Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Участие ферментов и липидов мицелия гриба Lentinus tigrinus в биодеградации фенолов
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология
Автореферат диссертации по теме "Участие ферментов и липидов мицелия гриба Lentinus tigrinus в биодеградации фенолов"
На правах рукописи
Надежина Оксана Сергеевна
участие ферментов и липидов мицелия гриба ьеыттш
тюятт в биодеградации фенолов
Специальность 03 00 23 - биотехнология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
0031758Э0
Саранск - 2007
003175890
Работа выполнена в ГОУВПО "Мордовский государственный университет имени Н П Огарева"
Научный руководитель доктор биологических наук, профессор Д А Кадималиев
Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор
А Н Лихачев
доктор биологических наук, профессор Б П Чураков
Ведущая организация Институт фундаментальных проблем биологии РАН
дании диссертационного совета Д 212 117 12 при ГОУВПО "Мордовский государственный университет им Н П Огарева" по адресу 430023, г Саранск, ул Ульянова, 26, корп "б", конференцзал
С диссертацией можно ознакомиться в научйой библиотеке ГОУВПО "Мордовский государственный университет им Н П Огарева"
Автореферат диссертации разослан " jP" OH^t-^iJ ¡Сд? года
Ученый секретарь диссертационного совета
Защита диссертации состоится " -fc7 " ия^с-г/уЛ JßiSf ;в
часов на засе-
кандидат биологических наук
С А Ибрагимова
общая характеристика работы
Актуальность темы С развитием промышленности и сельского хозяйства в биосферу поступает все большее количество различных ксенобиотиков, в том числе фенолов и фенольных соединений, которые в значительной степени загрязняют окружающую среду В настоящее время нагрузка на естественные процессы самоочищения биосферы является избыточной, и параллельно с деструкцией загрязнений идет их постепенное накопление и преобразование в еще более токсичные соединения Существующие химические и физические способы утилизации фенольных соединений не всегда эффективны В связи с этим разработка теоретических и практических (биотехнологических) основ биодеградации этих веществ является актуальной проблемой биотехнологии и экологии В настоящее время предпочтение отдается микробиологическим технологиям Однако, несмотря на преимущества этих методов, имеется один существенный недостаток Большинство микроорганизмов и биологических агентов не способны функционировать при высоких концентрациях фенолов Вместе с тем содержание фенолов даже в стоках пищевых предприятий, например, коптильных цехов, может доходить до 3% Такие стоки, попадая на биологические очистные сооружения, приводят к гибели микроорганизмов активного ила (Смирнов В Н и др , 2002) В этом плане перспективным может быть использование новых штаммов грибов "белой гнили", обладающих уникальными внеклеточными ферментами лигноли-тического комплекса Благодаря этому они являются единственными организмами способными полностью разрушать один из основных компонентов древесины - лигнин, а также большое количество разнообразных ксенобиотиков (Кадималиев Д А и др, 2003, Рабинович МЛ и др , 2004) Эффективность биодеградации этих соединений зависит от качественного и количественного соотношения внеклеточных ферментов В этом отношении внимание заслуживает гриб ЬеШтиз щппич штамм ВКМ Р-36160 обладающий высокой лигнолитической активностью за счет способности продуцировать нетипичную "желтую" лакказу и секреторную пероксидазу растительного типа (Ревин В В и др , 2000, Кадималиев ДА и др , 2005)
Считается, что немаловажную роль в секреции этих ферментов во внеклеточную среду, играют мембранные структуры, в частности фосфолипиды (ФЛ), которые наряду с жирными кислотами (ЖК) определяют физиологические свойства мембраны -проницаемость, микровязкость, заряд, что особенно важно для транслокации ферментов через мембрану Изменение качественного и количественного состава ФЛ мембран является одним из факторов определяющим ее проницаемость Уровень и механизмы секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду также зависят от изменений в химическом составе мембраны (Несмеянова М А , 1982, Феофилова Е П и др, 1987) Контролируемое изменение физиологических и физико-химических свойств мембраны грибов путем воздействия на липиды модификаторами - органическими растворителями, детергентами, и другими соединениями может быть одним из возможных методов увеличения секреции ферментов во внеклеточную среду Кроме того, есть данные о значительной роли в процессах биодеградации липидов и продуктов их перекисного окисления (Капич А Н , 1995) Установление связи между этими процессами позволит не только лучше понять механизмы участия липидов в функционировании внеклеточного лигнолитического ферментного комплекса (ВЛФК), но и регулировать процессы их синтеза и секреции
Цель и задачи исследования Целью настоящей работы явилось изучение процес-^х са биодеградации фенольных соединений грибом Ь. пцппк1, и выделяемыми им внеклеточными лигнолитическими ферментами, а также подбор условий модификации \
мембраны, обеспечивающий максимальный выход этих ферментов
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи
1 Исследовать процесс биодеградации фенольных соединений грибом £ ¡щппиз и роль отдельных ферментов внеклеточного лигнолитического комплекса в этом процессе,
2 Изучить изменение липидного состава, продуктов перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) мицелия и лигнолитической активности гриба tlgrmus в процессе роста и биодеградации фенола,
3 Установить взаимосвязь между изменением липидного состава, активностью ферментов лигнолитического комплекса и биодеградацией фенола,
4 Подобрать модификаторы клеточной мембраны, их концентрацию и время внесения для повышения выхода ферментов лигнолитического комплекса,
5 Разработать варианты практического использования гриба Ь П£пп№ для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в промышленных сточных водах
Научная новизна работы Впервые показана способность гриба Ь гщгтиз расти и развиваться в присутствии высоких концентраций фенола (до 5%), а также возможность его использования для биодеградации фенола и его производных Установлено, что лакказа играет в этом процессе ведущую роль, а роль пероксидазы в большей степени заключается в детоксикации образующихся токсичных продуктов его разрушения Причем для эффективной биодеградации фенола необходима секреция этих ферментов в определенных соотношениях
Впервые исследован состав липидов и продукты их окисления в мицелии гриба Ь п^гаш.? ВКМ Р-3616 О Выявлена взаимосвязь между составом липидов мицелия и секрецией лигнолитических ферментов Установлено, что фазе активного роста и максимальной секреции ВФЛК соответствует повышенное содержание легко окисляемых ФЛ, ненасыщенных ЖК и вместе с тем низкое содержание продуктов ПОЛ В идиофазе, характеризующейся более низким выходом внеклеточных лигнолитических ферментов, повышается доля более стабильных ФЛ, насыщенных ЖК и продуктов ПОЛ
Исследовано влияние модификаторов клеточной мембраны на секрецию лигнолитических ферментов грибом Ь щгтия при глубинном культивировании Показано, что повышение лакказной и пероксидазной активностей в культуральной жидкости по сравнению с контролем наблюдается на 6 сутки роста, при добавлении модификаторов мембраны (бутанола и толуола для лакказы, ЭДТА для пероксидазы) на 3 сутки, т е в начале продуцирования и секреции лигнолитических ферментов Максимальной лакказной и пероксидазной активностям соответствует определенное соотношение ФЛ и ЖК
Исследовано влияние новых пирролохинолинов 7-гидроксикарбонил-1,2,3-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-^хинолина (1) являющегося витаминоподобным аналогом РС)(2 и 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1Н-пирроло[3,2^]хинолина (2) на рост и развитие гриба Ь Щппт Показано, что пирролохинолин (1) оказывает стимулирующее действие на рост и развитие гриба, в то время как трифторзамещенный пирролохинолин (2) затормаживает развитие культуры гриба
Научно-практическая значимость работы Результаты исследований расширяют представления о механизмах биодеградации токсичных веществ фенольной природы грибом белой гнили Ь й$ппиз и роли отдельных ферментов в этом процессе, участия липидов в процессах секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду
Предложены новые приемы увеличения выхода ферментов лигнолитического комплекса, путем модификации клеточной мембраны Полученные результаты могут служить основой для увеличения эффективности старых и разработки новых методов биодеградации ксенобиотиков фенольной природы и лигноцеллюлозных субстратов Предложена технология практического использования гриба Ь ¡щппих для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в сточных водах
Связь работы с научными программами Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках научно-практических работ при поддержке программы "Развитие научного потенциала высшей школы 2006-2008" РНП 2 1 17708 «Моделирование и кинетический анализ процессов деструкции лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков с участием ферментов и липидов», гранта Минобрнауки РФ по поддержке ведущих научных школ РИ-112/001/350 "Исследование физиолого-биохимических свойств базидиальных грибов (на примере Рапт Щппия) и физико-химических свойств секретируемых ферментов для получения новых материалов", гранта Роснауки по поддержке молодых ученых, шифр 2006-РИ-19 0/001/079 "Исследование свойств лигнолитических ферментов гриба Рапия гщгтиэ и их роли в биодеградации растительных отходов и токсичных веществ"
Апробация работы Основные результаты диссертационной работы были представлены для обсуждения на Огаревских чтениях в Мордовском государственном университете им Н П Огарева (Саранск, 2004-2006), на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им Н П Огарева (Саранск, 2005-2006), на 10 - ой Путинской школе - конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), на IV Съезде общества биотехнологов России им Ю А Овчинникова (Пущино, 2006), на 14-ой международной конференции «Математика Компьютер Образование» (Пущино, 2007), VI Республиканской научно-практической конференции «Наука и инновации в Республике Мордовия» (Саранск, 2007)
Публикации По теме диссертации опубликовано 21 печатных работ, в числе которых 2 статьи в российских научных журналах, рекомендованных ВАК и подана заявка на патент
Структура и объем диссертации Материалы диссертации изложены на тЗУ страницах машинописного текста Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы Диссертационная работа включает Л рисунка и 3 таблицы Список цитируемой литературы включает источников, в том числе /^Уна иностранных языках
Благодарность Выражаю искреннюю благодарность и признательность научному руководителю доктору биологических наук Кадималиеву Давуду Али-оглы за плодотворные советы при проведении экспериментов, внимание и помощь в подготовке диссертации Выражаю особую благодарность заведующему кафедрой биотехнологии МГУ им Н П Огарева доктору биологических наук, заслуженному деятелю науки РФ Ревину Виктору Васильевичу, кандидату биологических наук Атыкян Нелли Альбертовне и всему коллективу кафедры биотехнологии МГУ им Н П Огарева за поддержку при выполнении диссертационного исследования
содержание работы
ВВЕДЕНИЕ
Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи ис-
следования, научная новизна и практическая ценность полученных результатов, указан личный вклад соискателя
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Общая характеристика дереворазрушающих грибов и их применение
В главе представлены классификация и общая характеристика дереворазрушающих грибов Описаны примеры практического применения лигнолитических грибов и выделяемых ими ферментов, в том числе и в процессах биодеградации фенолов и их производных
ГЛАВА 2 Внеклеточный лигнолитический ферментный комплекс
В главе представлен обзор основных работ, посвященных внеклеточным ферментативным системам базидиальных грибов Рассматриваются строение, свойства, механизмы действия основных ферментов, входящих в состав внеклеточного лигнолитического ферментного комплекса базидиомицетов, а также их роль в процессах биодеградации фенольных соединений
ГЛАВА 3. Роль липидов в функционировании лигнолитических грибов
В главе приведены современные представления об особенностях строения и химического состава клеток лигнолитических грибов, описаны механизмы участия липидов, а также роль процессов их перекисного окисления в секреции и функционировании лигнолитических ферментов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 4. Объект и методы исследования
Объектом исследования служил лигнолитический гриб Panus (Lentinus) tigrinus (Bulliard Fries) Fries 317 выделенный сотрудниками кафедры биотехнологии Мордовского государственного университета им Н П Огарева, и депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов РАН под номером ВКМ F-3616 D (Ревин В В идр, 1998)
Гриб поддерживали на косяках с сусло-агаром Для приготовления инокулята L tigrinus культивировали в течение 4 суток на жидкой среде Чапека-Докса, содержащей 15 г/л лигносульфоната Дальнейший рост продуцента проводили глубинным способом на питательной среде (Eggert С et а!, 1996) с добавлением березовых опилок (20 г/л) в течение 3,6 и 9 суток
Выращивание гриба L tigrinus в экспериментах по изучению процессов биодеградации фенольных соединений проводили с добавлением фенола в концентрации 1 и 5 % Фенол добавляли на третьи (трофофаза) и шестые (идиофаза) сутки роста культуры
Изучение роли отдельных ферментов внеклеточного лигнолитического комплекса гриба L tigrinus в процессе биодеградации фенольных соединений и лигноуглеводных комплексов (ЛУК) березы и сосны велись на спекторофометре "Specord М-40" по изменению характера и интенсивности поглощения этих веществ в ультрафиолетовой и видимой областях спектра
В экспериментах по подбору модификаторов клеточной мембраны с целью увеличения секреции ферментов лигнолитического комплекса гриба L tigrinus, культивирование проводили с добавлением бутанола и толуола в концентрациях 1 и 5 %, ЭДТА и DDS-Na в концентрациях 0,2 и 0,8 %, а также пиррохинолинов 7-
гидроксикарбонил-1,2,3-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-1]хинолина (1) и 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1Н-пирроло[3,2-§]хинолина (2) в концентрациях 10"4 и 5 10 4М Модификаторы добавляли на нулевые (лаг-фаза развития гриба), третьи (трофофаза) и шестые (идиофаза) сутки роста культуры
В экспериментах по изучению возможности практического использования гриба L hgrinus для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных выращивание культуры гриба L tigrmus проводили на стоках коптильного цеха ЗАО Мясоперерабытывающего комплекса "Атяшевский" смывах, образуемых в результате мойки коптильных камер и конденсате коптильного дыма 0,5л стоков без разбавления после доведения рН до 6,0 помещали в ферментер ("ОКА - Ml") объемом 1л
Выделение лигнолитических ферментов (лакказы и пероксидазы) проводили методом ионообменной хроматографии, как описано в работах В В Ревина с соавт, 2000 и Д А Кадималиева с соавт, 2005
ЛУК березы и сосны получали методом экстракции диметилсульфоксидом с последующим фракционированием на колонке с сефадексом G-75 (Решетникова И А и др, 1995)
Активность лигнолитических ферментов определяли спектрофотометрически лакказы по окислению пирокатехина при 410 нм (е = 0,740 мМ 'хсм ') (Синицын А П и др , 1990), а пероксидазы по окислению о-дианизидина при длине волны 460 нм (s = 30 мМ 'хсм"1) (Ugarova NN et al, 1979) За единицу активности принимали окисление 1 микромоля субстрата за 1 мин в 1 мл культуральной жидкости Удельную активность определяли как мкмоль/ мин/ мг белка
Содержание белка определяли по методу Бредфорд (Bradford М М , 1976) Содержание биомассы определяли весовым методом
Содержание фенола контролировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе Миллихром 4 (Россия) (Сычев С Н и др , 2002) и фотоколориметрически на фотоэлектроколориметре КФК-2 (Россия) по реакции с 4-аминоантипирином (Лурье Ю Ю , 1973)
ХПК определяли бихроматным методом БПК определяли по изменению содержания растворенного кислорода (Новиков Ю В и др , 1990)
Липиды из мицелия гриба экстрагировали методом Блайя-Дайера (Bligh Е et al, 1959) Качественный анализ смеси липидов анализировали методом микротонкослойной хроматографии на силикагеле Разделение на фракции проводили двумерно в системах Брокхьюза (Broeckhuyse R М, 1968) Идентификацию отдельных фракций ФЛ проводили, используя специфические окрашивающие реагенты, "свидетели" и значения Rf Определение микроколичеств ФЛ проводили по методу Васьковского с соавторами (Vaskovsky V Е et al, 1975)
Содержание диеновых и триеновых коньюгатов (ДК и ТК) определяли спектро-фотометрическим методом по поглощению в УФ-области, рассчитывая индексы окисленности ИОдк = А235/А215, ИОтк = А275/А215 (Орехович В Н , 1977) Малоновый диальдегид (МДА) определяли в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (Сталь-наяИДидр, 1977)
Состав метиловых эфиров ЖК анализировали методом газожидкостной хроматографии на хроматографе Кристалл 5000 1 (Россия) с капиллярной колонкой HP-FFAP 50m/0,32mm/0,5/xm (США) Метилирование ЖК проводили по методу Моррисона и Смита (Morrison W R et al, 1964)
Полученные экспериментальные данные статистически обрабатывали с использованием электронных таблиц Microsoft Excel 2000 и пакета программ STAT 2 Линейную аппроксимацию данных проводили с использованием пакета статистической
обработки результатов приложения Microsoft Ecxel 2000.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ГЛАВА 5. Биодеградация фенольных соединений и лигнина грибом Ъепйпт Л^пия и выделяемыми им внеклеточными лигнолитическими ферментами
Рост культуры гриба tigrinus в условиях погруженного культивирования в основном наблюдается в виде быстро оседающих пеллетов, что очень важно для биотехнологической очистки жидких стоков при отделении активного ила во вторичных отстойниках. В условиях глубинного культивирования на среде с березовыми опилками гриб Ь. й^пив довольно медленно накапливал биомассу. Рост гриба в некоторой степени тормозился недостатком азотного питания в среде культивирования, что создавали искусственно, с целью стимуляции синтеза ВЛФК (Кеувег Р. й а1., 1978). Добавление фенола в среду для культивирования после 3 суток роста в концентрации до 5% не вызывало угнетения роста культуры гриба I. ¡^пш« (рисунок 1,А).
А Б В
□ Контроль S I % фенола S2 5% фенола
6 9 9
Время культивирования, сутки
Рисунок 1. Рост культуры гриба!. И^ппт в присутствии фенола (А) и его влияние на накопление биомассы: Б - при добавлении фенола в трофофазу, В - при добавлении фенола в идиофазу
Более того, не зависимо от концентрации и времени внесения фенола содержание биомассы возрастало на протяжении всего периода культивирования, и было выше, чем в контрольных вариантах (рисунок 1,Б,В).
Вероятно, накопление биомассы связано с одной стороны со способностью гриба использовать фенольные соединения в качестве дополнительного источника углерода и энергии. С другой стороны фенолы могут выступать индукторами лигнолитических ферментов, так как гриб стремиться к снятию фенольного барьера в среде путем активного синтеза ароматолитических (лигнолитических) ферментов.
Степень биодеградации фенола культурой гриба зависела от его концентрации и времени внесения. При добавлении фенола в трофофазу к девятым суткам убыль фенола составила около 60 % (рисунок 2,А), а при добавлении фенола в идиофазу в концентрации 5% около 70% от исходного количества (рисунок 2,Б). Тенденция снижения содержания фенола в среде имела одинаковый характер и для концентрации 1% и для концентрации 5%. Об этом свидетельствует и интегрирование данных по убыли
А
Время культивирования сутки
- -О- ->% -А-5%
- - - - Линейный (1%) Линейный (5%)
Б
Время культивирования сутки
- 43- - 1% -*-5%
- - - - Линейный (1%)-Линейный (5%)
Рисунок 2 Убыль концентрации фенола культурой гриба Ь Щппш при его добавлении в трофофазу (А) и идиофазу (Б)
фенола Уравнения прямых интегрирования содержат практически одинаковые коэффициенты, то есть скорость деградации свободного фенола одинакова с 3 по 6 сутки
Таким образом, Ь Н&тш способен расти и развиваться в присутствии фенола и его можно использовать для биодеградации фенолов и его производных Для установления роли ферментов в этом процессе мы исследовали также уровень и динамику синтеза и секреции отдельных ферментов в присутствии фенола
Наши исследования показали, что фенол оказывал различное действие на активность и соотношение лигнолитических ферментов в зависимости от используемой концентрации и времени его внесения Добавление фенола в концентрации 5% в трофофазу стимулировало синтез лакказы, активность которой к 6 суткам роста была намного выше, чем в контрольном варианте (рисунок 3,А), пероксидазная же активность оставалась такой же, как и в контрольном варианте, однако к 9 суткам роста она была выше, чем в варианте с 1% фенола и контроле (рисунок 3,Б)
Внесение фенола в идиофазу (фаза синтеза вторичных метаболитов, в том числе, и лигнолитических ферментов) в концентрации 1 и 5% приводило к увеличению общей лакказной активности (рисунок 4,А) При этом фенол оказывал стимулирующее воздействие и на пероксидазную активность, особенно при внесении в концентрации 5% (рисунок 4,Б) С учетом характера изменений активности ферментов мы предположили, что лакказа играет в этом процессе ведущую роль, а пероксидаза в этом про
Время культивирования. сутки —■— Актимгость-контроль —А— Активность-1% фенола —♦—Акта нность-5% фенола - -о • Уд.актинность-кпнтроль - • Уд.активность-1% фенола * -О * Ул.актннность-5% фенола
Время культивирования, сутки —■— Активность-контроль А Активность-1% фенола —♦—Лктивность-5% фенола - О ■ Улактивность-контроль - -Д - Ул.актипность-1% фенола • -О • Ул.активность-5% фенола
400.0
I
7.
300.0 и} |
200,0 5
Рисунок 3. Изменение лакказной (А) и пероксидазной (Б) активности гриба Ь. ^ппш при добавлении фенола в трофофазу
Время культивирования, сутки
— Активность-кокгро ль —Л— Активность-1 % фешла
—Акпвнистъ-5% фонола - -О - Уд.активиость-конгроль
ь-1% фенола - -О - Ул.акишпос1ь-$% фенола
—Акгивюсть-кошроль —*—Акпвтстъ-1%фс1ыла
—Аюшиоеть-5% фенола - О * Уддепшнмпъ-кпнфоль • Ул акгнвтсть-1 % фенола - - Уд-акгивностъ-5% фенола
500.0
20,00
§
2 15,00 1
| 10,00 5,00
400.0
й I
г
300,0
|
200,0 | I
100,0
1 6 Время культивирования, с\тки
Рисунок 4, Изменение лакказной (А) и пероксидазной (Б) активности гриба!, при добавлении фенола в идиофазу
цессе, вероятно, участвует в детоксикации образующихся под действием других ферментов токсичных продуктов его разрушения Причем для эффективной биодеградации фенола необходима секреция этих ферментов в определенных соотношениях
Для того чтобы подтвердить это предположение мы провели модельные эксперименты по исследованию влияния выделенных ферментных препаратов лакказы и пероксидазы на вещества фенольной природы При воздействии лакказы на фенол, гваякол и пикриновую кислоту наблюдалось уменьшение величины оптической плотности, а на орто-фенилендиамин, р-динитрофенол и бензидин наблюдалось увеличение величины оптической плотности В то же время лакказа не вызывала изменений в спектрах резорцина При воздействии пероксидазы на ЛУК древесины березы и сосны в присутствии перекиси водорода происходило окисление ароматической части лигнинового компонента этих комплексов В отсутствии перекиси, фермент в большей степени вызывал полимеризацию низкомолекулярных фрагментов ЛУК
ГЛАВА 6 Взаимосвязь состава липидов и продуктов их перекисного окисления с секрецией лигнолитических ферментов в процессе роста ЬепНпия tigrlnus
Уровень и механизмы секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду зависят от изменений в химическом составе цитоплазматической мембраны, важнейшими компонентами которой, являются ФЛ (Несмеянова М А , 1982) В связи с этим на следующем этапе мы изучали взаимосвязь изменения состава липидов, продуктов их перекисного окисления с лигнолитической активностью гриба Ь Щппт при глубинном культивировании
В процессе культивирования общее содержание липидов в мицелии возрастало При этом доля нейтральных липидов (НЛ) увеличивалась, а ФЛ снижалась Полученные результаты согласуются с данными других авторов, которые показали, что для грибов «белой гнили» характерно значительное преобладание во фракционном составе НЛ (Капич АН и др , 1993)
ФЛ мицелия Ь и^ппт представлены следующими фракциями - лизофосфати-дилхолин (ЛФХ) + сфингомиелин (СФМ), фосфатидилсерин (ФС) + фосфатидилино-зит (ФИ), фосфатидная кислота (ФК), фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилэтанола-мин (ФЭА), фосфатидилглицерин (ФГ) Рост гриба сопровождался изменениями в соотношении ФЛ, без изменения их качественного состава (рисунок 5,А) Интенсивный рост мицелия характеризовался высоким содержанием ФЭА В идиофазе прирост биомассы снижался, и увеличивалась доля ФХ
Состав ЖК общих липидов (ОЛ) мицелия гриба в процессе роста практически не изменялся Обнаружены следующие кислоты пальмитиновая (С 16 0 ПЛК), стеариновая (С 18 0 )> олеиновая (С 181), линолевая (С 18 2ЛНК), линоленовая (С 18 3), миристи-новая (С 14 о), лауриновая (С 12 о), арахидоновая (С 20 4), бегеновая (С 22 о) (рисунок 5,Б) Мицелий активно растущей культуры содержал больше ненасыщенных ЖК, среди которых преобладала ЛНК Значительную долю насыщенных ЖК составляла ПЛК Коэффициент ненасыщенности (Кн) ЖК был максимальным В идиофазе доля ненасыщенных ЖК и, как следствие, Кн существенно ниже
Наличие ненасыщенных ЖК и, прежде всего ЛНК, в липидах гриба Ь (щгти$ создает предпосылки для активации процессов ПОЛ Согласно исследованиям Капи-ча, образующиеся при этом перекисные радикалы могут участвовать в расщеплении лигнина как непосредственно, так и через активацию лигнолитических ферментов (Капич АН и др , 1990, 1993, 1995) В трофофазе в мицелии гриба £ ¡щгтт наблю дается относительно невысокое содержание ДК и ТК - первичных продуктов ПОЛ
А
Время культивирования, сутки
а фг а фэа н фк ш фх □ фс+фи в лфх+сфм Б
Время культивирования, сутки □ с12:0 вс14:0 вс16:0 «шс18:0 qc18:i 0с18:2 ис18:3 в с20:4 и с22:0
Рисунок 5. Изменение состава ФЛ (% от суммы ФЛ) (А) и ЖК (Б) мицелия гриба L. tigrinus в процессе роста
(таблица 1). Вероятно, это связано с активным потреблением грибом доступного углеводного субстрата - глюкозы, присутствующей в среде, а потребление углерода опилок, в том числе и лигнина, будет происходить только при недостатке питания, т.е. в идиофазу. Действительно, в идиофазе содержание ДК и ТК резко увеличивается, хотя доля легкоокисляемых липидов становится меньше, что связано, вероятно, со снижением в липидной компоненте мембран природных биоантиоксидантов, в результате клетки уже не способны эффективно регулировать содержание продуктов ПОЛ. Можно полагать, что повышение доли более стабильных липидов в идиофазе является одним из механизмов, с помощью которого клетки поддерживают на стационарном уровне окислительные реакции в липидах мембран. Количество МДА возрастало в течение всего времени культивирования. Несоответствие между накоплением первичных (ДК и ТК) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ можно объяснить тем, что гидроперекиси, определяемые по поглощению в УФ-области, в большей степени характеризуют окисление ненасыщенных ЖК. А ТБК-активные продукты образуются не только при взаимодействии с МДА, но и другими метаболитами, например, его
предшественниками - карбонильными соединениями (альдегидами и альдегидкисло-тами), образующимися в результате разрыва углеводородных цепей гидроперекисей ЖК (Бурлакова Е.Б., 1985).
Таблица 1. Изменение содержания продуктов ПОЛ в мицелии гриба I. tigrinus в процессе роста
Время культивирования, сутки ДК, Е/мг липидов ТК, Е/мг липидов МДА, наномоль/мг биомассы
3 26,4±1,3 24,2±1,2 6,2±0,3
6 24,5±1,2 15,7±0,7 11,9±0,5
9 42,3±2,1 30,8±1,5 33,8±1,6
12 48,1±2,4 36,2±1,8 52,8±2,6
Таким образом, анализ экспериментального материала позволил выявить корреляцию между уровнем синтеза ВЛФК и изменениями в липидном составе мицелия гриба Ь. tigrinus. Фазе интенсивного образования ВФЛК соответствует повышенное содержание легкоокисляемых ФЛ, ненасыщенных ЖК и низкое содержание продуктов ПОЛ. При переходе в идиофазу повышается доля более стабильных ФЛ, насыщенных ЖК и продуктов ПОЛ.
ГЛАВА 7. Исследование взаимосвязи между биодеградацией фенола и изменениями в липидном составе мицелия гриба Ьепйпт ^ппю
В присутствии фенола в среде происходило изменение количественного соотношения индивидуальных фракций ФЛ, без изменения их качественного состава. При внесении фенола в трофофазу (рисунок 6,А) к 6 суткам роста происходило снижение содержания ФХ и вместе с тем увеличение его лизоформы.
А Б
6 9 9
Время кулыпвнрования, сутки
□ Контроль а ]%фенола В 5%фенола
Рисунок 6. Изменение соотношения индивидуальных фракций ФЛ (% от суммы ФЛ) в мицелии гриба I. при добавлении фенола в трофофазу (А) и идиофазу (Б)
Из литературных источников известно, что увеличение содержания ЛФХ является деструктивным фактором, в больших количествах он обладает хаотропным свойством, оказывая структурно-деформирующий эффект на мембранные структуры клеток (Артюхов В Г и др , 2000, Болдырев А А и др , 2006)
Фенол вызывал ингибирование процессов ПОЛ Независимо от концентрации и времени его внесения наблюдалось снижение содержания первичных продуктов пе-рекисного окисления липидов ДК и ТК (таблица 2) Вероятно, это связано со способностью фенола тормозить цепное окисление путем взаимодействия с перекисными радикалами окисляющихся ненасыщенных ЖК (Антонов В Ф и др , 2000)
Таблица 2 Влияние фенола на изменение содержания продуктов ПОЛ в мицелии гриба Ь (щппиз
Концент Время ДК, ТК, МДА,
рация фено- добавления, уел Ед/ уел Ед/ наномоль/
ла, % сутки мг липидов мг липидов мг биомассы
3 6 9 3 6 9 3 6 9
Контроль 26,9 20,5 42,3 24,2 15,7 30,8 6,2 11,9 33,8
±1,3 ±1,0 ±2,1 ±1,2 ±0,8 ±1,5 ±0,3 ±0,6 ±1,6
1 3 26,4 10,4 29,8 24,2 10,7 18,4 6,2 24,6 30,2
±1,3 ±0,5 ±1,4 ±1,2 ±0,5 ±0,9 ±0,3 ±1,2 ±1,5
6 26,4 20,5 25,0 24,2 15,7 25,7 6,2 11,9 31,5
±1,3 ±1,0 ±1,2 ±1,2 ±0,7 ±1,2 ±0,3 ±0,5 ±1,5
5 3 26,4 13,5 15,9 24,2 5,5 13,3 6,2 16,2 27,7
±1,3 ±0,6 ±0,7 ±1,2 ±0,2 ±0,6 ±0,3 ±0,8 ±1,3
6 26,4 20,5 22,5 24,2 15,7 22,0 6,2 11,9 27,0
±1,3 ±1,0 ±1,1 ±1,2 ±0,7 ±1,1 ±0,3 ±0,5 ±1,3
ГЛАВА 8. Влияние модификаторов мембраны на уровень секреции лигнолитических ферментов и изменения в составе мембран
Исходя из полученных, выше приведенных данных мы предположили, что одним из возможных методов увеличения секреции ферментов во внеклеточную среду может быть контролируемое изменение физико-химических свойств мембраны грибов путем воздействия на липиды модификаторами - органическими растворителями, детергентами и другими соединениями
В связи с этим следующим этапом экспериментальной работы являлось исследование влияния модификаторов клеточной мембраны - бутанола, толуола, ЭДТА, 008-1Ча, а также пирролохинолинов на лакказную и пероксидазную активности Ь а-£ппиз, и изменения в липидах мембран гриба, а также установление оптимальной концентрации и времени внесения модификаторов с целью увеличения уровня секреции лигнолитических ферментов
Внесение модификаторов мембраны в питательную среду одновременно с ино-кулятом угнетало и рост культуры, и секрецию лигнолитических ферментов Вероятно, это связано с нарушением межклеточных взаимодействий отдельных гиф, в результате чего, мицелий не образовывал пеллеты и был распределен в среде в виде отдельных гиф
При более позднем внесении, в трофофазу, когда скорость деления и роста грибной культуры максимальны, в присутствии бутанола и толуола в концентрации 1%
лакказная и пероксидазная активности культуры гриба возрастали. Добавление ЭДТА в грофофазу незначительно повышало лакказную активность культуры, в то же время происходило резкое увеличение пероксидазной активности (рисунок 7). В литературе имеются данные о том, что ЭДТА в концентрации более 6 мМ ингибирует лакказную активность (Xiao Y et al., 2002). Данные же об ингибировании пероксидазы этим ком-плексообразователем в исследуемых концентрациях в литературе не встречаются. По-видимому, повышение выхода лакказы во внеклеточную среду под действием ЭДТА частично нивелируется его ингибирующим действием на лакказную активность, вследствие извлечения и связывания ионов Си2+, находящихся в активном центре. Добавление DDS-Na вызывало снижение лакказной, но, вместе с тем, увеличивало пероксидазную активность, однако, эффект стимуляции был гораздо ниже.
А Б
II/.мл
30
6 9
Время культивирования, сутки Время культивирования, сутки
Рисунок 7. Динамика изменения лакказной (А) и пероксидазной (Б) активностей культуры гриба Ь. t¡gr¡nus при внесении модификаторов в трофофазу
При внесении модификаторов в питательную среду в идиофазу лакказная и пероксидазная активности к 9 суткам роста были несколько ниже или незначительно отличались от контрольного варианта.
Одной из возможных причин наблюдаемого повышения секреции лакказы и пероксидазы может быть влияние модификаторов на липидные компоненты мембран. Наши исследования показали, что в контроле, и при внесении модификаторов в тро-фофазе, в низкой концентрации на 6 сутки роста (во время максимальной лигнолити-ческой активности культуры) обнаружено относительно высокое содержание ненасыщенного ФЭА. Повышение концентрации бутанола и толуола до 5%, а ЭДТА до 0,8% незначительно повлияло на фракцию ФЭА, однако снизило долю ФХ (рисунок 8,А). При дальнейшем культивировании до 9 суток происходило повышение доли ФХ и снижение доли ФЭА (рисунок 8,Б).
Такая же тенденция наблюдалась при внесении модификаторов в идиофазу. Вместе с тем, независимо от концентрации и времени внесения модификаторов наблюдалось увеличение фракции ЛФХ в течение всего процесса культивирования.
Исследование жирно-кислотного состава липидов мицелия выявило, что внесение модификаторов мембраны вызывало изменение в количественном распределении ЖК в мицелии гриба, не затрагивая их качественного состава. Заметное влияние на жирно-кислотный состав оказало внесение 1% бутанола и толуола, а также 0,8%
ED контроль ■ 1%бутанола И 5%бутанола В 1%толуола □ 5%толуола В 0,2%ЭДТА Q 0,8%ЭДТА И 0,2%DDS-Na И 0,8%DDS-Na
□ контроль
В 1%бутанола ЕЭ 5%бутанола В 1%-голуола
□ 5%толуола Н 0,2% ЭДТА
0,8% ЭДТА
Рисунок 8. Состав ФЛ мицелия гриба Ь. ^гшш на б (А) и 9 (Б) сутки роста при внесении модификаторов мембраны в трофофазу (в % от суммы ФЛ)
ЭДТА в трофофазу. В присутствии бутанола происходило увеличение Кн за счет увеличения доли олеиновой (С |8:1), линолевой (С и^), линоленовой (С 18: з), и снижением ДОЛИ миристиновой (С |4: о), ПЭЛЬМИТИНОВОЙ (С 16:0 ), стеариновой (С !8:о ) кислот; а в присутствии толуола - повышением доли линолевой кислоты (С |8:2)- Повышение концентрации модификаторов до 5% приводило к снижению доли ненасыщенных ЖК и, как следствие Кн. В присутствии 0,8% ЭДТА Кн уменьшался на 25%, что было обусловлено увеличением доли пальмитиновой (С ,б:0 ) и стеариновой (С 18:0 ) кислот (рисунок 9).
И контроль И 1%буганола И 5%буганола В 1 %толуола О 5%толуола в 0,2%эдта п 0,8%эдта
Рисунок 9. Состав ЖК мицелия гриба ¿. tigrinus на 6 сутки роста при внесении модификаторов мембраны в трофофазу (в % от суммы площадей идентифицированных пиков)
По-видимому, добавление бутанола и толуола в питательную среду разжижает мембрану, увеличивает "текучесть" липидов мембраны. И если это увеличение не выходит за пределы физиологической нормы, то не происходит снижения метаболиче-
ской активности, а скорости трансмембранных переходов повышаются
Таким образом, повышение лакказной и пероксидазной активностей в культу-ральной жидкости по сравнению с контролем наблюдается на 6 сутки роста, при добавлении модификаторов мембраны (бутанола и толуола для лакказы, ЭДТА для пе-роксидазы) на 3 сутки, те в начале продуцирования и секреции лигнолитических ферментов Максимальной лакказной и пероксидазной активностям соответствует определенное соотношение ФЛ и ЖК
Характер воздействия пирролохинолинов на физиолого-биохимические характеристики гриба Ь и^ппт зависел от их химической структуры, используемой концентрации и времени внесения Полученные данные свидетельствуют о том, что 7-гидроксикарбонил-1,2,3-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-£]хинолин (1) оказывал стимулирующее действие на лакказную и пероксидазную активности, секрецию внеклеточного белка и накопление биомассы Добавление 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1Н-пирроло[3,2-§]хинолина (2) отрицательно действовало на рост и развитие гриба, что выражается в общем снижении лакказной и пероксидазной активностей, а также концентрации белка При этом не зависимо от концентрации и времени добавления характерный рост в виде шариков или пеллет полностью отсутствовал, и мицелий оставался в среде в виде отдельных гиф
Одновременно с изучением изменения ферментативной активности исследовали влияние пирролохинолинов на изменение фосфолипидного состава мицелия гриба Ь й^пш Было обнаружено, что внесение пирролохинолинов (1) и (2) приводит к изменению количественного соотношения фракций ФЛ без изменения их качественного состава При добавлении пирролохинолина (1) в трофофазу к 9 суткам роста наблюдалось изменение содержания основных фракций ФЛ увеличение содержания ФХ и снижение содержания ФЭА Такая же тенденция наблюдалась и при внесении пирролохинолина (1) в идиофазу При внесении пирролохинолина (2) в среду для культивирования также наблюдалось изменение содержания основных фракций ФЛ, однако в отличие от пирролохинолина (1) увеличение доли ЛФХ было значительно выше
Таким образом, пиррохинолоны в зависимости от химической структуры оказывали разное влияние на рост и развитие грибов - на биосинтез и активность ферментов, накопление биомассы Пирролохинолин (1), являясь вероятно витаминоподоб-ным аналогом Р<3<3, оказывает стимулирующее действие, а пирролохинолин (2) в диапазоне исследуемых концентраций оказывает отрицательное действие на все изучаемые параметры роста и развития гриба Независимо от концентрации и времени добавления пирролохинолинов происходит изменение фосфолипидного состава мицелия лигнолитического гриба Ь Ьщппиъ
Исходя из полученных результатов, можно полагать, что интенсивность секреции ферментов лигнолитического комплекса и их соотношение можно регулировать подбором соответствующих модификаторов Использование бутанола и толуола позволяет повысить выход лакказы, а ЭДТА - пероксидазы Использование пирролохинолина (1) позволяет повысить уровень секреции как лакказы, так и пероксидазы ,
ГЛАВА 9. Биодеградация фенолов в стоках коптильных цехов ю
мясоперерабатывающих предприятий /гЛЧ
Фенольные соединения относятся к числу наиболее распространенных полл^ тантов водных экосистем Одним из источников загрязнения поверхностных вод фенолами является пищевая промышленность, в частности коптильные цеха мясоперерабатывающих предприятий Нами было показано, что гриб £ гщппиз способен расти и развиваться на жидких средах содержащих до 5% фенолов Поэтому на следующем
этапе своей работы мы исследовали возможность практического использования культуры гриба Ь 1щппив для биодеградации фенольных соединений в стоках коптильных цехов мясоперерабатывающих предприятий для разработки биотехнологического приема их обезвреживания
Объектом исследования являлись стоки коптильного цеха мясоперерабатывающего предприятия смывы, образуемые в результате мойки коптильных камер и конденсат коптильного дыма с уровнем загрязненности по показателю химического потребления кислорода (ХПК) -22528 мг 02/л и 22960 мг 02/л и содержанием фенола 3 и 0,3% соответственно
Культура гриба Ь активно росла на стоках коптильного цеха мясокомби-
ната, о чем свидетельствует увеличение содержания биомассы наблюдаемое как при росте на смывах, так и на конденсате (таблица 3), но при росте на смывах наблюдалось более интенсивное увеличение содержания биомассы Вероятно, это можно объяснить тем, что смывы кроме фенольных соединений содержат также жиры и другие питательные вещества, что благоприятно влияет на рост культуры гриба
Таблица 3 Показатели качества стоков коптильного цеха мясокомбинатов обработанных грибом Ь 1щгти$
Показатели Смыв Конденсат
качества до засева 3 сутки 6 сутки до засева 3 сутки 6 сутки
Биомасса, г/л - 30,0±1,5 35,0±1,7 - 25,0±1,2 28,0±1,4
Содержание фенола, мг/мл 30,0±1,5 18,0±0,9 1,2±0,1 3,0±0,1 2,1±0,1 0,3±0,1
Убыль фено- - 40,0±2,0 96,0±4,5 - 30,0±1,5 90,0±4,5
ла, %
ХПК, мг 02/л 22528,0± 8420,0± 1081,0± 22960,0± 1824,0± 1100,0±
1126,4 421,0 54,0 1148,0 91,2 55,0
БПК, мг 02/л 10688,0± 5005,0± 3929,0± 4260,0± 224,0± 120,0±
5344,0 250,2 196,4 213,0 И,2 6,0
Данные по утилизации фенола в смыве и конденсате указывают на высокую эффективность практического применения культуры гриба Ь ¡щппт для биодеградации фенольных соединений в сточных водах При выращивание культуры гриба Ь (щппш-в ферментере на установке "ОКА - М1" к 6 суткам роста наблюдалась почти полная утилизация фенола Его убыль при исходной концентрации 0,3% (в конденсате) составила около 90%, а при 3% (в смывах) более 90%
Таким образом, гриб белой гнили Ь Ьщппт обладает достаточно высоким деструктивным потенциалом по отношению к фенольным соединениям, и может быть использован в практических целях для очистки промышленных сточных вод с высоким содержанием соединений фенольного ряда
На основании проведенных нами исследований была предложена схема использования гриба Ь 1щгти$ для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в стоках коптильных цехов мясоперерабатывающих предприятий (рисунок
Рисунок 10 Схема использования культуры гриба L tigrmus для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в стоках коптильных цехов мясоперерабатывающих предприятий
Предлагаемая наМи технология очистки включает в себя следующие этапы 1) накопление стоков в усреднителе, 2) корректировка рН, 3) обработка в биореакторе, культурой гриба L tignnus, 4) отстаивание стоков в отстойниках и возврат осадка биомассы в биореактор, 5) обработка стоков с низким содержанием фенола на биологических очистных сооружениях
ВЫВОДЫ
1 Добавление фенола в концентрации до 5% в среду для культивирования не вызывало угнетения роста культуры гриба L tigrinus Более того, не зависимо от концентрации и времени внесения фенола содержание биомассы возрастало на протяжении всего периода культивирования, и было выше, чем в контрольных вариантах
2. На протяжении всего процесса культивирования происходило снижение концентрации ксенобиотика Степень биодёградации фенола культурой гриба L tigrinus зависела от его концентрации, времени внесения, активности и соотношения ферментов лигнолитического комплекса и в среднем составила около 70% к исходному содержанию
3 В биодеградации фенола участвуют внеклеточные ферменты лигнолитического комплекса гриба L tigrinus Лакказа играет в этом процессе ведущую роль, а роль пероксидазы в большей степени заключается в детоксикации образующихся токсичных продуктов его разрушения
4 Из мицелия гриба L tigrinus выделены и идентифицированы следующие ФЛ лизофосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозит, фосфа-тидная кислота, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилглицерин
5 Выявлена корреляция между уровнем синтеза ВЛФК и изменениями в липид-ном составе мицелия гриба L tigrmus Фазе интенсивного образования ВЛФК соответствует повышенное содержание легкоокисляемых ФЛ, ненасыщенных ЖК и низ-
кое содержание продуктов ПОЛ При переходе в идиофазу, характеризующуюся более низким выходом внеклеточных лигнолитических ферментов, повышается доля более стабильных ФЛ, насыщенных ЖК и продуктов ПОЛ
6 Подобраны модификаторы и условия их внесения, позволяющие повысить выход ферментов лигнолитического комплекса Повышение лакказной и пероксидазной активностей в культуральной жидкости по сравнению с контролем наблюдается на 6 сутки роста, при добавлении модификаторов мембраны (бутанола и толуола для лак-казы, ЭДТА для пероксидазы) на 3 сутки, т е в начале продуцирования и секреции лигнолитических ферментов Пиррохинолоны в зависимости от химической структуры оказывали разное влияние на рост и развитие грибов - на биосинтез и активность ферментов, накопление биомассы 7-гидроксикарбонил-1,2,3-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-1]хинолин (1), являясь витаминоподобным аналогом PQQ, оказывал стимулирующее действие, а 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1Н-пирроло[3,2^]хинолин (2) в диапазоне исследуемых концентраций оказывал отрицательное действие на все изучаемые параметры роста и развития гриба
7 Разработана схема практического использования гриба L tigrinus для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в промышленных сточных водах, включающая обработку стоков в биореакторе культурой гриба L tigrinus
8 Локальная очистка сточных вод с высокой концентрацией фенола (до 3%) производства копченых изделий может быть осуществлена в биореакторе, содержащем культуральную жидкость гриба L tigrinus В этих условиях утилизация фенола достигает 96%
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Кадималиев Д А , Атыкян Н А , Надежина О.С. Ферменты лигнолитического комплекса гриба Panus tigrinus II Третий съезд биофизиков России Тез докл Воронеж, 24-29 июня 2004г Воронеж Изд-во Воронеж, 2004 С 46-47
2 Надежина О.С., Кадеркаева А Н , Атыкян Н А , Кадималиев Д А Состав лигнолитических ферментов и липидов гриба Panus tigrinus II Юбилейная конференция, посвященная 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им М В Ломоносова Тез докл науч конф М Изд-во Нац акад микологии, 2004 С 99
3 Кадеркаева А Н , Надежина О С , Атыкян Н А , Кадималиев Д А Изменение липидного состава гриба Panus tigrinus в процессе роста // XXXII Огаревские чтения Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2004 С 18-19
4 Кадималиев Д А , Атыкян Н А , Надежина О.С Воздействие пероксидаз гриба и хрена на лигноуглеводный комплекс березы и сосны // Вестник ОГУ 2004 №9 С 111-114
5 Надежина О.С., Кадималиев Д А , Атыкян Н А , Ревин В В , Белобровкина ЕН Биодеструкция фенольных соединений лакказой гриба LENTINUS (PANUS) TIGRINUS И Второй съезд Общества биотехнологов России им Ю А Овчинникова Тез докл Москва, 13-15 октября 2004г М Изд-во МАКС-ПРЕСС, 2004 С 132-133
6 Надежина О.С., Кадималиев Д А , Кадеркаева А Н Изменение липидного состава мицелия гриба LENTINUS TIGRINUS в процессе роста // Общество биотехнологов России Сб науч трудов мордовского отделения общероссийского общественного отделения "Общество биотехнологов России" Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2004 С 101-106
7 Кадималиев Д А , Надежина О С., Атыкян Н А , Зюзин А Н , Соложенко О В Биодеградация фенолов лигнолитическим грибом LENTINUS TIGRINUS II Проблемы
биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды Материалы между-нар науч конф Саратов, 14-16 сентября 2005г Саратов Изд-во Научная книга, 2005 С 24
8 Ямашкин С А , Кадималиев Д А , Романова И С , Надежина О.С., Большаков М А , Бычкова Н Б Влияние фторсодержащих антибиотиков на рост и развитие микроскопических грибов // Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды Материалы междунар науч конф Саратов, 14-16 сентября 2005г Саратов Изд-во Научная книга, 2005 С 59-60
9 Надежина О С., Кадималиев Д А Влияние модификаторов мембраны на ли-пидный состав гриба LENTINUS TIGRINUS // X научная конференция молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета имени НП Огарева Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2005 С 31-32
10 Филина HB, Надежина ОС, Кадималиев ДА Влияние модификаторов мембраны на фосфолипидный состав мицелия гриба LENTINUS TIGRINUS II Студен-ты-науке XXI века Сб науч работ студентов биол фак Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2006 С 64-67
11 Надежина О.С., Кадималиев Д А , Селиверстова М С Изменение продуктов перекисного окисления липидов мицелия гриба LENTINUS TIGRINUS в процессе роста и развития // XXXIV Огаревские чтения Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2006 С 71-72
12 Надежина О С., Паршин А А , Атыкян Н А , Кадималиев Д А Влияние бута-нола, толуола, ЭДТА и DDS-Na на пероксидазную активность гриба LENTINUS TIGRINUS I/ 10-ая Пущинская школа-конференция молодых ученых, посвященная 50-летию Пущинского научного центра РАН "Биология - наука XXI века" Тез докл науч конф Пущино, 17-21 апреля 2006г Пущино Изд-во Пущинский научный центр РАН, 2006 С 85
13 Кадималиев Д А , Надежина 0;С., Атыкян Н А , Ревин В В , Самуилов В Д Взаимосвязь состава липидов и продуктов их перекисного окисления с секрецией лигнолитических ферментов в процессе роста LENTINUS (PANUS) TIGRINUS // Микробиология 2006 Т 75 №5 С 649-653
14 Надежйна О.С., Кадималиев Д А , Атыкян Н А , Паршин А А , Зюзин А Н Использование гриба LENTINUS TIGRINUS для биодеградации фенолов // Наука и инновации в республике Мордовия Материалы V респ науч -практ конф Саранск, 8-9 февр 2006г Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2006 С 692-693
15 Надежина О.С., Кадималиев Д А , Ямашкин С А , Романова И С , Большаков М А, Бычкова Н Б Изучение влияния новых соединений пирролохинолинового ряда на рост и развитие гриба PANUS TIGRINUS II Наука и инновации в республике Мордовия Материалы V респ науч -практ конф Саранск, 8-9 февр 2006г Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2006 С 700-702
16 Надежина О.С., Кадималиев Д А , Лаврова А И , Паршин А А Влияние бу-танола и толуола на физиолого-биохимические характеристики гриба LENTINUS TIGRINUS II Математика Компьютер Образование Материалы 14-ой междунар науч конф Пущино, 22-27 января 2007г Ижевск Изд-во НИЦ Регулярная и хаотическая динамика, 2007 С 173
17 Паршин А А , Надежина О.С., Кадималиев Д А , Фурсова П В , Атыкян Н А Участие ферментов лигнолитического комплекса гриба LENTINUS TIGRINUS в процессе биодеструкции фенола // Математика Компьютер Образование Материалы 14-ой междунар науч конф Пущино, 22-27 января 2007г Ижевск Изд-во НИЦ Регулярная и хаотическая динамика, 2007 С 177
18 Французова Ю Н , Надежина О С., Кадималиев Д А Повышение уровня секреции лигнолитических ферментов грибом LENTINUS TIGRINUS И XXXV Огаревские чтения Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2007 С 3
19 Паршин А А , Надежина О.С., Атыкян Н А , Кадималиев Д А Влияние фенола на Mn-пероксидазную активность гриба LENTINUS TIGRINUS II XXXV Огаревские чтения Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2007 С 4
20 Лобанова Н И , Чигажова Н Д , Атыкян Н А , Надежина О С , Кадималиев Д А Влияние концентрации и источника углерода на синтез ферментов лигнолитиче-ского комплекса грибом LENTINUS TIGRINUS штамм F-3616D в присутствии фенола в среде // XXXV Огаревские чтения Тез докл науч конф Саранск Изд-во Морд-го ун-та, 2007 С 6-7
21 Надежина О С , Кадималиев Д А , Атыкян НН А , Паршин А А Биодеградация фенолов культурой гриба LENTINUS TIGRINUS в стоках коптильных цехов мясоперерабатывающих предприятий // Первые чтения памяти профессора О А Заурало-ва Материалы науч конф Саранск, 16 мая 2007г Саранск Изд-во Референт, 2007 С 74-76
Подписано в печать 25 10 07 Объем 1,25 п л Тираж 100 экз Заказ № 1889 Типография Издательства Мордовского университета 430000, г Саранск, ул Советская, 24
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Надеждина, Оксана Сергеевна
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. Общая характеристика дереворазрушающих грибов и их применение
1.1. Грибы возбудители бурой гнили древесины
1.2. Грибы возбудители мягкой гнили древесины
1.3. Грибы возбудители белой гнили древесины
1.4. Практическое применение лигнолитических грибов и выделяемых ими ферментов
ГЛАВА 2. Внеклеточный лигнолитический ферментный комплекс
ГЛАВА 3. Роль липидов в функционировании лигнолитических грибов
3.1. Строение и химический состав клеток лигнолитических грибов
3.2. Роль липидов в секреции и функционировании лигнолитических ферментов
3.3. Роль процессов перекисного окисления липидов в секреции и функционировании лигнолитических ферментов 38 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 4. Объект и методы исследования
4.1. Объекты исследования
4.2. Реактивы и материалы
4.3. Культивирование гриба Ьепйпш й&'тш
4.4. Выделение и очистка лигнолитических ферментов (лакказы и . пероксидазы)
4.5. Выделение лигноуглеводных комплексов березы и сосны
4.6. Определение активности лигнолитических ферментов и исследование их воздействия на лигноуглеводный комплекс и фенолы
4.6.1. Определение лакказной активности по пирокатехину
4.6.2. Определение пероксидазной активности по одианизидину
4.6.3. Исследование воздействия лигнолитических ферментов на лигноуглеводный комплекс и фенольные соединения
4.7. Определение концентрации белка
4.8. Определение количества биомассы
4.9. Экстракция липидов из мицелия гриба ЬепНпт й^г'тиБ
4.9.1. Выделение общих липидов
4.9.2. Выделение фосфолипидов
4.10. Хроматографические методы анализа
4.10.1. Микротонкослойная хроматография фосфолипидов 47 Подготовка силикагеля и приготовление пластинок 47 Разделение фосфолипидов 48 Идентификация липидов
4.10.2. Количественное определение фосфолипидов
4.10.3. Газожидкостная хроматография жирных кислот 51 Метилирование жирных кислот 51 Анализ и обработка результатов хроматографических исследований
4.11. Определение продуктов перекисного окисления липидов
4.11.1. Определение диеновых и триеновых коньюгатов
4.11.2. Определение содержания ТБК-активных веществ (малонового диальдегида)
4.12. Определение содержания фенола
4.12.1. Колориметрическое определение с 4-аминоантипирином
4.12.2. Определение содержания фенола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
4.13. Определение химического потребления кислорода
4.14. Определение биохимического потребления кислорода
4.15. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 5. Биодеградация фенольных соединений и лигнина грибом ЬепНпш %ппш и выделяемыми им внеклеточными лигнолитическими ферментами
5.1. Биодеградация фенола грибом белой гнили ЬепНпш ^ппш
5.2. Биодеградация фенольных соединений лакказой гриба ЬепИпш ^гтш
5.3. Воздействие пероксидаз гриба и хрена на лигноуглеводный комплекс березы и сосны
ГЛАВА 6. Взаимосвязь состава липидов и продуктов их перекисного окисления с секрецией лигнолитических ферментов в процессе роста ЬепНпш ^ппш
ГЛАВА 7. Исследование взаимосвязи между биодеградацией фенола и изменениями в липидном составе мицелия гриба ЬепНпш ^гтш
ГЛАВА 8. Влияние модификаторов мембраны на уровень секреции лигнолитических ферментов и изменения в составе мембран
ГЛАВА 9. Биодеградация фенолов в стоках коптильных цехов мясоперерабатывающих предприятий 120 ВЫВОДЫ 126 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
БПК - биохимическое потребление кислорода
ВЛФК - внеклеточный лигнолитический ферментный комплекс
ГЖХ - газожидкостная хроматография
ДК - диеновые коньюгаты
ЖК - жирные кислоты
КЛ - кардиолипин
Кв - коэффициент воздействия
Кн - коэффициент ненасыщенности
ДНК - линолевая кислота
ЛУК - лигноуглеводный комплекс
ЛФХ - лизофосфатидилхолин
МДА - малоновый диальдегид
НЛ - нейтральные липиды
ОЛ - общие липиды
ПЛК - пальмитиновая кислота
ПОЛ - перекисное окисление липидов
Пирролохинолин (1) - 7-гидроксикарбонил-1,2,3,-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-^хинолина
Пирролохинолин (2) - 5-трифторметил-1,2,3,-триметил-1Н-пирроло[3,
§]хинолина
СЖК - свободные жирные кислоты СФМ - сфингомиелин ТК - триеновые коньюгаты ТБК - тиобарбитуровая кислота ТСХ - тонкослойная хроматография ФИ - фосфоинозитид ФК - фосфатидная кислота ФЛ - фосфолипиды
ФГ - фосфатидилглицерин
ФС - фосфатидилсерин
ФХ - фосфатидилхолин
ФЭА - фосфатидилэтаноламин
ХПК - химическое потребление кислорода
ABTS - 2,2 - азино - бис(3 - этилбензтиазолин - 6 - сульфонат) аммония НВТ- 1-гидроксибензотриазол
Введение Диссертация по биологии, на тему "Участие ферментов и липидов мицелия гриба Lentinus tigrinus в биодеградации фенолов"
Актуальность темы. С развитием промышленности и сельского хозяйства в биосферу поступает все большее количество различных ксенобиотиков, в том числе фенолов и фенольных соединений, которые в значительной степени загрязняют окружающую среду. В настоящее время нагрузка на естественные процессы самоочищения биосферы является избыточной, и параллельно с деструкцией загрязнений идет их постепенное накопление и преобразование в еще более токсичные соединения. Существующие химические и физические способы утилизации фенольных соединений не всегда эффективны. В связи с этим разработка теоретических и практических (биотехнологических) основ биодеградации этих веществ является актуальной проблемой биотехнологии и экологии. В настоящее время предпочтение отдается микробиологическим технологиям. Однако, несмотря на преимущества этих методов, имеется один существенный недостаток. Большинство микроорганизмов и биологических агентов не способны функционировать при высоких концентрациях фенолов. Вместе с тем содержание фенолов даже в стоках пищевых предприятий, например, коптильных цехов, может доходить до 3%. Такие стоки, попадая на биологические очистные сооружения, приводят к гибели микроорганизмов активного ила (Смирнов В.Н. и др., 2002). В этом плане перспективным может быть использование новых штаммов грибов "белой гнили", обладающих уникальными внеклеточными ферментами лигнолитического комплекса. Благодаря этому они являются единственными организмами способными полностью разрушать один из основных компонентов древесины - лигнин, а также большое количество разнообразных ксенобиотиков (Кадималиев Д.А. и др., 2003, Рабинович М.Л. и др., 2004). Эффективность биодеградации этих соединений зависит от качественного и количественного соотношения внеклеточных ферментов. В этом отношении внимание заслуживает гриб ЬепНпш ^гтш штамм ВКМ Р-3616Б обладающий высокой лигнолитической активностью за счет способности продуцировать нетипичную "желтую" лакказу и секреторную пероксидазу растительного типа (Ревин В.В. и др., 2000, Кадималиев Д.А. и др., 2005).
Считается, что немаловажную роль в секреции этих ферментов во внеклеточную среду, играют мембранные структуры, в частности фосфолипиды (ФЛ), которые наряду с жирными кислотами (ЖК) определяют физиологические свойства мембраны - проницаемость, микровязкость, заряд, что особенно важно для транслокации ферментов через мембрану. Изменение качественного и количественного состава ФЛ мембран является одним из факторов определяющим ее проницаемость. Уровень и механизмы секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду также зависят от изменений в химическом составе мембраны (Несмеянова М.А., 1982, Феофилова Е.П. и др., 1987). Контролируемое изменение физиологических и физико-химических свойств мембраны грибов путем воздействия на липиды модификаторами - органическими растворителями, детергентами, и другими соединениями может быть одним из возможных методов увеличения секреции ферментов во внеклеточную среду. Кроме того, есть данные о значительной роли в процессах биодеградации липидов и продуктов их перекисного окисления (Капич А.Н., 1995). Установление связи между этими процессами позволит не только лучше понять механизмы участия липидов в функционировании внеклеточного лигнолитического ферментного комплекса (ВЛФК), но и регулировать процессы их синтеза и секреции.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение процесса биодеградации фенольных соединений грибом L. tigrinus и выделяемыми им внеклеточными лигнолитическими ферментами, а также подбор условий модификации мембраны, обеспечивающий максимальный выход этих ферментов.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Исследовать процесс биодеградации фенольных соединений грибом Ь. ^ппш и роль отдельных ферментов внеклеточного лигнолитического комплекса в этом процессе;
2. Изучить изменение липидного состава, продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) мицелия и лигнолитической активности гриба Ь. И&тш в процессе роста и биодеградации фенола;
3. Установить взаимосвязь между изменением липидного состава, активностью ферментов лигнолитического комплекса и биодеградацией фенола;
4. Подобрать модификаторы клеточной мембраны, их концентрацию и время внесения для повышения выхода ферментов лигнолитического комплекса;
5. Разработать варианты практического использования гриба Ь. tigrinus для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в промышленных сточных водах.
Научная новизна работы. Впервые показана способность гриба Ь. %ппш расти и развиваться в присутствии высоких концентраций фенола (до 5%), а также возможность его использования для биодеградации фенола и его производных. Установлено, что лакказа играет в этом процессе ведущую роль, а роль пероксидазы в большей степени заключается в детоксикации образующихся токсичных продуктов его разрушения. Причем для эффективной биодеградации фенола необходима секреция этих ферментов в определенных соотношениях.
Впервые исследован состав липидов и продукты их окисления в мицелии гриба Ь. ппш ВКМ Р-3616 Э. Выявлена взаимосвязь между составом липидов мицелия и секрецией лигнолитических ферментов. Установлено, что фазе активного роста и максимальной секреции ВЛФК соответствует повышенное содержание легко окисляемых ФЛ, ненасыщенных ЖК и вместе с тем низкое содержание продуктов ПОЛ. В идиофазе, характеризующейся более низким выходом внеклеточных лигнолитических ферментов, повышается доля более стабильных ФЛ, насыщенных ЖК и продуктов ПОЛ.
Исследовано влияние модификаторов клеточной мембраны на секрецию лигнолитических ферментов грибом Ь. 1'щг'т№ при глубинном культивировании. Показано, что повышение лакказной и пероксидазной активностей в культуральной жидкости по сравнению с контролем наблюдается на 6 сутки роста, при добавлении модификаторов мембраны (бутанола и толуола для лакказы, ЭДТА для пероксидазы) на 3 сутки, т.е. в начале продуцирования и секреции лигнолитических ферментов. Максимальной лакказной и пероксидазной активностям соответствует определенное соотношение ФЛ и ЖК.
Исследовано влияние новых пирролохинолинов: 7-гидроксикарбонил-1,2,3 -триметил-4-метокси-1 Н-пиррол о [2,3 -^хинолина (1) являющегося витаминоподобным аналогом и 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1Нпирроло[3,2^]хинолина (2) на рост и развитие гриба Ь. Гщг'тт. Показано, что пирролохинолин (1) оказывает стимулирующее действие на рост и развитие гриба, в то время как трифторзамещенный пирролохинолин (2) затормаживает развитие культуры гриба.
Научно - практическая значимость работы. Результаты исследований расширяют представления о механизмах биодеградации токсичных веществ фенольной природы грибом белой гнили Ь. гтш и роли отдельных ферментов в этом процессе, участия липидов в процессах секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду. Предложены новые приемы увеличения выхода ферментов лигнолитического комплекса, путем модификации клеточной мембраны. Полученные результаты могут служить основой для увеличения эффективности старых и разработки новых методов биодеградации ксенобиотиков фенольной природы и лигноцеллюлозных субстратов. Предложена технология практического использования гриба Ь. И^тш для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в сточных водах.
Связь работы с научными программами. Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках научно-практических работ при поддержке: программы "Развитие научного потенциала высшей школы 2006-2008" РНП.2.1.17708 «Моделирование и кинетический анализ процессов деструкции лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков с участием ферментов и липидов»; гранта Минобрнауки РФ по поддержке ведущих научных школ РИ-112/001/350 "Исследование физиолого-биохимических свойств базидиальных грибов (на примере РапиБ Н&тш) и физико-химических свойств секретируемых ферментов для получения новых материалов"; гранта Роснауки по поддержке молодых ученых, шифр 2006-РИ-19.0/001/079 "Исследование свойств лигнолитических ферментов гриба Рапт Н^тш и их роли в биодеградации растительных отходов и токсичных веществ".
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены для обсуждения на Огаревских чтениях в Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (Саранск, 2004-2006); на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П/ Огарева (Саранск, 2005-2006); на 10-ой Пущинской школе - конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006); на IV Съезде общества биотехнологов России им Ю.А. Овчинникова (Пущино, 2006); на 14-ой международной конференции «Математика. Компьютер. Образование.» (Пущино, 2007); VI Республиканской научно-практической конференции «Наука и инновации в Республике Мордовия» (Саранск, 2007).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 печатных работ, в числе которых 2 статьи в российских научных журналах рекомендованных ВАК и подана заявка на патент.
Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 156 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения,
Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Надеждина, Оксана Сергеевна
выводы
1. Добавление фенола в концентрации до 5% в среду для культивирования не вызывало угнетения роста культуры гриба Ь. Н^тш. Более того, не зависимо от концентрации и времени внесения фенола содержание биомассы возрастало на протяжении всего периода культивирования, и было выше, чем в контрольных вариантах.
2. На протяжении всего процесса культивирования происходило снижение концентрации ксенобиотика. Степень биодеградации фенола культурой гриба Ь. Н^тш зависела от его концентрации, времени внесения, активности и соотношения ферментов лигнолитического комплекса и в среднем составила около 70% к исходному содержанию.
3. В биодеградации фенола участвуют внеклеточные ферменты лигнолитического комплекса гриба Ь. ^щгтт. Лакказа играет в этом процессе ведущую роль, а роль пероксидазы в большей степени заключается в детоксикации образующихся токсичных продуктов его разрушения.
4. Из мицелия гриба Ь. й%гтт выделены и идентифицированы следующие ФЛ: лизофосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозит, фосфатидная кислота, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилглицерин.
5. Выявлена корреляция между уровнем синтеза ВЛФК и изменениями в липидном составе мицелия гриба I. Г/^гшш. Фазе интенсивного образования ВЛФК соответствует повышенное содержание легкоокисляемых ФЛ, ненасыщенных ЖК и низкое содержание продуктов ПОЛ. При переходе в идиофазу, характеризующуюся более низким выходом внеклеточных лигнолитических ферментов, повышается доля более стабильных ФЛ, насыщенных ЖК и продуктов ПОЛ.
6. Подобраны модификаторы и условия их внесения, позволяющие повысить выход ферментов лигнолитического комплекса. Повышение лакказной и пероксидазной активностей в культуральной жидкости по
126 сравнению с контролем наблюдается на 6 сутки роста, при добавлении модификаторов мембраны (бутанола и толуола для лакказы, ЭДТА для пероксидазы) на 3 сутки, т.е. в начале продуцирования и секреции лигнолитических ферментов. Пиррохинолоны в зависимости от химической структуры оказывали разное влияние на рост и развитие грибов - на биосинтез и активность ферментов, накопление биомассы. 7-гидроксикарбонил-1,2,3-триметил-4-метокси-1Н-пирроло[2,3-^хинолин (1), являясь витаминоподобным аналогом Р<3<3, оказывал стимулирующее действие, а 5-трифторметил-1,2,3-триметил-1 Н-пирроло[3,2-^]хинолин (2) в диапазоне исследуемых концентраций оказывал отрицательное действие на все изучаемые параметры роста и развития гриба.
7. Разработана схема практического использования гриба Ь. Н^тш для биодеградации высоких концентраций фенола и его производных в промышленных сточных водах, включающая обработку стоков в биореакторе культурой гриба I. ^щппт.
8. Локальная очистка сточных вод с высокой концентрацией фенола (до 3%) производства копченых изделий может быть осуществлена в биореакторе, содержащем культуральную жидкость гриба Ь. йдг'тиъ. В этих условиях утилизация фенола достигает 96%.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Надеждина, Оксана Сергеевна, Саранск
1. Александрова Е.А., Завьялова Л.А., Терешина В.М., Гарибова Л.В., Феофнлова Е.П. Получение плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes II Микробиология. 1998.- Т.67, №5. - С.649-654.
2. Андреева И.И., Родман Л.С. Ботаника М.: Колос, 2001. 247 с.
3. Антонов В.Ф. Липидная пора: стабильность и проницаемость мембран // Соросовский образовательный журнал. 1998. - №10. - С. 10-17.
4. Антонов В.Ф., Смирнова Е.Ю., Шевченко Е. В. Липиды мембраны при фазовых превращениях М.: Наука, 1992. 136 с.
5. Антонов В.Ф., Черныш A.M., Пасечник В.И., Вознесенский С.А., Козлова Е.К. Биофизика: учеб. для студ. высш. учеб. заведений. М.: Гуманит. изд. центр ВЛАДОС, 1999. 288 с.
6. Артюхов В.Г. Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами: Учеб. пособие. Воронеж: Изд-во Воронежского гос-го ун-та, 2000. 296 с.
7. Бабицкая В.Г., Щерба B.B. Антиоксидантная активность грибов -деструкторов лигноцеллюлозных субстратов // Прикладная биохимия и микробиология. -2002. Т. 38, №2. - С.169-173.
8. Бадякина А.О., Корякина Ю.А., Сузина Н.Е., Несмеянова М.А. Изменение фосфолипидного состава мембран Escherichia coli влияет на уровень секреции периплазматической щелочной фосфатазы в среду // Биохимия. 2003. - Т. 68, №7. - С.917-925.
9. Беккер Е.Г., Петрова С.Д., Ермолова О.В., Элисашвили О.В. Синицын А.П. Выделение, очистка и некоторые свойства лакказы из Cerrería unicolorll Биохимия. 1990.- Т.55, №11. - С.83-87.
10. Беккер Е.Г., Пирцхалаишвли Д.О., Элисашвили В.И., Синицын А.П. Mn-пероксидаза из Pleurotus ostreatus: выделение, очистка и свойства // Биохимия. 1992.- Т.57, №8. - С.1248-1254.
11. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов М.: МГУ, 1998.269 с.
12. Белова Н.В., Денисова Н.П. Грибы белой гнили древесины и возможность их использования для утилизации отходов // Биотехнология.2005. №4. - С.55-58.
13. Бергельсон Л.Д., Дятловицкая Э.В., Молотковский Ю.Г. Препаративная биохимия липидов М.: Наука, 1981. 256 с.
14. Беспалова Л.А., Макаров O.E., Антонюк Л.П., Игнатов В.В. Особенности липогенеза базидиомицетов Pleurotus ostreatus и Flammulina velutipes при культивировании на различных средах // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - Т.38, №4. - С.405-412.
15. Билай В.И. Основы общей микологии К.: Выща школа, 1989.392 с.
16. Болдырев A.A., Кяйвяряйнен Е.И., Илюха В. А. Биомембранология: Учебное пособие. Петрозаводск: Изд-во Кар НЦ РАН,2006. 226 с.
17. Болдырев A.A. Матриксная функция биологических мембран // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т.6, №8. - С.2-8.
18. Болобова A.B., Аскадский A.A., Кондращенко В.И., Рабинович М.Л. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Кн. II. Ферменты, модели, процессы. М.: Наука, 2002. 344с.
19. Братковская И., Виджюнайте Р., Кулис Ю. Пероксидазное окисление фенольных соединений в присутствии водорастворимых полимеров и белков // Биохимия. 2004. Т. 69, №9. - С. 1213-1222.
20. Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке / Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1987. 125 с.
21. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. 2000. Т.6, №12. - С.13-18.
22. Гаврилова В.П., Шамолина И.И., Белова Н.В. Возможности нетрадиционного использования базидиомицетов в кожевенном и текстильном производстве // Биотехнология. 2002. - №5. - С.74-80.
23. Газарян И.Г., Решетникова H.A., Досеева В.В., Беккер Е.Г. Выделение и сравнительная характеристика пероксидаз гриба Phellinusigniarius (L.:FR.) Quel 90-1 и табака // Биохимия. 1995. - T.60, №7. - C.1017-1022.
24. Гальбрайх JI.C. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т.7, №1. - С.51 - 56.
25. Ганбаров Х.Г., Самедова Р.А. Биосинтез лакказы и пероксидазы у дереворазрушающего гриба Coriolus versicolor II Изв. АН Аз.ССР. Сер. биол. науки. 1980.-№5.-С.111-115.
26. Гарибова JI.B., Сидорова И.И. Грибы. Энциклопедия природы России М.: Дрофа, 1997.352 с.
27. Гиндилис А.Д., Баранов Ю.А., Жажина Е.О., Гаврилова В.П., Верзилов В.В., Ярополов А.И. Лакказа из базидиального гриба Сеггепа maxima. Некоторые свойства и кинетический механизм действия // Биохимия.- 1990.-Т.55, №2.-С.315-322.
28. Головастов В.В., Золов С.Н., Несмеянова М.А. Изучение взаимодействия экспорт-инициирующего домена зрелой щелочной фосфатазы Escherichia coli с фосфолипидами мембран в процессе секреции // Биохимия. 2002а. - Т.67, № 9. - С. 1182-1190.
29. Головастов В.В., Михалева Н.И., Кадырова Л.Ю. Несмеянова М.А. Основной фосфолипид Escherichia coli фосфатидилэтаноламин -необходим для продукции и секреции щелочной фосфатазы // Биохимия. -2000. - Т.65, № 9. - С. 1097-1104.
30. Головастов В.В., Михалева Н.И., Несмеянова М.А. Отсутствие фосфатидилэтаноламина основного фосфолипида мембран Escherichia coli- подавляет посттранслакационную модификацию щелочной фосфатазы в периплазме // Биохимия. 20026. - Т.67, № 7. - С.923-929.
31. Головастов В.В., Несмеянова М.А. Влияние фосфолипидного состава мембран и заряда сигнального пептида щелочной фосфотазы Escherichia coli на эффективность ее секреции // Биохимия 2003. - Т.68, №10. -С.1355-1364.
32. Головлева JI.A., Леонтьевский A.A. Лигнолитическая активность дереворазрушающих грибов // Микробиология. 1998. - Т.67, №5. - С.581-587.
33. Горбатова О.Н., Королева О.В., Ландесман Е.О., Степанова Е.В., Жердев A.B. Индукция биосинтеза лакказы как способ увеличения потенциала детоксификации базидиомицетами // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. - Т. 42, №4. - С. 468-474.
34. Горбатова О.Н., Степанова Е.В., Королева О.В. Изучение некоторых биохимических и физико-химических свойств индуцибельной формы внеклеточной лакказы базидиомицета Coriolus histurus II Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - Т.36, №3. - С212-211.
35. Гордон А., Форд Р. Спутник химика М.: Мир, 1976. 352 с.
36. Гребенчикова И.А., Ручай Н.С., Маркевич P.M., Гриц Н.В. Очистка сточной воды гидролизного производства в анаэробных биореакторах // Биотехнология. 2002. - №4. - С.70-79.
37. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая рольлизофосфолипидов // Вопросы медицинской химии. 1991. - Т. 37, №4. - С. 2-10.
38. Дзедзюля Е.И., Беккер Е.Г. Mn-пекроксидаза из Bjerkandera adusta 90: выделение и субстратная специфичность // Биохимия. 2000. -Т.65, №6. - С.829-835.
39. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика -М.: Мир, 1991.544 с.
40. Заварзин Г.А. Лекции по природоведческой микробиологии М.: Наука, 2003. 348 с.
41. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты М.: Наука, 2000. 137 с.
42. Кадималиев Д.А., Ревин В.В., Атыкян H.A., Самуилов В.Д. Влияние модификации древесины на потребление лигнина и синтез лигнолитических ферментов грибом Partus (Lentinus) tigrinus // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т.39, №5. - С.555-560.
43. Кадималиев Д.А, Ревин В.В., Атыкян H.A., Самуилов В.Д. Внеклеточные оксидазы лигнолитического гриба Partus tigrinus II Биохимия. 2005. - Т.70, №6 - С.850-854.
44. Кадималиев Д.А., Ревин В.В., Шутова В.В. Влияние прессования на свойства лигнина древесины сосны, обработанной грибом Panus tigrinus П Химия растительного сырья. 2001. - №3. - С.111-118.
45. Кадималиев Д.А., Ревин В.В., Шутова В.В., Самуилов В.Д. Использование гриба Panus tigrinus для производства прессованных материалов из отходов хлопчатника // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т.40, №1. - С.57-61.
46. Капич А.Н. Антиокислительная активность экстрактов мицелия ксилотрофных базидиомицетов // Микология и фитопоталогия. 1995. - Т.29, №5-6. - С.35-39.
47. Капич А.Н., Романовец Е.С., Войт С.П. О составе липидов мицелия Flammulina velutipes II Прикладная биохимия и микробиология. -1989. Т.25, №3. - С.368-372.
48. Капич А.Н., Романовец Е.С., Войт С.П. Содержание и жирнокислотный состав липидов дереворазрушающих базидиомицетов // Микология и фитопатология. 1990. - Т.24, № 1. - С.51-56.
49. Капич А.Н., Шишкина J1.H. Перекисное окисление липидов и его регуляция в мицелии ксилотрофных базидиомицетов // Микробиология. -1995. Т.64, №3. - С.320-326.
50. Капич А.Н., Шишкина JI.H. Фосфолипиды мицелия дереворазрушающих базидиомицетов // Микология и фитопатология. 1993. - Т.27, № 3. - С.32-37.
51. Каретникова Е.А. Утилизация водорастворимых фенольных соединений, образующихся в процессе пиролиза лигнина штаммом Pénicillium tardum Н-2 // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. -Т.42, №1. -С.55-58.
52. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: в 2 т. Т.2. М.: Мир, 1981.523 с.
53. Конова И.В., Волкова О.В. Лабильность полярных липидов фикомицетов//Микробиология. 1982. - Т.51, №6. - С.1010-1013.
54. Королева О.В., Степанова Е.В., Гаврилова В.П., Бинюков В.И., Пронин A.M. Сравнительная характеристика методов удаления Cu (II) из активного центра лакказ грибного происхождения // Биохимия. 2001а. -Т.66, №9.-С.1180-1187.
55. Королева О.В., Явметдинов И.С., Шлеев C.B., Степанова Е.В., Гаврилова В.П. Выделение и изучение некоторых свойств лакказы из базидиального гриба Cerrena maxima II Биохимия. 20016. - Т.66, №6. -С.762-767.
56. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран. Эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов М.: Наука, 1981. 339с.
57. Крутецкая З.И., Лебедев O.E., Курилова Л.С. Механизмы внутриклеточной сигнализации: Монография. Спб.:Изд-во С. Петерб. ун-та, 2003. 208 с.
58. Кузьмина Л.А., Ахмедова З.Р., Давранов К.Д. Влияние состава питательной среды на биосинтез пероксидазы грибом Pleurotus ostreatus штамм УЗБИ-И105 // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т.37, №2.-С.218-220.
59. Леонтьевский A.A., Головлева Л.А. Внеклеточные лигнинразрушающие ферменты гриба Panus tigrinus II Биохимия. 1990а. -Т.55, №3. - С.423-431.
60. Леонтьевский A.A. Лигниназы базидиомицетов. (2002). Автореф. дис. докт. биол. наук, ИБФМ РАН, Пущино.
61. Леонтьевский A.A., Мясоедова Н.М., Мальцева О.В., Термхитарова Н.Г., Крупянко В.И., Головлева Л.А. Мп-зависимая пероксидаза и оксидаза Panus tigrinus 8/18: очистка и свойства // Биохимия. -19906. Т.55, №10. - С.1841-1846.
62. Леонтьевский A.A., Позднякова H.H., Мясоедова Н.М., Головлева Л.А. Сравнительная характеристика оксидазы-1 гриба Panus tigrinus 8/18 и лакказы Coriolus versicolor ВКМ F-3616 // Биохимия.- 1996. Т.61, №10. -С.1785-1792.
63. Лисов A.B., Леонтьевский A.A., Головлева Л.А. Гибридная Мп -пероксидаза лигнолитического гриба Panus tigrinus 8/18. Выделение, субстратная специфичность, каталитический цикл // Биохимия. 2003. -Т.68, №9. - С.1256-1265.
64. Лисов A.B., Леонтьевский A.A., Головлева Л.А. Оксидазная реакция гибридной Мп пероксидазы гриба Panus tigrinus 8/18 II Биохимия. - 2005. - Т.70, №4. - С.568-574.
65. Литвинко Н.М., КисельМ.А., Эндогенные фосфолипазы А2: структура и функция Минск: Наука итехника, 1991. 270 с.
66. Лобанок А.Г., Бабицкая В.Г., Пленина Л.В., Пучкова Т.А., Осадчая О.В. Состав и биологическая активность глубинного мицелия ксилотрофного базидиомицета Lentinus edodes II Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т.39, №1. - С.69-73.
67. Лобуцкая Н.В., Волков Ю.Г., Ермак И.М., Дедюхина В.П. Получение биологически активных веществ с помощью грибных ферментов // Биотехнология. 2002. - №6. - С.68-69.
68. Лузинков В.Н. Экзоцитоз белков М.: Академкнига, 2006.253 с.
69. Лурье Ю.Ю. Унифицированные методы анализа вод М.: Химия, 1973.436 с.
70. Лурье Ю.Ю. Химический анализ производственных сточных вод -М.: Химия, 1974.364 с.
71. Мохов О.И. Клинические исследования фармако-экономической целесообразности применения фторхинолонов М.: Государственный научный центр по антибиотикам, 1999. 136 с.
72. Мюллер Э., Леффлер В. Микология М.: Мир, 1995. 343 с.
73. Несмеянова М.А. О возможном участии фосфолипидов в трансляции секретируемых белков через цитоплазматическую мембрану // Молекулярная биология. 1982. - Т. 16, №4. - С.821-829.
74. Новиков Ю.В., Ласточкина К.О., Болдина З.Н. Методы исследования качества воды водоемов М.: Медицина, 1990. 400 с.
75. Новицкая Г.В. Методическое руководство по тонкослойной хроматографии фосфолипидов М.: Наука, 1972. 64 с.
76. Орехович В.Н. Современные методы в биохимии М.: Мир, 1977.392 с.
77. Падейская E.H., Яковлев В.П. Антимикробные препараты группы фторхинолонов в клинической практике // Химико-фармацевтич. журн. -1998. -№ 9. С.9-12.
78. Писаревская И.В., Феофилова Е.П. Изменения в содержании и жирнокислотном составе липидов целых клеток и клеточных стенок в процессе цитодифференцировки Absidia coerulea II Микробиология. 1983. -Т.52, №6. - С.444 -448.
79. Плакунов B.K. Основы энзимологии М.: Логос, 2001. 128 с.
80. Племенков В.В. Введение в химию природных соединений -Казань: Казань, 2001. 376 с.
81. Полупанов B.C. Внеклеточные белки микроорганизмов М.: Наука и техника, 1986. 54 с.
82. Поступаев В.В., Рябцева Е.Г. Биохимическая организация клеточных мембран Хабаровск: Изд-во Дальневосточный гос-ный медиц-ий универ-т, 2001. 256 с.
83. Рабинович М.Л., Болобова A.B., Васильченко Л.Г. Разложение природных ароматических структур и ксенобиотиков грибами (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т. 40, № 1. - С.5-23.
84. Рабинович М.Л, Болобова A.B., Кондращенко В.И. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Кн. I. Древесина и разрушающие ее грибы М.: Наука, 2001. 264 с.
85. Рабинович М.Л., Мельник М.С., Болобова A.B. Целлюлазы микроорганизмов (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. -Т.38, №4. - С.355-373.
86. Ревин В.В., Кадималиев Д.А., Атыкян H.A., Ситкин Б.В., Самуилов В.Д. Выделение и свойства пероксидазы продуцируемой грибом Panus tigrinus II Биохимия. 2000. - Т.65, №11.- С.1305-1309.
87. Ревин В.В., Кадималиев Д.А., Шутова В.В., Самуилов В.Д. Модификация лигнина древесины грибом Panus tigrinus II Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - Т.38, №5. - С.529-533.
88. Ревин В.В., Прыткова Т.Н., Лияськина Е.В., Черкасов В.Д., Соломатов В.И. Свидетельство о депонировании микроорганизма Panus (Lentinus) tigrinus (Bulliard: Fries) Fries, 317. Регистрационный номер BKM F-3616 D присвоен 5 марта 1998 г.
89. Решетникова И.А., Елкин В.В. Воздействие дереворазрушающих грибов на лигнинуглеводный комплекс березовой древесины при различных значениях pH среды // Микробиология. 1994. - Т. 63, №6. - С. 1045-1049.
90. Решетникова И.А., Елкин В.В., Газарян И.Г. Воздействие ферментного препарата пероксидазы гриба Phellinus igniarius на лигноуглеводный комплекс березовой древесины // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. - Т. 31, № 2. - С.204-206.
91. Сидоренко C.B. Роль хинолонов в антибактериальной терапии, механизм действия, устойчивость микроорганизмов, фармакокинетика и переносимость М.: Государственный научный центр по антибиотикам, 2001. 102 с.
92. Синицын А.П., Черноглазов В.П., Гусаков A.B. Методы изучения и свойства целлюлолитических ферментов // Итоги науки и техники. Серия: Биотехнология. 1990. - Т. 25. - С.80-93.
93. Смирнов С.А., Королева О.В., Гаврилова В.П., Белова А.Б., Клячко Н.Л. Лакказы из базидиальных грибов: физико-химическиехарактеристики и субстратная специфичность по отношению к метоксифильным соединениям // Биохимия. 2001. - Т.66. №7. - С.952-958.
94. Смирнов В.Н., Рябкина М.В., Винаров А.Ю. Селекция промышленных штаммов микроорганизмов для биодеградации соединений фенольного ряда в газовоздушных и водных потоках // Биотехнология. -2002. №3. - С.67-79.
95. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Методы определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977.166 с.
96. Стахеев И.В., Коломиец Э.И., Здор H.A. Ботехнология малотоннажного производства микробного протеина Минск: Наука и техника, 1991. 264 с.
97. Степанов А.Е., Краснопольская Ю.М., Швец В.И. Физиологически активные липиды -М.: Наука, 1991. 135 с.
98. Страчунский Л.С., Кречиков В.А. Моксифлоксацин -фторхинолон нового поколения с широким спектром активности Смоленск: НИИ антимикробной химиотерапии, 2000. 149 с.
99. Сычев С.Н., Сычев Н.С., Гаврилина В.А. Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии "Милихром": Монография. Орел: Орел ГТУ, 2002. 134 с.
100. Титов В.Н., Лисицын Д.М. Жирные кислоты. Физическая химия, биология и медицина Тверь: ООО "Издво Триада", 2006. 672 с.
101. Турковская О.В., Муратова А.Ю., Панченко Л.В. Разработка приемов утилизации маслосодержащих сточных вод // Биотехнология 2000. - №3. - С.73-82.
102. Феофилова Е.П., Бурлакова Е.Б., Кузнецова Л.С. Значение реакций свободнорадикального окисления в регуляции роста и липидообразовании эукариотным и прокариотных организмов // Прикладная биохимия и микробиология. 1987. - Т. 23, № 1. - С.3-13.
103. Феофилова Е.П., Горнова И.Б., Меморская A.C., Гарибова Л.В. Липидный состав плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes (BERK) SING LENTINULA EDODES (BERK) PEGLER. // Микробиология. -1998a. T.67, №5. - C.655-659.
104. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов М.: Наука, 1983.248 с.
105. Феофилова Е.П., Кузнецова Л.С., Когтев Л.С., Широкова Е.А. Температурный шок и состав липидов мукорового гриба Cuhringhamella japónica II Прикладная биохимия и микробиология. 1989. - Т.25, №3. -С.373-379.
106. Феофилова Е.П. Липиды мицелиальных грибов и перспективы развития микробной олеобиотехнологии. 1. Липиды мицельальных грибов // Биол. науки. 1990. - № 11. - С.5-25.
107. Феофилова Е.П. Современные направления в изучении биологически активных веществ базидиальных грибов // Прикладная биохимия и микробиология. 19986. - Т. 34, № 6. - С.597-608.
108. Феофилова Е.П., Терешина В.М., Меморская A.C., Хохлова Н.С. О различных механизмах биохимической адаптации мицелиальных грибов к температурному стрессу: изменения в составе липидов // Микробиология. -2000.-Т.69, №5.-С. 612-619.
109. Феофилова Е.П. Царство грибов: гетерогенность физиолого-биохимических свойств и близость к растениям, животным и прокариотам (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т.37, №2. -С.141-155.
110. Хушпульян Д.М., Фечина В.А., Казаков C.B., Сахаров И.Ю., Газарян И.Г. Неферментативное взаимодействие продуктов реакции и субстратов в катализе пероксидазой // Биохимия. 2003. - Т. 68, №9. -С.1231-1237
111. Чизмаджев Ю.А. Мембранная биология: от липидных бислоев до молекулярных машин // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т.6, №8. - С. 12-17.
112. Шалабодов А.Д., Гусева Н.В. Основы мембранного транспорта -Тюмень: Тюмень, 2001.258 с.
113. Шлегель Г. Общая микробиология М.: Мир, 1987. 567 с.
114. Шлеев C.B., Ир Гвон Хан, Морозова О.В., Мажуго Ю.М., Халунина A.C., Ярополов А.И. Фенил-пиразолоны новый класс редокс-медиаторов оксидоредуктаз для деградации ксенобиотиков // Прикладная биохимия и микробиология. - 2004а. - Т.40, №2. - С. 165-172.
115. Щерба В.В., Бабицкая В.Г. Углеводы глубинного мицелия ксилотрофных базидиомицетов // Прикладная биохимия и микробиология.2004. Т. 40, №6. - С. 634-638.
116. Юлаев М.Ф., Ахунова A.M. Некоторые свойства экзогенной фосфолипазы А2, продуцируемой мицелием гриба Paecilomyces viridis // Вопросы медицинской химии. 1999. - №3. - С. 158-162.
117. Яковлев В.П. Новые фторхинолоны моксифлоксацин, перспективы использования в клинической практике // Мед. журн. - 1997. -Т.5. - С. 21-24.
118. Ямашкин С.А., Орешкина Е А., Юровская М.А. О возможности использования 5-,6-амино-2,3,7 триметил -,1,2,3,7 -тетраметилиндолов в синтезе трифторметилпирролохинолинов // Вест. Моск. ун-та. Сер.2 Химия.2005. Т.46, №6. - С.382-387.
119. Ямашкин С.А., Юровская М.А. Синтез некоторых нитро- и аминоиндолов // Химия гетероциклических соединений. 1999. - №12. -С.1630-1636.
120. Abadulla Е., Tzanov Т., Costa S., Robra К.Н., Cavaco Р.А., Guebitz G.M. Decolorization and detoxification of textile dyes with a laccase from Tramtes hirsuta II Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V.66. - P.3357-3362.
121. Akhtar M., Blanchette R.A., Kirk Т.К. Fungial delignification and biomechanical purping of wood // Adv. Biochem. Engin. Biotechnol. 1997. - V. 57. -P.160-193.
122. Ander P., Eriksson K.-E. Lignin degradation and utilization by microorganisms // Progress in industrial microbiology. Amsterdam. Elsevier. -1978.-V. 14.-P. 1-58.
123. Asther M., Corrieu G., Drapron R., Odier E. Effect of Tween-80 and oleic acid on ligninase production by Phanerochaete chrysosporium INA-12 // Enzyme Microb.Technol. 1987. - V.9. - P.245-249.
124. Banci L., Bertini I., Turano P., Tien M., Kirk T.K. Proton NMR investigation into the basis for the relatively high redox potential of lignin peroxidase //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1991. V.88. - P.6956-6960.
125. Banei L., Bartalesi I., Coifi-baffoni S., Tien M. Ufoldingand pH slodies on manganese peroxidase: role of heme and caleum on secondary structure stability // Biopolimers (Biospectroscopy). 2003. - V. 72. - P. 38-47.
126. Banei L., Bertini L., Dal Pozo L., Del Conte R., Tien M. Monitoring the role of oxalate in manganese peroxidase // Biochemistry 1998. - V. 37. - P. 9009-9015.
127. Banei L. Structural properties of peroxidases // J. Biothechnol. 1997. - V. 53. - P. 253-263.
128. Banerjee U.C., Vohra R.M. Production of laccase by Curvularia sp // Folia Microbiol. (Praha). -1991. V.36(4). - P.343-346.
129. Biswas-Hawkes D., Dodson A.P.J., Harvey P.J., Palmer J.M. Ligninase from white-rot fungu. In lignin Enzymic and microbial degradation // Ed. Odier E. 1987. - P.171-176.
130. Blanchette R. A. Degradation of the lignocellulose complex in wood //Can. J. Bot. 1995. - V.73,№ l.-P. 999-1010.
131. Bligh E., Dyer W. Rapid method of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Phision. 1959. - V. 37. - P. 911-917.
132. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the prinapll of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. - V.72. - P.248-254.
133. Bressler D.C., Fedorak P.M., Pickard M.A. Oxidation carbazole, N-ethylcarbazole, fluorine, and dibenzothiophene by the laccase of Coriolopsis gallica II Biotech.Lett. 2000. - V.22. - P. 1119-1125.
134. Broekhuyse R.M. Phospholipids in tissues of the eye. Isolation, characterization and quantitative analysis by two-dimensional thin-layer chromatography of diacyl and vinyl-ether phospholipids // Biochim. Biophys. Acta. 1968. - V. 260. - P. 449-459.
135. Buswell J.A., Odier E. Lignin biodégradation // CRC Crit. Rev. Biotechnol. 1987. - V. 6. - P. 1-60.
136. Cai D., Tien M. Characterization of the oxycomplex of lignin peroxidases from Phanerchaete chrysosporium: equlibrim and kinetic studies // Biochemistry. 1990. - V.29. - P.2085-2091.
137. Cameron M.D., Timofeevski S., Aust S.D. Fnzymology of Phanerochaete chrysosporium with respect to the degradation of recalcitrant compounds and xenobiotics // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2000. - V.54. -P.751-758.
138. Carneiro A., Abreu A., Evtuguin D.V., Neto S.P., Guebitz G., Paulo A.C. Polyoxometalates as promoters of laccase-assisted reaction // J. Mol. Catal. B Enzym. 2000. - V.9. - P.293-295.
139. Carunchio F., Crescenzi C., Girelli A.M., Messina A., Tarola A.M. Oxidation of ferulic acid by laccase: Identification of the products and inhibitory effects of some dipeptides // Talanta. 2001. - V.55. - P. 189-200.
140. Chefetz B., Chen Y., Hadar Y. Purification and characterization of laccase from Chaetomium thermophiilum and its role in humification // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V.64, №9. - P.3175-3179.
141. Cuerra A., Ferrazz A., Cotrin A.R., da Silva F.T.P. Polimerization of fragment contained in a model effluent by polyphenoloxidases and horseradish peroxidase/hydrogen peroxide system // Enzyme Microb.Technol. 2000. -V.26(5-6). - P.315-323.
142. Delgado G., Guilin F. Light stimulation of aryl-alcohol oxidase activity in Pleurotus eringil I I Mycol. Res. 1992. - V.96, №11.- P .984-986.
143. Dix N.J., Webster J. Fungal ecology London: Chapman and Hall, 1995.549 p.
144. Dowhan W. Molecular basis for membrane phospholipids diversity: why are there so many lipids? // Annu. Rev. Biochem. 1997. - V. 66. - P. 199232.
145. Eggert C., Temp U., Ericsson K-E.L. Laccase js essential for lignin degradation by the white-rot fungus Pycnoporus cinnabarinus II FEBS Lett. -1997. V.407, №1. - P.89-92.
146. Eggert C., Temp U., Eriksson L. K-E. The ligninolytic system of the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus: Purification and characterization of laccase 11 Appl. Environ. Microbiol. -1996. - V. 62, № 4. - P. 1151 -1158.
147. Eriksson K.-E.L., Blanchette R.A., Ander P. Microbial and enzymatic degradation of wood and wood components Berlin: Springer-Verlag, Hedelberg, Fed. Rep. Germany, 1990. 407 p.
148. Fabbrini M., Galli C., Genili P. Comparing the catalytic efficiency of some mediators of laccase // J. Mol. Catal. B: Dnz. 2002. - V. 16. - P. 231-240.
149. Farell R.L., Murtangh K.E., Tien M., Mozuch M.D., Kirk T.K. Phisical and enzymatic properties of lignin peroxidase isoenzyemes from Phanerochate chrysjsporium II Enzym Microb. Technol. 1989. - V.l 1. - P. 322328.
150. Fukuda T., Uchida H., Tacashima Y., Uwajima T., Kawabata T., Suzuki M. Degradation of bisphenol A by purified laccase from Trametesvillosa II Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V.284. - P.704-706.
151. Garzillo A.M., Colao M.C., Caruso C., Caporale C., Gelletti D., Buonoeore V. Laccase from the white-rot fungus Trametes trogil II Appl. Microbiol. Biothenol. 1998. - V.49, №5. - P.545-549.
152. Giffhorn F. Fungial pyranose oxidase: occurrence, properties and biotechnical application in carbohydrate chemistry // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2000.-V. 54.-P. 727-740.
153. Gil-ad N.L., Rar-Num N., Mayer A.M. The possible function of the glican sheath of Botrytis cinerea: effect on the distribution of enzyme activités // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - V. 199. - P. 109-113.
154. Gil-ad N.L., Rar-Num N., Noy T., Mayer A.M. Enzymes of Botrytis cinerea capable of breaking down hydrogen peroxide // FEMS Microbiol. Lett. -2000. V.190. -P.121-126.
155. Glenn J.K., Akileswaran L., Gold M.H. Mn(II)oxidation is the principal function of the extracellural Mn(II)-peroxidase from basidiomycete Phanerochaete chrysosporium II Arch. Biochem. Biophys. 1986. - V. 251. - P. 688-696.
156. Glumoff T., Harvey P., Molinari S., Goble M., Frank G., Palmer J.M., Smith D.J., Leisola M.S.A. Lignin peroxidase from Phanerochaete chrysosporium. Molecular and kinetic characterization of izozymes // Eur. J. Biochem. 1990. - V. 187.-P. 515-520.
157. Green F.III, Hightly T.L. Mechanism of blown-rot decay: paradigm or paradox // Int. Biodeteriol. Biodegr. 1997. - V. 39. - P. 113-124.
158. Gutierrez A., del Rio J.C., Martinez M.J., Martinez A.T. Production of New Unsaturated Lipids during Wood Decay by Lingi-nolitic Basidiomycetes // Appl. Environ. Microbiol. 2002. - V. 68, №3. - P. 1344-1350.
159. Hammel K.E. Extracellular free radical biochemistry of ligninolytic fungi //New J. Chem. 1996. - V. 20, №2. - P. 195-198.
160. Hammel K.E., Kalyanaraman B., Kirk T.K. Substrate free radicals are intermediates in ligninase catalysis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V.83, № 1.-P. 3708-3712.
161. Hammel K.E., Kapich A.N., Jensen K.A., Ryan Z.C. Reactive oxygen species as agents of wood decay by fungi // Enzyme and Microbial Technology. -2002. V. 30. - P. 445-453.
162. Hatakka A. Biodégradation of lignin // Biopolymers. Lignin, hunic substances and coal. 2001. - V. 1. - P. 129-180.
163. Higuchi T. Lignin biochemistry: biosynthesis and biodégradation // Wood Scien Technol. 1990. - V.24. - P.23-63.
164. Hofriehter M. Review: lignin conversion by manganese peroxidase (MnP) // Enz. Microb. Technol. 2002/ - V. 30. - P. 454-466.
165. Hublik G., Schinner F. Characterization and immobilization of the laccase from Pleurotus ostreatus and its use for the continuous elimination of phenolic pollutants // Enzyme. Microb. Technol. 2000. - V.27. - P.330-336.
166. Hudson H.J. Fungal biology. Cambridge: Cambridge University Press, 1986. 298 p.
167. Huttermann A., Mai C., Kharazipour A. Modification of lignin for the production of new compounded materials // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. -V.55. - P.387-394.
168. Hyung K.H., Shin W. Characterisation of immobilized laccase and its catalytic activity // J.Korean Electrochem. 1999. - V.2. - P.31-37.
169. Jonson L., Johanson T., Sjostrom K., Nyman P.O. Purification of ligninase isozymes from the white-rot fungus Trametes versicolor II Acta. Chem. Scand. 1987. - V.41. - P.766-768.
170. Karhunen E., Kanntelinen A., Niku-Paavola M.E. Mn-dependent peroxidase from the lignin-degrading white rot fungus Phlebia radiate // Arch. Biochem. Biophis. 1990. - V. 279. - P.25-31.
171. Kelly R.L. Identification of glucose oxidase activity as the primary source of hydrogen peroxide production in lignolityc cultures of Phanerochaete chrysosporium II Arch. Microbiol. 1986. - V.144, №3 - P.248-253.
172. Kersten P.J., Tien M., Kalyanaraman B., Kirk T.K. The ligninase of Phanerochaete chrysosporium generates cation radicals from methoxybenzenes // J. Biol. Chem. 1985. - V.260. - P.2609-2612.
173. Keyser P., Kirk T.K., Zeikus J.G. Lygnolityc enzyme system of Phanerochaete chrysosporium: synthesized in the absence of lignin in response to nitrogen starvation // J. Bacteriol. 1978. - V. 135. - P. 790-797.
174. Khindaria A., Grover T., Aust S.D. Evidence for formation of the veratryl alcohol carion radical by lignin peroxidase // Biochemistry. 1995. - V. 34.-P.6020-6025.
175. Kirk T.K., Croan S., Tien M., Murtagh K.E., Farrell R.L. Production of multiple ligninase by Phanerochaete chrysosporium: effect of selected growth conditions and use of mutant strain // Enzyme. Microb. Technol. 1986. - V.8. -P.27-32.
176. Kirk T.K., Farrell R.L. Enzymatic "combustion": the microbial degradation of lignin // Annal. Rev. Microbiol. 1987. - V.41. - P.465-505.
177. Kirk T.K., Schultz E., Connors W.J., Lorenz L.F., Zeicus J.G. Influence of culture parameters on lignin metabolism by Phanerochaete chrysosporium //Arch.Microbiol. 1978. - V.l 17. - P.654-661.
178. Kirk T.K., Shimada M. Lignin biodégradation: the microorganism involved and physiology and biochemistry of degradation by white-rot fungi // In: Biosynthesis and biodégradation of wood components. Higuchi T. ed. AP Inc. -1985 P.579-605.
179. Koroljova-Skorobogat'ko O.V., Stepanova E.V., Gavrilova V.P., Morozova O.V., Lubimova N.V., Dzchafarova A.N., Jaropolov A.I., Makower A.
180. Purification and charactrization of the constitutive form of laccase from the basidiomycete Coriolus hirsutus and effect of inducers on laccase synthesis // Biotechnol. Appl. Biochem. 1998. - V.28. - Pt.l. - P.47-54.
181. Kwon S.I., Anderson A.J. Laccase isozymes: production by an opportunistic phatogen, a Fusarium proliferatum isolate from wheat // Physiol. Mol. Plant Phatol. 2001. - V.59. - P.235-242.
182. Leech D., Daigle F. Optimization of a reagentless laccase electrode for the detection of the inhibitor azide // Analyst. 1998. - V.123. - P.1971-1974.
183. Leisola M.S.A., Haemmerli S.D., Waldner R., Schoemaker H.E., Schmidt H.W.H., Fiechter A. Metabolism of a lignin model compound, 3,4-dimethpxybenzyl alcohol by Phanerochaete chrysosporium II Cellulose. Chem. Technol. 1988. - V.22. - P.267-277.
184. Leisola M.S.A., Kozulic B., Meusdoerfer F., Fiechter A. Homology among multiple extracellular peroxidases from Phanerochaete chrysosporium // J. Biol. Chem. 1987. - V.262.-P. 419-424.
185. Leisola M.S.A., Schmidt B., Thanei-Wyss U., Fiechter A. Aromatic ring cleavage of veratryl alcohol by Phanerochaete chrysosporium IIFEBS Lett. -1985. V.189. - P.267-270.
186. Leonowiez A., Cho N.S., Lutererek J., Wilkolazka A., Wojtas-Wasilevska M., Maluszewska A., Hofrichler M., Wesenberg D., Rogalski J. Fungial laccase: properties and activity on lignin // J. Basic Microb. 2001. - V. 41.-P. 185-227.
187. Leotievsky A.A., Myasoedova N.M., Bascunov B.P., Golovleva L.A., Bucke C., Evans C.S. Transformation of 2,4,6-trichlorphenol by free and immobilized fungal laccase // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. - V.57, №1-2. -P.85-91.
188. Leotievsky A.A., Myasoedova N.M., Golovleva L.A., Sedarati M., Evans C.S. Adaptation of the white rot basidiomycete Panus tigrinus for transformation of high concentration of chlorphenols // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. - V.59, №4. - P.405-412.
189. Leotievsky A.A., Myasoedova N.M., Pozdnnyakova N.N., Golovleva L.A. "Yellow" laccase of Panus tigrinus oxidizes non-phenolic substrates without electron-transfer mediators // FEBS Lett. 1997(b). - V.413, №3. - P.446-448.
190. Lobarzewski J. The characteristics and function of the peroxidase from Trametes versicolor in lignin biotransformation // J.Biotechnol. 1990. -V.13. -P.lll-117.
191. Lobos S., Larrain J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Isoenzymes of manganese-dependent peroxidase and laccase produced by the lignin-degrading basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora II Microbiology. 1994. - V. 140. - P. 3145-3152.
192. Maceiras R., Rodriguez C.S., Sanroman A. Influence of several activators on the extracellular laccase activity and in vivo decolourization of poly R-478 by semi-solid-state cultures of Trametes versicolor II Acta Biotechnol. -2001. V.21. - P.255-264.
193. Mai C., Majcherczyk A., Huttermann A. Chemo-enzymatic synthesis and characterization of graft copolymers from lignin and acrylic compounds // Enzym. Microbiol. Technol. 2000(a). - V.27. - P. 167-175.
194. Mai C., Milstein 0., Huttermann A.Chemoenzymatical grafting of acrylamide onto lignin I I J.Biotechnol. 2000(b). - V.79. - P. 173-183.
195. Mai C., Schormann W., Huttermann A. Chemo-enzymatical induced copolymerization of phenolics with acrylate compounds // Appl. Microbiol. Biotehnol. 2000(c). - V.21. - P.1531-1543.
196. Marinetti G.V. New Biochemical Separations Princeton, Van Norstrand, 1964. 339 p.
197. Mayer A.M., Staples R.C. Laccase: new functions for an old enzyme // Phytochem. 2002. - V.60. - P.551-556.
198. Mester T., Tien M. Oxidation mechanism of ligninolytic enzymes jnvolved in the degradation of environmental pollutants // Int. Biodeter. Biodegrad. 2000. - V.46. - P.151-159.
199. Morrison W.R., Smith L.M. Preparation of fatty acid methyl esters and dimethylacetals from lipids with boron fluoride-methanol // J. Lipid Res. -1964.-Vol. 53.-P. 600-608.
200. Mougin C., Boyer F.D., Caminade E., Rama R. Cleavage of the diketonitrile derivative herbicide isoxaflutole by extracellular fungal oxidases // J. Agric. Food Chem. 2000. - V.48. - P.4529-4534.
201. Murakami M., Kudo I. Phospholipase A2 // J. Biochem. 2002. - V. 131.-P. 285-292.
202. Niku P.M.L., Viikari L. Enzymatic oxidation of alkenes // J. Mol. Catal. B.Enzym. 2000. - V.10. - P.435-444.
203. Otjen L., Blanchette R.A. A discussion of microstructural changes in wood during decomposition by white rot basidiomycetes // Can. J. Bot. 1986. -V.64. - P.905-917.
204. Palmieri G., Giardina P., Bianco C., Scaloni A., Capasso A., Sannia G.A. Novel white laccase from Pleurotus ostreatus II J.Biol.Chem. 1997. -V.272, №50. - P.31303-31307.
205. Perez J., Martinez J., de la Rubia T. Purification and partal characterization of a laccase from the white-rot fungus Phanerochaete flavido-alba II Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V.62, №11.- P.4263-4267.
206. Perie F.H., Sheng D., Gold M.H. Purification and charactrization of two manganese peroxidase isozymes from the white-rot basidiomycete Dichomitrus squalens II Biochim. Biophys. Acta. 1996. - V. 1297(2). - P.139-148.
207. Petersen J.F.W., Kadziola A., Larsen S. Three demensional structure of recombinant peroxidase from Coprinus cinnereus at 2,6 A resolution // FEBS Lett. 1994. - V.339. - P.161-170.
208. Pointing S.B., Vrijmoed L.L.P. Decolorization of azo and trephenilmethane dyes by Pycnoporus sanguineus producing laccase as the sole phenoloxidase I I World J. Microbiol. Biotechnol. 2000. - V.16. - P.317-318.
209. Pozdnykova N., Leontievsky A., Golovleva L. Oxidase of the white rot fungus Panus tigrinus 8/181 I FEBS Lett. 1994. - V.350, №2-3. - P. 192-194.
210. Raghukumar C. Fungi from marine habitats: an application in bioremidation //Mycol. Res. 2000. - V.104. - P. 1222-1226.
211. Reid I.D., Paice M.G. Effects of manganese peroxidase on residual lignin of softwood kraft pulp // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64, № 6. -P.2273-2274.
212. Reid I.D., Seifert K.A. Effect on an atmosphere of oxygen on growth, respiration and lignin degradation by white-rot fungi // Can. J. of Botany. 1982. -V. 60, №3. - P.252-260.
213. Renganathan V., Miki K., Gold M.H. Multiple molecular forms of diarylpropane oxygenase, an H202-requiring, lignin-degrading enzyme from Phanerochaete chrysosporium // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - V.241. -P.304-314
214. Sarkar S., Martinez A.T., Martinez M.J. Biochemical and molecular characteristics of a man Phanerochaete chrysosporium.ganQ&Q peroxidase isoenzyme from Pleurotus ostreatus // Biochim. Biophys. Acta. 1997. -V.1339(l). - P.23-30.
215. Schmidt N.W.M., Haemmerli S.D., Schoemaker M.E., Leisola M.S.A. Oxidative degradation of 3,4-dimethoxybenzil alcohol and its methyl ether by the lignin peroxidase of Phanerochaete chrysosporium II Biochemistry. 1989. - V. 28. -P.1776-1783.
216. Schoemaker H.E. On the chemistry of lignin biodégradation // Trav.Chim.Pays.-Bas. 1990. - V.109. - ?.255-272.
217. Servili M., DeStefano G., Piacquadio P., Sciancalepore V. A novel method for removing phenols from grape must // Am. J. Enol. Vitic. 2000. -V.51. - P.357-361.
218. Shcouten A., Wagemakers C.A.M., Stefanato F., van der Kaaij R.M., van Kan J.A.L. Resveratrol acts as natural profungicide and induces self-intoxication by a specific laccase // Mol. Microbiol. 2002. - V.43. - P.883-894.
219. Shimada M., Akamtsu Y., Tokimatsu T., Mii K., Hattori T. Possible biochemical roles of oxalic acid as a low molecular weight compound involved in brown-rot and white-rot wood decasys // J. Biotechnol. 1997. - V. 53. - P. 103113.
220. Soares J.M.B., Costa F.M., De Amorium M.T.P. Decolorization of an anthraquinone-type dye using a laccase formulation // Bioresour. Technol. 2001. -V.79. - P.171-177.
221. Stevanovich-Janezic T., Bujanovich B., Gelineo A. Transfarmation of the soluble part of kraft lignin by a microorganism screened from a pulp mill // J. Serb. Chem. Soc. 1993. - V.10. - P.751-758.
222. Sutherland G.R.J., Schiek Zapanta L., Tien M., Aust S.D. Role of caleum in mainlaining the heme environment of manganese peroxidase // Biochemistry. 1997. - V. 253. - P. 441-449.
223. Thurston C.F. The structure and function of fungial laccase // Microbiology. 1994.-V. 140.-P. 19-26.
224. Timofeevsky S.L., Reading N.S., Aust S.D. Mechanism for protection of manganes peroxidase by hyidrogen peroxide // Arch. Biochem. Biophis. 1998. -V.356.-P. 287-295.
225. Toyama H., Lidstom M.E. PQQ-find for biosinthesis pyrrologuinoline guinone in Methylobacterium extorguens AM 1 // Microbiology. 1998. - №144. -P. 183-191.
226. Tsutsumi Y., Haneda T., Nishida T. Removal of estrogenic activités of bisphenol A and nonylphenol by oxidative enzymes from lignin-degrading basidiomycetes // Chemosphere. 2001. - V.42. - P.271-276.
227. Ullah M.A., Kadhim H., Rastall R.A., Evans C.S. Evaluation of solid substrates for enzyme production by Coriolus versicolor, for use bioremediation of chlorphenols in aqueous effluents // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2000. - V.54. -P.832-837.
228. Umezawa T., Higuchi T. Mechanism of aromatic ring cleavage of |3-0-4 lignin substructure models by lignin peroxidase // FEBS Lett. 1987. - V.218. - P.255-260.
229. Umezawa T., Shimada M., Higuchi T., Kusai K. Aromatic ring cleavage of P-O-4 lignin substructure model dimers by lignin peroxidase of Phanerochaete chrysosporium // FEBS Lett. 1986. - V.205. - P.287-292.
230. Van Voorst F., De Kruijff B. Role of lipids in the translocation of protein across membranes // Biochem. J. 2000. - V. 347. - Pt. 3. - P. 601-612.
231. Vares T., Lundell T.K., Hatakka A.I. Novel heme-conaining enzyme possibly involved in lignin degradation by the white-rot fungus Junghuhnia separabilima IIFEMS Microbiol. Lett. 1992. - V.99. - P.53-58.
232. Vaskovsky V.E., Kostevsky E.Y., Vasendin J. A universal reagent for phospholipids analysis // J. Chromatogr. 1975(a). - Vol. 144. - P. 129-141.
233. Vaskovsky V.E., Latyshev N. Modified yunguccelis reagent for detecting phospolipids and other phosmorus compounds on thinlayer chromatograms // J. Chromatogr. 1975(b). - V. 145. - P.246-249.
234. Waldner R., Leisola M.S.A., Fiechter A. Comparision of ligninolitic activités of selected white-rot fungi // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1988. -V.29, №4. - P. 400-407.
235. Ward G., Hadar Y., Bilkis I., Konstantinovsky L., Dosoretz G.C. Initially steps of ferulic acid polymerization of lignin peroxidase // J. Biol. Chem. -2001.-V.276.-P. 18734-18741.
236. Warishi H., Akileswaran L., Gold M.H. Manganese peroxidase from the basidiomycete Phanerochaete chrysosporium: spectral characterization of the oxidized states and the catalytic cycle // Biochemistry. 1988. - V.27. - P.5365-5370.
237. Warishi H., Dunford H., Gold M. Reaction of lignin peroxidase from compound I and II with veratryl alcohol // J. Biol. Chem. 1991. - V.266. -P.20694-20699.
238. Warishi H., Dunford H.B., MacDonald I.D., Gold M.H. Manganese peroxidase from the Iignin-degrading basidiomycete Phanerochaete chrysosporium'.transiGnt-staG kinetics and reaction mechanism // J. Biol. Chem. -1989. V.264. - P.3335-3340.
239. Warishi H., Gold M.H. Lignin peroxidase compound III. Mechanism of formation and decomposition // J. Biol. Chem. 1990. V.265. - P.2070-2077.
240. Warishi H., Marquez L., Dunford H.B., Gold M.H. Lignin Peroxidase Compound II and Compound III: spectral and kinetic characterization of reactions with peroxides // J.Biol.Chem. 1990. - V.265. - P.l 1137-11142.
241. Warishi H., Valli K., Gold M.H. Manganese(II) peroxidation by manganese peroxidase from the basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. Kinetic mechanism and role of helators // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. -P.23688-23695.
242. Welinder K. Superfamily of plant, fungal and bacterial peroxidases // Curr. Opin. Struc. Biol. 1992. - V.2. - P.388-393.
243. Xiao Ya-Zhong, Wang Jun, Wang Yi-Ping, Pu Chun-Lei, Shi Yun-Yu Studies on production, purification and partial characteristics of the extracehalar laccase from Armmilliria mellea II Chin. J. Biotechnol. 2002. - V.18, № 4. - P. 457-462.
244. Xu F., Berka R.M., Wahleithner J.A., Nelson B., Schuster J.R., Brown S.H., Plamer A.E., Solomon E.I. Site directed mutations in fungal laccase: Effect on redox potentisl, activity and pH profile //Biochem. J. 1998. - V.334. - P.63-70.
245. Yong H.-D., Kim K.-J., Maeng J.S., Han Y.-H., Jeong I.-B., Jeong G., Kang S.-O., Hah Y.C. Single electron transfer by an extracellular laccase from the white-rot fungus Pleurotus ostreatus II Microbiology. 1995. - V.141, N2. -P.393-398.
-
Надеждина, Оксана Сергеевна
-
кандидата биологических наук
-
Саранск, 2007
-
ВАК 03.00.23
- Биотехнология нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности
- Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков
- Физиологические особенности гриба PANUS TIGRINUSВКМ F-3616D и свойства ферментов лигнолитического комплекса, продуцируемого им
- Липиды мицелиальных грибов как основа для создания биодизельного топлива
- Биологические особенности гриба Lentinus Edodes (Berk.) Sing. При интенсивном культивировании на лигноцеллюлозных отходах в Молдове
