто наблюдается при инфекциях,вызываемых вирусами разных классификационных групп (см. Семенов Б. Ф. , Варгин В. В. ,1989). Она описана' в виде двух качественно различных эффектов - усиления и подавления функции клеток,осуществляющих иммунологический надзор. Нередки ситуации, когда оба эффекта , сменяя друг друга, развиваются в динамике ответа хозяина на один возбудитель. Часто' вызываемые инфекционными агентами изменения функций иммунокомптетентных клеток проявляются как вторичные иммунодефициты, носящие в большинстве случаев временный характер. Несмотря на наличие в ряде случаев сходства в проявлении при разных вирусных инфекциях, закономерности И механизмы формирования вирусиндуцированйой антигеннеспецифи-ческой иммуномодуляции существенно разнятся. Ключевым моментом в нарушении иммунореактивности при инфекциях,вызываемых вирусами с тропизмом к иммунокомпетентным клеткам, представляется цикл событий следующих за их инфицированием. Результатом репродукции иммуноцитотропных вирусов является гибель иммуно-комлететных клеток, другие т нарушают- их функции без видимых повреждений. Изменения иммунореактивности при инфекциях иными вирусами в большей мере связываются с воздействием, на функции иммунокомпегентных клеток структурных компонентов вируса и продуктов его размножения в клетках. Отсутствие универсальности

механизма развития вирусиндуцированной антигеннеспецифической *

иммуномодуляции и эффективных противовирусных средств диктует необходимость выявления'закономерностей ее развития .изучение механизмов с последующей разработкой методов иммуноксррекции

- 5 - .

при вирусных заболеваниях со сходным патогенезом инфекционного процесса.

Мы сосредоточили внимание на изучении антигеннеспецифи-ческой иммуномодуляции'при флавивируоных инфекциях, поскольку возбудители многих из них (например,вирус клещевого энцефалита, денге 2) продолжают играть вагаую роль в инфекционной патологии человека,несмотря на интенсивные усилия по созданию средств и методов специфической профилактики. Самостоятельный интерес представляло исследование этого вопроса при буньяви-русной инфекции,вызываемой вирусом Гахиня.хотя и не играющей в патологии человека самостоятельного значения,но досточно широко распространенной у человека бессимптомной инфекции. Исследования феномена антигеннеслёцифической иммуномодуляции при фяа-вивирусных инфекциях проводятся около 20 лет, главным образом на моделях in vitro. -Однако до последнего времени не раскрыты закономерности ее развития in vivo, не выявлена ее роль в патогенезе инфекционного процесса. В качестве основных экспери-«ентальных моделей при изучении вирусиндуцированной аятиген-[еспецифической иммуномодуляции, нами использована воспроизвё-¡енных у мтэй острая инфекция вирусом клещевого энцефалита, ызывахшм клинически выраженное заболевание,а также инфекция шей вирусом Лангат, денге 2 и Западного Шла инициирующими у ивотных преимущественно бессимптомный инфекционный про-эсс. Значение в патогенезе флавивируоной инфекции антиген-зспецифической иммуномодуляции, индуцированной антигенноне-эдственным вирусом исследовалось с использованием экспериментальной инфекции мышей буньявирусом Тахиня. •

Цёль и задачи исследования. К началу наших исследований в стературе имелись единичные данные, свидетельствующие о кмму-модулирующей активности флавивирусов.но не были раскрыты за-

кономерности,характеризующие вирусиндуцированную антигеннеспе- | цифкческую иммуномодуляцию к мало было известно о ее роли в патогенезе моноэтиологичного флавивирусного или смешанного (вирусо-вирусного) инфекционного процесса. Поэтому при планировании работы основное внимание было уделено разработке экспериментальной модели для изучения влияния флавивирусов,играющих существенную роль в патологии человека, на иммунологическую реактивность организма, исследованию основных проявлений и закономерностей развития антигеннеспецифической.иммуномодуляции в ходе инфекционного процесса,анализу механизмов ее формирования и регуляции, выяснению значения в патогенезе экспериментальной флавивирусной инфекции и разработке, на основании полученных данных, экспериментальных подходов к восстановлению нарушенной при вирусной инфекции иммунореактивности. хозяина. Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

1) В экспериментах на мышах изучить изменения первичного

В-клеточного иммунного ответа хозяина на гетерологичные (отв

носительно инфекционного агента) антигены, вторичной иммунной реакции (формирование В-клеточной иммунологической' памяти) ,развития антигенспецифического иммунологического дефекта и исследозать основные закономерности характеризующие эти процессы при экспериментальной инфекции мышей,вызванной некоторыми флавивирусами и буньявирусом Тахиня.

2) Исследовать значение количественных и функциональных изменений иммунокомпентетных клеток хозяина в . развитии ви-русиндуцированной антигеннеспецифической иммуномодуляции.

3) Раскрыть роль иммунокомпетентных клеток организма как субстрата при развитии острого и переистентного Флавивирусного инфекционного процесса и выявить иммунологические механизмы

эго предотвращения.

4) Охарактеризовать способность флавивирусов индуцировать аутоиммунный ответ,изучить закономерности его развития и исследовать механизмы формирования аутореактивности в организме инфицированного хозяина.

5) Оценить значение антигеннеспецифической иммуномодуляции как фактора, определяющего исход флавивир'усного инфекционного и вакцинального процессов. • ...

6) Охарактеризовать возможность использования иммуномоду-ляторов для исправления и предупреждения у хозяина индуцированной вирусом иммуномодуляции.

Научная новизна работы и положения,выносимые на защиту.

В результате ■ провеяе'нных экспериментальных исследований:

- установлено;что развитие иммуномодуляции является обязательным компонентом- иммунологических событий, развивающихся гак при остром инфекционном, так и вакцинальном фяавивирусном 1роцессе,характеризуется транзиторными изменениями иммунного >твета на гетерологичные антигены и сочетается с количеетвеи-[ыми изменениями основных популяций иммунокомпететных клеток ¡рганизма хозяина-и их'функциональной активности;

- впервые доказано, что количественные и качественные 'па-аметры иммуномодуляции при инфекции представителями ПаУШП-ае определяются действием комплекса факторов,среди которых ажное .значение играют биологические свойства возбудителя, его ээа.путь инфицирования,особенности тест-антигена и интервал заду его аппликацией и инокуляцией вируса

- развитие эффекта стимуляции первичного иммунного ответа 1 гетерологичный антиген,наблюдаемого при экспериментальном ющевом энцефалите,носит характер фенотипической коррекции йбореагирующих на тчмусзависимый гетерологичный антиген ш-

вотных и обусловлено действием вирусиндуцированного гуморального фактора.

- впервые установлено,что широко распространенный вирус Тахиня обладает способностью индуцировать в организме 'хозяина множественные изменения функций иымунокомпетентных клеток. Индуцированный буньявирусом Тахиня у мышей.иммунологический дефект обусловливает проникновение гетерологичного вируса Лангат в ЦНС, развитие персистентной инфекции,сопровождающейся нарушениями ориентировочно-исследовательской активности.

- на модели инфекции мышей вирусом Тахиня впервые, продемонстрирована .важная роль вирусиндударованной антигеннеспеци-фической иммуномодуляции в снижении естественной противоопухолевой резистентности;

- установлено,что проявления вирусиндударованной,иммуномодуляции сочетаются с инфицированием разных популяций иммуно-комлетентных клеток зараженного хозяина; пермиссивными для флавивирусов в острой стадии является макрофаги и "Г-лимфоциты, важным резервуаром персистенции- вируса клещевого энцефалита и Лангат, наряду с тканями центральной нервной системы, являются Т-лимфоциты тимуса.

- в опытах с вирусом клещевого ' энцефалита установлена возможность участия противовирусных антител в механизмах' антитело-зависимого усиления вирусной репродукции в макрофаг&льных клетках in vitro.

- важную роль в предотвращении инфицирования лимфоцитов селезенки в острой фазе инфекции и при Формировании персистенции вируса клещевого энцефалита в тимоцитах в отдаленные сроки играют антителовависимые механизмы иммунитета (вируссиецифи-ческие антитела и эйфекторы антитело-зависимой клеточной цито-токеичности);

- 9 - .

- впервые при флавивирусяой инфекции описано явление индукции аутореактивных Т-клеток,определяемых по способности вы-' зьшать локальную РТЛХ у сингенных мышей. Выявлен новый механизм активации аутореактивных Т-лимфоцитов в организме хозяина под влиянием цитокина белковой природы молекулярной массой 8000-12000 дальтон, продуцируемого еирусиндуцироЕанными ауто-реактивными Т-клетками.

- экспериментально обоснована возможность ■ предупреждения и исправления вирусиндуцйрованного иммунологического дефекта с использованием иммуномодуляторов бактериального происхождения (анатоксина стафилококкового' очищенного и синтетического аналога мурамилдипептида).

Научная значимость работы заключается в раскрытии закономерностей развития вирусиндуцированной антигеннеспецифической им).|уномодуляции и факторов, определяющих ее проявления при экспериментальной флавивирусной инфекции,выяснении новых механизмов .формирования и роли антигененеспецифической иммуномодуг ляции в патогенеае инфекционного процесса,выявлении неизвестного ранее механизма активации Т-клеточноЙ аутореактивности под непосредственным воздействием секретируемого вирусиндуци-рованными аутореактивными Т-лимфоцитами цитокина.

Практическая значимость работа заключается:

- в. разработке основанного на выявленном эффекте антитело-зависимого усиления репродукции вируса клещевого энцефалита в макрофагальных клетках чувствительного антиглобулинового теста определения вирусспецифических антител, защищенного авторским свидетельством 1562857 от 8 января 1990 г. в Госреестре изобретений СССР "Способ определения антител к вирусу клещевого энцефалита в асцигной жидкости";

- 10 -

- экспериментальном обосновании возможности профилактики и коррекции индуцированного вирусом Тахиня иммунологического дефекта путем применения иммуномодуляторов бактериального про-исходцения (анатоксина стафилококкового очищенного и синтети-

• ческого аналога мурамиддипептида);

- анализе и обобщении данных по проблеме вирусиндуциро-ванной антигеннеспецифической иммуномодуляции в монографии "Иммуномодуляция при вирусных инфекциях и вакцинации",опубликованной в серии "Итоги науки и техники",1989 г. Ряд материалов представлен в монографии Семенов Б. Ф. .Гаврилов В. К Иммунопатология' при вирусных инфекциях. Москва. Медицина. 1976. 173 стр.

Апробация работы.

Материалы диссертации . докладывались на итоговых научных

сессиях Института полиомиелита и вир>усных энцефалитов АШ СССР

(Москва 1974,1975,1980,1985), всесоюзной конференциш: "При-

родно-очаговые инфекции и инвазии" (Вильнюс,1975), . 16 и 17

Всесоюзных съездах микробиологов¡эпидемиологов и иммунологов в

(1977,1989)/симпозиуме "Фагоцитоз и иммунитет" (Москва,1983) 1-ом Всесоюзном съезде иммунологов (Дагомыс,1989), рабочем совещании "Иммуномодуляторы природного происхождения" (Владивосток 1990), 1,4,5,8-ом Международных конгрессах по вирусблогии (1977,1978,1981, 1990),6-ой международной конференции по"сравнительной и . прикладной вирусологии в Канаде (1989 г.),2-ом симпозиуме по арбовирусам в Средиземноморских странах (Югославия, Дубровник 1989).

Публикации. Основные результаты исследований,рассмотренных в диссертацими, изложены в 45 публикациях: 23 журнальных статьях, 21 тезисах, 1 монографии. ■ ■ '

<30тем и структура работы. Диссертация изложена на 315

. - И - -

страницах машинописи, проиллюстрирована 33 таблицами и 36 рисунками. Состоит из введения,обзора данных литературы (3 гла-' вы), раздела собственных исследований (6 глав).обсуждения,выводов и списка цитируемой литературы.Библиографический указатель включает 292 работы отечественных и зарубежных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ '

Материалы и методы. В работе использовано шесть представителей ПаУШГ1с1ае: вирусы желтой лихорадки (штамм 170,Западного Нила (штамм В-95б),денге типа 2 (штамм 23085) .Японского энцефалита (штамм Накаяма).клещевого энцефалита (штамм Софьин), Лангат( штамм ТР-21) и буньявирус Тахиня (штамм-висце-ротропный). Экспериментальные инфекции воспроизводили у беспородных и инбредных мышей линии ВА1В/с,СВА,СБ7В1/6,0ВА или гибридов первого поколения П, массой 18-20 г. введением вирусов в расчитанных по методу Кербера титрах (Ашмарин и др.,1961) в ■брюшную полость,внутривенно,под кожу или в мозг. Для изучения персистенции вирусов использовали.два метода выделения инфекционных агентов:а) при исследовании головного мозга внешне здоровых мышей материал (1-10% гомогенаты) инокулировали интрацеребрально 2-3-дневным мышам-сосункам. Изолированные у заболевших мышей агенты затем идентифицировали в РГГА со специфичной антисывороткой или в реакции биологической нейтрализации, проведенных по общепринятым методам;б) наличие вирусов в иммунокомпетентных клетках определяли с помощью метода инфекционных центров. Клетки, образующие инфекционные центры, выявляли на монослое перевиваемых культур почечного эпителия взрослых свиней (С1БЭВ),на который наносили стандартное агаровое покрытие после внесения исследуемого материала (клетки). Антитела к

использованным флавивирусам определяли микрометодом реакции торможения гемагтлклинации (Sever, 1962) или в реакции нейтрализации по подавлению бляшкоообразовакия (Shmidt.,1976) под слоем агарового покрытия с использованием клеток СГОВ.

Источником иммунокомпетецтных клеток при проведении исследований служили ткани селезенки,тимуса,лимфатических узлов, костного мозга и перитонеального экссудата мышей. Для обогащения клеточных взвесей макрофагами клетки иммунокомпететных органов и перитонеального экссудата наслаивали на поверхность стеклянных чашек Петри диаметром 100 мм. Полученные в результате обеднения клеточные суспензии характеризовали снижением на 92-95% содержания макрофагальных клеток. Обеднение клеточных взвесей по Т- или В-клеткам проводили обработкой in vitro не содержащих макрофагов суспензий с использованием анти-тета-сы-воротки.анти-Thyl. 2 или сыворотки против гамма-глобулина мышей, соответственно. Действие эффекторов иммунитета в опытах по изучению клиренса вирусинфицированных' лимфоцитов в,острой и отдаленной фазе ^нфекции исследовали методом адоптивного переноса соответствующих клеток доноров (внутривенно,30-40 млн/0,'3 мл) сингенным реципиентам.

У инфицированных исследуемыми вирусами мышей оценивали функциональную активность иммунокомпететных клеток. Фагоцитарную активность макрофагов in vivo оценивали по скорости Удаления из крови животных частиц туши (Ki erzenbaum et al,1974), a in vitro - подсчитывая в окрашенных по Романовскому-Гимза фиксированных препаратах число макрофагов брюшной полости, содержащих эритроциты барана. Для оценки способности макрофагов к передаче антигенного стимула in vivo применили модель еияген-ного переноса (Галактионов,1979). Количественное • определение формирования, антителообразуюших клеток-к эритроцитам барана,

бычьему сывороточному альбумину, Vi-антигену Salmonella typhimurium проводили с применением техники локального гемоли-' за в геле агарозы (Jerne,1963). У- зараженных вирусами мышей определяли развитие кожной гиперчувствителыюсти замедленного типа на эритроциты барана,оцениваемой по увеличению объема лапки мышей после инокуляции тест-антигена (Nash et al,1980). Антигениндуцированную иммуносупрессию вызывали у мышей внутривенным введением им большой дозы тест-антигена;в качестве которого использовали эритроциты барана. Выраженность антигенин-дуцированной иммуносупресси характеризовали по подавлению у животных образования антителопродуцентов,специфичных к гетеро-логичным эритроцитам при вторичном ответе примированных мышей на оптимальную дозу антигена ( Калинкович, "1984). Активность естественных киллеров у мышей через различные интервалы после инфицирования тестировали определяя цитотоксичность их сплено-цитов в отношении меченных радиоактивным уридином опухолевых клеток человека YAC-1 в соответствии с методом Рыковой и др. (1981).основанным на регистрации остаточной радиоактивности неповрежденных клеток-мишеней в присутствии эффекторных клеток и РНК-азы. Для количественной оценки состояния естественной противоопухолевой • резистетности использовали трансплантационный тест, основанный на введении экспериментальным животным серийных разведений суспензий опухолевых клеток с последующим определением процента успешных трансплантаций опухоли и вычислением 50% трансплантационной дозы (ТрД/50),т. е. такого количества опухолевых клеток,введение которого обеспечило бы в последкющем развитие опухолей у половины инокулированных животных ' (Дейчман,1984). Аутореактивные Т-клетки выявляли при проведении техники локальной РТПХ в системе сингенных животных (Zshchiesche, Vargin, 1976). Цитотоксичность аутореактивных

Т-лимфоцитов (в суспензии спленоцитов,обедненной по макрофагам) исследовали в отношении незараженной культуры макрофагов или фибробластов эмбриона сингенных мышей (Егорова и др,1977). Действие эффекторов аутоиммунной патологии, индуцированной флавивирусами, исследовали in vivo путем введения донорских .лимфоцитов с таким видом активности интактным сингенным реципиентам в кровяное русло. На протяжении эксперимента характеризовали клиническое состояние животных,массу тела и селезеночный индекс,расчитанный по соотношению массы селезенки к массе тела. Аутоиммунные поражения внутренних органов (селезенки, тимуса,.печени, головного мозга) оценивали по результатам гистологического обследования'препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Молекулярную массу, исследуемого ЦАА характеризовали с использованием метода гель-хроматографии на колонках с Сефадексом G-25 fine, уравновешенный фосфатным буферным раст-Еором (рН 7,4). Оценку достоверности различий между полученными показателями экспериментов расчитывали по t-критерию Сть-юдента с использованием компьютерного анализа при програмном

о

обеспечении Statgraf.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ .

Закономерности, характеризующие антигеннеспецифичесКую иммуномодуляцию пей экспериментальной инфекции мышей флавивирусами.

Анализ изученных параметров развития у инфицированных вирусами мышей первичного гуморального иммунного ответа ка гете-рологичные антигены,формирования В-клеточной иммунологической памяти и индукции В-клеточного антигенспецифического иммуноло-

- 15 - .

гического дефекта дозволяет заключить,что подобно большинству вирусов других групп флавивирусы вызывают временные изменения' иммунореактивности хозяина. Такие- изменения прослеживаются как в опытах с возбудителями,вызывающими .острую летальную инфекцию инфекцию у.мышей (вирус клещевого энцефалита), так и флавиви-русами,инициирующими преимущественно бессимптомный или вакцинальный инфекционный процесс (вирус Лангат-, Западного Нила.ден-ге типа 2, штамм 170 Еируса желтой -лихорадки). Как установлено, антигеннеспецфическая иммуномодуляция при экспериментальной флавивирусной инфекции проявляется в виде двух качественно различных, сменяющих друг друга эффектов -. усиления и подавления иммунореактивности хозяина. Все изученные нами флавивирусы (клещевого энцефалита,Западного Нила.жлтой лихорадки, денге 2,Лангат).вводимые одновременно с гест-антигеном или в сроки близкие-к нему, при первичном иммунном ответе к гете-рологичным антигенам действуют .как иммунологические адьюван-ты;в случае заражения через сутки после инокуляции тест-антигена выявляются иммунодепрессивныэ свойства флавивирусов. Фаза стимуляции формирования В-клеточной памяти,наблюдаемая при синхронном введении мышам наряду с тест-антигеном вирусов,сменяется через несколько суток инфекции подавлением формирования иммунологической памяти к вводимому затем гетерологичному антигену. Впервые демонстрируется,что наряду с антигеннеспецифи-ческим изменением иммунореактивности при флавивирусной инфекции мышей имеет место изменение характера формирования анти-генспецифического иммунологического дефекта,наблюдаемого при введении зараженным мышам супраонтимальной дозы тест-антигё-на. Иммумодулирукяций эффект такого типа; как и отмеченное выше влияние флавивирусов на развитие первичного иммунного ответа, формирование иммунологической памяти,носит обратимый характер.

-16 -

Существенно,что иммуномодулирующее воздействие Флавиви-русов, легко обнаруживаемое в опытах с тимусзависимыми антигенами (эритроциты барана,бычий сывороточный альбумин), не определяется в опытах с тимуснезависимым У1-антигеном Б. шипит. Отмеченное, однако, не является особенностью иммуномодули-рующей активности только представителей семейства Паушгис1ае. В частности,резистентность развития иммунного ответа то ти-муснезависимому пути к иммуномодуляции наблюдается и при инфекции мышей вирусом лимфоцитарного хориоменингита (Вго^огвепБеп, 1978).

Количественные и качественные параметры иммуномодуляции при вирусном инфекционном процессе определяются действием комплекса факторов: биологических свойств возбудителя,его дозы, пути инфицирования, интервалом между инокуляцией вируса и тест-антигена. У мышей одной и.той же линии в условиях одинакового пути инфицирования (в брюшную полость) флавивирусы стимулируют формирование антителопродуцентов в случае одновременного (или в интервале, измеряемого часами) инфицирования и инокуляции тест-антигена,но резко подавляют антителоформирова-ние, когда гегерологичный антиген инокулируют через сутки после заражения. В условиях,благоприятствующих проявлению имму-ноадьювантности, наблюдается усиление формирования АОК к гете-рологичному антигену при экстраневральных путях инокуляции флавивирусов. Иммунодепрессивное воздействие флавивирусов проявляется при их внутримозговой аппликации не зависимо от схемы эксперимента (одновременно с антигеном или, при экстраневраль-ном заражении, за сутки до введения тест-антигена). Как и для большинства вирусов животных, для флавивирусов, вызывающих у мьшей преимущественно бессимптомный инфекционный процесс (ЗН. Лангат) ,скч?алогь харатгтегкнм зкспои^исиальнс« нарастание

- 17 - .

эффекта стимуляции иммунного ответа к гетерологичному антигену, переходящее в плато при применении максимальных доз' патогена. В экспериментах' с высоковирулентным для мышей штаммом Софьин вируса Ю отмечен колоколообразный вид кривой дова-эф-фект,когда показатель иммуномодудяции прогрессивно нарастает при увеличении дозы от 1 до 100000 ' ЛД/БО,но снижается при дальнейшем увеличении дозы патогена. Из большого круга изученных вирусов такую картину наблюдали только в опытах с возбудителем болезни визна (Зуеппег1т>1т е^а1. ,1978).

Способность флавивирусов повышать первичный иммунный ответ на гетерологичный антиген выражается неодинаково при использовании в экспериментах мышей линий С57В1/6 (Н-2Ь),ВАЬВ/с (Н-20), СС57Вг (Н-2Ь), (СВАхС57В1/6)И (Н-2кЬ) и совсем не обнаруживается в благоприятных, для этого условиях (одновременное введение животным вируса к тест-антигена) на мышах линий СВА (Н-2к),0ВА (Н-2сЗ) или СЗН (Н-2к).Из сопоставления этих фактов еледует,что различия в проявлении иммуномо-дулируюших свойств флавивирусов в данной системе определяются не гаплотипом .Н-2 главного комплекса гистосовместимости, а способностью конкретного хозяина реагировать на данный антиген. ■

Смена стимулирующего Бездействия флавивирусов на ингиби-рующее отмечена и при оценке их влияния на формирование у • мышей В-клеточной иммунологической памяти к гетерологичному антигену. В отличие от результатов экспериментов с цитомегалови-русом,когда иммунодепрессивная активность возбудителя,отмечаемая при первичном иммунном ответе на тёст-аятиген,сочетается' с нормальным формированием к нему иммунологической памяти (В1х1ег,Вооз,1980), полученные нами данные демонстрируют корреляцию показателей иммуномодулирующей активности, вируса кле-

щевого энцефалита,определяемых при развитии первичного ииммун-ного ответа или.формировании В-клеточной иммунной памяти. Эффект углубления, антигенспецифического иммунологического дефекта, . индуцированного супраоптимальной дозой тест-антитгена, наблюдаемый при развитии экспериментальной флавивирусной ин-.фекции,связывается с усилением активности у инфицированных мышей Т-супрессоров.

Изменение популяций иммунокомпетентных клеток и их функций при экспериментальной Флави- и буньявирусной инфекции .

мышей.

Количественные сдвиги в популяциях иммунокомпететных клеток на фоне флавивирусной инфекции у мышей касаются В-,Т-,' нуль-лимфоцитов и сочетаются, с изменением функций других иммунокомпететных клеток. Характерный для ранних стадий флавивирусной инфекции лимфоцитов ассоциируется в основном с увеличением доли В-лимфоцитов. Транзиторная, но выраженнная лимфоци-о

топения селезенки, наблюдаемая при инфекции мышей вирусом клещевого энцефалита,не сопровождается отрицательными сдвигами в количестве лимфоцитов в других органах иммуногенеза (костный мозг,тимус). Фагоцитарная активность макрофагов при этой инфекции сначала быстро возрастает,но затем (по мере развертывания клинической картины заболевания) снижается. При развитии бессимптомного инфекционного процесса, вызванного вирусом Лан-гат,Западного Нила или-денге 2, функции фагоцитоза,осуществляемые макрофагами печени и брюшной полости у мышей,'кратковременно нарастает,но.затем нормализуются. Отмеченная закономерность прослеживается при проведении экспериментов на разных линиях мышей. Вместе с тем характер модуляции цитотоксической

-19 - ■

активности естественньк киллеров при воздействие вирусов Лангат ,Западного Нила или клещевого энцефалита не одинаков у мышей разных линий. На ранних стадиях инфекции вирусами усиление цитотоксичности естественных киллеров для стандартных клеток-мишеней наблюдается .у мьшей линия с низкой (С57В1/6) или средней (BALB/c) исходной активностью' естественных киллерных клеток; мыши с исходно высокой активностью' таких эффекторов (СБА) рефрактерны к стимулирующему "влиянию флавивирусов; Феноменологически сходные различия, наблюдаемые в опытах воздействия на активность естественных киллеров у мышей высоко-или низкореагирумцего гаплотипа синтетических полиэлектролитов (Хаитов и др. ,1984), подтверждает универсальность эффекта, отмеченного в экспериментах с фпавивирусами. " • ■

В связи со способностью флавивирусов повышать первичный гуморальный иммунный ответ к гетеродогичным антигенам в ранние ' сроки инфекционного процесса . встает вопрос о механизмах данного явления. - Как установлено, адоптивный перенос иммунокомпетентных клеток (спленодатов) зараженного вирусом клещевого энцефалита или Лангат донора не приводит в повышению способности сингенных реципиентов •. отвечать, усилением формирования АОК к ЭБ, вводимым одномоментно со спяеноцитами.' С другой стороны, он не сочетается с вирусиндуцированными изменениями фагоцитарной функции макрофагов,поскольку,например, выраженность индуцированного вирусом клещевого энцефалита повышения функции макрофагов к захвату гетерологичных эритроцитов in vitro оказалась одинаковой как для • мышей С57В1/6 (чувствительных к адьювантному действию .вируса),так и мышей СБА (резистентных к адьювантному действию). В дальнейших экспериментах нами установлена связь иммуноадьювантного эффекта вируса КЗ с действием гуморального фактора сыворотки, обнаружива-

емого в течение первых 24 часов инфекции,который отличается термолабильностью и чувствительностью к низким значениям рН среды.

.Свойство бунъявируса Тахиня изменять функциональную активность иммунокомлететных клеток обнаруживается как в опытах in vitro,так и in vivo. Наблюдается,в частности,угнетение способности клеток системы мононуклеарных фагоцитов к фагоцитозу. Однако ведущей причиной ослабления иммунного ответа инфицированного организма,на гетерологичный антиген следует,по-видимому, считать ингибирование вирусом Тахиня способности макрофагов к передаче гетерологичного антигенного curHaia лимфоцитам, поскольку повреждение именно этой функции макрофагов зараженных животных сочетается во времени с ослаблением иммуно-реактивности. Выявленное нарушение функции макрофагов не удается связать с прямым инфицированием этих клеток вирусом Тахиня. Одновременно регистрируется активация антигеннеспецифи-ческих Т-супрессоров. Действие последних,- в отличие от активируемых при флавивирусной инфекции (Хозинский,Семенов,.1981),

е

обнаруживается в определенных условиях,а именно - при доста*-точно длительном контакте с клетками-мишенями.

Угнетение естественной противоопухолевой реактивности, выражающееся в повышении чувствительности инфицированных вирусом Тахиня иышей к трансплантируемым злокачественным опухолевым клеткам L-1210, также расценивается нами как следствие наличия у вируса иммунодепрессивных свойств,в первую очередь способности ингибировагь .функцию естественных киллеров. Указанная активность .вероятнее всего,проявляется в отношении не только естественной противоопухолевой реактивности, но и специфического противоопухолевого иммунитета,так как депрессивнее влияние этого вируса распространяется и на антиген-

зависимые элементы Г-клеточного иммунитета. Полученные результаты можно рассматривать как одно из косвенных подтверждений потенциальной способности,по крайней мере некоторых из инфекционных неонкогенных вирусов,обладающих имМунодепрессивнои активностью, играть роль своеобразных коканцерогенных факторов, повышающих пермиссивность инфицированного ими организма в отношении возникновения,развития и роста в нем злокачественных опухолей.

Заражение иммунокомпетентных клеток как фактор патогенеза флавивирусной инфекции. .

Полученные наш На модели экспериментальной инфекции мышей вирусом клетевого 'энцефалита и Лангат данные о инфицировании флавивирусами иммунокомпететных клеток хозяина ' расширяют представление о такой особенности патогенеза флавивирусных инфекций. Было установлено, что оба исследованных флавивируса, родственных в антигенном отношении,но. различающиеся по вирулентности для мьппей при эксграневральном пути введения, способны инфицировать клетки центральных органов иммуногенеза и размножаться в них,как в острую,так и реконвалесцентную фазы инфекционного процесса, а также при формировании персистенции. Клетками-мишенями' дм вируса клещевого энцефалита и "Лангат в ранние сроки инфекции служат спленоциты, тимоциты и клетки костного мозга ' По способности прилипать к поверхности, чувствительности к анти^тета-сыворотке, и сыворотке против иммуноглобулинов мышей в цитотоксическом тесте пермиссивные для вирусов клетки '.в . селезенке зараженных животных охарактеризованы как макрофаги и Т-лимФоциты. Важно отметить, что при заражении вирусом клещевого энцефалита или Лангат у

мышей на фоне транзиторной иммунодепрессии, индуцированной однократным применением циклофосфана, наряду с увеличением доли вирус-продуцентов (из числа иммунокомпетентных клеток) в острой стадии инфекции наблюдается усиление фазы персистенции флавивирусов не только в тканях головного мозга, но и в органах иммунной системы.

Исследовано значение антител и отдельных эффекторов клеточного иммунного ответа (Т-лимфоцитов и их субпопудяций, эффекторов антителозависимой клеточной цитогоксичности, нуль-клеток) в клиренсе вирусинфицированных лимфоцитов в острой стадии инфекции вирусом клещевого энцефалита и значение их в предотвращении развития персистенции этого инфекционного агента. Эффект противовирусных Антител и факторов клеточного иммунитета оценивали после адоптивного переноса популяций спленоцитов ( взятых у зараженных вирусом КЭ доноров) реципи-• ентам, получавшим одновременно с заражением циклофосфан в дозе 200 мг/кг. Введение указанной дозы иммунодепрессанта сопровождается подавлением формирования вирусспецифических антител и Т-эффекторов гиперчувствительности • замедленного типа и цито-токеичности до 9 суток опыта, что позволяло оценивать эффект переносимых- эффекторов иммунного ответа Проведенные эксперименты продемонстрировали определяющее . значение вирусспецифи-чесгарс . антител и эффекторов антителозависимой клеточной цито-токсичности в клиренсе вирусинфицированных лимфоцитов при острой форме' инфекции. Способностью подавлять инфицирование флави-вирусом. лимфоцитов селезенки,как оказалось, обладают эффекторы антитело-зависимой клеточной щтотокси'пюсти в смеси с той дозой противовирусных антител,которая не вызывает угнетения процесса инфекции лимфоцитов (сами по себе клетки-эффекторы не эффективны). Положительное ' воздействие эффекторов актите-

ло-зависимой клеточной цитотоксичности подтверждается способностью к проявлению эффекта в отсутствии Н-2 рестрикции. Специфичность феномена демонстрируется результатами экспериментов, где эффект обнаруживается только при использовании в качестве сенсибилизирующих эффекторы антитело-зависимой клеточной цитотоксичности вирусспецифических гомологичных антител. Среди Т-клеток,как установлено, противовирусной- активностью, обладает смесь вирусспецифических Т-эффекторов гиперчувствительности замедленного типа и ГЗТ и циготоксических Т-клеток. Адоптивный перенос спленоцитов мышей, вакцинированных убитой вакциной против клещевого энцефалита и содержащих в своем составе только- Т-клетки с активностью эффекторов гиперчувствительности замедленного типа (Хозгаский,1989), не сопровождался снижением количества вируспродуцентов у зараженных вирусом клещевого энцефалита мышей-реципиентов. Учитывая это, можно полагать,что , клиренс вирусинфицирбванкых лимфоцитов при. остром зксперимей- . тальном клещевом энцефалите связан с присутствием в. популяции цитотоксических Т-клеток. Т-лимфоциты оказались неактивны в предупреждении развития персистентной инфекции вируса КЗ в.ти-моцитах реципиентов. ■

Закономерности формирования Т-клеточного аутоиммунного •

ответа при экспериментальной флавивирусной инфекции.

К началу нашей работы не было известно о возможности .индукции ответа клеточных аутоиммунных эффекторов при флавиви-)усном инфекционном процессе. Поэтому на первых этапах основ- • гое внимание было сосредоточено на разработке эксперименталь-юй модели для оценки способности Флавивирусов индуцировать даточный аутоиммунный ответ.

Используя технику локального (в подошву задней лапы) вве-. дения спленоцитов инфицированных флавивирусами доноров были выявлены лимфоциты, способные реагировать по типу эффекторов реакции, трансплантант против хозяина (РТПХ) в организме сиа-генного реципиента Реакцию регистрировали по увеличению подколенного лимфатического узла задней лапы с инокулируемой стороны. Как установлено, индукция таких клеток имеет место при инфекции мышей разными флавивирусами - КЗ,Лангат,Западного Нила, японского энцефалита, а' также при вакцинальном процессе у мшей, вызванном вакцинным штаммом вируса желтой лихорадки. Процесс активации эффекторов РТПХ на фоне флавивирусной экспериментальной инфекции носит временный и обратимый характер. В опытах с гирусом Лангат демонстрируется прямая зависимость выраженности ответа аутореактивных эффекторов РТПХ от дозы вируса, вводимого мышам. Регистрируемые в динамике реакции ин-, дексы РТПХ (при условии введения одинаковой дозы АЭртпх) возрастают постепенно.с 2-3 суток после трансплантации и до 9 дня включительно (срок наблюдения).

Доказано,что проявление РТПХ-активности спленоцитов не связана с наличием в суспензии клеток инфекционного или инак-тивированного вируса В тоже время развитие локальной РТПХ, индуцируемой сплёноциташ инфицированных вирусом Лангат мышей, блокируется в случае предварительной инкубации их с митомици-•ном С .воздействующим на пролиферагивную активность переносимых клеток (60 мг/мл). ^ Введение реципиентам популяции спленоцитов вирусинфицированных мышей,способных адсорбироваться на стеклянной ' поверхности,к развитию докальной РТПХ у сингенных реципиентов не приводит. С другой стороны,развитие реакции отменяется при обработке трансплантируемых спленоцитов зараженных доноров анти-тета сывороткой в присутствии комплемента, а

сыворотка против иммуноглобулинов мышей в условиях цитотокси-ческого теста не влияла на способность лимфоцитов участвовать в РТПХ в еингенной системе мышей. Совокупность полученных фактов позволила- отнести тестируемые клетки к аутореактивным Т-эффекторам.

Полученные нами данные расширяют представления о механизмах развития аутоиммунитета и его регуляции при флавивирусном инфекционном процессе. Оказалось,что в условиях отсутствия супрессорных механизмов (моделируемых, при последовательном сингенном адоптивном переносе аутореактивных Т-лимфоцитов,индуцированных вирусом Лангат), наряду с усилением активности аутореактивных эффекторов РТПХ происходит формирование аутоиммунных Т-эффекторов с цитотоксической активностью, 'способных лизировать in vitro 'сингенные клетки-мииени. Для развития эффекта усиления формирования аутореактивных лимфоцитов при -использовании сингенного адоптивного переноса необходимо полное или частичное совпадение антигенов главного комплекса гистосовместимости доноров и реципиентов аутореактивных лимфоцитов (принцип H-S-рестрикции). Поскольку развитие аутоиммунного патологического процесса у реципиентов наблюдают лишь . после проведения нескольких циклов переноса спленоцитов.на фоне возрастания активности аутореактивных эффекторов РТПХ и цй-тотоксичности. клинические признаки заболевания (адинамия,гибель животных) и инфильтративно - некротизирухдай процесс в различных органах животных связывается с синергичееким действием обоих популяций лимфоцитов. В отличие от результатов полученных в опытах с вирусом клещевого энцефалита (Хозинский. Семенов.ФролоБа.1985), в моделируемых нами условиях аутоиммунные поражения затраг'ивактг не только ткани висцеральных органов, ¡¡о и головного мозтг' пешпиентов. В связи с этим

логично предположить,что морфологические проявления хронического флавивирусного инфекционного процесса в мозгу, по крайней мере частично, могут быть связаны с параллельным эффектом вирусиндуцированных аутоиммунных эффекторов.

Следуя общепринятой точке зрения пролиферация аутореак-тивных клонов клеток представляет собой основной,если не единственный, механизм экспансии аутореактивности в организме инфицированного вирусом хозяина. Наличие разветвленной системы гуморальной регуляции активности иммунокомпететных клеток, наблюдения медиаторной роли системы интерлейкинов в • процессах активации лимфоцитов, опосредующих экспериментальный аутоиммунный энцефалит, а тага®,результаты наших экспериментов с сцнгенным адоптивным переносом аутореактивных лимфоцитов указывало, по нашему мнению, на возможность функционирования альтернативного пути лимфокиновой индукции аутореактивности в ор-. ганизме. В пользу высказанной гипотезы служат ц .результаты проведенных экспериментов с кариологическим анализом клеток селезенки у самок-реципиентов BALB/c (H-2b), которым за 6 суток до исследования переносили популяцию спленоцитав сингенных самцов BALB/c (Н--2Ь) .обогащенную аутореактивными лимфоцитами, индуцированными вирусом Лангат. Ожидалось,что е процессе нарастания активности вирусиндуцированных аутореактивных клеток среди пролиферирующих Т-лимфоцитов селеаенки самок-реципиентов_ будут обнаружены клетки донорского происхождения с кариотипом сингенных- самцов-донород, однако, этого не произошло. В последующем было установлено., что индуцированные вирусом Лангат. клещевого энцефалита,Западного Нила или желтой лихорадки ауторе-актитшые Т-лимфоциты способны продуцировать in vitro цитокин, активирующий аутореактявность Т-клеток интактных сингенных мышей (ЦАА). Для продукции аутореактинши Т-клетками НАД необхо-

дим интактный механизм синтеза белка, поскольку актиномицин Б, но не митоминин С.препятствует освобождению этого сигнального Фактора. Клетками-мишенями для ПАА являются Т-лимфоциты и действие ЦАА на них подчиняется правилу Н-2 рестрикции (в отношении лимфоцитов, продуцирующих сигнальный лимфокин). Выявленный секреторный.Т-клеточный лимфокин ЦАА весьма термолабилен, судя ' по чувствительности к обработке ферментом трипсином является веществом белковой.природы, и обладает небольшой молекулярной массой (8000-12000 дальтон),о чем свидетельствуют данные полученные при гель-хроматография ЦАА на колонке с Се-фадексом 6-25. -

Антигекнеспешфическая ишуномодуляция как фактор патогенеза флавивирусной инфекции и использование иммуномодуляторов. для

ее коррекции. . :

Признание вторичных иммунодефицитов в качестве элемента патогенеза вирусного инфекционного процессса ведет к необходимости рассмотрения антигеннеспепифической иммуномоду-ляции как фактора, определяющего исход сопуствующего инфекционного или вакцинального процессов, и разработки тактики имму-нокоррекции вторичных иммунодефицитов. '■

Нами исследовано влияние буньявируса Тахиня на течение и исход вызываемой флавивирусом Лангат инфекции, которая у беспородных мышей,как правило,протекает бессимптомно. Хотя каждый 13 'вирусов в отдельности не вызывал-значительной смертности :реди мышей зараженных грутт, этот показатель существенно воз->астал, когда мышам инокулировали оба вируса в брюшную полость' вирус Лангат через 4.дня после вируса Тахиня). Щж'инокуляции яруса Тахиня в брюшную полость,а вируса Лангат ' в мозг, при

одинаковых показателях летальности, отмечали удлинение средней продолжительности жизни, что может бьггь объяснено воздействием вирусиндуцированной иммунодепрессии на иммунопатологический компонент флавивирусной инфекции. У мышей, получивших оба вируса интраперитонеально,наблюдалось также увеличение длительности персистенции вируса Лангат в мозгу. Так,при сочетанной инфекции двумя патогенами вирус Лангат обнаруживается в мозгу клинически здоровых мышей на 56 и 114-й день в 18 и 3% случаев соответственно. У контрольных животных с моноинфекцией вирус Тахиня определялся до 25, а вирус Лангат до 35 суток эксперимента. Важно подчеркнуть,что персиетентное носительноетво вируса в ЦНС может приводить к существенным нарушениям функций этого органа,которые досточно легко выявляются при специальных методах исследования. Действительно, у мышей с так называемым бессимптмоным вирусоносительством обнаружено понижение ориентировочно-исследовательской активности по .сравнению с контрольной группой и группами животных,зараженных только вирусом Тахиня или вирусом Лангат. Об атом свидетельствуют результаты функциональной пробы с яошщью линейного лабиринта, поскольку время пробега мышей к пище в нем прямо пропорционально степени нарушения функции их центральной нервной системы.

Ситуации,когда имеет место суперинфицирование на фоне вирусиндуцированной иммуномодуляции,по-видимому,весьма распространены. В комплексе специфических -мероприятий, нацеленных на меры профилактики или ,,коррекции вторичных иммунодефицитов, многообещающим подходом по мнению ведущих специалистов является использование иммуномодуляторов (Allison;1986;Andronova, 1991). Используя модель инфекции вирусом Тахиня мы в экспериментах на мышах оценили воздействие-на развитие вйрусиндуциро-ванного иммунологического дефекта-иммуномодулятора природного

происхождения - анатоксина стафилококкового очищенного'(ACO) и синтетических аналогов мурамилдипептида стенки микобактерий (ГШШ и его дериватов). Эффективность перврго из них, связанная с его иммуномодулирующиш свойствами, была продемонстрирована при лечении острых и хронических воспалительных заболеваний различной 'локализации (Леонтьева,1988). Большой интерес в качестве иммуномодуляторов вызывают мурамилпептиды, открытые в ходе работ по поиску и идентификации адыовантного компонента микобактерий. Полученные глюкозаминшшурашшептиды, в частности,И-ацетилглюкозаминюН 1 -4) -N-ацетилмурамил-аланил-D-изоглутамин (ГМДП), моделируют фрагменты пептидогликанов клеточных стенок бактерий и являются прототипами целого семейства их аналогов и производных (Андронова,1989).• Анализируя данные, полученные при использовании в качестве тест-антигена эритроцитов барана, можно отметить иммунокоррегируюшую . активность исследованных иммуномодуляторов. Эффект ACO особенно . заметен в предупреждении развития у животных вторичного иммунодефицита, вызванного вирусом Тахиня. На фоне разьившегося вирусного инфекционного процесса применением ACO удается•лишь частично восстаноть нарушенную вирусом Тахиня иммунную реакцию мышей на гетерологичные.эритроциты. Эффект ГМДП наиболее ярко проявляется, когда его применяют в разгар вирусиндуцированной иммунодепрессии (на 7 сутки после инокуляции животным вируса Тахиня). Иммуюмокоррегирующая активность ACO, прослеженная в экспериментах по оценке формирования гуморального иммунного ответа на неинфекционный антиген, подтверждается и его способностью предупреждать вызываемое вирусом Тахиня обострение ге-терологичной инФекши вирусом .Лангат. Так, обычно усиливавшаяся под влиянием инфекции вирусом Тахиня гибель мвотиых с 12 до 47* от экстраневрального введения вируса Лангат, заметно сни-

жается (28%) в том случае,когда до инфицирования вирусом Тахи-ня животным инокулируют ACO. Сложность механизмов регуляции вирусного инфекционного процесса in vivo в условиях смешанной инфекции,когда один из возбудителей обладает иммунодепрессив-ныш свойствами,демонстрирует тот факт, что развивающаяся под влиянием сопутствующей инфекции вирусом Тахиня у мышей персистенция вируса Лангат в центральной нервной системе не предотвращается применением иммуномодулятора.

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Охарактеризованы закономерности развития антигеннеепеци-фической иммуномодуладии при экспериментальной флави- и бунь-явирусной инфекциях. Показано,что антигеннеспецифическая имму-номодуляция является обязательным компонентом иммунологических, событий, вызываемых как патогенными для человека,так и вакцинным флавивирусами.

2. Вирусиндуцированная антигеннеспецифическая иммуномоду-ляция при развитии острой и бессимптомной флавивирусной инфекции проявляется в транзиторных изменениях (усилении,угнетении) первичного иммунного ответа на гетерологичные антигены,формировании В-клеточной памяти,.индукции антигенспецифического иммунологического дефекта,количественных изменениях популяций и качественных 'сдвигах функций иммунокомпетентных клеток.

3. Количественные и, качественные параметры антигеннеспеци-фической имыуномодуляции при экспериментальной флавивирусной инфекции определяются действием комплекса факторов: биологических свойств возбудителя,его дозы,пути инфицирования, интервалом между инокуляцией вируса и тест-антигена.

4. Проявления антигеннеспецифической иммуномодуляции неод-

нозначны при флавивирусной инфекции мышей с генетически детерминированным сильным и слабым ответом на тимусзависимый тест-антиген. В первом случае наблюдается только эффект супрессии, во втором - обнаруживаются фазовые сдвиги иммунореак-тивности ( усиление-супрессия).

5. На примере экспериментальной инфекции вирусом Тахиня демонстрируется множественность возникающих в зараженном организме иммунологических дефектов - транзиторное ослабление гуморального и клеточного ответа на гетерологичный корпускулярный антиген,нарушение антигенпредъявляющей и фагоцитарной Функций макрофагов, усиление супрессорной активности Т-клеток.

6. Вирусиндуцированная антигеннеспецифическая иммуномоду-ляшя является существенным фактором, воздействующим на ход инфекционного или вакцинального процесса. Индуцированный бунь-явирусом Тахиня у мышей иммунологический дефект обусловливает . проникновение гетерологичного вируса Лангаг ■ в центральную. нервную систему, развитие персистентной'инфекции,сопровождающейся нарушениями ориентировочно-исследовательской активности.

7. Развитие эффекта стимуляции первичного иммунного ответа на гетерологичный антиген,наблюдаемого при экспериментальном клещевом энцефалите,носит характер фенотипической коррекции слабореагирующих ' на тимусзависимый гетерологичный антиген животных и обусловлено действием вирусиндуцированного гуморального фактора, обнаруживаемого в сыворотке крови.

8. Антигеннеспецифическая йммуномодуляция сочетается с. инфицированием флавивирусами разных популяций иымунокомпететных клеток зараженного хозяина. В экспериментах с вирусом клещевого энцефалита и Лангат продемонстрирована репродукция этих патогенов в макрофагах, селезенке и Т-лимфощтах гикуса и селезенки; Т-лимфоциты тимуса более иасто.чем ткани головного мозга

■служат резервуаром обоих возбудителей при развитии персистенг-ной■инфекции.

9. Выявлено участие вирусспецифических антител в развитии эффекта антитело-зависимого усиления репродукции вируса клещевого энцефалита в макрофагальных клетках и на этой основе разработан высокочувствительный антиглобулиновый тест определения вирусспецифических антител in vitro.

10. Реализация эффекта ограничения размножения в иммуноком-петентных клетках вируса клещевого энцефалита в ходе острого инфекционного процесса у мышей происходит при участии сенсибилизированных Т-клеток,антител и эффекторов антитело-зависимой клеточной цитотоксичности. Способностью предупреждать персистен-цию вируса КЗ в иммунокомпететных клетках хозяина обладают антитела и эффекторы антитело-зависимого клеточного иммунитета; сенсибилизированные Т-эффекгоры существенной роли не игра-, ш.

11.В ходе острой (вирус клещевого энцефалита) или преимущественно бессимптомной (вирус Лангат,Западного Нила) флавиви-русной инфекции наблюдается транзиторное усиление активности естественных киллеров, сменяемое при экспериментальном клещевом энцефалите .подавлением их функции на поздних этапах- инфекционного процесса. Подавление .активности естественных киллеров при инап'паратной инфекции мышей вирусом Тахиня сочетается со снижением естественной противоопухолевой резистетности организма.

12. Впервые при флавивирусной инфекции описано явление индукции' аутореактивных Т-клеток,определяемых по способности вызывать локальную РТПХ у сшгенных мышей, исследованы факторы определяющие этот процесс. Описан новый механизм активации аутореактивных Т-лимфоцитов в организме хозяина под влиянием ци-токлна.

- 33 -

13. Продуцируемый индуцированными вирусом Лангат Т-лимфоцитами цитокин белковой природы, способен активировать in vitro аутореактивность интактных Т-клеток в. течение часов и обладает молекулярной массой 8O0O-12COQ дальгон. Взаимодействие цитокияа с акцепторными клетками-мишенями, относимыми к Т-лимфоцитам - Н-2 рестрикгировано.

14. Развитие клинически выраженного аутоиммунного процесса у животных, моделируемое при сингенном адоптивном переносе вм-русиндуцированных аутореактивных клеток интактным реципиентам, наряду с поражением ткани селезенки,печени, сочетается с пато-морфологически выраженными изменениями ткани мозга.

15. Показана возможность предупреждения и исправления ви-русиндуцированной антигеннеспецифической иммуномодуляции с помощью иммуномодуляторов бактериального происхождения (анатоксина стафилококкового очищенного, синтетических аналогов мурамилдипептида).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Семенов Б. Ф. .Хозинский В. Е , Варгин а В. Гиперчувствительность замедленного типа .при острых и латентных инфекциях, вызываемых представителями рода Flavivirus. - Вестн. АМН СССР, 1974; 9, с. 60-65. . •

2. Варгин В. В., Семенов Б. 4>. Экспериментальные данные об изменении иммунологической реактивности хозяина под влиянием . ар-бовирусной инфекции.' - Природно-очаговые инфекции и инвазии. Сборник трудов,Вильнюс,1974,с.23-25.

3. Кармышева В.'Я., Фарутина Л. И. , Ипанникова Т. А...Варгин R В. . Семенов Б. & Иммунный цитолиз клеток.зараженных вирусом Синдбис. - Вопр. вирусол. .1974,2„о. 194-198.

4. Хозинский В. В. , Варгин В. В, Семенов Б. Ф. Изучение гиперчувствительности замедленного типа при экспериментальной инфекции вирусами денге 2 и клещевого энцефалита. - Арбовирусы СО. Тр. вып 1, Москва, 1974, с. 143-147.

5. Семенов Б. Ф. , Варгин В. В. , Хозинский В. В. Иммунопатологические реакции, воспроизводимые с арбовирусами.- Вестн. АМН СССР, 1974,10,11-18.

6. Варгин В. R , Зозинский В. В., Семенов Б. Ф. Влияние цикло-фосфана на развитие экспериментальной арбовируснрй инфекции у мышей. - Арбовирусы, Сб. тр. вып. 1. , Москва, 1974, с. 138-141.

7. Semenov В. F. .Vargin V. V. .Zschlesche W. .Veckenstadt A-L. Influence of certain immunodepressants on experimental and enterovirus infection in mice. - Intervirolog-y, 1975, 5,M 3-4 p. 220-224.

8. Seraenov B. F. Khozinsky V. V. ,Vargin V. V. The damaging • action of cellular- immunity in flavivirus infections of mice. - Medical biology, 1975, v. 53,p. 331-336

9. Zschieschew V. ,Vargin V. V. Graft-versus-host reactivity of' Langat virus-infected spleen cells in syngeneic mouse system. - Acta virol. 1975,v. 20,p. 445

• Ю.Семенов Б.Ф. , Варгин В.В. Особенности течения вакцинального процесса при иммунизации против клещевого энцефалита у животных с подавленным иммунитетом. - В сб:-Вопр. мед. ви-русол. Тез. конф. (18-я), Мэсква 1975, с. 56-58.

11. Варгин -В. В. Влияние фитогемагглютинина на течение фла-вивирусной инфекции. - В сб. Еопр. мед. вирусол.,Тез. конф. (18-я),

' Москва,1976,с. ^4-55.

12. Савинов А. П., Хозинский В. В. .Семенов Б. Ф.. Варгин В. В. Морфологическая характеристика инфекционного процесса у животных обработанных иммунодепрессангами. - В сб. Вопр. мед. ьи-

- 35-

русол. , Тез. конф. .Москва, 1975,с.50-61.

13. Варгин В. В. .Семенов Б. Ф. Особенности течения вакцинального' процесса при иммунизации против клещевого энцефалита' у животных с подавленным иммунным ответом. - В сб. Вопр. мед. ви-русол. , Тез. конф. Москва, 1975, с. 56-58.

14. Варгин В. В. , Семенов Б. Ф. . Адьюватное и иммунодепрессив-ное действие арбовирусов разных антигенных групп. - В сб. Вопр. мед. вируеол. Тез. конф (18-я), Москва, 1975, с. 55-56.

15. Варгин В. В. .Семенов Б.Ф. Изменение иммунного ответа хозяина к гетерологичному антигену под влиянием тогави-русной инфекции. - Вопр. вируеол. ,1976, 2. с. 150-154.

16. Варгин В. В., Семенов Б. Ф. Взаимодействие некоторых тога-вирусов с иммунокомпетентными клетками хозяина - В кн. Тез. докл. 16 Всесоюзного съезда, микробиол. и эпидемиол., Москва,1977,ч. 3,с. 29-30. ' . '

17. Semenov В. F.,Khosinskv V. V. ,Vargin V. V.- Damaging action of immune response in experimental flavivirus infection in mice. - Intern. Congr. Virol. ,3,Abstr. ,Madrid,1977, p. 52.

18. Взаимодействие некоторых тогавирусов с иммунокомпетентными клетками хозяина - В кн.- Тез. докл. 16 съезда микробиол. .и эпидемиол., Москва , 1977. с. 29-30.

19. Zcshiesche'W. .Vargin V. V. GVH reactivity of spleen cells from virus-infected mice after syngeneic transfer. - 4th Intern. Congr. Virol. Abstr. Haague 1978, p. 91.

20. Semenov B.'F., Vargin V.'V. Nonspecific interaction of,some Toga- and Bunvavirus and. Flavivirus vaccinees with immunocompetent cells. - In: Viruses and environment.Chapter 25. Acad. Press. Montreal ,1978. p. 507-514.

21. Варгин В. В. . Семенов В. Ф. Особенности ответа мышей с временной иммунодепрессией на рдение живой или. инактивиро-

-зеванной вакцины против клещевого энцефалита - Вопр. вирусологии, 1979,1,0. 52-58.

22. Варгин В. а .Семенов Б. Ф. -Характеристика аутсреактивных Т-лимфоцитов, формирующихся при экспериментальной инфекции вирусом Лангат. '- Иммунология, 1980, 2, с. 154-157.

23. Semenov B.F. .Khozinskv V. V. , Van? in V. V. - Immunologic events in experimental flavivirus, infections. - .In: 4th Intern. Congr. Immunol., Abstr. Paris, 1980, p.97.

24. Варгин В. В. Характеристика неспецифических иммунных реакций при вирусных инфекциях. - Вирусы ' и вирусные инфекции. , Тез. конф. 19-21 мая, 1981, Москва, с. 135. •

25. Варгин В. Н, Семенов Б. Ф. - Влияние вируса Тахиня на персиотенцлю вируса Лангат в центральной нервной системе мышей. - Вопр. вирусов. , 1981, 6, С. 724-728.

26. Semenov B.F. ,Khozisky V. V. ,Vargin V. V. - Immunopathology , and iranunoregulatory of tick-borne encephalitis. - . In:5th Intern. Congr. Virol. Abstr. Strasbourg, 1981, p. 137.

27. Варгин В. В. .Семенов Б. Ф. - Чувствительность к вирусу клещевого энцефалита разных популяций клеток иммунной системы щ-шей. - Журн. ыикробиол. зпидешюл. иммунол. , 1983, 11, с. 75-78. '

■ 28. Варгин. & В., Семенов Б. Ф. Угнетение функции макрофагов мышей при экспериментальной инфекции вирусом Тахиня. - Вопр. вирусов 1983, 2, с. 235-238

29.Vargin V. V. .Semenov В. F. - Changes of natural killer cell activity in different mquse lines by acute and asymptomatic Flavivirus infections. - Acta virol. ,1986, v. 30,p. 303-308

30.Ожерелков С.В. ,Варгин ЕВ. .Семенов Б. Ф.-Влияние экспериментального информационного и эмоционального стресса на первичный иммунный ответ у мышей пвзных линий. - Журн. микробиол. зпи-демиол. иммунобиол., 1985, И 8, с. 43-46.

31. Варгин Е В. Особенности взаимодействия вирусов клетевого энцефалита и Лангат с нммукокомпетентныш клетками мышей. - В кн. : Актуальные пробл. мед. вйрусОл. ,Тез. докл. конф. , Москва,21-23 мая 1985 г. , с. 81-81.

32. Варгин В. В. .Семенов Б. Ф. Персистениил вирусов клещевого энцефалита й Лангат ' в тимоцитах мышей при экспериментальной йнфекциИ на фоне имйунодепрессии,индуцированной циклофосфа-Ном. - Вопр. вирусол. , 1985, N5, с. 577-581.

33. Varçih V. V. ,3emenov В. F. formation of autoimmune effectors after transfer of virus-induced autoreactive precursors to syngeneic intact recipient ' an i nals. - Acta virol. , 1987,,v.31, p. 481-488.

34. Варгин В. В., Семенов Б. Ф. Модификация на фоне экспериментальной флавивирусной инфекции формирования В-клеточной иммунологической памяти к гетерологичному антигену. -Вопр. вирусол., 1988, N 4, с. 476-479

35. ВаргиН В. В., Семенов Б. Ф. Влияние индуцированной вирусами антигеннеспецифической супрессии на формирование анти-генспецифического иммунологического дефекта. - Вопр. вирусол., 1989,' И, с. 446-449.

36. Варгин В. В. , Стобецкий В. И. Активация аутореактивности интактных Т-клеток мышей под влиянием цитокина,продуцируемого вирусиндуцированными аутореактивными Т-лимфоцитами. - Тез.17 еьезда Всесоюзного общества эпид. микробиол. и парази-тол. , им. И. И. Мечникова. Алма-Ата, сентябрь 1989 г. ; Москва,.1989, Т. 2,0.43-44.

37. Семенов Б. Ф. .Варгин ЕВ. - Иммуномодуляша при вирусных инфекциях. - Итоги . науки. И техники ( под ред. Пинегин Б. В. ), ВИНИТИ.кэсква.серия ВирусологияЛ989,т. 17,161 стр.

33. Semenov В. F. . Vare:in V, V. .Khosinsky V. V. Antigen-nonspe-

cific immunosuppression . arid persistence of Flavjviruses in the cells of the immune system' and central nervous svstem of experimental animals.-Oth Intern. Conf. on comparative and appl. Virology. ,1989,october 15-21 .Canada,W8-V.

39. Semenov B. F. .Vargin V. V. .Khozinsky V. V. .Ozherelkov S. V. Persistence of tick-borne encephalitis (TBE) virus complex .in cells of the immune and the central nervous systems of animals with transient . imrmodeficiancy. - 2nd Svsmposium on Arboviruses - in tiie Mediterranean Countries.24-29 Septemberl989,Dubrovnik,S68.

40.Семенова И. Б. .Варгин В. В. Влияние антигеннеспецифи-ческого иммуномодулятора - очищенного стафилококкового анатоксина (АСО) на Формирование и проявление временного антк-генспецифического иммунологического дефекта (ЛСИД). - 1-ый Ееесоюзный съезд иммунологов - ноябрь 1989 г. Дагомыс: Тез. докл. М. Д989.',е,т.2. .с.275.

41. Варгин Е, В. .Семенова И. Г., Акатов А. К. Анатаксии стафилококковый очищенный {АСО) коррегирует приобретенный антигенспенифический и антигеннеслецифический иммунологические дефекты. - В кн, Рабочее совещание. - Иммуномодуляторы природного происхождения. Владивосток 9-10 октября 1990,. с. 748-49.

42. Semenov В. F. , Vargin У. V. , Ozherelkov ' S. V. ■. Mixed infection with two low-pathogenic viruses include high death rate at the acute stage of the disease and.t'.-э development of. viral persistence in the central nervous systew. - In. Abstr. of 8th'.Intern, congr. Virol. .Berlin, 1990,61-002, p. 403.

43. Vargiri V. V. .Semenov В. K. Changes of natural killer cell activity induced in different mouse strains bv acute and svinpthomtic flavivirus infection. - In. Abstr. of 8th Intern, coii^r. Virol. .Berlin, 1990,61-001, p: 403.

44. k!aw?30B ¡Í. К. . Семенов 0. Ф. . Оявведков С. Б.. Варгик В. й., Тоешалина Е. tí , Фироова Г. А. Влияние персистеитной вирусной инфекции на естественную противоопухолевую резистентность. -Вопр. вирусол. , 1991, т. 36,N 2,стр. 125-127.

45. Vare in V. V. .Semenov ' В. F. ,Stobetskv V. I. T-cells of virus-infected mice produce a lvmphokine vchih activates the autoreafitivitv of intact mouse lvmphocvtes. - Acta virol. , 1991, ,v. 25. p.50-53