Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков

Паршин, Александр Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков"

На правах рукописи

09461629а

Паршин Александр Александрович

оптимизация условий культивирования гриба ьежтиз

тюяшш для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве

биопластиков

Специальность 03.01.06 - биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

~ 9 ЛЕИ 2910

Саранск-2010

004616298

Работа выполнена в ГОУВПО "Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева"

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Д. А. Кадималиев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Н.Б. Градова

доктор биологических наук, профессор В.Ф. Смирнов

Ведущая организация: Институт микробиологии РАН им. С.Н. Виноградского

Защита диссертации состоится " £3 " Аа/ в " " часов на засе-

дании диссертационного совета Д 212. 117. 12 при ГОУВПО "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева" по адресу: 430023, г. Саранск, ул. Ульянова, 26, корп. "б", конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева".

Автореферат диссертации разослан "4?" года.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук С.А.Ибрагимова

общая характеристика работы

Актуальность темы. С развитием промышленного производства в биосферу поступает все большее количество ароматических ксенобиотиков фенолыюй природы, в том числе отходов древесины с высоким содержанием лигнина, что приводит к загрязнению окружающей среды (Градова, Кузнецов, 2006). Производство прессованных материалов (ДВП, ДСП) с использованием синтетических смол позволило в значительной степени решить проблему рационального использования отходов древесины. Однако, как было показано в работах (МаЬпеу, 1982; Кадималиев и др. 2006) в процессе производства и эксплуатации полученные материалы выделяют в окружающую среду токсичные вещества фенол и формальдегид. Для снижения токсичности плит рядом авторов (Минин, 1961, Петри, Вахрушева 1972,1976, Болобова и др. 2002) были предложены различные технологии, среди которых наиболее перспективным является биотехнологический подход, основанный на предварительной обработке древесных отходов инокулятом базидиомицетов - грибов белой гнили - с последующим прессованием.

Среди микроорганизмов особое внимание заслуживают - базидиомицеты (Вавь с!ттусе1е8), к которым относится Ь. tigrinus, как организмы способные осуществлять полную биодеградацию лигноцеллюлозных субстратов и некоторых ксенобиотиков за счет продуцирования комплекса внеклеточных ферментов лигнолитического комплекса (ВЛФК). В работах (Ревин и др. 2000, Кадималиев и др. 2004,2006), проведенных на кафедре биотехнологии было показано, что биообработка лигноцеллюлозы данным грибом ведет к образованию дополнительных активных группировок, которые в процессе прессования формируют новые связи. При этом лигнин, подвергнутый грибной обработке, выступает пластификатором, и одновременно, гидрофобизи-рующей добавкой. Несмотря на существенные преимущества этой технологии она до сих пор не реализована прежде всего из-за больших экономических затрат, обусловленных тем, что из-за недостаточной ферментативной активностью инокулята гриба, процесс получения активного инокулята и обработки отходов и ксенобиотиков занимает много времени - около 9 суток. В связи с этим оптимизация условий получения активного инокулята гриба и условий дальнейшей обработки отходов древесины и ксенобиотиков является актуальной

По мнению ряда авторов (Натте11 1983, ЬЫакка 1986, Капич 1993) в процессе биодеградации лигнина участвуют радикалы, источниками которых могут быть ли-пиды лигнолитических грибов (Феофилова 1987, 1998). Исследование этого вопроса позволит лучше понять механизмы биодеградации лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков фенольной природы, повысить эффективность и сократить длительность процессов делигнификации и модификации отходов древесины, оптимизировать условия получения биопластиков.

Цель работы - оптимизация условий культивирования гриба Ь. ^ппив для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых для получения биопластиков.

Задачи исследования:

1. Изучить изменение липидного состава мицелия и активности фосфолипаз гриба Ь. ^гтиэ при глубинном и твердофазном культивировании.

2. Исследовать влияние экзогенных липидов и органических растворителей на активность ферментов лигнолитического комплекса при глубинном и твердофазном культивировании.

3. Исследовать процесс деструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола г~

грибом Ь. ^ппия в присутствии экзогенных липидов и без них.

4. Установить взаимосвязь между изменением липидного состава, активностью фосфолипаз, лигнолитической активностью ферментов лигнолитичсского комплекса и степенью биодеградацией лигнина и фенола.

5. Оптимизировать условия модификации отходов древесины грибом ¿. ^ппия для получения биопластиков.

Основные положения выносимее на защиту.

1. Рост и развитие гриба ЬепИпиз И^чпив на механоактивированных отходах древесины и в присутствии фенола сопровождается изменениями в фосфолипидном составе, лигнолитической и фосфолипазными активностями.

2. Оптимизированы условия получения инокулята гриба ЬепНпиз й§ппиз с повышенной лигнолитической активностью за счет внесения экзогенных липидов и органических растворителей.

3. Добавление подсолнечного масла и толуола при выращивании инокулята и в дальнейшем при обработке отходов древесины позволяет, повысить ферментативную активность культуры гриба, что снижает сроки культивирования и повышает эффективность биомодификации отходов древесины, и снизить экономические затраты на производство биопластиков.

Научная новизна работы. Впервые исследованы изменения в фосфолипидном составе, липолитической - фосфолипазы А2 (ФЛ Л2 ), фосфоинозитид специфичной фосфолипазы С (ФЛ С) и лигнолитической (лакказа, пероксидазы, Мп-пероксидазы) активности гриба ЬепНпш (Рати) Н^гЫм ВКМ Р-3616 И при глубинном и твердофазном культивировании на обычных и механоактивированных опилках.

Установлена связь между липолитической, лигнолитической активностями и степенью биодеструкции лигнина и фенола. Предложен механизм участия фосфолипаз в этих процессах. В ходе исследования обнаружено, что присутствие в среде лигнина и фенола происходит активация ФЛ А2, а активность ФЛ С снижается. В результате наблюдается значительное повышение содержания лизофосфотидилхолина (ЛФХ) и ненасыщенных жирных кислот - источников перекисных радикалов. Предложен возможный механизм участия липидов и липолитических ферментов (ФЛ Аг, ФЛ С) в биодеструкции лигнина и ксенобиотиков.

Исследовано влияние экзогенных липидов (подсолнечное и оливковое масло) и органических растворителей (бутанола и толуола) на физиолого-биохимические характеристики гриба ЬепИпш (Рати) ^гтиэ ВКМ Р-3616 Э при твердофазном и глубинном культивировании.

Научно практическая значимость работы.

Впервые исследовано влияние экзогенных липидов на количественные и качественные изменения лигнина при твердофазном культивировании на лигноцеллюлоз-ных субстратах. Показано, что внесение экзогенных липидов повышает лигнолитиче-скую активность гриба ЬепИпия ^ппия, что в свою очередь вызывает интенсификацию процессов деструкции лигнина лигноцеллюлозных субстратов и приводит к накоплению продуктов деструкции лигнина. Оптимизированы условия применения экзогенных липидов и органических растворителей для повышения лигнолитической активности гриба Ь. и степени делигнификации лигноцеллюлозного сырья и

биодеструкции фенола. Оптимизирована и дополнена технологическая схема получения биопластиков путем биомодификации. отходов древесины инокулятом гриба Ь. tigrinus с повышенной ферментативной активностью.

Связь работы с научными программами. Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках научно-практических работ при

поддержке: программы "Развитие научного потенциала высшей школы 2006-2008" РНП.2.1.17708 «Моделирование и кинетический анализ процессов деструкции лигно-целлюлозных субстратов и ксенобиотиков с участием ферментов и липидов»; гранта Минобрнауки РФ по поддержке ведущих научных школ РИ-112/001/350 "Исследование физиолого-биохимических свойств базидиапьных грибов (на примере Panus tigrí-nus) и физико-химических свойств секретируемых ферментов для получения новых материалов"; гранта Роснауки по поддержке молодых ученых, шифр 2006-РИ-19.0/001/079 "Исследование свойств лигнолитических ферментов гриба Panus tigrinus и их роли в биодеградации растительных отходов и токсичных веществ"; программы "Научные и научно-педагогические кадры инновации России 2009-2013" ФЦП 02.740.11.0820 «Строительные биотехнологии в производстве строительных материалов».

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены для обсуждения на Огаревских чтениях в Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008-2010); на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008-2010); на 14-ой международной конференции «Математика. Компьютер. Образование.» (Пущино, 2007); VII-VIII Республиканской научно-практической конференции «Наука и инновации в Республике Мордовия» (Саранск, 2008-2009), на 3-й международной научно-технической конференции «Биоповреждения и биокоррозия в строительстве» (Саранск, 2009), на международной научной конференции «Биотехнология начала III тысячелетия» (Саранск, 2010), на 2-м международном Конгрессе - Партнеринге и Выставке по биотехнологии и биоэнергетика EurasiaBio 2010.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 21 печатная работа, в числе которых 4 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК, получен 1 патент на изобретение.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на ^¿страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Диссертационная работа включает 38 рисунка и 16 таблиц. Список цитируемой литературы включает 299 источников, в том числе 156 на иностранных языках.

Благодарность. Выражаю особую благодарность и признательность научному руководителю доктору биологических наук Кадималиеву Давуду Али-оглы за внимание и помощь в подготовке диссертации. Выражаю особую благодарность заведующему кафедрой биотехнологии МГУ им Н.П. Огарева доктору биологических наук, заслуженному деятелю науки РФ Ревину Виктору Васильевичу, кандидатам биологических наук Атыкян Нелли Альбертовне, Надежиной Оксане Сергеевне и всему коллективу кафедры биотехнологии МГУ им Н.П. Огарева за поддержку при выполнении диссертационного исследования.

содержание работы

ВВЕДЕНИЕ

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна и практическая ценность полученных результатов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Физиолого-биохимическая характеристика лигнолптических грибов н их практическое применение

В главе представлены: общая характеристика и классификация дереворазру-шающих грибов. Описаны примеры практического применения лигнолитических грибов и выделяемых ими ферментов. Представлен обзор основных печатных работ, посвященных внеклеточным ферментам базидиальных грибов, рассматриваются их строение, свойства, механизмы действия основных ферментов, входящих в состав внеклеточного лигнолитического ферментного комплекса базидиомицетов, а также их роль в процессах биодеградации ароматических соединений фенольной природы. Приводятся данные о химическом составе и структуре и распространенности отходов растительного сырья, а так же ксенобиотиков фенольной природы. В главе так же приведены современные представления об особенностях строения и химического состава мембран клеток лигнолитических грибов, описаны механизмы участия и роль липидов и их метаболитов процессах секреции и функционирования лигнолитических ферментов при биодеструкции субстратов. Проанализированы существующие и перспективные технологии производства композиционных материалов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 2. Объект и методы исследования

Объектом исследования служил лигнолитический гриб Panus (Lentinus) tigrinus (Bulliard: Fries) Fries 317 выделенный сотрудниками кафедры биотехнологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева, и депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов РАН под номером ВКМ F-3616 D (Ревин В.В. и др., 1998).

Гриб поддерживали на косяках с сусло-агаром. Для приготовления инокулята L. tigrinus культивировали в течение 4 суток на жидкой среде Чапека-Докса, содержащей 15 г/л лигносульфоната. Дальнейший рост продуцента проводили глубинным способом на питательной среде (Eggert С. et al., 1996) с добавлением березовых опилок (20 г/л) и механоактивированных отходов древесины в течение 3,6,9 и 12 суток при жидкофазном и . в течение 3,6 и 9 суток при твердофазном культивировании.

Механоактивацию отходов древесины проводили путем измельчения отходов древесины на планетарной мельнице марки Retsch РМ 100.

Выращивание гриба L. tigrinus в экспериментах по изучению влияния фенольных соединений на активность липолитических ферментов - фосфолипаз Аг, и С проводили с добавлением фенола в концентрации 1 и 5 %. Фенол добавляли на третьи (трс-фофаза) и шестые (идиофаза) сутки роста культуры.

Изучение изменений лигнина опилок в процессе биодеградации лигнолитиче-ским грибом L. tigrinus велись на спекторофометре "Specord 75 - IR" по изменению характера и интенсивности поглощения этих веществ в инфракрасной области спектра.

Активность лигнолитических ферментов определяли спектрофотометрически: лакказы по окислению пирокатехина при 410 нм (е = 0,740 мМ"'хсм"') (Синицын А.П. и др., 1990), а пероксидазы по окислению о-дианизидина при длине волны 460 нм (е = 30 мМ"'хсм"') (Ugarova N.N. et al., 1979). За единицу активности принимали окисление 1 микромоля субстрата за 1 мин в 1 мл культуральной жидкости. Удельную активность определяли как мкмоль/ мин/ мг белка.

Содержание белка определяли по методу Бредфорд (Bradford М.М., 1976).

Содержание биомассы определяли весовым методом.

Липиды из мицелия гриба экстрагировали методом Благя-Дайера (Bligh Е. et al., 1959). Качественный анализ смеси липидов анализировали методом микротонкослойной хроматографии на силикагеле. Разделение на фракции проводили двумерно в системах Брокхыоза (Broeckhuyse R.M., 1968). Идентификацию отдельных фракций ФЛ проводили, используя специфические окрашивающие реагенты, "свидетели" и значения Rf. Определение микроколичеств ФЛ проводили по методу Васьковского с соавторами (Vaskovsky V.E. et al., 1975).

Состав метиловых эфиров ЖК анализировали методом газожидкостной хроматографии на хроматографе Кристалл 5000.1 (Россия) с капиллярной колонкой HP-FFAP 50ш/0,32шт/0,5цт (США). Метилирование ЖК проводили по методу Моррисона и Смита (Morrison W.R. et al., 1964).

Содержание фенола контролировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе Миллихром 4 (Россия) (Сычев С.Н. и др., 2002) и фотоколориметрически на фотоэлектроколориметре КФК-2 (Россия) по реакции с 4-аминоантипирином (Лурье Ю.Ю., 1973).

Изготовление биопластиков и определение их физико-механических показателей. Растительные субстраты обработанные инокулятом гриба сушили до влажности 8-10 %, загружали в пресс-форму (5x15) и подвергали прессованию на вулканизаци-онном прессе АПВМ - 904 при различных режимах прессования (давление, температура, время). Полученные образцы испытывали на физико-механические свойства: определяли плотность (ГОСТ 10634-88) и предел прочности при статическом изгибе (ГОСТ 10635-88), влагопоглощение (ГОСТ 10634-88).

Полученные экспериментальные данные статистически обрабатывали с использованием электронных таблиц Microsoft Excel 2003 и пакета программ STAT 2. Линейную аппроксимацию данных проводили с использованием пакета статистической обработки результатов приложения Microsoft Ecxel 2003.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 3. Взаимосвязь метаболизма липидов, активностей фосфолипаз и лигнолнтичсскиу ферментов при культивировании гриба Lentinus tigrinus в присутствии лигноцеллюлозных субстратов н фенола

На первом этапе работы нами отслеживалось изменение соотношения ФЛ и активности ФЛ А2 в мицелии гриба Lentinus tigrinus в процессе роста при жидкофазном культивировании в присутствии механоактивированных отходов древесины.

Было выделено 6 фракций ФЛ мицелия гриба L. tigrinus и идентифицировано 8 индивидуальных ФЛ: фосфатидилглицерин (ФГ)> фосфатидилэтаноламин (ФЭА), фосфатидная кислота (ФК), фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилинозит (ФИ), фосфа-тидилсерин (ФС), лизофосфатидилхолин (ЛФХ), сфингомиелин (СФМ).

Рост гриба в условиях жидкофазного культивирования на механоактивированных отходах древесины сопровождался изменениями в количественном соотношении индивидуальных фракций ФЛ, без изменения их качественного состава. Изменения зависели от вида ФЛ, фазы роста.

Наиболее заметным было изменение ФХ/ЛФХ. Изменение соотношения фракций ФХ и ЛФХ может быть результатом действия ФЛ А2. В связи с этим нами было исследовано изменение активности ФЛ А2 в мицелии гриба L. tigrinus в процессе роста в условиях жидкофазного культивирования на механоактивированных отходах древесины (рисунок 1).

Анализ экспериментальных данных показывает, что активность ФЛ А2 детектируется со 2 суток роста и в процессе культивирования гриба ¿.tigrinus увеличивается

в 2 раза к ] 4 суткам роста.

Для оценки вклада отдельных ФЛ в изменения во фракции ФС+ФИ на следующем этапе наших исследований были отдельно выделены и разделены ФИ. Хроматография ФИ выделенных из общих липидов мицелия гриба Ьлщппив показала наличие трёх фракций, которые, согласно данным литературы и использованию "свидетелей" нами были идентифицированы как фосфотидилинозит (МФИ), фосфотидилинозит 4 -фосфат (ДФИ) и фосфотидилинозит 4,5 - дифосфат (ТФИ).

и 700

¡Г

*3 600

| 500

5 400

ё 200 ж

-§- 100 -в

е о

4 6 8 10

Время культивирования, супси

Рисунок 1 - Изменение активности фосфолипазы А2 мицелия гриба Ьепипия /Ч*ллиу в процессе роста в условиях жидкофазного культивирования на механоактивированных отходах древесины

В процессе роста гриба Ь.^шиэ в условиях жидкофазного культивирования на механоактивированных лигноцеллюлозных субстратах качественный состав ФИ не изменялся, однако наблюдались значительные изменения в их количественном соотношении. Рост гриба сопровождался снижением содержания фракций МФИ и ДФИ и увеличением содержания фракции ТФИ на протяжении всего периода культивирования. Причем в начале культивирования (2 сутки) в составе ФИ преобладали МФИ и ДФИ, а после 4 суток -ТФИ (рисунок 2).

Время культивирования, сутки О МФИ Е) ДФИ 03 ТФИ

Рисунок 2 - Изменение соотношения индивидуальных фракций фосфоинозитидов мицелия гриба ЬепЧпиз ^гтия в процессе роста в условиях жидкофазного культивирования в присутствии механоактивированных отходов древесины

Изменение соотношения индивидуальных фракций ФИ мицелия гриба L.tigrinus, предположительно могло быть результатом действия ФЛ С.

Активность ФЛ С мицелия гриба в условиях жидкофазного культи-

вирования на механоактивированных отходах древесины обнаруживалась со 2 суток роста и к 8 суткам роста достигала максимального значения - 3,79 нмоль Р1/мин на 1 мг белка. Однако в дальнейшем ее значение снижалось и к концу культивирования (14 сутки) составило 1,54 нмоль Рт/мин на 1 мг белка (рисунок 3).

з -

2 4 6 8 10 12 Время культивирования, сутки

Рисунок 3 - Изменение активности фосфоинозитид-специфичной фосфолипазы С мицелия гриба ЬепИпия й^ппиз в процессе роста в условиях жидкофазного культивирования в присутствии механоактивированных отходов древесины

При добавлении фенола в концентрации до 5% в процессе роста гриба происходило снижение содержания ксенобиотика. При этом качественный состав ФИ как в контрольном варианте, так и в опытном не изменялся, однако наблюдались значительные изменения в их количественном соотношении, при этом происходило снижение содержания фенола (рисунок 4).

Время культивирования, сутки

□ контроль

Щ добавление 1 % фенога в трофофазу В добавление 5% фенола в трофофазу (Ш добавление 1 % фенола в идиоАазу

□ добавление 5% фенола в идиофазу

Рисунок 4 - Изменение относительного содержания фракций ТФИ (% от суммы ФИ) мицелия гриба Ь. ^гшиэ в процессе биодеградации фенола

Характер изменений активности липаз был аналогичен изменениям в присутствии лигноцеллюлозного субстрата - активность ФЛ А2 повышалась, ФЛ С снижалась. Причем при повышении концентрации фенола до 5 % наблюдаемые эффекты усиливались (рисунок 5,6).

Время культивирования, сутки

—Контроль —■— 1% фенола * 5% фенола

Рисунок 5 - Изменение активности ФЛ А2 (мкг ЖК / мг белка*час) мицелия гриба/,, ¿(¿гмш в процессе биодеградации фенола при добавлении фенола в идиофазу

время культивирования, сутки

—контроль —внесение 1% фенола внесение 5% фенола

Рисунок 6 - Изменение активности фосфоинозитид-специфичной фосфолипазы С мицелия гриба ЬепИпш ^Нпия при добавлении фенола на 3 сутки роста

Для установления связи между метаболизмом ФЛ и лигнолитической активностью параллельно мы определяли активности основных ферментов ВЛФК.

Из проведенных опытов видно что, при использовании ультрадисперсных древесных опилок в процессе глубинного культивирования гриба Ь.^гмия повышается активность лакказы, и по сравнению с контролем максимум активности фермента смещается на 2 суток к началу культивирования. При этом наблюдается увеличение не только общей, но и удельной лакказной активности (рисунок 7 а).

Не зависимо от вида лигноцеллюлозного субстрата в процессе глубинного культивирования активность секреторной пероксидазы растительного типа гриба I; .^ппих возрастает к 6 (березовые опилки) - 8 (механоактивированный лигноцел-люлозный субстрат) суткам роста и до конца процесса культивирования остается на достаточно высоком уровне (рисунок 7 б).

а)

б)

120-•

ш. 80

60 ■•

1000

900

800

700 2 й

600 * 1 а -г • Ы

500 х <5 Л X

400 а ^ 3< 5

300 1

200

100

1ч

¡а 40 Й

■■ 30

2 4 6 8 10 12 14 Время культивирования, сутки

4 б 8 10 12 Время культивирования, сутки

—■— Аетнвно сть-Береэовые овнлш

—♦— АпнБНОсть-МесаноапиЕнрсвакный липгоцеллюлошый субстрат

—Уд. АктВБНосп-Бериовьи опоя&я

—•— Уд. Акгнвность-Мехаяоакптяровавныйлнгшщеддюлозяый субпрах

Рисунок 7 - Изменение активности лакказы - а) и пероксидазы - б) культуры гриба Ь.^ппия при глубинном культивировании в присутствии механоактивированных

отходов древесины

Активность Мп-пероксидазы в процессе глубинного культивирования на березовых опилках детектируется со 2 суток роста и к 6 суткам достигает своего максимального значения. В дальнейшем активность Мп-пероксидазы постепенно снижается, но до конца культивирования остается на достаточно высоком уровне. При использовании механоактивированного лигноцеллюлозного субстрата активность Мп-пероксидазы так же детектируется со 2 суток роста, но если в начальный период культивирования (2-4 сутки) ее значение несколько ниже контрольного варианта, то к 6 суткам роста активность Мп- пероксидазы достигает своего максимального значения, превышающего значение контрольного варианта (рисунок 8).

Вероятно, механическая активация лигноцеллюлозных субстратов повышает доступность питательных компонентов для роста и развития лигнолитического гриба белой гнили Ь.и&1пиз, что приводит к увеличению синтеза ферментов.

14 12

10 --

4 - ■ 2 --

100

60 1

50 X

40 19

30 1

Время культивирования, сутки —■— Ахтввяот-Береэовые оснлхи

—♦— Акгшшость-Мстантаиввнрсмяиый лнпюиеллкшшшй субстрат —В— Уд. Актнвиость-Береэсеые опнлхя

—*— Уд. Аютвность-Мсханоагтаы^шанныйлкшоцелпююзяыйсубстрат

Рисунок 8 - Изменение активности Мп- пероксидазы культуры гриба Ltigrinus при глубинном культивировании в присутствии механоактивированных

отходов древесины

Таким образом, в механизмы деструкции лигнина дереворазрушающими грибами с участием лигнолитических ферментов вовлекаются липиды и их метаболиты. Можно предположить следующий механизм участия липидов в процессах деструкции субстрата: на поверхности субстрата (древесины) или в присутствии ксенобиотиков фенольной природы происходит активация ФЛ А2, вследствие чего в примицеллиаль-ный слой выделяется большое количество жирных кислот. Под действием липоокси-геназ и активных форм кислорода происходит образование перекисных радикалов липидов (Феофилова, 1987), которые нейтрализуют (окисляют) присутствующие в древесине ароматические соединения ингибиторы роста грибов, в том числе лигнин. Одновременно мицелий гриба секретирует во внеклеточную среду ферменты лигно-литического комплекса. Все это приводит к снятию барьера обусловленного ароматическими соединениями (смолами) и/или повышению доступности последних воздействию ферментов лигнолитического комплекса. Таким образом, вокруг мицелия образуется более рыхлая и нейтральная среда, посредством которой гифы лигнолитических грибов проникают вглубь древесного субстрата.

ГЛАВА 4. Влияние экзогенных липидов и органических растворителей на физиолого-биохимические характеристики гриба £ел/мм tigrinus ВКМР-3616 й Исходя из этого, мы предположили, что добавление экзогенных липидов способных выступать, как доноры дополнительных источников радикалов позволит интенсифицировать процессы биодеструкции лигноцеллюлозных субстратов базидиальны-ми грибами. Растительные масла различного жирнокислотного состава могут служить источником перекисных радикалов жирных кислот - продуктов действия грибных

липаз и липоксигеназ. В качестве экзогенных липидов использовали подсолнечное и оливковое масло различающихся по жирно-кислотному составу

Как видно из представленных данных добавление подсолнечного масла в концентрации 0,05% приводило к увеличению лакказной активности. К 6 суткам роста активность достигала максимального значения (рисунок 9 а). При повышении концентрации подсолнечного масла в культуральной среде до 0,5% был отмечен значительный рост лакказной активности.

В колбах с концентрацией оливкового масла 0,05%,общая активность к 6 суткам повысилась, к 12 суткам активность снизилась. Удельная активность по сравнению с общей увеличилась, на б сутки она снизилась. При добавлении в среду 0,5% оливкового масла на б сутки общая активность увеличилась, с 9 суток заметен спад, и на 12 сутки она снизилась. Удельная лакказная активность по сравнению с общей повышалась до 6 суток, но уже с 9 суток она убывает.

Характер изменения активности пероксидазы в опытных вариантах был сходным ранее полученным данным без липидов, но активность была выше (рисунки 9 б).

3000 5 1800 £ 1600 | МИ

а)

б)

5 20

бсуткм Ч сутки

Вреив культивирования

3 сутки

бсутхи 5 сутки

Время кулыжвириваиия

12супи

ЕЗ 0,05% подсолнечного масла □ 0,5% подсолнечного масла □ 0,05% оливкового масла а 0,5% оливкового масла

Рисунок 9 - Изменение лакказной (а) и пероксидазной (б) активности гриба Ьеп-Ипия ^ппш при жидкофазном культивировании на механоактивированном лигно-целлюлозном субстрате в присутствии экзогенных липидов

В результате исследований, было обнаружено, что экзогенные липиды в присутствии органических растворителей оказываю^ различное действие на ферментативную активность гриба ЬепИпм tigrinus в зависимости от вида и используемой концентрации.

Как видно из представленных данных добавление 1 % толуола и подсолнечного масла в концентрации 0,05% приводило к увеличению лакказной активности. К 6 суткам роста активность достигала максимального значения выше, чем в варианте с добавлением липидов без толуола. В дальнейшем активность лакказы постепенно снижалась, но до конца процесса культивирования оставалась на достаточно высоком уровне, повышение концентрации подсолнечного масла в культуральной среде до 0,5% в присутствии 1% толуола, также значительно стимулировало рост лакказной активности (рисунок 10 а).

Внесение 1% толуола на фоне подсолнечного масла увеличивает активность пероксидазы. Причем не зависимо от концентрации подсолнечного масла активность пероксидазы достигает своего максимального значения на 9 сутки роста, в дальнейшем к 12 суткам роста активность пероксидазы снижается.

Добавление 1% толуола на фоне оливкового масла не оказало существенного влияния на активность пероксидазы (рисунок 10 б).

а)

Зсутеи

б сутки 9 сутки

Время культивирования

12 сутки

Зсутеи

б)

б суток 9сутев

Время культивирования

□ 0,05% подсолнечного масла Ш 0,5% подсолнечного масла ЕЗ 0,05% оливкового масла в 0,5% оливкового масла

Рисунок 10 - Изменение активности лакказы - а), и пероксидазы - б) гриба Ьеп-Ипих И§ппиз при жидкофазном культивировании на механоактивированном лигно-целлюлозном субстрате в присутствии экзогенных липидов и 1 % толуола

Добавление в среду культивирования культуры гриба ЬепИпиз tigrinus оливкового масла и 1 % бутанола, незначительно повышало активность лакказы, на протяжении всего процесса культивирования (рисунок 11 а).

Добавление 1% бутанола и оливкового масла в начале роста снижало активность пероксидазы. Увеличение активности пероксидазы наблюдалось только к 9 суткам роста при добавлении 0,05% оливкового. Независимо от концентрации и вида экзогенных липидов при внесении 1% бутанола наибольшая активность пероксидазы наблюдалась в конце периода культивирования (9-12 сутки), что вероятно связано с природной особенностью данного фермента включаться в процессы деструкции на более поздних этапах (рисунок 116).

а)

3 сутки

12 сутки

3 сутки

бсутки 9сутки

Время культивироваиия

6 сутки 9 сутки

Время культивирования

□ 0,05% подсолнечного масла В 0,5% подсолнечного масла

□ 0,05% оливкового масла В 0,5% оливкового масла

Рисунок 11- Изменение активности лакказы - а), и пероксидазы - б) гриба Ьеп• йпиз С^гтиз при жидкофазном культивировании на механоактивированном лигно-целлюлозном субстрате в присутствии экзогенных липидов и 1 % бутанола

Таким образом, внесение в питательную среду подсолнечного масла повышало лигнолитичскую активность гриба, а оливковое масло существенного влияния на активность не оказывало. Вероятно, это связано с тем, что подсолнечное масло содержит больше ненасыщенных жирных кислот, источников перекисных радикалов, вовлекаемых в процессы биодеструкции лигнина.

Биодеградация лигнина грибом ^ппия зависит от активности лигнолити-ческих ферментов и интенсивности роста гриба. В природных условиях высшие грибы адаптированы к росту на определенных породах древесины. Полученные данные показывают, что обработка опилок вызывала уменьшение содержания лигнина в течение изученного срока культивирования.

Лигнинразрушающие грибы, воздействуя на лигноцеллюлозу субстрата, изменяют качественно и количественно ее состав, содержание функциональных групп лигнина (рисунок 12).

Время культивирования, сут. ■ карбонильные группы

□ Фенольные гидроксильные группы

□ ароматическое кольцо

Рисунок 12 - Изменение относительного содержания функциональных групп лигнина механоактивированных отходов древесины обработанной лигнолитическим

грибом 1.4%ппиз

ГЛАВА 5. Получение биопластиков из отходов древесины обработанных грибом

ЬепНпиз

В ранее проведенных исследованиях (Шутова 2001, Болобова 2002, Кадима-лиев 2006) было показано, что физико-механические свойства плит зависят от лигно-литической активности гриба Ь.^ппих и условий обработки. Наиболее высокую прочность имели пластики изготовленные из сырья при прессовании материала, обработанного шестисуточным инокулятом с активностью лакказы - 48,5, пероксидазы - 1,5, Мп-пероксидазы - 6 ед/мл и степенью снижения содержания лигнина на 19,3 % к третьим суткам культивирования.

При добавление в питательную среду подсолнечного масла в концентрации 0,5% активности ферментов составили: лакказы - 95 ед/мл, пероксидазы - 2,12 ед/мл, Мп-пероксидазы - 5 ед/мл уже на 3 сутки культивирования. В связи с этим для предварительной обработки древесных опилок для получения биопластиков мы использовали 3-х суточный инокулят.

Древесное сырье обрабатывали инокулятом в течении 3-х и 6 суток и подвергали горячему прессованию при температуре 150 °С и давлении 90 и в течении 15 минут. Полученные биопластики испытывали на прочность и плотность (таблица 1).

Максимальную прочность имели опытные образцы плит с предварительной обработкой 3-х суточным инокулятом с липидами в течении 3-х суток.

Таблица 1 - Физико-механические показатели биопластиков при давлении прессования 90 кгс/см2, продолжительности прессования 15 минут и температуре 150° С.

Варианты биопластиков Предел прочности, МПа Плотность, кг/м-*

Контроль 7,2±0,6 650±51

0,05% подсолнечного масла 8,5±1,2 730±51

0,5% подсолнечного масла 17,8±4,5 880±30

0,05% оливкового масла 9,2±1,3 ч 680±39

0,5% оливкового масла 13,2±2,6 835±27

В результате прессования образцов полученных при обработке опилок грибом без внесения экзогенных липидов получены биопластики не соответствующие требованиям ГОСТ, в то время как внесение 0,5 % подсолнечного масла позволяет получить в тех условиях прессования биопластики соответствующие требованиям ГОСТа по прочности - 17,8 МПа, при более мягких условиях прессования и за более короткий срок.

Таким образом, добавление экзогенных липидов при выращивании инокулята и в дальнейшем при обработке отходов древесины позволяет, повысить ферментативную активность культуры гриба, сокращает время обработки на 2-3 суток и повышает эффективность биомодификации отходов древесины используемых для производства биопластиков.

На основании проведенных нами исследований была дополнена схема использования гриба I. {до-шю для биомодификации отходов древесины с целью получения биопластиков (рисунок 13) и приведен экономический расчет стоимости производст-

Рисунок 13. Схема использования культуры гриба Ь. ¡щИпш для биомодификации отходов древесины с целью получения биопласти|<ов

Предлагаемая нами технология включает в себя схему производства композиционных материалов с заменой этапов приготовления и добавления синтетических смол на получение инокулята гриба Ь. tigrinus в присутствии подсолнечного масла и обработку полученным инокулятом отходов древесины.

Таблица 2. Плановая калькуляция на производства 1 куб. м инокулята

(достаточно для обработки 10 тон технологической стружки или производства 250 плит размером 3060*1830*10 мм)____

Наименование Ед. изм.' Плановая цена, руб. Hai Mj

Кол-во Сумма, руб

I Сырье и основные материалы

Лигносульфонат кг 30 15 450,00

Сахароза кг 30 30 900,00

Хлористый калий кг 68,2 0.5 34,10

Медь сернокислая пяти водная кг 107,8 0,22 23,76

Натрий азотнокислый кг 63,8 3 191,40

Марганец сернокислый пяти водный кг 130,9 0,5 65,45

Железо сернокислое семи водное кг 42,9 0,01 0,43

Калий фосфорнокислый одноза-мегценный кг 112,2 1 112,20

Растительное масло (подсолнечное) л 54 5 170,00

Толуол л 81,4 10 814,00

Итого по I: руб. 2761,34

II Энергия на технологические цели:

электроэнергия кВтч 1,59 500 795,00

пар Гкал 336,00 4,4 1471,68

вода артезианская м.куб. 8,25 0,750 6,19

воздух высокого давления т.м.куб. 590,00 0,168 99,12

Итого по II: руб. 2371,99

III Затраты по заводу

Основная работа руб. 501,54

Отчисления на соцстрах руб. 71,22

Цеховые расходы руб. 906,00

Общезаводские расходы руб. 906,00

Итого по III 2384,76

Производственная себестоимость на выращивание инокулята руб. 7518,09

IV Упаковочные материалы

Бочка объемом 120 л (возвратная тара) шт. 450 8 3600,00

Маркировка шт. 0.35 5 1,75

Итого по IV 3601,75

¡¡непроизводственные расходы руб. 222,05

Полная себестоимость руб. 11341,89

Таблица 3 Плановая калькуляция на производства 1 куб м ДСП (около 20 плит размером 3060*1830*10 мм)

Наименование Ед. изм. . Плановая цена, руб. На 1 м3

Кол-во Сумма, руб

I Сырье и основные материалы

Технологическая стружка кг 8,00 700 5600,00

Инокулят л 11,34 70 793,93

Итого по I: руб. 6393,93

II Энергия на технологические цели:

электроэнергия кВтч 1,59 1000 1590,00

Итого по II: руб. 1590,00

Основная работа руб. 501,54

Отчисления на соцстрах руб. 71,22

Цеховые расходы руб. 906,00

Общезаводские расходы руб. 906,00

Итого по III 2384,76

Производственная себестоимость на производство ДСП руб. 10368,69

Внепроизводственные расходы руб. 222,05

Полная себестоимость руб. 10590,74

За I плиту руб. 529,54

Примерная себестоимость 1 плиты ДСП, произведенной по классической технологии руб. 480,00

Итого разница руб. -49,54

Удорожание % 10%

Таким образом, изготовление биопластиков по предложенной технологии удорожает получение продукта лишь на 10% по сравнению с традиционной, при полном исключении применения токсичных связующих.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования расширяют существующие представления о механизмах участия липидов и их метаболитов, а также липолитических и лигнолитических ферментов в процессах деструкции лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков фенольной природы (фенол).

Анализ полученных экспериментальных материалов и данных литературы позволяет дополнить существующие теории механизмов биодеструкции лигноцеллюлоз ных субстратов.

В отсутствии лигноцеллюлозных субстратов и фенола в питательной среде наблюдается относительно не высокие активности как ФЛ Аг так и ФИ - ФЛ С. В случае с дереворазрушающими грибами механизмы разрушения лигнина и других феноль-

ных структур можно дополнить следующими положениями. На поверхности субстрата (древесины) или в присутствии ксенобиотиков фенольной природы происходит активация ФЛ Аз вследствие чего в примицеллиальный слой выделяется большое количество ЖК, добавление субстрата приводит к активации ФЛ А2, в то время как активность ФИ - ФЛ С при этом снижается. Под действием липогсигеназ и активных форм кислорода происходит образование перекисных радикалов липидов, которые нейтрализуют (окисляют) присутствующие в древесине ароматические соединения ингибиторы роста грибов, в том числе лигнин. Одновременно мицелий гриба секретирует во внеклеточную среду ферменты лигнолитического комплекса. Все это приводит к снятию барьера обусловленного ароматическими соединениями и/или повышению доступности последних воздействию ферментов лигнолитического комплекса. Таким образом, вокруг мицелия образуется более рыхлая и нейтральная среда, посредством которой гифы лигнолитических грибов проникают вглубь древесного субстрата.

Повышение ферментативной активности культуры гриба Ь. ^гтия при культивировании в присутствии органических растворителей и экзогенных липидов позволяет сократить сроки биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, что расширяет возможности использования данной технологии в очистке окружающей среды от фенолов, способствует повышению эффективности и удешевлению технологии производства экологически безопасных биопластиков.

ВЫВОДЫ

1. Активность ВЛФК при жидкофазном и твердофазном культивировании гриба ¿епИпих (Рати) И^ппиь ВКМ Р-3616 О возрастает в присутствии механоактивиро-ванных отходов древесины и фенола. Максимум лакказной активности был зафиксирован на 4 сутки культивирования и составил 109,19 ед/мл, активность секреторной пероксидазы растительного типа достигает своего максимального значения - 4,22 ед/мл к 8 суткам роста, Мп-пероксидазная активность детектируется со 2 суток роста и к 6 суткам достигает своего максимального значения - 6,57 ед/мл.

2. Жидкофазное и твердофазное культивирование сопровождается изменениями в фосфолипидном составе мицелия гриба. Фазе активного роста и интенсивной биодеструкции лигноцеллюлозного субстрата и фенола соответствует высокое содержание лабильных фосфлолипидов и прежде всего ФЭА с высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот, а также ЛФХ.

3. Из мицелия гриба выделены и идентифицированы 3 фракции фосфоинозитидов: фосфотидилинозит (МФИ), фосфотидилинозит 4 - фосфат (ДФИ) и фосфотидилино-зит 4,5 - дифосфат (ТФИ). При жидкофазном и твердофазном культивировании гриба ЬепИпих ^ппих ВКМ Р-3616 О происходит изменение соотношения фракций ФИ. Рост гриба в присутствии фенола и механоактивированных отходов древесины сопровождался снижением содержания фракций МФИ и ДФИ и увеличением содержания фракции ТФИ на протяжении всего периода культивирования. Причём период максимальной лигнолитической активности гриба (9-12 сутки) характеризовался более высоким содержанием фракции ТФИ и более низким содержанием фракций МФИ и ДФИ.

4. При жидкофазном, и твердофазном культивировании гриба Ь. ^ппиз ВКМ Р-3616 О присутствии механоактивированных отходов древесины и фенола происходит активация фосфолипазы и Аг ингибирование активности ФИ специфичной фосфоли-пазы С. В результате наблюдается значительное повышение содержания лизофосфо-тидилхолина и ненасыщенных жирных кислот - источников перекисных радикалов.

5. Оптимизированы условия повышения ферментативной активности инокулята путем внесения липидов и органических растворителей, что позволило повысить лиг-нолитическую активность и интенсивность биодеструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола. Внесение подсолнечного масла вызывало увеличение лакказной и пероксидазной активности, максимумы активностей наблюдались на 6 и 9 сутки роста. Внесение оливкового масла в тех же условиях практически не влияет на лигноли-тическую активность и степень биодеструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола. Присутствие в следе бутанола и толуола в концентрации 1 % позволяет повысить эффективность применения подсолнечного масла.

6. Оптимизированы условия биомодификации инокулятом гриба L. tigrinus древесины и технологическая схема получения биопластиков. Добавление подсолнечного масла и толуола при выращивании инокулята и в дальнейшем при обработке отходов древесины позволяет, повысить фермрнтативную активность культуры гриба, что снижает сроки культивирования и повышает эффективность биомодификации отходов древесины на 2 суток и снизить экономические затраты.

7. Биопластики полученные из отходов древесины обработанные 3-х суточным инокулятом в течении 3-х суток имели характеристики соответствующие ГОСТ по прочности на изгиб 17,8 МПа, плотности 880 кг/м3.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

(* - статьи в журналах рекомендованных ВАК)

<ч

1. Паршин A.A. Повышение секреции лигнолитических ферментов грибом Lentinus tigrinus под действием бутанола и толуола: изменения в составе фосфолипидов мембран / О.С. Надежина, Ю.Н. Французова, A.A. Паршин, Д.А. Кадималиев // Наука и инновации в республике Мордовия: Материалы VI республиканской научно-практической конференции молодых ученых. - Саранск, 2007. -С. 616-618.

2. Паршин A.A. Изменение липидного состава мицелия лигнолитического гриба Lentinus tigrinus в процессе биодеструкции фенола. / A.A. Паршин, О.С. Надежина, C.B. Малушкин, Д.А. Кадималиев // Биология наука XXI века: Материалы 11-й Пу-щинской международной школы-конференции молодых ученых. - Пущино, 2007. - С. 42-43. ф,0

3. Паршин A.A. Изменение продуктов перекисного окисления липидов мицелия гриба Lentinus tigrinus в процессе биодеградации фенола. / A.A. Паршин, О.С. Надежина, C.B. Малушкин, Д.А. Кадималиев // Бология: теория, практика, эксперимент: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100 -летию со дня рождения д-ра биол. Наук, проф. Сапожниковой Е.В. - Саранск, 2008. -С. 5-6.

4. Паршин A.A. Изменение состава фосфолипидов мицелия гриба Lentinus tigrinus при твердофазном культивировании. / О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев, A.A. Паршин II Проблемы биоэкологи и пути их решения (Вторые Ржавитинские чтения): Материалы международной научной конференции. - Саранск, 2008. -С. 413-414.

5. Паршин A.A. Деструкция фенола грибом «белой гнили» Lentinus tigrinus / A.A. Паршин О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев, H.A. Атыкян //Современная микология в России: Материалы 2-го съезда микологов России. Москва, 2008. - С. 337.

6. Паршин A.A. Сохранение жизнеспособности гриба Lentinus tigrinus в присутствии фенола. / A.A. Паршин, Д.А. Кадималиев, О.С. Надежина, C.B. Малушкин // Наука и инновации в республике Мордовия: Материалы VII республиканской научно-практической конференции молодых ученых. - Саранск, 2008. -С. 738-742.

7.* Паршин A.A. Повышение уровня секреции лигнолитических ферментов грибом Lentinus tigrinus внесением бутшюла и толуола при глубинном культивировании. Д.А. Кадимапиев, О.С. Надежина, H.A. Атыкян, В.В. Ревин, A.A. Паршин, А.И. Лаврова, П.В. Духовскис // Прикладная биохимия и микробиология. - 2008. - Т. 44. - № 5. -С.-582-588.

8.* Parshin A.A. Increased secretion of lignolityc enzymes by the Lentinus tigrinus after addition of butanol and toluene in submerged cultivation / D.A. Kadimaliev, O.S. Na-dezhina, N.A. Atykyan, V.V. Revin, A.A. Parshin, A.I. Lavrova, P.V.Dukhovskis // Applied Biochemistry and Microbiology. 2008. Vol. 44. № 5. - P. 528-534.

9*. Паршин A.A. Патент на изобретение №2345957 РФ. Способ биодеструкции фенола / Д.А. Кадималиев, В.В. Ревин, A.A. Паршнн, О.С. Надежина, H.A. Атыкян, А.Б. Рубин, К.В. Шайтан (02.10.2009).

10. Паршин A.A. Изменение Mn-пероксидазной активности гриба Lentinus tigrinus при глубинном культивировании на ультрадисперсном древесном субстрате / A.A. Паршин, О.С. Надежина, P.C. Васильев, Д.А. Кадималиев // Развитие биотехнологии в Республике Мордовия: Материалы республиканской конференции молодых ученых. - Саранск, 2009. -С. 7-11.

11. Паршнн A.A. Возможные механизмы участия липидов мицелия гриба «белой гнили» L. tigrinus в биоповреждении древесины / A.A. Паршин, О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев, В.В. Ревин // Биоповреждения и биокоррозия в строительстве: Материалы третьей международной научно-технической конференции. - Саранск, 2009. -2009.-С. 156-159.

12. Паршин A.A. Использование гриба Lentinus tigrinus для снижения высоких концентраций фенолов в жидких средах / О.С. Надежина, A.A. Паршин, H.A. Атыкян, Д.А. Кадималиев // Развитие биотехнологии в Республике Мордовия: Материалы республиканской конференции молодых ученых. - Саранск, 2009. -С. 40-41.

13. Паршин A.A. Влияние экзогенных липидов на изменение лигнолитической активности гриба L.tigrinus / A.A. Паршнн, О.С. Надежина, Сидоренкова Е.О., Д.А. Кадималиев / XXXVIII Огаревские чтения: Матер, науч. конф. - Саранск, 2009. -С. 11-12.

14. Паршин A.A. Влияние внесения экзогенных липидов на делегнификацию березовых опилок грибом L.tigrinus / A.A. Паршин, P.C. Васильев, О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев / XXXVIII Огаревские чтения: Матер, науч. конф. Саранск, 2009. - С. 1213.

15. Паршин A.A. Влияние липидов на делегнификацию лигноцеллюлозных субстратов грибом Lentinus tigrinus / О.С. Надежина, A.A. Паршин, Д.А. Кадималиев, H.A. Атыкян, В.И. Телятник// 2-й Международный Конгресс-Партнеринг и Выставка по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио - 2010». М., - С. 130.

16. Паршин A.A. Возможный механизм биодеструкции лигнина базидиомице-тами / A.A. Паршин, О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев, H.A. Атыкян, P.C. Васильев // 2-й Международный Конгресс-Партнеринг и Выставка по биотехнологии и биоэнергетике «ЕвразияБио - 2010». М., - С. 143-144.

17. Паршин A.A. Изучение роли фосфоинозитидов в функционировании лигно-литичсского гриба Lentinus tigrinus / О.С. Надежина, A.A. Паршин, Д.А. Кадималиев, Масловская Е.В. // Биотехнология начала III тысячелетия: Материалы международной научной конференции. - Саранск, 2010. - С. 98.

18. Паршин A.A. Влияние экзогенных липидов на изменение Мп-пероксидазной активности гриба Lentinus tigrinus / A.A. Паршин, О.С. Надежина, Д.А. Кадималиев // Биотехнология начала III тысячелетия: Материалы международной научной конфе-

ренции. - Саранск, 2010. - С. 99.

19 Паршин А.А. Влияние экзогенных липидов на рост и развитие гриба Lentinus tigrinus в присутствии бутанола и толуола / А.А. Паршин, О.С. Надежина, Д.А. Ка-дималиев, М.А. Русяева // Биотехнология начала III тысячелетия: Материалы международной научной конференции. - Саранск, 2010. - С. 100.

20*. Паршин А.А. Изменение состава фосфолипидов и активности фосфолипаз гриба Ltigrinus ВКМ-3516 D при росте в присутствии фенола и лигноцеллюлозных субстратов / Д.А. Кадималиев, О.С. Надежина, А.А. Паршин, Н.А. Атыкян, В.В. Ре-вин//Биохимия. - 2010. - Т. 75.-№ 11. - С. -1522-1532.

21.* Parshin А.А. Change in phospholipid composition and phospholipase activity of the fungus Lentinus tigrinus VKM FF3616D during growth in the presence of phenol and pignocellulosic substrates / D.A. Kadimaliev, O.S. Nadezhina, A.A. Parshin, N.A. Aty-kyan, V.V. Revin // Biochemistry. 2010. Vol. 75. № 11. - P. 1342-1351.

Подписано в печать 16.11.10. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1731. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Паршин, Александр Александрович

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Физиолого-биохимическая характеристика лигнолитических грибов и их применение

1.1. Грибы возбудители гнили древесины

1.2. Внеклеточные ферменты лигнолитического комплекса грибов

1.3. Строение и химический состав клеток лигнолитических грибов.

1.4.Роль липидов и их метаболитов в функционировании лигнолитических грибов

1.5. Субстраты лигнолитических грибов

1.6. Применение лигнолитических грибов

1.6.1 Биодеструкция ксенобиотиков

1.6.2 Делигнификация материалов 58 1.6.3. Производство биопластиков и упаковочных материалов

ГЛАВА 2. Объект и методы исследования

2.1. Объекты исследования

2.2. Реактивы и материалы

2.3. Культивирование гриба ЬепНпш ^ппш

2.4. Определение содержания компонентов лигнолитического сырья

2.4.1. Выделение лигнина

2.4.2 Определение содержания лигнина

2.4.3. ИК-спектроскопия лигнина.

2.4.4. Определение содержания фенольных гидроксильных групп лигнина ^

2.4.5. Определение содержания карбоксильных групп лигнина 68 2.5 Определение количества биомассы 69 2.6. Определение концентрации белка

2.7. Исследование активности ферментов лигнолитического комплекса

2.7.1. Определение лакказной активности по пирокатехину

2.7.2. Определение пероксидазной активности по о- 70 дианизидину

2.7.3. Определение Мп-пероксидазной активности

2.8 Исследование липидов и липолитической активности ЬепНпш щппия

2.8.1. Выделение липидов

2.8.2. Хроматография и количественное определение фосфолипидов

2.8.3. Определение активности фосфолипазы А

2.8.4. Выделение фосфолипидов

2.8.5. Хроматографическое разделение и идентификация фосфолипидов

2.8.6. Определение активности ФИ-специфичной фосфолипазы С

2.9. Определение содержания фенола

2.9.1. Колориметрическое определение с 4-аминоантипирином

2.9.2. Определение содержания фенола методом высокоэффективной жидкостной хроматографией

2.10 Получение и испытание биопластиков

2.11. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. Взаимосвязь метаболизма липидов, активностей фосфолипаз и лигнолитических ферментов при культивировании гриба ЬепНпт Н^тш в присутствии лигноцеллюлозных субстратов и фенола

3.1. Изменение состава липидов, фосфолипазной и лигнолитической активности гриба Ьепйпт й^тш при жидкофазном культивировании в присутствии лигноцеллюлозных субстратов и фенола

3.2 Исследование изменения количественного содержания и структуры лигнина, механоактивированных отходов древесины после обработки грибом Ь. й^ппж

ГЛАВА 4. Влияние экзогенных липидов и органических растворителей на физиолого биохимические характеристики гриба ЬепНпш И£г1пт ВКМР

4.1 Влияние экзогенных липидов на накопление биомассы и лигнолитическую ферментативную гриба ЬепйпиБ ^гтш

4.2 Влияние органических растворителей и экзогенных липидовна физиолого биохимические характеристики гриба ЬепИпш ВКМР-3616Э

ГЛАВА 5 Получение биопластиков из отходов древесины обработанных грибом ЬепИпш й^гтин

5.1. Влияние условий обработки на физико-механические свойства биопластиков

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков"

Актуальность темы. С развитием промышленного производства в биосферу поступает все большее количество различных лигноцеллюлозных отходов с высоким содержанием лигнина и ароматических ксенобиотиков, это приводит к образованию огромных отвалов промышленных лигнинов которые в значительной степени загрязняют окружающую среду.

С точки зрения экологии и эффективности преимущественными методами модификации и утилизации этих отходов являются биологические методы с применением микроорганизмов и ферментов.

Среди микроорганизмов особое внимание заслуживают базидиомицеты (Basidiomycetes), к которым относится L. tigrinus, как организмы способные осуществлять полную биодеградацию лигноцеллюлозных субстратов и некоторых ксенобиотиков за счет продуцирования комплекса внеклеточных лигнолитических ферментов (Кадималиев Д.А. и др., 2003, Рабинович M.JT. и др., 2004). Эти микроорганизмы и их ферменты можно использовать и в новейших технологиях делегнификации, обесцвечивания бумаги и тканей, в изготовлении биосенсоров, производстве композиционных материалов и т.д. Однако, широкое применение биологических технологий для этих целей сдерживается из-за того, что механизмы микробиологического и ферментативного разложения лигнина до конца не исследованы. Поэтому с одной стороны процессы биодеструкции и биомодификации занимают длительное время. С другой стороны трудно контролировать этот процесс. Между тем, по мнению ряда авторов в биодеградации лигнина и ксенобиотиков фенол ьной природы ферментами ВЛФК участвуют и перекисные радикалы липидов (продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ)) источником которых являются жирные кислоты (Капич А.Н., 1995). Так же как у высших эукариот у мицеллиальных грибов существует взаимосвязь между физиологической активностью и липидным составом, интенсивностью процессов ПОЛ, антиокислительной активностью.

В клетках животных и растений важную роль в регуляции этих процессов играют фосфолипазы. Фофолипаза А2: во первых совместно с ацилСоА:лизофосфотидилхолинтрансферазой участвует в обновлении мембранных фосфолипидов, во-вторых, лизофосфатидилхолин и жирные кислоты - продукты фосфолипазной реакции являются мощными эффекторами метаболизма клетки и физиологической активности.

Среди фосфолипаз С особое внимание уделяется фосфоинозитид-специфичной фосфолипазе С катализирующей расщепление фосфоинозитидов и их фосфорилированных производных в результате которого образуются физиологически активные продукты, вторичные мессенджеры - диацилглицерин и инозитол-1,4,5-трифосфат. Они играют важную роль в делении клеток, в передаче информации, в регуляции проницаемости мембраны и т. д.

Но для микроскопических грибов механизмы участия липидов и их метаболитов в регуляции липолитической активности до конца не выяснены. Исследование этого вопроса позволит лучше понять механизмы биодеградации лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков фенольной природы, повысить эффективность процессов делигнификации и модификации лигноцеллюлозных субстратов и биодеструкции ксенобиотиков.

Цель работы - оптимизация условий культивирования гриба Ь. й^пив для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины используемых для получения биопластиков.

Задачи исследования:

1. Изучить изменение липидного состава мицелия и активности фосфолипаз гриба Ь. й§ппиз при глубинном и твердофазном культивировании.

3. Исследовать процесс деструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола грибом Ь. tigrinus в присутствии экзогенных липидов и без них.

4. Установить взаимосвязь между изменением липидного состава, активностью фосфолипаз, лигнолитической активностью ферментов лигнолитического комплекса и степенью биодеградацией лигнина и фенола.

5. Оптимизировать условия модификации отходов древесины грибом Ь. ТщппиБ для получения биопластиков.

Научная новизна работы. Результаты исследований- позволяют расширить представления о механизмах биодеградации лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков фенольной природы грибом белой гнили Ь. Т'щппт, о роли липидов мембран не только в процессах секреции лигнолитических ферментов во внеклеточную среду, но и участии в активации процессов радикального расщепления субстратов. Предложены способы повышения активности ферментов лигнолитического комплекса, путем внесения дополнительных источников перекисных радикалов в виде экзогенных липидов и модификации клеточной мембраны органическими растворителями для стимуляции секреции ферментов. Предложен возможный механизм регуляции изменений состава мембранных ФЛ за счет действия ФЛА2. При участии ФЛА2 в липидном бислое накапливаются лизофосфолипиды и свободные жирные кислоты, что в свою очередь приводит к изменению его структурных и функциональных свойств, -увеличению проницаемости, изменению активности мембраносвязанных ферментов, инициации процессов ПОЛ.

Впервые исследовано изменение состава фосфоинозитидов мицелия гриба Ь. ^гтш ВКМ Р-3616 Б в процессе роста и развития на механоактивированных отхолах древесины и в присутствии фенола. Выявлена взаимосвязь между изменениями состава фосфоинозитидов мицелия и активностью мембранных фосфолипаз. Установлено, что рост и развитие гриба Ь. Н^'тш сопровождается интенсификацией метаболизма ФИ. Интенсивному росту мицелия гриба соответствует более высокое содержание фракций МФИ и ДФИ, а при переходе ко вторичному метаболизму в мембранных липидах накапливается более лабильная и метаболически активная фракция - ТФИ что в свою очередь сказывается на структурной организации клеточной мембраны. В процессе превращения МФИ в ДФИ и далее в ТФИ участвуют ферменты полифосфоинозитДФИосфомоноэстеразы, а в их фосфодиэфирном расщеплении ФЛ С. Показано, что в присутсвии фенола изменяется количественное соотношение фракций ФЛ и и ФИ.

Исследовано влияние экзогенных липидов и модификаторов клеточной мембраны на уровень лигнолитической активности ферментов гриба Ь. й§г'т№ при глубинном культивировании. Показано, что внесение экзогенных липидов содержащих в своем составе больше ненасыщенных жирных кислот вызывает повышение лакказной и пероксидазной активностей в культуральной жидкости по сравнению с контролем. Максимальной ферментативной активности соотвепствует определенная концентрация и вид экзогенных липидов и модификаторов.

Научно - практическая значимость работы. Показана повышенная активность гриба Ь. гтт при биодеструкции механнообработанных отходов древесины. Установлено, что механообработка способствует повышению лигнолитической активности гриба, повышает интесивность процессов биодеструкции.

Полученные результаты могут использовать для поваышения эффективности существующих и разработки новых методов биодеградации ксенобиотиков фенольной природы и лигноцеллюлозных субстратов, а также технологий получения ферментных препаратов.

Связь работы с научными программами. Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках научнопрактических работ при поддержке: программы "Развитие научного потенциала высшей школы 2006-2008" РНП.2.1.17708 «Моделирование и кинетический анализ процессов деструкции лигноцеллюлозных субстратов и ксенобиотиков с участием ферментов и липидов»; гранта Минобрнауки РФ по поддержке ведущих научных школ РИ-112/001/350 "Исследование физиолого-биохимических свойств базидиальных грибов (на примере Рапж ^ппиб) и физико-химических свойств секретируемых ферментов для получения новых материалов"; гранта Роснауки по поддержке молодых ученых, шифр 2006-РИ-19.0/001/079 "Исследование свойств лигнолитических ферментов гриба Рапш г'щппж и их роли в биодеградации растительных отходов и токсичных веществ"; программы "Научные и научно-педагогические кадры инновации России 2009-2013" ФЦП 02.740.11.0820 «Строительные биотехиологии в производстве строительных материалов».

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены для обсуждения на Огаревских чтениях в Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008-2010); на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008-2010); на 10-ой Пущинской школе - конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006); на IV Съезде общества биотехнологов России им Ю.А. Овчинникова (Пущино, 2006); на 14-ой международной конференции «Математика. Компьютер. Образование.» (Пущино, 2007); УН-УН Республиканской научно-практической конференции «Наука и инновации в Республике Мордовия» (Саранск, 20092010), на международной научно-практической конференции Евразия Био 2010.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 21 печатная работа, в числе которых 4 статьи в российских научных журналах рекомендованныхВАК, 2 статьи приняты к печати в российских научных журналах рекомендованных ВАК, получен 1 патент на изобретение.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 193 страницы машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Диссертационная работа включает 37рисунков и 16 таблиц. Список цитируемой литературы включает 317 источников, в том числе 163 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Паршин, Александр Александрович

выводы

1. Активность ВЛФК при жидкофазном и твердофазном культивировании гриба Lentinus (Partus) tigrinus ВКМ F-3616 D возрастает в присутствии механоактивированных отходов древесины и фенола. Максимум лакказной активности был зафиксирован на 4 сутки культивирования и составил 109,19 ед/мл, активность секреторной пероксидазы растительного типа достигает своего максимального значения - 4,22 ед/мл к 8 суткам роста, Мп-пероксидазная активность детектируется со 2 суток роста и к 6 суткам достигает своего максимального значения - 6,57 ед/мл.

3. Из мицелия гриба выделены и идентифицированы 3 фракции фосфоинозитидов: фосфатидилинозит (МФИ), фосфатидилинозит 4 - фосфат (ДФИ) и фосфатидилинозит 4,5 - дифосфат (ТФИ). При жидкофазном и твердофазном культивировании гриба Lentinus tigrinus ВКМ F-3616 D происходит изменение соотношения фракций ФИ. Рост гриба в присутствии фенола и механоактивированных отходов ' древесины сопровождался снижением содержания фракций МФИ и ДФИ и увеличением содержания фракции ТФИ на протяжении всего периода культивирования. Причём период максимальной лигнолитической активности гриба L. tigrinus (9-12 сутки) характеризовался более высоким содержанием фракции ТФИ и более низким содержанием фракций МФИ и ДФИ.

4. При жидкофазном и твердофазном культивировании гриба L. tigrinus ВКМ F-3616 D присутствии механоактивированных отходов древесины и фенола происходит активация фосфолипазы и А2 ингибирование активности

ФИ специфичной фосфолипазы С. В результате наблюдается значительное повышение содержания лизофосфотидилхолина и ненасыщенных жирных кислот - источников перекисных радикалов.

5. Оптимизированы условия повышения ферментативной активности инокулята путем внесения липидов и органических растворителей, что позволило повысить лигнолитическую активность и интенсивность биодеструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола. Внесение подсолнечного масла вызывало увеличение лакказной и пероксидазной активности, максимумы активностей наблюдались на 6 и 9 сутки роста. Внесение оливкового масла в тех же условиях практически не влияет на лигнолитическую активность и степень биодеструкции лигноцеллюлозных субстратов и фенола. Присутствие в следе бутанола и толуола в концентрации 1 % позволяет повысить эффективность применения подсолнечного масла.

6. Оптимизированы условия биомодификации инокулятом гриба L. tigrinus древесины и технологическая схема получения биопластиков. Добавление подсолнечного масла и толуола при выращивании инокулята и в дальнейшем при обработке отходов древесины позволяет, повысить ферментативную активность культуры гриба, что снижает сроки культивирования и повышает эффективность биомодификации отходов древесины на 2 суток и снизить экономические затраты.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Паршин, Александр Александрович, Саранск

1. Александрова, Е.А. Получение плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes / Е.А. Александрова, Л.А. Завьялова, В.М. Терешина, Л.В. Гарибова, Е.П. Феофилова // Микробиология, 1998. Т.67. - №5. - С. 649-654.

2. Андреева, И.И./ И.И. Андреева, Л.С. Родман М.: Колос, 2001.- 247 с.

3. Анненков, В.В. Синтез и исследование влияния на процесс гемокоагуляции поли-5-изопропенилтетразола/В.А.Круглова, В.В. Анненков, Л.Т. Москвитина и др. // Хим.-фарм. ж., 1989. № 2. - С. 195-198

4. Антонов, В.Ф. Липиды мембраны при фазовых превращениях / В.Ф. Антонов, Е.Ю. Смирнова, Е.В. Шевченко. М.: Наука, 1992. - 136 с.

5. Антонов, В.Ф. Биофизика: учеб. для студ. высш. учеб. заведений / В.Ф. Антонов, A.M. Черныш, В.И. Пасечник, С.А. Вознесенский, Е.К. Козлова -М.: Туманит, изд. центр ВЛАДОС, 1999. 288 с.

6. Артюхов, В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами: Учеб. пособие / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж: Изд-во Воронежского гос-го ун-та, 2000. - 296 с.

7. Бабицкая, В.Г. Антиоксидантная активность грибов деструкторов лигноцеллюлозных субстратов / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Прикладная биохимия и микробиология, 2002. - Т. 38. - №2. - С. 169-173.

8. Бадякина, А.О. Изменение фосфолипидного состава мембран Escherichia coli влияет на уровень секреции периплазматической щелочнойфосфатазы в среду / А.О. Бадякина, Ю.А. Корякина, Н.Е. Сузина, М.А. Несмеянова //Биохимия, 2003. Т. 68. - №7. - С.917-925.

9. Беккер, Е.Г. Выделение, очистка и некоторые свойства лакказы из Cerrería unicolor / Е.Г. Беккер, С.Д. Петрова, О.В. Ермолова, О.В. Элисашвили, А.П. Синицын // Биохимия, 1990.- Т.55. -№11.- С.83-87.

10. Беккер, З.Э. Физиология и биохимия грибов / Беккер З.Э. М.: МГУ, 1998.- 269 с.

11. Беккер Е.Т. Сравнительный анализ методов исследования действия лигнолитических ферментов на лигнин / Е.Т. Беккер, А.П. Синицин // Прикладная биохимия и микробиология, 1993. Т.29, Т2. - с.244-252.

12. Белова, Н.В. Грибы белой гнили древесины и возможность их использования для утилизации отходов / Н.В. Белова, Н.П. Денисова // Биотехнология, 2005. №4. - С.55-58.

13. Бергельсон, Л.Д. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон, Э.В. Дятловицкая, Ю.Г. Молотковский М.: Наука, 1981.256 с.

14. Билай, В.И. Основы общей микологии / В.И. Билай Киев: Выща школа, 1989.-392 с.

15. Блажей, А. Фенольные соединения растительного происхождения. Пер. со словац. / А. Блажей, Л. Шутый. М.: Мир, 1977. - 239 с.

16. Болдырев, A.A. Биомембранология: Учебное пособие / A.A. Болдырев, Е.И. Кяйвяряйнен, В.А. Илюха. Петрозаводск: Изд-во Кар НЦ РАН, 2006. - 226 с.

17. Болдырев, A.A. Матриксная функция биологических мембран / A.A. Болдырев // Соросовский образовательный журнал, 2000. Т.6. -№8. -С.2-8.

18. Болобова, A.B. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Кн. II. Ферменты, модели, процессы / A.B. Болобова, A.A. Аскадский, В.И. Кондращенко, М.Л. Рабинович М.: Наука. - 2002. - 344с.

19. Бурлакова, Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ/ Е.Б.Бурлакова. М.: Наука, 1987.- 125 с.

20. Васильева, Л.Н. Сумчатые грибы Сибири, II: Виды рода Lophodermium на Pinus ssp. / Л.Н. Васильева, Т.И. Морозова // Микол. и фитопатол, 2004. Т. 38. - вып. 5. - С. 42-47.

21. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах/ Владимиров Ю.А. // Соросовский образовательный журнал, 2000. Т.6.-№12.-С.13-18.

22. Волчатова, И.В. Использование микроорганизмов для очистки сточных вод и утилизации отходов сульфатного производства /

23. И.В.Волчатова, С.А.Медведева, Э.Г.Ереминко //Прикладная биохимия и микробиология, 1999. Т.35, № 6. - С. 679 - 684.

24. Гаврилова, В.П. Биологическое окисление базидиомицетами гидролизной последрожжевой бражки / В.П. Гаврилова, JI.A. Гусарова // Микол. и фитопатол, 1986. т. 20. - № 4.- С. 285-288.

25. Гаврилова, В.П. Возможности нетрадиционного использования базидиомицетов в кожевенном и текстильном производстве / В.П. Гаврилова, И.И. Шамолина, Н.В. Белова // Биотехнология, 2002. №5. - С.74-80.

26. Газарян, И.Г. Выделение и сравнительная характеристика пероксидаз гриба Phellinus igniarius (L.:FR.) Quel 90-1 и табака / И.Г. Газарян, И.А. Решетникова, В.В. Досеева, Е.Г. Беккер // Биохимия, 1995. Т.60. - №7. -С.1017-1022.

27. Гальбрайх, JI.C. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение / J1.C. Гальбрайх // Соросовский образовательный журнал, 2001. Т.7. - №1. -С.51 - 56.

28. Ганбаров Х.Г. Биосинтез лакказы и пероксидазы у дерево разрушающего гриба Coriolus versicolor / Х.Г. Ганбаров, P.A. Самедова // Изв. АН Аз.ССР. Сер. биол. Науки, 1980. №5. - С. 111-115.

29. Ганбаров, Х.Г. Эколого-физиологические особенности дерево разрушающих высших базидальных грибов / Х.Г.Ганбаров. Баку: Элм, 1989,- 200 с.

30. Гарибова, JI.B. Грибы. Энциклопедия природы России / Гарибова Л.В., Сидорова И.И. М.: Дрофа, 1997. - 352 с.

31. Гвоздяк, П.И. Очистка сточных вод прикрепленными микроорганизмами / П.И.Гвоздяк, Г.И.Дмитриенко, Н.И.Куликов //Химия и технология воды. 1985. - Т.7. -№ 1 - С. 64 - 68.

32. Гиндилис, А.Л. Лакказа из базидиального гриба Cerrería maxima. Некоторые свойства и кинетический механизм действия / А.Л. Гиндилис, Ю.А. Баранов, Е.О. Жажина, В.П. Гаврилова, В.В. Верзилов, А.И. Ярополов // Биохимия, 1990. Т.55. -№2. - С.315-322.

33. Головастов, В.В. Основной фосфолипид Escherichia coli фосфатидилэтаноламин необходим для продукции и секреции щелочной фосфатазы / В.В. Головастов, Н.И. Михалева, Л.Ю. Кадырова, М.А. Несмеянова //Биохимия, 2000. - Т.65, № 9. - С. 1097-1104.

34. Головастов, В.В. Влияние фосфолипидного состава мембран и заряда сигнального пептида щелочной фосфотазы Escherichia coli на эффективность ее секреции /В.В. Головастов, М.А. Несмеянова // Биохимия, 2003. Т.68, №10. - С.1355-1364.

35. Головлева, Л.А. Лигнолитическая активность дереворазрушающих грибов / Л.А. Головлева, А.А. Леонтьевский // Микробиология, 1998. Т.67, №5. - С.581-587.

36. Гордиенко, В.В. Обработка древесностружечных плит давлением / В.В. Гордиенко, Ф.М.Манжос. М.: Лесная промышленность, 1987.- 120 с.

37. Гордон, А. Спутник химика / А. Гордон, Р. Форд. М.: Мир, 1976. -352 с.

38. Гринберг, А.М Обесфеноливание сточных вод коксохимических заводов / A.M. Гринберг.- М., Металлургия, 1968.-212 с.

39. Грушников, О.П. Достижения и проблемы химии лигнина / О.П. Грушников, В.В Елкин М.: Наука, 1973.- 296с.

40. Турецкая, B.JI. Органическая химия / B.JI. Турецкая.- М.: Высш. шк., 1983. -320с.

41. Данил як, Н.И. Ферментные системы высших базидиомицетов / Н.И. Даниляк, В.Д. Семичаевский, Л.Г. Дудченко, И.А. Трутнева. Киев: Наукова думка, 1989. - 278 с.

42. Дзедзюля, Е.И. Mn-пекроксидаза из Bjerkandera adusta 90: выделение и субстратная специфичность / Е.И. Дзедзюля, Е.Г. Беккер // Биохимия. 2000. - Т.65. - №6. - С.829-835.

43. Долин, П.И. Радиационная очистка воды / П.И. Долин, В.Н. Шубин, С.А. Брусенцова.- М., Наука, 1973.- 152 с.

44. Доронин, Ю.Г. Древесные прессмассы (технология производства, применение) / Ю.Г. Доронин, Н. Мирошниченко, И.А. Шулепов. М.: Лесная промышленность, 1980. -112с.

45. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Элиот, У. Элиот, К. Джонс-М.: Мир, 1991.-544 с.

46. Заварзин, Г.А. Лекции по природоведческой микробиологии / Г.А. Заварзин- М.: Наука, 2003. 348 с.

47. Заводов, Р.В. Химия древесины // Р.В. Заводов, М.А. Иванова. М.: Лесн. промышленность, 1982. - 400 с.

48. Загорная, Н.Б. Биоразрушение ксенобиотиков в сточных водах производства фенолформальдегидных смол / Н.Б.Загорная, В.Ц. Никошенко //Химия и технология воды, 1987. Т.9, № 4. - С. 357 - 359.

49. Запрометов, М. Н. Фенольные соединения: распространение, мета болизм и функции в растениях /М. Н. Запрометов. М.: Наука, 1993.- 272 с.

50. Зенков, Н.К. . Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова -М.: Наука, 2000. 137 с.

51. Зубарев, C.B. Применение окислительных методов для очистки сточных вод нефтеперерабатывающих и нефтехимических производств / C.B. Зубарев, Е.В. Кузнецова, Ю.С. Берзун, Э.В. Рубинская.- М.: ЦНИИТЭ Нефтехим, 1987.-371 с.

52. Илялетдинов, А.Н. Микробиология и биотехнология очистки промышленных сточных вод / А.Н.Илялетдинов, Р.М.Алиева. Алма Ата: Гылым, 1990.-233с.

53. Кадималиев, Д.А Внеклеточные оксидазы лигнолитического гриба Panus tigrinus / Д.А Кадималиев, В.В. Ревин, H.A. Атыкян, В.Д. Самуилов // Биохимия, 2005. Т.70, №6 - С.850-854.

54. Кадималиев, Д.А. Влияние прессования на свойства лигнина древе сины сосны, обработанной грибом Panus tigrinus / Д.А. Кадималиев, В.В. Ревин, В.В. Шутова // Химия растительного сырья, 2001. №3. - С.111-118.

55. Кадималиев, Д.А. Использование гриба Panus tigrinus для производства прессованных материалов из отходов хлопчатника / Д.А. Кадималиев, В.В. Ревин, В.В. Шутова, В.Д. Самуилов // Прикладная биохимия и микробиология, 2004. Т.40, №1. - С.57-61.

56. Капич, А.Н. Антиокислительная активность экстрактов мицелия ксилотрофных базидиомицетов / Капич А.Н. // Микология и фитопоталогия, 1995. Т.29.- №5-6. - С.35-39.

57. Капич, А.Н. О составе липидов мицелия Flammulina velutipes / А.Н. Капич, Е.С. Романовец, С.П. Войт // Прикладная биохимия и микробиология. 1989. - Т.25. -№3. - С.368-372.

58. Капич, А.Н. Содержание и жирнокислотный состав липидов дереворазрушающих базидиомицетов / А.Н. Капич, Е.С. Романовец, С.П. Войт // Микология и фитопатология, 1990. Т.24, № 1. - С.51-56.

59. Капич, А.Н. Перекисное окисление липидов и его регуляция в мицелии ксилотрофных базидиомицетов / Капич А.Н., Шишкина Л.Н. // Микробиология, 1995. Т.64, №3. - С.320-326.

60. Капич, А.Н. Фосфолипиды мицелия дереворазрушающих базидиомицетов / А.Н. Капич, Л.Н. Шишкина // Микология и фитопатология, 1993. Т.27. - № 3. - С.32-37.

61. Капустин, A.B. Активный слой кислородного электрода на основе панокомпозитного материала: дисперсный углеродный носитель лакказа / A.B. Капустин, М.Р. Тарасевич, Ю.Г. Чирков, В.А. Богдановская // Электрохимия, 2004.-Т. 40. Р. 1049-1058.

62. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография: в 2 т. Т.2. / Ю. Кирхнер, Н.М. Литвинко-М.: Мир, 1981.- 523 с.

63. Кисель, М.А. Эндогенные фосфолипазы А2: структура и функция / М.А. Кисель,. Минск: Наука и техника, 1991. - 272 с.

64. Козаченко, A.M. Общая технология производства ДСП / A.M. Козаченко, Б.Д. Модлин. М.: Высшая школа, 1990. 145 с.

65. Конова, И.В. Лабильность полярных липидов фикомицетов / И.В. Конова, О.В. Волкова // Микробиология, 1982.-Т.51.- №6. С.1010-1013.

66. Королева, О.В. Сравнительная характеристика методов удаления Си (II) из активного центра лакказ грибного происхождения / О.В. Королева,

67. Е.В. Степанова, В.П. Гаврилова, В.И. Бинюков, A.M. Пронин // Биохимия, 2001а.-Т.66. -№9.-С.1180-1187.

68. Королева, О.В. Выделение и изучение некоторых свойств лакказы из базидиального гриба Cerrena maxima / О.В. Королева, И.С. Явметдинов, C.B. Шлеев, Е.В. Степанова, В.П. Гаврилова // Биохимия, 20016. Т.66. - №6. - С.762-767.

69. Кохут, О.И. Очистка промышленных сточных вод/ О.И. Кохут. -М.: Госстройиздат, 1962, 406 с.

70. Крепе, Е.М. Липиды клеточных мембран. Эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов / Е.М. Крепе. М.: Наука, 1981. - 339с.

71. Кузьмина, Л.А.Влияние состава питательной среды на биосинтез пероксидазы грибом Pleurotus ostreatus штамм УЗБИ-И105 / Кузьмина Л.А., Ахмедова З.Р., Давранов К.Д. // Прикладная биохимия и микробиология,2001. Т.37. -№2. - С.218-220.

72. Купчинов, Б.И. Технология конструкционных материалов и изделий на основе измельченных отходов древесины / Б.И. Купчинов, Н.В. Немогай, Ф. Мельников. Минск: Навука и тэхника, 1992, 119 с.

73. Лазарев, Н.В. Вредные вещества в промышленности. Дополнительный том / Н.В. Лазарев. М.: Химия, 1969. - 536с.

74. Левит, М.Н. Лигнин и лигниназа / М.Н. Левит, А.М.Шкроб // Биоорганическая химия, 1992-Т. 18. №3 - С. 53.

75. Леонтьевский, A.A. Внеклеточные лигнинразрушающие ферменты гриба Panus tigrinus / A.A. Леонтьевский, Л.А. Головлева // Биохимия, 1990а. Т.55. - №3. - С.423-431.I

76. Леонтьевский, A.A. Лигниназы базидиомицетов. (2002). Автореф. дис. докт. биол. наук, ИБФМ РАН, Пущино.

77. Леонтьевский, A.A. Mn-зависимая пероксидаза и оксидаза Panus tigrinus 8/18: очистка и свойства / A.A. Леонтьевский, Н.М. Мясоедова, О.В. Мальцева, Н.Г. Термхитарова, В.И. Крупянко, Л.А. Головлева // Биохимия, 19906. Т.55. - №10. - С.1841-1846.

78. Леонтьевский, A.A. Сравнительная характеристика оксидазы-1 гриба Panus tigrinus 8/18 и лакказы Coriolus versicolor ВКМ F-3616 /

79. A.A. Леонтьевский, H.H. Позднякова, Н.М. Мясоедова, Л.А. Головлева // Биохимия.- 1996. Т.61. -№10. - С. 1785-1792.

80. Лобанок, А.Г. Состав и биологическая активность глубинного мицелия ксилотрофного базидиомицета Lentinus edodes / А.Г. Лобанок,

81. B.Г. Бабицкая, Л.В. Пленина, Т.А. Пучкова, О.В. Осадчая // Прикладная биохимия и микробиология, 2003. Т.39.- №1. - С.69-73.

82. Лобуцкая, Н.В. Получение биологически активных веществ с помощью грибных ферментов / Н.В. Лобуцкая, Ю.Г. Волков, И.М. Ермак, В.П. Дедюхина//Биотехнология, 2002. №6. - С.68-69.

83. Лузинков, В.Н. Экзоцитоз белков / В.Н. Лузинков- М.: Академкнига, 2006. 253 с.

84. Лурье, Ю.Ю. Унифицированные методы анализа вод / Ю.Ю. Лурье -М.: Химия, 1973. 436 с.

85. Лурье, Ю.Ю. Химический анализ производственных сточных вод / Ю.Ю. Лурье- М.: Химия, 1974. 364 с.

86. Макареля, A.A. Повторим химию / A.A. Макареля. М.: Высш. шк, 1989.-271с.

87. Михайличенко, A.JI. Древесиноведение и лесное товароведение /

88. A.Л. Михайличенко, Ф.П. Садовничий. -М.: Высшая школа, 1991. -189 с.

89. Мюллер, Э. Микология / Э. Мюллер, В. Леффлер М.: Мир, 1995. -343 с.

90. Несмеянова, М.А. О возможном участии фосфолипидов в трансляции секретируемых белков через цитоплазматическую мембрану / М.А. Несмеянова//Молекулярная биология, 1982. Т.16. - №4. - С.821-829.

91. Новицкая, Г.В. Методическое руководство по тонкослойной хроматографии фосфолипидов / Г.В. Новицкая. М.: Наука, 1972.- 64 с.

92. Оболенская, A.B. Химия древесины // A.B. Оболенская, A.A. Леонович. Л.: Наука, 1988.-215с.

93. Ю2.0тливанчик, А.Н. Производство ДСП на лесопильных и деревопере-рабатывающих предприятиях / А.Н. Отливанчик. М.: Гослесбумиздат. 1959. -63с.

94. Павленко, Н.И. Интенсификация биологической очистки сточных вод нефтеперерабатывающих заводов / Н.И. Павленко, З.Г.Бела,

95. B.В.Изжеурова //Химия и технология воды, 1989. Т.11.- № 6. - С. 541 - 544.

96. Первушин, Ю.В. Анализ работы сооружений биологической очистки с сообществами прикрепленных микроорганизмов /Ю.В. Первушин, Н.И.Куликов // Биотехнология, 1990. вып. 4. - С. 64 - 68.

97. Першина, Л. А. Исследование технологических режимов прессования костровых плит при применении новых связующих / Л.А. Першина, Н.И. Царев // Весы. Акад. аграр. наук Беларуси, 1993. -№4. -С. 114-117.

98. Писаревская, И.В. Изменения в содержании и жирнокислотном составе липидов целых клеток и клеточных стенок в процессе цитодифференцировки Absidia coerulea / И.В. Писаревская, Е.П. Феофилова // Микробиология, 1983. Т.52. - №6. - С.444 -448.

99. Плакунов, В.К. Основы энзимологии / В.К. Плакунов М.: Логос, 2001. - 128 с.

100. Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Племенков. Казань: Казань, 2001.-376 с.

101. Полу панов, B.C. Внеклеточные белки микроорганизмов / B.C. Полупанов М.: Наука и техника, 1986. - 54 с.

102. Посту паев, В.В. Биохимическая организация клеточных мембран / В.В. Поступаев, Е.Г. Рябцева. Хабаровск: Изд-во Дальневосточный гос-ный медиц-ий универ-т, 2001. - 256 с.

103. Ш.Прохорова, М.И. Биохимия и функция нервной системы / М.И. Прохорова, Л.С. Романова. М.: Наука, 1967. - 148 с.

104. Проскуряков, В.А. Очистка сточных вод в химической промышленности / В.А.Проскуряков, Л.И. Шмидт. — Л.: Химия, 1977.-127 с.

105. Рабинович, М.Л. Разложение природных ароматических структур и ксенобиотиков грибами (обзор) / М.Л. Рабинович, A.B. Болобова, Л.Г. Васильченко // Прикладная биохимия и микробиология, 2004. Т. 40, № 1. -С.5-23.

106. Н.Рабинович, М.Л Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Кн. I. Древесина и разрушающие ее грибы / М.Л Рабинович, A.B. Болобова, В.И. Кондращенко М.: Наука, 2001. - 264 с.

107. Рабинович, М.Л. Целлюлазы микроорганизмов (обзор) / М.Л. Рабинович, М.С. Мельник, A.B. Болобова // Прикладная биохимия и микробиология, 2002. Т.38. -№4. - С.355-373.

108. Разумовский, С. Д. Озон и его реакция с органическими соединениями / С.Д. Разумовский, Г.Е. Зайков. М.:Химия, 1974.-193 с.

109. Ревин, B.B. Выделение и свойства пероксидазы продуцируемой грибом Parins tigrinus / B.B. Ревин, Д.А. Кадималиев, H.A. Атыкян, Б.В. Ситкин, В.Д. Самуилов //Биохимия, 2000. Т.65. -№11. - С. 1305-1309.

110. Ревин, В.В. Модификация лигнина древесины грибом Panus tigrinus / B.B. Ревин, Д.А. Кадималиев, В.В. Шутова, В.Д Самуилов // Прикладная биохимия и микробиология, 2002. Т.38. - №5. - С.529-533.

111. Ревин В.В., Прыткова Т.Н., Лияськина Е.В., Черкасов В.Д., Соломатов В.И. Свидетельство о депонировании микроорганизма Panus (Lentinus) tigrinus (Bulliard: Fries) Fries, 317. Регистрационный номер BKM F-3616 D присвоен 5 марта 1998 г.

112. Роев, Г.А. Очистка сточных вод и вторичное использование нефтепродуктов / Г.А. Роев, В.А. Юфин. М.: Недра, 1987. - 250 с.

113. Сахарнов, A.B. Очистка сточных вод и газовых выбросов в лакокрасочной промышленности / A.B. Сахарнов. М.: Химия, 1971.- 144 с.

114. Сеник, C.B. Динамика изменения липидного компонента мембран в процессе морфогенеза бизидиальных грибов / C.B. Сеник, Е.Р. Котлова, A.A. Кияшко, A.B. Новиков // Иммунопатология, Аллергология, Инфектология, 2010.- № 1. С. 37-38.

115. Синицын, А.П. Методы изучения и свойства целлюлолитических ферментов / А.П. Синицын, В.П. Черноглазов, А.В Гусаков // Итоги науки и техники. Серия: Биотехнология, 1990. Т. 25. - С.80-93.

116. Скоробогатько,О.В. Биодеградация лигнина / О.В.Скоробогатько, А.А.Леонтьевский //Успехи микробиологии, 1990. вып. 24. - С. 128 — 155.

117. Степанов, А.Е. Физиологически активные липиды / А.Е. Степанов, Ю.М. Краснопольская, В.И. Швец-М.: Наука, 1991. 135 с.

118. Сычев, С.Н. Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии "Милихром": Монография / С.Н. Сычев, Н.С. Сычев, В.А. Гаврилина. Орел: Орел ГТУ, 2002. - 134 с.

119. Титов, В.Н. Жирные кислоты. Физическая химия, биология и медицина / В.Н. Титов, Д.М. Лисицын Тверь: ООО "Изд-во Триада", 2006. -672 с.

120. Феофилова, Е.П. Липидный состав плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes (BERK) SING LENTINULA EDODES (BERK) PEGLER. / Е.П. Феофилова, И.Б. Горнова, A.C. Меморская, Л.В. Гарибова // Микробиология, 1998а. Т.67. - №5. - С.655-659.

121. Феофилова, Е.П. Клеточная стенка грибов / Феофилова Е.П. М.: Наука, 1983. - 248 с.

122. Феофилова, Е.П. Температурный шок и состав липидов мукорового гриба Cuhringhamella japónica /Е.П. Феофилова, Л.С. Кузнецова, Л.С. Когтев, Широкова Е.А. // Прикладная биохимия и микробиология, 1989. Т.25. -№3. -С.373-379.

123. Феофилова, Е.П. Липиды мицелиальных грибов и перспективы развития микробной олеобиотехнологии. 1. Липиды мицельальных грибов / Е.П. Феофилова//Биол. науки, 1990. № 11. - С.5-25.

124. Феофилова, Е.П. О различных механизмах биохимической адаптации мицелиальных грибов к температурному стрессу: изменения в составе липидов / Е.П. Феофилова, В.М. Терешина, A.C. Меморская, Н.С. Хохлова // Микробиология, 2000. Т.69. - №5. - С. 612-619.

125. Феофилова, Е.П. Царство грибов: гетерогенность физиолого-биохимических свойств и близость к растениям, животным и прокариотам (обзор) / Е.П. Феофилова // Прикладная биохимия и микробиология, 2001. -Т.37. №2. - С.141-155.

126. Фомин, П.И. Радиационная очистка воды/П.И. Фомин, В.И. Шубин. -М.: Наука, 1973.- 152 с.

127. Хушпульян, Д.М. Неферментативное взаимодействие продуктов реакции и субстратов в катализе пероксидазой/Д.М. Хушпульян, В.А.Фечина, C.B. Казаков, И.Ю. Сахаров, И.Г. Газарян // Биохимия, 2003. Т. 68, №9. -С.1231-1237

128. Челноков, A.A. Основы промышленной экологии / А.А.Челноков, Л.Ф. Ющенко. Минск: Высш. шк., 2001. - 340с.

129. Шалабодов, А.Д. Основы мембранного транспорта/А.Д. Шалабодов, Н.В. Гусева- Тюмень: Тюмень, 2001. 258 с.

130. Шварцман, Г.М. Производство древесностружечных плит Г.М. Шварцман, Д.А. Щедро.- М.: Лесная промышленность, 1987. -320с.

131. Шеголев, В.П. Химия древесины и полимеров / В.П. Шеголев, A.B. Оболенская -. М.: Лесн. пр-ть, 1980.-168 с.

132. Шлегель, Г. Общая микробиология / Шлегель Г. М.: Мир, 1987.567 с.

133. Щерба, В.В. Углеводы глубинного мицелия ксилотрофных базидиомицетов / В.В. Щерба, В.Г. Бабицкая // Прикладная биохимия и микробиология, 2004. Т. 40. - №6. - С. 634-638.

134. Шуберт, В. Биохимия лигнина Пер с англ. / В. Шуберт. М.: Лесная промышленность, 1968.- 134 с.

135. Abadulla, Е. Decolorization and detoxification of textile dyes with a laccase from Tramtes hirsuta / E. Abadulla, T. Tzanov, S. Costa, K.H. Robra, P.A. Cavaco, G.M. Guebitz //Appl. Environ. Microbiol, 2000.- V.66.-P.3357-3362.

136. Akhtar, M. Fungial deligniflcation and biomechanical purping of wood / M. Akhtar, R.A. Blanchette, Т.К. Kirk // Adv. Biochem. Engin. Biotechnol, 1997. -V. 57. -P.160-193.

137. Anderson, D.G. Cellular therapy for disc degeneration / Anderson D.G., Albert T.J., Fraser J.K.,// Spine. 2005. Vol. -30. № 17. P. 14-19.

138. Andersson, T. Storage conditions of rainbow trout liver cytocrom P450 and conjugating enzymes / T. Andersson, / Сотр. Biochem. Physiol. 1985.- 80.-V.3.-P. 569-572.

139. Baldrian ,P. // FEMS Microbiol. Rev. 2006,- V.- 30.- № 2,- P. 215-242.

140. Banci, L. NMR investigation into the basis for the relatively high redox potential of lignin peroxidase / L. Banci, I. Bertini, P. Turano, M. Tien, Т.К. Kirk Proton // Proc.Natl .Acad. Sci .USA, 1991. V.88. - P.6956-6960.

141. Banci, L. Ufoldingand pll slodies on manganese peroxidase: role of heme and caleum on secondary structure stability / L. Banci, I. Bartalesi, S. Coifi-baffoni, M. Tien // Biopolimers (Biospectroscopy), 2003. V. 72. - P. 38-47.

142. Banei, L. Monitoring the role of oxalate in manganese peroxidase / L. Banei, L. Bertini, L. Dal Pozo, R. Del Conte, M. Tien // Biochemistry, 1998. -V. 37. P. 9009-9015.

143. Banei, L. Structural properties of peroxidases / Banei L. 11 J. Biothechnol, 1997.-V. 53.-P. 253-263.

144. Banerjee, U.C. Production of laccase by Curvularia sp /U.C. Banerjee, R.M. Vohra// Folia Microbiol. (Praha), 1991. V.36(4). - P.343-346.

145. Bateman, D. Pectic enzymes in tissue degradation / D. Bateman, R. Millar//Ann. Phytopatol., 1966.- V.4.- №1.- P. 119-128.

146. Biswas-Hawkes, D. Ligninase from white-rot fungu. In lignin Enzymic and microbial degradation / D. Biswas-Hawkes, A.P.J. Dodson, P.J. Harvey, J.M. Palmer//Ed. OdierE, 1987. P. 171-176.

147. Blanchette, R.A. Degradation of the lignocellulose complex in wood / R.A. Blanchette // Can. J.Bot, 1995.- V.73. -№ 1. P. 999-1010.

148. Bligh, E. Rapid method of total lipid extraction and purification / E. Bligh, W. Dyer // Can. J. Biochem. Phision., 1959. V. 37. - P. 911-917.

149. Bockle, B. Mechanism of peroxidase inactivation in liquid cultures of the ligninolytic fungus Pleurotus pulmonarius / B. Bockle , M.J. Martinez, F. Guillen, A.T. Martinez // Appl. Environ. Microbiol., 1999.-V. 65. P. 923-928

150. Bradford, M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the prinapll of protein-dye binding / M.M. Bradford // Anal. Biochem., 1976. V.72. - P.248-254.

151. Bressler, D.C. Oxidation carbazole, 7V-ethylcarbazole, fluorine, and dibenzothiophene by the laccase of Coriolopsis gallica / D.C. Bressler, P.M. Fedorak, M.A. Pickard // Biotech.Lett.,- 2000. V.22. - P.l 119-1125.

152. Buswell, J.A. Lignin biodégradation / J.A. Buswell, E. Odier // CRC Crit. Rev. Biotechnol. 1987. V. 6. - P. 1-60.

153. Cai, D. Characterization of the oxycomplex of lignin peroxidases from Phanerchaete chrysosporium: equlibrim and kinetic studies / D. Cai, M. Tien // Biochemistry, 1990. V.29. - P.2085-2091.

154. Cameron, M.D. Fnzymology of Phanerochaete chrysosporium with respect to the degradation of recalcitrant compounds and xenobiotics / M.D.Cameron, S. Timofeevski, S.D. Aust // Appl. Microbiol. Biotechnol., 2000. -V.54.-P.751-758.

155. Carbajo, J.M. Tannic acid induces transcription of laccase gene cglccl in the white-rot fungus Coriolopsis gallica / J.M,Carbajo H. Junca, M.C. Terron, T.Gonzalez, S. Yague, E. Zapico, A.E. Gonzalez // Can J Microbiol., 2002. V. 48(12).-P. 1041-1047.

156. Carneiro, A. Polyoxometalates as promoters of laccase-assisted reaction / A.Carneiro, A. Abreu, D.V. Evtuguin, S.P. Neto, G. Guebitz, A.C. Paulo // J. Mol. Catal. B Enzym., 2000. V.9. - P.293-295.

157. Carunchio, F. Oxidation of ferulic acid by laccase: Identification of the products and inhibitory effects of some dipeptides / F. Carunchio, C. Crescenzi, A.M. Girelli, A. Messina, A.M. Tarola//Talanta, 2001. V.55. - P. 189-200.

158. Cavazzoni, V. D-Xylanase produced by Schizophyllum radiatum / V.Cavazzoni, M. Manzoni, C. Parini, M.C. Bonferoni // Appl. Microbiol, and Biotechnol., 1989.- V.36, №3.- P. 247-251.

159. Chefetz, B. Purification and characterization of laccase from Chaetomium thermophiilum and its role in humification / B. Chefetz, Y. Chen, Y.Hadar//Appl. Environ. Microbiol., 1998. V.64, №9. - P.3175-3179.

160. Kersten, P. Extracellular oxidative systems of the lignin-degrading Basidiomycete Phanerochaete chrysosporium / P. Kersten, and D.Cullen, // Fungal Genet Biol., 2007. - V. 44. - P. 77-87.

161. Delgado, G. Light stimulation of aryl-alcohol oxidase activity in Pleurotus eringil / G. Delgado, F. Guilin // Mycol. Res., 1992. V.96.- №11. -P.984-986.

162. Dias, A.A. Activity and elution profile of laccase during biological decolorization and dephenolization of olive mill wastewater / A.A. Dias, R.M.Bezerra, A.N.Pereira // Bioresour Technol., 2004. V. -92(1).- P.7-13.

163. Dix, N.J. Fungal ecology / N.J. Dix, J. Webster. London: Chapman and Hall, 1995. 549 p.

164. Dowhan, W. Molecular basis for membrane phospholipids diversity: why are there so many lipids? / W. Dowhan // Annu. Rev. Biochem., 1997. V. 66. - P. 199-232.

165. Eichlerova, I The influence of extracellular H202 production on decolorization ability in Fungi / I. Eichlerova, L. Homolka, L. Lisa, F. Nerud// J Basic Microbiol., 2006. V. 46.- P. 449-458.

166. Eggert, C. Laccase js essential for lignin degradation by the white-rot fungus Pycnoporus cinnabarinus / C. Eggert, U. Temp, K-E.L. Ericsson // FEBS Lett., 1997. V.407. - №1. - P.89-92.

167. Eggert, C. The ligninolytic system of the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus: Purification and characterization of laccase / C. Eggert, U. Temp, L.K-E. Eriksson //Appl. Environ. Microbiol. - 1996.- V. 62.- № 4.- P. 1151 - 1158.

168. Eriksson, K.-E.L. Microbial and enzymatic degradation of wood and wood components / K.-E.L. Eriksson, R.A. Blanchette, P. Ander Berlin: Springer-Verlag, Hedelberg, Fed. Rep. Germany, 1990. - 407 p.

169. Fabbrini, M. Comparing the catalytic efficiency of some mediators of laccase / M. Fabbrini, C. Galli, P. Genili // J. Mol. Catal. B: Dnz., 2002. V. 16. -P. 231-240.

170. Farell, R.L. Phisical and enzymatic properties of lignin peroxidase isoenzyemes from Phanerochate chrysjsporium / R.L. Farell, K.E. Murtangh, M.Tien, M.D. Mozuch, T.K. Kirk // Enzym Microb. Technol., 1989. V. 11. - P. 322-328.

171. Fengel, D. Wood Chemystry, Ultrastructure, Reactions. / D. Fengel, G. -Wegener Berlin: Walter de Gruyter, 1984. P. 425 p.

172. Frische, K. Prostag.Leukot. / K. Frische, N. Cassitu Essen.Fattu Acids.-1996. -p. 315-323.

173. Fukuda, T. Degradation of bisphenol A by purified laccase from Trametesvillosa / T. Fukuda, H. Uchida, Y. Tacashima, T. Uwajima, T. Kawabata, M.Suzuki // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V.284. - P.704-706.

174. Garzillo, A.M. Laccase from the white-rot fungus Trametes trogil / A.M.Garzillo, M.C. Colao, C. Caruso, C. Caporale, D. Gelletti, V. Buonocore // Appl. Microbiol. Biothenol., 1998. V.49. -№5. - P.545-549.

175. Giffhorn, F. Fungial pyranose oxidase: occurrence, properties and biotechnical application in carbohydrate chemistry / F. Giffhorn // Appl. Microbiol. Biotechnol, 2000. -V. 54. P. 727-740.

176. Gil-ad, N.L. The possible function of the glican sheath of Botrytis cinerea: effect on the distribution of enzyme activités / N.L. Gil-ad, N. Rar-Num, A.M. Mayer //FEMS Microbiol. Lett., 2001. V. 199. - P. 109-113.

177. Gil-ad, N.L. Enzymes of Botrytis cinerea capable of breaking down hydrogen peroxide / N.L. Gil-ad, N. Rar-Num, T. Noy, A.M. Mayer // FEMS Microbiol. Lett., 2000. V.190. - P.121-126.

178. Glenn, J.K. Mn(II)oxidation is the principal function of the extracellural Mn(II)-peroxidase from basidiomycete Phanerochaete chrysosporium / J.K.Glenn, L. Akileswaran, M.H. Gold //Arch.Biochem. Biophys.,1986.-V. 251. P. 688-696.

179. Green, F.II Mechanism of blown-rot decay: paradigm or paradox / F.II.Green, T.L. Hightly // Int. Biodeteriol. Biodegr., 1997. V. 39. - P. 113-124.

180. Gutierrez, A. Production of New Unsaturated Lipids during Wood Decay by Lingi-nolitic Basidiomycetes / A. Gutierrez, J.C. del Rio, M.J. Martinez, A.T.Martinez // Appl. Environ. Microbiol., 2002. V. 68. - №3. p. 1344-1350.

181. Hammel, K.E. Extracellular free radical biochemistry of ligninolytic fungi / K.E. Hammel //New J. Chem., 1996. V. 20. - №2. - P. 195-198.

182. Hammel, K.E. Reactive oxygen species as agents of wood decay by fungi / K.E. Hammel, AN. Kapich, K.A. Jensen, Z.C. Ryan // Enzyme and Microbial Technology, 2002. V. 30. - P. 445-453.

183. Hao, J. Production of laccase by a newly isolated deuteromycete fungus Pestalotiopsis sp. and its decolorization of azo dye / J. Hao, F. Song, F. Huang, C.Yang, Z. Zhang, Y. Zheng, X. Tian //J Ind Microbiol Biotechnol., 2007. -V.-34. P.233-240.

184. Hatakka, A. Biodégradation of lignin / A. Hatakka // Biopolymers. Lignin, hunic substances and coal, 2001. V. 1. - P. 129-180.

185. Higuchi, T. Lignin biochemistry: biosynthesis and biodégradation / THiguchi // Wood Scien Technol., 1990. V.24. - P.23-63.

186. Hofriehter, M. Review: lignin conversion by manganese peroxidase (MnP) / M. Hofriehter // Enz. Microb. Technol., 2002. V. 30. - P. 454-466.

187. Hublik, G. Characterization and immobilization of the laccase from Pleurotus ostreatus and its use for the continuous elimination of phenolic pollutants / Hublik G., Schinner F. // Enzyme. Microb. Technol., 2000. V.27. -P.330-336.

188. Hudson, H.J. Fungal biology / Hudson H.J. Cambridge: Cambridge University Press, 1986. - 298 p.

189. Huttermann, A. Modification of lignin for the production of new compounded materials / A. Huttermann, C. Mai, A. Kharazipour // Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001. V.55. - P.387-394.

190. Hyung, K.H. Characterisation of immobilized laccase and its catalytic activity / K.H. Hyung, W. Shin // J.Korean Electrochem., 1999. V.2. - P.31-37.

191. Jonson, L. Purification of ligninase isozymes from the white-rot fungus Trametes versicolor / L. Jonson, T. Johanson, K. Sjostrom, P.O. Nyman // Acta. Chem. Scand., 1987. V.41. - P.766-768.

192. Kamaya H. Metabolism of 3,4-dimethoxycinnamyl alcohol and derivatives by Coriolus versicolor / H. Kamaya, K. Yasushi; T Higuchi // FEMS Microbiology Letters., 2006. V. 24 (2-3). - P. 225-229.

193. Kelly, R.L. Identification of glucose oxidase activity as the primary source of hydrogen peroxide production in lignolityc cultures of Phanerochaete chrysosporium / R.L. Kelly // Arch. Microbiol., 1986. V.144. -№3 - P.248-253.

194. Kirk, T.K. Production of multiple ligninase by Phanerochaete chrysosporium: effect of selected growth conditions and use of mutant strain / T.K.Kirk, S. Croan, M. Tien, K.E. Murtagh, R.L. Farrell // Enzyme. Microb. Technol., 1986. V.8. - P.27-32.

195. Kirk, T.K. Enzymatic "combustion": the microbial degradation of lignin / T.K. Kirk, R.L. Farrell // Annal. Rev. Microbiol., 1987. V.41. - P.465-505.

196. Kulaev,I.S., Melgunov V.I. News Lett 1973. Vol 20 P. 35-36.

197. Kwon, S.I. Laccase isozymes: production by an opportunistic phatogen, a Fusarium proliferatum isolate from wheat / S.I. Kwon, A.J. Anderson // Physiol. Mol. Plant Phatol, 2001. V.59. - P.235-242.

198. Leisola, M.S.A. Homology among multiple extracellular peroxidases from Phanerochaete chrysosporium / M.S.A. Leisola, B. Kozulic, F. Meusdoerfer, A. Fiechter//J. Biol. Chem., 1987. V.262.-P. 419-424.

199. Leisola, M.S.A. Aromatic ring cleavage of veratryl alcohol by Phanerochaete chrysosporium / M.S.A. Leisola, B. Schmidt, U. Thanei-Wyss, A. Fiechter//FEBS Lett. 1985. - V.189. - P.267-270.

200. Leonowicz, A. Fungial laccase: properties and activity on lignin / A.Leonowicz, N.S. Cho, J. Lutererek, A. Wilkolazka, M. Wojtas-Wasilevslca, A.Maluszewska., M. Hofrichler, D. Wesenberg, J. Rogalski // J. Basic Microb., 2001.-V. 41.-P. 185-227.

201. Leotievslcy, A.A. Transformation of 2,4,6-trichlorphenol by free and immobilized fungal laccase / A.A. Leotievsky, N.M. Myasoedova, B.P. Bascunov, L.A.Golovleva, C. Bucke, C.S. Evans // Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001. -V.57, №1-2. P.85-91.

202. Leotievsky, A.A. "Yellow" laccase of Panus tigrinus oxidizes nonphenolic substrates without electron-transfer mediators / A.A. Leotievsky, N.M. Myasoedova, N.N. Pozdnnyakova, L.A. Golovleva // FEBS Lett., 1997(b). -V.413, №3. P.446-448.

203. Lobarzewski, J. The characteristics and function of the peroxidase from Trametes versicolor in lignin biotransformation / J. Lobarzewski // J.Biotechnol., 1990. V.13.-P.111-117.

204. Lorenzo, M Inhibition of laccase activity from Trametes versicolor by heavy metals and organic compounds / M. Lorenzo, D. Moldes, S. Rodriguez Couto M.A. Sanroman // Chemosphere, 2005. V. -60(8). P. 1124-1128.

205. Mai, C. Chemo-enzymatic synthesis and characterization of graft copolymers from lignin and acrylic compounds / C. Mai, A. Majcherczyk, A.Huttermann // Enzym. Microbiol. Technol., 2000(a). V.27. - P.167-175.

206. Mai, C. Chemoenzymatical grafting of acrylamide onto lignin / Mai C., O.Milstein, A. Huttermann // J.Biotechnol., 2000(b). V.79. - P. 173-183.

207. Mai, C. Chemo-enzymatical induced copolymerization of phenolics with acrylate compounds / C. Mai, W. Schormann, A. Huttermann // Appl. Microbiol. Biotehnol. 2000(c). V.21. - P. 1531 -1543.

208. Mayer, A.M. Laccase: new functions for on old enzyme / A.M.Mayer, R.S.Staples// Phytochem. 2002. - V.60. - P. 551 - 556

209. Marco-Urrea, E. Novel aerobic perchloroethylene degradation by the white-rot fungus Trametes versicolor / E. Marco-Urrea, X. Gabarrell, M. Sarra, G.Caminal, T. Vicent, C.A. Reddy // Environ Sci Technol., 2006. -V. 15. № 40(24). - P. 7796-7802.

210. Marinetti, G.V. New Biochemical Separations / G.V. Marinetti -Princeton, Van Norstrand, 1964.-339p.

211. Masanobu, K. Pectolitic enzymes of Basidiomycetes / K. Masanobu// J. Agr. Chem. Soc. Jap., 1973.- V.47.- №9.- P. 523-527.

212. Mayer, A.M. Laccase: new functions for an old enzyme / A.M. Mayer, R.C. Staples // Phytochem., 2002. V.60. - P.551-556.

213. Mester, T. Oxidation mechanism of ligninolytic enzymes jnvolved in the degradation of environmental pollutants / T. Mester, M. Tien // Int. Biodeter. Biodegrad., 2000. V.46. - P.151-159.

214. Mougin. C. Cleavage of the diketonitrile derivative herbicide isoxaflutole by extracellular fungal oxidases / C. Mougin, F.D. Boyer, E. Caminade, R. Rama // J. Agric. Food Chem., 2000. V.48. - P.4529-4534.

215. Nicklas, W. Survey of embryonic stem cells for murine infective agents W. Nicklas, J. Weiss // Comp. Med., 2000. V. 50. P. 410.

216. Niku. P.M.L. Enzymatic oxidation of alkenes / P.M.L. Niku, L. Viikari // J. Mol. Catal. B.Enzym. 2000. V.10. - P.435 - 444.

217. Palmer, F. B.S.C. / Palmer // Anal. Biochem., 1985.V.150 P. 345-352.

218. Palmieri, G. Novel white laccase from Pleurotus ostreatus / G. Palmieri, P.Giardina, C. Bianco, A. Scaloni, A. Capasso, G.A. Sannia // J.Biol.Chem., 1997. V.272. - №50. - P.31303-31307.

219. Perez, J. Purification and partal characterization of a laccase from the white-rot fungus Phanerochaete flavido-alba / J. Perez, J. Martinez, T. de la Rubia // Appl. Environ. Microbiol. 1996. V.62. -№11.- P.4263-4267.

220. Perie, F.H. Purification and charactrization of two manganese peroxidase isozymes from the white-rot basidiomycete Dichomitrus squalens / F.H. Perie, D.Sheng, M.H. Gold//Biochim. Biophys. Acta., 1996. V. 1297(2). - P.139-148.

221. Petersen, J.F.W. Three demensional structure of recombinant peroxidase from Coprinus cinnereus at 2,6 A resolution / J.F.W. Petersen, A. Kadziola, S.Larsen // FEBS Lett, 1994. V.339. - P.161-170.

222. Pirhonen, I. Cellulolytic activity of some wood-rotting basidiomycetes /1. Pirhonen, A.I. Hatakka //VTT Symp., 1985,- № 60,- P. 35-46.

223. Pointing, S.B. Decolorization of azo and trephenilmethane dyes by Pycnoporus sanguineus producing laccase as the sole phenoloxidase / S.B.Pointing, L.L.P.Vrijmoed // World J. Microbiol. Biotechnol,2000.-V.16.- P.317-318.

224. Pozdnykova, N. Oxidase of the white rot fungus Panus tigrinus 8/18 / N.Pozdnykova, A.Leontievsky, L.Golovleva// FEBS Lett,1994.-V.350.-№2-3;-P. 192-194.

225. Raghukumar, C. Fungi from marine habitats: an application in bioremidation / C. Raghukumar// Mycol. Res, 2000. V.104. - P.1222-1226.

226. Reinhammar, B. Electron-accepting sites in Rhus vernicifera laccase as studied by anaerobic oxidation-reduction titrations / B.Reinhammar, T.I. Vanngard / Eur. J. Biochem. 1971. - 463-468.

227. Reinhamtnar, B.R.M. Oxidation-reduction potentials of the electron acceptors in laccases and stellacyanin / B.R.M. Reinhammar. Biochim. Biophys. Acta, 1972.-P. 275.

228. Reid, I.D. Effects of manganese peroxidase on residual lignin of softwood kraft pulp / I.D. Reid, M.G. Paice // Appl. Environ. Microbiol. 1998. -V. 64. - № 6. - P.2273-2274.

229. Reid, I.D. Effect on an atmosphere of oxygen on growth, respiration and lignin degradation by white-rot fungi / I.D. Reid, K.A. Seifert // Can. J. of Botany., 1982. V. 60, №3. - P.252-260.

230. Renganathan,V.Multiple molecular forms of diarylpropane oxygenase, an H202-requiring, lignin-degrading enzyme from Phanerochaete chrysosporium / V.Renganathan, K. Miki, M.H.Gold // Arch.Biochem.Biophys.-1985.-V.241.-P.304-314

231. Sarkar, S. Biochemical and molecular characteristics of a man Phanerochaete chrysosporium.ganese peroxidase isoenzyme from Pleurotus ostreatus / S. Sarkar, A.T. Martinez, M.J. Martinez // Biochim. Biophys. Acta., 1997. -V. 1339(1).-P.23-30.

232. Servili, M. A novel method for removing phenols from grape must / M.Servili, G. DeStefano, P. Piacquadio, V. Sciancalepore // Am. J. Enol. Vitic., 2000. V.51.-P.357-361.

233. Shcouten, A. Resveratrol acts as natural pro fungicide and induces self-intoxication by a specific laccase / A. Shcouten, C.A.M. Wagemakers, F. Stefanato, R.M. van der Kaaij, J.A.L. van Kan // Mol. Microbiol., 2002. V.43. - P.883-894.

234. Shimada, M. Possible biochemical roles of oxalic acid as a low molecular weight compound involved in brown-rot and white-rot wood decasys /M. Shimada, Y.Akamtsu, T.Tokimatsu, K.Mii, T.Hattori//J.Biotechnol.,1997.-V.53.-P.103-l 13.

235. Shleev. S. Direct electron transfer between copper-containing proteins and electrodes/ S.Shleev, J.Tkac, A.Christenson, T.Ruzgas, A.I.Yaropolov, J.W.Whittaker, L.Gorton // Biosensors & Bioelectronics,2005,V.20.-P. 2517-2554.

236. Sidorezyk, Z. Structural and immunochemical studies of the lipopolysa-ccharide of Proteus penneri stain OI5 containing pyruvie acid acetal / Z.Sidorezyk,

237. K.Zych, F.V. Toukach, N.A. Paramonov, A.S. Shashkov, Y.A. Knirel // Arch. Immunol. Ther. Exp., 1997. V. 45. - P. 435-441.

238. Soares, J.M.B. Decolorization of an anthraquinone-type dye using a laccase formulation / J.M.B. Soares, F.M. Costa, M.T.P. De Amorium // Bioresour. Technol., 2001. V.79. - P.171-177.

239. Salony,S.Production and characterization of laccase from Cyathus bulleri and its use in decolourization of recalcitrant textile dyes/S.Salony, S.Mishra, V.S.Bisaria //Applied Microbiology and Biotechnology, 2006.V.-71(5)- P. 646-53.

240. Sutherland, G.R.J. Role of caleum in mainlaining the heme environment of manganese peroxidase / G.R.J. Sutherland, L. Schiek Zapanta, M. Tien, S.D.Aust // Biochemistry, 1997. V. 253. - P. 441-449.

241. Tamagawa, Y. Removal of estrogenic activity of endocrine-disrupting genistein by ligninolytic enzymes from white rot fungi / Y. Tamagawa, H. Hirai, S.Kawai, T.Nishida // FEMS Microbiol Lett., 2005.- V. -244(1). P. 93-98.

242. Tamagawa, Y. Removal of estrogenic activity of natural steroidal hormone estrone by ligninolytic enzymes from white rot fungi / Y. Tamagawa, R.Yamaki, H.Hirai, S.Kawai, T.Nishida//Chemosphere., 2006.-V.-65(l). P.97-101.

243. Thompson, A.R. Severe hemophilia B due to a Gt-T transversion changing gly 309 to val and inhibiting active protease conformation by preventing ion pair formation/A.R.Thompson,G.D.Brayer,S.H.Chen//Blood.-l989.-V.74,- P. 134.

244. Cavalier-Smith, T. A revised six-kingdom system of life. Biological Reviews / T. Cavalier-Smith // 1998. -V. 73.-P. 203-266.

245. Tsutsumi, Y. Removal of estrogenic activités of bisphenol A and nonyl-phenol by oxidative enzymes from lignin-degrading basidiomycetes / Y. Tsutsumi, T. Flaneda, T. Nishida // Chemosphere., 2001. V.42. - P.271-276.

246. Umezawa. T. Mechanism of aromatic ring cleavage of (3-0-4 lignin substructure models by lignin peroxidase / T. Umezawa, T. Higuchi // FEB S Lett.1987.-V.218.-P.255-260.

247. Umezawa, T. Aromatic ring cleavage of P-O-4 lignin substructure model dimers by lignin peroxidase of Phanerochaete chrysosporium / T. Umezawa, M.Shimada, T. Higuchi, K. Kusai // FEBS Lett., 1986. V.205. - P.287-292.

248. Van Voorst, F. Role of lipids in the translocation of protein across membranes / F.Van Voorst, B.Dc Kruijff//Biochem.J,2000.-V.347.- Pt.3. P. 601-612.

249. Vaskovsky,V.E. A universal reagent for phospholipids analysis / V.E.Vaskovsky, E.Y.Kostevsky, J.Vasendin // J. Chromatogr., 1975(a). Vol. 144. - P.129-141.

250. Vaskovsky, V.E. Modified yunguccelis reagent for detecting phospolipids and other phosmorus compounds on thinlayer chromatograms / V.E.Vaskovsky, N.Latyshev // J. Chromatogr., 1975(b). V. 145. - P.246-249.

251. Waldner, R. Comparision of ligninolitic activités of selected white-rot fungi / R.Waldner, M.S.A. Leisola, A.Fiechter // Appl. Microbiol, and Biotechnol.,1988. V.29, №4. - P. 400-407.

252. Wang, J.X. Taurine inhibits ischemia/reperfusion-induced compartment syndrome in rabbits/J.X.Wang, Y.Li, L.K. Zhang //Acta Pharmacol. Sin.,2005. V.26(7).-821-827.

253. Ward, G. Initially steps of ferulic acid polymerization of lignin peroxidase /G.Ward, Y.Hadar, I.Bilkis, L. Konstantinovsky, G.C. Dosoretz // J. Biol. Chem., 2001. V.276. - P.18734-18741.

254. Wariishi,H. Manganese peroxidase from the basidiomycete Phanerochaete chrysosporium: spectral characterization of the oxidized states and the catalytic cycle /H.Wariishi, L.Akileswaran, M.Gold//Biochemistry,1988.-V.27.-P.5365-5370.

255. Wariishi, H. Reaction of lignin peroxidase from compound I and II with veratryl alcohol / H. Wariishi, H. Dunford, M. Gold //J. Biol. Chem., 1991.- V.266. P.20694-20699.

256. Warishi, H. Manganese peroxidase from the lignin-degrading basidiomycete Phanerochaete chrysosporium:transient-staQ kinetics and reaction mechanism /H.Warishi, H.B.Dunford, I.D.MacDonald, M.Gold //J.Biol.Chem., 1989.-V.264.-P.3335-3340.

257. Warishi, H. Lignin peroxidase compound III. Mechanism of formation and decomposition /H.Warishi, M.H.Gold //J.Biol.Chem., 1990.-V.265.-P.2070-2077.

258. Wariishi, H. Lignin Peroxidase Compound II and Compound III: spectral and kinetic characterization of reactions with peroxides / H. Wariishi, L. Marquez, H.B .Dunford, Gold M.H. //J.Biol.Chem., 1990. V.265. - P.l 1137-11142.

259. Wariishi, H. Manganese(II) peroxidation by manganese peroxidase from the basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. Kinetic mechanism and role of helators/H. Wariishi,K.Valli,M.H.Gold//J.Biol.Chem.,1992.-V.267.-P.23688-23695.

260. Welinder, K. Superfamily of plant, fungal and bacterial peroxidases / K.Welinder // Curr. Opin. Struc. Biol., 1992. V.2. - P.388-393.

261. Wood, T.M. Properties of cellulolytic enzyme sistem / T.M. Wood // Biochem. Soc Trans., 1985.-V.13.-№3.- P. 31-38.

262. Xiao, Ya-Zhong Studies on production, purification and partial characteristics of the extracehalar laccase from Armmilliria mellea / Y.-Z. Xiao, J.Wang, Y.-P.Wang, C.-L.Pu, Y.-Y.Shi // Chin.J.Biotechnol.,2002.-V.18.- № 4.-P.457-462.

263. Xu, F. Site directed mutations in fungal laccase: Effect on redox potentisl, activity and pH profile / F.Xu, R.M. Berka, J.A.Wahleithner, B.Nelson, J.R.Schuster, S.H.Brown, A.E.Plamer //Biochem. J., 1998. V.334. - P.63-70.

264. Xu,W. Crystal structures of c-Src reveal features of its autoinhibitory mechanism / W.Xu, A.Doshi, M.Lei, M.J.Eck //Mol.Cell, 1999.-V.3.-.629-638.

265. Yong, H.-D. Single electron transfer by an extracellular laccase from the white-rot fungus Pleurotus ostreatus / H.-D.Yong, K.-J. Kim, J.S. Maeng, Y.H.Han, I.-B.Jeong, G.Jeong // Microbiology, 1995.-V.141.-N2.- P.393-398.

266. Yucel Tokuz, R. Biodégradation and removal of phenols in rotating biological contactors/R.Yucel Tokuz //Water Sci. and Technol.-1989.-V.21.-P.1751-1754.

267. Yun, C.-H. Examination of the functional roles of five highly conserved residues in the cytochrome b subunit of the bel complex of Rhodobacter sphaeroides / C.-H.Yun, Z.Wang, A.R.Crofts, R.B.Gennis // J.Biol.Chem., 1992. V. 267. P. 5901-5909

Информация о работе

Паршин, Александр Александрович
кандидата биологических наук
Саранск, 2010
ВАК 03.01.06

Диссертация

Оптимизация условий культивирования гриба Lentinus Tigrinus для биодеструкции фенола и биомодификации отходов древесины, используемых в производстве биопластиков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы