Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят"

На правах рукописи

АХМЕТСАФИН РАМИЛЬ ГАРИФУЛЛОВИЧ

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СРЕДСТВ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СМЕШАННЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ ТЕЛЯТ

03.00.07 - микробиология

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2005

Работа выполнена во ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт (г.Казань).

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Гумеров Вали Галиевич

доктор ветеринарных наук, профессор Угрюмова Валентина Степановна

доктор ветеринарных наук, профессор

Гаффаров Харис Зарипович

кандидат ветеринарных наук, доцент

Сибгатуллин Рафаэль Сагидуллович

Ведущее учреждение: ФГУ «Федеральный центр ох-

раны здоровья животных» (ФГУ ВНИИЗЖ)

Защита состоится "_"_2005 г. в_часов на заседании диссертационного совета при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок- 2,ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Автореферат разослан "_"_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, ст. научный сотрудник

В.И.Степанов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Актуальность темы. Сохранение народившегося молодняка крупного рогатого скота от инфекционных заболеваний является одним из проблемных вопросов ветеринарной науки и практики. Смешанные респираторные и желудочно-кишечные болезни крупного рогатого скота распространены практически во всех странах мира и наносят ощутимый экономический ущерб животноводству, обусловленный гибелью молодняка, снижением молочной продуктивности, потерей живой массы и нарушением воспроизводительной функции (Петрова О.Г. 2002; Мищенко В.А. и др.,2003).

Одними из основных причин возникновения смешанных респираторных инфекций телят на фоне стрессовых воздействий являются такие этиологические агенты, как вирусы инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, аденовирус и хламидии (Мищенко ВАИ др. 2000; Равилов А.З. и др. 2000; R.W.Fulton et al., 2000). Исходя из этого, становится очевидным необходимость определения роли отдельных возбудителей в этиологии смешанных инфекций телят, изучение закономерностей циркуляции и персистенции их, оценка иммунологических сдвигов, происходящих в организме больных и переболевших животных, и усовершенствование средств их диагностики и специфической профилактики.

В связи с этим, ключевыми моментами при организации лечебно-профилактических мероприятий при смешанных респираторных инфекциях телят являются применение современных методов диагностики и изучение динамики накопления специфических антител. В настоящее время существует большое число эффективных способов и методов диагностики моно- и смешанных инфекций сельскохозяйственных животных. Однако следует отметить, что респираторные инфекции характеризуются полиэтиологичностью, что обуславливает необходимость быстрого проведения диагностических исследований, позволяющих проводить неотложные организационные и лечебно-профилактические мероприятия в неблагополучных хозяйствах в массовом порядке. Одним из таких тестов является реакция непрямой гемагтлютинации, которая не лишена определенных недостатков, что требует усовершенствование данного метода.

Заболеваемость новорождённых телят респираторными инфекциями происходит из-за низкого уровня иммуноглобулинов вследствие несвоевременного и позднего приема молозива матери, что обуславливает низкий уровень колост-ральных антител. Кроме того, в результате метаболического распада секреторных иммуноглобулинов и одновременного увеличения объёма крови у телят наступает постепенная утрата пассивного иммунитета (Кис В.Н.,1980; R.F.Kahrs,1977;D.Levieux,1982).

Учитывая вышеизложенное, наряду с необходимостью улучшения кормления и содержания с соблюдением зоогигиенических норм и правил в животноводческих помещениях молодняка КРС, важным звеном является применение в первые дни жизни телят поливалентных гипериммунных сывороток с

дальнейшим применением ассоциированных вакцин для создания надежной защиты их от инфекционных агентов смешанной природы.

1.2. Цель и задачи исследований : усовершенствовать средства диагностики и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят. Исходя, из целей были выдвинуты следующие задачи:

1. Провести клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах;

2. Усовершенствовать технологию изготовления эритроцитарных диагно-стикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекций крупного рогатого скота;

3. Изучить активность и специфичность эритроцитарных диагностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекций крупного рогатого скота в лабораторных и производственных условиях;

4. Усовершенствовать технологию получения полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят и изучить лечебно-профилактическую эффективность ее в производственных условиях.

1.3. Научная новизна.

Проведен клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах Поволжья и Урала.

Впервые разработан универсальный метод выделения антигена вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и аденовируса из инфицированной клеточной биомассы, а также рациональные схемы гипериммунизации кроликов данными антигенами с целью получения высокоспецифичных диагностических сывороток.

На основании полученных антигенов и сывороток сконструированы экспериментальные серии эритроцитарных диагностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.

Лабораторными и производственными испытаниями доказана высокая специфичность и активность диагностических наборов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции КРС в РНГА.

Впервые разработаны рациональные схемы гипериммунизации откормочных бычков экспериментальными и коммерческими вакцинам в условиях промышленного комплекса с целью получения полиспецифической сыворотки. В производственных условиях доказана высокая терапевтическая и профилактическая эффективность препарата при смешанных респираторных заболеваний телят.

1.4. Практическая значимость работы.

Результаты исследований были использованы при составлении комплектов нормативно-технической документации:

- Временной инструкции по изготовлению и контролю "Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагтлютинации";

- Технических условий на "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагтлютина-

ции";

- Временного наставления по применению "Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации";

- Временной инструкции по изготовлению и контролю "Полиспецифической сыворотки против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и хлами-диоза крупного рогатого скота";

- Технических условий на "Полиспецифическую сыворотку против пара-гриппа-3, инфекционного ринотрахеита и хламидиоза крупного рогатого скота";

- Временного наставления по применению "Полиспецифической сыворотки против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и хламидиоза крупного рогатого скота";

Техническая документация одобрена Научно-методическим советом ВНИВИ (гКазань), утверждена директором ВНИВИ и начальником главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.

1.5. Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на: отчетных научных конференциях Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (Казань, 2001-2004 г.г.):

- международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, Ульяновск, 2003 г.;

- международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ ВНИИЗЖ, Владимир, 2003 г.;

- международной научной конференции молодых учёных 24-26 марта "Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных", Владимир, 2004 г.;

- всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса, КГАВМ, Казань, 2004.

1.6. Публикация результатов исследований:

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

1.7. Основные положения, выдвигаемые на защиту:

- данные клинико-эпизоотологического и серологического мониторинга в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям крупного рогатого скота хозяйствах Поволжья и Урала;

- усовершенствование технологии изготовления эритроцитарных диагно-стикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, изучение их активности и специфичности в лабораторных и производственных условиях;

- усовершенствование технологии получения полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят и изучение ее лечебно-профилактической эффективности в производственных условиях.

Объем и структура диссертации:

Материалы диссертации изложены на 121 странице машинописного текста и включают титульный лист, введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы и практические предложения. Список литературы включает 143 работы отечественной и 64 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами, 4 рисунками. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую ценность.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в период 2001 - 2004 гг. в лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (ВНИВИ г. Казань), Республиканских ветеринарных лабораториях Татарстана, Башкортостана, республики Удмуртии и неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах Поволжья и Урала.

Отдельные этапы исследований выполнены с участием доктора ветеринарных наук, профессора Галиуллина А.К., кандидатов ветеринарных наук, старших научных сотрудников Хусаинова Ф.М. и Евстифеева В.В.

В процессе выполнения работы были использованы следующие

а) штаммы вирусов и хламидий:

Вакцинный штамм "ТК-А(ВИЭВ)- В2"и изолят "КА-9" вируса ИРТ; референтный штамм "ПТК-2"и изолят 'ТМ-50" вируса ПГ-3; вакцинный штамм "ВК-1(ВИЭВ)"и изолят 'ТАЛ" вируса диареи; референтный штамм "Bovina-10" и изолят "МСС" аденовируса; производственный штамм "250" возбудителя хламидиоза крупного рогатого скота.

б) культуры клеток:

перевиваемая культура клеток почки эмбриона коровы, линия MDBK; перевиваемая культура клеток трахеи эмбриона коровы, линия TR; перевиваемая культура клеток языка эмбриона коровы, линия ПЯЭК; перевиваемая культура клеток почек эмбриона свиньи, линия ППЭС; перевиваемая культура клеток почек эмбриона овцы, линия ППЭО.

в) питательные среды и растворы:

0,5 % раствор гидролизата лактоальбумина на растворе Хенкса; среда Игла MEM (pH 7,5-7,6) с глютамином; синтетическая среда 199; сбалансированный раствор Хенкса по стандартной прописи рН 7,2-7,4; 0,2-0,3% растворы трипсина и 0,02% Версена на растворе Хенкса; сыворотка крупного рогатого скота.

г) для проведения экспериментов использовали лабораторных и естественно-восприимчивых животных:

белые мыши с живой массой 16-20 г, морские свинки с живой массой 250-

400 г; кролики с живой массой 2,0-2,5 кг; крупный рогатый скот разных возрастных групп;

д) вакцины:

вакцина живая, лиофилизированная "Паравак" против ПГ-3 крупного рогатого скота; вакцина живая, лиофилизированная "Бивак" против ПГ-3 и ИРТ крупного рогатого скота; вирус-вакцина живая, лиофилизированная "ТКА-ВИЭВ" против ИРТ крупного рогатого скота; вакцина ассоциированная, инактивиро-ванная, эмульсионная против хламидиоза крупного рогатого скота, разработанная в лаборатории вирусологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань); вакцина ассоциированная против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота инактивированная, эмульсионная, разработанная в лаборатории вирусологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

е) аппаратура:

промышленная роллерная установка для культивирования клеток и вирусов в бутылях диаметром 130 ± 2 мм и высотой 315 ± 3 мм (типа четверть); ультразвуковой дезинтегратор "УЗДН - 2Т" ; ультрацентрифуга "Beckman L5 - 65" (USA).

Материалами для анализа эпизоотической ситуации неблагополучных хозяйств по смешанным респираторным инфекциям являлись данные, полученные в 2001-2004 гг. при постановке диагноза, разработке и осуществлении про-тивоэпизоотических мероприятий.

Диагностику смешанных респираторных инфекций телят проводили с использованием серологических, вирусологических и бактериологических методов исследований.

Серологические исследования основывались на выявлении антител к вирусам парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и аденовирусу, а также к хламидиям.

Антигемагглютинины к вирусу ПГ-3 определяли микрометодом в реакции торможения гемагглютинации с использованием микропанели с U-образными лунками. При этом использовали парагриппозный антиген типа-3, изготовленного Табольской биофабрикой. Диагностическим титром считали разведение сыворотки 1:32 (5,01о&) и выше.

Наличие специфических антител к вирусам ИРТ и вирусной диареи крупного рогатого скота устанавливали в реакции непрямой гемагглютинации со стандартными герпесвирусными и диарейными эритроцитарными диагности-кумами, изготовленными во ВНИВИ, и в реакции вируснейтрализации на культурах клеток TR и MDBK. Диагностическим титром считали разведение сыворотки 1:16 (4,0 log2) и выше в РИГА и 1:4 (2,0 log2) и выше в РВН.

Антитела к аденовирусу крупного рогатого скота определяли в реакции непрямой гемагглютинапии со стандартным эритроцитарным аденовирусным диагностикумом, изготовленным во ВНИВИ. Диагностическим титром считали разведение сыворотки 1:16 и выше.

Комплементсвязывающие и гемаглютинирующие антитела к группоспеци-фическому хламидийному антигену выявляли в реакциях связывания компле-

мента и РНГА. Сыворотки с титром 1: 8 (3,0 к®2) и выше в РСК, 1: 32 и выше в РНГА считали диагностическими.

Анализ результатов серологических исследований служил основанием для разработки диагностических тест-систем, средств терапии и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят.

Наработку вирусной биомассы при получение специфических антигенов и антисывороток к вирусам ИРТ, ВД и адено- для изготовления диагностических препаратов в РНГА, проводили в промышленной роллерной установке для культивирования клеток и вирусов в трёхлитровых стеклянных бутылях. Заражение 2-3-х суточных перевиваемых линий культур клеток MDBK и TR (после формирования монослоя) вышеперечисленными штаммами вирусов в дозе 0,11,0 ТЦЦ 50/клетка проводили после смены ростовой среды на поддерживающую. Инфицированные культуры клеток инкубировали при температуре 37±0,5°С до полной деструкции монослоя.

С целью получения антигенов вирусов ИРТ, ВД и адено- для конструирования диагностических препаратов были проведены сравнительные опыты 3-х способов выделения вирионов из инфицированных клеток с дальнейшим их концентрированием и очисткой.

С целью получения специфических сывороток были испытаны 2 схемы гипериммунизации кроликов очищенными инактивированными антигенами вирусов. Первая схема основывалась на серии внутривенных введений возрастающих доз антигена с недельными перерывами между каждым циклом иммунизации. При отработке 2-ой схемы антиген в смеси с полным адъювантом Фрейнда вводили внутрикожно в 5-и точках, с двух сторон в области спины. Повторную иммунизацию осуществляли через 45 дней подкожно в области плечевого пояса с неполным адъювантом Фрейнда.

Активность и специфичность антигенов и сывороток проверяли в ИФА и РВН.

Сенсибилизацию иммунологических планшет антигенами вирусов ИРТ, ВД и адено- и постановку ИФА проводили общепринятыми методами.

Одним из этапов наших дальнейших исследований являлось изготовление на основе полученных антигенов и сывороток экспериментальных серий препаратов для диагностики ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в РНГА.

С этой целью в опыте были использованы антигены вышеперечисленных вирусов, выделенные из вируссодержащей жидкости путём её обработки неионным детергентом с последующим осаждением их сульфатом аммония. Сенсибилизацию формалинизированных и танизированных эритроцитов барана антигенами ИРТ, ВД и аденовируса проводили общепринятыми методами.

Активность и специфичность опытных серий эритроцитарных диагности-кумов испытывали в РНГА с гомологичными и гетерологичными гипериммунными сыворотками, а также с сыворотками интактных животных. В качестве контрольного теста использовали реакцию нейтрализации.

С целью получения полиспецифической сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят были испытаны 4 схемы гипериммунизации

бычков коммерческими и экспериментальными вакцинами против ИРТ, ПГ-3, хламидиоза, ВД и аденовирусной инфекции в условиях откормочного хозяйства. При изыскании оптимальной схемы иммунизации животных отрабатывали дозы, сроки, кратность и способы введения вакцинных препаратов.

В процессе иммунизации у животных изучили в динамике уровень накопления специфических антител к вирусам ПГ-3 в РТГА, ИРТ и ВД в РВН, аденовирусу в РИГА и к хламидиям в РСК.

При этом взятие крови проводили до начала опытов, перед каждым циклом иммунизации и при завершении гипериммунизации, т.е. перед производственным взятием крови.

Первое производственное взятие крови осуществляли по 0,6 л, а затем - по 1,6 л на 100 кг массы животного после очередного введения антигенов. Кровь от доноров брали из ярёмной вены в стерильные 5-10-ти литровые бутыли. Тотальное взятие крови проводили в условиях мясокомбината стерильными полыми ножами из сердца.

Сыворотку готовили методом свертывания и отстоя в лаборатории вирусологии ВНИВИ, а также - в районных ветеринарных лабораториях.

Препарат консервировали 5 % стерильным раствором химически чистого фенола до конечной концентрации его в сыворотке 0,5 %. Консервированную сыворотку фильтровали через стерилизующие фильтры "СФ", выдерживали в бутылях в холодильной камере при +4° 1,5-2 месяца для отстоя; после чего проверяли :

а) на стерильность - путём высева в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и Сабуро. Посевы выдерживали в течении 10 суток при температурах 37С ± 0,5°С и 20±2°С;

б) на безвредность - введением по 0,5 см3 сыворотки подкожно 10-ти мышам массой 16-18 г и по 10 см3 трём морским свинкам массой 350-400 г. За лабораторными животными наблюдали в течении 10 суток;

в) на активность - в серологических реакциях на наличие антител к вирусам ИРТ и ВД в РВН, ПГ-3 в РТГА, аденовирусу в РИГА и хламидиям в РСК.

Сыворотку, удовлетворяющую требованиям контроля, расфасовывали в стерильные флаконы вместимостью 100, 200 и 500 см3, каждый флакон закупоривали резиновой пробкой, обкатывали металлическими колпачками и этике-тировали.

С целью определения сроков хранения полиспецифической сыворотки ее активность исследовали в серологических реакциях через 3, 6, 9 и 12 месяцев после изготовления.

Испытание эффективности применения полиспецифической сыворотки проводили в 2003-2004 г.г., в двух неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах РТ.

В первом хозяйстве, которое специализируется по доращиванию и откорму сборного поголовья крупного рогатого скота, сыворотку применяли аэрозольно с профилактической целью 3-х кратно - в день поступления животных на комплекс и повторно через 7-10 дней. Затем все клинически здоровые телята вакцинировались ассоциированной инактивированной вакциной против ПГ-3, ИРТ

и хламидиоза крупного рогатого скота (ВНИВИ г.Казань).

Во втором хозяйстве (репродукторном) сыворотку с профилактической целью вводили телятам внутримышечно на 2-ой день после рождения 3-х кратно с интервалом 7-10 дней. На 5-7 день после последней обработки сывороткой все клинические здоровые животные также вакцинировались вышеуказанной вакциной.

Сыворотку с лечебной целью применяли как аэрозольно, так и парентерально 3-х кратно с интервалом 2 дня. Доза поливалентной сыворотки при парентеральном введении с профилактической целью составляла 0,5 см3/кг, а с лечебной -1,0 см3/кг.

Аэрозольное применение препарата проводили в дозе 2,0 см на 1 м помещения с лечебной и 1,0 см3 на 1 м3 помещения с профилактической целями при помощи струйного генератора САГ-1 в приспособленной герметизированной камере. Для создания устойчивого аэрозоля в препарат добавляли до 10 % химически чистого глицерина. По мере оседания аэрозоля через 10-15 минут компрессор включали повторно. Сеанс ингаляции продолжался в течение одного часа.

Статистическую обработку цифрового материала, полученного в ходе исследований, проводили общепринятыми методами вариационной статистики согласно критериям Стьюдента при помощи прикладных программ Microsoft Excel 2000.

3. Результаты исследований.

3.1. Клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят.

Данные эпизоотологического обследования животноводческих хозяйств и клинический осмотр поголовья крупного рогатого скота, проведённых в различных регионах Среднего Поволжья и Урала, показали, что болезни органов дыхания регистрируются у телят разных возрастных групп. Однако в зависимости от типа ведения хозяйства имелись существенные различия в возрастных показателях заболеваемости животных.

Так, в откормочных хозяйствах, комплектующихся из различных хозяйств поставщиков, респираторные заболевания 2,5 - 3 — месячных телят регистрировались через 5-10 дней после комплектации. Респираторная патология в основном возникала из-за нарушения технологии комплектования, то есть, несоблюдением правил транспортировки, отсутствием противострессовой обработки животных, длительностью заполнения помещений разновозрастным поголовьем, а также не соблюдения принципа - "все пусто - все занято".

В хозяйствах с замкнутым циклом производства респираторные заболевания, в основном, регистрировались через 4-7 дней после перевода телят из профилактория в группу доращивания. Однако, следует отметить, что в ряде обследованных хозяйств репродукторного типа заболевания респираторного тракта у молодняка регистрировали уже с 7 - 14-и дневного возраста. Респира-

торная патология телят в более раннем возрасте связано с переболеванием их диареей. Установлено, что до 50 % таких животных переболевали респираторными болезнями, причём, бронхопневмония у них протекала в более тяжёлой форме и приводила к гибели до 60 % телят из числа заболевших.

В репродукторных хозяйствах заболеваемость телят респираторными болезнями характеризовалось более строгой сезонностью. Наиболее часто патология органов дыхания регистрировалась в зимне-весенний и летний периоды, что связано с массовыми отелами коров (скученность), рождением ослабленных, с пониженной резистентностью и плохой адаптационной способностью телят. В летнее время респираторные заболевания в основном, выявлялись у 4-6 месячных животных, которые переболели в зимне-весенний период, т.е. проявлялись рецидивы хронической инфекции.

Клиническая картина респираторной патологии телят как в промышленных комплексах, так и в репродукторных хозяйствах была практически идентичной и характеризовалась общим угнетением, повышением температуры тела до 41 С0, снижением аппетита, проявлением сухого кашля, развитием серозного ринита, трахеита, бронхита, а также диареей, учащением пульса и дыхания.

При вскрытии вынужденно убитых и павших животных патологические изменения выявлялись в верхних дыхательных путях и лёгких.

С целью выяснения этиологии смешанных респираторных заболеваний было исследовано 1665 проб сыворотки крови различных половозрастных групп крупного рогатого скота 76 неблагополучных хозяйств 5-и регионов Поволжья и Урала на наличие антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, адено-,ВД и хлами-диям. Результаты исследований показали, что наибольший процент положительных проб выявлено к вирусу ПГ-3 - 76,6 %, а также к вирусу ИРТ - 35 %, К другим этиологическим агентам этот показатель был ниже, а именно: к хлами-диям - 28,4 %, аденовирусу - 18,4 % и ВД -17,9 %.

Следует отметить, что при исследовании 577 проб сыворотки крови на наличие специфических антител одновременно к 5-и вышеперечисленным агентам в 67,9 % проб были обнаружены антитела к двум и более возбудителям, что свидетельствует о полиэтологичности и смешанном течении респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота разных половозрастных групп было установлено, что наиболее высокий процент положительно реагирующих проб к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД, адено- и хламидиям выявляются среди сухостойных коров (22,5-91,5 %) и новорожденных телят (19,490,1 %). По видимому, высокий процент положительных проб в вышеуказанных группах животных связан с накоплением специфических антител у матерей перед отелом и передача их с молозивом молодняку.

3.2. Усовершенствование диагностикумов для РИГА при ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции телят.

На первом этапе исследований проведён отбор чувствительных к вирусам ИРТ, ВД и адено- перевиваемых культур клеток, а также штаммы вирусов, ко-

торые хорошо репродуцировались в них. Установлено, что полевые штаммы "КА-9" вируса ИРТ,"МСС"- аденовируса, а также вакцинный штамм "ВК-1(ВИЭВ)" ВД стабильно репродуцировались на культурах клеток MDBK и TR в течении 10-15 пассажей, неизменно сохраняя свои первоначально высокие инфекционные титры (соответственно 6,5 , 5,5 и 6,25 ^ ТЦЦ 50/мл). В связи с этим в дальнейших опытах по разработке способов получения антигенов были использованы вышеуказанные штаммы вирусов и линии культур клеток.

С целью получения антигенов вирусов ИРТ, адено- и ВД для конструирования диагностических препаратов проведены 4 серии опытов, в которых отрабатывались 3 метода извлечения вирионов из инфицированных клеток с последующим концентрированием и очисткой вирусных частиц от клеточного деб-риса. Первый метод основывался на разрушении клеток 3-х кратным замораживанием и оттаиванием, с последующим концентрированием вирусного материала ультрацентрифугированием; при 2-ом способе - вируссодержащую биомассу обрабатывали ультразвуком, а затем концентрировали ПЭГом - 6000; третий метод заключался в обработке ВСЖ неионным детергентом и осаждение вирусных частиц сульфатом аммония.

Полученные антигены исследовали на активность и специфичность в ТФ-ИФА с контрольными положительными и отрицательными сыворотками лошади и кролика. В качестве контрольного теста использовали реакцию нейтрализации на культуре клеток. Результаты опытов показали, что суммарный уровень антител специфических сывороток в ИФА с антигеном, полученным путем обработки вирусной биомассы детергентом с последующим осаждением вирио-нов сульфатом аммония (3-ий метод), был соответственно в 3,7-5,1 и 1,5-2,4 раза выше по сравнению с антигенами, полученными по 1 и 2-ому методам, а также в 15-18,2 раза, чем в РВН.

Сравнительный анализ титров антител гипериммунных сывороток, полученных при оценке 2-х схем иммунизации кроликов, показали их относительную идентичность. В связи с этим обе схемы рекомендуются для получения специфических сывороток к наборам диагностикумов ИРТ, адено- и ВД.

На основании антигенов и специфических сывороток к ним были изготовлены экспериментальные серии наборов препаратов для серологической диагностики вышеперечисленных инфекций в РИГА. При изучении активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в лабораторных условиях установлено, что титры антител в положительных сыворотках в РИГА были на 23 порядка выше, чем в реакции нейтрализации, что свидетельствует о высокой чувствительности диагностических препаратов.

Согласно приказу Департамента ветеринарии Минсельхоза РФ на базе ВНИВИ и ЦНМВЛ проведены комиссионные испытания «Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации».

Результаты комиссионных испытаний показали, что все антигены 3-х опытных серий эритроцитарного диагностикума реагировали только со специфической сывороткой ИРТ и не вызывали гемагтлютинацию с положительными сыворотками, полученными к гетерологичным антигенам.

При определении специфичности контрольной положительной сыворотки из набора диагностикума в реакции нейтрализации с гомологичным (ИРТ) и ге-терологичными (РС, ПГ-3, адено- и ВД) вирусами было установлено, что специфическая сыворотка содержит вируснейтрализующие антитела только к вирусу ИРТ и не реагирует с другими вирусами.

В лаборатории вирусологии ВНИВИ, а также в Республиканских ветеринарных лабораториях Татарстана, Башкортостана и республики Удмуртии проведены испытания на активность и специфичность экспериментальных диагно-стикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота с полевыми сыворотками, взятыми из неблагополучных по смешанным респираторным заболеваниям телят хозяйств Поволжья и Урала.

Результаты сравнительных серологических исследований показали, что при постановке РИГА с экспериментальными сериями эритроцитарных диагно-стикумов количество положительно реагирующих проб выявляется на 5,0 -45,0 % к вирусу ИРТ, на 6,7 - 45,0 % к аденовирусу и 0 - 35,0 % к вирусу ВД больше, чем при исследовании их в РН. Следует также отметить, что титры специфических антител в РИГА были также выше на 0,7 - 3,4 к вирусу ИРТ, на 0,1 - 2,3 к^ к аденовирусу и на 0,5 - 3,6 1о& к вирусу ВД, чем в реакции нейтрализации.

Таким образом, лабораторные и производственные испытания экспериментальных серий эритроцитарных диагностикумов ИРТ, аденовирусной инфекции и ВД показали их высокую серологическую активность и специфичность, что позволяет рекомендовать эти наборы для диагностики смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота.

3.3. Усовершенствование средств пассивной профилактики и лечения респираторных заболеваний телят.

33.1. Разработка оптимальных схем гипериммунизации животных доноров для изготовления полиспецифической сыворотки при смешанных респираторных инфекциях телят.

С целью получения полиспецифической сыворотки против респираторных заболеваний телят были испытаны различные схемы гипериммунизации животных-доноров с использованием экспериментальных и коммерческих вакцин, которые применяются при вирусных и хламидийных инфекциях крупного рогатого скота.

В первоначальных опытах для гипериммунизации откормочных бычков были использованы моновакцины против ИРТ, ПГ-3 и хламидиоза крупного рогатого скота. В результате проведения 5 серий опытов, были определены оптимальные дозы вакцин, кратность и интервалы между введениями и была изыскана рациональная схема (№ 1) гипериммунизации доноров с использованием моновакцин, которая оказалась как наиболее приемлемой. Серологические исследования экспериментальных серий полиспецифической сыворотки, полученной по данной схеме, выявили высокий уровень титров специфических антител к вирусам ПГ-3 (1:256-1:1024) в РТГА, ИРТ (1:32-1:128) в РН и к хлами-диям (1:80-1:160) в РСК.

В дальнейшем в целях совершенствования получения полиспецифической сыворотки против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота вместо вирусных моновакцин была использована ассоциированная вакцина "Бивак"(ПГ-3+ИРТ) и моновакцина против хламидиоза крупного рогатого скота. В результате проведенных опытов была разработана рациональная схема (№ 2) иммунизации откормочных бычков, позволяющая получать гипериммунную сыворотку с высоким уровнем специфических антител, не уступающие по серологической активности гипериммунной сыворотке, полученной по схеме № 1.

Учитывая, что в лаборатории вирусологии ВНИВИ была разработана ассоциированная инактивированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота, нами проведены исследования по изысканию рациональной схемы гипериммунизации с использованием указанной вакцины. Анализ результатов серологических исследований 5-и экспериментальных серий полиспецифической сыворотки показал, что ассоциированная вакцина обеспечивает выработку в высоких титрах специфических антител к вирусам инфекционного ринотрахеита (7,3 ^2), парагриппа-3 (9,2 ^2) и к хламидиям (6,0 к^2).

Проведенный клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг показал, что в этиологии респираторных заболеваний телят в неблагополучных хозяйствах немаловажную роль играют кроме вирусов ПГ-3, ИРТ и хламидий также аденовирус и вирус диареи крупного рогатого скота. В связи с этим по разработанной нами технологии была изготовлена поливалентная экспериментальная вакцина, содержащая в высоких концентрациях антигены вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД, адено- и хламидий. Результаты проведенных исследований по изучению иммуногенной активности показали, что экспериментальные серии пятивалентной вакцины способствовали выработке специфических антител у доноров к вирусам ПГ-3 в титрах 1:512-1:1024 в РТГА,ИРТ- 1:64- 1:128, ВД -1:32-1:128 в РВН, аденовирусу 1:128-1:256 в РИГА и к хламидиям 1:128 -1:5 12вРСК.

Таким образом, используя как моно-, так и ассоциированные вакцины были разработаны 4 рациональные схемы гипериммунизации откормочных бычков для получения полиспецифической сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота.

Анализ результатов серологических исследований опытно-производственных серий гипериммунной сыворотки, полученных во ВНИВИ и в 2-х районных ветеринарных лабораториях РТ, с использованием вышеуказанных схем иммунизации доноров показал высокий уровень содержания в препаратах специфических антител к вирусам ПГ-3 (8,0-10,0 ^2), ИРТ (5,0-7,0 ^2), хламидиям (5,0-7,0^2), ВД (5,0-6,0 и аденовирусу (7,0-8,0 к^).

33.2. Испытание полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят в производственных условиях.

Лечебную и профилактическую эффективность полиспецифической сыво-

ротки в производственных условиях испытывали в 2-х неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям крупного рогатого скота хозяйствах Лаишевского района РТ.

В комплексе по доращиванию и откорму молодняка КРС п/ф "Юбилейная" изучение лечебной эффективности полиспецифической сыворотки проводили на животных в период вспышки респираторного заболевания.

С этой целью были созданы 5 групп:

1 группа (опытная) - 84 больным телятам с лечебной целью полиспецифическую сыворотку вводили в дозе 1,0 см3/кг внутримышечно, трёхкратно, с интервалом в 2 дня.

2 группа (опытная) - 25 больных телят с лечебной целью обрабатывали аэ-розольно полиспецифической сывороткой в дозе 2,0 см3 на 1 м3 помещения, 3-х кратно с интервалом в 2 дня;

3 группа (контрольная) - 24 больных телёнка, которых лечили общепринятыми методами с применением миксоферона и антибиотиков широкого спектра действия;

4 группа (опытная) - 254 телёнка с целью оценки профилактического действия полиспецифической сыворотки обрабатывали аэрозольно в дозе 1,0 см на 1м3 помещения, 3-х кратно с интервалом 7 дней;

5 группа (контрольная) - 12 клинически здоровых телят не подвергались обработке сывороткой, а при появлении признаков респираторного заболевания их лечили общепринятыми методами с применением антибиотиков широкого спектра действия.

Подобная оценка эффективности полиспецифической сыворотки нами была проведена в молочно-товарной ферме СХПК им. Нариманова. Животные также были разделены на 5 групп; при этом количество опытных и контрольных животных соответственно по группам составило: в первой - 75; во второй - 44; в третьей - 15; в четвертой - 85 и в пятой - 14 телят. Дозы и кратность применения полиспецифической сыворотки с лечебной и профилактической целью были идентичны таковым, которые были использованы в спецхозе "Казань".

Использование полиспецифической сыворотки для лечения телят, больных смешанной респираторной инфекцией в откормочном хозяйстве, показало, что оно эффективно как при внутримышечном введении, так и при применении сыворотки аэрозольно. При этом проценты выздоровевших телят были почти идентичны и составили соответственно 90,5-88,8 %. В тоже время лечение больных телят общепринятыми препаратами (антибиотики широкого спектра действия, миксоферон и др.) было менее эффективно и составило лишь 62,5 % Применение полиспецифической сыворотки с лечебной целью как внутримышечно, так и аэрозольно у больных телят вызывало улучшение общего состояния, уже на 2-ой день после применения препарата - происходило снижение температуры тела, ослабление клинических признаков. После повторного применения полиспецифической сыворотки температура тела снижалась до физиологических показателей с дальнейшим улучшением общего состояния животных. После 3-го применения полиспецифической сыворотки на 7-8 день насту-

пало полное выздоровление больных телят в пределах 89-90 % из числа заболевших.

В контрольной группе животных, где лечение проводили тетрациклином и миксофероном, симптомы смешанной респираторной инфекции несмотря на проводимое лечение сохранялись в течении 15-20 дней; лишь у отдельных телят отмечалось улучшение общего состояния, снижение температуры тела, полное восстановление аппетита на 9-10 дни и в последующие сутки наблюдалось выздоровление. При этом процент выздоровевших не превышал 37-40% из числа заболевших.

Идентичные результаты получены и в молочно-товарной ферме СХПК им. Нариманова и составили соответственно 89,3; 86,4 и 60 %

Применение полиспецифической сыворотки с целью профилактики смешанных респираторных инфекций телят показывает, что она предотвращает возникновение заболевания в неблагополучных хозяйствах у 70,6-68,2 % телят. Следует отметить, что незначительная часть заболевших телят после профилактической обработки в дальнейшем подвергались лечению с использованием полиспецифической сыворотки и общепринятых препаратов.

Применение полиспецифической сыворотки для лечения заболевших телят из профилактических групп способствовало выздоровлению до 91,6 % и 89,0 % животных соответственно против 50-55,5 % при использовании общепринятых препаратов. При этом следует отметить, что применение препарата аэрозольно с профилактической целью было более эффективно по сравнению с парентеральным способом введения.

Также следует отметить, что при применении полиспецифической сыворотки с профилактической целью экономическая эффективность из расчета на одно животное при парентеральном введении составила 598,45 руб., а при аэрозольном - 634,76 руб., экономический эффект на 1 рубль затрат соответственно -11,97 и 15,16 руб.

Использование же сыворотки для лечения смешанных респираторных инфекций телят показал, что экономическая эффективность на одно животное при этом составила - 299,67 руб. при парентеральном введении и 300,45 руб. при аэрозольном, экономический эффект на 1 рубль затрат составил соответственно -2,89 и 3,17 руб.

Таким образом, проведенными исследованиями было установлено смешанное течение респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах, особенности и сроки возникновения их, а также различие в серопозитивности крупного рогатого скота в зависимости от возраста и физиологического состояния животных.

Были разработаны оптимальные методы получения специфических антигенов вирусов ИРТ, ВД и аденовируса крупного рогатого скота и специфические антисыворотки к этим возбудителям, позволившие разработать регламент изготовления и контроля наборов диагностикумов для РИГА.

На основе разработанных рациональных схем гипериммунизации с использованием моно- и ассоциированных вакцин получены полиспецифические сыворотки, обладающие высокой лечебно-профилактической эффективностью

при смешанных респираторных инфекциях телят.

Нормативно-технические документы на набор диагностикума для РИГА при ИРТ и на полиспецифическую сыворотку при смешанных респираторных инфекциях крупного рогатого скота, утверждены директором ВНИВИ и начальником управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.

4.ВЫВОДЫ

1. Клинико-эпизоотолгические исследования, проведенные в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах Поволжья и Урала, показали, что в промышленных комплексах со сборным поголовьем скота животные заболевают через 5-10 дней после комплектации, а в репродукторных хозяйствах - на 4-7 день после перевода телят из профилактория в группу доращивания.

2. Серологическим мониторингом установлена значительная роль вирусов ПГ-3 (76,6 %), ИРТ (35,0 %), ВД (17,9 %), аденовируса (18,4 %) и хламидий (28,4 %) в этиологии респираторных заболеваний телят в неблагополучных хозяйствах. Выявление в 67,9 % исследованных сывороток крови крупного рогатого скота специфических антител к двум и более возбудителям, свидетельствует о смешанном характере респираторной патологии телят.

3. Разработан оптимальный метод получения специфических антигенов вирусов ИРТ, ВД и аденовируса крупного рогатого скота, основанный на обработке вирусной биомассы неионным детергентом с последующим осаждением вирусных частиц сульфатом аммония, который позволил разработать лабораторный регламент изготовления и контроля наборов препаратов для серологической диагностики ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в РИГА.

4. Лабораторными и производственными испытаниями эритроцитар-ных диагностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота доказана их высокая активность, специфичность и экспрессность при массовых серологических исследованиях.

5. Гипериммунизация откормочных бычков производственными и экспериментальными моно- и ассоциированных вакцинами позволило изыскать рациональные схемы получения высокоактивной полиспецифической сыворотки против вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД, аденовируса и хламидий крупного рогатого скота.

6. Применение полиспецифической сыворотки в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах путем парентерального введения и методом аэрозольной обработки животных с профилактической целью позволило уменьшить гибель и вынужденный убой телят соответственно на 33,4 % и 41,6 %; применение препарата с лечебной целью способствовало сокращению этих показателей в 2,9-3,9 раза по сравнению с контрольными груп-

пами животных, подвергнутых лечению общепринятыми методами.

7. Экономическая эффективность полиспецифической сыворотки при парентеральном методе лечения телят на 1 рубль затрат составила 2,89 рубля и аэрозольном способе обработки - 3,17 рубля; при профилактическом ее применении - 11,97 и 15,16 рубля соответственно.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагтлютинации" утвержденная директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года;

2. Технические условия на "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагтлюти-нации", утвержденные директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года (ТУ-9388-002-00492374-04);

3. Временное наставление по применению "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденное начальником управления ветеринарии Кабинета Министров РТ 5 марта 2003;

4. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота", утвержденная директором ВНИВИ 15 ноября 2004 года;

5. Технические условия на "Полиспецифическую гипериммунную сыворотку против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота", утвержденные директором ВНИВИ 15 ноября 2004 года;

6. Временное наставление по применению "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота", утвержденное начальником управления ветеринарии Кабинета Министров РТ 18 ноября 2004 года;

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Гумеров В.Г., Ахметсафин Р.Г., Каримуллина И.Г., Угрюмова B.C., Равилов А.З., Конов М.Н. Серологический мониторинг вирусных респираторных инфекций телят. // Матер, междун. науч. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». - Ульяновск, - 2003. - С. 146.

2. Макаев Х.Н., Гумеров В.Г., Коннов М.Н., Акимов Е.К., Хузин Д.А., Ахметсафин Р.Г. Изучение иммуногенности ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита крупного рогатого скота // Матер. Междун. науч. конф., посвященной 45-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". «Актуальные

проблемы инфекционной патологии животных» -Владимир. -2003. -С.435-437.

3. Ахметсафин Р.Г. Изготовление поливалентной гипериммунной сыворотки и ее применение при вирусно-хламидийных инфекциях телят. // Матер, междунар. науч. конф. молодых учёных 24-26 марта, «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных»- Владимир, 2004г.-С.145-147.

4. Ахметсафин Р.Г., Шарафиева P.P. Экспресс-диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемаглютина-ции // Материалы Всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса, КГАВМ. -2004. -С.5-7.

5. Авзалов Ф.З., Зоткин Г.В., ГумеровВ.Г., Ахметсафин Р.Г. Иммуномор-фологическая оценка эффективности применения ассоциированной вакцины против хламидиоза, ПГ-3 и ИРТ крупного рогатого скота.// Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана.- 2004.- Т. 178.- С.3-13.

Подписано в печать 2.06.2005 Формат бумаги 60x84 /16

Заказ 11 Тираж 100 Отпечатано на офсетном участке ФГНУ ВНИВИ (г. Казань) Адрес: 420075, г. Казань, Научный городок-2

' í.;

7 2 ИЮЛ 2ÛG5 у^Т*"

ч

•V

у

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Ахметсафин, Рамиль Гарифуллович

Введение.

1. Обзор литературы. ф 1.1. Этиология смешанных респираторных инфекций телят.

1.2. Диагностика смешанных респираторных инфекций телят.

1.3 Специфические меры борьбы и профилактики смешанных респираторных инфекций телят.

Собственные исследования.

2. Материалы и методы.

2.1. Материалы исследований. 2.1.1. Штаммы микроорганизмов.

2.1.2. Культура клеток.

2.1.3. Питательные среды и растворы.

2.1.4. Животные.

2.1.5. Вакцины.

2.1.6. Аппаратура.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Анализ эпизоотической ситуации по смешанным респираторным инфекциям крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах.

2.2.2. Лабораторные методы исследования при смешанных респираторных инфекциях крупного рогатого скота.

2.2.3. Получение антигенов вирусов ИРТ, ВД и адено- и специфических сывороток к ним для изготовления диагностических препаратов в

РИГА.

2.2.4. Изготовление и испытание экспериментальных серий эритроцитарных диагностикумов при ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции.

2.2.5. Изыскание оптимальной схемы гипериммунизации доноров-продуцентов для изготовления полиспецифической сыворотки.

2.2.6. Лабораторный регламент изготовления и контроля полиспецифической гипериммунной сыворотки.

2.2.7. Оценка лечебно-профилактической эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки в лабораторных и производственных условиях.

2.2.8. Статистическая обработка результатов исследований.

3. Результаты исследований.

3.1. Клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят. 3.2.Усовершенствование диагностикумов для РНГА при ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции телят.

3.2.1. Получение антигенов и сывороток для конструирования эритроцитарных диагностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в РНГА.

3.2.2. Изготовление экспериментальных серий наборов препаратов для диагностики ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного ф рогатого скота в РНГА.

3.3. Усовершенствование средств пассивной профилактики ^ и лечения респираторных заболеваний телят.

3.3.1. Разработка оптимальных схем гипериммунизации животных доноров для изготовления полиспецифической сыворотки при смешанных респираторных инфекциях телят.

3.3.2. Испытание полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят в производственных условиях.

4.0бсуждение результатов исследований. ф, б.Выводы.

6. Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят"

Актуальность темы. Использование эффективных технологий ведения животноводства, возникающих на фоне экономической реформы народного хозяйства, оказывает существенное влияние на эпизоотическую ситуацию, требующую от животных определённого адаптивного периода, когда наблюдается нарушение равновесия между нарождающимся молодняком и условиями их содержания. Этот период, сопровождающийся временным снижением резистентности организма, обуславливает наиболее благоприятные условия для смешанных инфекций телят полиэтиологичных по своей структуре, которые при традиционных условиях содержания животных, как правило, не возникают или протекают в латентной форме. Определенную роль при этом играет ещё то обстоятельство, что некоторые хозяйства проводят комплектацию своего поголовья из различных хозяйств поставщиков, в каждом из которых регистрируется разная эпизоотическая ситуация (Петрова О.Г., 2002).

Одними из основных причин возникновения смешанных респираторных инфекций телят на фоне стрессовых воздействий являются такие этиологические агенты, как вирусы инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, аденовирус и хламидии (Щипицын А.Г., 1998; Высокопоясный А.И., 2000; Равилов А.З. и др. 2000; Мищенко В.А.и др. 2000, 2003; D.G.Bryson 1996; R.W.Fulton et al., 2000). Исходя из этого, становится очевидным необходимость определения роли отдельных возбудителей в этиологии смешанных инфекций телят, изучение закономерностей циркуляции и персистенции их, оценка иммунологического состояния организма больных и переболевших животных, а также усовершенствование средств их диагностики и специфической профилактики.

В связи с этим, ключевыми моментами при организации лечебно-профилактических мероприятий при смешанных респираторных инфекциях телят являются применение современных методов диагностики и изучение изменения динамики накопления специфических антител. В настоящее время существует большое число эффективных способов и методов диагностики моно- и смешанных инфекций сельскохозяйственных животных. Однако следует отметить, что респираторные инфекции характеризуются полиэтиоло-гичностью, что обуславливает необходимость быстрого проведения диагностических исследований, позволяющих осуществлять неотложные организационные и лечебно-профилактические мероприятия в неблагополучных хозяйствах в массовом порядке. Одним из таких тестов является реакция непрямой гемагглютинации, которая не лишена определенных недостатков, что требует усовершенствование данного метода.

Гибель новорождённых телят при инфекционных заболеваниях происходит из-за низкого уровня иммуноглобулинов вследствие несвоевременного приема молозива матери, что обуславливает низкий уровень колостральных антител. Кроме того, в результате метаболического распада колостральных антител и одновременного увеличения объёма крови у телят наступает постепенная утрата пассивного иммунитета (Кис В .Н., 1980; R.F.Kahrs, 1977;D.Levieux,l 982).

Учитывая вышеизложенное, наряду с необходимостью улучшения кормления и содержания с соблюдением зоогигиенических норм и правил в животноводческих помещениях, важным звеном является применение в первые дни жизни телят поливалентных гипериммунных сывороток с дальнейшим использованием ассоциированных вакцин для создания надежной защиты их от инфекционных агентов смешанной природы.

Цель исследований : усовершенствовать средства диагностики и специфической профилактики, смешанных респираторных инфекций телят.

Для выполнения намеченной цели были выдвинуты следующие задачи:

- провести клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах;

- усовершенствовать технологию изготовления эритроцитарных диагно-стикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота;

- изучить активность и специфичность эритроцитарных диагностику-мов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в лабораторных и производственных условиях;

- усовершенствовать технологию получения полиспецифической гипериммунной сыворотки против респираторных смешанных инфекций телят;

- изучить лечебно-профилактическую эффективность полиспецифической гипериммунной сыворотки в производственных условиях.

Научная новизна.

Проведен клинико-эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторных инфекций телят в неблагополучных хозяйствах Поволжья и Урала.

Впервые разработан универсальный метод выделения антигена вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и аденовируса из инфицированной клеточной биомассы, а также рациональные схемы гипериммунизации кроликов данными антигенами с целью получения высокоспецифичных диагностических сывороток.

На основании полученных антигенов и сывороток, созданы эритроци-тарные диагностикумы ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.

Лабораторными и производственными испытаниями установлена высокая специфичность и активность наборов препаратов для диагностики ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции в РИГА.

Впервые разработаны рациональные схемы гипериммунизации откормочных бычков экспериментальными и коммерческими вакцинами в условиях промышленного комплекса с целью получения полиспецифической сыворотки. В производственных условиях установлена высокая терапевтическая и профилактическая эффективность препарата при смешанных респираторных заболеваниях телят.

Практическая значимость работы.

Результаты исследования позволили составить комплект технической документации:

1. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденная директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года;

2. Технические условия на "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденные директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года;

3. Временное наставление по применению "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденные начальником управления ветеринарии Кабинета Министров РТ 5 марта 2003;

4. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденная директором ВНИВИ 15 ноября 2004 года;

5. Технические условия на "Полиспецифическую гипериммунную сыворотку против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденные директором ВНИВИ 15 ноября 2004 года;

6. Временное наставление по применению "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденная директором ВНИВИ 15 ноября 2004 года;

На защиту выносятся следующие основные положения:

- данные клинико-эпизоотологического и серологического мониторинга в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям крупного рогатого скота хозяйствах Поволжья и Урала;

- усовершенствование технологии изготовления эритроцитарных диаг-ностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, изучение их активности и специфичности в лабораторных и производственных условиях;

- усовершенствование технологии получения полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций телят и изучение ее лечебно-профилактической эффективности в производственных условиях.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на: отчетных научных конференциях Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (Казань, 2001-2004 г.г.): международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины" (Ульяновск, 2003 г.); международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ ВНИИЗЖ "Актуальные проблемы инфекционной патологии животных" (Владимир, 2003); международной научной конференции молодых учёных 24-26 марта "Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных" (Владимир, 2004); всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса, КГАВМ. (Казань, 2004).

Публикация результатов исследований:

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации:

Материалы диссертации изложены на 121 страницах машинописного текста и включают титульный лист, введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы и практические предложения. Список литературы включает .143 работ отечественных и 64 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами, 4 рисунками. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую ценность.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Ахметсафин, Рамиль Гарифуллович

5.Выводы

Клинико-эпизоотолгические исследования, проведенные в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах Поволжья и Урала, показали, что в промышленных комплексах со сборным поголовьем скота животные заболевают через 5-10 дней после комплектации, а в репродукторных хозяйствах - на 4-7 день после перевода телят из профилактория в группу доращивания.

Серологическим мониторингом установлена значительная роль вирусов ПГ-3 (76,6 %), ИРТ (35,0 %), ВД (17,9 %), аденовируса (18,4 %) и хламидий (28,4 %) в этиологии респираторных заболеваний телят в неблагополучных хозяйствах. Выявление в 67,9 % исследованных сывороток крови крупного рогатого скота специфических антител к двум и более возбудителям, свидетельствует о смешанном характере респираторной патологии телят. Разработан оптимальный метод получения специфических антигенов вирусов ИРТ, ВД и аденовируса крупного рогатого скота, основанный на обработке вирусной биомассы неионным детергентом с последующим осаждением вирусных частиц сульфатом аммония, который позволил разработать лабораторный регламент изготовления и контроля наборов препаратов для серологической диагностики ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в РНГА.

Лабораторными и производственными испытаниями эритроци-тарных диагностикумов ИРТ, ВД и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота доказана их высокая активность, специфичность и экспрессность при массовых серологических исследованиях.

Гипериммунизация откормочных бычков производственными и экспериментальными моно- и ассоциированными вакцинами позволило изыскать рациональные схемы получения высокоактивной полиспецифической сыворотки против вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД, аденовируса и хламидий крупного рогатого скота. Применение полиспецифической сыворотки в неблагополучных по смешанным респираторным инфекциям телят хозяйствах путем парентерального введения и методом аэрозольной обработки животных с профилактической целью позволило уменьшить гибель и вынужденный убой телят соответственно на 33,4 % и 41,6 %, а применение препарата с лечебной целью способствовало сокращению этих показателей в 2,9-3,9 раза по сравнению с контрольными группами животных, подвергнутых лечению общепринятыми методами.

Экономическая эффективность полиспецифической сыворотки при парентеральном методе лечения телят на 1 рубль затрат составила 2,89 рубля и аэрозольном способе обработки - 3,17 рубля; при профилактическом ее применении - 11,97 и 15,16 рубля соответственно.

6. Практические предложения.

I. НТД на "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотра-хеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации":

1. Технические условия на "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденные директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года;

2. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Набора препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденная директором ВНИВИ 8 декабря 2003 года;

3. Временное наставление по применению "Набор препаратов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота реакцией непрямой гемагглютинации" утвержденные начальником управления ветеринарии Кабинета Министров РТ 5 марта 2003;

II. НТД на "Полиспецифическую гипериммунную сыворотку против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденная директором ВНИВИ;

4. Технические условия на "Полиспецифическую гипериммунную сыворотку против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденные директором ВНИВИ;

5. Временная инструкция по изготовлению и контролю "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота" утвержденная директором ВНИВИ;

6. Временное наставление по применению "Полиспецифической гипериммунной сыворотки против смешанных респираторных инфекций крупного рогатого скота";

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Ахметсафин, Рамиль Гарифуллович, Казань

1. Азаренко B.C., Музычин С.И., Корольков В.И., Андросов В.А.К вопросу эпизоотологии вирусных респираторных болезней крупного рогтого скота.// Актуаль. вопросы вет. вирусологии. Тез. и докл. 5 Всесоюзн. вет. вирусолог. Конф., Казань, 1980 -с.17-18.

2. Аль-Родан A.M. Выделение вируса парагрипп-3 от телят с острым респираторным синдромом в откормочных хозяйствах промышленного типа.// Сб.науч.трудов.МВА,1980,т.116,-с 5355.

3. Багданос И.И., Гельжинис А.В., Тамашаускене Б.И. Серологические исследования больных респераторными заболеваниями телят.// Актуаль. вопросы вет. вирусологии. Тез. докл. конф., Казань, 1980,-с.48.

4. Баженов К.С. Распространение вирусов парагриппа-3 и респи-раторно-синцитиальной инфекции среди телят на откорме в осенне-зимний период. // Бюл. ВНИИ экспери. вет., 1983, 50, -с.6-8.

5. Басова Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа.// Автореф. дисс. докт. вет. наук. Краснадар,2002.

6. Белоус В., Стеценко В., Кучерявенко Л., Кучерявенко Р., Постой В., Троценко 3. 1нфекцшний ринотрахеЬг велико! poraToi худоби // Вет.медицина Украши.- 2002.- № 5.- с. 7-9.

7. Белоусова Р.В., Нургазиев Р.Х., Фролов B.C., Корольков В.И. Аденовирусная инфекция крс.//Ветеринария,1989,1,-с.29

8. Бортничук В.А., Попович Г. Выделение хламидий от сельскохозяйственных животных и их идентификация.// Микробиологический журнал. 1981 ,т.43,2-с. 183-187.

9. Ю.Бортничук В.А. Хламидиоз свиней. Киев: Урожай, 1991. -192 с.

10. П.Бурдов Г.Н., Марасинская Е.И., Крысенко Ю.Г. Вирусные инфекции крупного рогатого скота. // Ветеринарный врач, 3, 2001, -с.38-39.

11. Вечеров А.Н., Дороненкова Г.Н., Лисицин В.В., Прохватилова Л.Б., Аянот П.К., Мищенко В.А. Применение ПЦР и нуклеотидного секвестрования фрагмента гена HN для выявления и штаммовой дифференциации вируса парагриппа-3 КРС.//Владимир, 2000, -с.207-212.

12. Вечеркин А.С., Зудилина З.Ф., Крюков Н.Н. Антигенная совместимость вирусов парагриппа-3 и инфекционного ринотра-хеита в организме телят.//Труды ВИЭВ,т.53,Москва, 1981,-с.26-28.

13. Высокопоясный А.И., Басова Н.Ю., Шахова А.Г., Щипицын А.Г. Респираторные болезни телят на Кубани. // Ветеринария.-2000.-№ 12.-е.- 8-11.

14. Гард С. Химическая инактивация вирусов.// Природа вирусов. Москва. 1958.-с. 134-157.

15. Гаффаров Х.З., Михайлова Л.И., Кривоносов B.C. Выделение вируса из группы ОЛТ при энзоотическом аборте у овец // Ветеринария. 1971. -№ 7. - С.109-111.

16. Гаффаров Х.З. Энзоотия хламидийного энцефаломиэлита у телят.// Актуальные вопросы вет.вирусологии.Тез.докл. 5 Всесоюзн. вет. вирус, конференции. Казань, 1982. -с.22.

17. Гаффаров Х.З. Диагностика и специфическая профилактика респираторно-кишечных болезней у телят (Обзор иностр. литературы). // Ветеринария, 1983. - № 4. - С. 73-76

18. Гаффаров Х.З. Инфекционные болезни рогатого скота хлами-# дийной, микоплазменной и вирусной этиологии, разработкадиагностических и лечебно-профилактических препара-тов.//Автореф. диссер. докт.вет.наук. Казань,1986,-с.455.

19. Глотов А.Г. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации и особенности эпизоотического процесса заболевания в современных условиях: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Новосибирск. -1999. -39с.

20. Глотов А.Г., Орешкова С.Ф. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации // Ветеринария. 1996. - №6. - С. 24-27.

21. Глотов А.Г., Петрова О.Г., Глотова Т.И., Нефедченко А.В., Та-тарчук А.Т.Душнир Н.И., Котенова С.В.,Ветров Г.К., Сергеев А.Н. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота.//Ветеринария,3,2002,-с. 17-21.

22. Гнутов И.Н. Клиника и диагностика генерализованной формы хламидиоза зоанозной природы у людей.// Автореф. дисс. докт. мед. наук-М., 1981.

23. Гумеров В.Г., Угрюмова B.C., Равилов А.З. Изготовление и применение полиспецифической сыворотки при смешанных инфекциях телят.// Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. "Вирусные болезни с/х животных. Владимир, 1995.- С. 207.

24. Гумеров В.Г., Хамадеев Р.Х., Равилов А.З. Хламидийно-герпетический энцефалит крупного рогатого скота.// Материалы Международной научной конф. посвящ. 125-летию академии. Часть 1. Казань, 1998.-С.33.

25. Гумеров В.Г. Сравнительное изучение эффективности ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота.// Материалы Международной научной конф. посвящ. 125-летию академии. Часть 1. Казань, 1998.-С.34.

26. Гуненков В.В., Халенов Г.А., Сюрин В.Н. Вирусные и хлами-дозойные респираторные и кишечные инфекции крупного рогатого скота. //Животноводство и ветеринария.том.8, Москва,1975, -с.5-131.

27. Данилевский В.М. Бронхопневмония телят: этиология, диагностика. // Профилактика и лечение. Ветеринария, 1985, 1 -с.16-19.

28. Дудников А.И., Коропов В.Н., Ашуров С.А. и др. Иммуноген-ность у крупного рогатого скота и свиней противоящурной вакцины с маслянным адъювантом // Пробл. вет. иммунол. М., -1985.-С. 138-139.

29. Евстифеев В.В. Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики при хламидиозе свиней.// Канд. Дисс.,1998.

30. Ефанова Л.И. Диагностика и профилактика наиболее распространенных инфекционных болезней телят и поросят: Учебное пособие. Воронеж: ВГАУ, 1991. - 128 с.

31. Кабиров С.В. Опыт сохранения молодняка крупного рогатого скота.//Ветеринария, 1996,3.

32. Какоуллин Т.Е., Лудыпов Ц. Некробактериоз крупного рогатого скота.// Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных.- Новосибирск, -1997. -С.115-116.

33. Карпуть И.М. Влияние техногенных факторов на качество молозива и развития болезней молодняка.// Акт.пробл. патол. с-х ж-ых : Матер. Междунар. науч.-практ. конф.; Минск, 2000. -с.483-486.

34. Колкова Н.И., Мартынова В.Р. К вопросам диагностики хла-мидийных инфекций// Ж.Клин. Лаб. диагн. 1998. - № 2. - С. 20-21.

35. Коннов Н.М. Изучение различных клинических форм инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. //Тез. докл. Респ.научно-технич. конф. по проблемам ветеринарнии и зоотехнии. Казань. 1980, -с.58-60.

36. Коннов Н.М. Пассивная профилактика и лечение респираторных инфекций телят на комплексах. //Инфекционные болезнисельскохозяйственных животных .Новосибирск. 1984,- с.71-72.

37. Конопаткин А.А., Масимов Н.А.,Аль-Родан A.M., Тищенко В.П. Смешанная инфекция парагриппа-3 и пастереллеза те-лят.//Ветеринария, 1982,5,-c.33-34.

38. Конопаткин А.А. Эпизоотологические проблемы смешанных инфекций в современном животноводстве.// Потол.органов дыхания и пищеварения с.-х. животных, Москва, 1983,-с.3-9.

39. Конопелько П.Я., Клименков К.П. Иммунные дефициты у телят, больных бронхопневмонией и их иммуномодулирующая терапия.//Ветеринария, 1987,3,-с.73-76.

40. Конопаткин А.А.,Тищенко В.П.,Масимов Н.А.,Аль-Родан A.M. Эпизоотология и диагностика парагриппа-3 крупного рогатого скота в откормочных хозяйствах промышленного ти-па.//Патол. органов дыхания и пищеварения с.-х. животных. Москва, 1983,-с. 19-23.

41. Крюков Н.Н. Инфекционный ринотрахеит-пустулезный вульвовагинит крупного рогатого скота.// Итоги науки и техн.ВИНИТИ АН СССР. Животноводство и ветеринария. 1980,т.13, -с.32-113.

42. Крюков Н.М. Научные принципы специфической профилактики вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота. // Труды ВИЭВ, т. 53, Москва, 1981, -с13~20.

43. Крюков Н.Н., Зудилина З.Ф., Вечеркин А.С. Иммуногенность ассоциированной вакцины против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита КРС.//Тр. ВИЭВ, Москва. 1983,-Т.57. -с.23-25.

44. Крюков Н.Н., Шуляк А.Ф. Ранняя устойчивость телят к инфекционному ринотрахеиту.//Ветеринария, 1990, 9, -с.28.

45. Кузнецов Д.П., Самуйленко А .Я., Панферова С.М., Кузнецова С.В. Антиген вируса ИРТ КРС для реакции непрямой гемагглютинации. Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. Щелково.- 2000.- с. 207-208.

46. Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И. Получение и очистка моноклональных а-тел к вирусу инфекционного ринотрахеита // Вирусные болезни с.-х. ж-ных: Тез. докл. науч.-практ. конф. Владимир, -1995. - С. 75.

47. Куриленко А.Н., Крупальник B.JI. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных.-М.; Колос, 2000, -с.144.

48. Куриленко А.Н. Крупальник В.А. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных.// Справоч. пособие, Москва, 2000, -с.111-119.

49. Курносов А.Н. и сотр.у/Вопросы ветеринарной вирусологии и микробиологии. Покров, 1990.

50. Лебедева Е.П.,Кленина Н.В., Антонов B.C. Защитные свойства молозива в первые 10 дней жизни.// Проб. вет. иммунол. -М. Агропромиздат, 1985, с.58-60.

51. Лещинская Н.П. и сотр. Вакцинация против респираторно-синцитиальной инфекции.//Вопр. Вирусологии, 1986, 5,-с.517.

52. Лисицын В.В. Разработка и совершенствование средств специфической профилактики ПГ-3 крупного рогатого ско-та.//Автореф. дисс. канд. вет. наук,2000.

53. Логтнов С.И. Некоторые аспекты формирования имунных комплексов в сыворотке крови крупного рогатого скота в проШессе индивидуального развития. // Сиб. аграр. наука III тысячелетия .- Новосибирск, 2000.- с. 160.

54. Масимов Н.А. О роли бактерий при респираторных заболеваниях телят в откормочных хозяйствах.//Сб. науч. трудов MB А, т.116,Москва,1980,-с.51-52.

55. Матковська С.Г. Д1агностика шфекцшного ринотрахе1ту-пустульозного вульвовапшту великой рогатой худоби за по-зазниками антитш в носовому, шхвовому секретах та сльозк Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Харьюв. -1999. -20 с.

56. Митрофанов П.М. Актуальные проблемы респираторных болезней телят в Сибири.//Науч.-техн. бюл. СО ВАСХ-НИЛ,1983,40,-с.З-9.

57. Мищенко В.А., Гусев А.А., Сухарев О.И., Ручнов Ю.Е., Гетманский О.И., Лисицын В.В. Особенности респираторных инфекций телят. // Ветеринария,- 2000.- № 9.- с. 5-6.

58. Мищенко В.А., Захаров В.Н., Кухаркина О.В., Жбанова Т.В., Никешина Т.Б., Лисицин В.В., Павлов Д.К.//Акт. Прбл. Инфек. Патологии ж-ых.// Матер.Межд. научн. конфер. посвящ. 45-летию Ф.Г.У. «ВНИЗЖ» 30-31 окт.2003 г., Владимир,-с.77-82.

59. Мищенко В.А., Костыркин Ю.А., Яременко Н.А., Лисицин В.В., Ручнов Ю.Е., Гетманский О.И. Вакцинация новорожденных телят против ИРТ и ПГ-3 КРС.// Ветеринария, 7,2003.-с. 19-22.

60. Мищенко В.А. Проблема респираторных смешанных инфекций молодняка КРС. // Акт. пробл. инфекц-ой патологии ж-ых. Мат. Межд. науч. конфер. Владимир, 2003, -с.73-77.

61. Музычин С.И., Шишко В.В., Дроздова JI.B. Контроль поствакцинального иммунитета при парагриппе-3 у телят путем определения уровня местных секреторных антител.// Микроорганизмы в сельском хозяйстве. 1983, -с.85.

62. Музычин С.И. Факторы секреторного иммунитета при вакцинации телят вакциной «Бивак » против парагриппа 3 и инфекционного ринотрахеита.// Вет. наука произ-ва. Минск, 1986, 25, -с.3-5.

63. Нефедченко А.В. Латенция вируса ИРТ у крупного рогатого скота: особенности течения и эффективность иммуномодуля-торов: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Новосибирск. - 2002. -23 с.

64. Нехуров Л.Б. Парагрипп-3 и аденовирусная инфекция крупного рогатого скота в Бурятской АССР.//Науч.-техн. бюлл. СО ВАСХНИЛ,1983,40,-с.16-20.

65. Петрова О.Г., Глотов А.Г. Особенности эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота на Урале. //Акт. вопр. ветеринарии: Тез.Докл. 1-й науч.-практ. конф. фа-культ. вет. медицины НГАУ. Новосибирск. 1997.- 51-52.

66. Петрова О.Г., Татарчук А.Т., Сапожникова Н.Л., Стригалева Н.И. Острые респираторные вирусные инфекции КРС, в хозяйствах Свердловской области. // Ветерин. врач, 4, 2000, -с.86-90.

67. Петрова О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Среднего Урала и оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий.//Автореф. диссер. докт.вет.наук.,Москва,2002,-с.12-28.

68. Петрова О.Г., Татарчук А.Т., Сапожникова Н.Л., Шевченко Н.И., Хаматов М.Ф. Глотов А.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в Свердловской области.// Ветеринария, 2, 2002. -с. 11-15.

69. Петрова О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции КРС в племенных хозяйствах Среднего Урала и оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий. // Автореф. Москва, 2002.

70. Преображенская Э.А. Денисенко В.Н. Иммунный статус коров-матерей и телят.//Акт.вопр. инфекц. и инваз. болезней ж-ых.Сб. науч. тр.,Москва, 1993,-с.90.

71. Равилов А.З., Гаффаров Х.З., Гумеров В.Г. Чтобы обеспечить надежную защиту молодняка. //Ветеринарный врач.2000, 4, -с.74-81

72. Ревякина Е., Шуляк А.Ф., Майджи О.В., Юров К.П. Иммунный ответ у животных на введение вакцины Тривак ВИ-ЭВ.//Ветеринария, 1998, 6, -с.25-27.

73. Садиков В.Е. Пневмоэнтириты // Профилактика инфекционных болезней крупного рогатого скота. Москва, 1982, -с.105-136.

74. Серов В.Н., Краснопольский В.И., Делекторский В.В. и др. Хламидиоз (клиника, диагностика, лечение): Методические рекомендации / М.: Патент, 1996. 22с.

75. Сизов И., Бостанджиева Р. Изоляция на аденовирусы от бронхопневмоничи телята. // Ветер, мед. науки, т.20, 5-6, 1983, -с.52-56.

76. Сисягин П.Н., Реджепова Г.Р., Убитина И.В., Зоткин Г.В. Профилактика вирусных респираторных болезней те-лят.//Мат. межд. науч-практ. конф. Актуаль.пробл. болезней молодняка в соврем, условиях. Воронеж, 2002.-с.38-40.

77. Сметанин М.А. Особенности течения гриппа у крупного рогатого скота в хозяйствах Среднего Поволжья.// В кн. Диагност. зараз, заболев, с-х. животных, Казань, 1982, -с.45-47.

78. Соколов С.Г. Ринотрахеитно-пастерилезная инфекция у телят и ее вакцинопрофилактика.//Профилактика и мерыборьбы с болезнями молодняка с.-х. животных. Тез.докл.республ. научно-произв. конф.,МинскД990,-с.90-91.

79. Сухарев О.И., Гладченко Н.Р. Диссеминация и перси-стирование вирусов ИРТ, ПГ-3,ВД-БС в организме телят при экспериментальном заражении.//Сб.науч.тр. ВГНКИ вет препарат., Москва, 1981,-с 87-92.

80. Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Частная вирусоло-гия.//Справочная книга. Москва, Колос, 1979, -с.472.

81. Сюрин В.Н., Халенев Г.А., Соколова H.JI. Особенности клинического проявления некоторых вирусных респираторно-кишечных болезней телят. // Ветеринария.- № 3.- 1983.- с. 3739.

82. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных. М.: Агропромиздат, -1991. -528с.

83. Сюрин В.Н., Самуйленко А .Я., Соловьев Б.Н., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. Москва, ВНИТИБП, 1998, -с.242-243

84. Тищенко В.П. Аденовирусная инфекция как этиологический фактор респираторного синдрома телят в промышленных комплексах. // Сб. науч.трудов. MB А, т. 116. Москва, 1980, -с.48-51.

85. Угрюмова B.C., Равилов А.З. Дезинфектанты широкого спектора действия при зоантропонозах хламидийной и вирусной этиологии.//Мат. Всесоюзн.конф.,Львов,1988,-с105-106.

86. Федюк В.И., Лысухо А.С. Лечение и профилактика респираторных болезней телят.// Ветеринария, 1997,7-С.20-22.

87. Фельдман И.И. Теория и практика профилактики диареи (колибактериоза) и энзоотической бронхопневмонии телят разрывом эпизоотической цепи.//Болезни телят и меры борьбы с ними. Новосибирск, 1983,-с.3-17.

88. Фомин Ю.В., Петрова И.А., Иванова Г.А., Фоменко Н.В. Воспроизведение инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в эксперименте.// Важнейшие исследования по изучению заболеваний с.-х. животных. Сб. науч. трудов, Москва, 1973 ,т.70,-с. 108-109.

89. Хазипов Н.З., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. Хламидиозы сельскохозяйственных животных.// В кн., Москва, 1984, -с.70-95.

90. Хамадеев Р.Х. Методы лабораторной диагности-ки.//Хламидиозы сельскохозяйственных животных. М.,Колос, 1984,-с. 152-193.

91. Хамадеев Р.Х. Хламидиозные аборты и мертворождае-мость у свиней в промышленных комплексах.//Акт. Вопр. инф. патол. в пром. животноводстве.Сб. науч. трудов КВИ,Казань, 1987,-с.32-3 5.

92. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней (Эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика и меры борьбы).//Дисс. док. вет. наук. Казань, 1990,-с.514

93. Хамадеев Р.Х., Равилов А.З. Возбудители хламидиозов сельскохозяйственных животных и патогенность их для человека.//ЖМЭиМ , 1997, 1, -с.99-101; -с.96-97.

94. Харламбиев Х.Е. Ринотрахеитни энзоотии при импорти-рани крави.//Ветер.сборник, 1974, т.72, 10,-с. 17-20.

95. Христовски М.,Бошнаковски Г,Ашанин Р.,Митров Д. Компаративно испитуванье на IBR/IPV преку крвен серум и млеко со ELISA и SN тест.Югославия, Ма-кед.ветер.Прегл, 1993,Г.22.бр. 1/2.

96. Цветков П., Петков К., Огнянов Д. Серологични проуч-ваня на вирусе на мукозната болест-вируна диарея по говеда-та.// Ветер, мед. науки, т. 19,4,1982,-с.29-35.

97. Чекшиев В.М., Кабанцев А.И. Профилактика респираторных болезней телят на крупных фермах. //Ветеринария.- № 4. 1983,- с. 33-35.

98. Шафикова Р.А. Иммунобиологическая характеристика хламидий, усовершенствование методов и средств лабораторной диагностики хламидиозов: Автореф.дис. . докт. вет. наук.-Казань, 1991.-38 с.

99. Шахов А.Г., Першина С.И., Лебедев М.И. Инфекционные заболевания КРС проявляющиеся респираторными и конъюнктивальными синдромами. Матер.конф.,2001.-е. 107108.

100. Шехватов А.Г. Эпизоотология и профилактика инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота в хозяйствах Волгоградской области. // Новое в технол. произ-ва ипереработки продукции животноводства. Тез. докл. Волгоград, 1996, -с.79-80.

101. Штрауб О.Х. Инфекции крупного рогатого скота вызываемые вирусами герпеса. Москва, 1981,-с.207

102. Ярных Е.В. Биологические свойства сухой вирус-вакцины против парагриппа-3 крупного рогатого ско-та.//Труды ВИЭВ ,т. 5 3,Москва, 1981 ,-с.21 -25.

103. Ahl R.,Straub О.С. Comparison of interferon production in cattle after intranasal infection with parainfluenza-3 live vaccine and avirulent IBR|IPV herpesvirus.|| Zbl.Vet.-Med.B.1985.-Bd.32.-S.407-416.

104. Alexandersen S. Advantages and disadvantages of using live vaccines.//Acta Vet. Scand. 1996- Suppl.-90. P.89-100.

105. Anderko R., Blauarmel H., Seiodel H. Die Beziehung des Antikorpermangelsyndroms zum Aufzuchtergebnis von Kolbern imK-0-Abschnitt.-Mli.Veter.Med.,1982,B.37,10,-s.369-372.

106. Bamford A.I., Adair B.M., Foster J.C. Primary cytotoxic response of bovine peripheral blood leukocytes to parainfluenza type 3 virus infection // Vet. Immunol. 1995. - V. 45, №12. - P. 85-95.

107. Badi Y. The Chlamydia and ist identification.||Livestok Ad-siver.-1987,12,-p.4.

108. Baner K. und and. Serologiche Untersuchngen uber den vor-breitungegrad der IBR/IPV-Viruinfection bei Rinderm in Baneru // Tierarztl. Umsch. 1980. №9. - S. 594-600.

109. Barrera M. Nada. J., Nunes А. и др. Evaluation de una vacuna inactivada contra el virus IBR||IPV. ||| REN. Salua anim., 1996; vol. 18, №3.-P. 145- 150.

110. Beck B.E. Infectious bovine rhinotracheitis Encephalimyelit is in cattle and its differential diagnosis // Can. Vet. J., 1985, V. 16, №9, P. 269-271.

111. Bryson D.G., Mc.Nulty M.S., Logan E.F., Cuch P.F. Respi-ratery syncytial virus pneumonia in young calves: clinical and patholoqic findings.-Amer. J.Vet.Res.,1983. V.44,9.-p.l648-1655.

112. Brownlie J., Clurke M.C.,Howard C.J. Experimental production of fatal mucosal disease in cattle.-Vet.Res.,1984,V.l 14.,22,-p.535-536.

113. Brownline J.,Nobiron I.,Thompson I.,Collins M.E. Bovine virus (BVDY). Pathogenedsis and vaccines.||2nd Int.Vet.Vaccines and Diagn.conf.-Oxford, 2000,-p.39.

114. Blanco L.A., Barrera P.J., Macrotegui M.A. Ultrastructura de una chlamydia de origen bovino// An. Inst Nac. Investig. Agr.Ser.: Hig. Sanid anim. 1975. - №2. - P. 37-55.

115. Brownlie J., Clurke M.C.,Howard C.J. Experimental production of fatal mucosal disease in cattle.-Vet.Res.,1984,V.l 14.,22,-p.535-536.

116. Brownline J.,Nobiron I.,Thompson I.,Collins M.E. Bovine virus (BVDV). Pathogenedsis and vaccines. 112nd Int.Vet.Vaccines and Diagn.conf.-Oxford, 2000,-p.39.

117. Burraqe Т.,Kramer E.,Brown F. Inactivation of viruses by aziridines. -B asel .Karqer, 1999,102.-p. 131 -139.

118. Deptula W., Buczek J. Slcutecznosc surowicy preciwwiru-sowci PL-3 i JBR oraz SZCZ epionek PL-3 i JBR w profilaktyce enzootyzncj bronchopneumonii cielgt w chowie przemyslowym. "Med. Vet.", 1983, 39,- №> 3, p/ 153-155.

119. Dusham P.J.K.,Hassard L.E. Prevalence of antibodies to infectious bovine rhinotracheitis,parainfluenza-3,lovine respiratory syncytial,and bovine viral diarrhea viruses in cattle in Saskatchewan and Alberta.||Canad. Veter. J. 1990,V.3 l,-p.815-820.

120. Ellis J.A.,Yonq Choon,Yonq C. Sistemic adverse reactions in young Simmental calves following administration of a combination vaccine.||Canad,Vet. J.-1997.-V.3 8,1 ,-p.45-47.

121. Fodor L. Use of a combined vaccine containinq farmspecific bacterium strains and parainfluenza-3 virus for the prevention of respiratory diseases of cattle.|| Maqy.Allatorv.Lapja.-1993.-V.48, 5,- p.276-279.

122. Franlcena K.,Franlcen P.,Vandehoek J.,Koskamp G.,Kramps J.A. Problemility of detectinq antibodies to bovine herpesvirus 1 in bulk milk after the introduction of a positive animal on to a neqative farm.||Veter.Rec.,1997.Vol.l40,4,-p.90-92/c.

123. Frediksen В., Press C. McL, Loken Т., Odegaard S.A. Distribution of viral antigen in uterus, placenta and foetus of cattle persistently infected with bovine virus diarrhoea virus // Veter. Microbiol.- 1999.- Vol. 64, №2/3. p. 109-122.

124. Ghram A., Reddy P.G., Morrill J.L. et al. Bovine herpesvirus-1 and parainfluenza-3 virus interactions: clinical and immu-noloqical response in calves.||Canad.J. of Vet.Res.-1989.V.53,l,-p.62-67.

125. Gibbs E.P.J. Rweyemamu M.M. Bovine herpes-viruss.||Vet.Bull.,1977, V.47.-p.417-425.

126. Horsh F. Epizootologic, Pathogenese und Infection-sabwehr bei den chlamydieninfectionen bei der wiederlcauer-wissen-schafte. Zschr.Humbold-imiver.-sitat. Berlin. 1980, l,-c.5-9.

127. Houe H. Epidemiological features and economical importance of bovine virus diarrhoea (BVDV) infections // Veter. Microbiol.- 1999.-Vol. 64, №2/3. p. 89-107.

128. Koves В., Belalc S.,Varga J. Parainfluenza-3 virus oktani szerepe egy gazdasag borjainak legzoszervi megbetege-desciben.-Magyar allatorv.Lapja, 1983,B.3 8,1 ,-s. 14-17.

129. Kruse P.E. The importance of colostral immunoglobulins and their absorption from the intestine of the new born animals. Ann. rech.vet., 1985,V.14,4,-p.349-353.

130. Kubin G., Fectstellung der infektiosen Rhinotracheitis (IBR) des Rindes in Osterreich.-Wien tierarztl.Mschr., 1982,B.69,5,s. 145148.

131. Liao Y.K.,Lu Y.S.,Chiu S.Y.et al. The dewelopment of multivalent inactivated vaccines composed of infectious bovine rhinotracheitis, bovine viral diarrhea and parainfluenza-3 viral anti-gens.||Proc.Soc.Exp.Biol., 1975,-Vol.59,-p.270-272.

132. Linon P. Suites contentieuses de la vente de genisses import-ees et reconnues infectees de rhino-tracheite.-Rev.Med.veter., 1979. V.130,8-9,-p.l 179-1192.

133. Li-Zi-Kua, Ju-Li-Wen, Li-Li-Jin. Diskovery of extracellular multipl from of Chlamydia trachomatis in the tissue cul-ture.j|Chlin.Med. 1994,107, 9,-p.683-685.

134. Luzzago C., Riccinini R., Zepponi A., Zecconi A., Stady on prevalence of bovine viral dirrhoea virus (BVDV) antibodies in 291.alian dairy herds with reproductive problems. // Veter. Microbiol.- 1999.- vol. 64, № 2/3. p. 247-252.

135. Luqovic B.,Cajavec S.,Cvetnic S. Stability of infections bo-vin chinotracheitis monovalent vaccine (Rl-Vac) and infectious bovine chinotracheitis and parainfluenza-3 bivalent vaccine 9 (RIPAVAK R). |jVet Arhiv.-1984.-V.54,4 -p/183-188.

136. Marshall R.L., Frank L.H. Nautralizing Antibodi in serum and nasi secretions of calves exposed to parainfluenza-3.-Virus.Amer.J.Vet.Res., 1971, V.32,11 ,-p. 1699-1706.

137. Meszaros J. Bekacmpfung der virus bedingten Atmungs-und Verdaungekrankheiten der Kaelber in Ungarn.Mh.Veter.Med., 1983, B.35,19, s.730-732.

138. Mozaffari-Nezhad H., Kita J. Antibody appearance of parainfluenza-3 virus in cattle population in West Azarbaijan prov-ince.-Pol.Arch.Veter., 1980, V.21,4,-p.473-476.

139. Mrozelc M. Bacteriologische Untersuchungen zum Vor-commen von Chlamydia psittaci in Genitaltrakt und in Kotproben vonBullen.|| Inaug.-Diss.-Hannover. 1989-s.l 19.

140. Msolla P.M.,Wisemann A., Allan E.M.,Selman J.E. Experimental infection ofcattle of different ages with infectious bovine rhinotracheitis virus (Straihen strain). J. Сотр. Patholak.,1983, V. 93, N2, p. 205-210.

141. Novak S. Virus PI-3 a bovine adenovirusy alco patogenhe agens pri ochoreni teliat.-Veterinarstvi, 1982.32,2.,75-76.

142. Polak M.P., Zmudzinski J.F. Prevalence of bovine viral diarrhoea virus infection in bulls in artificial insemination centers in Poland // Veter. Microbiol.- 1999.- Vol. 64, №2/3. -p.253-257.

143. Pritchard D. Current research on calf pneumonia.-Veter.ann. (Bristol), 1980,V.20,-. 189-203.

144. Rola J.,Zmudzinski J. Ocena testu ELISA do wykrywania przeciwcial dla wirusa BHV 1.||Med.weter.,1997,R.53,3,-s.148-150.

145. Shimizu T. Isolation of Mycoplasma bovis from calf pneumonia in Japon.-Jap.S.Vet.Sci.,1982, V.44,6,-p.981-983.

146. Shulz L. If you think a live IDR, BVD, PI 3. Vaccine is more effective then killed-think again.||Beef.-1987.-v.24.4,-p.39.

147. Solberg I.M. Neutralising antibody to infectious bovine rhi-notracheitis/infectious pustular vulvovaginitis (IBR/IPV) virus in foetal calf serum // Acta. vet. scand. 1975. - V. 16. - P. 549550.

148. Spire Mark F. Theory and practice if immunoprophylaxis in cattle.-J.Amer.Vet.Med.Assoc., 1982, V. 181,10,-p. 1158-1161.

149. Schirrmeier H.,Bergnann H.,Meyer U. Pathogenese und Im-munogenese bei virusbedingten respiratorischen Erkrankungen des Kalbes.-Monatsh, Veteri narmed.,1982,B.37,24,-s.949-955.

150. Shimizu T. Isolation of Mycoplasma bovis from calf pneumonia in Japon.-Jap.S.Vet.Sci., 1982, V.44,6,-p.981-983.

151. Shulc L. If you think a live IBR, BVD, PI-3 vaccine is more effective than killed-think again.||Beef, 1987. V.24,4,-p.563.

152. Shulz L. If you think a live IDR, BVD, PI 3. Vaccine is more effective then killed-think again.||Beef.-1987.-v.24.4,-p.39.

153. Stalheim Ole H.V. Mycoplasmal respiratory diseases of ruminants: a review and updata.-J.Amer.Vet.Med.Assoc.,1983, V. 182,4,-p.403-406.

154. Storz J. Chlamydia and chlamydia-included diseases. Illinois, USA. 1971.

155. Straub O.C. The IBR-IPV disease complex.-Vet.Med.Rev., 1983, 2,s. 119-131.

156. Straub O.C. Infectios bovine rhinotracheitis virus.||Virus In-fectios of Rhinotracheitis. -Amsterdam, 1990.-V.9.-p.71-108.

157. Terpstra C., Eikelenboom,J.L., Glas.C, Experiences with early vaccination of fettening calves against infectious bovine, rhinotracheitis, bovine virus diarrhoea and parainfluenza type 3// Proceedings. Vol. 1. 1982.-P. 177-181.

158. Tinapp D. Rindergrippe-was ist zu tum?-Rinderwelt,1983, B.8,2,-p.48-50.

159. Towhsend J., Duffus W.P.H.,Willians D.G.L.The effect of cattle on the in vitro production of interferon by peripharal blod mononuclear cells.|| J.Comp.Path.-1988.-V.99,2,-p.l69-185.

160. Wassel M.S., Soad S.A., Girgis S. et al. Trial for preparation and evaluation of a combined vaccine for IBRV, BVDY, PI-3V. P.multocida and P.haemolytica in Eqypt.||Assiut.Vet.Mtd.J.-1996.-V.35, 70,-p.130-143.

161. Wijaska T. Effekt inactivation on polypeptide structure of transmissible qastroenteritis virus on its immunoqenetic proper-ties.||Bull.Vet.inst.Pulawy.-1979.-V23.,3-4,-p.62-80.

162. Zoizelier B. Diagnostico de las chlamydiasis animals у sus problemas.|| Gas.Veter. 1973,-Vol.35.-278, -p.388-413.