Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические особенности гриба Lentinus Edodes (Berk.) Sing. При интенсивном культивировании на лигноцеллюлозных отходах в Молдове

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности гриба Lentinus Edodes (Berk.) Sing. При интенсивном культивировании на лигноцеллюлозных отходах в Молдове"

московский ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. МВ.Ломоносова Биологический факультет

На правах рукописи

Коробан Людмила Павловна

«БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГРИБА LENTINUS EDODES (BERK.) SING. ПРИ ИНТЕНСИВНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ НА ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ ОТХОДАХ В МОЛДОВЕ».

Специальность 03.00.24. - Микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена в лаборатории микробиологии Института защиты растений Молдовы, а также на кафедре биотехнологии Киевского политехнического

института

Научный руководитель: доктор биологических наук, академик АНМ

И.С.Попушой

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Л.В.Гарибова

кандидат биологических наук, А-И.Сафрай

Ведущая организация: Институт овощеводства РАСХН

Защита состоится 21 мая 2004г. в 15 часов 30 минут

На заседании диссертационного совета Д 501.001.46 в Московском государственном университете им. М.ВЛомоносова по адресу: 119992, ГСП-2, г.Москва, Ленинские горы, МГУ, Биологический факультет, ауд. М-1. Факс: (095) 939 39 70

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета Московского государственного университета

Автореферат разослан 20 апреля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

С.Н.Лекомцева

Характеристика работы Актуальность исследований - Проблема целесообразности создания единой

биотехнологической системы переработки растительного сырья по безотходной технологии в продукты полезные народному хозяйству ни у кого не вызывает сомнений.Среди нетрадиционных способов получения белка и биологически

ксилотрофных видов грибов в условиях регулируемого микроклимата.

Гриб шиитаке - Lentinus edodes (Berk.) Sing. — ксилотроф из класса Basidiomycetes. Ареал его естественного местообитания - страны Юго-Восточной Азии. Широко известен, благодаря своим вкусовым, питательным и медицинским свойствам. Растущая популярность гриба L. edodes делает актуальной разработку вариантов технологии его выращивания с использованием сырьевой базы и отходов растениеводства, характерных для Молдовы. Ежегодно в Молдове накапливается более 2 млн тонн местного целлюлозосодержащего сырья (солома злаковых культур, опилки древесных пород, свекловичный жом, лузга подсолнечника, виноградные выжимки и др.), которое может быть вовлечено в процесс биоконверсии путем ферментативного разложения ксилотрофными базидиомицетами.

В Молдове имеются неограниченные возможности для комплексной переработки широкого спектра растительного сырья по безотходной технологии. Это тем более актуально в настоящее время, так как в ряде европейских стран разработаны и осуществляются на практике национальные программы по увеличению производства экологически чистых пищевых продуктов, в том числе и грибов на базе собственных ресурсов.

Цель исследований : установить принципиальную возможность культивирования гриба шиитаке на лилюцеллюлозных отходах в Молдове.

Задачи иссчедований: 1.Изучить влияние абиотических факторов на рост изучаемых штаммов

активных веществ наиболее перспективным является культивирование

Lentinus edodes;

2.Разработать систему интенсивного культивирования нового для Молдовы съедобного вида гриба шиитаке в условиях регулируемого микроклимата;

3.Изучить характер микробиологических процессов, влияющих на накопление комплекса питательных веществ в субстратах для гриба Lentinus edodes;

4. Определить ферментативную активность изучаемых штаммов. Научная новизна состоит в том, что впервые в Молдове:

1.Предложен для культивирования новый съедобный вид гриба, обладающий уникальными пищевыми, вкусовыми, лечебными свойствами.

2.Разработана биотехнологическая схема интенсивного культивирования гриба Lentinus edodes - шиитаке - на местном лигноцеллюлозном растительном сырье, относящемся к разряду отходов: дубовые опилки, лузга подсолнечника, свекловичный жом, пшеничные отруби. Предложен новый вариант субстрата для интенсивного культивирования шиитаке - дубовые опилки + свекловичный жом (3:1).

3.Научно обоснован способ ступенчатой термической обработки субстратов для культивирования гриба шиитаке, диагностическим признаком готовности которых является активность определенных групп микроорганизмов в период подъема, стабилизации и естественного падения температуры. Практическая ценность: Предложен для культивирования новый для Молдовы вид съедобного гриба — шиитаке - интенсивным способом на субстрате опилки дубовые + свекловичный жом (3:1). Апробирован способ термической обработки субстрата, который рекомендован для промышленного культивирования шиитаке в грибоводческих фирмах Молдовы. Диагностическим признаком готовности субстрата является наличие определенных термофильных форм микроорганизмов в период подъема, стабилизации и естественного падения температуры.

Апробация работы и реализация результатов исследований: Материалы работы были апробированы на 5 конференциях и симпозиумах: Интернациональная конференция «Биологический контроль против болезней и вредителей» (г.Одесса,-1994); Международная конференция «Генная инженерия и

современная биотехнология» (г.Кишинев, 1997); IV Интернациональная Конференция по медицинской ботанике (Ялта, 1997); Конференция «Современные проблемы микологии, альгологии и фитопатологии» (г.Москва, 1998); 1-ый Международный конгресс «Современная биотехнология - состояние и перспективы развития» (г.Москва, 2002г.), II Международная конференция «Методологические основы познания биологических особенностей грибов-продуцентов физиологически активных соединений и пищевых продуктов» (г.Донецк, 2002г), 2-ой Международный конгресс «Биотехнология — сотояние и перспективы развития» (г.Москва, 2003г.), Юбилейная конференция , посвященная 85-летию кафедры микологии и альгологии «Микология и альгология - 2004».

Публикации результатов исследований : По материалам диссертации опубликовано 9 работ, 2 находятся в печати.

Структура и объем диссертации: Работа состоит из введения, 3 глав, выводов, списка литературы, включающего 226 источников (из них 127 иностранных авторов). Материал изложен на 114 страницах компьютерного текста, содержит 14 таблиц, 38 рисунков.

Содержание работы. Глава 1. Обзор литературы. Грибы рода Lentinus в мировой практике.

В данной главе представлен анализ опубликованных работ по систематике, морфологии и распространению Lentinus edodes , по влиянию абиотических факторов на рост культуры Lentinus edodes, по способам культивирования шиитаке в замкнутых экосистемах, по промышленному способу получетшя посевного мицелия ксилотрофных грибов, а также по изучению ферментативной активности ксилотрофных грибов в процессе их культивирования ( Singer R., 1961, 1986; Беккер З.Э., 1963; Рипачек В., 1967; Шиврина А.Ы. и др., 1969; Zadrazil Fr., 1974,1983; ГорлснкоМБ., 1981; Han Y.H., Ueng W.T., Chen L.C. & Cheng S., 1981; Jablonsky I., 1981;Гарибова Л.В., 1982, 1999; БиськоН.Л., Дудка И.Л., 1987, 2000; Бухало Л.С., 1988; Билай В.И., 1989; Даниляк Н.И., Ссмичаевский В.Д., 1989;

Przybolowicz P. & Donoghue S., 1990; Мюллер Э., Леффлер В., 1995; Wasser S.P., Nevo E., 1997; Саловарова В.П., Козлов Ю.Н., 2001; Кутафьева Н.П., 2003 и др.). Глава 2. Материалы и методы исследований.

Объектом исследований является ксилотрофный базидиальный гриб порядка Agaricales - Lentinns edodes (Berlc)Sing. В работе использовались штаммы 361, 365, 371, полученные из коллекции высших базидиомицетов Института ботаники им. Н.Г. Холодного НАН Украины. Дана характеристика компонентов субстратов. Описаны методы иелледоваиий:

-музейные культуры поддерживали методом пересева на сусло-агаровой среде 1 раз в 6-12 месяцев;

- изучение влияния температуры на вегетативный рост мицелия на различных по составу средах проводили с учетом ростового коэффициента по методу Бухало А.С. (1988);

- влияние рН среды - потенциометрическим методом (Сказкин Ф.Д, 1958);

- влияние влажности субстрата на рост мицелия - воздушно-весовым методом (Плешков Б.П., 1976); влажности воздуха при помощи психрометра в камерах «Флора»;

-морфология мицелия изучалась визуально на агризованных средах по общепринятым методам микологических исследований на агаризованных средах: отвары дубовых опилок, дубовых опилок и лузги подсолнечника (3:1), пшеницы, пшеницы и дубовых опилок (3:1);

-микроморфология мицелия - с помощью сканирующего электронного микроскопа методом Квательбаума Е. И Карнера Г. (Quattelbaum, Carner, 1980);

- в основе наработки посевного мицелия на твердых питательных средах использовали метод Лемке. Критерием оценки служили такие визуальные показатели как начало опушения, массовое зарастание, полное освоение среды, в сутках;

- при установлении количества вносимого ипокулюма были испытаны дозы от 5% до 25% от массы сухого субстрата;

- наработку посевного мицелия на жидких питательных средах проводили по методу Бухало А.С. (1988) на возвратно-поступательной качалке. Критерием оценки роста служило количество биомассы на 7 и 14 сутки роста;

- с целью подбора оптимального субстрата для культивирования L. edodes , были испытаны такие компоненты субстратов как опилки дубовые, солома пшеничная, лузга подсолнечника, виноградная выжимка, свекловичный жом. В дальнейшем исследования проводили на следующих вариантах субстратов:

1.Дубовые опилки (контроль);

2.Дубовые опилки + свекловичный жом (3:1);

3.Дубовые опилки + пшеничные отруби (3:1).

Схема интенсивного культивирования включает следующие этапы: измельчение сырья, замачивание, термообработка, инокуляция, инкубация, плодоношение;

-термическую обработку субстратов проводили в термокамере путем подачи пара и регуляции температуры;

Изучение активных групп микроорганизмов, принимающих участие в процессах деструкции субстратов, осуществляли методом серийных разведений с последующим высевом суспензии на питательные среды различного состава;

Урожайность рассчитывали как отношение массы свежих плодовых тел к массе субстрата (%);

Аналитические и биохимические анализы проводили с использованием стандартных и общепринятых методов: в субстратах определяли содержание золы методом прокаливания в муфельной печи при 600°С (Сказкин и др., 1958), целлюлозы - методом Кюршнера М. И Ганека Н. , лигнина - методом Комарова Ф.П. (Практические работы по химиии древесины, 1967); общий азот - методом Кьельдаля, рН среды - погенциометрическим мегодом (Плегаков Б.П., 1976), индекс микогепного ксилолиза вычисляли по Соловьеву В.А. (1980).

Из ферментов окислительного комплекса определяли активность монофенолмонооксигеназы фотометрическим мегодом (Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Н., Хандобина А.И., 1975).

-Ферментативная активность гидролитических ферментов - активность целлюлаз (карбоксиметилцеллюлазная активность, ФБ-активность) методом Хагедорна-Йенсена (Родионова Н.А., Тиунова Н.А., 1967), активность эндо-1,4-Р-глюканазы -вискозиметрическим методом (Белозерский, 1951).

Пектинэстеразная активность - титрометрическим методом, активность экзополигалактуроназы - вискозиметрическим методом (Лифшиц Д.Б., 1971).

Математическую обработку данных проводили с применением двухфакторного дисперсионного анализа (Максимов В.Н., 1980). Глава 3. Результаты исследований. Изучение биологических особенностей гриба шиитаке на лигноцеллюлозных отходах.

Раздел 1. Факторы, определяющие морфогенез культуры ЬенНиш В

данном разделе приведены результаты по изучению влияния температуры, рН, влажности, освещения на вегетативный рост мицелия гриба. Установлено, что оптимальной является температура 26°С. Реакция среды, благоприятная для роста мицелия - 5.8-6.0. Оптимальная влажность субстрата - 75%, относительная влажность воздуха 85-90%. Определено, что изучаемые штаммы шиитаке менее требовательны к свету, чем другие виды ксилотрофов порядка Agaricales. Однако, рассеянный свет проявляет стимулирующий эффект в период роста мицелия и в переделах 200-250 люкс свет необходим в период плодообразования. Раздел 2. Морфолого-культуральные особенности роста мицелия L.edodes. В данном разделе изучены морфолого-культуральные особенности роста мицелия Lentinus edodes на различных по составу агаризованных сред, таких как отвар пшеницы, дубовых опилок и лузги подсолнечника (3:1), пшеницы и дубовых опилок (3:1). Установлено, что в зависимости от используемой среды штаммы гриба могут образовывать колонии разных морфологических типов. Была выявлена зависимость линейного роста мицелия шиитаке от состава питательной среды. Установлено, что диаметр колонии изменяется в зависимости от варианта, что находит свое отражение в величине ростового коэффициента (РК). Мицелий был исследован методом сканирующей электронной микроскопии, что позволило

изучить микроструктуры -пряжки, анастомозы, которые являются харктерными признаками для идентификации высших базидиомицетов в культуре. Раздел 3. Интенсивный способ культивирования гриба Ledodes.

Выбор субстрата растительного происхождения, багоприятного для роста мицелия изучаемых штаммов Lentinus edodes проводили по оценке способности расти на отходах сельскохозяйственного производства (таблица 1).

В результате проведенных исследований были отобраны три варианта субстрата для изучения вопросов интенсивного культивирования : опилки дубовые, опилки дубовые + свекловичный жом (3:1), опилки дубовые + пшеничные отруби (3:1).

Таблица 1.

Рост Lentinus edodes на растительных субстратах

Варианты субстратов 6-е сутки 9-е сутки

361 365 371 361 365 371

1. Дубовые опилки + + + + + + + + + + + + + + + + +

2.Солома пшеничная + + + + + + + + +

ЗЛузга подсолнечника + + + + + + + + + + + + + + +

4.Виноградная выжимка + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

5.Д опилки + гап. отруби + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

б.Д.опшпси + свекл, жом + + + + + + + + + + + + + + + + + +- + + +

7.Д.0ПИЛКИ+ВИН. выжимка + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

8_Лузга поде. + свекл, жом + + + + + + + + + + + + + + +

Примечание: + - начало опушения; + + + - интенсивное опушение;

+ + - слабое опушение; + + + + - полное опушение

Опшки дубовые - отход лесоперарабатывающей промышленности. Содержит лигнин (до 20%), целлюлозу (43-50%), золу (1.6-3.8%). Используется как основной компонент в субстратах при интенсивном культивировании пшитаке. Свекловичный жом - пектинсодержащий отход сахароперерабатывающей промышленности. Более половины сухих веществ составляют углеводы (55%). Обладает хорошими рыхлящими свойствами. Способствует воздухо- и газообмену в субстрате, улучшает его структуру.

Пшеничные отруби - отход мукомольного производства, богатый источник углеводов (более 60%), белка (18-25%), минеральных веществ (3%). Широко используется в мировой практике как биоактиватор синтеза питательных веществ, необходимых для роста и развития гриба.

Важным этапом технологической схемы интенсивного культивирования шиитаке является подготовка субстрата, имеющая первостепенное значение при получении целевого продукта.

Нами была предложена схема термической обработки субстрата для получения селективной среды обитания гриба шиитаке (рис. 1).

Термическая обработка субстратов для шиитаке осуществляется в 4 этапа. Первый этап предусматривает постепенный подъем в течении 6-8 часов температуры до 60°С. В данный период на начальной стадии подъема температуры в субстратах развивается мезофильная микрофлора как патогенные виды, так и полезные, так называемые «защитные», которые способны предотвращать развитие конкурентов. К «защитной» микрофлоре относятся большинство термофильных бактерий и актшюмицетов, размножение которых усиливается с повышением температуры. При развитии такой микрофлоры происходит быстрое потребление легкодоступных питательных веществ, что тормозит развитие конкурентных плесеней.

Второй этап предусматривает поддержание температуры в субстрате на уровне 60сС в течение 12-16 часов. Это дает возможность максимальному развитию термофильных форм бактерий и актиномицетов. Кроме того, термофилы выделяют антибиотики, тормозящие рост конкурентов. Нами было установлено,

что начальная численность термофилов в субстрате составляет 102 - 103 клеток на 1г субстрата. Третий этап является решающим в процессе термообработки, характеризуется высоким уровнем селективности субстрата при численности термофилов на уровне 108 - 109. На данном этапе происходит постепенное снижение температуры до 55 - 48°С и поддержание ее на таком уровне в течение 10 часов. На протяжении четвертого этапа происходит естественное снижение температуры субстрата до 26°С. Этот период длится 8-12 часов.

Рис.1

Термическая обработка субстрата для ^пйпш оСос^

Нами был определен качественный и количественный состав микроорганизмов до и после термообработки субстратов (табл. 2).

Качественный и количественный состав микроорганизмов до и после термообработки

Количество микрорганизмов на 1 г а.с.в.

Ва- Плесневые Аммонифицир. Целлюлозоразруш. Целтолозораз

ри- грибы, тыс. бактерии, млн. грибы, % руш.

ан- бактерии, %

ты до после ДО после до после до после

1 12.6 1.6 86.0 177.3 16.6 32.6 22.0 26.6

±2.22 ±0.46 ±4.66 ±6.88 ±1.55 ±1.77 ±2.00 ±1.55

2 17.0 3.6 115.0 164.0 19.6 44.0 32.6 54.3

±2.12 ±0.35 ±10.00 ±4.00 ±1.11 ±2.00 ±1.77 ±3.55

3 18.3 3.1 101.6 194.0 18.3 37.3 30.0 40.0

±1.11 ±0.28 ±5.55 ±6.66 ±1.55 ±1.55 ±2.00 ±1.33

Примечание: 1 - дубовые опилки;

2 - дубовые опилки + свекловичный жом (3:1);

3 - дубовые опилки + пшеничные отруби (3:1). Количество плесневых грибов уменьшилось с 18 тыс колоний на 1 г субстрата; количество аммонифицирующих бактерий увеличилось от 86 млн до 194 млн на 1 г субстрата; количество целлюлозоразрушающих грибов увеличилось с 16 % до 44 %, а целлюлозоразрушающих бактерий с 22 % до 54 %.

При получении посевного инокулюма было испытано 4 варианта сред (табл.3).

Зерно пшеницы в чистом виде (вариант 1) использовали как контроль. Добавки к 3epiгy пшеницы в виде опилок дубовых и лузга подсолнечника способствуют улучшению структуры посевного мицелия . Происходит адаптация культуры к субстратам с липюцеллюлозными компеиентами еще на стадии подготовки инокулюма и как следствие, скорость освоения субстратов в вариантах 2 и 3 практически не отличалась от контроля.

Влияние состава среды на скорость освоения их мицелием гриба ЬвпИпш edodes.

Начало Массовое Полное

Вариант субстрата Штамм опушения, разрастание, обрастание,

сутки сутки сутки

1.Зерно пшеницы 361 2-3 8-9 16-18

365 2-3 8-9 16-18

371 3-4 9-10 16-18

2.3ерно пшеницы + дубовые опилки (3:1) 361 2-3 8-9 16-18

365 2-3 8-9 16-18

371 3-4 9-10 17-19

З.Зерно пш. +дуб. опилки + лузга поде. (3 : 0.5 :0.5) 361 2-3 9-10 17-19

365 3-4 10-11 18-20

371 3-4 10-11 18-20

4. Дубовые опилки + лузга подсолп. (3:1) 361 4-5 12-14 20-21

365 4-5 12-14 20-21

371 4-5 12-14 20-21

Для подготовки жидкого инокулюма глубинным способом использовались питательные среды, состоящие из отваров лигноцеллюлозных отходов: дубовых опилок, сечки соломы, свекловичного жома. Критерием оценки качества среды служило количество биомассы, полученное к концу ферментации (таблица 4). Наблюдения за ростом шиитаке в глубинной культуре показало преимущество среды из отвара смеси дубовых опилок и свекловичного жома (1:1), количество биомассы иым на этом варианте составило 14.7 г/л. Приведенные данные свидетельствуют о том, что получение инокулюма L.edodes на жидких питательных отварах липюцеллюлозных отходов - перспективно и требует дальнейших исследований.

Биомасса гриба Lentinus edodes ( штамм 365) и се биохимический состав (% ах.м.).

Вариант среды Сутки Биомасса, г/л pH Азот Сырой протеин

1. Дубовые опилки 7 6.5 6.5 1.32 8.25

14 8.0 4.4

2. Дубовые опилки +сечка соломы (1:1) 7 7.7 4.9 1.40 8.75

14 8.3 3.3

3.Дубовые опилки + свекловичный жом (1:1) 7 10.7 4.9 1.80 11.25

14 14.5 4.6

Установлено, что доза инокулюма 15% от массы сухого субстрата является оптимальной для ускорения процесса обрастания субстратов.

Инициация плодоношения, формирование плодовых тел зависят от биологических особенностей штаммов.

Таблица 5.

Скорость формирования плодовых тел гриба Lentinus edodes

Инициация Образование

Вариант Штамм плодоношения, Формирование плодовых тел.

субстрата сутки нримордиев, сутки сутки

1.Контроль 361 55 58 60

(дуб. опилки) 365 50 55 58

371 55 60 64

2,Опилки+свек- 361 40 44 50

ловичный жом 365 38 43 48

(3:1) 371 45 49 55

3.Опилки 361 40 45 52

+пшеничные 365 41 44 51

о груби (3:1) 371 43 46 55

На всех стадиях лучшим оказался штамм 365 (табл. 5, 6). Из исследуемых вариантов более эффективным был вариант 2.

Урожайность на данном субстрате составила 57% для штамма 371, 60% для штамма 361 и 66% для штамма 365. Свекловичный жом при интенсивном культивировании L.edodes предложен нами впервые. Лэухфакторный

дисперсионный анализ при НСР05 = 0.15 показал, что на величину урожайности в большей степени оказывает влияние качественный состав субстрата.

Таблица 6.

Влияние состава субстратов на урожайность гриба Lentinus edodes

(НСРо5=0.15).

Вариант субстрата Штамм Выход плод, тел, кг/ед. субстрата Урожайность, %

1. Контроль (дубовые опилки) 361 0.52 21

365 0.60 24

371 0.47 19

2. Опилки + свекловичный жом (3:1) 361 1.49 60

365 1.66 66

371 1.43 57

3.Опилки + пшеничные отруби (3:1) 361 0.85 34

365 0.97 39

371 0.78 31

Были проведены исследования по биодеструкции компонентов субстратов в процессе освоения их мицелием шиитаке. Изучено содержание лигнина целлюлозы в динамике (рис.2,3). Показано, что потери лигнина составили от 4.5% до 7.5%, потери целлюлозы от 6.4% до 8.4% по отношению к исходному составу субстрата.

время, сутки

рис. 2. Динамика содержания лигнина в процессе осоения субсарата (вариант 2 ) мицелием гриба Ledodes

время, сутки

рис. З.Динамика содержания целлюлозы в процессе освоения субстрата (вариант 2) мицелием гриба Ledodes

Кроме того, в субстрате увеличивается количество общего азота с 1.4% до 1.8%, сырого протеина с 6.13% до 8.01%, уменьшается доля зольных элементов с 3.93% до 1.92%..

Показателем биодеструкции компонентов субстрата (штаммы 361, 365, 371) является индекс микогенного ксилолиза, который составил 0.52-0.64 (табл.7).

Таблица 7.

Изменение состава субстрата (дуб. опилки + свекл, жом (3:1)) в процессе культивирования Lentinus edodes, % а.с.в (после плодоношения)

Штаммы РН Лигнин, % Целлюлоза, % Зола, % Общий азот, % Сырой протеин, N х 4.38, % Индекс Микогенного ксилолиза

361 5.8 17.62 ±0.45 26.16 ±0.29 2.17 ±0.09 1.77 ±0.24 7.75 0.53

365 5.7 15.75 ±0.96 24.10 ±0.30 1.92 ±0.06 1.83 ±0.06 8.01 0.52

371 5.8 18.75 ±0.81 24.50 ±0.40 2.45 ±0.05 1.59 ±0.07 6.96 0.64

Содержание в исходном субстрате 6.0 23.25 ±0.35 32.53 ±0.25 3.93 ±0.06 1.40 ±0.04 6.13

В связи с тем, что рост и развитие мицелия в субстрате происходит за счет ферментов, выделяемых грибом, нами была определена ферментативная активность шиитаке.

Из группы окислительных ферментов нами была определена активность монофенолмонооксигеназы (рис.4).

Максимальное количество монофенолмонооксигеназы было установлено на 6-е сутки роста для штамма 365 и составило от 0.4 до 3.0 мкмоль/мл х мин х10 -2.

Для штамма 371 характеризовалось наличие данного фермента в следовых количествах.

мкмоль / мл х мин х 10 "2

3 50,

48 72 96 120 144

время, час

рис. 4. Динамика активности монофенолмонооксигеназы

Из группы целлюлолитических ферментов определялась активность эндо-1,4-Р-глюканазы, КМТД-активность (карбоксиметилцеллюлазная активность) и фильтровально-бумажная (ФБ) активность (рис. 5, 6,7).

Фермент выполняет основную роль в процессе

деструкции целлюлозы, атакуя первым нерастворимую целлюлозу (Даниляк Н.И., Семичаевский В.Д., 1989). Показано,

что наибольшая активность фермента эндо - 1,4 - у штамма 365 (22.4

мкмоль/мл х мин.), способностью осахаривать КМЦ обладают все изучаемые штаммы, однако, максимальная активность наблюдалась у штаммов 361 и 371 (3.9 мкмоль/мл х мин. х 10 -2 на 4-е сутки роста), а штамм 365 проявил 2-х пиковый характер КМЦ активности.

рис. 6. Динамика КМЦ-активности

Фильтровально-бумажная активность - яркий показатель активности цсллюлаз, т.к. фильтровальная бумага представляет собой нативную целлюлозу, которая трудно гидролизуется. Показано, что максимум активности проявился у штаммов 361 и 371, что составило 6.6 мкмоль / мл. х мин х 10 "2 на 4-е сутки роста и 6.2 мкмоль / мл. х мин. х 10 2 на 5-е сутки роста соответственно, мгмоль / мл х мин х 10 "2

\ -Л

\ /

/ / \ ч

/ —ммнмМ!

—--\ \

/ \

/

/ / ,

«8 77 яв 120 1*»

время, час

рис. 7. Динамика ФБ-активности

Известно, что компонентный состав мультиферментного оксидазного и целлюлазного комплексов высших базидиомицетов зависит от их эколого-физиологаческих особенностей и условий культивирования (Решетникова И.А., 1997). Так как при культивировании шиитаке мы используем свекловичный жом, который является пектинсодержащим компонентом субстрата, нами была определена активность ферментов пектолитического комплекса - пектинэстеразы и экзополигалактуроназы (рис. 8, 9). Для всех трех штаммов характерно то, что пектиюстераза обнаруживается в первые часы роста с дальнейшим резким падением активности. Известно, что биосинтез пектинэстеразы носит индуктивный характер и при следовых количествах или полном отсутствии данного фермента, может наблюдаться продуцирование другого фермента лектолитического комплекса - экзополигалактуроназы (Даниляк Н.И., Семичаевский В. Д., 1989). 20

время, час

рис.9. Динамика активности экзополигалактуроназы Активность экзополигалактуроназы оказалась высокой и составила 1.8 мкмоль / мл. х мин у штаммов 361 и 365 и 1.6 мкмоль / мл. х мин у штамма 371.

выводы

1. Разработана система интенсивного культивирования для штаммов гриба 361, 365, 371 гриба Lenlinus edodes на лигноцеллюлозных отходах в условиях регулируемого микроклимата.

2. Установлено, что для роста мицелия изучаемых штаммов оптимальной является температура 26° С, значение рН среды - 5.8-6.0, влажность субстрата - 65%, воздуха 85-90%.

3. Определена среда для зернового посевного мицелия на средах с включением лигноцеллюлозных компонентов: лузга подсолнечника, дубовые опилки (3:0.5:0.5) с целью адаптации культуры гриба. Предложена доза вносимого инокулюма - 15% от сухой массы субстрата,

4. Установлена возможность использования в качестве посевного мицелия жидкого инокулюма гриба Lentinus edodes с включением лигноцеллюлозных отходов: дубовые опилки, свекловичный жом (1:1).

5. Предложена схема термической обработки субстратов для получения селективной среды обитания гриба шиитаке с учетом изменения температурных критериев: подъем температуры до 60°С, а затем постепенное снижение температуры до 55°С - 48°С - 26°С, обеспечивающих активность микробных популяций на разных стадиях термической обработки.

6. Определен качественный и количественный состав микроорганизмов до и после термообработки субстратов. Количество плесневых грибов уменьшилось с 18 тыс колоний на 1 г субстрата; аммонифицирующих бактерий увеличилось от 86 млн до 194 млн на 1 г субстрата; целлюлозоразрушающих грибов увеличилось с 16 % до 44 %, а целлюлозоразрушающих бактерий с 22 % до 54 %.

7. Определено, что в процессе биодеструкции компонентов субстрата грибом L. edodes при интенсивном культивировании потери лигнина составили от 4.5% до 7.5%, потери целлюлозы от 6.4% до 8.4% . В субстрате увеличивается количество общего азота с 1.4% до 1.8%, сырого протеина с

6.13% до 8.01%, уменьшается доля зольных элементов с 3.93% до 1.92%. Индекс микогсшюго ксилолиза в пределах от 0.53 до 0.64.

8. Предложен новый субстрат для интенсивного культивирования шиитаке: опилки дубовые + свекловичный жом (3:1). Урожайность на данном субстрате - 57% - 66% от массы субстрата в зависимости от штамма гриба.

9. Выявлена окислительная и гидролитическая ферментативная активность. Установлено, что максимальное количество монофенолмонооксигеназы было у штамма 365 -от 0.4 до 3.0 мкмоль/мл х мин х10 -2, высокая активность фермента эндо - 1,4 — ß-ГЛЮканазы обнаружена у штамма 365 (22.2 мкмоль/мл х мин.), способностью осахаривать КМЦ обладают все изучаемые штаммы, однако, максимальная активность наблюдалась у штаммов 361 и 371 (3.9 мкмоль/мл х мин. х 10~2 на 4-е сутки роста), а штамм 365 проявил 2-х пиковый характер КМЦ активности. Из пектолитических ферментов высокую активность проявил фермент экзополигалактуроназа у всех изучаемых штаммов.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1.Дворника Л.А., Волкова Л.П. (Коробан JI.I1), Романчук И.И. Базидиальные съедобные грибы в искусственных экосистемах // Материалы международной научно-практической конференции, г.Одесса, 12-16 сентября 1994г., с.7.

2. .Дворнина А.А., Волкова Л.П. (Коробан Л.П). Глубинное культивирование съедобных грибов рода Lentinus на липюцеллюлозных отходах // Международная конференция «Генная инженерия и современная биотехнология», Кишинев, 1998 г.- с.246-249.

3. Коробан Л.П., Дворнина А.А. Получение жидкого инокулюма гриба Спитаке (Lentinus edodes (Berk.) Sing, методом глубинного культивирования» // ВИНИТИ РАН, Депонированные научные работы, Москва 1998г. №12 (323), с.48.

4. Дворнина А.Л., Коробан Л.П. Интенсивное культивирование гриба Lentinus edodes (BerL)Sing. на различных лигноцеллюлозных субстратах // Сб. трудов международной конференции «Современные проблемы микологии, альгологии и фитопатологии», Москва, 1998г., с. 183-184.

5. Бисько Н.А., Клечак И.Р., Коробан Л.П., Линовицкая В.М. Ферментативная активность штаммов гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing, при культивировании на среде из свекловичного жома // Материалы II Международной конференции «Методологические основы познания биологических особенностей грибов - продуцентов физиологически активных соединений и пищевых продуктов», г.Донецк, 2002г., с. 87-91.

6. Коробан Л.П. Ферменты гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing, и их активность при культивировании на среде из свекловичного жома // Мат-лы Международного Конгресса «Биотехнология - состояние и перспективы развития, Москва, 2002г.,

7. Коробан Л.П. Морфогенез вегетативного мицелия гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing. // Мат-лы 2-го Международного Конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2003г., дополнение, с.2.

8. Коробан Л.П. Промышленный способ получения посевного мицелия ксилотрофных грибов. //Сборник научных трудов Молдавского Гос. Университета, серия «Химия и биология», г. Кишинев, 2003, с. 254-256.

9. Коробан Л.П. Термообработка лигноцеллюлозных субстратов при интенсивном культивировании гриба шиитаке - Lentinus edodes // Мат-лы юбилейной конференции «Микология и альгология - 2004 г.», Москва, 2004 г., -

10. Коробан Л.П. Ксшютрофный гриб шиитаке Lentinus edodes (Berk.) Sing. -перспективный объект биотехнологии // Мат-лы конференции по медицинской микологии, г.Москва, 2004 г. (в печати).

11. Коробан Л.П. Ферментативная активность 1риба Lentinus edodes (Berk.) Sing. // «Микология и фитопатология» (в печати).

с.303.

с.77.

Тираж 100 экземпляров.

№-7339

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Коробан, Людмила Павловна

Введение 1

Глава 1. Обзор литературы. Грибы рода Lentinus в мировой практике

1.1. История изучения, распространение, систематика и морфология грибов рода Lentinus 4

1.2. Абиотические факторы роста и развития мицелия ксилотрофных грибов 7

1.3. Способы культивирования Lentinus edodes в замкнутых экосистемах 14

1.4. Промышленный способ получения посевного мицелия съедобных грибов 22

1.5. Ферментативная активность ксилотрофных грибов в процессе их культивирования 26 —

Глава 2. Материалы и методы исследований

2.1. Место и время проведения исследований

2.2. Объект исследований

2.3. Характеристика компонентов субстратов 30 —

2.4. Методы исследований 32

Глава 3. Результаты и обсуждение. Изучение биологических особенностей гриба шиитаке на лигноцеллюлозных отходах. Раздел 1. Факторы, определяющие морфогенз культуры Lentinus edodes 39

Раздел 2 . Морфолого-культуральные особенности роста мицелия Lentinus edodes 2.1. Состав среды и морфология гриба 48

2.2. Состав среды и ростовой коэффициент 53

2.3. Микроморфология мицелия 56-59 Раздел 3. Интенсивный способ культивирования гриба Lentinus edodes

3.1. Подбор лигноцеллюлозных компонентов субстратов для культивирования гриба Lentinus edodes 61—

3.2. Технологическая схема интенсивного культивирования гриба Lentinus edodes

3.2.1. Измельчение и увлажнение компонентов субстратов 66 —

3.2.2.Термическая обработка субстратов - микробиологический процесс 68

3.2.3. Получение посевного мицелия для гриба Lentinus edodes 75

3.2.4. Инокуляция субстратов мицелием шиитаке 81

3.2.5. Инкубация и плодоношение гриба Lentinus edodes 87

3.2.6. Биодеструкция компонентов субстрата 99 - 10:

3.3. Ферментативная активность гриба Lentinus edodes 102

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические особенности гриба Lentinus Edodes (Berk.) Sing. При интенсивном культивировании на лигноцеллюлозных отходах в Молдове"

Проблема целесообразности создания единой биотехнологической системы переработки растительного сырья по безотходной технологии в продукты I полезные народному хозяйству ни у кого не вызывает сомнений.

Среди нетрадиционных способов получения белка и биологически активных веществ наиболее перспективным является получение ксилотрофных видов грибов в условиях регулируемого микроклимата.

Высокие питательные, вкусовые, медицинские свойства ксилотрофных грибов обеспечили постоянно возрастающий спрос на них во многих странах мира, что и обусловило интенсивный рост производства грибов и расширение их ассортимента.

Научные исследования все больше раскрывают механизм и динамику биохимических ферментативных процессов в производстве грибов, сопутствующих продуктов, биологически активных соединений, что позволяет постепенно увеличивать число регулируемых параметров. Технологический процесс становится устойчивее и экономически эффективнее, в результате чего создаются предпосылки для создания производственных циклов, как узкоспециализированных, так и крупномасштабных.

Одним из наиболее перспективных видов ксилотрофных грибов в настоящее время является гриб шиитаке - Lentinus edodes (Berk.) Sing. Шиитаке - это традиционный деликатесный гриб в странах Юго-Восточной Азии. Уже более тысячи лет шиитаке выращивают на древесных обрубках & умеренном поясе горных районов Китая, Японии и Кореи. В настоящее время популярность шиитаке еще более возросла благодаря обнаруженным у этого гриба ценным лечебным свойствам. Мировой объем производства шиитаке за последние 40 t лет вырос более чем в 30 раз и достиг 450 тыс. тонн в год. Наряду i традиционной технологией выращивания на древесных обрубках экстенсивный способ) все большее распространение получает интенсивная технология культивирования на древесных опилках, обогащенных питательными добавками. Лидером в производстве шиитаке уже много лет остается Япония, за ней следует Китай и Корея.

На долю Японии приходится также большинство публикаций и патентов по технологии возделывания мицелия и по интенсивным и экстенсивным способам культивирования плодовых тел Lentinus edodes.

Кроме стран Юго-Восточной Азии небольшие объемы промышленного производства шиитаке отмечены в Канаде и США, Австралии, Франции, Германии, Голландии, Венгрии. В США шиитаке начали выращивать в начале 70-х годов прошлого столетия, и в настоящее время объем производства достиг почти 3 тыс. тонн в год. Этот гриб имеет превосходный вкус, аромат и приятную текстуру мякоти.

Растущая популярность этого гриба делает актуальной разработку альтернативных вариантов технологии его выращивания с использованием сырьевой базы и отходов растениеводства, характерных для стран Европы, в том числе и для Молдовы, где в последние годы возрастает интерес к возможности выращивания этого экзотического гриба.

Ежегодно в Молдове накапливается более 2 млн тонн местного целлюлозосодержащего сырья (солома злаковых культур, опилки древесных пород, свекловичный жом, лузга подсолнечника, виноградные выжимки и др.), которое может быть вовлечено в процесс биоконверсии путем ферментативного разложения ксилотрофными базидиомицетами.

Исходя из вышеизложенного цель наших исследований - установить принципиальную возможность культивирования гриба шиитаке на лигноцеллюлозных отходах в Молдове.

В задачу исследований включены следущие вопросы:

1. Изучить влияние абиотических факторов на рост изучаемых штаммов

Lentinus edodes\

2. Разработать систему интенсивного культивирования нового для Молдовы съедобного вида гриба шиитаке в условиях регулируемого микроклимата;

3. Изучить характер микробиологических процессов, влияющих на накопление комплекса питательных веществ в субстратах для гриба Lentinus edodes;

4. Определить ферментативную активность изучаемых штаммов. Актуальность исследований: растущая популярность гриба Lentinus edodes делает актуальной разработку новых вариантов технологии его выращивания с использованием сырьевой базы и отходов растениеводства, характерных для Молдовы; интенсивный способ культивирования гриба Lentinus edodes позволяет создать замкнутый экологически чистый цикл в биотехнологических системах жизнеобеспечения человека; существенно снижает дефицит белка; утилизирует многотоннажные ежегодновозобновляемые лигноцеллюлозные отходы сельского хозяйства, загрязняющие окружающую среду.

Новизна исследований. Впервые в Молдове:

1. Предложен для культивирования новый съедобный вид гриба, обладающий уникальными пищевыми, вкусовыми, лечебными свойствами.

2. Разработана биотехнологическая схема интенсивного культивирования гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing. - шиитаке - на лигноцеллюлозном растительном сырье, относящемся к разряду отходов: дубовые опилки, лузга подсолнечника, свекловичный жом, пшеничные отруби. Предложен новый вариант субстрата для интенсивного культивирования шиитаке — дубовые опилки + свекловичный жом (3:1).

3. Научно обоснован способ ступенчатой термической обработки субстратов для культивирования гриба шиитаке, диагностическим признаком готовности которых является активность определенных групп микроорганизмов в период подъема, стабилизации и естественного падения температуры.

Заключение Диссертация по теме "Микология", Коробан, Людмила Павловна

выводы

1. Разработана система интенсивного культивирования для штаммов гриба 361, 365, 371 гриба Lentinus edodes на лигноцеллюлозных отходах в условиях регулируемого микроклимата.

2. Установлено, что для роста мицелия изучаемых штаммов оптимальной является температура 26° С, значение рН среды - 5.8-6.0, влажность субстрата - 65%, воздуха 85-90%.

3. Определена среда для зернового посевного мицелия на средах с включением лигноцеллюлозных компонентов: лузга подсолнечника, дубовые опилки (3:0.5:0.5) с целью адаптации культуры гриба. Предложена доза вносимого инокулюма — 15% от сухой массы субстрата.

4. Установлена возможность использования в качестве посевного мицелия жидкого инокулюма гриба Lentinus edodes с включением лигноцеллюлозных отходов: дубовые опилки, свекловичный жом (1:1).

5. Предложена схема термической обработки субстратов для получения селективной среды обитания гриба шиитаке с учетом изменения температурных критериев: подъем температуры до 60°С, а затем постепенное снижение температуры до 55°С - 48°С - 26°С, обеспечивающих активность микробных популяций на разных стадиях термической обработки.

6. Определен качественный и количественный состав микроорганизмов до и после термообработки субстратов. Количество плесневых грибов уменьшилось с 18 тыс колоний на 1 г субстрата; аммонифицирующих бактерий увеличилось от 86 млн до 194 млн на 1 г субстрата; целлюлозоразрушающих грибов увеличилось с 16 % до 44 %, а целлюлозоразрушающих бактерий с 22 % до 54 %.

7. Определено, что в процессе биодеструкции компонентов субстрата грибом L. edodes при интенсивном культивировании потери лигнина составили от 4.5% до 7.5%, потери целлюлозы от 6.4% до 8.4% . В субстрате увеличивается количество общего азота с 1.4% до 1.8%, сырого протеина с 6.13% до 8.01%, уменьшается доля зольных элементов с 3.93% до 1.92%. Индекс микогенного ксилолиза в пределах от 0.53 до 0.64.

8. Предложен новый субстрат для интенсивного культивирования шиитаке: опилки дубовые + свекловичный жом (3:1). Урожайность на данном субстрате - 57% - 66% от массы субстрата в зависимости от штамма гриба.

9. Выявлена окислительная и гидролитическая ферментативная активность. Установлено, что максимальное количество монофенолмонооксигеназы было у штамма 365 -от 0.4 до 3.0 мкмоль/мл х мин х10 ", высокая активность фермента эндо - 1,4 — глюканазы обнаружена у штамма 365 (22.2 мкмоль/мл х мин.), способностью осахаривать КМЦ обладают все изучаемые штаммы, однако, максимальная активность наблюдалась у штаммов 361 и 371 ( 3.9 мкмоль/мл х мин. х 10 " на 4-е сутки роста), а штамм 365 проявил 2-х пиковый характер КМЦ активности. Из пектолитических ферментов высокую активность проявил фермент экзополигалактуроназа у всех изучаемых штаммов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Предложен для культивирования новый для Молдовы вид съедобного гриба - шиитаке - интенсивным способом на субстрате опилки дубовые + свекловичный жом (3:1). Апробирован способ термической обработки субстрата, который рекомендован для промышленного культивирования шиитаке в грибоводческих фирмах Молдовы. Диагностическим признаком готовности субстрата является наличие определенных термофильных форм микроорганизмов в период подъема, стабилизации и естественного падения температуры.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Коробан, Людмила Павловна, Москва

1. Афанасьева М.М., Серебренников В.М. Отбор лигнинразрушающих грибов // Микология и фитопатология. 1980. - №4. - с. 287 - 290.

2. Бабицкая В.Г., Щерба В.В. Деградация природных полимеров мицелиальными грибами продуцентами биологически активных веществ// Прикладная биохимия и микробиология.-1991.-т.27.-№5.-с.687-694.

3. Беккер З.Э. Физиология грибов и их практическое использование. -М.: Изд-во Моск. Ун-та. -1963. -268с.

4. Беккер М.Е. Интенсификация прямой микробной биоконверсии растительных материалов // Биоконверсия: Тез. Докл. Всес. Симп. «Биоконверсия растительного сырья» (Рига, 12-16 апр. 1982г.). -Рига: Зинатне, 1982. -т.1 -с.3-4.

5. Белозерский А.Н., Проскуряков Н.М. Белки, продукты их распада и превращений.-В кн.: Практическое руководство по биохимии растений. М.:Сов.наука, 195 l.-c.l 06-208.

6. Билай В.И. Основы общей микологии. -К.: Вища школа, 1989. -392 с.

7. Билай В.И. Биология целлюлозоразрушающих грибов. В кн.: Проблемы биоконверсии растительного сырья.-1986.-М.: Наука,-с. 6-29.

8. Билай В.И., Билай Т.И., Мусич Е.И. Трансформация целлюлозы грибами.-Киев: Наукова думка, 1982.-265 с.

9. Бисько Н.А. Микрофлора субстрата Pleurotus ostreatus (Jacq.:Fr) Kumm. в частично замкнутой искусственной экосистеме // Микология и фитопатология. 1996. -Т.30. вып 5-6. с. 7-12.

10. Ю.Бисько Н.А., Бухало А.С., Вассер С.П. Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре. Киев: Наук, думка, 1983. -311 с.

11. Бисько Н.А., Дудка И.А. Биология и культивирование съедобных грибов рода вешенка. Киев: Наукова думка, 1987. - 148 с.

12. Бродзяк JI. Биотические взаимодействия Lentinus edodes с грибами, чаще всего встречающимися при его разведении: пер. с польского. К.: Всесоюзный центр переводов н.-т. лит-ры и докум. - 1983. -с.9.

13. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. -Киев: Наукова думка, 1988. -144 с.

14. Бухало А.С. Отбор грибов для получения пищевой биомассы//Микология и фитопатология,-1982.-16, в.1.-с.63-70.

15. Васильева J1.H. Съедобные грибы Дальнего Востока. Владивостокское изд- во, 1978.-245с.

16. Великанов Л.Л., Гарибова J1.B., Горбунова Н.Г., Горленко М.В. Курс низших растений. М.: Высшая школа, 1981. - 504 с.

17. Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов. М.: Пищ. Пром-сть, 1980. -232с.

18. Виестур У.Э. Принципы создания технологии и аппаратуры для твердофазной ферментации // Биоконверсия: Тез. Докл. Всес. Симп. «Биоконверсия растительного сырья» (Рига 12-16 апреля 1982 г.). -Рига: Зинатне, 1982. т.1. -с. 138-139.

19. Викторов А.С. Разработка и освоение биотехнологии производства коммерческого мицелия вешенки обыкновенной на основе виноградной выжимки и лозы//Авт. Дисс. Канд. Техн. Наук. Ялта, 1994.

20. Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Е., Хандобина A.M. Большой практикум по физиологии растений.-М.:Высшая школа, 1975.-392 с.

21. Гандбаров Х.Г. Эколого-физиологические особенности дереворазрушающих высших базидиальных грибов.-Баку: ЭЛМ.-1990.-197 с.

22. Гарибова JT.B. Селекция культивируемого шампиньона.// В кн.:.Генетические основы селекции микроорганизмов.-М., 1969, с.239-260.

23. Гарибова JI.B., Завьялова JI.A., Александрова Е.А., Никитина В.Е. Биология Lentinus edodes // Микология и фитопатология. 1999. ТЗЗ. Вып.2. с.107-110.

24. Головлева JI.A., Гандбаров Х.Г., Скрябин Г.К. Разложение лигнина грибными культурами//Микробиология.-1982.-51, в.4.-с.543-547.

25. Головлева Л.А., Леонтьевский А.А. Биодеградация лигнина//Успехи микробиологии.-1990.-№24.- с. 128-155.

26. Горленко М.В., Новобранова Т.Н. Пектолитические ферменты грибов -возбудителей загнивания плодов в связи со степенью их патогенности//Микология и фитопатология.-1971.-5, вып.4.-с.358-362.

27. Громов Н.Г. Шампиньоны. М., Сельхозгиз., 1957. 168 с.

28. Даниляк Н.И. Гидролиз полисахаридов растительного сырья системами гликозидаз дейтеро- и базидиомицетов.//Автореф. На соиск. уч. степени д.б.н. Киев, 1993.

29. Даниляк Н.И., Семичаевский В.Д., Дудченко А.Г., Трутнева И.А. Ферментные системы высших базидиомицетов.-Киев:Наукова думка.-1989.- 280с.

30. Дворнина А.А. Базидиальные съедобные грибы в искусственной культуре. Кишинев: Штиинца, 1990. -111с.

31. Дворнина А.А., Попушой И.С. Интенсификация процесса синтеза белка при глубинном культивировании базидиальных грибов // Известия АН РМ, биол. и хим. Науки, -1994, -с.25-28.

32. Денисова Н.П. Протеолитические ферменты базидиальных грибов, таксономические и экологические аспекты их изучения//Автореф. на соиск. ученой степени д.б.н. Ленинград, 1991.

33. Дудка И.А., Вассер С.П. Грибы. Справочник миколога и грибника. -К.:Наукова думка, 1987. -535с.

34. Дудка И.А., Вассер С.П., Бухало А.С. Промышленное культивирование съедобных грибов. -К.: Наукова думка, 1978. -264с.

35. Дудка И.А., Щепа В.В., Вассер С.П. и др. Вешенка обыкновенная.-Киев: Наукова думка, 1976.-1 Юс.

36. Капич А.Н., Стахеев И.В., Бабицкая В.Г. Дереворазрушающие базидиомицеты продуценты белка. - Минск, 1984. - 68 с. - (Препринт / АН БССР. Сер. биол. наук. - 1980. - №1. -с. 88 - 92.

37. Каткевич Р.Г., Каткевич Ю.Ю., Баладе Б.К. Ферментативный гидролиз полисахаридов древесины и соломы. //Химия древесины.-1980.-№2.-с.85-88.

38. Клечак И.Р. Оптимизация режимов получения посевного материала и технологические требования к биореактору для производства кормового белкового продукта из виноградных выжимок // Дисс. Канд. Техн. Наук. 03.00.23.-Ялта, 1991.-216с.

39. Клечак И.Р., Бисько Н.А., Билай В.Т. Особенности биодеструкции виноградной выжимки в процессе роста мицелия Lentinus edodes // Микология и фитопатология. -1999. Т.ЗЗ. вып.1. с.44-46.

40. Клечак И.Р., Бисько Н.А., Ежов В.Н., Танащук Т.Н. Физиология роста сиитаке на экстракте из виноградных выжимок // Мат-лы 1-й Междун.117

41. Конф. «Методологические основы познания биологических особенностей грибов продуцентов физиологически активных соединений пищевых продуктов». - Донецк: Дон. Ун-т. -1997. -е.60-63.

42. Клесов А.А. Биокатализ и получение пищевых продуктов из непищевого (целлюлозосодержащего) сырья//Биокатализ.-М.:Наука, 1984.-С.226-259.

43. Клесов А.А. Ферменты целлюлазного комплекса//Биокатализ.-М.:Наука, 1986.- с.93-125.

44. Клесов А.А., Рабинович M.JI. Ферментативный гидролиз целлюлозы//Итоги науки и техники, серия Биол. химия, Москва.-т.12,-1978.-С.49-91.

45. Коробан Л.П., Дворнина А.А. Получение жидкого инокулюма гриба сиитаке (Lentinus edodes (Berk.) Sing. методом глубинного культивирования»//ВИНИТИ РАН, Депонированные научные работы, Москва 1998г. №12 (323), с.48.

46. Кутафьева Н.П. Морфология грибов. Новосибирск: Сибирское унв. Изд-во, 2003. -215 с.

47. Кюршнер М., Ганек Н. Определение содержания клетчатки в растительных остатках // Методы биохимических анализов. -М.: Наука, 1974. -с. 15-17.

48. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов / Под редакцией Грачевой И.М. -М.: Высшая школа. -1982. -48с.

49. Лифшиц Д.Б. Методы определения активности промышленных ферментных препаратов.-М., 1971, с.29-39.

50. Лобанок А.Г., Бабицкая В.Г., Богдановская Ж.Н. Микробный синтез на основе целлюлозы: Белок и другие ценные продукты. — Мн.: Наука и техника, 1988. -261 с.

51. Любарский Л.В., Васильева Л.Н. Дереворазрушающие грибы Дальнего Востока. Новосибирск: Наука, 1975. -165с.

52. Маслова Р.А. Влияние различных источников азота на рост дереворазрушающих грибов в культуре//Микология и фитопатология.-1969.- 3,№5.-с.452-457.

53. Маттисон H.JI. Ферменты гриба Inonotus obliquus (Fr.) PilV/Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства.-М.: Наука, 1965.- с.21-25.

54. Маттисон Н.Л., Низковская О.П. Целлюлолитическая способность базидиальных грибов//Ферментативное расщепление целлюлозы.-М.:Наука, 1967.-е. 103-106.

55. Маттисон Н.Л., Низковская О.П., Сивочуб О.А. Целлюлазная активность культуральных фильтратов окаймленного трутовика//Продукты биосинтеза высших грибов и их использование.-М.:Наука, 1966.-С.21-27.

56. Маттисон Н.Л., Фалина Н.Н., Якимов П.А. Об активности протеолитических ферментов глубинных культур некоторых базидиальных грибов//Продукты биосинтеза высших грибов и их использование.-М.: Наука, 1966.-С.31-38.

57. Методы экспериментальной микологии / Справочник под ред. Билай В.И.- Киев: Наукова думка, 1982. -550с.

58. Морозова Г.Р., Сафонова Н.В., Кинаревская Т.В., Тарасенко А.Н. Питательные среды для промышленного глубинного культивирования мицелия высших грибов //Производство высших съедобных грибов в СССР. -Киев: Наукова думка. -1978. -с.87-91.

59. Низковская О.П. Рост высших грибов в глубинной культуре //Микология и фитопатология. -1972. -т.6, вып.4. -с.306 312.

60. Низковская О.П. Противоопухолевые свойства высших базидиомицетов //Микология и фитопатология. -1983. Т. 17, вып.З. с.243-247.

61. Оболенская А.В., Щеголев В.П., Аким Г.Л. и др. Практические работы по химии древесины и целлюлозы.-М.:Лесн. Пром-ть, 1967.-411с.

62. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. -М.: Колос, 1976. -256с.

63. Решетникова И.А. Деструкция лигнина ксилотрофными макромицетами. Накопление селена и фракционирование его изотопов микроорганизмами.- Москва, 1997. -202с.

64. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов. Москва: Лесная промышленность, 1967. -276с.

65. Родионова Н.А. Ферментативное расщепление целлюлозы/ЛДеллюлазы микроорганизмов.-М.:Наука, 1981 .-с.4-40.

66. Родионова Н.А., Тиунова Н.А. Определение активности отдельных ферментов целлюлазного комплекса/ТВ кн.:Ферментативное расщепление целлюлозы.-М.:Наука, 1967.-С.46-57.

67. Саловарова В.П., Козлов Ю.П. Эколого-биотехнологические основы конверсии растительных субстратов. -М: РУДН, 2001. -331 с.

68. Селибер Б.Б. Большой практикум по микробиологии. -М.: Высшая школа, 1962.

69. Синицын А.П., Гусаков А.В., Черноглазое В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов. —М.: Изд-во МГУ, 1995.

70. Сказкин Ф.Д., Ловчиновская Е.И., Миллер М.С., Аникеев В.В. Практикум по физиологии растений. -М.: Сов. Наука, 1958. -339 с.

71. Соловьев В., Малышева О.Н. Количественная характеристика микогенного ксилолиза // Превращение древесины при микробиологических и энзиматических воздействиях. -Рига, 1980.- с.35-38.

72. Соломко Э.Ф. Сравнительный химический состав и питательная ценность мицелия съедобных грибов, выращенных глубинным методом. Киев: Наукова думка, 1978. - с. 167-173.

73. Соломко Э.Ф. Высший съедобный базидиальный гриб вешенка обыкновенная как продуцент биомассы пищевого назначения (медико-биологический аспект). К., 1988. - 52 с.

74. Соломко Э.Ф. Физиолого-биохимические свойства и биосинтетическая деятельность высшего базидиального гриба Pleurotus ostreatus (Jacq.:Kr.) Kumm. в глубинной культуре//Автореф на соискание ученой степени д.б.н., Киев, 1992.

75. Соломко Э.Ф., Бухало А.С., Пархоменко Л.Н., Морозова Г.Р. Подбор штаммов грибов для глубинного культивирования на промышленных средах с мелассой ^Производство высших съедобных грибов в СССР. -Киев: Наукова думка, 1978. -с. 105-108.

76. Соломко Э.Ф., Дудка И.А. Перспективы использования высших базидиомицетов в микробиологической промышленности. -М.:Наука, 1985.-48с.

77. Соломко Э.Ф., Митропольская Н.Ю. Получение посевного материала Lentinus edodes (Berk.) Sing, глубинным методом // Микология и фитопатология. -1994. -т.28, вып 3. -с.34-39.

78. Степанова Н.Т., Мухин В.А. Основы экологии дереворазрушающих грибов. М.: Наука,. 1979. -97с.

79. Столлер Б. Шампиньоны. Теория и практика выращивания.-М.:Изд-во иностр. литературы, 1956.-88с.

80. Танащук Т.Н. Разработка биотехнологии производства съедобного гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing, на отходах переработки винограда//Автореф. на соискание ученой степени канд. техн. наук, Ялта, 1997.

81. Тиунова Н.А. Применение целлюлаз/ЯДеллюлазы микроорганизмов.-М.:Наука, 1981.-С.40-73.

82. Тишенков А.Д. Культивирование шиитаке // Школа грибоводства, 2000, -№1.

83. Фалина Н.Н., Маслова Р.А., Якимов П.А. и др. Некоторые итоги изучения базидиальных грибов как источника получения кормового белка и дефицитных аминокислот//Раст. Ресурсы. 1965. -1, №1. -с.122 - 127.

84. Фениксова Р.В. Производство ферментных препаратов из культур микроорганизмов. -М.: Пищепромиздат, 1961.-С.97-107.

85. Фомина В.И., Бисько Н.А., Билай В.Т. Особенности роста мицелия штаммов Lentinus edodes (Berk.) Sing, на растительных субстратах // Микология и фитопатология. -1998. -т.32, вып.4. -с. 18-24.

86. Фомина В.И., Бисько Н.А., Митропольская Н.Ю., Трухоновец В.В. Зависимость роста мицелия и плодоношения Lentinus edodes от субстрата // Микология и фитопатология. -1999. -т.ЗЗ, вып.6. -с.406-411.

87. Фомина В.И., Гаврилова Л.П. Питательные субстраты для выращивания инокулята культивируемых гименомицетов // Микология и фитопатология. -1985. -т.19, вып.6. -с.526-528.

88. Фомина В.И., Лысенкова А.В. О возможности культивирования гриба Lentinus edodes // Растительные ресурсы. -1989. -т.25,вып.4. -с.65-67.

89. Фомина В.И., Митропольская Н.Ю., Бисько Н.А., Шевцова Л.В. Отбор высокопродуктивных штаммов Lentinus edodes // Микология и фитопатология, 2003. -т.37, №2. с.60-65.

90. Фостер Д.Химическая деятельность грибов. -М.:ИЛ, 1950.-651с.

91. Шиврина А.Н. Биологически активные вещества высших1 грибов. -Л.: Наука, 1965. -199с.

92. Шиврина А.Н., Низковская О.П., Фалина Н.Н. Биосинтетическая деятельность высших грибов. -Л.: Наука, 1969. -243с.

93. Яковлева Р.С., Николаев С.В., Малышева О.Н. Активность ферментов у разных видов грибов рода Coriolus Quell. // Экология и защита леса.-Л.-1989.- с.92-94.

94. Askey М., Noble R., Dobrovin-Pennington A. Cultivation of shiitake on different sawdust substrates // Mushroom news. 1999. -v.4, N8. -p.4-7.

95. Atkins F.C. Mushroom growing today. -London, Faber and Faber, -1955. 116p.

96. Badham E. The effect of light upon basidiocarp initiation in Psilocybe cubensis // Mycologia. -1980. -72, N1. -p.136-142.

97. Balazs S. Effect of composition and heart-treatment of culture medium on formation of fruit bodies Pleurotus ostreatus (Jacq. Ex Fr.) and Pleurotus florida // Publ. Univ. Horticult. Budapest.-1979.-lO.-p. 191-198.

98. Balazs S., Gyurko P., Kozonczy J. Et al. Gombatemesztes.-Budapest:Mezogazdasagi Kiado, 1973.-p.80.

99. Berker K., Walker J. Relationship of pectolytic and cellulolytic enzyme production by strains of Pellicularia filamentosa to their pathogeneity//Phytopatology.-1962.-52, № 11 .-p. 1119-1121.

100. Berry D.R. The environmental control of the physiology of filamentous fungi // The filamentous fungi. London: Edward, 1975. -p. 16 - 32.

101. Bisaria V.S., Chose Т.К. Biodegradation of cellulosic materials: substrates, microorganisms, enzymes and products // Enzyme microbiol. Technol.-1981.-3 ,№ 1 .-p.90-104.

102. Bis'ko N., Bilay V. Effect of Baccilus macerans Fr. On growth of Pleurotus ostreatus ( Jack.: Fr.) Kumm. // Science and cultivation of edible fungi, 1995.-p.843-846.

103. Block S.S., TsaoG., Han L. Production of mushrooms from sawdust // J. Agr. and food chem.- 1958.-6,№6.-p.923-927.

104. Block S.S., Tsao G., Han L. Experiments in the cultivation of Pleurotus ostreatus/ZMushroom science iv: Proc. Fourth Intern. Sci. Congr. Cultivat. Edible Fungi.-Copenhagen, 1959.-p.309-325.

105. Brown R.D., Jurasek L. Hydrolysis of cellulose: mechanisms of enzymatic and acid catalysis//Adv. Chem. Ser.-1979.-181.-p.l 1.

106. Burkholder P.R., Sinnott B.W. Morfogenesis of fungus colonies in submerged shaken cultures // Amer.J.Bot. 1945. -32. -№7. -p.34 - 43.

107. Buswell J.A., Odier E. Lignin biodegradation//CRC Rev. Biotechnol. 1987.-№6.- p. 1-60.

108. Campbell L.L., Pace E. Physiology of growth at high temperature//J. Appl. Bacteriol.-1968.-41 ,№ 1 -p.24-35.

109. Chang S.T. & Miles P.G. Edible mushrooms and their cultivation. // Boca Raton, fl., CRC Press, 1989.

110. Chang S.T. Mushroom biology: The impact on mushroom production and mushroom products // Mushroom biology and mushroom products, 1993/ Hong Kong, Chinese Univ. Press. -23 Op.

111. Corner F.J. The agaric genera Lentinus, Panus and Pleurotus with particular reference to Malaysian species. //Beih. Nova Hedwigia. 69:1-169.

112. Crisan E.V. Current concept of thermophilic fimgi//Mycologia.-1973.-55,№5.-p.l 171-1198.

113. Delmas J., Mamoun M. Influence de la lumiere sur la fructification in vitro du pleurote en corne dabondance, Pleurotus cornucopia Fr. Ex Fr. // Agronomie. -1982. -2, N4. -p. 379-387.

114. Dijkstra F.Y. Submerged cultures of mushrooms mycelium as sources of protein flaour compounds: Ph. D. thesis, Delft Univ. Technol. -Delft, 1976. -106p.

115. Durand R. Light breaks and fruit-body maturation in Coprinus congregatus: dark inhibitory and dark recovery process // Plant and cell physiology. -1983. -24, N5. -p.899-905.

116. Durand R, Robert J. Interaction entre les facteurs lumiere et temperature dans le controle de la morphogenese des carpophores du champignon basidiomycete Coprinus congregatus // Physiol. Veget. -1980. -18, N1. —p. 131145.

117. Eger G. Blue-light photomorphogenesis in mushrooms (Basidiomycetes) // Blu-light syndrome. -Berlin etc., 1980. -p.555-562.

118. Eger G., Gottwald H.D., von Netzer U. The action of light and other factors on sporophore initiation in Pleurotus ostreatus // Mushroom Science, IX: Proc. Ninth Intern. Sci Congr. Cultivat. Edible Fungu. -Tokyo, 1974. -p. 575 583.

119. Eriksson K.E. Enzyme mechanism involved in cellulose hydrolysis by the rot fungus Sporotrichum pulverulentum // Biotechnol. And Bioeng.- 1978.-20,№2.-p.317-332.

120. Eriksson k.e. Biosynthesis of polysaccharases//Microbiol. Polysaccharides and polysaccharases (Ed. By R.C.W. Berkeley et al).-London:Acad. Press. 1979.-p.285- 296.

121. Eriksson K.E. Cellulases of fungi//Trends in the biology of fermentatin (Ed. By Hollaender a.O.-N.Y.: Plenum Press, 1981.-p. 19-32.

122. Eriksson K.E., Blanchette R., Ander P. Microbial and enzymic degradation of wood and wood components // Publ: Springer-Verlag, Hedelberg, Fed. Rep. Germany.- 1990, 125p.

123. Evans C.S. Lignin degradation // Progress biochemistry. 1987.-v.22. -№4. -p. 102-105.

124. Falanghe H. Production of mushroom mycelium as a protein and fat source in submerged culture in medium of vinnase //Appl. Microbiol. -1962. -10, №2. -p.572 576.

125. Genders R. Mushroom growing for everyone // Mushroom grower, London, 1969.-216p.

126. Gilbert M. Logs and laying yards // Shiitake news, 1988, №5. P.8 10.

127. Gregory P.H. The first benefector's lecture on the fungal mycelium: an historical perspective//Trans. Brit. Mycol. Soc.-1984.-82,№l.-p.l-l 1.

128. Griffin H., Dintris F.R., Krull L., Baker F.L. A microfibril generating factor from the enzyme complex of Trichoderma reesei // Biotechnol. And Bioeng.-l 984.-26,№2.-p.296-300.

129. Halliwell G. Microbial P-glucanases // Prog. Industr. Microbiol.-1978.-15,№1.-p. 1-58.

130. Han Y.H., Yeng W.T., Chen L.C.,Chang S. Physiology and ecology of Lentinus edodes (Berk.) Sing. //Mushroom sci., 1981, 11. P.623 658.

131. Harris R. Growing shiitake commercially // Madison, Wisk., Science technology publ., 1986.

132. Hattula M.L., Gyllenberg H.G. Adaptability to submerged culture and amino acid contens of certain fleshy fungi common in Finland // Karstenia. -1969. -12, №9. p.39 -45.

133. Hattula M.L., Gyllenberg H.G. Protein and fat composition and vitamin content of Boletus (Suillus) luteus mycelium produced in submerged culture // Ibid. -1969.- p.46- 50.

134. Higuchi T. Lignin biochemistry: biosynthesis and biodegradation //Wood sci. Technol.-1990.-v.24.-p.23-63.

135. Hiroi T, Eriksson K. Microbiological degradation of lignin. 1. Influence of the degradation of lignins by the white rot fungus Pleurotus ostreatus // Sven. Pap. -1976. -79, 5.-p.157-167.

136. Ho. M. The cultivation of edible fungi in Taiwan // Mushr. Sci., 1978, VIII. -p.257-264.

137. Ho M. A new technology "plastic bag cultivation method" for growing shiitake mushroom // Mushroom sci., 1989 ,XII. -p.303-307.

138. Huhnke W. Erfahrung bei der verwendung des activmyzel-Anbauverfahrens // Gartenbau wissenschaft, 1961, 9, №11, p.22-28.

139. Huhnke W. Die weiterentwicklung des champignonanbau-verfahrens auf nicht kompostiertem Nahrsubstrat.-Mushroom Sci., 1972, 2, p.503-515.

140. Huhnke w., Lemke G., Sengbush R. Die III Phase der Entwicklung des Champignonanverfahrens auf nicht kompostiertem sterilem nahrsubstrat.// Gartenbauwissens-Chaft, 1967, 32, №6, s.485-502.

141. Huhnke W., Sengbusch R. Active mycelium spawning of cultivated mushroom // Mushroom Grow. Assoc. Bull., 1960, №126, p.97-101.

142. Ishikawa H. Physiological and ecological studies on the Lentinus edodes (Berk.) Sing. // J. Agri. Lab. (Abiko), Japan, 1967, №8. P. 1 - 57.

143. Jablonsky I. Changes in biochemical and physiological activities of substrates colonized by fungi P.ostreatus, L.edodes and A.aegerita // Mushroom sciense, XI: Proc. Eleventh intern. Sci. Confr. Cultivat. Edible fungi. -Sydney, 1981. -p. 659 673.

144. Jablonsky I. Vyvoj a perspectivy pestovani jedlych hub ve svete // Vest. Pest. 1989.Г.23 ,№ 1 ,p.3 2-39

145. Kalberer P.P. The cultivation of Pleurotus ostreatus: experiments to elucidate the influence of different culture conditions on the crop yield //

146. Mushroom sciense, IX: Proc.Ninth Intern. Sci. Congr. Cultivat. Edible Fungi:-Tokyo, 1974.-p.653-661.152. 133.Kalberer P.P. Experiments on the cultivation of shiitake (Lentinus edodes) on sawdust // Mushr. Sci., 1987, XII.

147. Kalberer P.P., Vogel F. Untersuchungen zur Kultur von Pleurotus //Schweiz. Z. Speisepilz-Anbau.-1974.-1,№1.-p.7-11.

148. Kalberer P.P. The cultivation of shiitake (Lentinus edodes) on supplemented sawdust // Mushroom science XII: Proc twelfth Int. congr. Cultiv. Ed. Fungi. -1989. -p.317-325.

149. Kawai G. et al. Effect of liquid mycelial culture used as a spawn on sawdust cultivation of shiitake (Lentinus edodes) // J. Mycoscience, 1996, №37.-p. 201 -207.

150. Kedyk V., Smotlachova R. Production of mushroom from sawdust //Ces. Mycol.-1959.-36,№ 1 .-p. 119-124.

151. Khan S., Mirza J., Khan M. Studies on shiitake mushroom (Lentinula edodes (Berk.) Pegler.) // Science and cultivation of edible fungi, 1991. -p.503-507.

152. King N.J., Smith G.A. A cellulolytic enzyme from the wood-destroying basidiomycete B531. 1 .Growth of the fungus and enzyme production //Int. Biodet. Bull.-1973 .-9,№4.-p.87-90.

153. Lirchoff В., Lelley I. Investigation of shiitake (Lentinus edodes) bag-long cultivation to increase the yield in Germany // Mushroom Sci. — 1991. -13, 2. -p.509-516.

154. Kirk Т., Connors W.I., Leikus I.G. Reguiment for a growth substrate during lignin decomposition by two wood-rotting // Appl. Enyrron. Mycrobiol. -1976. -32, 2.-p. 192-194.

155. Kneebone L.R. Americans have five main lines of mushroom research.-Mushroom Grow. Assoc. Bull., 1962, №155, p. 90-95.

156. Kobayasi Y. Tropical distribution of Lentinus edodes. J.Japan. Bot. -1966,41. p.257-258.

157. Kobayasi Y., Otan Y., Hongo T. Some higher fungi found in New Guinea: Mycological reports from New Guinea and Solomon Islands. -1973. -Rept. Tottori Mycol. Inst. -10. -p.341-356.

158. Komatsu M. Antifungal activity of Hypocrea and Trichoderma occurring on the bed- logs of shiitake mushroom, Lentinus edodes (Berk.)

159. Sing.//Rept.Tottori Mycol. Inst., 1975, №12. P. 189-190.

160. Komatsu M., Tokimoto K. Effect of incubation temperature and moisture content of bed-logs on primordium formation of Lentinus edodes (Berk.) Sing.// Rept. Tottori Mycol. Inst., 1982, №20. P.l04 112

161. Kuo D. and Kuo M. How to grow forest mushroom (shiitake) // Mushroom technology Corp., Naperville, 1983.

162. Laborde J., Clauzel P., Crabos O.JDelmas J. Aspects pratiques de la culture de Pleurotus sp. // Proc Intern. Symp. Substr. Mushroomgrowing and cultivation Pleurotus spec. -Budapest: Akad. Kiado. -1984. -p.66-97.

163. Lambert E.B. principles and problems of mushroom culture.// Bot. Rev., 1938.-4,№l.-p.397-426.

164. Leatham G.F. Selected physiological and biochemical studies of growth and development of shiitake, the edible Japanese forest mushroom, Lentinus edodes // PhD. Thesis, Univ. Wisconsin, Madison, WI.

165. Leatham G., Stahmann M. Effect of light and aeration on fruiting of Lentinus edodes // Trans. Brit. Mycol. Soc., 1987. -p. 9 20.

166. Lelley J. Austernpilze. Red. Dr. K. Keipert, B. Weiss, Bonn, Ulmer, 1974.-196s.

167. Lemke G. Myzelwachstumsteste mit vier Champignon stammen.-Champignon, 1972, 12,№128.-s.l-5.

168. Leontievsky A., Mishurtsovs Z., Golovleva L. Lignolytic activity of the fungus Panus tigrinus during submerged and solid cultivation // VVP symp.-1994.-№89.-p.96-102.

169. Lyr H. Die bildung von Ektoenzymen durch holzzerstorende und holzbewohnende Pilze auf. Verschiedenen Nahrboden V. Ein Komplexes Medium als C-Quelle //Ibid.-1960.-35,№5.-s.258-278.

170. Lyr H. Alterung und Enzymbildung bei hoheren Pilzen //Z. Allg. Microbiol.-1964.- 4,№3.s.249-258.

171. Luthadt W. Holzbewohnende Pilze.-Wittenberg: Lutherstadt, 1969,-122s.

172. Manachere G. Aspects photoperiodiques de la reproduction chez quelques champignons // Bull. Sor. Bot. France. -1978. -125. -p.243-262.

173. Manachere G. Conditions essential for controlled fruitting of macromycetes a revew // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1980 , v.75, №2. -p.255 -270.

174. Mandels M. Microbial source of cellulase // Cellulose as a chemical and resource.-N.Y., 1975.-p.81-105.

175. Mandels M., Weber J. The production of cellulases //Adv. Chem. Ser.-1969.-95,№2.-p.391-415.

176. Miller M. W., Jong S.C. Commercial cultivation of shiitake in sawdust filled plastic bags // Cultivating edible fungi, 1986. NY, Elsevier Science Publisher.

177. Mori K, Toyomasu Т., Nanba H, Kuroda H. Antitumor activity of fruit bodies of edible mushrooms orally administered to mice.// Mushr. J. Tropics, 1987, №7. P. 121

178. Norkrans B. Influence of cellulolytic enzymes hymenomycetes on cellulose preparation of different crystallinity //Physiol. Plant.-1950.-3,№1.-p.75-87.

179. Norkrans B. Influence of some cultural conditions on fungal cellulase production //Physiol. Plant.-1956.-16,№ 1 .-p. 11 -19.

180. Norkrans B. Studies of p-glucoside and cellulose splitting enzymes from Polyporus annosus Fr. /flbid.-1957.-10,№l.-p.l98-214.

181. Norkrans B. Degradation of cellulose //Ann. Rev. Phytopathol.-1963.-l,№2.-p.325- 350.

182. Pegler D.N. The genus Lentinula (Tricholomataceae tribe Collyleieae). -1983- Sydowia 36. -p.227-239.

183. Pilat A. The Bohemian species of the genus Agaricus.//Acta Mus. Nat. Prag., 1951, 7, N1. -p.1-42.

184. Pinkerton M.H. Commercial mushroom growing. London, Faber and Faber. 1954. -230p.

185. Przbylowicz P., Donoghue S. Shiitake growers handbook: the art and science of mushroom cultivation. Dubugue: Hunt Publishing Company, 1990. 170 p.

186. Reese E.T., Siu R.G.H., Levinson H.S. The biological degradation of soluble cellulose derivatives and its relationship to the mecanism of cellulose hydrolysis //J.Bacteriol.- 1950.-59, №4.-p.485-490.

187. Rettew G.K. Tobacco spawn. Пат США №19396006 1934, c.43-47.

188. Royse D.J. Effect of spawn run time and substrate nutrition on yield and size of the shiitake mushroom // Mycologia, 1985, 77. -p.756 762.

189. Royse D.J. Specialty mushrooms and their cultivation //Horticult. Rev., 1997, 19. P.59-97.

190. Royse D.J., Bahler B.D. & Bahler C.C. Enhanced yield of shiitake by saccharide amendment of the syntetic substrate // Appl. Environ. Microbiol., 1990, №56. -p.479 482.

191. Royse D., Schisler L. Cultivation of shiitake on supplemented sawdust // shiitake News. -N3.-1986. -p. 1-4.

192. Royse D.J., Schisler L.C. and Diehle D.A. Shiitake mushrooms. Consumption, production and cultivation.//Interdisc. Sci. Rev.- 1985,- 10(4).-p.329-335.

193. Ryu D.D., Mandels M. Cellulases: biosynthesis and application //Enzyme Microbiol. Technol.-1980.-2,№ 1 .-p.91 -102.

194. Samgina D.I. Agarikovye griby I. Agaricales Fl. Sport. Rast Kazakhst., 1981, 13:1-268.

195. Schmaus L. Ein neuer Pilz (Pleurotus ostreatus). //Ibid., 1972, bd 12, №134 .-p.5- 11.

196. Sinden J.W. Mushroom spawn and method of making same.-U.S. Pat., №1869517, 1932.

197. Singer R. The shiitake and its cultivation in east Asia .//Mushrooms and truffels,1961. London, New York, Leonard Hill Books, p. 132-146.

198. Singer R. The agaricales in modern taxonomy//4th ed. Koenigstein, Koeltz Scientific books, 1986. 965p.

199. Singer R. And Harris B. Mushrooms and truffels: botany, cultivation and utilization. 2nd ed., Koenigstein, Koeltz scientific books, 1987.

200. Stalpers J. Identification of wood-inhabiting Aphillophorales in pure culture // Stud. Mycol. 1978. -16,1. -p.248.

201. Stamets P. Growing gourmet and medicinal mushrooms. -1993. -Ten speed press, -Toronto. -573p.

202. Stanek M. Microorganisms and cultivated edible fungi // Karstenia. -1978. -18, N1. -p.74-76.

203. Stanek M., Rysava J. Application of thermophilic microorganisms i the fermentation of the nutrient substrate for the cultivation of Pleurotus ostreatus (Jacq. Ex Fr.) Kummer //Pest. Zamp.-1971.-8,№l.-p.59-60.

204. Stavenon G. The Agaricales of New Zealand: V. Kew. Bull., 1964, 19. -p.1-59.

205. Su C.H.„Hsu L.R., Tung T.C. Application of SE-HPLC on analyzing polysaccharides produced by mushrooms// Science and cultivation of edible fungi ,Maler (ed.). Rotterdam, A.A. Balkema, p. 329 335.

206. Sugihara T.F., Humfeld H. Submerged culture of the mycelium of various species of mushroom // Appl. Microbiol. 1954. - 2, №1. -p. 170 -172.

207. Sugimori Т., Oyama T. Studies on Basidiomycetes. 1.Production of mycelium and fruit body from moncarbohydrate organic substances // J. Ferment. Technol. -1971. -49, №5. -p.435 446.

208. Till O. Champignonkultur auf sterilisiertem Nahrsubstrat und die wiederverwendung von abgetraganem Kompost. //Mushroom sci., 1962, 5, p.251-257.

209. Tokimoto К. & Kawai A. Nutritional aspects of fruit body development in replacement culture of Lentinus edodes (Berk.) Sing. // Rept. Tottori Mycol. Inst., 1975, №12. -p. 25-30.

210. Tokimoto K. And Komatsu M. Biological nature of Lentinus edodes //In: The Biology and cultivation of edible mushroom, 1978, Ac. Press, p.445-459.

211. Tokimoto K. & Komatsu M. Influence of temperature on mycelial growth and primordium formation in Lentinus edodes // Trans. Мус. Soc. Japan, 1982.-p. 385 -390.

212. Tritatana S. And Tantikanjan T. Effects of some enviromental factors on the morphology and yield of Lentinus edodes (Berk.) Sing. //Mushroom science, 1987.

213. Vedder P.J. Modern mushroom growing. -1978, Educaboek, Culemborg.

214. Wasser S.P., Nevo E. Medicinal mushrooms. Lentinus edodes (Berk.) Sing, (shiitake mushroom). San Antonyo, Haifa, Kiev. 1997. -87 p.

215. Wood R.K. Enzymes produced by fungi and bacteria. Their role in pathogenicity //Ann. Phytopathol.-1978.-10,№2.-p.l27-135.

216. Yaoshikawa К and Tsuetaki H. Utilization of citrus-unshiu peel wastes as the primary substrate for edible mushroom cultivations //Hakkokogaku Kaishi, 1979, 57(6).-p.467-474.

217. Zadrazil F. The ecology and industrial production Pleurotus ostreatus, Pleurotus florida, Pleurotus curnucopiae and Pleurotus eryngii //Mushroom sci., IX: Proc. Ninth Intern. Sci. Congr. Cultivat. Edible fungi.-Tokyo, 1974.-p.621-652.

218. Zadrazil F. Conversion of different plant waste into feed by Basidiomycetes //Ibid.- 1980.-9.-p.243-248.

219. Zadrazil F., Brunnet H. Influence of ammonium nitrate on the growth and straw decomposition of higher fungi //Zeit. Pflanzenernaehr Bodenkd, 1979, 142(3). -p.446-455.

220. Zadrazil F., Schneidereit M. Die Grundlagen fur dei inkulturnahme einer bisher nicht kultivierten Pleurotus Art. //Champignon.-1972.-12,№135.-s.25-32.

221. Zimmermann W. Degradation of lignin by bacteria //J. Of Biotechnology.- 1990.-v.l3.-№2,3.-p.l 19-131.