Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота"

003463391

На правах рукописи Красочко Петр Альбинович

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.23 - биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

12 [.;др 2с:э

003463991

На правах рукописи Красочко Петр Альбинович

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.23 - биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Работа выполнена в отделе вирусных инфекций РУГ1 «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского»

Научный консультант Доктор биологических наук, профессор

Заслуженный деятель науки Российской Федерации Еремец Владимир Иванович

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор

Заслуженный ветеринарный врач Российской Федерации Албулов Алексей Иванович Доктор биологических наук, профессор Цыбанов Содном Жамьянович Доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент РАСХН Девришов Давудай Абдулсемидович

Ведущая организация: ФГУ «Всероссийский научно-

исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко»

Защита состоится 10 апреля 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, п/о Кашинцево, п. Биокомбината, ВНИТИБП; E-mail: vnitibp@mail.ru; тел/факс: (495) 526-43-74

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИБП Автореферат разослан 6 марта 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук у

Ю.Д.Фролов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации. Современное веление мясного и молочного скотоводства, сопровождающееся концентрацией поголовья на небольшой площади, комплектованием животноводческих ферм и комплексов одновозрастными и одновидовыми животными с генетическим потенциалом, приближенным'к однородному, приводит к быстрому распространению инфекционных заболеваний, поражающих различные половозрастные группы животных.

Среди болезней крупного рогатого скота вирусные респираторные и желудочно-кишечные инфекции наносят огромный экономический ущерб животноводству. Возбудителями таких инфекций являются вирусы инфекционного рипотрахеита (ИРТ), парагринпа-З (ПГ-3), диареи (ВД) , рота- и короиавирусы н т.д. Это так называемые «малые» инфекции, которые у здоровых животных с нормальным функционированием иммунной системы протекают бессимптомно без выраженных клинических признаков или животные вообще не иереболевагат. Особенно тяжело болеют животные, когда в патологический процесс вовлекается 2 и более вирусов, то есть возникает смешанная или ассоциативная инфекция (В.Н.Сюрин с соавг., 1998; А.Я.Самуйленко с соавт., 2005 и др.). При тяжелом течении вирусной фазы инфекции наряду с поражением чувствительных клеток наступает значительное угнетение клеточного и гуморального звеньев иммунитета, на фоне чего условно-патогенная' микрофлора активизируется и у животных развиваются тяжело протекающие пиевмоэн-теригы, приводящие к значительному отходу заболевших животных,'снижению их продуктивности. По тропизму все вышеуказанные возбудители могут репродуцироваться в клетках респираторного и желудочно-кишечного тракта, половых органов, иммунокомпетентных клетках, то есть они пантропны. Это обуславливает их высокую контагиозность и тяжесть течения болезни.

Важное место в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при пнев-моэнтеритах телят, вызванных вирусами ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусами, играет специфическая профилактика, проводимая с иомощыо живых и инактивирован-ных вакцин. Но при современном ведении животноводства, часто связанном с недостатком или несбалансированностью кормления, приводящим к угнетению иммунной системы, вакцинация не всегда достигает нужного эффекта. При этом для снятия им-мунодепрессивного эффекта и повышения эффективности иммунного ответа оправдана стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью различных препаратов.

Одним из перспективных направлений в разработке средств иммуностимулирующей терапии и профилактики заболеваний молодняка является использование производных бактерий и продуктов пчеловодства. Из бактериальных имуносгимули-рующих препаратов особое место принадлежит бактериальным полисахаридам, которые являются поликлональными активаторами В-системы лимфоцитов, а препараты, изготовленные из продуктов пчеловодства (пыльцы,'перги, прополиса), стимулируют Т-систему лимфоцитов, особенно субпопуляцию Т-хелперов, фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивают активность гуморальных факторов иммунной защиты.

В связи с вышеизложенным, изучение эпизоотической ситуации, разработка новых средств и способов иммунологической профилактики вирусных инфекций является актуальной задачей ветеринарной науки и практики. Поэтому наши исследования были направлены на разработку и совершенствование существующих биотехнологических методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследований. Целыо настоящих исследований явилась разработка и совершенствование биотехнологических средств и методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций молодняка крупного рогатого скота.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Беларусь;

- изучить состояние иммунной системы и обменных процессов организма телят при пиевмоэнтеритах и коров с заболеваниями репродуктивных органов;

- разработать иммуностимулирующие препараты на основе непатогенных для теплокровных животных бактерий и продуктов пчеловодства, отработать схемы их применения, изучить их влияние на иммунную систему и лечебно-профилактическую эффективность при вирусных респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях;

- разработать унифицированные технологии изготовления и применения моно-и ассоциированных живых и инактивированных культуральиых вирус-вакцин для профилактики инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота;

- разработать комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят.

Научная новизна полученных результатов. Впервые в условиях Республики Беларусь изучены особенности эпизоотической ситуации по инфекционному ринот-рахеиту, вирусной диарее, иарагриппу-3, рота- и коронавирусной инфекциям в животноводческих хозяйствах. Впервые теоретически обоснованы и практически использованы технологии изготовления и применения новых иммуностимулирующих препаратов на основе бактериальных липополисахаридов и продуктов пчеловодства при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота (Патенты Республики Беларусь № 2889 (1999 г.), 3913 (2001 г.), Республики Молдова № 889 (1998 г.), 890 (1998 г.), 891 (1998 г.). Установлено явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках, что приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериях (диплом на открытие № 291 от 18.10.2005 г.). Разработаны унифицированные технологии изготовления и применения моно- и ассоциированных живых и инактивированных вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят (патенты Республики Беларусь № 5304 (2003 г.), 10696 (2008 г), 10697 (2008 г). Впервые изучено влияние на иммунную систему телят моно- и ассоциированных вакцин про-

тив респираторных заболеваний и предложены способы стимуляции иммунитета с помощью препаратов бактериальною происхождения и препаратов из пчелиной перги. По результатам собственных исследований разработана научная концепция изготовления и применения вакцин и иммуностимуляторов в промышленном животноводстве, предусматривающая регламентированное их использование с учетом состояния иммунной системы организма. Разработана научная основа оптимизации вакцинопрофилактики респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят. Результаты исследований позволяют дополнить и систематизировать научную теорию превентивного применения вакцин и иммуностимуляторов в промышленном животноводстве.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Результаты экспериментальных исследований обогащают современные знания по вопросам патогенеза, лечения и профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота, что позволяет с достаточно высокой точностью и эффективностью производить борьбу с данными заболеваниями. Изучена этиологическая структура возбудителей респираторных и желудочно-кишечных инфекций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, состояние иммунной системы и обмена веществ при данной патологии у телят. Разработанные средства, способы и схемы применения иммуностимулирующих и вакцинных препаратов для профилактики и терапии респираторных заболеваний телят позволяют значительно сократить их заболеваемость и непроизводительное выбытие. На основании проведенных исследований утверждена нормативно-техническая документация на 7 живых и инактнвировапных вакцин, 14 методических рекомендаций и указаний по совершенствованию ветеринарно-санитарных мероприятий при пневмоэнтеритах телят.

Применение указанных разработок в условиях производства позволяет в 3-5 раз сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие молодняка крупного рогатого скота от вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту;

- результаты изучения распространения вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота в Республике Беларусь, позволяющие рационально осуществлять планирование противоэпизоотических мероприятий;

- состояние обмена веществ и иммунитета у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях;

- результаты разработки, апробации и внедрения иммунокорригирующих препаратов из продуктов пчеловодства, сапрофитных бактерий, тканей животных и препаратов серебра;

- результаты конструирования и внедрения moho-, би-, трех- и четырехвалентных живых и инактнвировапных вирус-вакции для специфической профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота;.

- результаты изучения закономерности иммунного ответа у телят после имму-

пизации их вакцинами при раздельном и комбинированном применении со стимуляцией поствакцинального иммунитета, позволяющие получать у животных напряженный иммунитет и снижать заболеваемость телят респираторными инфекциями.

Личный вклад соискателя. Исследования по разработке средств и методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций, отработке параметров изготовления иммуностимулирующих и вакцинных препаратов, разработке схем их применения проводились лично соискателем, При выполнении комплексных разработок, иммуностимулирующих и вакцинных препаратов личный вклад соискателя составлял от 60 до 100%,

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены: на заседаниях и РУП «Институт эксперменталь-ной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского (1991-2008 гг.) и на Международных, Всесоюзных и Республиканских конференциях, симпозиумах и конгрессах:

Научной конференции «Болезни молодняка сельскохозяйственных животных и их профилактика на комплексах», Таллин, 1984; научной конференции «Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслуживания промышленного животноводства», Кишинев, 1987; Всесоюзной научной конференции «Стресс и иммунитет», Ростов-на-Дону, 1989; Первом иммунологическом съезде Сочи, 1989; научно-практической конференции «Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных», Минск, 1990; Всесоюзной научно-технической конференции «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине», Нижний-Новгород, 1990; научной конференции «ЯшоЫктез уе!еппагуо$ ргоЫетоэ», Ка1з1а<1огу5, Литва, 1993; научной конференции «Апитерапия и пчеловодство», Вильнюс, 1993; научно-практической конференции «Збережешсть молодняка с/г тварин - запорука розвитку твариництва Украши», Харьюв, 1994; научно-практической конференции «Бттехнолопя ветери-нарних препаратов», Харьюв, 1993; Международной научной конференции «Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы», Харьков, 1995; Международной научной конференции «Иммунодиагностика и иммунотерапия», Витебск, 1995; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», Смоленск, 1996; 5^й научно-практической конференции по апитерапии «Пчелы и ваше здоровье», Сочи, 1996; Международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных», Воронеж, 1997; Международной научно-практической конференции «Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном производстве», Минск, 1997; Международной научно-практической конференции «Зооантроионозные болезни, меры профилактики и борьбы» Гродно, 1997; 6-й научно-практической конференции по апитерапии «Пчелы и ваше здоровье», Рыбное, 1997; Международной научно-практической конференции «Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве», посвященной 100-летию со дня рождения академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца, Минск, 1998; [ итоговой научно-практической конференции БелНИИЭМ, Минск, 1998; Республиканской научно-

практической конференции «Инфекция и иммунитет», посвященная 75-летию Бел-НИИЭМ, Минск, 1999; учредительной конференции Международной ассоциации па-разитоценологов, Витебск, 1999; Международной научно-нрактической конференции «Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных», посвященной 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского, Минск, 2000; II Международной научно-практической конференции «Апитерапия сегодня - с биологической аптекой пчел в XXI век», Уфа, 2000; I Международной научно-практической конференции по пчеловодству и пчелотерапии «От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия», Минск, 2002; научно-производственной конференции «Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство», Смоленск, 2002; Международной научно-практической конференции «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных», Минск, 2003; Шестом Международном форуме по глобальной вакцинологии «Вакцины и иммунизация», Минск, 2003; Международной научно-практической конференции «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства», Ялта, 2005; Simpozionul stiintific international consacrat jubileului de 50 ani de la fondarea Institutului de Zootclmie si Medicina Veterinara «Realizad si perspective in cresterea animalelor», Chisinau, 2006; III зЧзди аштераиевапп Украши «Аттератя: досягнення та перспек-гиви розвитку», XapKÍB, 2006.

Опубликовшшостъ результатов. По теме диссертации опубликовано 105 научных работ, в том числе 7 монографий; 10 статей в изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации; 33 статьи в журналах и сборниках трудов СНГ; 39 статей и тезисов докладов в материалах конференций, 1 диплом на научное открытие, 15 патентов и авторских свидетельств, 14 рекомендаций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 483 страницах машинописного текста и состоит из: введения, общей характеристики работы, обзора литературы по теме и выбранного направления исследований; материалов и методов исследований; 8 глав собственных исследований; анализа и обобщения результатов исследований; выводов и практических предложений; списка использованной литературы, включающего 467 наименование работ отечественных и зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 115 таблицами, 42 фотографиями и рисунками. В приложении на 82 страницах, приводятся документы и таблицы, подтверждающие результаты отдельных этапов работ, их научную и практическую значимость.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в условиях отдела вирусных инфекций РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» и в животноводческих хозяйствах РБ в период с 1991 по 2008 год.

Для конструирования вакцин, проведения иммунологических исследований и получения бактериальных липополисахаридов использованы штаммы вирусов - инфекционного ринотрахеита КМИЭВ-6, диареи КМИЭВ-7, парагриппа-3 КМИЭВ-8, ротавируса КМИЭВ-3, коронавируса КМИЭВ-1 и бактерий: Esherichia coli, Staphylococcus epidermidis № 56, Mycrococcus lysodeicticus, Bacillus subtilis, Bacillus alvei КМИЭВ-11.

В качестве основного объекта исследований были использованы коровы и телята черно-пестрой породы из животноводческих хозяйств Республики Беларусь. Для диагностики ИРТ использовано 7068 сывороток крови от крупного рогатого скота; к вирусу диареи - 7692, ПГ-3 - 3159, ротавирусу - 1165, коронавирусу - 1165.

В опытах по изучению состояния иммунитета у телят и иммунологической перестройки организма после обработки иммунобиологическими препаратами (иммуностимуляторами, вакцинами), лечебной и профилактической эффективности испытуемых средств в производственных условиях использовано 23799 телят в возрасте от 1 дня до 6-месяцев; 14025 коров; 290 кроликов породы шиншилла и белый великан массой 1 - 4 кг; 295 белых мышей; 152 белых крыс.

Выполнено более 38000 серологических, 5000 вирусологически*,1 5250 иммунологических и 750 биохимических исследований.

Схема выполнения исследований

Для решения поставленных задач по изучению эпизоотической ситуации, разработке, изучению и внедрению средств и методов профилактики и терапии вирусных пневмоэнтеритов телят был использован комплекс различных методов исследо-

паний.

1. Клшшко-эпизоотологическое обследование животноводческих хозяйств, в которых эпизоотическая обстановка по массовым желудочно-кишечным и респираторным заболеваниям телят была напряженной, проводили по Бакулоиу (1982). Эпизоотическая обстановка учитывалась с использованием статистического, описательно-исторического, клинико-гематологического, патологоапатомпческого, серологического и иммунологического методов исследований по общепринятым методикам.

Диагноз желудочно-кишечных и респираторных болезней телят вирусной и бактериальной этнологии устанавливали, используя метод эпизоотического обследования и комплексе с клиническим исследованием животных, патолого-аиагомическнми изменениями у вынужденно убитых н павших животных. Для оценки эпизоотического процесса определяли заболеваемость и смертность.

Для определения эффективности иммуностимулирующих и вакцинных препаратов при пневмоэнтернтах телят проводили клиническое обследование животных -температуру тела, пульс и дыхание определяли выборочно у отдельных животных в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств. Всего общему клиническому обследованию и наблюдению было подвергнуто более десяти тысяч голов крупного рогатого скота.

2. Серологические методы включали исследование сывороток крови от здоровых и больных животных с различным клиническим состоянием и после введения сывороток и иммунизации вирус-вакцинами. С целыо установления противовирусных антител использовали следующие серологические реакции:

а) реакцию нейтрализации (РН) ставили с целыо выявления антител к вирусам ИРГ, ВД, ПГ-3, рота- и коропавирусам в исследуемых сыворотках крови кроликов для оценки иммуногешшети вакцин по общепринятой методике (В. П. Сюрин с со-авт., 1986);

б) реакцию непрямой гемагппотинации (РИГА) ставили с целыо выявления антител к вирусам ИРТ, ВД, рота- и коропавирусам в сыворотках крови с помощью эритроцитарных дпагностикумов (П. А. Красочко с соавт., 1988, 1995);

в) реакцию задержки гемагглютинации (РЗГА) для диагностики нарагригша-З и установления уровня ноствакцинальных антител ставили с помощью набора дпагностикумов производства Приволжской биофабрики (В. (Г. Сюрин с соавт., 1986);

г) нммунофермептный анализ (ИФА, Elisa) ставили по В. Н. Сюрину с соавт. (1983) в нашей модификации.

3. Иммунологические исследования проводили по следующим направлениям:

а) оценка специфического гуморального иммунитета по содержанию иммуноглобулинов М- и G-классои: количественное определение содержания иммуноглобулинов в сыворотках крови крупного рогатого скота проводили с помощью простой радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по Манчшш (1964);

б) оценка состояния клеточного иммунитета по содержанию Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса: содержание Т-лимфоцитов определяли путем постановки реакции спонтанного розеткообразова-

пия со стабилизированными эритроцитами барана, а В-лимфоцигов - с эритроцитами мыши по Д. К. Новикову и В. И. Новиковой (1979); фагоцитарное число и фагоцитарный индекс нейтрофилов устанавливали по Н. С. Киеляк и-Р. В. Ленской (1978) с помощью тест-культуры кишечной палочки или суспензии иолнстиролового латекса диаметром 0,1 - 0,2 мкм;

в) оценка состояния неспецифического гуморального иммунитета путем определения бактерицидной активности сыворотки крови, бета-лизинов, титра интерферона, концентрации лизоцима, общего белка: бактерицидную активность сыворотки крови определяли по О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966) упрощенным нефе-ломегрическим методом по отношению к E.coli (референтный тест-штамм 0 55); содержание лизоцима в сыворотках кропи определяли нефелометрическим методом по В. Г. Дорофейчуку (1968) по изменению оптической плотности микробной взвеси референтного штамма М. lysodeictius; бактериальный титр интерферона определяли нефелометрическим методом по Н.С.Мурашовой с соавт. (1986) с помощью тест-штамма St. epidermidis № 56; общий белок сыворотки крови определяли рефрактометрически с помощью рефрактора РПЛ-2.

4.Физико-химические методы исследований включали:

а) выделение иммуноглобулинов классов М и ü из сыворотки крови крупного рогатого скот проводили по И. Сроку (1987), а их очистку методом гель-фильтрации на ультрагеле АсА22;

б) выделение бактериального липополисахарида из Вас. alvei КМИЭВ-11 проводили путем термогидролиза с помощью уксусной кислоты но В. М. Никитину (1982) в модификации П.А.Красочко с сотавт. (1989). Полученный липонолисахарид стерилизовали автоклавированием.

5. Гематологические исследования выполнялись на гематологическом анализаторе «Medonic СА 620» (Швеция) с использованием реактивов производства фирмы «Cormey» (Польша). Биохимические исследования крови проводились на бихимиче-ском анализаторе «Cormey-Lumen» с использованием наборов Cormay serum HN производства фирмы «Cormey» (Польша).

6. Биометрическая обработка цифрового материала, полученного в экспериментальных исследованиях, проводилась по Р.Б. Стрелкову (1966) с учетом рекомендаций П. Ф. Рокицкого (1967), а также с использованием персонального компьютера ISA/PC! 804S6DX2-66 и программы Microsoft Exel, графическое обеспечение - с помощью программы Graph Exel.

Экономическую эффективность применения научных разработок рассчитывали согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной ГУВ МСХ и П РБ в 2000 г., а также в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ новой техники, изобретений и рационализаторских предложений», утвержденной МСХ СССР в 1983 г.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Изучение причин возникновения респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота и Республике Беларусь

На основе анализа результатов исследований установлено, что п возншеиопе-пии респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота основную роль играют следующие факторы:

-основными возбудителями респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят являются вирусы ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусы, а также условно-патогенная бактериальная микрофлора, осложняющая течение заболевания;

- иммунодефицитное состояние организма новорожденных телят (первичный иммунодефицит) или телят старше 1-месячного возраста иод воздействием неблагоприятных технологических и экологических факторов (вторичный приобретенный иммунодефицит);

-способность вирусов инфекционного ринотразеита, диареи, иарвовирусов, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с его дальнейшей иммунотолераитностыо и вирусоносительством;

-создание стрессовых ситуаций (нарушение технологии содержания и кормления животных, несбалансированность рационов по основным питательным веществам, микро- и макроэлементам, витаминам, низкоэпергетическое питание скота, скученное содержание телят па ограниченной площади);

- влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды;

-комплектование групп животных на комплексах или крупных фермах сборными телятами без учета степени ннфицированности хозяйств-поставщиков или ферм-поставщиков;

-содержание в одном помещении разновозрастных животных с различным клиническим и иммунологическим состоянием;

-нарушение принципа "пусто-занято" при заполнении помещений новыми телятами;

-генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров.

Наличие антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций в сыворотках крови певакцинированного крупного рогатого скота различных половозрастных групп и клинического состояния свидетельствует о степени инфицнрованности стад (взрослые животные), а также о переболевании молодняка вирусными инфекциями (табл.1).

В таблице. 1. представлены результаты исследований сыворогок крови от крупного рогатою скота па наличие антител к вирусам ИРТ, ВД и ПГ-3.

Таблица 1.

Результаты исследования сывороток крови от крупною рогатого скота на наличие антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций

Вирус Показатели Клиническое состояние и возраст

Коровы,3— Телята, 3-4 мес., Телята

10 лет, кли- переболевшие старше 6

нически респираторными мес., кли-

здоровые болезнями нически здоровые

Инфекционный К-во исслед. 4456/67,6 1955/65,8 657/68,8

ринотрахеит проб/процент

Вирусная диарея К-во исслед. проб/процент 4678 / 86,6 2357/84,1 657/ 88,9

Парагригш-3 К-во исслед. проб/процент 1646/55,9 1031/71,5 482 / 59,6

Из представленных в таблице данных видно, что в стадах крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах в этиологической структуре вирусных респираторных инфекций основное место принадлежит вирусам ИРТ, ВД и ПГ-3.

Полученные результаты по распространению вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3 среди коров свидетельствуют о широком распространении данных возбудителей среди воспроизводящего поголовья. Тем самым инфицированные животные способствуют перезаражению новорожденных телят еще в раннем нренаталыюм периоде развития. Это приводит к массовым вспышкам пневмоэнтеритов телят, особенно при возникновении каких-либо нарушений в кормлении, содержании животных, стрессовых ситуациях.

В таблице 2 представлены результаты диагностических исследований биологического материала на вируено-бактериальные энтериты.

Таблица 2.

Результаты диагностических исследований телят на вируспо-бактериальныс энтериты

Инфекция Вид материала Количество проб Положительные пробы, %

Вирусная диарея Сыворотка крови от переболевших телят 1270 64,8

Фекалии 574 35,1

Ротакирусная сыворотка крови от переболевших телят 1165 90,9

Фекалии 492 67,4

Коронавирусная сыворотка крови ог переболевших телят 1165 80,6

Фекалии 492 33,7

Колибактерноз Патологический материал 152 42,4

Псевдомоноз Патологический материал 152 5,8

Сальмонеллез Патологический материал 152 1,9

Стафилококкоз Патологический материал 152 7,7

Анализ результатов диагностических лабораторных исследований показал, что при серологическом исследовании антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8% обследованных переболевших энтеритами телят из хозяйств, в которых отмечались массовые заболевания телят энтеритами, к ротавирусу - 90,9%; короиавирусу - 80,6%. У больных энтеритами гелят установлено наличие антигенов ротавируса у 67,4% от обследованных животных, коропавируса - у 33,7%; вируса диареи - у 35,1%.

2.2.2. Состояние иммунной системы и обмена веществ у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях

Псреболевание телят вирусными респираторными и желудочно-кишечными инфекциями сопровождалось значительным угнетением клеточного н гуморального звеньев иммунной системы. Наиболее характерным являлось уменьшение количества Т-лимфоцитов (в 1,2 раза меньше, чем у клинически здоровых), В-лимфоцитов (в 1,28 раза), фагоцитарной активности нейгрофилов периферической крови (в 1,23 - фаго-циграиое число и 1,56 - фагоцитарный индекс).

Изучение состояния гуморального иммунитета показывает, что в 2,7 раза снижается количество лизоцима, в 1,3 раза бактерицидная активность сыворотки крови, 1,6 раза титр интерферона, в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, отмечен повышенный титр противирусных антител. К вирусу ИРТ у больных телят он был в 2,5 раза выше, чем у здоровых, к ПГ-3 в 2,53 раза.

Наряду с изменениями в иммунной системе переболеваиие телят вирусными респираторными и желудочно-кишечными инфекциями сопровождалось значительными изменениями в белковом, азотистом, углевордном, лииидном и пигментном обменах организма. Содержание низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатииина и мочевой кислоты) в сыворотке крови у больных и переболевших телят превышало уровень здоровых животных в 1,2-2,2 раза. Это взаимосвязано с повышенным содержанием циркулирующих иммунных комплексов (в 4,3 и 5 раз выше, чем у здоровых), которые воздействуют на фильтрующую способность почечных ка-

пальцев. Концентрация биллирубина в крови у больных и переболевших телят была в 1,3-1,5 раза выше, чем у здоровых, а концентрация глюкозы в 1,23-1,27 раза и липи-дов в 1,1-1,47 раза ниже. Была повышена активность аспартатаминотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших), аланинаминотрапсферразы соогвет-свено 2,7 и 5,09 раза; креатининкиназы в 4,6 и 1,8 раза, понижена активность амилазы в 1,05 и 1,16 раза, щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза, холинэстеразы в 1,28 и 1,05 раза. Значительные изменения отмечены и при изучении минерального обмена - у больных телят отмечено повышение концентрации меди в 1,23, калия в 1,13 раза, снижение концентрации кальция в 1,07 раза, железа в 1,72 раза, цинка в 1,4 раза.

Полученные данные свидетельствуют о том, что при переболевании респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями в патологический процесс вовлекаются не только органы дыхания и пищеварения, но и угнетаются основные звенья иммунитета, обмена веществ, а также поражаются жизнепноважные системы организма теленка - сердечно-сосудистая и выделительная.

2.2.3. Иммуностимулирующие препараты в терапии и профилактике вирусных респираторных инфекций телят

Стимуляция иммунной системы телят при вирусных респираторных инфекциях с помощью бактериальных пипополисахаридов. Известно, что для стимуляции иммунной системы организма животных используются бактериальные липоп-лисахариды (ЛИС), являющиеся поликлональными активаторами В-системы лимфоцитов, Обладая высокой иммунологической активностью, данный вид иммуностимуляторов, особенно полученных из грамотрицательных бактерий нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта организма животных и человека, обладает высокой реактогепностыо. Поэтому, путем экспериментальных исследований из 22 различных штаммов микроорганизмов с использованием таких иммунологических тестов, как реакция бласттраисформации лимфоцитов (РБТЛ), нагрузочные тесты с лейкоцитами, взятыми от животных с иммунодефицигами, был отобран ЛПС из споро-образующей аэробной бактерии - Bac.alvei КМИЭВ-11 - возбудителя европейского шильца пчел. Данный микроорганизм не имеет контакта с теплокровными животными и поэтому его применили в диагностических целях для оценки функционального состояния B-системы лимфоцитов, а также для повышения резистентности организма сельскохозяйственных животных. В целях диагностики бактериальный ЛПС из Bac.alvei КМИЭВ-11 использован для постановки реакции бласттраисформации в концентрации 20-50 мкг/мл. При сравнении результатов РБТЛ, поставленной с ЛПС из Вас. alvei, Bact. prodigiosum и Е. coli, фитогемагглютинином и коиканавалнном-А, установлено, что он по своей активности не уступает общепринятым митогенам и его можно с успехом использовать в комплексных исследованиях при оценке функционального состояния Т- и В-лимфоцитов.

При использовании вышеуказанного ЛПС для телят наиболее оптимальной явилась доза 5-10 мкг/кг живой массы. После однократной обработки телят ЛПС в

этих дозах к 5 дню отмечено увеличение Т-лимфоцитои па 41%, В-лимфоцитов па 37%, фагоцитарного числа на 15% по сравнению с исходными данными. К 14 дшо указанные показатели снизились и пришли к уровню исходных данных. После трехкратной обработки телят ЛПС из Вас.а1ус1 с интервалом в 7 дней отмечена значительная стимуляция клеточного и гуморального иммунитета, продолжающаяся до 18 дня наблюдения. Так, к 4 дню отмечено возрастание фагоцитарного числа на 22%, фагоцитарного индекса на 108%, к 8-му дшо - соответственно на 25 и 52%, к 18-му дшо - па 5 и 27%; Т-лимфоцитов - соответственно на 37%, 45%, 33%; В-лимфоцитов па 62%, 87%, 55%; лизоцима на 94% (5-й день), 215% (8-й день). Другие показатели гуморального иммунитета у обработанных телят не отлачилсь от уровня показателей контрольных животных. Обработка телят бактериальным ЛПС активизирует белковый, углеводный, линидный, азотистый, пигментный, минеральный обмены. Производственные испытания бактериального ЛПС па телятах с целью повышения резистентности организма показали высокую его эффективность. Заболеваемость теляг ОРЗ снизилась в 2,3 раза, прирост живой массы увеличился на 80 г, окупаемость вет-мероприятий составила 10,86 рублей на 1 рубль затрат.

Иммунологическая эффективность препарата, полученного на основе пчелиной перги. Разработана технология изготовления инъекционной формы иммуностимулирующего препарата "Агшстимулин-А" на основе пчелиной перги с высокой эффективностью и низкой себестоимостью. Проведенные токсикологические исследования показали его низкую токсичность и отсутствие аллергенных свойств, стиму-лирущее воздействие на обмен веществ организма лабораторных животных. В результате проведенных исследований на животных установлена терапевтическая доза, которая составила 1 мг/кг живой масы при 3-4-х кратном введении с интервалом в 34 дня. При обработке больных пневмоэнтеритами телят отмечалось восстановление угнетенных звеньев иммунитета до уровня клинически здоровых животных. При изучении влияния на клеточный и ^моральный иммунитет препарата "Аписгимулин-А" в оптимальной терапевтической дозе (! мг/кг массы) у клинически здоровых (подопытная группа № 1) и больных пневмоэнтеритами (подопытная группа № 2) телят установлено, что введение препарата способствует увеличению Т- и В-лимфоцитов, активизации фагощггарной активности нейтрофилов, повышению активности интерферона и лизоцима. Проведенные производственные испытания препарата "Аписти-мулин-А" показали, что его применение способствует снижению заболеваемости телят респираторными инфекциями с 66,7-95% до 20-32,5%, отхода с 17,3-23,35 до 4,87%. Окупаемость ветмероприятий при его использовании составляет 40,39 рублей на 1 рубль затрат.

Иммунологическая перестройка организма телят и лечебно-профилактическая эффективность Т-активина при респираторных заболеваниях. В ряду известных иммуностимулирующих препаратов, нашедших применение в профилактике и терапии респираторных заболеваний телят, особое место прииадле-

жит Т-активину, представляющему собой комплекс полипептидов из тимуса крупного рогатого скота. Проведенные исследования по изучению лечебно-профилактической эффективности и влияния на клеточный иммунитет больных телят показали его высокую активность. В частности, отмечено стимулирующее влияние на лимфоциты периферической крови (на общее их количество, на Т-и В-систему лимфоцитов). Установлено, что в результате заболевания у телят отмечается значительное угнетение 'Г- и В-звеньев лимфоцитов - до 10,0+0,95 и 10,2+0,84%. Но через 7 дней после обработки Т-активином отмечается значительное увеличение их количества - соответсвенпо до 19,4+1,29% и 13,0+0,9%. К 28 дню наблюдения количество Т-лимфоцитов возросло до 24,8+0,9% и В-лимфоцитов до 15,4+1,72%. У контрольных животных значительных колебаний в содержании Т- и В-лимфоцигов не обнаружено. Обработка телят Т-активином восстанавливала угнетенные звенья клеточного иммунитета у телят, больных ОРЗ, что способствовало быстрейшему их выздоровлению.

Лечебно-профилактическая эффективность Т-активина была проверена на 2-х группах телят, заболеваемость в которых составляла 50%. После обработки Т-активином, число больных телят через 4 дня снизилось до 25%, а через 20 дней - до 4,5%, тогда как среди телят контрольной группы к 10 дню больных было 63,6%.; к 20 дню число заболевших было 36,4%, а к 40 дню - 9,1%. Полное выздоровление телят контрольной группы произошло к 45 дню наблюдения. Экономическая эффективность от применения Т-активина составляет 2,54 рубля на 1 рубль затрат.

Иммунологическая и лечебно-профилактическая эффективность протаргола при вирусных респираторных инфекциях. Из имеющихся антибактериальных химиотерапевтических препаратов известны препараты серебра - протаргол и колларгол, которые обладают противовирусными и иммуностимулирующими свойствами. В результате проверки раствора протаргола в различных концентрациях на культуре клеток отмечено угнетение репродукции вирусов ИРТ и ВД при 0,25-0,5%-ной его концентрации. Проведенные исследования по изучения влияния 0,5%-ного раствора протаргола на иммунную систему позволили установить его иммуностимулирующий эффект. Так, через 14 дней после обработки телят отмечено увеличение Т-лимфоцитов на 49%, В-лимфоцитов на 55%, фагоцитарного числа на 15%, фагоцитарного индекса на 58%, бактерицидной активности сыворотки крови в 2 раза, общего белка сыворотки крови на 34%. Эго позволило применить его для лечения вирусных респираторных инфекций животных. Протаргол для лечения телят использовали в 0,5%-ной концентрации, растворенный в неспецифическом иммуноглобулине. Применялось интратрахеалыюе и аэрозольное введение препарата. Интратрахеальпо раствор протаргола вводили 3-4-х кратно с интервалом в 3-5 дней, аэрозольио - в дозе 2 мл на 1 м3 помещения 1 раз в 3-5 дней с экспозицией не менее 60 мин. В результате проведенных исследований коэффициент заболеваемости интратрахеальпо обработанных телят снижается с 0,24 до 0,08, аэрозолыю обработанных - с 0,42 до 0,24. Окупаемость ветеринарных мероприятий соответственно составляла 12,01 и 8,81 рублей на 1 рубль затрат.

2.2.4. Специфическая профилактика вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекции телят

Общие подходы к конструированию вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят. В комплексе лечебно-профилактических мероприятий при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота специфическая профилактика занимает одно из ведущих мест.

Специфическая профилактика этих инфекций в современных условиях осуществляется по следующим направлениям:

1) активная специфическая профилактика живыми и ипактииврованиыми moho- и ассоциированными вакцинами;

2) активная специфическая профилактика с использованием рекомбинаптных штаммов бактерий, имеющих в своем геноме геном вирусов;

3) активная специфическая профилактика с использованием маркерных штаммов вирусов;

Вакцинация телят позволяет создать напряженный специфический иммунитет (как местный, так и общий), а также иеспецифическнй противовирусный иммунитет из-за высокой интерфероногенной активности некоторых вакцинных штаммов вирусов, обусловленный созданием невосприимчивости к ряду возбудителей, не входящих в вакцину. Такое положение характерно для иммунизации живыми вирус-вакцинами. Постоянная иммунизация как молодняка крупного рогатого скота, так и взрослых животных способствует вытеснению из стада эпизоотических штаммов вирусов вакцинными и тем самым снижению степени инфицированное™ возбудителями респираторных инфекций. Это относится к таким вирусным инфекциям, как инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, нарагрипп-3, ресгшраторио-синцитиалышя инфекция.

Механизм действия ииактивированпых вакцин несколько иной. В основном инактивироваиные вакцины при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях используют:

-для иммунизации племенных животных, которым нежелательно применять живые вакцины;

- для иммунизации глубоко стельных коров с целыо создания напряженного колострального иммунитета у телят;.

- на заключительных стадиях оздоровления хозяйств от вирусных инфекций.

Современное ведение животноводства, связанное с нарушениями в кормлении,

содержании животных, с постоянными стрессами приводит к значительному угнетению иммунной системы. В идеальных условиях профилактическая эффективность вакцин должна быть 90-100%. Однако при современных условиях содержания животных, иммунизация крупного рогатого скота, у которого отмечены нарушения обменных процессов и угнетение иммунной системы сопровождается значительным снижением эффективности вакцин. Для решения вопроса повышения эффективности

иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов.

В связи с вышеизложенным, проведен комплекс исследований по разработке технологии изготовления живых и инактивированных моно- и ассоциированных вирус-вакцин против ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусной инфекций для иммунизации крупного рогатого скота различного возраста и физиологического состояния, а также для стимуляции иммунной системы животных при иммунизации.

Исследования по разработке живых и инактивированных моно- и ассоциированных вирус-вакцин против ИРТ, ВД, ГТГ-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота проводились в несколько этапов:

- подбор и отработка режимов культивирования вакцинных штаммов вирусов;

- отработка оптимальных методов инактивации вирусов для конструирования инактивированных вакцин;

- изучение антигенной активности живых и инактивированных штаммов вирусов на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- подбор оптимальных адыовантов для конструирования инактивированных вакцин;

- отработка оптимальных доз и соотношений компонентов при конструировании ассоциированных живых и инактивированных вирус-вакцин;

- изучение иммунологической перестройки организма коров и телят после иммунизации живыми и инактивированными вирус-вакцинами;

- определение иммуногенности живых и инактивированных культуральных вирус-вакцин против вирусных инфекций крупного рогатого скота на лабораторных животных;

- изучение профилактической эффективности живых и инактивированных культуральных вирус-вакцин против вирусных инфекций при респираторных и желудочно-кишечных болезнях телят, заболеваниях репродуктивных органов коров.

Подбор, селекционирование, отработка режимов культивирования и определения антигенной активности вакцинных штаммов вирусов крупного рогатого скота для конструирования вакцин. Как правило, для изготовления вирус-вакцин накопление вирусной массы осуществляется на первично трипсинизирован-ных культурах клеток почки эмбриона теленка или тестикул бычка, а в последние годы - перевиваемых культурах клеток (ПТ-линия "Таурус", МДБК, ПТ-80). В качестве питательных культуральных сред применяли среду 199; 0,5% лактапьбумина гидролизаг; среду Игла; ферментный гидролизат мышечных тканей (ФГМС). Для повышения эффективности культивирования и удешевления вакцин для накопления вирусной массы использованы вышеуказанные перевиваемые культуры, которые адаптированы к 5%-ному гемогидролизату, изготавливаемому на предприятии «Диалек» («Белбиофарм», Республика Беларусь). Данная питательная среда но своим ростовым свойствам им не уступает и дешевле вышеуказанных в 3-4 раза.

Для конструирования живых вакцин против ИРТ крупного рогатого скота в СССР, а ныне в странах СНГ' с 70-х годов используются аттенуированные штаммы ТК-А и MB А 2/81, инактивированной - «4016», «Оренбург» и «Молдавский»; диареи - атт^нуиропанпый штамм ВК-№ 28, инактивированной - «Орегон С-24», парагриппа-3 - аттенуированные штаммы ПТК-45, SF-4, «Белорусский-9»; ротавирусной инфекции - эпизоотические штаммы ротавирусов 243, «Белорусский-7»; коронавирусной инфекции - эпизоотические штаммы коронавирусов «Линкольн», F-17 и «Белорусский-! 1»,

При этом проведена работа по адаптации вакцинных и эпизоотических штаммов вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3. коронавируса, в основном культивируемых на первичных клетках почки эмбриона коровы (ПЭК), к перевиваемым клеткам - почки теленка (ПТ, линия "Таурус"); (П'Г-80) и МДБК, адаптированных к 5%-му гемогидролизату. Ротавирус адаптировали к перевиваемыем линиям клеток почек зеленой мартышки -Vero, почки теленка - МДВК, перевиваемые клетки почки поросенка - СПЭВ. Проведение 12 пассажей каждого вируса на новых клеточных линиях показали, что вышеуказанные перепиваемые культуры клеток можно с успехом использовать для накопления вирусной массы при конструировании вакцины.

Особенно высокий инфекционный титр установлен при культивировании вирусов на перевиваемых клетках МДБК (до 6,5 -8,0 lg ТЦД 50/мл).

Для идентификации ДНК и РНК вирусов и подтверждения их специфичности проведено типирование нуклеиновых кислот в полимеразной цепной реакции (ПЦР) в условиях отдела биотехнологии Института Сибири и Дальнего Востока РАСХН, лаборатории диагностики РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского».

На рис. 1 - 4 представлены результаты постановки ПЦР с штаммами вирусов ИРТ, ВД, рога- и коронавируса.

Рисунок 1. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса ИРТ

Рисунок 2. Постановка ПЦР с различными штаммами вируса диареи

Рисунок 3. Постановка ПЦР с ротави- Рисунок 4. Постановка ПЦР с коронавиру-

русом крупного рогатого скота. сом крупного рогатого скота.

Маркеры - стандартные Маркеры - стандартные олигонуклеотидные

олигонуклеотидные праймеры праймеры коронавируса. 2 - отрицательный

ротавируса. 2 - отрицательный кон- контроль; I - РНК из коронавируса КМИЭВ-

троль; 1 - РНК из ротавируса КМИЭВ- 1,3- положительный контроль 3, 3 - положительный контроль

В дальнейшей работе использованы адаптированные и аттенуированные штаммы вирусов, которые депонированы в Республиканской коллекции микроорганизмов и им присвоены номера: инфекционного ринотрахеита - КМИЭВ - 6, диареи -КМИЭВ - 7, парагриппа-3 - КМИЭВ- 8, ротавирус - КМИЭВ - 3, короиавирус -КМИЭВ - I.

Следующим этапом работы при разработке культуральных вирус-вакцин против ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и кронавирусной инфекций крупного рогатого было изучение возможности отдельного и совместного культивирования аттенуированпых и адаптированных к перевиваемым культурам клеток вакцинных штаммов вирусов.

Первоначально была проведена работа по изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили вирусами ИРТ, штамм «КМИЭВ-6»; ВД — «КМИЭВ-7»; ПГ-3 -«КМИЭВ-8» в разных дозах и соотношениях. О репродукции вирусов судили по их титру. Установлено, что при совместном культивировании на культуре клеток штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 они репродуцируются не в одинаковой степени. Так, вирус диареи способствовал угнетению накопления вирусов ИРТ и ПГ-3 вследствие его быстрой репродукции. Это не позволило использовать метод одновременного культивирования вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр вирусов существенно снижает эффективность промышленного производства вакцин.

Также была проведена работа по изучению возможности одновременного культивирования аттенуированных штаммов рота- и короианирусов при раздельном и совместном инфицировании культуры клеток МДБК. Заражение культуры проводили

ротавирусом штамм «КМИЭВ-3», коронавируса, штамм «КМИЭВ-1», в разных дозах и соотношениях. При совместном культивировании на культуре клеток штаммы рота-и коронавирусов также репродуцируются не в одинаковой степени. Ротавнрус, репродукция которого проходила за 24 часа, способствовал угнетению накопления корона-вируса. Это также не позволило применять метод одновременного культивирования рога- и коронавирусов на культуре клеток, т.к. получаемый низкий титр коропавируса не позволяет получать качественные биопрепараты.

При накоплении монокомпонентов вакцин на матрасах и на роллерах цитопа-тическое действием (ЦГ1Д), характерное для вируса ИРТ наступало через 36-48 час, вируса диареи - 24-36 час, вируса парагриппа-3 - 60-72 час, ротавируса - через 24 час, коронавируса - через 72-96 час. К этому сроку отмечалась полная деструкция клеточного монослоя, его сползание со стекла и наличие в вируссодержащей жидкости взвеси клеток. Титрация вируссодержащей жидкости по Риду и Менчу показала, что после культивирования на матрасах титр вируса ИРТ составлял 5,5-6,0 ^ 'ГЦД 50/1,0 мл; вируса диареи - 6,0-6,5 1«; ТЦД 50/1,0 мл; вируса нарагрипна-3 - 5,0-5,5 ^ ТЦЦ 50/1,0 мл; ротавируса - 7,5-8,0 ^ ТЦЦ 50/1,0 мл; коронавируса -5,0 ТЦД 50/ 1,0 мл. Но при культивировании на роллерах - титр вируса был выше на 1,5-2,0 ^ ТЦЦ 50/ 1,0 для каждого вируса.

Изучение антигенной активности адаптированных штаммов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3, рота- и коронавирусов на кроликах и телятах в сравнении с исходными штаммами проводилось путем двукратного внутримышечного введения кроликам по 2 мл вируссодержащей жидкости каждого из вирусов при инфекционном титре 6,0 ^ ТЦД 50/мл и нитратрахеального или внутримышечного введения телят ам по 2 мл вирусов при этом же тигре. Кровь у животных брали до введения вирусов и через 14 дней после введения. В сыворотках крови титр антител определяли в реакции нейтрализации на культуре клеток.

Результаты исследований показали, что адаптация вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусов на клеточных линиях МДБК и СПЭВ не влияет на их антигенную активность в сравнении с исходными штаммами. Штаммы не реактогенпы, вызывают активную выработку противовирусных антител сельскохозяйственными (крупный рогатый скот) и лабораторными (кролики) животными в достаточно высоких титрах.

Конструирование, иммунологическая и профилактическая эффективность живых и инактивировапных мопо- и ассоциированных вакцин против респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота.

Вирус-накнина живая культуральная против инфекционного ринотрахеитч. При разработке моновакцины против ИРТ была отработана оптимальная доза вируса и кратность ее введения. Доза вакцины составляла 1-2 мл мри инфекционном титре вируса от 5,5 до 6,0 ТЦЦ 50/мл, и двукратном введении с интервалом 21-28 дней, при которой наблюдалась максимальная выработка противовирусных антител. При изучении иммунологической перестройки организма животных после иммунимзации

моновакциной против ИРТ установлено, что титр антител к 4 дн возрос в 3,25 раза, к 11 дн — в 4 раза, а к 42 дн — в 6,75 раза по сравнению с исходными данными. У контрольных животных также отмечалось увеличение: титра антител, однако их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом наиболее активно происходит биосинтез иммуноглобулинов М-класса. Так, после вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило до 11 дн с 5,68+0,13 до 6,8+0,13 г/л, после чего отмечено их некоторое уменьшение. Биосинтез иммуноглобулинов. О-класса начинался несколько позднее — к 11 дн возросло с 14,6±0,25 до 16,4±0,2 г/л, а к 65,дп достигло 17,0±0,24 г/л. У контрольных телят в биосинтезе иммуноглобулинов ^ О и ^ М значительных колебаний не отмечалось.

У иммунизированных телят количество Т-лимфоцитов к 11 дн возросло с 29,2+1,7% до 44,4± 1,7%. Затем произошло снижение их количества к 21 дн до 40,4+1,29%, 42 дн до 29,4+1,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дн наблюдения их количество возросло с 15,2+1,3% до 23,2+0,8%, а к 21 дн снизилось до 20,6±1,07%, к 42 дн до 18,6+1,5%. Установлено, что вакцина против ИРТ обладает высокой интерфероно-генной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 11 дн с 29,1±5,96 до 59,7±5,6%, после чего отмечалось его снижение, к 65 дн титр составил 43,319,6%. ,.

Вакцина против ИРТ обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет ,88,2-91%. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 1995-2001 гг было изготовлено свыше 50,0 тыс. доз вакцины

Вирус-вакиина живая культуральная против вирусной диареи. В результате проведения исследований по разработке моновакцины против ВД отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения, что составляло 1-2 мл при инфекционном титре от 5,5 до 6,0ТЦД 50/мл с кратностью введения 21-28 дней. При изучении иммуногенеза у телят после иммунизации моновакциной против ВД установлено, что титр антител к 4 дн возрос с 0,8 1о§г до 4,2±0,4 1о§2 к 21 дн и до 5,2+0.4 1о§2 к 42 дн. У контрольных животных отмечалось увеличение титров антител, но их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом активно происходит биосинтез антител ^ М и О -классов. Так, количество антител М класса к 4 дн возросло по сравнению с исходными данными в 1,27 раза, к 11 дн в 1,34 раза, а к 42 дн в 1,59 раза.

При иммунизации телят вакциной против ВД отмечено увеличение Т-лимфоцитов: их количество возросло к 11 дн с 25,6+1,7 до 37,6+2,6%, к 21 дн до 39,0±1,1% и к 42 дн снизилось до 27,8±1,72%. Количество В-лимфоцитов к 11 дн возросло с 16,4±1,3 до 26,0±0,86%, к 21 дн до 22,4±1,7% и к 42 дн снизилось до 18,4+0,6%. Вакцина против ВД обладает высокой интерфероногенной активностью -титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 21 дн с 32,6±8,37 до 70,1+6,29%, к 42 дн его титр снизился до 50,8+3,52%.

Вакцина против ВД обладает высокой профилактической эффективностью -

91-96,9%. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 1995-2001 гг было изготовлено свыше 50,0 тыс. доз вакцины

Вирус-вакцина живая культуралыюя против парагриппа-З. Разработка моновакцины против ПГ-3 включала отработку оптимальной дозы вируса и краткости ею введения, что составляло I -2 мл при инфекционном титре вируса от 5,5 до 6,5 ^ ТЦД 50/мл, двукратно с интервалом 21-28 дней. При изучении иммунного ответа у теляг после иммунизации моповакцииой против ПГ-3 установлено, что титр антите^к 4 дн возрос в 3,0 раза, к 11 дн — в 3,2 раза, а к 42 дн — в 5,2 раза по сравнению с исходными данными. После вакцинации активно происходит биосинтез антител ^ М -класса. На 4 день после иммунизации их количество возросло но сравнению с исходными данными в 1,19 раза, к 11 дн - 1,35 раза, к 42 дн - п 1,45 раза. У телят этой группы уровень антител lg О-класса был несколько ниже, чем уровень антител М-класса. К 14 дн отмечено увеличение уровня 1Ё0-ангител в 1,1 раза, к 21 дн - в 1,18 раза, к 42 дн - в 1,39 раза.

При иммунизации телят вакциной против ПГ-3 отмечено увеличение количества Т-лимфоцитов - их количество возросло к 11 дн с 26,4+1,7 до 42,4+0,9%, к 21 - до 38,8±1,5%, но к 42 дн снизилось до 28,8±0,9%. Количество В-лимфоцитов к 11 дн возросло с 17,13% до 22,60+0,86%, к 21 дн - до 20,8+1,7%, а к 42 дн снизилось до 19,8+1,3%. Вакцина также обладает интерфероногенной активностью. При иммунизации телят возрастание интерферона продолжалось до 21 дн с 22,7+9,9?/о до 42,1 ±3,0%. К 42 дн его титр снизился до 32,912,47%.

Вакцина обладает высокой профилактической эффективностью, составлявшей 88,2-91%. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 1995-2001 гг было изготовлено свыше 50,0 тыс. доз вакцины.

Вирусвакцина бивалентная живая кулыпуральная против ипфекииоиного ри-иотрахеита и вирусной диареи. Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея имеют широкое распространение среди крупного рогатого скота в различных странах мира - инфицированность стад крупного рогатого скота этими вирусами составляет от 25 до 70%. Животные в основном переболевают ассоциациировапной рипотрахе-итно-диарейной инфекцией, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как мопоинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%.

При отработке соотношения монокомпонентов вакцины оптимальным соотношением монокомпонентов бивалентной вирус-вакцины против ИРТ и ВД крупного рогатого скота является 1:1 при инфекционном титре вирусов 5,0 1ц ТЦД 50/мл. При этом, уже начиная с 10-го дн наблюдения титры антител к вирусу ИРТ возрастали в с 0,2 до 2,5 1о§2, а ВД - с 0,4 до 4,8 \og2- Титр ноствакцинальных антител продолждал увеличиваться до 60-го дн наблюдения и составил соответсвенно 7,6 и 7,9 \о£2-

У телят, иммунизированных бивалентной и моновакцинами против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, наиболее активно

шел биосинтез антител, относящихся к ^ М-классу. На 10-й день после иммунизации их количество было максимальным. После этого отмечается снижение биосинтеза антител 1$ М-класса, но увеличение биосинтеза антител в-класса.

Изучение динамики Т- и В-лимфоцитов у телят, иммунизированных бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота отмечено увеличение Т-лимфоцитов к 11 дне 26,4+1,7 до 42,4±0,9%, В-лимфоцитов - с. 17,0+1,3 до 23,6+0,9%, после чего происходило их снижение к 42 дн соответственно до 28,0±0,9 и 19,8±1,3. У телят контрольной группы содержание Т- и В-лимфоцитов было практически на одном уровне на протяжение всего срока наблюдения. При иммунизации телят бивалентной вакциной против ИРТ и ВД возрастание интерферона продолжалось до 11 дн с 32,3±2,8 до 62,3±1,7%, а затем к 28 дн его титр снижался до 23,1+1,24%. У телят контрольной группы титр интерферона был на уровне 25,7±6,9 - 35,5+4,14%. Бивалентная вакцина против ИРТ и ВД обладает высокой профилактической эффективностью" - 88,0-90,8% и широко используется в животноводческих хозяйствах. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 1997-2001 гг было изготовлено свыше 100,0 тыс. доз вакцины.

Вирусвакиина трехвалентная живая кулътурапьная против инфекционного ринотрахеита. вирусной диареи и парагуиппа-З. На основании проведения анализа результатов серологических исследований было установлено, что в хозяйствах животные, в основном, переносят заболевание, вызванные ассоциацией вирусов ИРТ+ВД+Г1Г-3, удельный вес которого составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%, ПГ-3 - 5,511,2%. Это послужило основанием для разработки трехвалентной живой культураль-ной вирус-вакцины против данных инфекций. При определении различных соотношений монокомпонентов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 установлены оптимальные соотношения монокомпонентов 1:1:1 при инфекционном титре каждого вируса 5,0-5,5 \% ТЦД 50/мл. При этом биосинтез антител ко всем трем вирусам начинается уже после первого введения вакцины и на 10-й день его уровень в 3-5 раз выше исходного -• титр возрастал с 1,0-2,0 до 3,0-4,0 Дальнейшее возрастание, титров антител продолжалось до 45 дня наблюдения и достигало 5,0-7,0 Отмечается также и увеличение количества Т-и В-лимфоцитов. Так, количество Т-лимфоцитов к 21 дн увеличилось с 28,4+3,05 до 41,2±5,3%, но к 45 дн снизилось до 38.1+4.91%. Количество В-лимфоцитов увеличилось к 21 дн с 16,4+1,76 до 25,4+3,33%, а к 45 дн снизилось до 22,3±2,87%. Биосинтез имуноглобулинов начался уже с первых дней после вакцинации. Их концентрация к 10-му дн у имунизированных телят возросла с 14,8 до 16,5 г/л, а к 45 дн - до 17,1 г/л. К 65 дн произошло некоторое их снижение до 16,2 г/л. У контрольных животных титры антител и концентрация иммуноглобулинов оставались практически на одном уровне. При изучении бактерицидной активности сыворотки крови у иммунизированных телят отмечено ее увеличение с 55,6+7,0 до 78,7+14,2% к 30 дн, после чего отмечено ее снижение к 45 дн до 50,8+8,3%; концентрация лизоцима возросла к 10 дн с 1,99+0,3 до 2,88+0,5 мкг/мл, после чего произош-

ло его снижение к 45 дн до 1,05+0,4 мкг/мл; титр интерферона возростал к 21 дн с 35,6+8,3 до 70,1+6,1%, после чего отмечалось снижение до 56,9+9,1%. У контрольных животных эти показатели имели недостоверные колебания по сравнению с исходными данными.

Испытания трехвалентной вакцины против инфекционного ринограхеита, вирусной диареи и napaipnnna-З показали, что после иммунизации телят в условиях животноводческих комплексов заболеваемость с признаками пневмоэнтеритов составляла от 4,3% до 11,4%, тогда как в группе неиммунизированных телят заболеваемость была 95,5%- 97,1%. В опытных группах телят падежа и вынужденного убоя не быйо, а в контрольной - Отход составлял от 7,1% до 14,5%.

Телята, полученные от иммунизированных коров, с признаками пневмоэнтеритов заболевали в 5,9% - 7,1% случаях, отход составлял от 0,88% до 2,1%. Среди телят, полученных от неиммунизированных коров, заболеваемость составляла ог 77,9 до 90,8%, отход от 8,3% до 11,4%. Профилактическая эффективность вакцины на телятах составляла 95,7%, на коровах - 92,9%. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 2001-2008 гг было изготовлено свыше 600,0 тыс. доз вакцины.

Ассоциированная вакиииа против рота- и коропавирусной инфекций новорожденных телят. При исследовании материала от больных энтеритами новорожденных телят в биологическом материале обнаруживались антигены рота- и коронавирусов у 42 - 64%» обследованных животных, у переболевших энтеритами телят количество положительных проб было на 24-33,5% больше, чем у больных, что указывает на этиологическую роль вышеуказанных вирусов в возникновении заболевания.

При отработке режимов инактивации рота- и коронавирусов было установлено, что инактиванты - формалин, теотропин в небольших концентрациях (0,125% -0,3%) вызывают их полную инактивацию.

При изучении эффективности инактивации вакцинных штаммов, установлено, что наиболее эффективным явился способ инактивации с помощью 0,2% раствора теотропина.

На основании проведенного изучения иммунного ответа после введения кроликам и крысам инактивированных рота- и коронавирусов крупного рогатого с различными адъювантамн установлено, что оптимальными адъювантами являются: для ро-тавируссв - 1 и 2% суспензия целлюлозы (титр антител 3,5 и 4,5 log2y кроликов и 3,5 log2 у крыс) и 10%-ный эмульсиген (3,5 log2y кроликов и 4,0 log2 у крыс); для коронавирусов - 2% суспензия целлюлозы (титр антител 4,38 к^для кроликов и 3,38 log2 для крыс) и 10% эмульсиген (титр антител 4,50 к^для кроликов и 4,80 log 2 для крыс). Оптимальной дозой монокомпонентов при инфекционном титре 6,5 lg ТЦЦ 50/мл является 2,5 мл на голову, что дает максимальное возрастание титров антител после введения монокомпонентов вакцины. Оптимальное соотношение монокомпонентов 1:1 при титре каждою вируса 6,5 lg ТЦЦ 50/мл в дозе 2,5 мл. При этом отмечается максимальная выработка антител ко в~ем испытуемым вирусам. При изучении иммуногенеза установлена активизация биосинтеза иммуноглобулинов: их количест-

во возросло с 42,31+2,1 до 56,08+3,95 г/л на 60 день после вакцинации. Вакцинация коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции способствует существенному биосинтезу противовирусных антител к вышеуказанным вирусам. Так к 45 дн титр антител к ротавирусу возрос с 5,2 до 7,8 коронавирусу - с 2,2 до 5,9 1оц2.

У новорожденных телят, родившихся от коров, иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и коронавирусов и получавших молозиво в течение первых 2 часов, отмечается напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций - так титр антител через 12 часов после рождения составлял 9,0-10,0 1о§2 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

Профилактическая эффективность ассоциированной вакцины против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят в животноводческих хозяйствах составляла от 85,0 до 95,6 %. В условиях РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 2002-2008 гг было изготовлено свыше 200,0 тыс. доз вакцины.

Поливалентная инактивированная культуралыши вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи: рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак>>. Конструирование поливалентной инактивированной культуральной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак» проводилось по описанной выше технологии.

При конструировании вакцины «Тетравак» вирусы ИРТ, ВД и коронавирусы культивировали на перевиваемых клетках почки теленка (МДБК); ротавирусы - на перевиваемиых клетках почки свиней (СПЭВ). Преимущественное культивирвоание -роллерное, при котором титр вируса возрастал на 1,0-2,0 ^ ТЦД 50/мл по сравнению со стационарным методом. При отработке инактивации вакцинных штаммов установлено, что оптимальным инактивантом является теотропин. В ходе подбора адыовапта установлено, что оптимальными являются 2% суспензия активированной целлюлозы (производства Белорусского Государственного Университета, Республика Беларусь) и 10% эмульсиген (производство США). На основании результатов отработки технологии изготовления вакцины установлено, что инфекционный тигр монокомпонентов должен быть не менее 6,5 ^ ТЦД 50/мл, оптимальное соотношение моиокомнонеп-тов - 1:1:1:1, вирусы подвергают инактивации геотропипом в концентрации 0,2% в течение 24 часов при 37° С и добавляют адъювант - 2% суспензию активированной целлюлозы с 4 - 5% СООН-групп или эмульсиген до 10% концентрации. При исследовании сывороток крови коров, которым вводили вакцину, выявлен высокий уровень биосинтеза иммуноглобулинов — их уровень повысился на 60-й день после вакцинации на 7,8%, тигры антител к каждому из вирусов увеличились на 4-6

При условии выпойки в течение первых 2 час молозива от матерей, иммунизированных поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусов у телят формируется напряженный колост-

ральный иммунитет, способствующий защите организма .телецка от вьццеуказанных инфекций. При исследовании уровня антител с [гомощьюРНГА.ихтатр через 12 часов после рождения составлял 9-10 1о§2 и оставался на этом же уровне на протяжении всего срока наблюдения.

При проведении производственных испытаний поливалентная инактивирован-ная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронави-русной инфекций крупного рогатого скота имеет 93,3 - 95,1%-ю профилактическую эффективность. В условиях РУП «Институт экспериментальной-'ветеринарии им. С.Н.Вышелесского» для нужд животноводческих хозяйств в 2007-2008 гт было изготовлено свыше 100,0 тыс. доз вакцины. •

Рекомбинаитная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота с использованием генетически модифицированных штаммов бактерий. На первом этапе конструирования вакцины установлено норвое явление в биологической науке - спонтанная нерсистенция генома вирусов ИРТ и ВД в бактериальных клетках. Наличие общих антигенов бактерий и вирусов было установлено при изучении антигенного родства Вас. а1уе1 с вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого и Вас. виЫШэ с вирусом диареи крупного рогатого скота с использованеим иммунологических реакций - РА, РТНГА, ИФА. Подтверждение наличия генома вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в бактериальной клетке установлено с помощью точечной гибридизации с радиоактивной меткой, с использованием ДНК-зонда, постановкой лолимеразной цепной реакции при установлении комплементарное™ участков ДНК вируса инфекционного ринотрахеита в Вас. аЬ^ и участков РНК вируса диареи в Вас. виЫШз.

Исследования, проведенные с использованием ПЦР показали, что в этом же штамме Вас.а1уе1 (КМИЭВ-11) имеются участки ДНК, идентичные вирусу ИРТ (рисунок 5). Для сравнения использовали ДНК, выделенную из вируса ИРТ (штамм 4016) и ДНК из Вас.аКчп (КМИЭВ-11). Маркеры - участки ДНК - стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ. Аналогично в Вас. БиЬиПз (КМИЭВ-39) установлены участки РНК, комплементарные вирусу диареи крупного рогатого скота. На рис. 6 представлены результаты ПЦР при выявлении комплементарных участков РНК вируса диареи в Вас. яиМИэ (КМИЭВ-39).Для сравнения использованы различные штаммы бацилл из коллекции микроорганизмов РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского»

Рисунок б. Результаты постановки ПЦР при выявлении

комплементарных участков РНК вируса диареи в Bacillus Subtilis (КМИЭВ-39).

Примечание:

1 - Bacillus 100b (НИИП); 2 - Вас. subtilis 200а (НИИП); 3 Вас. subtilis (Бел НИИЭВ-2); 4 - Вас. subtilis (Нел НИИЭВ); 5 - Вас. subtilis ВВИ-1; 6 - Bac.alvei ВВИ - 1, K+VD - положительный контроль вируса диареи

В результате проведенных исследований доказано, что инфекционные вирусы животных способны проникать в бактериальную клетку и участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифи-ческих белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вирусспецифические антитела у животных, иммунизированных данными бактериями. Так, у мышей, которых иммунизировали Bac.alvei (КМИЭВ-П) гигр антител к вирусу ИРТ составлял 3,5+0,3 log 2, а у животных, получавших вирус ИРТ -4,25+0,5 log2. При иммунизации мышей Вас. subtilis (КМИЭВ-39), тигр нротиводиа-рейных антител был 3,0+0,2 log2, а вирусом диареи - 4,5+0,6 log2. Полученные данные свидетельствуют о выработке противовирусных вируснейгрализующих антител у животных, иммунизированных бактериями с геномом вирусов и экспрессированными вирусспецифическими белками.

На основании доказательства наличия бактерий, несущих па своей поверхности вирус - специфические белки для специфической профилактики вирусных инфекций животных разработан бактериальный препарат, названный нами "Бактерин-3". Его готовили из 48-часовой агаровой культуры бактерий Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Вас. subtilis (КМИЭВ-39) при концентрации бактерий 1,0 млрд. микр. тел в мл, которые инактивировали формальдегидом. Телятам вводили препарат в дозе 5,0 мл двукратно с интервалом в 14 дней

Рисунок 5. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементарных участков ДНК вируса ИРТ в Вас.аЫе! (КМИЭВ-11).

Примечание:

Маркеры - стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ; « - » - отрицательный контроль; 1 - ДНК из Вас.а1уе1 (КМИЭВ-11), II - ДНК ит вируса инфекционного рииотрахеита (штамм 4016).

Результаты постановки РИГА свидетельствовали о том, что через 35-40 дней после введения препарата, тигры антител к вирусам ИРТ и ВД у животных были в наиболее высоких ти грах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 (ВД). При определении уровня у -глобулинов у подопытных телят, получавших препарат, отмечено активное образовании антител-иммуноглобулинов. У телят подопытной группы - к концу 3-го мес их количество составляло 16,26+1,3 - 17,84+1,35% (Р<0,01), тогда как в контроле не превышало 13,59+0,64% (Р< 0,001). При изучении иммуноглобулинов различных классов установлено довольно значительное увеличение количества О у телят, получавших "Бактерин-3". Так, если в контрольной группе максимальное их количество не превышало 18,59+1,48 г/л, то у иммунизированных телят их количество на 14 сутки после введения препарата составило 24,17+2,31 г/л (Р<!,01). Количество 1ц А и 1ц М у подопытных животных не отличалось от контрольной группы. Профилактическая эффективность препарата составила в среднем 70%; заболеваемость не превышала 30%>, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%

Стимуляция ноствакцинальпого иммунитета с помощью препаратов природного происхождения. Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации животных наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция ноствакцинальпого иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов. Этот технологический прием обусловлен существенным угнетением иммунной системы у животных из-за нарушений содержания, кормления, постоянных стрессов у продуктивных животных. Для этого были проведены исследования по изучению стимуляции ноствакцинальпого иммунитета с помощью «Апистимулина-А» при вакцинации крупного рогатого скота против инфекционного ринограхеита и вирусной диареи бивалент ной вакциной.

Основной показатель эффективности вакцины - биосинтиез противовирусных антител. При изучении динамики антител М и О-классов в ИФА после вакцинации против ИРТ и ВД па фоне обработок "Анистимулином-А" установлено, что биосинтез антител ^ М-класса активно происходит у телят, иммунизированных вакциной на фоне активизации иммунитета. Показатель АЕ (отношение показателя оптической плотности исследуемой сыворотки к показателю оптической плотности отрицательной сыворотки) у телят, иммунизированных вакциной на фоне активизации иммунитета показал, что более активным был биосинтез антител ^ М-класса к вирусу ИРТ на 11 день наблюдения - 1.71±0.05 против 1,67+0,08, ^ О-класса на 21 день 1,56+0,04 против 1,39+0,04, а к 28 дн - 1.6210.08 против 1,5110,02. В остальные сроки существенной разницы между уровнем антител не было установлено.

Иммунизация телят вирус-вакциной на фоне активизации иммунитета "Анистимулином-А" наряду с биосинтезом противовирусных антител активизируется и биосинтез всех иммуноглобулинов. Так, при иммунизации телят вакциной на этом фоне количество иммуноглобулинов М-класса было значительно выше, чем у телят, привитых одной вакциной. Их концентрация к 4 дн возросла с 5,5610,09 до 7,8±0,1 г/л, а к 11 дн — до 8,010,21 г/л, тогда как у телят, получавших моновакцину, к 11 дн

концентрация 1ц М была 6,8+0,13 г/л. После 11 дн биосинтез [ц М снижался. Однако биосинтез ]g О был значительно активнее и их концентрация продолжала возрастать до 65 дня наблюдения. Количество 1а, О начало возрастать уже начиная с 4 дн с 14,4+0,09 до 15,2+0,3 г/л, к 11 дн —до 17,4+0,15 г/л, а к 42 дн —до 18,4+0,37 г/л.

У телят, иммунизированных вакциной против ИРТ и ВД на фоне обработки "Апистимулином-А", также происходило увеличение как Т-, так и В-лимфоцитов, но эти показатели были выше, чем у животных, получавших одну вакцину. Количество Т-лимфоцитов у телят, получавших вакцину на фоне активизации иммунной системы, возросло с 28,8+3,9 до 48,8+1,7% к И дн (с 29,2+1,7% до 44,4±1,7% без иммуностимулятора), но к 21 дн снизилось до 42,2+1,7% (40,4±1,29%) и к 42 дн до 29,2+1,5% (29,4+1,5%). Аналогично изменялось и количество В-лимфоцитов. К 11 дн оно возросло с 16,8+1,3 до 30,0±1,7% (с 15,2±1,3% до 23,2+0,8%), к 21 дн снизилось до 21,8+1,0 (20,6+1,07%) и к 42 дн — до 20,2+1,93% (18,6+1,5%).

Таким образом, иммунизация телят на фоне активизации иммунитета способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, ан-тигепсвязывающих клеток. Это свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа на введение вакцин после активизации иммунитета. При анализе профилактической эффективности сохранность телят была выше у телят, иммунизированных на фоне стимуляции поствакцинального иммунитета была на 8-10% выше, чем у у телят,получавших одну вакцину. Так же была выше и продуктивность - на 12-18 г среднесуточный прирост живой массы был выше.

Перспективы использования разработанных технологий биопрепаратов в концепции развития биологической промышленности Республики Беларусь. В настоящее время для нужд животноводства Республики Беларусь ежегодно импортиру-егся до 90% наименований биологических препаратов для иммунизации животных против инфекционных заболеваний. В этой связи в 2005 году Советом Министров Республики Беларусь была принята Государственная программа развития производства ветеринарных препаратов и инструментов, используемых в ветеринарии, на 2005 - 2008 годы. Программой предусматривается обеспечить потребность животноводство страны на 80% отечественными ветеринарными препаратами, для чего осуществляется реконструкция Витебской биофабрики и разработка технологий производства современных биопрепаратов для животных.

Проведенный нами комплекс научных исследований по разработке унифицированных технологий изготовления живых и ипактивированных моно- и ассоциированных вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота позволяет обеспечить производственные мощности реконструируемой Витебской биофабрики современными технологиями. На разработанные вакцины подготовлены опытно-промышленные регламенты, а технологии изготовления вакцин отработаны па опытно-экспериментальном участке института с целыо их дальнейшей адаптации к

условиям промышленного производства. Сформированный пакет разработанных нами технологий изготовления вакцин позволит производить широкий спектр биопрепаратов на Витебской биофабрике и обеспечить потребность животноводства Республики Беларусь на 80-90% отечественными высокоэффективными биологическими препаратами для специфической профилактики вирусных инфекции крупног о рогатого скота.

Комплекс встерипарно-саиитирных мероприятий по применению иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии инфекционных ппев-молинеритов у телят. Проведенные исследования по разработке иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят позволили обобщить и составить схему их использования для выращивания здоровых животных и получения от них эколог ически безвредной животноводческой продукции.

Разработанная схема предусматривает ряд следующих мероприятий:

Л. Обработка сухостойных коров и нетелей:

1. Контроль качества кормов, нормализация и балансирование рационов премиксами в соответствии с потребностями.

2. Вакцинация коров проовдится но схеме:

- поголовная двукратная иммунизация коров во второй половине стельности живыми могго- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств);

-иммунизация сухостойных коров ассоциированной инактивироваипой вакциной против рота- й гсоронааирусной инфекции новорожденных телят или поливалентной инактивироваипой вакциной против инфекционног о ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств).

3. Содержание глубокоетельных коров изолированно в родильных отделениях.

4. Обработка разработанными иммуностимулирующими препаратми глубокостельных коров и нетелей за 10-15 дней до отела для достижения у новорожденных телят высокого уровня иммуноглобулинов.

Б. Обработка новорожденных телят:

1. Обработка телят с лечебной и профилактической целью иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липополисахаридом из Вас. а1уе|' или «Аии-стимулином-А».

2. Содержание телят в изолированных пластмассовых домиках для разрыва эпизоотической цепи.

В. Выращивание телят старше 20-25 дней:

1. Обработки телят иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липоплисахаридом из Вас. а!уег или «Апистимулином-А».

2. Двукратная иммунизация телят живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагригша-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств).

Применение данного комплекса мероприятий в хозяйствах Республики Беларусь позволило в 2-3 раза снизить заболеваемость и в 1,5-2 раза - отход телят по причине заболевания их инфекционными пневмоэнгеритами.

3. ВЫВОДЫ

1. Основными причинами возникновении респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь являются предрасполагающие факторы (иммуноде-фицитное состояние организма новорожденных телят, наличие стрессовых ситуаций, влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды, нарушение технологии содержания и кормления животных, генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров) и сопутствующие факторы (возбудители респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят вирусной и бактериальной этиологии, способность вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с дальнейшей его иммунотолерантноетыо и вирусоносительсг-вом).

2. В этиологической структуре вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в Республике Беларусь основной удельный вес занимают вирусы инфекционного ринотрахеита - 67,6% у коров и 65,8% у телят переболевших иневмоэнтеритами, 68,8% у клинически здоровых телят старше 6 мес.; диареи соответственно 86,6, 84,1 и 88,9%; парагриппа-З - 55,9, 71,5, 59,6%. При инфекционных энтеритах антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8% переболевших телят, к ротавирусу - 90,9%, коронавирусу - 80,6%. У больных энтеритами телят установлено наличие антигенов ротавируса - 67,4% (от обследованных), коронавируса - 33,7%, вируса диареи - 35,1%.

3. У больных и переболевших пневмоэнгеритами телят отмечается угнетение Т-лимфоцитов (в 1,2 раза), В-лимфоцитов (в 1,28 раза), фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 раза фагоцитарное число и 1,56 раза - фагоцитарный индекс); в 2,7 раза снижается количество лизоцима; в 1,3 раза бактерицидная активность сыворотки крови; в 1,6 раза титр интерферона; в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов; в 1,2-2,2 раза конценрар-ция низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты); активность аспартатаминотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших); аланинаминотрансферразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатииинкнназы в 4,6 и 1,8 раза превышало уровень здоровых животных, но отмечается снижение активности амилазы в 1,05 и 1,16 раз; щелочной фосфагазы в 1,73 и 1,6 раза; холииэсте-разы в 1,28 и 1,05 раза, что указывает на системный процесс.

4. Разработанные иммуностимулирующие препараты; препарат из пчелиной

перги "Апистимулнн-А", воздействующий на Т-снстсму лимфоцитов; бактериальный дипополисахарид из Dac.alvei (КМИЭВ-II), влияющий на В-снстему способствуют активизации угнетенных звеньев иммунитега и обмена веществ при респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях телят.

5. При конструировании живых и инактивированпых моно- и ассоциированных вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, нарагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций выделены и селекционированы производственные штаммы вирусов крупного рогатого скога: ИРТ - КМИЭВ-6; диареи '- КМИОВ-7; па-рагринпа-3 - КМИЭВ-8; ротавнруса - КМИЭВ-3; короиавируса - КМИЭВ-1, которые наиболее активны в антигенном отношении и по своим генетическим характеристикам не отличаются от референтных штаммов. Оптимальным является раздельное кулыивнровапне вирусов в роллерпых установках па перевиваемых культурах клеток МДБК или СПЭВ с использованием 5%-ного гемогидролизата в качестве ростовой (с сывороткой) и поддерживающей питательной среды, что позволяет достигнуть инфекционного титра вышеуказанных вирусов до 6,5 - 8,0 lg ТЦД 50/мл,. Для инактивации вируса использован теотропин в 0,2% концентрации, в качестве адыованга -эмульсиген или суспензия активированной целлюлозы.

6. Введение живых и инактивированпых моно- и ассоциированных вакцин крупному рогатому скогу приводит к биосинтезу противовирусных антител (до 5,5 -7,0 logi), активизации клеточного и гуморального иммунитета, основных показателей обмена веществ. Профилактическая эффективность вакцин в производственных условиях составляет от 88,2 до 97,5%.

7. Вирусы нфекционного ринотрахеита и диареи, способны проникать в бактериальную клетку, участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вируспейтрализующие антитела у лабораторных животных в титрах ог 3,0+0,2 до 3,5+0,3 )og2. Препарат, изготовленный на основе Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Вас. subtilis (КМИОВ-39) приводит к выработке у телят антител к вирусам ИРТ и ВД в титрах 7,8-8,0 logj(HPT) и 7-7,5 log2(Bfl) в РИГА. Профилактическая эффективность препарата составила в среднем 70%; заболеваемость животных не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%.

8. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета иммуностимуляторами природного происхождения способствовала усилению специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антнгенсвязывающих клеток, что свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа.

9. Научно-обоснованные подходы к профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций у телят, включающие комплекс организационно-хозяйственных, технологических, ветеринарно-санитарных и терапевтических мероприятий с использованием иммуностимуляторов, живых и инактивированпых вакцин, позволяют в животноводческих хозяйствах снизить заболеваемость

в 2 -3 раза и в 1,5-2 раза - отход телят по причине инфекционных нневмоэнгеритов.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Проведенные исследования позволяют рекомендовать производству следующие нормативные документы:

1. Вирус-вакцина живая культуральная против инфекционного рипотрахеита крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.223-97.

2. Вирус-вакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.224-97.

3. Вирус-вакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.225-97.

4.Бивалентная живая культуральная вирус-вакцина против инфекционного рипотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, ТУ РБ 00750971.006-98.

5. Вирус-вакципа трехвалентная живая культуральная против инфекционного рипотрахеита, вирусной диареи и парагршша-З крупного рогатого скота, ТУ РБ 600049353.033-2002.

6. Поливалентная ипактивированная культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавируеной инфекции крупного рогатого скога «Тетравак», ТУ В У 600049853. 099 - 2007.

7 Ассоциированная вакцина против рота- и коронавируеной инфекций новорожденных телят, ТУ ВУ 600049853. 093 - 2008.

8. Рекомендации по диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний геляг. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 24.07.1991 г.

9. Методические рекомендации по диагностике и профилактике инфекционных заболеваний молодняка крупного рогатого скота. Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова протокол № 1 от 10 июля 1990 г.

10. Методические рекомендации по оценке функциональной активности В-лимфоцитов сельскохозяйственных животных. Утверждены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991. Москва, 1991.

11. Использование протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота (Рекомендации). Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова, протокол № 1 от 10 июля 1990 г.

12. Методические рекомендации но комплексной профилактике и терапии гшевмоэнтеритов телят. Утверждены отделом ветеринарии управления сельского хозяйства Смоленской области 6 апреля 1994 г.

13. Методические рекомендации по иммунологической диагностике, профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят вирусно-бакгериалыюй этиологии. Рассмотрены и одобрены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол № 4 от 29

декабря 1996 г.

14. Методические указания по профилактике и мерарл борьбы с рога- и корона-вирусой инфекцией телят. Утверждены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол №1 от 27.01.1998.

15. Методические рекомендации но профилактике, лечению и мерам борьбы с пневмоэптеритами телят. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г. . .

16. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике респираторных и желудочно-кишечных заболеваний гелят вирусной и бактериальной этиологии. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.

17. Ветеринарпо-санитарные требования для племенных животноводческих хозяйств (ферм) Республики. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол № 2 от9 августа 2002 г.

18. Ветеринарпо-санитарные требования для элеверов и гоенлемпредприятий Республики Беларусь. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол № 3 от25 октября 2002 г.

19. Ветерннарио-сапитариые требования для племенных заводов Республики Беларусь, поставляющих ремонтных бычков на элеверы. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол № 3 от 25 октября 2002 г.

20. Методические указания но эпизоотологическому обследованию животноводческих предприятий. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.

21. Методические рекомендации по профилактике пневмоэнтеритов телят технологическими методами. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10,04.2005 г.

22. Экологические методы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят (методические указания). Утверждены Комитетом Правительства Республики Дагестан по ветеринарии Российской Федерации 07.02.2006 г.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ Монографии

1. Красочко, П.А. Вирусные пневмоэнтериты телят / П.А.Красочко, Ю.Г. Зелютков, И.А.Красочко Минск: Хата. 1999,-166 с.

2. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине / П.А.Красочко, В.С.Прудников, О.Г.Новиков и др. / Под ред. П. А Красочко. Смоленск, 2001 .-324 с.

3. Инфекционные и инвазионные заболевания молодняка / П.А.Красочко, А.С.Ястребов, О.Г.Новиков и др. / Под ред. П.А. Красочко Смоленск, 2001.-380 с.

4. Болезни крупного рогатого скота и свиней / П.А.Красочко, О.Г.Ковиков, А.И.Ятусевич и др. / Под ред. П.А, Красочко. Минск, Техионринт, 2003. -464 с.

5. Болезни сельскохозяйственных животных / П.А.Красочко М.В.Якубовский, А.ИЛтусевич и др./ Под ред. П.А. Красочко. Минск: Бизнесофсет, 2005.-800 с.

6. Болезни крупного рогатого скота и овец / П.А.Красочко, З.Д.Джамбулатов, К.Б. Курбаимагомедов и др. / Под ред. Г1.А. Красочко. Махачкала: 2007 - 657 с.

7. Иммунокоррекция в клинической ветеринарной медицине / П.А.Красочко, М.В.Якубовский, И.А. Красочко и др. / Под ред. П.А.Красочко. Минск, Техноперспектива, 2008. - 520 с.

Открытия

8. Диплом на открытие № 291 Российской академии естественных наук и Меясдународной академии авторов научных открытий и изобретений / Явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках / Красочко П.А., Лысенко А.П., Волосянко Е.В. Москва, 18 октября 2005 г. Москва: 2005. 25 с.

Публикации в репетируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ

9. Красочко, П.А. Выявление антител к респираторным вирусам у крупного рогатого скота I П.А.Красочко, 'Г.И.Помирко // Ветеринария. 1988, - № 4,- С. 63-64.

10. Красочко, П.А., Применение Т-актнвина и протаргола для лечения респираторных болезней телят/ П.А.Красочко, Т.И.Помирко, ГШ Яровой // Ветеринария. 1990.-№ 11. - С.22-23.

11. Красочко, II. Вакцины против бесплодия / Красочко П., Пузына Г. // Молочное и мясное скотоводство. 1991. - № 1.- С.37-38.

12. Красочко, Г1.А. Чувствительность ИФА и РИГА при диагностике вирусной диареи крупного рогатого скота / П.А. Красочко // Ветеринария. 1991. - № 5. - С. 58-59.

13. Красочко, П.А. Эффективное средство при респираторных заболеваниях /П.А. Красочко // Молочное и мясное скотоводство. 1992. - № 2.- С.7-8.

14. Многослойная керамика на алюмосиликатной основе для фильтрации ветеринарных препаратов / С.М.Азаров, Т.А.Азарова, П.А.Красочко, А.И.Ратько, Е.С.Журавлева // Стекло и керамика. 2004. - № 7. -С. 15-17

15. Красочко, П.А. Изучение иммунного ответа у животных после введения инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронави-русной инфекций крупного рогатого скота с различными адъювантами / П.А. Красочко, С.В Бойчук // Ветеринарная патология. 2005. - № 2. - С. 54-55

16. Красочко, П.А. Метаболизм и состояние иммунитета у телят при энтеритах вирусно-бактериальной этиологии / П.А.Красочко, Е.С.Журавлева, К.Б. Курбаимагомедов //Международный вестник ветеринарии. 2006. - № 5-6. - С. 12-17.

17. Влияние инактивированиой бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скога на метаболизм иммунизированных коров / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.С.Журавлева, А.Н.Пригычепко // Ветеринарная патология. 2007. - № 3. - С.213-220

18. Красочно, П.Л. Иммуиотрошюе действие препарата из пчелиной перги «Апистимулина-А» на организм телят и поросят / П.А.Красочно, И. А.Красочко, В.М.Мосин // Ветеринарная патология. Москва: 2007, № 3. С.220-224.

Изобретении

19. Авторское свидетельство 1554590 СССР, МКП7 О 01 N 33/48. Способ определения функциональной активности лимфоцитов крупного рогатого скота: Кра-сочко П.А., Баева Е.В., Помирко Т.И.; МНИИЖиВ. - Заявл. 1.08.1988 № 4471085/3013, опубл. 1.12.1989. Москва: 1989.

20. Патент 1835659 Российская Федерация, МКП7 А 61 К 39/15. Criocpö приготовления эритроцитарного диагностику^ на основе вируса диареи крупного рогатого скота: Красочко П.А., Ковалев H.A., Красочко И.А., Жидков С.А., Корольков В.И.; БелНИИЭВ им. С'.Н.Вьипелесского. - Заявл. 04.12.1990 № 4887098, опубл. 10.09.1993. Москва: 1991.-5 с.

21. Патент 763 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 39/15. Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота: Красочко П.А., Ковалев H.A., Красочко И.А., Жидков С.А., Корольков В.И.; БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Заявл. 04.12.1990 № 238-4887098, опубл. 15.08.1995. Минск: 1995.- 2 с.

22. Патент 889Реснублика Молдова, МКП7 А 61 К 35/78. Remediu pentru stimularea sistemului imtin al animalelor (Средство для стимулирования иммунной системы животных): Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Катко Леонид, Иванов Василий, Лукьяичик Станислав, Усов Сергей; Еремия Николай, Красочко Петр. - Заявл. 26.12.1996 № 96-0314, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. - 4 с.

23. Патент 890 Республика Молдова, МКП7 А 61 К 35/78. Metoda de stiinulare а sisremnlui imun al animalelor (Метод стимулирования иммунной системы животных) Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьяичик Станислав, Усов Сергей, Еремия Нина; Еремия Николай, Красочко Петр. - Заявл. 26.12.1996 № 97-0075, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998.- 6 с.

24. Патент 891 Республика Молдова, МКГ17 А 61 К 35/78. Procedeu de obtinere а remediului pentrustimularea suistemului imun al animalelor (Способ получения средства для стимулирования иммунной системы животных) / Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьяичик Станислав, Усов Сергей, Еремия Нина; Еремия Николай, Красочко Петр. - Заявл. 26.12.1996 №97-0076, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998,- 5 с.

25. Патент 2889 Республика БелаРусь, МКП7 А 61 К 35/64, А 61 К 35/78. Средство для стимуляции иммунной системы организма животных Аиистимулин-А, способ его гюлучеиия и способ стимуляции иммунной системы организма животных/

Красочко П.А., Ковалев Н.А., Еремия Н.Г., Иванов А.Т., Малиновский И.Ф., Красочко И.А., Новиков О.Г., Грибко С.М., Катко JI.C., Иванов В.Е., Лукьянчик С.А., Усов С.М.: Красочко П.А. - Заявл. 24.061996 № 960314, опубл. 25.02.1999. Минск: 1999. - 7 с.

26. Патент 3913 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 39/02, А 61 К 39/07, А 61 К 31/739, А 61 К 35/74. Способ повышения резистентности организма молодняка крупного рогатого скота / Красочко П.А.; Красочко П.А. - Заявл. 12.04.1996 № 960174 опубл. 15.01.2001. Минск: 2001.-5 с.

27. Патент 5304 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 35/76, А 61 К 39/12, А 61 К 35/15, 61 К 39/295. Бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, способ ее получения и способ ее применения / Красочко П.А., Ковалев Н.А., Красочко И.А., Жидков С.А., Белявская 'Г.В., Ко-лоницкая Е.Г., Новиков О.Г., Грибко С.М., Кашко Л.С.; БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Заявл. 11.12.1997, № 970693, Опубл. 17.03.2003. Минск: 2003. -10с.

28. Патент 6091 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 39/265. Штамм Bacillus alvei КМИЭВ-11, используемый для получения вирусспецифических белков вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота / Красочко П.А., Фукс П.П., Волосянко Е.В., Красочко И.А.; Красочко П.А. - Заявл. 30.06.1999 № а1999651, Опубл. 29.12.2003. Минск: 2004. - 4 с.

29. Патент 26673 УкраТна, МКП7 А 61 К 39/00. Штамм Bacillus subtilis (КМИЭВ -39) для одержапня в1русопециф1чних битов Bipycy jiiapei великсн poraroi худоби / Красочко IT.A., Красочко И.А., Волосянко Е.В., Еремия Н.Г.; Красочко П.А., Волосянко Е.В. - Заявлено 09.10.2006; № и 200610644 опубл. 10.10.2007. Бюл. .№ 16 -Киев: 2007. - 2 с.

30. Патент 26677 Украша. МКП7 А 61 К 39/265. Штам Infectious bovine rhi-notracheitis (КМИЭВ-6) Bipycy шфекцшного ринотрахеггу велико! poraroi худоби для виготовленпя пакцинних i /папюстичннх препарапв / Красочко П.А., Красочко И.А., Волосянко Е.В., КасЫч В.Ю.; Красочко П.А., Волосянко Е.В. - Заявлено 20.10.2006; № u 200611089 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 - Киев: 2007. - 2 с.

31. Патент 26676 Украша, МКП'А 61 К 39/265. Штам Bipycy fliapoei bovine viral diarrhea (КМИЭВ-7) eejiHKoi рогато) худоби для виготовленпя вакцинних i /цагностичних препарате / Красочко П.А., Красочко И.А., Волосянко, Kacci4 В.Ю. ; Красочко П.А., Волосянко Е.В. - Заявлено 20.10.2006; № и 200611084 Е.В.опубл.

10.10.2007. Бюл. № 16- Киев: 2007.-2 с.

32. Патент 10696 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 35/76, А 61 К 39/12, А 61 К 35/15, 61 К 39/295. Трехвалентная живая кульгуральная вакцина против инфекционного ринограхеита, вирусной диареи и парагрнппа-3 крупного рогатого скота, способ ее получения и способ иммунизации крупного рогатого скота / Красочко П.А., Красочко И.А., Ковалев Н.А., Колоницкая Е.Г., Жих Г.И., Иванова И.П., Кот Н.И.; РНИУП «ИЭВ им. С.Н.Вышелесского». - Заявл. 08.10.2004 № а20040924, Опубл.

06.03.2008. Минск: 2008. - 4 с.

33. Патент 10697 Республика Беларусь, МКП7 А 61 К 35/76, А 61 К 39/12, А 61 К 35/15, 61 К 39/295. Поливалентная инактивировапная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота / Красочко П.А., Красочко И.А., Кабась С.С., Жих Г И., Иванова И.П., Ковалев H.A., Машеро В.А., Бойчук C.B., Кануцкий Ф.Н., Герт Е.В., Торгашоа В.И., Зубец О.В.; РНИУГ1 «ИЭВ им. С.Н.Вышелесского». - Заявл. 08.10.2004 № а20040925, Онубл. 06.03.2008. Минск: 2008. - 8 с.

Список статен в журналах СНГ

34. Профилактика и терапия респираторных заболевании телят / П.А.Красочко, Т.И.Помирко, В.И.Стародуб, А.В.Жовтан // Сельское хозяйство Молдавии. - 1988,- №> 11.- С.35-36.

35. Состояние иммунитета при вакцинации телят бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи / П.А.Красочко, H.A.Ковалев, П.А.Красочко, Т.В.Белявская // Becui Акадэмп аграрных навук Рэ-публ1к1 Беларусь. - 1998. - № 2- С. 81-84.

36. Красочко, H.A. Влияние препарата "Апистимулин-А" на состояние иммунитета и обменные процессы организма здоровых телят / П.А.Красочко, П.А.Красочко, С.М.Усов //Becui Акадэмп аграрных навук Рэпублш Беларусь. -1998,- № 3-С. 87-90.

37. Красочко, П.А. Профилактика инфекционных энтеритов новорожденных телят технологическими методами / П.А.Красочко, С.Л.Борознов // BicuiiK Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал 1-2 (13-14). -2005. -С.70-72.

38. Красочко, П.А. Реактогенность и иммунологическая эффективность инактивированных вакцин для специфической профилактики энтеритов новорожденных телят / П.А.Красочко, В.А. Машеро // BiciniK Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал № 1-2 (13-14). - 2005. -С.240-241

39. Красочко, П.А. Состояние иммунитета и обменных процессов у телят при вирусно-бактериальных энтеритах / П.А.Красочко, Е.С.Журавлева, А.А.Мацинович // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. -2004. -№ 3. - С.38-42.

40. Красочко, П.А. Иммуностимуляторы и современные способы коррекции иммунного ответа / П.А.Красочко, В.А.Машеро // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. - 2004. - № 1 - С.3-11.

41. Красочко, П.А. Спонтанная персистенция генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках, приводящая к биосинтезу вирус специфических белков / П.А.Красочко, А.П.Лысепко, Е.В. Волосянко // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. - 2004. - № 2, - С.34-40

42. Красочко, П.А. Современные подходы к классификации иммуномодуля-горов /' П.А. Красочко, // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. - 2006. - № 2. - С.35-40

43. Красочко, П.А. Научные основы изучения этиологии, патогенеза и разработка мер борьбы с вирусными инфекциями молодняка крупного рогатого скота / П.А.Красочко, A.M. Ламан // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. - 2006. - № 3. -С. 3-8.

Список статей в сборниках трудов СССР и СНГ

44. Этиология, профилактика и лечение острых гастроэнтеритов новорожденных телят / П.А.Красочко, А.И.Ерошов, В.М.Бондарь, Т.И.Помирко // Научное обеспечение животноводства Молдавии. - Кишинев: Штиинца. - 1989. -С. 100-103.

45. Спатарь, Ф.В. Комплексная терапия острых респираторных болезней крупного рогатого скота / Спатарь Ф.В., Шитту Мохаммед, Красочко П.А.// Диагностика и специфическая профилакгика инфекционных болезней животных и птиц: Сб. научн. тр. Кишиневский СХИ. им. М.В.Фрунзе. -Кишинев, 1989. - С.86-91.

46. Красочко, П.А. Роль вирусов в этиологии респираторных инфекций телят / П.А. Красочко // Биотехнологические аспекты развития животноводства: Сб. паучн. статей. - Кишинев: Молдагроинформ реклама. - 1991. - С.125-130

47. Иммуностимулирующие свойства пыльцы и перги // П.А.Красочко, Н.Г. Еремия, Н.М.Еремия, Е.В.Баева, Т.М.Есауленко // Апитерапия и пчеловодство: Сб. научн. трудов. - Гадяч, 1991.- С. 183-186

48. Использование ИФА для изучения динамики противовирусных антиител Ig М н Ig G-классов / П.А.Красочко, H.A. Ковалев, И.А. Красочко, Ю.Г.Зелютков, Ю.Н.Федоров // Уч. зап. Витебского ордена "Знак Почета" вет. института им. Октябрьской революции,-Витебск, 1993.- Т.30.- С.62-64.

49. Состояние колостральпого иммунитета у телят при нневмоэитеритах / П.А.Красочко. И..А. Красочко, Т.В. Белявская, С.М. Грибко, И.В.Шадепко // Уч. зап. Витебской Гос. акад. вет. медицины. - Витебск, 1995. - Т.32,- С. 26-27

50. Красочко, П.А. Бактериальный липополисахарид - стимулятор поствак-цшгалыюго иммунитета при вирусных респираторных инфекциях телят I П.А.Красочко, В.А.Машеро // Уч. Зап. Витебской Гос. акад. вет. медицины. - Витебск, 1998. Т. 34,-С. 144-146

51. Красочко, П.А. Сравнительная иммунологическая эффективность бактериальных линоиолисахаридов в зависимости от способов выделения / П.А.Красочко,

B.А.Машеро, A.A. Гласкович // Уч. Зап. Витебской ордена "Знак Почета" Гос. акад. вет, медицины. - Витебск, 1999. Т.35, ч.1,-С.66-68.

52. Красочко, П.А. Иммунодефицит и его коррекция при инфекционном ри-нотрахеитс и вирусной диарее у телят / П.А. Красочко, И.А. Красочко, С.М.Усов // Ветеринарная наука - производству: Науч. Тр. БелНИИЭВ,- Минск: Хата. - 2000. -Т.34. - С.40-50.

53. Состояние клеточного и гуморального иммунитета у телят при иммунизации против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 / П.А.Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова /У Ветеринарная наука - производству: Науч. Тр. БелНИИЭВ. - Минск: Хата. - 2000. -Т.34. -

C.51-57.

54. Красочко, П.А. Перспективы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят / П.А.Красочко, H.A. Ковалев, И.А.Красочко Н Аграрная паука на рубеже XXI века. Маг. общего собрания ААН РБ 16 ноября 2000 г. - Минск, 2000. -С. 238-240.

55. Эффективность трехвалентной вакцины против инфекционного риног-рахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота / П.А.Красочко, Н.И.Кот, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая // Уч. Зап. ВГАВМ: Сб. науч. Тр. по мат. Межд. Копф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и интенсивного животноводства». - Витебск, 2002. - Т.38, ч. 1.- 58-61.

56. Состояние клеточного иммунитета у телят при иммунизации против инфекционного ринотрахеита, вирусной диреи и парагриппа-3 / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Н.И.Кот Е.Г.Колоницкая, Иванова И.II. // Ветеринарна медицина. М1жвидомчий тематичний навуковий зб1рник, присвячений SO-piMinmi 1нституту експерименталыки i клннчно1 ветсрипарпо! медицини. - Харыш, 2002. -С.337-341.

57. Сравнительная эффективность инактивации вирусов - возбудителей пневмоэнтеритов телят / П.А.Красочко,И.А.Красочко, В.А.Матеро, Е.Г.Колоницкая, С.В.Бойчук // Уч. Зап. УО «Витебская ордена «Знак Почета» гос. академия вет. медицины». -. Витебск, 2003. -Т. 39, Ч. 1. - С.63-64.

58. Жих, Г.И. Иммунопрофилактика вирусных гастроэнтеритов молодняка крупного рогатого скота / Г.И.Жих, П.А.Красочко, И.П.Иванова // Уч. Заи. УО «Витебская ордена «Знак Почета» гос. академия вет. медицины». - Витебск, 2004. - Т. 40,4. 1.-С. 205-206.

59. Использование теотрогшна для инактивации вирусов при конструировании инактивированных вакцин / П.А.Красочко, И.П.Иваиова, Г.И.Жих,

A.А.Губаревич Ü Уч. Зап. УО «Витебская ордена «Знак Почета» гос. академия вет. медицины». - Витебск, 2004. - Т. 40, Ч. 1. - С. 223-224.

60. Красочко, П.А. Использование бактериального липополисахарида из Вас. Larvei для оценки состояния B-системы лимфоцитов у телят /' П.А., Красочко,

B.А.Машеро// Сельское хозяйство - проблемы и перспективы: Сб.науч. тр. УО «Гродненский государственный аграрный университет». - Гродно, 2005. - Т.4, ч.2. -С 56-58.

61. Красочко, П.А. Технологические методы в профилактике респираторных заболеваний телят / П.А.Красочко, С.Л. Борознов // Сельское хозяйство - проблемы и перспективы. Сб.науч. тр. УО «Гродненский государственный аграрный университет». - Гродно, 2005. - Т.4, ч.2..- С.233-236.

62. Босиптез противовирусных антител у животных после иммунизации бактериями, имеющими участки генома инфекционных вирусов / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Г.И.Жих, И.П.Иванова // Ветеринарная наука-производству. Науч. Тр. РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского HAH Беларуси»: - Минск, 2005. - Вып. 38 - С.291-295.

63. Специфическая профилактика вирусно-бактериальных пневмоэнтеритов молодняка крупного рогатого скота / П.А.Красочко, Ю.В.Ломако, И.А.Красочко,

С.С.Кабась, С.Л.Борознов, Л.Д.Андросик, Е.С.Журавлева, Г.И.Жих, И.П.Иванова, А.А.Губаревич, В.К.Карпович, А.М.Ламан // Ветеринарная наука-производству. Науч. Тр. РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского HAH Беларуси»: - Минск, 2005. - Вып. 38 - С.302-306.

64. Красочко, П.А. Определение иммуногенной активности экспериментальной поливалентной инактивированной вакцины против ИРТ, ВД, рота- и корона-вирусной инфекции на лабораторных животных / П.А. Красочко, Г.И.Жих, И.П.Иванова // Уч. Зап. УО «Витебская ордена «Знак Почета» гос. академия вет. медицины». -Витебск, 2005. -Т. 41,Вып.2, ч. 1.-.С. 28-29.

65. Борознов, С.Л. Сравнительное изучение эффективности профилактики диарейных болезней телят с применением иммунобиологических препаратов / С.Л.Борознов, П.А.Красочко // Уч. Зап. УО «Витебская ордена «Знак Почета» гос. академия вет. медицины». т. Витебск, 2007. - Т. 43, Вып. I. - С.33-35.

Материалы конференций

66. Красочко, П.А. Антигенсвязывающие клетки у телят после вакцинации против респираторных инфекций / П.А.Красочко, Ю.Г.Зелютков // Siuolaikines veteri-narijos problemos: Матер.научн. конф. Kaisiadorys, 1993,- S. 20-22.

67. Красочко, П.А. Иммунологическая оценка цветочной пыльцы и перги / П.А.Красочко, Н.Г. Еремия // Апитерапия и пчеловодство: Матер, научн. конф. Ална литера. - Вильнюс, 1993 - С.40-44.

68. Изучение этиологической структуры вирусных респираторных инфекций телят в Беларуси // П.А.Красочко, И.А.Красочко, И.В.Шаденко, Т.В.Белявская // Збе-реженкть молодняка с/г тварин - запорука розвитку гвариництва Украши: Зб.статей наук.-практ.конф. - Харьюв, 1994.- 10-12.

69. Д1я вакцин проти шфекшйного рипо-трахе1ту та Bipycnoi fliapei на имунну систему телят / П.А.Красочко, H.A. Ковалев, И.А. Красочко, С.М. Усов // Бю-техполопя ветерииарпих препаратов: Матер.наук.-практ. конф. - Харьюв, 1993. -С.85г86.

70. Изучение вопроса идентичности антигенов условно-патогенных бактерий и вирусов животных / П.П.Фукс, В.А.Бусол, П.А.Красочко, В.В.Шимко // Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы: Матер. Межд. науч. конф. - Харьков, 1995. - С. 197-200.

71. Интерферонообразование у телят, иммунизированных против вирусных респираторных инфекций /П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Ю.Г.Зелютков // Иммунодиагностика и иммунотерапия: Труды 1-й Междун. научн. Конф.- Витебск, 1995.- С.211-212.

72. Красочко, П.А. Сравнительная эффективность иммуностимуляторов при респираторных инфекциях телят / П.А.Красочко, H.A. Ковалев, С.М.Грибко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Матер, межд.паучн.-практ.конф. - Смоленск, 1996,-С.37-38.

73. Красочко, П.А. Иммунологическая и профилактическая эффективность перги / П.А. Красочко // Апитерапия сегодня (сборник 5): Матер. 5-й научн,-

практ.конф. по анигерагши "Пчелы и ваше здоровье" - Рыбное, 1997. - С.107-109.

74. Красочно, 11.А. Состояние клеточного иммунитета у телят при респираторных заболеваниях в условиях промышленной технологии выращивания / П.А. Красочко, С.М. Грибко // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных: Матер. Междунар. координац. Совещ. - Воронеж, 1997. - С.99-100.

75. Технологические основы изготовления вакцинных препаратов для профилактики заболеваний телят / П.А. Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Краеочко, Т.В.Белявская // Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном производстве: Матер. Междунар. ппучно-практич. конф,, поев, 50-летию, БелНИИМСХ -Минск, 1997.-С.136-137.

76. Красочко, П.А. Влияние иммуностимулятора "Апистимулин-А" на показатели обмена веществ телят / К П.А.расочко, С.М.Усов // Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном производстве: Матер. Междунар. научно-гтрактич. конф., поев. 50-летию. БелНИИМСХ-Минск, 1997. - С. 138-139.

77. Красочко, П.А. Специфическая профилактика инфекционного рннотра-хеига и вирусной диареи крупного рогатого скота ассоциированной вакциной / И.А.Краеочко, Т.В.Белявская, Е.Г. Колоницкая // Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы: Матер. Межд.научн.-практ. конф. - Минск, 1997. - С.36-37.

78. Красочко, П.А. Белки крови телят после обработки иммуностимулятором "Апистимулин-А" / П.А.Красочко, С.М. Усов // Апитерапия сегодня: Матер. VI науч-но-практ. конф. но апитерапии. - Рязань, 1998.- С.67-70.

79. Красочко, П.А. Диагностика, профилактика и терапия респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка / П.А.Красочко, И.А. Красочко // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве: Матер. Междунар. На-уч.-практ. Копф. Поев. 100-летию со дня рожд. академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца-Минск, 1998.-С.15-18

80. Красочко, П.А. Теоретические аспекты возникновения вирусных респираторных заболеваний и желудочно-кишечных инфекций телят /П.А. Красочко, И.А.Краеочко, Л.С.Кашко // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве: Матер. Межд. Науч.-нракт. Конф. Поев. 100-летию со дня рожд. академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца-Минск, 1998. - С 39-41.

81. Красочко, П.А. Имммунологическая оценка бактериальных полисахаридов, полученных из бацилл / П.А. Красочко, В.А.Машеро// Инфекция и иммунитет: Мат. Респ. науч.-практ. конф., поев. 75-летию БелНИИЭВ. - Минск: Хата. - 1999. -С.505-507.

82. Красочко, П.А. Иммунный ответ телят при иммунизации против вирусной и бактериальных инфекций с различной технологией выращивания /П.А.Красочко, В.А.Машеро, Ю.Г.Зелютков // Мат. Учр. Конф. Межд. Ассоц. парази-тоценологов. - Витебск, 1999,- С.89-91.

83. Красочко, П.А. Инфицированносгь стад крупного рогатого скота возбудителями респираторных инфекций в хозяйствах Минской области / П.А.Красочко, И.П. Иванова // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных:

Мат. Межд. науч.-практ. Конф., поев. 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. -Минск: Хата. - 2000. - С. 105-106.

84. Профилактическая эффективность трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова, Г.И.Жих, Н.И.Кот // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. науч.-практ. Конф., поев. 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Минск: Хата. - 2000. -С. 115-117.

85. Красочко, П.А. Активизация поствакцинального иммунитета у телят с помощью препарата альвеозан / П.А.Красочко, В.А.Машеро // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. науч.-практ. Конф., поев. 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Минск: Хата. - 2000. - С. 120-123.

86. Сравнительная характеристика иммуностимуляторов природного происхождения / П.А.Красочко, В.А.Машеро, И.Н.Дубина, А.А.Гласкович, С.А.Болынаков // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. науч.-практ. Конф,, поев. 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Минск: Хата.-2000.-С. 123-125.

87. Иммунодефициты при респираторных заболеваниях телят и их коррекция продуктами пчеловодства / П.А.Красочко, И.А.Красочко, В.Е.Иванов, С.М.Усов // Апитерапия сегодня - с биологической аптекой пчел в XXI век: Матер. II Межд. науч.-практ. Конф. - Уфа, 2000. - С. 152-155.

88. Красочко, П.А. Митогеиная активность Аиистимулина-А в системе in vitro/ П.А. Красочко, О.Г.Новиков, С.М. Грибко // От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия: Мат. 1 Межд. Науч.-практ. Конф. по пчеловодству и пчелотерапии "Белорусский мед-2002". - Минск, 2002.- С, 153-154.

89. Профилактическая эффективность бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи при пневмоэнтеритах телят, мастите и эндометритах коров У П.А.Красочко, О.Г.Новиков, Л.С.Кашко, И.А.Красочко, С.М.Грибко // Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство: Мат. Науч.-произв. Конф. - Смоленск, 2002.-С.21-22.

90. Красочко, П.А. Современные аспекты профилактики и терапии вирусных пневмоэнтеритов телят в Республике Беларусь / П.А Красочко // Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. Науч.-практ. конф,-Минск, 2003. - С.13-15

91. Красочко, П.А. Иммуногенность компонентов поливалентной инактиви-рованной вакцины против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота и коронави-русной инфекции крупного рогатого скота / П.А.Красочко, С.В.Бойчук, С.С. Кабась // Современные вопросы патблогии сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. На-уч^-практ. конф,-Минск, 2003,- C.I60-163.

92. Иммуногенная эффективность поливалентной инактивировапной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирус-ной инфекций крупного рогатого скота / П.А.Красочко, И.А.Красочко, С.С.Кабась,

И.П.Иванова, Г.И.Жих // Ветеринарная медицина - 2005: Сб. науч. Тр. Межд. Науч.-иракт. Конф. «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства». -Харьков, 2005.-Т. 1.- С. 620-623.

93. Красочко, П.А. Отработка оптимальных способов инактивации вирусов для изготовления инактивированных противовирусных вакцин / П.А.Красочко, П.А.Красочко, МА. Ламап // Realizan s.i perspective in cres.terea animalelor", simpoz. st. (2006;). Simpozionul stiintific international consacrat jubileului de 50 ani de la fondarea Institutului de Zootehnie si Medicina Veterinara "Realizari si perspective in cresterea animalelor". - Chisinau, 2006. - P. 464468.

94. Возбудители инфекционных заболеваний пчел - источники иммунотрон-ных препаратов для животных и пгиц /П.А. Красочко, Е.В.Волосянко, Н.Г.Еремия, В.А.Машеро, Е.А. Капитонова // Мат. Ill зЧзду аштерапева™ Украши. Аштерашя: досягнення та перспективи розвитку. - Харьков, 2006. - С.214-219.

95. Красочко, П.А. Сравнительная иммунологическая эффективность бактериальных липополисахаридов в зависимости от способов выделения / П.А.Красочко, В.А.Машеро, Е.А.Канитонова. // Научные основы производства вегерииариых биологических препаратов: Мат. Науч.-пракг. Конф., поев. 80-летию со дня рожд. И.А. Хорькова - - Щелково, 2006. - С. 147-150.

96. Смирнова, Н.И. Экспериментальные данные о способности бактерий предохранять телят против инфекционного ринотрахеита и иарагриппа-3 /Н.И.Смирнова, В.М Жавненко, П.А. Красочко // Болезни молодняка сельскохозяйственных животных и их профилактика на комплексах: Тез. Докл. научи, конф. - Таллии, 1984.-С. 29-31.

97. Помирко, Т.И. Иммунная реактивность телят, больных вирусными респираторными инфекциями / Т.И.Помирко, П.А.Красочко, И.А. Красочко // Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслуживания промышленного животноводства: Тез. Докл. Науч. Конф. - Кишинев, 1987. - С.20-21

98. Смирнова, Н.И. К вопросу о возможности повышения резистентности организма телят при помощи бациллы альвей-3 / Н.И.Смирнова, П.А.Красочко // Вопросы интенсификации и иаучио-обосиованного вегеринарного обслуживания промышленного животноводства: Тез. Докл. Науч. Конф. - Кишинев, 1987. - С.21-22.

99. Красочко, П.А. Промышленная технология выращивания телят и иммунный ответ их организма на респираторные вирусы / П.А.Красочко, Т.И. Помирко // Стресс и иммунитет. Тез. Докл. Всес. конф. - Ленинград, 1989,- С.236.

100. Красочко, Г1.А. Определение антител к вирусу диареи в сыворотках крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа / П.А. Красочко // Первый иммунологический съезд: Тез. Докл.- Москва 1989. - Т.I. - С- 226.

101. Красочко, П.А. Стимуляция иммунной системы телят бактериальным липополисахаридом для профилактики респираторных инфекций /П.А. Красочко // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных: Тез. докл. научи.-произв. конф. - Минск, 1990,- С. 112-113.

102. Красочко, П.А. Использование Т-активина для коррекции приобретеп-

лого иммунодефицита при респираторных инфекциях телят /П.А; Красочко // Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине. Тез.докл Всес. научн.-техн.конф. -Москва, 1990. - С.75-77.

103. Иммунологическая эффективность трехвале7гпюй вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и иарагрипна-3 крупного рогатого скота /П.А.Красочко Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Е.Г.Колоницкая, И.П.Иванова, Т.В.Белявская // Современные проблемы инфекционной патологии человека (эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология:/ Ст. и тез. докл. 1 итог. Науч.-практ.конф. БелНИИЭМ- Минск, 1998. - С.457-458.

104. Красочко, П.А. Изучение инфицйрованности возбудителями респираторных инфекций стад крупного рогатого скота в Республике Беларусь / П.А. Красочко, И.П.Иванова // Современные проблемы инфекционной патологии человека (эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология:/ Ст. и тез. Докл. 1 итог. Науч.-практ.конф. БелНИИЭМ-Минск, 1998, - С.506 -508

105. Красочко, П.А. Иммуногенность вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота / П.А.Красочко, И.А. Красочко, Е.Г.Колоницкая // Вакцины и иммунизация. Шестой Межд. форум но глобальной вакцинологии,- Минск: 2003.- С.39.

Отпечатано в ООО «Мещера», М.О., г. Щелково, ул. Свирская, 8а, зак. 63, тираж 130 экз.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Красочко, Петр Альбинович

Общая характеристика работы

Глава 1 Обзор литературы.

1.1. Вирусные респираторные и желудочно-кишечные инфекции молодняка крупного рогатого скота.

1.2. Этиология респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

1.2.1. Характеристика основных причин возникновения пневмо- 18 энтеритов телят

1.2.2. Характеристика вирусов - основных возбудителей респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

1.2.2.1. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота

1.2.2.2. Вирусная диарея крупного рогатого скота.

1.2.2.3. Парагрипп-3 крупного рогатого скота

1.2.2.4. Ротавирусная инфекция крупного рогатого скота

1.2.2.5. Коронавирусная инфекция крупного рогатого скота

1.2.2.6. Ассоциативные вирусные респираторные и желудочно- 34 кишечные инфекции крупного рогатого скота.

1.3. Иммунитет и иммунопатология при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота.

1.4. Специфическая профилактика и меры борьбы при респираторных желудочно-кишечных инфекциях телят

1.4.1. Принципы изготовления вирус-вакцин

1.4.2. Вакцины, основанные на использовании антигенно-родственных возбудителей болезней

1.4.3. Вакцины против респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

1.5. Иммуномодуляторы в профилактике и терапии респираторных заболеваний крупного рогатого скота.

1.5.1. Механизм действия иммуномодуляторов на иммунную систему животных.

1.5.2. Иммуностимуляторы природного происхождения и их использование для иммунокоррекции иммунодефицитов

1.6. Анализ данных литературы.

Глава 2. Материал и методы исследований.

Результаты собственных исследований.

Глава 3. Изучение причин возникновения респираторных и желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота в Республике Беларусь.

3.1. Клиническое проявление и патологоанатомические изменения при пневмоэнтеритах телят

3.2. Ущерб и основные технологические причины возникновения заболеваний желудочно-кишечного тракта, органов дыхания у крупного рогатого скота вирусной этиологии

3.3. Изучение роли вирусов и бактерий в возникновении респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

Глава 4 Состояние иммунной системы и обмена веществ у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях и у коров при заболеваниях репродуктивных органов.

Глава 5. Неспецифическая профилактика вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

5.1. Разработка технологии получения и стимуляция иммунной 95 системы телят при вирусных пневмоэнтеритах с помощью бактериальных липополисахаридов

5.2. Использование продуктов пчеловодства с целыо повыше- 113 ния резистентности организма телят при вирусных пневмоэнтеритах

5.3. Иммунологическая перестройка организма телят и лечеб- 128 но-профилактическая эффективность Т-активина при респираторных заболеваниях

5.4 Иммунологическая и лечебно-профилактическая эффективность использования протаргола при вирусных респираторных инфекциях

ГЛАВА 6. Специфическая профилактика вирусных респираторных и 141 желудочно-кишечных инфекций телят

6.1. Общие подходы к конструированию вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят

6.1.1. Подбор, селекционирование и отработка режимов культивирования вакцинных штаммов вирусов крупного рогатого скота для конструирования вакцин

6.1.1.1. Выделение и селекционирование вируса инфекционного 144 ринотрахеита крупного рогатого скота

6.1.1.2. Выделение и селекционирование вируса диареи крупного рогатого скота

6.1.1.3. Выделение и селекционирование вируса парагриппа-3 148 крупного рогатого скота

6.1.1.4. Выделение и селекционирование ротавируса крупного ро- 151 гатого скота

6.1.1.5. Выделение и селекционирование коронавируса крупного 153 рогатого скота

6.1.2. Отработка способов совместного и раздельного культиви- 155 рования вирусов

6.1.3. Изучение антигенной активности аттенуированных штам- 160 мов ИРТ, ВД и ПГ-3, рота- и коронавирусов на лабораторных и сельскохозяйственных животных

6.2. Разработка живых моновакцин против инфекционного ри- 162 нотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота

6.2.1. Разработка технологии изготовления моновакцины против 162 инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.2.2. Разработка технологии изготовления моновакцины против 170 вирусной диареи крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.2.3. Разработка технологии изготовления моновакцины против 179 парагриппа-3 крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.3. Разработка живых ассоциированных вакцин против ин- 189 фекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота

6.3.1. Разработка технологии изготовления бивалентной вакцины 189 против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.3.2. Разработка технологии изготовления трехвалентной вакци- 206 ны против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.4. Разработка инактивированных вакцин против вирусных 219 пневмоэнтеритов крупного рогатого скота

6.4.1. Разработка технологии . изготовления ассоциированной 220 вакцины против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота и изучение иммуногенеза после ее применения

6.4.2. Разработка технологии изготовления поливалентной инак- 236 тивированной вакцины против инфекционного ринотра-хеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак» и изучение иммуногенеза после ее применения

6.5. Разработка рекомбинантной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота с использованием генетически модифицированных штаммов бактерий

6.5.1. Установление спонтанной персистенции генома вирусов 259 КОРТ и ВД в бактериальных клетках

6.5.2. Использование бактерий, несущих на своей поверхности 269 вирус специфические белки в ветеринарной практике

Глава 7 .Стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью 273 иммуностимулирующих препаратов природного происхождения.

Глава 8. Ветеринарно-санитарные мероприятия по применению 280 иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии инфекционных пневмоэнтеритов у телят

Глава 9. Экономическая эффективность использования иммунобио- 284 логических препаратов при вирусных респираторных желудочно-кишечных заболеваниях телят

Глава 10 Анализ и обобщение результатов исследований.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота"

Актуальность темы диссертации

Современное ведение мясного и молочного скотоводства, сопровождающееся концентрацией поголовья на небольшой площади, комплектованием животноводческих ферм и комплексов одновозрастпыми и одновидо-выми животными с генетическим потенциалом, приближенным к однородному, сопровождается быстрым распространением инфекционных заболеваний, которые поражают различные половозрастные группы животных.

Среди болезней крупного рогатого скота ппевмоэнтериты наносят огромный экономический ущерб животноводству. Возбудителями таких инфекций являются вирусы, относящиеся к семействам герпесвирусов (вирус инфекционного ринотрахеита), парамиксовирусов (вирусы парагригша-З и респираторно-синтициальный вирус), тогавирусов (вирус диареи — болезни слизистых), аденовирусов, рота- и коронавирусов и т.д. Это так называемые "малые" инфекции, которые у здоровых животных с нормальным функционированием иммунной системы протекают бессимптомно без выраженных клинических признаков или животные вообще не переболевают данными инфекциями. Особенно тяжело болеют животные, когда в патологический процесс вовлекается 2 и более вирусов, то есть возникает смешанная или ассоциативная инфекция (17, 129, 151, 166, 208, 250, 275,)Течепие пневмоэнте-ритов развивается в две фазы: первая — вирусиая фаза, вторая — бактериальная. При тяжелом течении вирусной фазы инфекции наряду с поражением чувствительных клеток наступает значительное угнетение клеточного и гуморального звеньев иммунитета, на фоне чего условно-патогенная микрофлора активизируется и у животных развивается "энзоотическая пневмония", приводящая к значительному отходу заболевших животных, снижению их продуктивности (17, 129, 162, 229). Особенностью распространения вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, респираторпо-синцитиальной инфекции является то, что данные возбудители у молодняка до 1 месяца могут вызывать энтериты, у более старших животных — респираторные заболевания, а у взрослых половозрелых коров и быков — нарушение воспроизводительной функции. Кроме того, вирус парагриппа-3 широко распространен у телят старше 1-го месячного возраста при нарушениях технологии выращивания, т.е. при стрессовых воздействиях на организм, вызывая поражения дыхательных путей, а рота- и коронавирусы - у новорожденных телят вызывают тяжело протекающие энтериты.

По тропизму все выщеуказанные возбудители могут репродуцироваться в клетках респираторного и желудочно-кишечного тракта, половых органах, иммунокомпетентных клетках, то есть оии паитропны. Это обуславливает их высокую контагиозность и тяжесть течения болезни (17).

Одним из пусковых механизмов поражения животных инфекционными заболеваниями в условиях современной промышленной технологии является снижение иммунологической реактивности организма, которая вызывается рядом факторов — недоразвитостью иммунной системы молодняка (первичный иммунодефицит), пищевые токсикозы, недостаточное и несбалансированное по различным компонентам кормление, а также сильное стрессовое воздействие: так называемый "технологический стресс", обусловленный современной технологией производства продукции животноводства. Составляющими современной промышленной технологии, способствующие вызвать стрессовые воздействия на организм животных являются безвыгульное и безвыпасное содержание животных, транспортировка, изменение микроклимата, формирование больших групп животных, малый фронт кормления, интенсивная эксплуатация (25). Все такие факторы отрицательно отражаются на иммунной системе и обменных процессах организма животных, что приводит к значительному снижению устойчивости к инфекционным заболеваниям, особенно к заболеваниям, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы и вирусы. Угнетенная иммунная система под воздействием вышеуказанных факторов не в состоянии противостоять вирусам-возбудителям даже с невысокой патогенностыо. Вирусы-возбудители респираторных инфекций крупного рогатого скота каждый в отдельности, но особенно в ассоциациях, в свою очередь угиегают отдельные звенья иммунной системы — как клеточные, так и гуморальные. При переболевании животных вирусной диареей поражается в основном клеточное звено иммунитета — снижается количество и функциональная активность лимфоцитов, угнетается биосинтез антител, снижается концентрация общего белка в сыворотке крови. При переболевании ассоциативной инфекцией диарея и инфекционный ринотрахеит, диарея и парагрипп-3 снижается биосинтез антител к данным возбудителям (103,188).

Кроме того, вирус диареи крупного рогатого скота репродуцируется в лейкоцитах — лимфоцитах, моноцитах, пейтрофилах, тем самым вызывая лейкопению (103). Вирус инфекционного ринотрахеита, репродуцирующийся в организме телят, угнетает функцию В-лимфоцитов, снижает активность альвеолярных макрофагов (417). Наряду с угнетением иммунной системы поражаются чувствительные клетки дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта, которые являются хорошим субстратом для размножения условно-патогенной микрофлоры. Все вышеуказанные вирусы у молодняка крупного рогатого скота вызывают пневмоэнтериты, а у взрослых животных — поражение репродуктивных органов.

Как уже было сказано выше, течение вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций (ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавирусы) сопровождается состоянием иммунодепрессии. В этой связи в комплекс лечебно-профилактических мероприятий в пораженных стадах необходимо включить препараты, являющиеся стимуляторами иммунной системы, снимающие им-мунодепрессивное состояние и нормализующие клеточный и гуморальный иммунитет до уровня здоровых животных.

В арсенале медицинских и ветеринарных иммуностимулирующих препаратов важное место отводится производным природных продуктов. В настоящее время высокоэффективными препаратами являются иммуностимуляторы животного происхождения — АСД, тканевые препараты, изготовленные по методу Филатова, Т- и В-активии. Однако АСД и тканевые препараты по Филатову хотя и высокоэффективны, но при введении их животным вызывают значительную антигенную перегрузку, чем усугубляют течение заболевания и восстановления иммунной системы. Т- и В-активии высокоактивные биологические препараты, но в последние годы их производство и применение значительно снизилось. Наиболее перспективным направлением в разработке методов иммуностимулирующей терапии и профилактики заболеваний молодняка является использование производных бактерий и продуктов пчеловодства. Из бактериальных имуностимулирующих препаратов особое место принадлежит целым бактериальным клеткам (вакцина БЦЖ, Bordetella pertussis, Corinebacterium parvum), а также бактериальным полисахаридам из Bact. prodigiosum, Ps. aeruginosa, Salmonella. Бактериальные ли-пополисахариды являются очень сильными иммуностимулирующими препаратами, но обладают высокой токсичностью. Особенно это относится к ли-пополисахаридам, выделяемым из условно-патогенной микрофлоры. Хотя вышеуказанные липополисахариды и являются поликлопальиым активаторами B-системы лимфоцитов, но в период постиатальиого развития животных иммунная система имеет контакт с антигенами данных микроорганизмов и организм остается сенсибилизирован. Поэтому после применения данных липополисахаридов как для оценки состояния B-лимфоцитов в системе реакции бласттрансформации, лимфоцитов, так и для стимуляции иммунитета в системе in vitro, отмечается неадекватная реакция — увеличение процента бластов или резкое ухудшение состояния организма, протекающее по типу анафилактического шока (122, 129, 163, 229, 323). В этой связи для разработки иммуностимулирующих препаратов из бактерий желательно использовать только те, которые не имеют контакта с организмом теплокровных животных (152).

Наряду с бактериальными иммуностимуляторами в последние годы значительное внимание уделяется препаратам, изготовленных из продуктов пчеловодства. По имеющимся литературным данным, при использовании человеком и животными пыльцы, перги, прополиса стимулируется Т-система лимфоцитов, особенно субпопуляция Т-хелперов, фагоцитарная активность нейтрофилов, увеличивается активность гуморальных факторов иммунной защиты 89, 121, 127, 131)

В связи с вышеуказанным, использование бактериальных липополиса-харидов и производных продуктов пчеловодства способствует активизации Т- и В-лимфоцитов фагоцитоза, угнетение которых отмечается при инфекционном ринотрахеите, вирусной диарее, респираторно-сипцитиальной инфекции, разработка новых препаратов па их основе позволит снять иммупо-депрессивное состояние животных и в то же время ускорит выздоровление животных, больных пневмоэнтеритами.

Важное место в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при пневмоэпгеритах телят, вызванных ИРТ, ВД, ПГ-3, рота- и коронавиру-сами играет специфическая профилактика (пассивная и активная). Однако использование моновакцин в профилактике ассоциаций не всегда дает положительный эффект, т.к. антитела вырабатываются против одного возбудителя, а патологический процесс вызывается ассоциацией вирусов и бактерий. В этой связи заслуживает интерес использование для специфической профилактики ассоциаций вакцин против 2-3 инфекций, что позволит повысить эффективность вакцинных препаратов. При современном ведении животноводства, связанном с недостатком и несбалансированностью кормления, приводящим к угнетению иммунной системы, специфическая профилактика не всегда достигает нужного эффекта. При этом для снятия иммунодепрес-сивного эффекта стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью различных препаратов оправдана. В литературе имеется ряд сообщений об использовании иммуностимулирующих препаратов для стимуляции поствакцинального иммунитета при парагриппе-3, сальмонеллезе, сибирской язве (150, 282, 335). Для экстренной профилактики и терапии пневмоэнтери-тов телят широкое применение нашли сывороточные препараты, имеющие высокий титр антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций, в частности гипериммунные сыворотки, неспецифический иммуноглобулин, молозивный иммуноглобулин, сыворотка рекопвалесцептов ОРЗ (252, 424).

Таким образом в мировой науке и практике накоплен значительный опыт борьбы с вирусными респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями молодняка крупного рогатого скота, однако для условий Республики Беларусь и стран СНГ он не всегда приемлем.

В связи с вышеизложенным, изучение эпизоотической ситуации разработка новых технологий изготовления новых средств иммунологической профилактики вышеуказанных заболеваний на современном этапе является актуальной задачей ветеринарной науки и практики. Поэтому наши исследования были направлены на разработку и совершенствование существующих методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследований

Целыо настоящих исследований явилась разработка и совершенствование биотехнологических средств и методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций молодняка крупного рогатого скота.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Беларусь;

- изучить состояние иммунной системы и обменных процессов организма телят при пневмоэнтеритах и коров с заболеваниями репродуктивных органов;

- разработать иммуностимулирующие препараты на основе непатогенных для теплокровных животных бактерий и продуктов пчеловодства, отработать схемы их применения, изучить их влияние на иммунную систему и лечебно-профилактическую эффективность при вирусных респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях;

- разработать унифицированные технологии изготовления и применения моно- и ассоциированных живых и инактивированных культуральпых вирус-вакцин для профилактики инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота;

- разработать комплекс ветерипарпо-санитарпых мероприятий по профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят.

Научная новизна полученных результатов

Впервые в условиях Республики Беларусь изучены особенности эпизоотической ситуации по инфекционному ринотрахеиту, вирусной диарее, парагриппу-3, рота- и коронавирусной инфекциям в животноводческих хозяйствах. Впервые теоретически обоснованы и практически использованы технологии изготовления и применения новых иммуностимулирующих препаратов на основе бактериальных липополисахаридов и продуктов пчеловодства при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях крупного рогатого скота (Патенты Республики Беларусь № 2889 (1999 г.), 3913 (2001 г.), Республики Молдова № 889 (1998 г.), 890 (1998 г.), 891 (1998 г.). Установлено явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках, что приводит к биосинтезу вирусспеци-фических белков в бактериях (диплом па открытие № 291 от 18.10.2005 г.). Разработаны унифицированные технологии изготовления и применения moho- и ассоциированных живых и инактивированных вакцин для профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят (патенты Республики Беларусь № 5304 (2003 г.), 10696 (2008 г), 10697 (2008 г). Впервые изучено влияние на иммунную систему телят моно- и ассоциированных вакцин против респираторных заболеваний и предложены способы стимуляции иммунитета с помощью препаратов бактериального происхождения и препаратов из пчелиной перги. По результатам собственных исследований разработана научная концепция изготовления и применения вакцин и иммуностимуляторов в промышленном животноводстве, предусматривающая регламентированное их использование с учетом состояния иммунной системы организма. Разработана научная основа оптимизации вакци-нопрофилактики респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят. Результаты исследований позволяют дополнить и систематизировать научную теорию превентивного применения вакцин и иммуностимуляторов в промышленном животноводстве.

Практическая значимость и реализация результатов исследований

Результаты экспериментальных исследований обогащают современные знания по вопросам патогенеза, лечения и профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота, что позволяет с достаточно высокой точностью и эффективностью производить борьбу с данными заболеваниями. Изучена этиологическая структура возбудителей респираторных и желудочно-кишечных инфекций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, состояние иммунной системы и обмена веществ при дайной патологии у телят. Разработанные средства, способы и схемы применения иммуностимулирующих и вакцинных препаратов для профилактики и терапии респираторных заболеваний телят позволяют в значительно сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие телят. На основании проведенных исследований утвержнеа нормативная документация на 7 живых и инактивированных вакцин, 14 методических рекомендаций и указаний по совершенствованию ветринарно-сапитарных мероприятий при пневмоэнтеритах телят, получено 15 авторских свидетельств и патентов.

Применение указанных разработок! в условиях производства позволяет в 3-5 раз сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие молодняка крупного рогатого скота от вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

- результаты изучения распространения вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота в Республике Беларусь, позволяющие рационально осуществлять планирование противоэпи-зоотических мероприятий;

- состояние обмена веществ и иммунитета у телят при вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекциях;

- результаты разработки, апробации и внедрения иммупокорригирую-щих препаратов из продуктов пчеловодства, сапрофитных бактерий, тканей животных и препаратов серебра;

- результаты конструирования и внедрения мопо-, би-, трех- и четырехвалентных живых и ииактивированных вирус-вакцин для специфической профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота;

- результаты изучения закономерности иммунного ответа у телят после иммунизации их вакцинами при раздельном и комбинированном применении со стимуляцией поствакцинальиого иммунитета, позволяющие получать у животных напряженный иммунитет и снижать заболеваемость телят респираторными инфекциями.

Личный вклад соискателя

Исследования по разработке методов иммунологической профилактики и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций, отработке параметров изготовления иммуностимулирующих и вакцинных препаратов проводились лично соискателем. При выполнении комплексных разработок - иммуностимулирующих и вакцинных препаратов личный вклад соискателя составлял от 60 до 100%.

Апробация результатов диссертации Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены: на заседаниях и РУП «Институт эксперменталыюй ветеринарии им. С.Н.Вышелесского (1991-2008 гг.); Международных, Всесоюзных и Республиканских конференциях, симпозиумах и конгрессах:

Научной конференции «Болезни молодняка сельскохозяйственных животных и их профилактика па комплексах», Таллин: 1984; Научной конференции «Вопросы интенсификации и научно-обоснованного ветеринарного обслуживания промышленного животноводства» Кишинев, 1987; Всесоюзной научной конференции «Стресс и иммунитет», Ростов-на-Допу, 1989; Первом иммунологическом съезде Сочи, 1989; Научно-практической конференции «Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных» .Минск, 1990; Всесоюзной научно-технической конференции «Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине» Нижной-Новгород, 1990; Научной конференции «ЗшоЫктеБ уе1егтагуоБ ргоЫетоБ», Ка1з1ас1огу5, Литва, 1993; Научной конференции «Апитерапия и пчеловодство» (Вильнюс, 1993); Научно-практической конференции «Збережешсть молодняка с/г тварин -запорука розвитку тварииицтва Украши», Харыав, 1994; Научно-практической конференции «Бютехнолопя ветери-нарних препарат1в» Харьюв, 1993; Международной научной конференции «Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы», Харьков, 1995; Международной научной конференции «Иммунодиагностика и иммунотерапия» Витебск, 1995; Международной научио-практической конференции «Актуальные проблемы ветерииарной медицины», Смоленск, 1996; 5-й Научно- практической конференции по апитерапии "Пчелы и ваше здоровье" г.Сочи, 1996; Международном координационном совещании «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных» Воронеж, 1997; Международной научно-практической конференции «Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном производстве», Минск, 1997; Международной научно-практической конференции «Зооантропоиоз-ные болезни, меры профилактики и борьбы» Гродно, 1997; 6-й Научно-практической конференции по апитерапии "Пчелы и ваше здоровье" Рыбное, 1997; Международной научно-практической конференции «Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве», посвященной 100-летию сот дня рождения академиков АНБ Х.С.Горегляда и М.К.Юсковца, Минск, 1998; 1 итоговой научно-практической конференции БелНИИЭМ. Минск, 1998; Республиканской научно-практической конференции «Инфекция и иммунитет», посвященная 75-летию БелНИИЭМ, Минск, 1999; Учредительной конференции Международной ассоциации парази-тоценологов. Витебск, 1999; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных», посвященной 70-летию БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского, Минск, 2000; II Международной научно-практической конференции «Апитерапия сегодня - с биологической аптекой пчел в XXI век», Уфа, 2000; 1 Международной научно-практической конференции и пчеловодству и пчелотерапии «От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия» Минск, 2002; Научно-производственной конференции «Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство», Смоленск, 2002; Международной научно-практической конференции «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных», Минск, 2003; Шестом-Международном форуме по глобальной вакцинологии «Вакцины и иммунизация» Минск, 2003; Международной научно-практической конференции. «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства». Ялта, 2005; Simpozionul stiintific international consacrat jubileului de 50 ani de la fondarea Institutului de Zootehnie si Medicina Veterinara "Realizan si perspective in cresterea animalelor", Chisinau, 2006; III зЪд апггерапевапв Украши. Аштерашя: досягненпя та перспективи розвит-ку. Харюв, 2006.

Опубликованность результатов.

По теме диссертации опубликовано 105 научных работ, в том числе 7 монографий, 11 статей в изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации, 32 статьи в журналах и сборниках трудов СНГ, 39 статей и тезисов докладов в материалах конференций, 1 свидетельство на научное открытие, 15 патентов и авторских свидетельств, 14 рекомендаций.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 438 страницах машинописного текста и состоит из: введения, общей характеристики работы, обзора литературы по теме и выбора направления исследований, изложения общей методики и основных методов исследований, 8 глав собственных исследований, анализа и обобщения результатов исследований, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 467 наименование работ отечественных и зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 115 таблицами, 42 фотографиями и рисунками. В приложении на 82 страницах, приводятся документы, подтверждающих результаты отдельных работ, их научную и практическую значимость.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Красочко, Петр Альбинович

ВЫВОДЫ

1. Основными причинами возникновении респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скога в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь являются предрасполагающие факторы (иммунодефицитное состояние организма новорожденных телят, наличие стрессовых ситуаций, влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды, нарушение технологии содержания и кормления животных, генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров) и сопутствующие факторы (возбудители респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят вирусной и бактериальной этиологии, способность вирусов инфекциоипого ринограхеита, диареи, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с дальнейшей его иммунотолерантностыо и вирусоносительством).

2. В этиологической структуре вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в Республике Беларусь основной удельный вес занимают вирусы инфекционного рипотрахеита - 67,6% у коров и 65,8% у телят переболевших пневмоэнтеритами, 68,8% у клинически здоровых телят старше 6 мес.; диареи соответственно 86,6, 84,1 и 88,9%; парагриппа-3 - 55,9, 71,5, 59,6%. При инфекционных энтеритах антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8%) переболевших телят, к ротавирусу - 90,9%о, короиавирусу - 80,6%. У больных энтеритами телят установлено наличие антигенов ротавируса - 67,4% (от обследованных), коронавируса - 33,7%, вируса диареи - 35,1%.

3. У больных и переболевших пневмоэнтеритами телят отмечается угнетение Т-лимфоцитов (в 1,2 раза), В-лимфоцитов (в 1,28 раза), фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 раза фагоцитарное число и 1,56 раза - фагоцитарный индекс); в 2,7 раза снижается количество лизоцима; в 1,3 раза бактерицидная активность сыворотки крови; в 1,6 раза титр интерферона; в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов; в 1,2-2,2 раза конценрарция низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты); активность аспартатамииотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших); аланинамипотрансфсрразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатининкиназы в 4,6 и 1,8 раза превышало уровень здоровых животных, но отмечается снижение активности амилазы в 1,05 и 1,16 раз; щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза; холипэстеразы в 1,28 и 1,05 раза, что указывает на системный процесс.

4. Разработанные иммуностимулирующие препараты: препарат из пчелиной перги "Лпистимулин-А", воздействующий па Т-систему лимфоцитов; бактериальный липополисахарид из Bac.alvei (КМИЭВ-11), влияющий на В-систему способствуют активизации угнетенных звеньев иммунитета и обмена веществ при респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях телят.

5. При конструировании живых и инактивированных мопо- и ассоциированных вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коропавирусной инфекций выделены и селекционированы производственные штаммы вирусов крупного рогатого скота: ИРТ - КМИЭВ-6; диареи - КМИЭВ-7; парагриппа-3 - КМИЭВ-8; ротавируса - КМИЭВ-3; коронавируса - КМИЭВ-1, которые наиболее активны в антигенном отношении и по своим генетическим характеристикам не отличаются от референтных штаммов. Оптимальным является раздельное культивирование вирусов в роллерных установках на перевиваемых культурах клеток МДБК или СПЭВ с использованием 5%-ного гемогидролизата в качестве ростовой (с сывороткой) и поддерживающей питательной среды, что позволяет достигнуть инфекционного титра вышеуказанных вирусов до 6,5 - 8,0 lg ТЦД 50/мл,. Для инактивации вируса использован теотропип в 0,2% концентрации, в качестве адъюванта -эмульсиген или суспензия активированной целлюлозы.

6. Введение живых и инактивированных моно- и ассоциированных вакцин крупному рогатому скоту приводит к биосинтезу противовирусных антител (до 5,5 - 7,0 log2), активизации клеточного и гуморального иммунитета, основных показателей обмена веществ. Профилактическая эффективность вакцин в производственных условиях составляет от 88,2 до 97,5%.

7. Вирусы нфекционного ринотрахеита и диареи, способны проникать в бактериальную клетку, участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вируснейтрализующие антитела у лабораторных животных в титрах от 3,0+0,2 log2 до 3,5+0,3 log2. Препарат, изготовленный па основе Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Вас. subtilis (КМИЭВ-39) приводит к выработке у телят антител к вирусам ИРТ и ВД в титрах 7,8-8,0 log2 (ИРТ) и 7-7,5 log2 (ВД) в РИГА. Профилактическая эффективность препарата составила в среднем 70%; заболеваемость животных не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%.

8. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета иммуностимуляторами природного происхождения способствовала усилению специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета — Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток, что свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа.

9. Научно-обоснованные подходы к профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций у телят, включающие комплекс организационно-хозяйственных, технологических, ветеринарно-санитарных и терапевтических мероприятий с использованием иммуностимуляторов, живых и инактивированных вакцин, позволяют в животноводческих хозяйствах снизить заболеваемость в 2-3 раза и в 1,5-2 раза - отход телят по причине инфекционных пневмоэнтеритов.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Проведенные исследования позволяют рекомендовать производству следующие нормативные документы:

1. Вирусвакцина живая культуральная против инфекционного рипотрахеита крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.223-97;

2. Вирусвакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.224-97;

3. Вирусвакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ 00028493.225-97;

4.Бивалентная живая культуральная вирусвакцина против инфекционного рипотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота; ТУ РБ 00750971.006-98;

5. Вирусвакцина трехвалентная живая культуральная против инфекционного рипотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ 600049353.033-2002;

6. Поливалентная инактивированпая культуральная вирус-вакцина против инфекционного рипотрахеита, вирусной диареи, рота- и коропавируспой инфекции крупного рогатого скота «Тетравак», ТУ ВУ 600049853. 099-2007;

7 Ассоциированная вакцина против рота- и коропавируспой инфекций новорожденных телят, ТУ ВУ 600049853. 093 - 2008;

8. Рекомендации по диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний телят — утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 24.07.1991 г.

9. Методические рекомендации по диагностике и профилактике инфекционных заболеваний молодняка крупного рогатого скота — рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1

10. Методические рекомендации по оценке функциональной активности В-лимфоцитов сельскохозяйственных животных /Утверждены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991. Москва, 1991, 11 с.

11. Использование протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота. Рекомендации, рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1

12. Методические рекомендации по комплексной профилактике и терапии ппевмоэитеритов телят - рассмотрены и утверждены отделом ветеринарии управления сельского хозяйства Смоленской области 6 апреля

1994 г.

13. Методические рекомендации по иммунологической диагностике, профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят вирусно-бактериальной этиологии — рассмотрены и одобрены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 29 декабря 1996 г., протокол № 4

14. Методические указания по профилактике и мерам борьбы с рота- и коронавирусой инфекцией телят (Утверждены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол №1 от 27.01.1998);

15. Методические рекомендации по профилактике, лечению и мерам борьбы с пневмоэнтеритами телят (Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.);

16. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике респираторных и желудочно-кишечных заболеваний телят вирусной и бактериальной этиологии (Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.);

17. Ветеринарно-санитарные требования для племенных животноводческих хозяйств (ферм) Республики (Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 9 августа 2002 г., протокол № 2);

18. Ветеринарно-санитарные требования для элеверов и госплемпредприятий Республики Беларусь Утверждены (НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г., протокол № 3);

19. Ветеринарно-санитарные требования для племенных заводов Республики Беларусь, поставляющих ремонтных бычков на элеверы (Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г., протокол № 3);

20. Методические указания по эпизоотологическому обследованию животноводческих предприятий (Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.)

21. Методические рекомендации по профилактике пневмоэнтеритов телят технологическими методами (Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.)

22. Экологические методы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят (методические указания) (Утверждены председателем Комитета Правительства Республики Дагестан по ветеринарии Российской Федерации 07.02.2006 г.)

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Красочко, Петр Альбинович, Москва

1. Аавер Э.Я., Фомин Ю.В., Кумар Ю. К эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в Эстонской ССР //Тез. докл. Всес. межвуз. научи, конф. по вет. вирусологии. М.:, 1973.— С. 41-43.

2. A.C. № 1092778 СССР, МКИ А 61 К 39/28. Ассоциированная вакцина "Бивак" против ИРТ и ПГ-3 крупного рогатого скота, способ ее изготовления и способ профилактики ИРТ и ПГ-3 //Ковалев H.A., Музычии С.И., Сухарев О.И. и др.—№ 3523289, заявлено 17.12.82.

3. A.C. № 926813 СССР. Ассоциированная вакцина против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита и способ профилактики парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита / Крюков H.H., Зудилина З.Ф., Вечеркип A.C.: от 7 января 1982.— 7 с.

4. Адреева A.B. Влияиие сочетапного применения иммуностимуляторов на показатели бактерицидной, лизацимной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности лейкацитов // Ветеринарная патология. -2003. -№3.- С. 35 -36.

5. Акимов Р.К. Аэрозоли иммуномодуляторов в комплексной терапии и профилактике бронхопневмонии ягнят: автореф. дисс. . канд. вет. паук: 16.00.01 / Витебский вет. институт. Витебск, 1987. - 18 с.

6. Альберт Сассон. Биотехнология: Свершения и надежды.: — М.: Мир, 1987. С. 6-79.

7. Андреев Е.В. Диагностика и профилактика вирусиых респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах по производству говядины //Пути обеспечения ветеринарного благополучия в промышленном животноводстве. — Киев:— 1978.— С.34-42.

8. Андреев Е.В. Средства и способы пассивной иммунизации телят в хозяйствах по производству говядины //Проблемы ветеринарной иммупологии.—М.: Агропромиздаг, 1985.— С. 135-138.

9. Андреев Е.В., Драгомир A.B. Острые респираторные заболевания крупного рогатого скота.— Кишинев: Картя-Малдовепяскэ, 1979.— 194 с.

10. Андреев Е.В., Дудник О.Д. Выделение цитопатогенных агентов из спермы быков-производителей //Сб. Ветеринария.— 1977.— Киев:— В. 45.—С. 3-5.

11. Апатенко В.М. Достижения ветеринарной паразитоцеполопш и основные направления ее развития //Паразитоцепозы и ассоциативные болезни,—М.: Колос, 1984.— С.56-69.

12. Апатенко В.М. Смешанные вирусные инфекции сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай, 1978.- 120 с.

13. Апитерапия сегодня. Бухарест: Апимондия, 1986.— 88 с

14. Ариоп В.Я. Выделение, физико-химические свойства и биологическая активность Т-активина //Итоги науки и техники. Серия: Иммунология.— М., 1982.— Т. 10.— С.45-63

15. Ариоп В.Я. Иммуиологически активные факторы тимуса //Итоги науки и техники. Серия: Иммунология.— М., 1981.— Т.9.— С. 10-50.

16. Атамась В.А., Андреев В.Е., Чечеткипа Н.Т. Респираторные болезни сельскохозяйственных животных.— К.: Урожай, 1986.— 184 с.

17. Афошошкин В.Н., Юрик С.А.; Семенихин В.И. Исследование клинически здоровых животных, серопозитивных к вирусу ВД-БС. // Ветеринария, 2004; N 1. -С. 12-13

18. Ашмарип И.П., Васильев H.H., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов Ленинград: Изд-во Ленипгр. ун-та, 1974. - 76 с.

19. Баев A.A. Биотехнология.—М.: Наука, 1984. С. 188-257.

20. Баева Е.В. Функции иммунной системы при стрессовых воздействиях в раннем постнатальном онтогенезе: Автореф. дисс. доктора биолог, наук: 14.00.16 /НИИ эксп. медицины.— Ленинград, 1991.— 34 с.

21. Бакулов И.А., Юрков Г.Г. Особенности распространения вирусных болезней животных в современных условиях и их профилактировапие //Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии.— Казань: 1980.— С.4-5.

22. Басова, НЛО. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. . доктора вет. паук: 16.00.03. Краснодар, 2002. - 42 с.

23. Безбородкин Н.С. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий. Витебск, 2000. — 13 с.

24. Беккер М.Е. Введение в биотехнологию.— М.: Пищевая промышленность, 1978.- С. 45-104.

25. Белкина Н.М. Изучение некоторых биологических свойств вирусов группы герпеса: Автореф. дисс. канд. вет. наук: 16.00.03 /ВИЭВ.— М.: 1974.—20 с.

26. Белов А.Д., Рогожкип Л.В. Оценка влияния Т-активина на некоторые показатели крупного рогатого скота //Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве. Матер. Всесоюзной научп. конф.— М.: 1992.— С.31.

27. Белова Н.В. Эффективность ассоциированной вакцины против рота-карона-ВД-БС-вирусов крупного рогатого скота // Ветеринария. 2005. -№4.-С. 18-20.35,36