Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа

Вершняк, Татьяна Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа"

На правах рукописи

ВБРШНЯК ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

УСЛОВНО-ПАТОГЕННАЯ МИКРОФЛОРА В ПТИЦЕХОЗЯЙСТВАХ И ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗА ПТИЦ НА ОСНОВЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

03.00.23. - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ЩЕЛКОВО - 2003

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (ВНИТИБП).

Научный руководитель

доктор биологических наук Кузнецова C.B.

Научный консультант доктор ветеринарных наук, академик РАСХН, профессор,

лауреат Государственной премии Самуйленко А.Я.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Белоусов В.И.

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАЕН, доктор ветеринарных

наук, профессор ' Бурлаков В.А.

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Защита состоится «о//» октября 2003г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д 006.069.01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности РАСХН (141142, Московская обл., Щелковский район, пос. Биокомбинат, п/о Кашинцево, ВНИТИБП).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ВНИТИБП.

Автореферат разослан «£&?» сентября 2003г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Фролов Ю.Д.

"1W

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Актуальность темы. В связи с ухудшением экологической ситуации и ряда других причин в последнее время наблюдается снижение уровня природной резистентности организма птицы. Следствием этого является развитие бактериальных инфекций, обусловленных условно-патогенной микрофлорой.

В настоящее время птицеводческие хозяйства наибольшие убытки несут от следующих инфекций: колибактериоз, сальмонеллез, респираторный микоплазмоз и различных вирусов [Собко А.И.,1995, Фотина Т.Н.,' 2002]. Большой экономический ущерб наносят и болезни, вызванные условно-патогенной микрофлорой такой, как Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Yersinia, Serratia, Hafnia, Pseudomonas и некоторыми другими микроорганизмами [Киприч В.В., Трускова Т.Ю., 2000]. В большей степени отмечается смешанное течение инфекции, вызванное двумя и больше возбудителями. Смешанные инфекции трудно диагностируются и наносят значительный экономический ущерб хозяйствам [Клецов Н.А., 1993]. Наггу Е.Н. (1994), Волошин В.Г. (1998) доказали, что наибольший убыток наносят болезни, вызванные условно-патогенными микробами, которые при многократном пассировании через организм повышают свою вирулентность. При снижении естественной резистентности организма особую опасность несут эшерихии [Зон Г.А., Котина Т.И., 1990]. Опытами установлено, что в 78,9% случаев эшерихиоз проходит в смешанной форме с участием двух и более возбудителей, например эшерихиоз и стрептококкоз, эшерихиоз и стафилококкоз, эшерихиоз и псевдомоноз, эшерихиоз и микоплазмоз, эшерихиоз и клебсиеллез и другие вариации [Байдевлятов А.Б., 1995, Фотина Т.И., 1999].

К настоящему времени точно не установлено, в какой ассоциации чаще протекает эшерихиоз; не разработаны рациональные схемы бактериологического исследования патологического материала и средства

эффективной профилактики и лечения этих ассоциаци

Быстрый и точный диагноз инфекционных болезней является решающим условием организации необходимых мер борьбы с ними. Хотя традиционные методы лабораторной диагностики достаточно специфичны и чувствительны, они часто трудоёмки, сложны, а иногда и недоступны для некоторых лабораторий. В последние годы разработаны новые простые и быстрые методы диагностики инфекций. Ускоренные методы постановки диагноза обладают рядом преимуществ по сравнению с традиционными методами серологической диагностики. Быстрота и простота проведения тестов делают их удобными для исследования динамики инфекции в очагах заболевания, а полученная информация может служить ориентиром для принятия соответствующих мёр по предупреждению инфекций и их распространению [Белая Ю.А.,1994, Богомаз В.М., Дынник О.Б., 2001].

Большинство исследователей считают, что диагностику эшерихиоза .животных и птиц нельзя основывать только по клиническому проявлению болезни, так как инфекционный процесс при эшерихиозе может протекать у одних латентно, в форме скрытого носительства, а у других клинические признаки не являются характерными только для данной болезни [Анапенко . В.М.,1991, Бусол В.А.,1995]. Поэтому при диагностике эшерихиоза рекомендуют использовать бактериологические и серологические методы лабораторных исследований.

Таким образом, создание тест-систем для ускоренной диагностики эшерихиоза на сегодняшний день является важной и актуальной задачей.

1.2.Целью настоящей работы являлось изучение эпизоотической ситуации относительно эшерихиоза птиц в птицехозяйствах, выделение условно-патогенной микрофлоры и определение её чувствительности к антибиотикам, разработка диагностики на основе сконструированной тест-системы иммуноферментного анализа (ИФА) и изучение его диагностической эффективности.

Для достижения цели решались следующие задачи:

I ' • ' ' ¡и:^» ■ ■ •

•Ч'.щ лы _ ■ ,1

12.1. Провести анализ изолятов условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах.

1.2.2. Осуществить микробиологический мониторинг при выводе цыплят и динамику накопления условно-патогенной микрофлоры в воздухе выводных инкубаторов.

1.2.3. Определить антибиотико-резистентность патогенных для птицы микроорганизмов.

1.2.4. Разработать тест-систему на основе иммуноферментного анализа для диагностики эшерихиоза птиц.

1.2.4.1. Охарактеризовать антигенную структуру E.coli различных сероваров.

1.2.4.2. Выделить термостабильный энтеротоксин E.coli и испытать его в качестве антигена при постановке ИФА.

1.2.4.3. Отработать оптимальные условия постановки ИФА при исследовании антиэшерихиозных сывороток.

1.2.5. Испытать разработанную тест-систему ИФА при исследовании анти-эшерихиозных сывороток.

1.3.Научная новизна. Осуществлен анализ изолятов условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах разной технологической направленности. Показана тенденция роста инфицирования птицы E.coli, а также малоизученными патогенами: Ps. aeruginosa, KI. pneumonia и др.

В процессе работы был изучен мониторинг при выводе цыплят, выявлена корреляция между увеличением процента вывода цыплят и количеством микрофлоры в выводных инкубаторах.

.. Впервые в РФ разработана тест-система ИФА для диагностики эшерихиоза на основе энтеротоксина E.coli.

1.4.Практическое значение полученных результатов. Проведен анализ условно-патогенной микрофлоры, которая может предопределять патологию смешанных инфекций в птицехозяйствах.

Мониторинг вывода цыплят показал, что заболеваемость птицы вызывается одними и теми же ассоциациями. Рекомендуется использовать с целью оценки и прогноза эпизоотической ситуации относительно бактериальных заболеваний птицы.

Определена антибиотико-резистентность патогенных для птицы микроорганизмов.

Разработана тест-система ИФА, предназначенная для диагностики эшерихиоза птиц при смешанных инфекциях.

Создан "Набор для выявления антиэшерихиозных антител в сыворотках птиц методом иммуноферментного анализа "КАЭ - С". Материалы работы использованы при составлении нормативной документации (НД).

1.5. На защиту выносятся:

1.5 Л .Результаты анализа выделения условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах.

1.5.2.Результаты изучения мониторинга при выводе цыплят и динамики накопления условно-патогенной микрофлоры в воздухе выводных шкафов инкубаторов.

1.5.3.Результаты определения антибиотико-резистентности патогенных для птицы микроорганизмов.

1.5.4. Результаты разработки и испытания тест-системы на основе ИФА для диагностики эшерихиоза птиц.,

1.6.Апробация раболпы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Учёного Совета и Методической комиссии ВНИТИБП (2000-2003гт.), на ежегодных научных конференциях СНАУ (19972000гг.), первой межвузовской научной конференции молодых учёных и аспирантов «Инфекционная патология молодняка с/х животных и птицы» (г.Сумы, 1999г.), международной конференции молодых учёных «Состояние и перспективы развития ветеринарной науки» (г.Харьков, 1999г.), международной научно-практической конференции «Прогрессивные технологии ветеринарной медицины в промышленном птицеводстве XXI века» (НАУ, г.Киев,2000г.), международной

конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (г.Симферополь, 2002г.) международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» (ВНИТИБП, г.Щёлково, 2003г.), Междунар. научю-пракгич. конференции "Современные вопросы патологии с.-х. животных"(ВИЭВ, Минск, 2003г.), Всерос. науч.-практич. конференции "Актуальные проблемы микробиологической безопасности РФ" (г.Киров , 2003г.), И Всерос. науч.-практич. конференции "Научно-технический прогресс в животноводстве России -ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства" (Московская обл., ВИЖ, 2003г.).

1.7.Публикации работ. По теме диссетации опубликовано 10 печатных работ.

1.8.0бъем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения (4стр.), обзора литературы (32стр.), собственных исследований (51стр.), обсуждения (5стр.) и выводов (2 стр.). Список использованной литературы включает 227 отечественных и 79 работ зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 15. таблицами и 11 рисунками. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их практическую значимость.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Эпизоотологические исследования включали изучение источников возбудителей инфекции, механизма передачи и развития патогенных микроорганизмов в организме цыплят в условиях групповой профилактики бактериальных инфекций, степень распространения, динамику гибели и значение факторов передачи инфекций

2.1.2. Объектами исследований были эмбрионы и цыплята породы леггорн, кросса "Беларусь-9" от одно- до 60-дневного возраста, которые содержались в типичных условиях птицехозяйсгв.

2.1.3. Выделение микроорганизмов из патматериала, изучение их культурально-морфологических, биохимических и патогенных свойств проводили по стандартным методикам. Выделение энпгеропатогенных культур эшерихий проводили путем высева материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, и другие простые и элективные питательные среды) и инкубировали 24 часа при 37°С, пересевали на среды Эндо, МПА, МДБ, бульон Хоттингера, Кларка, Козера, Симмонса.

2.1.4. Идентификаиию выделенных культур осуществляли в соответствии с требованиями, изложенными в "Кратком определителе бактерий Берги" (1980). :

2.1.5. Морфологические свойства выделенных культур изучали в мазках, окрашенных по Граму, подвижность определяли в полужидком агаре (0,250,3% концентрации). Изучение культуральных и биохимических свойств проводили, используя питательные среды с углеводами и многоатомными спиртами, которые содержат индикатор Андреде, такие как среда Кларка, Олькельницького, цитратно-амонийная среда, среда с мочевиной, среда Христинсена. Типичные культуры исследовали с агглютинирующими комплексными сыворотками. Культуры, у которых были положительные реакции, в дальнейшем исследовали с монорецепторными агглютинирующими сыворотками. Серологическую типизацию культур эшерихий осуществляли с целью установления энзоотичных сероваров.

21.6 Антигены В качестве исходного эшерихиозного антигена использовали суспензии, микробных клеток Escherichia coli (серовариант 078), полученные из 2-х - суточных культур, выращенных на агаре Хоттингера при +37°С и инактивированных при +56°С в течение 24 часов, дважды отмытых от среды забуференным физиологическим раствором (ЗФР) с последующим центрифугированием при 4000 об/мин., 15 мин.

, Суспензии эшерихиозных антигенов для ИФА готовили в ЗФР (рН 7,3)

путем доведения оптической плотности (ОП) от 0,1 до 0,5 о.е. мутности на

фотоэлектроколориметре (КФК-2-УХЛ-4.2) при длине волны 540 нм. /

•Выделение 1токсина из культурапьной жидкости. ^Инокулировали 2мл стерильного бульо'на'Е.соТ!, выделенной после тестирования. Инокулированную культуру энергично встряхивали при 37°С в течение Т8-24ч. Это обеспечивало достаточный рост культуры (минимум ОП540 в кювете ?см) 6т 0.5 до' 1.0 о.ё. мутности при 10-кратном ' разведении." После ' инкубации проводили цёнтрифугированиё при 900§ в течение 30 минут при 4°С "и использовали надосадок после фильтрации" (фильтр 0.2-0.45цш) с низким "белок-связЫйаюйшм свойством в качестве образца. 1 "' л " ' " 1

2.1.7. Определение '' активности ' коньюгатов ' А'анпШвидовых иммуноглобулинов (анти-1рО-кур )фермент'ом пероксидазои хрена (ПХ). Рабочее разведение полученного конъюгата определялил титрованием ~ с '

;-. -.•-г - -Гд,-; ^ "

гомологичным (1§С-кур) и гетерологйчным (^-кролика) иммуноглобулинами, адсорбированными в лун'ках-полистироловых планшет. -'--■'За рабочее разведение конъюгата принимали такое разведение,1 при котором ОГЦй в реакции с положительным антигеном составляла'12 -1.4, с страдательным - 0.02 -"0.05 о.е.'" уг-,т:' - ......л

2.1.8. Постановка непрямого'метода ИФА для диагностики эшерихиоза. Для отработки условий Постановки ИФА опыты проводили" по следующей схеме: в качестве твердофазного но'сйтёля С использовали 96-луночныё' пслксткройовые плашки (Ьупа1есН,*США).' Дач сшсибилчдации иммунологических плашёк в лунки'вносили суспёнзии клеток^ЕзсЬепсЫа'сой различных "¿ёроваров (02;*Ъ#; '078) разведенньйс до'рабочей кйцен^зации, в объеме 0,1 мл."Условия адсорбции антигенов были подобраны в опытах. Не связавшийся с поверхностью полистирола антиген отмывали 3-х кратно ЗФРТ.

За положительную реакцию "йрйтимали значения ЁД ЙФА не менее 200

(№&А+2о). '.....^ : ' ^ "-И." • -

2.1.9. ПолиакриламиЬныи гелъэлекЛРофсфез (ТГААГЭ) с 'дбдеийл сульфатом натрии ШФЛ: Электрофорез в полиакрйлкмидном геле (ПААГ), содержащем 0,1 % ДСН, приводили по методу ЬаепнпВ и.К. (19^0)'в вертикальной' камере 8Ё40Ь

Г"» г с »' •* * • • Ч'П'" , - * , 1 » ^ , 4 )|| '

фирмы "НоеГеГ !5аепййс" {пзйгпйепй" (США).' Молекулярного "массу белков

определяли путем сравнения со смесью молекулярных маркеров, подвергнутых гидролизу как и опытные образцы фирмы "Merck" (мол. массы от 12 до 78 кД).

2.1.10. Иммуиоблот-аналю. Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану после разделения в геле проводили на аппарате "Semi-phor ТЕ-70" в "Товбин буфере" при постоянном токе 100 мА в течение часа. После переноса мембраны промывали в буфере для блота и оставляли в нем на забивку на 20 минут. Затем мембраны погружали в раствор сыворотки в рабочем разведении в том же буфере. Результат реакции учитывали по появлению полос коричневого цвета, соответствующих местоположению разделенных белков.

2.1.11. Результаты исследований обрабатывали статистически по таблииам Фишера и Стьюдента.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Анализ изоляции условно-патогенной микрофлоры в птииехозяйствах разного технологического направления. Обследовали 11 птицехозяйств, в которых содержатся цыплята. Проведен анализ изоляции условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах разного технологического направления (хозяйства по производству яиц, племенные, бройлерные). При этом наибольший процент изоляции условно-патогенной микрофлоры приходится на хозяйства по производству яиц - 58%.

При проведении бактериологических исследований установили постоянное наличие эшерихий и, в значительно меньшей степени, таких возбудителей как синегнойная палочка, клебсиелла, сальмонелла. В племенных хозяйствах чаще всего обнаруживали кокковую микрофлору, в бройлерных -синегнойную палочку, протей, клебсиеллу.

В целом по всем хозяйствам наибольший вес имели эшерихии - 34%. Кокковой микрофлоры было выделено 20.6 %. В значительном количестве выделяли Ps. Aeruginosa, Salmonella spp.t Kl-pneumonia.

Во всех возрастных группах циркулирует аналогичная микрофлора. Так, из патматериала всех возрастных групп мы выделяли эшерихии: наибольшее количество • 63,4% в 61-150- дневном возрасте, несколько меньше от цыплят 1-

30-дневного и 31-60-дневного возраста - 50,8% и 38,1% соответственно. Кокковую микрофлору чаще всего выделяли от цыплят в возрасте 31 -60 дней -42,6%. В значительном количестве она была выделена и от цыплят 30-дневног о возраста - 34%. От птицы старше 150 дней чаще всего выделяли синегнойную палочку и клебсиеллы.

Таким образом, при эпизоотологическом обследовании птицехозяйств было установено, что в этих хозяйствах широко циркулирует условно-патогенная микрофлора, которая вызывает смешаннное течение эшерихиоза.

2.2.2. Мониторинг вывода цыплят. Нами был проведен мониторинг 20-ти выводов цыплят в пяти птицеводческих хозяйствах разного технологического направления (племенное, бройлерное, хозяйства по производству яиц). При этом было установлено, что в процессе вывода цыплят идет интенсивное накопление микрофлоры в воздухе выводного инкубатора. Так, общее количество микроорганизмов при выводе 30-40% цыплят в два раза больше, чем в начале вывода; при выводе 60% - в 10 раз, а при выводе 80% - в 12 раз. Такая же закономерность отмечена и в росте отдельных видов микроорганизмов. Так, количество эшерихий к концу вывода увеличивается в 8 раз, а стафилококков в 4 раза.

При идентификации микроорганизмов, изолированных из воздуха выводного инкубатора установлено, что они относятся к Staphylococcus aureus, Streptococcus, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus fumigatus, Salmonella, Enterobacter aglomerans, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia, Hafnia alvei, Citrobacter oiversus.

Поскольку вся микрофлора в воздухе выводного шкафа инкубатора выделяется при вылуплении цыпленка и, циркулируя в воздухе, попадает опять к нему аэрогенным путем, можно предположить, что в организме цыплят присутствует широкий спектр микроорганизмов. С этой целью мы провели исследование 495 трупов цыплят в возрасте 1-60 дней и установили наличие идентичных микроорганизмов.

Кроме того, нами были проведены исследования относительно изучения спектра микрофлоры птичников, где содержались цыплята. Было установлено, что микроорганизмы, выделенные из воздуха выводных инкубаторов, трупов цыплят, объектов внешней среды в большинстве случаев идентичны.

2.2.3. Культурально-морфологические и биохимические свойства выделенных культур возбудителей. Выделенные культуры были дифференцировань! и определены культурально-морфологические и биохимические свойства энтеробактерий. Изолированные культуры эшерихий представлены грамотрицательными палочками с округленными- концами. Отдельные серовары бактерий имели коккоподобную форму, были расположены отдельно или попарно. Большая часть культур была подвижная (93,4%). На МГТБ выделенные изоляты давали равномерное помутнение с образованием белого осадка, который легко разбивался при встряхивании. Ряд культур образовывали на поверхности МГТБ пленку (25,62%). На" МП А культуры формировали рост в виде округлых, серовато-белых колоний с гладкой блестящей поверхностью. На среде Эндо большинство изолятов образовывали ярко-красные с металлическим блеском колонии (72,76%).

В биохимическом отношении выделенные культуры были достаточно активные, сбраживали с образованием кислоты и газа или лишь кислоты, сахара и многоатомные спирты; 76,3% изолированных эшерихий обладали типичными биохимическими свойствами; 23,7% были атипичными, имели отклонение по одному или двум признакам.

Серологическую типизацию изолированных культур проводили с набором типичных агглютинирующих О-поли- и моновалентных колисывороток посредством РА. Так, установили, что изолированные из патматериалов эшерихии были отнесены к сероварам: 01, 02, 04, 08, 078, 0132. При исследовании культур, изолированных из воздушной среды, кроме вышеназванных, выделили серовар 0103.

Всего при проведении бактериологических исследований было изолировано 1600 культур энтеробактерий. Из них наибольшее количество культур идентифицировали как вид Exoli (34%).

2.2.4. Изучение патогенных свойств выделенных культур. При сравнительном изучении патогенных свойств культур микроорганизмов, изолированных из патматериала, воздушной среды птицеводческих объектов и смывов воздушных шкафов, получены, главным образом, идентичные результаты. по микробиологическому составу. При заражении 30-дневных цыплят, отмечали разную длительность инкубационного периода заболевания, что зависело от вида возбудителя.

Самый короткий инкубационный период (15-18 часов), установлен Opto заражении цыплят культурами эшерихий (серовары 02, 04, 08, 078), а также S. typhimurium. Больные цыплята были вялые, отказывались от корма, дыхание затрудненное, учащенное. Инфицированные цыплята погибали через 24 ^асЬ после заражения, а отход составлял 96-100%. Высокий процент гибели цыпля¥ (80-92%) вызывали также культуры S. pullorum-gallinarum, St. aureus.

Падёж цыплят при введении эшерихий (серовары: Ol, 0103), а также Str.haemolyticus, Ps. aeruginosa составила 68-72%. При изучений энтеротоксигенных свойств установили, что культуры сероваров 04, 08 й 078 имели выраженную энтеротоксигенность.

В наших опытах-куриные эмбрионы оказались более чувствительными к патогенным культурам возбудителей, чем цыплята. У погибших эмбрионов, зараженных эшерихиями, отмечали вираженньге отеки, кровоизлияние в аллантоисные оболочки, выраженную инъекцию сосудов желточного мешка, кровоизлияние в области головы, гиперемию селезенки, глинисто-желтый цвет печени.,

При инфицировании куриных эмбрионов культурами E.coli (серовары 08, 04, 078 и др.), S.typhimurium и другие - отмечали 100%-ю их летальность. При заражении эшерихиями (серовар 02), а также S. pullorum-gallinarum, St. aureus, Ps. aeruginosa - летальный исход составлял 90-94%; 72-84% куриных эмбрионов

погибали в результате инфицирования Str. haemolyticus, Asp. sumigatus, E.coli (серовар 0103). Следует отметить, что белые мыши были более чувствительными к заражению культурами E.coli, чем цыплята и развивающиеся куриные эмбрионы. При инфицировании белых мышей эшерихиями (серовары 08,04,078) была зарегистрирована 100%-ная гибель.

При инокуляции культур Asp.fumigatus, Str. haemolyticus, E.coli (серовары 02, 0103); Ps. aeruginosa - отход белых мышей составлял 84-96.

Культурально-морфологические, биохимические и серологические свойства культур энтеробактерий, выделенных от погибших и вынужденно убитых цыплят, белых мышей и куриных эмбрионов, позволили установить их идентичность с исходными культурами возбудителей, отобранными для экспериментального заражения.

В наших опытах патогенными были не только изоляты, выделенные от погибшей и больной птицы, но также изолированные из воздушной среды птицеводческих объектов и из смывов воздушных шкафов. В соответствии с полученными результатами можно сделать вывод, что инкубаторы являются резервуарами инфекций в птицеводческих хозяйствах, а воздушная среда птичников и инкубатора содействует аэрогенному инфицированию птицы и осеменению скорлупы инкубационных яиц. В хозяйстве возникает замкнутая эпизоотическая цепь, где циркулируют одинаковые серовары патогенных микроорганизмов и при снижении резистентности птицы, вызывают вспышки инфекционных заболеваний.

2.2.5. Определение антибиотико-резистентности патогенных для птииы микроорганизмов. При изучении антибиотико-резистентности изолированных нами эпизоотических, культур Ps aeruginosa, Е. coli, Kl.pneumonia отмечена их различная устойчивость к разным антибиотикам: мономицину, неомицину, стрептомицину, пенициллину, эритромицину, олеандомицину, тетрациклину, полимиксину-М, хлорамфениколу, стрептомицину, левомицетину, байтрилу. В 97% отмечали снижение чувствительности к препаратам, которые широко применялись в хозяйствах.

Отдельные культуры (31,4%) оказались резистентными к пенициллину, макролидам, олеандомицину, эритромицину. У незначительного количества культур (2%) была отмечена устойчивость к хлорамфениколу, тетрацикпинам, стрептомицинам.

• Наряду с этим у отдельных культур (15,3%) установлено повышение чувствительности к тетрациклину, полимиксину, что связано с длительным перерывом при использовании данных препаратов в хозяйствах. Опытные культуры микроорганизмов (E.coli, Kl.pneumonia, Ps aeruginosa) в большинстве случаев оказались малочуствительными и нечувствительными к неомицину, мономицину, стрептомицину, что, как видно, можно объяснить длительным применением этих препаратов в хозяйствах с лечебно-профилактической целью.

Возникновение штаммов патогенных микроорганизмов, стойких к антибиотикам, приводит к появлению атипичных форм течения заболеваний. Этот факт является тревожным сигналом и требует от ветеринарной науки и практики принятия мероприятий по уменьшению возможности возникновения и распространения антибиотикоустойчивых вариантов бактерий. Одним из этих мер является применение эффективных антимикробных препаратов, которые обладают бактерицидной активностью по отношению к патогенным микроорганизмам. В качестве таких препаратов в своих опытах мы использовали левомицетин и байтрил. Чувствительность опытных микроорганизмов к ним была 100%.

2.2.6. Применение комплексных пробиотиков в птииехозяйствах.

Для повышения сохранности и продуктивности животных и птицы используются различные биологически активные вещества, в том числе и пробиотики. Пробиотики относятся к группе кишечных стабилизаторов и их применение в профилактике болезней птиц бактериальной этиологии является перспективным.

Возрастные иммунодефициты у цыплят проявляются на 3-5,14-28 и 40-50 сутки жизни. Применение пробиотиков профилактирует возрастную иммунную

недостаточность, увеличивает местную защиту пищеварительного тракта, нормализует микрофлору, предохраняет от распространения патогенных бактерий, а также позволяет сократить применение противомикробных препаратов [Бондарь Л.О., 2000].

Учитывая данные микробиологического мониторинга вывода цыплят, значительный спектр условно-патогенной микрофлоры, выделяемой из воздуха выводных инкубаторов, обуславливающей существенный фактор риска заражения цыплят на выводе и повышенный падеж их в первые 7-10 дней выращивания, мы испытывали в качестве одного из возможных путей профилактики, применение комплексных пробиотиков: Кормо-токс, Биофлор, Био Плюс 2Б, Авигард.

Нами были изучены антагонистические свойства препаратов, эффективность при экспериментальном эшерихиозе, при определении которых в качестве тест-микробов произвольно были взяты патогенные культуры, выделенные из воздуха выводных инкубаторов: E.coli (2 культуры), Ps.aeruginosa (1 культура), St.aureus (2 культуры), St.albus (1 культура), S.enteritidis (1 культура), Klebsiela pneumonia (1 культура).

В результате исследований пробиотиков на микроорганизмы было установлено, что чувствительными к препаратам были все культуры.

Для дальнейших опытов препараты были испытаны при экспериментальном эшерихиозе. Опыты были поставлены на 120 цыплятах 7-дневного возраста. Цыплята были разделены на 4 группы по 30 голов, и каждая группа - на три подгруппы (по 10 голов в каждой). Цыплята двух подгрупп из каждой группы получали пробиотики (каждая группа -' разный) в течение месяца согласно схеме применения по каждому из препаратов. Цыплята контрольных подгрупп препараты не получали.

Цыплята опытных подгрупп (по одной в каждой группе) заражали культурой кишечной палочки в дозе LDioo одновременно с началом вскармливания пробиотиков, а еще 4-х подгрупп — по окончаний скармливания. В результате проведенных исследований было установлено, что процент

сохранности птицы в этих группах был на 27.5% выше, чем в контрольных группах.

Помимо показателя сохранности цыплят учитывали также влияние препаратов на прирост живой массы. До применения препаратов среднесуточный привес и живая мйсса цыплят опытных и контрольных групп существенно не отличались (использовались цыплята со средней живой массой 105г на начало опыта). Взвешивание цыплят'проводили в течение месяца один раз в три-четыре дня. После применения препаратов 7-суточным цыплятам среднесуточный привес в опытных группах в течение 30 суток наблюдения был больше на 5-6,5г, чем в контрольной группе цыплят.

Через 30 дней разница средней массы цыплят в подопытных и контрольных группах составила 150-195г.

В производственных условиях мы испытывали комплексный пробиотик Биофлор на цыплятах первых дней жизни для профилактики бактериальных болезней. Скармливание пробиотика Биофлор способствовало повышению сохранности цыплят на 1-1,5%.

2.2.7. Разработка тест-системы на основе метода ИФА для диагностики эшерихиоза птии

Предварительно в ИФА в качестве антигенов были испытаны суспензии инакгивированных нагреванием целых клеток различных сероваров патогенных для гггицы E.coli (02; 08; 04; 078) с ОП540 0,1 o.e.

Изучение серологической специфичности антигенов проводили, раститровывая на них гомологичные и гетерологичные гипериммунные сыворотки кур. В качестве контролей служили нормальные сыворотки кролика и кур. Анализ полученных данных позволил предложить в качестве антигена для ИФА клетки E.coli серовара 078, поскольку он выявлял антитела в сыворотках крови птиц ко всем исследованным сероварам эшерихий (02, 04; 08,078), Т.е. был типоспецифичным.

На первом этапе работы было проведено разделение ДСН-лизатов клеток в 15% ДСН-ПААГ с последующим окрашиванием гелей раствором Кумасси R-250 для сравнения белковых профилей штаммов Escherichia coli (078,08,02).

По данным электрофоретического анализа в ДСН-ПААГ лизаты различных сероваров эшерихий (078, 08, 02) содержали набор белков с молекулярными массами от 30 до 70 кД, доминирующими среди которых являлись белки с молекулярными массами 34,36,39,64 кД.

На следующем этапе было проведено изучение антигенной специфичности белковых профилей Escherichia coli в иммуноблотгинге после электрофоретического переноса с гелей на нигроцеллюлозную мембрану и взаимодействия с гомологичными и гетерологичными сыворотками. Специфичность иммунологических реакций проверяли с сыворотками кур против Escherichia coli.

В результате опытов было установлено, что при взаимодействии лизатов исследованных сероваров эшерихий с сыворотками кур картины белковых профилей характеризовались идентичностью доминирующих полос при реакции как с сыворотками, полученными на аналогичный серовар, так и с сыворотками, полученными против других сероваров эшерихий. Наиболее типичными для этих сероваров были белки с молекулярными массами 18,29,30,34,36,39,64,75 кД.

Гипериммунные сыворотки кур, полученные против различных сероваров эшерихий (078, 08, 02), показали наличие в иммуноблоте общих антител к белковым антигенам с молекулярными массами 17,27,36,39,54 кД.

Таким образом, проведенные нами эксперименты позволили использовать в качестве антигена при создании диагностической ИФА-сисгемы эшерихиоза серовар 078.

2.2.7.1. Термостабильный энтеротоксин E.coli в качестве антигена при проведении ИФА. Ускоренная диагностика острых кишечных диарейных инфекций может осуществляться без выделения чистых культур по обнаружению антигенов возбудителей и их токсинов или по уровню антисывороток на них. Известно, что большинство сероваров E.coli

продуцируют энтеротоксины. Эти энтеротоксигенные Exoli (ЭТКП) являются общей причиной диареи.

Проведено изучение специфичности профилей энтеротоксина E.coli в иммуноблотинге с гомологичными и гетерологичными сыворотками, гипериммунные сыворотки кур, полученные против сероваров 078, 08, 02 показали наличие общих антител к энтеротоксинам E.coli, что говорит об идентичности антигенов с молекулярными массами 14,22 и 29кД.

2.2.7.2. Подбор оптимальной концентрации антигенов для сенсибилизации плашек. В работе изучено влияние сенсибилизирующей концентрации инактивированных корпускулярных антигенов из штаммов E.coli, серовариантов 078, 04, 02, 08 на величину показателей ОГЦэд анш-эшерихиозных положительных сывороток при постановке твердофазного ИФА, осуществляемого в стандартном непрямом варианте. Для постановки ИФА. использовали разведения указанных ангигенов в ЗФР, рН 7,3 со следующими значениями оптической плотности суспензии (ОПио): 0,5; ОД; 0,1; 0,05 и 0,01 о.е. мутности. Далее вносили гипериммунную куриную анти-эшерихиозную (078) сыворотку, а также нормальные сыворотки кролика и кур в ЗФРТ. Рабочие разведения сывороток для отработки условий постановки ИФА были подобраны по предварительному титрованию сывороток.. После инкубации, с конъюгатом результаты реакции с субстратом (ОФД) учитывали по оптической плотности образовавшегося реакционного продукта, измеренной на приборе MicroELISA Auto Reader MR 580 (Dynatech, США) при длине волны 490 им. Реакцию останавливали после 15-ти минутной инкубации добавлением 50 мкп 0.5 М раствора H2SQ4.

Наиболее предпочтительной концентрацией эшерихиозного антигена для сенсибилизации полистироловой плашки явилась суспензия клеток с оптической плотностью (ОП«о) равной 0,1 о.е.

22.73. Подбор оптимального режима инкубации сывороток и конъюгатоа Для определения температурного режима инкубации сывороток и конъюгаггое на результаты ИФА использовали плашки, сенсибилизированные антигеном.

Положительные (анти-эшерихиозные)'и негативные сыворотки инкубировали Й антигенами при 37°С или при комнатной температуре (22-24вС) в течение 1 часа.

Оптимальным режимом связывания антител с иммобилизованным на плашке антигбном является 1 час при комнатной температуре. ' ' "

2.2.Т.4. Срок -хранения плашек, сенсибилизированных антигенами. Для определения - •' влияния *" Продолжительности хранения ' ' плашек, сенсибилизированнь1х эшерихйозным антигеном, в опыте были проверены плашки, хранившиеся после нанесения на нйх антигенов приЧ°С:'

Как 'пЬказали опыты, допустимо хранение иммунологических - плашек,' сенсибилиз»фованных антигенами, втечение'ТО'месяцев Притгемперагуре'4°С (фьк наблюдения).' За это время чувствите№н0сть1гест-системь1 не снижалась. ' ' 2.2-.8.^Проверка чувствительности и с)4Ыи<$чгюстй разработанной ИФА тест-сиспКмы'- ' - - - ' '

2.2.8.1. Исследование гетерологичнЬх сывороток в предлагаемой ИФА твсг-сист^ме: При исследовании специфичности "подобранного антиген^ в отработанной тест-системе ИФА было Проверено 117 гйерологичных сывдроток," полученных ий различных пгицехозяйсгв: 19 О- комплексных ^ггглкл-иниругощих сальмонеллезных сывороток; 23 микобактериальные сыворЬТки; 34 кампилобактериозйые* сьйоротки; 41 пастереллезнйя сьшЬротка! В качестве контроля' - йспользовали анти-зшерихисзную сыворотку и сыворотки Й* здоровых ЙГГИЦ. - 4 ' " - -" ■ •'

• В результате была установлена высокая" '¿певдфичность дМгой диагностической тест-системы ИФА! - -ПоложиТеяьяьйёрезультатов йрй испытаний антисывороток к Другим бактериям в разведений Т: 1 Об (минимальное разведение) и выше обнаружено не было. л-

2.-2.8.2. Исследование гипериммунных' сывороток. "Специфичность и чувствительность предложённого способа идентификации хьшороток оценивали путем сравнения ЕД ИФА гипериммунных куриных' сывороток;' полученных к различным серов&риантам Е.соП 08, 02, 04, 078, С)#6,0132; Нормальных кроличьих и куриных сывороток Сыворотку вносили в 'луйки планшеты в разведении 1:400 в-ЗФРТ, полученные результаты свидетельствуют 6 том, что

средние значения ЕД ИФА положительной анги-эшерихиозных сывороток были положительными (>200) на гомологичных антигенах и отрицательными (<150) на гетеролопичных.

2.2.8.3. Сравнение специфичности и чувствительности различных тест-систем ИФА для диагностики эшерихиоза. Полистироловые планшеты сенсибилизировали антигенами двух типов:

1. инактивированным корпускулярным эшерихиозным антигеном из штамма E.coli сероварианта 078;

2. энтеротоксином, полученным из культуральной ростовой среды E.coli. Сенсибилизацию полистироловых планшет (12,5-25,0 мкг/мл) проводили в течение 16 ч при 4°С. После инкубации планшеты тщательно отмывали ЗФРТ.

Для сравнения использовали планшеты из коммерческой тест-системы DAKO (Дания), сенсибилизированные ЛПС E.coli 078 и тест-системы Oxoid (Англия), сенсибилизированные термостабильным энтеротоксином.

Для сопоставимости результатов сыворотки были протестированы по методике, предлагаемой в тест-системе DAKO E.coli 078 ELISA (Дания) и "Oxoid" (Лондон): сыворотки исследовали в трех повторностях в одном разведении 1: 400, инкубировали с антигеном 2 часа при комнатной температуре и с коньюгатом 1 час, инкубация с субстратом 15 минут.

Предложенный способ является более чувствительным и специфичным, поскольку все исследованные гипериммунные сыворотки кур, полученные к различным серовариантам эшерихий, дают на корпускулярном эшерихиозном антигене из штамма E.coli сероварианта 078 положительные результаты (ЕД ИФА > 200). Применяя энтеротоксин, получетный нами и тест-системы Oxoid, были получены идентичные результаты. Показатели ОП490 в тест-системе DAKO были в 1,5 - 2 раза ниже, чем в системе Oxoid и предлагаемой нами.

22.8.4. Сравнительная оценка различных серологических методов для диагностики эшерихиоза Методом ИФА было исследовано более трёхсот сывороток шщ. полученных из различных гггицехозяйста, и определены благополучные и

неблагополучные птицехозяйства. Из исследованных сывороток произвольно взяли 107 с установленным тигром в ИФА и исследовали в реакции непрямой гемагтлютинации.

Сравнительные исследования 107 сывороток кур в ИФА и РИГА показали, что 28 сывороток, отрицательных в РИГА (т.е.26,2%) были положительны в ИФА, 79 образцов, которые имели в РНГА титр антител 1:4 и выше, имели в ИФА значение ОГЦэд (при разведении сывороток 1:400) выше 0,200 ЕД ИФА. Коэффициент корреляции равен: г = 0.86, Р <0.01.

Чувствительность ИФА выше, чем РНГА. Это выражается выявлением большего числа антител-содержащих сывороток и показателями титров их активности. ИФА может быть использован при определении уровня эшерихия-антител при обследовании большого количества птицы.

На основании проведенной работы была разработана НД на "Набор для серологической иммуноферментной диагностики эшерихиоза птиц "КАЭ - С".

3. ВЫВОДЫ.

3.1.Проведены комплексные исследования и анализ эпизоотологического обследования 11 птицехозяйств и установлено, что в этих хозяйствах широко циркулирует условно-патогенная микрофлора, которая может предопределить патологию смешанного течения эшерихиоза с другими инфекциями.

3.2.ПроведенныЙ анализ позволяет утверждать, что в условиях интенсивного птицеводства условно-патогенная микрофлора, выделенная из воздуха выводных инкубаторов, трупов цыплят, объектов внешней среды идентична и играет существенную роль в патологии птицы разного возраста.

3.3.Установлено, что смешанная инфекция птиц является причиной внезапных, спонтанных вспышек эпизоотий в птицехозяйствах. При проведении бактериологических исследований было изолировано 1600 культур энтеробактерий, среди которых вид Е.соН составил 34%.

3.4.Воздушная среда птичников и инкубаторов содействует аэрогенному инфицированию птицы и осеменению скорлупы инкубируемых яиц. Возникает замкнутая цепь, где циркулируют одинаковые серовары условно-патогенных

микроорганизмов и при снижении резистентности птицы вызывают вспышки инфекционных заболеваний.

3.5. При изучении чувствительности изолированных культур микроорганизмов к антибиотикам установили, что они проявляли резистентность к препаратам, которые широко применялись в хозяйствах с лечебно-профилактической целью. В связи с этим антибиотики оказывались слабо эффективными (в 97% случаев), за исключением левомицетина и байтрила (100%-кая чувствительность).

3.6.Проведенными экспериментальными исследованиями установлено, что при применении пробиотиков Кормо-токс, Биофлор, Био Плюс 2Б, Авигард повышается сохранность птицы на 27.5%, ежесуточный привес у цыплят был на 5,0 - 6,5г больше, чем в контроле и через 30 дней разница средней массы составила150-195г.

3.7.На основе инактивированного корпускулярного антигена Е.соН сероварианта 078 разработаны компоненты и схема постановки непрямого ИФА, предназначенные для диагностики эшерихиоза птиц.

3.8. Разработана тест-система ИФА на основе антигена термостабильного энтеротоксина без выделения чистых культур, предназначенная для диагностики эшерихиоза птиц.

3.9 Показано, что разработанная тест-система характеризуете!» специфичностью, чувствительностью' и воспроизводимостью результатов. При сравнительной оценке методов ИФА и РИГА для определения эшбрихиозных антител более эффективным был метод ИФА., коэффициент корреляции равен: г = 0.86, Р< 0.01.

3.10. Технология получения реагентов и методика проведения ИФА положены в основу разработанной тест-системы и создан "Набор для серологической иммуноферментной диагностики эшерихиоза птиц "КАЭ - С". НД на набор представлен к утверждению в общепринятом порядке.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

• Мониторинг вывода цыплят рекомендуется использовать с целью оценки и прогноза относительно эпизоотической ситуации по бактериальным болезням птицы и для выбора методов прооведения ветеринарно-санитарных мероприятий.

Теоретические положения и практические рекомендации, полученные-при выполнении диссертационной работы, внедрены в учебный процесс факультета ветеринарной медицины СНАУ. •

В практику предложена тест-система для обнаружения антител к эшерихиям в сыворотках крови кур методом иммуноферментного анализа Метод может быть рекомендован для включения в схему лабораторных исследований с целью диагностики эшерихиозагтш.

Материалы работыиспольэованы при составлении нормативной документации: «Набор для серологической иммуноферментной диагностики эшерихиоза Птиц КАЭ -С» (ТУ, Инструкция и Наставление).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1.Вершняк Т.В., Мшанко О.О., Фотша М.В. Л^кувально-профшакгачш заходи при асощйованому nepeöiry euiepixio3i курчатУ/ М1жв1домчий тематичний науковий зб|рник.-Харюв -1999. - №76.-с.134-136.

2.Вершняк Т.В., Фопна М.В., Мшанко О.О. Проф тактика юунбактерозу птищ, обумовленого ентеротоксигенними ешер1Х1ЯмиУ/ В1сник Сумького державного аграрного ушверсигету.- Суми. -1999. - вип.4. -с33-35.

3.Вершняк Т.В. Профилактика бактер1альних ¡нфекцМ, обумовлених умовно-пагогенними м1кроорганзмамиУ/ Вюник Сумького державного . аграрного уш'версигегу.- Суми. - 2000. - вип.5. - с.35-37.

4.Вершняк Т.В. Застосування Bio Плюс 2Б при ешерихМ курчатУ/ Труды Крымского государственного аграрного университета. - Симферополь. - вып.74. -C12-14.

5.Вершняк Т.В., Миланко АЛ., Кузнецова С.В. Патогенные свойства микрофлоры, выделяемой в птицехозяйствахУ/ Международная конфер. "Научные

основы производства ветеринарных биологических препаратов". - ВНИТИБП, г.Щёлково, 2003. - II ч., с.208-211.

6.Вершняк Т.В, Миланко АЛ., Кузнецова C.B. Анализ выделения условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах разного технологического направления.// Л Международная конфер. "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - ВНИТИБП, гЛДёлково, 2003. - II ч., с2\ 1-215.

7.Вершняк Т.В, Миланко АЛ., Кузнецова C.B. Микробиологический мониторинг вывода цыплят.// Международная конфер. "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов". - ВНИТИБП, г.Щёлково, 2003.-II ч, с.215-219.

8.Вершняк Т.В., Кузнецова C.B., Самуйленко АЛ. Определение антибиотико-резистенгносги патогенных для птицы микроорганизмов.// Междунар. научю-практич. конфер. "Современные вопросы патологии с.-х. животных". -ВИЭВ, Минск, (в печати).

9.Вершняк Т.В., Кузнецова C.B., Самуйленко АЛ. Профилактика бактериозов птицы, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами.// Всерос. науч.-пракгич. конференция "Актуальные проблемы микробиологической безопасности РФ", Киров (в печати).

Ю.Вершняк Т.В., Кузнецов ДЛ, Самуйленко АЛ. Кузнецова С.В Тест-система определения термостабильного энтерогоксина E.coli для иммуноферментной диагностики эшерихиоза птиц // II Всерос. науч.-пракгич. конференция "Научно-технический прогресс в животноводстве России - ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства", Московская обл., ВИЖ (в печати).

Отпечатано в ООО "Мещера" Зак. № 747. Тир. 100 экз.

НЙ8

P1 4 6 4 8

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Вершняк, Татьяна Викторовна

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность темы. ф 1.2. Цель и задачи исследований.

1.3. Научная новизна.

1.4. Практическое значимость работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Особенности эпизоотической ситуации в птицехозяйствах.

2.2. Роль условно-патогенной микрофлоры в заболевании птицы.

2.3. Клинико-эпизоотические особенности течения инфекционного процесса при смешанных инфекциях.

2.4. Диагностика эшерихиоза птиц при смешанных инфекциях.

2.5. Применение пробиотиков в птицеводстве.

2.6. Иммуноферментный анализ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа"

1.1. Актуальность темы

В связи с ухудшением экологической ситуации и ряда других причин в последнее время наблюдается снижение уровня природной резистентности организма птицы. Следствием этого является развитие бактериальных инфекций, обусловленных условно-патогенной микрофлорой.

В настоящее время птицеводческие хозяйства наибольшие убытки несут от следующих инфекций: колибактериоз, сальмонеллез, респираторный микоплазмоз и различных вирозов [58, 86, 136, 141, 175,].

Большой экономический ущерб наносят и болезни, вызванные условно-патогенной микрофлорой такой, как Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Yersinia, Serratia, Hafnia, Pseudomonas и некоторыми другими [4, 17, 32, 90, 93, 105]. В большей степени отмечается смешанное течение инфекции, вызванное двумя и больше возбудителями. Смешанные инфекции трудно диагностируются и наносят значительный экономический ущерб хозяйствам [13, 24, 47]. Harry Е.Н. [262], Волошин В.Г. [58] доказали, что наибольший убыток наносят болезни, вызванные условно-патогенными микробами, которые при многократном пассировании через организм повышают свою вирулентность. При снижении естественной резистентности организма особую опасность представляют эшерихии [56, 63]. Опытами установлено, что в 78,9% случаев эшерихиоз проходит в смешанной форме с участием двух и более возбудителей, например эшерихиоз и стрептококкоз, эшерихиоз и стафилококкоз, эшерихиоз и псевдомоноз, эшерихиоз и микоплазмоз, эшерихиоз и клебсиеллез и другие вариации [4, 21, 44, 58, 244, 254].

Быстрый и точный диагноз инфекционных болезней является решающим условием организации необходимых мер борьбы с ними. Хотя традиционные методы лабораторной диагностики достаточно специфичны и чувствительны, они часто трудоёмки, сложны, а иногда и недоступны для некоторых Я лабораторий. В последние годы разработаны новые простые и быстрые методы диагностики инфекций. Ускоренные методы постановки диагноза обладают рядом преимуществ по сравнению с традиционными методами серологической диагностики. Быстрота и простота проведения тестов делают их удобными для исследования динамики инфекции в очагах заболевания, а полученная информация может служить ориентиром для принятия соответствующих мер по предупреждению инфекций и их распространению [15, 17, 35, 36, 40, 49, 90, 92].

Большинство исследователей считают, что диагностику эшерихиоза нельзя основывать только по клиническому проявлению болезни, так как инфекционный процесс при эшерихиозе может протекать у одних животных латентно, в форме скрытого носительства, а у других клинические признаки не Ф являются характерными только для данной болезни [49, 70, 71, 94, 239, 260, 265]. Поэтому при диагностике эшерихиоза рекомендуют использовать бактериологические и серологические методы лабораторных исследований.

Таким образом, создание тест-систем для ускоренной диагностики ^ эшерихиоза на сегодняшний день является важной и актуальной задачей.

1.2.Цель и задачи исследования.

Основной целью настоящей работы являлось изучение эпизоотической ситуации относительно эшерихиоза птиц в птицехозяйствах, выделение условно-патогенной микрофлоры и определение её чувствительности к антибиотикам, разработка диагностики на основе сконструированной тест-системы имму но ферментного анализа (ИФА) и изучение его диагностической эффективности.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1.2.1. Провести анализ изолятов условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах.

1.2.3. Определить антибиотико-резистентность патогенных для птицы микроорганизмов.

1.2.4. Разработать тест-систему на основе иммуноферментного анализа для диагностики эшерихиоза птиц.

1.2.4.1. Охарактеризовать антигенную структуру E.coli различных сероваров.

1.2.4.2. Выделить термостабильный энтеротоксин E.coli и испытать его в качестве антигена при постановке ИФА.

1.2.4.3. Отработать оптимальные условия постановки ИФА при исследовании антиэшерихиозных сывороток.

1.2.5. Испытать разработанную тест-систему ИФА при исследовании анти-эшерихиозных сывороток.

1.3.Научная новизна.

Осуществлен анализ выделенной условно-патогенной микрофлоры в птицехозяйствах разной технологической направленности. Показана тенденция роста инфицирования птицы E.coli, а также малоизученными патогенами: Ps. aeruginosa, Kl. pneumonia и др.

Впервые в РФ разработана тест-система ИФА для диагностики эшерихиоза на основе энтеротоксина E.coli.

1.4.Практическое значение полученных результатов.

Проведен анализ условно-патогенной микрофлоры, которая может предопределять патологию смешанных инфекций в птицехозяйствах.

Микробиологический мониторинг вывода цыплят показал, что заболеваемость птицы вызывается одними и теми же ассоциациями. Рекомендуется использовать с целью оценки и прогноза эпизоотической ситуации относительно бактериальных заболеваний птицы.

Определена антибиотико-резистентность патогенных для птицы микроорганизмов.

Разработаны и утверждены государственным департаментом ветеринарной медицины Украины "Методические рекомендации по диагностике и профилактике колибактериоза сельскохозяйственных птиц".

Материалы научно-исследовательской диссертационной работы включены в курс лекционно-практических занятий факультета ветеринарной медицины Сумского НАУ.

Разработана тест-система ИФА, предназначенная для диагностики эшерихиоза птиц при смешанных инфекциях.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Вершняк, Татьяна Викторовна

5. ВЫВОДЫ.

5.1.Проведены комплексные исследования и анализ эпизоотологического обследования 11 птицехозяйств и установлено, что в этих хозяйствах широко циркулирует условно-патогенная микрофлора, которая может предопределить патологию смешанного течения эшерихиоза с другими инфекциями.

5.2.Проведенный анализ позволяет утверждать, что в условиях интенсивного птицеводства условно-патогенная микрофлора, выделенная из воздуха выводных инкубаторов, трупов цыплят, объектов внешней среды идентична и играет существенную роль в патологии птицы разного возраста.

5.3.Установлено, что смешанная инфекция птиц является причиной внезапных, спонтанных вспышек эпизоотий в птицехозяйствах. При проведении бактериологических исследований было изолировано 1600 культур энтеробактерий, среди которых вид E.coli составил 34%.

5.4.Воздушная среда птичников и инкубаторов содействует аэрогенному инфицированию птицы и осеменению скорлупы инкубируемых яиц. Возникает замкнутая цепь, где циркулируют одинаковые серовары условно-патогенных микроорганизмов и при снижении резистентности птицы вызывают вспышки инфекционных заболеваний.

5.5.При изучении чувствительности изолированных культур микроорганизмов к антибиотикам установили, что они проявляли резистентность к препаратам, которые широко применялись в хозяйствах с лечебно-профилактической целью. В связи с этим антибиотики оказывались слабо эффективными (в 97% случаев), за исключением левомицетина и байтрила (100%-ная чувствительность).

5.6.Проведенными экспериментальными исследованиями установлено, что при применении пробиотиков Кормо-токс, Биофлор, Био Плюс 2Б, Авигард повышается сохранность птицы на 27.5%, ежесуточный привес у цыплят был на 5,0 - 6,5г больше, чем в контроле и через 30 дней разница средней массы составила 150-195г.

5.7.На основе инактивированного корпускулярного антигена E.coli сероварианта 078 разработаны компоненты и схема постановки непрямого ИФА, предназначенные для диагностики эшерихиоза птиц.

5.8.Разработана тест-система ИФА на основе антигена термостабильного энтеротоксина без выделения чистых культур, предназначенная для диагностики эшерихиоза птиц.

5.9.Показано, что разработанная тест-система характеризуется специфичностью, чувствительностью и воспроизводимостью результатов. При сравнительной оценке методов ИФА и РИГА для определения эшерихиозных антител более эффективным был метод ИФА, коэффициент корреляции равен: г = 0.86, Р< 0.01.

5.10.Технология получения реагентов и методика проведения ИФА положены в основу разработанной тест-системы и создан "Набор для серологической иммуноферментной диагностики эшерихиоза птиц "КАЭ - С". НД на набор представлен к утверждению в общепринятом порядке.

2.7. Заключение.

Смешанные инфекции птиц в последнее время привлекают особенно пристальное внимание учёных при попытках выяснить причины внезапных, спонтанных вспышек эпизоотий в птицехозяйствах. В связи с тем, что данные инфекции в птицеводстве чаще всего протекают с атипичными клиническими признаками или бессимптомно, диагностика их часто затруднена.

Применение современных методов идентификации микроорганизмов позволяет объективно определить спектр выделяемой микрофлоры от животных и птицы, а также из разных объектов внешней среды. Для точной диагностики смешанных инфекций нужно использовать разные методы исследования с учетом особенностей возбудителей, которые входят в состав паразитоценоза.

Необходимость более полного выявления больных животных на всех стадиях инфекционного процесса привела к разработке новых иммунологических методов, способных выявлять минимальные количества антител (AT), достигающих нанограмм.

Разрабатываемые в последние годы иммуноферментные методы позволяют выявлять в биологических жидкостях как антитела, так и антигены, не требуют дорогостоящего оборудования и позволяют проводить визуальную оценку реакции. Имеющиеся на вооружении ветеринарных специалистов методы серодиагностики этих инфекций не позволяют с достаточной точностью решить эту задачу.

В связи с необходимостью разработки эффективных средств диагностики эшерихиоза, необходимо выявление наиболее специфических антигенов этого возбудителя и изучение их иммунологических свойств.

Основной целью настоящей работы являлось изучение эпизоотической ситуации относительно эшерихиоза птиц в птицехозяйствах, динамики накопления условно-патогенной микрофлоры, разработка рациональной схемы диагностики на основе сконструированной тест-системы иммуноферментного анализа (ИФА) и изучение его диагностической эффективности.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы.

Исследования проводились в 1997-2000гг. на базе Сумского Национального аграрного университета, птицеводческих совхозах Сумской области, в 2000-2003гг. во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности, г.Щёлково, Российской Федерации, в соответствии с плановой научно-исследовательской тематикой «Комплексная разработка диагностикумов и вакцин против вирусных и бактериальных болезней животных» (РК 01.200.1.12.689).

3.1.1. Эпизоотологические исследования включали изучение источников возбудителей инфекции, механизм передачи и развитие патогенных микроорганизмов в организме цыплят в условиях групповой профилактики бактериальных инфекций. При этом выясняли степень распространения, динамику гибели и значение факторов передачи инфекций.

3.1.2. Объектами исследований были эмбрионы и цыплята породы леггорн, кросса "Беларусь-9" от одно- до 60-дневного возраста, которые содержались в типичных условиях птицехозяйств.

3.1.3. Выделение микроорганизмов из эмбрионов, трупов птицы, патматериала, отобранного на санитарной бойне, изучение их культурально-морфологических, биохимических и патогенных свойств проводили по стандартным методикам [99, 106, 113, 118, 123, 124, 125, 143, 144, 202]. Выделение энтеропатогенных культур эшерихий проводили путем высева материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина и другие). Выросшие и изолированные колонии (не меньше четырех) пересевали на МПА, выдерживали в термостате при 37°С в течение 24 часов. После этого часть пробирок использовали для приготовления мазков, посевов на дифференциально-диагностические среды и заражения лабораторных животных, а другие для изготовления автоклавированного антигена, если кипяченый антиген не агглютинировался поливалентными колисыворотками.

3.1.4. Посевы проводили из костного, головного мозга, сердца, печени, желчного пузыря и других органов на простые и элективные питательные среды. Посевы инкубировали 24 часа при 37 С. Пересев материала проводили на среды Эндо, 0,3%-й МПА, МПБ, бульон Хоттингера, среды Кларка, Козера, Симмонса.

3.1.5. Идентификацию выделенных культур осуществляли в соответствии с требованиями, изложенными в "Кратком определителе бактерий Берги" (1980) [118].

Типизацию и идентификацию выделенных культур бактерий сальмонеллезной группы проводили методом последовательного обогащения. Материал, отобранный сразу после забоя птицы, размещали в колбе, которая содержала среду в соотношении 1:5 и помещали в термостат. Через 18-24 часа выращивания проводили высевы в бактериологические чашки с дифференциально-диагностическими средами (висмутсульфитный агар, селенитовый бульон, магниевая среда). После 16-тичасовой выдержки в термостате при 37 С из обогащенных сред проводили пересев на чашки с висмут-сульфитным агаром и помещали в термостат. Засеянные чашки просматривали через 16, 24 и 48 часов культивирования.

3.1.6. Морфологические свойства выделенных культур изучали в мазках, окрашенных по Граму, подвижность определяли в полужидком агаре (0,250,3% концентрации). Изучение культуральных и биохимических свойств проводили, используя питательные среды с углеводами и многоатомными спиртами, которые содержат индикатор Андреде, а также на средах Кларка, Олькельницького, цитратно-амонийная среда, среда с мочевиной, среда Христинсена. Типичные культуры исследовали с агглютинирующими комплексными сыворотками. Культуры, у которых были положительные реакции, в дальнейшем исследовали с монорецепторными аглютинирующими сыворотками.

3.1.7. Серологическую типизацию культур эшерихий осуществляли с целью установления эпизоотических сероваров.

Для приготовления антигенов каждую предназначенную для типизации суточную культуру смывали стерильным физраствором, суспензию бактерий доводили физиологическим раствором до 3-4 млрд. микробных тел в 1см3 (по стандарту мутности), кипятили на водяной бане в течение 60 минут. Затем взвеси охлаждали, центрифугировали при 3000 - 4000 об/мин в течение 15 минут. Потом на чистое, обезжиренное предметное стекло наносили по капле каждой комплексной сыворотки, разведенной физраствором 1:5 и добавляли по капле антиген, ингредиенты тщательным образом смешивали. Учет реакции проводили не позже трех минут при легком покачивании стекла.

Для определения кокковой микрофлоры проводили разведение материала. При этом в стерильные пробирки помещали 1г исследуемого материала и добавляли 10 см3 стерильного физраствора, тщательным образом перемешивали содержимое, встряхивали и делали серийное разведение от 1:10 до 1:1 000000. После оседания взвешенных частиц из верхнего слоя жидкости отбирали пробы и высевали на чашки Петри с 5% -ным кровяным МПА. Учет колоний проводили после инкубации в термостате в течение 48 часов при 37°С. Для идентификации стрептококков полученные колонии пересевали на молочную среду с 0,002% содержанием метиленового синего.

3.1.8. Буферные смеси и другие реактивы:

• забуференный физиологический раствор (ЗФР), рН 7.3: 72 мл 0,2 М Na2HP04 х 12 Н20, 28 мл 0,2 М NaH2P04 х 2 Н20 и 9г NaCl доводили дистиллированной водой до 1 л в мерной колбе;

• забуференный физиологический раствор с добавлением 0,05% Твина-20 (ЗФРТ);

• фосфатный буфер, 0.1М: рН 6.2: 18,5 мл 0,2М Na2HP04 и 81,5 мл 0,2М NaH2P04 доводят дистиллированной водой до 200 мл, при необходимости доводят рН до нужной величины Н3Р04 или NaOH;

• рН 8.0: 94,7 мл 0,2М Na2HP04 и 5,3 мл 0,2М NaH2P04 доводят дистиллированной водой до 200 мл, при необходимости доводят рН до нужной величины Н3Р04 или NaOH;

• карбонат-бикарбонатный буфер, 0.2М, рН 9.8: 22 мл 0,2М Na2C03 и 50 мл 0,2М ЫаНСОз разбавляют дистиллированной водой до 200 мл;

• цитратно-фосфатный буфер (ЦФБ) 0.05М, рН 5.0: 9.7 мл 0.1М лимонной кислоты хН20 + 10.3 мл 0,2М Na2HP04x2H20 разбавляют водой до 1000 мл;

• 10х буфер для переноса = 10х Трис-глициновый буфер: 0.25 М Трис, 1.92 М глицин, рН 8.3, фирмы "Serva".

• Из него готовят " Товбин буфер " (0.025 М Трис, 0.192 М глицин, 20% метанол) 10-кратным разбавлением с добавлением 20% метанола (100 мл 10х буфер для переноса + 200 мл метанола + 700 мл Н20).

• 10х буфер для электрофореза = 10х ДСН-Трис-глициновый буфер: 0.25 М

• Трис, 1.92 М глицин, 1% ДСН, рН 8.3, фирмы "Merck".

Из него готовят буфер для электрофореза (0.025 М Трис, 0.192 М глицин, 0.1% ДСН) 10-кратным разведением: 50 мл 10х ДСН-Трис-глицин буфер довести до 500 мл дистиллированной водой. Раствор мономеров (АА/Бис) (хранится при +4°С,в темноте) (30% Т, 2,7% С): 146 г акриламида (АА) + 4 г бисакриламида (Бис)—► до 500 мл Н20 диет.;

• 4х буфер разделяющего геля (+4° С): 1,5 М Трис-HCl, рН 8.8:

Трис-основной.36,3 г

Н20 диет.100 мл

НС1 1М.до рН 8,8

Н20 диет.до 200 мл

• 4х буфер концентрирующего геля (+4° С): 0,5М Трис-HCl, рН -6.8: Трис-основной.6 г

Н20 диет.50 мл

НС1 1М.до рН 6.8

Н20 диет.до 100мл

• Лизирующий буфер: 2х буфер для образцов (ОД25М Трис, 4% ДСН, 10% ДТТ, 20% глицерин, 0.001% бромфенолового синего, рН 6.8):

0,5МТрис-НС 1 ,рН6,8.2,5мл

Дитиотрейтол (ДТТ).1 г

Глицерин.2 мл

НгО диет.до 10мл

• Буфер для иммуноблота (ЗО мМ Трис-HCl, 150 мМ NaCl, 0.05% Твин-20, 0.5мг/мл овальбумин, рН 8.0):

ЗМТрис-НС 1.2 мл

Твин-20.100 мкл

Овальбумин.1 00 мг

Н20 диет.до200мл

• хромогенный субстрат ортофенилендиамин (ОФД): 10 мг ОФД растворяют в 25 мл ЦФБ с рН 5,0 и добавляют 50 мкл 3% Н202, готовится непосредственно перед использованием;

• хромогенный субстрат диаминобензидин (ДАБ): 10 мг диаминобензидина растворяют в 10 мл Трис 3 мМ, рН 8.0 и добавляют 50 мкл 3% Н202;

• 1N раствор серной кислоты;

• 3% перекись водорода;

• 10% додецил сульфат натрия (ДСН);

• 10% персульфат аммония (ПСА);

• Краситель для гелей:

- 0.3% Кумасси R250 в смеси Н20 : спирт : ледяная уксусная кислота в соотношении 5:3:1. Кумасси растворяют в спирте на мешалке в течение 15 минут. Затем добавляют воду и уксусную кислоту. Фильтруют.

- 0,1% раствор амидочерного в смеси изопропанол - уксусная к-та (25%-10%);

- коммерческая тест-система для количественного определения IgG- и IgA-антител к E.coli в сыворотках крови (E.coli 078 ELISA, DAKO, Дания);

- антитела диагностические против иммуноглобулинов кролика, меченные пероксидазой хрена, изготовленные НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (ФС 423618-98);

- антитела диагностические против иммуноглобулинов кур, меченные пероксидазой хрена, изготовленные НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (ФС 423618-98).

3.1.9. Антигены.

В качестве исходного эшерихиозного антигена использовали суспензии микробных клеток Escherichia coli (сероварианты 078, 08 и 02), полученные из 2-х - суточных агаровых культур, выращенных на агаре Хоттингера при +37°С и инактивированных при +56°С в течение 24 часов, дважды отмытых от среды забуференным физиологическим раствором (ЗФР) с последующим центрифугированием (4000 об/мин., 15 мин.).

Суспензии эшерихиозных антигенов для ИФА готовили в ЗФР (рН 7,3) путем доведения оптической плотности (ОП) от 0,01 до 0,50 о.е. мутности на фотоэлектроколориметре (КФК-2-УХЛ-4,2) при длине волны 540 нм в кювете 10 мм.

Выделение токсина из кулътуральной жидкости. Инокулировали 2мл стерильного бульона E.coli, выделенной после тестирования. Инокулированную культуру энергично встряхивали при 37°С в течение 1824ч. Это обеспечивало достаточный рост культуры (минимум ОП540 в кювете 1см) от 0.5 до 1.0 о.е. мутности при 10-кратном разведении. После инкубации проводили центрифугирование при 900g в течение 30 минут при 4°С и использовали надосадок после фильтрации (фильтр 0.2-0.45 |im) с низким белок-связывающим свойством в качестве образца.

3.1.10. Определение активности конъюгатов антивидовых иммуноглобулинов (,анти-Ig G-кур )ферментом пероксидазой хрена (ПХ).

Рабочее разведение полученного конъюгата определяли титрованием с гомологичным (Ig G-кур) и гетерологичным (Ig-кролика) иммуноглобулинами, адсорбированными в лунках полистироловых планшет.

Готовили разведение конъюгата (исходя из концентрации ПХ в полученном конъюгате) до концентрации 400, 300, 200, 100 и 50 нг/мл в ЗФР.

Результаты ферментативной реакции учитывали после инкубации в течение 30 минут при 37°С и отмывки ЗФРТ и учитывали по величине ОП490 окрашенного продукта, полученного в результате взаимодействия фермента с хромогенным субстратом - ОФД.

За рабочее разведение конъюгата принимали такое разведение, при котором ОП49о в реакции с положительным антигеном составляла 1.2 - 1.4, с отрицательным - 0.02 - 0.05 о.е.

3.1.11. Постановка непрямого метода ИФА для диагностики эшерихиоза

Для отработки условий постановки ИФА опыты проводили по следующей схеме: в качестве твердофазного носителя использовали 96-луночные полистироловые плашки (Dynatech, США). Для сенсибилизации иммунологических плашек в лунки вносили суспензии клеток Escherichia coli различных сероваров (02; 08; 078) разведенных до рабочей концентрации, в объеме 0,1 мл. Условия адсорбции антигенов были подобраны в опытах. Не связавшийся с поверхностью полистирола антиген отмывали 3-х кратно ЗФРТ. После термической обработки в течение 15 минут при 65°С (для фиксации антигена) планшеты можно хранить не менее 6 месяцев (срок наблюдения) при 4°С. для количественного определения антител в испытуемых сыворотках каждую из них титровали методом двукратных разведении в ЗФРТ на эшерихиозном антигене, либо вносили на антиген в одном разведении в тройной повторности и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Стандартно отмывали. добавляли по 0,1 мл антивидовых пероксидазных конъюгатов в рабочем разведении в ЗФРТ и инкубировали 1 час при комнатной температуре. после стандартной отмывки в лунки добавляли по 0,1 мл субстратной смеси.

Реакцию останавливали после 15-30 минутной инкубации при комнатной температуре добавлением 0,05 мл IN H2SO4. Регистрацию цветной реакции, возникающей в результате взаимодействия фермента с субстратом, проводили инструментально на вертикальном фотометре Micro ELISA Auto Reader MR580 (Dynatech, США) при длине волны 490 нм. Результаты реакции выражали в единицах иммуноферментного анализа (ЕД ИФА). Данный показатель рассчитывали по формуле, предложенной в документах ВОЗ [122]:

ЕД ИФА= ^х,00,

ОП,, где ОПх — средняя оптическая плотность лунок с исследуемым образцом;

ОП0 — средняя оптическая плотность лунок с отрицательной контрольной сывороткой.

За положительную реакцию принимали значения ЕД ИФА не менее 200 плюс удвоенное среднее квадратическое отклонение (ИФА+2а). В нашем случае этот показатель равняется 244.

В дальнейших опытах по исследованию сывороток из хозяйств применяли ИФА с подобранными условиями.

3.1.12. Полиакриламидный гельэлектрофорез (ПААГЭ) с додецил сульфатом натрия (ДСН):

Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ), содержащем 0,1 % ДСН, проводили по методу Laemmli U.K. [267] в вертикальной камере SE400 фирмы "Hoefer Scientific Instruments" (США). Концентрирование полос проводили при силе тока 45 мА / 2 стекла, при переходе на разделяющий гель силу тока повышали до 60 мА / 2 стекла. Длительность электрофореза составляла 50-60 мин.

Полученные электрофореграммы фиксировали 20 мин в 20% ТХУ при комнатной температуре, затем окрашивали раствором Кумасси R-250 в течение ночи при комнатной температуре.

Молекулярную массу белков определяли путем сравнения со смесью молекулярных маркеров, подвергнутых гидролизу как и опытные образцы, фирмы "Merck" (мол. массы от 12 до 78 кД). Для определения молекулярных масс белковых полос были определены коэффициенты относительной подвижности Rf:

Длина пробега образца, мм

Rf=

Длина геля после фиксации,

По значению коэффициента относительной подвижности для стандартных образцов был построен калибровочный график зависимости величины Rf от значений десятичного логарифма молекулярной массы. Исходя из значений коэффициентов относительной подвижности для исследуемых белков, их молекулярные массы были определены по калибровочным графикам.

3.1.13. Иммуноблот-анализ

Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану после разделения в геле проводили на аппарате "Semi-phor ТЕ-70" в "Товбин буфере" при постоянном токе 100 мА в течение часа. После переноса мембраны промывали в буфере для б лота и оставляли в нем на забивку на 20 минут. Затем мембраны погружали в раствор сыворотки в рабочем разведении в том же буфере. Инкубировали с сыворотками ночь при комнатной температуре на мешалке. Отмывали 2-3 раза t в блокирующем буфере и погружали в раствор конъюгата в рабочем разведении. Инкубацию с конъюгатом проводили 1.5 ч при комнатной температуре. Стандартно отмывали и погружали мембрану на 10-15 мин. в раствор субстрата (диаминобензидина). Результат реакции учитывали по появлению полос коричневого цвета, соответствующих местоположению разделенных белков. Реакцию останавливали, промывая мембрану дистиллированной водой.

Молекулярные массы окрашенных полос определяли по калибровочным графикам, исходя из значений коэффициентов относительной подвижности, как описано выше.

3.1.14. Результаты исследований обрабатывали статистически по

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Вершняк, Татьяна Викторовна, Щелково

1. Алешкин В., Феклисова Л., Борисова И. Иммуноглобулиновые препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний. // Врач. — 1997, —№6. —С. 16—17.

2. Алексеев Ф. Ф. К вопросу неспецифической профилактики колисептицемии кур. // Ветеринария, 1991, №6 С. 35.

3. Аллахвердиева И.И., Григорьева Н. А., Муцмахер Д. М. Микроклимат птичников и яичная продуктивность кур в конце продуктивного периода. Тр. Азерб. СХИ, серия «Ветеринария», 1981, вып.5 С.36-38.

4. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий // Ветеринария. 1984. -№7. - с.25-27.

5. Андрейчин М.А., Гебеш В.В., Гнатюк М.С. Энтеросорбция: достижения, проблемы, перспективы. // Врачеб. дело. — 1991. — №9. — С. 12—19.

6. Андрейчин М.А, Ивахив О.Л. Энтеросорбция в комплексном лечении инфекционных больных. // Клин, медицина. — 1994. — Т. 72, №6. — С. 11—14.

7. Андрейчин М.А., Копча В. С., leaxie О.Л. Пщвищення ефективност1 лжування хворих на rocTpi кишков1 шфекц11 за допомогою ентеросорбент1в i сшпбору. // 1нфекцшш хвороби. — 1995. — №1. — С. 12—16.

8. Андрейчин М.А., Луцук ОС., Андрейчин С.М., Копча B.C. Ентеросорбцшне лжування хворих на rocTpi кишков1 шфекци та хрошчш колгги з д1ареею. // Лжарська справа. — 1996. — №7—9. — С. 147—151.

9. Андреева О. С. О роли патогенных серотипов кишечной палочки при заболевании молодняка с/х животных. // Материалы Всесоюз. конф. по болезням молодняка с/х животных и птиц М., 1984.- С. 54-56.

10. Андрюнин Ю. И. Ветеринарно-санитарная защита ферм и методы дезинфекции.// Ветеринария, 1989, №11- с. 8-12

11. Андрюнин Ю. И., Дукаценко В. Г. Дезинфекция в животноводческих комлексах.// Ветеринария, 1991, №10 С. 42-46.

12. Анапенко В. М. Смешанные инфекции с/х животных. Киев, «Урожай», 1990.-172.

13. Анапенко В. М. Ассоциированные инфекции птиц в иммуноморфологическом аспекте. // Межвуз. сб. науч. трудов, Харьков, 1991 — С. 30-31.

14. Анапенко В. М. Ассоциированные инфекции и иммуностимуляция в условиях откормочных хозяйств. Новое в учении о заразных болезнях (вирусных, бактериальных, зоопарапзитарных). // Материалы 3-го съезда паразитоценологов.-Киев, 1994-С. 151-160.

15. Антитела. Методы. 1 т. // Под ред. Д.Кэтти.- М.: Мир, 1991.-287с.

16. Аринкин А.В. Коррекция иммуного ответа у цыплят, заражённых смешанной инвазией. // Ветеринария, №1 1997, с.30.

17. Аржаков В. Н. Чувствительность к антибиотикам патогенных штаммов Е. coli, выделенных из различных птицеводческих хозяйств. -Сборник науч. работ Сиб. НИВИ -т. Инфекционные болезни животных , 1989, в. 34.-С. 105-110

18. Артемьева С. А. Колибактериоз птиц. М.: Колос, 1997.-95 с.

19. Артемьева С. А. Бактериоциногения кишечной палочки и пастерелл. // Птицеводство, 1980, №11-С. 45.

20. Артемьева С. А. Смешанная инфекция пастереллёза и колибактериоза. // Птицеводство, 1986, №8-С. 45-46.

21. Артемьева С. А. Современные методы профилактики коли и паратифозных инфекций птиц Сб. тр. Всесоюз. НИВИ, 1987, В. 11/22/-С. 5055.

22. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В. А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М.: Триада X, 1998. - 496с.

23. Атамась В. А., Масленникова С. И. Ассоциированное течение болезней бактериальной этиологии. // Ветеринария, 1985, №3.-С. 37-39.

24. Ахмедова А. Г. Биология бактерий группы кишечной палочки, выделенной от птиц. // Материалы науч.- произ. конф., Самарканд, 1987.С. 37

25. Ашмарин И. П., Воробьёв А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях JL: Медгиз., 1962.-179 с.

26. Бабина М.П. Коррекция имунного статуса и повышение продуктивности цыплят-бройлеров пробиотиками. // Актуал. пробл. интенсив, развития животноводства Горки. - 1998. - с.294-299.

27. Байдевлятов А.Б. Справочник по болезням сельскохозяйственных птиц,- Киев, "Урожай", 1980.-С.136.

28. Байдевлятов А.Б., Герман В В., Киприч В В. Система ветеринарно-санитарных мероприятий в промышленном и племенном животноводстве. -Киев: "Урожай", 1987,- 222 с.

29. Байдевлятов А.Б. Пути повышения жизнеспособности птицы в промышленном птицеводстве Научно-техн. бюл. УНИИП, 1990, №6, С. 3842.

30. Байдевлятов А.Б. , Бессарабов Б.Ф., Ольховик Л.А. Справочник по болезням с/х. птицы-Киев:"Урожай",1992.-200 с.

31. Байдевлятов А.Б., Фотина Т.И. Дезинфекция птичников при ассоциированных бактериозах. // Материалы межгос. конф. по научным и прикладным проблемам паразитоценологии.- Киев-Харьков-Луганск,1992-С.34.

32. Байдевлятов А.Б. Сравнительная характеристика дезинфекционных средств при ассоциированных бактериозах. // Материалы lV-ro Съезда паразитоценологов Украины.- Харьков, 1995.-С.153.

33. Бактериальный эндотоксикоз /Шенкман Б.З., Андрейчин М.А., Степанов С.А., Богомолова Н.В./ — Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1991. — 240 с.

34. Белая ОФ. Клинико-патологические, иммунологические и диагностические аспекты циркуляции в организме антигенов и токсинов энтеробактерий как факторов патогенности возбудителей при острых кишечных заболеваниях: Дисс. д-ра мед. наук.- 1994.- 426 с.

35. Белая Ю.А. Реакция коагглютинации — чувствительный экспресс метод индикации антигенов и токсинов возбудителей кишечных и других заболеваний. // Новое в практике лаб. иссл. Горький.- 1987.-С. 66-70.

36. Бессарабов Б.Ф. Ветеринарно-санитарные мероприятия по профилактике болезней птиц.— М: Россельхозиздат.,1990,- 187 с.

37. Бессарабов Б.Ф., Байдевлятов А.Б. Рецептурный справочник по болезням птиц Сумы: МКИПП "Мрия",1992. - 304 с.

38. Блюгер А.Ф., Векслер Х.М., Новицкий И.Н. Клиническая иммунология кишечных инфекций. — Рига: Звайгзне, 1980. — 214 с.

39. Богомаз В.М., Дынник О.Б. Серологическая диагностика инфицированности Helicobacter pylori методом иммуноферментного анализа. // Украшський медичний часопис №5 -IX/X - 2001 -с. 108-110.

40. Богосьян А.А. Скрытые очаги инфекции в помещениях для птиц и новые способы их обеззараживания. // Тезисы 5-й межгос.межвуз. науч.конференции Санкт-Петербург, 1993 -С. 10-16.

41. Болезни птицы / Пер. с анг.О.В.Мищихи, О.А.Покорной М.: Агропромиздат, 1985. - 349с.

42. Бондар И.О. Ерготрошки в профшактищ та терапи хвороб птищ. // В1сник Сумського Державного аграрного ушверситету.- Суми, 2000. с.28-32.

43. Борисов А.Е. Респираторные инфекции телят при ассоциированном течении. // Материалы межгосуд. конф. по научным и практ. проблемам паразитоценологии- Киев Харьков - Луганск, 1993-С. 17-18.

44. Бочаров Д.А. Дезинфекция на птицефермах Птицеводство, 1989, №6, С. 29-31

45. Бродов А.Е., Малеев В.Д., Машилов В.П. Осложнения у больных пищевыми токсикоинфекциями и сальмонеллезами. // Клин, медицина. — 1996. — №1. —С. 36—38.

46. Бродов А.Е., Ющук Н.Д., Кареткина Т.Н. Трудности дифференциальной диагностики между рядом инфекционных заболеваний и пищевыми токсикоинфекциями. // Клин, медицина. — 1989. — №7. — С. 131— 135.

47. Бродов А.Е., Ющук Н.Д., Малеев В. В. Клинико-патогенетические особенности инфекционно-токсического шока у больных острыми кишечными инфекциями. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1997. — №2. — С. 22—26

48. Бродянский Ю.М., Чайко Н.А. Улучшение методов бактериальных и серологических исследований при кишечных инфекциях. // Острые кишечные инфекции.-JI.- 1982,-вып. 6.- С. 124-132.

49. Бублик В.Н., Борисов А.Е. Роль паразитоценологии при промышленном содержании животных. // Материалы межгосуд. науч. конф. -Харьков, 1995,-С. 348-351.

50. Бурханова Х.К. Химиотерапия и специфические средства при колибактериозе и пуллорозе-тифе цыплят. // Передовой науч.- технич. опыт в птицеводство.—Загорск, 1980, №2,- С. 32—34.

51. Бусол В. А. Теоретические и практические аспекты управления эпизоотическим процессом при хронических инфекционных болезнях. // Материалы международ, науч. конф Харьков, 1995 - С. 16-20.

52. Васильев В. С., Комар В. И., Цыркунов В. М. Практика инфекциониста. — М.: Высш. шк., 1993. — 495 с.

53. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов. — JL: Медицина, 1981. — 207 с.

54. Використання ентеросорбенив у комплексному лшуванш хворих на rocTpi кишков1 шфекцш: Метод. Рекомендацш. /Склали Андрейчин М.А., Гебеш В.В., 1вах1в О.Л./ — Тернопшь, 1992. — 18с.

55. Волинецъ Л., Колганов О., Потоцький М. Симптоми, патоморфолопя та бактерюлопя хрошчного асощйованого кол1бактерюзу курей. // Ветеринарна медицина Украши, №12 1999 - с.20.

56. Волков Г.К., Саввинова М.С. Загрязненность воздуха в многоэтажных птичниках. // Ветеринария, 1990, №7 С.20-22.

57. Волошин В.Г. Особенности течения и патологоанатомические изменения при смешанных бактериозах птиц в условиях Сумской области. // Материалы науч. конф Сумы, 1998 - С.36-37.

58. Воробьев С.И., Михайлова В.Е. Профилактика инфекционных болезней в условиях инкубаториев Птицеводство, 1988,№7 - С.42-43.

59. Воробьев С.И. Санация птицеводческих помещений.-Птицеводство, 1989, №12.- С. 16-17.

60. Воскобойников В.А. Организация ветеринарных мероприятий.-Москва, Агропромиздат, 1993,- 216с.

61. Воскобойников В.А. Профилактика болезней птиц в птицеводческих хозяйствах. Киев: "Урожай", 1993 - с.86-92.

62. Гебеш В.В. Современные эфферентные методы в лечении больных острыми кишечными инфекциями // Кишечные инфекции. — Киев, 1991. — Вып. 22. — С.46—50.

63. Герман В.Е., Соколенко Н.Т. Санитарно-бактериологическая характеристика птицеводческих помещений. // Ветеринария, 1985, №9 С. 34.

64. Гнатюк М.С., Ивахив О.А., Сорока Н. Е. Энтеросорбция в комплексном лечении больных пищевыми токсикоинфекциями. // Съезд врачей-инфекционистов (Суздаль/сентябрь 1992 г.). — М., 1992. — Т.1. — С. 382—385.

65. Горковая А.Г. Дезинфекция птичников при интенсивном птицеводстве. // РЖ "Ветеринария", 1978, №5.- С.3-5.

66. Грачева Н.М., Щетинина КН. Клиническая химиотерапия инфекционных болезней. — JL: Медицина, 1991. — 256 с.

67. Григорьев А.В., Бондаренко В.М., Абрамов В.А. Разработка и клиническая оценка пробиотика "Бифидумбактерин форте". // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1997. — №3. — С. 92— 96.

68. Грошева Г.А. Колибактериоз и меры борьбы с ним в птицеводческих хозяйствах промышленного типа Труды ВИЭВ, 1979, т.49-С. 123.

69. Грошева Г.А. Колисептицемия птиц и методы ее диагностики. // Ветеринария, 1989, №4.-С.65-66.

70. Данилова А.К. Определение патогенности серологических типов кишечной палочки на куриных эмбрионах Труды ВГНКИ, 1987, т. 14, С. 133— 142.

71. Данилова А.К. Эффективность применения элеутерококка на курах. // Сб. науч. трудов Донского СХИ, 1989, т. 15, вып 2.-С.31-34.

72. Демченко А.В., Збудчак А.В., Макарчук В.И. К вопросу распространения и диагностики смешанных инфекций птиц в хозяйствах Одесской области. // Инфекционные и инвазионные болезни с.-х. животных и птиц. Одесса.- 1983.- с. 20-23.

73. Дмитриев А.Ф. Санитарно-бактериологическая оценка воздуха помещений. // Ветеринария, 1989, N7- С.26-28.

74. Донник Н. Профилактика болезней птиц. Киев: "Урожай", 1994.173с.

75. Дробчак В., Шеремета В. 1нтернет: hobi можливосп для ветеринарно1 науки та практики // Ветеринарна медицина Украши, №11 — 2002 -с.42-46.

76. Дудницкий И.А., Деркачев П.П., Гришин В В. Дезинфицирующие средства. // Ветеринария, 1989, №2 С. 5-7.

77. Дудницкий И.А. Контроль качества дезинфекции. // Ветеринария, 1991, №9- С. 21-25

78. Евдокимов М.И. О колибактериозе. // Птицеводство, 1980, №7.-С. 42-43

79. Евдокимова Е.С., Сапронова Л.Г., Дурдыев Д.Д. Распространение и носительство энтеропатогенных типов кишечной палочки у птиц. // Ветеринария, 1986, №9.-С.34-36.

80. Егоров В.Т., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа.- М.: Мир, 1991. 456 с.

81. Ежов В.И. Действие антибактериальных препаратов на возбудителя колисептицемии птиц. // Ветеринария, 1980, №12 С.33-34.

82. Ежов В.И. Антибиотикоустойчивость штаммов эшерихий, выделенных при колисептицемии птиц. Труды ВИЭВ, 1992, т.63 - С.46-48.

83. Еремеев М.Н. Гемолитическая активность энтеропатогенных кишечных палочек. // Ветеринария, 1977, №2 С.46-47.

84. Журкин А.Т., Макарова Т.В., Ставицкая Е.Л. Особенности современного течения дизентерии в Санкт-Петербурге. // Клин, медицина. — 1996. —№9.—С. 32—33.

85. Заволока А.А., Смолянинов В.К, Руденко А.Ф., Луи Роже. Экономическая эффективность профилактических противоэпизоотических мероприятий при Ньюкаслской болезни птиц. // Интенсификация птицеводства: межвуз.сб. науч. трудов Харьков, 1991, С. 73-77.

86. Закомырдин А.А. Ветеринарно-санитарные мероприятия в промышленном птицеводстве.-Колос, Москва, 1981, 271 с.

87. Зон Г.А. Изучение биологических свойств эпизоотических культур эшерихий. // Ветеринария: Республ.межвед.темат.сб.науч.трудов. Киев, 1987, вып.58.- С.14-16.

88. Зон Г.А., Котина Т.Н. Санитарная оценка продуктов птицеводства при ассоциированном эшерихиозе и эймериозе. // Материалы IV-й межгосуд. конф.- Киев Харьков - Луганск, 1990.-С. 110.

89. Зыкин Л.Ф., Хащев З.Ю. Усовершенствование лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. // Ветеринария. -2001.-№5.-С. 22-24.

90. Зубик Т.М., Иванов КС., Казанцев А.П., Лесников А.Л. Дифференциальная диагностика инфекционных заболеваний.— Л.: Медицина, 1991.—376с.

91. Ибрагимов А.А. Клинико-анатомическая характеристика колисептицемии птиц. // Материалы Всес. конф. по патанатомии.- Ленинград, 1983. С.220-224.

92. Иванов А.И. Острые кишечные инфекции. — Л.: Медицина, 1982. — 182с.

93. Иванов К.С., Иванов А. И. Диагностика острых диарейных инфекций. И Клин, медицина. — 1992. — №7—8. — С. 64—69.

94. Ieaxie О.Л., Луцук О.С., Копча B.C. Ентеросорбщйна терашя при гострих кишкових шфекщях. // 1нфекцшш хвороби. — 1997. — №2. — С. 39— 42.

95. Ибрагимов А.А. Патоморфология при колибактериозе цыплят.-Меры профилактики и диагностики бактериозов с/х. животных- Ашхабат, 1993- С.89-91.

96. Илюшечкин Ю.П. Паразитоценоз кокцидий и кишечной палочки в организме цыплят. // Ветеринария, 1983, №.2 С. 28-30.

97. Кадымов Р. А., Дунамалиев Г.Э., Агеев Э.М., Бачиров М.З. Ассоциированное течение некоторых болезней бактериальной этиологии. // Материалы межгосуд. конф Киев - Харьков - Луганск, 1993-С.49-50.

98. Кармолиев Р.Х. Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии.- М.: Колос, 1971.- 288с.ил.

99. Карпов В.П. Справочник ветеринарного врача птицеводческого предприятия. -М.: Колос, 1982.

100. Каталог фирмы Bayer, Германия. 2001.

101. Киприч В.В., Бабкин Б.Ф. Организация ветеринарно-санитарных мероприятий в птицеводческих хозяйствах.- Харьков, 1990.-С. 16-20.

102. Ктрич ВВ., Трускова Т.Ю. Д1агностика бактер1альних шфекцш у птищ. // Вюник СНАУ. 2000 - с.21-27.

103. Кирпиченок В.А. Справочник по ветеринарной дезинфекции М., 1991.- 136 с.

104. Клецов М.А. Совершенствование ветеринарно-санитарной защиты на птицефабриках Сумского района Сумской области. // Труды Сумского СХИ. 1993.- С.28-31.

105. Клиническая лабораторная диагностика: Справочное издание / И.П.Кондрахин, Н.В.Курилов, А.Г.Малахов / М.: Агропромиздат, 1985. -287с.

106. Ковалёв В.Ф., Волков И.В. Резистентность эшерихий и сальмонелл к применяемым антибиотикам. // Ветеринария, №7 1989. - с.30.

107. Кожемяка Н.В. Колибактериоз // Птицеводство.- 1991.- №4 с.2627.

108. Кожемяка Н.В. Санитарные меры основа профилактики заразных болезней в птицеводческих хозяйствах. // Ветеринария, 1990, №12.

109. Колганов О.В., Волинець Л.К. Einepixii та мшоплазми в етюлош ресшраторних хвороб курей та Тх профшактика. // Вюник Сумського Державного аграрного ушверситету.- Суми, 2000. с.69-71.

110. Коровин P. H. Заразные болезни птиц и разработка мер профилактики.// Ветеринария. -1991.- №6.- с.3-6.

111. Коровин Р.Н., Зеленский В.П., Грошева Г.А. Лабораторная диагностика болезней птиц / Справочник. М.: Агропромиздат., 1989. - 256с.

112. Коровин Р.Н., Урбан В.П. , Богосъян А. А. Бактериальная загрязненность.//Ветеринария, 1993, №2-С. 14-16.

113. Кот А.П. О микробной загрязненности воздуха птичников. // Ветеринария 1986, №4 - С. 26-29.

114. Крамарев С.О. Лжування гострих кишкових шфекцш у дггей. // Журн. практического врача. — 1997. — №3. — С. 32—34.

115. Краснобаев Е.А. Смешанные вирусные и вирус-бактериальные кишечные инфекции на свинокомплексе. // Материалы международ, науч. конф. Харьков, 1995. -С.71-76.

116. Краткий определитель бактерий Берги /под ред.Дж. Хоулта/.-М., Мир, 1980, 444 с.

117. Крятов О.В., Крятова Р.Е. Сучасш технологи виробництва продукцп тваринництва, ix недолши та переваги. // Материалы науч.конфер.СНАУ, Сумы, 2002.

118. Кудрявцев Ф.С., Зеленский В.Н., Малыгин М.М. Профилактика болезней птиц Ленинград, Колос, 1991, 119 с.

119. Курбанова М. А, Изучение микробных культур, выделенных из патматериала от птицы, павшей от паратифа и колибактериоза. //Ученые записки Азербайджанского СХИ им. С.Агамала-Оглы, 1989, №1, С.32-34.

120. Кэрстак Э. Успехи в разработке иммуноферментных методов: получение реагентов, планирование эксперимента и интерпретация результатов. // Бюллетень ВОЗ.- 1985. №4. - С. 125-126.

121. Лабораторная диагностика. Часть 2. Микробиологические и паразитологичесие исследования. М., Воениздат. - 1985.

122. Лабораторные исследования в ветеринарии / под ред. Антонова

123. B.Я., Блинова П.Н. -М., Колос, 1986, 637 с.

124. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные исследования. М., 1986. - с.128-130.

125. Лебедев А.К. , Борисенкова А.II., Мухамедиян А.А. Смешанное течение пастереллёза и колибактериоза у кур. // Ветеринария, 1973, №121. C. 5 8-60.

126. Леесмент О.В. Усовершенствование методов диагностики и мероприятия по борьбе с пуллорозом-тифом птиц. Автореф.дис. на соискание ученой степени канд.наук.-Тарту, 1992,- 17 с.

127. Литвин В.П. Принципы диагностики заболеваний в крупных хозяйствах. // Теоретические и практические вопросы ветеринарии. Киев, Урожай, 1982.-С. 16-20.

128. Литвин Б.П. Паразитоценозы свиней в племенных хозяйствах Украины. // Межгосуд. конф. по науч. и прикл. проблемам паразитоценологии Киев - Харьков - Луганск, 1993- С.57.

129. Литвин Б.П., Поживин А.И., Яцышин А.И. Закономерности течения эпизоотического процесса при смешанных (ассоциированных) болезнях телят и поросят. // Межгосуд. науч. конф. Харьков, 1995. - С.645-648.

130. Лобзин Ю.В., Огарков П.И., Сиволодский Е.П. и др. Дизентерия и другие кишечные диарейные инфекции. М., 1999 - 138с.

131. Луцук О.С., Андрейчин С. М., Копча B.C. Cnoci6 мюцевого лпсування колтв. // 1нфекцшш хвороби. — 1995. — №2. — С. 37—39.

132. Лысюк В.В. Ассоциированные инфекции и возможности ветеринарной медицины в откормочном комплексе. // Межгосуд. конференция по паразитоценологии. Киев - Харьков - Луганск, 1993. - С. 58.

133. Лысюк В.В., Апатенко В.М. Ассоциированные инфекции и иммуностимуляция в условиях откормочного хозяйства //Новое в учении о заразных болезнях вирусных, бактериальных, зоопаразитарных //Материалы 3-го съезда паразитоценологов. Киев, 1994 - С. 151-160.

134. Лядова Е., Лазничкова К., Соботкина Я. Результаты применения некоторых лабораторных методик при кишечных инфекциях. // Острые кишечные инфекции.- Л.-1982.-вып. 6.- С. 137-143.

135. Ляшенко Ю.И., Иванов А.И. Смешанные инфекции. — Л.: Медицина, 1989.— 240 с.

136. Маловастый К. С. Применение полиен-1 при колибактериозе цыплят. // В1сник Сумського Державного аграрного ушверситету.- Суми, 2000.- с.84-85.

137. Материалы XX Всемирного птицеводческого Конгресса, 2-5 сентября, 1996.

138. Mamepicuiu XIII зЧзду Украшського наукового товариства мжробюлопв, ешдемюлопв та паразитолопв 1м.Д.К.Заболотнього. К., 1996.

139. Материалы научной конференции СНАУ // Тезисы. Сумы -2002.

140. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий /утверждена ГУ МСХ СССР/ М., 1983, 10 с.

141. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях. М., Минздрав РФ, 1999.

142. Методические указания по бактериологической диагностике1./смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями. №13-7-2/1759 от 11.10.99 -утв.В.В.Селиверстов, Минсельхозпрод России.

143. Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней с.х. животных/ М., 1972,ч-4 с.

144. Методы исследований в иммунологии / Под ред.И.Мерковитса, Б.Перниса. М.: Мир, - 1981. - с.428-467.

145. Мшанко О.О. Профшактика зм1шанних форм бактерюз1в // Bicmnc Сумського Державного аграрного ушверситету.- Суми, 2000. с.88-90.

146. Митюшников В.И., Кравченко Н.А. Микроклимат птичника и его влияние на резистентность и продуктивность кур.- Птицеводство, 1983, №4. -С.24-26.

147. Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы оценки качества. ГОСТ 7702.2-74.

148. Мясо птицы. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса. ГОСТ 7702.1-74.

149. Нго Т. Т., Ленхофф Г. М. Иммуноферментный анализ антител. // Иммуноферментный анализ.- М.: Мир, 1989 С. 172-190.

150. Никитенко А. И., Заика А.А. Нитрофурановые препараты при колибактериозе животных. // Ветеринария, 1984, №4. С. 14-16.

151. Николаева Л.Г., Белая Ю.А., Быстрова С.М. и др. Обнаружение бактериальных антигенов с помощью реакции коагглютинации у больных острыми кишечными инфекциями. Кишечные инфекции. // Респ. межвед. сб., Киев, 1991.-С. 65-66.

152. Новикова А. Ф. Изучение ассоциированного течения пуллороза-тифа и колибактериоза.— Передовой науч.производ. опыт в животноводстве, 1985, №1 С.14-17.

153. Ольховик Л.А., Зубова Т.И. О контроле птицеводческих хозяйств на пуллороз-тиф. // Болезни птиц при интенсивных методах ведения отрасли: Межвуз.сб. науч. трудов,-Харьковский СХИ-Харьков, 1986.-С.39-42.

154. Осколков B.C. Свойства изолятов кишечной палочки, выделенных от птиц. // Ветеринария, 1972, №2 С.43-44.

155. Острые кишечные инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами / Е.П. Бернасовская, В.Н. Бычковский, С.И. Бидненко / — Киев: «Здоров'я», 1984. — 152 с.

156. Панасюк Д.И Учение о паразитоценозах и ассоциативных заболеваниях. // Тезисы докл. 11-й Всесоюз.съезда паразитоценологов — Киев, 1985.-С.259-261.

157. Панасюк Д.И. Особенности этиологии и меры борьбы при смешанных болезнях птиц // Ветеринария. -1991. №5. - с.38-41.

158. Паткар 1.1., Дашлов О.О., Педан В.А. Результати використання байтрилу i ав1гарду для профилактики бактер1альних хвороб птищ. // Вюник Сумського Державного аграрного ушверситету.- Сумм, 2000. с.96-99.

159. Паникар И.И., Решетило А.И. Особенности патогенеза, эпизоотологии и диагностики вирусных болезней птиц- Профилактика наиболее опасных вирусных болезней птиц.— Кишинев, 1991.- С. 16-20

160. Паникар ИИ, Тютченко Ю.Н., Решетило А.И. Особенности диагностики вирусного гепатита утят, протекающего в ассоциации с бактериальными и вирусными болезнями. // Интенсификация птицеводства: Межвуз.сб. науч. трудов.— Харьков, 1993.- С.83-87.

161. Паникар И.И, Корявець В.П. Байтрил у лжуванш бактерюз1в птищ. // Тваринництво Украши, 1995, №2. С. 14-16.

162. Петков Г., Байков Д., Руссак Г. Вьезможност за обеззаразиване на вэздуха при промышлено отлегидане на птицы. // Вет.мед.науки, 1991,т.24, №3- С.67-72.

163. Петров А.И. Дезинфекция бактерицидными пенами // Кролиководство и звероводство, 1985, №6.-С. 19-21.

164. Погребняк Л.И. Ассоциативное течение инфекционных болезней в свиноводческих комплексах. // Межгосуд. конф. по науч. и прикл. проблемам паразитоценологии.— Киев Харьков - Луганск, 1993. С.72-73.

165. Покровский В.И., Малеев В.В. Пищевые токсикоинфекции. // Инфекционные болезни: Руководство для врачей / Под ред. В.И. Покровского./

166. М. Медицина, 1996. — С. 144—154.

167. Покровский В.И., Ющук Н.Д. Бактериальная дизентерия. — М. Медицина, 1994. — 256 с.

168. Поляков А.А. Руководство по ветеринарной санитарии — М., Агропромиздат, 1986,— 318 с. 144 .

169. Поляков И.В. Практическое пособие по медицинской статистике.- Л., 1975.- 127с.

170. Поспелова В., Грачева Н., Ханина Г. Эубиотики — эффективное средство нормализации микрофлоры — и вклад МНИИЭМ в их разработку. // Врач.— 1997. — №4. — С. 30—32.

171. Постовит В.А. Пищевые токсикоинфекции. — Л.: Медицина, 1984.280 с.

172. Правила ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. 2000.

173. Прискока В.А. Определение состояния иммунной реактивности. // Материалы международ.науч.конф.—Харьков, 1995,-С.430—431 .

174. Прискока В.А, Достоевський П.П., Борзяк А.Т. Паразитоценози як етюлопчний фактор зм1шаних шфекцш.— Ктв, 1995, -20 с.

175. Прямухина Н.С., Семина Н.А. Дифференциация кишечных эшерихиозов. //Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 1991.2.—С. 81—87.

176. Радчук Н.А., Грампанис В.Э. Роль аэрогенного заражения в распространении бактериозов птиц. // Ветеринария, 1982, №2. С.50-52.

177. Радчук Н.А. Профилактика и лечение бактериозов птиц в условиях птицефабрик. // Материалы науч. произвол, конф.— Харьков, 1990, С.37-41.

178. Ребенко Г.1. Кол1бактерюз телят. // Материалы научной конференции СНАУ. Тезисы. Сумы -2002. - с.59 - 60.

179. Резвых А.Г. Колисептицемия.— Птицеводство, 1980, №2 С.4850.

180. Руководство по инфекционным болезням с атласом инфекционной патологии. / Под ред. Лобзина Ю.В., Козлова С.С., Ускова А.Н./ 2000 - 138с.

181. Рыженко В.П., Манченко В.М. Влияние ассоциированных инфекций на эпизоотический процесс. // Материалы междунар. конф.— Харьков, 1995. С.37-40.

182. Савов Д. Микробная загрязненность воздуха в бройлерном помещении.— Науч. труды Казан, вет. института.— Казань, 1993, т. 131. С.41-43.

183. Серебряков B.C. Изучение действия некоторых антибиотиков на возбудителей бактериозов птиц.- Уч.записки Азербайджан СХИ, 1990, С.36-39.

184. Серебрякова А.Г. Профилактика колибактериоза птиц в ЗОСП:- Сб. науч. трудов ЗОСП, 1989, т.З.- С.70-72.

185. Синицин В. Перспективи розвитку 1ммуноферментного методу д1агностики шфекцшних хвороб тварин. // Ветеринарна медицина Украши, №2 1996 - с.18-19.

186. Скутарь И.Г. Химиотерапия и профилактика бактериальных инфекций птиц. // Труды ВНИТИП, Загорск, 1989.- С.6-8. 157.

187. Скутарь И.Г. Экология, иммунное состояние и профилактика инфекционных болезней животных. // IV-я межгосуд. конф.— Киев Харьков -Луганск, 1993.-С.98.

188. Скрыпник Б.Г., Бабкин А.Ф., Красников Г.А. Изучение причин гибели молодняка крупного рогатого скота на откормочном комплексе. // Материалы межгосуд. конф. по науч. и прикл. проблемам паразитоценологии.— Киев Харьков - Луганск, 1993- С.98.

189. Скрипченко Г.С., Пономаренко А.К. Новий метод тдвищення ефективност1 1мунобюлопчних препарат1в. // Материалы международной конфер.— Харьков, 1995. С.665-666.

190. Смирнов A.M., Бубнов В.Д. Характеристика факторов периферической защиты в птичниках. // Интенсификация птицеводства: Межвуз. сб. науч. трудов.— Харьков, 1991- С. 107-109.

191. Собко А.И., Синицын А.П. Общая эпизоотология, иммунологические, экологические и методологические проблемы. // Международ, науч. конф-Харьков, 1995 -С. 12-14.

192. Соколов Б.Д. Вакцинопрофклактика в птицеводстве. // Международ, науч. конф.— Харьков, 1995,-С. 438-440.

193. Соколов БД., Андреева H.JI. О классификации эрготропиков. // Тезисы докл. 2-й межвуз.науч.-практич. конф. "Новые фарм. средства в ветеринарии". -1990 -с.56

194. Старчеус А.П. Современные методы диагностики инфекционных болезней животных. // Международ, науч. конф.—Харьков,1995, С. 358-361.

195. Стешов Ф.Ф. Сравнительная оценка методов обнаружения кишечной палочки при контроле качества дезинфекции. // Лабораторное дело, 1997, №12. С.743-745.

196. Сытдыков А.К. Вопросы специфической профилактики колибактериоза. // Ветеринария, 1984 , №10 .- С.28-30.

197. Сюрин В.Н., Аликаев В.А., Сосов Р.Ф. Стрессы и вирусоносительство. // Птицеводство, 1973, №5 С.91-96.

198. Сюрин В.Н., Фомина Н.В., Белоусова Р.В. Ветеринарная вирусология.— М.,1984, Колос,- 376 с.

199. Терешин KM. Интенсификация птицеводства и его проблемы. // Интенсификация птицеводства: Межвуз. сб. науч. трудов.— Харьков, 1987. -С. 5-13.

200. Технологические инструкции по убою, обработке и хранению мяса птицы. 1991.

201. Третьяков А.Д., Оленина В.И., Тихонова О.Г. Методика определения энтеропатогенности микроорганизмов. //Ветеринария, 1989, №2—С.48-49.

202. Урбан В.П. Проблемы эпизоотологии в промышленном птицеводстве. Система мероприятий по обеспечению эпизоотического благополучия и рентабельности птицеводческих предприятий. // Тезисы докл. науч.- производ. конф Ломоносов, 1985, часть 1- С. 17-20.

203. Федорова З.П. Серологическая характеристика кишечной палочки, выделенной от птицы и из воздуха птичников. // Передовой научно-производ. опыт — в производство, 1992, №2 С. 14—16.

204. Фёдорова З.П., Ещенко И.Д., Погребняк Л.Л., Лучин А.И. Микрофлора воздуха в птичнике // Ветеринария. 1984. - №1 - с.24-25.

205. Фотта Г.А. Мжробюлопчний мошторинг курчат на виводь // Материалы научной конференции СНАУ. Тезисы. Сумы -2002. - с.61 - 62.

206. Фотта Т.1. Етюлопя кишково1 форми einepixio3y. // Вюник Сумського Державного аграрного ушверситету.- Суми, 2000. с. 130-131.

207. Фотина Т.И., Зон Г.А., Фотин А.И, Миланко А.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза тушек птицы при эшерихиозе. // Межвуз. сб. науч. трудов.—Харьков, 1991.-С.79-83.

208. Фомина Т.И., БайдевлятовА.Б. Санитарно-бактериологическая характеристика воздушной среды инкубаториев. // Конф. по птицеводству.— Борки Симферополь, 1992.— С. 116-117.

209. Фотта T.I. Удосконалення системи заход1в по профилактищ einepixio3a та пулорозу-тифу птищ. // Матер1али наук. конф. Сумського СГ1.— Сумы, 1995.-С.48.

210. Хазенсон А.В., Чайка Н.А. Иммунологические основы диагностики и эпидемиологического анализа кишечных инфекций. — Д.: Медицина, 1987. —112с.

211. Хапцев З.Ю. Усовершенствование лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животных: Автореф. дис. канд. вет. наук СГАУ. -Саратов, 2000. 23 с.

212. Цимбал А.Д., Станислав В.И. Микробная ассоциация в помете кур. // Межгосуд. конф. по паразитоценологии.— Киев-Харьков-Луганск, 1993,-СИИЗ.

213. Цинзерлинг А.В. Современные инфекции: Патанатомия и вопросы патогенеза: Руководство. — СПб.: СОТИС, 1993. — 363 с.

214. Часнык Н.Г., Волошин В.Г., Клецов М.А. Особенности профилактики и меры борьбы со смешанными инфекциями птиц в хозяйствах Сумской области. // Материалы науч.конф. Сумского СХИ.— Сумы, 1995,— С.136-137.

215. Чернуха В.К., Люлин П.В. Видовой состав возбудителей и совершенствование мер борьбы с эймеризом индеек // Интенсификация птицеводства: Межвуз. сб. науч. трудов.— Харьков, 1991. С.62-69.

216. Чибисова В А., Селютина Д.Ф., Горелов В.Н., Драновская ЕА., Скавронская А.Г. Выделение и очистка антигенов бруцелл, синтезированных клетками Escherichia coli К12. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.-1992.-№3-4.-С. 12-17.

217. Чикунова Л.1. Бактер1альна забруднешсть пов1тря при промисловому вирощуванш бройлер1в. // Ветеринар1я, 1989, Кшв, В.№50. С. 77-79.

218. Шаблий В.Я. Справочник по ветеринарной санитарии.— М., Колос, 1986, 186 с.

219. Шаблий В.Я. Экономические проблемы повышения ветеринарно— санитарного качества продуктов животноводства. // Материалы международ, науч. конф.— Харьков, 1995. С. 544-547.

220. Шалыгина Н.Б. О роли микробных токсических субстанций в патогенезе острых кишечных инфекций. // Арх. патология. — 1991. — Т. 53, №6. С.3-6.

221. Шарапов Т.А. Дифференциация энтеропатогенных и непатогенных кишечных палочек в культурах тканей. // Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1986, №10. С .29-33.

222. Шахмарданов М.З., Земскова А.Н., Исаева И.П., Аучшев В.И. Поливалентный пиобактериофаг в лечении острых кишечных инфекций. // Рос. мед. журн. — 1997. — №1. —С. 54—55.

223. Шубин В.А. Патоморфологические изменения при колисептицемии цыплят. // Ветеринария, 1992, №1.- С.48-51.

224. Шувалова Е.П., Осипова Г.И., Кроткова М.Р. Актуальные вопросы дизентерии и дисбактериоза. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1997. —№1. —С. 44—48.

225. Эрготропики: регуляторы обмена веществ и использования кормов сельскохозяйственными животными, /пер. с нем. Хеннинг А., Бокер X., Флаховски Г. и др./- М.: Агропромиздат. 1986. - 344с.

226. Ященко Н.Ф. Современные методы дезинфекции при эпизоотиях. // Материалы междун^род. конф.— Харьков, 1995. С. 582-585.

227. Ярных Б.С. Санитарная микробиология и дезинфекция объектов животноводства. //Сб. статей-М.,1981/1982/.-С. 159-161.Труды ВНИИВС.

228. Andreychyn M., Lucuk O., Andreychyn S, Kopcha V. Loka absorba terapio de diarea sindromo. // Medicina internacia revuo- 1990- Vol. 16a, №1. P. 61-62.

229. Andreychyn M., Lutsuk O., Andreychyn S. Enterosorption Effectiveness in Acute and Chronic Colitis/ // 7th International Congress for Infectious Diseases. — (June 10—13, 1996): Abstracts. — Hong Kong, 1996. — P. 114.

230. Andreychyn M., Lutsuk O., Ivakhiv O. Experience of acute intestinal infections and chronic colitis enterosorbents therapy. // 6th International Congress for Infectious Diseases (April 26—30, 1994). — Prague, Czech Republic, 1994. — S. 107.

231. Asav A., Zivkovic J., Polianec D. Totalna raskuzba u klaonici peradi. 11 Veterinaria, 1990. -G. 19, Sv. 1-224-229.

232. Bamba H., Tawa H. Sanitasation of a chicken house contaminated with patogenic microbe. // Res. Bull. Aichi-Ken. Agr. Res. Center Negarute Aichi, 1995, p. 41 5-419.

233. Beer K., Methiling W., Mehlorn G., Erwerth W. Untersuchunge zur Wirksamkeit der prophilaktischen leeninung und Desinfection von Oberflechen in Kalfer- und Schweinestallon. // Mh.Veter Med., 1990, Yg.35, H.3.-S.84-90.

234. Bettilhelm K.A. A. Study of Escherichi coli, isolated from chronic urinary infection. //J. Med. microbial., 1989, v.2, c.3, p. 225-236.

235. Botton E.J. The Genus Yersinia. A handbook of the biology of bacteria ecophysiology, isolation, identification, applications 1992 - vol.III.- P. 2863-2887.

236. Brodendorp E., Durling H. Untersuchungen zur bakteriellen Kotamination von Oberflechen einer Geflugel-productionsanslage unter besonderer Berucksichtiegung der Serviesperiode. 11 Mh. Veter- Med., 1994. Jg.33., H.2.-S.41-42.

237. Chattopadhyay U. K., Rathore R. S., Pal D., Das M. S. Enterotoxigenicity of human and animal isolates of Campylobacter jejuni in ligated rat ileal loops. // J. Diarrhoeal Dis Res. — 1991. — Vol. 9, №1. — P. 20—22.

238. Close D. Patogenicity of E.coli strains for chick embryos. // Journal of bakteriologv, 1989, v.91,&4,p.l410.

239. Doyle M.P. Pathogenic Escherichia coli, Yersinia enterocolitica and Vibrio parahaemolyticus. // Lancet. — 1990. — №8723. — P. 1111—1115.

240. Drobnica L., Parrakova E. The function of bakterial fimbriae. // Arch.immunol.exp.immunol, 1987, v. 16. 52, p. 173.

241. El-AssadF.G. A laboratory system for evaluating poultry transport crate disinfection. // Maryland Univ. College Park. De pt.of Agricultural Engineering, 1992, 278 leaves.

242. Engstroem B. Salmonella control in poultry. // Statens Veterinae-madicinska Anstalt, 1994, p.97, p.97-104.

243. Engvall A. Cleaning and disinfection of poultry houses. // Statens Veterinae-medicinska Anstalt, 1994, p. 155-159.

244. Evans D.G., Evans D.J. New surface-associated heat-labile colonization factor antigen (CFA/II) produced by enterotoxigenic E.coli of serogroups Об and 08. Inf. and Immunity 21, 1978, p.638-647.

245. Evans D.G., Evans D.J., Du Pont H.L. Virulence factors of enterotoxigenic E.coli. Journ.of Inf. Diseases 136, 1977, p. 118-123.

246. Fauchere J.-L., Kervella M., Rosenau A. Adhesion to HeLa cells of Campylobacter jejuni and E. coli outer membrene components. // Res. Microbiol. — 1989. — Vol. 140, №6. — P. 379—392.

247. Foucault M. Laboratory-sized poultry cage disinfection system. // Paper-American Society of Agricultural Engineers, 1992, N.92, 4054, 13 pp.

248. Flandrios J.P. Esherichia coli. Infectologie, 1993. №44 - p.34-37.

249. Froyman R. Epidemiology of respiratory infections. // Intern. Hatchery Practice. -1989. Vol.3, №5. - p.5-11.

250. Giambrone J.J. Controlling poultry deseases: a look at where we are headed // Poultry Dig. 1988. - Vol.47, №560. - p.464-474.

251. Glantz P. Serotypes of Escherichia coli associated with coli bacillosis in neonatal animals. // Ann. N. Y.Acad.Sci., 1990, v.2, p.67-79.

252. Goren E. Colibacillise biv plumtoce. // Tiydschr. Guse L. Microbial protoplasts, spheroplasts and L-forms.— Baltimore, 1990, 163.p.

253. Gross R.J. and Rowe B. Escerichia coli diarrhoea. // J.Hug. Camb.,95, 1985, p.531-550.

254. Hart C. A. Diagnosis of enteric Escherichia coli infections. // Med. Lab. Sci. — 1992. — Vol. 49, №3. — P. 203.

255. Harry E.H. E.coli and how you can control it. // Worlds Poultry Sci. J., 1994, v.24, c.2, p.141-146.

256. Harry E.H. A study of 119 outbreaks of colisepticoemia in broilerflocks. // Vet.Rec., 1994, vol.76, C.16, p.443-445.

257. Hashim N.H., Reda l.M. Coli-Bacillosis in chicks in Saudi Arabia. 11 Trop.Anim.Health and Prod., 1980, v. 12, C.l, p.15-16.

258. Henrigsen S.P. Serotypes of a collection of mucoid gram-negative rods. // Acta path, microbiol., Scand., 1986, v.26,p.424-435.

259. Hines J., Nachamkin I. Effective Use of the Clinical Microbiology Laboratory for Diagnosing Diarrheal Diseases. // Clin. Infect. Dis. — 1996. — Vol. 23,.— P. 1292—1301.

260. Hyden M.J. Salmonella and other pathogenic bacteria in storage // Feed compounder. 1989. - Vol.9, №4. - p.50-52.

261. Kelly W.R. Nettojage, desinfection des poulaillers; les principales operations a effectuer. //L.Agricultuer, 1989, 450; 55, 61-65.

262. Keusch G. Т., Jacewicz M, Mobassaleh M, Donohue-Rolfe A. Shiga toxin: intestinal cell receptors and pathophysiology of enterotoxic effects. //Rev. Infect. Dis. — 1991. —Vol. 13, Suppl. 4. — P. 304—310.

263. Kremerv V. Somatic and capsular antigens of gram-negative bacteria. // Comp.Biochem., 1987, v.26 A, p. 105.

264. Kubicek A., Dvorak P., Ivanska J. Pregivani bacterii na posinkovanem a hlinikovem materialu. // Veter.Med., 1989, r.24, c.l 1.

265. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.1 I Nature 1970.- vol.277.- P. 680-685.

266. Levine MM Escerichia coli that Cause Diarrhea: Enterotoxigenic, Enteropathogenic, Enteroinvasive, Enterohemorrhagic, and Enteroadherent.

267. Manfrela G., Bertuzzi S. Controllo microbiologico del incubatio // Riv. Avicolt. 1989. - vol.58, №10. - p.23-32.

268. McGuirre E. Epidemiology and genetics of R — factors. // Ann. N.Y. Ac.Sci., 1990, v.182, p.141-152.

269. Meger R.C., Rhoades H.E. Episootological investigations of colibacillosis in turkeys. // Avian Diseases, 1992, v.21, C.4, p.514-530.

270. Methods for examinating Poultry Biologies and for Identifying and guantifying Avian Pathogens. // Nat. Acad. Sci., Washington, D.C. 1971. - p.66-99.

271. McQuitty J.В. Air quality in confinement animal housing. Jg. there cause for concern. //Agr Forestry Bull., 1985, 8, 32-38.

272. Miclos L. Medsinorodna spolpraca v zivotnom prosteredy. // Uroda, 1982, r.40, c.2, S.59-60.

273. Mintz E. D., Cartter M. L., HadlerJ. L. Dose-response effect in an outbreak of Salmonella enteritidis. // Epidemiol. Infect. — 1994. — Vol.112, №1. — P. 13—23.

274. Mitra Amal K., Engleberg N. Cary, Glass Roger I., Chowdhury Mridul K. Fatal dysentery in rural Bangladesh. // J. Diarrhoeal Dis. Res. — 1990. — Vol. 8, №1—2. —P. 12—17.

275. Mittermayer H. Durch Antibiotika bedingte Diarrhoen. // Wien. med. Wschr. — 1989. — Bd. 139, №9. — S. 202—206.

276. Miwa T. Studies of entorobakterial lipopolisacharides. // J. Immunol., 1990, v. 76, p.377- 385.

277. Morita M. Treatment of colibacteriosis and other serious infections. // New England Journal of Medicine, 1995, v.263, p.207-221.

278. Mousa S., Soliman A., Bayonimi A.H., Sokkar I.N. The role played by free flying birds in the transmission of avian pathogens. // Assiat veter.med.J. -1988. Vol.20, №39. -p.179-185.

279. Nockels C.F. Vitamin needs increase during stress, desease. // Poultry Dig. 1989. - Vol.48, №567. - p.218-226.

280. Novotny A. Relationship of structure and biological activity of bacterial endotoxins. //Naturwissenschaften, 1991, Bd.58, H.8. S. 397-398.

281. O^donell K.W., Kaufman F. Evaluation of the R-B-system from identification of Enterobacteriaceae. // Arch.J.clin.path., 1987 v.53, C.2, p. 145-148.

282. Ogawa H., Nakamura A., Sakasahi R. Pathogenic properties of Escherichia coli. // Japan. J.Med.Sci.Biol., 1989, v.21, p.333-334.

283. Okamoto К., Nomura Т., Fujii Y., and Yamanaka H. Contribution of the Disulfide Bond of the A Subunit to the Action of Escherichia coli Heat-Labile Enterotoxin // J. Bacterid., March 1998, p. 1368-1374, Vol.180, No.6.

284. Oxvad M, Masolchem D. Controll alle colibscillosi aviarie. // Clin.veter., 1992, v. 102., C4.p.259-269.

285. Poeppel M. Fattening of young poultry: Diseases must be prevented and diagnosed and treated early. // Detch. Geflugelwirtschaft und Sweineproduction, 1992, v.44(35), p.1003-1008.

286. Reddy A.R.M., Reddy P.R. Factors contributing to immunosupression in chicken. // Poultry Adviser. 1988. - Vol.21 - p.53-56.

287. Ritchie B.W., Dreesen D.W. Awian zoonoses: Proven and potential disease. Pt 2. Viral, fungal and miscellanious diseases. Compendium of continuing. // Educat. Practicing Veter. 1988. - Vol.10 - p.688-691.

288. Sarma R., Murata J. Further studies on enteropatogenic E.coli associated with diaerhocal diseases. // Japan. J. Med. Sci. Biol., 1990, v.27,C.l , p. 7-10.

289. Sarma D.K., Sambval D.S. Drug susceptibility of Escherichia coli from domestic fowl. // Zbl.Veterinarmed., 1991, v.28, p.333.

290. Sathanakrishnan В., Sankaranrayanan V. Rice water solution in diarrhoeal dehydration. // Indian J. Pediat. — 1985. — Vol. 52. — P. 479—482.

291. Schufman E. Escherichia coli in newborn lambs. // Brit.Vet.J.,1988, p.127, p.214-219.

292. Scherrod P.S., Bruce V.R. Serological typing of bacteria. // Acta path.microb.Scand.,1993, v.62, p.28-32.

293. Sharma V.P. Drug susceptibility of Escherichia coli from domestic fowl. // Zhl. Veterinarmed, 1991 V.28. - p.333-335.

294. Shoeiv N.K., Sayed A.N., Sotony S.A., Abdel-Ghaffar S.K. Response of broiler chicks to probiotic (profiner) supplementation. Assint.Vet.Med.J. - Vol.36 - 1996. - p.104-114.

295. Smith H. W. The transmissible nature of the genetic factors in bacteriosis that control production. // J.gen.Micribiol., 1994, v. 52, p.319-322.

296. Stahlberg Т.Н., Granfors K., Pekkola-Heino K. Immunoblotting analysis of human IgG, IgM and IgA response to chromosomally coded antigens of Y. enterocolitica ОЗ. // Acta path, microbiol. immunol. scand.-Sect.C.- 1987.- vol.95.- P.71-79.

297. Stewart L.E. Septicemia in poultry. // Indian Veter. J., 1995, v.56, p.629-633.

298. Tesh V.L., O'Brien A.D. The pathogenic mechanisms of Shiga toxin and Shiga-like toxins: MicroReview. // Mol. Microbiol. —1991. — Vol.5 №8. — P.1817—1822.

299. Towbin H., Staehelin Т., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from poliacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1979.- vol.76.- No.9.- P. 4350-4354.

300. Vaschim N.H. De lirnination de la notion des bacteries. // Ann.Inst. Pasteur, 1990, v.99; p.859-874.

301. Weber В., Mans J. Serologiache Untersuchungen der O-Antigene von E.coli. // St.Berlin, Wachr., 1991, v.84; p.441-443.

Информация о работе

Вершняк, Татьяна Викторовна
кандидата биологических наук
Щелково, 2003
ВАК 03.00.23

Диссертация

Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Условно-патогенная микрофлора в птицехозяйствах и диагностика эшерихиоза птиц на основе тест-системы иммуноферментного анализа - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы