Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Вазидиомицетные дрожжи (таксономия и экология)

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Вазидиомицетные дрожжи (таксономия и экология)"

РГБ ОА

1 О 1535

ГОЛУБЕВ ВЛАДИСЛАВ ИВАНОВИЧ

Б А 3 ИДИ О И ИЦЕ ТНЫЕ ДРОЖЖИ

(ТАКСОНОМИЯ И ЭКОЛОГИЯ)

(03.00.07 микробиология}

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Пущина - 1995

Работа выполнена в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов

Российской академии наук

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Е.Л. Головлев

доктор биологических наук, чл.-корр. Технологической АН РФ,

профессор

доктор биологических наук, профессор

Н.В. Градова Е.П. Феофидова

Ведущее учреждение: Кафедра биологии почв, факультет почвоведения.

заседании специализированного уч<_ . _ ,, ____ _______сти-

туте биохимии и физиологии микроорганизмов РАН, г. Пущино Московской области, 142292

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии фиаиологии микроорганизмов РАН

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносов*

Защита диссертации состоится

на

Автореферат

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

В.М. Вагабов

ЫЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. На протяжении всей истории человечества сд оклеточные грибы ''дрожжи) - наиболее широко используемые микроорга-измы как б исследовательской, так и практической деятельности. Целые аучные дисциплины (знзимология, клеточная биология, радиобиология) едут начало от пионерских работ, выполненных с использованием дрожжей, стамцихся и сейчас наиболее удобными и благодарныыми объектами иссле^ ований, а масштабы их практического применения просто не сопоставим»-' какой-либо другой группой микроорганизмов.

Сказанное относится, однако •■ С 3 ы»яв" ^ »ажсшв ив

звестных г.е"—,; ^тло ¿адов »гг.«,«, сведения о большинстве кото-ы* г-р^опи.сапилми видов. Более того, в последние годы

скрыта чрезвычайная гетерогенность дрожжей, что не позволяет или де-ает сомнительной экстраполяцию накопленной на единичных видах (прежде сего, сахаромицетах) информации на другие дрожжевые организмы, уже на ровне категорий самого высокого таксономического ранга принадлежащие разным группам эумицетов. Вопреки распространенному мнению о всех рожжах как примитивных аскомицетах, в 60-70-х гг. у ряда аслорогекных вдов (рассматриваемых-обычно несовершенными аналогами аскоспороЕых) Знаружены жизненные циклы базидиомицетногс типа. Это открытие индуци-ОБадо поток исследований, благодаря которым разнообразие и объем мира азидиомицетных дрожжей в настоящее время стремительно расширяется, уыественно изменяя представления о филогении и эволюции грибов. Среди азидиомицетных дрожжей встречаются как патогенные, так и сапротрофные рганизмы, практическое использование которых значительно расширяет ссортимент продуктов, получаемых с помощью одноклеточных грибов.

Цель и задачи исследований. Цель работы - характеристика осноекы.ч зпектов биологии базидиомицетных дрожжей, оценка их биораелообразия и аксономического положения, в соответствии с которой решались следуйте задачи:

- изучение распространения базидиомицетных дрожжей в природе и свя-анных с ятим их биологических особенностей;

- выявление и исследование наиболее характерных морфологических, ци-элогических и фивиолого-биохимических свойств, отличающих их от аско-вдетных или полезных для диагностики и дифференциации внутри ба&идио-лцетных дрожжей, а также имеющих прикладное значение;

- поиск штаммов-киллеров среди базидиомицетных дрожжей и таксономи-

ческая оценка антагонистических взаимоотношений, обусловленных секр( цией микоцинов;

- достижение телеоморфных состояний базидиомицетных дрожжей и локаш вация их среди основных групп базидиомицетов.

Материалы и методы исследований. Изучено несколько тысяч культ' дрожжей, основной массив которых выделен путем высева из разведений i агариаованные среды из различных природных источников. Их идентифик; ция проведена согласно рекомендуемым методам с использованием cpi фирмы Difco (США) при сравнении с типовыми штаммами видов, полученны) из ВКМ, коллекции дрожжей каф. биологии почв МГУ, коллекций Нидерла) дов, Словакии, Японии, Австрии, Германии, Португалии и США. В рабо' использованы методы культивирования, получения протопластов, дезинтеi рации клеток, световой и электронной микроскопии, ЯМР, спектрофотоме' рии, определения знзиматической активности, радиоактивных изотопо] выделения и анализа состава полисахаридов, нуклеиновых кислот, коэнв] мов Q, ссылки на описания которых указаны в соответствующих глава; Описаны методы получения внеклеточных полисахаридов, декапсулировани; выявления микоциногенных штаммов, разработанные или модифицирован» нами.

Научная новизна. 1. Установлен таксономический аффинитет 38 вид! аспорогенных дрожжей. Выявлены телеоморфы у базидиомицетных несове' шенных организмов Apioirichum osvaldii, Bensingtonla intermedia, Rh domyces dendrorhous (Phaffia rhodozyma), Sporobolomyces philippovii Sp. tenuis. Описаны новые для базидиомицетных дрожжей тип полово процесса, род и три вида.

2. На основании сравнительного ивучения состава капсульных и вн клеточных полисахаридов выявлены маркерные моносахариды для дрожж головневого и тремеллоидного аффинитетов.

3. Показано, что капсула представляет собой отдельную клеточную о ганеллу, отличающуюся от клеточной стенки дрожжей как по ультрастру туре, химическому составу, так и в функциональном отношении.

4. Установлено функционирование у дрожжей глюкуронат-гулонатно пути катаболизма i-инозита при ассимиляции его в качестве источни углерода и энергии.

5. Благодаря таксономически обоснованному выбору тестерных чувстЕ тельных культур микоциногенная активность обнаружена у 16 видов ? р дов и впервые также у дрожжей обнаружено образование микроцинов. Выя лена корреляция группирования дрожжей по микоциночувствительности

жнейоими таксономическими критериями и продемонстрирована аффектов-scib использования микоциноь ь таксономических исследованиях.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Известные базидиомицет-ie дрожжи, sa исключением Xanthophvllomyces gen. nov. , лредстаьллют ¡бой одноклеточные стадии онтогенеза организмов, родственных головне im или тремелловым грибам.

2. Еазидиомицетные дрожжи распространены повсеместно и особенна '8К0 доминируют Е. микобиоте высокоширотных, пустыни'!г „

;гионоб.

3. Полисахави>""г .-.»¡ov*= "^--„¿пгляст собой отдельную ор-•"C-av, «"!тсушв «отсрий выключаются в улучшении на меточном

трагического режима при низком содержании питательных веществ в >еде и смягчении действия резких флуктуации влажности.

4. Имеющие капсульное происхождение внеклеточные полисахариды дрожай тремеллоидного аффинитета содержат, кроме гексоз, ксилову, а у югих дрожжей головневого аффинитета - фукозу. Наличие этих маркерных «аров характеризует таксоны выше родового уровня.

5. Как и другие эукариоты, дрожжи катаболизируют i-инозит б качест ! источника углерода и энергии по глюкуронат-гулонатнему пути, '.'по )бность утилизировать i-инозит и.'или D глюкуронат в основном присуща южжам тремеллоидного аффинитета.

6. Среди базидиомицетных дрожжей широко распространен антагонизм, 'условленный секрецией ими микроцинов или микоцинов. Чувствительность последним таксоноспецифична и с учетом ростовых фаз, диапазона дей 'Бия может быть испольаоЕана в качестве нового инструмента в таксоне :ческих исследованиях.

Практическая ценность работы.

1. Сформулироьаны состав сред и условия инкубации, стимулир.'ющие равование дрожжами внеклеточных полисахаридов;

2. Разработаны методы получения капсульных веществ дрожжей;

3. Даны рекомендации по подбору чувствительных культур, условиям стирования для выявления микоциногенных штаммов;

4. Обоснован и апробирован глюкуронатный тест, позволяющий в боль-;встве случаев дифференцировать дрожжи тремеллоидного и головневого финитетов.

5. Выделены, изучены и депонированы в крупнейших коллекциях около О штаммов дрожжей, в том числе активных продуцентов внеклеточных по сахаридов, липидов, антифунгальных соединений и некоторых ферментов.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конф ренции молодых ученых (Москва, 1968), 15 чехословацкой конференции электронной микроскопии (Прага, 19??), советско-американской конфере ции "Методы и результаты исследований смешанных культур микрооргани мов и новые ферментационные процессы" (Рига, 1981), 5-? съездах В] (Ереван, 1975, Рига, 1980, Алма-Ата, 1935), на Всесоюзных конференци: "Результаты и перспективы научных исследований микробных полисачар; дов" (Ленинград, 1978), "Биосинтез ферментов микроорганизмами", "Мм роорганизмы - стимуляторы и ингибиторы роста растений и животны: (Ташкент, 1988, 1989), "Микроорганизмы как компонент биогеоценоза "Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации раст< ниеводства и кормопроизводства" (Алма-Ата, 1982, 1990), на междунаро, ных симпозиумах: по химии углеводов (Братислава, 1974), взаимодейств: аналитической химии и микробиологии (Колумбия, 193?), "Микозы и имм: нодефицит" (Ленинград, 1991), "Сгур1ососсиз и криптококкоз" (Мила 1993), на 3, 5, 7, 14, 15 специализированных (Хельсинки, 1973, Кечел! 1977, Валенсия, 1931, Смоленицы, 1990, Рига, 1991) и 5, 7, 8 общ симпозиумах по дрожжам (Лондон, 1980, Перуджа, 1988, Атланта, 1992), микологическом конгрессе (Ванкувер, 1994).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 108 печатных р; бот и получены 3 авторских свидетельства на изобретения.

Объем и структура диссертации. Общий объем: £85 машинописных стр; ниц, в том числе 49 рисунков, 58 таблиц и библиография, включающая 5! наименования. Работа состоит из введения, восьми глав, заключения, ы водов и двух приложений. -

Автор глубоко благодарен коллегам-соавторам (см. список публик. ций), без помощи и участия которых в исследованиях многие зксперимен' не были бы осуществлены и особенно признателен И.П. Еабьевой (МГУ; первому моему учителю в мире дрожжей.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Эволюция понятия "дрожжи". Еще в прошлом веке было док< зано, что дрожжи являются истинными грибами, однако до настоящего вр< мени сохраняется противопоставление их друг другу ("грибы и дрожжи"' Анализ истории зимологии показывает, что таксономический смысл, суб-ективно вкладываемый в понятие "дрожжи", - следствие замкнутости этс дисциплины в себе, обособления от общей микологии, обусловленного кг

зключитевькой экономической важностью отдельных ьздов, так и бахьвнма величиями в методах изучения. Далеко зашедшая автономизацня н првяму-9СТССННО прагматическая ориентация исследований, объекты которых были граяичепы всего несколькими аскомицетными видами, весьма отрицательно казались на развитии общей симодогии. Лишь в последние :30-"0 лет по гаьились экспериментальные дачные, вскрывшие огромно* разнообразие рояхевых оргаиибмов, уже на уровне самых высоких таксономических рая-эв стнзсявссса к равным группам зумицетов. Значит« « о-т^—-

0 сейчас возрастающую часть доо»™«'- ср;а-№мы, предстда»""^..^ очл"» раавития видов, родст-

пых тп.-^лок"» «итегпеьым грибам. Понятие "дрожжи" не имеет "^п-ляггеской ценности, а означает одноклеточную ассимилятивную зко-эрфу (жизненную форму) зумицетов.

Глава !. Предьгсторкя изучения базидаомицетных дрожжей. Отсчет истиной истории их изучения следует вести с описания жизненного цикла у Ьос!оЬоги1а ^1иИтз (Ваппо, 1967), включающего конъюгацию клеток эмплементарных типов спаривания, формирование дикарионного мицелия с эяжками и телиоспорами, прорастающими септироваяпой ¿авидией, т.е. эисущего представителям пор. {ЬШаета1ез. У** б свете чтого откры-1Я сказалось возможным дать надлежащую оценку предыдущих ¡кслчзосшп»» >дственных организмов {5рог1ЛсЬо1из, }оЬвзМ1ит) и начавшим накапываться к этому времени ультраструктурным и хемотаксономическнм хара-геристикам. До этого же большинство автороЕ рассматривало все аепоро-гнные дрожки как несовершенные аналоги аскоспоровых, в силу чего дав-з известные организмы, относимые сейчас к базидиомицетным, обычно шсывшш в составе родов аскомицетных дрожжей. Скудный набор приана->в, бывший в то время в распоряжении исследователей, обуславливал вы-'жденное завышение таксономического веса культуральных, морфологичег-IX и физиологических признаков, большинство которых, к<зк впоследствии но покааано, носят штаммовый характер и изменчивы в зависимости от :ловий роста.

Глава П. Морфология и цитология. На уровне светооптической микро-¡опии вегетативные клетки базидиомицетных дрожжей довольно одноооб-шны, вследствие чего в целях их дифференциации до недавнего времени :иленно эксплуатировались из морфологических признаков различия в юсобности к образованию псевдомицелия и истинного мицелия, использо-шшиеся для разграничения таксонов не ниже родового уровня. Результа-

1 наших исследований, однако, показывают, что отрицательные по этим

свойствам организмы нередко образуют мицелиальные структуры с возрг том, а также обычны случаи выделения культур, идентичных по физиолог биохимическим и хемотаксономическим признакам, и различающиеся лишь образованию псевдо- или истинного мицелия. Параллельно этому наблюг лось как спонтанное возникновение мицелиальных и амицелиальных кдо! у Cryptocaccus spp., так и в результате обработки нитрозогуанидинс На основании этих данных мы пришли к заключению о неправомерности Д1 ференциации родов дрожжей по способности к образованию псевдо- и \ тинного мицелия и предложили виды базидиомицетного аффинитета Candi amylolenta, С. curvata, С. humicola, С. marina и С. podzolica перенс ти в род Cryptococcus.

Обнаружение в последние годы у ряда базидиомицетных дрожжей тел« морфных стадий показало, что основным условием формирования у них i тинного мицелия является состояние плоидности культур. Как правш одноядерные гаплоидные культуры представлены дрожжевой фазой, скреп вание которых, образование дикарионов (аналога диплоидии) ведет к фс мированию субстратного истинного мицелия с пряжками. Таким образе принципиальное различие между аскомицетными и базидиомицетнымн дрожа ми состоит в том, что обычно у первых жизненный цикл может протек* полностью в дрожжевой фазе, тогда как у вторых последняя таксономич« ки не самостоятельна, а является стадией онтогенеза. Исключением hbj ется описанный нами род Xanthophyllomyces, характеризующийся новым г базидиомицетных дрожжей типом полового процесса - педогамией, при > торой дикарионное состояние очень кратковременно.

Культуры почти всех базидиомицетных дрожжей имеют слизистую kohci тенцио (в противоположность пастообразной у большинства аскомицетны? обусловленную присутствием вокруг клеток капсулы, что является од! из примечательных их цитологических особенностей. Наличие капсулы щ суще многим впифитным и почвенным дрожжам, но до наших исследований изучение (как возможного фактора вирулентности) проводилось лишь у ¡ тогенного вида Cr. neoformans. Проведенная электронная mhkpockoi ультратонких срезов клеток представителей разных родов и видов аско-бааедиомицетных дрожжей выявила однотипность у них ультраструктур1 организации капсул, составленных радиально отходящими от наружной i верхности клеточной стенки микрофибриллами. Для изучения химическс состава капсульного материала разработаны способы декапсулирова) клеток (Гл. VIII) и анализы полученных препаратов показали, что к; сульныи материал представлен полисахаридами, в состав которых у ба

з. 1. Рост (—), количество почкующихся клеток (-о-) и толщина капсул (•) при выращивании СгурЬососсиз тарпиз ВКМ У-2242 в маннозо-пептонной среде (АНКУМ-2, рС^ - 70-90%, рН - 6,0, 20°С).

редуктаза дегидрогеназа

оксигеназа НАДФ-Нд НАД

1-инозит -Т""""" °~глюкУР°Н0Бая —1--гулоновая -—

С^ кислота НАДФ кислота НАД-Н2

декарбоксилаза

8-окси-Ь-гулоновая кислота

ч

со,

Ь-ксилулева

редуктаза

НАДФ-Н>

V"

НАДФ

дегидрогенава НАД

->т—

НАД-Н2

0-ксилулеза ■

пентозныи цикл

2. Глюкуронат-гулонатный путь катаболизма ¿-инозита дрожжами.

диомицетных дрожжей, кроме гексоз, входят дезоксигексовы, пентозы уроновая кислота, имеющиеся в составе также внеклеточных полисахар! дов (Тайл. 1), но отсутствующие в стенках, где обнаруживаются глюкоз; манноаа и глюковамин. Найденные различия в ультраструктуре, химическ< составе привели к заключению, что капсула дрожжей не является част) клеточной стенки, продуктом ее "сверхсинтеза", а представляет отдел] ную клеточную органеллу. Наиболее активно капсулообравование идет молодых, но полностью сформировавшихся клеток. В этот период (середи; -конец логарифмической фазы роста) вначале в центральных частях цит> плазмы, а затем по периферии клеток наблюдается обилие зон и везикул фибриллярным материалом, идущим, очевидно, на построение капсул. То. щина их максимальна в начале стационарной фазы роста, после чего нач: нается отделение и растворение капсульного материала, накопление среде внеклеточных полисахаридов, что сопровождается повышением вя кости среды (Рис. 1). Капсулообравованию благоприятствуют повышен« концентрации легко усваиваемых Сахаров и факторов роста, понижена содержание азотистых веществ и температуры инкубации, слабокислые вн. чения pH среды и усиленная аэрация. По отношению к этим условиям рос не найдено существенных различий в потребностях для капсулообразован: между патогенными и сапротрофными дрожжами.

К настоящему времени выявлено несколько критериев, позволяющих дм ференцировать дейтеромицетные дрожжи на организмы аско- и базидиом: четного аффинитета. Используемые для этих целей фйвиолого-биохишче< кие характеристики имеют, однако, немало исключений и ограничена Единственным сейчас признаком, однозначно указывающим таксономическ аффинитет, является ультраструктура клеточных стенок вегетативных кл ток. При обычных методах фиксации и контрастирования срезов у аском: цетных дрожжей стенка представлена двумя основными слоями, ревко ра личающимися по электронной плотности, а у. баэидиомицетных она состо из множества тонких электронноплотных и средней плотности слоев. Ул траструктура клеточных стенок нами исследована у нескольких десятк видов дрожжей, ранее не изучавшихся в этом отношении, в результате ч го установлен аскомицетный или базидиомицетный аффинитет, соответс венно, 11 и £7 видов несовершенных дрожжей.

Глава III. Физиологические особенности. Базидиомицетные дрожжи ра нообравны по физиологическим свойствам и достаточно четкие обобщен возможны лишь в отношении отдельных характеристик. Как правило, о обладают невысокой осмотолерантностыо и осмофилы среди них отсутству

завляющее большинство их ауксотрофы, нуждающиеся в биотине и обычно <же в тиамине. Среди базидиомицетных дрожжей отсутствуют психрофоб-5 организмы, большинство является мезофилами и нередко психрофилами максимальными для роста температурами около 30° или 20°С. За исклю-г!ием патогенного вида Cr. neoformans, ни один не растет при темпера-зах выше 37*С. Минимальные для роста температуры обычно - 0°, -1*С, i многих изолятов из полярных регионов -3', -Ч'С. Судя по скорости :та, оптимальные температуры обычно на 3-5"С ни*° ••^'.^.мам^г-:-, т оценивать по накапливаемой ояя к »чя!пии.яои.

В отличим мног»» которых сбраживают сахара, все

«я дрсжжи утилизируют их только аэробно. Слабая

здильная способность отмечена лишь у 4Z от известных видов. Традицию различия по способности к утилизации углеродных соединений ис~ ¡шзуются для видовой идентификации дрожжей. Исключением является цист, i-инозит, способность к ассимиляции которого как единственного гочника углерода и энергии широко используется в качестве родовой эактеристики. До наших исследований имевшиеся сведения о катаболизме того соединения дрожжами были крайне противоречивы: одни указывали наличие ино80зо-глюконатнсго пути, присущего прокариотам, другие -журонат-гулонатного, функционирующего у эукариот (Рис. 2). В ре-штате обследования почти всех известных видов обнаружено, что за ;нь редкими исключениями, все ассимилирующие инозит дрожжи утилизи-зт также и глюкуронат. Напротив, не имеется корреляции между способ-;тью усваивать инозит и инозозу, глюконат и кето-глюконаты, интерме-1ты инозозо-глюконатного пути. У выращенных на инозите дрожжей уста-¡лено наличие ферментов глюкуронат-гулонатного пути: инозит-оксиге-ш (1.13.1.11), глюкуронат-оксидоредуктазы U.1.1.19) и ксилит-де-(рогеназы (1.1.1.9), но инозит-дегидрогеназа (ключевой фермент ино-ю-глюконатного пути) не обнаружена. При инкубаиии с инозитом- -^^С !ди меченых интермедиатов идентифицированы глюкуроновая и гулоновая :лоты. Совокупность полученных данных позволила заключить, что ката-газм i-иновита дрожжами осуществляется по глюкуронат-гулонатному пу-функционирование которого и обуславливает наличие у них способнос-ассимилировать как этот циклит, так и D-глюкуронат. Выявлено вначи-ibHoe число видов дрожжей, утративших, очевидно, способность к прогнию первого этапа глюкуронат-гулонатного пути (окислительное растение 6-углеродного кольца (Рис. 2) или транспорту инозита в клет-но ассимилирующих глюкуронат. Способность к утилизации последнего

коррелирует с важными таксономическими характеристиками дрожжей (Г VII).

Глава IV. Биохимические характеристики. Предположения о баэидиом цетной природе некоторых дрожжей были выдвинуты еще в начале века, лишь развитие, наряду с ультраструктурными, хемотаксономических иссл дований предоставило для них надежную экспериментальную основу. Так как и мицелиальные базидиомицеты, родственные им дрожжи характеризуй ся ядерной ДНК ГЦ-типа, тогда как аскомицетные -_АТ-типа. В целом т кое различие подтверждено при изучении подавляющего большинства дрс жей, однако обнаружено немало видов с почти эквимолярным содержала пар оснований и в отдельных случаях аскомицетные дрожжи с ДНК ГЦ-тиг а базидиомицетные - АТ-типа. Подобные примеры (Cr. magras var. ate Metschnikowia Innata, Taphrina sp.) выявлены и нами при изучении 9 г дов аскомицетных (35,5-49,6 мол.%) и 11 видое базидиомицетных (43, 61,2 мол.% ГЦ) дрожжей. Перекрывание имеет место у них и по преобла? ющим типам кознзимов Q, что усиливается присутствием минорных типе содержание которых колеблется в зависимости от возраста и условий i ращиБания. В частности, у Atractogloea stillata, Cr. elinovii, ( fuscesceiis, Cr. podzolicus преобладает Q-10 я имеется также минор! компонент - Q-'Э, у С'г. curvatus, Cr. hutnicola, Sirobasidium magni кроме Q-9, присутствуют Q-8 и Q-10. По зтим причинам указанные пока; тели при идентификации могут быть использованы лишь в комплексе с д] гими признаками.

В отличие от аскомицетных, внеклеточные полисахариды которых сод< жат лишь гексозы, базидиомицетные дрожжи часто продуцируют гетеропо, сахариды, имеющие в составе также пентозы, дезоксигексозы и нере, глюкуроновую кислоту (Табл. 1). Количество образуемых этих полимеро содержание отдельных моносахаридов значительно колеблются в зависим ти от штамма и условий культивирования, но качественный состав пост нен и однотипен для видов таксономически родственных и гомогенных дов. Напротив, гетерогенные по другим характеристикам роды гетероге также и по качественному моносахаридному составу внеклеточных и к сульных полисахаридов, которые в атом отношении идентичны. В частно найдено, что виды Cr. lactativorus, Cr. melibiasum, Cr. hinnuleus и phylloplanus в противоположность остальным криптококкам не имеют в лисахаридах ксилозы и на этом основании нами было предложено исключ их из состава рода Cryptococcus. Как показало изучение ультраструкт клеточной стенки, первые два вообще являются аскомицетным организма

Таблица 1

!остав капсульных, внеклеточных полисахаридов баеидиомицетных дрожжей и дрожжевых фаз некоторых базидиомицетов

'ода (количество иссле- Нейтраль ные

¡ванных видов, штаммов) моносахариды

\garicQstilbum (1, 1) Гл, Гал, Май, фук

Игас1о^1ова (1, 1) Г.1> ¡Аам

ЗвПБ^П^ОП!* , 2', 1л. Нин

я»;/г" 2> Гл, Гал, !!ан, Кс

юПеготусез (1, 1) Гл, Гал, Нан, КС

7апсИс1а С8, 8) Гл, Гал*, Ман

!апсИс1а (4, 5) Гл, Гад, Нан, Кс

'¡ап'Иёа (3, 6) Гл, Гал, Ман, Фук

?алсШа (4, 4) Гл, Гал, Ман, Фук,

7алсМа (2, 3) Гл, Гал*, Ман, Кс*. Фук,

1о1еозрог1и!п (1, 1) Гл, Гал, Мая, Кс

УгурЬососсиБ (21, 88) ГЛА, Гал*, Ман, Кс

1гурЪососсиз (4, 4) Гл*, Гал, Ман

:узЬоП1оЬаз1(Иит (2, 2) Гл, Гал, Нан, Кс

"п(1орЬу11ит (1, 1) Гл, Гал, Ман, Кс

"агуз^'а (1, 1) Гл, Гал, Ман

?21оЬаз1сИшп (2, 2) Гл, Гал, Ман, Кс

зу/ппоБрагал^ит (1, 1) Гл, Гал, Ман, Кс

.еисозрог!сИит (2, 4) Гл, Гал, Ман, Фук

ИсгоЬоЬгуит (2, 2) Гл, Гал, Ман, Фук

ЛсгозЬгота (1, 1) Гл, Гал, Нан, Ко

¿гакза (1, 2) Гл, Гал, Ман, Кс,

^абу^оеа (1, 1) Гл, Гал, Ман,

?Ьо<1оЬоги1а (3, 5) Гл, Гал, Ман, Фук

?Ъо<ЗоЬогиЫ (1, 2) Гл, Гад, Ман, Фук,

?Ъос}оЬаги1а (3, 4) Гл, Гал, Мая

5ака?1'"Ыа (1, 1). Гл, Гал, Ман

5еЬас1па (1, 1) Гл, Гаи, Ман, Кс, Фук

5ерЬоЬаз11Нт (1, 1) Гл, Гал, Ман, Фук

5рЪасе1оЬЪеса (1, 1) Гл, Гал, Ман

5ропзог1ит (1, 1) Гл, Гал, Ман

(продолжение Табл. 1)

Sporobolomyces (3, 3) Sporobolomyces ("1, 1) Тremella (2, 2)

Гл, Гад*, Ман, Фук

Гл, Гал, Ман

Гл, Ман, Кс

Гл, Гал, Ман, Кс

Гл, Гал, Ман

Гл, Гал, Ман, Кс, Рам

Trimrpbomyces (1, 1) Ustilago (4, 4)

Xsnthophyllomyces (1, 4)

Гл - глюкоза, Гад - галактоза, Ман - манноза, Кс - ксилоза, Фук - c¡ коэа, Рам - рамноза, »содержание варьирует, жирным шрифтом выделен t минирующий компонент.

Полученные данные свидетельствуют о повсеместном распространении дрожжей гексов. С таксономической точки зрения в качестве маркеров С видиомицетного аффинитета интерес представляют пентозы и дезоксигекс зы. В этом отношении исследованные базидиомицетные организмы распад ются на четыре группы: 1) имеющие в составе внеклеточных полисахарид лишь гексозы; 2) содержащие также ксилозу; 3) содержащие фукозу и содержащие рамнозу (Табл. 1). В большинстве случаев в полисахарид обнаруживается только один маркерный моносахарид. Иногда наряду с 4 козой имеется рамноза, но совместное присутствие других маркерных ы носахаридов встречается очень редко. Анализ распространения маркерн Сахаров у базидиомицетных дрожжей и родственных им организмов обнар живает корреляцию таких данных с многими важными таксономическими х рактеристиками (Гл. VII).

Глава V. Киллер-токсины: микоцины и микроцины. До наших исследов ний киллер-феномен был известен у нескольких видов аскомицетных дрс жей и по настоящее время основное внимание уделяется молекулярно-гея тическим аспектам (главным образом, у сахаромицетов) этого явлени Нами найдено, что последнее широко распространено как среди аскомице ных, так и базидиомицетных дрожжей. Об ординарности у них киллерно фенотипа свидетельствуют обнаружение его у представителей почти вс исследованных нами родов (Табл. 2) и высокого относительного содерж ния киллеров в случае обследования большого количества штаммов одно вида. Так, при изучении Plchla memhranaefaciers и Rhodotorula mucil nosa (свыше 60 штаммов каждого) киллерная активность выявлена, соо ветственно, у 37% и 98% штаммов. Столь значительное число обнаруженн активных штаммов в разных таксонах базидиомицетных дрожжей, у котор

е они не были (за исключением, С'г. iauгent2l.) известны, обусловле-аксономически обоснованным при скрининге ЕЫбором тестерных чувст-льных штаммов. Принципиальной особенностью киллер-токсинов являет-мы полагаем, активность их против таксономически родственных орга-гав, в силу чего в качестве тестерных культур мы использовали штам-■ого же или близко родственного вида.

Киллерная активность обнаруживается лишь при определенных услови-шкубации, из которых первостепенную важность им^ет ^¡ачннкл рП ¡ы. Как правило, она проявляется при срнвтггс-льно нирк:;- „ааччниах,

■ некотор"-™ б^^истгу-^сро^ыл др"^'';"! при бливких к нейтральному ¡л. "). чуЕстгигильность тестирования возрастает с понижением тем-1туры инкубации и существенное значения имеет также соотношение 'ок чувствительного и киллерного штаммов. Некоторое влияние оказы-:остав буферного растБора и сред: более четкие результаты обеспечи-

■ полноценные среды, но с пониженным содержанием питательных ве-:в. Строгое соблюдение условий тестирования особенно важно при изу-!и слабо чувствительных штаммов и киллеров с низкой активностью.

Таблица 2

ш список найденных микоциногенных штаммов базидиомицетных дрожжей I рекомендуемые для выявления у них активности значения рН сред

1ды (количество штаммов) рН Виды (количество штаммов) рН

етл^олда тгзсапЬЫ (1) 6,0 т. ешшв (2) 5,0

т. паё-апоелэгз (1) 7,0 кЬ. 1ас1оза (2) 4,5

т. зиЬгозеа (1) 7,0 .9/1, тис1^1Поза (62) 5,5

т. уисс!со1а (1) 6,0 ПЪ. раШда (2) 4,0

/рЬососсиз Ьилисо1а (5) 4,0 ЗрОГ1сИоЬо1иЗ ]СЪП30!П1 (4) 4,0

, 1аигепШ (3) 5,0 5рог1с1. ратагозеиз (2) 4,5

. родгоНсиз (2) 4,0 ЗрогоЬо1оп',усе~:

ЛоГИоЬаз1(Иит а1ЬогиЬезсепз (1) 5,5

Ыврог1сШ (1) 4,0 Зр. 1асЬарМ1из (1) 6,0

1оЬаз1сИит 5р. огуг1са1а (1) 7,0

сарзиИрепит (1) 5,0 заз1со1а (1) 6,5

х/оЬоги]а 5р. зиЬЬгиппеиз (1) 7,0

/чу^залеп513 (1) 5,0 Зр. хапЬЬиз (1) 6,0

Киллер-токсины исследованных дрожжей термочувствительны, полное инактивируются после 2-3 мин прогревания при 100*С, а при 40-50' после 5 мин обработки. Как правило, они чувствительны также к дека протеаз. Судя по результатам гель-фильтрации, их молекулярная мг находится обычно в диапазоне 10-30 кДа. Обладают фунгицидным ми <3 гистатическим действием. Во втором случае у чувствительных клеток гибируется на ранних этапах формирование почек. За редким исключею к киллер-токсинам базидиомицетных дрожжей не чувствительны аскомш. ные и, более того, к токсинам продуцирующих ксилозосодержащие пол1 хариды киллеров чувствительны организмы, образующие подобные же, не фукозодержащие гетерополисахариды (Табл. 1). Киллеры дрожжей, синт« рующие последние, также действуют против организмов с фукозосодержг ми, но не ксилоаосодержащими внеклеточными полисахаридами (Гл. VII)

В большинстве случаев попытки устранить киллерную активность п> обработки штаммов агентами, эффективно элиминирующими внехромосок элементы, дали у базидиомицетных киллеров отрицательные результаты них не обнаружены плазмидные РНК или ДНК, что указывает на хромосом детерминацию генов, кодирующих синтез токсинов. Положительные в а отношении данные получены лишь для киллеров Cystofilobasidium bispe dii и Sporidiobolus johnsonii. В их клетках обнаружены содержащие д цепочечные РНК (1,1-1,9 и 4,5-5,0 тыс. пар оснований) вирусные част икосаэдрической формы (диам. 31-35 нм), имеющие капсидный белок с лекулярной массой 80-83 кДа.

Ив всех изученных киллеров дрожжей резко выделяются штаммы. Сг. mi cola, фунгицидные киллер-токсины которых действуют как против ас мицетных, так и базидиомицетных дрожжей. Некоторая таксономичес специфичность проявляется лишь в более высокой чувствительности к родственных организмов. Токсины Cr. humicola, имеющие в своем сост аминокислоты и глюкозу, растворимы в метаноле, термостабильны, уст чивы к протеазам и обладают молекулярной массой не более 1 кДа. С ласно этим характеристикам они отнесены к микроцинам, ранее извест лишь у бактерий. Обнаружение микроцинов у дрожжей подчеркивает об природу киллер-феномена (микоциногении) и бактериоциногении. В об случаях образование веществ белковой природы, токсичных для родств ных организмов (что известно также для парамеций, миксоамеб), сеяв со специфическим'иммунитетом к ним самих продуцентов и нередко коди ется внехромосомно. Как и бактериоциногения, микоциногения может б: обусловлена секрецией двух типов токсинов: микоцинов, являющихся (г,

[ротеинами, активными против таксономически родственных организмов микроцинов, являющихся (глико)олигопептвдвми значительно более ши-)го и, следовательно, менее специфичного спектра действия, 'лава VI. Биогеография и экология. С первого выделения в начале того века дрожжей в культуру опубликовано большое число работ по 1ружению их почти во всех регионах земного шара. Подавляющую часть :едоЕанных субстратов составляют пищевые продукты и клинические об-;ы, где преобладают аскомицетные дрожжи. За исключением fr. ..¡.ыог-:, данные по распространению яр^гхсй оати*^- -

арными и часто >"-.-; и&-»я ртг^чии в способах вынвле-

pt изучении распространения криптококков, типичных базидиомицетных жей, в основных типах почв широтной и вертикальной зональности вины значительные различия в относительном содержании их в дрожжевой биоте. Оно вше в тех типах почв (тундровые, пустынные, высокогор-, где дрожжи в целом малочисленны, и, напротив, составляют обычно рную часть в богатых дрожжами плодородных почвах (черноземы, серые ые, горно-луговые). Например, в примитивных каменистых почвах, ынном сероземе Памира, Тянь-Шаня при средней общей численности жей около 500 кл/г криптококки составляли 50-70%, тогда как в гор-уговой и горно-лесной почвах, содержавших 3000 кл/г и выше, - лишь или вообще не обнаруживались. Относительное содержание криптокок-снижается при окультуривании почв и в отношении их не наблюдается зферного эффекта. Эти данные вызвали повышенное внимание к одно-очной микобиоте высокоширотных регионов (Арктика, Антартарктика). едование низших и высших растений, почв данных районоЕ показало, популяции дрожжей б них представлены почти исключительно базидио-гными организмами (видами Cryptococcus, Leucosporldium, Mrakia, otorula, Sporobolomyces). В Восточно-сибирской тундрр и Антарктиде составляют 95-100% от всех обнаруживаемых дрожжей, а уже в субан-гической зоне (с. Пост. Фолкленд) содержание их падает до 80%. жая особенность глобального распределения базидиомицетных дрожжей ци отражение в общи для них физиолого-биохимических и цитологи-« характеристиках (Гл. II, III), в частности, наличии капсулы. ;ки широко распространенному взгляду на нее как дополнительный ¡р, защищающий от неблагоприятных биологических и небиологических >ров среды, проведенные эксперименты не выявили повышенной устой-;ти сильнокапсулированных клеток в сравнении с микрокапсулирован-

Рис. 3. Поглощение воды лиофшшаированными сильно- (о) и микрокапс рованными (•) культурами СгурЬососсиз аШёиэ МГУ 943 при относит ной влажности 90%.

I 10

<я

о

8 20

§

к

30 40

50 -,-,-,---г—

10 20 30 40 50 разбавление среда Рис. 4. Накопление биомассы дрожжей в зависимости от разбавления ново-пептонной среды (24° С, 200 об/мин). По оси абсцисс указан сколько раз раабавлена среда, по оси ординат - во сколько раз умен ется вес накопленной биомассы (начало стационарной фааы роста), сильно- и 2 - микрокапсудированный варианты ОгурЬососсиз 1аигепЬИ 1803, 3 - бескапсулыше дрожжи ЗассИаготусез ceгevisiae К-9.

ными или бескапсульными к УФ-радиации и поглощению амебами, а также более прочнной адгезии клеток к плотным поверхностям. Результаты наших исследований привели к заключению, что капсула дрожжей представляет собой буферную систему, смягчающую воздействие резких колебаний влажности и обеспечивающую поглощение питательных веществ при низкой концентрации их в окружающей среде. Наличие капсулы замедляет ьысушивание клеток и, кроме того, найдено, что микрокалсулированные клетки начиняют поглощать воду при относительной влажности оке.-; .¿ил, тегди. как сильнокапсулированные - ¡фи 1Ы,, а при более высск;:/, значениях по-с.-тдьли сорбиругл воду быстрее .1 больше (Рис. 3). В условиях особенно «ридгиХ регионов капсула препятствует гибельному иссушению клетки, а при повышении окружающей влажности способствует быстрой ее регидрата-ции и переходу в активное состояние. Капсула обладает значительной активностью не только в поглощении воды, но и других соединений, как газообразных, так и растворенных. Сильнокапсулированные клетки в несколько раз больше поглощают аммиака и способны расти и накапливать больше биомассы в более разбавленных средах, чем микрокалсулированные (Рис. 4). В условиях очень ниэкого содержания питательных Ееществ в среде или затрудненного доступа их в микроокружение клетки на плотных субстратах (из-за слабой диффузии при низких температурах) капсула способствует, очевидно, повышению концентрации этих веществ на поверхности клеток до уровня, при котором способны функционировать транспортные системы. Эти представления о функциях капсулы согласуются с выше приведенными данными о высоком относительном содержании капсулирован-ных (базидиомицетных) дрожжей в бедных питательными веществами арктических, антарктических, пустынных почвах и в таком биотопе как поверхность коры деревьев.

При справедливости указанной общей закономерности содержание базидиомицетных дрожжей в конкретных биотопах ррзко варьирует. Так, среди эпифитных дрожжей ваповедника "Кедровая падь" (подзона широколиственно-хвойных лесов) базидиомицетные виды в качестве доминантов выступали у 75Х обследованных растений, а на остальных преобладали виды аскоми-цетных дрожжей. Полностью отсутствовали базидиомицетные дрожжи в отдельных типах торфов болот Московской обл., хотя в большинстве их были преобладающими. Анализ вэимосвявей между ботаническими, физико-химическими характеристиками торфов низинных, переходных, верховых болот и дрожжевой биотой выявил статистически достоверные корреляции их с видовым разнообразием, но не общей численностью дрожжей. При этом наи-

более высока положительная корреляция между количеством обнаруживаемых в торфах видов и значением рН, т.е. видовое разнообразие дрожжей выше в низинных, чем в переходных и особенно верховых болотах.

Большинство природных микробоценозов слишком сложны для детального анализа в силу ярко Еыраженкой микроочаговости и высокой гетерогенности по важнейшим параметрам. В качестве сравнительно простого объекта таких исследований наше внимание привлекла микрофлора весенних сокоте-чений деревьев. Предварительные наблюдения засвидетельствовали относительную несложность складывающегося эфемерного биоценоза, напоминающего процесс непрерывного культивирования, что предоставляет возможность моделирования развития природных микробных ассоциаций в лабораторных условиях с высокой степенью приближения. Прямое микроскопирование и микробиологические анализы показали, что постоянным и обычно преобладающим компонентом микрофлоры весенних сокотечений являются дрожжи, численность и состав которых претерпевает со временем значительные изменения. Вытекающий сок стерилен и из-за неспецифичности путей контаминации заселяющие его дрожжи вначале разнообразны по видовому составу (значительную долю составляют нередко аскомицетные дрожжи, ассоциро■ ванные с посещающими сокотечения насекомыми), но с повышением суточных температур, когда общая численность клеток дрожжей быстро возрастает с тысяч до миллионов в мл, количество их видов ограничивается всего 1-Е, а именно базидиомицетными дрожжами Тг1сЪозрогоп ри11и1апз и ХапЬЪо-рЬуНотусез с!ет1гогЬо113. Сравнительное изучение первичных и впоследствии преобладающих в пасоке дрожжей выявляет между ними различия, обуславливающие наблюдаемую сукцессию. Найдено, что первые более устойчивы к резким флуктуациям температур, присущим в начале сокотечения, но обладают меньшими скоростями роста, чем вторые, для которых характерна также олигонитрофилия.

Глава VII. Таксономия и идентификация. Классификация базидиомицет-ных дрожжей находится еще в стадии становления. К настоящему времени выявлен ряд ультраструктурных (Гл. II), физиолога-биохимических характеристик, позволяющих дифференцировать их анаморфы от аспорогенных ас-комицетных дрожжей. В качестве дополнительных полезных для этой цели признаков могут служить различия в моносахаридном составе внеклеточных полисахаридов, микоциночувствительности и способности к ассимиляции глюкуроната (Гл. III-V). Однако, ценность разрабатываемых нами критериев заключается прежде всего в том, что они являются почти единственными, которые дают практическую возможность проводить дифференциацию

внутри базидиомицетных дрожжей, Еключакицих организмы, родственные го-лсвнеЕым и тремедловым грибам.

В отличие от аскомицетных базидиомицетные дрожжи синтезируют вне-' клеточные полисахариды, содержащие часто, помимо гексоа, пентозы или девоксигексоэы (Табл. 1). Нами найдено, что качественный моносахарид-ный состав этих полимеров является характеристикой таксонов надродовых рангов, как правило, не ниже порядка. Наличие ксилозы присуще Tremellales, а фукозы и иногда также ósti ls-

ginales. Рял -p-saeá не им<?»т ; „оотяее полисахаридов

укчяо»:ги .маркернчх что ограничивает использование данного

лригерия в таксономических целях.

Сравнительное изучение спектров действия микоцинов показало, что антифунгальная их активность таксоноспецифична, т. е. они действуют против таксономически родственных микоциногенному штамму организмов. Степень родства, однако, сильно варьирует: одни микоцины активны лишь против штаммов одного или родственных видов, другие - видов близких родов и даже представителей равных семейств или порядков. Такая особенность позволяет использовать микоциночувствительность на разных уровнях таксономической иерархии, но при этом требует предварительного изучения широты диапазона, в пределах которого данные микоцины проявляют активность. В основе специфичности действия микоцинов лежит их связывание определенными компонентами клеточной стенки, состав которой различен не только у таксонов грибов, но и у дрожжевой и мицелиальной фаэ одного организма и, следовательно, последние будут отличаться по микоциночувствительности. Необходимо, кроме того, дифференцировать устойчивость к микоцинам и иммунность к ним, механизмы которых принципиально различны. Проведенный с учетом сказанного таксономический анализ группирования базидиомицетных дрожжей согласно их микоциночувствительности выявил четкие корреляции с группированием по таким признакам как ультраструктура порового аппарата септ (Moore, 1987), моносахаридный состав внеклеточных полисахаридов (Табл. 1), структура 5S рРНК (Gottschalk, Blanz, 19S5). Ясно прослеживается также сходство его с группированием по результатам секвенирования крупных рРНК (Рис. 5). Наличие множественных корреляций между чувствительностью к микоцинам и важнейшими таксономическими привязками привели к заключению, что киллер-чувствительные взаимоотношения отражают таксономические и филогенетические взаимосвязи между организмами, т.е. анализ спектров чувствительности к микоцинам может быть использован в качестве нового инструмента в

- "

1 '

1 2 3 4 5 6

Síeгigиatospoгlc/iuя ро1утогрЬит - - - + + -

■ П1оЬазШе11а пео^гтапз - - - + + +

РИоЬаз1сИит С1ог1^гте - - - - + -

■ Тг1сЬазрогоп Ьв1^еШ - - - - - -

■ Тг1сЬозрогоп сиЬапеит - - - - - -

■ТггсЪозрогоп ри11и1аг*з - - - - + -

ХапЬЬорЬуНошусез с1епс1гогЪоиз - - - - - +

• Суз^ИоЬазгсИит сар^ЫЬим - - - - + +

ИЪодозропсИцт &ги1о!с1ез - + + - -

Зрог1сИоЬо1из ¿оЪпвопН + + + - -

1еисозрог1<Иит зсоЫИ

Рис. 5. Корреляция микоциночувствительности с группированием дрожжей по сходству в нуклеотидных последовательностях 182 и 253 рРНК (йиеЬо et а1., 1989). Киллеры: 1 - 5рог1сИаЬо1из ¿оЬлзолИ, 2-5. ра-гагоэеиз, 3 - ЯЪос1оЬоги1а е1иЫп1з, 4 - П 1оЬаз1сИи!п сарзиИ^епит, 5 -СгурЬососсиз 1аигепЬИ, 6 - СузйоГИоЬаз^сЛит ЫвроггсШ; +: чувствительны, -: устойчивы.

таксономии дрожжей. Б общем плане данные по микоциночувствительности подтверждают наличие двух крупных групп базидиомицетных дрожжей: головневого и тремеллоидного аффинитетов (Табл. 3, где использованы ми-коциногенные штаммы: 1 - КЬос1о1оги1а ^1иИп1з-, 2-10 - ИЬ. тсИа£1по-яа; 11 - ЯЬ. Лшиапесшэ; 12, 13 - 5рог1с11оЬо1из jоЬпзопИ; 14 - Я. рагагозеиз; 15 - ГИоЬаз1(Иит сарзиН^епт; 16 - СгурЬососсиз 1аигеп-¿11; 17,-18 - Сг. робгоИсиз; 19 - Сг. 1аигепШ; 20 - СузЬоШоЬаз1сН-ит ЫзрапдИ). Такие данные, в частности, укааывают, что виды сравнительно недавно описанных родов КогнАэа, БЬвгг^тЬолусез имеют головневый, а виды РеПотусез, Коскоуав 11а и Sieгlg•matospoг2cfiш!l - тремелло-идный аффинитет. Изучение чувствительности несовершенных дрожжей к

Чувствительность баялистоспоровых грибов « микоцинам головневых {от 1 до 14) и тремелловых (от 15 до 20) дрожжей

Зр. з1п^и1аг13 +сссс----- - + - - - - - - - -

й. ^ЬпзопН + + + + - + + + +■ - - - -

Б. пйсгозрогиз + г + 1^есссс + + - - - - -

гозеиз + + + + + + + С + 14- . - -

3. пИпет'»» _____

Н. рагагозеи?! ■ •. > ■ т с с - - -

Ьеп. 1г>£о1(Ш +t + t + c-■-- - - - - - - - - - - -

Веп. пизсапЦ-и + + + + + -- -- -- - - - - - - - - -

Е. еаШагсЦапит + + + + с- -- -- - - - - - - - - - -

Зр. з1п^и1аг!3 +сссс----- - + - - - - - - - -

Веп. ^егтесЦа +сссс---- - - с - - - - - - - -

Т.иазМг^опегтз с + сс----- - - - - - - - - - - -

Веп. уисс1со1а не....... - - - - - - - - - -

Яр. а1ЬогиЬезсепз ++--------+-------- -

Зр. еИзесИауиз - - - +

Зр. ¿позНорЬПиз ---------- - + - - - - - - -

Таблица 3

Б. с1епс!горЬПа --------- - - - - - - - - - с -

В. рзеис(аа1Ьа + -

В. р1г1со1а _ . - _ _ _ _ - - +

К. ^аПапсНса ----------- - - +

В. тееа1озрога ---------- с _ _ . -_-.с+

В. ригасеа -

В. огугае ---------- - - - - - + _ - + _

I. регр1ехапз ---------- + - - - _ + - _ + +

В. пиуаечпя -_.___-__-__-- + -- + сР. 1псапзр1сиит --------- - - - - - - - +с +

В. сгосеа - - - - - - с+++

В. агтетаса ---------- _ - _ - - - + + + +

31г. тащит ---------- _ - - _ _ с+ ++ +

8и1. аЛЬиэ _ - _ _ - ++ + + +

+ : чувствительны, с: слабо чувствительны, не чувствительны.

значительному числу микоцинов выявило идентичные в этом отношении штаммы, скрещивание которых между собой показало, что они представляют собой типы спаривания гетероталличных организмов. Именно таким образом было найдено, что Apiotrichum osvaldii является типом спаривания А2В2 Leucosporidium scottii, a Sporobolomyces tenuis - типом спаривания А2 Sporidioholus pararoseus. Также анализ микоциночувствительности привел к обнаружению нового вида Rhodosporidium bahjevae и телеоморфы Веп-singtonia intermedia. Эти и ряд других результатов подтверждают эффективность использования микоцинов в таксономических исследованиях.

С группированием дрожжей, основанном на хемотаксономических, удь-траструктурных данных и чувствительности к микоцинам, коррелирует способность к утилизации D-глюкуроната. Почти все аскомицетные глюкуро-нат-отрицательны, тогда как базидиомицетные дрожжи тремеллоидного аффинитета положительны. Организмы головневого аффинитета в основном отрицательны по этому признаку (Табл. 4). Большинство таксонов в данном отношении однородны и, более того, последние изменения в таксономии дрожжей приводят к сокращению имеющейся в отдельных случаях гетероген-

Таблица 4

Дифференциация родов бааидиомицетных дрожжей по глюкуронатному тесту

Глюкуронат-отрицательные Глюкуронат-положительные

Apiotrichum Itersonilia

Atractogloea Kockovaella

Bensingtonia* Bullera Mrakia

Kondoa Bulleromyces Sakaguchia

Kurtzmanomyces Cryptococcus Sarcinosporon

Leucospordium* Cystofilobasidium Sebacirta

Rhodosporidium Fellomyces Sirobasidium

Rhodotorula* Erythrobasidium Sterigmatomyces

Sporidiobolus Fibulobasidium Sterigmatosporidium

Sporobolomyces* Filobasidiella Tremella*

Filobasidium Trichosporon

Hoitermannia Tri morphomyces

¡tersonilia Xanthophyllomyces

*Имеются исключения.

ности. Так, глюкуронат-положительны? Rbcdc-ápcriJium spp. и почти во-? Sporobolcmyces spp. выведены в самостоятельные роды '.Cyst of i lob.asidjum, Sakaguchia) или перенесены в род Bullera, так же как и глюкуронат-отрицательный Fellomyces nectairii выделен в отдельный род Kurtsmncrr; ces. Явно не случайно гетерогенность по ассимиляции глюкуронатн í отучается именно ь родач, таксономия которых находится особенно е. неудоь летЕсрительном состоянии ¡ Candida, Rbodotorula, Sporcbolomyces). C'oeo купность таких данных свидетельствует о диагнпг.тшю-.«---- „тлгя

признака. Pn*»:; u-onn*ww»y—.-.^{«кхёоигт«!» ••—- „__„„«-

ляцпь .'.juüvpuhsto ______единственным, который в большинстве

случаев позволяет дифференцировать головневые и тремеллоЕые дрожжи.

Глава VIII. Прикладной потенциал. С середины нашего века практическое применение дрожжей выходит за пределы традиционных отраслей (хлебопечение, пивоварение, виноделие) и идет неуклонное расширение ассортимента получаемых с помощью дрожжей продуктов. В этом плане базидио-мицетные дрожжи привлекают внимание прежде всего в связи с получением веществ, несбразуемых (или менее активно), аскомицетными. В последние годы особенно живой коммерческий интерес вызывают дрожи Xontbc-phyîl?-myces dendrorhcus iPhaffia rhedozymai, уникальные по способности синтезировать каротиноид астаксантин, необходимый при разведении красных пород рыб, а также в птицеводстье. Природным местообитанием ^того видя являются весенние сокотечения лиственных пород деревьев ¡Гл. VI:, от куда нами выделено большое количество его штэшсе, часть которых д-по нирована в В КМ ¡Приложение 2 ■. Обнаружение нами полового процесса v этих дрожжей (Гл. II, Приложение i может иметь существенное значение для получения и селекции ьысокопрсдуктиЕных культур.

В противоположность аскомицетным. баэидисмицетные дрожжи образуют высшие гомологи (Q-'3,lû; убихинонов 'Гл. IV), используемые для снижения токсичности лекарственных препаратор, и лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Наибольшее содержание и* обнаружено у бидое crvpicc-xcxs curvatus и Cr. húmico 1а. В качестве специфичных антифунгальных агентов значительный интерес представляют микоцины и микроцины (Гл. V), обладающие активностью против патогенных для человека [Сг. neoforgans': и растений видов (головневые, ржаЕчинные грибы).

Почти все активные липидообразоьатели принадлежат к бае-идиомицетнкм дрожжам. Более того, предпринятый таксономический анализ имеющихся данных показал, что перечень таких видов ограничен (Cr. aerius, Rï.o dosporidim toruloides, Trlchosporon cutaneum, Tr. pullulans:. С'ущест

вующие хаотичные представления о множестве других видов "жировых" дрожжей обусловлены ошибочной идентификацией и довольно обширной синонимикой указанных видов. Ряд выделенных нами штаммов Сг. aerius и Тг. pullulans (Приложение 2) характеризуются как большим содержанием липи-дов, в том числе содержащих ненасыщенные жирные кислоты, так и высокой эффективностью липидообразования (Крылова с соавт., 1984, Дедюхина с соавт., 198?).

Проведенный скрининг базидиомицетных дрожжей выявил виды, обладающие фитазной, пектиназной, инулиназной, протеолитической активностями ОCryptococcus spp.). Особенно широко распространены среди них организмы, гидролизующие крахмал и гемицеллюлозы. Наибольшей амилолитической активностью характеризовались Сг. flavus, Sporidiobolus pararoseus, Sporobolomyces roseus, Tilletiopsis washingtonensis, Filobasidium cap-suligenum, ксиланазной - Apiotrichum porosum, Cr. podzolicus, Tricho-sporon pullulans. Условия культивирования, способствующие образованию ксиланазы, недавно изучены Шубаковым с соавт. (1994), а »¿-амилаза F. capsuligenum охарактеризована Циоменко с соавт. (1992). Базидиомицет-ные дрожжи тремеллоидного аффинитета являются постоянным компонентом микоценозов растительного опада (Гл. VI). Неспособные сами разлагать лигнин и целлюлозу, они обычно хорошо утилизируют продукты их деградации, стимулируют активность дереворазрущающих грибов и устойчивы к продуктам их жизнедеятельности. Это предполагает, что указанные дрожжи перспективны для совместного выращивания с лигнин- и целлюлозоразруша-ющими грибами в целях обогащения белком грубых кормов.

Базидиомицетные дрожжи привлекают давний и устойчивый интерес как активные продуценты внеклеточных полисахаридов, области практического применения которых чрезвычайно широки и разнообразны. Нами, в частности, предложено их использование в буровых растворах в целях повышения скорости бурения скважин. Изучение динамики формирования капсул (Рис. 1), накопления в среде полисахаридов, сходство в условиях, стимулирую -1дих их образование, привело к заключению о капсульном происхождении внеклеточных полисахаридов. Чтобы иметь возможность сравнить состав последних и капсульных полисахаридов, нами были разработаны способы декалсулирования клеток дрожжей путем автоклавирования или обработкой ультразвуком. Сравнение полученных препаратов подтвердило, что кап-сульные и внеклеточные полисахариды имеют сходные ИК-спектры, молекулярную массу и моносахаридный состав (Табл. 1), отличаясь от полисахаридов клеточных стенок, в которых присутствуют глюкоза, манноза и тлю-

kosswih, но не обнаруживаются спецвфотны* для кппсуд г.онюаы, деаокси-r':i:;cLH ¡1 урсяоше кислоты. Таким образом, капсулообразованне является ■«¡ггескм этапе»! при наработке внеклеточных полисахаридов. В обоих случаям им способствуют повышенные концентрации легко доступных сяхярсв, пошавниов содержание органического источника аеота, обеспеченность v-.iKTr'p.4v:; рсста. Б то же время вплелся ряд различий в оптимальных знз->?шму. уел•iT-iift квкубацки (рН, температура; указывающие, что процесс

получения внеклеточных полисахаридов включает той ----— v,wn>i:

рост продуцента ям кмпгянл« « в п»»

Г1"*'—. gvnui«»"» ""^«улятатсв предложены состав сред и уелски инкубации, стимулирующие у дрожжей капсулообразование и обеспечивающие выход внеклеточных полисахаридов от 3 до 10 г/л среды.

Заключение. Всего лет 30 назад отсутствовало само понятие "базидио-чицетные дрожжи", насчитывающие к настоящему времени уже около 200 видов (более 30 родов). Количество их продолжает быстро увеличиваться и, несомненно, в нарастающем темпе будет возрастать и далее с совершенствованием методов изучения, учитывающих особенности биологии этих организмов, а также в результате более тщательного обследования микобнот vfano еще исследованных высокоширотных, пустынных, и высокогорных регионов, где одноклеточные грибы представлены почти исключительно базидио-лщетными дрожжами.

Принципиальное отличие последних от аскомицетных дрожжей, полный кизненный цикл подавляющего большинства которых может протекать в од-юклеточной фазе, заключается в том, что одноклеточное состояние у них тредставляет собой, как правило, стадию онтогенеза, т.е. таксономичес-■ui не самостоятельно. Эта особенность создает дополнительные трудности з разработке таксономии и методов идентификации данных организмов.

Благодаря стремительному в последние 20 лет прогрессу в таксономии црожжей практически разрешена проблема дифференциала аско- и базидио-лииетнчх ергаггпомиь дате при отсутствии у них телеоморфного состояния. Зднако, как показано в настоящей работе и другими авторами, сами бази-зиомицетные дрожжи таксономически гетерогенны и включают, по крайней мере, две группы, родственные головневым или тремелловым грибам. Диф-Е>еренция их затруднительна и эта проблема остается актуальной, поскольку все больше накапливается данных, что традиционно используемые морфологические критерии, такие как образование мицелия, баялистоспор, точек на стеригмах, телиоспор обладают невысокой диагностической ценностью. Указанные признаки присущи представителям обеих групп. Пред-

принятый нами анализ имеющихся сведений показал, что реально работающими критериями по определению таксономического аффинитета, особенно анаморф, являются лишь данные по структуре рРНК и порового аппарата септ мицелия. Дрожжи головневого аффинитета имеют 53 рРНК типа A (Gottschalk, Blana, 1985) и простые поры, тогда как тремеллоидного - типа В и долипоры (Boekhout eb al., 1992, Suh, Sugiyama, 1993), а по результатам секвенирования крупных рРНК (Fell et al., 1992, Nakase et al., 1993) они образуют далекие друг от друга кластеры с подгруппами внутри них. В настоящей работе показано, что маркерами головневого или тремеллоидного аффинитета является наличие, соответственно, ксилозы или фукозы во внеклеточных полисахаридах. Впервые как таксономический критерий предложено рассматривать микоциночувствительнооть организмов, которая может быть использована и для дифференциации головневых и тре-меллоидных дрожжей. С указанными характеристиками коррелирует наличие способности утилизировать глюкуронат и в качестве общедоступного данный тест может быть рекомендован в широкой диагностической практике.

Уже на настоящем этапе результаты изучения баэидиомицетных дрожжей существенно расширяют наши представления о разнообразии мира одноклеточных грибов и свидетельствуют о значительном прикладном потенциале этого нового источника микробных ресурсов.

Приложение 1. Приведены описания нового рода Xanthophyllomyces с видом X. dendrorhous и новых видов: Cryptococcus elinovii, Сг. fusces-cens и Rhodosporidium babjevae. С учетом предложенной модификации рода Cryptococcus Kutsing указаны новые комбинации: Сг. amylolentus, Сг. curvatus, Сг. humicola, Сг. marinus и Сг. podzolicus, а также восстановленные названия: Rhodotoruia colostri и Rh. pallida.

Приложение 2. Дан список выделенных в настоящей работе около 300 штаммов дрожжей, которые депонированы во Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ, Пущино), Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ, Москва), Американской коллекции типовых культур (АТСС, США), Коллекции департамента сельского хозяйства (NRRL, США), Центральной коллекции плесневых культур (СВЗ, Нидерланды), Чехословацкой коллекции дрожжей (CCY, Словакия), Японской коллекции микроорганизмов (JCM, Япония) и Коллекции института ферментации в Осака (IF0, Япония). Указаны оригинальные обозначения штаммов, присвоенные им в этих коллекциях номера, наименования и ссылки на работы, где описаны источники выделения или свойства данных штаммов.

ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных исследований и анализа развития зимологии предлагается следующее определение дрожжевых организмов: дрожжи являются одноклеточной ассимилятивной экоморфой представителей различных таксонов эумицетов.

В отличие от аскомицетных, у которых все стадии жизненного цикла могут, как правило, протекать в одноклеточной Фаяо. б^хтъх^и&хьыа дрожжи обдаип оооои отяряв сятсгвиега мии«.1и»ял»»!Г' ГгЛ«-

!.г:р{. ЛвамоЫм оазидиом.чцетных дрожжей различаются по

цитологическим и физиолого-биохимическим признакам, с использованием которых установлен таксономический аффинитет 38 видов несовершенных дрожжей. Наиболее надежна дифференциация по ультраструктуре клеточной стенки.

2. Значительное разнообразие в типах полового процесса и жизненных циклах, в морфологии баэидиальных структур, хемотаксономических характеристиках и микоциночувствительности свидетельствуют о таксономической гетерогенности базидиомицетных дрожжей.

Дано описание нового телеоморфного рода Xanthophyllomyces, трех видов родов Rhodosporidium и Cryptococcus. Для последнего рода предложены модифицированный диагноз, 5 новых таксономических комбинаций и восстановлены наименования двух видов рода Rhodotorula. Показано, что виды Apiotrichum osvaldii, Sporobolomyces philippovii и Sp. tenuis являются анаморфами, соответственно, Leucosporidium scottii, Sporidiobo-lus johnsonii и S. pararoseus. Впервые выявлена телеоморфная стадия у баллистоспоровых дрожжей рода Bensingtonla.

3. Еазидиомицетные дрожжи распространены повсеместно и часто являются доминирующими одноклеточными эумицетами в филлосфере, на растительных остатках и в почве. Особенно они преобладают и нередко бывают единственными дрожжевыми организмами в микобиоте высокоширотных, пустынных и высокогорных регионов. Наличие доступных питательных веществ в первую очередь определяет плотность популяций дрожжей в природных субстратах.

4. Подавляющее большинство базидиомицетных дрожжей - активные проценты внеклеточных полисахаридов, имеющих капсульное происхождение.

Капсула образуется молодыми полностью сформированными клетками и состоит из радиально отходящих от наружной поверхности стенки полисача-ридных микрофибрилл. Она отличается от клеточной стенки как ультраструктурной организацией, составом полисахаридов, так и функционально, т. е. представляет собой отдельную клеточную органеллу. Основные функции капсул заключаются в смягчении водного и трофического режимов на клеточном уровне при резких флуктуациях влажности и в условиях низкогс содержания питательных веществ в окружающей среде или затрудненного доступа их к клетке.

5. Независимо от родовой принадлежности тремеллоидные дрожжи образуют ксилозосодержащие, а многие головневые - фукозосодержащие внеклеточные гетерополисахариды. В составе этих полисахаридов нередко присутствуют также рамноза и глюкуроноЕая кислота.

6. В результате таксономически обоснованного подбора чувствительных штаммов впервые выявлена микоциногенная активность у представителей 7 родов базидиомицетных дрожжей. Продуцируемые микоцины характеризуются различными спектрами действия. За исключением Суз1оГ 11оЬаз1с11и1п Ызро-гхсИ! и Зрог1сНоЬо1из ЗоЬпзопи, у которых микоциногенная активность связана с наличием РНК-содержащих вирусов, у остальных видов зтот фенотип детеминирован хромосомными генами.

7. Чувствительность к микоцинам таксоноспецифична. Как правило, микоцины базидиомицетных дрожжей не активны против аскомицетных; головневые дрожжи не чувствительны к микоцинам тремеллоидных, а последние -к микоцинам головневых дрожжей. О учетом ростовых фаз, различий в диапазонах и спектрах действия микоцинов, чувствительность к ним может •быть использована в качестве дополнительного критерия в систематике дрожжей на разных уровнях таксономической иерархии.

8. Впервые у дрожжей обнаружено образование микроцинов - фунгицид-ных пептидов широкого.спектра действия, т.е. подобно бактериоциногении киллер-феномен у дрожжей может быть обусловлен секрецией двух типов токсинов: микоцинов или микроцинов.

9. Катаболизм 1-инозита как источника углерода, способность к утилизации которого используется в качестве родовой характеристики, осу-

ществляется дрожжами по глюкуронат-гулонатному пути. Ассимиляция i-инозита и/'или глюкурсната присуща базидиомицетным дрожжам тремеллоид-ного аффинитета и редка среди дрожжей других таксономических групп.

10. Около 300 оригинальных изолятот дрожжей депонированы б крупнейших отечественных и зарубежных коллекциях микроорганизмов и послужили материалом для многочисленных физиолога-биохимических и таксономических исследований.

Среди одноклеточных «•«"." пи ..от.

^wivueHT" *rr~~zi.mA<jh. wür~ ri.-.-.^oi ив успхинонов, антифунгальных "¡г.-чллХив (.мнксцинов, микроцинов), а также перспективны для получения внеклеточных полисахаридов, липидов и некоторых ферментов.

Список основных публикаций по теме диссертации:

1. Бабьева И.П., Голубев В.И., 1969. Психрофильные дрожжи в оазисах Антарктиды. Микробиология 38, вып. 3, с. 518-524.

2. Еабьева И.П, Голубев В.И., 1970. Аспорогенные капсульные дрожжи из природных субстратов. Тр. 2-ой межвуз. конф. "Микроорганизмы Б сельском хозяйстве". Иад-во МГУ, М., с. 109-127.

3. Перцсьская А.Ф., Голубев В.И., 1971. Адсорбционные свойства дрожжей, выделенных из природных субстратов. Вест. (ЛГУ (биол., почвовед.) N 4, с. 102-107.

4. Голубев В.И., Свиридов А.Ф., Бабьева И.П., 1971. Моносахаридный состав внеклеточных и капсульных полисахаридов дрожжей. Микробиология 40, вып. 4, с. 510-614.

5. Голубев В.И., 1972. Условия образования внеклеточных полисахари цое дрожжами. Науч. докл. высш. школы (Биол. науки) N 1, с. 89-91.

6. Гузев В.О., Голубев В.И. , Звягинцев Д.Г.. 197?. Обнаружение микрокапсул у микроорганий^св и контролирование полноты их декапсулиро-вания методом микроэлектрофореза. Микробиология 41, ьыл.1, с.115-120.

7. Аксенове.!!., Еабьева И.П., Голубев В.И., 1972. Исследование процессов увлажнения и высушивания у капсульных и бескапсульных форм ?ryptococcus albidus var. diffluens методом ЯМР-спиновое эхо. Изв. АН :ССР (сер. биол.) N 4, с. 545-558.

8. Aksenov S. I., Babjeva I.P., Golubev W.I., 1973. Mechanism of microorganisms adaptation to extreme low humidity. Life Sei. and Space ?es. XI (Proc. open meeting work group on Space Biology. 15th plenary

meeting of COSPAR. Madrid, Spain, 12-24 May 1972). Sneath P.H.A., ed Akad. Verlag-Berlin, p. 55-61.

9. Голубев В.И., Бабьева И.П., 1973. Таксономические критерии род; Cryptococcus Küta. Микология и фитопатол. 7, N 6, с. 552-556.

10. Бабьева И.П., Голубев В.И., Картинцев A.B., Горин O.E., Заславская П. Л., 1973. Дрожжи в структуре лесных и луговых биогеоценозов. Вест. МГУ (биол., почвовед.) N 6, с. 67-73.

11. Голубев В.И., БдовинаН.В., 1973. Дрожжевая флора почв рисовьс полей, обрабатываемых гербицидами. Поведение, превращение и анали; пестицидов и их метаболитов в почве (Мат. 1 Всесоюз. совещ., 17-19 октября 1973 г.) Пущино-на-Оке, с. 66-73.

12. Голубев В.И., Вдовина Н.В., 1974. Моносахаридный состав внеклеточных полисахаридов некоторых видов криптококков. Микробиология 43, 1 1, с. 154-156.

13. Голубев В.И., Окунев О.Н., Вдовина Н.В., 1974. Ассимиляция i-ино-вита дрожжами как диагностический признак. Микробиология 43, вып. б, с. 1046-1050.

14. Бабьева И.П., Голубев В.И., Решетова И.О., АвиеваЕ.Е., Бдагодат-ская В.М., 1976. Дрожжи в высокоширотных регионах северного и южного полушарий. Вест. МГУ (биол., почвовед.) N 2, с. 81-87.

15. Голубев В.И., Бабьева И.П., Едагодатская В.М., Решетова И.О.. 1977. Таксономическое изучение дрожжевых организмов, выделенных из весенних истечений беревы (.Betula verrucosa Ehrh.). Микробиология 46, вып. 3, с. 564-569.

16. Голубев В.И., Бабьева И.П., Новик С.Н., 1977. Сукцессия дрожжей ] сокотечениях березы. Экология N 5, с. 21-26.

17. Голубев В.И., ВагабоВа Л.М., 1977. Нуклеотидный состав ДНК некоторых видов дрожжей. Иав. АН ССОР (сер. биол.) Я в, с. 933-936.

18. Голубев В.И., Едагодатская В.М., 1978. О вначении способности Candida Berkhout ассимилировать D-глюкуроновую кислоту, О-глюкано-З-лактон и 5-кето-0-глюконат для систематики. Микробиология 47, вып. 5, с. 841-848.

19. Голубев В.И., Манукян А.Р., 1979. Капсулообразование у сапрофитных дрожжей. Микробиология 48, N 2, с. 314-318.

20. Голубев В.И., Таусон Е.Л., 1979. Гетерогенность дрожжевого гриба Cryptococcus terreus di Menna. Микология и фитопатол. 13, N 6, с. 462 -467.

21. Бабьева И.П., Голубев В.И., 1979. Методы выделения и идентифика-

1ИИ дрожжей. Изд-во "Пищевая пром-сть", М., 120 с.

22. Шкидченко А.Н., Голубев В.И., 1980. Непрерывное культивирование зазвивающихся в весенних сокотечениях березы дрожжей в моно- и смешанных культурах. Микробиология 49, вып. 1, с. 44-48.

£3. Голубев В.И., Манукян А.Р., Циоменко А.Б., Ушаков В.М., 1S80. Поучение капсульного материала дрожжей. Прикл. биохимия и микробиол. L6, N 4, с. 591-596.

24. Голубев В.И., 1980. Изменчивость видов Cryptococcus по способности к образованию псевдомицелия. Микообмл"ог"г: í3, ьыг,. л. f.

25. Z.H., i«ñO Тлкс;аомйл и дролл«ья грибов юда Clryp+tfc^r-r^z. ;3ь»1, Пущпно, 90 с.

26. Голубев В.И., Логинова Т. М., Тюрин B.C., 1980. Ультраструктура иеточных стенок и септ у глюкуронат-положительных видов Candida. Мик-зобиология 49, вып. б, с. 942-944.

2?. Гулевская O.A., Голубев В.И., Манукян А.Р., 1981. Ультраструктура сапсул дрожжей. Микробиология 50, вып. 1, с. 110-113.

23. Голубев В.И., Благодатская В.М., Манукян А.Р., Лисс O.E., 1981. {рожжевая флора торфов. Изв. АН СССР (сер. биол.) N 2, с. 181-187.

29. Голубев В.И., Манукян А.Р., Шкидченко А.Н., 1981. Влияние условий шращивания на капсулообразование у дрожжей. Еиол. журн. Армении 34, Н i, с. 259-264.

30. Голубев В.И., 1981. Новые комбинации у дрожжевых грибов рода Cryptococcus. Микология и фитопатол. 15, N 6, с. 467-468.

31. Гулевская С.А., Манукян А.Р., Голубев В.И., 1982. Цитология дина-гаки образования капсул у дрожжей. Микробиология 51, вып. 2, £87-291.

32. Голубев В.И., Манукян А.Р, Лазарев П.И., 1984. функции капсулы у фожкевых организмов. Журн. общ. биологии 45, N 4, с. 507-515.

33. Oolubev W. I., 1984. Cryptococcus fuscescens sp. nov. arid a diag-lostic key to the nitrate-positive species of the genus Cryptococcus. I. Gen. Appl. Microbiol. 30, N 6, p. 427-433.

34. Голубев В.И., Циоменко А.Б., 1935. Штаммы-киллеры баллистоспоро-збразующих дрожжевых грибов рода Sporidiobolus Нуland. Докл. АН СССР Í82, N 2, с. 425-426.

35. Голубев В.И., 1936. Дрожжи арктической Восточно-сибирской тундры. 1ав. АН СССР (сер. биол.) N 4, с. 609-612.

36. Голубев В.И., 1986. Sporobolomyces philippovii Krassilnikov 1933 - анаморфа Sporidiobolus salmonicolor Fell et Tallman 1981. Микология i фитопатол. 20, N 6, с. 449-451.

37. Голубев В.И., 198?. Дифференциация аскомицетных и базидиомицетньс аспорогенных дрожжей. В сб.: "Проблемы идентификации микроскопически; грибов и других микроорганизмов." Вильнюс, с. 10-12.

38. Weijmari А.С.М., Golubev W. I., 198?. Carbohydrate patterns and taxonomy of yeasts and yeast-like fungi. Studies in Mycology N 30, p 361-371.

39. Голубев В.И., Циоменко А.Б., Тихомирова Л.П., 1988. Не содержали« плазмид штаммы-киллеры дрожжей Sporidiobolus pararoseus. Микробиологи; 57, вып. 5, с. 805-809.

40. Голубев В.И., Семенова С.А., 1988. Определение таксономической аффинитета аспорогенных дрожжей. Микология и фитопатол. 22, N 5, с. 396-399.

41. Голубев В.И., 1989. Спектр действия киллер-токсинов Rhodotorula glutinis и его таксономическое значение. Микробиология 58, вып. 1, с. 99-103.

42. Голубев В.И,, 1989. Катаболизм i-инозита и таксономическое значение способности дрожжей ассимилировать D-глюкуронат. Микробиология 58, вып. 2, с. 276-283.

43. Голубев В.И., Кузнецова Л.Б., 1989. Образование и спектр действиг микоцинов базидиомицетных дрожжей Cryptococcus laurentii (Kufferath) Skinner. Микробиология 58, вып. 6, с. 980-984.

44. Голубев В..И., Чуркина Л.Г., 1990. Широкое распространение штаммов-убийц у дрожжей Rhodotorula rnucilaginosa (Jorgensen) Harrison. Изв. АН СССР (сер. биол.) N 6, с. 854-861.

45. Голубев В.И., 1990. Спектр действия микоцина Cystofilobasidiun bisporidli с таксономической точки зрения. Микология и фитопатол. 24, N 6, с. 542-547.

46. Golubev W.I., 1991. Capsules. In: The Yeasts (Rose A.H., Harrisor J.S., eds.) 2nd ed., 4, p. 175-198. Acad. Press, London e.a.

47. Голубев В.И., Кузнецова Л.Б., 1991. Таксономическая специфичность спектра действия микоцина Filobasidium capsuligenum. Микробиология 60, вып. 3, с. 530-536.

43. Голубев В.И., 1991. Таксономическая оценка микоцинов базидиомицетных дрожжей Cryptococcus podzolicus. Микробиология 60, вып. 6, с. 115-121.

49, Голубев В.И., 1991. Таксономическая оценка микоцинов фунгистати-ческого действия, продуцируемых дрожжами комплекса Rhodotorula minuta. Микология и фитопатол. 25, N 6, с. 482-486.

- S3 -

Э. Голубев В.И., 1992. Дрожжи филлосферы ь дальневосточном заповед-ле "Кедровая падь". Сиб. биол. журн. N 2, с. 37-42.

1. Голубев В.И., 1992. Антибиотическая активность и таксономическое яожение Rhodotorula fujisanensis (Scneda)' Johnson et Phaff. Микроби-. журн. 54, N 5, с. 21-26.

2. Golubev W.I., Boekhout Т., 1992. Dimorphism in Itersonilia per-exans.- yeast and hyphal phases differ In their sensitivity to myco-ns produced by tremellaceous yeasts. FEMS Microbiol. Lit,'— fc 1-

p. 1W-10C,

3. Голубев в.И., 1332. ОЬОЛмЦИЯ понятия "дрожжи". Усп. совр. биоло-и N 5-6, с. 715-724.

4. Boekhout Т., Fonseca А., Sampaio J.-P., Golubev W.I., 1993. Clas-fication of heterobasidiomycetous yeasts: characteristics and affi-ation of genera to higher taxa of Heterobasidlomycetes. Can. J. Mic-biol. 39, N 3, p. 276-290.

5. Голубев В.И., Чуркина Л.Г., 1993. Внутриродовой спектр действия коцинов Rhodotorula muclaginosa. Известия РАН (сер. биол.) N 4, с. 0-557.

6. Карамышева З.Н., Ксензенко В.Н., Голубев В.И., Ратнер Е.Н., Тихо-рова Л.П., 1993. Характеристика вирусов микоциногенного штамма ВКМ Y 700 Qystofilobasidium bisporidii. Доклады РАН 331, N 3, с. 376-378.

7. Golubev W., 1993. Rhodosporidium babjevae, a new heterotahallic ast species (Ustilaginales). System. Appl. Microbiol. 16, N 3, p. 5-449.

3. Шубаков A.A., Окунев 0.H., Голубев В.И., Михалева H.И., 1994. гпространение ксиланазной активности среди базидиомицетных дрожжевых ибсв. Микробиология 63, Вып. 2, с. 217-220.

9. Golubev W., Shabalin Y., 1994. Mlcrocin production by the yeast •yptococcus humicola. FEMS Microbiol. Lett. 119, t; 1-2, p. 105-110. О. Голубев В.И., 1994. Реидентификация штаммов дрожжей, используемых гидролиано-дрожжевых производствах. Биотехнология N 6, с. 3-6.

11. Golubev W.I., 1995. Perfect state of Rhodomyces dendrorhous 'haffia rhodozyma). Yeast 11, p. 101-110.

12. Голубев В.И., Чуркина Л.Г., Серегина С. А., 1995. Межродовые спек-1Ы действия микоцинов Rhodotorula mucilaeinosa. Известия РАН (сер. юл.), в печати.

13. Golubev W.I., Boekhout Т. 1995. Sensitivity to mycocins as a ta-inomic tool among heterobasidiomycetous yeasts. Studies in Mvcology,

in press.

64. Golubev W.I., 1995. Mycocins (killer toxins). In: The Yeasts. A Taxonomic Study. Kurtanan C.P., Fell J.W., eds. In press.

IS.03.95 г. _Зак.б517Р. Тир.100 экз. Уи^-изд,.л._2jO Отпечатано на ротапринте в ОКТИ ШЦ РАН